【課題】抗原結合分子の薬物動態を向上する方法、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法、薬物動態が向上した抗原結合分子、抗原結合分子の抗原への結合回数が向上した抗原結合分子、および、それらの製造法等の提供。
【解決手段】抗原に対するｐＨ５．８でのＫＤとｐＨ７．４でのＫＤの比であるＫＤ（ｐＨ５．８）／ＫＤ（ｐＨ７．４）の値が２以上である抗原結合分子。抗原結合分子のｐＨ５．８における抗原結合活性をｐＨ７．４における抗原結合活性より弱くすることにより抗原結合分子の薬物動態を向上させる方法。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原に対するpH5.8でのKDとpH7.4でのKDの比であるKD(pH5.8)／KD(pH7.4)の値が２以上である抗原結合分子。
【請求項２】
KD(pH5.8)／KD(pH7.4)の値が１０以上である請求項１に記載の抗原結合分子。
【請求項３】
KD(pH5.8)／KD(pH7.4)の値が４０以上である請求項１に記載の抗原結合分子。
【請求項４】
少なくとも１つのアミノ酸がヒスチジンで置換され又は少なくとも１つのヒスチジンが挿入されていることを特徴とする請求項１〜３いずれかに記載の抗原結合分子。
【請求項５】
アンタゴニスト活性を有することを特徴とする請求項１〜４いずれかに記載の抗原結合分子。
【請求項６】
膜抗原又は可溶型抗原に結合することを特徴とする請求項１〜５いずれかに記載の抗原結合分子。
【請求項７】
抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項１〜６いずれかに記載の抗原結合分子。
【請求項８】
請求項１〜７いずれかに記載の抗原結合分子を含む医薬組成物。
【請求項９】
抗原結合分子のpH5.8における抗原結合活性をpH7.4における抗原結合活性より弱くすることにより抗原結合分子の薬物動態を向上させる方法。
【請求項１０】
抗原結合分子のpH5.8における抗原結合活性をpH7.4における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法。
【請求項１１】
抗原結合分子のpH5.8における抗原結合活性をpH7.4における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法。
【請求項１２】
抗原結合分子のpH5.8における抗原結合活性をpH7.4における抗原結合活性より弱くすることにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法。
【請求項１３】
抗原結合分子のpH5.8における抗原結合活性をpH7.4における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法。
【請求項１４】
抗原結合分子のpH5.8における抗原結合活性をpH7.4における抗原結合活性より弱くすることにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法。
【請求項１５】
抗原に対するpH5.8でのKDとpH7.4でのKDの比であるKD(pH5.8)／KD(pH7.4)の値を２以上とすることを特徴とする請求項９〜１４いずれかに記載の方法。
【請求項１６】
KD(pH5.8)／KD(pH7.4)の値を１０以上とすることを特徴とする請求項９〜１４いずれかに記載の方法。
【請求項１７】
KD(pH5.8)／KD(pH7.4)の値を４０以上とすることを特徴とする請求項９〜１４いずれかに記載の方法。
【請求項１８】
抗原結合分子の少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも１つのヒスチジンを挿入することにより薬物動態を向上させる方法。
【請求項１９】
抗原結合分子の少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも１つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子の抗原への結合回数を増やす方法。
【請求項２０】
抗原結合分子の少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも１つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子が結合可能な抗原の数を増やす方法。
【請求項２１】
抗原結合分子の少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも１つのヒスチジンを挿入することにより、細胞外で抗原結合分子に結合した抗原を細胞内で抗原結合分子から解離させる方法。
【請求項２２】
抗原結合分子の少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも１つのヒスチジンを挿入することにより、抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれた抗原結合分子を、抗原と結合していない状態で細胞外に放出させる方法。
【請求項２３】
抗原結合分子の少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも１つのヒスチジンを挿入することにより、抗原結合分子の血漿中抗原消失能を増加させる方法。
【請求項２４】
ヒスチジンへの置換又はヒスチジンの挿入により、pH5.8での抗原結合活性とpH7.4での抗原結合活性の比であるKD(pH5.8)／KD(pH7.4)の値がヒスチジン置換又は挿入前と比較して大きくなることを特徴とする請求項１８〜２３いずれかに記載の方法。
【請求項２５】
抗原結合分子がアンタゴニスト活性を有することを特徴とする請求項９〜２４いずれかに記載の方法。
【請求項２６】
抗原結合分子が膜抗原又は可溶型抗原に結合することを特徴とする請求項９〜２５いずれかに記載の方法。
【請求項２７】
抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項９〜２６いずれかに記載の方法。
【請求項２８】
以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法、
(a)pH6.7〜pH10.0における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、
(b)pH4.0〜pH6.5における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、
(c)pH6.7〜pH10.0での抗原結合活性がpH4.0〜pH6.5での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程。
【請求項２９】
pH6.7〜pH10.0における抗原結合活性がpH4.0〜pH6.5での抗原結合活性の2倍以上である抗体を選択することを特徴とする請求項２８に記載のスクリーニング方法。
【請求項３０】
以下の工程を含む抗原結合分子のスクリーニング方法、
(a) pH6.7〜pH10.0の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、
(b) (a)の抗原に結合した抗原結合分子をpH4.0〜pH6.5の条件下に置く工程、
(c) pH4.0〜pH6.5の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程。
【請求項３１】
以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法、
(a) 抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、
(b) 第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、
(c) 溶出された抗原結合分子を取得する工程。
【請求項３２】
以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子のスクリーニング方法、
(a) 抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、
(b) カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、
(c) 溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、
(d) 溶出された抗原結合分子を取得する工程。
【請求項３３】
第一のpHがpH6.7.〜pH10.0、第二のpHが4.0〜pH6.5であることを特徴とする請求項３１または３２に記載のスクリーニング方法。
【請求項３４】
抗原結合分子が、抗原結合分子中の少なくとも１つ以上のアミノ酸がヒスチジンで置換された又は少なくとも１つのヒスチジンが挿入された抗原結合分子である請求項２８〜３３いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項３５】
血漿中滞留性が優れた抗原結合分子を得ることを目的とする請求項２８〜３３いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項３６】
抗原に２回以上結合することができる抗原結合分子を得ることを目的とする請求項２８〜３３いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項３７】
結合可能な抗原の数が抗原結合部位より多い抗原結合分子を得ることを目的とする請求項２８〜３３いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項３８】
細胞外で結合した抗原を細胞内で解離する抗原結合分子を得ることを目的とする請求項２８〜３３いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項３９】
抗原と結合した状態で細胞内に取り込まれ、抗原と結合していない状態で細胞外に放出される抗原結合分子を得ることを目的とする請求項２８〜３３いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項４０】
血漿中抗原消失能が増加した抗原結合分子を得ることを目的とする請求項２８〜３３いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項４１】
抗原結合分子が医薬組成物として用いられる抗原結合分子である請求項２８〜４０いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項４２】
抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項２８〜４１いずれかに記載のスクリーニング方法。
【請求項４３】
以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法、
(a) pH6.7〜pH10.0における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、
(b) pH4.0〜pH6.5における抗原結合分子の抗原結合活性を得る工程、
(c) pH6.7〜pH10.0での抗原結合活性がpH4.0〜pH6.5での抗原結合活性より高い抗原結合分子を選択する工程、
(d) (c)で選択された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、
(e) (d)で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。
【請求項４４】
以下の工程を含む抗原結合分子の製造方法、
(a) pH6.7〜pH10.0の条件下で抗原結合分子を抗原に結合させる工程、
(b) (a)の抗原に結合した抗原結合分子をpH4.0〜pH6.5の条件下に置く工程、
(c) pH4.0〜pH6.5の条件下で解離した抗原結合分子を取得する工程、
(d) (c)で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、
(e) (d)で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。
【請求項４５】
以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法、
(a) 抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で抗原結合分子を結合させる工程、
(b) 第一のpH条件下でカラムに結合した抗原結合分子を、第二のpH条件下でカラムから溶出する工程、
(c) 溶出された抗原結合分子を取得する工程、
(d) (c)で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、
(e) (d)で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。
【請求項４６】
以下の工程を含む第一のpHでの結合活性が第二のpHでの結合活性よりも高い抗原結合分子の製造方法、
(a) 抗原結合分子ライブラリーを、抗原を固定したカラムに第一のpH条件下で結合させる工程、
(b) カラムから第二のpH条件下で抗原結合分子を溶出する工程、
(c) 溶出された抗原結合分子をコードする遺伝子を増幅する工程、
(d) 溶出された抗原結合分子を取得する工程、
(e) (d)で取得された抗原結合分子をコードする遺伝子を得る工程、
(f) (e)で得られた遺伝子を用いて抗原結合分子を製造する工程。
【請求項４７】
第一のpHがpH6.7.〜pH10.0、第二のpHが4.0〜pH6.5であることを特徴とする請求項４５または４６に記載の製造方法。
【請求項４８】
抗原結合分子中の少なくとも１つ以上のアミノ酸をヒスチジンで置換する又は少なくとも１つのヒスチジンを挿入する工程をさらに含む請求項４３〜４７いずれかに記載の製造方法。
【請求項４９】
抗原結合分子が抗体であることを特徴とする請求項４３〜４８いずれかに記載の製造方法。
【請求項５０】
請求項４３〜４９いずれかに記載の製造方法により製造された抗原結合分子を含む医薬組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【公開番号】特開２０１２−１１６８３７（Ｐ２０１２−１１６８３７Ａ）
【公開日】平成２４年６月２１日（２０１２．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２６８４９７（Ｐ２０１１−２６８４９７）
【出願日】平成２３年１２月８日（２０１１．１２．８）
【分割の表示】特願２０１１−１７１２２５（Ｐ２０１１−１７１２２５）の分割
【原出願日】平成２１年４月１０日（２００９．４．１０）
【出願人】（０００００３３１１）中外製薬株式会社 (228)
【Ｆターム（参考）】