血圧上昇を抑制する組成物、薬剤及び機能性食品
【課題】ツボクサ由来のサポニンを用いて血圧の上昇を抑制すること。
【解決手段】ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有した組成物にすることで、血圧の上昇を抑制することができるようになる。
【解決手段】ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有した組成物にすることで、血圧の上昇を抑制することができるようになる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧に関連する疾患の予防、改善及び治療等を行うものであり、例えば、ツボクサ等の植物の抽出物に含有されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有させてなる血圧上昇を抑制する組成物と、該組成物を含有する薬剤及び機能性食品とに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
今日、欧米先進国を中心として高血圧などの生活習慣病が蔓延しつつあり、日本国も例外ではなく、主に、食環境の欧米化に伴う生活習慣病の急増が顕在化している。その終末として、心臓（循環器）、脳機能障害及び悪性腫瘍が死因となる事例が、近年増加の傾向にある。
【０００３】
しかしながら、現在の高血圧症の治療効果の高い医療用医薬品は、一般的に副作用が強い上に、多剤服用による重複毒性の問題などが存在するために長期間にわたる服用には、リスクを負わざるを得ないのが現実である。
【０００４】
そこで、血圧上昇を抑制または降下させることができ、且つ服用によるリスクが少ない天然物からなる成分として、例えば、茶葉から得られるサポニン類を有効成分として含有する血圧降下剤がある（特許文献１参照）。
【０００５】
この特許文献１の公知技術においては、茶葉から低級のアルコールを用いて抽出した茶葉由来のサポニンを用いるものである。このサポニンとは、トリテルペンまたはステロイドの配糖体の総称である。植物等から抽出されるサポニンは、それぞれの生物活性が個々に異なっており、サポニンとしての共通性はないものであり、サポニンは、血圧上昇を抑制または降下させる作用を有しているということが知られている。
【０００６】
ところで、体細胞に供給される酸素は、心臓から送り出された血液によって運ばれることは周知である。この心臓から血液を送り出す際の圧力（血圧）は、体内の神経系やホルモン系等の作用によりコントロールされているが、このコントロール機能が崩れると、高血圧症や低血圧症が発症するといわれている。
【０００７】
この血圧の上昇／下降については、近年の研究により、ＡＣＥという酵素が関与していることが報告されており、該ＡＣＥが過剰に作用した際に、血圧の正常なコントロールが崩れて血圧が上昇するようになると考えられている。そのため、前記ＡＣＥをコントロールして正常な状態にできれば、血圧の上昇を抑制（降下を含む）することができると考えられるのである。
【０００８】
【特許文献１】特開平７−２０６６９２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ところで、近年、ツボクサ由来のサポニンが注目されつつある。このツボクサとは、中国やインド等の東南アジアにおいて、古くから薬草として用いられると共に、薬効を有するハーブとして知られており、野菜としてそのまま食したり、ジュース等の飲食品に加工されたりしているものであり、安全性の高いものとして扱われているものである。
【００１０】
そこで、本発明においては、ツボクサ由来のサポニンを用いて血圧の上昇を抑制することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記した従来例の課題を解決する具体的手段として本発明に係る第１の発明として、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有することを特徴とする血圧上昇を抑制する組成物を提供するものである。
【００１２】
また、第２の発明として、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有することを特徴とする血圧上昇を抑制する組成物を提供するものである。
【００１３】
これら第１、第２の発明において、前記トリテルペン系サポニンが、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅまたはｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅと、それぞれのアグリコンであるａｓｉａｔｉｃ ａｃｉｄまたはｍａｄｅｃａｓｓｉｃ ａｃｉｄとの一種または二種以上であることを付加的な要件として含むものである。
【００１４】
更に、第３及び第４の発明として、前記血圧上昇を抑制する組成物を含む薬剤と、機能性食品とを提供するものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明に係る血圧上昇を抑制する組成物は、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有する、更には、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有するものであるため、ツボクサ由来のサポニンを用いて血圧の上昇を抑制（降下を含む）することができ、更に、グルコン酸亜鉛を併用する場合には、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛との相乗効果を期待できると共に、これらトリテルペン系サポニンと、グルコン酸亜鉛とは、いずれも経口摂取による安全性が高いので、服用によるリスクを軽減できるという優れた効果を奏する。
【００１６】
また、本発明に第３、第４の発明に係る薬剤及び機能性食品は、前記第１または２の発明に係る血圧上昇を抑制する組成物を含むものであるため、ツボクサ由来のサポニンを用いて血圧の上昇を抑制（降下を含む）することができ、更に、服用によるリスクを少なくできるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
次に、本発明を具体的な実施の形態に基づいて詳しく説明する。
本発明の実施の形態に係る血圧上昇を抑制する組成物は、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコン、更に、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有するものである。これらトリテルペン系サポニン、およびそのアグリコンとは、自然植物界に広く分布する化合物であり、植物から水またはアルコール等により容易に抽出することができる。
【００１８】
また、亜鉛は、金属（イオン）であるが、一般的に用いられる硫酸亜鉛等の無機亜鉛化合物は、体内で摂取された際に毒性を示すことがあるが、本発明に用いるグルコン酸亜鉛は、有機亜鉛化合物であるため、体内に摂取した場合であっても、比較的安全性が高い物質であると認められているものであり、米国において、サプリメント類、あめ類または飲料等として用いられているものである。
【００１９】
前記トリテルペン系サポニンとしては、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅまたはｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅを用いることが良く、また、該トリテルペン系サポニンのそれぞれのアグリコンとしては、ａｓｉａｔｉｃ ａｃｉｄまたはｍａｄｅｃａｓｓｉｃ ａｃｉｄを用いることが良く、これらトリテルペン系サポニンと、そのアグリコンとの一種または二種以上を用いれば良い。このトリテルペン系サポニンの化学式を図１に示し、該トリテルペン系サポニンのアグリコンの化学式を図２に示してある。
【００２０】
これらトリテルペン系サポニン、およびそのアグリコンとしては、双子葉植物でセリ科のツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ ａｓｉａｔｉｃａ Ｌ．）から抽出するものであり、特にツボクサの地上部（乾燥物を含む）から抽出するのが良い。このツボクサから抽出したトリテルペン系サポニン、およびそのアグリコン（ツボクサ抽出エキス）には、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅが約１％（多い時には約５％）程度含まれており、多量に精製できる点で優れている。
【００２１】
更に、本発明においては、薬剤または食品に前記血圧上昇を抑制する組成物を含有させて、血圧上昇を抑制する組成物を含む薬剤または機能性食品とすることができる。これら薬剤または機能性食品は、本態性高血圧症、腎性高血圧症、および境界型高血圧症等からなる群から選択される血圧の上昇する疾患などの予防、改善、あるいは治療に用いることができる。
【００２２】
この機能性食品とは、血圧上昇を抑制する組成物を含み、ビタミン類等の各種栄養素または食品等を一種以上含む天然物からなる食品またはその加工食品のことであり、例えば、菓子類または清涼飲料等の飲食品を含むものである。
【００２３】
前記薬剤を、例えば、医薬製剤（医薬品）として用いる場合には、有効成分であるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンの薬剤担体成分の全体に対する割合が、約０．１〜１０重量％程度の範囲であれば良く、特に、約０．５〜５重量％の範囲であることが好ましい。また、グルコン酸亜鉛の配合量としては、薬剤担体成分の全体に対する割合が、約０．２５ｍｇ／ｋｇ・ＢＷ〜０．５ｍｇ／ｋｇ・ＢＷ程度の範囲であり、且つ、該グルコン酸亜鉛の１日あたりの摂取量が１５ｍｇ・Ｚｎを越えないように配合させるのが良い。
【００２４】
この薬剤を医薬製剤として用いる場合における剤形としては、例えば、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、液剤、懸濁液剤、軟膏、ゲル剤、ペースト剤またはクリーム剤等の医薬製剤として製造可能な全ての剤形をあげることができる。また、投与経路としては、例えば、経口、静脈内、筋肉内、皮下または関節腔等の種々の投与経路をあげることができる。
【００２５】
また、前記医薬製剤は、予防や治療に有効な量のトリテルペン系サポニン及びそのアグリコンを製薬学的に許容できる担体または希釈剤と共に製剤化するのが良い。更に、結合剤、吸収促進剤、潤沢剤、乳化剤、界面活性剤、酸化防止剤、防腐剤、着色剤、香料または甘味料等を適宜添加させても良い。
【００２６】
（トリテルペン系サポニン及びそのアグリコンの製造例１）
次に、より具体的な実施例を用いて説明する。この製造例１においては、ツボクサの地上部を採取し、これを乾燥させたものを用いた。このツボクサ地上部の乾燥物５５０グラムに８０％エタノール水を５リットル加え、８０℃で１時間還流抽出し、その後、その抽出液を濾過した。この濾過して得られた残渣に、再度、８０％エタノール水を５リットル加えて、同様の操作を行った。これら２回分の濾液を減圧濃縮し、水・エタノールを留去し乾燥させて乾燥物１２５グラム（トリテルペン系サポニンと、そのアグリコンとの含有量が約２２．７％）を得た。
【００２７】
（トリテルペン系サポニンの製造例２）
この製造例２においては、ツボクサに最も多量に含まれているトリテルペン系サポニンのａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅの精製方法の一例をあげる。ツボクサ地上部の乾燥物５．１キログラムに８０％エタノール水を６０リットル加え、２．５時間の還流抽出を２回行い、この得られた抽出濾液を減圧濃縮して抽出乾燥物９９８グラムを得た。
【００２８】
この得られた抽出乾燥物を、多孔質ポリスチレン樹脂を充填したカラム（φ８０ｍｍ×４００ｍｍ）に付し、メタノール水（３０→６０→８０％メタノール）の各３リットルで順次溶出させた。
【００２９】
８０％メタノール水の溶出部の乾燥物３７．５グラムをシリカゲルカラム（φ８０ｍｍ×３００ｍｍ）に付し、クロロホルム・メタノール・水（２５：１０：１ ｖ／ｖ／ｖ）混合液で順次極性を上げながら溶出させ、４画分（Ｉ〜IV）に分画した。
【００３０】
画分IVを逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリル・メタノール・水；１：１：２ ｖ／ｖ／ｖ）により、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ １０．１２グラム（収率０．１９８％）を得た。
【００３１】
（試験例１）
この試験例１においては、前記製造例１（ツボクサ抽出エキス群）と、前記製造例２（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）とにおける血圧の上昇を抑制する効果についての確認をラットを用いて行った。８週齢の雄性の自然発症性高血圧（ＳＨＲＳＰ）ラットに対して、予備飼育期間中は固形飼料を与えつつ血圧測定および状態観察を行い、最高血圧（収縮期）／最低血圧（拡張期）の血圧の平均値がほぼ一定になるように１０匹ずつ３群に群分けした。
【００３２】
これら３群としては、下記溶剤のみを投与した群（Ｃｏｎｔｒｏｌ群）と、下記溶剤及び前記製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）とを投与した群（製造例１群）と、下記溶剤及び前記製造例２で得られたａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅを投与した群（製造例２群）との各群に分けた。これら各群に対し、各群の０．３％ＣＭＣ懸濁液（溶剤）を毎日１回、強制的に３０日間連続経口投与し、５日毎に３０日目まで、最高血圧（収縮期）の値を測定した。
【００３３】
この試験例１の結果を表１に示すと共に、それぞれの血圧の変化を表したグラフを図３に示した。なお、被験物質は、２００ｍｇ／ｋｇ相当量とした。試験結果は、平均値±標準偏差で表し、有意差検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ−ｔを用いた。
【００３４】
［表１］
（ｍｍＨｇ）
（平均値±標準偏差； *：ｐ＜0.05、 **：ｐ＜0.01）
【００３５】
この表１及び図３の結果から、溶剤の０．３％ＣＭＣの懸濁液のみ与えたＣｏｎｔｒｏｌ群の最高血圧（収縮期）の値は、試験開始時の約１４１．３ｍｍＨｇから３０日目の約２０３．１ｍｍＨｇと高血圧値を呈し、上昇傾向にあったのに対して、製造例１群と製造例２群とでは、それぞれ試験開始時の約１４０．７ｍｍＨｇ及び約１３９．３ｍｍＨｇから３０日目の約１８８．２ｍｍＨｇ（ｐ＜０．０５）及び約１７４．４ｍｍＨｇ（ｐ＜０．０１）になり、前記Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して、有意な血圧上昇の抑制効果が確認され、前記製造例１群（ツボクサ抽出エキス群）では投与から約２０日以降で、また前記製造例２群（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）では投与から約１５日以降で、有意な血圧上昇の抑制が確認された。
【００３６】
（試験例２）
この試験例２においては、トリテルペン系サポニン及びそのアグリコン（例えば、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）を用いて、アンジオテンシンＩ変換酵素阻害（ＡＣＥ−Ｉ）を確認する試験を行った。
【００３７】
この試験例２のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害（ＡＣＥ−Ｉ）試験においては、ＡＣＥ酵素による合成基質（Ｈｉｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）の分解作用の５０％阻害活性値（ＩＣ５０）から求めた。
【００３８】
各濃度のａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ１００μｌを加えて、３７℃でプレインキュベーション後に２．３５ｍＭ合成基質のリン酸緩衝液（ｐＨ８．５）２００μｌを加えて、１時間反応（インキュベーション）した。
【００３９】
その反応液に、３％メタリン酸ナトリウム溶液１００μｌを加えて反応を停止させた後に、その液を高速液体クロマトグラフィーにかけて、酵素反応で生成する馬尿酸を定量することによって、ＡＣＥ活性のＩＣ５０値を求めた。
【００４０】
その結果、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅのＡＣＥ酵素に対するＩＣ５０値は、２８３ｎｇ／ｍｌで、医療用医薬品のカプトプリル（０．４）の約７００倍であった。更に、グルコン酸亜鉛について吸光度法により測定したところ、グルコン酸亜鉛の水和物にＡＣＥ阻害活性がみられ、亜鉛量としてＩＣ５０値は、１．７μｇ／ｍｌ（１７００ｎｇ／ｍｌ）であった。
【００４１】
（試験例３）
この試験例３においては、前記試験例１と同様に、前記製造例１（ツボクサ抽出エキス群）と、前記製造例２（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）とにおける血圧の上昇を抑制する効果についての確認をラットを用いて行った。８週齢の雄性の自然発症性高血圧（ＳＨＲＳＰ）ラットに対して、予備飼育期間中は固形飼料を与えつつ血圧測定および状態観察を行い、最高血圧（収縮期）／最低血圧（拡張期）の血圧の平均値がほぼ一定になるように８匹ずつ４群に群分けした。
【００４２】
これら４群としては、下記溶剤のみを投与した群（Ｃｏｎｔｒｏｌ群）と、下記溶剤及び前記製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）とを投与した群（製造例１群）と、下記溶剤及び前記製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）及びグルコン酸亜鉛とを投与した群（製造例１＋Ｇ群）と、下記溶剤及び前記製造例２で得られたａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅを投与した群（製造例２群）との各群に分けた。これら各群に対し、Ｃｏｎｔｒｏｌ群は、０．３％ＣＭＣ懸濁液（溶剤）を毎日１回、強制的に３０日間連続経口投与し、５日毎に３０日目まで、最高血圧（収縮期）の値を測定した。
【００４３】
この試験例３の結果を表２に示すと共に、それぞれの血圧の変化を表したグラフを図４に示した。なお、被験物質は、トリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）及びａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅは２００ｍｇ／ｋｇ体重相当量とし、グルコン酸亜鉛は２．３ｍｇ／ｋｇ体重相当量とした。試験結果は、平均値±標準偏差で表し、有意差検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ−ｔを用いた。
【００４４】
［表２］
（ｍｍＨｇ）
（平均値±標準偏差； *：ｐ＜0.05、 **：ｐ＜0.01）
【００４５】
この表２及び図４の結果から、溶剤の０．３％ＣＭＣの懸濁液のみ与えたＣｏｎｔｒｏｌ群の最高血圧（収縮期）の値は上昇傾向にあったのに対して、製造例１群と製造例１＋Ｇ群と製造例２群とでは、前記Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して、有意な血圧上昇の抑制効果が確認され、前記製造例１群（ツボクサ抽出エキス群）では投与から約２０日以降で、また製造例１＋Ｇ群（ツボクサ抽出エキス及びグルコン酸亜鉛）と前記製造例２群（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）とでは投与から約１０日以降で、有意な血圧上昇の抑制が確認された。
【００４６】
以上により、被験物質の製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）と、製造例２で得られたａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅとは、自然発症性高血圧（ＳＨＲＳＰ）ラットに対して血圧上昇抑制効果を有していることが確認された。この作用機序は、ツボクサ抽出エキス中のトリテルペン系サポニンであるａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅによるアンジオテンシンＩ変換酵素阻害（ＡＣＥ−Ｉ）による降圧作用が関与しているものと推察される。更に、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有する組成物にすることで、トリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛との相乗効果を得ることができ、ツボクサ抽出エキス単体で用いるよりもより高い血圧上昇抑制効果が得られることが確認された。
【００４７】
このように、天然に存在するトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有する薬剤または機能性食品を経口摂取等することにより、血圧の上昇を抑制する作用（血圧を降下させる作用を含む）を得ることができることから、高血圧に関連する疾患の予防・改善・治療を行ううえで、安全性が高く、緩やかで確実な効果を期待できる。また、ツボクサ等の植物に由来することから、経口摂取による安全性が高いので、服用によるリスクを軽減できる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明に係る血圧上昇を抑制する組成物を構成する物質の１つであるトリテルペン系サポニンの化学式である。
【図２】同トリテルペン系サポニンのアグリコンの化学式である。
【図３】試験例１の最高血圧値の変化を表したグラフである。
【図４】試験例３の最高血圧値の変化を表したグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧に関連する疾患の予防、改善及び治療等を行うものであり、例えば、ツボクサ等の植物の抽出物に含有されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有させてなる血圧上昇を抑制する組成物と、該組成物を含有する薬剤及び機能性食品とに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
今日、欧米先進国を中心として高血圧などの生活習慣病が蔓延しつつあり、日本国も例外ではなく、主に、食環境の欧米化に伴う生活習慣病の急増が顕在化している。その終末として、心臓（循環器）、脳機能障害及び悪性腫瘍が死因となる事例が、近年増加の傾向にある。
【０００３】
しかしながら、現在の高血圧症の治療効果の高い医療用医薬品は、一般的に副作用が強い上に、多剤服用による重複毒性の問題などが存在するために長期間にわたる服用には、リスクを負わざるを得ないのが現実である。
【０００４】
そこで、血圧上昇を抑制または降下させることができ、且つ服用によるリスクが少ない天然物からなる成分として、例えば、茶葉から得られるサポニン類を有効成分として含有する血圧降下剤がある（特許文献１参照）。
【０００５】
この特許文献１の公知技術においては、茶葉から低級のアルコールを用いて抽出した茶葉由来のサポニンを用いるものである。このサポニンとは、トリテルペンまたはステロイドの配糖体の総称である。植物等から抽出されるサポニンは、それぞれの生物活性が個々に異なっており、サポニンとしての共通性はないものであり、サポニンは、血圧上昇を抑制または降下させる作用を有しているということが知られている。
【０００６】
ところで、体細胞に供給される酸素は、心臓から送り出された血液によって運ばれることは周知である。この心臓から血液を送り出す際の圧力（血圧）は、体内の神経系やホルモン系等の作用によりコントロールされているが、このコントロール機能が崩れると、高血圧症や低血圧症が発症するといわれている。
【０００７】
この血圧の上昇／下降については、近年の研究により、ＡＣＥという酵素が関与していることが報告されており、該ＡＣＥが過剰に作用した際に、血圧の正常なコントロールが崩れて血圧が上昇するようになると考えられている。そのため、前記ＡＣＥをコントロールして正常な状態にできれば、血圧の上昇を抑制（降下を含む）することができると考えられるのである。
【０００８】
【特許文献１】特開平７−２０６６９２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ところで、近年、ツボクサ由来のサポニンが注目されつつある。このツボクサとは、中国やインド等の東南アジアにおいて、古くから薬草として用いられると共に、薬効を有するハーブとして知られており、野菜としてそのまま食したり、ジュース等の飲食品に加工されたりしているものであり、安全性の高いものとして扱われているものである。
【００１０】
そこで、本発明においては、ツボクサ由来のサポニンを用いて血圧の上昇を抑制することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記した従来例の課題を解決する具体的手段として本発明に係る第１の発明として、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有することを特徴とする血圧上昇を抑制する組成物を提供するものである。
【００１２】
また、第２の発明として、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有することを特徴とする血圧上昇を抑制する組成物を提供するものである。
【００１３】
これら第１、第２の発明において、前記トリテルペン系サポニンが、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅまたはｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅと、それぞれのアグリコンであるａｓｉａｔｉｃ ａｃｉｄまたはｍａｄｅｃａｓｓｉｃ ａｃｉｄとの一種または二種以上であることを付加的な要件として含むものである。
【００１４】
更に、第３及び第４の発明として、前記血圧上昇を抑制する組成物を含む薬剤と、機能性食品とを提供するものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明に係る血圧上昇を抑制する組成物は、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有する、更には、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有するものであるため、ツボクサ由来のサポニンを用いて血圧の上昇を抑制（降下を含む）することができ、更に、グルコン酸亜鉛を併用する場合には、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛との相乗効果を期待できると共に、これらトリテルペン系サポニンと、グルコン酸亜鉛とは、いずれも経口摂取による安全性が高いので、服用によるリスクを軽減できるという優れた効果を奏する。
【００１６】
また、本発明に第３、第４の発明に係る薬剤及び機能性食品は、前記第１または２の発明に係る血圧上昇を抑制する組成物を含むものであるため、ツボクサ由来のサポニンを用いて血圧の上昇を抑制（降下を含む）することができ、更に、服用によるリスクを少なくできるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
次に、本発明を具体的な実施の形態に基づいて詳しく説明する。
本発明の実施の形態に係る血圧上昇を抑制する組成物は、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコン、更に、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有するものである。これらトリテルペン系サポニン、およびそのアグリコンとは、自然植物界に広く分布する化合物であり、植物から水またはアルコール等により容易に抽出することができる。
【００１８】
また、亜鉛は、金属（イオン）であるが、一般的に用いられる硫酸亜鉛等の無機亜鉛化合物は、体内で摂取された際に毒性を示すことがあるが、本発明に用いるグルコン酸亜鉛は、有機亜鉛化合物であるため、体内に摂取した場合であっても、比較的安全性が高い物質であると認められているものであり、米国において、サプリメント類、あめ類または飲料等として用いられているものである。
【００１９】
前記トリテルペン系サポニンとしては、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅまたはｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅを用いることが良く、また、該トリテルペン系サポニンのそれぞれのアグリコンとしては、ａｓｉａｔｉｃ ａｃｉｄまたはｍａｄｅｃａｓｓｉｃ ａｃｉｄを用いることが良く、これらトリテルペン系サポニンと、そのアグリコンとの一種または二種以上を用いれば良い。このトリテルペン系サポニンの化学式を図１に示し、該トリテルペン系サポニンのアグリコンの化学式を図２に示してある。
【００２０】
これらトリテルペン系サポニン、およびそのアグリコンとしては、双子葉植物でセリ科のツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ ａｓｉａｔｉｃａ Ｌ．）から抽出するものであり、特にツボクサの地上部（乾燥物を含む）から抽出するのが良い。このツボクサから抽出したトリテルペン系サポニン、およびそのアグリコン（ツボクサ抽出エキス）には、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅが約１％（多い時には約５％）程度含まれており、多量に精製できる点で優れている。
【００２１】
更に、本発明においては、薬剤または食品に前記血圧上昇を抑制する組成物を含有させて、血圧上昇を抑制する組成物を含む薬剤または機能性食品とすることができる。これら薬剤または機能性食品は、本態性高血圧症、腎性高血圧症、および境界型高血圧症等からなる群から選択される血圧の上昇する疾患などの予防、改善、あるいは治療に用いることができる。
【００２２】
この機能性食品とは、血圧上昇を抑制する組成物を含み、ビタミン類等の各種栄養素または食品等を一種以上含む天然物からなる食品またはその加工食品のことであり、例えば、菓子類または清涼飲料等の飲食品を含むものである。
【００２３】
前記薬剤を、例えば、医薬製剤（医薬品）として用いる場合には、有効成分であるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンの薬剤担体成分の全体に対する割合が、約０．１〜１０重量％程度の範囲であれば良く、特に、約０．５〜５重量％の範囲であることが好ましい。また、グルコン酸亜鉛の配合量としては、薬剤担体成分の全体に対する割合が、約０．２５ｍｇ／ｋｇ・ＢＷ〜０．５ｍｇ／ｋｇ・ＢＷ程度の範囲であり、且つ、該グルコン酸亜鉛の１日あたりの摂取量が１５ｍｇ・Ｚｎを越えないように配合させるのが良い。
【００２４】
この薬剤を医薬製剤として用いる場合における剤形としては、例えば、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、液剤、懸濁液剤、軟膏、ゲル剤、ペースト剤またはクリーム剤等の医薬製剤として製造可能な全ての剤形をあげることができる。また、投与経路としては、例えば、経口、静脈内、筋肉内、皮下または関節腔等の種々の投与経路をあげることができる。
【００２５】
また、前記医薬製剤は、予防や治療に有効な量のトリテルペン系サポニン及びそのアグリコンを製薬学的に許容できる担体または希釈剤と共に製剤化するのが良い。更に、結合剤、吸収促進剤、潤沢剤、乳化剤、界面活性剤、酸化防止剤、防腐剤、着色剤、香料または甘味料等を適宜添加させても良い。
【００２６】
（トリテルペン系サポニン及びそのアグリコンの製造例１）
次に、より具体的な実施例を用いて説明する。この製造例１においては、ツボクサの地上部を採取し、これを乾燥させたものを用いた。このツボクサ地上部の乾燥物５５０グラムに８０％エタノール水を５リットル加え、８０℃で１時間還流抽出し、その後、その抽出液を濾過した。この濾過して得られた残渣に、再度、８０％エタノール水を５リットル加えて、同様の操作を行った。これら２回分の濾液を減圧濃縮し、水・エタノールを留去し乾燥させて乾燥物１２５グラム（トリテルペン系サポニンと、そのアグリコンとの含有量が約２２．７％）を得た。
【００２７】
（トリテルペン系サポニンの製造例２）
この製造例２においては、ツボクサに最も多量に含まれているトリテルペン系サポニンのａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅの精製方法の一例をあげる。ツボクサ地上部の乾燥物５．１キログラムに８０％エタノール水を６０リットル加え、２．５時間の還流抽出を２回行い、この得られた抽出濾液を減圧濃縮して抽出乾燥物９９８グラムを得た。
【００２８】
この得られた抽出乾燥物を、多孔質ポリスチレン樹脂を充填したカラム（φ８０ｍｍ×４００ｍｍ）に付し、メタノール水（３０→６０→８０％メタノール）の各３リットルで順次溶出させた。
【００２９】
８０％メタノール水の溶出部の乾燥物３７．５グラムをシリカゲルカラム（φ８０ｍｍ×３００ｍｍ）に付し、クロロホルム・メタノール・水（２５：１０：１ ｖ／ｖ／ｖ）混合液で順次極性を上げながら溶出させ、４画分（Ｉ〜IV）に分画した。
【００３０】
画分IVを逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（アセトニトリル・メタノール・水；１：１：２ ｖ／ｖ／ｖ）により、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ １０．１２グラム（収率０．１９８％）を得た。
【００３１】
（試験例１）
この試験例１においては、前記製造例１（ツボクサ抽出エキス群）と、前記製造例２（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）とにおける血圧の上昇を抑制する効果についての確認をラットを用いて行った。８週齢の雄性の自然発症性高血圧（ＳＨＲＳＰ）ラットに対して、予備飼育期間中は固形飼料を与えつつ血圧測定および状態観察を行い、最高血圧（収縮期）／最低血圧（拡張期）の血圧の平均値がほぼ一定になるように１０匹ずつ３群に群分けした。
【００３２】
これら３群としては、下記溶剤のみを投与した群（Ｃｏｎｔｒｏｌ群）と、下記溶剤及び前記製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）とを投与した群（製造例１群）と、下記溶剤及び前記製造例２で得られたａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅを投与した群（製造例２群）との各群に分けた。これら各群に対し、各群の０．３％ＣＭＣ懸濁液（溶剤）を毎日１回、強制的に３０日間連続経口投与し、５日毎に３０日目まで、最高血圧（収縮期）の値を測定した。
【００３３】
この試験例１の結果を表１に示すと共に、それぞれの血圧の変化を表したグラフを図３に示した。なお、被験物質は、２００ｍｇ／ｋｇ相当量とした。試験結果は、平均値±標準偏差で表し、有意差検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ−ｔを用いた。
【００３４】
［表１］
（ｍｍＨｇ）
（平均値±標準偏差； *：ｐ＜0.05、 **：ｐ＜0.01）
【００３５】
この表１及び図３の結果から、溶剤の０．３％ＣＭＣの懸濁液のみ与えたＣｏｎｔｒｏｌ群の最高血圧（収縮期）の値は、試験開始時の約１４１．３ｍｍＨｇから３０日目の約２０３．１ｍｍＨｇと高血圧値を呈し、上昇傾向にあったのに対して、製造例１群と製造例２群とでは、それぞれ試験開始時の約１４０．７ｍｍＨｇ及び約１３９．３ｍｍＨｇから３０日目の約１８８．２ｍｍＨｇ（ｐ＜０．０５）及び約１７４．４ｍｍＨｇ（ｐ＜０．０１）になり、前記Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して、有意な血圧上昇の抑制効果が確認され、前記製造例１群（ツボクサ抽出エキス群）では投与から約２０日以降で、また前記製造例２群（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）では投与から約１５日以降で、有意な血圧上昇の抑制が確認された。
【００３６】
（試験例２）
この試験例２においては、トリテルペン系サポニン及びそのアグリコン（例えば、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）を用いて、アンジオテンシンＩ変換酵素阻害（ＡＣＥ−Ｉ）を確認する試験を行った。
【００３７】
この試験例２のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害（ＡＣＥ−Ｉ）試験においては、ＡＣＥ酵素による合成基質（Ｈｉｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）の分解作用の５０％阻害活性値（ＩＣ５０）から求めた。
【００３８】
各濃度のａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ１００μｌを加えて、３７℃でプレインキュベーション後に２．３５ｍＭ合成基質のリン酸緩衝液（ｐＨ８．５）２００μｌを加えて、１時間反応（インキュベーション）した。
【００３９】
その反応液に、３％メタリン酸ナトリウム溶液１００μｌを加えて反応を停止させた後に、その液を高速液体クロマトグラフィーにかけて、酵素反応で生成する馬尿酸を定量することによって、ＡＣＥ活性のＩＣ５０値を求めた。
【００４０】
その結果、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅのＡＣＥ酵素に対するＩＣ５０値は、２８３ｎｇ／ｍｌで、医療用医薬品のカプトプリル（０．４）の約７００倍であった。更に、グルコン酸亜鉛について吸光度法により測定したところ、グルコン酸亜鉛の水和物にＡＣＥ阻害活性がみられ、亜鉛量としてＩＣ５０値は、１．７μｇ／ｍｌ（１７００ｎｇ／ｍｌ）であった。
【００４１】
（試験例３）
この試験例３においては、前記試験例１と同様に、前記製造例１（ツボクサ抽出エキス群）と、前記製造例２（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）とにおける血圧の上昇を抑制する効果についての確認をラットを用いて行った。８週齢の雄性の自然発症性高血圧（ＳＨＲＳＰ）ラットに対して、予備飼育期間中は固形飼料を与えつつ血圧測定および状態観察を行い、最高血圧（収縮期）／最低血圧（拡張期）の血圧の平均値がほぼ一定になるように８匹ずつ４群に群分けした。
【００４２】
これら４群としては、下記溶剤のみを投与した群（Ｃｏｎｔｒｏｌ群）と、下記溶剤及び前記製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）とを投与した群（製造例１群）と、下記溶剤及び前記製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）及びグルコン酸亜鉛とを投与した群（製造例１＋Ｇ群）と、下記溶剤及び前記製造例２で得られたａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅを投与した群（製造例２群）との各群に分けた。これら各群に対し、Ｃｏｎｔｒｏｌ群は、０．３％ＣＭＣ懸濁液（溶剤）を毎日１回、強制的に３０日間連続経口投与し、５日毎に３０日目まで、最高血圧（収縮期）の値を測定した。
【００４３】
この試験例３の結果を表２に示すと共に、それぞれの血圧の変化を表したグラフを図４に示した。なお、被験物質は、トリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）及びａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅは２００ｍｇ／ｋｇ体重相当量とし、グルコン酸亜鉛は２．３ｍｇ／ｋｇ体重相当量とした。試験結果は、平均値±標準偏差で表し、有意差検定は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ−ｔを用いた。
【００４４】
［表２］
（ｍｍＨｇ）
（平均値±標準偏差； *：ｐ＜0.05、 **：ｐ＜0.01）
【００４５】
この表２及び図４の結果から、溶剤の０．３％ＣＭＣの懸濁液のみ与えたＣｏｎｔｒｏｌ群の最高血圧（収縮期）の値は上昇傾向にあったのに対して、製造例１群と製造例１＋Ｇ群と製造例２群とでは、前記Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して、有意な血圧上昇の抑制効果が確認され、前記製造例１群（ツボクサ抽出エキス群）では投与から約２０日以降で、また製造例１＋Ｇ群（ツボクサ抽出エキス及びグルコン酸亜鉛）と前記製造例２群（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ群）とでは投与から約１０日以降で、有意な血圧上昇の抑制が確認された。
【００４６】
以上により、被験物質の製造例１で得られたトリテルペン系サポニンとそのアグリコンとを含有する乾燥物（ツボクサ抽出エキス）と、製造例２で得られたａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅとは、自然発症性高血圧（ＳＨＲＳＰ）ラットに対して血圧上昇抑制効果を有していることが確認された。この作用機序は、ツボクサ抽出エキス中のトリテルペン系サポニンであるａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅによるアンジオテンシンＩ変換酵素阻害（ＡＣＥ−Ｉ）による降圧作用が関与しているものと推察される。更に、ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有する組成物にすることで、トリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛との相乗効果を得ることができ、ツボクサ抽出エキス単体で用いるよりもより高い血圧上昇抑制効果が得られることが確認された。
【００４７】
このように、天然に存在するトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有する薬剤または機能性食品を経口摂取等することにより、血圧の上昇を抑制する作用（血圧を降下させる作用を含む）を得ることができることから、高血圧に関連する疾患の予防・改善・治療を行ううえで、安全性が高く、緩やかで確実な効果を期待できる。また、ツボクサ等の植物に由来することから、経口摂取による安全性が高いので、服用によるリスクを軽減できる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明に係る血圧上昇を抑制する組成物を構成する物質の１つであるトリテルペン系サポニンの化学式である。
【図２】同トリテルペン系サポニンのアグリコンの化学式である。
【図３】試験例１の最高血圧値の変化を表したグラフである。
【図４】試験例３の最高血圧値の変化を表したグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有すること
を特徴とする血圧上昇を抑制する組成物。
【請求項２】
ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有すること
を特徴とする血圧上昇を抑制する組成物。
【請求項３】
前記トリテルペン系サポニンが、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅまたはｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅと、それぞれのアグリコンであるａｓｉａｔｉｃ ａｃｉｄまたはｍａｄｅｃａｓｓｉｃ ａｃｉｄとの一種または二種以上であること
を特徴とする請求項１または２に記載の血圧上昇を抑制する組成物。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の血圧上昇を抑制する組成物を含むこと
を特徴とする薬剤。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の血圧上昇を抑制する組成物を含むこと
を特徴とする機能性食品。
【請求項１】
ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンを含有すること
を特徴とする血圧上昇を抑制する組成物。
【請求項２】
ツボクサから抽出されるトリテルペン系サポニン及び／またはそのアグリコンと、グルコン酸亜鉛とを含有すること
を特徴とする血圧上昇を抑制する組成物。
【請求項３】
前記トリテルペン系サポニンが、ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅまたはｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅと、それぞれのアグリコンであるａｓｉａｔｉｃ ａｃｉｄまたはｍａｄｅｃａｓｓｉｃ ａｃｉｄとの一種または二種以上であること
を特徴とする請求項１または２に記載の血圧上昇を抑制する組成物。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の血圧上昇を抑制する組成物を含むこと
を特徴とする薬剤。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の血圧上昇を抑制する組成物を含むこと
を特徴とする機能性食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００７−２９７３６７（Ｐ２００７−２９７３６７Ａ）
【公開日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−３３１７９１（Ｐ２００６−３３１７９１）
【出願日】平成１８年１２月８日（２００６．１２．８）
【出願人】（３９１０１９７２８）養命酒製造株式会社 (11)
【出願人】（５０１３５５９１９）有限会社カンズ研究開発 (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月８日（２００６．１２．８）
【出願人】（３９１０１９７２８）養命酒製造株式会社 (11)
【出願人】（５０１３５５９１９）有限会社カンズ研究開発 (4)
【Ｆターム（参考）】
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