本発明は、コレステロール結合ドメインまたはその一部の置換または内部欠失を含む変異リステリオリジンＯ（ＬＬＯ）タンパク質またはその断片を含む組換えタンパク質またはペプチドと、同一のものを含む融合タンパク質またはペプチドと、同一のものをコードするヌクレオチド分子と、同一のものを含むかコードするワクチンベクターとを提供する。また、本発明は、目的のペプチドに対する免疫応答を誘導するために、本発明の組換えタンパク質、ペプチド、ヌクレオチド分子、およびワクチンベクターを利用する方

【特許請求の範囲】
【請求項１】
リステオロジンＯ（ＬＬＯ）タンパク質またはＮ末端断片を含む組換えタンパク質であって、
前記リステオロジンＯ（ＬＬＯ）タンパク質またはＮ末端断片がコレステロール結合ドメイン（ＣＢＤ）に突然変異を有し、前記突然変異が、
ａ．１〜５０アミノ酸非ＬＬＯペプチドから配列番号１８に記載される前記ＣＢＤの１〜５０アミノ酸ペプチドへの置換、
ｂ．配列番号３７の残基Ｃ４８４、Ｗ４９１、もしくはＷ４９２またはこれらの組み合わせの突然変異、
あるいは
ｃ．配列番号１８に記載される前記ＣＢＤの１〜５０アミノ酸ペプチドの欠失を含み、
前記組換えタンパク質の溶血作用が野生型のＬＬＯと比較して１００倍を上回る減少を示す、組換えタンパク質。
【請求項２】
請求項１の組換えタンパク質であって、
前記ＬＬＯタンパク質またはＮ末端ＬＬＯ断片がそのシグナルペプチド配列の欠失を含む、組換えタンパク質。
【請求項３】
請求項１の組換えタンパク質であって、
前記ＬＬＯタンパク質またはＮ末端ＬＬＯ断片がそのシグナルペプチド配列を含む、組換えタンパク質。
【請求項４】
請求項１の組換えタンパク質であって、
前記ＬＬＯタンパク質の配列が配列番号３７に記載されている、組換えタンパク質。
【請求項５】
請求項１の組換えタンパク質であって、
前記組換えタンパク質が目的の異種ペプチドを含む、組換えタンパク質。
【請求項６】
請求項５の組換えタンパク質であって、
前記非ＬＬＯペプチドが前記目的の異種ペプチドを含む、組換えタンパク質。
【請求項７】
請求項５の組換えタンパク質であって、
前記目的の異種ペプチドが抗原ペプチドである、組換えタンパク質。
【請求項８】
請求項７の組換えタンパク質であって、
前記抗原ペプチドが前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）ペプチドである、組換えタンパク質。
【請求項９】
請求項７の組換えタンパク質であって、
前記抗原ペプチドがヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）Ｅ７ペプチドである、組換えタンパク質。
【請求項１０】
請求項７の組換えタンパク質であって、
前記抗原ペプチドがＨｅｒ／２−ｎｅｕペプチドである、組換えタンパク質。
【請求項１１】
請求項７の組換えタンパク質であって、
前記抗原ペプチドが、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）−１６−Ｅ６、ＨＰＶ−１６−Ｅ７、ＨＰＶ−１８−Ｅ６、ＨＰＶ−１８−Ｅ７、前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、角質層キモトリプシン様酵素（ＳＣＣＥ）抗原、ウィルムス腫瘍抗原１（ＷＴ−１）、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、プロテイナーゼ３、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ２）、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、滑膜肉腫、Ｘ（ＳＳＸ）−２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＭＡＧＥ−Ａ、インターロイキン−１３受容体アルファ（ＩＬ１３−Ｒアルファ）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、スルビビン、ＧＰ１００、テスチシン、ＮＹ−ＥＳＯ−１、またはＢ細胞受容体（ＢＣＲ）である、組換えタンパク質。
【請求項１２】
請求項１の組換えタンパク質とアジュバントとを含むワクチン。
【請求項１３】
請求項１２のワクチンであって、
前記アジュバントが、顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）タンパク質、ＧＭ−ＧＳＦタンパク質をコードするヌクレオチド分子、サポニンＱＳ２１、モノホスホリル脂質Ａ、または非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、ワクチン。
【請求項１４】
請求項１の組換えタンパク質と目的の異種ペプチドとを含む組成物であって、
前記組換えタンパク質が前記目的の異種ペプチドに共有結合していない、組成物。
【請求項１５】
請求項１４の組成物とアジュバントとを含むワクチン。
【請求項１６】
請求項１５のワクチンであって、
前記アジュバントが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）タンパク質、ＧＭ−ＧＳＦタンパク質をコードするヌクレオチド分子、サポニンＱＳ２１、モノホスホリル脂質Ａ、または非メチル化ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを含む、ワクチン。
【請求項１７】
請求項１の組換えタンパク質をコードする組換えワクチンベクター。
【請求項１８】
請求項１の組換えタンパク質をコードするヌクレオチド分子。
【請求項１９】
請求項１８のヌクレオチド分子とアジュバントを含むワクチン。
【請求項２０】
請求項１の組換えタンパク質を含む組換えリステリア菌株。
【請求項２１】
被験体の免疫応答を誘導する方法であって、
前記被験体に請求項７の組換えタンパク質を投与することで、前記抗原ペプチドに対する免疫応答を誘導すること、を含む方法。
【請求項２２】
被験体の免疫応答を誘導する方法であって、
前記被験体に請求項１４の組成物を投与することで、前記目的の異種ペプチドに対する免疫応答を誘導すること、を含む方法。
【請求項２３】
被験体の免疫応答を誘導する方法であって、
前記被験体に請求項１７の組換えワクチンベクターを投与することを含み、
前記組換えタンパク質の前記非ＬＬＯペプチドが目的の抗原ペプチドを含むことで、目的の前記抗原ペプチドに対する免疫応答を誘導する、方法。
【請求項２４】
被験体の免疫応答を誘導する方法であって、
前記被験体に請求項２０の組換えリステリア菌株を投与することを含み、
前記組換えタンパク質の前記非ＬＬＯペプチドが目的の抗原ペプチドを含むことで、目的の前記抗原ペプチドに対する免疫応答を誘導する、方法。
【請求項２５】
卵巣メラノーマ細胞および肺癌細胞から選択されるＮＹ−ＥＳＯ−１発現癌細胞に対する被験体の免疫応答を誘導する方法であって、
前記被験体に請求項８の組換えタンパク質を投与することで、ＮＹ−ＥＳＯ−１発現癌細胞に対する免疫応答を誘導するステップを含む、方法。
【請求項２６】
被験体の卵巣黒色腫および肺癌腫から選択されるＮＹ−ＥＳＯ−１発現腫瘍を処置、阻害、または抑制する方法であって、
前記被験体に請求項８の組換えタンパク質を投与することで、ＮＹ−ＥＳＯ−１発現腫瘍を処置、阻害、または抑制するステップを含む、方法。
【請求項２７】
子宮頸癌細胞および頭頸部癌細胞から選択されるＨＰＶＥ７発現癌細胞に対する被験体の免疫応答を誘導する方法であって、
前記被験体に請求項９の組換えタンパク質を投与することで、子宮頸癌細胞および頭頸部癌細胞から選択されるＨＰＶＥ７発現癌細胞に対する免疫応答を誘導するステップを含む、方法。
【請求項２８】
被験体の子宮頸癌腫および頭頸部癌腫物から選択されるＨＰＶＥ７発現腫瘍を処置、阻害、または抑制する方法であって、
前記被験体に請求項９の組換えタンパク質を投与することで、前記被験体の子宮頸癌腫および頭頸部癌腫物から選択されるＨＰＶＥ７発現腫瘍を処置、阻害、または抑制するステップを含む、方法。
【請求項２９】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）発現リンパ腫に対する被験体の免疫応答を誘導する方法であって、
前記被験体に請求項１０の組換えタンパク質を投与することで、ＢＣＲ発現リンパ腫に対する免疫応答を誘導するステップを含む、方法。
【請求項３０】
被験体のＢ細胞受容体（ＢＣＲ）発現リンパ腫を処置、阻害、または抑制する方法であって、
前記被験体に請求項１０の組換えタンパク質を投与することで、被験体のＢ細胞受容体（ＢＣＲ）発現リンパ腫を処置、阻害、または抑制するステップを含む、方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１３Ｄ】

【図１３Ｅ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１６】

【公表番号】特表２０１１−５２５３７５（Ｐ２０１１−５２５３７５Ａ）
【公表日】平成２３年９月２２日（２０１１．９．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１６４８６（Ｐ２０１１−５１６４８６）
【出願日】平成２１年６月２２日（２００９．６．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４８０８５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／００８７８２
【国際公開日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【出願人】（５００４２９１０３）ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア (102)
【Ｆターム（参考）】