還元型補酵素Ｑ含有組成物
自動酸化しやすく親油性であることにより工業的利用に供されてこなかった還元型補酵素Ｑを、安定に維持でき、同時に、水へ可溶な組成物として提供する。還元型補酵素Ｑをシクロデキストリンと共に接触または混合することにより包接化合物を得ることで、あるいは、抗酸化剤と還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンを適当な条件で混合することで、冷蔵または室温においても長期保存が可能で、かつ、水へ可溶な還元型補酵素Ｑを含有する組成物を調整できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、一般的に多用される天然乳化剤または合成乳化剤やリポソーム等を用いることなく、水への可溶性または分散性に優れ、保存安定性に優れた還元型補酵素Ｑ含有組成物を、食品、機能性食品、医薬品または医薬部外品の素材として提供することに関する。
【背景技術】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分であり、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として知られている。補酵素Ｑは、ミトコンドリア内において酸化と還元を繰り返すことで、電子伝達系における伝達成分としての機能を担っている以外にも、還元型補酵素Ｑは抗酸化作用をもつことが知られている。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ、補酵素Ｑ１０が主成分であり、生体内においては通常４０〜９０％程度が還元型として存在している。補酵素Ｑの生理的作用としては、ミトコンドリア賦活作用によるエネルギー生産の活性化、心機能の活性化、細胞膜の安定化効果、抗酸化作用による細胞の保護効果などが挙げられている。
補酵素Ｑは種々の用途での使用が知られており、例えば、酸化型補酵素Ｑ１０はその心臓に対する効果から鬱血性心不全薬として用いられている。医薬用途以外でも、ビタミン類同様、栄養剤や栄養補助剤として経口的にサプリメントやドリンク剤等の形態により利用されている。
近年、血中の酸化ストレスの増加による疾患の増悪が種々報告されている。代表的なものとして、動脈硬化、糖尿病合併症などが挙げられる。これらの疾患では、血液中に存在する種々の酸化ストレスによる脂質変性などにより、疾患の発生あるいは増悪が起こっている。このような酸化ストレスによる影響を減少させるためには抗酸化剤の投与による生体の抗酸化能の賦活が有効である。脂質過酸化の抑制により有効であると考えられる脂溶性の抗酸化物質の代表的な化合物であるビタミンＥは抗酸化物質として疾患の予防などに幅広く用いられている。一方、ビタミンＥの抗酸化活性を充分に発揮させるためには還元型補酵素Ｑ１０の共存が重要であることが報告され（Ｂｏｗｒｙ等、１９９３、Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１１５、６０２９−６０４４）、脂溶性抗酸化物質としてビタミンＥと共に、補酵素Ｑの重要性が明らかになりつつある。
還元型補酵素Ｑはそれ自身でも強い抗酸化作用を有するため、可溶化して血中に充分量の還元型補酵素Ｑを送り込むことにより、血中の抗酸化活性を効果的に増加させることが可能となる。
血中の抗酸化活性を増加させることは、虚血再還流時の血管障害、動脈硬化の再狭窄防止、脳梗塞後の血管障害の防止、動脈効果の予防、糖尿病の合併症の予防など活性酸素種によって増悪が示唆されている多くの疾患に対して幅広い有用性が考えられる。
さらに、新たな補給形態として点滴により体内へ送りこむことにより、経口による摂取ができない重症患者あるいは脳疾患患者への補酵素Ｑの供給が可能となる。このように補酵素Ｑを可溶化することは多くのメリットを生み出すことが予想される。
補酵素Ｑには酸化型と還元型が知られており、酸化型補酵素Ｑ１０（ユビデカレノンまたはユビキノンとも呼ばれる）の可溶化方法に関しては、従来から数多くの研究が行われてきた。酸化型補酵素Ｑ１０の可溶化方法としては、リポソームによる被覆、界面活性剤あるいは油脂による懸濁など種々の方法等が報告されている（例えば、特開平５−１８６３４０、特開平７−６９８７４、特表２０００−５１０８４１）。
酸化型補酵素Ｑ１０が抗酸化活性を示すためには還元酵素などによって還元型補酵素Ｑ１０に変換される必要がある。経口的に摂取された酸化型補酵素Ｑ１０は、生体内におけるＮＡＤＰＨ−ＣｏＱ還元酵素、リポアミド脱水素酵素、チオレドキシン還元酵素等により、還元型補酵素Ｑ１０へと変換され抗酸化活性を発揮するものと推察されている。しかし、加齢とともに、生体内の還元酵素等による、還元酸化型補酵素Ｑ１０の還元型補酵素Ｑ１０への還元能力の低下も懸念されており、老齢者や酸化型補酵素Ｑ１０の還元能力低下者に対しては、生体外からの還元型補酵素Ｑ１０の投与は意義がある。
還元型補酵素Ｑ１０は、それ自体が抗酸化活性を有することから、還元型補酵素Ｑ１０の投与は前述のような疾患に対する有用性がおおいに期待できる物質であるが、物性としては空気に触れると自動酸化が進む極めて不安定な物質であり、加えて、水への溶解性も極めて悪いために工業的な利用にはこれまで供し得なかった。
還元型補酵素Ｑ１０は、リポソーム被覆体を利用した製剤として酸化還元酵素などの研究のために作製したという研究報告はあるが（Ｋｉｓｈｉ等、１９９９、ＢｉｏＦａｃｔｏｒｓ、１０、１３１−１３８）、用いられているリポソームは実験毎の用時調製例であり、安定的に還元型補酵素Ｑを維持できる可溶化方法については全く知られていなかった。
以前に我々は鋭意研究の結果、還元型補酵素Ｑ１０を安定的に維持できる水可溶化液の作製および保存方法を明らかにした（特開２００３−０２６６２５、特開２００３−１１９１２６）。この発明により、有用性の高い還元型補酵素Ｑ水可溶化液を実用に供することが可能になった。本発明は、以前の発明をさらに発展させ、還元型補酵素Ｑ１０を水可溶化物とすると同時に保存安定性を更に向上させることを目的としたものである。
【発明の開示】
本発明の課題は、水への溶解または分散性が劣り、かつ、極めて不安定な化合物である還元型補酵素Ｑを含有する、水への可溶性または分散性が優れ、室温で長期保存が可能となる組成物を、提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究した結果、還元型補酵素Ｑが物性的に極めて不安定であり水に対してほとんど不溶性であるにもかかわらず、還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンを含有せしめることによって、保存安定性が飛躍的に向上し、同時に、水への分散性が優れた組成物として得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒及び一般式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを含む組成物であって、還元型補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ）組成物に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする還元型補酵素Ｑの可溶化方法に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、シクロデキストリン、極性溶媒、および還元型補酵素Ｑを含む組成物であって、還元型補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている組成物の製造方法に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの安定化方法に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの酸化を防止する方法に関する。
まず、本発明におけるシクロデキストリン、極性溶媒及び還元型補酵素Ｑを含有する組成物であって、該還元型補酵素Ｑが組成物中に可溶化されている組成物について説明する。本明細書において可溶化とは、補酵素Ｑが上記組成物中に溶解され、そして該補酵素Ｑの全部または一部がシクロデキストリンに包接されていることをいう。上記組成物は、組成物に溶解しなかったが分散されている補酵素Ｑを含んでもよい。ここにいう分散とは、以下に記載する試験によって、該組成物中の補酵素Ｑが浮上または沈殿しないことをいう。ここにいう包接とは、補酵素Ｑを含む該組成物が水に溶解するよう組成物を構成している分子が会合している状態をいう。
還元型補酵素Ｑが上記組成物中に可溶化されているか否かは、以下の試験によって判定できる。該組成物１ｇを水５００ｍｌに懸濁し、２０℃にて２４時間経過後、目視により確認した場合、均一に分散されていることを確認できたときは可溶化されていると判断する。還元型補酵素Ｑが、シクロデキストリンに包接されているか否かは、以下の試験によって判定できる。該組成物１ｇを水５００ｍｌに懸濁し、２０℃にて２４時間経過後、目視により確認した場合、均一に分散されており、かつ、透明の溶液状態を確認できたときを包接されていると判断する
補酵素Ｑは、下記式（１）；
（式中、ｎは１〜１２の整数を表す）および下記式（２）；
（式中、ｎは１〜１２の整数を表す）で表され、式（１）は還元型補酵素Ｑを表し、式（２）は酸化型補酵素Ｑを表す。還元型補酵素Ｑは結晶性でも、非結晶性であってもよい。
本発明における上記組成物において、酸化型補酵素Ｑを含んでもよい。酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの両者を含有する場合、補酵素Ｑ全量（酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの総量）に対して還元型補酵素Ｑを５０重量％以上含有するのが好ましく、７５重量％以上含有するのがより好ましい。
上記還元型補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により補酵素Ｑを得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ区分を濃縮する方法などを採用することが出来る。この場合には、必要に応じて上記補酵素Ｑに対し、水素化ほう素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム（ハイドロサルファイトナトリウム）等の一般的な還元剤を添加し、常法により上記補酵素Ｑ中に含まれる酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑとした後にクロマトグラフィーによる濃縮を行っても良い。また、既存の高純度補酵素Ｑに上記還元剤を作用させる方法によっても得ることが出来る。
本発明で用いる還元型補酵素Ｑは、前記式（１）および（２）で表されるように、側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来るが、なかでも側鎖繰り返し単位が１０のもの、すなわち還元型補酵素Ｑ１０が特に好適に使用できる。
シクロデキストリンとしては、特に限定されないが、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等を使用することができる。好ましくは、α−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンから選択される一種が用いられる。更に、好ましくは、γ−シクロデキストリンである。
含有するシクロデキストリンの比率については、還元型補酵素Ｑ、モルに対して０．１モル〜１００モルが好ましく、０．２〜２０モルがより好ましい。
ここにいう極性溶媒とは、水またはアルコール類をいう。含有する極性溶媒としては、特に制限されないが、極性溶媒としては、水、エタノール等のアルコール類、があげられる。これらは、単独または混合して用いてもよい。なかでも、水とエタノールの混合液が好ましく用いられ、水がより好ましい。
還元型補酵素Ｑと極性溶媒の比率については特に制限はないが、通常、極性溶媒中の還元型補酵素Ｑの割合が、溶媒に対して０．００１〜５００重量％の範囲で使用される。
本発明における還元型補酵素Ｑの可溶化組成物は、抗酸化物質を含有することができる。抗酸化物質としては、抗酸化活性を示すものであれば如何なる化合物でも良いが、例えば、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、グルタチオン、還元型グルタチオン、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、Ｌ−カルニチン、リコペン、リボフラビン、クルクミノイド、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、ＰＱＱ（ピロロキノリンキノン）、から選択される一種または二種以上の混合物が好ましく、更には、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体から選択される一種または二種以上の混合物がより好ましく用いられる。含有する抗酸化物質は、還元型補酵素Ｑ、１モルに対して０．０１モル以上１０００モル以下が好ましく０．１モル以上１００モル以下がより好ましい。
次に、本発明による、還元型補酵素Ｑの可溶化方法について説明する。可溶化方法としては、例えば、還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンを、適当な極性溶媒中で、接触する、または混合する方法があげられる。接触または混合することで、包接化合物として得ることができる。接触するまたは混合するときに、原料を強く攪拌することが、包接化合物を得るために必要な時間を短縮する観点から好ましい。これは、還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンの十分な接触を確保するためである。ここにいう強く攪拌する条件の例は、室温（約２０℃）下、ホモミキサー（ポリトロＰＴ２１００）により２００００ｒｐｍで１０分処理である。
極性溶媒としては前記組成物と同じ物、例えば、水、エタノール等のアルコール類、があげられ、これらは混合して用いてもよい。水とエタノール類の混合物が好ましく、水がさらに好ましい。還元型補酵素Ｑは、そのまま用いてもよいし、非極性溶媒あるいは油脂に溶解させたものを用いることができる。
非極性溶媒としては例えば、ヘキサン、エーテル、油脂を用いることができる。油脂としては、食用に供することができることから、オリーブオイル、シソ油、菜種油、米糠オイル、大豆油および魚油等が好ましい。これらは混合して用いてもよい。また、シクロデキストリンは、極性溶媒に溶解させたものを用いてもよいし、そのまま用いても良い。
還元型補酵素Ｑとシクロデキストリン、極性溶媒を混合する順序としては特に制限されないが、極性溶媒にシクロデキストリンを溶解させ、次いで還元型補酵素Ｑを該溶解液に添加して、接触、混合させる順序が好ましく、極性溶媒にシクロデキストリンを溶解させると同時に還元型補酵素Ｑを加えて接触、混合させる手順がより好ましい。これらの手順により、還元型補酵素Ｑは、シクロデキストリンによって包接され、包接化合物が生成される。これにより、水へ可溶な、または水へ均一に分散する還元型補酵素Ｑの可溶化組成物が得られる。
還元型補酵素Ｑとシクロデキストリン、極性溶媒、抗酸化物質を混合する順序に特に制限はない。例えば、極性溶媒に抗酸化物質を溶解させ、シクロデキスリンを添加した後、還元型補酵素Ｑを添加、接触、混合させてもよいし、極性溶媒にシクロデキストリンを添加して、還元型補酵素Ｑを接触、混合させた後に、抗酸化物質を添加しても良い。抗酸化物質は、そのまま用いてもよいし、前記極性溶媒に溶解させたものを用いてもよい。
上記可溶化方法により得られる還元型補酵素Ｑの可溶化組成物は全て本発明に含まれる。
次に、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、シクロデキストリン、極性溶媒、および還元型補酵素Ｑを含む組成物であって、還元型補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている組成物の製造方法について説明する。該製造方法について、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの比率、使用される原料類、原料投入順序、および還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンの比率などの条件は、上記可溶化方法と同様である。
本発明にしたがう組成物は、スプレードライや凍結乾燥等に供して粉末性の組成物として得ることができる。実用的に取り扱いが簡便であり産業上の利用のしやすさから粉末状組成物として得ることがより好ましい。これにより、水への可溶性または分散性が優れ、室温または冷蔵で長期保存が可能な組成物として好適に得ることができる。
調製される組成物は、さらに、薬剤学的に許容されうる他の製剤素材を含有してもよい。含有しうる製剤素材としては、例えば、着色剤、乳化剤、緊張化剤、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、矯臭剤、安定化剤、賦形剤等が挙げられる。さらに用途に即して他の有効成分、例えば薬剤、栄養補助剤などを含有しても良い。これら製剤素材は、常法により適宜調整される。また本発明による組成物は押出造粒や流動層造粒等の造粒に供することもできる。
さらに、本組成物は、医薬品成分、機能性食品成分、サプリメント成分等、ヒトあるいはペット、家畜等、動物の健康維持のために有用であると考えられる各種成分を含有してもよい。これら成分は、常法により適宜添加することができる。
本発明で得られる組成物の投与形態は、特に制限されず使用用途により適宜選択することができるが、水への可溶性または分散性が優れていることから、経口投与用として使用することが好ましい。
本発明による還元型補酵素Ｑを含有する組成物は、ヒト用または動物用として、食品、機能性食品、医薬品または医薬部外品等として使用することができる。ここで言う機能性食品とは、健康食品、栄養補助食品、サプリメント、栄養食品等、健康の維持あるいは食事に代わり栄養補給の目的で摂取する食品を意味している。具体的な形態としてはドリンク剤、チュアブル、タブレット、カプセル剤、錠剤、注射剤、輸液、点眼剤、飼料などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本発明の可溶化方法により得られた可溶化組成物は、還元型補酵素Ｑを酸化に対して安定に維持することができる。ここでいう「安定に維持できる」とは、組成物の用途や目的、保存状態によっても異なるが、該可溶化組成物を、室温（約２０℃）において空気雰囲気下４週間遮光保存した場合、還元型補酵素Ｑの残存率が保存開始時の濃度の８０％以上であることで評価した。
次に、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの酸化を防止する方法について説明する。該方法にしたがって、還元型補酵素Ｑを、室温（約２０℃）において空気雰囲気下４週間遮光保存した場合、還元型補酵素Ｑの残存率が保存開始時の量の８０％以上であるならば、還元型補酵素Ｑは酸化が防止されていると判断した。該方法について、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの比率、使用される原料類、および還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンの比率などの条件は、上記組成物と同様である。
【図面の簡単な説明】
図１ 各粉末状組成物中の還元型補酵素Ｑ１０の、２３℃における自動酸化に対する安定性を示したグラフである。縦軸は組成物（試験サンプル）に含まれる全補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の残存率を表し、横軸は保存日数を表す。保存開始４週間後において、還元型補酵素Ｑ１０原末では４１％まで還元型補酵素Ｑ比が低下しているのにもかかわらず、粉末状組成物Ｉ〜ＩＶではいずれも８０％以上の還元型補酵素Ｑ比である。
図２ 各粉末状組成物中の還元型補酵素Ｑ１０の、４０℃における自動酸化に対する安定性を示したグラフである。縦軸は組成物（試験サンプル）に含まれる全補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の残存率を表し、横軸は保存日数を表す。保存開始４週間後において、還元型補酵素Ｑ１０原末では１１％まで還元型補酵素Ｑ比が低下しているのにもかかわらず、粉末状組成物Ｉ〜ＩＶではいずれも６５％以上の還元型補酵素Ｑ比である。
【発明を実施するための最良の形態】
本発明の効果については、以下に示す実施例より明らかにされるが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
尚、実施例中の還元型補酵素Ｑ、酸化型補酵素Ｑの濃度は下記ＨＰＬＣ分析により求めた。
（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム：ＳＹＭＭＥＴＲＹ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ製）２５０ｍｍ（長さ）４．６ｍｍ（内径）、移動相；Ｃ２Ｈ５ＯＨ：ＣＨ３ＯＨ＝４：３（ｖ：ｖ）、検出波長；２１０ｎｍ、流速；１ｍｌ／ｍｉｎ、還元型補酵素Ｑ１０の保持時間；９．１ｍｉｎ、酸化型補酵素Ｑ１０の保持時間：１３．３ｍｉｎ。
またスプレードライについては大川原製作所製Ｌ−１２型スプレードライ装置を入り口温度１７０℃、出口温度８０℃、噴霧速度１００ｍｌ／ｍｉｎにより行った。
【実施例１】
１３３６ｍｌの水に２０５ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１８ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加え、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物Ｉを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン＝１：８である。
【実施例２】
６７５ｍｌの水に１２．２ｇのアスコルビン酸を十二分に攪拌して溶解させ、その後、８５．３ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１５ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加えて、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物ＩＩを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン：アスコルビン酸＝１：４：４である。
【実施例３】
１１８８ｍｌの水に１２．２ｇのアスコルビン酸を十二分に攪拌して溶解させ、その後１７１ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１５ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加えて、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物ＩＩＩを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン：アスコルビン酸＝１：８：４である。
【実施例４】
１１８２ｍｌの水に１６．３ｇのアスコルビン酸を十二分に攪拌して溶解させ、その後１７１ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１０ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加えて、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物ＩＶを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン：アスコルビン酸＝１：１２：８である。
（実施例５〜１２、比較例１、２）
２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する還元型補酵素Ｑ１０原末（Ｑ−ＯＨ原末）と、実施例１〜４で得られた粉末状組成物Ｉ〜ＩＶの安定性試験を以下のように実施した。即ち、それぞれの組成物（試験サンプル）をマイクロチューブに入れ、２３℃または４０℃で、遮光条件下、空気存在下にて保存した。使用した試験サンプル、試験温度を表１に示す。
１，２，４週間保存後に各々のサンプルについて２５ｍｇサンプリングしてエタノールに溶解後、ＨＰＬＣを用いて酸化型補酵素Ｑ１０および還元型補酵素Ｑ１０の濃度を測定することにより、組成物（試験サンプル）に含まれる全補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の比率を定量した。結果を、図１および図２に示した。
（実施例１３〜１６、比較例３）
還元型補酵素Ｑ１０を９８％含有する補酵素Ｑ１０原末（Ｑ−ＯＨ原末）と、実施例１〜４で得られた各粉末状組成物の溶解性試験を以下のように実施した。即ち、各々の組成物（試験サンプル）１ｇを１００ｍｌの水に加え、ミキサーにより５０００ｒｐｍで３０秒間攪拌して、その後静置した。静置１時間後における水溶液の状態を観察し、水への可溶性を確認した。結果を表２に示す。
還元型補酵素Ｑ１０を９８％含有する補酵素Ｑ１０原末（Ｑ−ＯＨ原末）は橙色の油摘状として水の上に浮遊して不溶であるが、実施例１〜４で得られた粉末状組成物Ｉ〜ＩＶは、すべて白色の乳化様状態として水へ均一に分散していることを認めた。
【産業上の利用可能性】
本発明により、抗酸化物質あるいは栄養補助成分として有用性の高い還元型補酵素Ｑが、水に可溶で、同時に、保存安定性に優れた組成物として供給できるようになった。
【図１】
【図２】
【技術分野】
本発明は、一般的に多用される天然乳化剤または合成乳化剤やリポソーム等を用いることなく、水への可溶性または分散性に優れ、保存安定性に優れた還元型補酵素Ｑ含有組成物を、食品、機能性食品、医薬品または医薬部外品の素材として提供することに関する。
【背景技術】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分であり、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として知られている。補酵素Ｑは、ミトコンドリア内において酸化と還元を繰り返すことで、電子伝達系における伝達成分としての機能を担っている以外にも、還元型補酵素Ｑは抗酸化作用をもつことが知られている。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ、補酵素Ｑ１０が主成分であり、生体内においては通常４０〜９０％程度が還元型として存在している。補酵素Ｑの生理的作用としては、ミトコンドリア賦活作用によるエネルギー生産の活性化、心機能の活性化、細胞膜の安定化効果、抗酸化作用による細胞の保護効果などが挙げられている。
補酵素Ｑは種々の用途での使用が知られており、例えば、酸化型補酵素Ｑ１０はその心臓に対する効果から鬱血性心不全薬として用いられている。医薬用途以外でも、ビタミン類同様、栄養剤や栄養補助剤として経口的にサプリメントやドリンク剤等の形態により利用されている。
近年、血中の酸化ストレスの増加による疾患の増悪が種々報告されている。代表的なものとして、動脈硬化、糖尿病合併症などが挙げられる。これらの疾患では、血液中に存在する種々の酸化ストレスによる脂質変性などにより、疾患の発生あるいは増悪が起こっている。このような酸化ストレスによる影響を減少させるためには抗酸化剤の投与による生体の抗酸化能の賦活が有効である。脂質過酸化の抑制により有効であると考えられる脂溶性の抗酸化物質の代表的な化合物であるビタミンＥは抗酸化物質として疾患の予防などに幅広く用いられている。一方、ビタミンＥの抗酸化活性を充分に発揮させるためには還元型補酵素Ｑ１０の共存が重要であることが報告され（Ｂｏｗｒｙ等、１９９３、Ｊ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ、１１５、６０２９−６０４４）、脂溶性抗酸化物質としてビタミンＥと共に、補酵素Ｑの重要性が明らかになりつつある。
還元型補酵素Ｑはそれ自身でも強い抗酸化作用を有するため、可溶化して血中に充分量の還元型補酵素Ｑを送り込むことにより、血中の抗酸化活性を効果的に増加させることが可能となる。
血中の抗酸化活性を増加させることは、虚血再還流時の血管障害、動脈硬化の再狭窄防止、脳梗塞後の血管障害の防止、動脈効果の予防、糖尿病の合併症の予防など活性酸素種によって増悪が示唆されている多くの疾患に対して幅広い有用性が考えられる。
さらに、新たな補給形態として点滴により体内へ送りこむことにより、経口による摂取ができない重症患者あるいは脳疾患患者への補酵素Ｑの供給が可能となる。このように補酵素Ｑを可溶化することは多くのメリットを生み出すことが予想される。
補酵素Ｑには酸化型と還元型が知られており、酸化型補酵素Ｑ１０（ユビデカレノンまたはユビキノンとも呼ばれる）の可溶化方法に関しては、従来から数多くの研究が行われてきた。酸化型補酵素Ｑ１０の可溶化方法としては、リポソームによる被覆、界面活性剤あるいは油脂による懸濁など種々の方法等が報告されている（例えば、特開平５−１８６３４０、特開平７−６９８７４、特表２０００−５１０８４１）。
酸化型補酵素Ｑ１０が抗酸化活性を示すためには還元酵素などによって還元型補酵素Ｑ１０に変換される必要がある。経口的に摂取された酸化型補酵素Ｑ１０は、生体内におけるＮＡＤＰＨ−ＣｏＱ還元酵素、リポアミド脱水素酵素、チオレドキシン還元酵素等により、還元型補酵素Ｑ１０へと変換され抗酸化活性を発揮するものと推察されている。しかし、加齢とともに、生体内の還元酵素等による、還元酸化型補酵素Ｑ１０の還元型補酵素Ｑ１０への還元能力の低下も懸念されており、老齢者や酸化型補酵素Ｑ１０の還元能力低下者に対しては、生体外からの還元型補酵素Ｑ１０の投与は意義がある。
還元型補酵素Ｑ１０は、それ自体が抗酸化活性を有することから、還元型補酵素Ｑ１０の投与は前述のような疾患に対する有用性がおおいに期待できる物質であるが、物性としては空気に触れると自動酸化が進む極めて不安定な物質であり、加えて、水への溶解性も極めて悪いために工業的な利用にはこれまで供し得なかった。
還元型補酵素Ｑ１０は、リポソーム被覆体を利用した製剤として酸化還元酵素などの研究のために作製したという研究報告はあるが（Ｋｉｓｈｉ等、１９９９、ＢｉｏＦａｃｔｏｒｓ、１０、１３１−１３８）、用いられているリポソームは実験毎の用時調製例であり、安定的に還元型補酵素Ｑを維持できる可溶化方法については全く知られていなかった。
以前に我々は鋭意研究の結果、還元型補酵素Ｑ１０を安定的に維持できる水可溶化液の作製および保存方法を明らかにした（特開２００３−０２６６２５、特開２００３−１１９１２６）。この発明により、有用性の高い還元型補酵素Ｑ水可溶化液を実用に供することが可能になった。本発明は、以前の発明をさらに発展させ、還元型補酵素Ｑ１０を水可溶化物とすると同時に保存安定性を更に向上させることを目的としたものである。
【発明の開示】
本発明の課題は、水への溶解または分散性が劣り、かつ、極めて不安定な化合物である還元型補酵素Ｑを含有する、水への可溶性または分散性が優れ、室温で長期保存が可能となる組成物を、提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究した結果、還元型補酵素Ｑが物性的に極めて不安定であり水に対してほとんど不溶性であるにもかかわらず、還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンを含有せしめることによって、保存安定性が飛躍的に向上し、同時に、水への分散性が優れた組成物として得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒及び一般式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを含む組成物であって、還元型補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ）組成物に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする還元型補酵素Ｑの可溶化方法に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、シクロデキストリン、極性溶媒、および還元型補酵素Ｑを含む組成物であって、還元型補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている組成物の製造方法に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの安定化方法に関する。
また、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの酸化を防止する方法に関する。
まず、本発明におけるシクロデキストリン、極性溶媒及び還元型補酵素Ｑを含有する組成物であって、該還元型補酵素Ｑが組成物中に可溶化されている組成物について説明する。本明細書において可溶化とは、補酵素Ｑが上記組成物中に溶解され、そして該補酵素Ｑの全部または一部がシクロデキストリンに包接されていることをいう。上記組成物は、組成物に溶解しなかったが分散されている補酵素Ｑを含んでもよい。ここにいう分散とは、以下に記載する試験によって、該組成物中の補酵素Ｑが浮上または沈殿しないことをいう。ここにいう包接とは、補酵素Ｑを含む該組成物が水に溶解するよう組成物を構成している分子が会合している状態をいう。
還元型補酵素Ｑが上記組成物中に可溶化されているか否かは、以下の試験によって判定できる。該組成物１ｇを水５００ｍｌに懸濁し、２０℃にて２４時間経過後、目視により確認した場合、均一に分散されていることを確認できたときは可溶化されていると判断する。還元型補酵素Ｑが、シクロデキストリンに包接されているか否かは、以下の試験によって判定できる。該組成物１ｇを水５００ｍｌに懸濁し、２０℃にて２４時間経過後、目視により確認した場合、均一に分散されており、かつ、透明の溶液状態を確認できたときを包接されていると判断する
補酵素Ｑは、下記式（１）；
（式中、ｎは１〜１２の整数を表す）および下記式（２）；
（式中、ｎは１〜１２の整数を表す）で表され、式（１）は還元型補酵素Ｑを表し、式（２）は酸化型補酵素Ｑを表す。還元型補酵素Ｑは結晶性でも、非結晶性であってもよい。
本発明における上記組成物において、酸化型補酵素Ｑを含んでもよい。酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの両者を含有する場合、補酵素Ｑ全量（酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの総量）に対して還元型補酵素Ｑを５０重量％以上含有するのが好ましく、７５重量％以上含有するのがより好ましい。
上記還元型補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により補酵素Ｑを得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ区分を濃縮する方法などを採用することが出来る。この場合には、必要に応じて上記補酵素Ｑに対し、水素化ほう素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム（ハイドロサルファイトナトリウム）等の一般的な還元剤を添加し、常法により上記補酵素Ｑ中に含まれる酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑとした後にクロマトグラフィーによる濃縮を行っても良い。また、既存の高純度補酵素Ｑに上記還元剤を作用させる方法によっても得ることが出来る。
本発明で用いる還元型補酵素Ｑは、前記式（１）および（２）で表されるように、側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来るが、なかでも側鎖繰り返し単位が１０のもの、すなわち還元型補酵素Ｑ１０が特に好適に使用できる。
シクロデキストリンとしては、特に限定されないが、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等を使用することができる。好ましくは、α−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンから選択される一種が用いられる。更に、好ましくは、γ−シクロデキストリンである。
含有するシクロデキストリンの比率については、還元型補酵素Ｑ、モルに対して０．１モル〜１００モルが好ましく、０．２〜２０モルがより好ましい。
ここにいう極性溶媒とは、水またはアルコール類をいう。含有する極性溶媒としては、特に制限されないが、極性溶媒としては、水、エタノール等のアルコール類、があげられる。これらは、単独または混合して用いてもよい。なかでも、水とエタノールの混合液が好ましく用いられ、水がより好ましい。
還元型補酵素Ｑと極性溶媒の比率については特に制限はないが、通常、極性溶媒中の還元型補酵素Ｑの割合が、溶媒に対して０．００１〜５００重量％の範囲で使用される。
本発明における還元型補酵素Ｑの可溶化組成物は、抗酸化物質を含有することができる。抗酸化物質としては、抗酸化活性を示すものであれば如何なる化合物でも良いが、例えば、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、グルタチオン、還元型グルタチオン、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、Ｌ−カルニチン、リコペン、リボフラビン、クルクミノイド、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、ＰＱＱ（ピロロキノリンキノン）、から選択される一種または二種以上の混合物が好ましく、更には、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体から選択される一種または二種以上の混合物がより好ましく用いられる。含有する抗酸化物質は、還元型補酵素Ｑ、１モルに対して０．０１モル以上１０００モル以下が好ましく０．１モル以上１００モル以下がより好ましい。
次に、本発明による、還元型補酵素Ｑの可溶化方法について説明する。可溶化方法としては、例えば、還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンを、適当な極性溶媒中で、接触する、または混合する方法があげられる。接触または混合することで、包接化合物として得ることができる。接触するまたは混合するときに、原料を強く攪拌することが、包接化合物を得るために必要な時間を短縮する観点から好ましい。これは、還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンの十分な接触を確保するためである。ここにいう強く攪拌する条件の例は、室温（約２０℃）下、ホモミキサー（ポリトロＰＴ２１００）により２００００ｒｐｍで１０分処理である。
極性溶媒としては前記組成物と同じ物、例えば、水、エタノール等のアルコール類、があげられ、これらは混合して用いてもよい。水とエタノール類の混合物が好ましく、水がさらに好ましい。還元型補酵素Ｑは、そのまま用いてもよいし、非極性溶媒あるいは油脂に溶解させたものを用いることができる。
非極性溶媒としては例えば、ヘキサン、エーテル、油脂を用いることができる。油脂としては、食用に供することができることから、オリーブオイル、シソ油、菜種油、米糠オイル、大豆油および魚油等が好ましい。これらは混合して用いてもよい。また、シクロデキストリンは、極性溶媒に溶解させたものを用いてもよいし、そのまま用いても良い。
還元型補酵素Ｑとシクロデキストリン、極性溶媒を混合する順序としては特に制限されないが、極性溶媒にシクロデキストリンを溶解させ、次いで還元型補酵素Ｑを該溶解液に添加して、接触、混合させる順序が好ましく、極性溶媒にシクロデキストリンを溶解させると同時に還元型補酵素Ｑを加えて接触、混合させる手順がより好ましい。これらの手順により、還元型補酵素Ｑは、シクロデキストリンによって包接され、包接化合物が生成される。これにより、水へ可溶な、または水へ均一に分散する還元型補酵素Ｑの可溶化組成物が得られる。
還元型補酵素Ｑとシクロデキストリン、極性溶媒、抗酸化物質を混合する順序に特に制限はない。例えば、極性溶媒に抗酸化物質を溶解させ、シクロデキスリンを添加した後、還元型補酵素Ｑを添加、接触、混合させてもよいし、極性溶媒にシクロデキストリンを添加して、還元型補酵素Ｑを接触、混合させた後に、抗酸化物質を添加しても良い。抗酸化物質は、そのまま用いてもよいし、前記極性溶媒に溶解させたものを用いてもよい。
上記可溶化方法により得られる還元型補酵素Ｑの可溶化組成物は全て本発明に含まれる。
次に、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、シクロデキストリン、極性溶媒、および還元型補酵素Ｑを含む組成物であって、還元型補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている組成物の製造方法について説明する。該製造方法について、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの比率、使用される原料類、原料投入順序、および還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンの比率などの条件は、上記可溶化方法と同様である。
本発明にしたがう組成物は、スプレードライや凍結乾燥等に供して粉末性の組成物として得ることができる。実用的に取り扱いが簡便であり産業上の利用のしやすさから粉末状組成物として得ることがより好ましい。これにより、水への可溶性または分散性が優れ、室温または冷蔵で長期保存が可能な組成物として好適に得ることができる。
調製される組成物は、さらに、薬剤学的に許容されうる他の製剤素材を含有してもよい。含有しうる製剤素材としては、例えば、着色剤、乳化剤、緊張化剤、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、矯臭剤、安定化剤、賦形剤等が挙げられる。さらに用途に即して他の有効成分、例えば薬剤、栄養補助剤などを含有しても良い。これら製剤素材は、常法により適宜調整される。また本発明による組成物は押出造粒や流動層造粒等の造粒に供することもできる。
さらに、本組成物は、医薬品成分、機能性食品成分、サプリメント成分等、ヒトあるいはペット、家畜等、動物の健康維持のために有用であると考えられる各種成分を含有してもよい。これら成分は、常法により適宜添加することができる。
本発明で得られる組成物の投与形態は、特に制限されず使用用途により適宜選択することができるが、水への可溶性または分散性が優れていることから、経口投与用として使用することが好ましい。
本発明による還元型補酵素Ｑを含有する組成物は、ヒト用または動物用として、食品、機能性食品、医薬品または医薬部外品等として使用することができる。ここで言う機能性食品とは、健康食品、栄養補助食品、サプリメント、栄養食品等、健康の維持あるいは食事に代わり栄養補給の目的で摂取する食品を意味している。具体的な形態としてはドリンク剤、チュアブル、タブレット、カプセル剤、錠剤、注射剤、輸液、点眼剤、飼料などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本発明の可溶化方法により得られた可溶化組成物は、還元型補酵素Ｑを酸化に対して安定に維持することができる。ここでいう「安定に維持できる」とは、組成物の用途や目的、保存状態によっても異なるが、該可溶化組成物を、室温（約２０℃）において空気雰囲気下４週間遮光保存した場合、還元型補酵素Ｑの残存率が保存開始時の濃度の８０％以上であることで評価した。
次に、本発明は、シクロデキストリン、極性溶媒、および前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの酸化を防止する方法について説明する。該方法にしたがって、還元型補酵素Ｑを、室温（約２０℃）において空気雰囲気下４週間遮光保存した場合、還元型補酵素Ｑの残存率が保存開始時の量の８０％以上であるならば、還元型補酵素Ｑは酸化が防止されていると判断した。該方法について、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの比率、使用される原料類、および還元型補酵素Ｑとシクロデキストリンの比率などの条件は、上記組成物と同様である。
【図面の簡単な説明】
図１ 各粉末状組成物中の還元型補酵素Ｑ１０の、２３℃における自動酸化に対する安定性を示したグラフである。縦軸は組成物（試験サンプル）に含まれる全補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の残存率を表し、横軸は保存日数を表す。保存開始４週間後において、還元型補酵素Ｑ１０原末では４１％まで還元型補酵素Ｑ比が低下しているのにもかかわらず、粉末状組成物Ｉ〜ＩＶではいずれも８０％以上の還元型補酵素Ｑ比である。
図２ 各粉末状組成物中の還元型補酵素Ｑ１０の、４０℃における自動酸化に対する安定性を示したグラフである。縦軸は組成物（試験サンプル）に含まれる全補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の残存率を表し、横軸は保存日数を表す。保存開始４週間後において、還元型補酵素Ｑ１０原末では１１％まで還元型補酵素Ｑ比が低下しているのにもかかわらず、粉末状組成物Ｉ〜ＩＶではいずれも６５％以上の還元型補酵素Ｑ比である。
【発明を実施するための最良の形態】
本発明の効果については、以下に示す実施例より明らかにされるが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
尚、実施例中の還元型補酵素Ｑ、酸化型補酵素Ｑの濃度は下記ＨＰＬＣ分析により求めた。
（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム：ＳＹＭＭＥＴＲＹ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ製）２５０ｍｍ（長さ）４．６ｍｍ（内径）、移動相；Ｃ２Ｈ５ＯＨ：ＣＨ３ＯＨ＝４：３（ｖ：ｖ）、検出波長；２１０ｎｍ、流速；１ｍｌ／ｍｉｎ、還元型補酵素Ｑ１０の保持時間；９．１ｍｉｎ、酸化型補酵素Ｑ１０の保持時間：１３．３ｍｉｎ。
またスプレードライについては大川原製作所製Ｌ−１２型スプレードライ装置を入り口温度１７０℃、出口温度８０℃、噴霧速度１００ｍｌ／ｍｉｎにより行った。
【実施例１】
１３３６ｍｌの水に２０５ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１８ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加え、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物Ｉを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン＝１：８である。
【実施例２】
６７５ｍｌの水に１２．２ｇのアスコルビン酸を十二分に攪拌して溶解させ、その後、８５．３ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１５ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加えて、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物ＩＩを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン：アスコルビン酸＝１：４：４である。
【実施例３】
１１８８ｍｌの水に１２．２ｇのアスコルビン酸を十二分に攪拌して溶解させ、その後１７１ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１５ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加えて、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物ＩＩＩを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン：アスコルビン酸＝１：８：４である。
【実施例４】
１１８２ｍｌの水に１６．３ｇのアスコルビン酸を十二分に攪拌して溶解させ、その後１７１ｇのγ−シクロデキストリンを溶解し、直後に１０ｇの還元型補酵素Ｑ１０（２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する）を加えて、ホモジナイザーにより１００００ｒｐｍで２０分間攪拌することで還元型補酵素Ｑ１０のシクロデキストリン混合物を調製し、スプレードライに供して粉末状組成物ＩＶを得た。本粉末状組成物の構成素材のモル比率としては、還元型補酵素Ｑ１０：γ−シクロデキストリン：アスコルビン酸＝１：１２：８である。
（実施例５〜１２、比較例１、２）
２％の酸化型補酵素Ｑ１０を含有する還元型補酵素Ｑ１０原末（Ｑ−ＯＨ原末）と、実施例１〜４で得られた粉末状組成物Ｉ〜ＩＶの安定性試験を以下のように実施した。即ち、それぞれの組成物（試験サンプル）をマイクロチューブに入れ、２３℃または４０℃で、遮光条件下、空気存在下にて保存した。使用した試験サンプル、試験温度を表１に示す。
１，２，４週間保存後に各々のサンプルについて２５ｍｇサンプリングしてエタノールに溶解後、ＨＰＬＣを用いて酸化型補酵素Ｑ１０および還元型補酵素Ｑ１０の濃度を測定することにより、組成物（試験サンプル）に含まれる全補酵素Ｑ１０中の還元型補酵素Ｑ１０の比率を定量した。結果を、図１および図２に示した。
（実施例１３〜１６、比較例３）
還元型補酵素Ｑ１０を９８％含有する補酵素Ｑ１０原末（Ｑ−ＯＨ原末）と、実施例１〜４で得られた各粉末状組成物の溶解性試験を以下のように実施した。即ち、各々の組成物（試験サンプル）１ｇを１００ｍｌの水に加え、ミキサーにより５０００ｒｐｍで３０秒間攪拌して、その後静置した。静置１時間後における水溶液の状態を観察し、水への可溶性を確認した。結果を表２に示す。
還元型補酵素Ｑ１０を９８％含有する補酵素Ｑ１０原末（Ｑ−ＯＨ原末）は橙色の油摘状として水の上に浮遊して不溶であるが、実施例１〜４で得られた粉末状組成物Ｉ〜ＩＶは、すべて白色の乳化様状態として水へ均一に分散していることを認めた。
【産業上の利用可能性】
本発明により、抗酸化物質あるいは栄養補助成分として有用性の高い還元型補酵素Ｑが、水に可溶で、同時に、保存安定性に優れた組成物として供給できるようになった。
【図１】
【図２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロデキストリン、極性溶媒及び次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを含有組成物であって、該補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ）組成物。
【請求項２】
還元型補酵素Ｑが酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの総量に対して、５０重量％以上含有される請求１記載の組成物。
【請求項３】
経口投与用である請求項１記載の組成物。
【請求項４】
還元型補酵素Ｑが還元型補酵素Ｑ１０である請求項１記載の組成物。
【請求項５】
シクロデキストリンがα−シクロデキストリンおよびγ−シクロデキストリンから選択される少なくとも一種である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
極性溶媒が水または水とアルコールの混合物である請求項１記載の組成物。
【請求項７】
還元型補酵素Ｑ、１モルに対してシクロデキストリンを０．１モル〜１００モルの比率で含有する請求項１記載の組成物。
【請求項８】
抗酸化物質を、更に含有する請求項１記載の組成物。
【請求項９】
抗酸化物質が、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、グルタチオン、還元型グルタチオン、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、Ｌ−カルニチン、リコペン、リボフラビン、クルクミノイド、およびスーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）から選択される少なくとも一種である請求項１記載の可溶化組成物。
【請求項１０】
請求項１記載の組成物であって、医薬品成分、機能性食品成分、サプリメント成分及び食品成分から選択される少なくとも一種以上を含有する可溶化組成物。
【請求項１１】
請求項１記載の組成物を含有する、ヒトまたは動物に投与用の食品、機能性食品、医薬品または医薬部外品。
【請求項１２】
請求項１記載の組成物をスプレードライすることにより得られうる粉末状可溶化組成物。
【請求項１３】
極性溶媒、シクロデキストリン、および還元型補酵素Ｑを混合することによって得られうる、シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを含む組成物。ここで、該還元型補酵素Ｑは、該組成物中に可溶化されている。
【請求項１４】
シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを、混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの可溶化方法。
【請求項１５】
還元型補酵素Ｑが、還元型補酵素Ｑが酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの総量に対して、５０重量％以上含有される請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
還元型補酵素Ｑが還元型補酵素Ｑ１０である請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
シクロデキスリンがα−シクロデキストリンおよびγ−シクロデキストリンから選択された少なくとも一種である請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
極性溶媒中にシクロデキスリンを、溶解させ、次いで還元型補酵素Ｑを該溶解液と混合することを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
極性溶媒が水または水とアルコールの混合物である請求項１４記載の方法。
【請求項２０】
還元型補酵素Ｑ、１モルに対してシクロデキストリンを０．１〜１００モルの比率で含有する請求項１４記載の方法。
【請求項２１】
抗酸化物質が、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、グルタチオン、還元型グルタチオン、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、Ｌ−カルニチン、リコペン、リボフラビン、クルクミノイド、およびスーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）から選択される少なくとも一種である請求項１４記載の方法。
【請求項２２】
シクロデキストリン、極性溶媒、および還元型補酵素Ｑを含む組成物の製造方法であって、シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）：
で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする製造方法。
【請求項２３】
シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを、混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの酸化を防止する方法。
【請求項１】
シクロデキストリン、極性溶媒及び次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを含有組成物であって、該補酵素Ｑが該組成物中に可溶化されている（ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄ）組成物。
【請求項２】
還元型補酵素Ｑが酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの総量に対して、５０重量％以上含有される請求１記載の組成物。
【請求項３】
経口投与用である請求項１記載の組成物。
【請求項４】
還元型補酵素Ｑが還元型補酵素Ｑ１０である請求項１記載の組成物。
【請求項５】
シクロデキストリンがα−シクロデキストリンおよびγ−シクロデキストリンから選択される少なくとも一種である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
極性溶媒が水または水とアルコールの混合物である請求項１記載の組成物。
【請求項７】
還元型補酵素Ｑ、１モルに対してシクロデキストリンを０．１モル〜１００モルの比率で含有する請求項１記載の組成物。
【請求項８】
抗酸化物質を、更に含有する請求項１記載の組成物。
【請求項９】
抗酸化物質が、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、グルタチオン、還元型グルタチオン、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、Ｌ−カルニチン、リコペン、リボフラビン、クルクミノイド、およびスーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）から選択される少なくとも一種である請求項１記載の可溶化組成物。
【請求項１０】
請求項１記載の組成物であって、医薬品成分、機能性食品成分、サプリメント成分及び食品成分から選択される少なくとも一種以上を含有する可溶化組成物。
【請求項１１】
請求項１記載の組成物を含有する、ヒトまたは動物に投与用の食品、機能性食品、医薬品または医薬部外品。
【請求項１２】
請求項１記載の組成物をスプレードライすることにより得られうる粉末状可溶化組成物。
【請求項１３】
極性溶媒、シクロデキストリン、および還元型補酵素Ｑを混合することによって得られうる、シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを含む組成物。ここで、該還元型補酵素Ｑは、該組成物中に可溶化されている。
【請求項１４】
シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを、混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの可溶化方法。
【請求項１５】
還元型補酵素Ｑが、還元型補酵素Ｑが酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの総量に対して、５０重量％以上含有される請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
還元型補酵素Ｑが還元型補酵素Ｑ１０である請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
シクロデキスリンがα−シクロデキストリンおよびγ−シクロデキストリンから選択された少なくとも一種である請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
極性溶媒中にシクロデキスリンを、溶解させ、次いで還元型補酵素Ｑを該溶解液と混合することを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
極性溶媒が水または水とアルコールの混合物である請求項１４記載の方法。
【請求項２０】
還元型補酵素Ｑ、１モルに対してシクロデキストリンを０．１〜１００モルの比率で含有する請求項１４記載の方法。
【請求項２１】
抗酸化物質が、クエン酸、クエン酸誘導体、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、グルタチオン、還元型グルタチオン、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、Ｌ−カルニチン、リコペン、リボフラビン、クルクミノイド、およびスーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）から選択される少なくとも一種である請求項１４記載の方法。
【請求項２２】
シクロデキストリン、極性溶媒、および還元型補酵素Ｑを含む組成物の製造方法であって、シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）：
で表される還元型補酵素Ｑを混合することを特徴とする製造方法。
【請求項２３】
シクロデキストリン、極性溶媒、および次式（１）；
（式中、ｎ＝１〜１２の整数）で表される還元型補酵素Ｑを、混合することを特徴とする、還元型補酵素Ｑの酸化を防止する方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４１９４５
【国際公開日】平成１７年５月１２日（２００５．５．１２）
【発行日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１５１６０（Ｐ２００５−５１５１６０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１６０７９
【国際出願日】平成１６年１０月２２日（２００４．１０．２２）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年５月１２日（２００５．５．１２）
【発行日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１６０７９
【国際出願日】平成１６年１０月２２日（２００４．１０．２２）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
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