酸化セルロースの製造方法
【課題】 酸化セルロースの製造方法を提供する。
【解決手段】 平均分子量が少なくとも５０００の酸化セルロースを、前記酸化セルロースの部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度で、アルカリ性水溶液で処理する。その結果生じる酸化セルロースを前記溶液から回収する。
【解決手段】 平均分子量が少なくとも５０００の酸化セルロースを、前記酸化セルロースの部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度で、アルカリ性水溶液で処理する。その結果生じる酸化セルロースを前記溶液から回収する。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
この発明は酸化再生セルロース（oxidized regenerated cellulose：ＯＲＣ）のオリゴ糖などの酸化オリゴ糖（oxidized oligosaccharides）に関する。この発明は創傷ドレッシング（wound dressings）ならびに他の医療用途および製薬用途における酸化オリゴ糖の使用にも関し、また酸化オリゴ糖を製造する方法にも関する。
【０００２】
ＯＲＣは長年にわたり製造され、止血を行うために、および手術後の癒着を防止するためのバリア材として、医療上使用されている。ＯＲＣの鍵となる特徴は体内に移植された時にそれが吸収されやすいことであるが、これに対し、セルロースはそうでない。ＯＲＣは該高分子の加水分解開裂により吸収されて小さなオリゴ糖を生じ、これが代謝され体から排出される。セルロースの重量につき１０％乃至２１％のカルボキシル基を生じるセルロースの酸化によって、移植後２週間乃至３週間以内にその材料がほぼ完全に吸収されることが可能となる。
【０００３】
ＯＲＣは、米国特許公報第３１２２４７９号に記載されているように四酸化二窒素などの酸化剤にセルロースを曝すことによって製造される。セルロース材料の物理的形態は重要でない。例えば、セルロースのフィルム、紙、スポンジ、布地は全て酸化されてＯＲＣを生じる。しかし、商業的に好適な材料は織った布または編んだ布である。編布の形態のＯＲＣは吸収性止血性材料として用いるためにSURGICEL（商標）により入手可能であり、またＯＲＣは癒着バリアとして用いるためにINTERCEED（商標）により入手可能である。
【０００４】
セルロース以外の多糖も、酸化されて医療上有用な止血性材料を生じ得る。このような他の多糖には、微生物性多糖、例えば、デキストラン、ゲラン(gellan）ゴム、キサンタン(xanthan）ゴム；植物由来の多糖、例えば、寒天、デンプン、こんにゃく、カラゲナン(carrageenan)、グアール(guar）ゴム、イヌリン、ペクチン；および多糖誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、酢酸セルロース、メチルセルロース、エチルセルロースがある。
【０００５】
創傷ドレッシングとして使用するため、ＯＲＣを他の材料と組み合わせることが提案されている。例えば、米国特許公報第２５１７７７２号（Doubら）はトロンビンで含浸したＯＲＣより形成したドレッシングを開示している。しかし、ＯＲＣはかなり酸性である。十分に水で飽和したＯＲＣ布片の表面ｐＨは１．７程度に低いことがある。多くのタンパク質薬剤、例えばトロンビン等は、酸の影響を非常に受け易く、このようなマトリックスと接触して直ぐに不活性化される。従って、Doubらはトロンビンで含浸する前にＯＲＣを中和すべきことを教示している。酢酸カルシウム、炭酸ナトリウム、アンモニアおよびアルコール性エチルアミンが適切な中和剤の例として与えられているが、Doubらは、溶液またはゲル化と分解の理由により、水中に入れた時にＯＲＣがその繊維性を失うような程度までＯＲＣを中和すべきでないことを警告している。
【０００６】
欧州特許公開第０４３７０９５号は、ＯＲＣ布地を中和するために炭酸ナトリウムの水溶液を使用する結果、部分的にゲル化し、その当初のサイズから歪み、非常に弱く、ほとんど一体性がない布地が生じることを開示している。その布地の引張強度は非常に低くて、実際の用途、例えば止血性材料等に向かないと記載されている。強塩基性の水酸化ナトリウム水溶液、水酸化アンモニウム水溶液の使用により、同様の結果が得られると記載されている。欧州特許公開第０４３７０９５号は従って、酸で酸化したセルロース材料を、塩化物の存在しない弱酸の僅かに塩基性の塩のアルコールと水の溶液に接触させて、セルロース材料のｐＨを５と８の間に上げる工程；そのｐＨを上げたセルロース材料をアルコールで洗浄して、余分な塩と水を除去する工程；およびそのセルロース材料を乾燥して、アルコールを除去する工程を含む、貯蔵安定性、非刺激性で治療効果のある中和した酸化セルロース製品の製造方法を教示している。
【０００７】
さて、ＯＲＣおよび他の酸化多糖は穏やかなアルカリ性条件下で部分加水分解して多くの医療上有用な特性を有するオリゴ糖を生じ得ることが、今、見出された。
【０００８】
従って、本発明は平均分子量が１０００ダルトン乃至５００００ダルトンの範囲にある酸化オリゴ糖を含む、局所、経口もしくは非経口投与用医薬組成物を提供するものである。
【０００９】
特に、本発明の酸化オリゴ糖組成物は治療上有用な薬剤を結合し、次にそのような結合薬剤を高収率で放出することができる。したがって、本発明の酸化オリゴ糖医薬組成物は、そのような薬剤を創傷部位に送達するために、例えば創傷ドレッシングにおいて使用することができる。酸化オリゴ糖により結合される治療上有用な薬剤には、薬理活性なペプチド及びタンパク質、好ましくは成長因子、例えば、ＰＤＧＦ ＡＢ，ＰＤＧＦ ＢＢ，ＴＧＦ−β１，ＴＧＦ−β２，ＴＧＦ−β３，塩基性ＦＧＦ，酸性ＦＧＦ、および場合によりＥＧＦおよびＴＧＦ−αがある。
【００１０】
いかなる理論にも拘束されることを望まないが、酸化オリゴ糖のアニオン性カルボキシレート基がペプチド及びタンパク質のカチオン性アミノ基と複合体形成する(complex) と考えられる。アニオン性の基を有する治療活性薬剤との複合体形成は、例えば、イオン性架橋剤としてＣａ２＋またはＺｎ２＋のような多価金属イオンを使用することによっても容易に達成することができる。
【００１１】
本発明の医薬組成物の別の利点は、それらがタンパク質等の他の材料や他の多糖と親密に組み合わさって（化学的に架橋するか架橋しないかに拘わらない）、新規な特性を有する組成物を形成し得ることである。例えば、酸化オリゴ糖は、ヒアルロン酸、キトサンまたはアルギン酸塩（特にアルギン酸ナトリウム、アルギン酸カルシウムまたはアルギン酸ナトリウム／カルシウム混合物）と組み合わさって新規な止血性組成物を形成し得る。あるいは、酸化オリゴ糖と他のオリゴ糖、多糖またはタンパク質との複合体は、種々の治療薬剤、例えば防腐剤、抗生物質、タンパク質成長因子、抗炎症剤、鎮痛剤、アプロチニン等のプロテイナーゼインヒビター、またはヒドロキサム酸に対し、調節された放出マトリックスとして使用し得る。本発明の組成物の酸化オリゴ糖は溶液中にある間、所望の治療薬剤と組み合わせられ（該治療薬剤は溶液中または懸濁液中にある）、次に、その酸化オリゴ糖は適切な手段により溶液から取り出されて、該治療薬剤がほぼ均一に分配された材料を生じる。あるいは、溶媒を、例えば凍結乾燥により除去してもよい。
【００１２】
酸化オリゴ糖はまた、三次元構造の形成を可能とするように架橋結合することもできる。例えば、酸化オリゴ糖は非常に低い濃度のペプシン可溶化コラーゲンが添加された水に溶解することができる。次にカルボジイミドを架橋剤として添加すれば、該コラーゲンはオリゴ糖間の架橋基として作用し、そのため凍結乾燥することにより三次元構造を得ることができる。
【００１３】
好ましくは、本発明の組成物における酸化オリゴ糖の分子量は少なくとも１０００ダルトンであり、一般的に１０００００よりも小さい。分子量は５０００ダルトン乃至３００００ダルトンよりも小さいことが最も通常であろう。（本発明における酸化オリゴ糖は異なるサイズの分子が混在した集団を形成することが理解されよう。従って、本願における特定の分子量範囲を有する酸化オリゴ糖への言及は、分子の少なくとも９０重量％がその特定の範囲に該当することを意味する。）
【００１４】
一つの実施形態において、本発明による組成物において使用するためのオリゴ糖は、不溶性の酸化多糖から誘導され、中性およびアルカリ性ｐＨで可溶であるが酸性ｐＨでは不溶であるような分子量のものである。そのようなオリゴ糖は、単にｐＨを下げてそれらを沈殿させるだけで、溶液から容易に回収することができる。あるいは、他の不揮発性成分を含有しない溶液に移し、その溶媒を蒸発させることによって、酸化オリゴ糖を溶液から回収することもできる。例えば、酸化オリゴ糖は、イオン交換固相抽出カラム（例えば、予めメタノールで活性化し希酢酸で平衡化したフェニルボロン酸固相カラム）を使用し、次に希薄な（例えば０．１Ｍ）水酸化アンモニウム水溶液で溶出することにより、単離することができる。
【００１５】
好ましくは、本発明の組成物において使用される酸化オリゴ糖は５重量％乃至２５重量％のカルボキシル含有量を有し、より好ましくは８重量％乃至１４重量％のカルボキシル含有量を有する。このオリゴ糖のカルボキシル含有量は、以下のようにして決定する。
【００１６】
酸化オリゴ糖の試料（約０．２ｇ）を０．５Ｍ水酸化ナトリウム（５ｍｌ）に溶解し、２，３滴の０．１％フェノールフタレイン指示薬溶液を加える。余分な水酸化ナトリウムは、０．１ＭのＨＣｌでフェノールフタレイン終点（赤から透明）まで逆滴定される。５ｍｌの０．１Ｍ水酸化ナトリウムを０．１ＭのＨＣｌで滴定することにより、ブランク値を決定する。カルボキシル含有量の値は、以下の式を用いて計算される。
Ｃ＝ ４．５×（Ｂ−Ｓ）×Ｍ
Ｗ
式中、Ｃ＝カルボキシル含有量％
Ｂ＝ブランクを滴定するための標準ＨＣｌの量（ｍｌ）
Ｓ＝試料を滴定するための標準ＨＣｌの量（ｍｌ）
Ｍ＝標準ＨＣｌのモル濃度
Ｗ＝試料の乾燥重量（ｇ）
（４．５＝カルボキシルのミリ当量重量×１００）
【００１７】
本発明はまた、分子量が少なくとも５００００（通常は少なくとも１０００００、例えば３００００より大きい）の酸化セルロースを、前記酸化セルロースの部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度でアルカリ性水溶液で処理すること、および次にその結果生じる酸化セルロースを例えばｐＨを７以下に調整することにより、溶液から回収することを含む酸化セルロースの製造方法を提供する。このアルカリ性溶液はアルカリ金属の水酸化物または炭酸塩、例えば、水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウムの溶液であることが好都合であるが、他のアルカリ（例えば水酸化アンモニウム水溶液）も用いることができる。この処理条件（特にｐＨ）はその結果生じる生成物について所望される分子量範囲に依存することが理解されるだろう。しかしながら、適当な条件は任意の特定の場合において日常的実験により容易に決定することができる。例示すれば、酸化再生セルロースは、１Ｍ乃至８Ｍの水酸化ナトリウム中、０℃乃至５０℃の温度で５分間乃至１２０分間で加水分解されて分子量範囲１０００ダルトン乃至２００００ダルトンのオリゴ糖を生じることが可能であり、あるいは０．０１Ｍ乃至１Ｍの炭酸ナトリウム中、０℃乃至５０℃の温度で１０時間乃至１０日間で分子量範囲７０００ダルトン乃至５００００ダルトンのオリゴ糖を生じることが可能である。
【００１８】
加水分解反応は、その溶液がおよそ中性になるまで鉱酸のような酸を加えることによって止めることができる。濃塩酸を用いるのが好都合である。
【００１９】
本発明を以下の実施例により、さらに説明する。
【００２０】
実施例１
ＯＲＣの溶液は、Surgicel（商標）の布を２０ｍｇ／ｍｌの濃度で６Ｍの水酸化ナトリウム中で溶解させることによって調製した。その溶液を４５分間３７℃でインキュベート（保温）し、その後６ＭのＨＣｌを、沈殿が生じｐＨがアルカリ性からｐＨ７以下へ変化するまで加えることによって、反応を止めた。その沈殿を一晩放置し、次に余分な液を除去した。その沈殿を分子量１０００カットオフのチューブで水に対して透析し、次に凍結乾燥して粉末を得た。
【００２１】
ゲル電気泳動により、および高性能液体クロマトグラフィにより決定された、そのオリゴ糖の分子サイズは、およそ１０００ダルトン乃至１５０００ダルトンにわたる範囲を示した。
【００２２】
実施例２
ＯＲＣの溶液は、Surgicel（商標）の布を１０ｍｇ／ｍｌの濃度で０．１Ｍの炭酸ナトリウム中で溶解させることによって調製した。全てのＯＲＣが溶解し終えるまで、この溶液を２日間乃至３日間３７℃でインキュベートした。沈殿が生じｐＨがアルカリ性からｐＨ７以下へ変化するまで、６ＭのＨＣｌを加えることによって反応を止めた。この沈殿を一晩静置し、次に余分な液を除去した。この沈殿を分子量１０００カットオフのチューブで水に対して透析し、次に凍結乾燥して粉末を得た。
【００２３】
上述のようにして決定された、分子サイズは、およそ１０００ダルトン乃至３００００ダルトンの範囲を示した。
【００２４】
実施例３
酸化カルボキシメチルセルロースのスポンジを、以下のようにして調製した。５００ｇの水に、アクアロン社（Aqualon Corporation）からの７．５ｇのカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を攪拌しながら加える。この高分子が溶解した時に、溶液を一晩脱気し、トラップ（捕捉）した気泡を除去する。この溶液を３×４×1／4インチのトレイに注ぎ入れ、凍結乾燥機で２４時間凍結乾燥する。この手順により、柔軟で白色で水溶性のＣＭＣスポンジが得られる。
【００２５】
このＣＭＣスポンジの酸化は、８ｇの四酸化二窒素を含有した小フラスコが付いた樹脂ケトル内に、５．８ｇの乾燥スポンジを置くことによって行う。この四酸化二窒素を小フラスコから樹脂ケトルに蒸発させ、ＣＭＣスポンジをガス雰囲気で覆う。そのスポンジを４８時間樹脂ケトル内に置いた後、ガスを腐食性トラップに逃し、そのスポンジを取り出して５００ｍｌの水中につける。その酸化ＣＭＣスポンジは水中で不溶である。酸化ＣＭＣスポンジを水で１５分間洗浄し、次に新鮮な水中につけてさらに洗浄する。この酸化ＣＭＣスポンジの洗浄を、その洗浄水のｐＨが３より大きくなるまで繰り返す。その白色酸化カルボキシメチルセルローススポンジを１００％イソプロピルアルコール中に１５分間つけることによって乾燥する。これを合計２回繰り返し、次にそのスポンジを空気乾燥する。その酸化ＣＭＣスポンジは柔軟で適合性があり、また等張性食塩水中で自己の１４倍の重量を吸収する。その酸化ＣＭＣスポンジは０．５Ｎ水酸化ナトリウム中で可溶であり、また、滴定により２６．３％と求められる、そのカルボキシル酸含有量によってキャラクタライズ（特徴付け）される。
【００２６】
酸化カルボキシメチルセルローススポンジの溶液は、上記スポンジ材料を１０ｍｇ／ｍｌの濃度で０．１Ｍの水酸化アンモニウム中で溶解させることによって調製した。その溶液を２時間３７℃でインキュベートし、そして次に、沈殿が生じるまで６ＭのＨＣｌを加えることによって反応を止めた。その沈殿を集め、分子量１０００カットオフのチューブで蒸留水に対して大規模に透析し、次に凍結乾燥して粉末を得た。
【００２７】
その分子量は、ゲル電気泳動により１０００ダルトンと３００００ダルトンに決定された。
【００２８】
実施例４
メチルセルロースを実施例３に述べた手順と類似の手順で酸化し、その酸化材料を２０ｍｇ／ｍｌの濃度で６Ｍ水酸化アンモニウム中で溶解させ、４５分間３７℃でインキュベートすることによって溶液を調製した。その溶液を遠心分離して不溶解材料を除去し、６ＭのＨＣｌを加えることによって溶液からオリゴ糖を沈殿させた。その沈殿を集め、分子量１０００カットオフのチューブで蒸留水に対して大規模に透析した。
【００２９】
その分子量は、ゲル電気泳動により１０００ダルトンと５０００ダルトンの間にあることが決定された。
【００３０】
実施例５
１０ｍｌの容器に１００ｍｇの吸着剤材料を含有したフェニルボロン酸（ＰＢＡ）固相抽出カラム（ボンドエルト，ヴァリアンアソシエーツ（Bond Elut, Varian Associates））を、１０ｍｌのメタノールを用いて活性化し、該カラムを濡らした後、１０ｍｌの０．１Ｍ酢酸により該カラムを適正なｐＨで平衡化した。
【００３１】
ＯＲＣ溶液は、Intercreed（商標）材料の１ｇを６Ｍ水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌ中で溶解させることによって調製した。そのInterceed（商標）材料が完全に溶解した後に、その溶液をｐＨ３．０に酸性化し、沈殿を遠心分離により除去した。その上澄を取り、２ｍｌを上記活性化ＰＢＡカラムに通した。そのカラムを次に０．１Ｍ酢酸２ｍｌと蒸留水４×２ｍｌポーション（部分）とで洗浄して、塩や他の内因性物質をすべて除去した。０．１Ｍ水酸化アンモニウム２×２ｍｌポーション（部分）を用いて、そのカラムからＯＲＣオリゴ糖を溶出させた。それらのポーションをプール（蓄液）し、冷凍し、凍結乾燥して、粉末を得た。その酸化オリゴ糖のイオン交換クロマトグラフィによる分離後、質量スペクトル分析ではその分子量が６００ダルトン乃至１２００ダルトンの範囲にあることを示した。
【００３２】
実施例６
コラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖のスポンジを、以下の方法で調製した。石灰処理したコラーゲン繊維を０．０１のＨＣｌ（ｐＨ３．０）１６０ｍｌ中でスラリー化し、そして実施例２で調製したＯＲＣオリゴ糖の０．１６ｇを加えた。その混合物を１５秒間ホモジェナイズ（均質化）し、ＨＭＤＩを加え（コラーゲンの１０％Ｗ／Ｗ）、そのスラリーをさらに２×１５秒間ホモジェナイズした。そのスラリーを脱気し、２つの９ｃｍ径ペトリ皿に注ぎ入れ、冷凍し、７２時間にわたり−３０℃乃至７０℃で運転する熱勾配(heat ramp）を用いて凍結乾燥した。
【００３３】
次に、このコラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖スポンジを、その血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）結合能について試験した。比較のため、Interceed（商標）布および（上述のように調製したがＯＲＣオリゴ糖を加えていない）単なるコラーゲンスポンジも試験した。それぞれの場合に、試験材料の小区分（Interceed（商標）布のおよそ１ｃｍ２ 正方形、およびスポンジのおよそ１ｃｍ×０．５ｃｍ×０．４ｃｍ区分）の重量を計り、１５０ｍＭ塩化ナトリウム含有１００ｍＭリン酸ナトリウム二塩基性緩衝液（合計量１ｍｌ）中に室温で少なくとも１時間浸した。次に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と共に試料を２時間室温でインキュベートした。次に２５ｎｇのＰＤＧＦを、２％ＢＳＡ含有ＰＢＳ ２５０μｌ中の各試料に加え、次に試料をさらに１時間３７℃でインキュベートした。
【００３４】
次に、各試料を２５０μｌ ＰＢＳで３回洗浄した後、塩化ナトリウム濃度を増加させた。最後に、各試料を４．０Ｍ尿素で洗浄した。当初(original)のＰＤＧＦ調製物および試料材料からの種々の洗浄物のＥＬＩＳＡ分析により、以下の結果が得られた。
【００３５】
表Ｉ：
ＰＤＧＦ−ＡＢの結合
試料 コラーゲン コラーゲン／ＯＲＣ INTERCEED
当初 １００％ １００％ １００％
結合しない ２０．６％ ２２．９％ １５．９％
ＰＢＳ洗浄 １．８％ １１．１％ ７．５％
０．３Ｍ ＮａＣｌ ４．５０％ １２．３％ １．９％
０．５Ｍ ＮａＣｌ ２２．０％ ２２．２％ ７．７％
１．０Ｍ ＮａＣｌ １１．９％ １５．２％ １１．２％
２．０Ｍ ＮａＣｌ ３．０％ ５．１％ ７．８％
３．０Ｍ ＮａＣｌ ０％ ４．３％ ３．４％
４．０Ｍ 尿素 ０％ ４．０％ ９．７％
回収率 ６３．８％ ９７．１％ ６４．６％
【００３６】
この結果は、３つの試験材料が全て類似の量のＰＤＧＦを結合するが、コラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖スポンジから最も高収率でＰＤＧＦを回収できることを示す。
【００３７】
結合特性もまた、個々の比較材料に比べて、コラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖材料が特有に異っている。これらの観察結果は、該複合体が特有のＰＤＧＦ結合を有し、これを成長因子の外因性の結合および内因性の結合と放出の双方のために適切に利用し得ることを示す。
本発明の具体的な実施態様は、以下の通りである。
１．平均分子量が１０００ダルトン乃至５００００ダルトンの範囲にある酸化オリゴ糖組成物。
２．酸化された細菌性もしくは植物性多糖から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
３．酸化された動物性多糖または酸化された合成多糖から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
４．酸化セルロースまたは酸化セルロース誘導体から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
５．デキストラン、ゲランゴム、キサンタンゴム、寒天、デンプン、こんにゃく、カラゲナン、グアールゴム、ペクチン、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、酢酸セルロース、メチルセルロース、リン酸セルロース、エチルセルロースまたはイヌリンの酸化誘導体から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
６．平均分子量が５０００ダルトン乃至２５０００ダルトンの範囲にある実施態様１乃至実施態様５のいずれかに記載のオリゴ糖組成物。
７．実施態様１乃至実施態様６のいずれかに記載の酸化オリゴ糖組成物を含む、局所、経口もしくは非経口投与用医薬組成物。
８．酸化オリゴ糖は薬理活性なペプチドもしくはタンパク質に結合されている実施態様７に記載の医薬組成物。
９．ペプチドもしくはタンパク質は成長因子である実施態様８に記載の医薬組成物。
１０．創傷ドレッシングとして、あるいは創傷ドレッシングにおいて用いる組成物を製造するための実施態様１乃至実施態様６のいずれかに記載の酸化オリゴ糖組成物の使用。
１１．薬理活性薬剤が前記創傷ドレッシング全体にわたってほぼ均一に分配されている実施態様８に記載の使用。
１２．前記薬理活性薬剤は抗生物質、防腐剤またはタンパク質成長因子である実施態様１１に記載の使用。
１３．（ａ）平均分子量が少なくとも５０００の酸化多糖を、前記多糖の部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度で、アルカリ性水溶液で処理する工程、および
（ｂ）その結果生じる酸化オリゴ糖を前記溶液から回収する工程を含む、酸化オリゴ糖の製造方法。
１４．アルカリ性溶液はアルカリ金属の水酸化物または炭酸塩である実施態様１３に記載の方法。
１５．酸化オリゴ糖は、酸を用いてｐＨを７以下に調整することにより前記溶液から回収される実施態様１３または実施態様１４に記載の方法。
１６．酸は濃鉱酸である実施態様１５に記載の方法。
１７．実施態様１３乃至実施態様１６のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、
（ａ）酸化オリゴ糖のアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液のｐＨを下げて前記酸化オリゴ糖を沈殿させる工程を含む方法。
１８．実施態様１３乃至実施態様１６のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、
（ａ）酸化オリゴ糖のアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液から溶媒を除去する工程を含む方法。
１９．溶媒は工程（ｃ）において凍結乾燥により除去される実施態様１８に記載の方法。
【開示の内容】
【０００１】
この発明は酸化再生セルロース（oxidized regenerated cellulose：ＯＲＣ）のオリゴ糖などの酸化オリゴ糖（oxidized oligosaccharides）に関する。この発明は創傷ドレッシング（wound dressings）ならびに他の医療用途および製薬用途における酸化オリゴ糖の使用にも関し、また酸化オリゴ糖を製造する方法にも関する。
【０００２】
ＯＲＣは長年にわたり製造され、止血を行うために、および手術後の癒着を防止するためのバリア材として、医療上使用されている。ＯＲＣの鍵となる特徴は体内に移植された時にそれが吸収されやすいことであるが、これに対し、セルロースはそうでない。ＯＲＣは該高分子の加水分解開裂により吸収されて小さなオリゴ糖を生じ、これが代謝され体から排出される。セルロースの重量につき１０％乃至２１％のカルボキシル基を生じるセルロースの酸化によって、移植後２週間乃至３週間以内にその材料がほぼ完全に吸収されることが可能となる。
【０００３】
ＯＲＣは、米国特許公報第３１２２４７９号に記載されているように四酸化二窒素などの酸化剤にセルロースを曝すことによって製造される。セルロース材料の物理的形態は重要でない。例えば、セルロースのフィルム、紙、スポンジ、布地は全て酸化されてＯＲＣを生じる。しかし、商業的に好適な材料は織った布または編んだ布である。編布の形態のＯＲＣは吸収性止血性材料として用いるためにSURGICEL（商標）により入手可能であり、またＯＲＣは癒着バリアとして用いるためにINTERCEED（商標）により入手可能である。
【０００４】
セルロース以外の多糖も、酸化されて医療上有用な止血性材料を生じ得る。このような他の多糖には、微生物性多糖、例えば、デキストラン、ゲラン(gellan）ゴム、キサンタン(xanthan）ゴム；植物由来の多糖、例えば、寒天、デンプン、こんにゃく、カラゲナン(carrageenan)、グアール(guar）ゴム、イヌリン、ペクチン；および多糖誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、酢酸セルロース、メチルセルロース、エチルセルロースがある。
【０００５】
創傷ドレッシングとして使用するため、ＯＲＣを他の材料と組み合わせることが提案されている。例えば、米国特許公報第２５１７７７２号（Doubら）はトロンビンで含浸したＯＲＣより形成したドレッシングを開示している。しかし、ＯＲＣはかなり酸性である。十分に水で飽和したＯＲＣ布片の表面ｐＨは１．７程度に低いことがある。多くのタンパク質薬剤、例えばトロンビン等は、酸の影響を非常に受け易く、このようなマトリックスと接触して直ぐに不活性化される。従って、Doubらはトロンビンで含浸する前にＯＲＣを中和すべきことを教示している。酢酸カルシウム、炭酸ナトリウム、アンモニアおよびアルコール性エチルアミンが適切な中和剤の例として与えられているが、Doubらは、溶液またはゲル化と分解の理由により、水中に入れた時にＯＲＣがその繊維性を失うような程度までＯＲＣを中和すべきでないことを警告している。
【０００６】
欧州特許公開第０４３７０９５号は、ＯＲＣ布地を中和するために炭酸ナトリウムの水溶液を使用する結果、部分的にゲル化し、その当初のサイズから歪み、非常に弱く、ほとんど一体性がない布地が生じることを開示している。その布地の引張強度は非常に低くて、実際の用途、例えば止血性材料等に向かないと記載されている。強塩基性の水酸化ナトリウム水溶液、水酸化アンモニウム水溶液の使用により、同様の結果が得られると記載されている。欧州特許公開第０４３７０９５号は従って、酸で酸化したセルロース材料を、塩化物の存在しない弱酸の僅かに塩基性の塩のアルコールと水の溶液に接触させて、セルロース材料のｐＨを５と８の間に上げる工程；そのｐＨを上げたセルロース材料をアルコールで洗浄して、余分な塩と水を除去する工程；およびそのセルロース材料を乾燥して、アルコールを除去する工程を含む、貯蔵安定性、非刺激性で治療効果のある中和した酸化セルロース製品の製造方法を教示している。
【０００７】
さて、ＯＲＣおよび他の酸化多糖は穏やかなアルカリ性条件下で部分加水分解して多くの医療上有用な特性を有するオリゴ糖を生じ得ることが、今、見出された。
【０００８】
従って、本発明は平均分子量が１０００ダルトン乃至５００００ダルトンの範囲にある酸化オリゴ糖を含む、局所、経口もしくは非経口投与用医薬組成物を提供するものである。
【０００９】
特に、本発明の酸化オリゴ糖組成物は治療上有用な薬剤を結合し、次にそのような結合薬剤を高収率で放出することができる。したがって、本発明の酸化オリゴ糖医薬組成物は、そのような薬剤を創傷部位に送達するために、例えば創傷ドレッシングにおいて使用することができる。酸化オリゴ糖により結合される治療上有用な薬剤には、薬理活性なペプチド及びタンパク質、好ましくは成長因子、例えば、ＰＤＧＦ ＡＢ，ＰＤＧＦ ＢＢ，ＴＧＦ−β１，ＴＧＦ−β２，ＴＧＦ−β３，塩基性ＦＧＦ，酸性ＦＧＦ、および場合によりＥＧＦおよびＴＧＦ−αがある。
【００１０】
いかなる理論にも拘束されることを望まないが、酸化オリゴ糖のアニオン性カルボキシレート基がペプチド及びタンパク質のカチオン性アミノ基と複合体形成する(complex) と考えられる。アニオン性の基を有する治療活性薬剤との複合体形成は、例えば、イオン性架橋剤としてＣａ２＋またはＺｎ２＋のような多価金属イオンを使用することによっても容易に達成することができる。
【００１１】
本発明の医薬組成物の別の利点は、それらがタンパク質等の他の材料や他の多糖と親密に組み合わさって（化学的に架橋するか架橋しないかに拘わらない）、新規な特性を有する組成物を形成し得ることである。例えば、酸化オリゴ糖は、ヒアルロン酸、キトサンまたはアルギン酸塩（特にアルギン酸ナトリウム、アルギン酸カルシウムまたはアルギン酸ナトリウム／カルシウム混合物）と組み合わさって新規な止血性組成物を形成し得る。あるいは、酸化オリゴ糖と他のオリゴ糖、多糖またはタンパク質との複合体は、種々の治療薬剤、例えば防腐剤、抗生物質、タンパク質成長因子、抗炎症剤、鎮痛剤、アプロチニン等のプロテイナーゼインヒビター、またはヒドロキサム酸に対し、調節された放出マトリックスとして使用し得る。本発明の組成物の酸化オリゴ糖は溶液中にある間、所望の治療薬剤と組み合わせられ（該治療薬剤は溶液中または懸濁液中にある）、次に、その酸化オリゴ糖は適切な手段により溶液から取り出されて、該治療薬剤がほぼ均一に分配された材料を生じる。あるいは、溶媒を、例えば凍結乾燥により除去してもよい。
【００１２】
酸化オリゴ糖はまた、三次元構造の形成を可能とするように架橋結合することもできる。例えば、酸化オリゴ糖は非常に低い濃度のペプシン可溶化コラーゲンが添加された水に溶解することができる。次にカルボジイミドを架橋剤として添加すれば、該コラーゲンはオリゴ糖間の架橋基として作用し、そのため凍結乾燥することにより三次元構造を得ることができる。
【００１３】
好ましくは、本発明の組成物における酸化オリゴ糖の分子量は少なくとも１０００ダルトンであり、一般的に１０００００よりも小さい。分子量は５０００ダルトン乃至３００００ダルトンよりも小さいことが最も通常であろう。（本発明における酸化オリゴ糖は異なるサイズの分子が混在した集団を形成することが理解されよう。従って、本願における特定の分子量範囲を有する酸化オリゴ糖への言及は、分子の少なくとも９０重量％がその特定の範囲に該当することを意味する。）
【００１４】
一つの実施形態において、本発明による組成物において使用するためのオリゴ糖は、不溶性の酸化多糖から誘導され、中性およびアルカリ性ｐＨで可溶であるが酸性ｐＨでは不溶であるような分子量のものである。そのようなオリゴ糖は、単にｐＨを下げてそれらを沈殿させるだけで、溶液から容易に回収することができる。あるいは、他の不揮発性成分を含有しない溶液に移し、その溶媒を蒸発させることによって、酸化オリゴ糖を溶液から回収することもできる。例えば、酸化オリゴ糖は、イオン交換固相抽出カラム（例えば、予めメタノールで活性化し希酢酸で平衡化したフェニルボロン酸固相カラム）を使用し、次に希薄な（例えば０．１Ｍ）水酸化アンモニウム水溶液で溶出することにより、単離することができる。
【００１５】
好ましくは、本発明の組成物において使用される酸化オリゴ糖は５重量％乃至２５重量％のカルボキシル含有量を有し、より好ましくは８重量％乃至１４重量％のカルボキシル含有量を有する。このオリゴ糖のカルボキシル含有量は、以下のようにして決定する。
【００１６】
酸化オリゴ糖の試料（約０．２ｇ）を０．５Ｍ水酸化ナトリウム（５ｍｌ）に溶解し、２，３滴の０．１％フェノールフタレイン指示薬溶液を加える。余分な水酸化ナトリウムは、０．１ＭのＨＣｌでフェノールフタレイン終点（赤から透明）まで逆滴定される。５ｍｌの０．１Ｍ水酸化ナトリウムを０．１ＭのＨＣｌで滴定することにより、ブランク値を決定する。カルボキシル含有量の値は、以下の式を用いて計算される。
Ｃ＝ ４．５×（Ｂ−Ｓ）×Ｍ
Ｗ
式中、Ｃ＝カルボキシル含有量％
Ｂ＝ブランクを滴定するための標準ＨＣｌの量（ｍｌ）
Ｓ＝試料を滴定するための標準ＨＣｌの量（ｍｌ）
Ｍ＝標準ＨＣｌのモル濃度
Ｗ＝試料の乾燥重量（ｇ）
（４．５＝カルボキシルのミリ当量重量×１００）
【００１７】
本発明はまた、分子量が少なくとも５００００（通常は少なくとも１０００００、例えば３００００より大きい）の酸化セルロースを、前記酸化セルロースの部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度でアルカリ性水溶液で処理すること、および次にその結果生じる酸化セルロースを例えばｐＨを７以下に調整することにより、溶液から回収することを含む酸化セルロースの製造方法を提供する。このアルカリ性溶液はアルカリ金属の水酸化物または炭酸塩、例えば、水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウムの溶液であることが好都合であるが、他のアルカリ（例えば水酸化アンモニウム水溶液）も用いることができる。この処理条件（特にｐＨ）はその結果生じる生成物について所望される分子量範囲に依存することが理解されるだろう。しかしながら、適当な条件は任意の特定の場合において日常的実験により容易に決定することができる。例示すれば、酸化再生セルロースは、１Ｍ乃至８Ｍの水酸化ナトリウム中、０℃乃至５０℃の温度で５分間乃至１２０分間で加水分解されて分子量範囲１０００ダルトン乃至２００００ダルトンのオリゴ糖を生じることが可能であり、あるいは０．０１Ｍ乃至１Ｍの炭酸ナトリウム中、０℃乃至５０℃の温度で１０時間乃至１０日間で分子量範囲７０００ダルトン乃至５００００ダルトンのオリゴ糖を生じることが可能である。
【００１８】
加水分解反応は、その溶液がおよそ中性になるまで鉱酸のような酸を加えることによって止めることができる。濃塩酸を用いるのが好都合である。
【００１９】
本発明を以下の実施例により、さらに説明する。
【００２０】
実施例１
ＯＲＣの溶液は、Surgicel（商標）の布を２０ｍｇ／ｍｌの濃度で６Ｍの水酸化ナトリウム中で溶解させることによって調製した。その溶液を４５分間３７℃でインキュベート（保温）し、その後６ＭのＨＣｌを、沈殿が生じｐＨがアルカリ性からｐＨ７以下へ変化するまで加えることによって、反応を止めた。その沈殿を一晩放置し、次に余分な液を除去した。その沈殿を分子量１０００カットオフのチューブで水に対して透析し、次に凍結乾燥して粉末を得た。
【００２１】
ゲル電気泳動により、および高性能液体クロマトグラフィにより決定された、そのオリゴ糖の分子サイズは、およそ１０００ダルトン乃至１５０００ダルトンにわたる範囲を示した。
【００２２】
実施例２
ＯＲＣの溶液は、Surgicel（商標）の布を１０ｍｇ／ｍｌの濃度で０．１Ｍの炭酸ナトリウム中で溶解させることによって調製した。全てのＯＲＣが溶解し終えるまで、この溶液を２日間乃至３日間３７℃でインキュベートした。沈殿が生じｐＨがアルカリ性からｐＨ７以下へ変化するまで、６ＭのＨＣｌを加えることによって反応を止めた。この沈殿を一晩静置し、次に余分な液を除去した。この沈殿を分子量１０００カットオフのチューブで水に対して透析し、次に凍結乾燥して粉末を得た。
【００２３】
上述のようにして決定された、分子サイズは、およそ１０００ダルトン乃至３００００ダルトンの範囲を示した。
【００２４】
実施例３
酸化カルボキシメチルセルロースのスポンジを、以下のようにして調製した。５００ｇの水に、アクアロン社（Aqualon Corporation）からの７．５ｇのカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を攪拌しながら加える。この高分子が溶解した時に、溶液を一晩脱気し、トラップ（捕捉）した気泡を除去する。この溶液を３×４×1／4インチのトレイに注ぎ入れ、凍結乾燥機で２４時間凍結乾燥する。この手順により、柔軟で白色で水溶性のＣＭＣスポンジが得られる。
【００２５】
このＣＭＣスポンジの酸化は、８ｇの四酸化二窒素を含有した小フラスコが付いた樹脂ケトル内に、５．８ｇの乾燥スポンジを置くことによって行う。この四酸化二窒素を小フラスコから樹脂ケトルに蒸発させ、ＣＭＣスポンジをガス雰囲気で覆う。そのスポンジを４８時間樹脂ケトル内に置いた後、ガスを腐食性トラップに逃し、そのスポンジを取り出して５００ｍｌの水中につける。その酸化ＣＭＣスポンジは水中で不溶である。酸化ＣＭＣスポンジを水で１５分間洗浄し、次に新鮮な水中につけてさらに洗浄する。この酸化ＣＭＣスポンジの洗浄を、その洗浄水のｐＨが３より大きくなるまで繰り返す。その白色酸化カルボキシメチルセルローススポンジを１００％イソプロピルアルコール中に１５分間つけることによって乾燥する。これを合計２回繰り返し、次にそのスポンジを空気乾燥する。その酸化ＣＭＣスポンジは柔軟で適合性があり、また等張性食塩水中で自己の１４倍の重量を吸収する。その酸化ＣＭＣスポンジは０．５Ｎ水酸化ナトリウム中で可溶であり、また、滴定により２６．３％と求められる、そのカルボキシル酸含有量によってキャラクタライズ（特徴付け）される。
【００２６】
酸化カルボキシメチルセルローススポンジの溶液は、上記スポンジ材料を１０ｍｇ／ｍｌの濃度で０．１Ｍの水酸化アンモニウム中で溶解させることによって調製した。その溶液を２時間３７℃でインキュベートし、そして次に、沈殿が生じるまで６ＭのＨＣｌを加えることによって反応を止めた。その沈殿を集め、分子量１０００カットオフのチューブで蒸留水に対して大規模に透析し、次に凍結乾燥して粉末を得た。
【００２７】
その分子量は、ゲル電気泳動により１０００ダルトンと３００００ダルトンに決定された。
【００２８】
実施例４
メチルセルロースを実施例３に述べた手順と類似の手順で酸化し、その酸化材料を２０ｍｇ／ｍｌの濃度で６Ｍ水酸化アンモニウム中で溶解させ、４５分間３７℃でインキュベートすることによって溶液を調製した。その溶液を遠心分離して不溶解材料を除去し、６ＭのＨＣｌを加えることによって溶液からオリゴ糖を沈殿させた。その沈殿を集め、分子量１０００カットオフのチューブで蒸留水に対して大規模に透析した。
【００２９】
その分子量は、ゲル電気泳動により１０００ダルトンと５０００ダルトンの間にあることが決定された。
【００３０】
実施例５
１０ｍｌの容器に１００ｍｇの吸着剤材料を含有したフェニルボロン酸（ＰＢＡ）固相抽出カラム（ボンドエルト，ヴァリアンアソシエーツ（Bond Elut, Varian Associates））を、１０ｍｌのメタノールを用いて活性化し、該カラムを濡らした後、１０ｍｌの０．１Ｍ酢酸により該カラムを適正なｐＨで平衡化した。
【００３１】
ＯＲＣ溶液は、Intercreed（商標）材料の１ｇを６Ｍ水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌ中で溶解させることによって調製した。そのInterceed（商標）材料が完全に溶解した後に、その溶液をｐＨ３．０に酸性化し、沈殿を遠心分離により除去した。その上澄を取り、２ｍｌを上記活性化ＰＢＡカラムに通した。そのカラムを次に０．１Ｍ酢酸２ｍｌと蒸留水４×２ｍｌポーション（部分）とで洗浄して、塩や他の内因性物質をすべて除去した。０．１Ｍ水酸化アンモニウム２×２ｍｌポーション（部分）を用いて、そのカラムからＯＲＣオリゴ糖を溶出させた。それらのポーションをプール（蓄液）し、冷凍し、凍結乾燥して、粉末を得た。その酸化オリゴ糖のイオン交換クロマトグラフィによる分離後、質量スペクトル分析ではその分子量が６００ダルトン乃至１２００ダルトンの範囲にあることを示した。
【００３２】
実施例６
コラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖のスポンジを、以下の方法で調製した。石灰処理したコラーゲン繊維を０．０１のＨＣｌ（ｐＨ３．０）１６０ｍｌ中でスラリー化し、そして実施例２で調製したＯＲＣオリゴ糖の０．１６ｇを加えた。その混合物を１５秒間ホモジェナイズ（均質化）し、ＨＭＤＩを加え（コラーゲンの１０％Ｗ／Ｗ）、そのスラリーをさらに２×１５秒間ホモジェナイズした。そのスラリーを脱気し、２つの９ｃｍ径ペトリ皿に注ぎ入れ、冷凍し、７２時間にわたり−３０℃乃至７０℃で運転する熱勾配(heat ramp）を用いて凍結乾燥した。
【００３３】
次に、このコラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖スポンジを、その血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）結合能について試験した。比較のため、Interceed（商標）布および（上述のように調製したがＯＲＣオリゴ糖を加えていない）単なるコラーゲンスポンジも試験した。それぞれの場合に、試験材料の小区分（Interceed（商標）布のおよそ１ｃｍ２ 正方形、およびスポンジのおよそ１ｃｍ×０．５ｃｍ×０．４ｃｍ区分）の重量を計り、１５０ｍＭ塩化ナトリウム含有１００ｍＭリン酸ナトリウム二塩基性緩衝液（合計量１ｍｌ）中に室温で少なくとも１時間浸した。次に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と共に試料を２時間室温でインキュベートした。次に２５ｎｇのＰＤＧＦを、２％ＢＳＡ含有ＰＢＳ ２５０μｌ中の各試料に加え、次に試料をさらに１時間３７℃でインキュベートした。
【００３４】
次に、各試料を２５０μｌ ＰＢＳで３回洗浄した後、塩化ナトリウム濃度を増加させた。最後に、各試料を４．０Ｍ尿素で洗浄した。当初(original)のＰＤＧＦ調製物および試料材料からの種々の洗浄物のＥＬＩＳＡ分析により、以下の結果が得られた。
【００３５】
表Ｉ：
ＰＤＧＦ−ＡＢの結合
試料 コラーゲン コラーゲン／ＯＲＣ INTERCEED
当初 １００％ １００％ １００％
結合しない ２０．６％ ２２．９％ １５．９％
ＰＢＳ洗浄 １．８％ １１．１％ ７．５％
０．３Ｍ ＮａＣｌ ４．５０％ １２．３％ １．９％
０．５Ｍ ＮａＣｌ ２２．０％ ２２．２％ ７．７％
１．０Ｍ ＮａＣｌ １１．９％ １５．２％ １１．２％
２．０Ｍ ＮａＣｌ ３．０％ ５．１％ ７．８％
３．０Ｍ ＮａＣｌ ０％ ４．３％ ３．４％
４．０Ｍ 尿素 ０％ ４．０％ ９．７％
回収率 ６３．８％ ９７．１％ ６４．６％
【００３６】
この結果は、３つの試験材料が全て類似の量のＰＤＧＦを結合するが、コラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖スポンジから最も高収率でＰＤＧＦを回収できることを示す。
【００３７】
結合特性もまた、個々の比較材料に比べて、コラーゲン／ＯＲＣオリゴ糖材料が特有に異っている。これらの観察結果は、該複合体が特有のＰＤＧＦ結合を有し、これを成長因子の外因性の結合および内因性の結合と放出の双方のために適切に利用し得ることを示す。
本発明の具体的な実施態様は、以下の通りである。
１．平均分子量が１０００ダルトン乃至５００００ダルトンの範囲にある酸化オリゴ糖組成物。
２．酸化された細菌性もしくは植物性多糖から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
３．酸化された動物性多糖または酸化された合成多糖から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
４．酸化セルロースまたは酸化セルロース誘導体から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
５．デキストラン、ゲランゴム、キサンタンゴム、寒天、デンプン、こんにゃく、カラゲナン、グアールゴム、ペクチン、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、酢酸セルロース、メチルセルロース、リン酸セルロース、エチルセルロースまたはイヌリンの酸化誘導体から誘導された実施態様１に記載のオリゴ糖組成物。
６．平均分子量が５０００ダルトン乃至２５０００ダルトンの範囲にある実施態様１乃至実施態様５のいずれかに記載のオリゴ糖組成物。
７．実施態様１乃至実施態様６のいずれかに記載の酸化オリゴ糖組成物を含む、局所、経口もしくは非経口投与用医薬組成物。
８．酸化オリゴ糖は薬理活性なペプチドもしくはタンパク質に結合されている実施態様７に記載の医薬組成物。
９．ペプチドもしくはタンパク質は成長因子である実施態様８に記載の医薬組成物。
１０．創傷ドレッシングとして、あるいは創傷ドレッシングにおいて用いる組成物を製造するための実施態様１乃至実施態様６のいずれかに記載の酸化オリゴ糖組成物の使用。
１１．薬理活性薬剤が前記創傷ドレッシング全体にわたってほぼ均一に分配されている実施態様８に記載の使用。
１２．前記薬理活性薬剤は抗生物質、防腐剤またはタンパク質成長因子である実施態様１１に記載の使用。
１３．（ａ）平均分子量が少なくとも５０００の酸化多糖を、前記多糖の部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度で、アルカリ性水溶液で処理する工程、および
（ｂ）その結果生じる酸化オリゴ糖を前記溶液から回収する工程を含む、酸化オリゴ糖の製造方法。
１４．アルカリ性溶液はアルカリ金属の水酸化物または炭酸塩である実施態様１３に記載の方法。
１５．酸化オリゴ糖は、酸を用いてｐＨを７以下に調整することにより前記溶液から回収される実施態様１３または実施態様１４に記載の方法。
１６．酸は濃鉱酸である実施態様１５に記載の方法。
１７．実施態様１３乃至実施態様１６のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、
（ａ）酸化オリゴ糖のアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液のｐＨを下げて前記酸化オリゴ糖を沈殿させる工程を含む方法。
１８．実施態様１３乃至実施態様１６のいずれかに記載の組成物の製造方法であって、
（ａ）酸化オリゴ糖のアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液から溶媒を除去する工程を含む方法。
１９．溶媒は工程（ｃ）において凍結乾燥により除去される実施態様１８に記載の方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）平均分子量が少なくとも５０００の酸化セルロースを、前記酸化セルロースの部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度で、アルカリ性水溶液で処理する工程、および
（ｂ）その結果生じる酸化セルロースを前記溶液から回収する工程を含む酸化セルロースの製造方法。
【請求項２】
アルカリ性溶液はアルカリ金属の水酸化物または炭酸塩である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
酸化セルロースは、酸を用いてｐＨを７以下に調整することにより前記溶液から回収される請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
酸は濃鉱酸である請求項３に記載の方法。
【請求項５】
請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法であって、
（ａ）前記酸化セルロースのアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液のｐＨを下げて前記酸化セルロースを沈殿させる工程を含む方法。
【請求項６】
請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法であって、
（ａ）前記酸化セルロースのアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液から溶媒を除去する工程を含む方法。
【請求項７】
溶媒は工程（ｃ）において凍結乾燥により除去される請求項６に記載の方法。
【請求項１】
（ａ）平均分子量が少なくとも５０００の酸化セルロースを、前記酸化セルロースの部分加水分解を生じさせるのに充分な時間、或る温度で、アルカリ性水溶液で処理する工程、および
（ｂ）その結果生じる酸化セルロースを前記溶液から回収する工程を含む酸化セルロースの製造方法。
【請求項２】
アルカリ性溶液はアルカリ金属の水酸化物または炭酸塩である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
酸化セルロースは、酸を用いてｐＨを７以下に調整することにより前記溶液から回収される請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
酸は濃鉱酸である請求項３に記載の方法。
【請求項５】
請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法であって、
（ａ）前記酸化セルロースのアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液のｐＨを下げて前記酸化セルロースを沈殿させる工程を含む方法。
【請求項６】
請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載の方法であって、
（ａ）前記酸化セルロースのアルカリ性溶液を供給する工程、
（ｂ）前記アルカリ性溶液に治療活性薬剤を溶解または分散させる工程、および
（ｃ）前記溶液または分散液から溶媒を除去する工程を含む方法。
【請求項７】
溶媒は工程（ｃ）において凍結乾燥により除去される請求項６に記載の方法。
【公開番号】特開２００９−１０２６４５（Ｐ２００９−１０２６４５Ａ）
【公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３１４２２８（Ｐ２００８−３１４２２８）
【出願日】平成２０年１２月１０日（２００８．１２．１０）
【分割の表示】特願平１０−５０３９１３の分割
【原出願日】平成９年６月２７日（１９９７．６．２７）
【出願人】（５９８０１０９５３）ジョンソン・アンド・ジョンソン・メディカル・リミテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】Ｅｒｓｋｉｎｅ Ｈｏｕｓｅ，６８−７３ Ｑｕｅｅｎ Ｓｔｒｅｅｔ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ ＥＨ２ ４ＮＨ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１０日（２００８．１２．１０）
【分割の表示】特願平１０−５０３９１３の分割
【原出願日】平成９年６月２７日（１９９７．６．２７）
【出願人】（５９８０１０９５３）ジョンソン・アンド・ジョンソン・メディカル・リミテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｔｄ．
【住所又は居所原語表記】Ｅｒｓｋｉｎｅ Ｈｏｕｓｅ，６８−７３ Ｑｕｅｅｎ Ｓｔｒｅｅｔ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ ＥＨ２ ４ＮＨ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ
【Ｆターム（参考）】
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