輪紋病（Ｍ．ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ）植物
【課題】 輪点様の病弊を引き起こす輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を提供する。
【解決手段】 輪紋病（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）への耐性を有する芽キャベツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法であって、（ａ）輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を備える手段と、（ｂ）前記第１芽キャベツ植物と感受性第２芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とを交配させる手段と、（ｃ）１つ若しくはそれ以上の前記耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを用いることによる前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在を発見するための子孫ゲノムＤＮＡを分離する手段と、（ｄ）前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在が手段（ｃ）によって立証された芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の前記子孫ゲノムＤＮＡから選択する手段とを具備する。
【解決手段】 輪紋病（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）への耐性を有する芽キャベツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法であって、（ａ）輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を備える手段と、（ｂ）前記第１芽キャベツ植物と感受性第２芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とを交配させる手段と、（ｃ）１つ若しくはそれ以上の前記耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを用いることによる前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在を発見するための子孫ゲノムＤＮＡを分離する手段と、（ｄ）前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在が手段（ｃ）によって立証された芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の前記子孫ゲノムＤＮＡから選択する手段とを具備する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、輪点様の病弊を引き起こす輪紋病（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ。以下Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａと略す。）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ。以下Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａと略す。）植物に関する。本発明はまた、これら輪紋病耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の種子、果実、及び／又は他の植物部位に関する。本発明は更に、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の生産方法に関する。本発明はまた、特に耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の同定目的の為の輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性遺伝子に連結された特定ＤＮＡマーカの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａは、別名でＳｐｈａｅｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ， Ｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ， Ｄｏｔｈｉｄｅａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ， Ａｓｔｅｒｏｍａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ， ＰｈｙｌｌｏｓＷｔｉｃｔａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａなる学名で表される）（プニタリンガム アンド ホリデイ， デスクリプション オブ パソジェニック フンギ アンド バクテリア， シーエムアイ（コモンウェルス マイコロジカル インスティテュート） イングランド， ４６８巻， １９７５年（Ｐｕｎｉｔｈａｌｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｈｏｌｌｉｄａｙ， Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｎｇｉ ａｎｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ， ＣＭＩ （Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ） Ｅｎｇｌａｎｄ， Ｎｏ． ４６８， １９７５）：非特許文献１）は、アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物において、輪点様の病弊を引き起こす。８０年代初めに多くの場所で発生し、時として大流行した、（輪紋病）真菌は、子嚢菌類に属し、芽キャベツ植物の葉に灰褐色の病斑を形成し、ゆくゆく子嚢胞子が形成され。これらの胞子は、前記真菌の散布を意味し、そして主に風及び雨滴によって（真菌が）拡大される。前記真菌は、湿潤且つ温和な条件が一番好適な繁殖条件である。前記条件の組み合わせによって、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）が広い範囲で急速に拡大する。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の深刻な（感染）影響が、急速な葉の枯化、落葉、そして結果として生じる作物の生産の減少を引き起こす。付け加えると、前述のようなことが、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の感染が生産作物の保存中に拡大することにより、病斑が二次感染（例えば、ハイイロカビ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｐ．）による）のための侵入部位を形成することにより、生産作物（植物全体及び／又は植物の一部分）に対して表面的なダメージを導く。
【０００３】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の宿主植物は、ナノハナ（Ｂ． ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、アビシニアガラシ（Ｂ． ｃａｒｉｎａｔａ）、セイヨウアブラナ（Ｂ． ｎａｐｕｓ）、クロガラシ（Ｂ． ｎｉｇｒａ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）等の殆ど全てのアブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）と、更にはラディッシュ（Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）、並びにダイコンモドキ（Ｈｉｒｓｃｈｆｅｌｄｉａ ｉｎｃａｎａ）、アラセイトウ（Ｍａｔｔｈｉｏｌａ ｉｎｃａｎａ）、カキネガラシ（Ｓｉｓｙｍｂｒｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、及びグンバイナズナ（Ｔｈｌａｓｐｉ ａｒｖｅｎｓｅ）等のアブラナ科の草である。
【０００４】
アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）とは、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ（以前は十字花科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ））に属する植物属である。この属に属する植物は、キャベツ或いはカラシの集合体である。アブラナ属は、セイヨウアブラナ、カリフラワー、赤キャベツ、サボイキャベツ、白キャベツ、牛心キャベツ、ちりめんキャベツ、ブロッコリー、芽キャベツ、白菜、スズナ、及びポルトガルキャベツ（ケール）などの多くの重要な農業及び園芸作物を含んでいる。前記アブラナ属植物の殆ど全てが、根（カブ）、茎（スズナ）、葉（白キャベツ）、腋芽（芽キャベツ）、花卉（カリフラワー、ブロッコリー）及び種（セイヨウアブラナ）のように、食物として使用されている。白若しくは紫色の花又は明確な色若しくは形を持つ葉を有する幾つかの種（前記アブラナ属植物）は、観賞目的に栽培される。
【０００５】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の制御（抑制）には、殺菌剤を使用することが可能（有効）であるにも関わらず、認可済みの殺菌剤の数及び殺菌剤の使用が、環境上及び健康上の理由から制限されている。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の抑制に対して殺菌剤を使用することは、取り扱いのための的確な時期を決定することが難しいため、それ以上に容易なことではない。それ故、アブラナ科、特に芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を前記真菌に耐性を有するように改良することが好ましい。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に耐性を有するアブラナ科の植物は得られていない。
【非特許文献１】プニタリンガム アンド ホリデイ， デスクリプション オブ パソジェニック フンギ アンド バクテリア， シーエムアイ（コモンウェルス マイコロジカル インスティテュート） イングランド， ４６８巻， １９７５年（Ｐｕｎｉｔｈａｌｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｈｏｌｌｉｄａｙ， Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｎｇｉ ａｎｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ， ＣＭＩ （Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ） Ｅｎｇｌａｎｄ， Ｎｏ． ４６８， １９７５．）．
【非特許文献２】マツモト他， マンマリアン ゲノム， 第９巻：５３１−５３５ページ， １９９８年（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｅｎｏｍｅ， ９： ５３１−５３５， １９９８．）．
【非特許文献３】レイター， 「ＰＣＲ−ベースド マーカ システムズ」（ＤＮＡ−ベースド マーカーズ イン プランツ）， クリューワー アカデミック パブリシャーズ， 第６巻：９−２９ページ， ２００１年（Ｒｅｉｔｅｒ， ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒ ｓｙｓｔｅｍｓ， ｉｎ： ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， ｖｏｌ． ６： ９−２９， ２００１．）．
【非特許文献４】ウェイシング他， 「ディテクティング ＤＮＡ ヴァリエーション バイ モレキュラー マーカーズ」（ＤＮＡ フィンガープリンティング イン プランツ， プリンシプルズ， メソッヅ， アンド アプリケーションズ）， シーアールシー セカンドエディション， 第６巻：２１−７３ページ， ２００５年（Ｗｅｉｓｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＤＮＡ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ， ｉｎ： ＤＮＡ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， ２ｎｄ ｅｄ． ： ２１−７３， ２００５．）．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述の事情に鑑み、本発明の目的は、輪点様の病弊を引き起こす輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
この目的を達成するために、本発明は、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物であって、前記耐性遺伝子が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する単性及び優性耐性を備え、前記耐性遺伝子が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来することを特徴とすることで達成される。驚いたことには、優れた耐性が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する２種の生理種（ｐｈｙｓｉｏ´ｓ）によって提供されることにより、本発明による耐性遺伝子が発見された。これらは、オランダ国にてしばしば存在する生理種並びに西フランス地方（特にノルマンディ及びブリタニー）のカリフラワー及び中央アメリカ（特にグアテマラ）のキャベツによく見られるより伝染率の高い生理種である。
【０００８】
本発明の更に好ましい態様は、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物中の耐性遺伝子が１つ若しくはそれ以上の特有ＤＮＡマーカに連結されていることである。これらのマーカは、本発明の耐性遺伝子の存在を立証するために使用される。
【０００９】
本発明の好ましい態様は、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、最も好ましくは６つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲むことである。本発明における“エンクローズ（囲む）”とは、ＤＮＡマーカが、耐性遺伝子の両側、即ち耐性遺伝子の“アップストリーム（上流）”及び“ダウンストリーム（下流）”にあるゲノムに存在することを意味するものであると理解されたい。複数のＤＮＡマーカの存在を立証するには、ＤＮＡマーカが耐性遺伝子に連結されていること、並びに耐性遺伝子を伴った遺伝子移入が実質的に存在していることが確実である耐性遺伝子を囲むことである。
【００１０】
本発明によるＤＮＡマーカが、好ましくは、表１から選択され、前記芽キャベツ植物中のゲノム中にある前記ＤＮＡマーカの存在が、配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択されるプライマー配列を用いることで立証される。
【００１１】
本発明に関する研究では、前記関連ＤＮＡマーカが輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性を有するための遺伝子移入のための特性があることを見出した。本発明におけるＤＮＡマーカは、関連耐性遺伝子に連結され、表１に表示されている（塩基対の）同定サイズを有し、そして特有的プライマーの組み合わせを用いることによって立証される。
【００１２】
本発明の植物は、好ましくは、ロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される。
【００１３】
本発明はまた、前記植物の種、果実、及び／又は他の部位に関連する。ここで言う他の部位とは、例えば芽キャベツにおける腋芽などのように、とりわけ植物における可食部を意味するものと理解されたい。
【００１４】
本発明はまた、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を得るための栽培方法であって、前記方法は、少なくとも（ａ）輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を備える手段と、（ｂ）前記第１芽キャベツ植物と感受性第２芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とを交配させる手段と、（ｃ）１つ若しくはそれ以上の前記耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを用いることによる前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在を発見するための子孫ゲノムＤＮＡを分離する手段と、（ｄ）前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在が手段（ｃ）によって立証された芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の前記子孫（ゲノムＤＮＡ）から選択する手段とを具備している。
【００１５】
本発明の方法によれば、耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、本発明の耐性遺伝子の遺伝子移入に特有であるＤＮＡマーカを使用することによって迅速且つ簡便に提供される。
【００１６】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の病的圧力は、風、気温、空気湿度及び環境（その逆として宿主植物側からも）のような異質な自然因子によってとても変化しやすい。感染度の大きな差は、これによって表れる。更には、その兆候は、黒斑病（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）及び黒すす病（Ａ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）によって引き起こされた病弊と容易く錯覚されてしまう。本発明による方法と耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを使用することは、植物が耐性遺伝子を含んでいるかどうかを簡便に決定することが可能である。この方法では、耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物がそれ以上に、従来の育種プログラムと比べるとより速く得られる。多くのアブラナ属種は、植物が最初の１年は発育そして花をつけ、２年目は種を生産するという２年に１回というサイクルを有する。耐性遺伝子に連結されている特有ＤＮＡマーカを利用することによって、感染テストを実行する必要が無いこと並びに可能な限り選択した親世代に成長されなくてはならない植物が必要ないために、前述の過程が年周期として促進される。このように、多くの年が全てを含めた育種プログラムに蓄えられている。
【００１７】
本発明による方法における前記手段（ｄ）によって選択される植物は、感染しやすい芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とともに前記手段（ｄ）によって１回若しくはそれ以上得られる植物と、特有ＤＮＡマーカを使用した耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の子孫からその都度再度選択するといった戻し交配若しくは自家受粉のような従来ある手段に随意的に従う。前述の手段（ｄ）にて得られた植物はまた、例えば、葯及び／又はミクロ胞子培地のような当業者に知られた手法によって、ホモ接合体が作られる。
【００１８】
第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、好ましくは、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する単性及び優性耐性を与える耐性遺伝子を備えている。
【００１９】
好ましい態様は、第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から得られた耐性遺伝子を含んでいることである。
【００２０】
本発明の方法による更に好ましい態様は、手段（ｄ）における耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の選択が、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、最も好ましくは少なくとも６つである耐性遺伝子に連結されたＤＮＡマーカを含んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を選択することであり、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子に囲まれている。このことによって、植物が耐性遺伝子を伴った遺伝子移入を実質的に有するという確実性を決定することが可能である。
【００２１】
本発明によるＤＮＡマーカは、好ましくは表１から選択され、前記植物のゲノム中のＤＮＡマーカの存在が、配列番号１〜６（表２）の群から選択されるプライマーの配列を使用することで立証される。
【００２２】
本発明の特に好ましい態様は、第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州 ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来する輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性遺伝子を含んでいることである。
【００２３】
耐性遺伝子が中に注入された感染しやすい芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とは、好ましくはロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される。
【００２４】
本発明は更に、前記方法によって得られる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物と、前記植物の種及び／又はそれ以外の部位に関する。
【００２５】
本発明はまた、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を同定するための、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が連結された少なくとも１つのＤＮＡマーカの使用であって、前記ＤＮＡマーカが表１のＤＮＡマーカより選択され、前記ＤＮＡマーカが配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択される。
【００２６】
耐性遺伝子が好ましくは、受託番号ＰＴＡ−７４１３として米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ））に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来する。
【発明の効果】
【００２７】
本発明の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物製造方法によって、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に耐性を有する遺伝子を交配することで、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性と、前記芽キャベツ植物の種及び／又はそれ以外の部位に関して、輪紋病耐性を有することが可能になった。
【実施例】
【００２８】
本発明の態様を以下の実施例に基いて説明する。
【００２９】
［実施例］
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性親系統芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）（９００９８９９， カリフラワー型；受託番号ＰＴＡ−７４１３として米国菌培養収集所に蓄積されている）は、異種芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）種（スズナ、ブロッコリー、牛心キャベツ、白キャベツ、赤キャベツ、ちりめんキャベツ、サボイキャベツ、ケール、芽キャベツ及びカリフラワー）と異種交配された。ＢＣｌポピュレーション（個体群）は、感染しやすい親系統へと戻し交配した後に得られた。
【００３０】
フィールドテストは違った年に立証された。（芽キャベツ）植物素材が、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）による感染度が高く、且つ異種芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）種に一様に発生した年に収集された。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性のためのＤＮＡマーカの発達は、これらの個体群から始まった。該ポピュレーションの殆ど全てが、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性に関して１：１のスプリットを有しており、前記輪紋病耐性は、期待された単一的且つ優れた耐性を示唆する。
【００３１】
これらの個体群（牛心キャベツ、ブロッコリー及びスズナ）が、凡そ１５０個体のそれぞれに使用された。全ての個体のＤＮＡは、リーフパンチ法（１つのリーフパンチあたり大体０．３ｃｍ２）により分離（単離）された。ＢＳＡ（バルク分離分析若しくは蛋白包埋）法は、綿密に連結されたＤＮＡマーカを続いて生み出すのに用いられ、ＢＳＡ法は、ＲＡＭＰ（受容体活性変更タンパク質）法（マツモト他， マンマリアン ゲノム， 第９巻：５３１−５３５ページ， １９９８年（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｅｎｏｍｅ， ９： ５３１−５３５， １９９８．）（非特許文献２）； レイター， 「ＰＣＲ−ベースド マーカ システムズ」（ＤＮＡ−ベースド マーカーズ イン プランツ）， クリューワー アカデミック パブリシャーズ， 第６巻：９−２９ページ， ２００１年（Ｒｅｉｔｅｒ， ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒ ｓｙｓｔｅｍｓ， ｉｎ： ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， ｖｏｌ． ６： ９−２９， ２００１．）（非特許文献３）； ウェイシング他， 「ディテクティング ＤＮＡ ヴァリエーション バイ モレキュラー マーカーズ」（ＤＮＡ フィンガープリンティング イン プランツ， プリンシプルズ， メソッヅ， アンド アプリケーションズ）， シーアールシー セカンドエディション， 第６巻：２１−７３ページ， ２００５年（Ｗｅｉｓｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＤＮＡ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ， ｉｎ： ＤＮＡ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， ２ｎｄ ｅｄ． ： ２１−７３， ２００５．）（非特許文献４））から作られた。
【００３２】
ｉＳＳＲ（単純反復配列間）及びＲＡＰＤ（無作為増幅多型ＤＮＡ）プライマーが組み合わされるようにして成るＲＡＭＰ法は、識別が耐性遺伝子移入を含んだ個体と、遺伝子移入を含まない個体との間で作られるために、その中に具体的には耐性を同時分離したようなＤＮＡフラグメントを有した結合パターンを生産する。
【００３３】
ＲＡＭＰフラグメントをマッピングすることによって、近接的に連結されたＲＡＭＰマーカは、遺伝子移入によって落とすことにより、表１に記載されているような耐性遺伝子を囲むことによって同定された。ＤＮＡマーカと耐性遺伝子との間の遺伝距離は、センチモルガン（ｃＭ。１ｃＭ＝０．０２２ｃｍ）で表される。
【００３４】
マーカ分析及びＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）の反応条件
ＤＮＡマーカが生成されたＰＣＲ反応条件の概要については、以下に記す。
【００３５】
ＲＡＭＰ反応のためのＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）混合
【００３６】
ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）プログラム
【００３７】
ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）（Ｌｉｃｏｒ社の装置による）
ＲＡＭＰパターン分析には、“ジェネ リードアイアール ４２００ ＤＮＡ アナライザ（Ｇｅｎｅ ＲｅａｄＩＲ ４２００ ＤＮＡ ａｎａｌｙｚｅｒ：Ｌｉｃｏｒ社）”から製造されたものが用いられる。６．５％のアクリルアミドを最適濃度として、フラグメントが基礎ベースにまで下がって分離される。このシステムにおいて、前記フラグメントを可視化するには、ラベル化（ＩＲ染料ラベル）されたプライマーを使用する必要がある。この目的は、順方向プライマーの３分の１の量が、同じ配列を有するラベル化されたプライマーによって、置換される。
【００３８】
マーカの概要
表２に付託される本発明のプライマーを導き出す研究では、表１に付託されるＤＮＡマーカを生成（産出）するのに用いられている。
【００３９】
【表１】
【００４０】
【表２】
【００４１】
プライマーの組み合わせは、耐性遺伝子移入の特有的サイズを有したフラグメントを形成している（表１）。これらのＤＮＡマーカはそれゆえに耐性遺伝子移入によって特徴付けられる。耐性遺伝子を囲んでいるこれらのＤＮＡマーカの組み合わせは、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性遺伝子移入があるという確証を提供している。
【００４２】
［定義］
ＢＳＡ（バルク分離分析若しくは蛋白包埋分析）法：大きな分離集団における選択戦略において、同形質（表現型）若しくはＤＮＡを伴った個体群は、“プール”の中に束ねられる。ＤＮＡテクニックを伴ってこれらのプールをスクリーニングした後、マーカは、関連表現型に連結されて同定される。
【００４３】
ｃＭ−センチモルガン：マーカ間の遺伝距離のための単位であり、１００個体あたりの（遺伝）交差数を基にしている。
【００４４】
ＤＮＡマーカ：ゲノムの既知の位置にある遺伝子又はＤＮＡの別の部位に連結されているＤＮＡフラグメントであって、前記ＤＮＡフラグメントは、この遺伝子若しくは位置の遺伝率をモニターするのに使用される。
【００４５】
ゲル電気泳動：それらのサイズに基いた分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質及び関連物質）の分離方法であって、形成若しくはチャージを、電場の影響下でマトリクス（アガロース又はポリアクリルアミド）中で行う。
【００４６】
遺伝子移入：例えば、交配によって別の線に挿入された染色体フラグメントの線。
【００４７】
ＩＲ（可視光）染料ラベル：リコーイメージングシステムに用いられるＩＲラベルのことであって、７００ｎｍ又は８００ｎｍにて発光する。
【００４８】
単一遺伝子：１つの遺伝子によって決定される。
【００４９】
ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）：特有的ＤＮＡフラグメントの増殖のためのインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）式拡充方法。この合成反応は、ＤＮＡ断片とハイブリダイズした最低限のオリゴヌクレオチドを使用した後に、ポリメラーゼが連続的温度サイクルの間の隣接領域を拡充する。
【００５０】
プライマー：一本鎖らせんＤＮＡ分子の配列と相補的な短いオリゴヌクレオチド（約２０〜５０塩基対）であって、ポリメラーゼの始点として供給する。
【００５１】
ＲＡＭＰｓ（受容体活性変更タンパク質法）：異種ＤＮＡ巨大分子間での多型性が検出されることを伴った、ＲＡＰＤ及びｉＳＳＲプライマーをベースにしたＤＮＡ指紋法。
【００５２】
ＲＡＰＤ（無作為増幅多型ＤＮＡ）：無作為増幅多型ＤＮＡプライマーとは、“ランダム”配列を有した１０ｍｅｒのプライマーであって、グアニン・シトシン含有率が６０〜７０％であり、前記プライマーが自己補完型ではない。
【００５３】
ｉＳＳＲ（単純反復配列間）：単純反復配列間プライマーとは、ＳＳＲ（単純反復配列）の５´末端にて設計されたプライマーであり、２又は３のヌクレオチドの繰り返しを含むＤＮＡ断片である。
【００５４】
ＢＣ（戻し交配）：親の１つと個体との交配。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、輪点様の病弊を引き起こす輪紋病（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ。以下Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａと略す。）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ。以下Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａと略す。）植物に関する。本発明はまた、これら輪紋病耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の種子、果実、及び／又は他の植物部位に関する。本発明は更に、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の生産方法に関する。本発明はまた、特に耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の同定目的の為の輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性遺伝子に連結された特定ＤＮＡマーカの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａは、別名でＳｐｈａｅｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ， Ｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ， Ｄｏｔｈｉｄｅａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ， Ａｓｔｅｒｏｍａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ， ＰｈｙｌｌｏｓＷｔｉｃｔａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａなる学名で表される）（プニタリンガム アンド ホリデイ， デスクリプション オブ パソジェニック フンギ アンド バクテリア， シーエムアイ（コモンウェルス マイコロジカル インスティテュート） イングランド， ４６８巻， １９７５年（Ｐｕｎｉｔｈａｌｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｈｏｌｌｉｄａｙ， Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｎｇｉ ａｎｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ， ＣＭＩ （Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ） Ｅｎｇｌａｎｄ， Ｎｏ． ４６８， １９７５）：非特許文献１）は、アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物において、輪点様の病弊を引き起こす。８０年代初めに多くの場所で発生し、時として大流行した、（輪紋病）真菌は、子嚢菌類に属し、芽キャベツ植物の葉に灰褐色の病斑を形成し、ゆくゆく子嚢胞子が形成され。これらの胞子は、前記真菌の散布を意味し、そして主に風及び雨滴によって（真菌が）拡大される。前記真菌は、湿潤且つ温和な条件が一番好適な繁殖条件である。前記条件の組み合わせによって、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）が広い範囲で急速に拡大する。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の深刻な（感染）影響が、急速な葉の枯化、落葉、そして結果として生じる作物の生産の減少を引き起こす。付け加えると、前述のようなことが、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の感染が生産作物の保存中に拡大することにより、病斑が二次感染（例えば、ハイイロカビ（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｓｐｐ．）による）のための侵入部位を形成することにより、生産作物（植物全体及び／又は植物の一部分）に対して表面的なダメージを導く。
【０００３】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の宿主植物は、ナノハナ（Ｂ． ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、アビシニアガラシ（Ｂ． ｃａｒｉｎａｔａ）、セイヨウアブラナ（Ｂ． ｎａｐｕｓ）、クロガラシ（Ｂ． ｎｉｇｒａ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）等の殆ど全てのアブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）と、更にはラディッシュ（Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ）、並びにダイコンモドキ（Ｈｉｒｓｃｈｆｅｌｄｉａ ｉｎｃａｎａ）、アラセイトウ（Ｍａｔｔｈｉｏｌａ ｉｎｃａｎａ）、カキネガラシ（Ｓｉｓｙｍｂｒｉｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、及びグンバイナズナ（Ｔｈｌａｓｐｉ ａｒｖｅｎｓｅ）等のアブラナ科の草である。
【０００４】
アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）とは、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ（以前は十字花科（Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ））に属する植物属である。この属に属する植物は、キャベツ或いはカラシの集合体である。アブラナ属は、セイヨウアブラナ、カリフラワー、赤キャベツ、サボイキャベツ、白キャベツ、牛心キャベツ、ちりめんキャベツ、ブロッコリー、芽キャベツ、白菜、スズナ、及びポルトガルキャベツ（ケール）などの多くの重要な農業及び園芸作物を含んでいる。前記アブラナ属植物の殆ど全てが、根（カブ）、茎（スズナ）、葉（白キャベツ）、腋芽（芽キャベツ）、花卉（カリフラワー、ブロッコリー）及び種（セイヨウアブラナ）のように、食物として使用されている。白若しくは紫色の花又は明確な色若しくは形を持つ葉を有する幾つかの種（前記アブラナ属植物）は、観賞目的に栽培される。
【０００５】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の制御（抑制）には、殺菌剤を使用することが可能（有効）であるにも関わらず、認可済みの殺菌剤の数及び殺菌剤の使用が、環境上及び健康上の理由から制限されている。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の抑制に対して殺菌剤を使用することは、取り扱いのための的確な時期を決定することが難しいため、それ以上に容易なことではない。それ故、アブラナ科、特に芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を前記真菌に耐性を有するように改良することが好ましい。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に耐性を有するアブラナ科の植物は得られていない。
【非特許文献１】プニタリンガム アンド ホリデイ， デスクリプション オブ パソジェニック フンギ アンド バクテリア， シーエムアイ（コモンウェルス マイコロジカル インスティテュート） イングランド， ４６８巻， １９７５年（Ｐｕｎｉｔｈａｌｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｈｏｌｌｉｄａｙ， Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｎｇｉ ａｎｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ， ＣＭＩ （Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ） Ｅｎｇｌａｎｄ， Ｎｏ． ４６８， １９７５．）．
【非特許文献２】マツモト他， マンマリアン ゲノム， 第９巻：５３１−５３５ページ， １９９８年（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｅｎｏｍｅ， ９： ５３１−５３５， １９９８．）．
【非特許文献３】レイター， 「ＰＣＲ−ベースド マーカ システムズ」（ＤＮＡ−ベースド マーカーズ イン プランツ）， クリューワー アカデミック パブリシャーズ， 第６巻：９−２９ページ， ２００１年（Ｒｅｉｔｅｒ， ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒ ｓｙｓｔｅｍｓ， ｉｎ： ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， ｖｏｌ． ６： ９−２９， ２００１．）．
【非特許文献４】ウェイシング他， 「ディテクティング ＤＮＡ ヴァリエーション バイ モレキュラー マーカーズ」（ＤＮＡ フィンガープリンティング イン プランツ， プリンシプルズ， メソッヅ， アンド アプリケーションズ）， シーアールシー セカンドエディション， 第６巻：２１−７３ページ， ２００５年（Ｗｅｉｓｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＤＮＡ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ， ｉｎ： ＤＮＡ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， ２ｎｄ ｅｄ． ： ２１−７３， ２００５．）．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述の事情に鑑み、本発明の目的は、輪点様の病弊を引き起こす輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
この目的を達成するために、本発明は、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物であって、前記耐性遺伝子が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する単性及び優性耐性を備え、前記耐性遺伝子が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来することを特徴とすることで達成される。驚いたことには、優れた耐性が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する２種の生理種（ｐｈｙｓｉｏ´ｓ）によって提供されることにより、本発明による耐性遺伝子が発見された。これらは、オランダ国にてしばしば存在する生理種並びに西フランス地方（特にノルマンディ及びブリタニー）のカリフラワー及び中央アメリカ（特にグアテマラ）のキャベツによく見られるより伝染率の高い生理種である。
【０００８】
本発明の更に好ましい態様は、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物中の耐性遺伝子が１つ若しくはそれ以上の特有ＤＮＡマーカに連結されていることである。これらのマーカは、本発明の耐性遺伝子の存在を立証するために使用される。
【０００９】
本発明の好ましい態様は、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、最も好ましくは６つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲むことである。本発明における“エンクローズ（囲む）”とは、ＤＮＡマーカが、耐性遺伝子の両側、即ち耐性遺伝子の“アップストリーム（上流）”及び“ダウンストリーム（下流）”にあるゲノムに存在することを意味するものであると理解されたい。複数のＤＮＡマーカの存在を立証するには、ＤＮＡマーカが耐性遺伝子に連結されていること、並びに耐性遺伝子を伴った遺伝子移入が実質的に存在していることが確実である耐性遺伝子を囲むことである。
【００１０】
本発明によるＤＮＡマーカが、好ましくは、表１から選択され、前記芽キャベツ植物中のゲノム中にある前記ＤＮＡマーカの存在が、配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択されるプライマー配列を用いることで立証される。
【００１１】
本発明に関する研究では、前記関連ＤＮＡマーカが輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性を有するための遺伝子移入のための特性があることを見出した。本発明におけるＤＮＡマーカは、関連耐性遺伝子に連結され、表１に表示されている（塩基対の）同定サイズを有し、そして特有的プライマーの組み合わせを用いることによって立証される。
【００１２】
本発明の植物は、好ましくは、ロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される。
【００１３】
本発明はまた、前記植物の種、果実、及び／又は他の部位に関連する。ここで言う他の部位とは、例えば芽キャベツにおける腋芽などのように、とりわけ植物における可食部を意味するものと理解されたい。
【００１４】
本発明はまた、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を得るための栽培方法であって、前記方法は、少なくとも（ａ）輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を備える手段と、（ｂ）前記第１芽キャベツ植物と感受性第２芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とを交配させる手段と、（ｃ）１つ若しくはそれ以上の前記耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを用いることによる前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在を発見するための子孫ゲノムＤＮＡを分離する手段と、（ｄ）前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在が手段（ｃ）によって立証された芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の前記子孫（ゲノムＤＮＡ）から選択する手段とを具備している。
【００１５】
本発明の方法によれば、耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、本発明の耐性遺伝子の遺伝子移入に特有であるＤＮＡマーカを使用することによって迅速且つ簡便に提供される。
【００１６】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）の病的圧力は、風、気温、空気湿度及び環境（その逆として宿主植物側からも）のような異質な自然因子によってとても変化しやすい。感染度の大きな差は、これによって表れる。更には、その兆候は、黒斑病（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）及び黒すす病（Ａ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）によって引き起こされた病弊と容易く錯覚されてしまう。本発明による方法と耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを使用することは、植物が耐性遺伝子を含んでいるかどうかを簡便に決定することが可能である。この方法では、耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物がそれ以上に、従来の育種プログラムと比べるとより速く得られる。多くのアブラナ属種は、植物が最初の１年は発育そして花をつけ、２年目は種を生産するという２年に１回というサイクルを有する。耐性遺伝子に連結されている特有ＤＮＡマーカを利用することによって、感染テストを実行する必要が無いこと並びに可能な限り選択した親世代に成長されなくてはならない植物が必要ないために、前述の過程が年周期として促進される。このように、多くの年が全てを含めた育種プログラムに蓄えられている。
【００１７】
本発明による方法における前記手段（ｄ）によって選択される植物は、感染しやすい芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とともに前記手段（ｄ）によって１回若しくはそれ以上得られる植物と、特有ＤＮＡマーカを使用した耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の子孫からその都度再度選択するといった戻し交配若しくは自家受粉のような従来ある手段に随意的に従う。前述の手段（ｄ）にて得られた植物はまた、例えば、葯及び／又はミクロ胞子培地のような当業者に知られた手法によって、ホモ接合体が作られる。
【００１８】
第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、好ましくは、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する単性及び優性耐性を与える耐性遺伝子を備えている。
【００１９】
好ましい態様は、第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から得られた耐性遺伝子を含んでいることである。
【００２０】
本発明の方法による更に好ましい態様は、手段（ｄ）における耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の選択が、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも４つ、より好ましくは少なくとも５つ、最も好ましくは少なくとも６つである耐性遺伝子に連結されたＤＮＡマーカを含んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を選択することであり、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子に囲まれている。このことによって、植物が耐性遺伝子を伴った遺伝子移入を実質的に有するという確実性を決定することが可能である。
【００２１】
本発明によるＤＮＡマーカは、好ましくは表１から選択され、前記植物のゲノム中のＤＮＡマーカの存在が、配列番号１〜６（表２）の群から選択されるプライマーの配列を使用することで立証される。
【００２２】
本発明の特に好ましい態様は、第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州 ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来する輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性遺伝子を含んでいることである。
【００２３】
耐性遺伝子が中に注入された感染しやすい芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とは、好ましくはロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される。
【００２４】
本発明は更に、前記方法によって得られる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物と、前記植物の種及び／又はそれ以外の部位に関する。
【００２５】
本発明はまた、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を同定するための、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が連結された少なくとも１つのＤＮＡマーカの使用であって、前記ＤＮＡマーカが表１のＤＮＡマーカより選択され、前記ＤＮＡマーカが配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択される。
【００２６】
耐性遺伝子が好ましくは、受託番号ＰＴＡ−７４１３として米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ））に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来する。
【発明の効果】
【００２７】
本発明の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物製造方法によって、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に耐性を有する遺伝子を交配することで、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物が、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性と、前記芽キャベツ植物の種及び／又はそれ以外の部位に関して、輪紋病耐性を有することが可能になった。
【実施例】
【００２８】
本発明の態様を以下の実施例に基いて説明する。
【００２９】
［実施例］
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性親系統芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）（９００９８９９， カリフラワー型；受託番号ＰＴＡ−７４１３として米国菌培養収集所に蓄積されている）は、異種芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）種（スズナ、ブロッコリー、牛心キャベツ、白キャベツ、赤キャベツ、ちりめんキャベツ、サボイキャベツ、ケール、芽キャベツ及びカリフラワー）と異種交配された。ＢＣｌポピュレーション（個体群）は、感染しやすい親系統へと戻し交配した後に得られた。
【００３０】
フィールドテストは違った年に立証された。（芽キャベツ）植物素材が、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）による感染度が高く、且つ異種芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）種に一様に発生した年に収集された。輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性のためのＤＮＡマーカの発達は、これらの個体群から始まった。該ポピュレーションの殆ど全てが、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性に関して１：１のスプリットを有しており、前記輪紋病耐性は、期待された単一的且つ優れた耐性を示唆する。
【００３１】
これらの個体群（牛心キャベツ、ブロッコリー及びスズナ）が、凡そ１５０個体のそれぞれに使用された。全ての個体のＤＮＡは、リーフパンチ法（１つのリーフパンチあたり大体０．３ｃｍ２）により分離（単離）された。ＢＳＡ（バルク分離分析若しくは蛋白包埋）法は、綿密に連結されたＤＮＡマーカを続いて生み出すのに用いられ、ＢＳＡ法は、ＲＡＭＰ（受容体活性変更タンパク質）法（マツモト他， マンマリアン ゲノム， 第９巻：５３１−５３５ページ， １９９８年（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｅｎｏｍｅ， ９： ５３１−５３５， １９９８．）（非特許文献２）； レイター， 「ＰＣＲ−ベースド マーカ システムズ」（ＤＮＡ−ベースド マーカーズ イン プランツ）， クリューワー アカデミック パブリシャーズ， 第６巻：９−２９ページ， ２００１年（Ｒｅｉｔｅｒ， ＰＣＲ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒ ｓｙｓｔｅｍｓ， ｉｎ： ＤＮＡ−ｂａｓｅｄ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， ｖｏｌ． ６： ９−２９， ２００１．）（非特許文献３）； ウェイシング他， 「ディテクティング ＤＮＡ ヴァリエーション バイ モレキュラー マーカーズ」（ＤＮＡ フィンガープリンティング イン プランツ， プリンシプルズ， メソッヅ， アンド アプリケーションズ）， シーアールシー セカンドエディション， 第６巻：２１−７３ページ， ２００５年（Ｗｅｉｓｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＤＮＡ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ， ｉｎ： ＤＮＡ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ ｉｎ ｐｌａｎｔｓ， ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， ２ｎｄ ｅｄ． ： ２１−７３， ２００５．）（非特許文献４））から作られた。
【００３２】
ｉＳＳＲ（単純反復配列間）及びＲＡＰＤ（無作為増幅多型ＤＮＡ）プライマーが組み合わされるようにして成るＲＡＭＰ法は、識別が耐性遺伝子移入を含んだ個体と、遺伝子移入を含まない個体との間で作られるために、その中に具体的には耐性を同時分離したようなＤＮＡフラグメントを有した結合パターンを生産する。
【００３３】
ＲＡＭＰフラグメントをマッピングすることによって、近接的に連結されたＲＡＭＰマーカは、遺伝子移入によって落とすことにより、表１に記載されているような耐性遺伝子を囲むことによって同定された。ＤＮＡマーカと耐性遺伝子との間の遺伝距離は、センチモルガン（ｃＭ。１ｃＭ＝０．０２２ｃｍ）で表される。
【００３４】
マーカ分析及びＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）の反応条件
ＤＮＡマーカが生成されたＰＣＲ反応条件の概要については、以下に記す。
【００３５】
ＲＡＭＰ反応のためのＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）混合
【００３６】
ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）プログラム
【００３７】
ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）（Ｌｉｃｏｒ社の装置による）
ＲＡＭＰパターン分析には、“ジェネ リードアイアール ４２００ ＤＮＡ アナライザ（Ｇｅｎｅ ＲｅａｄＩＲ ４２００ ＤＮＡ ａｎａｌｙｚｅｒ：Ｌｉｃｏｒ社）”から製造されたものが用いられる。６．５％のアクリルアミドを最適濃度として、フラグメントが基礎ベースにまで下がって分離される。このシステムにおいて、前記フラグメントを可視化するには、ラベル化（ＩＲ染料ラベル）されたプライマーを使用する必要がある。この目的は、順方向プライマーの３分の１の量が、同じ配列を有するラベル化されたプライマーによって、置換される。
【００３８】
マーカの概要
表２に付託される本発明のプライマーを導き出す研究では、表１に付託されるＤＮＡマーカを生成（産出）するのに用いられている。
【００３９】
【表１】
【００４０】
【表２】
【００４１】
プライマーの組み合わせは、耐性遺伝子移入の特有的サイズを有したフラグメントを形成している（表１）。これらのＤＮＡマーカはそれゆえに耐性遺伝子移入によって特徴付けられる。耐性遺伝子を囲んでいるこれらのＤＮＡマーカの組み合わせは、輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性遺伝子移入があるという確証を提供している。
【００４２】
［定義］
ＢＳＡ（バルク分離分析若しくは蛋白包埋分析）法：大きな分離集団における選択戦略において、同形質（表現型）若しくはＤＮＡを伴った個体群は、“プール”の中に束ねられる。ＤＮＡテクニックを伴ってこれらのプールをスクリーニングした後、マーカは、関連表現型に連結されて同定される。
【００４３】
ｃＭ−センチモルガン：マーカ間の遺伝距離のための単位であり、１００個体あたりの（遺伝）交差数を基にしている。
【００４４】
ＤＮＡマーカ：ゲノムの既知の位置にある遺伝子又はＤＮＡの別の部位に連結されているＤＮＡフラグメントであって、前記ＤＮＡフラグメントは、この遺伝子若しくは位置の遺伝率をモニターするのに使用される。
【００４５】
ゲル電気泳動：それらのサイズに基いた分子（ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質及び関連物質）の分離方法であって、形成若しくはチャージを、電場の影響下でマトリクス（アガロース又はポリアクリルアミド）中で行う。
【００４６】
遺伝子移入：例えば、交配によって別の線に挿入された染色体フラグメントの線。
【００４７】
ＩＲ（可視光）染料ラベル：リコーイメージングシステムに用いられるＩＲラベルのことであって、７００ｎｍ又は８００ｎｍにて発光する。
【００４８】
単一遺伝子：１つの遺伝子によって決定される。
【００４９】
ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）：特有的ＤＮＡフラグメントの増殖のためのインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）式拡充方法。この合成反応は、ＤＮＡ断片とハイブリダイズした最低限のオリゴヌクレオチドを使用した後に、ポリメラーゼが連続的温度サイクルの間の隣接領域を拡充する。
【００５０】
プライマー：一本鎖らせんＤＮＡ分子の配列と相補的な短いオリゴヌクレオチド（約２０〜５０塩基対）であって、ポリメラーゼの始点として供給する。
【００５１】
ＲＡＭＰｓ（受容体活性変更タンパク質法）：異種ＤＮＡ巨大分子間での多型性が検出されることを伴った、ＲＡＰＤ及びｉＳＳＲプライマーをベースにしたＤＮＡ指紋法。
【００５２】
ＲＡＰＤ（無作為増幅多型ＤＮＡ）：無作為増幅多型ＤＮＡプライマーとは、“ランダム”配列を有した１０ｍｅｒのプライマーであって、グアニン・シトシン含有率が６０〜７０％であり、前記プライマーが自己補完型ではない。
【００５３】
ｉＳＳＲ（単純反復配列間）：単純反復配列間プライマーとは、ＳＳＲ（単純反復配列）の５´末端にて設計されたプライマーであり、２又は３のヌクレオチドの繰り返しを含むＤＮＡ断片である。
【００５４】
ＢＣ（戻し交配）：親の１つと個体との交配。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物であって、前記耐性遺伝子が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対して単性及び優性耐性を有し、前記耐性遺伝子が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来することを特徴とする芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項２】
前記耐性遺伝子が少なくとも１つの特有ＤＮＡマーカに連結されている請求項１に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項３】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも２つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項２に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項４】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも３つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項３に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項５】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも４つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項４に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項６】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも５つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項５に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項７】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも６つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項６に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項８】
前記ＤＮＡマーカが表１から選択され、前記芽キャベツ植物中のゲノムにある前記ＤＮＡマーカの存在が、配列番号１〜６（表２）を含むグループから選択されるプライマー配列を使用することにより立証される請求項１乃至７のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項９】
前記芽キャベツ植物が、ロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される請求項１乃至８のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の種、果実及び／又は他の部位。
【請求項１１】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法であって、
（ａ）輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を備える手段と、
（ｂ）前記第１芽キャベツ植物と感受性第２芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とを交配させる手段と、
（ｃ）１つ若しくはそれ以上の前記耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを用いることによる前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在を発見するための子孫ゲノムＤＮＡを分離する手段と、
（ｄ）前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在が手段（ｃ）によって立証された芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の前記子孫ゲノムＤＮＡから選択する手段とを具備することを特徴とする芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１２】
前記耐性遺伝子が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対して単性及び優性耐性を有している請求項１１に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１３】
前記耐性遺伝子が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来する請求項１１又は１２に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１４】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも２つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１１乃至１３のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１５】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも３つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１４に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１６】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも４つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１５に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１７】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも５つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１６に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１８】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも６つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１１に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１９】
前記ＤＮＡマーカが表１に記載のＤＮＡマーカより選択され、前記ＤＮＡマーカが配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択されたプライマー配列により立証される請求項１１乃至１８に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項２０】
前記芽キャベツ植物が、ロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される請求項１１乃至１９のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項２１】
請求項１１乃至２０のいずれかに記載の芽キャベツ植物の製造方法によって得られる輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項２２】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の同定のために、輪紋病（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子に連結された少なくとも一つのＤＮＡマーカの使用であって、前記ＤＮＡマーカが表１に記載のＤＮＡマーカより選択され、前記ＤＮＡマーカが配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択されたプライマー配列により立証されることを特徴とする芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の使用。
【請求項１】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物であって、前記耐性遺伝子が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対して単性及び優性耐性を有し、前記耐性遺伝子が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来することを特徴とする芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項２】
前記耐性遺伝子が少なくとも１つの特有ＤＮＡマーカに連結されている請求項１に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項３】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも２つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項２に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項４】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも３つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項３に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項５】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも４つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項４に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項６】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも５つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項５に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項７】
前記輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子が少なくとも６つのＤＮＡマーカに連結されており、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる請求項６に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項８】
前記ＤＮＡマーカが表１から選択され、前記芽キャベツ植物中のゲノムにある前記ＤＮＡマーカの存在が、配列番号１〜６（表２）を含むグループから選択されるプライマー配列を使用することにより立証される請求項１乃至７のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項９】
前記芽キャベツ植物が、ロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される請求項１乃至８のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の種、果実及び／又は他の部位。
【請求項１１】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法であって、
（ａ）輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子を有する第１芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物を備える手段と、
（ｂ）前記第１芽キャベツ植物と感受性第２芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物とを交配させる手段と、
（ｃ）１つ若しくはそれ以上の前記耐性遺伝子に連結された特有ＤＮＡマーカを用いることによる前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在を発見するための子孫ゲノムＤＮＡを分離する手段と、
（ｄ）前記耐性遺伝子への遺伝子移入の存在が手段（ｃ）によって立証された芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の前記子孫ゲノムＤＮＡから選択する手段とを具備することを特徴とする芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１２】
前記耐性遺伝子が輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対して単性及び優性耐性を有している請求項１１に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１３】
前記耐性遺伝子が、受託番号ＰＴＡ−７４１３として２００６年３月１日に米国菌培養収集所（エーティーシーシー（ＡＴＣＣ）， パテント デポジトリー（Ｐａｔｅｎｔ Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）， １０８０１， ユニバーシティ バウルバード（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ）， マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ）， バージニア州（ＶＡ） ２０１１０， 米国）に蓄積された種から成る、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物に由来する請求項１１又は１２に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１４】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも２つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１１乃至１３のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１５】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも３つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１４に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１６】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも４つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１５に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１７】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも５つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１６に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１８】
手段（ｄ）における前記耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物は、前記耐性遺伝子に連結されている少なくとも６つのＤＮＡマーカを含み、前記ＤＮＡマーカが前記耐性遺伝子を囲んでいる芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物から選択されて成る請求項１１に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項１９】
前記ＤＮＡマーカが表１に記載のＤＮＡマーカより選択され、前記ＤＮＡマーカが配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択されたプライマー配列により立証される請求項１１乃至１８に記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項２０】
前記芽キャベツ植物が、ロマネスコ・カリフラワー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ｃｙｍｏｓａ）、スプラウティング・ブロッコリー（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ． ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ）、芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｇｅｍｎｉｆｅｒａ）、白キャベツ若しくは牛心キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ａｌｂａ）、赤キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｒｕｂｒａ）、サボイキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ． ｓａｂａｕｄａ）、ちりめんキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｓａｂｅｌｌｉｃａ）、スズナ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ． ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ． ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）、及びポルトガルキャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ． ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ． ｃｏｓｔａｔａ）から成るグループより選択される請求項１１乃至１９のいずれかに記載の芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の製造方法。
【請求項２１】
請求項１１乃至２０のいずれかに記載の芽キャベツ植物の製造方法によって得られる輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）耐性芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物。
【請求項２２】
輪紋病（Ｍ． ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性を有する芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の同定のために、輪紋病（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）に対する耐性遺伝子に連結された少なくとも一つのＤＮＡマーカの使用であって、前記ＤＮＡマーカが表１に記載のＤＮＡマーカより選択され、前記ＤＮＡマーカが配列番号１〜６（表２）から成るグループから選択されたプライマー配列により立証されることを特徴とする芽キャベツ（Ｂ． ｏｌｅｒａｃｅａ）植物の使用。
【公表番号】特表２００９−５３３０３７（Ｐ２００９−５３３０３７Ａ）
【公表日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０４７５３（Ｐ２００９−５０４７５３）
【出願日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５３５７０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１６０９６
【国際公開日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【出願人】（５０８２９８２６０）ベーヨ ザーデン ビー ブイ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＢＥＪＯ ＺＡＤＥＮ Ｂ．Ｖ．
【住所又は居所原語表記】Ｔｒａｍｂａａｎ １，ＮＬ−１７４９ ＣＺ Ｗａｒｍｅｎｈｕｉｚｅｎ （ＮＬ）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５３５７０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１６０９６
【国際公開日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【出願人】（５０８２９８２６０）ベーヨ ザーデン ビー ブイ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＢＥＪＯ ＺＡＤＥＮ Ｂ．Ｖ．
【住所又は居所原語表記】Ｔｒａｍｂａａｎ １，ＮＬ−１７４９ ＣＺ Ｗａｒｍｅｎｈｕｉｚｅｎ （ＮＬ）
【Ｆターム（参考）】
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