説明

脂肪酸誘導体の増強された生産

脂肪酸生合成経路からの生成物(脂肪酸誘導体)を生産する遺伝子操作された細胞および微生物、ならびにその使用方法が提供される。生成物は特にバイオ燃料として有用である。


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【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下の(a) および (b)の少なくとも1つを含む組換え細胞:
(a)脂肪酸誘導体酵素をコードする少なくとも1つの遺伝子、ここで該遺伝子は、遺伝子が過剰発現されるように改変されている;および
(b) アシル-CoA デヒドロゲナーゼ酵素をコードする遺伝子、ここで該遺伝子は、遺伝子の発現が減弱されるように改変されている。
【請求項2】
以下を含む請求項 1の組換え細胞:
(a)脂肪酸誘導体酵素をコードする少なくとも1つの改変された遺伝子、および、
(b)アシル-CoA デヒドロゲナーゼ酵素をコードする改変された遺伝子。
【請求項3】
脂肪酸誘導体酵素をコードする改変された遺伝子が、アシル-CoA シンターゼ、チオエステラーゼ、エステルシンターゼ、アルコール アシルトランスフェラーゼ、アルコール デヒドロゲナーゼ、アシル-CoA レダクターゼ、または脂肪アルコール形成 アシル-CoA レダクターゼをコードする遺伝子である請求項 1の組換え細胞。
【請求項4】
脂肪酸誘導体酵素をコードする改変された遺伝子が、アシル-CoA シンターゼ、チオエステラーゼまたはエステルシンターゼをコードする遺伝子である請求項 3の組換え細胞。
【請求項5】
以下を含む請求項 3の組換え細胞:
(a)アシル-CoA シンターゼをコードする改変された遺伝子、および
(b)チオエステラーゼまたはエステルシンターゼをコードする改変された遺伝子。
【請求項6】
以下を含む請求項 3の組換え細胞:
(a)アシル-CoA シンターゼをコードする改変された遺伝子、
(b)チオエステラーゼをコードする改変された遺伝子、および、
(c)エステルシンターゼをコードする改変された遺伝子。
【請求項7】
輸送タンパク質をコードする遺伝子を含む請求項 1の組換え細胞。
【請求項8】
細胞が、サッカロマイセス・セレビシエ、カンジダ・リポリティカ、大腸菌、アルスロバクター、ロドトルラ・グルチニンス、アシネトバクター、カンジダ・リポリティカ、ボツリオコッカス・ブラウニ、ビブリオ・ファーニッシ、ミクロコッカス・ルテウス、ステノトロホモナス・マルトフィリアまたはバチルス・スブチリス 細胞である請求項 1の組換え細胞。
【請求項9】
細胞が、アルスロバクター AK 19、アシネトバクター・エスピー・株 M-1、大腸菌 B、大腸菌 C、大腸菌 K または大腸菌 W 細胞である請求項 8の組換え細胞。
【請求項10】
細胞がラン藻細胞である請求項 1の組換え細胞。
【請求項11】
ラン藻細胞が、シネコシスティス・エスピーPCC6803またはシネココッカス・エロンガツス PCC7942 細胞である請求項 10の組換え細胞。
【請求項12】
細胞が、植物、動物またはヒト細胞である請求項 1の組換え細胞。
【請求項13】
細胞が、細菌、酵母、または糸状菌からの微生物細胞である請求項 1の組換え細胞。
【請求項14】
脂肪酸誘導体酵素をコードする少なくとも1つの外来性核酸配列を含むように改変されている、脂肪酸誘導体を生産することが出来る組換え細胞。
【請求項15】
外来性核酸配列が、アシル-CoA シンターゼ、チオエステラーゼ、エステルシンターゼ、アルコール アシルトランスフェラーゼ、アルコール デヒドロゲナーゼ、アシル-CoA レダクターゼ、または脂肪アルコール形成 アシル-CoA レダクターゼをコードする請求項 14の組換え細胞。
【請求項16】
脂肪酸誘導体酵素をコードする 少なくとも2つの外来性核酸配列を含むように改変されている、請求項 14の組換え細胞。
【請求項17】
第一の外来性核酸配列がアシル-CoA シンターゼをコードする請求項 16の組換え細胞。
【請求項18】
第二の外来性核酸配列がチオエステラーゼまたはエステルシンターゼをコードする請求項 17の組換え細胞。
【請求項19】
第一の外来性核酸配列が fadDをコードする請求項 17の組換え細胞。
【請求項20】
細胞が、植物、動物またはヒト細胞である請求項 14の組換え細胞。
【請求項21】
細胞が、細菌、酵母、または糸状菌からの微生物細胞である請求項 14の組換え細胞。
【請求項22】
外来性核酸配列が、アルスロバクター、ロドトルラ・グルチニンス、アシネトバクター・エスピー、アルカニボラックス・ボルクメンシスまたはカンジダ・リポリティカ由来である請求項 14の組換え細胞。
【請求項23】
細胞が、アルスロバクター AK 19、アシネトバクター・エスピー・株 M-1、大腸菌 B、大腸菌 C、大腸菌 K または大腸菌 W 細胞である請求項 14の組換え細胞。
【請求項24】
脂肪酸誘導体酵素をコードする遺伝子が、組換え細胞における発現のために最適化されるよう改変されている請求項 1の組換え細胞。
【請求項25】
細胞が、アシル-CoA シンターゼをコードする改変された遺伝子を含む、請求項 1の組換え細胞。
【請求項26】
細胞が第二の改変された脂肪酸誘導体酵素遺伝子を含み、該第二の遺伝子が脂肪アルコール形成 アシル-CoA レダクターゼ、アシル-CoA レダクターゼ、またはアルコール デヒドロゲナーゼをコードする、請求項 25の組換え細胞。
【請求項27】
アシル-CoA シンターゼ 遺伝子が、fadD、fadK、BH3103、yhfL、Pfl-4354、EAV15023、fadD1、fadD2、RPC_4074、fadDD35、fadDD22、faa3p、または ZP_01644857をコードする遺伝子である請求項 25の組換え細胞。
【請求項28】
アシル-CoA シンターゼ 遺伝子が、結核菌 HR7Rv由来fadDD35 [NP_217021]、枯草菌由来yhfL [NP_388908]、緑膿菌 PAO1由来fadD1 [NP_251989]、ステノトロホモナス・マルトフィリア R551-3由来のZP_01644857をコードする遺伝子、またはサッカロマイセス・セレビシエ由来faa3p [NP_012257]である請求項 27の組換え細胞。
【請求項29】
細胞がチオエステラーゼをコードする改変された脂肪酸誘導体酵素 遺伝子を含む、請求項 1の組換え細胞。
【請求項30】
チオエステラーゼ 遺伝子が、tesA、tesA、tesB、fatB、fatB2、fatB3、fatB [M141T]、fatA またはfatA1である請求項 29の組換え細胞。
【請求項31】
改変された脂肪酸誘導体酵素 遺伝子がエステルシンターゼをコードする請求項 1 の組換え細胞。
【請求項32】
エステルシンターゼ 遺伝子が、アシネトバクター・エスピーピー、アルカニボラックス・ボルクメンシス、シロイヌナズナ、サッカロマイセス・セレビシエ、ヒト、またはシモンジア・チネンシスから得られる請求項 31の組換え細胞。
【請求項33】
エステルシンターゼ 遺伝子が、wax/dgatである請求項 31の組換え細胞。
【請求項34】
エステルシンターゼが、シモンジア・チネンシス、アシネトバクター・エスピー・株 ADP1、アルカニボラックス・ボルクメンシス、緑膿菌、ファンディバクター・ジャデンシス、シロイヌナズナ、またはアルカリゲネス・エウトロファス由来の二機能性 エステルシンターゼ/アシル-CoA:ジアシルグリセロール アシルトランスフェラーゼである請求項 31の組換え細胞。
【請求項35】
エステルシンターゼが、モルチエレラ・アルピナ、クリプトコッカス・クルヴァツス、アルカニボラックス・ ジャデンシス、アシネトバクター・エスピー・HO1-Nまたは ロドコッカス・オパクスから得られる請求項 31の組換え細胞。
【請求項36】
発現または過剰発現されるよう 改変されているpdh、panK、aceEF、fabH、fabD、fabG、acpP、および fabF 遺伝子の少なくとも1つをさらに含む請求項 1の組換え細胞。
【請求項37】
遺伝子発現が減弱されるよう改変されているfadE、gpsA、ldhA、pflB、adhE、pta、poxB、ackA、および ackB 遺伝子の少なくとも1つをさらに含む請求項 1の組換え細胞。
【請求項38】
plsbおよびsfaの少なくとも1つの改変された遺伝子をさらに含む請求項 1の組換え細胞。
【請求項39】
アシル-CoA デヒドロゲナーゼ酵素をコードする遺伝子が欠失されている請求項 1の組換え細胞。
【請求項40】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 ppm 以下のヒ素を含む、請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項41】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 30 ppm以下のヒ素を含む請求項 40の組成物。
【請求項42】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 25 ppm以下のヒ素を含む請求項 41の組成物。
【請求項43】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 10 〜約 50 ppm のヒ素を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項44】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 200 ppm以下のカルシウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項45】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 150 ppm以下のカルシウムを含む請求項 44の組成物。
【請求項46】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 119 ppm 以下のカルシウムを含む請求項 45の組成物。
【請求項47】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 〜約 200 ppm のカルシウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項48】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 200 ppm以下の塩素を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項49】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、 さらに約 150 ppm以下の塩素を含む請求項 48の組成物。
【請求項50】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 119 ppm以下の塩素を含む請求項 49の組成物。
【請求項51】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 〜約 200 ppmの塩素を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項52】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 ppm 以下の銅を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項53】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 30 ppm 以下の銅を含む請求項 52の組成物。
【請求項54】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 23 ppm 以下の銅を含む請求項 53の組成物。
【請求項55】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 10 〜約 50 ppmの銅を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項56】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 300 ppm以下の鉄を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項57】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 200 ppm 以下の鉄を含む請求項 56の組成物。
【請求項58】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 136 ppm 以下の鉄を含む請求項 57の組成物。
【請求項59】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 〜約 250 ppmの鉄を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項60】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 ppm 以下の鉛を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項61】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 30 ppm以下の鉛を含む請求項 60の組成物。
【請求項62】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 25 ppm 以下の鉛を含む請求項 61の組成物。
【請求項63】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 10 〜約 50 ppm の鉛を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項64】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 ppm以下のマンガンを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項65】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 30 ppm以下のマンガンを含む請求項 64の組成物。
【請求項66】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 23 ppm以下のマンガンを含む請求項 65の組成物。
【請求項67】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 10 〜約 50 ppmのマンガンを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項68】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 ppm 以下のマグネシウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項69】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 30 ppm 以下のマグネシウムを含む請求項 68の組成物。
【請求項70】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 23 ppm以下のマグネシウムを含む請求項 69の組成物。
【請求項71】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 10 〜約 50 ppmのマグネシウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項72】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.5 ppm 以下の水銀を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項73】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.1 ppm 以下の水銀を含む請求項 72の組成物。
【請求項74】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.06 ppm 以下の水銀を含む請求項 73の組成物。
【請求項75】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.01 〜約 0.2 ppm の水銀を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項76】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 ppm 以下のモリブデンを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項77】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 30 ppm以下のモリブデンを含む請求項 76の組成物。
【請求項78】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 23 ppm以下のモリブデンを含む請求項 77の組成物。
【請求項79】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 10 〜約 50 ppmのモリブデンを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項80】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 2% 以下の窒素を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項81】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 1% 以下の窒素を含む請求項 80の組成物。
【請求項82】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.5%以下の窒素を含む請求項 81の組成物。
【請求項83】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.1 〜約 1%の窒素を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項84】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 200 ppm 以下のカリウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項85】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 150 ppm 以下のカリウムを含む請求項 84の組成物。
【請求項86】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 103 ppm以下のカリウムを含む請求項 85の組成物。
【請求項87】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 〜約 200 ppm のカリウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項88】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 300 ppm以下のナトリウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項89】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 200 ppm以下のナトリウムを含む請求項 88の組成物。
【請求項90】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 140 ppm 以下のナトリウムを含む請求項 89の組成物。
【請求項91】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 〜約 300 ppmのナトリウムを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項92】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 1 ppm 以下の硫黄を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項93】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 1%以下の硫黄を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項94】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.14% 以下の硫黄を含む請求項 93の組成物。
【請求項95】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 0.05 〜約 0.3% の硫黄を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項96】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 50 ppm 以下の亜鉛を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項97】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 30 ppm 以下の亜鉛を含む請求項 96の組成物。
【請求項98】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 23 ppm 以下の亜鉛を含む請求項 97の組成物。
【請求項99】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 10 〜約 50 ppmの亜鉛を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項100】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 700 ppm以下のリンを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項101】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 500 ppm 以下のリンを含む請求項 100の組成物。
【請求項102】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 350 ppm以下のリンを含む請求項 101の組成物。
【請求項103】
組換え細胞から生産される脂肪酸誘導体を含み、さらに約 100 〜約 700 ppmのリンを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項104】
脂肪酸誘導体の還元末端 から炭素鎖の7位(C7とC8との間)にて二重結合を有する脂肪酸を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項105】
組成物がC5-C25 脂肪エステルを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項106】
組成物がC10-C20 脂肪エステルを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項107】
組成物がC12-C18 脂肪エステルを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項108】
脂肪酸誘導体が直鎖脂肪酸誘導体を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項109】
脂肪酸誘導体が分枝鎖脂肪酸誘導体を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項110】
脂肪酸誘導体が環状部分を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項111】
脂肪酸誘導体が不飽和である請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項112】
脂肪酸誘導体がモノ不飽和である請求項 111の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項113】
脂肪酸誘導体が飽和である請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項114】
組成物が、アルコールおよびアシル-CoAから生産される脂肪エステルを含み、ここで、
該アルコールが、少なくとも 約 1、約 2、約 3、約 4、約 5、約 6、約 7、約 8、約 10、約 12、約 14、約 16、または約 18 炭素長であり、
該アシル-CoA が、少なくとも 約 2、約 4、約 6、約 8、約 10、約 12、約 14、約 16、約 18、約 20、約 22、約 24、または約 26 炭素長である、
請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項115】
脂肪エステルが生産されるアルコールおよびアシル-CoAが、約 2、約 4、約 6、約 8、約 10、約 12または約 14 炭素原子にて異なる請求項 114の組成物。
【請求項116】
脂肪酸誘導体が約 1.003 〜約 1.5の現代炭素比を有する請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項117】
以下の工程を含む組換え細胞において脂肪酸誘導体を生産する方法:
a)請求項 1の組換え細胞を得る工程;
b)組換え細胞を発現に好適な条件下で培養する工程、および、
c)脂肪酸誘導体を生産させる工程。
【請求項118】
以下の工程を含む組換え細胞において脂肪酸誘導体を生産する方法:
a) 請求項 5の組換え細胞を得る工程;
b) 組換え細胞を発現に好適な条件下で培養する工程、および、
c) 脂肪酸誘導体を生産させる工程。
【請求項119】
以下の工程を含む組換え細胞において脂肪酸誘導体を生産する方法:
a) 請求項 6の組換え細胞を得る工程;
b) 組換え細胞を発現に好適な条件下で培養する工程、および、
c) 脂肪酸誘導体を生産させる工程。
【請求項120】
以下の工程を含む組換え細胞における脂肪酸誘導体の生産を上昇させる方法:
脂肪酸誘導体酵素をコードする外来性核酸を細胞に導入する工程、および、
外来性核酸を発現させる工程、
ここで、組換え細胞における核酸の発現の結果、非組換え細胞と比較して脂肪酸誘導体の生産が上昇する。
【請求項121】
外来性核酸が、アシル-CoA シンターゼ、チオエステラーゼまたはエステルシンターゼをコードする請求項 120の方法。
【請求項122】
アシル-CoA シンターゼ、チオエステラーゼおよびエステルシンターゼをコードする外来性核酸が組換え細胞に導入される請求項 120の方法。
【請求項123】
以下の工程を含む、組換え細胞における脂肪酸誘導体の生産レベルを上昇させる方法:
(a)核酸コンストラクトを宿主細胞に導入する工程、ここで、該核酸コンストラクトは、
(a)配列番号2、配列番号3、配列番号6、配列番号9 または配列番号13の脂肪酸誘導体酵素をコードする核酸配列、および
(b)該核酸配列の発現のための制御配列、
を含む;
(b)該核酸配列を発現させる工程;および、
(c)脂肪酸誘導体を得る工程。
【請求項124】
脂肪酸誘導体酵素をコードする核酸配列を含む組換えコンストラクト、ここで、該核酸配列は、脂肪酸誘導体酵素をコードする遺伝子を過剰発現するように改変されている。
【請求項125】
該核酸配列が、アシル-CoA シンターゼ、チオエステラーゼまたはエステルシンターゼをコードする遺伝子を過剰発現するように改変されている請求項 124の組換えコンストラクト。
【請求項126】
該核酸配列が、以下:
(1)アシル-CoA シンターゼをコードする遺伝子、および、
(2)チオエステラーゼまたはエステルシンターゼをコードする遺伝子、
を過剰発現するように改変されている請求項 124の組換えコンストラクト。
【請求項127】
該核酸配列が、以下:
(1)アシル-CoA シンターゼ、
(2)チオエステラーゼ、および、
(3)エステルシンターゼ、
をコードする遺伝子を過剰発現するように改変されている請求項126の組換えコンストラクト。
【請求項128】
コンストラクトが、アシル-CoA デヒドロゲナーゼの発現が減弱されるように改変されているアシル-CoA デヒドロゲナーゼをコードする核酸配列をさらに含む、請求項 124の組換えコンストラクト。
【請求項129】
請求項 124の組換えコンストラクトを含むベクター。
【請求項130】
請求項125の組換えコンストラクトを含むベクター。
【請求項131】
請求項126の組換えコンストラクトを含むベクター。
【請求項132】
請求項127の組換えコンストラクトを含むベクター。
【請求項133】
請求項128の組換えコンストラクトを含むベクター。
【請求項134】
ベクターが形質転換細胞の選択を提供する構造遺伝子をさらに含む、請求項 129のベクター。
【請求項135】
以下の工程を含む、生産宿主細胞における脂肪酸誘導体の生産を上昇させる方法:
生産宿主細胞が脂肪酸誘導体酵素を発現または過剰発現するように、ヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する工程、ここで、生産宿主細胞における脂肪酸誘導体の生産は、形質転換されていない生産宿主細胞と比較して上昇している。
【請求項136】
生産された脂肪酸誘導体を得るために、生産宿主細胞が収集され、溶解される請求項 135の方法。
【請求項137】
生産宿主細胞が輸送タンパク質をコードするヌクレオチド配列により形質転換され、生産宿主細胞が脂肪酸誘導体を細胞外に放出する、請求項 135 の方法。
【請求項138】
宿主細胞において機能的であるプロモーターに作動可能に連結した、脂肪酸誘導体酵素をコードする核酸配列を含むベクター、ここで、該核酸配列は、アシル-CoA シンターゼをコードする第一の核酸配列およびチオエステラーゼまたはエステルシンターゼをコードする第二の核酸配列を含む。
【請求項139】
輸送タンパク質をコードする核酸配列をさらに含む請求項 138のベクター。
【請求項140】
該第二の核酸配列がチオエステラーゼをコードし、該ベクターがさらに、エステルシンターゼをコードする第三の核酸配列を含む、請求項 138のベクター。
【請求項141】
輸送タンパク質をコードする核酸配列をさらに含む請求項 140のベクター。
【請求項142】
以下の工程を含む脂肪酸誘導体を生産する方法:
(a)請求項 138のベクターを含む生産宿主細胞を提供する工程、および、
(b)生産宿主細胞を培養して脂肪酸誘導体を生産させる工程。
【請求項143】
以下の工程を含む脂肪酸誘導体を生産する方法:
(a)請求項 140のベクターを含む生産宿主細胞を提供する工程、および、
(b)生産宿主細胞を培養して脂肪酸誘導体を生産させる工程。
【請求項144】
生産された脂肪酸誘導体を得るために、生産宿主細胞の培養物からの上清が回収される請求項 142の方法。
【請求項145】
生産された脂肪酸誘導体を得るために、生産宿主細胞の培養物からの上清が回収される請求項143の方法。
【請求項146】
請求項 142の方法によって生産された脂肪酸誘導体。
【請求項147】
請求項 143の方法によって生産された脂肪酸誘導体。
【請求項148】
請求項 146の脂肪酸誘導体を含むバイオ燃料組成物。
【請求項149】
請求項 147の脂肪酸誘導体を含むバイオ燃料組成物。
【請求項150】
脂肪酸誘導体が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 146の脂肪酸誘導体。
【請求項151】
脂肪酸誘導体が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 147の脂肪酸誘導体。
【請求項152】
組換え細胞が以下を含む請求項 4の組換え細胞:
アシル-CoA シンターゼをコードする改変された遺伝子、および、
チオエステラーゼをコードする改変された遺伝子。
【請求項153】
非組換え細胞と比較してより多くのアシル-CoAを生産する請求項 152の組換え細胞。
【請求項154】
請求項 104の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項155】
請求項 105の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項156】
請求項 106の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項157】
請求項 107の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項158】
請求項 114の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項159】
請求項 116の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項160】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 154のバイオ燃料組成物。
【請求項161】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 155のバイオ燃料組成物。
【請求項162】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 156のバイオ燃料組成物。
【請求項163】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 157のバイオ燃料組成物。
【請求項164】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 158のバイオ燃料組成物。
【請求項165】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 159のバイオ燃料組成物。
【請求項166】
遊離脂肪酸を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項167】
遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 1%である請求項 166の組成物。
【請求項168】
遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 5%である請求項 166の組成物。
【請求項169】
遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約8%である請求項 166の組成物。
【請求項170】
遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 10%である請求項 166の組成物。
【請求項171】
遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約20%である請求項 166の組成物。
【請求項172】
脂肪エステルを含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項173】
脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 50%である請求項 172の組成物。
【請求項174】
脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 60%である請求項 172の組成物。
【請求項175】
脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 75%である請求項 172の組成物。
【請求項176】
脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 80%である請求項 172の組成物。
【請求項177】
脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 85%である請求項 172の組成物。
【請求項178】
脂肪エステルおよび遊離脂肪酸を含む請求項 1の組換え細胞によって生産される組成物。
【請求項179】
脂肪エステルの遊離脂肪酸に対する比が、約 10:1、約 9:1、約 8:1、約 7:1、約 5:1、約 2:1または約 1:1である請求項 179の組成物。
【請求項180】
脂肪エステルの遊離脂肪酸に対する比が約 9:1または約 8:1である請求項 179の組成物。
【請求項181】
脂肪エステルが以下の少なくとも1つである請求項 179の組成物: エチルドデカノエート、エチルトリデカノエート、エチルテトラデカノエート、エチルペンタデカノエート、エチルシス-9-ヘキサデセノエート、エチルヘキサデカノエート、エチルヘプタデカノエート、エチルシス-11-オクタデセノエート、エチルオクタデカノエート、またはそれらの組合せ。
【請求項182】
遊離脂肪酸が以下の少なくとも1つである請求項 172の組成物: ドデカン酸、テトラデカン酸、ペンタデカン酸、シス-9-ヘキサデセン酸、ヘキサデカン酸、シス-11-オクタデセン酸、またはそれらの組合せ。
【請求項183】
請求項 166の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項184】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 183のバイオ燃料組成物。
【請求項185】
請求項 172の組成物を含むバイオ燃料組成物。
【請求項186】
バイオ燃料が、バイオディーゼル、脂肪アルコール、脂肪エステル、トリアシルグリセリド、ガソリンまたはジェット燃料である請求項 185のバイオ燃料組成物。
【請求項187】
総遊離脂肪酸に対するC12 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 5%である請求項 166の組成物。
【請求項188】
総遊離脂肪酸に対するC12 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 10%である請求項 166の組成物。
【請求項189】
総遊離脂肪酸に対するC14 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 20%である請求項 166の組成物。
【請求項190】
総遊離脂肪酸に対するC14 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 30%である請求項 166の組成物。
【請求項191】
総遊離脂肪酸に対するC15 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 1%である請求項 166の組成物。
【請求項192】
総遊離脂肪酸に対するC16 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 20%である請求項 166の組成物。
【請求項193】
総遊離脂肪酸に対するC16 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 30%である請求項 166の組成物。
【請求項194】
総遊離脂肪酸に対するC18 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 15%である請求項 166の組成物。
【請求項195】
総遊離脂肪酸に対するC18 遊離脂肪酸の重量パーセンテージが少なくとも 約 20%である請求項 166の組成物。
【請求項196】
総脂肪エステルに対するC12 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 1%である請求項 166の組成物。
【請求項197】
総脂肪エステルに対するC12 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 2%である請求項 166の組成物。
【請求項198】
総脂肪エステルに対するC14 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 10%である請求項 166の組成物。
【請求項199】
総脂肪エステルに対するC14 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 15%である請求項 166の組成物。
【請求項200】
総脂肪エステルに対するC16 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 30%である請求項 166の組成物。
【請求項201】
総脂肪エステルに対するC16 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 40%である請求項 166の組成物。
【請求項202】
総脂肪エステルに対するC18 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 20%である請求項 166の組成物。
【請求項203】
総脂肪エステルに対するC18 脂肪エステルの重量パーセンテージが少なくとも 約 30%である請求項 166の組成物。

【図2】
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【図3】
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【図4】
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【図5】
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【図6】
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【図7】
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【図8】
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【図9】
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【図10】
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【図11】
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【図12】
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【図13】
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【図14】
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【図15】
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【図16】
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【図17】
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【図18−1】
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【図18−2】
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【図18−3】
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【図19】
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【図20】
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【図21】
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【図22】
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【図23】
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【図24】
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【図25】
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【図26】
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【図27】
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【図28】
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【図29】
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【図30】
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【図31】
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【公表番号】特表2010−538602(P2010−538602A)
【公表日】平成22年12月16日(2010.12.16)
【国際特許分類】
【出願番号】特願2010−501269(P2010−501269)
【出願日】平成20年3月28日(2008.3.28)
【国際出願番号】PCT/US2008/058788
【国際公開番号】WO2008/119082
【国際公開日】平成20年10月2日(2008.10.2)
【出願人】(508343205)エルエス9・インコーポレイテッド (7)
【氏名又は名称原語表記】LS9, Inc.
【Fターム(参考)】