親環境性防汚剤
本発明はホンダワラから抽出した親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害で、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため既存の防汚性物質に比べて生産原価を節減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、ホンダワラから抽出した新規の防汚剤に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホンダワラから抽出した親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害で、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるために既存の防汚性物質に比べて生産原価を節減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、ホンダワラから抽出した新規の防汚剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
防汚性物質とは、船舶の表面に海洋付着性物（微生物および動植物）が着生することを防止するために塗料と混合される物質を言う。着生とは、底生生物が人工または自然物体に付着、成長することを言う。底生生物が船舶の表面に付着すると摩擦力の増加をもたらし、船舶の速度の低下、腐食促進、そして、燃料使用の増加などにより、経済的損失が発生する。
【０００３】
船底部分を６ヶ月間海水に露出させると、約１５０kg／ｍ２の量の生物が底に付着することが知られている。また、大型船舶の場合、船体表面が着生生物の付着により０．１mm粗くなる度に、摩擦力が０．３〜１．０％増加することが報告されており、摩擦力の増加により船舶の速度は、約５０％減少する。
【０００４】
このような問題点を解決するために、トリブチルすず（以下、ＴＢＴと称す）のような有機すず化合物を防汚剤として頻繁に使用してきた。しかしながら、ＴＢＴは、海洋環境に悪影響を及ぼすという事実が明らかになったことで、ＵＮ傘下の国際海事機構（ＩＭＯ）の海洋環境保護委員会（ＭＥＰＣ）では、有機すず化合物の危険性のため、船舶用防汚システムの規制決議を採択した。その結果、２００３年１月１日から防汚剤として使用されてきたＴＢＴの使用が全面禁止され、２００８年には船舶からＴＢＴを完全に除去しなければならないという規定が施行される。
【０００５】
現在、有機すず化合物に代わって一般的に使用されている非すず系防汚物質は、大韓民国公開特許第２００１−００９９０４９号に開示されているように、亜酸化銅または亜鉛を含む。非すず系防汚剤は、海藻類である青海苔に対する防汚効果が不十分であるという技術的な問題点がある。また、亜酸化銅防汚剤は、海洋底質に蓄積され、環境に悪影響を及ぼすため、２００６年〜２００８年の間に使用が禁止されることが予想される。これに伴い、防汚効果が優秀であると同時に環境に無害な防汚剤の開発が急がれている。
【特許文献１】大韓民国公開特許第２００１−００９９０４９号
【特許文献２】大韓民国特許出願第９５−１５１４９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明者は、前述した問題点を解決するために環境に無害で、卓越した防汚効果を有し、生産原価が安価である防汚剤の開発に対し研究した結果、ホンダワラから抽出された物質が卓越した防汚効果を有することを確認することで本発明を確認するに至った。
【０００７】
従って、本発明の目的は、天然物質から抽出することにより生産原価が安価で、ホンダワラから抽出した親環境的な防汚剤を提供することである。
【０００８】
また、本発明の別の目的は、ホンダワラから抽出した親環境的防汚塗料を提供することである。
【０００９】
更に、本発明の別の目的は、ホンダワラから抽出した親環境的バイオサイド（ｂｉｏｃｉｄｅ）を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記目的を達成するために、一の観点においては、本発明は、ホンダワラ抽出物を有効成分として含有する防汚剤を提供する。
【００１１】
また、別の観点においては、本発明は、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物が有効成分として含有された防汚剤を提供する。
【００１２】
また、別の観点においては、本発明は、ホンダワラから抽出した防汚性を有する新規の６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物、および、その製造方法を提供する。
【００１３】
別の観点においては、本発明は、樹脂、溶剤、顔料、防汚性物質、および、その他添加剤とを具備する防汚塗料において、前記防汚性物質として、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの中から選択される、１または２またはそれを超える化合物が混合されて使用される親環境性防汚塗料を提供する。
【００１４】
また、前記ホンダワラ抽出物は、藻類抑制効果があるため、防汚剤だけでなくバイオサイドとしても使用が可能である。すなわち、これらの防汚剤とバイオサイドは、本発明の範囲内にある。
【００１５】
以下より、本発明を更に詳細に示す。
【００１６】
本発明は、ホンダワラから抽出した親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害で、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため、既存の防汚性物質に比べて生産原価が安価であり、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、ホンダワラから抽出した新規の防汚剤に関する。
【００１７】
本発明者は、環境に無害な防汚塗料を開発するために多様な種類の海藻類と陸上植物に対して防汚性の試験を行った。海藻類は、韓国沿岸の日本海沿岸、太平洋海沿岸の数ヶ所の潮間帯に棲息する種と、潜水して採取した種を、分類して、同定して、陰干しし、そして、破砕機で粉砕し、粉末試料は、ガラス瓶に保管して必要の度に使用した。陸上植物は、韓国全土に棲息する陸上植物の中から２次代謝産物が防汚性を有する植物を採取し、分類、同定後、陰干しして破砕機で粉砕して抽出した。
【００１８】
付着性海藻類に対する抽出物の付着防止効果は、代表的な付着性海藻類であるスジアオノリとアナアオサの胞子を利用して試験を行った。その試験を通して、多様な海藻類および陸上植物の中、ホンダワラの抽出物が、優れた防汚性を示した。
【００１９】
本発明者は、多様な実験を通して、防汚性が優れたホンダワラの抽出物から防汚性を見せる物質が、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランであることが明らかになった。
【００２０】
特に、本発明においては、フシスジモク（Sargassum confusum）から、新規のｌ６−ホロミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物を発見した。この化合物は、フシスジモクの粉末をヘキサン、酢酸エチルまたはメタノールからなる群から選択された１種の溶媒で抽出した後、上層液のみを減圧濃縮して製造された。
【００２１】
一方、防汚塗料は、通常、防汚性物質、樹脂、溶剤、顔料、その他添加剤等で構成され、防汚性を向上させるために、ブースターを添加することもできる。
【００２２】
本発明の塗料は、前記防汚性物質を３〜４０重量％、更に好ましくは、１０〜３０重量％含有する。その防汚性物質の量が、３重量％未満の場合には、防汚性が不足し、そして、その防汚性物質の量が、３０重量％を超過する場合は、その他の組成成分との混合性、長期保管性などが低下する。
【００２３】
本発明の防汚塗料に使用することのできる樹脂は、従来の防汚塗料に使用されていた全ての樹脂が使用される。その例としては、酢酸ビニル樹脂、塩化ビニル樹脂などのビニル系樹脂、ウレタン樹脂、塩化ゴム系樹脂、フタル酸樹脂、アルキド樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、アクリル樹脂、フッ素樹脂、シリコン樹脂などの合成樹脂とロジンなどの天然樹脂を使用することができる。特に、アクリル樹脂を構成する成分の単量体の例としては、ｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−アクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−メタクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−２，３−アクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−２，３−メタクリル酸ジクロロマレイミドアルキル、ｗ−マレイミドアルキルビニルエーテル、４−アクリル酸マレイミドアルキル、アクリル酸、メタクリル酸、無水マレイン酸、アクリル酸ヒドロキシルアルキル、アクリル酸アルコキシアルキル、アクリル酸フェノキシアルキル、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルビニルエーテル、ビニルアセトアセトアセテート、Ｎ，Ｎ−アクリル酸ジアルキル、ビニルピリジン、ビニルピロリジン、４−ニトロフェニル−２−ビニルエチラート、２，４−アクリル酸ジニトロフェニル、２，４−メタクリル酸ジニトロフェニル、４−アクリル酸チオシアノフェニル、アクリル酸トリアルキルシリル、アクリル酸モノアルキルジフェニルシリル、アクリル酸ジクロロメチル、メタクリル酸クロロメチル、アクリル酸フェニルメチル、アクリル酸ジフェニルメチル、ジアクリル酸フェニルメチルメタ、アクリル酸トリアルキル亜鉛、メタクリル酸トリアルキル亜鉛、アクリル酸トリアリル亜鉛、メタクリル酸トリアリル亜鉛、アクリル酸トリアルキル銅、メタクリル酸トリアルキル銅、アクリル酸トリアリル銅、メタクリル酸トリアリル銅のような成分を含有する単量体を、１または２またはそれを超えるように含有する重合体である。この通常的な製造方法は、大韓民国特許出願第９５−１５１４９号に記載されている。この時、単量体の数平均分子量は、粘度、フィルム形成度および作業性において有利な１，５００〜１００，０００が適当である。更に、合成樹脂と天然樹脂を併用することもできる。塗料中の樹脂含量は、２〜２０重量％、好ましくは、５〜１５重量％である。２重量％未満の場合には、塗料の付着性が低下し、そして、２０重量％を超過する場合には、貯蔵性に問題が生じる。
【００２４】
本発明の防汚塗料に使用される溶剤は、キシレン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのような炭化水素系、ケトン類溶剤および酢酸セロソルブなどであり、その使用量は、１０〜３０重量％が適切である。溶媒量が１０重量％未満の場合には、粘度が非常に高くなり、溶媒量が３０重量％を超過する場合には、塗膜に対する付着性および防汚性に問題が発生する。
【００２５】
本発明の防汚塗料に使用される顔料としては、当業界において知られた多様な顔料を含む。例えば、酸化チタン、酸化鉄、酸化亜鉛などの金属酸化物と、有機顔料とを、単独または混合して使用する。前記顔料は、２０〜４０重量％内で使用することが好ましい。顔料が２０重量％未満で使用される場合には、変色するという問題点があり、４０重量％を超過する場合には、耐候性が低下するという問題点が発生する。
【００２６】
塗料の防汚性を更に向上させる必要性がある場合、ブースターを使用することができる。その例としては、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テラクロロ−イソフタロニトリル、３−（３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−（チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅、銀化合物を含む。これらの化合物は、１種、または、２以上の混合物として使用してもよい。そのブースターは、好ましくは、１〜７重量％、より好ましくは、２〜４重量％で使用される。そのブースターの量が、１重量％未満の場合には、防汚性の上昇効果が微々たるものであり、７重量％を超過する場合には、塗量の貯蔵安定性に問題が生じる。
【００２７】
更に、本発明の塗料組成物は、多様な公知の添加剤を含有させることができる。添加剤の例としては、ポリアミドワックス、ベントナイトまたはポリエチレンワックスなどのような増粘剤を挙げることができる。これらの添加物は、好ましくは、１〜５重量％にて使用される。添加物の量が、５重量％を超過する場合は、粘度が非常に高くなってしまう。
【００２８】
さらに、本発明によるホンダワラの抽出物、即ち、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−デメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの中から選択された１種以上の化合物は、藻類運動阻害活性を有するため、バイオサイドとしても使用が可能である。そのバイオサイドは、好ましくは、前記抽出物または化合物を有効成分として、バイオサイドの全重量に対して、０．１〜５重量％含有することができる。更に、前記有効成分の他に、バイオサイドは、界面活性剤、溶剤、イソチアゾロン系バイオサイドなども含有させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下より、本発明は、実施例によって更に詳しく説明される。しかしながら、本発明が、これらの実施例よって限定されるわけではないことは、当業者にとって明白である。
【実施例】
【００３０】
（実施例１）試料採取および抽出
１）フシスジモクの抽出
フシスジモクを韓国の慶尚北道（Gyeongsangbuk-do）浦項（Pohang）（緯度３６°経度１２９°３０′）で採取し、その海藻から異物を除いた。そして、その海藻を洗浄し、陰干しした。抽出収率を高めるために、その陸上植物を、粉砕機を利用して粉末を作り、実験材料として使用した。ヘキサン１０ｌに試料粉末１kgを添加して、２４時間保管した後に抽出し、上層液のみを集めた。その抽出と、上層液の収集とを、３回反復し、そして、その上澄み液を共に混ぜ合わせ、３７℃において減圧濃縮器を利用して１／１０の体積に蒸発させた。その残留した材料を、０．２２μmフィルターを介して濾過し、−２０℃で保管して実験に使用した。
【００３１】
有機溶媒に対する溶解度の確認
フシスジモクのヘキサン抽出物の有機溶媒に対する溶解度を確認するために、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（SIL G/U254、0．25mm layer with fluorescent indicator Machereynagel Co. 独）を利用して、ヘキサン、クロロホルム、塩化メチレン、酢酸エチル、エタノール、メタノールの溶解度を、ＵＶランプ（UVGL-58、UV-254/366nm、UVP Inc. U.S.A）によって同定した（図１、２）。
【００３２】
２）ホンダワラ類の抽出
生物由来の抽出物を対象にスジアオノリの胞子付着阻害効果の実験を行った。試料のメチルアルコール抽出物を、２００μｌ/mlの濃度で付着阻害効果を実験した結果、ホンダワラ類（Sargassum sp.（139）、Sargassum sp.（365）、Sargassum sp.（383））の抽出物が、最も優れた胞子付着阻害効果を表した（表１ａ、１ｂ）。
【００３３】
【表１ａ】
【００３４】
【表１ｂ】
【００３５】
（実施例２）フシスジモク抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサンにおいてガラス管コラム（１０cm×９０cm、PTEE end plate付着）に充填した。その際、そのコラムは、試料の量に応じて、選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍にした。展開溶媒としては、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０とし、順番に５ml／minの流速で分取し、フシスジモク抽出物に対して実験を展開した。展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーを行い、６個の分画（Ｉ〜VI）に分画した。
【００３６】
【表２】
【００３７】
分画（Ｉ〜VI）の汚損生物付着抑制効果は、代表的な付着海藻類の一つであるアナアオサを対象に実験を行った。アナアオサは江陵（Kangrung）近郊の鏡浦台（Kyongpodae）で採集した。その採取された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、超音波処理を１分間、３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。その洗浄した藻を、１％ベタジンおよび２％trition X-100の混合溶液に、１分間沈置させて、簡単な滅菌処理後、半乾燥した。その半乾燥されたアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、２０℃の培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【００３８】
準備したチューブに、１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を入れ、胞子が放出された海水を添加した。濃度別に５００、１０００、１５００、２０００、４０００μｌ/mlでの胞子の運動性阻害効果を、顕微鏡（オリンパスCK-2）でＸ１００の倍率で観察し、その結果を下記表３に表した。表３においては、胞子の運動性阻害効果が９５％以上の場合は＋＋＋＋で、胞子の運動性阻害効果が９５〜７５％の場合は＋＋＋、７５〜５０％の場合は＋＋で、５０〜２０％の場合は＋で表し、胞子の運動性阻害効果が全くない場合は−で表した。各希釈濃度別の接種前に、海水内の胞子の運動状態を確認し、対照群と比較使用した。
【００３９】
前記で分画された５個の分画（Ｉ〜VI）について、胞子の運動性阻害活性に対する試験をし、その結果を、下記表３に示した。表３において表される通り、分画IIIで強い活性を見せた。前記試験で活性の良かった分画IIIの２次シリカゲルコラムを実施した。この際、展開溶媒としては、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０とし、順番に３ml／minの流速で分取した。展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーを行い、フシスジモクの８個の分画（Ａ〜Ｈ）を対象に胞子運動性抑制活性実験を実施し、その結果を表４に示した。表４に表す通り、８個の分画全てが、強い活性を示した。
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】
（実施例３）フシスジモク抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン下でガラス管コラム（１０cm×９０cm、PTEE end plate付着）に充填した。その際、コラムは、試料の量に応じて選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍にした。展開溶媒としては、ヘキサン、ヘキサン：塩化メチレン＝８０：２０、ヘキサン：塩化メチレン＝６０：４０、ヘキサン：塩化メチレン＝２０：８０、塩化メチレン、塩化メチレン：エタノール＝８０：２０、塩化メチレン：エタノール＝６０：４０、塩化メチレン：エタノール＝４０：６０、塩化メチレン：エタノール＝２０：８０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０、酢酸エチル：メタノール＝７０；３０、酢酸エチル：メタノール＝６０：４０、酢酸エチル：メタノール＝５０：５０、メタノールとし、順番に１０ml／minの流速で分取し、実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーを行い、８個の分画（Ｉ〜VIII）に分画した。
【００４３】
陸上植物と海藻類の抽出物の汚損生物の付着阻害効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサを対象にして試験を行った。アナアオサは、江陵（Kangrung）近郊の鏡浦台（Kyongpodae）で採集してた。その採取された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために超音波処理を１分間、３回繰り返し、殺菌した海水できれいに洗浄した。そして、１％ベタジンおよび２％trition X-100の混合溶液に１分間沈置させて簡単な滅菌処理後、半乾燥した。
【００４４】
半乾燥されたアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、２０℃の培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【００４５】
準備したチューブに、１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を入れ、胞子が放出された海水を添加した。濃度別に１２５、２５０、５００、１０００、１５００、２０００、４０００μｇ/mlでの胞子の運動性阻害効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）でＸ１００の倍率で観察し、その結果を下記表５に表した。胞子の運動性抑制が９５％以上、即ち運動性が殆ど観察されない場合は＋＋＋＋で、胞子の運動性阻害効果が９５〜７５％の場合は＋＋＋、７５〜５０％の場合は＋＋で、５０〜２０％の場合は＋で、２０％以下の場合は−で表した。
【００４６】
【表５】
【００４７】
表５に記載された通り、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性テストの結果においては、４０００(g/mlの濃度で、分画Ｖが最も強力な抑制活性を示した。
【００４８】
分画Ｖを、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒において、Prep-TLC上で展開させ、５個の分画Ｖ−ａ、Ｖ−ｂ、Ｖ−ｃ、Ｖ−ｄ、Ｖ−ｅに分画した。
【００４９】
５個の各分画に対する胞子の運動性抑制効果をテストし、その結果を下記表６に示す。
【００５０】
【表６】
【００５１】
表６に記載された通り、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性テストの結果においては、分画Ｖ−ｅが、２５０、５００、１０００、１５００、２０００、４０００μｇ/mlで最も強力な活性を見せ、１２５μｇ/mlの濃度でも強い活性（＋＋＋）を表した。分画Ｖ−ｅは、有機溶媒（ヘキサン、酢酸エチル、メタノール）を使用して溶媒別に溶解度によって各３個の分画を得た。その３個の各分画について青海苔胞子の運動性抑制効果をテストし、その結果を下記表７に示す。
【００５２】
【表７】
【００５３】
表７に記載された通り、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性テストの結果においては、溶解度によって分画された分画Ｖ−ｅでは、酢酸エチルの溶媒で溶出された分画が強い胞子の運動性抑制効果を表した。
【００５４】
分画採取用高速液体クロマトグラフィー（Prep-HPLC）
分画Ｖ−ｅを酢酸エチル溶媒で分画した分画を分画採取用高速液体クロマトグラフィー Ｃ１８逆相コラム（Microsorb、21.4mm×250mm）に適用し、８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間、流速５ml/minで溶出させた。２５４nmでその溶出された分画の吸光度を測定し、各分画（Ｋ１〜Ｋ８）の分取を行った。その分取された８個の分画を、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性効果についてテストし、その結果を下記表８に示す。その分取された８個の分画の生理活性検証を通して最も優れた胞子の運動性抑制活性を表した分画Ｋ７を、気体クロマトグラフィー／気体質量分光器（ＧＣ／ＭＳ）、高性能液体クロマトグラフィー／液体質量分光器（ＬＣ／ＭＳ）、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）を使用して物質構造分析の試料として使用した。
【００５５】
【表８】
【００５６】
高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
生理活性物質の生理活性検証を通して優れた胞子の運動性抑制活性を表した分画Ｋ７またはPrep-HPLCにより分画された８個の分画を、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）Ｃ１８逆相コラム（Microsorb、21.4mm×250mm、Cosmosil）に適用し、８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間、１ml/minの流速で溶出させた。２５４nmで、その溶出された各分画の吸光度を測定して分取し、８個の分画を分析した。
【００５７】
気体クロマトグラフィー質量測定スペクトル
ＨＰＬＣから活性部分（メタノール濃度８０％）のみを回収して乾燥させ、メタノールに溶かし、その溶液の１mgを気体クロマトグラフィー分析に使用した。気体クロマトグラフィーには、毛細管コラムであるＨＰ−５（Hewlett-Packard、30cm×0.25mm×0.25μm）を使用し、移動相気体にはヘリウムを使用し、注入速度を０．６ml/minとし、分割注入法（１：５０）を使用して分析した。コラム注入口の温度は２３０℃、コラムの初期温度は１００℃とした。１００℃の温度を２分間維持し、４℃/minの速度で１５０℃まで昇温させた。その後、３℃/minの速度で２００℃まで、そのコラムを昇温させ、再び７℃/minの速度で２５０℃まで昇温させて、その温度にそのコラムを維持させた。その際、イオンソース（Ion source）の電子イオン化モード（electron ionization mode）にて、２８０℃で７０ｅＶを使用した（表９）。
【００５８】
【表９】
【００５９】
液体／気体クロマトグラフィー質量分析スペクトル（ＬＣ／ＧＣ ＭＳ）によって、分画Ｖ−ｅ−Ｋ７の分子量を求め（図３、４）、その分画Ｖ−ｅ−Ｋ７についてのＧＣ−ＭＳの分析結果は、以下のように、Ｒｔ：７１．５６min、分子イオン：Ｍ＋ −３４２であった。
【００６０】
（実施例３）ホンダワラ抽出物の溶媒の分画
特定ホンダワラ類（Sargassum sp.（139）、Sargassum sp.（365）、Sargassum sp.（383））の抽出物から青海苔の胞子に対する運動性抑制物質を探索するために、有機溶媒の分画を作った。
【００６１】
海藻をヘキサン、メチルアルコール、そして、水を使用して各々抽出した。そのヘキサンとメチルアルコール抽出液を濾過し、その濾過液を３０℃で減圧濃縮器を使用して濃縮した。その水抽出物は、凍結乾燥機を利用して凍結乾燥させた。
【００６２】
各抽出物を生理活性についてテストし、その検証結果を下記表１９に示した。青海苔胞子の運動性抑制活性検証結果においては、ヘキサン抽出物の場合、１０，０００μｇ/ml、７，５００μｇ/mlそして、５，０００μｇ/mlにて強力な抑制効果（９５％以上の抑制：＋＋＋＋）、２，５００μｇ/mlにて強い活性（９５〜７５％：＋＋＋）、１，２５０μｇ/mlにて中間活性（７５％〜５０％：＋＋）を表した。
【００６３】
メチルアルコール抽出物は、１０，０００μｇ/mlと７５，０００μｇ/mlとで強い活性（＋＋＋）を見せたが、１，２５０μｇ/mlでは活性を示さなかった。また、水抽出物は、１０，０００μｇ/mlおよび７，５００(g/mlとで、中間活性（＋＋）を、５，０００(g/mlで、弱い活性（＋）を示し、２，５００(g/mlと１，２５０(g/mlとでは、活性を示さなかった。
【００６４】
結果的に、ヘキサン抽出物で優れた効果が示され、この抽出物を防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００６５】
【表１０】
【００６６】
１次シリカゲルコラムクロマトグラフィー
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン下で充填した。ヘキサン抽出物試料を適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（７．５：２．５）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（２．５：７．５）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、メチルアルコール（１０）を順番に、ヘキサンから塩化メチレンまで１００ml、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）からメチルアルコールまでは３００mlずつ、３ml／minの流速で溶出させた（表１１）。
【００６７】
【表１１】
【００６８】
その溶出液を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒の条件下でＴＬＣを行い、６個の分画に分画した。６個の分画（Ｉ〜VI）を対象に生理活性の検証を行い、その結果は表１２の通りである。
【００６９】
【表１２】
【００７０】
４，０００(g/mlの濃度で分画Ｖが胞子の運動性に対する強力な活性（＋＋＋＋）を見せ、分画II、III、IVそしてVIでは強い活性（＋＋＋）を見せた。２，０００(g/ml、１，５００(g/mlで分画Ｖは強力な活性（＋＋＋＋）を示し、７５０(g/mlと２５０(g/mlではその活性が低下されたが、強い活性（＋＋＋）を維持した。結果的に、分画（Ｉ〜VI）のうち、活性が最も優れていた塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）の範囲内の分画Ｖを２次シリカゲルコラムクロマトグラフィーを利用した防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７１】
２次シリカゲルコラムクロマトグラフィー
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン下で充填し、分画Ｖを試料として適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（９：１）、ヘキサン：塩化メチレン（８：２）、ヘキサン：塩化メチレン（７：３）、ヘキサン：塩化メチレン（６：４）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（４：６）、ヘキサン：塩化メチレン（３：７）、ヘキサン：塩化メチレン（２：８）、ヘキサン：塩化メチレン（１：９）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン（ｍｅｔｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）：酢酸エチル（９：１）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（７：３）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（５：５）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（３：７）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、塩化メチレン：酢酸エチル（１：９）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（６：４）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、メチルアルコール（１０）を順番に、１００mlずつ、３ml／minの流速で溶出させた後（表１３）、各分画をヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒の条件下で、ＴＬＣにて確認し、６個の分画（VI−i〜VI−vi）を作った。その各分画に対するＴＬＣダイアグラムを図５に、各分画についてのＲｆ値を、表１４に示す。その６個の分画を、胞子運動性に対する抑制活性についてテストし、その結果を表１５に表す。
【００７２】
【表１３】
【００７３】
【表１４】
【００７４】
【表１５】
【００７５】
その結果、分画Ｖ−iiiが最も優れた活性を示したため、この分画をPrep-TLCによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７６】
２次シリカゲルコラムクロマトグラフィーを使用して有機溶媒の濃度勾配を実施して得た分画の生理活性試験を通して最も優れた活性を表す分画Ｖ−iiiを、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒を利用してPrep-TLC上で展開させ、３個の分画Ｖ−iii−ａ、Ｖ−iii−ｂ、Ｖ−iii−ｃを各々分取した。
【００７７】
各分画に対するＴＬＣダイアグラムを図６に、各分画に対するＲｆ値を表１６に示す。青海苔胞子の運動性抑制効果を、下記表１７に各々表示する。
【００７８】
【表１６】
【００７９】
【表１７】
【００８０】
その結果、分画Ｖ−iii−ａが希釈倍数の増加にも関わらず活性が持続されたため、Prep-HPLCを利用した防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００８１】
Prep-HPLC
Prep-TLCで分取した活性分画であるＶ−iii−aを、Prep-HPLC C18逆相コラム（microsorb、21.4×250mm）に適用した。その移動相は、６０％アセトニトリルと４０％水の混合溶媒を使用して１２０分間、流速２０ml／minで溶出した。２１３nmで、その溶出した分画の吸光度を測定し、最高値を見せる６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）を分取した。
【００８２】
Prep−TLCで分取した活性分画であるＶ−iii−aを、Prep−HPLCと分析用ＨＰＬＣに適用して得たクロマトグラムは、図７に示され、Prep-HPLCを使用して分取した各分画（Ｋ１〜Ｋ６）の青海苔の胞子に対する運動性抑制活性試験結果は、表１８に示される。
【００８３】
【表１８】
【００８４】
その結果、その分取した６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）中、分画Ｋ４の青海苔胞子の運動性抑制効果が最も優れていた。
【００８５】
（実施例３）フシスジモク由来の防汚性物質の確認
前記実施例２の分画Ａ〜ＨのＮＭＲを行い、防汚性物質を確認した。
【００８６】
分画Ａ〜Ｈに対する水素−ＮＭＲによる分析結果、分画Ａはヘキサデカンとオクタデカンが結合された形態で、分画Ｂはエイコサン、分画Ｂは１−ペンタデカノール、分画Ｃは１−エイコサノール、分画Ｄは１−ペンタデカノール、分画Ｅはフタル酸ジブチル、分画Ｆはフタル酸ジオクチル、分画Ｇはフタル酸ジイソノニル、そして分画Ｈはフタル酸ジシクロヘキシルと判明した（図８〜１４）。上記分画は、下記化学式の構造を有する。
【００８７】
【化１】
【００８８】
【化２】
【００８９】
【化３】
【００９０】
【化４】
【００９１】
【化５】
【００９２】
【化６】
【００９３】
【化７】
【００９４】
【化８】
【００９５】
【化９】
【００９６】
更に、前記実施例３の分画Ｖ−ｅ−Ｋ７に対する水素−核磁気共鳴（１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは、Bruker AC-200スペクトロメータ（５００ＭＨｚ）から得て、炭素−核磁気共鳴（１３Ｃ ＮＭＲ）スペクトルはBruker AC-800スペクトロメータ（８００ＭＨｚ）から得た（図１５〜１８および表１９）。
【００９７】
【表１９】
【００９８】
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは５個の骨格が見られ、２個のメタ双（meta pairs）が芳香族陽子で連結されたδ６．５２でペアを成す片方にまたペアを成しており、２個のオレフィン陽子δ６．３５のペアを成す両側に３双の５．２１を成し、４個のメチル陽子は各々の単一体としてδ１．６３、１．６７、２．０６を成す。４個の分子のうち一つは、δ２．４６であり、水素原子２個を含むベンゾピランの核（necleus）は、アリル位で(２．６６の３双を成して作用する。
【００９９】
また、単一体としての(９．３０は、アルデヒド陽子を表し、(４．８０は、広範囲にヒドロキシル陽子の位置を表し、Ｄ２Ｏと交換される。（１．２５と２．１４は、広範囲のメチル陽子の位置を表し、前記データは、混合物であるプレニル側鎖二重結合の一部分である１４、１５とジヒドロベンゾピランであることを表す。
【０１００】
１３Ｃ ＮＭＲ（８００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは、２２個の炭素信号基（carbon signal）を表す。（１９５．６８の信号（signal）は、アルデヒドを表し、オレフィン炭素は、（１２７．５、１２１．３、１１７．６と１１５．８により表され、単一体である（１４８．０５と１４６．０７は芳香核と２双のメタからなるアルデヒドを表す。これは、アルデヒドが側鎖であるということを提示することはできないが、芳香核であり、また、mass m/e 121の破片である。
【０１０１】
前記データを分析した結果、“２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２，８−ジメチル−２Ｈ−クロマン−６−オール”であると判明し、massによる部分的パターンを求めた（図１９）。
【０１０２】
加えて、分画Ｖ−ｅ−Ｋ７を赤外線吸収スペクトル（Fourier Infrared Spectrophotometer、Mattson、USA）ＫＢｒパレット法で測定した（CHO，Chong-Soo外、1987）。
【０１０３】
Ｖ−ｅ−Ｋ７に対する赤外線分光スペクトルの分析結果（図１４）は、v max（KBr）-3710，3669（-OH），2972，2933，2865（CH3，St），1680（=C=O，St），1597，1520そして1474cm−１（aromatic function）が得られた。その収集したデータを総合して分析した結果、フシスジモクから分離された防汚性物質は、下記化学式１０のような構造を有する。
【０１０４】
【化１０】
【０１０５】
（実施例８）ホンダワラ類由来の防汚性物質の確認
前記実施例４の分画Ｋ４を、ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳそしてＮＭＲを利用した、物質構造分析の試料として使用した。
【０１０６】
分画Ｋ４のＧＣ−ＭＳの結果を、図２１〜２３に示し、ＮＭＲデータを図２４〜２６に示す。また、分画Ｋ４は、下記化学式１１〜１３の構造を有する。
【０１０７】
【化１１】
【０１０８】
【化１２】
【０１０９】
【化１３】
【０１１０】
結論的に、防汚性が優れた特定のホンダワラ類（Sargass sp.（139、365、383））から分離、精製された新規の防汚物質は、脂肪酸であるパルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルであることが新たに明らかになった。
【０１１１】
（実施例７）安全性試験
ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシルおよび６−ホロミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランを、各々ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、水で希釈した。そして、その希釈液をマウス（群当り１０匹）に各々１０mg/kgを投与した。７日間観察したが、死亡するマウスはなかった。
【０１１２】
フタル酸メチルの物理的特性としては、以下のように、融点は３２〜３４℃、沸点は１６３〜１６４℃、密度は０．８５２である。マウスへの口腔毒性検査をこの化合物についてし、その結果、ＬＤ５０＞２０mg/kgを示した。ウサギの目に刺激を与えた時、一時的な刺激現象があるだけであった。ヒトの皮膚を通して刺激を与えた時も、また、同様に非常に軽い刺激のみであった。水に対する毒性を検査するためにマスの一種であるブルーギル（Blugil）を試験した結果、ＬＤ５０＞１０００ml/ｌであった。
【０１１３】
ステアリン酸メチルは、不透明な白色の結晶体で、融点は４０〜４２℃、沸点は１８１〜１８２℃である。その化合物は、吸入、摂取、皮膚吸収により有害であるが刺激は殆どない。すなわち、テスト結果では、ＬＤ５０＞１７．２g/kgであった。
【０１１４】
リノール酸メチルの物理的特長は無色の液体で、融点が−３５℃、沸点が１９２℃、密度が０．８８９である。
【０１１５】
（実施例８〜２４）防汚塗料の製造
樹脂とロジンをキシレンと若干のメチルイソブチルケトンに完全に溶解させた。その溶液へ、顔料として酸化亜鉛および酸化鉄を添加し、サンドミルで２回分散させた。この混合物に、下記表２０にて与えられる防汚性物質と増粘剤とを添加した。その結果得られる混合物を、高速攪拌器にて３５００rpmで６０分間攪拌した。そして、その残ったケトン類溶媒を添加して攪拌し、防汚塗料を製造した。
【０１１６】
【表２０】
【０１１７】
（実施例２５）ブースター添加塗料の製造
実施例１３と同一の組成の混合物に、ブースターとしてピリチオン亜鉛を４重量部、添加し、防汚塗料を得た。ブースターの添加は、分散工程の前に行い、顔料と共に添加した。
【０１１８】
（実施例２６）防汚性物質が混合された塗料の製造
実施例２１と同様に製造するが、防汚性物質の半分をフタル酸ジオクチルに代替し、防汚塗料を製造した。
【０１１９】
（比較例１）
実施例１３と同様に行うが、防汚性物質の含量を１重量部に変え、防汚塗料を得た。
【０１２０】
（比較例２）
実施例１３と同様に行うが、防汚性物質の含量を１重量部に変え、防汚塗料を得た。
【０１２１】
（比較例３）
実施例１９と同様に行うが、防汚性物質の含量を１重量部に変え、防汚塗料を得た。
【０１２２】
（試験例１）
ＫＳＤ３５０１の圧延鋼板（３００×３００×３．２mm）にＫＳＭ５５６９法に従って製造した防汚塗料の試片を３枚ずつ準備し、タール／ビニル樹脂で防錆塗装をした。ここに、実施例５〜２６および比較例１〜３により製造された防汚塗料を使用して、乾燥厚さが１５０μmとなるように、そのサンプルのそれぞれにスプレー塗装をした。
【０１２３】
その塗装されたパネルを相対湿度７５％、２５℃で１週間乾燥させ、そして、日本海において２Ｍ水深域に沈積させた。１２ヶ月後にパネルを観察した。試料の上端から７０mm降りた線、下端から３０mm上がった線および左右両端から２０mm内部の線の有効面積５２，０００mm２を基準に、３枚の試料の汚染面積の算術平均値を算出した。その算出された算術値を、５％の範囲で四捨五入し、その結果を下記表２１に記載した。
【０１２４】
【表２６】
【０１２５】
以上の結果から判るように、本発明の防汚塗料は、既存の有機スズ化合物を含む防汚塗料に比べて防汚性能が同等以上であることが分かる。
【０１２６】
（試験例２）
９６−マルチウェルプレート（multi well plate）上に置かれたＰＡＧＳの濃度を、２倍連続希釈法によって希釈した液体培地に、１０４cfu／mlの微生物を接種した。その液体培地を３０℃で４８時間培養し、微生物の成長可否を濁度を基準に肉眼で判定する方法によりＭＩＣを測定した。そのテストにおいて使用した液体培地は、細菌については大腸菌群（Difco）である。その試験において使用した抗菌物質は、ＰＡＧＳ−１でありし、その結果を、下記表２２に示す。
【０１２７】
（表２２）微生物に対するＰＡＧＳのＭＩＣ値の測定データ
【産業上の利用可能性】
【０１２８】
上記から判るように、本発明によるホンダワラから抽出した親環境性防汚剤は、環境に無害であり、広範囲な対象生物に対して防汚性を有し、天然物から抽出するため、既存の防汚剤と比較して製造原価を相対的に減少させることができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１２９】
【図１】図１は、フシスジモクのヘキサン抽出物の３６５nmでのＴＬＣダイアグラムを示す。
【図２】図２は、フシスジモクのヘキサン抽出物の２４５４nmでのＴＬＣダイアグラムを示す。
【図３】図３は、分画Ｖ−ｅ−Ｋ７に対するＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図４】図４は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランのＧＣ−Ｍａｓｓスペクトルの分析結果を示す。
【図５】図５は、分画Ｖ−i〜Ｖ−viに対するＴＬＣダイアグラムを示す。
【図６】図６は、分画Ｖ−iii−ａ〜Ｖ−iii−ｃに対するＴＬＣダイアグラムを示す。
【図７】図７は、分画Ｖ−iii−ａのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図８】図８は、実施例２の分画Ａに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図９】図９は、実施例２の分画Ｂに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１０】図１０は、実施例２の分画Ｃに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１１】図１１は、実施例２の分画Ｄに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１２】図１２は、実施例２の分画Ｅに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１３】図１３は、実施例２の分画Ｆに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１４】図１４は、実施例２の分画Ｇに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１５】図１５は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−デメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの１Ｈ ＮＭＲスペクトルの分析結果を示す。
【図１６】図１６は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−デメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの１Ｈ ＮＭＲスペクトルの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルの分析結果を示す。
【図１７】図１７は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの２次元のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１８】図１８は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランのＨＭＢＣの相関図を示す。
【図１９】図１９は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの質量による部分的パターンの例示図を示す。
【図２０】図２０は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランのＩＲスペクトルの分析結果を示す。
【図２１】図２１は、実施例４の分画Ｋ４に対するＧＣ−ＭＳデータを示す。
【図２２】図２２は、図２１と同一である。
【図２３】図２３は、図２１と同一である。
【図２４】図２４は、実施例４の分画Ｋ４に対するＮＭＲデータを示す。
【図２５】図２５は、図２４と同一である。
【図２６】図２６は、図２４と同一である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホンダワラから抽出した親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害で、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるために既存の防汚性物質に比べて生産原価を節減することができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、ホンダワラから抽出した新規の防汚剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
防汚性物質とは、船舶の表面に海洋付着性物（微生物および動植物）が着生することを防止するために塗料と混合される物質を言う。着生とは、底生生物が人工または自然物体に付着、成長することを言う。底生生物が船舶の表面に付着すると摩擦力の増加をもたらし、船舶の速度の低下、腐食促進、そして、燃料使用の増加などにより、経済的損失が発生する。
【０００３】
船底部分を６ヶ月間海水に露出させると、約１５０kg／ｍ２の量の生物が底に付着することが知られている。また、大型船舶の場合、船体表面が着生生物の付着により０．１mm粗くなる度に、摩擦力が０．３〜１．０％増加することが報告されており、摩擦力の増加により船舶の速度は、約５０％減少する。
【０００４】
このような問題点を解決するために、トリブチルすず（以下、ＴＢＴと称す）のような有機すず化合物を防汚剤として頻繁に使用してきた。しかしながら、ＴＢＴは、海洋環境に悪影響を及ぼすという事実が明らかになったことで、ＵＮ傘下の国際海事機構（ＩＭＯ）の海洋環境保護委員会（ＭＥＰＣ）では、有機すず化合物の危険性のため、船舶用防汚システムの規制決議を採択した。その結果、２００３年１月１日から防汚剤として使用されてきたＴＢＴの使用が全面禁止され、２００８年には船舶からＴＢＴを完全に除去しなければならないという規定が施行される。
【０００５】
現在、有機すず化合物に代わって一般的に使用されている非すず系防汚物質は、大韓民国公開特許第２００１−００９９０４９号に開示されているように、亜酸化銅または亜鉛を含む。非すず系防汚剤は、海藻類である青海苔に対する防汚効果が不十分であるという技術的な問題点がある。また、亜酸化銅防汚剤は、海洋底質に蓄積され、環境に悪影響を及ぼすため、２００６年〜２００８年の間に使用が禁止されることが予想される。これに伴い、防汚効果が優秀であると同時に環境に無害な防汚剤の開発が急がれている。
【特許文献１】大韓民国公開特許第２００１−００９９０４９号
【特許文献２】大韓民国特許出願第９５−１５１４９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明者は、前述した問題点を解決するために環境に無害で、卓越した防汚効果を有し、生産原価が安価である防汚剤の開発に対し研究した結果、ホンダワラから抽出された物質が卓越した防汚効果を有することを確認することで本発明を確認するに至った。
【０００７】
従って、本発明の目的は、天然物質から抽出することにより生産原価が安価で、ホンダワラから抽出した親環境的な防汚剤を提供することである。
【０００８】
また、本発明の別の目的は、ホンダワラから抽出した親環境的防汚塗料を提供することである。
【０００９】
更に、本発明の別の目的は、ホンダワラから抽出した親環境的バイオサイド（ｂｉｏｃｉｄｅ）を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記目的を達成するために、一の観点においては、本発明は、ホンダワラ抽出物を有効成分として含有する防汚剤を提供する。
【００１１】
また、別の観点においては、本発明は、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物が有効成分として含有された防汚剤を提供する。
【００１２】
また、別の観点においては、本発明は、ホンダワラから抽出した防汚性を有する新規の６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物、および、その製造方法を提供する。
【００１３】
別の観点においては、本発明は、樹脂、溶剤、顔料、防汚性物質、および、その他添加剤とを具備する防汚塗料において、前記防汚性物質として、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの中から選択される、１または２またはそれを超える化合物が混合されて使用される親環境性防汚塗料を提供する。
【００１４】
また、前記ホンダワラ抽出物は、藻類抑制効果があるため、防汚剤だけでなくバイオサイドとしても使用が可能である。すなわち、これらの防汚剤とバイオサイドは、本発明の範囲内にある。
【００１５】
以下より、本発明を更に詳細に示す。
【００１６】
本発明は、ホンダワラから抽出した親環境性防汚剤に関し、更に詳しくは、環境に無害で、広範囲な汚損生物に対して防汚性を有し、自然から抽出することができるため、既存の防汚性物質に比べて生産原価が安価であり、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされていた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる、ホンダワラから抽出した新規の防汚剤に関する。
【００１７】
本発明者は、環境に無害な防汚塗料を開発するために多様な種類の海藻類と陸上植物に対して防汚性の試験を行った。海藻類は、韓国沿岸の日本海沿岸、太平洋海沿岸の数ヶ所の潮間帯に棲息する種と、潜水して採取した種を、分類して、同定して、陰干しし、そして、破砕機で粉砕し、粉末試料は、ガラス瓶に保管して必要の度に使用した。陸上植物は、韓国全土に棲息する陸上植物の中から２次代謝産物が防汚性を有する植物を採取し、分類、同定後、陰干しして破砕機で粉砕して抽出した。
【００１８】
付着性海藻類に対する抽出物の付着防止効果は、代表的な付着性海藻類であるスジアオノリとアナアオサの胞子を利用して試験を行った。その試験を通して、多様な海藻類および陸上植物の中、ホンダワラの抽出物が、優れた防汚性を示した。
【００１９】
本発明者は、多様な実験を通して、防汚性が優れたホンダワラの抽出物から防汚性を見せる物質が、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランであることが明らかになった。
【００２０】
特に、本発明においては、フシスジモク（Sargassum confusum）から、新規のｌ６−ホロミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物を発見した。この化合物は、フシスジモクの粉末をヘキサン、酢酸エチルまたはメタノールからなる群から選択された１種の溶媒で抽出した後、上層液のみを減圧濃縮して製造された。
【００２１】
一方、防汚塗料は、通常、防汚性物質、樹脂、溶剤、顔料、その他添加剤等で構成され、防汚性を向上させるために、ブースターを添加することもできる。
【００２２】
本発明の塗料は、前記防汚性物質を３〜４０重量％、更に好ましくは、１０〜３０重量％含有する。その防汚性物質の量が、３重量％未満の場合には、防汚性が不足し、そして、その防汚性物質の量が、３０重量％を超過する場合は、その他の組成成分との混合性、長期保管性などが低下する。
【００２３】
本発明の防汚塗料に使用することのできる樹脂は、従来の防汚塗料に使用されていた全ての樹脂が使用される。その例としては、酢酸ビニル樹脂、塩化ビニル樹脂などのビニル系樹脂、ウレタン樹脂、塩化ゴム系樹脂、フタル酸樹脂、アルキド樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、アクリル樹脂、フッ素樹脂、シリコン樹脂などの合成樹脂とロジンなどの天然樹脂を使用することができる。特に、アクリル樹脂を構成する成分の単量体の例としては、ｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−イソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−５−クロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）アクリル酸アルキル、ｗ−（Ｎ−４，５−ジクロロイソチアゾロニル）メタクリル酸アルキル、ｗ−アクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−メタクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−２，３−アクリル酸マレイミドアルキル、ｗ−２，３−メタクリル酸ジクロロマレイミドアルキル、ｗ−マレイミドアルキルビニルエーテル、４−アクリル酸マレイミドアルキル、アクリル酸、メタクリル酸、無水マレイン酸、アクリル酸ヒドロキシルアルキル、アクリル酸アルコキシアルキル、アクリル酸フェノキシアルキル、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルアクリレート、ｗ−（アセトアセトキシ）アルキルビニルエーテル、ビニルアセトアセトアセテート、Ｎ，Ｎ−アクリル酸ジアルキル、ビニルピリジン、ビニルピロリジン、４−ニトロフェニル−２−ビニルエチラート、２，４−アクリル酸ジニトロフェニル、２，４−メタクリル酸ジニトロフェニル、４−アクリル酸チオシアノフェニル、アクリル酸トリアルキルシリル、アクリル酸モノアルキルジフェニルシリル、アクリル酸ジクロロメチル、メタクリル酸クロロメチル、アクリル酸フェニルメチル、アクリル酸ジフェニルメチル、ジアクリル酸フェニルメチルメタ、アクリル酸トリアルキル亜鉛、メタクリル酸トリアルキル亜鉛、アクリル酸トリアリル亜鉛、メタクリル酸トリアリル亜鉛、アクリル酸トリアルキル銅、メタクリル酸トリアルキル銅、アクリル酸トリアリル銅、メタクリル酸トリアリル銅のような成分を含有する単量体を、１または２またはそれを超えるように含有する重合体である。この通常的な製造方法は、大韓民国特許出願第９５−１５１４９号に記載されている。この時、単量体の数平均分子量は、粘度、フィルム形成度および作業性において有利な１，５００〜１００，０００が適当である。更に、合成樹脂と天然樹脂を併用することもできる。塗料中の樹脂含量は、２〜２０重量％、好ましくは、５〜１５重量％である。２重量％未満の場合には、塗料の付着性が低下し、そして、２０重量％を超過する場合には、貯蔵性に問題が生じる。
【００２４】
本発明の防汚塗料に使用される溶剤は、キシレン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのような炭化水素系、ケトン類溶剤および酢酸セロソルブなどであり、その使用量は、１０〜３０重量％が適切である。溶媒量が１０重量％未満の場合には、粘度が非常に高くなり、溶媒量が３０重量％を超過する場合には、塗膜に対する付着性および防汚性に問題が発生する。
【００２５】
本発明の防汚塗料に使用される顔料としては、当業界において知られた多様な顔料を含む。例えば、酸化チタン、酸化鉄、酸化亜鉛などの金属酸化物と、有機顔料とを、単独または混合して使用する。前記顔料は、２０〜４０重量％内で使用することが好ましい。顔料が２０重量％未満で使用される場合には、変色するという問題点があり、４０重量％を超過する場合には、耐候性が低下するという問題点が発生する。
【００２６】
塗料の防汚性を更に向上させる必要性がある場合、ブースターを使用することができる。その例としては、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テラクロロ−イソフタロニトリル、３−（３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−（チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅、銀化合物を含む。これらの化合物は、１種、または、２以上の混合物として使用してもよい。そのブースターは、好ましくは、１〜７重量％、より好ましくは、２〜４重量％で使用される。そのブースターの量が、１重量％未満の場合には、防汚性の上昇効果が微々たるものであり、７重量％を超過する場合には、塗量の貯蔵安定性に問題が生じる。
【００２７】
更に、本発明の塗料組成物は、多様な公知の添加剤を含有させることができる。添加剤の例としては、ポリアミドワックス、ベントナイトまたはポリエチレンワックスなどのような増粘剤を挙げることができる。これらの添加物は、好ましくは、１〜５重量％にて使用される。添加物の量が、５重量％を超過する場合は、粘度が非常に高くなってしまう。
【００２８】
さらに、本発明によるホンダワラの抽出物、即ち、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルおよび６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−デメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの中から選択された１種以上の化合物は、藻類運動阻害活性を有するため、バイオサイドとしても使用が可能である。そのバイオサイドは、好ましくは、前記抽出物または化合物を有効成分として、バイオサイドの全重量に対して、０．１〜５重量％含有することができる。更に、前記有効成分の他に、バイオサイドは、界面活性剤、溶剤、イソチアゾロン系バイオサイドなども含有させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下より、本発明は、実施例によって更に詳しく説明される。しかしながら、本発明が、これらの実施例よって限定されるわけではないことは、当業者にとって明白である。
【実施例】
【００３０】
（実施例１）試料採取および抽出
１）フシスジモクの抽出
フシスジモクを韓国の慶尚北道（Gyeongsangbuk-do）浦項（Pohang）（緯度３６°経度１２９°３０′）で採取し、その海藻から異物を除いた。そして、その海藻を洗浄し、陰干しした。抽出収率を高めるために、その陸上植物を、粉砕機を利用して粉末を作り、実験材料として使用した。ヘキサン１０ｌに試料粉末１kgを添加して、２４時間保管した後に抽出し、上層液のみを集めた。その抽出と、上層液の収集とを、３回反復し、そして、その上澄み液を共に混ぜ合わせ、３７℃において減圧濃縮器を利用して１／１０の体積に蒸発させた。その残留した材料を、０．２２μmフィルターを介して濾過し、−２０℃で保管して実験に使用した。
【００３１】
有機溶媒に対する溶解度の確認
フシスジモクのヘキサン抽出物の有機溶媒に対する溶解度を確認するために、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（SIL G/U254、0．25mm layer with fluorescent indicator Machereynagel Co. 独）を利用して、ヘキサン、クロロホルム、塩化メチレン、酢酸エチル、エタノール、メタノールの溶解度を、ＵＶランプ（UVGL-58、UV-254/366nm、UVP Inc. U.S.A）によって同定した（図１、２）。
【００３２】
２）ホンダワラ類の抽出
生物由来の抽出物を対象にスジアオノリの胞子付着阻害効果の実験を行った。試料のメチルアルコール抽出物を、２００μｌ/mlの濃度で付着阻害効果を実験した結果、ホンダワラ類（Sargassum sp.（139）、Sargassum sp.（365）、Sargassum sp.（383））の抽出物が、最も優れた胞子付着阻害効果を表した（表１ａ、１ｂ）。
【００３３】
【表１ａ】
【００３４】
【表１ｂ】
【００３５】
（実施例２）フシスジモク抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサンにおいてガラス管コラム（１０cm×９０cm、PTEE end plate付着）に充填した。その際、そのコラムは、試料の量に応じて、選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍にした。展開溶媒としては、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０とし、順番に５ml／minの流速で分取し、フシスジモク抽出物に対して実験を展開した。展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーを行い、６個の分画（Ｉ〜VI）に分画した。
【００３６】
【表２】
【００３７】
分画（Ｉ〜VI）の汚損生物付着抑制効果は、代表的な付着海藻類の一つであるアナアオサを対象に実験を行った。アナアオサは江陵（Kangrung）近郊の鏡浦台（Kyongpodae）で採集した。その採取された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために、超音波処理を１分間、３回繰り返し、そして、殺菌した海水できれいに洗浄した。その洗浄した藻を、１％ベタジンおよび２％trition X-100の混合溶液に、１分間沈置させて、簡単な滅菌処理後、半乾燥した。その半乾燥されたアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、２０℃の培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【００３８】
準備したチューブに、１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を入れ、胞子が放出された海水を添加した。濃度別に５００、１０００、１５００、２０００、４０００μｌ/mlでの胞子の運動性阻害効果を、顕微鏡（オリンパスCK-2）でＸ１００の倍率で観察し、その結果を下記表３に表した。表３においては、胞子の運動性阻害効果が９５％以上の場合は＋＋＋＋で、胞子の運動性阻害効果が９５〜７５％の場合は＋＋＋、７５〜５０％の場合は＋＋で、５０〜２０％の場合は＋で表し、胞子の運動性阻害効果が全くない場合は−で表した。各希釈濃度別の接種前に、海水内の胞子の運動状態を確認し、対照群と比較使用した。
【００３９】
前記で分画された５個の分画（Ｉ〜VI）について、胞子の運動性阻害活性に対する試験をし、その結果を、下記表３に示した。表３において表される通り、分画IIIで強い活性を見せた。前記試験で活性の良かった分画IIIの２次シリカゲルコラムを実施した。この際、展開溶媒としては、ヘキサン、ヘキサン：酢酸エチル＝９５：５、ヘキサン：酢酸エチル＝９０：１０、ヘキサン：酢酸エチル＝８５：１５、ヘキサン：酢酸エチル＝８０：２０、ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０、ヘキサン：酢酸エチル＝５０：５０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９５：５、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０とし、順番に３ml／minの流速で分取した。展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーを行い、フシスジモクの８個の分画（Ａ〜Ｈ）を対象に胞子運動性抑制活性実験を実施し、その結果を表４に示した。表４に表す通り、８個の分画全てが、強い活性を示した。
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】
（実施例３）フシスジモク抽出物の溶媒分画
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン下でガラス管コラム（１０cm×９０cm、PTEE end plate付着）に充填した。その際、コラムは、試料の量に応じて選択して使用し、シリカゲルの量は、試料量の５０〜６０倍にした。展開溶媒としては、ヘキサン、ヘキサン：塩化メチレン＝８０：２０、ヘキサン：塩化メチレン＝６０：４０、ヘキサン：塩化メチレン＝２０：８０、塩化メチレン、塩化メチレン：エタノール＝８０：２０、塩化メチレン：エタノール＝６０：４０、塩化メチレン：エタノール＝４０：６０、塩化メチレン：エタノール＝２０：８０、酢酸エチル、酢酸エチル：メタノール＝９０：１０、酢酸エチル：メタノール＝８０：２０、酢酸エチル：メタノール＝７０；３０、酢酸エチル：メタノール＝６０：４０、酢酸エチル：メタノール＝５０：５０、メタノールとし、順番に１０ml／minの流速で分取し、実施例２と同一の展開溶媒条件下で薄層クロマトグラフィーを行い、８個の分画（Ｉ〜VIII）に分画した。
【００４３】
陸上植物と海藻類の抽出物の汚損生物の付着阻害効果は、代表的な軟性海藻類の一つであるアナアオサを対象にして試験を行った。アナアオサは、江陵（Kangrung）近郊の鏡浦台（Kyongpodae）で採集してた。その採取された海藻を実験室に運搬し、アナアオサのみを分類した。汚損生物を除去するために超音波処理を１分間、３回繰り返し、殺菌した海水できれいに洗浄した。そして、１％ベタジンおよび２％trition X-100の混合溶液に１分間沈置させて簡単な滅菌処理後、半乾燥した。
【００４４】
半乾燥されたアナアオサを滅菌海水に入れ、８０μmol m−２ s−１、２０℃の培養器に入れて胞子放出を誘導した。
【００４５】
準備したチューブに、１０μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を入れ、胞子が放出された海水を添加した。濃度別に１２５、２５０、５００、１０００、１５００、２０００、４０００μｇ/mlでの胞子の運動性阻害効果を顕微鏡（オリンパスCK-2）でＸ１００の倍率で観察し、その結果を下記表５に表した。胞子の運動性抑制が９５％以上、即ち運動性が殆ど観察されない場合は＋＋＋＋で、胞子の運動性阻害効果が９５〜７５％の場合は＋＋＋、７５〜５０％の場合は＋＋で、５０〜２０％の場合は＋で、２０％以下の場合は−で表した。
【００４６】
【表５】
【００４７】
表５に記載された通り、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性テストの結果においては、４０００(g/mlの濃度で、分画Ｖが最も強力な抑制活性を示した。
【００４８】
分画Ｖを、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒において、Prep-TLC上で展開させ、５個の分画Ｖ−ａ、Ｖ−ｂ、Ｖ−ｃ、Ｖ−ｄ、Ｖ−ｅに分画した。
【００４９】
５個の各分画に対する胞子の運動性抑制効果をテストし、その結果を下記表６に示す。
【００５０】
【表６】
【００５１】
表６に記載された通り、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性テストの結果においては、分画Ｖ−ｅが、２５０、５００、１０００、１５００、２０００、４０００μｇ/mlで最も強力な活性を見せ、１２５μｇ/mlの濃度でも強い活性（＋＋＋）を表した。分画Ｖ−ｅは、有機溶媒（ヘキサン、酢酸エチル、メタノール）を使用して溶媒別に溶解度によって各３個の分画を得た。その３個の各分画について青海苔胞子の運動性抑制効果をテストし、その結果を下記表７に示す。
【００５２】
【表７】
【００５３】
表７に記載された通り、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性テストの結果においては、溶解度によって分画された分画Ｖ−ｅでは、酢酸エチルの溶媒で溶出された分画が強い胞子の運動性抑制効果を表した。
【００５４】
分画採取用高速液体クロマトグラフィー（Prep-HPLC）
分画Ｖ−ｅを酢酸エチル溶媒で分画した分画を分画採取用高速液体クロマトグラフィー Ｃ１８逆相コラム（Microsorb、21.4mm×250mm）に適用し、８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間、流速５ml/minで溶出させた。２５４nmでその溶出された分画の吸光度を測定し、各分画（Ｋ１〜Ｋ８）の分取を行った。その分取された８個の分画を、青海苔胞子の運動性に対する抑制活性効果についてテストし、その結果を下記表８に示す。その分取された８個の分画の生理活性検証を通して最も優れた胞子の運動性抑制活性を表した分画Ｋ７を、気体クロマトグラフィー／気体質量分光器（ＧＣ／ＭＳ）、高性能液体クロマトグラフィー／液体質量分光器（ＬＣ／ＭＳ）、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）を使用して物質構造分析の試料として使用した。
【００５５】
【表８】
【００５６】
高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
生理活性物質の生理活性検証を通して優れた胞子の運動性抑制活性を表した分画Ｋ７またはPrep-HPLCにより分画された８個の分画を、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）Ｃ１８逆相コラム（Microsorb、21.4mm×250mm、Cosmosil）に適用し、８０％メタノールと２０％水の混合溶媒を使用して６０分間、１ml/minの流速で溶出させた。２５４nmで、その溶出された各分画の吸光度を測定して分取し、８個の分画を分析した。
【００５７】
気体クロマトグラフィー質量測定スペクトル
ＨＰＬＣから活性部分（メタノール濃度８０％）のみを回収して乾燥させ、メタノールに溶かし、その溶液の１mgを気体クロマトグラフィー分析に使用した。気体クロマトグラフィーには、毛細管コラムであるＨＰ−５（Hewlett-Packard、30cm×0.25mm×0.25μm）を使用し、移動相気体にはヘリウムを使用し、注入速度を０．６ml/minとし、分割注入法（１：５０）を使用して分析した。コラム注入口の温度は２３０℃、コラムの初期温度は１００℃とした。１００℃の温度を２分間維持し、４℃/minの速度で１５０℃まで昇温させた。その後、３℃/minの速度で２００℃まで、そのコラムを昇温させ、再び７℃/minの速度で２５０℃まで昇温させて、その温度にそのコラムを維持させた。その際、イオンソース（Ion source）の電子イオン化モード（electron ionization mode）にて、２８０℃で７０ｅＶを使用した（表９）。
【００５８】
【表９】
【００５９】
液体／気体クロマトグラフィー質量分析スペクトル（ＬＣ／ＧＣ ＭＳ）によって、分画Ｖ−ｅ−Ｋ７の分子量を求め（図３、４）、その分画Ｖ−ｅ−Ｋ７についてのＧＣ−ＭＳの分析結果は、以下のように、Ｒｔ：７１．５６min、分子イオン：Ｍ＋ −３４２であった。
【００６０】
（実施例３）ホンダワラ抽出物の溶媒の分画
特定ホンダワラ類（Sargassum sp.（139）、Sargassum sp.（365）、Sargassum sp.（383））の抽出物から青海苔の胞子に対する運動性抑制物質を探索するために、有機溶媒の分画を作った。
【００６１】
海藻をヘキサン、メチルアルコール、そして、水を使用して各々抽出した。そのヘキサンとメチルアルコール抽出液を濾過し、その濾過液を３０℃で減圧濃縮器を使用して濃縮した。その水抽出物は、凍結乾燥機を利用して凍結乾燥させた。
【００６２】
各抽出物を生理活性についてテストし、その検証結果を下記表１９に示した。青海苔胞子の運動性抑制活性検証結果においては、ヘキサン抽出物の場合、１０，０００μｇ/ml、７，５００μｇ/mlそして、５，０００μｇ/mlにて強力な抑制効果（９５％以上の抑制：＋＋＋＋）、２，５００μｇ/mlにて強い活性（９５〜７５％：＋＋＋）、１，２５０μｇ/mlにて中間活性（７５％〜５０％：＋＋）を表した。
【００６３】
メチルアルコール抽出物は、１０，０００μｇ/mlと７５，０００μｇ/mlとで強い活性（＋＋＋）を見せたが、１，２５０μｇ/mlでは活性を示さなかった。また、水抽出物は、１０，０００μｇ/mlおよび７，５００(g/mlとで、中間活性（＋＋）を、５，０００(g/mlで、弱い活性（＋）を示し、２，５００(g/mlと１，２５０(g/mlとでは、活性を示さなかった。
【００６４】
結果的に、ヘキサン抽出物で優れた効果が示され、この抽出物を防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００６５】
【表１０】
【００６６】
１次シリカゲルコラムクロマトグラフィー
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン下で充填した。ヘキサン抽出物試料を適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（７．５：２．５）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（２．５：７．５）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、メチルアルコール（１０）を順番に、ヘキサンから塩化メチレンまで１００ml、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）からメチルアルコールまでは３００mlずつ、３ml／minの流速で溶出させた（表１１）。
【００６７】
【表１１】
【００６８】
その溶出液を、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒の条件下でＴＬＣを行い、６個の分画に分画した。６個の分画（Ｉ〜VI）を対象に生理活性の検証を行い、その結果は表１２の通りである。
【００６９】
【表１２】
【００７０】
４，０００(g/mlの濃度で分画Ｖが胞子の運動性に対する強力な活性（＋＋＋＋）を見せ、分画II、III、IVそしてVIでは強い活性（＋＋＋）を見せた。２，０００(g/ml、１，５００(g/mlで分画Ｖは強力な活性（＋＋＋＋）を示し、７５０(g/mlと２５０(g/mlではその活性が低下されたが、強い活性（＋＋＋）を維持した。結果的に、分画（Ｉ〜VI）のうち、活性が最も優れていた塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）の範囲内の分画Ｖを２次シリカゲルコラムクロマトグラフィーを利用した防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７１】
２次シリカゲルコラムクロマトグラフィー
シリカゲル（７０〜２３０メッシュ）をヘキサン下で充填し、分画Ｖを試料として適用し、ヘキサン（１０）、ヘキサン：塩化メチレン（９：１）、ヘキサン：塩化メチレン（８：２）、ヘキサン：塩化メチレン（７：３）、ヘキサン：塩化メチレン（６：４）、ヘキサン：塩化メチレン（５：５）、ヘキサン：塩化メチレン（４：６）、ヘキサン：塩化メチレン（３：７）、ヘキサン：塩化メチレン（２：８）、ヘキサン：塩化メチレン（１：９）、塩化メチレン（１０）、塩化メチレン（ｍｅｔｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）：酢酸エチル（９：１）、塩化メチレン：酢酸エチル（８：２）、塩化メチレン：酢酸エチル（７：３）、塩化メチレン：酢酸エチル（６：４）、塩化メチレン：酢酸エチル（５：５）、塩化メチレン：酢酸エチル（４：６）、塩化メチレン：酢酸エチル（３：７）、塩化メチレン：酢酸エチル（２：８）、塩化メチレン：酢酸エチル（１：９）、酢酸エチル（１０）、酢酸エチル：メチルアルコール（９：１）、酢酸エチル：メチルアルコール（８：２）、酢酸エチル：メチルアルコール（７：３）、酢酸エチル：メチルアルコール（６：４）、酢酸エチル：メチルアルコール（５：５）、メチルアルコール（１０）を順番に、１００mlずつ、３ml／minの流速で溶出させた後（表１３）、各分画をヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒の条件下で、ＴＬＣにて確認し、６個の分画（VI−i〜VI−vi）を作った。その各分画に対するＴＬＣダイアグラムを図５に、各分画についてのＲｆ値を、表１４に示す。その６個の分画を、胞子運動性に対する抑制活性についてテストし、その結果を表１５に表す。
【００７２】
【表１３】
【００７３】
【表１４】
【００７４】
【表１５】
【００７５】
その結果、分画Ｖ−iiiが最も優れた活性を示したため、この分画をPrep-TLCによる防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００７６】
２次シリカゲルコラムクロマトグラフィーを使用して有機溶媒の濃度勾配を実施して得た分画の生理活性試験を通して最も優れた活性を表す分画Ｖ−iiiを、ヘキサン：塩化メチレン：酢酸エチル（３：１：１）の混合溶媒を利用してPrep-TLC上で展開させ、３個の分画Ｖ−iii−ａ、Ｖ−iii−ｂ、Ｖ−iii−ｃを各々分取した。
【００７７】
各分画に対するＴＬＣダイアグラムを図６に、各分画に対するＲｆ値を表１６に示す。青海苔胞子の運動性抑制効果を、下記表１７に各々表示する。
【００７８】
【表１６】
【００７９】
【表１７】
【００８０】
その結果、分画Ｖ−iii−ａが希釈倍数の増加にも関わらず活性が持続されたため、Prep-HPLCを利用した防汚成分の分離および精製の試料として使用した。
【００８１】
Prep-HPLC
Prep-TLCで分取した活性分画であるＶ−iii−aを、Prep-HPLC C18逆相コラム（microsorb、21.4×250mm）に適用した。その移動相は、６０％アセトニトリルと４０％水の混合溶媒を使用して１２０分間、流速２０ml／minで溶出した。２１３nmで、その溶出した分画の吸光度を測定し、最高値を見せる６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）を分取した。
【００８２】
Prep−TLCで分取した活性分画であるＶ−iii−aを、Prep−HPLCと分析用ＨＰＬＣに適用して得たクロマトグラムは、図７に示され、Prep-HPLCを使用して分取した各分画（Ｋ１〜Ｋ６）の青海苔の胞子に対する運動性抑制活性試験結果は、表１８に示される。
【００８３】
【表１８】
【００８４】
その結果、その分取した６個の分画（Ｋ１〜Ｋ６）中、分画Ｋ４の青海苔胞子の運動性抑制効果が最も優れていた。
【００８５】
（実施例３）フシスジモク由来の防汚性物質の確認
前記実施例２の分画Ａ〜ＨのＮＭＲを行い、防汚性物質を確認した。
【００８６】
分画Ａ〜Ｈに対する水素−ＮＭＲによる分析結果、分画Ａはヘキサデカンとオクタデカンが結合された形態で、分画Ｂはエイコサン、分画Ｂは１−ペンタデカノール、分画Ｃは１−エイコサノール、分画Ｄは１−ペンタデカノール、分画Ｅはフタル酸ジブチル、分画Ｆはフタル酸ジオクチル、分画Ｇはフタル酸ジイソノニル、そして分画Ｈはフタル酸ジシクロヘキシルと判明した（図８〜１４）。上記分画は、下記化学式の構造を有する。
【００８７】
【化１】
【００８８】
【化２】
【００８９】
【化３】
【００９０】
【化４】
【００９１】
【化５】
【００９２】
【化６】
【００９３】
【化７】
【００９４】
【化８】
【００９５】
【化９】
【００９６】
更に、前記実施例３の分画Ｖ−ｅ−Ｋ７に対する水素−核磁気共鳴（１Ｈ ＮＭＲ）スペクトルは、Bruker AC-200スペクトロメータ（５００ＭＨｚ）から得て、炭素−核磁気共鳴（１３Ｃ ＮＭＲ）スペクトルはBruker AC-800スペクトロメータ（８００ＭＨｚ）から得た（図１５〜１８および表１９）。
【００９７】
【表１９】
【００９８】
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは５個の骨格が見られ、２個のメタ双（meta pairs）が芳香族陽子で連結されたδ６．５２でペアを成す片方にまたペアを成しており、２個のオレフィン陽子δ６．３５のペアを成す両側に３双の５．２１を成し、４個のメチル陽子は各々の単一体としてδ１．６３、１．６７、２．０６を成す。４個の分子のうち一つは、δ２．４６であり、水素原子２個を含むベンゾピランの核（necleus）は、アリル位で(２．６６の３双を成して作用する。
【００９９】
また、単一体としての(９．３０は、アルデヒド陽子を表し、(４．８０は、広範囲にヒドロキシル陽子の位置を表し、Ｄ２Ｏと交換される。（１．２５と２．１４は、広範囲のメチル陽子の位置を表し、前記データは、混合物であるプレニル側鎖二重結合の一部分である１４、１５とジヒドロベンゾピランであることを表す。
【０１００】
１３Ｃ ＮＭＲ（８００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３／ＴＭＳ）スペクトルは、２２個の炭素信号基（carbon signal）を表す。（１９５．６８の信号（signal）は、アルデヒドを表し、オレフィン炭素は、（１２７．５、１２１．３、１１７．６と１１５．８により表され、単一体である（１４８．０５と１４６．０７は芳香核と２双のメタからなるアルデヒドを表す。これは、アルデヒドが側鎖であるということを提示することはできないが、芳香核であり、また、mass m/e 121の破片である。
【０１０１】
前記データを分析した結果、“２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２，８−ジメチル−２Ｈ−クロマン−６−オール”であると判明し、massによる部分的パターンを求めた（図１９）。
【０１０２】
加えて、分画Ｖ−ｅ−Ｋ７を赤外線吸収スペクトル（Fourier Infrared Spectrophotometer、Mattson、USA）ＫＢｒパレット法で測定した（CHO，Chong-Soo外、1987）。
【０１０３】
Ｖ−ｅ−Ｋ７に対する赤外線分光スペクトルの分析結果（図１４）は、v max（KBr）-3710，3669（-OH），2972，2933，2865（CH3，St），1680（=C=O，St），1597，1520そして1474cm−１（aromatic function）が得られた。その収集したデータを総合して分析した結果、フシスジモクから分離された防汚性物質は、下記化学式１０のような構造を有する。
【０１０４】
【化１０】
【０１０５】
（実施例８）ホンダワラ類由来の防汚性物質の確認
前記実施例４の分画Ｋ４を、ＧＣ−ＭＳ、ＬＣ−ＭＳそしてＮＭＲを利用した、物質構造分析の試料として使用した。
【０１０６】
分画Ｋ４のＧＣ−ＭＳの結果を、図２１〜２３に示し、ＮＭＲデータを図２４〜２６に示す。また、分画Ｋ４は、下記化学式１１〜１３の構造を有する。
【０１０７】
【化１１】
【０１０８】
【化１２】
【０１０９】
【化１３】
【０１１０】
結論的に、防汚性が優れた特定のホンダワラ類（Sargass sp.（139、365、383））から分離、精製された新規の防汚物質は、脂肪酸であるパルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチルであることが新たに明らかになった。
【０１１１】
（実施例７）安全性試験
ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシルおよび６−ホロミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランを、各々ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、水で希釈した。そして、その希釈液をマウス（群当り１０匹）に各々１０mg/kgを投与した。７日間観察したが、死亡するマウスはなかった。
【０１１２】
フタル酸メチルの物理的特性としては、以下のように、融点は３２〜３４℃、沸点は１６３〜１６４℃、密度は０．８５２である。マウスへの口腔毒性検査をこの化合物についてし、その結果、ＬＤ５０＞２０mg/kgを示した。ウサギの目に刺激を与えた時、一時的な刺激現象があるだけであった。ヒトの皮膚を通して刺激を与えた時も、また、同様に非常に軽い刺激のみであった。水に対する毒性を検査するためにマスの一種であるブルーギル（Blugil）を試験した結果、ＬＤ５０＞１０００ml/ｌであった。
【０１１３】
ステアリン酸メチルは、不透明な白色の結晶体で、融点は４０〜４２℃、沸点は１８１〜１８２℃である。その化合物は、吸入、摂取、皮膚吸収により有害であるが刺激は殆どない。すなわち、テスト結果では、ＬＤ５０＞１７．２g/kgであった。
【０１１４】
リノール酸メチルの物理的特長は無色の液体で、融点が−３５℃、沸点が１９２℃、密度が０．８８９である。
【０１１５】
（実施例８〜２４）防汚塗料の製造
樹脂とロジンをキシレンと若干のメチルイソブチルケトンに完全に溶解させた。その溶液へ、顔料として酸化亜鉛および酸化鉄を添加し、サンドミルで２回分散させた。この混合物に、下記表２０にて与えられる防汚性物質と増粘剤とを添加した。その結果得られる混合物を、高速攪拌器にて３５００rpmで６０分間攪拌した。そして、その残ったケトン類溶媒を添加して攪拌し、防汚塗料を製造した。
【０１１６】
【表２０】
【０１１７】
（実施例２５）ブースター添加塗料の製造
実施例１３と同一の組成の混合物に、ブースターとしてピリチオン亜鉛を４重量部、添加し、防汚塗料を得た。ブースターの添加は、分散工程の前に行い、顔料と共に添加した。
【０１１８】
（実施例２６）防汚性物質が混合された塗料の製造
実施例２１と同様に製造するが、防汚性物質の半分をフタル酸ジオクチルに代替し、防汚塗料を製造した。
【０１１９】
（比較例１）
実施例１３と同様に行うが、防汚性物質の含量を１重量部に変え、防汚塗料を得た。
【０１２０】
（比較例２）
実施例１３と同様に行うが、防汚性物質の含量を１重量部に変え、防汚塗料を得た。
【０１２１】
（比較例３）
実施例１９と同様に行うが、防汚性物質の含量を１重量部に変え、防汚塗料を得た。
【０１２２】
（試験例１）
ＫＳＤ３５０１の圧延鋼板（３００×３００×３．２mm）にＫＳＭ５５６９法に従って製造した防汚塗料の試片を３枚ずつ準備し、タール／ビニル樹脂で防錆塗装をした。ここに、実施例５〜２６および比較例１〜３により製造された防汚塗料を使用して、乾燥厚さが１５０μmとなるように、そのサンプルのそれぞれにスプレー塗装をした。
【０１２３】
その塗装されたパネルを相対湿度７５％、２５℃で１週間乾燥させ、そして、日本海において２Ｍ水深域に沈積させた。１２ヶ月後にパネルを観察した。試料の上端から７０mm降りた線、下端から３０mm上がった線および左右両端から２０mm内部の線の有効面積５２，０００mm２を基準に、３枚の試料の汚染面積の算術平均値を算出した。その算出された算術値を、５％の範囲で四捨五入し、その結果を下記表２１に記載した。
【０１２４】
【表２６】
【０１２５】
以上の結果から判るように、本発明の防汚塗料は、既存の有機スズ化合物を含む防汚塗料に比べて防汚性能が同等以上であることが分かる。
【０１２６】
（試験例２）
９６−マルチウェルプレート（multi well plate）上に置かれたＰＡＧＳの濃度を、２倍連続希釈法によって希釈した液体培地に、１０４cfu／mlの微生物を接種した。その液体培地を３０℃で４８時間培養し、微生物の成長可否を濁度を基準に肉眼で判定する方法によりＭＩＣを測定した。そのテストにおいて使用した液体培地は、細菌については大腸菌群（Difco）である。その試験において使用した抗菌物質は、ＰＡＧＳ−１でありし、その結果を、下記表２２に示す。
【０１２７】
（表２２）微生物に対するＰＡＧＳのＭＩＣ値の測定データ
【産業上の利用可能性】
【０１２８】
上記から判るように、本発明によるホンダワラから抽出した親環境性防汚剤は、環境に無害であり、広範囲な対象生物に対して防汚性を有し、天然物から抽出するため、既存の防汚剤と比較して製造原価を相対的に減少させることができ、ＴＢＴのような毒性防汚剤の使用により引き起こされた海洋環境の汚染を効果的に防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１２９】
【図１】図１は、フシスジモクのヘキサン抽出物の３６５nmでのＴＬＣダイアグラムを示す。
【図２】図２は、フシスジモクのヘキサン抽出物の２４５４nmでのＴＬＣダイアグラムを示す。
【図３】図３は、分画Ｖ−ｅ−Ｋ７に対するＨＰＬＣ分析結果を示す。
【図４】図４は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランのＧＣ−Ｍａｓｓスペクトルの分析結果を示す。
【図５】図５は、分画Ｖ−i〜Ｖ−viに対するＴＬＣダイアグラムを示す。
【図６】図６は、分画Ｖ−iii−ａ〜Ｖ−iii−ｃに対するＴＬＣダイアグラムを示す。
【図７】図７は、分画Ｖ−iii−ａのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図８】図８は、実施例２の分画Ａに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図９】図９は、実施例２の分画Ｂに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１０】図１０は、実施例２の分画Ｃに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１１】図１１は、実施例２の分画Ｄに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１２】図１２は、実施例２の分画Ｅに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１３】図１３は、実施例２の分画Ｆに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１４】図１４は、実施例２の分画Ｇに対する１Ｈ ＮＭＲデータを示す。
【図１５】図１５は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−デメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの１Ｈ ＮＭＲスペクトルの分析結果を示す。
【図１６】図１６は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−デメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの１Ｈ ＮＭＲスペクトルの１３Ｃ ＮＭＲスペクトルの分析結果を示す。
【図１７】図１７は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの２次元のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１８】図１８は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランのＨＭＢＣの相関図を示す。
【図１９】図１９は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランの質量による部分的パターンの例示図を示す。
【図２０】図２０は、６−ホルミル−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランのＩＲスペクトルの分析結果を示す。
【図２１】図２１は、実施例４の分画Ｋ４に対するＧＣ−ＭＳデータを示す。
【図２２】図２２は、図２１と同一である。
【図２３】図２３は、図２１と同一である。
【図２４】図２４は、実施例４の分画Ｋ４に対するＮＭＲデータを示す。
【図２５】図２５は、図２４と同一である。
【図２６】図２６は、図２４と同一である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホンダワラ抽出物を有効成分として含有する防汚剤。
【請求項２】
前記ホンダワラ抽出物は、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物を含有する、請求項１記載の防汚剤。
【請求項３】
前記ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物は、ホンダワラから分離される、請求項２記載の防汚塗料。
【請求項４】
パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、およびリノール酸メチルからなる群から選択される１または２またはそれを超える化合物は、ホンダワラ類から分離される、請求項２記載の防汚塗料。
【請求項５】
ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、および１−ペンタデカノールからなる群から選択される、１５個の炭素を有する、１または２またはそれを超える線形の炭化水素化合物、
フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、および、リノール酸メチルからなる群から選択される、１または２またはそれを超えるエステル化合物、
６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物
からなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物を有効成分として含有する防汚剤。
【請求項６】
防汚性を有するｌ６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物。
【請求項７】
海藻類であるフシスジモクを粉砕してフシスジモクの粉末を作る段階と、
フシスジモクの粉末をヘキサン、酢酸エチルおよびメタノールからなる群から選択される１種の溶媒で抽出し、上層液を集める段階と、
集めた上層液を減圧濃縮する段階と
を具備する、ｌ６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物を製造する方法。
【請求項８】
樹脂、溶媒、顔料、防汚性物質、および、その他添加物とを具備する防汚塗料において、前記防汚性物質が、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物が混合されて使用される親環境性防汚塗料。
【請求項９】
前記樹脂の含量は、防汚塗料の全重量に対して２〜２０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１０】
前記溶媒の含量は、防汚塗料の全重量に対して１０〜３０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１１】
前記顔料の含量は、防汚塗料の全重量に対して２０〜４０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１２】
前記防汚性物質の含量は、防汚塗料の全重量に対して３〜４０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１３】
防汚性能向上のために添加されるブースターとして、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テトラクロロ−イソフタロニトリル、３−（３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−（チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅、銀化合物からなる群から選ばれる、１または２またはそれを超えるものであって、その使用量が１〜７重量％である、請求項８記載の防汚塗料。
【請求項１４】
前記その他添加物の含量は、防汚塗料の全重量に対して１〜５重量％である、請求項８に記載の防汚塗料。
【請求項１５】
ホンダワラ抽出物を有効成分として含有するバイオサイド。
【請求項１６】
前記ホンダワラ抽出物は、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物を、有効成分として含有する、請求項１５記載のバイオサイド。
【請求項１】
ホンダワラ抽出物を有効成分として含有する防汚剤。
【請求項２】
前記ホンダワラ抽出物は、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物を含有する、請求項１記載の防汚剤。
【請求項３】
前記ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物は、ホンダワラから分離される、請求項２記載の防汚塗料。
【請求項４】
パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、およびリノール酸メチルからなる群から選択される１または２またはそれを超える化合物は、ホンダワラ類から分離される、請求項２記載の防汚塗料。
【請求項５】
ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、および１−ペンタデカノールからなる群から選択される、１５個の炭素を有する、１または２またはそれを超える線形の炭化水素化合物、
フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、および、リノール酸メチルからなる群から選択される、１または２またはそれを超えるエステル化合物、
６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物
からなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物を有効成分として含有する防汚剤。
【請求項６】
防汚性を有するｌ６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物。
【請求項７】
海藻類であるフシスジモクを粉砕してフシスジモクの粉末を作る段階と、
フシスジモクの粉末をヘキサン、酢酸エチルおよびメタノールからなる群から選択される１種の溶媒で抽出し、上層液を集める段階と、
集めた上層液を減圧濃縮する段階と
を具備する、ｌ６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピラン化合物を製造する方法。
【請求項８】
樹脂、溶媒、顔料、防汚性物質、および、その他添加物とを具備する防汚塗料において、前記防汚性物質が、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物が混合されて使用される親環境性防汚塗料。
【請求項９】
前記樹脂の含量は、防汚塗料の全重量に対して２〜２０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１０】
前記溶媒の含量は、防汚塗料の全重量に対して１０〜３０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１１】
前記顔料の含量は、防汚塗料の全重量に対して２０〜４０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１２】
前記防汚性物質の含量は、防汚塗料の全重量に対して３〜４０重量％である、請求項８記載の親環境性防汚塗料。
【請求項１３】
防汚性能向上のために添加されるブースターとして、亜鉛ピリチオン、銅ピリチオン、リン酸ポリヘキサメチレングアンジン、２，４，５，６−テトラクロロ−イソフタロニトリル、３−（３，４−ジクロロフェニル）−１、１−ジメチル尿素、２−メチルチオ−４−テルブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン（2−methylthio−4−terbutylamino−6−cyclopropylamino−s−triazine）、エチレンビスジチオカルバミン酸亜鉛、エチレンビスジチオカルバミン酸マンガン、２−ｎ−オクチル−４，５−ジクロロ−２−メチル−４−イソチアゾリン−３−オン、２−（チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２，３，５，６−テトラクロロ−４−（メチルスルホニル）ピリジン、３−ヨード−２−ブチルカルバミン酸プロピニル、ジヨードメチル−ｐ−トリスルホン、１，２−ベンゾイソチアゾリン−３−オン、２−メチルチオ−４−tert−ブチルアミノ−６−シクロプロピルアミノ−ｓ−トリアジン、２−（４−チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール、２−ｎ−オクチル−４−イソチアゾリン−３−オン、Ｎ−（フルオロジクロロメチルチオ）−フタルイミド、Ｎ−ジクロロフルオロメチルチオ−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｎ−ｐ−トリルスルファミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−フェニル−（フルオロジクロロメチルチオ）−スルファミド、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛 、（２−ピリジルチオ−１−オキシド）銅、銀化合物からなる群から選ばれる、１または２またはそれを超えるものであって、その使用量が１〜７重量％である、請求項８記載の防汚塗料。
【請求項１４】
前記その他添加物の含量は、防汚塗料の全重量に対して１〜５重量％である、請求項８に記載の防汚塗料。
【請求項１５】
ホンダワラ抽出物を有効成分として含有するバイオサイド。
【請求項１６】
前記ホンダワラ抽出物は、ヘキサデカン、オクタデカン、エイコサン、１−エイコサノール、１−ペンタデカノール、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、フタル酸ジイソノニル、フタル酸ジシクロヘキシル、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、リノール酸メチル、および６−ホルミル−３，４−デヒドロ−２，８−ジメチル−２−（３’，６’−ジエニル−８’−ヒドロキシ−４’−メチルノナン）−２Ｈ−１−ベンゾピランからなる群から選択される、１または２またはそれを超える化合物を、有効成分として含有する、請求項１５記載のバイオサイド。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【公表番号】特表２００８−５０２７６９（Ｐ２００８−５０２７６９Ａ）
【公表日】平成２０年１月３１日（２００８．１．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１６３７７（Ｐ２００７−５１６３７７）
【出願日】平成１７年５月２３日（２００５．５．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００５／００１５０３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１２３８５１
【国際公開日】平成１７年１２月２９日（２００５．１２．２９）
【出願人】（５０６４１９１６８）
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＩＮ， Ｈｙｕｎ Ｗｏｕｎｇ
【住所又は居所原語表記】１０２−８０４ Ｓａｎｇａ Ａｐｔ．， Ｓｉｎｃｈａｎｇ−Ｍｙｅｏｎ， Ａｓａｎ−ｓｉ， Ｃｈｕｎｇｃｈｅｏｎｇｎａｍ−ｄｏ ３３６−７７４ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１月３１日（２００８．１．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年５月２３日（２００５．５．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００５／００１５０３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１２３８５１
【国際公開日】平成１７年１２月２９日（２００５．１２．２９）
【出願人】（５０６４１９１６８）
【氏名又は名称原語表記】ＳＨＩＮ， Ｈｙｕｎ Ｗｏｕｎｇ
【住所又は居所原語表記】１０２−８０４ Ｓａｎｇａ Ａｐｔ．， Ｓｉｎｃｈａｎｇ−Ｍｙｅｏｎ， Ａｓａｎ−ｓｉ， Ｃｈｕｎｇｃｈｅｏｎｇｎａｍ−ｄｏ ３３６−７７４ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
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