美白剤及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料
【課題】優れた美白作用を有する美白剤、及び優れた抗老化作用を有する抗老化剤、並びに該美白剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを含む皮膚化粧料の提供。
【解決手段】バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有する美白剤、又は抗老化剤、並びに該美白剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを含む皮膚化粧料である。
【解決手段】バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有する美白剤、又は抗老化剤、並びに該美白剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを含む皮膚化粧料である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白剤及び抗老化剤、並びに該美白剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを含む皮膚化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線（ＵＶＡ、ＵＶＢ）の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、コラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
【０００３】
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
コラーゲンの中でもＩ型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。
また、エラスターゼは皮膚の真皮に存在するエラスチンの加水分解酵素であるが、エラスターゼは、紫外線暴露や老化により過剰発現することがあり、エラスターゼによりエラスチンが変性・破壊されると、皮膚の弾力性が低下すると考えられている。
【０００４】
また、近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群が挙げられる。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３）、（２）ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９）、（３）ストロメライシン群（ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０）、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献１参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
【０００５】
また、角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から形成される。セラミドを主成分とする細胞間脂質は、ラメラ構造を形成することにより、角層バリア機能を担っている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、以下「ＣＥ」と略す。）という疎水的で強靭な細胞膜様構造物に覆われている。ＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリン、ロリクリンなど複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼ−１により架橋され、不溶化して形成され、このＣＥが皮膚のバリア機能に密接に関与している。更に、その一部にはセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角層バリア機能及び皮膚の水分保持機能の基礎が形成される。
【０００６】
しかしながら、加齢、乾燥、紫外線（ＵＶＡ、ＵＶＢ）などの影響によりターンオーバー速度に異常が生じると、ラメラ構造の乱れやＣＥが不完全な状態で形成された、いわゆる不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角層の水分保持機能及びバリア機能は低下する。このことが肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状につながると考えられる。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の患者では、バリア機能が低下した皮疹部で未熟なＣＥが高頻度に観察され、ＣＥが正しく形成されることが皮膚のバリア機能に非常に重要であると考えられている（非特許文献１参照）。
【０００７】
このようなことから、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用等の各作用を有する抗老化剤は、皮膚の弾力性低下、荒れ、シワ等の皮膚の老化症状を、効果的に予防乃至改善することができると考えられる。
【０００８】
一方、皮膚においてメラニンは紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般に、メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、次いで、５,６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成される。したがって、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）を予防乃至改善するため、即ち美白のためには、メラニン産生過程を阻害すること、或いは既に産生したメラニンを淡色漂白することが有効であると考えられる。
このようなチロシナーゼ活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、藤茶抽出物（特許文献２参照）、ヤナギタデ抽出物（特許文献３参照）などが報告されている。
【０００９】
これまでの美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、最近、紫外線ＵＶＢ照射後に表皮ケラチノサイトからの産生が上昇し、色素細胞（メラノサイト）を活性化するサイトカインとしてα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、一酸化窒素（ＮＯ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）等が報告されており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニン産生を抑制して美白効果を導く物質の開発が盛んに行われるようになってきている。このようなエンドセリン−１（ＥＴ−１）の色素細胞（メラノサイト）への作用を阻害する生薬の抽出物として、例えばカミツレ抽出物及びアルテア抽出物などが報告されている（非特許文献２参照）。
【００１０】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料に広く使用可能な美白剤及び抗老化剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【００１１】
【特許文献１】特開２０００−３４４６７２号公報
【特許文献２】特開２００２−３７０９６２号公報
【特許文献３】特開２００４−０８３４８８号公報
【非特許文献１】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １２：５９１−６０１（２００３）
【非特許文献２】「フレグランスジャーナル」，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．９，ｐ６５〜７１，２０００年発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第１に、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、優れたエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第３に、本発明の前記美白剤、及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記課題を解決するため本発明者が、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料に広く使用可能な美白剤、及び抗老化剤について鋭意検討を重ねた結果、バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳花の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種が、（１）優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、美白剤として有用であること、及び（２）優れたエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有し、抗老化剤として有用であることを、それぞれ知見した。
【００１４】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする美白剤である。
＜２＞ チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の美白剤である。
＜３＞ バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞ エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の美白剤、及び前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によると、第１に、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することができる。
また、本発明によると、第２に、優れたエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することができる。
また、本発明によると、第３に、本発明の前記美白剤、及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した皮膚化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（美白剤及び抗老化剤）
本発明の美白剤及び抗老化剤は、バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記美白剤は、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかに基づく、美白作用を有するものである。
前記バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の各抽出物が含有する、美白作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、美白剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、このことは本発明者らによる新たな知見である。
【００１７】
本発明の抗老化剤は、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかに基づく、抗老化作用を有するものである。
前記バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の各抽出物が含有する、抗老化作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、抗老化剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、このことは本発明者らによる新たな知見である。
【００１８】
前記バイベリー（学名：Ｍｙｒｉｃａ ｃｅｒｉｆｅｒａ）は、シロヤマモモとも呼ばれるヤマモモ科ヤマモモ属の植物である。
抽出原料として使用する前記バイベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根皮が特に好ましい。
前記フウトウカズラ（学名：Ｐｉｐｅｒ ｋａｄｚｕｒａ）は、コショウ科コショウ属の植物であり、本州（関東南部以西）〜沖縄に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記フウトウカズラの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、茎が特に好ましい。
前記キンミズヒキ（学名：Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ）は、バラ科キンミズヒキ属の多年草であり、本州、四国、九州などの林の縁、原野、路傍に生息しており、容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記キンミズヒキの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、全草が好ましい。
前記ブルーベリー（学名：Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｐｐ．）は、ツツジ科スノキ属に分類される北アメリカ原産の落葉低木果樹の総称である。
抽出原料として使用する前記ブルーベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記ブルーフラッグ（学名：Ｉｒｉｓ ｖｅｓｉｃｏｌｏｒ）は、アヤメ科の植物である。
抽出原料として使用する前記ブルーフラッグの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根が好ましい。
前記西洋サクラソウ（学名：Ｐｒｉｍｕｌａ ｖｅｒｉｓ）は、サクラソウ科の植物である。
抽出原料として使用する前記西洋サクラソウの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記レモンバーベナ（学名：Ａｌｏｙｓｉａ ｔｒｉｐｈｙｌｌａ）は、クマツズラ科イワダレソウ属の落葉低木である、高さ１〜３ｍに成長し、葉は強いレモンの香りを放つ。
抽出原料として使用する前記レモンバーベナの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記セロリ（学名：Ａｐｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ）は、セリ科の植物であり、オランダミツバ、清正人参（きよまさにんじん）とも呼ばれる。葉、茎、根、種子のほぼ全ての部分を食用にできる。独特の強い香りがある。
抽出原料として使用する前記セロリの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、種子が好ましい。
前記紅柳（学名：Ｔａｍａｒｉｘ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）は、ギョウリュウ科の植物である。
抽出原料として使用する前記紅柳の部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、花が好ましい。
前記パッションフルーツ（学名：Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ ｅｄｕｌｉｓ）は、トケイソウ科の植物である。
抽出原料として使用する前記パッションフルーツの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
【００１９】
抽出原料である前記各植物は、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記各植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記各植物の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００２０】
前記各植物の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記各植物の抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記各植物の抽出物には、前記各植物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２１】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記各植物に含まれる美白作用又は抗老化作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００２２】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００２４】
抽出原料である前記各植物から、各抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の美白剤又は抗老化剤の有効成分として用いることができる。
【００２５】
抽出により得られる前記各植物の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記各植物の抽出液は、そのままでも美白剤又は抗老化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記各植物は特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記各植物の抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２６】
以上のようにして得られる前記各植物の抽出物は、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ＡＴＰ産生促進作用、ラミニン−５産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の美白剤又は抗老化剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
前記美白剤又は抗老化剤中の前記各植物の抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記美白剤又は抗老化剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
また、前記美白剤又は抗老化剤中、前記各植物の抽出物は、いずれか１種のみが含まれていてもよいし、２種以上が含まれていてもよい。前記美白剤又は抗老化剤中に２種以上の植物抽出物が含まれる場合の、各々の含有量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２７】
また、前記美白剤又は抗老化剤中に含まれ得る、前記各植物の抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記各植物の抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記美白剤又は抗老化剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記美白剤又は抗老化剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００２８】
本発明の美白剤又は抗老化剤は、優れた美白作用又は抗老化作用を有すると共に、使用感及び安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚化粧料への利用に特に好適である。
【００２９】
（皮膚化粧料）
本発明の皮膚化粧料は、本発明の前記美白剤及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
【００３０】
ここで、前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、などが挙げられる。
【００３１】
前記美白剤又は前記抗老化剤の前記皮膚化粧料全体に対する配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記各植物抽出物に換算して０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜１質量％がより好ましい。
【００３２】
前記皮膚化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、本発明の前記美白作用及び抗老化作用の妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。
【００３３】
本発明の皮膚化粧料は、皮膚に使用した場合に高い安全性を有し、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ＡＴＰ産生促進作用、ラミニン−５産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００３４】
なお、本発明の美白剤、抗老化剤、及び皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３５】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００３６】
（製造例１）
−各植物の水抽出物の製造−
下記表１に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の水抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の水抽出物の「抽出率」を表１に示す。
【００３７】
【表１】
【００３８】
（製造例２）
−各植物の５０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表２に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の５０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の５０質量％エタノール抽出物の「抽出率」を表２に示す。
【００３９】
【表２】
【００４０】
（製造例３）
−各植物の８０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表３に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量（質量比）の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の８０質量％エタノール抽出物の「抽出率」を表３に示す。
【００４１】
【表３】
【００４２】
（実施例１）
−チロシナーゼ活性阻害作用試験−
下記表４の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、チロシナーゼ活性阻害作用を試験した。
まず、４８ｗｅｌｌプレートに、ＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６．８）０．２ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬのチロシン溶液０．０６ｍＬ、被験試料の２５質量％ＤＭＳＯ溶液０．１８ｍＬを加え、３７℃で１０分間静置した。これに、８００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのチロシナーゼ溶液０．０２ｍＬを加え、引き続き３７℃で１５分間反応した。反応終了後、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
チロシナーゼ活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。
チロシナーゼ活性阻害率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
ただし、Ｓｔは被験試料溶液の波長４７５ｎｍにおける吸光度、Ｓｂは被験試料溶液ブランクの波長４７５ｎｍにおける吸光度、Ｃｔはコントロール溶液の波長４７５ｎｍにおける吸光度、Ｃｂはコントロール溶液ブランクの波長４７５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００４３】
結果は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、又は５０％阻害試料濃度で表し、表４に示す。
【００４４】
【表４】
表４の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、及び紅柳の抽出物が、チロシナーゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
【００４５】
（実施例２）
−メラニン産生抑制作用試験−
下記表５の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、メラニン産生抑制作用を試験した。
まず、Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０質量％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで２４．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり３００μＬずつ播種し、６時間培養した。培養終了後、１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに３００μＬ添加し、４日間培養した。培養終了後、各ｗｅｌｌから培地を取り除き、１ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ溶液２００μＬを添加して超音波破砕器により細胞を破壊し、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってメラニン産生量とした。
空試験として、１ｍｍｏｌ／Ｌのテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭのみで培養した細胞を同様の方法で試験した。
メラニン産生抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
メラニン産生抑制率（％）＝｛１−（Ｂ／Ｄ）／（Ａ／Ｃ）｝×１００
ただし、Ａは被験試料無添加での４７５ｎｍにおける吸光度、Ｂは被験試料添加での４７５ｎｍにおける吸光度、Ｃは被験試料無添加での５４０ｎｍにおける吸光度、Ｄは被験試料添加での５４０ｎｍにおける吸光度を表す。
【００４６】
結果は、試料濃度２５μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、又は５０％阻害試料濃度で表し、表５に示す。
【００４７】
【表５】
表５の結果から、ブルーフラッグの抽出物、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、パッションフルーツの抽出物、及びセロリの抽出物が、メラニン産生抑制作用を有することが確認できた。
【００４８】
（実施例３）
−エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現抑制作用試験−
下記表６の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（normal human epidermis keratinocyte;ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶＢ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液（試料濃度は表６参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、Ｔａｋａｒａ ＳＹＢＲ ＥｘＳｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）によるリアルタイム ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＥＴ−１の発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式１によりＥＴ−１ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ又は試料濃度１μｇ／ｍＬでのＥＴ−１ｍＲＮＡ発現抑制率を表６に示す。
＜数式１＞
エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式１中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
【００４９】
【表６】
表６の結果から、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現抑制作用を有することが確認できた。
【００５０】
（実施例４）
−ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用試験−
下記表７の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（normal human epidermis keratinocyte;ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶＢ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液（試料濃度は表７参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＳＣＦ、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）によるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＳＣＦの発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式２によりＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ又は試料濃度１μｇ／ｍＬでのＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制率を表７に示す。
＜数式２＞
ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式２中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
【００５１】
【表７】
表７の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用を有することが確認できた。
【００５２】
（実施例５）
−ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表８の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶＢ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試験試料（試料濃度は表８参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製、Cat.no．311-02501）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ｂＦＧＦ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，codeNo．RR063A，タカラバイオ社製）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ｂＦＧＦのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。結果を表８に示す。
ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)
＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
ただし、式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
【００５３】
【表８】
表８の結果から、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００５４】
（実施例６）
−ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表９の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試験試料（試料濃度は表９参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Cat.no．311-02501）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＰＯＭＣ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，codeNo．RR063A）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。 ＰＯＭＣのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。結果を表９に示す。 ＰＯＭｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％) ＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００ ただし、式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
【００５５】
【表９】
表９の結果から、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００５６】
（実施例７）
−エラスターゼ活性阻害作用試験−
下記表１０の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エラスターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、９６穴マイクロプレートにて、０．２ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した各試料溶液５０μＬ、及び２０μｇ／ｍＬのエラスターゼ・タイプＩＩＩ溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬのＮ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥを１００μＬ添加して、２５℃にて１５分間反応させた。反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、これらの結果から、下記数式３によりエラスターゼ活性阻害率を算出した。
＜数式３＞
エラスターゼ活性阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式３中、Ａは、試料溶液無添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、試料溶液添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００５７】
次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記エラスターゼ活性阻害率を測定し、阻害率が５０％になる濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を近似曲線により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどエラスターゼ活性阻害作用が強い）。結果を表１０に示す。
【００５８】
【表１０】
表１０の結果から、バイベリーの抽出物、及びフウトウカズラの抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
【００５９】
（実施例８）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用試験−
下記表１１の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Ｗｕｎｓｃｈ ａｎｄ Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変したものである。
まず、蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬの塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した各試料溶液５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１，６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
なお、ＭＭＰ−１としては、COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum（シグマ社製）を使用した。
Ｐｚ−ｐｅｐｔｉｄｅとしては、Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＡＧ社製）を使用した。
そして、得られた結果から、下記数式４によりＭＭＰ−１活性阻害率を算出した。
＜数式４＞
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
ただし、前記数式４中、Ａは試料溶液無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料溶液無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｃは試料溶液添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｄは試料溶液添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度を表す。
【００６０】
次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記ＭＭＰ−１活性阻害率を測定し、阻害率が５０％になる濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を近似曲線により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどＭＭＰ−１活性阻害作用が強い）。結果を表１１に示す。
【００６１】
【表１１】
表１１の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、ＭＭＰ−１活性阻害作用を有することが確認できた。
【００６２】
（実施例９）
−Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験−
下記表１２の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにダルベッコＭＥＭ培地を用いて希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴あたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．２５質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した各試料溶液（試料濃度：１００μｇ／ｍＬ）を各穴に１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。その後、各穴の培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００６３】
Ｉ型コラーゲン産生促進率は、試料無添加時のＩ型コラーゲン量を１００％として算出した。Ｉ型コラーゲン産生促進率の計算方法は以下のとおりである。
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、Ａは被験試料添加時のＩ型コラーゲン量、Ｂは被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量を表す。
【００６４】
【表１２】
表１２の結果から、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、パッションフルールの抽出物、及び紅柳の抽出物が、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
【００６５】
（実施例１０）
−ＩＶ型コラーゲン産生促進作用試験−
フウトウカズラの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにしてＩＶ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにダルベッコＭＥＭ培地を用いて希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴あたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．２５質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した各試料溶液（試料濃度：１００μｇ／ｍＬ）を各穴に１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。培養終了後、各穴の培地中のＩＶ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
そして、得られた測定結果から、下記数式５によりＩＶ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。試料濃度１００μｇ／ｍＬでのＩＶ型コラーゲン産生促進率の結果を表１３に示す。
＜数式５＞
ＩＶ型コラーゲン産生促進率(％)＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式５中、Ａは試料溶液添加時のＩＶ型コラーゲン量を表し、Ｂは試料溶液無添加時のＩＶ型コラーゲン量を表す。
【００６６】
【表１３】
表１３の結果から、フウトウカズラの抽出物が、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
【００６７】
（実施例１１）
−過酸化水素に対するダメージ抑制作用試験−
下記表１４の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、過酸化水素に対するダメージ抑制作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）をα−ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ ＢＬＲ社製品，ｐＨ７．２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるようにα−ＭＥＭ培地を用いて希釈した後、４８穴プレートに播種し１穴当たり２００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した被験試料を各穴に２００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄した。洗浄後、ハンクス緩衝液に溶解した過酸化水素（１ｍｍｏｌ／Ｌ）、あるいは、ハンクス緩衝液のみを各穴に２００μＬ添加し、２時間培養した。培養後、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄し、終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬで１質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解したニュートラルレッドを各穴に２００μＬ添加した。２．５時間培養した後、ニュートラルレッド溶液を捨て、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９）を各穴に２００μＬ添加し、色素を抽出した。抽出後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。得られた測定結果から、下記数式６により、過酸化水素に対するダメージ抑制率を求めた。結果を表１４に示す。
＜数式６＞
過酸化水素に対するダメージ抑制率（％）
＝｛１−（Ｃ−Ａ）／（Ｃ−Ｂ）｝×１００
ただし、前記数式６中、Ａは過酸化水素処理・被験試料処理の吸光度、Ｂは過酸化水素処理・被験試料無処理の吸光度、Ｃは過酸化水素無処理・被験試料無処理の吸光度、を表す。
【００６８】
【表１４】
表１４の結果から、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、高い過酸化水素に対するダメージ抑制作用を有することが認められた。
【００６９】
（実施例１２）
−ラミニン−５産生促進作用試験−
下記表１５の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ラミニン−５産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２のフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）にて３７℃、５％ＣＯ２下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５個／ｍＬの細胞密度となるようにＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、２４穴プレートに１穴あたり２００μＬずつ播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で一晩培養した。
培養終了後、培地を抜き、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に５００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で４８時間培養した。培養終了後、上清１００μＬをエライザプレートに移し換え一晩４℃でプレートに吸着させたのち、溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１質量％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトラミニン−５抗体（マウスＩｇＧ、ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ビオチン標識抗体マウスＩｇＧ（アマシャムバイオサイエンス社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、アビジン−ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体と反応させたのち、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
ラミニン−５産生促進率は、試料無添加時における吸光度を１００％として算出した。各試料のラミニン−５産生促進率（％）を表１５に示す。
【００７０】
【表１５】
表１５の結果から、ブルーフラッグの抽出物、パッションフルーツの抽出物、及びセロリの抽出物が、角化細胞のラミニン−５産生を促進する作用を有することが確認できた。
【００７１】
（実施例１３）
−トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験−
下記表１６の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるようにＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、２日間培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量をモノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。結果を表１６に示す。
トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。
トランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、Ａは被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度、Ｂは被験試料無添加時（コントロール）の波長４０５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００７２】
【表１６】
表１６の結果から、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、セロリの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有することが確認できた。
【００７３】
（実施例１４）
−ＵＶＢダメージからの回復作用試験−
下記表１７の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＵＶＢダメージからの回復作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をα−ＭＥＭを用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり２００μＬずつ播種した。２４時間培養後、培地を１００μＬのＰＢＳ（−）へ交換し、１．０Ｊ／ｃｍ２のＵＶＢを照射した。照射後、直ちに、ＰＢＳ（−）を抜き、１０質量％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭに溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに４００μＬ添加し、２４時間培養した。紫外線ＵＶＢダメージからの回復効果は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様に細胞播種した後、ＵＶＢを照射しない細胞、及び細胞播種後ＵＶＢを照射し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
ＵＶＢダメージからの回復作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表１７に示す。
ＵＶＢダメージからの回復率（％）
＝｛（Ｎｔ−Ｃ）−（Ｎｔ−Ｓａ）｝／（Ｎｔ−Ｃ）×１００
ただし、式中、ＮｔはＵＶＢを照射しない細胞での吸光度、ＣはＵＶＢを照射し被験試料を添加しない細胞での吸光度、ＳａはＵＶＢを照射し被験試料を添加した細胞での吸光度を表す。
【００７４】
【表１７】
表１７の結果から、フウトウカズラの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びセロリの抽出物が、ＵＶＢダメージからの回復作用を有することが確認できた。
【００７５】
（実施例１５）
−表皮角化細胞増殖促進作用試験−
西洋サクラソウの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
次に、表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide〕を各穴に１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式７により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。試料濃度３．１３μｇ／ｍＬでの表皮角化細胞増殖促進率を表１８に示す。
＜数式７＞
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ／Ｃｔ）×１００
ただし、前記数式７中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度を表す。
【００７６】
【表１８】
表１８の結果から、西洋サクラソウの抽出物が、表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
【００７７】
（実施例１６）
−皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験−
フウトウカズラの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０質量％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を５質量％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭで７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
培養終了後、５質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した試料溶液（濃度：４００μｇ／ｍＬ）を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
次いで、皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。具体的には、各穴から１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide〕を各穴に２０μＬずつ添加した。４．５時間培養した後、１０質量％のＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液を各穴に１００μＬ添加し、一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式８により試料濃度２００μｇ／ｍＬの皮膚線維芽細胞増殖促進率を算出した。結果を表１９に示す。
＜数式８＞
皮膚線維芽細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）×１００
ただし、前記数式８中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｓｂは試料溶液を添加した空試験の吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度、Ｃｂは試料溶液を添加しない空試験の吸光度、をそれぞれ表す。
【００７８】
【表１９】
表１９の結果から、フウトウカズラの抽出物が、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
【００７９】
（実施例１７）
−インボルクリン産生促進作用試験−
西洋サクラソウの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、インボルクリン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２のフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）にて３７℃、５％ＣＯ２下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５個／ｍＬの細胞密度となるようにＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、４８穴プレートに１穴あたり２００μＬずつ播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で一晩培養した。
培養終了後、培地を抜き、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に２００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で４８時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ細胞表面に発現したインボルクリンの量をモノクローナル抗ヒトインボルクリン抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記数式９によりインボルクリン産生促進率（％）を算出した。結果を表２０に示す。
＜数式９＞
インボルクリン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、前記数式９中、Ａは試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００８０】
【表２０】
表２０の結果から、西洋サクラソウの抽出物が、高いインボルクリン産生促進作用を有することが認められた。
【００８１】
（実施例１８）
−アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進作用試験−
下記表２１の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＡＴＰ産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、２時間培養した。ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。即ち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社製）を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加した。反応後、化学発光量を測定した。結果を表２１に示す。
ＡＴＰ産生促進率の計算方法は以下のとおりである。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、Ａは被験試料を添加した細胞での化学発光量、Ｂは被験試料を添加しない細胞での化学発光量を表す。
【００８２】
【表２１】
表２１の結果から、バイベリーの抽出物、及びレモンバーベナの抽出物が、ＡＴＰ産生促進作用を有することが確認できた。
【００８３】
（実施例１９）
−プロフィラグリン・フィラグリン産生促進作用試験−
下記表２２の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、フィラグリン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を同培地にて１．５×１０５個／ｍＬの細胞密度になるように調整し、２ｍＬずつ６穴コラーゲンコートプレートに播種して３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で３日間培養した。培養後、培地を０．５質量％ＤＭＳＯに溶解した試料（試料濃度は表２２を参照）を含むＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２ ２ｍＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で５日間培養した。培養終了後、常法により総タンパクの調整を行った。＜ウエスタンブロッティング＞
１０μｇ／列に調整したサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥにより展開し、ＰＶＤＦ膜に転写した。５％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）でブロッキングを行った後、抗ヒトフィラグリンモノクローナル抗体（Harbor Bio-Products社製）、ビオチン標識抗マウスＩｇ（Whole Ab，Amersham Biosciences社製）及びストレプトアビジンーペルオキシダーゼ複合体（CALBIOCHEM社製）を、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．３％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）で１０００倍に希釈して順次反応させ、ECL Western blotting detection reagents and analysis system（Amersham Biosciences社製）の発光によりプロフィラグリン及びフィラグリンを検出した。検出したバンドをKODAK 1D Image Analysis Software EDAS290 Version3.5にて定量的に測定した。
結果は、試料添加及び無添加で培養した細胞のそれぞれから調製したタンパク１０μｇ中のプロフィラグリン及びフィラグリンのNet intensity（バンド強度）を合算した値を用いて、試料のプロフィラグリン産生促進作用を評価し、プロフィラグリン産生促進率（％）を下記式に基づいて算出した。結果を表２２に示す。
プロフィラグリン・フィラグリン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、式中Ａは「試料添加時のNet intensity（プロフィラグリン及びフィラグリンの合計値）」を、Ｂは「試料無添加時（コントロール）のNet intensity」を表す。
【００８４】
【表２２】
表２２の結果から、ブルーフラッグの抽出物、及びパッションフルーツの抽出物が、フィラグリン産生促進作用を有することが確認できた。
【００８５】
（実施例２０）
−ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表２３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。 回収した細胞を３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液（試料濃度は表２３参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Cat.No.311-02501）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＨＡＳ３（Hyaluronan Synthase 3）及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit（Perfect Real Time，codeNo.RR063A）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。ＨＡＳ３の発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「試料無添加」の補正値を１００としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。結果を表２３に示す。
ＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、式中Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時の補正値」を表す。
【００８６】
【表２３】
表２３の結果から、フウトウカズラの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、セロリの抽出物、及びレモンバーベナの抽出物が、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００８７】
（実施例２１）
−アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表２４の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。 ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した被験試料を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ；Ｃａｔ．ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（登録商標）（Ｃｅｐｈｅｉｄ社）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ（登録商標）ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。ＡＱＰ３の発現量は、被験試料無添加、被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に被験試料無添加の補正値を１００とした時の被験試料添加の補正値を算出した。結果を表２４に示す。
ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用の計算方法は以下の通りである。
ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、式中Ａは被験試料添加時の補正値、Ｂは被験試料無添加時の補正値を表す。
【００８８】
【表２４】
表２４の結果から、ブルーフラッグの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、及びセロリの抽出物が、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００８９】
（配合実施例１）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・バイベリーの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９０】
（配合実施例２）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・ブルーフラッグの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９１】
（配合実施例３）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・フウトウカズラの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９２】
（配合実施例４）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・西洋サクラソウの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９３】
（配合実施例５）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・レモンバーベナの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９４】
（配合実施例６）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・キンミズヒキの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９５】
（配合実施例７）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・ブルーベリーの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９６】
（配合実施例８）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・セロリの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９７】
（配合実施例９）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・紅柳の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９８】
（配合実施例１０）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・パッションフルーツの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９９】
（配合実施例１１）
−クリーム−
下記組成のクリームを、常法により製造した。
・流動パラフィン・・・５．０ｇ
・サラシミツロウ・・・４．０ｇ
・セタノール・・・３．０ｇ
・スクワラン・・・１０．０ｇ
・ラノリン・・・２．０ｇ
・ステアリン酸・・・１．０ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・１．５ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５ｇ
・香料・・・０．１ｇ
・ブルーフラッグの８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【０１００】
（配合実施例１２）
−パック−
下記組成のパックを、常法により製造した。
・ポリビニルアルコール・・・１５ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３ｇ
・プロピレングリコール・・・７ｇ
・エタノール・・・１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・フウトウカズラの水抽出物（製造例１）・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【０１０１】
本発明の美白剤又は抗老化剤は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ＡＴＰ産生促進作用、ラミニン−５産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有しており、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント等の皮膚化粧料に幅広く用いられる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白剤及び抗老化剤、並びに該美白剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを含む皮膚化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、皮膚線維芽細胞、及び、これらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、これら皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線（ＵＶＡ、ＵＶＢ）の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄、過酸化水素との接触等の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、コラーゲンやエラスチン等の細胞外マトリックスの産生量が減少すると共に、架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
【０００３】
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与していることが知られている。
コラーゲンの中でもＩ型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。
また、エラスターゼは皮膚の真皮に存在するエラスチンの加水分解酵素であるが、エラスターゼは、紫外線暴露や老化により過剰発現することがあり、エラスターゼによりエラスチンが変性・破壊されると、皮膚の弾力性が低下すると考えられている。
【０００４】
また、近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群が挙げられる。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３）、（２）ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９）、（３）ストロメライシン群（ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０）、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献１参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１及びＭＭＰ−１４は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
【０００５】
また、角層は、表皮角化細胞が終末分化して形成された角質細胞と、細胞間を埋める細胞間脂質から形成される。セラミドを主成分とする細胞間脂質は、ラメラ構造を形成することにより、角層バリア機能を担っている。一方、角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、膜の裏打ち蛋白であるコーニファイドエンベロープ（角質肥厚膜、以下「ＣＥ」と略す。）という疎水的で強靭な細胞膜様構造物に覆われている。ＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って細胞内で産生されるインボルクリン、ロリクリンなど複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼ−１により架橋され、不溶化して形成され、このＣＥが皮膚のバリア機能に密接に関与している。更に、その一部にはセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角層バリア機能及び皮膚の水分保持機能の基礎が形成される。
【０００６】
しかしながら、加齢、乾燥、紫外線（ＵＶＡ、ＵＶＢ）などの影響によりターンオーバー速度に異常が生じると、ラメラ構造の乱れやＣＥが不完全な状態で形成された、いわゆる不全角化が誘発され、角質細胞や細胞間脂質の構造に異常が生じ、角層の水分保持機能及びバリア機能は低下する。このことが肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状につながると考えられる。また、乾癬やアトピー性皮膚炎の患者では、バリア機能が低下した皮疹部で未熟なＣＥが高頻度に観察され、ＣＥが正しく形成されることが皮膚のバリア機能に非常に重要であると考えられている（非特許文献１参照）。
【０００７】
このようなことから、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、エストロゲン様作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用等の各作用を有する抗老化剤は、皮膚の弾力性低下、荒れ、シワ等の皮膚の老化症状を、効果的に予防乃至改善することができると考えられる。
【０００８】
一方、皮膚においてメラニンは紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般に、メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、次いで、５,６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成される。したがって、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）を予防乃至改善するため、即ち美白のためには、メラニン産生過程を阻害すること、或いは既に産生したメラニンを淡色漂白することが有効であると考えられる。
このようなチロシナーゼ活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、藤茶抽出物（特許文献２参照）、ヤナギタデ抽出物（特許文献３参照）などが報告されている。
【０００９】
これまでの美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、最近、紫外線ＵＶＢ照射後に表皮ケラチノサイトからの産生が上昇し、色素細胞（メラノサイト）を活性化するサイトカインとしてα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、一酸化窒素（ＮＯ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）等が報告されており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニン産生を抑制して美白効果を導く物質の開発が盛んに行われるようになってきている。このようなエンドセリン−１（ＥＴ−１）の色素細胞（メラノサイト）への作用を阻害する生薬の抽出物として、例えばカミツレ抽出物及びアルテア抽出物などが報告されている（非特許文献２参照）。
【００１０】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料に広く使用可能な美白剤及び抗老化剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【００１１】
【特許文献１】特開２０００−３４４６７２号公報
【特許文献２】特開２００２−３７０９６２号公報
【特許文献３】特開２００４−０８３４８８号公報
【非特許文献１】Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １２：５９１−６０１（２００３）
【非特許文献２】「フレグランスジャーナル」，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．９，ｐ６５〜７１，２０００年発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第１に、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、優れたエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第３に、本発明の前記美白剤、及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記課題を解決するため本発明者が、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、皮膚化粧料に広く使用可能な美白剤、及び抗老化剤について鋭意検討を重ねた結果、バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳花の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種が、（１）優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、美白剤として有用であること、及び（２）優れたエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有し、抗老化剤として有用であることを、それぞれ知見した。
【００１４】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする美白剤である。
＜２＞ チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の美白剤である。
＜３＞ バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞ エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の美白剤、及び前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によると、第１に、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系美白剤を提供することができる。
また、本発明によると、第２に、優れたエラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することができる。
また、本発明によると、第３に、本発明の前記美白剤、及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した皮膚化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（美白剤及び抗老化剤）
本発明の美白剤及び抗老化剤は、バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記美白剤は、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかに基づく、美白作用を有するものである。
前記バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の各抽出物が含有する、美白作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、美白剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、このことは本発明者らによる新たな知見である。
【００１７】
本発明の抗老化剤は、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかに基づく、抗老化作用を有するものである。
前記バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の各抽出物が含有する、抗老化作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、抗老化剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、このことは本発明者らによる新たな知見である。
【００１８】
前記バイベリー（学名：Ｍｙｒｉｃａ ｃｅｒｉｆｅｒａ）は、シロヤマモモとも呼ばれるヤマモモ科ヤマモモ属の植物である。
抽出原料として使用する前記バイベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根皮が特に好ましい。
前記フウトウカズラ（学名：Ｐｉｐｅｒ ｋａｄｚｕｒａ）は、コショウ科コショウ属の植物であり、本州（関東南部以西）〜沖縄に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記フウトウカズラの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、茎が特に好ましい。
前記キンミズヒキ（学名：Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｐｉｌｏｓａ）は、バラ科キンミズヒキ属の多年草であり、本州、四国、九州などの林の縁、原野、路傍に生息しており、容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記キンミズヒキの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、全草が好ましい。
前記ブルーベリー（学名：Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｓｐｐ．）は、ツツジ科スノキ属に分類される北アメリカ原産の落葉低木果樹の総称である。
抽出原料として使用する前記ブルーベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記ブルーフラッグ（学名：Ｉｒｉｓ ｖｅｓｉｃｏｌｏｒ）は、アヤメ科の植物である。
抽出原料として使用する前記ブルーフラッグの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根が好ましい。
前記西洋サクラソウ（学名：Ｐｒｉｍｕｌａ ｖｅｒｉｓ）は、サクラソウ科の植物である。
抽出原料として使用する前記西洋サクラソウの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記レモンバーベナ（学名：Ａｌｏｙｓｉａ ｔｒｉｐｈｙｌｌａ）は、クマツズラ科イワダレソウ属の落葉低木である、高さ１〜３ｍに成長し、葉は強いレモンの香りを放つ。
抽出原料として使用する前記レモンバーベナの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
前記セロリ（学名：Ａｐｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ）は、セリ科の植物であり、オランダミツバ、清正人参（きよまさにんじん）とも呼ばれる。葉、茎、根、種子のほぼ全ての部分を食用にできる。独特の強い香りがある。
抽出原料として使用する前記セロリの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、種子が好ましい。
前記紅柳（学名：Ｔａｍａｒｉｘ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ）は、ギョウリュウ科の植物である。
抽出原料として使用する前記紅柳の部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、花が好ましい。
前記パッションフルーツ（学名：Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａ ｅｄｕｌｉｓ）は、トケイソウ科の植物である。
抽出原料として使用する前記パッションフルーツの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。
【００１９】
抽出原料である前記各植物は、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記各植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記各植物の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。
【００２０】
前記各植物の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記各植物の抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記各植物の抽出物には、前記各植物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２１】
前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記各植物に含まれる美白作用又は抗老化作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。
【００２２】
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００２４】
抽出原料である前記各植物から、各抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の美白剤又は抗老化剤の有効成分として用いることができる。
【００２５】
抽出により得られる前記各植物の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記各植物の抽出液は、そのままでも美白剤又は抗老化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記各植物は特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記各植物の抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば皮膚化粧料に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２６】
以上のようにして得られる前記各植物の抽出物は、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ＡＴＰ産生促進作用、ラミニン−５産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の美白剤又は抗老化剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
前記美白剤又は抗老化剤中の前記各植物の抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記美白剤又は抗老化剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
また、前記美白剤又は抗老化剤中、前記各植物の抽出物は、いずれか１種のみが含まれていてもよいし、２種以上が含まれていてもよい。前記美白剤又は抗老化剤中に２種以上の植物抽出物が含まれる場合の、各々の含有量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２７】
また、前記美白剤又は抗老化剤中に含まれ得る、前記各植物の抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記各植物の抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記美白剤又は抗老化剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記美白剤又は抗老化剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００２８】
本発明の美白剤又は抗老化剤は、優れた美白作用又は抗老化作用を有すると共に、使用感及び安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の皮膚化粧料への利用に特に好適である。
【００２９】
（皮膚化粧料）
本発明の皮膚化粧料は、本発明の前記美白剤及び前記抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
【００３０】
ここで、前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、などが挙げられる。
【００３１】
前記美白剤又は前記抗老化剤の前記皮膚化粧料全体に対する配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記各植物抽出物に換算して０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜１質量％がより好ましい。
【００３２】
前記皮膚化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、本発明の前記美白作用及び抗老化作用の妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。
【００３３】
本発明の皮膚化粧料は、皮膚に使用した場合に高い安全性を有し、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ＡＴＰ産生促進作用、ラミニン−５産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを発揮するものである。
【００３４】
なお、本発明の美白剤、抗老化剤、及び皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３５】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００３６】
（製造例１）
−各植物の水抽出物の製造−
下記表１に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の水抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の水抽出物の「抽出率」を表１に示す。
【００３７】
【表１】
【００３８】
（製造例２）
−各植物の５０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表２に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の５０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の５０質量％エタノール抽出物の「抽出率」を表２に示す。
【００３９】
【表２】
【００４０】
（製造例３）
−各植物の８０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表３に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量（質量比）の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の８０質量％エタノール抽出物の「抽出率」を表３に示す。
【００４１】
【表３】
【００４２】
（実施例１）
−チロシナーゼ活性阻害作用試験−
下記表４の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、チロシナーゼ活性阻害作用を試験した。
まず、４８ｗｅｌｌプレートに、ＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６．８）０．２ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬのチロシン溶液０．０６ｍＬ、被験試料の２５質量％ＤＭＳＯ溶液０．１８ｍＬを加え、３７℃で１０分間静置した。これに、８００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのチロシナーゼ溶液０．０２ｍＬを加え、引き続き３７℃で１５分間反応した。反応終了後、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
チロシナーゼ活性阻害作用の計算方法は以下のとおりである。
チロシナーゼ活性阻害率（％）＝｛１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）｝×１００
ただし、Ｓｔは被験試料溶液の波長４７５ｎｍにおける吸光度、Ｓｂは被験試料溶液ブランクの波長４７５ｎｍにおける吸光度、Ｃｔはコントロール溶液の波長４７５ｎｍにおける吸光度、Ｃｂはコントロール溶液ブランクの波長４７５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００４３】
結果は、試料濃度１００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、又は５０％阻害試料濃度で表し、表４に示す。
【００４４】
【表４】
表４の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、及び紅柳の抽出物が、チロシナーゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
【００４５】
（実施例２）
−メラニン産生抑制作用試験−
下記表５の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、メラニン産生抑制作用を試験した。
まず、Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０質量％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで２４．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり３００μＬずつ播種し、６時間培養した。培養終了後、１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに３００μＬ添加し、４日間培養した。培養終了後、各ｗｅｌｌから培地を取り除き、１ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨ溶液２００μＬを添加して超音波破砕器により細胞を破壊し、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってメラニン産生量とした。
空試験として、１ｍｍｏｌ／Ｌのテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭのみで培養した細胞を同様の方法で試験した。
メラニン産生抑制作用の計算方法は以下のとおりである。
メラニン産生抑制率（％）＝｛１−（Ｂ／Ｄ）／（Ａ／Ｃ）｝×１００
ただし、Ａは被験試料無添加での４７５ｎｍにおける吸光度、Ｂは被験試料添加での４７５ｎｍにおける吸光度、Ｃは被験試料無添加での５４０ｎｍにおける吸光度、Ｄは被験試料添加での５４０ｎｍにおける吸光度を表す。
【００４６】
結果は、試料濃度２５μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、又は５０％阻害試料濃度で表し、表５に示す。
【００４７】
【表５】
表５の結果から、ブルーフラッグの抽出物、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、パッションフルーツの抽出物、及びセロリの抽出物が、メラニン産生抑制作用を有することが確認できた。
【００４８】
（実施例３）
−エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現抑制作用試験−
下記表６の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（normal human epidermis keratinocyte;ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶＢ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液（試料濃度は表６参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、Ｔａｋａｒａ ＳＹＢＲ ＥｘＳｃｒｉｐｔ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）によるリアルタイム ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＥＴ−１の発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式１によりＥＴ−１ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ又は試料濃度１μｇ／ｍＬでのＥＴ−１ｍＲＮＡ発現抑制率を表６に示す。
＜数式１＞
エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式１中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
【００４９】
【表６】
表６の結果から、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現抑制作用を有することが確認できた。
【００５０】
（実施例４）
−ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用試験−
下記表７の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（normal human epidermis keratinocyte;ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶＢ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液（試料濃度は表７参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調整した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＳＣＦ、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）によるリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＳＣＦの発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式２によりＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬ又は試料濃度１μｇ／ｍＬでのＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制率を表７に示す。
＜数式２＞
ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制率（％）
＝{（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）}／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式２中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
【００５１】
【表７】
表７の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用を有することが確認できた。
【００５２】
（実施例５）
−ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表８の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶＢ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試験試料（試料濃度は表８参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製、Cat.no．311-02501）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ｂＦＧＦ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，codeNo．RR063A，タカラバイオ社製）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ｂＦＧＦのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。結果を表８に示す。
ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)
＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
ただし、式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
【００５３】
【表８】
表８の結果から、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００５４】
（実施例６）
−ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表９の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試験試料（試料濃度は表９参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Cat.no．311-02501）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＰＯＭＣ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，codeNo．RR063A）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。 ＰＯＭＣのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。結果を表９に示す。 ＰＯＭｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％) ＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００ ただし、式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
【００５５】
【表９】
表９の結果から、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、及びセロリの抽出物が、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００５６】
（実施例７）
−エラスターゼ活性阻害作用試験−
下記表１０の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エラスターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、９６穴マイクロプレートにて、０．２ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した各試料溶液５０μＬ、及び２０μｇ／ｍＬのエラスターゼ・タイプＩＩＩ溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬのＮ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥを１００μＬ添加して、２５℃にて１５分間反応させた。反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、これらの結果から、下記数式３によりエラスターゼ活性阻害率を算出した。
＜数式３＞
エラスターゼ活性阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式３中、Ａは、試料溶液無添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、試料溶液添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００５７】
次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記エラスターゼ活性阻害率を測定し、阻害率が５０％になる濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を近似曲線により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどエラスターゼ活性阻害作用が強い）。結果を表１０に示す。
【００５８】
【表１０】
表１０の結果から、バイベリーの抽出物、及びフウトウカズラの抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
【００５９】
（実施例８）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用試験−
下記表１１の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Ｗｕｎｓｃｈ ａｎｄ Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変したものである。
まず、蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬの塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した各試料溶液５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心（１，６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
なお、ＭＭＰ−１としては、COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum（シグマ社製）を使用した。
Ｐｚ−ｐｅｐｔｉｄｅとしては、Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＡＧ社製）を使用した。
そして、得られた結果から、下記数式４によりＭＭＰ−１活性阻害率を算出した。
＜数式４＞
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
ただし、前記数式４中、Ａは試料溶液無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料溶液無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｃは試料溶液添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｄは試料溶液添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度を表す。
【００６０】
次に、各試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記ＭＭＰ−１活性阻害率を測定し、阻害率が５０％になる濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を近似曲線により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどＭＭＰ−１活性阻害作用が強い）。結果を表１１に示す。
【００６１】
【表１１】
表１１の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、ＭＭＰ−１活性阻害作用を有することが確認できた。
【００６２】
（実施例９）
−Ｉ型コラーゲン産生促進作用試験−
下記表１２の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにダルベッコＭＥＭ培地を用いて希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴あたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．２５質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した各試料溶液（試料濃度：１００μｇ／ｍＬ）を各穴に１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。その後、各穴の培地中のＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００６３】
Ｉ型コラーゲン産生促進率は、試料無添加時のＩ型コラーゲン量を１００％として算出した。Ｉ型コラーゲン産生促進率の計算方法は以下のとおりである。
Ｉ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、Ａは被験試料添加時のＩ型コラーゲン量、Ｂは被験試料無添加時のＩ型コラーゲン量を表す。
【００６４】
【表１２】
表１２の結果から、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、パッションフルールの抽出物、及び紅柳の抽出物が、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
【００６５】
（実施例１０）
−ＩＶ型コラーゲン産生促進作用試験−
フウトウカズラの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにしてＩＶ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるようにダルベッコＭＥＭ培地を用いて希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴あたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、０．２５質量％のＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した各試料溶液（試料濃度：１００μｇ／ｍＬ）を各穴に１５０μＬずつ添加し、３日間培養した。培養終了後、各穴の培地中のＩＶ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
そして、得られた測定結果から、下記数式５によりＩＶ型コラーゲン産生促進率（％）を算出した。試料濃度１００μｇ／ｍＬでのＩＶ型コラーゲン産生促進率の結果を表１３に示す。
＜数式５＞
ＩＶ型コラーゲン産生促進率(％)＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式５中、Ａは試料溶液添加時のＩＶ型コラーゲン量を表し、Ｂは試料溶液無添加時のＩＶ型コラーゲン量を表す。
【００６６】
【表１３】
表１３の結果から、フウトウカズラの抽出物が、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認できた。
【００６７】
（実施例１１）
−過酸化水素に対するダメージ抑制作用試験−
下記表１４の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、過酸化水素に対するダメージ抑制作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）をα−ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ ＢＬＲ社製品，ｐＨ７．２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるようにα−ＭＥＭ培地を用いて希釈した後、４８穴プレートに播種し１穴当たり２００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した被験試料を各穴に２００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄した。洗浄後、ハンクス緩衝液に溶解した過酸化水素（１ｍｍｏｌ／Ｌ）、あるいは、ハンクス緩衝液のみを各穴に２００μＬ添加し、２時間培養した。培養後、４００μＬのＰＢＳ（−）で洗浄し、終濃度０．０５ｍｇ／ｍＬで１質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解したニュートラルレッドを各穴に２００μＬ添加した。２．５時間培養した後、ニュートラルレッド溶液を捨て、エタノール・酢酸溶液（エタノール：酢酸：水＝５０：１：４９）を各穴に２００μＬ添加し、色素を抽出した。抽出後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。得られた測定結果から、下記数式６により、過酸化水素に対するダメージ抑制率を求めた。結果を表１４に示す。
＜数式６＞
過酸化水素に対するダメージ抑制率（％）
＝｛１−（Ｃ−Ａ）／（Ｃ−Ｂ）｝×１００
ただし、前記数式６中、Ａは過酸化水素処理・被験試料処理の吸光度、Ｂは過酸化水素処理・被験試料無処理の吸光度、Ｃは過酸化水素無処理・被験試料無処理の吸光度、を表す。
【００６８】
【表１４】
表１４の結果から、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、高い過酸化水素に対するダメージ抑制作用を有することが認められた。
【００６９】
（実施例１２）
−ラミニン−５産生促進作用試験−
下記表１５の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ラミニン−５産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２のフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）にて３７℃、５％ＣＯ２下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５個／ｍＬの細胞密度となるようにＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、２４穴プレートに１穴あたり２００μＬずつ播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で一晩培養した。
培養終了後、培地を抜き、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に５００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で４８時間培養した。培養終了後、上清１００μＬをエライザプレートに移し換え一晩４℃でプレートに吸着させたのち、溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１質量％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトラミニン−５抗体（マウスＩｇＧ、ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ビオチン標識抗体マウスＩｇＧ（アマシャムバイオサイエンス社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、アビジン−ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体と反応させたのち、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
ラミニン−５産生促進率は、試料無添加時における吸光度を１００％として算出した。各試料のラミニン−５産生促進率（％）を表１５に示す。
【００７０】
【表１５】
表１５の結果から、ブルーフラッグの抽出物、パッションフルーツの抽出物、及びセロリの抽出物が、角化細胞のラミニン−５産生を促進する作用を有することが確認できた。
【００７１】
（実施例１３）
−トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用試験−
下記表１６の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるようにＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、２日間培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−１の量をモノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ−１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。結果を表１６に示す。
トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用の計算方法は以下のとおりである。
トランスグルタミナーゼ−１産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、Ａは被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度、Ｂは被験試料無添加時（コントロール）の波長４０５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００７２】
【表１６】
表１６の結果から、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、セロリの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物が、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用を有することが確認できた。
【００７３】
（実施例１４）
−ＵＶＢダメージからの回復作用試験−
下記表１７の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＵＶＢダメージからの回復作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をα−ＭＥＭを用いて２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり２００μＬずつ播種した。２４時間培養後、培地を１００μＬのＰＢＳ（−）へ交換し、１．０Ｊ／ｃｍ２のＵＶＢを照射した。照射後、直ちに、ＰＢＳ（−）を抜き、１０質量％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭに溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに４００μＬ添加し、２４時間培養した。紫外線ＵＶＢダメージからの回復効果は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴを各ｗｅｌｌに２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様に細胞播種した後、ＵＶＢを照射しない細胞、及び細胞播種後ＵＶＢを照射し被験試料を添加しない細胞についても同様に測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
ＵＶＢダメージからの回復作用の計算方法は以下のとおりである。結果を表１７に示す。
ＵＶＢダメージからの回復率（％）
＝｛（Ｎｔ−Ｃ）−（Ｎｔ−Ｓａ）｝／（Ｎｔ−Ｃ）×１００
ただし、式中、ＮｔはＵＶＢを照射しない細胞での吸光度、ＣはＵＶＢを照射し被験試料を添加しない細胞での吸光度、ＳａはＵＶＢを照射し被験試料を添加した細胞での吸光度を表す。
【００７４】
【表１７】
表１７の結果から、フウトウカズラの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びセロリの抽出物が、ＵＶＢダメージからの回復作用を有することが確認できた。
【００７５】
（実施例１５）
−表皮角化細胞増殖促進作用試験−
西洋サクラソウの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
次に、表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide〕を各穴に１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式７により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。試料濃度３．１３μｇ／ｍＬでの表皮角化細胞増殖促進率を表１８に示す。
＜数式７＞
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ／Ｃｔ）×１００
ただし、前記数式７中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度を表す。
【００７６】
【表１８】
表１８の結果から、西洋サクラソウの抽出物が、表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
【００７７】
（実施例１６）
−皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験−
フウトウカズラの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０質量％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を５質量％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭで７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
培養終了後、５質量％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した試料溶液（濃度：４００μｇ／ｍＬ）を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
次いで、皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。具体的には、各穴から１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide〕を各穴に２０μＬずつ添加した。４．５時間培養した後、１０質量％のＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液を各穴に１００μＬ添加し、一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式８により試料濃度２００μｇ／ｍＬの皮膚線維芽細胞増殖促進率を算出した。結果を表１９に示す。
＜数式８＞
皮膚線維芽細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）×１００
ただし、前記数式８中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｓｂは試料溶液を添加した空試験の吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度、Ｃｂは試料溶液を添加しない空試験の吸光度、をそれぞれ表す。
【００７８】
【表１９】
表１９の結果から、フウトウカズラの抽出物が、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
【００７９】
（実施例１７）
−インボルクリン産生促進作用試験−
西洋サクラソウの５０質量％エタノール抽出物を試料として用い、以下のようにして、インボルクリン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２のフラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）にて３７℃、５％ＣＯ２下で培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５個／ｍＬの細胞密度となるようにＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、４８穴プレートに１穴あたり２００μＬずつ播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で一晩培養した。
培養終了後、培地を抜き、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液を各穴に２００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で４８時間培養した。培養終了後、培地を抜き、細胞をプレートに固定させ細胞表面に発現したインボルクリンの量をモノクローナル抗ヒトインボルクリン抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。得られた測定結果から、下記数式９によりインボルクリン産生促進率（％）を算出した。結果を表２０に示す。
＜数式９＞
インボルクリン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、前記数式９中、Ａは試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料無添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００８０】
【表２０】
表２０の結果から、西洋サクラソウの抽出物が、高いインボルクリン産生促進作用を有することが認められた。
【００８１】
（実施例１８）
−アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進作用試験−
下記表２１の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ＡＴＰ産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌ当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した被験試料を各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、２時間培養した。ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。即ち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社製）を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加した。反応後、化学発光量を測定した。結果を表２１に示す。
ＡＴＰ産生促進率の計算方法は以下のとおりである。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、Ａは被験試料を添加した細胞での化学発光量、Ｂは被験試料を添加しない細胞での化学発光量を表す。
【００８２】
【表２１】
表２１の結果から、バイベリーの抽出物、及びレモンバーベナの抽出物が、ＡＴＰ産生促進作用を有することが確認できた。
【００８３】
（実施例１９）
−プロフィラグリン・フィラグリン産生促進作用試験−
下記表２２の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、フィラグリン産生促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、ヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を同培地にて１．５×１０５個／ｍＬの細胞密度になるように調整し、２ｍＬずつ６穴コラーゲンコートプレートに播種して３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で３日間培養した。培養後、培地を０．５質量％ＤＭＳＯに溶解した試料（試料濃度は表２２を参照）を含むＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２ ２ｍＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で５日間培養した。培養終了後、常法により総タンパクの調整を行った。＜ウエスタンブロッティング＞
１０μｇ／列に調整したサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥにより展開し、ＰＶＤＦ膜に転写した。５％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）でブロッキングを行った後、抗ヒトフィラグリンモノクローナル抗体（Harbor Bio-Products社製）、ビオチン標識抗マウスＩｇ（Whole Ab，Amersham Biosciences社製）及びストレプトアビジンーペルオキシダーゼ複合体（CALBIOCHEM社製）を、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．３％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）で１０００倍に希釈して順次反応させ、ECL Western blotting detection reagents and analysis system（Amersham Biosciences社製）の発光によりプロフィラグリン及びフィラグリンを検出した。検出したバンドをKODAK 1D Image Analysis Software EDAS290 Version3.5にて定量的に測定した。
結果は、試料添加及び無添加で培養した細胞のそれぞれから調製したタンパク１０μｇ中のプロフィラグリン及びフィラグリンのNet intensity（バンド強度）を合算した値を用いて、試料のプロフィラグリン産生促進作用を評価し、プロフィラグリン産生促進率（％）を下記式に基づいて算出した。結果を表２２に示す。
プロフィラグリン・フィラグリン産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、式中Ａは「試料添加時のNet intensity（プロフィラグリン及びフィラグリンの合計値）」を、Ｂは「試料無添加時（コントロール）のNet intensity」を表す。
【００８４】
【表２２】
表２２の結果から、ブルーフラッグの抽出物、及びパッションフルーツの抽出物が、フィラグリン産生促進作用を有することが確認できた。
【００８５】
（実施例２０）
−ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表２３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。 回収した細胞を３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で溶解した試料溶液（試料濃度は表２３参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製，Cat.No.311-02501）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＨＡＳ３（Hyaluronan Synthase 3）及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart cycler（Cepheid社製）を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit（Perfect Real Time，codeNo.RR063A）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。ＨＡＳ３の発現量は、「試料無添加」で及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「試料無添加」の補正値を１００としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進率（％）を算出した。結果を表２３に示す。
ＨＡＳ３ｍＲＮＡ発現促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、式中Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時の補正値」を表す。
【００８６】
【表２３】
表２３の結果から、フウトウカズラの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、セロリの抽出物、及びレモンバーベナの抽出物が、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００８７】
（実施例２１）
−アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用試験−
下記表２４の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
まず、正常ヒト新生児皮膚表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコでヒト正常新生児表皮角化細胞長期培養用培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。 ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した被験試料を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ；Ｃａｔ．ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（登録商標）（Ｃｅｐｈｅｉｄ社）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ（登録商標）ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。ＡＱＰ３の発現量は、被験試料無添加、被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製したｔｏｔａｌ ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に被験試料無添加の補正値を１００とした時の被験試料添加の補正値を算出した。結果を表２４に示す。
ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進作用の計算方法は以下の通りである。
ＡＱＰ３ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
ただし、式中Ａは被験試料添加時の補正値、Ｂは被験試料無添加時の補正値を表す。
【００８８】
【表２４】
表２４の結果から、ブルーフラッグの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、及びセロリの抽出物が、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認できた。
【００８９】
（配合実施例１）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・バイベリーの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９０】
（配合実施例２）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・ブルーフラッグの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９１】
（配合実施例３）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・フウトウカズラの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９２】
（配合実施例４）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・西洋サクラソウの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９３】
（配合実施例５）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・レモンバーベナの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９４】
（配合実施例６）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・キンミズヒキの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９５】
（配合実施例７）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・ブルーベリーの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９６】
（配合実施例８）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・セロリの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９７】
（配合実施例９）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・紅柳の５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９８】
（配合実施例１０）
−乳液−
下記組成の乳液を、常法により製造した。
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・パッションフルーツの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００９９】
（配合実施例１１）
−クリーム−
下記組成のクリームを、常法により製造した。
・流動パラフィン・・・５．０ｇ
・サラシミツロウ・・・４．０ｇ
・セタノール・・・３．０ｇ
・スクワラン・・・１０．０ｇ
・ラノリン・・・２．０ｇ
・ステアリン酸・・・１．０ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・１．５ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５ｇ
・香料・・・０．１ｇ
・ブルーフラッグの８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【０１００】
（配合実施例１２）
−パック−
下記組成のパックを、常法により製造した。
・ポリビニルアルコール・・・１５ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３ｇ
・プロピレングリコール・・・７ｇ
・エタノール・・・１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・フウトウカズラの水抽出物（製造例１）・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【０１０１】
本発明の美白剤又は抗老化剤は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用、エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、ＡＴＰ産生促進作用、ラミニン−５産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、及び過酸化水素に対するダメージ抑制作用の少なくともいずれかを有しており、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント等の皮膚化粧料に幅広く用いられる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項２】
チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の美白剤。
【請求項３】
バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項４】
エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有する請求項３に記載の抗老化剤。
【請求項５】
請求項１から２のいずれかに記載の美白剤、及び請求項３から４のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項１】
バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項２】
チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ＳＣＦｍＲＮＡ発現抑制作用、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現抑制作用、及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現抑制作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の美白剤。
【請求項３】
バイベリーの抽出物、ブルーフラッグの抽出物、フウトウカズラの抽出物、西洋サクラソウの抽出物、レモンバーベナの抽出物、キンミズヒキの抽出物、ブルーベリーの抽出物、セロリの抽出物、紅柳の抽出物、及びパッションフルーツの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項４】
エラスターゼ活性阻害作用、ＭＭＰ−１活性阻害作用、Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、過酸化水素に対するダメージ抑制作用、ラミニン−５産生促進作用、トランスグルタミナーゼ−１産生促進作用、ＵＶＢダメージからの回復作用、表皮角化細胞増殖促進作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、インボルクリン産生促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、フィラグリン産生促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用、及びアクアポリン３（ＡＱＰ３）ｍＲＮＡ発現促進作用の少なくともいずれかを有する請求項３に記載の抗老化剤。
【請求項５】
請求項１から２のいずれかに記載の美白剤、及び請求項３から４のいずれかに記載の抗老化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【公開番号】特開２０１０−６５００９（Ｐ２０１０−６５００９Ａ）
【公開日】平成２２年３月２５日（２０１０．３．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２３５４１５（Ｐ２００８−２３５４１５）
【出願日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年３月２５日（２０１０．３．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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