Ｎ，Ｏ−アミドマロネート白金錯体
【課題】精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体の提供。
【解決手段】本発明は、白金がアミドマロネートの単一のＮ，Ｏ−キレートまたはＯ，Ｏ−キレートを形成するように配位した、精製された白金錯体に関する。このキレートおよびその薬学的に受容可能な処方物は、癌の処置に有用である。白金キレートは、さらに、水溶性を増加し、そして／またはキレートの腫瘍標的化を補助する、１つ以上の官能基に結合され得る。腫瘍標的化部分の例としては、１つ以上の白金キレートが、身体内で切断され得るリンカーを介してポリマー骨格に結合するポリマーならびに腫瘍組織および／または腫瘍血管系において濃縮または上方制御されるレセプターに対して高い親和性を有する分子が挙げられる。
【解決手段】本発明は、白金がアミドマロネートの単一のＮ，Ｏ−キレートまたはＯ，Ｏ−キレートを形成するように配位した、精製された白金錯体に関する。このキレートおよびその薬学的に受容可能な処方物は、癌の処置に有用である。白金キレートは、さらに、水溶性を増加し、そして／またはキレートの腫瘍標的化を補助する、１つ以上の官能基に結合され得る。腫瘍標的化部分の例としては、１つ以上の白金キレートが、身体内で切断され得るリンカーを介してポリマー骨格に結合するポリマーならびに腫瘍組織および／または腫瘍血管系において濃縮または上方制御されるレセプターに対して高い親和性を有する分子が挙げられる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
２０００年１月４日に出願し、そして本明細書中に参考として援用される、仮出願米国出願第６０／１７４，４３５号からの優先権が主張される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
シスプラチンの抗腫瘍活性の発見（Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇら，１９６９）後、癌の処置のための白金錯体の使用に関する分野において大量の研究が行われた。白金化合物の抗腫瘍活性は、反応性モノ−またはジ−アクア錯体（これは、鎖内および鎖間のＤＮＡ架橋を腫瘍細胞において形成し得る）を形成するインビボでの不安定な塩素配位子の喪失から生じると考えられる。これらの架橋は、細胞死をもたらし得る。シスプラチン（ｃＤＤＰまたはシス−ジアミンジクロロ白金（ＩＩ））は、ヒト被験体における使用について承認されている白金化合物のうちで最も広範に使用されており、そして固形腫瘍（精巣、卵巣ならびに頭部および頸部を含む）のための、ならびに扁平上皮癌および小細胞肺癌に対する使用において他の薬剤と組み合わせた処置が示されている（Ｓｕｒら，１９８３）。
【０００３】
しかし、その毒性に起因して、シスプラチンの使用には重大な制限が存在する。腎毒性および聴器毒性は代表的に、その用量を制限する毒性である。この問題があるので、多くの研究者が、治療指数（毒性に起因する耐えられ得る最大用量と、効力を提供する用量との間の比）が改善された新たな化合物を見出すことを期待して、新規の低分子白金キレートを作製し、そして試験した。白金キレート構造における変化もまた、白金治療が有効であり得る腫瘍型の範囲を広げ得、そして／または毒性プロフィールを変更し得る。上記のように、不安定な脱離基が殺腫瘍活性のために必要とされるが、これらの官能基はまた、この分子の毒性に寄与し得る。英国におけるＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈで行われた研究は、塩素原子を他の脱離基で置換することによって、より低い腎毒性を有する化合物が入手され得ること実証した（Ｈａｒｒａｐ，１９８５）。この研究によって、カルボプラチン（２つの配位した塩化物イオンが１，１−シクロブタン−ジカルボン酸のキレートによって置換されたシスプラチンアナログ）の発見がもたらされた。このキレート基は、シスプラチンの塩素原子と比較してそれほど不安定性ではない。その結果、シスプラチンと比較して、より高い用量のカルボプラチンが、同様の殺腫瘍効果のために必要とされるが、カルボプラチンは、より高い治療指数を有し、そして用量を制限する毒性は、腎毒性ではなく骨髄抑制（ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）である。
【０００４】
オキサリプラチンは、欧州においてヒトへの使用が承認された別の低分子白金キレートである。この白金キレートは、シスプラチンの不安定でない（アミン）配位子および不安定な配位子の両方における変化の効果を調査する研究の結果であった。オキサリプラチンでは、配位したアンモニア配位子は、トランス−１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサン（ＤＡＣＨ）キレートによって置換されており、一方、不安定な塩素配位子は、シュウ酸キレートによって置換されている。オキサリプラチン（および他のＤＡＣＨ白金化合物）が、ＮＣＩヒト腫瘍スクリーニングにおいてシスプラチンおよびカルボプラチンと比較した場合に異なる活性スペクトルを有すること（Ｐａｕｌｌら，１９８９）が示されており、そしてオキサリプラチンは結腸直腸癌の処置のためにその後開発された。オキサリプラチンの用量を制限する毒性は、感覚ニューロン障害である。
【０００５】
他の多くの低分子白金錯体が、潜在的な化学療法剤として調査されているが、せいぜい、効力および治療指数のわずかな改善しか達成されていない。これらのより新たな低分子白金キレートの多くは不活性であるかまたは処方に問題があり（例えば、低い水溶性または乏しい水性安定性）、そして大部分が、腎毒性、神経毒性、骨髄抑制、悪心および嘔吐を含めた、重篤な毒性副作用を誘発する。承認された白金錯体の治療指数を改善する多数の試みは、組合せ治療（例えば、シスプラチンとパクリタキセルとの同時投与；（Ｐｏｓｎｅｒら，２０００））または処方の変更（例えば、リポソーム中への封入（Ｓｔｅｅｒｅｎｂｅｒｇら，１９８８））のいずれかを含んでいた。現在承認されている白金キレートと比較して治療指数がさらに改善された、新たな白金キレートについての明確な必要が残っている。このようなキレートは、理想的には水溶性であり、そして水性環境において安定であるが、腫瘍細胞においてはＤＮＡを架橋し得る種を提供し、そして最終的に腫瘍細胞死を引き起こすに十分に不安定である。
【０００６】
さらに、治療指数の改善は、腫瘍細胞に対する白金錯体の標的化によって達成され得る。従来の低分子白金錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチン）は、腫瘍細胞に対して特異的には標的化されず、そして静脈内投与後に、これらは、腫瘍細胞中に拡散するのと同じくらい容易に正常細胞中に拡散し得る。また、これらの用量は、迅速にクリアランスされる。注射３時間後には、血漿中のシスプラチン由来の白金の９０％が不可逆的にタンパク質に結合する（Ｐｈｙｓｉｃａｎ’ｓ．Ｄｅｓｋ Ｒｅｆ．１９９７）。シスプラチンおよびカルボプラチンについては、用量のうちのそれぞれ２５％および６５％が１２時間以内に腎臓に分泌される（ＤｅＶｉｔａら，１９９３）。治療指数の改善は、白金錯体が、腫瘍に対して正常細胞よりも容易に送達されるのであれば、および／または腫瘍細胞によって正常細胞よりも容易に取り込まれるのであれば、可能であり得る。
【０００７】
文献で大量に報告されている、腫瘍を標的化する１つの方法は、ポリマーまたは他の高分子構造体への化学療法化合物の不安定な付着を含む。腫瘍細胞におけるポリマーおよびナノ粒子（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）の濃度が、静脈内投与後の正常組織におけるそれらの濃度を超えることが実証されている（Ｓｅｙｍｏｕｒ １９９２；Ｖｅｒｏｎｅｓｅら，１９９９）。この好ましい腫瘍蓄積のための機構は、「増強された透過性および残留」（すなわち、「ＥＰＲ」）効果と命名されている（Ｓｅｙｍｏｕｒら，１９９５）。本質的に、腫瘍内皮細胞は、正常な内皮細胞よりも「漏出性」であり、それゆえ、ポリマーおよびナノ粒子は、正常組織の場合よりも容易に腫瘍における内皮細胞層を通過する。従って、静脈内投与後、ポリマーおよびナノ粒子は、正常細胞の細胞外流体に対してよりもずっと容易に、腫瘍細胞の細胞外流体に進入し得る。さらに、腫瘍細胞における細胞外流体のリンパドレナージは、正常細胞と比較してずっと効率が低い。これらの２つの要因は、低分子の自由に分散し得る分子と比較し、正常な組織と比較して、腫瘍におけるポリマーおよびナノ粒子のより高い濃度を説明する。
【０００８】
ＥＰＲ効果を通じた腫瘍への化学療法剤の受動的標的化を提供する構築物のいくつかの例が既に存在する。例えば、ドキソルビシンが、直鎖状ポリマー骨格であるポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ポリ（ＨＰＭＡ））へと、リソソーム酵素によって切断されるように設計されたテトラペプチドを介して付着された。この水溶性結合体は、「ＰＫ１」と命名され、そしてその化学的性質、前臨床試験および臨床評価を記載する、多数の刊行物の主題であった（例えば、Ｓｅｙｍｏｕｒら，１９９０；Ｐｉｍｍら，１９９６；Ｄｕｎｃａｎら，１９９８；Ｔｈｏｍｓｏｎら，１９９９；Ｍｉｎｋｏら，２０００）。同様に、ＨＰＭＡは、これらの化学療法分子の腫瘍への送達の増強のために、パクリタキセルおよびカンプトテシンに結合体化された（Ｆｒａｉｅｒら，１９９８；Ｃａｉｏｌｆａら，２０００）。パクリタキセルおよびカンプトテシンの両方が、腫瘍標的化および薬物の水溶性を改善することを目的として、他の水溶性ポリマーに付着されている（例えば、Ｌｉら，２０００およびＣｏｎｏｖｅｒら，１９９８）。
【０００９】
ポリマー−白金結合体を用いて、白金錯体の溶解度を増大させ、全身毒性を減少させ、そして腫瘍をＥＰＲ効果によって標的化することによって、癌を処置する際に患者に利益を与え得ることが提唱されている（Ｄｕｎｃａｎ，１９９２）。ポリマー−白金結合体のいくつかの例が報告されている。例えば、米国特許第５，９６５，１１８号は、リソソーム酵素によって潜在的に切断され得るペプチドを介してＨＰＭＡポリマー骨格へと結合された種々の白金キレートを記載する（Ｇｉａｎａｓｉら，１９９９もまた参照のこと）。さらなる例としては、ポリホスファーゼン白金（ＩＩ）結合体（Ｓｏｈｎら，１９９７；米国特許第５，６６５，３４３号）、ポリ（グルタメート）白金錯体（Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒら，１９８７）および他のもの（Ｂｏｇｄａｎｏｖ，Ｊｒ．ら，１９９６；Ｈａｎら，１９９４；Ｊｏｈｎｓｓｏｎら，１９９６；Ｆｉｅｂｉｇら，１９９６）；Ｆｉｌｉｐｏｖａ−Ｖｏｐｒｓａｌｏｖａら，１９９１；Ｆｕｊｉら，１９９６；Ｎｅｕｓｅら，１９９５；Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒら，１９８９）が挙げられる。
【００１０】
本発明者らの知る限りでは、ポリマー白金結合体の上記の報告は、ポリマーへの白金錯体形成の構造についても性質についても良好な証拠を提供しないが、大部分は、白金錯体の構造について特定の根拠のない仮定をする。以前のこれらの全ての例では、白金がポリマーに１より多くの方法で結合することが可能であり、従って、混合された錯体の可能性を生じる。また、ｐＨは、不活性（ヒドロキソ配位子）または非常に毒性な（アクア配位子）であり得る他の白金錯体の形成をもたらし得る錯体の形成において制御されていない。従って、白金が任意の１つのポリマーから異なる放出速度で放出されること、および（形成される錯体の混合物はバッチの間で変動し得るので）白金の放出速度がバッチ毎に異なり、毒性および効力の両方における未制御のバッチ毎のバリエーションを生じることが可能である。このようなバリエーションは、癌の処置におけるこれらの結合体の使用には受け入れられない。好ましい状況は、腫瘍に対する白金化合物の改善された送達のためにＥＰＲ効果を利用する場合に、癌の処置のために有益である放出速度を与える、ポリマーに対する白金の、十分に規定され、よく制御された錯体形成を有することである。
【００１１】
ＥＰＲ効果を利用した受動的腫瘍標的化に加えて、「能動的」機構を利用して腫瘍に対して白金錯体を標的化することも可能であり得る。これは、例えば、正常組織と比較して腫瘍においてアップレギュレートされるレセプターに結合する部分へと白金錯体をカップリングし、それゆえ正常組織と比較して腫瘍組織における白金のレベルの上昇を生じることによって達成され得る。このようなアップレギュレートされた広範な種々のレセプターが公知である（例えば、Ｈｅｐｐｅｌｅｒら，２０００；Ｓｃｈｌａｅｐｐｉら，１９９９；Ｓｕｄｉｍａｃｋら，２０００；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら，１９９９；Ｗｅｉｎｅｒ，１９９９；Ｂｕｏｌａｍｗｉｎｉ，１９９９）。標的化剤の例としては、モノクローナル抗体、ペプチド、ソマトスタチンアナログ、葉酸誘導体、レクチンおよび多価陰イオン性多糖が挙げられる。
【００１２】
しかし、本発明者らの知識によれば、腫瘍組織に対する白金の増加した送達のついてのレセプター標的機構の有用性についてほとんど報告された例はない。しかし、モノクローナル抗体（ＭｃＩｎｔｏｓｈら、１９９７；Ｈａｔａら、１９９２）、ステロイド（Ｇｕｓｔら、１９９５；ＤｉＺｉｏら、１９９２、Ｇｉｂｓｏｎら、１９９０）および葉酸（Ｖｉｔｏｌｓら、１９８７）と結合体化した白金の研究はいずれも、臨床において評価されていない。
【００１３】
ポリマーの受動標的化を、レセプターアビド化合物（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｖｉｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の活性標的化と組み合わせることが可能である。これは、「ＰＫ２」、すなわちＨＰＭＡポリマーを有する化合物、酵素切断可能なペプチドを介してポリマーに結合したドキソルビシンによって例示され、これは、ガラクトース、すなわち、アシアロ糖蛋白レセプターに対して強力な親和性を有する糖質と結合体化され、これは、肝臓内で高度に濃縮される（Ｊｕｌｙａｎ、１９９９）。本発明者らの知識によれば、活性標的化と受動標的化とを合わせるこのアプローチは、白金キレートを用いて探求されていない。
【００１４】
本発明は、初期の不安定なＯ，Ｏ−アミドマロネートｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を、純粋かつ単離可能なＮ，Ｏ−アミドマロネートｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を再配列することを可能にする条件の予測できない発見に基づく。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは、反応性ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種がアミドマトネートと反応する際に、はじめに形成される。以下で議論される報告は、このような反応において、Ｎ，Ｏ−キレートが、単離も精製もされないマイナー生成物として形成されないし、見出されもしないことを示す。本明細書中において、純粋なＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）が単離されるのを可能にする一般的条件が、記載される。さらに、このようなＮ，Ｏ−キレートは、癌の処置のための優先的な生物学的活性、具体的には改良された治療指数を有する。癌の処置のためのこのようなＮ，Ｏ−アミドマロネートキレートの有利な特性は、以前に報告されていない。さらに、本明細書中に記載される非熱力学的に安定な錯体のＮ，Ｏ−キレートへのほぼ完全な変換は、一貫した効力および毒性プロファイルによって製造され得る腫瘍を処置するための低分子およびポリマー化合物を提供する。
【００１５】
任意の薬学的生成物について、その同一性および純度の正確な測定が必要である。本発明および関連分野に対して、白金錯体の正確な性質を検証し、そして不純物を同定することが最も重要である。なぜなら、不純な白金錯体は、精製の際に消滅する見込みのある生物学的活性を示した例があるからである（Ｔａｌｅｂｉａｎら、１９９１およびＡｐｐｌｅｔｏｎら、２０００）。
【００１６】
本発明の場合、白金錯体の正確な性質を同定するための最良の方法は、ＮＭＲ分光法、具体的には１９５Ｐｔ ＮＭＲおよび１５Ｎ ＮＭＲ分光法である（Ａｐｐｌｅｎｔｏｎ２０００）。いずれの技術によっても、白金錯体の同一性は、前分離の必要なしに作成される。この研究の場合、１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法は、選択の方法である。なぜなら、それは十分な感度を提供し、１５Ｎ ＮＭＲ分光法に必要とされる同位体富化の必要性が避けられるからである。１９５Ｐｔ核は、スピン１／２であり、１３Ｃ核の感受性のほぼ２０倍の感受性を有し、１５，０００ｐｐｍの化学シフト範囲にわたって共鳴を示す。この化学シフトは、白金リガンドの同一性およびジオメトリに対して非常に敏感である。１９５Ｐｔは、約１０ｍＭ白金以上の実践的な感度限界を有する。ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体についての化学シフトの例として、シスプラチンの−２１６８ｐｐｍ、カルボプラチンの−１７２３ｐｐｍ、ジアクアの−１５８４ｐｐｍ、モノアクア−モノクロロの−１８４１ｐｐｍ、Ｏ，Ｏ−アミノマロネートの−１７３２ｐｐｍ、Ｎ，Ｏ−アミノマロネートの−２１５６ｐｐｍ、およびＮ−アセチルグリシンのＮ，Ｏ−キレートの−２０２０ｐｐｍが挙げられる（Ａｐｐｌｅｔｏｎ１９９０；Ｇｉｂｓｏｎ１９９０；Ａｐｐｌｅｔｏｎ２０００）。対応するＤＡＣＨ−Ｐｔ錯体は、さらなる高磁場に現れる。
【００１７】
ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種の、遊離アミン含有アミノマロネートとの反応が、報告されている。Ｇａｎｄｏｌｆｉ（Ｇａｎｄｏｌｆｉら、米国特許第４，６１４，８１１号；Ｇａｎｄｏｌｆｉら、１９８７）は、ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種およびアミノマロネートとの間の錯体の調製および抗腫瘍活性を報告した。この報告された構造は、図２ａに示されるような全てＯ，Ｏ−キレートであった。後に、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートが最初に形成されたが、ｐＨ＝５で数時間内に、図２ｂに示される熱力学的なＮ，Ｏ−アミノマロネートｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）に異性化することが、明確に示された。さらに、Ａｐｐｌｅｔｏｎは、ｐＨが非常に低い（２未満）場合、脱炭酸反応が起こり、対応するＮ，Ｏ−グリシン錯体を得ることを示した。ｐＨが非常に高い（９を超える）場合、白金エステルの加水分解が起こった。純粋なＮ，Ｏ−アミノマロネート錯体の生物学的活性の文献報告は、公知ではない。しかし、密接に関連した、十分に精製されたＮ，Ｏ−アスパラギン酸ｃｉｓ−ジアミンＰｔ（ＩＩ）錯体の報告（Ｔａｌｅｂｉａｎ１９９１）は、たとえ細胞傷害活性があったとしても、ほとんど示さなかった。
【００１８】
図３（遊離アミンを有しない）に示されるようなアミドマロネートのｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）の場合、Ｔｓｕｊｉｈａｒａの米国特許第４，８８２，４４７号は、多くの１，２−ジアミンシクロヘキサン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−アミドマロネート錯体（すなわち、ＤＡＣＨ−白金（ＩＩ））の調製および生物学的活性を報告する。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート化を検証するデータは、記載されていない。一連のアミドマロネートＤＡＣＨ−白金（ＩＩ）は、図３ａに示されたものと同様のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートとしてのみ存在することが報告された（Ｔａｌｅｂｉａｎら、１９９０）。ポリホスファゼンベースのアミドマロネートは、単に、Ｏ，Ｏ−キレートとして示され（図３ａ）、同様のグルタミン酸ベースの物質を通して、ほとんど等量の２種のキレートを示すことを確証した分光学的データはなかった。しかし、一連のステロイドベースのアミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体（図３、Ｒ＝ステロイド）は、Ｏ，Ｏ−ＰｔアミドマロネートキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔアミドマロネートキレートの混合物（それぞれ、図３ａおよび図３ｂ）であることが示され、Ｏ，Ｏ−異性体は、優先された（Ｇｉｂｓｏｎら、１９９０）。２種の分離は記載されていないが、おそらく熱またはより長い反応時間で、Ｎ，Ｏ−キレートが好まれ得ることが予想された。しかし、本発明は、アミドマロネートｃｉｓ−ジアミン白金錯体のＯ，Ｏ−ＰｔからＮ，Ｏ−Ｐｔへの転換を行うのにさらなる成分が必要とされる。
【００１９】
要約すると、アミドマロネートのｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体の場合、初期Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは、迅速にＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに異性化する、しかし、アミドマロネートのｃｉｓ−ジアミン錯体の場合、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートのみが見出されるか、または両方のキレートの混合物中で、Ｏ，Ｏ−Ｐｔが優先する。アミドマロネートの純粋なＮ，Ｏ−キレートの調製について全く報告がなされていない。従って、ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体のアミドマロネートととのＮ，Ｏ−キレートの調製および有用な生物学的活性が、本明細書中で提供される。さらに、Ｏ，Ｏ−キレートの選択的調製が、記載される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
（発明の要旨）
本発明は、精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体に関する。この錯体は、結合したポリマーであり得る。この錯体は、有効量の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネートジアミン錯体を患者へ投与する工程を包含する、白金感受性の新生物形成を処置する方法において有用である。
【００２１】
より詳細には、本発明は、腫瘍処置における使用のための組成物に関し、この組成物は、以下：
【００２２】
【化４】
の形態のｃｉｓ−ジアミンＮ，Ｏ−アミドマロネート白金種を含み、
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、水可溶性基、キャリアまたは腫瘍に対して種を標的化するのに有用な標的基であり；Ｒ２およびＲ３は、アミンであり；Ｒ４は、Ｈまたはカチオンであり；そしてここで、上記種は、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性を有するようにインビボで転化される。この錯体中のカチオンは、アンモニウムイオン、アルカリ、またはアルカリ土類金属であり得る。好ましいカチオンは、ナトリウムである。
【００２３】
特定の場合、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体は、上記組成物を含み得、ここで、Ｒ１は、１〜５０００キロダルトンの分子量のＮ−アルキルメタクリルアミドユニットの合成ポリマーであり、以下：
【００２４】
【化５】
の形態を有し、
ここで、ｍ＝０およびｎ＝１００であるか、またはｍ：ｎの比は、０．１〜９９．９であり；Ｒ５は、ＨまたはＣＨ３であり；Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ７は、生理学的条件下で切断され得る、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙを有するオリゴペプチドであり、ここで、ｐは、０〜３であり、Ｗは、アミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせであり、このＣ末端は、アミドマロネート基のアミドである。
【００２５】
上記のＮ，Ｏ−アミドマロネート白金錯体の重要な実施形態において、Ｒ２およびＲ３の両方とも、ＮＨ３である。これらは、しばしば、好ましくは、１，２−ジアミノシクロヘキサンの第一アミン基である。
【００２６】
これらの錯体に含まれる白金は、＋２酸化状態または＋４酸化状態にあり得る。上記のＲ１は、Ｈまたはアルキルのいずれかであるが、葉酸レセプターを標的化するのに有用な、ステロイドまたは葉酸または葉酸誘導体もしくはアナログでもあり得る。
【００２７】
ポリマーＮ，Ｏ−アミドマロネート白金錯体のポリマーは、本明細書中で記載される他のポリマー、すなわち、ポリグルタミン酸、モノ−もしくはポリサッカリドまたはポリサッカリドの側鎖を有し得る。
【００２８】
本発明はまた、白金ジアミン化合物の安定性を改良する方法に関する。この方法は、白金化合物の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を形成する工程を包含する。
【００２９】
本発明の重要な局面は、腫瘍処置における使用のための組成物に関し、この組成物は、腫瘍部位に蓄積するよう設計され、白金化合物との錯化のためのポリマーに沿って間隔をあけられた側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドからなるポリマー白金錯体を含み、この側鎖は、（ｉ）一方端でそのポリマーに結合し、そして他方端において、少なくとも主に、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して白金化合物に結合したオリゴペプチドからなり、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断され、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性を有するようにインビボで転化される白金化合物を生成するように設計された少なくとも１つの連結を含む。
【００３０】
このようなＮ−アルキルアクリルアミドポリマーは、好ましくは、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである。Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーは、０．１と約９９．９との間のｍ：ｎ比の２個の繰り返し単位を有するコポリマーであり得る。
【００３１】
本発明の組成物はまた、オリゴペプチド側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドユニットの繰り返し単位を含む。これらのオリゴヌクレオチド鎖は、白金化合物を結合し得る近位基内で終端し得る。
【００３２】
本発明の組成物において、有用なポリマーは、ポリマーが以下：
【００３３】
【化６】
の形態のコポリマーである形態のコポリマーであり得、
ここで、Ｒ１は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ２は、低級アルキルもしくは低級ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ３は、オリゴペプチド側鎖である。このポリマーにおいて、Ｒ１は、ＣＨ３であり、Ｒ２は、２−ヒドロキシプロピルであり、Ｒ３は、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＡｍａまたはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｍａである。本発明の治療的用途において、ポリマー白金化合物は、非経口投与に適切な水性媒体に溶解される。
【００３４】
本発明の重要な局面は、白金化合物に供される固体腫瘍を処置する方法であり、この方法は、白金化合物と錯化するためのポリマーに沿って間隔をあけられた側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドポリマーからなるポリマー−白金錯体を調製する工程であって、この側鎖が、（ｉ）一方端でそのポリマーに結合し、そして他方端において、少なくとも主に、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して白金化合物に結合したオリゴペプチドからなり、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断され、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性を有するようにインビボで転化される白金化合物を生成するように設計された少なくとも１つの連結を含む、工程；ならびに、薬学的に有効な量の錯体を被験体に非経口投与する工程、を包含する。１つの好ましい実施形態における上記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーは、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである。別の重要な実施形態において、Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーは、１，０００ダルトンと５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するコポリマーである。このコポリマーは、０．１と約９９．９との間のｍ：ｎの比の２つの繰り返し単位ｍおよびｎを含む。このような繰り返し単位は、Ｎ−アルキルアクリルアミドユニットおよび、白金化合物に結合し得る近位端を有するオリゴペプチド側鎖を有するユニットを含む。オリゴペプチドが使用される場合、上記オリゴペプチドは、好ましくは、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙであり、ここで、ｐは０〜３であり、Ｗは、アミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせである。１つの重要な実施形態において、オリゴペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＧｌｙ−Ｇｌｙである。
【００３５】
本発明は、白金ジアミン化合物が、被験体にこの化合物を含む薬学的に受容可能な溶液を非経口的に投与することによって腫瘍を処置するために使用される際に、白金ジアミン化合物の治療指数を向上する方法を包含し、この方法は、上記投与の前に、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位、および上記白金化合物とＮ，Ｏ連結を介して錯化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位からなるコポリマーと、白金化合物とを錯化する工程を包含する。
【００３６】
別の観点から、本発明は、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位、および上記白金化合物とＮ，Ｏ連結を介して錯化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位からなるコポリマーと、上記化合物とを錯化する工程を包含する、白金ジアミン化合物の安定性を改善する方法に関する。
【００３７】
従って、本発明の目的は、インビボで改善された抗腫瘍活性を有する新規のポリマー−白金錯体を提供することである。
【００３８】
１局面において、本発明は、腫瘍部位で蓄積するよう設計されたポリマー−白金化合物を含む、腫瘍処置における使用のための組成物に関する。この化合物は、骨格に結合した白金含有側鎖を有する合成ポリマー骨格からなる。この側鎖（ｉ）は、生分解性リンカー、例えば、一方端またはその付近にて骨格に結合し、他方端またはその付近にて白金化合物に結合したオリゴペプチドからなる。このリンカーは、抗腫瘍活性を有するか、または有するようにインビボで転化される白金化合物を生じる選択された生理学的条件下で切断するように設計される少なくとも１つの連結を含む。オリゴペプチドは、通常のアミノ酸（例えば、アミドマロネートなど）またはαアミノ酸以外を含み得る。
【００３９】
１つの実施形態において、この合成ポリマーは、約１，０００〜５，０００，０００ダルトンの間の原子量を有する、Ｎ−アルキルアクリルアミドまたはメタクリルアミド（つまり、全「ｎ」型単量体）のホモポリマーである。
【００４０】
別の実施形態において、この合成ポリマーは、１，０００〜５，０００，０００ダルトンの間の原子質量を有するコポリマーであり、ｍ：ｎの割合が約０．１〜９９．９の間である、２つの単量体のｍおよびｎを含む。
【００４１】
１つの実施形態において、この単量体は、Ｎ−アルキルアクリルアミドまたはメタクリルアミド単体、および白金化合物と連結し得る近位な末端基に終端するオリゴペプチド側鎖を運ぶ単体から構成される。
【００４２】
１つ実施形態において、ポリマー−白金化合物におけるポリマーは、以下の形態のコポリマーである：
【００４３】
【化７】
ここで、Ｒ１はＨまたはＣＨ３であり、Ｒ２は下位アルキルまたは下位ヒドロキシアルキル基であり、かつＲ３はオリゴペプチド側鎖である。
【００４４】
別の実施形態において、このオリゴペプチドは、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙの形態のオリゴペプチドであり、ここでｐは、０〜３であり得、そして（Ｗ）は任意のアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせであり得る。１つの実施形態において、このペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙであり、そして白金化合物との連結のためのカルボキシル、ジアミンまたはマロニル部分に終端する。ＰｈｅまたはＬｅｕは、好ましい実施形態において（Ｌ）アミノ酸である。別の実施形態において、このペプチドは、近位なカルボニル末端基に終端しているＧｌｙ−Ｇｌｙである。Ｄ−アミノ酸含有オリゴペプチドが、生分解性であるという点において、これらはオリゴペプチドの一部分または全てでもあり得る。
【００４５】
好ましい実施形態において、Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２は２−ヒドロキシプロピルであり、かつＲ３はＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−[Ｘ]であり、ここで[Ｘ]は、ジアミン、カルボキシル基またはマロニル部分である。
【００４６】
このポリマー−白金化合物は、非経口投与に適した薬学的に受容可能な培養液中に溶解される。
【００４７】
別の局面において、本発明は、被験体において固形腫瘍に対して白金化合物を標的化する方法を含む。この方法は、幹に沿って間隔のあいた側鎖を有する合成ポリマー幹から構成されたポリマー−白金化合物を調製する工程を包含する。この側鎖は、（ｉ）一方の末端において幹に連結し、そして他方の末端において白金化合物に連結したオリゴペプチドから構成され、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下において、坑腫瘍活性を有するか、または坑腫瘍活性を有するためにインビボで転換される白金化合物を得るために切断されるべく設計される、少なくとも１つの連鎖を含む。この化合物は、薬学的に有効な量において、被験体に非経口で投与される。
【００４８】
別の局面において、この化合物が、被験体に対する化合物を含む、非経口で薬学的に受容可能な溶液を投与することによって、腫瘍を処置するために使用される場合、本発明は、白金化合物の治療学的指標を増強する方法を含む。この化合物を投与する前に、この方法は、白金化合物と混合可能な近位の末端基に終端するオリゴペプチド側鎖を有する、Ｎ−アルキルアクリルアミドの第一単量体および第二単量体から構成されたコポリマーを有する白金化合物を混合する工程を包含する。
【００４９】
別の局面において、本発明は、この白金化合物と混合可能な近位の末端基に終端するオリゴペプチド側鎖を有する、Ｎ−アルキルアクリルアミドの第一単量体および第二単量体から構成されたコポリマーを有する化合物を混合することによる、白金化合物の溶解性および／または安定性に関与する方法を含む。このポリマー−白金錯体は、生理学的条件下において、非錯体の白金化合物よりも、より可溶性であり、そして／またはより安定している。好ましい白金錯体は、−およびＯ−を介して結合され、最も好ましくは、アミノマロネート残基は、ポリマーに対して生分解性連鎖に連結される。
【００５０】
これらの対象および他の対象、ならびに本発明の特徴は、本発明の以下の詳細な記載を添付の図面と共に読む場合に、さらに十分に理解される。
【００５１】
化学療法薬剤を含む、治療薬剤のポリマーに基づく送達は、考慮すべき注意を受け続ける（Ｄｕｎｃａｎら（１９９９）、Ｓｅｙｍｏｕｒ）。代表的には、確立した薬理学的実在は、生物学的挿入ポリマーに化学的に連結され、従ってその分布、排除および毒物学的特性を大いに変化させる。腫瘍学的な適用について、この技術は、増強した透過性および保持（ＥＰＲ）効果を介して腫瘍間隙での細胞障害性薬剤の濃度を増加させる可能性を提供する（Ｓｅｙｍｏｕｒら）。ＡＣＣＥＳＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌは、白金と合金にしたポリマー治療の広範なクラスの権利を有する。ＡＰ ５２８０と命名されたこれらの１つは、シス−ジアンミン白金（ＩＩ）（ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））のアミノマロネート（ａｍｉｎｏｍａｌｏｎａｔｏ）キレートを有する、９０：１０のＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）のコポリマー、およびＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙのメタクリルアミドである。この最適化したリンカーを組み込むことは、このポリマー由来の白金含有フラグメントを、腫瘍プロテアーゼによる切断を介して放出する可能性を提供する。このコポリマー−リンカー−キレート結合の概念、ならびに初期合成研究および生物学的研究は、Ｄｕｎｃａｎら（１９９９）によって示されている。臨床的評価のために、この物質のさらなる発展への挑戦は、ヒトに使用するために規制当局の許可を保証するために必要な、必須の活性、安定性および薬学的特性を有する、構造的に特徴づけられた生成物のための拡張可能な手順を定義することである。
【００５２】
ＡＰ ５２８０の合成は、初期にジエチルアミノマロネートを中間体のポリ（ＨＰＭＡ）ＧＦＬＧ−ＯＮｐにおけるｐ−ニトロフェノールに置換することによって達成され、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔが得られる。この後者はけん化され、次いでシス−（ＮＨ３）２Ｐｔ（Ｈ２Ｏ２）２＋で白金と合金され、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２が得られた。その後、初期Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートのＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの再配列はコントロールされる。本発明者らはまた、ＨＰＭＡおよびＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔモノマーからポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを作製した（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂ）。これらのモノマーを、種々の量のラジカル鎖転移薬剤（つまり、ｐ−ニトロフェノール）を用いて重合することによって、この分子量は制御される（注意：この分子量の制御方法は、文献において周知である）。次いで、これらのポリマーは、けん化され、白金と合金され、そして際配列され、記載されるようなＮ，Ｏ−キレートが得られた。低分子量の不純物からの精製は、末端の凍結乾燥による最終処方生成物の単離を用いて、接線方向の流体を濾過することによって達成される。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート（９２％未満）の同定および精製は、Ｏ，Ｏ−キレート（−１７３３ｐｐｍ）または他のＰｔ種のような８％未満のＰｔ存在を有する、１９５ＰｔＮＭＲ分光学（−２０５６ｐｐｍ）によって確認される。この最終生成物は、８．０±０．５％のＰｔ（ｗｔ／ｗｔ）を含み、そしてＭＷ＝２４．４ｋＤａを有する。３７℃で２４時間を越えて、水中においては、ＡＰ ５２８０は、ポリマー遊離白金種として１％より十分小さい（＜＜１％）白金含有量を放出し、そしてクロライドの生理学的濃度を含む培養液中に２％未満の白金を放出する。ＡＰ ５２８０の有効性は、ｓ．ｃ．Ｂ１６Ｆ１０マウスの腫瘍モデルにおいて評価され、このモデルは、３ｍｇ／ｋｇにおけるシスプラチンの活性に相当する、２０ｍｇ Ｐｔ／ｋｇにおいて活性を示す。カルボプラチン（４５または６０ｍｇ／ｋｇ）を越える活性は、２００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇ（全用量ＩＶ、ｑｄ ｘ５）において、ＡＰ ５２８０を用いて達成される。重要な局面において、図Ａは、ＡＰ ５２８０の手順についての工程の概要を示す。
例えば、本願発明は、以下の項目を含む。
（項目１） 精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体。
（項目２） ポリマー結合Ｎ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体。
（項目３） 白金感受性新形成を処置する方法であって、有効量の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体を患者に投与する工程を包含する、方法。
（項目４） 腫瘍の処置における使用のための組成物であって、以下の式：
【化１】
のシスジアミンＮ，Ｏ−アミドマロネート白金種を含み、
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、水可溶化基、担体または該白金種を腫瘍に標的化するのに有用な標的化基であり；Ｒ２およびＲ３は、アミンであり；Ｒ４は、Ｈまたはカチオンであり；そして該白金種が、抗腫瘍活性を有するか、またはインビボで変換されて抗腫瘍活性を有する、組成物。
（項目５） 項目４に記載の組成物であって、ここで、前記カチオンが、アルカリ金属またはアルカリ土類金属である、組成物。
（項目６） 項目４に記載の組成物であって、ここで、前記カチオンが、ナトリウムである、組成物。
（項目７） 項目４に記載の組成物であって、ここで、Ｒ１が、分子量１〜５０００キロダルトンのＮ−アルキルメタクリルアミド単位の合成ポリマーであり、そして以下の式：
【化２】
であり、
ここで、ｍ＝０およびｎ＝１００またはｍ：ｎの比が０．１〜９９．９であり；Ｒ５が、ＨまたはＣＨ３であり；Ｒ６が、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ７が、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙの配列を有する、生理学的条件下で切断可能なオリゴペプチド鎖であり、ここで、ｐが０〜３であり、Ｗがアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせであり、Ｃ末端が項目１に記載のアミドマロネート基のアミドである、組成物。
（項目８） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ２およびＲ３が、ＮＨ３である、組成物。
（項目９） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ２およびＲ３が、１，２−ジアミノシクロヘキサンの一級アミン窒素である、組成物。
（項目１０） 項目４または７に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋２の酸化状態である、組成物。
（項目１１） 項目４または７に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋４の酸化状態である、組成物。
（項目１２） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、Ｈまたはアルキルである、組成物。
（項目１３） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、ステロイドである、組成物。
（項目１４） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、葉酸レセプターを標的化するのに有用である葉酸誘導体または葉酸アナログである、組成物。
（項目１５） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、ポリグルタミン酸の側鎖である、組成物。
（項目１６） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、モノサッカリドまたはポリサッカリドの側鎖である、組成物。
（項目１７） 白金ジアミン化合物の安定性を改善するための方法であって、白金化合物の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を形成する工程を包含する、方法。
（項目１８） 腫瘍の処置における使用のための組成物であって、以下：
ポリマー−白金錯体であって、該ポリマー−白金錯体が、腫瘍部位に蓄積するように設計され、そして白金化合物を錯体化するためにポリマーに沿って間隔を開けて配置された側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドポリマーを含み、該側鎖が、（ｉ）一端において該ポリマーに結合され、他端において少なくとも主にＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して該白金化合物に結合されたオリゴペプチドを含み、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断されて、抗腫瘍活性を有するかまたはインビボで変換されて抗腫瘍活性を有する白金化合物を生じるように設計された少なくとも１つの連結を含む、ポリマー−白金錯体、
を含む、組成物。
（項目１９） 項目１８に記載の組成物であって、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである、組成物。
（項目２０） 項目１８に記載の組成物であって、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するコモポリマーであり、該コポリマーが、約０．１と約９９．９との間の比ｍ：ｎで２つの繰り返し単位ｍおよびｎを含む、組成物。
（項目２１） 項目２０に記載の組成物であって、ここで、前記繰り返し単位が、Ｎ−アルキルアクリルアミド単位および前記オリゴペプチド側鎖を保持する単位を含み、該オリゴペプチドが、前記白金化合物に結合し得る近位末端基で終わっている、組成物。
（項目２２） 項目１８に記載の組成物であって、ここで、前記ポリマーが、以下の式：
【化３】
のコポリマーであり、
ここで、Ｒ１が、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ２が、低級アルキル基または低級ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ３が、オリゴペプチド側鎖である、組成物。
（項目２３） 項目２２に記載の組成物であって、ここで、前記オリゴペプチドが、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙであり、ここで、ｐが０〜３であり、Ｗがアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせである、組成物。
（項目２４） 項目２２に記載の組成物であって、ここで、前記オリゴペプチドの近位末端が、アミドマロネートである、組成物。
（項目２５） 項目２２に記載の組成物であって、ここで、Ｒ１がＣＨ３であり、Ｒ２が、２−ヒドロキシプロピルであり、そしてＲ３がＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＡｍａまたはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｍａである、組成物。
（項目２６） 項目１８に記載の組成物であって、ここで、前記ポリマー−白金化合物が、非経口投与に適した水性媒体中に溶解される、組成物。
（項目２７） 被験体の固形腫瘍を白金化合物で処置するための方法であって、該方法が、ポリマー−白金錯体を調製する工程および薬学的に有効な量の該化合物を該被験体に非経口的に投与する工程を包含し、該ポリマー−白金錯体が、白金化合物を錯体化するためにポリマーに沿って間隔を開けて配置された側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドポリマーを含み、該側鎖が、（ｉ）一端において該ポリマーに結合され、他端においてＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して該白金化合物に結合されたオリゴペプチドを含み、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断されて、抗腫瘍活性を有するかまたはインビボで変換されて抗腫瘍活性を有する白金化合物を生じるように設計された少なくとも１つの連結を含む、方法。
（項目２８） 項目２７に記載の方法であって、ここで、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである、方法。
（項目２９） 項目２７に記載の方法であって、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するコモポリマーであり、該コポリマーが、約０．１と約９９．９との間の比ｍ：ｎで２つの繰り返し単位ｍおよびｎを含む、方法。
（項目３０） 項目２９に記載の方法であって、ここで、前記繰り返し単位が、Ｎ−アルキルアクリルアミド単位および前記オリゴペプチド側鎖を保有する単位を含み、該オリゴペプチドが、前記白金化合物に結合し得る近位末端基で終わっている、方法。
（項目３１） 項目２７に記載の方法であって、ここで、前記オリゴペプチドが、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙであり、ここで、ｐが０〜３であり、Ｗがアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせである、方法。
（項目３２） 項目２７に記載の方法であって、ここで、前記オリゴペプチドが、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＧｌｙまたはＧｌｙ−Ｇｌｙである、方法。
（項目３３） 白金ジアミン化合物を、該化合物を含む薬学的に受容可能な溶液を被験体に非経口的に投与することによって腫瘍を処置するために使用する場合に、該白金ジアミン化合物の治療指数を高める方法であって、以下：
該投与の前に、該白金化合物を、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位およびＮ，Ｏ連結を介して該白金化合物を錯体化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位を含むコポリマーで錯体化する工程、
を包含する、方法。
（項目３４） 白金ジアミン化合物の安定性を改善する方法であって、以下：
該化合物を、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位およびＯ，Ｎ連結を介して該白金化合物を錯体化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位を含むコポリマーで錯体化する工程、
を包含する、方法。
（項目３５） ポリグルタメートまたは別の天然または合成ポリマーに結合された、Ｏ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体。
（項目３６） 項目３５に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋２の酸化状態である、組成物。
（項目３７） 項目３５に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋４の酸化状態である、組成物。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンの構造ならびにアミドマロネート−シス−ジアンミン白金（ＩＩ）（ａｍｉｄｏｍａｌｏｎａｔｅ−ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの基本的構造を示す（注意：シスプラチンはまた、ｃＤＤＰおよびシス−ジクロロジアンミン白金（ＩＩ）（ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｃｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））として公知である）。
【図２Ａ】図２Ａは、アミノマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、アミノマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、アミドマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、アミドマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図４】図４は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ｙの調製物および構造を示し、ここでＹ＝ＯＮｐまたはＡｍａ−ｄｉＥｔである。Ｙ＝ＯＮｐの場合、より狭い部分での多分散を有する下位の分子量ポリマーが形成される。ＯＮｐ基または添加したｐ−ニトロフェノールがない場合、より上位の分子量ポリ（ＨＰＭＡ）ポリマーが見い出される。この３５１ｋＤａの物質は、任意のＯＮｐエステル、および任意の添加したｐ−ニトロフェノールなしの反応系から生じる。ＯＮｐエステルなしに、ｐ−ニトロフェノールが重合のために添加される場合、より小さいＨＰＭＡポリマーは、より狭くそしてより均一な分子量分布を有して得られる。
【図５】図５は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｎ，Ｏ−キレートを調製するために用いられる工程を示す。例において得られる多数のこれらの同様な工程および状態は、小さな分子であるか、またはポリマーに結合したアミドマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）種の他のＮ，Ｏ−キレートの形成に適応可能である。
【図６】図６は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの調製の間のｐ−ニトロフェノールの放出を示す。これは、置換反応が小さな分子を用いてモニターされた１つの方法を示す。
【図７】図７は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの構造と共に、それらに対応する１９５ＰｔＮＭＲスペクトルを示す。これらのスペクトルは、２つのキレートのピーク位置におけるキレート転換および差異を図解的に示す。Ｏ，Ｏ−キレートのスペクトルは、このスペクトルが約８５％のＯ，Ｏ−キレートおよび１５％のＮ，Ｏ−キレートからなることを示す。Ｎ，Ｏ−キレートのスペクトルは、このスペクトルが約１０％のＯ，Ｏ−キレートおよび９０％のＮ，Ｏ−キレートからなることを示す。より高温、またはより長い反応時間が用いられた場合、Ｏ，Ｏ−キレートは検出不可能である。
【図８】図８は、図５の工程Ｃの間のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートのパーセントのプロットを示す。これは、Ｏ，Ｏ−キレート形成が１〜２時間以内で完了することを示す。
【図９】図９は、７５ｍＭホスフェート（ｐＨ＝７．４、１００ｍＭ ＮａＣｌ）対時間における、Ｏ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換のプロットを示す。これは、これらの状態において、１００％の白金がＮ，Ｏ−キレートとして存在することを示す。
【図１０】図１０は、Ｏ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換における塩化物イオン濃度の影響を示す。約６０ｍＭのＮａＣｌ濃度におけるキレート転換率は、同じである。
【図１１】図１１は、Ｏ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換における硝酸塩、アセテートおよびヨウ化物の影響を示す。３つの陰イオンの全てが、キレート転換に影響を与えるが、異なる割合である。
【図１２】図１２は、実施例２３のＢ１６黒色腫の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで生理食塩水は、コントロールとして用いられ、シスプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの十分下位に投薬された。
【図１３】図１３は、実施例２４のＢ１６黒色腫の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで生理食塩水は、コントロールとして用いられ、シスプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの近位に投薬された。
【図１４】図１４は、実施例２５のＢ１６黒色腫の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで生理食塩水は、コントロールとして用いられ、カルボプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの近位に投薬された。
【図１５】図１５は、実施例２６のヒト異種移植の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで等浸透圧性グルコースは、コントロールとして用いられ、カルボプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの十分に下部、および近位に投薬された。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
（発明の詳細な説明）
本発明の中心的な実施形態は、特定の型の白金（ＩＩ）錯体（すなわち、図３ｂ）の精製され、そして十分に特徴付けられた組成物であり、この錯体において、アミドマロネート基が、アミドマロネートのアミド窒素およびアミドマロネートのカルボキシレートのうちの１つの酸素によって、白金にキレートされ、そしてここで、中心白金に対する２つの他の利用可能な配位子部位が、アンミンまたはアミンである。このような錯体は、癌の処置において有用な化学療法剤であり得る。
【００５５】
本発明の重要な局面において、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体のカルボニルアミドに結合したＲ基（図３ｂを参照のこと）は、Ｈ、アルキル基、本発明の種を可溶化するために有用な基、ポリマー、本発明の錯体とポリマーとの間を結合するために有用な基、高分子、またはＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を腫瘍に標的化するために有用な実体への結合のようなものであり得る。
【００５６】
アミドカルボニルのＲ基がＨ、単純なアルキル、または水可溶化基である、本発明は、有用であり得る。なぜなら、本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体は、好ましい治療指数を有するからである。本実施例は、本発明のＮ，Ｏ−キレートが低い毒性および良好なインビトロ活性を有することを示すので、このような単純な低分子バージョンのＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体は、有用であり得る。これらのＯ，Ｏ−キレートの対応物は、生物学的活性を有することが公知であり、そして本発明は、Ｏ，Ｏ−Ｐｔアミドマロネートキレートが生理学的条件下で迅速にＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに転化することを示す。水可溶化基をＲ基としてかまたはＲ基の一部として組み込むことによって、より好ましい処方物および投薬が達成され得る。このような水可溶化基としては、炭水化物、ポリエチレングリコール、四級アミン（すなわち、ベタイン）および当業者に公知の他のものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
アミドカルボニルのＲ基がポリマーである、本発明は、有用であり得る。なぜなら、このポリマーが、ＥＰＲ効果による腫瘍の標的化を提供し得、そして水溶性を増加させ得るからである。このポリマーは、合成物または天然物であり得る。合成ポリマーとしては、ポリアクリルアミド（ポリメタクリルアミドを含む）、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリエチレングリコール（直鎖または分枝鎖）およびポリアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。ポリアミノ酸としては、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、およびポリリジンが挙げられる。これらのポリアミノ酸におけるポリマー骨格は、αアミン基およびαカルボキシル基のアミドであっても、側鎖のカルボキシルまたはアミン基とのアミドであってもよい。他のものが、当業者に明らかであり得る。天然ポリマーとしては、アルブミンのようなタンパク質、およびヘパリン、コンドロイチン６−硫酸、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、キチン、キトサンのような多糖類などが挙げられる。他のものが、当業者に明らかであり得る。各ポリマー鎖は、１つ以上の白金キレートに結合し得る。ポリマーとアミドマロネート基との間の連結は、ジカルボン酸（例えば、コハク酸）を使用してポリマーのアミン基とアミノマロン酸のアミンとの間を架橋して、ポリマーのカルボキシル基をアミドマロネートで置換することによるか、またはハロゲン化アルキル置換基を用いて多糖類のヒドロキシル基とアミドマロネートとの間にエーテルを形成することによって、作製され得る。他の可能性が、当業者に明らかであり得る。
【００５８】
アミドカルボニルのＲ基が、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を腫瘍に対して標的化するために有用な基を含む、本発明は、本発明の錯体の治療指数をさらに増加させるために有用であり得る。標的化剤としては、モノクローナル抗体、ペプチド、ステロイド、ソマトスタチンアナログ、葉酸の誘導体およびアナログ、レクチン、ならびにポリアニオン性多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のこの特定の範囲内で、本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネートジアミン白金（ＩＩ）錯体と標的化基との間に、共有結合が形成される。次いで、このような標的化錯体が患者に投与される場合に、この標的化剤は、本発明の錯体を腫瘍に指向する。これは、本発明の白金錯体の殺腫瘍効果を増加させ、そして全身毒性を減少させると予測される。このような標的化された錯体の１つの例は、葉酸のγ−カルボキシレートをジエチルアミノマロネートで置換して、葉酸−Ａｍａ−ｄｉＥｔ種を与えることによって、作製され得る。次いで、この例において与えられる手順に従って、これは葉酸−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートに転化される。この白金は、＋２または＋４のいずれの酸化状態でもあり得る。
【００５９】
１つの好ましい実施形態において、アミドマロネートのアミドカルボニル基のＲ基は、「ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＧ−」であり、Ａｍａ基が近位のＧ（グリシン）に結合している。特に好ましい実施形態において、アミドカルボニルのＲ基は、２５ｋＤａのＭＷを有する「ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ」である。別の好ましい実施形態は、アミドカルボニルのＲ基が「ポリ（Ｇｌｕ−Ａｍａ）」であるものである。
【００６０】
本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネートジアミン白金（ＩＩ）種のアミンは、同一であるかまたは異なり得る。本発明に関して、アミンは、ＮＨ３（すなわち、アンミン）、一級、二級、および三級アミンであり得る。これらのアミンは、複素環式および／または芳香族であり得る。図３ｂは、Ｒ’がアルキル基またはアリール基である場合の、２つの一級アミンを有するような錯体を示す；Ｒ’がＨである場合には、これはＮＨ３すなわちアンミンである。これら２つのアミンは、別個の実体であり得るか、または単一の実体の２つの部分であり得る。二級アミンおよび三級アミンのそれぞれ２つまたは３つのＲ基は、同じであるかまたは異なり得、ｎ−アルキル、分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリール、これらの組み合わせおよび当業者に公知の他の類似の基であり得る。また、アミンのアルキル基およびアミンは、これらが白金錯体と適合性であることを条件として、他の官能基をもまた有し得る。このような適合性の基としては、アルコール、エーテル、四級アミン、ハライド、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、スルホン酸、三級アミド、エステル、および当業者に公知の他の官能基が挙げられる。非適合性の官能基としては、チオール、チオエーテルなどが挙げられ得る。
【００６１】
Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）組成物の特に好ましい実施形態は、２つのアミンがそれぞれＮＨ３部分であるものである。別の好ましい実施形態は、２つのアミンが１，２−ジアミノシクロヘキサンの一級アミンであるものである。特に好ましいものは、トランス−１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサン立体異性体である（Ｎｏｊｉら、１９８１）。
【００６２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、精製したＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を患者に投与することによって、白金感受性新形成を処置するために使用される。この用量は腹腔内（ＩＰ）、静脈内（ＩＶ）、または経口的に投与され得、ＩＰおよびＩＶの経路が好ましい。これは、水、等張液、または患者への投与に適した何らかの他の媒体に溶解され得る。
【００６３】
本発明の重要な局面は、本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体および関連する錯体の純度および同一性がいかにして決定され得るかを教示する。純度および同一性のこのような決定は、安全性および効力を確実にするために、薬学的製品に対して必要である。同一性および純度の決定のための中心的なものは、１Ｈ核および１９５Ｐｔ核のＮＭＲ分光法である。１Ｈ ＮＭＲから、小さな水素含有不純物が見られ得、そして０．０５％（ｗｔ／ｗｔ）まで低いレベルまで、同定され得る。この錯体の同一性は、部分的には、１Ｈ ＮＭＲ分光法によって同様に確認され得る。例えば、多くの実施例が、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２調製物の帰属とともに、プロトンピークを列挙する。さらに、Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートが、５ｐｐｍと６ｐｐｍとの間のピークの存在から、区別され得る。このピークは、Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートに対してそれぞれ５．８ｐｐｍおよび５．２ｐｐｍの近くに出現する。白金錯体の正確な性質の同定は、１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって最良に決定される。なぜなら、白金共鳴の化学シフトは、その配位子およびそれらの配置に非常に感受性であるからである。アミドマロネートシス−ジアンミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに関して、共鳴がそれぞれ−１７３３ｐｐｍおよび−２０５５ｐｐｍにおいて出現し、アナログに関しては、対応する共鳴は、それぞれ約−１８５０〜−１９００ｐｐｍおよび−２３５０〜−２４００ｐｐｍに出現する。また、他の所望でない白金種が見られ得、そして同定され得る。例えば、実施例３におけるポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートのスペクトルは、他の２つの白金のピークの存在を示す。
【００６４】
他の分析技術が、同一性および純度に関して、ＮＭＲスペクトルを補充および確認する。元素分析から、白金、ナトリウム、塩素、およびホスフェートの量が測定される。［実際の結果は、約９％のＰｔを含み、そして塩素またはホスフェートをほとんどまたは全く含まない、予測されたものに適合する。ナトリウムに関しては、Ｎ，Ｏ−キレートは、予測された量の１．０％のＮａを有することが測定される。Ｏ，Ｏ−キレートは、ナトリウムをほとんど有さない。］カールフィッシャー滴定を使用して、水を測定する。なぜなら、最終生成物がしばしば凍結乾燥されるからである。ポリマーの大きさおよびその分子量分布を、分析用ＳＥＣによって決定する。遊離の低分子白金種の量および生理学的条件下（すなわち、ＰＢＳ３７℃）で放出される白金の量を決定する。なぜなら、遊離の白金種は、所望より高い毒性を導き得るからである。例えば、本明細書中に記載されるＯ，Ｏ−Ｐｔキレートは、Ｎ，Ｏ−キレートよりずっと少量の白金種を放出する。これに対応して、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは、インビボにおいて、本発明のＮ，Ｏ−Ｐｔキレートよりずっと毒性が高い。
【００６５】
本発明の別の局面は、本発明の白金錯体が、ヒトへの投与に適切なレベルまで精製されることを教示する。いくつかの滅菌濾過を組み込み、そして全プロセスに沿って重要な工程においては滅菌環境を使用することに、注意が払われる（図５を参照のこと）。このことは、本発明の滅菌された最終生成物を確実にすることを補助する。不純物のレベルは、限外濾過によって、薬学的に受容可能なレベルまで低減される。このことを、塩化物、ホスフェート、および限外濾過可能な白金に関して最終生成物を分析することによって、確認した。いくつかの実施例によって示されるように、このような塩および小さな白金種のレベルは非常に低く、そして十分に、必要な純度レベルの範囲内である。また、ＴＦＦの間の精製を、白金、リンおよび塩化物に対する透過性を分析することによって、確認した。
【００６６】
本発明の特に重要な局面は、Ｏ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転化がいかにして起こるか、およびいかにして起こらないかを教示する。実験ＤおよびＥの結果の比較は、より高い温度のみでは、キレートの転化を引き起こさないことを示す。なぜなら、実験Ｄにおいては有意なキレート転化が起こらなかったが、実験ＥにおいてはＮ，Ｏキレートへの完全な転化が起こったからである。これらの反応物の両方が、同じ時間だけ加熱された。ＮａＣｌおよびリン酸緩衝液を含む方のみが、キレート転化を示した。このキレート転化を、図７にグラフで示す。この図から見られ得るように、３７℃のＰＢＳ中で１６時間後にも、依然としていくらかのＯ，Ｏ−Ｐｔキレートが残っている。より高い温度および／またはより長い曝露時間を使用する場合には、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは検出されないであろう。実験ＥおよびＦにおいて得られた結果の比較は、より高い温度が、キレート転化の速度を増大させることを明らかにする。なぜなら、５０℃で５時間後には転化は完了したが、３７℃で１６時間後にはいくらかのＯ，Ｏ−キレートが依然として残っていたからである。実験ＦおよびＧは、類似のイオン強度および温度における、３７℃で１６時間後に関して、ｐＨが重要であることを示す。より低いｐＨに曝露された材料は、より高いｐＨにおけるものより多くのＯ，Ｏ−キレートを含んだ。最後に、実験Ｈは、低濃度の緩衝液単独の影響が、キレート転化が起こることを可能にすることを示す。
【００６７】
本発明の別の教示は、特定の最低濃度のＮａＣｌが、アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体のＯ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの効率的な転化のために必要とされることを示す。図１０によって示されるように、キレート転化は、より高いＮａＣｌ濃度が使用される場合には進行しなかった（１０ｍＭのリン酸緩衝液が使用されたことが注目されるべきである。リン酸がキレート転化を引き起こし得ること、およびより高い濃度のリン酸が、調製的なキレート転化を引き起こすために使用されることが、認識される）。
【００６８】
本発明の別の重要な局面は、ＮａＣｌおよびリン酸塩以外の塩類がキレート変換を行い得ることを示す。図１１は、ナイトレート、アセテート、およびアイオダイドのような種々のアニオン類がすべてこのキレート変換を行うことを示す。白金に対して良好ではあるが不安定なリガンドであるアイオダイドは、所定の時間で最高のキレート変換を示した。その一方、アセテートは最小を示した。興味深いことに、ナイトレート（白金に対して弱いリガンド）が、非常に効率的なキレート変換を行った。これらの結果は、ＮａＩが多くの有機溶媒中に可溶であるので有用であり、そしてそれは、非水系キレート変換においてキレート変換を行うために用いられ得る。その一方、高濃度のナイトレートは、その他の所望されないリガンドがキレートし得る系においてキレート変換を行うために用いられ得る。同様に、このキレート変換は、重炭酸緩衝液において円滑に進行した。臭化物、硫酸塩、スルフォン酸塩などのその他の金属類のその他の塩もまた、このキレート変換を行うことが予期される。
【００６９】
本発明の１つの有用な局面では、４＋酸化状態にある白金が、２＋状態の代わりに本発明の複合体のコアを形成する。より高い酸化の本発明の複合体は有用であり得る。なぜなら、それらは、置換に不活性であるからである。従って、そうでなければ、分子の別の部分または所望されない生物学的標的と反応し得る、本発明の４＋状態にある白金が調製され得る。さらに、４＋酸化状態にある白金は、白金化学的療法の経口投与のために用いられている。４＋複合体の合成は、過酸化物、過酸、ハロゲン化合物、および当業者に公知のその他の試薬を用いた酸化に際し、対応する２＋複合体からであり得る。
【００７０】
図１０により示されるように、１２３ｍＭより大きいＮａＣｌ濃度は、キレート変換の速度に有意な影響をもたない。しかし、６０ｍＭ ＮａＣｌでは、キレート変換の程度は、完全なようではなかった。これは、その他のイオン、特にアニオン類が、キレート変換の速度において役割を演じ得ることを示す。
【００７１】
これらの結果は、２５ｋＤａのＯ，Ｏ−Ｐｔキレート（０．８−１．０μＭ Ｐｔ）および２５ｋＤａのＮ，Ｏ−Ｐｔキレート（３．４μＭ Ｐｔ）に対するＩＣ５０値、ならびにシスプラチン（０．５μＭ Ｐｔ）およびカルボプラチン（２．４μＭ Ｐｔ）のそれらが、同じ低マイクロモル濃度範囲に入ることを示す。これは、このインビトロアッセイにより示されるように、これらの試薬のすべてが類似の細胞障害性能力を提示してＢ１６Ｆ１０メラノーマ細胞の増殖を阻害することを示す。このアッセイはさらに、このポリマーの分子量が実質的に増加するとき、この細胞障害性能力が保持されることを示す。なぜなら、４５ｋＤａのＯ，Ｏ−Ｐｔキレート（１．０μＭ）および９０ｋＤａのＯ，Ｏ−Ｐｔキレート（０．９μＭ）もまた、この低範囲内に入るからである。従って、対応するより大きな分子量アナログのＮ，Ｏ−Ｐｔキレートは、それらの高いインビトロ細胞障害性を保持し得ることが予測される。対照的に、このアッセイは、より大きな分子量の非白金化ポリマーの細胞障害性は非常に低い（大きさでコントロール値に匹敵する）ことを示す。これらのデータは、新たに産生されたアナログを、インビボ評価により関与させる前に、高細胞障害性能力を保持することに対して慣用的にスクリーニングするための、このインビトロ系の有用性を示す。
【００７２】
本発明の１つの好適な実施形態において、分子量における広範な分布をカバーする置換されたＨＰＭＡキャリアへの白金の結合は、代表的な哺乳動物腫瘍細胞系において、従来の抗腫瘍白金薬剤により所有される細胞障害性に等しいか、またはそれより大きい、実質的な細胞障害性活性を、これらキャリアに与える（表３）。対照的に、これもまた分子量における広範な分布をカバーする置換されたＨＰＭＡは、そのような細胞障害性活性はない（表３）。本発明の１つの好適な局面は、このような上記細胞障害性活性が、所望のように、部分的には、上記広範な分子量分布を有する代表的な置換されたＨＰＭＡへの、Ｏ，Ｏ−、Ｎ，Ｏ−、およびＤＡＣＨ連結白金成分からなる、広範な種類の白金複合体により与えられるという点でさらにより広範に証明される。
【００７３】
本発明の１つの好適な実施形態では、代表的なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの好適なＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの変換は、予期されないように、かつ所望のように上記代表的なＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに、顕著な耐性の増大を付与し、それによって、所望されるように、顕著により高い用量の治療的抗腫瘍白金成分の全身投与を可能にする（表４）。
【００７４】
本発明の１つの好適な実施形態では、従来薬剤（３ｍｇ／ｋｇのシスプラチン）と比較して、顕著に有利な治療指標は、ポリマーキャリアへの代表的な白金複合体の結合により達成される（１７．５ｍｇＰｔ／ｋｇで投与されるＮ，Ｏ−Ｐｔ複合体の実質的により低い全身障害性）。ここで、両方の治療養生法は、生理食塩水コントロール群の増殖と比較して同程度の腫瘍増殖減少を与える（図１２）。
【００７５】
図１３に示される結果は、本発明の１つの好適な局面をさらに示し、ここでは、抗腫瘍活性が、ポリマーキャリアに連結された治療的白金複合体から得られることが広く期待される。この例では、代表的なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの活性が、生理食塩水コントロール群の腫瘍増殖に対して腫瘍増殖阻害を生じることが示される。上記Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートにより与えられるこの増殖阻害は、従来のシスプラチン療法のそれより有意により明白ではない。図１２に示されるＮ，Ｏ−Ｐｔキレートにより与えられるより好ましい腫瘍増殖阻害活性をともに考慮すると、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートのそれに対するＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの予期せぬ明白な活性が強力に示される。
【００７６】
本発明の１つの好適な実施形態では、強力かつ予期せぬ治療利点が、腫瘍増殖阻害活性において、毎日の×５（ｑｄ×５）養生法について、代表的な従来の白金薬剤（シスプラチン）に対する比較により（両者は、最大許容用量で投与される）、上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートによって付与される（図１４）。
【００７７】
本発明の１つの好適な実施形態では、上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートは、先の例（図１２−１５）の実質的に異なるＢ１６メラノーマモデルに対して、ヒト扁平上皮乳頭腫瘍細胞異種移植片における広範かつ予期せぬ範囲の腫瘍増殖活性を与えることが強力に示された（図１５）。この代表的なヒト異種移植片モデルでは、上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート６５または４００ｍｇＰｔ／ｋｇで、等張グルコースコントロール群の腫瘍増殖に対し、従来の白金薬剤（カルボプラチン）により与えられる強力な活性に相当する活性を与えた。本発明のさらなる好適な局面では上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートの６５ｍｇＰｔ／ｋｇの用量で、６５ｍｇＰｔ／ｋｇのカルボプラチンの投与から生じる障害性、またはより高い用量４００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇの上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートの投与から生じるそれより実質的に少ない全身障害性が観察される。
【００７８】
（用語の定義）
用語「精製された」は、１つの化学的形態において、９５％以上の白金が存在し、しかも反応物質、白金以外の金属のキレート、副産物、塩、遊離リガンド、および／または分解産物（もしあれば）のようなその他の所望されない物質が、全体の１％（ｗｔ／ｗｔ）を超えないように低減され、そしてここで、このような不純物の任意の１つが０．５％より多くない複合体をいう。癌を治療する目的に、動物またはヒト被験体にこの精製された白金複合体を投与するために、この精製された白金複合体は、この精製された白金複合体の安定かつ薬学的に受容可能な処方物を提供するために安全と一般にみなされる認可された薬学的賦形剤および材料と処方され得る。
【００７９】
治療的に効果的な量は、腫瘍後退を引き起こす量である。これは、１ｍｇ／ｋｇ〜１ｇｍ／ｋｇ体重であると考えられる。
【００８０】
用語アクリルアミドポリマーは、ポリアクリルアミドおよびポリメタクリルアミドを含む。
【００８１】
用語「複合体」は、中心の金属原子がリガンドにより取り囲まれる種を示す。
【００８２】
キレートは、複合体の金属原子と環を形成するリガンドをいう。
【００８３】
用語「アミン（ａｍｍｉｎｅ）」はＮＨ３をいい、その一方用語「アミン（ａｍｉｎｅ）」は、ＮＨ３、１級、２級、３級アミンを含み、それらは、脂肪族、芳香族、および／または異環であり得る。
【００８４】
用語「アマ（Ａｍａ）」は、文脈に応じてアミノマロネートまたはアミドマロネートをいう。用語「アミドマロネート」は、２−アミノマロン酸のアミドをいう。それは、酸または塩形態であり得る。
【００８５】
腫瘍を「標的するために有用な」群の本発明の複合体は、その他の組織より腫瘍に活性薬物のより多くを送達するものである。このような標的化は、ＥＰＲにより得られる受動的標的化、または抗体、レクチン、葉酸などへの接合により示されるような能動的標的化を含む。
【００８６】
用語「ポリマー結合Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）複合体」は、ポリマーに共有結合している本発明の複合体をいう。請求項４の「カチオン」は、Ｈ＋、アルカリ、アルカリ土類、およびアンモニウムカチオンをいう。用語「アミノ酸」は、天然および非天然αアミノ酸、ならびにβアラニン、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、ｐ−アミノ安息香酸などのようなアミノ酸を含む。
【００８７】
用語「近位端」は、ポリマーバックボーンの近傍に連結していないオリゴペプチドリンカーの端部をいう。
【００８８】
葉酸誘導体は、葉酸と本発明の複合体のような目的の別の分子との結合体である。葉酸アナログは、メトトレキセート、アメトプテリン、およびプテリンカルボキシレートのような葉酸の近縁化学的関連物の部分である。
【００８９】
用語「ポリサッカライドの側鎖」は、アミドマロネートを形成するため、またはアミドマロネートへの連結の部分として有用な官能基をいう。当業者にとって、カルボキシレート、アミンおよびヒドロキシ基でさえ、アミドマロネートを付着すめために用いられ得る。１つ以上の白金複合体が、この側鎖により各ポリサッカライドに結合され得る。
【００９０】
用語「ポリ（Ｇｌｕ）−Ａｍａ−ｄｉＥｔ」は、カルボキシル側鎖のフラクション（すなわち１５％）のみがＡｍａ−ｄｉＥｔ基により置換されたポリマーを示す。同様に、用語「ポリ（Ｇｌｕ）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２」は、すべてまたは大部分のＡｍａ基がｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）に配位しているＯ，Ｏ−またはＮ，Ｏ−アミドマロネート白金キレートを示す。
【００９１】
用語「ポリ（Ｇｌｕ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ）」は、すべてのカルボキシ側鎖がＡｍａ−ｄｉＥｔ基により置換されたポリマーをいう。用語「ポリ（Ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２」は、Ａｍａ基のほんの一部分（すなわち１０％）がｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種に配位しているＯ，Ｏ−またはＮ，Ｏ−アミドマロネート白金キレートを示す。
【００９２】
（略語）
Ａｍａ、アミノマロネートまたはアミドマロネート；
Ａｍａ−ｄｉＥｔ、ジエチルアミノマロネートまたはジエチルアミドマロネート；
ＡＰ５２８０、は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｎ，Ｏ−キレート ２５ｋＤａ物質である；
ＤＡＣＨ、ジアミノシクロヘキサン；
ＤＣＣ、ジシクロヘキシルカルボジイミド；
ＤＭＡＰ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン；
ＤＭＦ、ジメチルホルムアミド；
ＥＤＣ、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドハイドメロクロライド；
ＦＩＤ、自由誘導減衰；
ＨＯＢｔ、ヒドロキシベンゾトリアゾール；
ＨＰＡ、（２−ヒドロキシプロピルアミン）；
ＭＡ、メタクロイル；
ＭＴＤ、最大許容用量、薬物誘導障害性から生じる死滅がない評価された最高の用量；
Ｎ，Ｏ−Ｐｔ、アミド、カルボキシキレート；
Ｏ，Ｏ−Ｐｔ、ジカルボキシキレート；
ＯＮｐ、ｐ−ニトロフェノールエステル；
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ、ＨＰＭＡおよびｇｌｙ−Ｐｈｅ−ｌｅｕ−ｇｌｙのメタクリルアミドのコポリマー；
ＲＣＦ、相対的遠心力、
ＴＦＦ、タンジェンシャルフロー濾過；
（材料および方法）
（Ｉ．化学品）
シスプラチン、ピリジン、エタノール、エチルアセテート、ジエチルエーテル、ジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、ジエチルＮ−アセトアミドマロネート、ＡｇＮＯ３、ＮａＯＨ、１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサン、ポリグルタメートＮａ塩、ＫＩ、ＰＢＳ混合物は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ ＵＳＡにより供給された。溶媒は、ＨＰＬＣグレードおよびＡＣＳグレードの試薬またはより良好な品質であった。イオン交換樹脂ＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ）Ｈ＋、ＨＯ−形態、ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８Ｈ＋、およびＣｈｅｌｅｘ １００ Ｂｉｏｔｅｃｈグレードは、Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより供給された。クラス１の水は、Ｍｉｌｌｉ−Ｑウォーターシステムから自家調製した。Ｋ２ＰｔＣｌ４は、Ａｌｌ−Ｃｈｅｍｉｅ Ｌｔｄ．Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ，ＳＣにより供給された。フィルターエイド２８９ポンプは、Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌからであった。ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ ４５ｋＤａ、およびポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ ３５１ｋＤａは、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｈｒｏｐｓｈｉｒｅ、ＵＫにより合成された。アミノ酸分析およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳは、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤにより実施された。
【００９３】
（ＩＩ．装置および機器）
スケール０．２μｍに依存して滅菌濾過を、２５ｍｍ Ｗｈａｔｍａｎ ＧＤ／ＸＰＶＤＦシリンジフィルター、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＧＰ Ｅｘｐｒｅｓｓメンブレンを備えたＳｔｅｒｉｔｏｐ媒体ボトルフィルター、またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＰＶＤＦメンブレンを備えたＭｉｌｌｉｐａｋインラインフィルターのいずれかを用いて実施した。ＵＶ光を備えた層流フードを滅菌操作に用いた。ｐＨは、４および１０で校正されたゲル電極を備えたＢｅｃｋｍａｎ Ｐｈｉ−３４ｐＨメーターで測定した。凍結乾燥固体中の静電気は、ＳＩＭＣＯ，Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＰＡからの静電場メーターによりガイドされるように、ＡｌｄｒｉｃｈからのＺｅｒｏｓｔａｔ銃により中和した。白金は、３％ＨＮＯ３中３０−６０ｐｐｍに希釈されたサンプルおよび標準に対し、Ｊｏｂｉｎ ＹｖｏｎＪＹ２４分光計を用いるＩＣＰ−ＯＥＳにより分析した。水分は、ＥＭ ＳｃｉｅｎｃｅからのＡｑｕａｓｔａｒ Ｃ２０００を用いるＫａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ滴定により測定した。Ｎａ、ＣｌおよびＰの元素分析は、Ｄｅｓｅｒｔ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺにより実施した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ，Ｉｎｃ．からの４００ＭＨｚ Ｕｎｉｔｙ／Ｉｎｏｖａシステム上で得た。１９５ＰｔＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎからの３００ＭＨｚ Ｍｅｒｃｕｒｙシステム上で得た。凍結乾燥は、ＶｉｒｔｕｓからのＦｒｅｅｚｅｍｏｂｉｌｅ １２ＥＬ上で実施した。
【００９４】
（ＩＩ．パーセントＯ，Ｏ−およびＮ，Ｏ−キレートのためのアリコート精製）
反応混合物の時限アリコート中のＯ，Ｏ−およびＮ，Ｏ−キレートのパーセントは、１９５Ｐｔ ＮＭＲスペクトル分析のみを行うべき場合、約１００ｍｇ、または％Ｐｔおよび％水分が測定されるべき場合、約２００ｍｇを生じるよう十分な反応混合物（濃度に依存して４−１５ｍＬ）を取り出すことにより測定した。このアリコートは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅからの５ｋＤａ Ｂｉｏｍａｘメンブレンを備えたＣｅｎｔｒｉｃｏｎ Ｐｌｕｓ−２０遠心フィルターを用いる限外濾過により精製した。充填されたデバイスを、推奨されたＲＣＦで約０．５ｍＬ未満が残存するまで回転した。アリコートについて報告された時間は、最初の遠心分離が開始した瞬間である。濾液を棄て、保持液を１５−１８ｍｌの水で希釈し、そしてこのサンプルを先のように遠心分離した。これをもう１回繰り返し、そして保持液を凍結乾燥し、分析用のサンプルを得た。この技法はまた、アミドマロネート基をもつポリマーを含む０．１−２ｇの反応物の精製のために用いた。
【００９５】
（ＩＩＩ．ＰＢＳからの白金放出）
経時的に放出された小白金種のパーセントは、約３０ｍｇのポリマー白金結合体を正確に秤量し、そして１５ｍＬのリン酸緩衝化生理食塩水（１０ｍＭリン酸、１２３ｍＭ Ｃｌ−）中に溶解することにより測定し、そして３７℃の水浴中でインキュベートした。示された時間で、２．０ｍＬのアリコートを、３ｋＤａの公称分子量カットオフをもつ遠心フィルター（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＣｅｎｔｒｉｃｏｎ ＹＭ−３）にトランスファーし、そして即座に１．５ｍｌより多い濾液が蓄積するまで回転した。これらの時限濾液および当初の溶液は、ＩＣＰ−ＯＥＳによって白金を分析した。所定時間に存在する小白金種のパーセントは、式：（濾液中のＰｔ ｐｐｍ／ストック溶液中のＰｔ ｐｐｍ）＊１００により決定した。
【００９６】
（ＩＶ．サイズ排除クロマトグラフィー）
Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートを、３５℃のカラムオーブン内に２つのＰＬ Ａｑｕａｇｅｌ−ＯＨ混合型の８μｍカラム（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｓ製）およびＲＩ検出器を備えるＨＰＬＣ装置から構成されるＳＥＣシステムにおいて分析した。移動相（これは、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏと１０．０ｍＭのＬｉＣｌＯ４との３５／６５混合物からなる）を、１．０ｍＬ／分の流速でポンプ注入した。各分析に３０分を必要とした。カラムをＰＥＯ／ＰＥＧ標準を用いてキャリブレートし、そして結果を保持時間の逆数の関数としてｌｏｇ（Ｍｐ）の４次多項式にフィットさせた。ＭｗおよびＭｎについて記録した値は、移動相に溶解した２ｍｇ／ｍＬのサンプルの１００μｌの、３回の測定の平均を示す。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを、Ｍｅｎｄｉｃｈｉら、１９９６の方法に従って分析した。
【００９７】
（Ｖ．タンジェンシャルフローフィルトレーション）
約２ｇよりも大きいスケールで、Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートのポリマーを、５ｋＤの見かけの分子量のカットオフ値を有するＢｉｏｍａｘポリエーテルスルホンから作製した０．０５〜０．１ｍ２の面積を有する膜を用いるタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）により精製した。濾過の前に、この系を洗浄し、そして推奨される流速で３０〜６０分間０．１Ｎ ＮａＯＨをポンプ注入することにより消毒した。腐食物質を取り出し、そして新鮮な１型水（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水）を、保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）および浸透液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）のｐＨが中性（ｐＨ＜８）になるまで循環させた。浸透液の流速を、２．０バールのインレット圧および０．３５バールのアウトレット圧で測定した。Ｍｉｌｌｉ−Ｑ系由来の新鮮な１型水を、補給水として用いた。
（ＶＩ．ＮＭＲ分析）
１９５Ｐｔ ＮＭＲスペクトルを、Ｂａｎｃｒｏｆｔら、１９９０の方法に従って、５ｍｍチューブ内の、９３／７Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ中の０．７０ｍＬの濾過した溶液から得た。十分なサンプル（８０〜１２０ｍｇ）を用いて、白金が約５０ｍＭ以上である溶液を得た。プローブを、各サンプルについて調製する。９０°のパルス幅、５．１２ミリ秒の取り込み時間、１００ｋＨｚのスペクトルウィンドウ（ｓｐｅｃｔｒａｌ ｗｉｎｄｏｗ）、および遅延なし、を用いた。トランスミッタ（ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ）を、Ｏ，Ｏ−キレートとＮ，Ｏ−キレートとの中間（−１８９６ｐｐｍ）に置いた。５０，０００〜２５０，０００の間の遷移（２０〜９０分）が、代表的に、３５／１を越える十分なｓ／ｎ比を獲得するために必要とされた。得られたＦＩＤを、平坦なベースラインが得られるまで漸増的に左にシフトさせ、１００Ｈｚの線の広幅化を適用し、そして２０４８を満たすフーリエ変換を適用した後、処理した。積分領域を設定し、そしてスペクトルのベースラインを、ＶＮＭＲソフトウェアｖ６．１によるスプラインフィットに供した。サンプルは、９５／５Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ、１００ｍＭＨＣｌ中のＫ２ＰｔＣｌ４の１００ｍＭのサンプル（−１６２４ｐｐｍ）を外部標準とした。これを用いて、９０°のパルス幅およびＴ１もまた測定した。９０°のパルス、２Ｔ１の取り込み時間および３Ｔ１の遅延を用いると、１２８の遷移は、「ｇｅｓｔｎ」命令を用いる標準サンプルについて、３０／１を越えるｓ／ｎを与えた。
【００９８】
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、１９５Ｐｔ ＮＭＲに用いたのと同じサンプルについて獲得した。０．５０秒の取り込み時間、３．０秒の遅延、約７０°のパルス幅、および５０００〜１００００の遷移を、３．５Ｈｚの線の広幅化を適用して、収集した。１００を越えるｓ／ｎを代表的に得た。水性サンプルは、９３／７Ｄ２Ｏ中の１，４−ジオキサン（６７．１９ｐｐｍ）を外部標準とした。他のサンプルは、溶媒ピークを標準とした。
【００９９】
１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ＴＭＳまたはＴＭＳＰを標準とし、そして標準的パラメーターを用いて獲得した。ＨＯＤシグナルの前飽和を頻繁に用いた。カップリング定数（Ｊ）は、ヘルツである。
【実施例】
【０１００】
以下の実施例は、好ましいバージョンおよびこれを作製する方法を含む本発明の実施形態をさらに例示する；しかし、これらの例は、本発明の限定と解釈されない。
【０１０１】
（実施例１）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（約２５ｋＤａ）の調製）
オーブン乾燥した、磁性攪拌子を有する１Ｌ丸底フラスコに、隔壁（ｓｅｐｔａ）を装着し、そして減圧下で冷却した。一旦、冷却した後、窒素を導入し、隔壁を取り出し、そして２９．７９ｇ（１４０．８ｍｍｏｌ）のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩を添加した。隔壁を再び置き、そして８００ｍＬの無水ピリジンをフラスコに挿管注入（ｃａｎｎｕｌａｔｅ）した。溶解後、５０ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ（米国特許第５，９６５，１１８号の化合物Ｉ、図１Ａ）の３分の１を添加した。ほぼ溶解したときに、５０ｇのＯＮｐ−ポリマーの、次ぎの３分の１を、上記のように導入した。この手順を、５０ｇのＯＮｐ−ポリマーの全てが添加されるまで繰り返した。
【０１０２】
反応の程度を、Ｃ１８カラム、３１６ｎｍのＵＶ検出、およびｐＨ４．５／ＭｅＣＮ移動相を用いて、遊離および総量のｐ−ニトロフェノールについて、ＨＰＬＣアッセイによりモニターした。アリコートを、塩基加水分解（ｐＨ＝１２、５分）の後、遊離のＯＮｐおよび総量について分析した。約２３℃で攪拌をしながら２０〜２４時間後、反応が図６に示されるように完了したことを見出した。
【０１０３】
反応混合物を、水浴中で３時間４０〜４５℃に加熱し、室温に冷却し、そしてピリジンを４０℃未満で、減圧除去した。残渣を、無水ＥｔＯＨに溶解して、２５％ｗｔ／ｖｏｌ．の溶液を得た。粗精製物を、２．５Ｌの乾燥ＥｔＯＡｃおよび０．５Ｌのジエチルエーテルを用いて沈殿させた。混合物を、３〜５時間攪拌して、次いで、中目のガラスフリット（ｍｅｄｉｕｍ ｇｌａｓｓ ｆｒｉｔ）を介して濾過した。残渣を、１００ｍＬ未満のエーテルを用いて３回洗浄し、そしてラバーダム下で乾燥して、５７〜５９ｇの淡黄色固体を得た。この固体を、５００ｍＬのＥｔＯＨに溶解し、そして１ｇのろ過ケーキあたり３．１ｇのＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ）ＩＸ樹脂（Ｈ＋および−ＯＨ形態）を添加した。混合物を２．５時間穏やかに攪拌し、次いで、ろ過して、樹脂を取り除いた。ＥｔＯＨの容量を、２５％（ｗｔ／ｖｏｌ．）溶液まで減少させ、そして上記のように沈殿させた。純粋な生成物を収集し、そして上記のように洗浄して、４５〜４６ｇ（約９０％）の淡黄色固体を得た。この物質の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ａｍａ−ｄｉＥｔ基に特徴的なピークを含み、１％未満のＥｔＯＨおよびＥｔＯＡｃの各々を除いて低分子は無かったことを示した（Ｐｉｎｃｉｒｏｌｉら、１９９７）：アミノ酸分析（ｇｌｙ：ＨＰＡ：ｌｅｕ：ｐｈｅのモル比）：３．１：７．１：１．０：１．２；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２０）δ７．２−７．４（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），４．６６（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３１（ｂｒ ｓ，５，α−Ｈ ｌｅｕ，＆ＯＣＨ２ＣＨ３），４．１−３．８（高いおよび低いｍ，約１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３および−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３−２．９（ｍ，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，−ＣＨ２−（ポリマー骨格），ＣＨ２＆ＣＨ（ｌｅｕ）），１．２０（ｂｒ ｓ，約３１，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，および−ＯＣＨ２ＣＨ３），０．９９（ｓ，ＣＨ３−（ポリマー骨格）），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）。
（実施例２）
（シス−ジアミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートの調製）
シスプラチン（８．９９６ｇ、２９．９８ｍｍｏｌ）、ＡｇＮＯ３（９．９５９ｇ、５８．６２ｍｍｏｌ）、３−５滴の５％ＨＮＯ３、および１９０ｍＬの水を、ホイルで覆った低化学作用性メディウム瓶中で約２３℃で一晩攪拌し、次いで６０〜６５℃で３．５時間加熱した。室温まで冷却後、混合物を０．２２μｍフィルターを介してろ過した。ｐＨは約２であった。ＰｔおよびＡｇ分析（ＩＣＰ−ＯＥＳ）は、代表的に、約１５，０００〜２５，０００ｐｐｍのＰｔおよび４〜１４ｐｐｍのＡｇを含むことを示した。各調製物を、Ｐｔについて分析し、そして使用の直前に５５℃にて５分間過熱し、次いで、室温まで冷却した。
【０１０４】
シス−ジアミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートのジ−１５Ｎイソトポリペプチドマーの調製は、１９５ＰｔＮＭＲの−１５８２ｐｐｍのトリプレットを示した。これは、Ａｐｐｌｅｔｏｎら、１９８９により報告された−１５８０ｐｐｍの文献値に厳密に一致する。
（実施例３）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
（１．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの加水分解）
攪拌子を有する１Ｌメディウム瓶において、４５ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（１９．３５ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ残基）を２００ｍＬの水に添加した。激しい攪拌の後、１３５ｍｌの水を添加して、１２〜１３％（ｗｔ／ｖ）混合物を得た。１〜２時間の溶解の際、２７ｍＬ（５４ｍｍｏｌ）の２Ｎ ＮａＯＨを添加して、ｐＨを１２．５〜１２．７に上昇させた。ｐＨを３０分間、この範囲に維持し、次いで、４５ｇのＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ）ＩＸ樹脂（Ｈ＋および−ＯＨ）を添加した。ｐＨ７未満のとき、樹脂を滅菌ろ過により取り出した。濾液のｐＨを２Ｎ ＮａＯＨを用いて７．６に上昇させて、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−（Ｃｏ２−Ｎａ＋）の溶液を得た。
（２．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２、Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
実施例３のポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−（Ｃｏ２−Ｎａ＋）２のｐＨ＝７．６溶液に、実施例２に従って調製したシス−［Ｐｔ（ＮＨ３）２（Ｈ２Ｏ）２］２＋・２ＮＯ３−の、１９９ｍＬの５９０．９ｍＭ（２２，９４０ｐｐｍ Ｐｔ）溶液を一度に加えて、５．０±０．１のｐＨを有する反応混合物を得た。一晩の攪拌の間、ｐＨを約４．２まで下げ、そして少量の沈殿を形成させた。１６〜１８時間後、１７ｇのＣｈｅｌｅｘ １００樹脂を添加し、そして１．５時間攪拌した。ろ過の前に、約０．５ｇのフィルター助剤パルプを添加し、そして分散させた。混合物を粗目のガラスフリット介してろ過した。約１２５ｍｇを含むこの濾液のアリコートを取り出し、０．２μｍの膜を介してろ過し、そして遠心分離限外濾過により精製した。保持液を凍結乾燥して、約１１０ｍｇを得た。あるいは、反応混合物を、実施例４に記載されるように、ＴＦＦにより精製してもよい。１Ｈ ＮＮＭ（Ｄ２Ｏ）δ７．６および７．５５（ｂｒ ｓ，交換，ＮＨ），７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．９（ｂｒ ｓ，部分的に交換，０．２，ＮＨ−Ａｍａ）４．６５（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３７（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ，ＮＨ３またはＣＨ２（ｇｌｙ）），４．１−３．８（高いおよび低い，約１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｂｒｍ，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，−ＣＨ２−（ポリマー骨格），ＣＨ２＆ＣＨ（ｌｅｕ）），１．２０および１．１９（ｓ，約２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ＣＨ３−（ポリマー骨格），０．９（ｓｈ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ１８０．１，１７９．８，１７９．６，１７５．０，１７４．２，１７３．３，１７１．５，１７１．１，１７０．７，１３６．６，１２９．８，１２９．４，１２７．８，６６．５，６６．３，５９．６，５５．６，５４．７，５３．０，４７．９，４６．７，４６．０，４５．６，４３．１，４０．５，３７．８，２４．９，２３．１，２１．６；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ−１５８７，−１７３３，−２０２０，および−２０５６（それぞれ、１：３８：１：４の面積比を有する）。分析は、この物質が、約９％のＰｔ、５〜１０％の水、および０．０２％Ｎａを含むことを示す。
（実施例４）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２、Ｎ，Ｏ−キレート（ＡＰ５２８０）の調製）
（１．Ｏ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転換）
実施例３からのＣｈｅｌｅｘ１００のろ過により約１Ｌの濾液を得た後、溶液を、ＮａＣｌおよび７５ｍＭ リン酸（ｐＨ７．４）中で、５．８５ｇ（１００ｍｍｏｌ）のＮａＣｌ、１６．３５ｇ（６１ｍｍｏｌ）のＮａＨＰＯ４・７、および１．９３ｇ（１４ｍｍｏｌ）のＮａＨ２ＰＯ４を添加することにより１００ｍＭにした。ｐＨを、１Ｎ ＮａＯＨまたは５％ＨＮＯ３を用いて７．４に調整した。この溶液をろ過し、そして０．２２μｍの滅菌膜を介して、滅菌メディウム瓶へと、同じ濃度の緩衝液を用いて洗浄して、１．５Ｌの溶液を得、そして０．２２μｍ膜スクリューキャップを用いてキャップした。この溶液を水浴で３７〜３８℃に温め、次いで、オーブン中で２２時間、３７℃に置いた。この時点での、限外濾過により精製したアリコートの１９５Ｐｔ ＮＭＲ分析は、白金キレートが、９５％以上のＮ，Ｏ−キレートおよび５％未満のＯ，Ｏ−キレートであることを示した（図７を参照のこと）。
（２．Ｎ，Ｏ−キレートのＴＦＦ精製および凍結乾燥）
上記からの１．２ＬのＮ，Ｏ−キレートを、ＴＦＦにより方法の節に記載のように精製した。保持液（透明な暗赤色溶液）を、滅菌ろ過し、そして凍結乾燥して、４１．４ｇ（９２％）の赤褐色の固体を得た：％Ｐｔ＝７．９±０．１５％，５．６％，１．０７％Ｎａ，＜．０５％Ｐ，０．０７％Ｃｌ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．２３（ｂｒ ｓ，部分的に交換，ＣＨ（Ａｍａ）），４．６５（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３７（ｂｒ ｓ，ｌ，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ，ＮＨ３またはＣＨ２（ｇｌｙ）），４．１−３．８（高いおよび低いｍ，約１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｍ，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，−ＣＨ２−（ポリマー骨格），ＣＨ２＆ＣＨ（ｌｅｕ）），１．２０および１．１９（ｓ，約２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ＣＨ３−ポリマー骨格），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ１８６．５，１８５．０，１８０．１，１７９．９，１７９．６，１７６．３，１７５．２，１７５．０，１７４．６，１７４．４，１７４．０，１７３．９，１７３．２，１７１．４，１７１．０，１３６．６，１２９．８，１２９．４，１２７．８，７１．０，６６．５，６６．３，５５．６，５４．７，５２．８，４７．９，４６．０，４５．６，４１．８，４０．５，３７．９，２４．８，２３．１，２１．５，２０．９，２０．７，１８．７，１７．３；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ，６４．４ＭＨｚ）δ−１７３３（ｖ ｂｒ ｓ，Ｏ，Ｏ−キレート），−２０５６（ｓ，Ｎ，Ｏ−キレート），Ｏ，Ｏ−対Ｎ，Ｏの比は、それぞれ、＜５：＞９５；ＳＥＣ Ｍｐ＝２４．５，ＭＷ＝２４．３ｋＤａ，Ｍ＝１５．７
ｋＤａ、およびＭｗ／Ｍｎ＝１．５５；Ｐｔ放出（ＰＢＳ中、３７℃，０．６％（３ｈ），２．０％（２４ｈ））。
【０１０５】
（実施例５）
（Ｏ，Ｏ−キレートの形成）
実施例３の白金処理（ｐｌａｔｉｎａｔｉｏｎ）反応の間の有意なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの形成を、上記に記載されるアリコート精製および１９５Ｐｔ分析を用いて研究した。このような研究の１つからのデータのプロットを、図８に示す。示されるように、反応は、最大量の、９０％のＯ，Ｏ−キレート（１時間）を用いて、迅速に進行した。反応が進行した場合、Ｏ，Ｏ−キレートの量は減少し、そしてＮ，Ｏ−キレートの量は増加し、その結果、２０時間で、８０％のＯ，Ｏ−キレートおよび２０％のＮ，Ｏ−キレートが存在する。従って、Ｏ，Ｏ−キレート物質を必要とする場合、ＴＦＦ精製（実施例４）は、シス−ジアミンジアクア白金（ＩＩ）カチオンの添加の約１時間後に開始するべきである。
【０１０６】
（実施例６）
（実施例４の条件下でのＯ，Ｏ−ＰｔキレートからＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの転換の時間経過）
実施例４に記載のキレート転換の間、アリコートを、種々の時間間隔で得た。これを、遠心分離限外濾過で直ぐに精製し、そして凍結乾燥した。これらを引き続いて、９３／７Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ中に新たに溶解し、そして１９５Ｐｔ ＮＭＲ分析により分析した。ピーク面積比を、各時間点でのスペクトルから獲得した。これを、次いで、％Ｎ，Ｏ−キレートに変換し、そして図９にプロットした。アリコートの組成は、少なくとも２４時間安定であった。
【０１０７】
（実施例７）
（Ｏ，Ｏ−キレートの選択的形成）
Ｏ，Ｏ−キレートを選択的に調製する方法を、アミドマロネート基あたりのシス−ジアミンアクア白金（ＩＩ）カチオンの当量を変化させた場合に観察した。各反応Ａ〜Ｃは、２．０ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを用いて開始した。Ｐｔの数が等しい場合を除いて、反応を実施例３のように行った。反応混合物を凍結乾燥し、そして同じＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１０カラム（２．５ｘ６０ｃｍ）を用いてＳＥＣにより精製した。表１に示すように、１当量未満のＰｔを用いた場合、２当量の白金処理剤を用いた場合よりも、より高い比率のＯ，Ｏ−キレートを見出した。
【０１０８】
（表１．異なる当量のＡｍａ基あたりのＰｔでの白金処理の間のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの形成の％）
【０１０９】
【表１】
（実施例８）
（Ｏ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの変換：ｐＨ、温度、および緩衝液の効果）
実施例３に記載される調製物から単離し、そしてＴＦＦまたはＳＥＣにより精製した有意なＯ，Ｏ−キレート物質を、実施例４において用いた温度、緩衝液、およびｐＨから変更した温度、緩衝液、およびｐＨに供した。代表的には、１０ｍｇ／ｍＬの濃度のポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２の有意なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートを用いた。結果を表２に示す。
【０１１０】
（表２．実施例４のＯ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換の程度に対する温度、緩衝液、およびｐＨの研究からの結果）
【０１１１】
【表２】
ａリン酸塩緩衝化生理食塩水は、１０ｍＭのリン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、および２．７ｍＭのＫＣｌであった
（実施例９）
（ＰＢＳ中でのＯ，Ｏ−キレートからＭ，Ｏ−キレートへの転換：Ｃｌ−濃度の効果）
Ｏ，Ｏ−キレートからＭ，Ｏ−キレートへの転換の割合に対する種々の塩化物濃度が有し得る効果を調べ、そしてこれらの結果を図１０に示す。約１ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２主要Ｏ，Ｏ−キレートを、１０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ＝７．４）に、１０ｍｇ／ｍＬで溶解し、そして３７℃で放置した。１：０５時間後、アリコート（１０ｍＭ Ｐｈｏｓ．）を取り、そしてこの溶液の残りを、十分なＮａＣｌを含む４つの容器に分配して、６０ｍＭ、１２３ｍＭ、２５０ｍＭ、および５００ｍＭのＮａＣｌを得た。１．５時間後（１０ｍＭリン酸塩緩衝液に溶解して２；３５時間後）、これらのアリコートを、遠心限外濾過によって精製し、そしてＮ，Ｏ−キレートの％を、１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって決定した。
【０１１２】
（実施例１０）
（ＰＢＳ中でのＯ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転換：他のアニオンの効果）
塩化物アニオンは、白金（ＩＩ）に対する非常に弱いかまたは非常に強いリガンドのいずれでもないので、塩化物より弱いかまたは強いリガンドのＯ，Ｏ−キレートからＭ，Ｏ−キレートへの転換に対する効果を調べた。実施例９で使用されたＯ，Ｏ−キレートの同じ１０ｍＭのリン酸塩（ｐＨ＝７．４）溶液を使用して、ＮａＮＯ３、ＮａＯＡｃ、およびＮａＩの１２３ｍＭの溶液を作製した。これらのリガンドは、各々、白金（ＩＩ）種に対して非常に弱いリガンド、強いリガンド、および非常に強いリガンドである（Ａｐｐｌｅｔｏｎら、１９８４）。
【０１１３】
（実施例１１）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
（１．シス−ジアクア−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨ白金ＩＩ（シス−（Ｈ２Ｏ）２Ｐｔ−ｌＲ，２Ｒ−ＤＡＣＨ）の調製）
Ｇａｎｄｏｌｆｉ（Ｇａｎｄｏｌｆｉら、１９８７）の方法を使用して、シス−ジアクア−１Ｒ，２Ｒ ＤＡＣＨ白金（ＩＩ）を調製した。１２５ｍＬのＥｒｌ．フラスコ（３．６５ｇ（８．７９ｍｍｏｌ）のＫ２ＰｔＣｌ４および３７ｍＬの水を含む）を加温して、赤茶色の溶液を得、これに６ｍＬの水中の５．８４ｇ（３５．２ｍｍｏｌ）のＫＩの溶液を添加して、暗赤色の溶液を得た。周囲温度に冷却する際に、０．９６２ｇの１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサンを添加し、そして黄色沈澱が直ちに形成された。２５℃での３時間の攪拌後、この混合物を４℃で一晩放置した。この沈澱を回収し、そして冷水、ＥｔＯＨ、およびエーテルで洗浄して、４．９８ｇ（９７％）の（シス−Ｉ２Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨ））を得た。次に、１．００ｇ（１．７７６ｍｍｏｌ）のシス−Ｉ２Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨ、０．５８９８ｇ（３．４７２ｍｍｏｌ）のＡｇＮＯ３、および１６ｍＬの水を、遮光された容器内で組合せ、そして周囲温度で一晩攪拌し、次いで６０〜６５℃で３．５時間攪拌した。周囲温度への冷却の際に、ＡｇＣｌを濾過によって除去し、そして少量の水で１回洗浄した。濾液のＩＣＰ−ＯＥＳによる分析は、それが、１３，５００ｐｐｍのＰｔ（６９．１ｍＭ）シス−（Ｈ２Ｏ）Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨを含むことを示した。
【０１１４】
（２．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
出発物質である２．８０ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（１．２３２ｍｍｏｌのＡｍａ−ｄｉＥｔ基）を加水分解し、そして中和して、実施例３に記載されるようなポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−（ＣＯ２Ｎａ）２のｐＨ＝７．６の溶液を得た。この溶液に、１．４８ｍｍｏｌのシス−（Ｈ２Ｏ）２Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨジニトレート塩を上記からの水溶液として添加し、そして周囲温度で一晩攪拌した。この反応混合物は沈澱を含み、この沈澱を、０．１ｇのフィルター補助パルプの添加の後に滅菌濾過によって除去した。次いで、この反応系の１／３を、上記のように、０．３ｇのＣｈｅｌｅｘ樹脂で９０分間処理し、滅菌濾過し、次いで遠心限外濾過によって精製した。このサンプルを凍結乾燥して、０．７１グラムの赤茶色の固体を得た。８．７％のＰｔ、４．２％のＨ２Ｏ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）７．７および７．６（ｂｒ ｓ，〜５，ＮＨ），７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．８６（ｓ，１．６），４．６５（ｂｒ ｓ，１，αＨ−ｐｈｅ），４．３９（ｂｒ ｓ，１，αＨ−ｌｅｕ），４．１−３．８（ｂｒ ｍ，４，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．９５（ｂｒ ｓ，９，ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，），３．３５−２．９（ｍ，２０，ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．６−２．３．（ｂｒ ｓ，Ｎ−ＣＨ−ＤＡＣＨ），２．２５−１．２（ｍ，ポリマー骨格の−ＣＨ２−，ｌｅｕのＣＨ２＆ＣＨ，およびＤＡＣＨ），１．４５−０．８（ｂｒ ｓおよびｍ，〜９７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，ポリマー骨格のＣＨ３−，ｌｅｕ−ＣＨ３，およびＤＡＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８０．０，１７５．２，１７４．１，１７３．３，１７１．８，１７０．７，１３６．８，１２９．９，１２９．５，１２８．６，１２８．０，６６．５，６６．３，６３．４，５５．５，５４．７，５２．８，４７．９，４６．７，４６．０，４５．６，４３．５，４０．５，３７．４，３２．４，２４．８，２３．２，２１．５，２０．９，２０．８，１８．６，１７．６，および１７．２；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ約−１９００（ｖ ｂｒ ｓ，かろうじて認知可能，Ｏ，Ｏ−Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，−）；ＰＢＳ中でのＰｔ放出，３７Ｃ：３時間で６．０％，２４時間で１０．９％。
【０１１５】
（実施例１２）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，Ｎ，Ｏ−キレートの調製）
実施例１１からの反応混合物の残りの２／３を０．６ｇのＣｈｅｌｅｘ樹脂と共に、９０分間攪拌し、そして次いで滅菌濾過した。この透明な溶液を、１１０ｍＭのＮａＣｌおよび８０ｍＭのリン酸塩、ならびにｐＨ＝７．４にした。これを、３７〜３８℃に２２時間維持し、次いで遠心限外濾過によって精製し、そして凍結乾燥して、１．３３ｇの赤茶色の固体を得た。８．１％のＰｔ、７．１％のＨ２Ｏ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．１７（ｓ，０．３），４．６５（ｂｒ ｓ，１，αＨ−ｐｈｅ），４．３８（ｂｒｓ，ｌ，αＨ−ｌｅｕ），４．１−３．８（ｂｒ ｍ，４，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．９５（ｂｒ ｓ，９，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，），３．３５−２．９（ｍ，２０，ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．６−２．２．（ｂｒ ｍ，Ｎ−ＣＨ−ＤＡＣＨ），２．２５−１．２（ｍ，ポリマー骨格の−ＣＨ２−，ＣＨ２，ｌｅｕのＣＨ，およびＤＡＣＨ），１．４５−０．８（ｂｒ ｓおよびｍ，〜１００，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，ポリマー骨格のＣＨ３−，ｌｅｕ−ＣＨ３，およびＤＡＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８６．８，１８５．３，１８０．０，１７５．１，１７４．６，１７４．１，１７３．５，１７１．５，１７１．１，１３６．７，１２９．９，１２９．５，１２７．９，７０．２，６６．５，６６．３，６４．２，６３．３，６１．０，５５．６，５４．７，５２．９，４７．９，５６．７，４６．０，４５．６，４４．２，４３．３，４１．２，４０．５，３７．９，３２．７，２４．８，２４．６，２３．１，２１．５，２０．９，２０．７，１８．６，１７．３；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ −２２９３，−１９００にピークなし，および他のピークなし。ＰＢＳ中でのＰｔ放出，３７℃：３時間で２．０％、２４時間で２．１％。
【０１１６】
（実施例１３）
（ポリ（グルタメート）−Ａｍａ−ｄｉＥｔの調製）
Ｌｉ（Ｌｉら、１９９８）の手順を適合して、ポリグルタメートの遊離カルボキシレートの約１５％を置換した。０．５ｇ（３．２９ｍｍｏｌの−ＣＯ２基）のポリグルタメートおよび攪拌子を含むボトルに、１０４ｍｇ（０．４９３ｍｍｏｌ）のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、３ｍｇのＤＭＡＰ、および１０ｍＬの無水ＤＮＭ（ＨＰＬＣグレード、４Ａシーブスで＞４８時間）を、ドライボックス中で添加し、そして攪拌して、濁った混合物を得た。次いで、３１５ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ）のＤＣＣを添加し、ボトルの口に隔壁を挿入し、エーテル中の１．０Ｍ ＨＣｌの２ｍＬを添加し、そしてこの混合物を周囲温度で一晩攪拌した。その後、約１５ｍＬのＣＨＣｌ３を添加し、そしてこの濁った混合物を、３８５０ＲＣＦで１５分間遠心分離した。上清を破棄し、そして白色のゲル物質を２．５％のＮａＨＣＯ３と共に３０分間攪拌した。この混合物を前のように遠心分離し、そして上清を凍結乾燥して、１．９１ｇの白色固体を得、この固体の１Ｈ ＮＭＲは、ＤＭＦ、ＥｔＯＨ、ＤＣＣ／ＤＣＵの存在、ならびにポリグルタメートおよびジエチルアミドマロネート、ならびにジエチルアミノマロネートのピークを示した。（４．３ｐｐｍ（ｇｌｕのα−ＣＨおよび−ＯＣＨ２ＣＨ３）および２．４ｐｐｍ（ｇｌｕのＣＨ２）でのピーク面積は、約１：１であり、ここでポリグルタメートにおけるのと同様に、それらは各々、１：２である。）この物質を水に溶解し、そして遠心限外濾過によって精製して、２１６ｇの白色固体を得、この固体の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ＤＣＣ／ＤＵＣの存在を示した。また、Ｄ２Ｏ中の溶液へのＮａＯＤの添加は、ポリ（ｇｌｕ）−Ａｍａ−ｄｉＥｔ １ｇあたり０．６７ｍｍｏｌのＡｍａ−ｄｉＥｔ基に対応するＥｔＯＨを遊離する。さらに精製することなく、これを実施例１４において使用した。
【０１１７】
（実施例１４）
（ポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの調製）
（１．ポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−キレートの調製）
攪拌子を含む２０ｍＬのバイアル中の４ｍＬの水に、実施例１３からの１８８ｍｇ（０．１２６ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ当量）のポリ（ｇｌｕ）−Ａｍａ−ｄｉＥｔを添加した。一旦溶解した後、ｐＨを１２．４〜１２．８に２０分間上昇させ、次いで０．２ｇのＡＧ−５０Ｗ−Ｘ８ Ｈ＋ ＩＸ樹脂を添加した。２分以内にｐＨが６に下がった。この樹脂を、粗ガラスフリットを通す濾過によって除去し、次いで濾液を滅菌濾過した。濾液のｐＨを、新しい２ＮのＮａＯＨで７．１に上昇させ、そして実施例２に従って調製した、１．３ｍＬの、シス−ジアンミンジアクア白金（ＩＩ）２ＮＯ３−の１９，０００ｐｐｍのＰｔ溶液（０．１２６ｍｍｏｌ）を添加した。これを３５分間攪拌し、次いで、上記のように遠心限外濾過によって精製した。１８ｍＬに濃縮し、そして各々１５ｍＬの水での３回の洗浄の後、この保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）を凍結乾燥して、１８２ｍｇの白色固体を得、この白色固体の１９５Ｐｔ ＮＭＲスペクトルは、各々、約１：４の比の２つのピーク、−１５９５ｐｐｍおよび−１７３２ｐｐｍを示した。−１７３２での主ピークは、シス−ジアンミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−アミドマロネートキレートである。この物質をさらに精製する試みにより、おそらくシス−ジアンミンＰｔによるグルタメートカルボキシレートの架橋に起因するゼラチン状塊を得、このため、この物質は、実施例４および関連する実施例のキレート転換条件に供された。
【０１１８】
（２．ポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートの調製）
上のポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−キレートを、１１０ｍＭのＮａＣｌ、８５ｍＭのリン酸塩、ｐＨ＝７．４にされたサンプルを用いて、実施例４のＯ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転換条件に供した。３８℃で約２２時間の後、これを遠心限外濾過によって精製し、そして保持液を、凍結乾燥して、１６３ｍｇの白色固体を得、この固体は、１５．５％のＰｔ（０．７７ｍｍｏｌ Ｐｔ／ｇポリマー）、０．０３５％のＰを含んだ；１８６．９，１８３．６，１８２．８，１８２．１（ｐ−ｇｌｕ），１８０．０，１７５．３，１７４．２（ｐ−ｇｌｕ），１７３．６，１７２．５，１７１．０，１７０．７，１５５．７，７２．１，６３．６，６２．７，６０．４，２５．４，５４．２（ｐ−ｇｌｕ），５３．５，５１．６，３４．２（ｐ−ｇｌｕ），３２．１，３１．４，３０．８，２８．６（ｐ−ｇｌｕ），２６．０，２５．５，２５．０；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（９３／３ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ １５９５ （ｖ ｂｒ ｓ，２２％，（ＮＨ３）２Ｐｔ（ＲＣＯ２）および（ＲＣＯ２，Ｈ２Ｏおよび／またはＨＯ））および−２０５３（ｂｒ ｓ，７８％，アミドマロネートのＮ，Ｏ−キレート）。
【０１１９】
（実施例１５）
（ポリ（ｇｌｕ−ＡｍａｄｉＥｔ）の調製）
Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ（ＤａｎｉｓｈｅｆｓＩｋｙら、１９７１）の手順を適合して、ポリグルタメートの全てのカルボキシル基を置換した。０．５ｇ（３．２９ｍｍｏｌの−ＣＯ２Ｎａ基）のポリグルタメートおよび攪拌子を含むボトルに、１．３９ｇ（６．５８ｍｍｏｌ）のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、１．８９ｇ（９．８６２ｍｍｏｌ）のＥＤＣ、０．５０３ｇ（３．２８７ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔおよび２０〜２５ｍＬの無水ＤＭＦ（ＨＰＬＣグレード、４Ａシーブスで＞４８時間）をドライボックス中で添加し、そして攪拌して、濁った混合物を得た。周囲温度で一晩攪拌した後、この混合物を１５０ｍＬの水に注いで、白色固体の沈澱を得た。（４．３ｐｐｍ（ｇｌｕのα−ＣＨおよび−ＯＣＨ２ＣＨ３）および２．４ｐｐｍ（ｇｌｕのＣＨ２）でのピーク面積は、約１：１であり、ここでポリグルタメートにおけるのと同様に、それらは各々、１：２である。）この物質を、水に溶解し、濾過によって回収し、そして水で洗浄した。減圧下で３日間乾燥した後、０．７９ｇ（８４％）の固体物質を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．２５（ｖ ｂｒ ｓ，１，ＮＨ−ｇｌｕ），７．２４
（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ−Ａｍａ），５．１６（ｄ，１，Ｊ＝５．７，ＣＨ−Ａｍａ），４．２２および４．１（ｍおよびｂｒ ｓ，ＯＣＨ２ＣＨ３およびＣＨ−ｇｌｙ）２．６５，２．３３，および２．１８（ｂｒ ｓ，４，ＣＨ２ＣＨ２−ｇｌｕ），ならびに１．２６（ｂｒ ｔ，６，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ １７５．９，１７１．９，１６６．５，６２．４，５６．８，５６．４，３２．５，２６．３，および１３．９。さらに精製することなく、これを実施例１６で使用した。
【０１２０】
（実施例１６）
（ポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの調製）
０．７９ｇ（２．７５ｍｍｏｌのＡｍａ−ｄｉＥｔ基）のポリ（ｇｌｕＡｍａｄｉＥｔ）の、約３０ｍＬのＥｔＯＨスラリーを、新たな４０ｍＭ ＮａＯＨと合わせた。ｐＨを１２．３−１２．６に維持し、そして混合物を、加温し、そして３０分間超音波処理した。この混合物は多少濁っていた。ｐＨを、１．８ｇのＨ＋ ＩＸ樹脂を用いて、７．２６に減少させ、滅菌濾過して、かすかに黄色の溶液を得た。容積を、約３０ｍＬに減圧下で減少させ、４．２ｍＬの、シス−ジアンミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートの１８，４００ｐｐｍ Ｐｔ（０．３９ｍｍｏｌ）溶液を添加して、ｐＨ＝５．９７の溶液を得た。これを、５％ ＨＮＯ３を用いて５．０に減少させ、そして周囲温度で１時間攪拌した。
【０１２１】
（１．ポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートの単離）
１時間の攪拌後、ポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２反応混合物のサンプルを凍結乾燥して、９０ｍｇの白色固体を得、この固体の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、６７％のみのエチルエステルが加水分解されたことを示した：１０．３％のＰｔ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ ５．９３（ｓ，０．１交換された，ＣＨ−ａｍａ），４．４−４．１（ｍ，３．４，ＣＨ−ｇｌｕ，ＯＣＨ２ＣＨ３、およびＮＨ３？），２．４６（ｂｒ ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２），２．０７（ｂｒ
ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２），および１．２５（ｂｒ ｑ，２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ １７５．１，１７５．０，１７４．８，１７４．５，１７３．８，１７１．１，１７１．０，１７０．８，１７０．５，６３．６，６０．７，６０．４，６０．０，５３．７，３１．９，２７．８，および１４．０；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ −１７３４（Ｏ，Ｏ−Ｐｔ，８６％）および−２０３４（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ，１４％）。
【０１２２】
（２．Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートからＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの転換およびポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートの単離）
残り３２ｍＬのポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート溶液を、２０７ｍｇのＮａＣｌ、７６ｍｇのＮａＨ２ＰＯ４ １Ｈ２Ｏ、および５８８ｍｇのＮａ２ＨＰＯ４ ７Ｈ２Ｏを添加することによって、１１０ｍＭ ＮａＣｌ、８５ｍＭリン酸塩にした。ｐＨを７．４に調節し、この溶液を滅菌濾過し、そして４２℃で１６時間インキュベートした。この溶液は、多少濁っていた。次いで、これを再濾過し、次いで遠心限外濾過によって精製した。保持液を凍結乾燥して、約６００ｍｇの明るい黄色の固体を得た：１１．４％のＰｔ，１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ ５．２（ｂｒ ｓ，０．１交換された，ＣＨ−ａｍａ），４．５９ （ｂｒ ｓ，０．２），４．４−４．１（ｍ，２．５，ＣＨ−ｇｌｕ，およびＯＣＨ２ＣＨ３）、４．００および３．８５（ｂｒ ｓ，０．２５），２．４７（ｂｒ ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２），２．０６（ｂｒ ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２）、および１．２５（ｂｒ ｑ，２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ
ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ １７５．１，１７４．８，１７４．４，１７３．７，１７１．０，１７０．８，１７０．５，６３．５，６３．１，６２．７，５３．７，３２．２，３１．８，２７．９，１４．０；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ −１７３０（Ｏ，Ｏ−Ｐｔ，８％）および−２０５３（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ，９２％）。
【０１２３】
（実施例１７）
（Ｎ−アセトアミドマロネート＝Ｐｔ（ＮＨ３）２ Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの調製）
２０ｍＬのバイアル中で、８００ｍｇ（３．６８ｍｍｏｌ）のＮ−アセトアミドマロネートを、８ｍＬの水および２．０ｍＬの２Ｎ ＮａＯＨとともに攪拌した。３分以内に、ｐＨ＝１２．６のかすかに黄色の溶液を得た。３０分後、Ｈ＋
ＩＸ樹脂を添加し、そしてｐＨを７．０に下げた。この樹脂を濾過によって除去し、ｐＨを７．５に上げ、そして２３．５ｍＬの、シス−ジアンミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートの２８，３７５ｐｐｍのＰｔ（３．６３ｍｍｏｌ）溶液。ｐＨを４．４に下げた。２滴の２Ｎ ＮａＯＨの添加の際に、白色固体を形成した。この混合物を濾過し、そしてサンプルをＤ２Ｏにおいて１０％にし、そして１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって分析した。−１７３４のピークのみが明確であった。
【０１２４】
この濾液を、ＫＩが１００ｍＭ、そしてＫＨＣＯ３が５０ｍＭになるようにし、そして滅菌濾過した。そのｐＨは、７．７〜７．９であった。これを、４０℃で１８時間放置した。形成した橙色の沈澱を濾過によって除去し、そして濾液を減圧下でストリッピングした。残渣を、２０ｍＬのアセトンと共に、１時間攪拌した。一部分を濾過し、７％Ｄ２Ｏにし、そして１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって分析した。−２０５７ｐｐｍの１つのピークのみが明確であった。
【０１２５】
（実施例１８）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（４５ｋＤａおよび３５０ｋＤａ）の調製）
１．ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの調製
約２５ｇのＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐを、ＤＭＦ溶液中１．２当量のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、３当量ＴＥＡ、１当量ＨＯＢｔで５０℃で約１６時間処理した。ＤＭＦを真空中で除去し、そして残渣をジエチルエーテルでスラリーとし、一晩４℃まで冷却した。生成物を濾過によって採集し、エーテルで洗浄し、そして真空中で乾燥し、ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを得た。この正体および純度を１Ｈ ＮＭＲスペクトル法およびＨＰＬＣによって確認した。１Ｈ
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７４（ｄ，１，Ｊ＝７．３，ＮＨ−Ａｍａ），８．１４（ｔ，１，Ｊ＝５．９，ＣＨ２−ｇｌｙ），８．１１（ｄ，１，Ｊ＝８．２，αＣＨ ｌｅｕ），８．０３（ｔ，１，Ｊ＝８．２，ＣＨ２ｇｌｙ），８．０１（ｄ，１，Ｊ＝８．２，ＮＨ−ｐｈｅ），７．３−７．０（ｍ，５，ＡｒＨ），５．７０（ｓ，１， ＝ＣＨ２），５．３７（ｔ，１，Ｊ＝１．６， ＝ＣＨ２），５．０９（ｄ，１，Ｊ＝７．３，ＣＨ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ），４．５３（ｍ，１， ｐｈｅのαＣＨ），４．３２（ｍ，４，ＯＣＨ２ＣＨ３），３．９−３．７（ｍ，３，ＣＨ２−ｇｌｙ）．３．６３および３．５９（ｄｄ，１，Ｊ＝１６，３，５．８），３．１−３．０および２．８３−２．７３（ｍ，２，ＣＨ２−ｐｈｅ），２．５１，（ｍ，３，Ｊ＝１．７，ＣＨ３−Ｃ＝ＣＨ２），１．５９（ｍ，１，Ｊ＝６．５，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２，１．４９（ｔ，２，Ｊ＝７．５，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．２１６および１．２１４（２ ｔ，６，Ｊ＝７．２，ＯＣＨ２ＣＨ３），０．８８（ｄ，３，Ｊ＝６．６，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），および０．８４（ｄ，３，Ｊ＝６．５，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）。
【０１２６】
２．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（約４５ｋＤ）の調製
コンデンサを伴う容器に、１２．７ｗｔ％のＨＰＭＡモノマーおよびＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔモノマー（９０／１０比）のそれぞれ、０．６ｗｔ％純粋ＡＩＢＮ、１０ｍｏｌ％ ｐ−ニトロフェノール（全モノマーのうち）、および８６ｗｔ％アセトンを加えた。混合物を、窒素バブルを用いて３０分以上の間脱気し、次いで５０℃で６５時間加熱した。固体生成物ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを濾過によって採集し、そしてエーテルで洗浄した。これを約２５％ｗｔ／ｖｏｌのａｂｓ．ＥｔＯＨ中で再溶解し、次いで８容量のＥｔＯＡｃで沈殿させた。得られた固体を濾過によって採集し、エーテルで洗浄し、そして真空中で乾燥し、約２０ｇのオフホワイト色の粉末を得た。これの１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、２５ｋＤａ型と非常に類似していた。Ｍｗ＝４４．５ｋＤａ、ＰＤＩ＝１．７６、バイモーダル（ｎｉｍｏｄａｌ）。アミノ酸分析：（１１ｍｏｌ／ｍｇポリマー）２．７：８．１：０．９：０．９のｇｌｙ：２−ヒドロキシプロピルアミン：ｌｅｕ：ｐｈｅ（それぞれ）；ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（ＮＢＡマトリックス） ｍ／ｚ Ｍ＋４０−４５ｋＤａ、Ｍ＋２ １４−１６ｋＤａ。
【０１２７】
（３．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（約３５０ｋＤ）の調製）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの４５ｋＤバッチの手順を、ｐ−ニトロフェノールを省いたことを除いて繰り返した。約２５ｇの白色粉末が得られた。これの１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ピークはより広いものであったが、２５ｋＤａ型と非常に類似していた。Ｍｗ＝３５１ｋＤａ、ＰＤＩ＝３．９５、トリモーダル（ｔｒｉｍｏｄａｌ）。
【０１２８】
（実施例１９）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２、Ｎ，Ｏ−キレート ４５ｋＤａの調製）
攪拌子を含む２５０媒体ボトルに、７２ｍＬの水および１５．５ｇ（６．８２ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ基）のポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔをそれぞれ添加した。力強い攪拌が確立されると、４８ｍＬの水をさらに添加し、そして混合物を約１時間攪拌し、淡紫色の溶液を得た。この溶液に１２ｍＬの新鮮な２Ｍ ＮａＯＨを添加し、そしてｐＨは１２．６に上昇した。ｐＨを３０分間１２．４〜１２．８に維持し、次いで１５．４ｇの混合床ＩＸ樹脂（ＡＧ ５０１−Ｘ８（Ｄ）、Ｈ＋形態、−ＯＨ形態）を添加した。３分後、ｐＨは５．０に低下し、この樹脂を滅菌Ｓｔｅｒｉｔｏｐ １５０ｍＬフィルタによる濾過によって除去した。濾液のｐＨを新鮮な２Ｎ ＮａＯＨで７．６０にまで上げ、そして８．１４ｍｍｏｌ（６４ｍＬ、２４，２００ｐｐｍ Ｐｔ）の新たに調製したジアミン−ジアクア白金（ＩＩ）溶液を１つ分添加した。添加後、ｐＨは５．１であり、そして一晩攪拌した。その後、ｐＨは、４．４２であり、そして５．１０ｇ Ｃｈｅｌｅｘ １００樹脂を添加した。ｐＨは５．３３に上昇し、そして混合物を９０分間攪拌した。樹脂を粗ガラスフリットによる濾過によって除去し、４６０ｍＬの溶液を得た。濾液を、２．９６ｇ ＮａＣｌ、１．０８ｇ ＮａＨ２ＰＯ４ Ｈ２Ｏ、および７．６６ｇ Ｎａ２ＨＰＯ４ ７Ｈ２Ｏの添加により、ＮａＣｌ中１１０ｍＭ、ホスフェート中８０ｍＭとした。２Ｎ ＮａＯＨおよび５％ ＨＮＯ３を用いてｐＨを７．４に調整し、次いでＳｔｅｒｉｔｏｐフィルタを通して滅菌した媒体ボトルに滅菌濾過し、生物学的安全フード内でメンブレンキャップをかぶせた。これを３９℃湯浴中に２０分間置き、次いでインキュベータオーブン中に３７〜３８℃で置いた。
【０１２９】
３７〜３８℃で２２時間後、溶液をＴＦＦによって精製した。この溶液を５％ｗｔ／ｖｏｌに濃縮し、７容量の透過液を採集し、次いでこの透過液がわずかに色づいたときに保持液を８〜１０％に濃縮した。保持液を、Ｍｉｌｌｉｐａｋ ２０フィルタを通して滅菌した凍結乾燥フラスコに滅菌濾過した。凍結乾燥後、１１．２ｇ（６６％）のオフホワイト色の固体を得た：８．８９％ Ｐｔ、５．４％ Ｈ２Ｏ、１．０３％ Ｎａ、０．０５％ Ｃｌ、＜０．０５％ Ｐ；１Ｈ
ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．２３（ｂｒ ｓ，部分交換，ＡｍａのＣＨ），４．６６（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３７（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ， ｇｌｙのＮＨ３またはＣＨ２），４．１−３．８（高いｓおよび短いｍ，〜１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｍ，１８，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，ポリマーバックボーンの−ＣＨ２−，ｌｅｕのＣＨ２およびＣＨ），１．２０および１．１９（ｓ，〜２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ポリマーバックボーンのＣＨ３），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８６．７，７１．０，および他のピークは全て実施例４について報告のとおり；１９６Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ−２０５５（１００％）。
【０１３０】
（実施例２０）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２， Ｎ，Ｏ−キレート ＞３５１ｋＤａの調製）
攪拌子を備えた５００ｍＬ媒体ボトルに、１２０ｍＬ水および２０ｇ（８．８０ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ）ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（３５１ｋＤａ）をそれぞれ添加した。力強い攪拌が確立されると、１００ｍＬの水を添加し、そして全てのポリマーが溶解したときに混合物を２時間攪拌し、無色の溶液を得た。ｐＨ電極を挿入し、そして１４ｍＬの新鮮な２Ｎ ＮａＯＨを添加した。ｐＨは１２．７４に上昇し、これを３０分間１２．４〜１２．８の間に保持した。その後、１９．９ｇの混合床（Ｈ＋形態、−ＯＨ形態）ＩＸ樹脂（ＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ））を添加し、そして３分以内に、ｐＨは６に低下した。この混合物をＳｔｅｒｉｔｏｐボトルトップフィルタを通して滅菌濾過し、そしてそのｐＨを２Ｎ ＮａＯＨおよび５％ＨＮＯ３で７．６３に調整した。１つ分において、８５．５ｍＬの新たに調製したジアミンジアクア白金（ＩＩ）溶液の２４，２００ｐｐｍ Ｐｔ溶液（１０．６ｍｍｏｌ）を添加し、５．０２のｐＨを得た。この溶液は、粒子の大きさに起因してわずかに曇っているようであった。これを室温で一晩攪拌した。この間にｐＨは、４．２５に低下し、そして６．７７ｇ Ｃｈｅｌｅｘ １００樹脂を添加した。ｐＨは５．３３に上昇し、そして９０分の攪拌後、０．２ｇのフィルタ補助パルプを添加した。混合物を粗ガラスフリットを通して滅菌濾過した。この溶液７２５ｍＬを、４．６６１ｇ（７９．８ｍｍｏｌ）ＮａＣｌ、１２．２４ｇ（４５．７ｍｍｏｌ）Ｎａ２ＨＰＯ４ １２Ｈ２Ｏ、１．７０３ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）ＮａＨ２ＰＯ４ １Ｈ２Ｏのそれぞれの添加により、ＮａＣｌ中１１０ｍＭおよびホスフェート中８５ｍＭとした。ｐＨを７．４に調整し、次いでＳｔｅｒｉｔｏｐフィルタを通して１Ｌ媒体ボトルに通過させた。このボトルをメンブレンキャップで封鎖し、そして湯浴中に４０℃で２０分間置き、次いでインキュベータオーブン中に３７〜３８℃で置いた。約２２時間後、内容物を上記のようにＴＦＦによる精製に供した。ＮＭＲ分光法を約５０ｍｇで実施した。これは、より濃縮した溶液では粘性でありすぎたからである。保持液の凍結乾燥により、１９．９ｇの白色固体を得た：７．９５％Ｐｔ，７．０％Ｈ２Ｏ，１．０３％Ｎａ，０．０９％Ｃｌ，＜０．０５％Ｐ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．２３（ｂｒ ｓ，部分交換，ＡｍａのＣＨ），４．６５（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３８（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ， ｇｌｙのＮＨ３またはＣＨ２），４．１−３．８（高いｓおよび短いｍ，〜１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｍ，１８，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，ポリマーバックボーンの−ＣＨ２−，ｌｅｕのＣＨ２およびＣＨ），１．２０および１．１９（ｓ，〜２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ポリマーバックボーンのＣＨ３），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８６．７，７１．０，および他のピークは全て実施例４について報告のとおり；１９６ＰｔＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ−２０５５（１００％）．；ＳＥＣトリモーダル，Ｍｐ＝４６８ｋＤａ，１４７ｋＤａ Ｍｎ＝６６．３ｋＤａ，ＰＤＩ＝１３．８；Ｐｔ放出：０．６８％（３ｈ）、２．２８％（２４ｈ）。
【０１３１】
（実施例２１）
（Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートのインビトロ活性）
組織培養物における活性の特徴づけ。種々のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートアナログの相対的細胞傷害性活性を、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞の組織培養物を用いるクロノジェニック（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ）（コロニー形成）アッセイによってインビトロで評価した。このようにして、アナログの活性をシスプラチンおよびカルボプラチン（活性のある従来の白金剤）の活性と比較した。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートへの変換の効果もまた評価した。簡潔に述べると、細胞を培養皿に播種し、そして付着させた。この培養物を、所望の濃度の試験剤を含有する培地中で７日間インキュベートした。固定後、５０より多い細胞を含む細胞塊の数をコロニーとして記録した。各濃度の試験剤を三連でアッセイした。三連の皿のにおけるコロニーの平均数を、コントロール（試験剤なし）の皿におけるコロニーの平均数で割り、各濃度の試験剤について生存値％を得た。試験剤の各々のＩＣ５０（増殖の５０％阻害を生じる濃度）を、５０％生存点をすぐ上回るおよび下回るデータ値を用いて、直線回帰分析を行うことによって決定した。
【０１３２】
（表３．アミドマロネートのＯ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートについてのクロノジェニックアッセイからの細胞傷害性結果）
【０１３３】
【表３】
（実施例２２）
（寛容化および最大耐用量研究）
ＡＰ５２８０（すなわちポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＫＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２）のＮ，Ｏ−Ｐｔキレート形態に対してＯ，Ｏ−Ｐｔキレート形態を比較する単回用量ＩＶ研究は、マウスにおける最大耐用量（ＭＴＤ）がそれぞれ、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートについては８０〜１００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇ、Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートについては４００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇであることを示し、これは、安全性領域の増大がポリマー結合Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートにより与えられることを示す。これらの研究のために、ＭＴＤを、マウスの死亡が薬物誘導傷害性から生じなかった、評価した最も高い用量であると定義した。
【０１３４】
両キレートの多回用量の寛容（いずれかのキレートを毎日５用量与えたＢ１６メラノーマ腫瘍を有する１０匹のマウスの群の最大平均体重損失によって表される）を、表１に示す。これらのデータはまた、Ｎ，Ｏ−ＰｔキレートがＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの等価用量（１７．５ｍｇＰｔ／ｋｇ）で傷害性がないこと、および等価の平均重量損失を生じるためには、Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートは、実質的により高い用量（＞２４０ｍｇＰｔ／ｋｇ）が必要であることを示す。
【０１３５】
（表４．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−およびＮ，Ｏ−Ｐｔキレート、２５ｋＤａの毎日５回投与について体重減少平均パーセントとして表されるＡＰ５２８０の寛容化）
【０１３６】
【表４】
（実施例２３）
（ｓ．ｃ．Ｂ１６メラノーマモデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ）対シスプラチンおよび生理食塩水コントロールの腫瘍増殖阻害を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびシスプラチンをそれぞれ１７．５ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇで、ｑｄ×５のスケジュールで投与した。このＮ，Ｏ−キレート用量は、そのＭＴＤを十分に下回る。一方、シスプラチン用量は、そのＭＴＤの近傍である。処置群当たり１０匹の動物に対し、１０６のＢ１６Ｆ１０マウスメラノーマ細胞を右側の背部の横腹にｓ．ｃ．接種した。移植後６日目を始めとして、毎日、腫瘍の大きさを軽いメトフラン（Ｍｅｔｈｆｕｒａｎｅ）麻酔下でカリパスによって測定した。生じた腫瘍の重さ（ｍｇ）を、式（Ｗ２×Ｌ）／２（ここで、Ｗは、短い方の腫瘍寸法の長さであり、そしてＬは、長い方の寸法の長さである（ｍｍ））によって概算した。腫瘍が５０ｍｇより大きな大きさであったとき、各動物において処置を開始した。各研究動物は個々に従い、各動物についての処置の１日目は、腫瘍の大きさが投与の開始を示した日に対応した。全ての試験化合物を、尾静脈を介してＩＶ投与し、そして体重２０ｇ当たり０．２〜０．３ｍＬの容量で投与した。投与容量を確立するために投与前に毎日、およびその後研究の終了まで毎日、動物を観察し、そしてその体重を量った。結果を図１２に示す。
【０１３７】
（実施例２４）
（ｓ．ｃ．Ｂ１６メラノーマモデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｏ，Ｏ−Ｐｔ）対シスプラチンおよび生理食塩水コントロールの腫瘍増殖阻害を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびシスプラチンをそれぞれ１７．５ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇで、ｑｄ×５のスケジュールで投与した。このＯ，Ｏ−キレート用量は、シスプラチン用量と同様に、そのＭＴＤの近傍である。本研究を実施例２３に記載のとおり実施した。結果を図１３に示す。
【０１３８】
（実施例２５）
（ｓ．ｃ．Ｂ１６メラノーマモデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ）対カルボプラチンおよび生理食塩水コントロールの腫瘍増殖阻害を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびカルボプラチンをそれぞれ２００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび６５ｍｇ／ｋｇで、ｑｄ×５のスケジュールで投与した。このＮ，Ｏ−キレート用量は、カルボプラチン用量と同様に、そのＭＴＤの近傍である。それ以外には、本研究を実施例２３に記載のとおり実施した。結果を図１４に示す。
【０１３９】
（実施例２６）
（ｓ．ｃ．扁平上皮細胞異種移植モデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ）対カルボプラチンおよびビヒクルコントロール（等張グルコース）の腫瘍増殖阻害を、処置群当たり７匹のＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの群において評価した。ヒト扁平上皮腫瘍細胞（ＵＭＳＣＣ１０ｂ）を４つの部位（左側および右側の肩ならびに左側および右側の横腹）に移植した（１部位当たり１０６細胞）。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびカルボプラチンをそれぞれ４００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび６５ｍｇ／ｋｇで単回ＩＰ注射として投与した。このＮ，Ｏ−キレート用量は、カルボプラチン用量と同様に、そのＭＴＤの近傍である。腫瘍が５０ｍｇの群平均に達したとき、全てのマウスに試験レジメを行った。結果を図１５に示す。
【０１４０】
本明細書中に記載の種々の成分、要素、および組み合わせの構築および操作において、または本明細書中に記載の方法の工程もしくは工程の順序においては、上記の特許請求の範囲において定義されるような本発明の精神および範囲を逸脱することなく、変更がなされ得る。
【０１４１】
以下の引用文献を、本願を補足する詳細のために、本明細書中に参考として援用する。
【０１４２】
【表５】
【０１４３】
【表６】
【０１４４】
【表７】
【０１４５】
【表８】
【０１４６】
【表９】
【０１４７】
【表１０】
【０１４８】
【表１１】
【０１４９】
【表１２】
【０１５０】
【表１３】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
２０００年１月４日に出願し、そして本明細書中に参考として援用される、仮出願米国出願第６０／１７４，４３５号からの優先権が主張される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
シスプラチンの抗腫瘍活性の発見（Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇら，１９６９）後、癌の処置のための白金錯体の使用に関する分野において大量の研究が行われた。白金化合物の抗腫瘍活性は、反応性モノ−またはジ−アクア錯体（これは、鎖内および鎖間のＤＮＡ架橋を腫瘍細胞において形成し得る）を形成するインビボでの不安定な塩素配位子の喪失から生じると考えられる。これらの架橋は、細胞死をもたらし得る。シスプラチン（ｃＤＤＰまたはシス−ジアミンジクロロ白金（ＩＩ））は、ヒト被験体における使用について承認されている白金化合物のうちで最も広範に使用されており、そして固形腫瘍（精巣、卵巣ならびに頭部および頸部を含む）のための、ならびに扁平上皮癌および小細胞肺癌に対する使用において他の薬剤と組み合わせた処置が示されている（Ｓｕｒら，１９８３）。
【０００３】
しかし、その毒性に起因して、シスプラチンの使用には重大な制限が存在する。腎毒性および聴器毒性は代表的に、その用量を制限する毒性である。この問題があるので、多くの研究者が、治療指数（毒性に起因する耐えられ得る最大用量と、効力を提供する用量との間の比）が改善された新たな化合物を見出すことを期待して、新規の低分子白金キレートを作製し、そして試験した。白金キレート構造における変化もまた、白金治療が有効であり得る腫瘍型の範囲を広げ得、そして／または毒性プロフィールを変更し得る。上記のように、不安定な脱離基が殺腫瘍活性のために必要とされるが、これらの官能基はまた、この分子の毒性に寄与し得る。英国におけるＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈで行われた研究は、塩素原子を他の脱離基で置換することによって、より低い腎毒性を有する化合物が入手され得ること実証した（Ｈａｒｒａｐ，１９８５）。この研究によって、カルボプラチン（２つの配位した塩化物イオンが１，１−シクロブタン−ジカルボン酸のキレートによって置換されたシスプラチンアナログ）の発見がもたらされた。このキレート基は、シスプラチンの塩素原子と比較してそれほど不安定性ではない。その結果、シスプラチンと比較して、より高い用量のカルボプラチンが、同様の殺腫瘍効果のために必要とされるが、カルボプラチンは、より高い治療指数を有し、そして用量を制限する毒性は、腎毒性ではなく骨髄抑制（ｍｙｅｌｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）である。
【０００４】
オキサリプラチンは、欧州においてヒトへの使用が承認された別の低分子白金キレートである。この白金キレートは、シスプラチンの不安定でない（アミン）配位子および不安定な配位子の両方における変化の効果を調査する研究の結果であった。オキサリプラチンでは、配位したアンモニア配位子は、トランス−１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサン（ＤＡＣＨ）キレートによって置換されており、一方、不安定な塩素配位子は、シュウ酸キレートによって置換されている。オキサリプラチン（および他のＤＡＣＨ白金化合物）が、ＮＣＩヒト腫瘍スクリーニングにおいてシスプラチンおよびカルボプラチンと比較した場合に異なる活性スペクトルを有すること（Ｐａｕｌｌら，１９８９）が示されており、そしてオキサリプラチンは結腸直腸癌の処置のためにその後開発された。オキサリプラチンの用量を制限する毒性は、感覚ニューロン障害である。
【０００５】
他の多くの低分子白金錯体が、潜在的な化学療法剤として調査されているが、せいぜい、効力および治療指数のわずかな改善しか達成されていない。これらのより新たな低分子白金キレートの多くは不活性であるかまたは処方に問題があり（例えば、低い水溶性または乏しい水性安定性）、そして大部分が、腎毒性、神経毒性、骨髄抑制、悪心および嘔吐を含めた、重篤な毒性副作用を誘発する。承認された白金錯体の治療指数を改善する多数の試みは、組合せ治療（例えば、シスプラチンとパクリタキセルとの同時投与；（Ｐｏｓｎｅｒら，２０００））または処方の変更（例えば、リポソーム中への封入（Ｓｔｅｅｒｅｎｂｅｒｇら，１９８８））のいずれかを含んでいた。現在承認されている白金キレートと比較して治療指数がさらに改善された、新たな白金キレートについての明確な必要が残っている。このようなキレートは、理想的には水溶性であり、そして水性環境において安定であるが、腫瘍細胞においてはＤＮＡを架橋し得る種を提供し、そして最終的に腫瘍細胞死を引き起こすに十分に不安定である。
【０００６】
さらに、治療指数の改善は、腫瘍細胞に対する白金錯体の標的化によって達成され得る。従来の低分子白金錯体（例えば、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチン）は、腫瘍細胞に対して特異的には標的化されず、そして静脈内投与後に、これらは、腫瘍細胞中に拡散するのと同じくらい容易に正常細胞中に拡散し得る。また、これらの用量は、迅速にクリアランスされる。注射３時間後には、血漿中のシスプラチン由来の白金の９０％が不可逆的にタンパク質に結合する（Ｐｈｙｓｉｃａｎ’ｓ．Ｄｅｓｋ Ｒｅｆ．１９９７）。シスプラチンおよびカルボプラチンについては、用量のうちのそれぞれ２５％および６５％が１２時間以内に腎臓に分泌される（ＤｅＶｉｔａら，１９９３）。治療指数の改善は、白金錯体が、腫瘍に対して正常細胞よりも容易に送達されるのであれば、および／または腫瘍細胞によって正常細胞よりも容易に取り込まれるのであれば、可能であり得る。
【０００７】
文献で大量に報告されている、腫瘍を標的化する１つの方法は、ポリマーまたは他の高分子構造体への化学療法化合物の不安定な付着を含む。腫瘍細胞におけるポリマーおよびナノ粒子（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ）の濃度が、静脈内投与後の正常組織におけるそれらの濃度を超えることが実証されている（Ｓｅｙｍｏｕｒ １９９２；Ｖｅｒｏｎｅｓｅら，１９９９）。この好ましい腫瘍蓄積のための機構は、「増強された透過性および残留」（すなわち、「ＥＰＲ」）効果と命名されている（Ｓｅｙｍｏｕｒら，１９９５）。本質的に、腫瘍内皮細胞は、正常な内皮細胞よりも「漏出性」であり、それゆえ、ポリマーおよびナノ粒子は、正常組織の場合よりも容易に腫瘍における内皮細胞層を通過する。従って、静脈内投与後、ポリマーおよびナノ粒子は、正常細胞の細胞外流体に対してよりもずっと容易に、腫瘍細胞の細胞外流体に進入し得る。さらに、腫瘍細胞における細胞外流体のリンパドレナージは、正常細胞と比較してずっと効率が低い。これらの２つの要因は、低分子の自由に分散し得る分子と比較し、正常な組織と比較して、腫瘍におけるポリマーおよびナノ粒子のより高い濃度を説明する。
【０００８】
ＥＰＲ効果を通じた腫瘍への化学療法剤の受動的標的化を提供する構築物のいくつかの例が既に存在する。例えば、ドキソルビシンが、直鎖状ポリマー骨格であるポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ポリ（ＨＰＭＡ））へと、リソソーム酵素によって切断されるように設計されたテトラペプチドを介して付着された。この水溶性結合体は、「ＰＫ１」と命名され、そしてその化学的性質、前臨床試験および臨床評価を記載する、多数の刊行物の主題であった（例えば、Ｓｅｙｍｏｕｒら，１９９０；Ｐｉｍｍら，１９９６；Ｄｕｎｃａｎら，１９９８；Ｔｈｏｍｓｏｎら，１９９９；Ｍｉｎｋｏら，２０００）。同様に、ＨＰＭＡは、これらの化学療法分子の腫瘍への送達の増強のために、パクリタキセルおよびカンプトテシンに結合体化された（Ｆｒａｉｅｒら，１９９８；Ｃａｉｏｌｆａら，２０００）。パクリタキセルおよびカンプトテシンの両方が、腫瘍標的化および薬物の水溶性を改善することを目的として、他の水溶性ポリマーに付着されている（例えば、Ｌｉら，２０００およびＣｏｎｏｖｅｒら，１９９８）。
【０００９】
ポリマー−白金結合体を用いて、白金錯体の溶解度を増大させ、全身毒性を減少させ、そして腫瘍をＥＰＲ効果によって標的化することによって、癌を処置する際に患者に利益を与え得ることが提唱されている（Ｄｕｎｃａｎ，１９９２）。ポリマー−白金結合体のいくつかの例が報告されている。例えば、米国特許第５，９６５，１１８号は、リソソーム酵素によって潜在的に切断され得るペプチドを介してＨＰＭＡポリマー骨格へと結合された種々の白金キレートを記載する（Ｇｉａｎａｓｉら，１９９９もまた参照のこと）。さらなる例としては、ポリホスファーゼン白金（ＩＩ）結合体（Ｓｏｈｎら，１９９７；米国特許第５，６６５，３４３号）、ポリ（グルタメート）白金錯体（Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒら，１９８７）および他のもの（Ｂｏｇｄａｎｏｖ，Ｊｒ．ら，１９９６；Ｈａｎら，１９９４；Ｊｏｈｎｓｓｏｎら，１９９６；Ｆｉｅｂｉｇら，１９９６）；Ｆｉｌｉｐｏｖａ−Ｖｏｐｒｓａｌｏｖａら，１９９１；Ｆｕｊｉら，１９９６；Ｎｅｕｓｅら，１９９５；Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒら，１９８９）が挙げられる。
【００１０】
本発明者らの知る限りでは、ポリマー白金結合体の上記の報告は、ポリマーへの白金錯体形成の構造についても性質についても良好な証拠を提供しないが、大部分は、白金錯体の構造について特定の根拠のない仮定をする。以前のこれらの全ての例では、白金がポリマーに１より多くの方法で結合することが可能であり、従って、混合された錯体の可能性を生じる。また、ｐＨは、不活性（ヒドロキソ配位子）または非常に毒性な（アクア配位子）であり得る他の白金錯体の形成をもたらし得る錯体の形成において制御されていない。従って、白金が任意の１つのポリマーから異なる放出速度で放出されること、および（形成される錯体の混合物はバッチの間で変動し得るので）白金の放出速度がバッチ毎に異なり、毒性および効力の両方における未制御のバッチ毎のバリエーションを生じることが可能である。このようなバリエーションは、癌の処置におけるこれらの結合体の使用には受け入れられない。好ましい状況は、腫瘍に対する白金化合物の改善された送達のためにＥＰＲ効果を利用する場合に、癌の処置のために有益である放出速度を与える、ポリマーに対する白金の、十分に規定され、よく制御された錯体形成を有することである。
【００１１】
ＥＰＲ効果を利用した受動的腫瘍標的化に加えて、「能動的」機構を利用して腫瘍に対して白金錯体を標的化することも可能であり得る。これは、例えば、正常組織と比較して腫瘍においてアップレギュレートされるレセプターに結合する部分へと白金錯体をカップリングし、それゆえ正常組織と比較して腫瘍組織における白金のレベルの上昇を生じることによって達成され得る。このようなアップレギュレートされた広範な種々のレセプターが公知である（例えば、Ｈｅｐｐｅｌｅｒら，２０００；Ｓｃｈｌａｅｐｐｉら，１９９９；Ｓｕｄｉｍａｃｋら，２０００；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら，１９９９；Ｗｅｉｎｅｒ，１９９９；Ｂｕｏｌａｍｗｉｎｉ，１９９９）。標的化剤の例としては、モノクローナル抗体、ペプチド、ソマトスタチンアナログ、葉酸誘導体、レクチンおよび多価陰イオン性多糖が挙げられる。
【００１２】
しかし、本発明者らの知識によれば、腫瘍組織に対する白金の増加した送達のついてのレセプター標的機構の有用性についてほとんど報告された例はない。しかし、モノクローナル抗体（ＭｃＩｎｔｏｓｈら、１９９７；Ｈａｔａら、１９９２）、ステロイド（Ｇｕｓｔら、１９９５；ＤｉＺｉｏら、１９９２、Ｇｉｂｓｏｎら、１９９０）および葉酸（Ｖｉｔｏｌｓら、１９８７）と結合体化した白金の研究はいずれも、臨床において評価されていない。
【００１３】
ポリマーの受動標的化を、レセプターアビド化合物（ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｖｉｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の活性標的化と組み合わせることが可能である。これは、「ＰＫ２」、すなわちＨＰＭＡポリマーを有する化合物、酵素切断可能なペプチドを介してポリマーに結合したドキソルビシンによって例示され、これは、ガラクトース、すなわち、アシアロ糖蛋白レセプターに対して強力な親和性を有する糖質と結合体化され、これは、肝臓内で高度に濃縮される（Ｊｕｌｙａｎ、１９９９）。本発明者らの知識によれば、活性標的化と受動標的化とを合わせるこのアプローチは、白金キレートを用いて探求されていない。
【００１４】
本発明は、初期の不安定なＯ，Ｏ−アミドマロネートｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を、純粋かつ単離可能なＮ，Ｏ−アミドマロネートｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を再配列することを可能にする条件の予測できない発見に基づく。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは、反応性ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種がアミドマトネートと反応する際に、はじめに形成される。以下で議論される報告は、このような反応において、Ｎ，Ｏ−キレートが、単離も精製もされないマイナー生成物として形成されないし、見出されもしないことを示す。本明細書中において、純粋なＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）が単離されるのを可能にする一般的条件が、記載される。さらに、このようなＮ，Ｏ−キレートは、癌の処置のための優先的な生物学的活性、具体的には改良された治療指数を有する。癌の処置のためのこのようなＮ，Ｏ−アミドマロネートキレートの有利な特性は、以前に報告されていない。さらに、本明細書中に記載される非熱力学的に安定な錯体のＮ，Ｏ−キレートへのほぼ完全な変換は、一貫した効力および毒性プロファイルによって製造され得る腫瘍を処置するための低分子およびポリマー化合物を提供する。
【００１５】
任意の薬学的生成物について、その同一性および純度の正確な測定が必要である。本発明および関連分野に対して、白金錯体の正確な性質を検証し、そして不純物を同定することが最も重要である。なぜなら、不純な白金錯体は、精製の際に消滅する見込みのある生物学的活性を示した例があるからである（Ｔａｌｅｂｉａｎら、１９９１およびＡｐｐｌｅｔｏｎら、２０００）。
【００１６】
本発明の場合、白金錯体の正確な性質を同定するための最良の方法は、ＮＭＲ分光法、具体的には１９５Ｐｔ ＮＭＲおよび１５Ｎ ＮＭＲ分光法である（Ａｐｐｌｅｎｔｏｎ２０００）。いずれの技術によっても、白金錯体の同一性は、前分離の必要なしに作成される。この研究の場合、１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法は、選択の方法である。なぜなら、それは十分な感度を提供し、１５Ｎ ＮＭＲ分光法に必要とされる同位体富化の必要性が避けられるからである。１９５Ｐｔ核は、スピン１／２であり、１３Ｃ核の感受性のほぼ２０倍の感受性を有し、１５，０００ｐｐｍの化学シフト範囲にわたって共鳴を示す。この化学シフトは、白金リガンドの同一性およびジオメトリに対して非常に敏感である。１９５Ｐｔは、約１０ｍＭ白金以上の実践的な感度限界を有する。ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体についての化学シフトの例として、シスプラチンの−２１６８ｐｐｍ、カルボプラチンの−１７２３ｐｐｍ、ジアクアの−１５８４ｐｐｍ、モノアクア−モノクロロの−１８４１ｐｐｍ、Ｏ，Ｏ−アミノマロネートの−１７３２ｐｐｍ、Ｎ，Ｏ−アミノマロネートの−２１５６ｐｐｍ、およびＮ−アセチルグリシンのＮ，Ｏ−キレートの−２０２０ｐｐｍが挙げられる（Ａｐｐｌｅｔｏｎ１９９０；Ｇｉｂｓｏｎ１９９０；Ａｐｐｌｅｔｏｎ２０００）。対応するＤＡＣＨ−Ｐｔ錯体は、さらなる高磁場に現れる。
【００１７】
ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種の、遊離アミン含有アミノマロネートとの反応が、報告されている。Ｇａｎｄｏｌｆｉ（Ｇａｎｄｏｌｆｉら、米国特許第４，６１４，８１１号；Ｇａｎｄｏｌｆｉら、１９８７）は、ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種およびアミノマロネートとの間の錯体の調製および抗腫瘍活性を報告した。この報告された構造は、図２ａに示されるような全てＯ，Ｏ−キレートであった。後に、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートが最初に形成されたが、ｐＨ＝５で数時間内に、図２ｂに示される熱力学的なＮ，Ｏ−アミノマロネートｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）に異性化することが、明確に示された。さらに、Ａｐｐｌｅｔｏｎは、ｐＨが非常に低い（２未満）場合、脱炭酸反応が起こり、対応するＮ，Ｏ−グリシン錯体を得ることを示した。ｐＨが非常に高い（９を超える）場合、白金エステルの加水分解が起こった。純粋なＮ，Ｏ−アミノマロネート錯体の生物学的活性の文献報告は、公知ではない。しかし、密接に関連した、十分に精製されたＮ，Ｏ−アスパラギン酸ｃｉｓ−ジアミンＰｔ（ＩＩ）錯体の報告（Ｔａｌｅｂｉａｎ１９９１）は、たとえ細胞傷害活性があったとしても、ほとんど示さなかった。
【００１８】
図３（遊離アミンを有しない）に示されるようなアミドマロネートのｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）の場合、Ｔｓｕｊｉｈａｒａの米国特許第４，８８２，４４７号は、多くの１，２−ジアミンシクロヘキサン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−アミドマロネート錯体（すなわち、ＤＡＣＨ−白金（ＩＩ））の調製および生物学的活性を報告する。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート化を検証するデータは、記載されていない。一連のアミドマロネートＤＡＣＨ−白金（ＩＩ）は、図３ａに示されたものと同様のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートとしてのみ存在することが報告された（Ｔａｌｅｂｉａｎら、１９９０）。ポリホスファゼンベースのアミドマロネートは、単に、Ｏ，Ｏ−キレートとして示され（図３ａ）、同様のグルタミン酸ベースの物質を通して、ほとんど等量の２種のキレートを示すことを確証した分光学的データはなかった。しかし、一連のステロイドベースのアミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体（図３、Ｒ＝ステロイド）は、Ｏ，Ｏ−ＰｔアミドマロネートキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔアミドマロネートキレートの混合物（それぞれ、図３ａおよび図３ｂ）であることが示され、Ｏ，Ｏ−異性体は、優先された（Ｇｉｂｓｏｎら、１９９０）。２種の分離は記載されていないが、おそらく熱またはより長い反応時間で、Ｎ，Ｏ−キレートが好まれ得ることが予想された。しかし、本発明は、アミドマロネートｃｉｓ−ジアミン白金錯体のＯ，Ｏ−ＰｔからＮ，Ｏ−Ｐｔへの転換を行うのにさらなる成分が必要とされる。
【００１９】
要約すると、アミドマロネートのｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体の場合、初期Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは、迅速にＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに異性化する、しかし、アミドマロネートのｃｉｓ−ジアミン錯体の場合、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートのみが見出されるか、または両方のキレートの混合物中で、Ｏ，Ｏ−Ｐｔが優先する。アミドマロネートの純粋なＮ，Ｏ−キレートの調製について全く報告がなされていない。従って、ｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）錯体のアミドマロネートととのＮ，Ｏ−キレートの調製および有用な生物学的活性が、本明細書中で提供される。さらに、Ｏ，Ｏ−キレートの選択的調製が、記載される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
（発明の要旨）
本発明は、精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体に関する。この錯体は、結合したポリマーであり得る。この錯体は、有効量の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネートジアミン錯体を患者へ投与する工程を包含する、白金感受性の新生物形成を処置する方法において有用である。
【００２１】
より詳細には、本発明は、腫瘍処置における使用のための組成物に関し、この組成物は、以下：
【００２２】
【化４】
の形態のｃｉｓ−ジアミンＮ，Ｏ−アミドマロネート白金種を含み、
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、水可溶性基、キャリアまたは腫瘍に対して種を標的化するのに有用な標的基であり；Ｒ２およびＲ３は、アミンであり；Ｒ４は、Ｈまたはカチオンであり；そしてここで、上記種は、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性を有するようにインビボで転化される。この錯体中のカチオンは、アンモニウムイオン、アルカリ、またはアルカリ土類金属であり得る。好ましいカチオンは、ナトリウムである。
【００２３】
特定の場合、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体は、上記組成物を含み得、ここで、Ｒ１は、１〜５０００キロダルトンの分子量のＮ−アルキルメタクリルアミドユニットの合成ポリマーであり、以下：
【００２４】
【化５】
の形態を有し、
ここで、ｍ＝０およびｎ＝１００であるか、またはｍ：ｎの比は、０．１〜９９．９であり；Ｒ５は、ＨまたはＣＨ３であり；Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ７は、生理学的条件下で切断され得る、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙを有するオリゴペプチドであり、ここで、ｐは、０〜３であり、Ｗは、アミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせであり、このＣ末端は、アミドマロネート基のアミドである。
【００２５】
上記のＮ，Ｏ−アミドマロネート白金錯体の重要な実施形態において、Ｒ２およびＲ３の両方とも、ＮＨ３である。これらは、しばしば、好ましくは、１，２−ジアミノシクロヘキサンの第一アミン基である。
【００２６】
これらの錯体に含まれる白金は、＋２酸化状態または＋４酸化状態にあり得る。上記のＲ１は、Ｈまたはアルキルのいずれかであるが、葉酸レセプターを標的化するのに有用な、ステロイドまたは葉酸または葉酸誘導体もしくはアナログでもあり得る。
【００２７】
ポリマーＮ，Ｏ−アミドマロネート白金錯体のポリマーは、本明細書中で記載される他のポリマー、すなわち、ポリグルタミン酸、モノ−もしくはポリサッカリドまたはポリサッカリドの側鎖を有し得る。
【００２８】
本発明はまた、白金ジアミン化合物の安定性を改良する方法に関する。この方法は、白金化合物の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を形成する工程を包含する。
【００２９】
本発明の重要な局面は、腫瘍処置における使用のための組成物に関し、この組成物は、腫瘍部位に蓄積するよう設計され、白金化合物との錯化のためのポリマーに沿って間隔をあけられた側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドからなるポリマー白金錯体を含み、この側鎖は、（ｉ）一方端でそのポリマーに結合し、そして他方端において、少なくとも主に、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して白金化合物に結合したオリゴペプチドからなり、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断され、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性を有するようにインビボで転化される白金化合物を生成するように設計された少なくとも１つの連結を含む。
【００３０】
このようなＮ−アルキルアクリルアミドポリマーは、好ましくは、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである。Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーは、０．１と約９９．９との間のｍ：ｎ比の２個の繰り返し単位を有するコポリマーであり得る。
【００３１】
本発明の組成物はまた、オリゴペプチド側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドユニットの繰り返し単位を含む。これらのオリゴヌクレオチド鎖は、白金化合物を結合し得る近位基内で終端し得る。
【００３２】
本発明の組成物において、有用なポリマーは、ポリマーが以下：
【００３３】
【化６】
の形態のコポリマーである形態のコポリマーであり得、
ここで、Ｒ１は、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ２は、低級アルキルもしくは低級ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ３は、オリゴペプチド側鎖である。このポリマーにおいて、Ｒ１は、ＣＨ３であり、Ｒ２は、２−ヒドロキシプロピルであり、Ｒ３は、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＡｍａまたはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｍａである。本発明の治療的用途において、ポリマー白金化合物は、非経口投与に適切な水性媒体に溶解される。
【００３４】
本発明の重要な局面は、白金化合物に供される固体腫瘍を処置する方法であり、この方法は、白金化合物と錯化するためのポリマーに沿って間隔をあけられた側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドポリマーからなるポリマー−白金錯体を調製する工程であって、この側鎖が、（ｉ）一方端でそのポリマーに結合し、そして他方端において、少なくとも主に、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して白金化合物に結合したオリゴペプチドからなり、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断され、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性を有するようにインビボで転化される白金化合物を生成するように設計された少なくとも１つの連結を含む、工程；ならびに、薬学的に有効な量の錯体を被験体に非経口投与する工程、を包含する。１つの好ましい実施形態における上記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーは、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである。別の重要な実施形態において、Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーは、１，０００ダルトンと５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するコポリマーである。このコポリマーは、０．１と約９９．９との間のｍ：ｎの比の２つの繰り返し単位ｍおよびｎを含む。このような繰り返し単位は、Ｎ−アルキルアクリルアミドユニットおよび、白金化合物に結合し得る近位端を有するオリゴペプチド側鎖を有するユニットを含む。オリゴペプチドが使用される場合、上記オリゴペプチドは、好ましくは、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙであり、ここで、ｐは０〜３であり、Ｗは、アミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせである。１つの重要な実施形態において、オリゴペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＧｌｙ−Ｇｌｙである。
【００３５】
本発明は、白金ジアミン化合物が、被験体にこの化合物を含む薬学的に受容可能な溶液を非経口的に投与することによって腫瘍を処置するために使用される際に、白金ジアミン化合物の治療指数を向上する方法を包含し、この方法は、上記投与の前に、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位、および上記白金化合物とＮ，Ｏ連結を介して錯化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位からなるコポリマーと、白金化合物とを錯化する工程を包含する。
【００３６】
別の観点から、本発明は、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位、および上記白金化合物とＮ，Ｏ連結を介して錯化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位からなるコポリマーと、上記化合物とを錯化する工程を包含する、白金ジアミン化合物の安定性を改善する方法に関する。
【００３７】
従って、本発明の目的は、インビボで改善された抗腫瘍活性を有する新規のポリマー−白金錯体を提供することである。
【００３８】
１局面において、本発明は、腫瘍部位で蓄積するよう設計されたポリマー−白金化合物を含む、腫瘍処置における使用のための組成物に関する。この化合物は、骨格に結合した白金含有側鎖を有する合成ポリマー骨格からなる。この側鎖（ｉ）は、生分解性リンカー、例えば、一方端またはその付近にて骨格に結合し、他方端またはその付近にて白金化合物に結合したオリゴペプチドからなる。このリンカーは、抗腫瘍活性を有するか、または有するようにインビボで転化される白金化合物を生じる選択された生理学的条件下で切断するように設計される少なくとも１つの連結を含む。オリゴペプチドは、通常のアミノ酸（例えば、アミドマロネートなど）またはαアミノ酸以外を含み得る。
【００３９】
１つの実施形態において、この合成ポリマーは、約１，０００〜５，０００，０００ダルトンの間の原子量を有する、Ｎ−アルキルアクリルアミドまたはメタクリルアミド（つまり、全「ｎ」型単量体）のホモポリマーである。
【００４０】
別の実施形態において、この合成ポリマーは、１，０００〜５，０００，０００ダルトンの間の原子質量を有するコポリマーであり、ｍ：ｎの割合が約０．１〜９９．９の間である、２つの単量体のｍおよびｎを含む。
【００４１】
１つの実施形態において、この単量体は、Ｎ−アルキルアクリルアミドまたはメタクリルアミド単体、および白金化合物と連結し得る近位な末端基に終端するオリゴペプチド側鎖を運ぶ単体から構成される。
【００４２】
１つ実施形態において、ポリマー−白金化合物におけるポリマーは、以下の形態のコポリマーである：
【００４３】
【化７】
ここで、Ｒ１はＨまたはＣＨ３であり、Ｒ２は下位アルキルまたは下位ヒドロキシアルキル基であり、かつＲ３はオリゴペプチド側鎖である。
【００４４】
別の実施形態において、このオリゴペプチドは、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙの形態のオリゴペプチドであり、ここでｐは、０〜３であり得、そして（Ｗ）は任意のアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせであり得る。１つの実施形態において、このペプチドは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙであり、そして白金化合物との連結のためのカルボキシル、ジアミンまたはマロニル部分に終端する。ＰｈｅまたはＬｅｕは、好ましい実施形態において（Ｌ）アミノ酸である。別の実施形態において、このペプチドは、近位なカルボニル末端基に終端しているＧｌｙ−Ｇｌｙである。Ｄ−アミノ酸含有オリゴペプチドが、生分解性であるという点において、これらはオリゴペプチドの一部分または全てでもあり得る。
【００４５】
好ましい実施形態において、Ｒ１はＣＨ３であり、Ｒ２は２−ヒドロキシプロピルであり、かつＲ３はＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−[Ｘ]であり、ここで[Ｘ]は、ジアミン、カルボキシル基またはマロニル部分である。
【００４６】
このポリマー−白金化合物は、非経口投与に適した薬学的に受容可能な培養液中に溶解される。
【００４７】
別の局面において、本発明は、被験体において固形腫瘍に対して白金化合物を標的化する方法を含む。この方法は、幹に沿って間隔のあいた側鎖を有する合成ポリマー幹から構成されたポリマー−白金化合物を調製する工程を包含する。この側鎖は、（ｉ）一方の末端において幹に連結し、そして他方の末端において白金化合物に連結したオリゴペプチドから構成され、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下において、坑腫瘍活性を有するか、または坑腫瘍活性を有するためにインビボで転換される白金化合物を得るために切断されるべく設計される、少なくとも１つの連鎖を含む。この化合物は、薬学的に有効な量において、被験体に非経口で投与される。
【００４８】
別の局面において、この化合物が、被験体に対する化合物を含む、非経口で薬学的に受容可能な溶液を投与することによって、腫瘍を処置するために使用される場合、本発明は、白金化合物の治療学的指標を増強する方法を含む。この化合物を投与する前に、この方法は、白金化合物と混合可能な近位の末端基に終端するオリゴペプチド側鎖を有する、Ｎ−アルキルアクリルアミドの第一単量体および第二単量体から構成されたコポリマーを有する白金化合物を混合する工程を包含する。
【００４９】
別の局面において、本発明は、この白金化合物と混合可能な近位の末端基に終端するオリゴペプチド側鎖を有する、Ｎ−アルキルアクリルアミドの第一単量体および第二単量体から構成されたコポリマーを有する化合物を混合することによる、白金化合物の溶解性および／または安定性に関与する方法を含む。このポリマー−白金錯体は、生理学的条件下において、非錯体の白金化合物よりも、より可溶性であり、そして／またはより安定している。好ましい白金錯体は、−およびＯ−を介して結合され、最も好ましくは、アミノマロネート残基は、ポリマーに対して生分解性連鎖に連結される。
【００５０】
これらの対象および他の対象、ならびに本発明の特徴は、本発明の以下の詳細な記載を添付の図面と共に読む場合に、さらに十分に理解される。
【００５１】
化学療法薬剤を含む、治療薬剤のポリマーに基づく送達は、考慮すべき注意を受け続ける（Ｄｕｎｃａｎら（１９９９）、Ｓｅｙｍｏｕｒ）。代表的には、確立した薬理学的実在は、生物学的挿入ポリマーに化学的に連結され、従ってその分布、排除および毒物学的特性を大いに変化させる。腫瘍学的な適用について、この技術は、増強した透過性および保持（ＥＰＲ）効果を介して腫瘍間隙での細胞障害性薬剤の濃度を増加させる可能性を提供する（Ｓｅｙｍｏｕｒら）。ＡＣＣＥＳＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌは、白金と合金にしたポリマー治療の広範なクラスの権利を有する。ＡＰ ５２８０と命名されたこれらの１つは、シス−ジアンミン白金（ＩＩ）（ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））のアミノマロネート（ａｍｉｎｏｍａｌｏｎａｔｏ）キレートを有する、９０：１０のＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）のコポリマー、およびＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙのメタクリルアミドである。この最適化したリンカーを組み込むことは、このポリマー由来の白金含有フラグメントを、腫瘍プロテアーゼによる切断を介して放出する可能性を提供する。このコポリマー−リンカー−キレート結合の概念、ならびに初期合成研究および生物学的研究は、Ｄｕｎｃａｎら（１９９９）によって示されている。臨床的評価のために、この物質のさらなる発展への挑戦は、ヒトに使用するために規制当局の許可を保証するために必要な、必須の活性、安定性および薬学的特性を有する、構造的に特徴づけられた生成物のための拡張可能な手順を定義することである。
【００５２】
ＡＰ ５２８０の合成は、初期にジエチルアミノマロネートを中間体のポリ（ＨＰＭＡ）ＧＦＬＧ−ＯＮｐにおけるｐ−ニトロフェノールに置換することによって達成され、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔが得られる。この後者はけん化され、次いでシス−（ＮＨ３）２Ｐｔ（Ｈ２Ｏ２）２＋で白金と合金され、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２が得られた。その後、初期Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートのＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの再配列はコントロールされる。本発明者らはまた、ＨＰＭＡおよびＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔモノマーからポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを作製した（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂ）。これらのモノマーを、種々の量のラジカル鎖転移薬剤（つまり、ｐ−ニトロフェノール）を用いて重合することによって、この分子量は制御される（注意：この分子量の制御方法は、文献において周知である）。次いで、これらのポリマーは、けん化され、白金と合金され、そして際配列され、記載されるようなＮ，Ｏ−キレートが得られた。低分子量の不純物からの精製は、末端の凍結乾燥による最終処方生成物の単離を用いて、接線方向の流体を濾過することによって達成される。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート（９２％未満）の同定および精製は、Ｏ，Ｏ−キレート（−１７３３ｐｐｍ）または他のＰｔ種のような８％未満のＰｔ存在を有する、１９５ＰｔＮＭＲ分光学（−２０５６ｐｐｍ）によって確認される。この最終生成物は、８．０±０．５％のＰｔ（ｗｔ／ｗｔ）を含み、そしてＭＷ＝２４．４ｋＤａを有する。３７℃で２４時間を越えて、水中においては、ＡＰ ５２８０は、ポリマー遊離白金種として１％より十分小さい（＜＜１％）白金含有量を放出し、そしてクロライドの生理学的濃度を含む培養液中に２％未満の白金を放出する。ＡＰ ５２８０の有効性は、ｓ．ｃ．Ｂ１６Ｆ１０マウスの腫瘍モデルにおいて評価され、このモデルは、３ｍｇ／ｋｇにおけるシスプラチンの活性に相当する、２０ｍｇ Ｐｔ／ｋｇにおいて活性を示す。カルボプラチン（４５または６０ｍｇ／ｋｇ）を越える活性は、２００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇ（全用量ＩＶ、ｑｄ ｘ５）において、ＡＰ ５２８０を用いて達成される。重要な局面において、図Ａは、ＡＰ ５２８０の手順についての工程の概要を示す。
例えば、本願発明は、以下の項目を含む。
（項目１） 精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体。
（項目２） ポリマー結合Ｎ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体。
（項目３） 白金感受性新形成を処置する方法であって、有効量の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体を患者に投与する工程を包含する、方法。
（項目４） 腫瘍の処置における使用のための組成物であって、以下の式：
【化１】
のシスジアミンＮ，Ｏ−アミドマロネート白金種を含み、
ここで、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、水可溶化基、担体または該白金種を腫瘍に標的化するのに有用な標的化基であり；Ｒ２およびＲ３は、アミンであり；Ｒ４は、Ｈまたはカチオンであり；そして該白金種が、抗腫瘍活性を有するか、またはインビボで変換されて抗腫瘍活性を有する、組成物。
（項目５） 項目４に記載の組成物であって、ここで、前記カチオンが、アルカリ金属またはアルカリ土類金属である、組成物。
（項目６） 項目４に記載の組成物であって、ここで、前記カチオンが、ナトリウムである、組成物。
（項目７） 項目４に記載の組成物であって、ここで、Ｒ１が、分子量１〜５０００キロダルトンのＮ−アルキルメタクリルアミド単位の合成ポリマーであり、そして以下の式：
【化２】
であり、
ここで、ｍ＝０およびｎ＝１００またはｍ：ｎの比が０．１〜９９．９であり；Ｒ５が、ＨまたはＣＨ３であり；Ｒ６が、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ７が、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙの配列を有する、生理学的条件下で切断可能なオリゴペプチド鎖であり、ここで、ｐが０〜３であり、Ｗがアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせであり、Ｃ末端が項目１に記載のアミドマロネート基のアミドである、組成物。
（項目８） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ２およびＲ３が、ＮＨ３である、組成物。
（項目９） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ２およびＲ３が、１，２−ジアミノシクロヘキサンの一級アミン窒素である、組成物。
（項目１０） 項目４または７に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋２の酸化状態である、組成物。
（項目１１） 項目４または７に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋４の酸化状態である、組成物。
（項目１２） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、Ｈまたはアルキルである、組成物。
（項目１３） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、ステロイドである、組成物。
（項目１４） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、葉酸レセプターを標的化するのに有用である葉酸誘導体または葉酸アナログである、組成物。
（項目１５） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、ポリグルタミン酸の側鎖である、組成物。
（項目１６） 項目４に記載の組成物であって、ここでＲ１が、モノサッカリドまたはポリサッカリドの側鎖である、組成物。
（項目１７） 白金ジアミン化合物の安定性を改善するための方法であって、白金化合物の精製されたＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を形成する工程を包含する、方法。
（項目１８） 腫瘍の処置における使用のための組成物であって、以下：
ポリマー−白金錯体であって、該ポリマー−白金錯体が、腫瘍部位に蓄積するように設計され、そして白金化合物を錯体化するためにポリマーに沿って間隔を開けて配置された側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドポリマーを含み、該側鎖が、（ｉ）一端において該ポリマーに結合され、他端において少なくとも主にＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して該白金化合物に結合されたオリゴペプチドを含み、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断されて、抗腫瘍活性を有するかまたはインビボで変換されて抗腫瘍活性を有する白金化合物を生じるように設計された少なくとも１つの連結を含む、ポリマー−白金錯体、
を含む、組成物。
（項目１９） 項目１８に記載の組成物であって、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである、組成物。
（項目２０） 項目１８に記載の組成物であって、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するコモポリマーであり、該コポリマーが、約０．１と約９９．９との間の比ｍ：ｎで２つの繰り返し単位ｍおよびｎを含む、組成物。
（項目２１） 項目２０に記載の組成物であって、ここで、前記繰り返し単位が、Ｎ−アルキルアクリルアミド単位および前記オリゴペプチド側鎖を保持する単位を含み、該オリゴペプチドが、前記白金化合物に結合し得る近位末端基で終わっている、組成物。
（項目２２） 項目１８に記載の組成物であって、ここで、前記ポリマーが、以下の式：
【化３】
のコポリマーであり、
ここで、Ｒ１が、ＨまたはＣＨ３であり、Ｒ２が、低級アルキル基または低級ヒドロキシアルキル基であり、そしてＲ３が、オリゴペプチド側鎖である、組成物。
（項目２３） 項目２２に記載の組成物であって、ここで、前記オリゴペプチドが、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙであり、ここで、ｐが０〜３であり、Ｗがアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせである、組成物。
（項目２４） 項目２２に記載の組成物であって、ここで、前記オリゴペプチドの近位末端が、アミドマロネートである、組成物。
（項目２５） 項目２２に記載の組成物であって、ここで、Ｒ１がＣＨ３であり、Ｒ２が、２−ヒドロキシプロピルであり、そしてＲ３がＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＡｍａまたはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｍａである、組成物。
（項目２６） 項目１８に記載の組成物であって、ここで、前記ポリマー−白金化合物が、非経口投与に適した水性媒体中に溶解される、組成物。
（項目２７） 被験体の固形腫瘍を白金化合物で処置するための方法であって、該方法が、ポリマー−白金錯体を調製する工程および薬学的に有効な量の該化合物を該被験体に非経口的に投与する工程を包含し、該ポリマー−白金錯体が、白金化合物を錯体化するためにポリマーに沿って間隔を開けて配置された側鎖を有するＮ−アルキルアクリルアミドポリマーを含み、該側鎖が、（ｉ）一端において該ポリマーに結合され、他端においてＮ，Ｏ−アミドマロネート錯体を介して該白金化合物に結合されたオリゴペプチドを含み、そして（ｉｉ）選択された生理学的条件下で切断されて、抗腫瘍活性を有するかまたはインビボで変換されて抗腫瘍活性を有する白金化合物を生じるように設計された少なくとも１つの連結を含む、方法。
（項目２８） 項目２７に記載の方法であって、ここで、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、約１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するホモポリマーである、方法。
（項目２９） 項目２７に記載の方法であって、前記Ｎ−アルキルアクリルアミドポリマーが、１，０００ダルトンと約５，０００，０００ダルトンとの間の分子量を有するコモポリマーであり、該コポリマーが、約０．１と約９９．９との間の比ｍ：ｎで２つの繰り返し単位ｍおよびｎを含む、方法。
（項目３０） 項目２９に記載の方法であって、ここで、前記繰り返し単位が、Ｎ−アルキルアクリルアミド単位および前記オリゴペプチド側鎖を保有する単位を含み、該オリゴペプチドが、前記白金化合物に結合し得る近位末端基で終わっている、方法。
（項目３１） 項目２７に記載の方法であって、ここで、前記オリゴペプチドが、Ｇｌｙ−（Ｗ）ｐ−Ｇｌｙであり、ここで、ｐが０〜３であり、Ｗがアミノ酸または任意のアミノ酸の組み合わせである、方法。
（項目３２） 項目２７に記載の方法であって、ここで、前記オリゴペプチドが、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＧｌｙまたはＧｌｙ−Ｇｌｙである、方法。
（項目３３） 白金ジアミン化合物を、該化合物を含む薬学的に受容可能な溶液を被験体に非経口的に投与することによって腫瘍を処置するために使用する場合に、該白金ジアミン化合物の治療指数を高める方法であって、以下：
該投与の前に、該白金化合物を、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位およびＮ，Ｏ連結を介して該白金化合物を錯体化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位を含むコポリマーで錯体化する工程、
を包含する、方法。
（項目３４） 白金ジアミン化合物の安定性を改善する方法であって、以下：
該化合物を、Ｎ−アルキルアクリルアミド第１繰り返し単位およびＯ，Ｎ連結を介して該白金化合物を錯体化するアミドマロネート末端基を有するオリゴペプチド側鎖を有する第２繰り返し単位を含むコポリマーで錯体化する工程、
を包含する、方法。
（項目３５） ポリグルタメートまたは別の天然または合成ポリマーに結合された、Ｏ，Ｏ−アミドマロネート白金ジアミン錯体。
（項目３６） 項目３５に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋２の酸化状態である、組成物。
（項目３７） 項目３５に記載の組成物であって、ここで、前記白金が、＋４の酸化状態である、組成物。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンの構造ならびにアミドマロネート−シス−ジアンミン白金（ＩＩ）（ａｍｉｄｏｍａｌｏｎａｔｅ−ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの基本的構造を示す（注意：シスプラチンはまた、ｃＤＤＰおよびシス−ジクロロジアンミン白金（ＩＩ）（ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｃｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））として公知である）。
【図２Ａ】図２Ａは、アミノマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、アミノマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、アミドマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、アミドマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）のＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの構造を示す。
【図４】図４は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ｙの調製物および構造を示し、ここでＹ＝ＯＮｐまたはＡｍａ−ｄｉＥｔである。Ｙ＝ＯＮｐの場合、より狭い部分での多分散を有する下位の分子量ポリマーが形成される。ＯＮｐ基または添加したｐ−ニトロフェノールがない場合、より上位の分子量ポリ（ＨＰＭＡ）ポリマーが見い出される。この３５１ｋＤａの物質は、任意のＯＮｐエステル、および任意の添加したｐ−ニトロフェノールなしの反応系から生じる。ＯＮｐエステルなしに、ｐ−ニトロフェノールが重合のために添加される場合、より小さいＨＰＭＡポリマーは、より狭くそしてより均一な分子量分布を有して得られる。
【図５】図５は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｎ，Ｏ−キレートを調製するために用いられる工程を示す。例において得られる多数のこれらの同様な工程および状態は、小さな分子であるか、またはポリマーに結合したアミドマロネート−シス−ジアミン白金（ＩＩ）種の他のＮ，Ｏ−キレートの形成に適応可能である。
【図６】図６は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの調製の間のｐ−ニトロフェノールの放出を示す。これは、置換反応が小さな分子を用いてモニターされた１つの方法を示す。
【図７】図７は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの構造と共に、それらに対応する１９５ＰｔＮＭＲスペクトルを示す。これらのスペクトルは、２つのキレートのピーク位置におけるキレート転換および差異を図解的に示す。Ｏ，Ｏ−キレートのスペクトルは、このスペクトルが約８５％のＯ，Ｏ−キレートおよび１５％のＮ，Ｏ−キレートからなることを示す。Ｎ，Ｏ−キレートのスペクトルは、このスペクトルが約１０％のＯ，Ｏ−キレートおよび９０％のＮ，Ｏ−キレートからなることを示す。より高温、またはより長い反応時間が用いられた場合、Ｏ，Ｏ−キレートは検出不可能である。
【図８】図８は、図５の工程Ｃの間のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートのパーセントのプロットを示す。これは、Ｏ，Ｏ−キレート形成が１〜２時間以内で完了することを示す。
【図９】図９は、７５ｍＭホスフェート（ｐＨ＝７．４、１００ｍＭ ＮａＣｌ）対時間における、Ｏ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換のプロットを示す。これは、これらの状態において、１００％の白金がＮ，Ｏ−キレートとして存在することを示す。
【図１０】図１０は、Ｏ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換における塩化物イオン濃度の影響を示す。約６０ｍＭのＮａＣｌ濃度におけるキレート転換率は、同じである。
【図１１】図１１は、Ｏ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換における硝酸塩、アセテートおよびヨウ化物の影響を示す。３つの陰イオンの全てが、キレート転換に影響を与えるが、異なる割合である。
【図１２】図１２は、実施例２３のＢ１６黒色腫の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで生理食塩水は、コントロールとして用いられ、シスプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの十分下位に投薬された。
【図１３】図１３は、実施例２４のＢ１６黒色腫の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで生理食塩水は、コントロールとして用いられ、シスプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの近位に投薬された。
【図１４】図１４は、実施例２５のＢ１６黒色腫の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで生理食塩水は、コントロールとして用いられ、カルボプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの近位に投薬された。
【図１５】図１５は、実施例２６のヒト異種移植の腫瘍増殖阻害の研究からのプロットを示し、ここで等浸透圧性グルコースは、コントロールとして用いられ、カルボプラチンは、そのＭＴＤの近位に投薬され、そしてポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートは、そのＭＴＤの十分に下部、および近位に投薬された。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
（発明の詳細な説明）
本発明の中心的な実施形態は、特定の型の白金（ＩＩ）錯体（すなわち、図３ｂ）の精製され、そして十分に特徴付けられた組成物であり、この錯体において、アミドマロネート基が、アミドマロネートのアミド窒素およびアミドマロネートのカルボキシレートのうちの１つの酸素によって、白金にキレートされ、そしてここで、中心白金に対する２つの他の利用可能な配位子部位が、アンミンまたはアミンである。このような錯体は、癌の処置において有用な化学療法剤であり得る。
【００５５】
本発明の重要な局面において、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体のカルボニルアミドに結合したＲ基（図３ｂを参照のこと）は、Ｈ、アルキル基、本発明の種を可溶化するために有用な基、ポリマー、本発明の錯体とポリマーとの間を結合するために有用な基、高分子、またはＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を腫瘍に標的化するために有用な実体への結合のようなものであり得る。
【００５６】
アミドカルボニルのＲ基がＨ、単純なアルキル、または水可溶化基である、本発明は、有用であり得る。なぜなら、本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体は、好ましい治療指数を有するからである。本実施例は、本発明のＮ，Ｏ−キレートが低い毒性および良好なインビトロ活性を有することを示すので、このような単純な低分子バージョンのＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体は、有用であり得る。これらのＯ，Ｏ−キレートの対応物は、生物学的活性を有することが公知であり、そして本発明は、Ｏ，Ｏ−Ｐｔアミドマロネートキレートが生理学的条件下で迅速にＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに転化することを示す。水可溶化基をＲ基としてかまたはＲ基の一部として組み込むことによって、より好ましい処方物および投薬が達成され得る。このような水可溶化基としては、炭水化物、ポリエチレングリコール、四級アミン（すなわち、ベタイン）および当業者に公知の他のものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
アミドカルボニルのＲ基がポリマーである、本発明は、有用であり得る。なぜなら、このポリマーが、ＥＰＲ効果による腫瘍の標的化を提供し得、そして水溶性を増加させ得るからである。このポリマーは、合成物または天然物であり得る。合成ポリマーとしては、ポリアクリルアミド（ポリメタクリルアミドを含む）、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリエチレングリコール（直鎖または分枝鎖）およびポリアミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない。ポリアミノ酸としては、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、およびポリリジンが挙げられる。これらのポリアミノ酸におけるポリマー骨格は、αアミン基およびαカルボキシル基のアミドであっても、側鎖のカルボキシルまたはアミン基とのアミドであってもよい。他のものが、当業者に明らかであり得る。天然ポリマーとしては、アルブミンのようなタンパク質、およびヘパリン、コンドロイチン６−硫酸、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、キチン、キトサンのような多糖類などが挙げられる。他のものが、当業者に明らかであり得る。各ポリマー鎖は、１つ以上の白金キレートに結合し得る。ポリマーとアミドマロネート基との間の連結は、ジカルボン酸（例えば、コハク酸）を使用してポリマーのアミン基とアミノマロン酸のアミンとの間を架橋して、ポリマーのカルボキシル基をアミドマロネートで置換することによるか、またはハロゲン化アルキル置換基を用いて多糖類のヒドロキシル基とアミドマロネートとの間にエーテルを形成することによって、作製され得る。他の可能性が、当業者に明らかであり得る。
【００５８】
アミドカルボニルのＲ基が、Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を腫瘍に対して標的化するために有用な基を含む、本発明は、本発明の錯体の治療指数をさらに増加させるために有用であり得る。標的化剤としては、モノクローナル抗体、ペプチド、ステロイド、ソマトスタチンアナログ、葉酸の誘導体およびアナログ、レクチン、ならびにポリアニオン性多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。本発明のこの特定の範囲内で、本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネートジアミン白金（ＩＩ）錯体と標的化基との間に、共有結合が形成される。次いで、このような標的化錯体が患者に投与される場合に、この標的化剤は、本発明の錯体を腫瘍に指向する。これは、本発明の白金錯体の殺腫瘍効果を増加させ、そして全身毒性を減少させると予測される。このような標的化された錯体の１つの例は、葉酸のγ−カルボキシレートをジエチルアミノマロネートで置換して、葉酸−Ａｍａ−ｄｉＥｔ種を与えることによって、作製され得る。次いで、この例において与えられる手順に従って、これは葉酸−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートに転化される。この白金は、＋２または＋４のいずれの酸化状態でもあり得る。
【００５９】
１つの好ましい実施形態において、アミドマロネートのアミドカルボニル基のＲ基は、「ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＧ−」であり、Ａｍａ基が近位のＧ（グリシン）に結合している。特に好ましい実施形態において、アミドカルボニルのＲ基は、２５ｋＤａのＭＷを有する「ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ」である。別の好ましい実施形態は、アミドカルボニルのＲ基が「ポリ（Ｇｌｕ−Ａｍａ）」であるものである。
【００６０】
本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネートジアミン白金（ＩＩ）種のアミンは、同一であるかまたは異なり得る。本発明に関して、アミンは、ＮＨ３（すなわち、アンミン）、一級、二級、および三級アミンであり得る。これらのアミンは、複素環式および／または芳香族であり得る。図３ｂは、Ｒ’がアルキル基またはアリール基である場合の、２つの一級アミンを有するような錯体を示す；Ｒ’がＨである場合には、これはＮＨ３すなわちアンミンである。これら２つのアミンは、別個の実体であり得るか、または単一の実体の２つの部分であり得る。二級アミンおよび三級アミンのそれぞれ２つまたは３つのＲ基は、同じであるかまたは異なり得、ｎ−アルキル、分枝鎖アルキル、シクロアルキル、アリール、これらの組み合わせおよび当業者に公知の他の類似の基であり得る。また、アミンのアルキル基およびアミンは、これらが白金錯体と適合性であることを条件として、他の官能基をもまた有し得る。このような適合性の基としては、アルコール、エーテル、四級アミン、ハライド、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、スルホン酸、三級アミド、エステル、および当業者に公知の他の官能基が挙げられる。非適合性の官能基としては、チオール、チオエーテルなどが挙げられ得る。
【００６１】
Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）組成物の特に好ましい実施形態は、２つのアミンがそれぞれＮＨ３部分であるものである。別の好ましい実施形態は、２つのアミンが１，２−ジアミノシクロヘキサンの一級アミンであるものである。特に好ましいものは、トランス−１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサン立体異性体である（Ｎｏｊｉら、１９８１）。
【００６２】
別の好ましい実施形態において、本発明は、精製したＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体を患者に投与することによって、白金感受性新形成を処置するために使用される。この用量は腹腔内（ＩＰ）、静脈内（ＩＶ）、または経口的に投与され得、ＩＰおよびＩＶの経路が好ましい。これは、水、等張液、または患者への投与に適した何らかの他の媒体に溶解され得る。
【００６３】
本発明の重要な局面は、本発明のＮ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体および関連する錯体の純度および同一性がいかにして決定され得るかを教示する。純度および同一性のこのような決定は、安全性および効力を確実にするために、薬学的製品に対して必要である。同一性および純度の決定のための中心的なものは、１Ｈ核および１９５Ｐｔ核のＮＭＲ分光法である。１Ｈ ＮＭＲから、小さな水素含有不純物が見られ得、そして０．０５％（ｗｔ／ｗｔ）まで低いレベルまで、同定され得る。この錯体の同一性は、部分的には、１Ｈ ＮＭＲ分光法によって同様に確認され得る。例えば、多くの実施例が、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２調製物の帰属とともに、プロトンピークを列挙する。さらに、Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートが、５ｐｐｍと６ｐｐｍとの間のピークの存在から、区別され得る。このピークは、Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートに対してそれぞれ５．８ｐｐｍおよび５．２ｐｐｍの近くに出現する。白金錯体の正確な性質の同定は、１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって最良に決定される。なぜなら、白金共鳴の化学シフトは、その配位子およびそれらの配置に非常に感受性であるからである。アミドマロネートシス−ジアンミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに関して、共鳴がそれぞれ−１７３３ｐｐｍおよび−２０５５ｐｐｍにおいて出現し、アナログに関しては、対応する共鳴は、それぞれ約−１８５０〜−１９００ｐｐｍおよび−２３５０〜−２４００ｐｐｍに出現する。また、他の所望でない白金種が見られ得、そして同定され得る。例えば、実施例３におけるポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートのスペクトルは、他の２つの白金のピークの存在を示す。
【００６４】
他の分析技術が、同一性および純度に関して、ＮＭＲスペクトルを補充および確認する。元素分析から、白金、ナトリウム、塩素、およびホスフェートの量が測定される。［実際の結果は、約９％のＰｔを含み、そして塩素またはホスフェートをほとんどまたは全く含まない、予測されたものに適合する。ナトリウムに関しては、Ｎ，Ｏ−キレートは、予測された量の１．０％のＮａを有することが測定される。Ｏ，Ｏ−キレートは、ナトリウムをほとんど有さない。］カールフィッシャー滴定を使用して、水を測定する。なぜなら、最終生成物がしばしば凍結乾燥されるからである。ポリマーの大きさおよびその分子量分布を、分析用ＳＥＣによって決定する。遊離の低分子白金種の量および生理学的条件下（すなわち、ＰＢＳ３７℃）で放出される白金の量を決定する。なぜなら、遊離の白金種は、所望より高い毒性を導き得るからである。例えば、本明細書中に記載されるＯ，Ｏ−Ｐｔキレートは、Ｎ，Ｏ−キレートよりずっと少量の白金種を放出する。これに対応して、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは、インビボにおいて、本発明のＮ，Ｏ−Ｐｔキレートよりずっと毒性が高い。
【００６５】
本発明の別の局面は、本発明の白金錯体が、ヒトへの投与に適切なレベルまで精製されることを教示する。いくつかの滅菌濾過を組み込み、そして全プロセスに沿って重要な工程においては滅菌環境を使用することに、注意が払われる（図５を参照のこと）。このことは、本発明の滅菌された最終生成物を確実にすることを補助する。不純物のレベルは、限外濾過によって、薬学的に受容可能なレベルまで低減される。このことを、塩化物、ホスフェート、および限外濾過可能な白金に関して最終生成物を分析することによって、確認した。いくつかの実施例によって示されるように、このような塩および小さな白金種のレベルは非常に低く、そして十分に、必要な純度レベルの範囲内である。また、ＴＦＦの間の精製を、白金、リンおよび塩化物に対する透過性を分析することによって、確認した。
【００６６】
本発明の特に重要な局面は、Ｏ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転化がいかにして起こるか、およびいかにして起こらないかを教示する。実験ＤおよびＥの結果の比較は、より高い温度のみでは、キレートの転化を引き起こさないことを示す。なぜなら、実験Ｄにおいては有意なキレート転化が起こらなかったが、実験ＥにおいてはＮ，Ｏキレートへの完全な転化が起こったからである。これらの反応物の両方が、同じ時間だけ加熱された。ＮａＣｌおよびリン酸緩衝液を含む方のみが、キレート転化を示した。このキレート転化を、図７にグラフで示す。この図から見られ得るように、３７℃のＰＢＳ中で１６時間後にも、依然としていくらかのＯ，Ｏ−Ｐｔキレートが残っている。より高い温度および／またはより長い曝露時間を使用する場合には、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートは検出されないであろう。実験ＥおよびＦにおいて得られた結果の比較は、より高い温度が、キレート転化の速度を増大させることを明らかにする。なぜなら、５０℃で５時間後には転化は完了したが、３７℃で１６時間後にはいくらかのＯ，Ｏ−キレートが依然として残っていたからである。実験ＦおよびＧは、類似のイオン強度および温度における、３７℃で１６時間後に関して、ｐＨが重要であることを示す。より低いｐＨに曝露された材料は、より高いｐＨにおけるものより多くのＯ，Ｏ−キレートを含んだ。最後に、実験Ｈは、低濃度の緩衝液単独の影響が、キレート転化が起こることを可能にすることを示す。
【００６７】
本発明の別の教示は、特定の最低濃度のＮａＣｌが、アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）錯体のＯ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの効率的な転化のために必要とされることを示す。図１０によって示されるように、キレート転化は、より高いＮａＣｌ濃度が使用される場合には進行しなかった（１０ｍＭのリン酸緩衝液が使用されたことが注目されるべきである。リン酸がキレート転化を引き起こし得ること、およびより高い濃度のリン酸が、調製的なキレート転化を引き起こすために使用されることが、認識される）。
【００６８】
本発明の別の重要な局面は、ＮａＣｌおよびリン酸塩以外の塩類がキレート変換を行い得ることを示す。図１１は、ナイトレート、アセテート、およびアイオダイドのような種々のアニオン類がすべてこのキレート変換を行うことを示す。白金に対して良好ではあるが不安定なリガンドであるアイオダイドは、所定の時間で最高のキレート変換を示した。その一方、アセテートは最小を示した。興味深いことに、ナイトレート（白金に対して弱いリガンド）が、非常に効率的なキレート変換を行った。これらの結果は、ＮａＩが多くの有機溶媒中に可溶であるので有用であり、そしてそれは、非水系キレート変換においてキレート変換を行うために用いられ得る。その一方、高濃度のナイトレートは、その他の所望されないリガンドがキレートし得る系においてキレート変換を行うために用いられ得る。同様に、このキレート変換は、重炭酸緩衝液において円滑に進行した。臭化物、硫酸塩、スルフォン酸塩などのその他の金属類のその他の塩もまた、このキレート変換を行うことが予期される。
【００６９】
本発明の１つの有用な局面では、４＋酸化状態にある白金が、２＋状態の代わりに本発明の複合体のコアを形成する。より高い酸化の本発明の複合体は有用であり得る。なぜなら、それらは、置換に不活性であるからである。従って、そうでなければ、分子の別の部分または所望されない生物学的標的と反応し得る、本発明の４＋状態にある白金が調製され得る。さらに、４＋酸化状態にある白金は、白金化学的療法の経口投与のために用いられている。４＋複合体の合成は、過酸化物、過酸、ハロゲン化合物、および当業者に公知のその他の試薬を用いた酸化に際し、対応する２＋複合体からであり得る。
【００７０】
図１０により示されるように、１２３ｍＭより大きいＮａＣｌ濃度は、キレート変換の速度に有意な影響をもたない。しかし、６０ｍＭ ＮａＣｌでは、キレート変換の程度は、完全なようではなかった。これは、その他のイオン、特にアニオン類が、キレート変換の速度において役割を演じ得ることを示す。
【００７１】
これらの結果は、２５ｋＤａのＯ，Ｏ−Ｐｔキレート（０．８−１．０μＭ Ｐｔ）および２５ｋＤａのＮ，Ｏ−Ｐｔキレート（３．４μＭ Ｐｔ）に対するＩＣ５０値、ならびにシスプラチン（０．５μＭ Ｐｔ）およびカルボプラチン（２．４μＭ Ｐｔ）のそれらが、同じ低マイクロモル濃度範囲に入ることを示す。これは、このインビトロアッセイにより示されるように、これらの試薬のすべてが類似の細胞障害性能力を提示してＢ１６Ｆ１０メラノーマ細胞の増殖を阻害することを示す。このアッセイはさらに、このポリマーの分子量が実質的に増加するとき、この細胞障害性能力が保持されることを示す。なぜなら、４５ｋＤａのＯ，Ｏ−Ｐｔキレート（１．０μＭ）および９０ｋＤａのＯ，Ｏ−Ｐｔキレート（０．９μＭ）もまた、この低範囲内に入るからである。従って、対応するより大きな分子量アナログのＮ，Ｏ−Ｐｔキレートは、それらの高いインビトロ細胞障害性を保持し得ることが予測される。対照的に、このアッセイは、より大きな分子量の非白金化ポリマーの細胞障害性は非常に低い（大きさでコントロール値に匹敵する）ことを示す。これらのデータは、新たに産生されたアナログを、インビボ評価により関与させる前に、高細胞障害性能力を保持することに対して慣用的にスクリーニングするための、このインビトロ系の有用性を示す。
【００７２】
本発明の１つの好適な実施形態において、分子量における広範な分布をカバーする置換されたＨＰＭＡキャリアへの白金の結合は、代表的な哺乳動物腫瘍細胞系において、従来の抗腫瘍白金薬剤により所有される細胞障害性に等しいか、またはそれより大きい、実質的な細胞障害性活性を、これらキャリアに与える（表３）。対照的に、これもまた分子量における広範な分布をカバーする置換されたＨＰＭＡは、そのような細胞障害性活性はない（表３）。本発明の１つの好適な局面は、このような上記細胞障害性活性が、所望のように、部分的には、上記広範な分子量分布を有する代表的な置換されたＨＰＭＡへの、Ｏ，Ｏ−、Ｎ，Ｏ−、およびＤＡＣＨ連結白金成分からなる、広範な種類の白金複合体により与えられるという点でさらにより広範に証明される。
【００７３】
本発明の１つの好適な実施形態では、代表的なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの好適なＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの変換は、予期されないように、かつ所望のように上記代表的なＮ，Ｏ−Ｐｔキレートに、顕著な耐性の増大を付与し、それによって、所望されるように、顕著により高い用量の治療的抗腫瘍白金成分の全身投与を可能にする（表４）。
【００７４】
本発明の１つの好適な実施形態では、従来薬剤（３ｍｇ／ｋｇのシスプラチン）と比較して、顕著に有利な治療指標は、ポリマーキャリアへの代表的な白金複合体の結合により達成される（１７．５ｍｇＰｔ／ｋｇで投与されるＮ，Ｏ−Ｐｔ複合体の実質的により低い全身障害性）。ここで、両方の治療養生法は、生理食塩水コントロール群の増殖と比較して同程度の腫瘍増殖減少を与える（図１２）。
【００７５】
図１３に示される結果は、本発明の１つの好適な局面をさらに示し、ここでは、抗腫瘍活性が、ポリマーキャリアに連結された治療的白金複合体から得られることが広く期待される。この例では、代表的なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの活性が、生理食塩水コントロール群の腫瘍増殖に対して腫瘍増殖阻害を生じることが示される。上記Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートにより与えられるこの増殖阻害は、従来のシスプラチン療法のそれより有意により明白ではない。図１２に示されるＮ，Ｏ−Ｐｔキレートにより与えられるより好ましい腫瘍増殖阻害活性をともに考慮すると、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートのそれに対するＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの予期せぬ明白な活性が強力に示される。
【００７６】
本発明の１つの好適な実施形態では、強力かつ予期せぬ治療利点が、腫瘍増殖阻害活性において、毎日の×５（ｑｄ×５）養生法について、代表的な従来の白金薬剤（シスプラチン）に対する比較により（両者は、最大許容用量で投与される）、上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートによって付与される（図１４）。
【００７７】
本発明の１つの好適な実施形態では、上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートは、先の例（図１２−１５）の実質的に異なるＢ１６メラノーマモデルに対して、ヒト扁平上皮乳頭腫瘍細胞異種移植片における広範かつ予期せぬ範囲の腫瘍増殖活性を与えることが強力に示された（図１５）。この代表的なヒト異種移植片モデルでは、上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート６５または４００ｍｇＰｔ／ｋｇで、等張グルコースコントロール群の腫瘍増殖に対し、従来の白金薬剤（カルボプラチン）により与えられる強力な活性に相当する活性を与えた。本発明のさらなる好適な局面では上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートの６５ｍｇＰｔ／ｋｇの用量で、６５ｍｇＰｔ／ｋｇのカルボプラチンの投与から生じる障害性、またはより高い用量４００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇの上記Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートの投与から生じるそれより実質的に少ない全身障害性が観察される。
【００７８】
（用語の定義）
用語「精製された」は、１つの化学的形態において、９５％以上の白金が存在し、しかも反応物質、白金以外の金属のキレート、副産物、塩、遊離リガンド、および／または分解産物（もしあれば）のようなその他の所望されない物質が、全体の１％（ｗｔ／ｗｔ）を超えないように低減され、そしてここで、このような不純物の任意の１つが０．５％より多くない複合体をいう。癌を治療する目的に、動物またはヒト被験体にこの精製された白金複合体を投与するために、この精製された白金複合体は、この精製された白金複合体の安定かつ薬学的に受容可能な処方物を提供するために安全と一般にみなされる認可された薬学的賦形剤および材料と処方され得る。
【００７９】
治療的に効果的な量は、腫瘍後退を引き起こす量である。これは、１ｍｇ／ｋｇ〜１ｇｍ／ｋｇ体重であると考えられる。
【００８０】
用語アクリルアミドポリマーは、ポリアクリルアミドおよびポリメタクリルアミドを含む。
【００８１】
用語「複合体」は、中心の金属原子がリガンドにより取り囲まれる種を示す。
【００８２】
キレートは、複合体の金属原子と環を形成するリガンドをいう。
【００８３】
用語「アミン（ａｍｍｉｎｅ）」はＮＨ３をいい、その一方用語「アミン（ａｍｉｎｅ）」は、ＮＨ３、１級、２級、３級アミンを含み、それらは、脂肪族、芳香族、および／または異環であり得る。
【００８４】
用語「アマ（Ａｍａ）」は、文脈に応じてアミノマロネートまたはアミドマロネートをいう。用語「アミドマロネート」は、２−アミノマロン酸のアミドをいう。それは、酸または塩形態であり得る。
【００８５】
腫瘍を「標的するために有用な」群の本発明の複合体は、その他の組織より腫瘍に活性薬物のより多くを送達するものである。このような標的化は、ＥＰＲにより得られる受動的標的化、または抗体、レクチン、葉酸などへの接合により示されるような能動的標的化を含む。
【００８６】
用語「ポリマー結合Ｎ，Ｏ−アミドマロネート−ジアミン白金（ＩＩ）複合体」は、ポリマーに共有結合している本発明の複合体をいう。請求項４の「カチオン」は、Ｈ＋、アルカリ、アルカリ土類、およびアンモニウムカチオンをいう。用語「アミノ酸」は、天然および非天然αアミノ酸、ならびにβアラニン、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、ｐ−アミノ安息香酸などのようなアミノ酸を含む。
【００８７】
用語「近位端」は、ポリマーバックボーンの近傍に連結していないオリゴペプチドリンカーの端部をいう。
【００８８】
葉酸誘導体は、葉酸と本発明の複合体のような目的の別の分子との結合体である。葉酸アナログは、メトトレキセート、アメトプテリン、およびプテリンカルボキシレートのような葉酸の近縁化学的関連物の部分である。
【００８９】
用語「ポリサッカライドの側鎖」は、アミドマロネートを形成するため、またはアミドマロネートへの連結の部分として有用な官能基をいう。当業者にとって、カルボキシレート、アミンおよびヒドロキシ基でさえ、アミドマロネートを付着すめために用いられ得る。１つ以上の白金複合体が、この側鎖により各ポリサッカライドに結合され得る。
【００９０】
用語「ポリ（Ｇｌｕ）−Ａｍａ−ｄｉＥｔ」は、カルボキシル側鎖のフラクション（すなわち１５％）のみがＡｍａ−ｄｉＥｔ基により置換されたポリマーを示す。同様に、用語「ポリ（Ｇｌｕ）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２」は、すべてまたは大部分のＡｍａ基がｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）に配位しているＯ，Ｏ−またはＮ，Ｏ−アミドマロネート白金キレートを示す。
【００９１】
用語「ポリ（Ｇｌｕ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ）」は、すべてのカルボキシ側鎖がＡｍａ−ｄｉＥｔ基により置換されたポリマーをいう。用語「ポリ（Ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２」は、Ａｍａ基のほんの一部分（すなわち１０％）がｃｉｓ−ジアミン白金（ＩＩ）種に配位しているＯ，Ｏ−またはＮ，Ｏ−アミドマロネート白金キレートを示す。
【００９２】
（略語）
Ａｍａ、アミノマロネートまたはアミドマロネート；
Ａｍａ−ｄｉＥｔ、ジエチルアミノマロネートまたはジエチルアミドマロネート；
ＡＰ５２８０、は、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｎ，Ｏ−キレート ２５ｋＤａ物質である；
ＤＡＣＨ、ジアミノシクロヘキサン；
ＤＣＣ、ジシクロヘキシルカルボジイミド；
ＤＭＡＰ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン；
ＤＭＦ、ジメチルホルムアミド；
ＥＤＣ、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドハイドメロクロライド；
ＦＩＤ、自由誘導減衰；
ＨＯＢｔ、ヒドロキシベンゾトリアゾール；
ＨＰＡ、（２−ヒドロキシプロピルアミン）；
ＭＡ、メタクロイル；
ＭＴＤ、最大許容用量、薬物誘導障害性から生じる死滅がない評価された最高の用量；
Ｎ，Ｏ−Ｐｔ、アミド、カルボキシキレート；
Ｏ，Ｏ−Ｐｔ、ジカルボキシキレート；
ＯＮｐ、ｐ−ニトロフェノールエステル；
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ、ＨＰＭＡおよびｇｌｙ−Ｐｈｅ−ｌｅｕ−ｇｌｙのメタクリルアミドのコポリマー；
ＲＣＦ、相対的遠心力、
ＴＦＦ、タンジェンシャルフロー濾過；
（材料および方法）
（Ｉ．化学品）
シスプラチン、ピリジン、エタノール、エチルアセテート、ジエチルエーテル、ジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、ジエチルＮ−アセトアミドマロネート、ＡｇＮＯ３、ＮａＯＨ、１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサン、ポリグルタメートＮａ塩、ＫＩ、ＰＢＳ混合物は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ ＵＳＡにより供給された。溶媒は、ＨＰＬＣグレードおよびＡＣＳグレードの試薬またはより良好な品質であった。イオン交換樹脂ＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ）Ｈ＋、ＨＯ−形態、ＡＧ５０Ｗ−Ｘ８Ｈ＋、およびＣｈｅｌｅｘ １００ Ｂｉｏｔｅｃｈグレードは、Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより供給された。クラス１の水は、Ｍｉｌｌｉ−Ｑウォーターシステムから自家調製した。Ｋ２ＰｔＣｌ４は、Ａｌｌ−Ｃｈｅｍｉｅ Ｌｔｄ．Ｍｔ．Ｐｌｅａｓａｎｔ，ＳＣにより供給された。フィルターエイド２８９ポンプは、Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌからであった。ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ ４５ｋＤａ、およびポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ ３５１ｋＤａは、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｈｒｏｐｓｈｉｒｅ、ＵＫにより合成された。アミノ酸分析およびＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳは、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤにより実施された。
【００９３】
（ＩＩ．装置および機器）
スケール０．２μｍに依存して滅菌濾過を、２５ｍｍ Ｗｈａｔｍａｎ ＧＤ／ＸＰＶＤＦシリンジフィルター、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＧＰ Ｅｘｐｒｅｓｓメンブレンを備えたＳｔｅｒｉｔｏｐ媒体ボトルフィルター、またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＰＶＤＦメンブレンを備えたＭｉｌｌｉｐａｋインラインフィルターのいずれかを用いて実施した。ＵＶ光を備えた層流フードを滅菌操作に用いた。ｐＨは、４および１０で校正されたゲル電極を備えたＢｅｃｋｍａｎ Ｐｈｉ−３４ｐＨメーターで測定した。凍結乾燥固体中の静電気は、ＳＩＭＣＯ，Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＰＡからの静電場メーターによりガイドされるように、ＡｌｄｒｉｃｈからのＺｅｒｏｓｔａｔ銃により中和した。白金は、３％ＨＮＯ３中３０−６０ｐｐｍに希釈されたサンプルおよび標準に対し、Ｊｏｂｉｎ ＹｖｏｎＪＹ２４分光計を用いるＩＣＰ−ＯＥＳにより分析した。水分は、ＥＭ ＳｃｉｅｎｃｅからのＡｑｕａｓｔａｒ Ｃ２０００を用いるＫａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ滴定により測定した。Ｎａ、ＣｌおよびＰの元素分析は、Ｄｅｓｅｒｔ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺにより実施した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ，Ｉｎｃ．からの４００ＭＨｚ Ｕｎｉｔｙ／Ｉｎｏｖａシステム上で得た。１９５ＰｔＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎからの３００ＭＨｚ Ｍｅｒｃｕｒｙシステム上で得た。凍結乾燥は、ＶｉｒｔｕｓからのＦｒｅｅｚｅｍｏｂｉｌｅ １２ＥＬ上で実施した。
【００９４】
（ＩＩ．パーセントＯ，Ｏ−およびＮ，Ｏ−キレートのためのアリコート精製）
反応混合物の時限アリコート中のＯ，Ｏ−およびＮ，Ｏ−キレートのパーセントは、１９５Ｐｔ ＮＭＲスペクトル分析のみを行うべき場合、約１００ｍｇ、または％Ｐｔおよび％水分が測定されるべき場合、約２００ｍｇを生じるよう十分な反応混合物（濃度に依存して４−１５ｍＬ）を取り出すことにより測定した。このアリコートは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅからの５ｋＤａ Ｂｉｏｍａｘメンブレンを備えたＣｅｎｔｒｉｃｏｎ Ｐｌｕｓ−２０遠心フィルターを用いる限外濾過により精製した。充填されたデバイスを、推奨されたＲＣＦで約０．５ｍＬ未満が残存するまで回転した。アリコートについて報告された時間は、最初の遠心分離が開始した瞬間である。濾液を棄て、保持液を１５−１８ｍｌの水で希釈し、そしてこのサンプルを先のように遠心分離した。これをもう１回繰り返し、そして保持液を凍結乾燥し、分析用のサンプルを得た。この技法はまた、アミドマロネート基をもつポリマーを含む０．１−２ｇの反応物の精製のために用いた。
【００９５】
（ＩＩＩ．ＰＢＳからの白金放出）
経時的に放出された小白金種のパーセントは、約３０ｍｇのポリマー白金結合体を正確に秤量し、そして１５ｍＬのリン酸緩衝化生理食塩水（１０ｍＭリン酸、１２３ｍＭ Ｃｌ−）中に溶解することにより測定し、そして３７℃の水浴中でインキュベートした。示された時間で、２．０ｍＬのアリコートを、３ｋＤａの公称分子量カットオフをもつ遠心フィルター（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅからのＣｅｎｔｒｉｃｏｎ ＹＭ−３）にトランスファーし、そして即座に１．５ｍｌより多い濾液が蓄積するまで回転した。これらの時限濾液および当初の溶液は、ＩＣＰ−ＯＥＳによって白金を分析した。所定時間に存在する小白金種のパーセントは、式：（濾液中のＰｔ ｐｐｍ／ストック溶液中のＰｔ ｐｐｍ）＊１００により決定した。
【００９６】
（ＩＶ．サイズ排除クロマトグラフィー）
Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートを、３５℃のカラムオーブン内に２つのＰＬ Ａｑｕａｇｅｌ−ＯＨ混合型の８μｍカラム（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｓ製）およびＲＩ検出器を備えるＨＰＬＣ装置から構成されるＳＥＣシステムにおいて分析した。移動相（これは、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏと１０．０ｍＭのＬｉＣｌＯ４との３５／６５混合物からなる）を、１．０ｍＬ／分の流速でポンプ注入した。各分析に３０分を必要とした。カラムをＰＥＯ／ＰＥＧ標準を用いてキャリブレートし、そして結果を保持時間の逆数の関数としてｌｏｇ（Ｍｐ）の４次多項式にフィットさせた。ＭｗおよびＭｎについて記録した値は、移動相に溶解した２ｍｇ／ｍＬのサンプルの１００μｌの、３回の測定の平均を示す。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを、Ｍｅｎｄｉｃｈｉら、１９９６の方法に従って分析した。
【００９７】
（Ｖ．タンジェンシャルフローフィルトレーション）
約２ｇよりも大きいスケールで、Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートのポリマーを、５ｋＤの見かけの分子量のカットオフ値を有するＢｉｏｍａｘポリエーテルスルホンから作製した０．０５〜０．１ｍ２の面積を有する膜を用いるタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）により精製した。濾過の前に、この系を洗浄し、そして推奨される流速で３０〜６０分間０．１Ｎ ＮａＯＨをポンプ注入することにより消毒した。腐食物質を取り出し、そして新鮮な１型水（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水）を、保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）および浸透液（ｐｅｒｍｅａｔｅ）のｐＨが中性（ｐＨ＜８）になるまで循環させた。浸透液の流速を、２．０バールのインレット圧および０．３５バールのアウトレット圧で測定した。Ｍｉｌｌｉ−Ｑ系由来の新鮮な１型水を、補給水として用いた。
（ＶＩ．ＮＭＲ分析）
１９５Ｐｔ ＮＭＲスペクトルを、Ｂａｎｃｒｏｆｔら、１９９０の方法に従って、５ｍｍチューブ内の、９３／７Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ中の０．７０ｍＬの濾過した溶液から得た。十分なサンプル（８０〜１２０ｍｇ）を用いて、白金が約５０ｍＭ以上である溶液を得た。プローブを、各サンプルについて調製する。９０°のパルス幅、５．１２ミリ秒の取り込み時間、１００ｋＨｚのスペクトルウィンドウ（ｓｐｅｃｔｒａｌ ｗｉｎｄｏｗ）、および遅延なし、を用いた。トランスミッタ（ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ）を、Ｏ，Ｏ−キレートとＮ，Ｏ−キレートとの中間（−１８９６ｐｐｍ）に置いた。５０，０００〜２５０，０００の間の遷移（２０〜９０分）が、代表的に、３５／１を越える十分なｓ／ｎ比を獲得するために必要とされた。得られたＦＩＤを、平坦なベースラインが得られるまで漸増的に左にシフトさせ、１００Ｈｚの線の広幅化を適用し、そして２０４８を満たすフーリエ変換を適用した後、処理した。積分領域を設定し、そしてスペクトルのベースラインを、ＶＮＭＲソフトウェアｖ６．１によるスプラインフィットに供した。サンプルは、９５／５Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ、１００ｍＭＨＣｌ中のＫ２ＰｔＣｌ４の１００ｍＭのサンプル（−１６２４ｐｐｍ）を外部標準とした。これを用いて、９０°のパルス幅およびＴ１もまた測定した。９０°のパルス、２Ｔ１の取り込み時間および３Ｔ１の遅延を用いると、１２８の遷移は、「ｇｅｓｔｎ」命令を用いる標準サンプルについて、３０／１を越えるｓ／ｎを与えた。
【００９８】
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを、１９５Ｐｔ ＮＭＲに用いたのと同じサンプルについて獲得した。０．５０秒の取り込み時間、３．０秒の遅延、約７０°のパルス幅、および５０００〜１００００の遷移を、３．５Ｈｚの線の広幅化を適用して、収集した。１００を越えるｓ／ｎを代表的に得た。水性サンプルは、９３／７Ｄ２Ｏ中の１，４−ジオキサン（６７．１９ｐｐｍ）を外部標準とした。他のサンプルは、溶媒ピークを標準とした。
【００９９】
１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ＴＭＳまたはＴＭＳＰを標準とし、そして標準的パラメーターを用いて獲得した。ＨＯＤシグナルの前飽和を頻繁に用いた。カップリング定数（Ｊ）は、ヘルツである。
【実施例】
【０１００】
以下の実施例は、好ましいバージョンおよびこれを作製する方法を含む本発明の実施形態をさらに例示する；しかし、これらの例は、本発明の限定と解釈されない。
【０１０１】
（実施例１）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（約２５ｋＤａ）の調製）
オーブン乾燥した、磁性攪拌子を有する１Ｌ丸底フラスコに、隔壁（ｓｅｐｔａ）を装着し、そして減圧下で冷却した。一旦、冷却した後、窒素を導入し、隔壁を取り出し、そして２９．７９ｇ（１４０．８ｍｍｏｌ）のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩を添加した。隔壁を再び置き、そして８００ｍＬの無水ピリジンをフラスコに挿管注入（ｃａｎｎｕｌａｔｅ）した。溶解後、５０ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ（米国特許第５，９６５，１１８号の化合物Ｉ、図１Ａ）の３分の１を添加した。ほぼ溶解したときに、５０ｇのＯＮｐ−ポリマーの、次ぎの３分の１を、上記のように導入した。この手順を、５０ｇのＯＮｐ−ポリマーの全てが添加されるまで繰り返した。
【０１０２】
反応の程度を、Ｃ１８カラム、３１６ｎｍのＵＶ検出、およびｐＨ４．５／ＭｅＣＮ移動相を用いて、遊離および総量のｐ−ニトロフェノールについて、ＨＰＬＣアッセイによりモニターした。アリコートを、塩基加水分解（ｐＨ＝１２、５分）の後、遊離のＯＮｐおよび総量について分析した。約２３℃で攪拌をしながら２０〜２４時間後、反応が図６に示されるように完了したことを見出した。
【０１０３】
反応混合物を、水浴中で３時間４０〜４５℃に加熱し、室温に冷却し、そしてピリジンを４０℃未満で、減圧除去した。残渣を、無水ＥｔＯＨに溶解して、２５％ｗｔ／ｖｏｌ．の溶液を得た。粗精製物を、２．５Ｌの乾燥ＥｔＯＡｃおよび０．５Ｌのジエチルエーテルを用いて沈殿させた。混合物を、３〜５時間攪拌して、次いで、中目のガラスフリット（ｍｅｄｉｕｍ ｇｌａｓｓ ｆｒｉｔ）を介して濾過した。残渣を、１００ｍＬ未満のエーテルを用いて３回洗浄し、そしてラバーダム下で乾燥して、５７〜５９ｇの淡黄色固体を得た。この固体を、５００ｍＬのＥｔＯＨに溶解し、そして１ｇのろ過ケーキあたり３．１ｇのＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ）ＩＸ樹脂（Ｈ＋および−ＯＨ形態）を添加した。混合物を２．５時間穏やかに攪拌し、次いで、ろ過して、樹脂を取り除いた。ＥｔＯＨの容量を、２５％（ｗｔ／ｖｏｌ．）溶液まで減少させ、そして上記のように沈殿させた。純粋な生成物を収集し、そして上記のように洗浄して、４５〜４６ｇ（約９０％）の淡黄色固体を得た。この物質の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ａｍａ−ｄｉＥｔ基に特徴的なピークを含み、１％未満のＥｔＯＨおよびＥｔＯＡｃの各々を除いて低分子は無かったことを示した（Ｐｉｎｃｉｒｏｌｉら、１９９７）：アミノ酸分析（ｇｌｙ：ＨＰＡ：ｌｅｕ：ｐｈｅのモル比）：３．１：７．１：１．０：１．２；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２０）δ７．２−７．４（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），４．６６（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３１（ｂｒ ｓ，５，α−Ｈ ｌｅｕ，＆ＯＣＨ２ＣＨ３），４．１−３．８（高いおよび低いｍ，約１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３および−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３−２．９（ｍ，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，−ＣＨ２−（ポリマー骨格），ＣＨ２＆ＣＨ（ｌｅｕ）），１．２０（ｂｒ ｓ，約３１，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，および−ＯＣＨ２ＣＨ３），０．９９（ｓ，ＣＨ３−（ポリマー骨格）），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）。
（実施例２）
（シス−ジアミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートの調製）
シスプラチン（８．９９６ｇ、２９．９８ｍｍｏｌ）、ＡｇＮＯ３（９．９５９ｇ、５８．６２ｍｍｏｌ）、３−５滴の５％ＨＮＯ３、および１９０ｍＬの水を、ホイルで覆った低化学作用性メディウム瓶中で約２３℃で一晩攪拌し、次いで６０〜６５℃で３．５時間加熱した。室温まで冷却後、混合物を０．２２μｍフィルターを介してろ過した。ｐＨは約２であった。ＰｔおよびＡｇ分析（ＩＣＰ−ＯＥＳ）は、代表的に、約１５，０００〜２５，０００ｐｐｍのＰｔおよび４〜１４ｐｐｍのＡｇを含むことを示した。各調製物を、Ｐｔについて分析し、そして使用の直前に５５℃にて５分間過熱し、次いで、室温まで冷却した。
【０１０４】
シス−ジアミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートのジ−１５Ｎイソトポリペプチドマーの調製は、１９５ＰｔＮＭＲの−１５８２ｐｐｍのトリプレットを示した。これは、Ａｐｐｌｅｔｏｎら、１９８９により報告された−１５８０ｐｐｍの文献値に厳密に一致する。
（実施例３）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
（１．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの加水分解）
攪拌子を有する１Ｌメディウム瓶において、４５ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（１９．３５ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ残基）を２００ｍＬの水に添加した。激しい攪拌の後、１３５ｍｌの水を添加して、１２〜１３％（ｗｔ／ｖ）混合物を得た。１〜２時間の溶解の際、２７ｍＬ（５４ｍｍｏｌ）の２Ｎ ＮａＯＨを添加して、ｐＨを１２．５〜１２．７に上昇させた。ｐＨを３０分間、この範囲に維持し、次いで、４５ｇのＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ）ＩＸ樹脂（Ｈ＋および−ＯＨ）を添加した。ｐＨ７未満のとき、樹脂を滅菌ろ過により取り出した。濾液のｐＨを２Ｎ ＮａＯＨを用いて７．６に上昇させて、ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−（Ｃｏ２−Ｎａ＋）の溶液を得た。
（２．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２、Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
実施例３のポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−（Ｃｏ２−Ｎａ＋）２のｐＨ＝７．６溶液に、実施例２に従って調製したシス−［Ｐｔ（ＮＨ３）２（Ｈ２Ｏ）２］２＋・２ＮＯ３−の、１９９ｍＬの５９０．９ｍＭ（２２，９４０ｐｐｍ Ｐｔ）溶液を一度に加えて、５．０±０．１のｐＨを有する反応混合物を得た。一晩の攪拌の間、ｐＨを約４．２まで下げ、そして少量の沈殿を形成させた。１６〜１８時間後、１７ｇのＣｈｅｌｅｘ １００樹脂を添加し、そして１．５時間攪拌した。ろ過の前に、約０．５ｇのフィルター助剤パルプを添加し、そして分散させた。混合物を粗目のガラスフリット介してろ過した。約１２５ｍｇを含むこの濾液のアリコートを取り出し、０．２μｍの膜を介してろ過し、そして遠心分離限外濾過により精製した。保持液を凍結乾燥して、約１１０ｍｇを得た。あるいは、反応混合物を、実施例４に記載されるように、ＴＦＦにより精製してもよい。１Ｈ ＮＮＭ（Ｄ２Ｏ）δ７．６および７．５５（ｂｒ ｓ，交換，ＮＨ），７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．９（ｂｒ ｓ，部分的に交換，０．２，ＮＨ−Ａｍａ）４．６５（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３７（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ，ＮＨ３またはＣＨ２（ｇｌｙ）），４．１−３．８（高いおよび低い，約１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｂｒｍ，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，−ＣＨ２−（ポリマー骨格），ＣＨ２＆ＣＨ（ｌｅｕ）），１．２０および１．１９（ｓ，約２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ＣＨ３−（ポリマー骨格），０．９（ｓｈ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ１８０．１，１７９．８，１７９．６，１７５．０，１７４．２，１７３．３，１７１．５，１７１．１，１７０．７，１３６．６，１２９．８，１２９．４，１２７．８，６６．５，６６．３，５９．６，５５．６，５４．７，５３．０，４７．９，４６．７，４６．０，４５．６，４３．１，４０．５，３７．８，２４．９，２３．１，２１．６；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ−１５８７，−１７３３，−２０２０，および−２０５６（それぞれ、１：３８：１：４の面積比を有する）。分析は、この物質が、約９％のＰｔ、５〜１０％の水、および０．０２％Ｎａを含むことを示す。
（実施例４）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２、Ｎ，Ｏ−キレート（ＡＰ５２８０）の調製）
（１．Ｏ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転換）
実施例３からのＣｈｅｌｅｘ１００のろ過により約１Ｌの濾液を得た後、溶液を、ＮａＣｌおよび７５ｍＭ リン酸（ｐＨ７．４）中で、５．８５ｇ（１００ｍｍｏｌ）のＮａＣｌ、１６．３５ｇ（６１ｍｍｏｌ）のＮａＨＰＯ４・７、および１．９３ｇ（１４ｍｍｏｌ）のＮａＨ２ＰＯ４を添加することにより１００ｍＭにした。ｐＨを、１Ｎ ＮａＯＨまたは５％ＨＮＯ３を用いて７．４に調整した。この溶液をろ過し、そして０．２２μｍの滅菌膜を介して、滅菌メディウム瓶へと、同じ濃度の緩衝液を用いて洗浄して、１．５Ｌの溶液を得、そして０．２２μｍ膜スクリューキャップを用いてキャップした。この溶液を水浴で３７〜３８℃に温め、次いで、オーブン中で２２時間、３７℃に置いた。この時点での、限外濾過により精製したアリコートの１９５Ｐｔ ＮＭＲ分析は、白金キレートが、９５％以上のＮ，Ｏ−キレートおよび５％未満のＯ，Ｏ−キレートであることを示した（図７を参照のこと）。
（２．Ｎ，Ｏ−キレートのＴＦＦ精製および凍結乾燥）
上記からの１．２ＬのＮ，Ｏ−キレートを、ＴＦＦにより方法の節に記載のように精製した。保持液（透明な暗赤色溶液）を、滅菌ろ過し、そして凍結乾燥して、４１．４ｇ（９２％）の赤褐色の固体を得た：％Ｐｔ＝７．９±０．１５％，５．６％，１．０７％Ｎａ，＜．０５％Ｐ，０．０７％Ｃｌ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．２３（ｂｒ ｓ，部分的に交換，ＣＨ（Ａｍａ）），４．６５（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３７（ｂｒ ｓ，ｌ，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ，ＮＨ３またはＣＨ２（ｇｌｙ）），４．１−３．８（高いおよび低いｍ，約１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｍ，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，−ＣＨ２−（ポリマー骨格），ＣＨ２＆ＣＨ（ｌｅｕ）），１．２０および１．１９（ｓ，約２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ＣＨ３−ポリマー骨格），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ１８６．５，１８５．０，１８０．１，１７９．９，１７９．６，１７６．３，１７５．２，１７５．０，１７４．６，１７４．４，１７４．０，１７３．９，１７３．２，１７１．４，１７１．０，１３６．６，１２９．８，１２９．４，１２７．８，７１．０，６６．５，６６．３，５５．６，５４．７，５２．８，４７．９，４６．０，４５．６，４１．８，４０．５，３７．９，２４．８，２３．１，２１．５，２０．９，２０．７，１８．７，１７．３；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（９３／７ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ，６４．４ＭＨｚ）δ−１７３３（ｖ ｂｒ ｓ，Ｏ，Ｏ−キレート），−２０５６（ｓ，Ｎ，Ｏ−キレート），Ｏ，Ｏ−対Ｎ，Ｏの比は、それぞれ、＜５：＞９５；ＳＥＣ Ｍｐ＝２４．５，ＭＷ＝２４．３ｋＤａ，Ｍ＝１５．７
ｋＤａ、およびＭｗ／Ｍｎ＝１．５５；Ｐｔ放出（ＰＢＳ中、３７℃，０．６％（３ｈ），２．０％（２４ｈ））。
【０１０５】
（実施例５）
（Ｏ，Ｏ−キレートの形成）
実施例３の白金処理（ｐｌａｔｉｎａｔｉｏｎ）反応の間の有意なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの形成を、上記に記載されるアリコート精製および１９５Ｐｔ分析を用いて研究した。このような研究の１つからのデータのプロットを、図８に示す。示されるように、反応は、最大量の、９０％のＯ，Ｏ−キレート（１時間）を用いて、迅速に進行した。反応が進行した場合、Ｏ，Ｏ−キレートの量は減少し、そしてＮ，Ｏ−キレートの量は増加し、その結果、２０時間で、８０％のＯ，Ｏ−キレートおよび２０％のＮ，Ｏ−キレートが存在する。従って、Ｏ，Ｏ−キレート物質を必要とする場合、ＴＦＦ精製（実施例４）は、シス−ジアミンジアクア白金（ＩＩ）カチオンの添加の約１時間後に開始するべきである。
【０１０６】
（実施例６）
（実施例４の条件下でのＯ，Ｏ−ＰｔキレートからＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの転換の時間経過）
実施例４に記載のキレート転換の間、アリコートを、種々の時間間隔で得た。これを、遠心分離限外濾過で直ぐに精製し、そして凍結乾燥した。これらを引き続いて、９３／７Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ中に新たに溶解し、そして１９５Ｐｔ ＮＭＲ分析により分析した。ピーク面積比を、各時間点でのスペクトルから獲得した。これを、次いで、％Ｎ，Ｏ−キレートに変換し、そして図９にプロットした。アリコートの組成は、少なくとも２４時間安定であった。
【０１０７】
（実施例７）
（Ｏ，Ｏ−キレートの選択的形成）
Ｏ，Ｏ−キレートを選択的に調製する方法を、アミドマロネート基あたりのシス−ジアミンアクア白金（ＩＩ）カチオンの当量を変化させた場合に観察した。各反応Ａ〜Ｃは、２．０ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを用いて開始した。Ｐｔの数が等しい場合を除いて、反応を実施例３のように行った。反応混合物を凍結乾燥し、そして同じＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１０カラム（２．５ｘ６０ｃｍ）を用いてＳＥＣにより精製した。表１に示すように、１当量未満のＰｔを用いた場合、２当量の白金処理剤を用いた場合よりも、より高い比率のＯ，Ｏ−キレートを見出した。
【０１０８】
（表１．異なる当量のＡｍａ基あたりのＰｔでの白金処理の間のＯ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの形成の％）
【０１０９】
【表１】
（実施例８）
（Ｏ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの変換：ｐＨ、温度、および緩衝液の効果）
実施例３に記載される調製物から単離し、そしてＴＦＦまたはＳＥＣにより精製した有意なＯ，Ｏ−キレート物質を、実施例４において用いた温度、緩衝液、およびｐＨから変更した温度、緩衝液、およびｐＨに供した。代表的には、１０ｍｇ／ｍＬの濃度のポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２の有意なＯ，Ｏ−Ｐｔキレートを用いた。結果を表２に示す。
【０１１０】
（表２．実施例４のＯ，Ｏ−キレートのＮ，Ｏ−キレートへの転換の程度に対する温度、緩衝液、およびｐＨの研究からの結果）
【０１１１】
【表２】
ａリン酸塩緩衝化生理食塩水は、１０ｍＭのリン酸塩、１００ｍＭのＮａＣｌ、および２．７ｍＭのＫＣｌであった
（実施例９）
（ＰＢＳ中でのＯ，Ｏ−キレートからＭ，Ｏ−キレートへの転換：Ｃｌ−濃度の効果）
Ｏ，Ｏ−キレートからＭ，Ｏ−キレートへの転換の割合に対する種々の塩化物濃度が有し得る効果を調べ、そしてこれらの結果を図１０に示す。約１ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２主要Ｏ，Ｏ−キレートを、１０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ＝７．４）に、１０ｍｇ／ｍＬで溶解し、そして３７℃で放置した。１：０５時間後、アリコート（１０ｍＭ Ｐｈｏｓ．）を取り、そしてこの溶液の残りを、十分なＮａＣｌを含む４つの容器に分配して、６０ｍＭ、１２３ｍＭ、２５０ｍＭ、および５００ｍＭのＮａＣｌを得た。１．５時間後（１０ｍＭリン酸塩緩衝液に溶解して２；３５時間後）、これらのアリコートを、遠心限外濾過によって精製し、そしてＮ，Ｏ−キレートの％を、１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって決定した。
【０１１２】
（実施例１０）
（ＰＢＳ中でのＯ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転換：他のアニオンの効果）
塩化物アニオンは、白金（ＩＩ）に対する非常に弱いかまたは非常に強いリガンドのいずれでもないので、塩化物より弱いかまたは強いリガンドのＯ，Ｏ−キレートからＭ，Ｏ−キレートへの転換に対する効果を調べた。実施例９で使用されたＯ，Ｏ−キレートの同じ１０ｍＭのリン酸塩（ｐＨ＝７．４）溶液を使用して、ＮａＮＯ３、ＮａＯＡｃ、およびＮａＩの１２３ｍＭの溶液を作製した。これらのリガンドは、各々、白金（ＩＩ）種に対して非常に弱いリガンド、強いリガンド、および非常に強いリガンドである（Ａｐｐｌｅｔｏｎら、１９８４）。
【０１１３】
（実施例１１）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
（１．シス−ジアクア−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨ白金ＩＩ（シス−（Ｈ２Ｏ）２Ｐｔ−ｌＲ，２Ｒ−ＤＡＣＨ）の調製）
Ｇａｎｄｏｌｆｉ（Ｇａｎｄｏｌｆｉら、１９８７）の方法を使用して、シス−ジアクア−１Ｒ，２Ｒ ＤＡＣＨ白金（ＩＩ）を調製した。１２５ｍＬのＥｒｌ．フラスコ（３．６５ｇ（８．７９ｍｍｏｌ）のＫ２ＰｔＣｌ４および３７ｍＬの水を含む）を加温して、赤茶色の溶液を得、これに６ｍＬの水中の５．８４ｇ（３５．２ｍｍｏｌ）のＫＩの溶液を添加して、暗赤色の溶液を得た。周囲温度に冷却する際に、０．９６２ｇの１Ｒ，２Ｒ−ジアミノシクロヘキサンを添加し、そして黄色沈澱が直ちに形成された。２５℃での３時間の攪拌後、この混合物を４℃で一晩放置した。この沈澱を回収し、そして冷水、ＥｔＯＨ、およびエーテルで洗浄して、４．９８ｇ（９７％）の（シス−Ｉ２Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨ））を得た。次に、１．００ｇ（１．７７６ｍｍｏｌ）のシス−Ｉ２Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨ、０．５８９８ｇ（３．４７２ｍｍｏｌ）のＡｇＮＯ３、および１６ｍＬの水を、遮光された容器内で組合せ、そして周囲温度で一晩攪拌し、次いで６０〜６５℃で３．５時間攪拌した。周囲温度への冷却の際に、ＡｇＣｌを濾過によって除去し、そして少量の水で１回洗浄した。濾液のＩＣＰ−ＯＥＳによる分析は、それが、１３，５００ｐｐｍのＰｔ（６９．１ｍＭ）シス−（Ｈ２Ｏ）Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨを含むことを示した。
【０１１４】
（２．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，Ｏ，Ｏ−キレートの調製）
出発物質である２．８０ｇのポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（１．２３２ｍｍｏｌのＡｍａ−ｄｉＥｔ基）を加水分解し、そして中和して、実施例３に記載されるようなポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−（ＣＯ２Ｎａ）２のｐＨ＝７．６の溶液を得た。この溶液に、１．４８ｍｍｏｌのシス−（Ｈ２Ｏ）２Ｐｔ−１Ｒ，２Ｒ−ＤＡＣＨジニトレート塩を上記からの水溶液として添加し、そして周囲温度で一晩攪拌した。この反応混合物は沈澱を含み、この沈澱を、０．１ｇのフィルター補助パルプの添加の後に滅菌濾過によって除去した。次いで、この反応系の１／３を、上記のように、０．３ｇのＣｈｅｌｅｘ樹脂で９０分間処理し、滅菌濾過し、次いで遠心限外濾過によって精製した。このサンプルを凍結乾燥して、０．７１グラムの赤茶色の固体を得た。８．７％のＰｔ、４．２％のＨ２Ｏ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）７．７および７．６（ｂｒ ｓ，〜５，ＮＨ），７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．８６（ｓ，１．６），４．６５（ｂｒ ｓ，１，αＨ−ｐｈｅ），４．３９（ｂｒ ｓ，１，αＨ−ｌｅｕ），４．１−３．８（ｂｒ ｍ，４，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．９５（ｂｒ ｓ，９，ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，），３．３５−２．９（ｍ，２０，ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．６−２．３．（ｂｒ ｓ，Ｎ−ＣＨ−ＤＡＣＨ），２．２５−１．２（ｍ，ポリマー骨格の−ＣＨ２−，ｌｅｕのＣＨ２＆ＣＨ，およびＤＡＣＨ），１．４５−０．８（ｂｒ ｓおよびｍ，〜９７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，ポリマー骨格のＣＨ３−，ｌｅｕ−ＣＨ３，およびＤＡＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８０．０，１７５．２，１７４．１，１７３．３，１７１．８，１７０．７，１３６．８，１２９．９，１２９．５，１２８．６，１２８．０，６６．５，６６．３，６３．４，５５．５，５４．７，５２．８，４７．９，４６．７，４６．０，４５．６，４３．５，４０．５，３７．４，３２．４，２４．８，２３．２，２１．５，２０．９，２０．８，１８．６，１７．６，および１７．２；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ約−１９００（ｖ ｂｒ ｓ，かろうじて認知可能，Ｏ，Ｏ−Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，−）；ＰＢＳ中でのＰｔ放出，３７Ｃ：３時間で６．０％，２４時間で１０．９％。
【０１１５】
（実施例１２）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ＝ＤＡＣＨ，Ｎ，Ｏ−キレートの調製）
実施例１１からの反応混合物の残りの２／３を０．６ｇのＣｈｅｌｅｘ樹脂と共に、９０分間攪拌し、そして次いで滅菌濾過した。この透明な溶液を、１１０ｍＭのＮａＣｌおよび８０ｍＭのリン酸塩、ならびにｐＨ＝７．４にした。これを、３７〜３８℃に２２時間維持し、次いで遠心限外濾過によって精製し、そして凍結乾燥して、１．３３ｇの赤茶色の固体を得た。８．１％のＰｔ、７．１％のＨ２Ｏ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．１７（ｓ，０．３），４．６５（ｂｒ ｓ，１，αＨ−ｐｈｅ），４．３８（ｂｒｓ，ｌ，αＨ−ｌｅｕ），４．１−３．８（ｂｒ ｍ，４，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．９５（ｂｒ ｓ，９，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，），３．３５−２．９（ｍ，２０，ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．６−２．２．（ｂｒ ｍ，Ｎ−ＣＨ−ＤＡＣＨ），２．２５−１．２（ｍ，ポリマー骨格の−ＣＨ２−，ＣＨ２，ｌｅｕのＣＨ，およびＤＡＣＨ），１．４５−０．８（ｂｒ ｓおよびｍ，〜１００，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，ポリマー骨格のＣＨ３−，ｌｅｕ−ＣＨ３，およびＤＡＣＨ）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８６．８，１８５．３，１８０．０，１７５．１，１７４．６，１７４．１，１７３．５，１７１．５，１７１．１，１３６．７，１２９．９，１２９．５，１２７．９，７０．２，６６．５，６６．３，６４．２，６３．３，６１．０，５５．６，５４．７，５２．９，４７．９，５６．７，４６．０，４５．６，４４．２，４３．３，４１．２，４０．５，３７．９，３２．７，２４．８，２４．６，２３．１，２１．５，２０．９，２０．７，１８．６，１７．３；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ −２２９３，−１９００にピークなし，および他のピークなし。ＰＢＳ中でのＰｔ放出，３７℃：３時間で２．０％、２４時間で２．１％。
【０１１６】
（実施例１３）
（ポリ（グルタメート）−Ａｍａ−ｄｉＥｔの調製）
Ｌｉ（Ｌｉら、１９９８）の手順を適合して、ポリグルタメートの遊離カルボキシレートの約１５％を置換した。０．５ｇ（３．２９ｍｍｏｌの−ＣＯ２基）のポリグルタメートおよび攪拌子を含むボトルに、１０４ｍｇ（０．４９３ｍｍｏｌ）のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、３ｍｇのＤＭＡＰ、および１０ｍＬの無水ＤＮＭ（ＨＰＬＣグレード、４Ａシーブスで＞４８時間）を、ドライボックス中で添加し、そして攪拌して、濁った混合物を得た。次いで、３１５ｍｇ（１．３６ｍｍｏｌ）のＤＣＣを添加し、ボトルの口に隔壁を挿入し、エーテル中の１．０Ｍ ＨＣｌの２ｍＬを添加し、そしてこの混合物を周囲温度で一晩攪拌した。その後、約１５ｍＬのＣＨＣｌ３を添加し、そしてこの濁った混合物を、３８５０ＲＣＦで１５分間遠心分離した。上清を破棄し、そして白色のゲル物質を２．５％のＮａＨＣＯ３と共に３０分間攪拌した。この混合物を前のように遠心分離し、そして上清を凍結乾燥して、１．９１ｇの白色固体を得、この固体の１Ｈ ＮＭＲは、ＤＭＦ、ＥｔＯＨ、ＤＣＣ／ＤＣＵの存在、ならびにポリグルタメートおよびジエチルアミドマロネート、ならびにジエチルアミノマロネートのピークを示した。（４．３ｐｐｍ（ｇｌｕのα−ＣＨおよび−ＯＣＨ２ＣＨ３）および２．４ｐｐｍ（ｇｌｕのＣＨ２）でのピーク面積は、約１：１であり、ここでポリグルタメートにおけるのと同様に、それらは各々、１：２である。）この物質を水に溶解し、そして遠心限外濾過によって精製して、２１６ｇの白色固体を得、この固体の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ＤＣＣ／ＤＵＣの存在を示した。また、Ｄ２Ｏ中の溶液へのＮａＯＤの添加は、ポリ（ｇｌｕ）−Ａｍａ−ｄｉＥｔ １ｇあたり０．６７ｍｍｏｌのＡｍａ−ｄｉＥｔ基に対応するＥｔＯＨを遊離する。さらに精製することなく、これを実施例１４において使用した。
【０１１７】
（実施例１４）
（ポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの調製）
（１．ポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＯ，Ｏ−キレートの調製）
攪拌子を含む２０ｍＬのバイアル中の４ｍＬの水に、実施例１３からの１８８ｍｇ（０．１２６ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ当量）のポリ（ｇｌｕ）−Ａｍａ−ｄｉＥｔを添加した。一旦溶解した後、ｐＨを１２．４〜１２．８に２０分間上昇させ、次いで０．２ｇのＡＧ−５０Ｗ−Ｘ８ Ｈ＋ ＩＸ樹脂を添加した。２分以内にｐＨが６に下がった。この樹脂を、粗ガラスフリットを通す濾過によって除去し、次いで濾液を滅菌濾過した。濾液のｐＨを、新しい２ＮのＮａＯＨで７．１に上昇させ、そして実施例２に従って調製した、１．３ｍＬの、シス−ジアンミンジアクア白金（ＩＩ）２ＮＯ３−の１９，０００ｐｐｍのＰｔ溶液（０．１２６ｍｍｏｌ）を添加した。これを３５分間攪拌し、次いで、上記のように遠心限外濾過によって精製した。１８ｍＬに濃縮し、そして各々１５ｍＬの水での３回の洗浄の後、この保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）を凍結乾燥して、１８２ｍｇの白色固体を得、この白色固体の１９５Ｐｔ ＮＭＲスペクトルは、各々、約１：４の比の２つのピーク、−１５９５ｐｐｍおよび−１７３２ｐｐｍを示した。−１７３２での主ピークは、シス−ジアンミン白金（ＩＩ）のＯ，Ｏ−アミドマロネートキレートである。この物質をさらに精製する試みにより、おそらくシス−ジアンミンＰｔによるグルタメートカルボキシレートの架橋に起因するゼラチン状塊を得、このため、この物質は、実施例４および関連する実施例のキレート転換条件に供された。
【０１１８】
（２．ポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２のＮ，Ｏ−キレートの調製）
上のポリ（グルタメート）−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−キレートを、１１０ｍＭのＮａＣｌ、８５ｍＭのリン酸塩、ｐＨ＝７．４にされたサンプルを用いて、実施例４のＯ，Ｏ−キレートからＮ，Ｏ−キレートへの転換条件に供した。３８℃で約２２時間の後、これを遠心限外濾過によって精製し、そして保持液を、凍結乾燥して、１６３ｍｇの白色固体を得、この固体は、１５．５％のＰｔ（０．７７ｍｍｏｌ Ｐｔ／ｇポリマー）、０．０３５％のＰを含んだ；１８６．９，１８３．６，１８２．８，１８２．１（ｐ−ｇｌｕ），１８０．０，１７５．３，１７４．２（ｐ−ｇｌｕ），１７３．６，１７２．５，１７１．０，１７０．７，１５５．７，７２．１，６３．６，６２．７，６０．４，２５．４，５４．２（ｐ−ｇｌｕ），５３．５，５１．６，３４．２（ｐ−ｇｌｕ），３２．１，３１．４，３０．８，２８．６（ｐ−ｇｌｕ），２６．０，２５．５，２５．０；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（９３／３ Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ）δ １５９５ （ｖ ｂｒ ｓ，２２％，（ＮＨ３）２Ｐｔ（ＲＣＯ２）および（ＲＣＯ２，Ｈ２Ｏおよび／またはＨＯ））および−２０５３（ｂｒ ｓ，７８％，アミドマロネートのＮ，Ｏ−キレート）。
【０１１９】
（実施例１５）
（ポリ（ｇｌｕ−ＡｍａｄｉＥｔ）の調製）
Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ（ＤａｎｉｓｈｅｆｓＩｋｙら、１９７１）の手順を適合して、ポリグルタメートの全てのカルボキシル基を置換した。０．５ｇ（３．２９ｍｍｏｌの−ＣＯ２Ｎａ基）のポリグルタメートおよび攪拌子を含むボトルに、１．３９ｇ（６．５８ｍｍｏｌ）のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、１．８９ｇ（９．８６２ｍｍｏｌ）のＥＤＣ、０．５０３ｇ（３．２８７ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔおよび２０〜２５ｍＬの無水ＤＭＦ（ＨＰＬＣグレード、４Ａシーブスで＞４８時間）をドライボックス中で添加し、そして攪拌して、濁った混合物を得た。周囲温度で一晩攪拌した後、この混合物を１５０ｍＬの水に注いで、白色固体の沈澱を得た。（４．３ｐｐｍ（ｇｌｕのα−ＣＨおよび−ＯＣＨ２ＣＨ３）および２．４ｐｐｍ（ｇｌｕのＣＨ２）でのピーク面積は、約１：１であり、ここでポリグルタメートにおけるのと同様に、それらは各々、１：２である。）この物質を、水に溶解し、濾過によって回収し、そして水で洗浄した。減圧下で３日間乾燥した後、０．７９ｇ（８４％）の固体物質を得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ ８．２５（ｖ ｂｒ ｓ，１，ＮＨ−ｇｌｕ），７．２４
（ｂｒ ｓ，１，ＮＨ−Ａｍａ），５．１６（ｄ，１，Ｊ＝５．７，ＣＨ−Ａｍａ），４．２２および４．１（ｍおよびｂｒ ｓ，ＯＣＨ２ＣＨ３およびＣＨ−ｇｌｙ）２．６５，２．３３，および２．１８（ｂｒ ｓ，４，ＣＨ２ＣＨ２−ｇｌｕ），ならびに１．２６（ｂｒ ｔ，６，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ １７５．９，１７１．９，１６６．５，６２．４，５６．８，５６．４，３２．５，２６．３，および１３．９。さらに精製することなく、これを実施例１６で使用した。
【０１２０】
（実施例１６）
（ポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートの調製）
０．７９ｇ（２．７５ｍｍｏｌのＡｍａ−ｄｉＥｔ基）のポリ（ｇｌｕＡｍａｄｉＥｔ）の、約３０ｍＬのＥｔＯＨスラリーを、新たな４０ｍＭ ＮａＯＨと合わせた。ｐＨを１２．３−１２．６に維持し、そして混合物を、加温し、そして３０分間超音波処理した。この混合物は多少濁っていた。ｐＨを、１．８ｇのＨ＋ ＩＸ樹脂を用いて、７．２６に減少させ、滅菌濾過して、かすかに黄色の溶液を得た。容積を、約３０ｍＬに減圧下で減少させ、４．２ｍＬの、シス−ジアンミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートの１８，４００ｐｐｍ Ｐｔ（０．３９ｍｍｏｌ）溶液を添加して、ｐＨ＝５．９７の溶液を得た。これを、５％ ＨＮＯ３を用いて５．０に減少させ、そして周囲温度で１時間攪拌した。
【０１２１】
（１．ポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートの単離）
１時間の攪拌後、ポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２反応混合物のサンプルを凍結乾燥して、９０ｍｇの白色固体を得、この固体の１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、６７％のみのエチルエステルが加水分解されたことを示した：１０．３％のＰｔ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ ５．９３（ｓ，０．１交換された，ＣＨ−ａｍａ），４．４−４．１（ｍ，３．４，ＣＨ−ｇｌｕ，ＯＣＨ２ＣＨ３、およびＮＨ３？），２．４６（ｂｒ ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２），２．０７（ｂｒ
ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２），および１．２５（ｂｒ ｑ，２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ １７５．１，１７５．０，１７４．８，１７４．５，１７３．８，１７１．１，１７１．０，１７０．８，１７０．５，６３．６，６０．７，６０．４，６０．０，５３．７，３１．９，２７．８，および１４．０；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ −１７３４（Ｏ，Ｏ−Ｐｔ，８６％）および−２０３４（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ，１４％）。
【０１２２】
（２．Ｏ，Ｏ−ＰｔキレートからＮ，Ｏ−Ｐｔキレートへの転換およびポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートの単離）
残り３２ｍＬのポリ（ｇｌｕ−Ａｍａ）＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート溶液を、２０７ｍｇのＮａＣｌ、７６ｍｇのＮａＨ２ＰＯ４ １Ｈ２Ｏ、および５８８ｍｇのＮａ２ＨＰＯ４ ７Ｈ２Ｏを添加することによって、１１０ｍＭ ＮａＣｌ、８５ｍＭリン酸塩にした。ｐＨを７．４に調節し、この溶液を滅菌濾過し、そして４２℃で１６時間インキュベートした。この溶液は、多少濁っていた。次いで、これを再濾過し、次いで遠心限外濾過によって精製した。保持液を凍結乾燥して、約６００ｍｇの明るい黄色の固体を得た：１１．４％のＰｔ，１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ ５．２（ｂｒ ｓ，０．１交換された，ＣＨ−ａｍａ），４．５９ （ｂｒ ｓ，０．２），４．４−４．１（ｍ，２．５，ＣＨ−ｇｌｕ，およびＯＣＨ２ＣＨ３）、４．００および３．８５（ｂｒ ｓ，０．２５），２．４７（ｂｒ ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２），２．０６（ｂｒ ｓ，２，ＣＨ２ＣＨ２）、および１．２５（ｂｒ ｑ，２，ＯＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ
ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ １７５．１，１７４．８，１７４．４，１７３．７，１７１．０，１７０．８，１７０．５，６３．５，６３．１，６２．７，５３．７，３２．２，３１．８，２７．９，１４．０；１９５Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ −１７３０（Ｏ，Ｏ−Ｐｔ，８％）および−２０５３（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ，９２％）。
【０１２３】
（実施例１７）
（Ｎ−アセトアミドマロネート＝Ｐｔ（ＮＨ３）２ Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートの調製）
２０ｍＬのバイアル中で、８００ｍｇ（３．６８ｍｍｏｌ）のＮ−アセトアミドマロネートを、８ｍＬの水および２．０ｍＬの２Ｎ ＮａＯＨとともに攪拌した。３分以内に、ｐＨ＝１２．６のかすかに黄色の溶液を得た。３０分後、Ｈ＋
ＩＸ樹脂を添加し、そしてｐＨを７．０に下げた。この樹脂を濾過によって除去し、ｐＨを７．５に上げ、そして２３．５ｍＬの、シス−ジアンミンジアクア白金（ＩＩ）ジニトレートの２８，３７５ｐｐｍのＰｔ（３．６３ｍｍｏｌ）溶液。ｐＨを４．４に下げた。２滴の２Ｎ ＮａＯＨの添加の際に、白色固体を形成した。この混合物を濾過し、そしてサンプルをＤ２Ｏにおいて１０％にし、そして１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって分析した。−１７３４のピークのみが明確であった。
【０１２４】
この濾液を、ＫＩが１００ｍＭ、そしてＫＨＣＯ３が５０ｍＭになるようにし、そして滅菌濾過した。そのｐＨは、７．７〜７．９であった。これを、４０℃で１８時間放置した。形成した橙色の沈澱を濾過によって除去し、そして濾液を減圧下でストリッピングした。残渣を、２０ｍＬのアセトンと共に、１時間攪拌した。一部分を濾過し、７％Ｄ２Ｏにし、そして１９５Ｐｔ ＮＭＲ分光法によって分析した。−２０５７ｐｐｍの１つのピークのみが明確であった。
【０１２５】
（実施例１８）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（４５ｋＤａおよび３５０ｋＤａ）の調製）
１．ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの調製
約２５ｇのＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐを、ＤＭＦ溶液中１．２当量のジエチルアミノマロネートＨＣｌ塩、３当量ＴＥＡ、１当量ＨＯＢｔで５０℃で約１６時間処理した。ＤＭＦを真空中で除去し、そして残渣をジエチルエーテルでスラリーとし、一晩４℃まで冷却した。生成物を濾過によって採集し、エーテルで洗浄し、そして真空中で乾燥し、ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを得た。この正体および純度を１Ｈ ＮＭＲスペクトル法およびＨＰＬＣによって確認した。１Ｈ
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．７４（ｄ，１，Ｊ＝７．３，ＮＨ−Ａｍａ），８．１４（ｔ，１，Ｊ＝５．９，ＣＨ２−ｇｌｙ），８．１１（ｄ，１，Ｊ＝８．２，αＣＨ ｌｅｕ），８．０３（ｔ，１，Ｊ＝８．２，ＣＨ２ｇｌｙ），８．０１（ｄ，１，Ｊ＝８．２，ＮＨ−ｐｈｅ），７．３−７．０（ｍ，５，ＡｒＨ），５．７０（ｓ，１， ＝ＣＨ２），５．３７（ｔ，１，Ｊ＝１．６， ＝ＣＨ２），５．０９（ｄ，１，Ｊ＝７．３，ＣＨ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ），４．５３（ｍ，１， ｐｈｅのαＣＨ），４．３２（ｍ，４，ＯＣＨ２ＣＨ３），３．９−３．７（ｍ，３，ＣＨ２−ｇｌｙ）．３．６３および３．５９（ｄｄ，１，Ｊ＝１６，３，５．８），３．１−３．０および２．８３−２．７３（ｍ，２，ＣＨ２−ｐｈｅ），２．５１，（ｍ，３，Ｊ＝１．７，ＣＨ３−Ｃ＝ＣＨ２），１．５９（ｍ，１，Ｊ＝６．５，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２，１．４９（ｔ，２，Ｊ＝７．５，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），１．２１６および１．２１４（２ ｔ，６，Ｊ＝７．２，ＯＣＨ２ＣＨ３），０．８８（ｄ，３，Ｊ＝６．６，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２），および０．８４（ｄ，３，Ｊ＝６．５，ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）。
【０１２６】
２．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（約４５ｋＤ）の調製
コンデンサを伴う容器に、１２．７ｗｔ％のＨＰＭＡモノマーおよびＭＡ−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔモノマー（９０／１０比）のそれぞれ、０．６ｗｔ％純粋ＡＩＢＮ、１０ｍｏｌ％ ｐ−ニトロフェノール（全モノマーのうち）、および８６ｗｔ％アセトンを加えた。混合物を、窒素バブルを用いて３０分以上の間脱気し、次いで５０℃で６５時間加熱した。固体生成物ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔを濾過によって採集し、そしてエーテルで洗浄した。これを約２５％ｗｔ／ｖｏｌのａｂｓ．ＥｔＯＨ中で再溶解し、次いで８容量のＥｔＯＡｃで沈殿させた。得られた固体を濾過によって採集し、エーテルで洗浄し、そして真空中で乾燥し、約２０ｇのオフホワイト色の粉末を得た。これの１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、２５ｋＤａ型と非常に類似していた。Ｍｗ＝４４．５ｋＤａ、ＰＤＩ＝１．７６、バイモーダル（ｎｉｍｏｄａｌ）。アミノ酸分析：（１１ｍｏｌ／ｍｇポリマー）２．７：８．１：０．９：０．９のｇｌｙ：２−ヒドロキシプロピルアミン：ｌｅｕ：ｐｈｅ（それぞれ）；ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（ＮＢＡマトリックス） ｍ／ｚ Ｍ＋４０−４５ｋＤａ、Ｍ＋２ １４−１６ｋＤａ。
【０１２７】
（３．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（約３５０ｋＤ）の調製）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔの４５ｋＤバッチの手順を、ｐ−ニトロフェノールを省いたことを除いて繰り返した。約２５ｇの白色粉末が得られた。これの１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ピークはより広いものであったが、２５ｋＤａ型と非常に類似していた。Ｍｗ＝３５１ｋＤａ、ＰＤＩ＝３．９５、トリモーダル（ｔｒｉｍｏｄａｌ）。
【０１２８】
（実施例１９）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２、Ｎ，Ｏ−キレート ４５ｋＤａの調製）
攪拌子を含む２５０媒体ボトルに、７２ｍＬの水および１５．５ｇ（６．８２ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ基）のポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔをそれぞれ添加した。力強い攪拌が確立されると、４８ｍＬの水をさらに添加し、そして混合物を約１時間攪拌し、淡紫色の溶液を得た。この溶液に１２ｍＬの新鮮な２Ｍ ＮａＯＨを添加し、そしてｐＨは１２．６に上昇した。ｐＨを３０分間１２．４〜１２．８に維持し、次いで１５．４ｇの混合床ＩＸ樹脂（ＡＧ ５０１−Ｘ８（Ｄ）、Ｈ＋形態、−ＯＨ形態）を添加した。３分後、ｐＨは５．０に低下し、この樹脂を滅菌Ｓｔｅｒｉｔｏｐ １５０ｍＬフィルタによる濾過によって除去した。濾液のｐＨを新鮮な２Ｎ ＮａＯＨで７．６０にまで上げ、そして８．１４ｍｍｏｌ（６４ｍＬ、２４，２００ｐｐｍ Ｐｔ）の新たに調製したジアミン−ジアクア白金（ＩＩ）溶液を１つ分添加した。添加後、ｐＨは５．１であり、そして一晩攪拌した。その後、ｐＨは、４．４２であり、そして５．１０ｇ Ｃｈｅｌｅｘ １００樹脂を添加した。ｐＨは５．３３に上昇し、そして混合物を９０分間攪拌した。樹脂を粗ガラスフリットによる濾過によって除去し、４６０ｍＬの溶液を得た。濾液を、２．９６ｇ ＮａＣｌ、１．０８ｇ ＮａＨ２ＰＯ４ Ｈ２Ｏ、および７．６６ｇ Ｎａ２ＨＰＯ４ ７Ｈ２Ｏの添加により、ＮａＣｌ中１１０ｍＭ、ホスフェート中８０ｍＭとした。２Ｎ ＮａＯＨおよび５％ ＨＮＯ３を用いてｐＨを７．４に調整し、次いでＳｔｅｒｉｔｏｐフィルタを通して滅菌した媒体ボトルに滅菌濾過し、生物学的安全フード内でメンブレンキャップをかぶせた。これを３９℃湯浴中に２０分間置き、次いでインキュベータオーブン中に３７〜３８℃で置いた。
【０１２９】
３７〜３８℃で２２時間後、溶液をＴＦＦによって精製した。この溶液を５％ｗｔ／ｖｏｌに濃縮し、７容量の透過液を採集し、次いでこの透過液がわずかに色づいたときに保持液を８〜１０％に濃縮した。保持液を、Ｍｉｌｌｉｐａｋ ２０フィルタを通して滅菌した凍結乾燥フラスコに滅菌濾過した。凍結乾燥後、１１．２ｇ（６６％）のオフホワイト色の固体を得た：８．８９％ Ｐｔ、５．４％ Ｈ２Ｏ、１．０３％ Ｎａ、０．０５％ Ｃｌ、＜０．０５％ Ｐ；１Ｈ
ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．２３（ｂｒ ｓ，部分交換，ＡｍａのＣＨ），４．６６（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３７（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ， ｇｌｙのＮＨ３またはＣＨ２），４．１−３．８（高いｓおよび短いｍ，〜１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｍ，１８，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，ポリマーバックボーンの−ＣＨ２−，ｌｅｕのＣＨ２およびＣＨ），１．２０および１．１９（ｓ，〜２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ポリマーバックボーンのＣＨ３），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８６．７，７１．０，および他のピークは全て実施例４について報告のとおり；１９６Ｐｔ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ−２０５５（１００％）。
【０１３０】
（実施例２０）
（ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２， Ｎ，Ｏ−キレート ＞３５１ｋＤａの調製）
攪拌子を備えた５００ｍＬ媒体ボトルに、１２０ｍＬ水および２０ｇ（８．８０ｍｍｏｌ Ａｍａ−ｄｉＥｔ）ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ−ｄｉＥｔ（３５１ｋＤａ）をそれぞれ添加した。力強い攪拌が確立されると、１００ｍＬの水を添加し、そして全てのポリマーが溶解したときに混合物を２時間攪拌し、無色の溶液を得た。ｐＨ電極を挿入し、そして１４ｍＬの新鮮な２Ｎ ＮａＯＨを添加した。ｐＨは１２．７４に上昇し、これを３０分間１２．４〜１２．８の間に保持した。その後、１９．９ｇの混合床（Ｈ＋形態、−ＯＨ形態）ＩＸ樹脂（ＡＧ５０１−Ｘ８（Ｄ））を添加し、そして３分以内に、ｐＨは６に低下した。この混合物をＳｔｅｒｉｔｏｐボトルトップフィルタを通して滅菌濾過し、そしてそのｐＨを２Ｎ ＮａＯＨおよび５％ＨＮＯ３で７．６３に調整した。１つ分において、８５．５ｍＬの新たに調製したジアミンジアクア白金（ＩＩ）溶液の２４，２００ｐｐｍ Ｐｔ溶液（１０．６ｍｍｏｌ）を添加し、５．０２のｐＨを得た。この溶液は、粒子の大きさに起因してわずかに曇っているようであった。これを室温で一晩攪拌した。この間にｐＨは、４．２５に低下し、そして６．７７ｇ Ｃｈｅｌｅｘ １００樹脂を添加した。ｐＨは５．３３に上昇し、そして９０分の攪拌後、０．２ｇのフィルタ補助パルプを添加した。混合物を粗ガラスフリットを通して滅菌濾過した。この溶液７２５ｍＬを、４．６６１ｇ（７９．８ｍｍｏｌ）ＮａＣｌ、１２．２４ｇ（４５．７ｍｍｏｌ）Ｎａ２ＨＰＯ４ １２Ｈ２Ｏ、１．７０３ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）ＮａＨ２ＰＯ４ １Ｈ２Ｏのそれぞれの添加により、ＮａＣｌ中１１０ｍＭおよびホスフェート中８５ｍＭとした。ｐＨを７．４に調整し、次いでＳｔｅｒｉｔｏｐフィルタを通して１Ｌ媒体ボトルに通過させた。このボトルをメンブレンキャップで封鎖し、そして湯浴中に４０℃で２０分間置き、次いでインキュベータオーブン中に３７〜３８℃で置いた。約２２時間後、内容物を上記のようにＴＦＦによる精製に供した。ＮＭＲ分光法を約５０ｍｇで実施した。これは、より濃縮した溶液では粘性でありすぎたからである。保持液の凍結乾燥により、１９．９ｇの白色固体を得た：７．９５％Ｐｔ，７．０％Ｈ２Ｏ，１．０３％Ｎａ，０．０９％Ｃｌ，＜０．０５％Ｐ；１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ７．４および７．３（ｂｒ ｓ，５，ＡｒＨ），５．２３（ｂｒ ｓ，部分交換，ＡｍａのＣＨ），４．６５（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｐｈｅ），４．３８（ｂｒ ｓ，１，α−Ｈ−ｌｅｕ），４．０５（ｓｈ， ｇｌｙのＮＨ３またはＣＨ２），４．１−３．８（高いｓおよび短いｍ，〜１３，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３，−ＮＨＣＨ２ＣＯ２−）３．３５−２．９（ｍ，１８，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３およびｐｈｅ−ＣＨ２），２．２５−１．２（ｍ，ポリマーバックボーンの−ＣＨ２−，ｌｅｕのＣＨ２およびＣＨ），１．２０および１．１９（ｓ，〜２７，−ＮＨＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３），０．９９（ｓ，ポリマーバックボーンのＣＨ３），０．９３および０．８７（ｓｈおよびｓ，６，ｌｅｕ−ＣＨ３）；１３Ｃ ＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ１８６．７，７１．０，および他のピークは全て実施例４について報告のとおり；１９６ＰｔＮＭＲ（Ｈ２Ｏ／Ｄ２Ｏ ９３／７）δ−２０５５（１００％）．；ＳＥＣトリモーダル，Ｍｐ＝４６８ｋＤａ，１４７ｋＤａ Ｍｎ＝６６．３ｋＤａ，ＰＤＩ＝１３．８；Ｐｔ放出：０．６８％（３ｈ）、２．２８％（２４ｈ）。
【０１３１】
（実施例２１）
（Ｏ，Ｏ−キレートおよびＮ，Ｏ−キレートのインビトロ活性）
組織培養物における活性の特徴づけ。種々のＯ，Ｏ−Ｐｔキレートアナログの相対的細胞傷害性活性を、Ｂ１６Ｆ１０メラノーマ細胞の組織培養物を用いるクロノジェニック（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ）（コロニー形成）アッセイによってインビトロで評価した。このようにして、アナログの活性をシスプラチンおよびカルボプラチン（活性のある従来の白金剤）の活性と比較した。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートへの変換の効果もまた評価した。簡潔に述べると、細胞を培養皿に播種し、そして付着させた。この培養物を、所望の濃度の試験剤を含有する培地中で７日間インキュベートした。固定後、５０より多い細胞を含む細胞塊の数をコロニーとして記録した。各濃度の試験剤を三連でアッセイした。三連の皿のにおけるコロニーの平均数を、コントロール（試験剤なし）の皿におけるコロニーの平均数で割り、各濃度の試験剤について生存値％を得た。試験剤の各々のＩＣ５０（増殖の５０％阻害を生じる濃度）を、５０％生存点をすぐ上回るおよび下回るデータ値を用いて、直線回帰分析を行うことによって決定した。
【０１３２】
（表３．アミドマロネートのＯ，Ｏ−ＰｔキレートおよびＮ，Ｏ−Ｐｔキレートについてのクロノジェニックアッセイからの細胞傷害性結果）
【０１３３】
【表３】
（実施例２２）
（寛容化および最大耐用量研究）
ＡＰ５２８０（すなわちポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＫＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２）のＮ，Ｏ−Ｐｔキレート形態に対してＯ，Ｏ−Ｐｔキレート形態を比較する単回用量ＩＶ研究は、マウスにおける最大耐用量（ＭＴＤ）がそれぞれ、Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートについては８０〜１００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇ、Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートについては４００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇであることを示し、これは、安全性領域の増大がポリマー結合Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートにより与えられることを示す。これらの研究のために、ＭＴＤを、マウスの死亡が薬物誘導傷害性から生じなかった、評価した最も高い用量であると定義した。
【０１３４】
両キレートの多回用量の寛容（いずれかのキレートを毎日５用量与えたＢ１６メラノーマ腫瘍を有する１０匹のマウスの群の最大平均体重損失によって表される）を、表１に示す。これらのデータはまた、Ｎ，Ｏ−ＰｔキレートがＯ，Ｏ−Ｐｔキレートの等価用量（１７．５ｍｇＰｔ／ｋｇ）で傷害性がないこと、および等価の平均重量損失を生じるためには、Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートは、実質的により高い用量（＞２４０ｍｇＰｔ／ｋｇ）が必要であることを示す。
【０１３５】
（表４．ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−およびＮ，Ｏ−Ｐｔキレート、２５ｋＤａの毎日５回投与について体重減少平均パーセントとして表されるＡＰ５２８０の寛容化）
【０１３６】
【表４】
（実施例２３）
（ｓ．ｃ．Ｂ１６メラノーマモデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ）対シスプラチンおよび生理食塩水コントロールの腫瘍増殖阻害を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびシスプラチンをそれぞれ１７．５ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇで、ｑｄ×５のスケジュールで投与した。このＮ，Ｏ−キレート用量は、そのＭＴＤを十分に下回る。一方、シスプラチン用量は、そのＭＴＤの近傍である。処置群当たり１０匹の動物に対し、１０６のＢ１６Ｆ１０マウスメラノーマ細胞を右側の背部の横腹にｓ．ｃ．接種した。移植後６日目を始めとして、毎日、腫瘍の大きさを軽いメトフラン（Ｍｅｔｈｆｕｒａｎｅ）麻酔下でカリパスによって測定した。生じた腫瘍の重さ（ｍｇ）を、式（Ｗ２×Ｌ）／２（ここで、Ｗは、短い方の腫瘍寸法の長さであり、そしてＬは、長い方の寸法の長さである（ｍｍ））によって概算した。腫瘍が５０ｍｇより大きな大きさであったとき、各動物において処置を開始した。各研究動物は個々に従い、各動物についての処置の１日目は、腫瘍の大きさが投与の開始を示した日に対応した。全ての試験化合物を、尾静脈を介してＩＶ投与し、そして体重２０ｇ当たり０．２〜０．３ｍＬの容量で投与した。投与容量を確立するために投与前に毎日、およびその後研究の終了まで毎日、動物を観察し、そしてその体重を量った。結果を図１２に示す。
【０１３７】
（実施例２４）
（ｓ．ｃ．Ｂ１６メラノーマモデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｏ，Ｏ−Ｐｔ）対シスプラチンおよび生理食塩水コントロールの腫瘍増殖阻害を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。Ｏ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびシスプラチンをそれぞれ１７．５ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇで、ｑｄ×５のスケジュールで投与した。このＯ，Ｏ−キレート用量は、シスプラチン用量と同様に、そのＭＴＤの近傍である。本研究を実施例２３に記載のとおり実施した。結果を図１３に示す。
【０１３８】
（実施例２５）
（ｓ．ｃ．Ｂ１６メラノーマモデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ）対カルボプラチンおよび生理食塩水コントロールの腫瘍増殖阻害を、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびカルボプラチンをそれぞれ２００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび６５ｍｇ／ｋｇで、ｑｄ×５のスケジュールで投与した。このＮ，Ｏ−キレート用量は、カルボプラチン用量と同様に、そのＭＴＤの近傍である。それ以外には、本研究を実施例２３に記載のとおり実施した。結果を図１４に示す。
【０１３９】
（実施例２６）
（ｓ．ｃ．扁平上皮細胞異種移植モデルにおける腫瘍増殖阻害：Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート）
ポリ（ＨＰＭＡ）−ＧＦＬＧ−Ａｍａ＝Ｐｔ（ＮＨ３）２，Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレート，２５ｋＤａ（Ｎ，Ｏ−Ｐｔ）対カルボプラチンおよびビヒクルコントロール（等張グルコース）の腫瘍増殖阻害を、処置群当たり７匹のＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスの群において評価した。ヒト扁平上皮腫瘍細胞（ＵＭＳＣＣ１０ｂ）を４つの部位（左側および右側の肩ならびに左側および右側の横腹）に移植した（１部位当たり１０６細胞）。Ｎ，Ｏ−Ｐｔキレートおよびカルボプラチンをそれぞれ４００ｍｇ Ｐｔ／ｋｇおよび６５ｍｇ／ｋｇで単回ＩＰ注射として投与した。このＮ，Ｏ−キレート用量は、カルボプラチン用量と同様に、そのＭＴＤの近傍である。腫瘍が５０ｍｇの群平均に達したとき、全てのマウスに試験レジメを行った。結果を図１５に示す。
【０１４０】
本明細書中に記載の種々の成分、要素、および組み合わせの構築および操作において、または本明細書中に記載の方法の工程もしくは工程の順序においては、上記の特許請求の範囲において定義されるような本発明の精神および範囲を逸脱することなく、変更がなされ得る。
【０１４１】
以下の引用文献を、本願を補足する詳細のために、本明細書中に参考として援用する。
【０１４２】
【表５】
【０１４３】
【表６】
【０１４４】
【表７】
【０１４５】
【表８】
【０１４６】
【表９】
【０１４７】
【表１０】
【０１４８】
【表１１】
【０１４９】
【表１２】
【０１５０】
【表１３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書に記載された発明。
【請求項１】
本願明細書に記載された発明。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公開番号】特開２０１１−１３７０４６（Ｐ２０１１−１３７０４６Ａ）
【公開日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１１−８６８４４（Ｐ２０１１−８６８４４）
【出願日】平成２３年４月８日（２０１１．４．８）
【分割の表示】特願２００１−５５０２３６（Ｐ２００１−５５０２３６）の分割
【原出願日】平成１３年１月４日（２００１．１．４）
【出願人】（５０１４９１０４４）アクセス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−８６８４４（Ｐ２０１１−８６８４４）
【出願日】平成２３年４月８日（２０１１．４．８）
【分割の表示】特願２００１−５５０２３６（Ｐ２００１−５５０２３６）の分割
【原出願日】平成１３年１月４日（２００１．１．４）
【出願人】（５０１４９１０４４）アクセス ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
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