ＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病の予防または治療のための組成物
本発明は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含む医薬組成物に関し、式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、Ｒ7は直鎖、分岐鎖、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアル
キル、アルケンまたはアルキン基であり、Ｒ4は、水素原子であるか、またはモノ、ジ、
トリ、テトラ、およびペンタ−マンノシルから成る群から選択されたＲ6基によって６位
で置換されたマンノシル基である。また、本発明は、対象におけるＴＮＦおよび／またはＩＬ−１２の過剰発現に関連する疾病の予防または治療のための薬物を製造するための同組成物の使用方法にも関する。
キル、アルケンまたはアルキン基であり、Ｒ4は、水素原子であるか、またはモノ、ジ、
トリ、テトラ、およびペンタ−マンノシルから成る群から選択されたＲ6基によって６位
で置換されたマンノシル基である。また、本発明は、対象におけるＴＮＦおよび／またはＩＬ−１２の過剰発現に関連する疾病の予防または治療のための薬物を製造するための同組成物の使用方法にも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象におけるＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病の予防または治療の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチまたはクローン病等の炎症性疾患の発生率が、先進国で、特に欧州諸国で絶えず増加している。これらの病気については、ＴＮＦおよびＩＬ−１２が重要なエフェクターを構成している。
【０００３】
インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は、固有の構造と多面的作用サイトカインである（非特許文献１〜４）。ＩＬ−１２は、活性型ヘテロ二量体または阻害型ｐ４０ホモ二量体を形成する２つのサブユニット（ｐ４０とｐ３５）から成る。ＩＬ−１２は、マクロファージと単球によって主に生産され、本質的にこの後に、特に微生物、細胞内寄生体、細菌または細菌産物の製品である内因性か外因性かを問わない種々の起源の活性化を伴う。機能的研究により、ＩＬ−１２がＮＫ（ナチュラルキラー）細胞とマクロファージの細胞溶解活性を刺激することが示された。最後に、ＩＬ−１２はＴｈ１型Ｔ細胞の分化における中心的役割を果たし、ＩＦＮ−γの生産を誘導する。
【０００４】
ＴＦＮαは、エンドトキシンまたは他の刺激に応答して単球とマクロファージにより分泌されるサイトカインである。ＴＮＦαは可溶性ホモ三量体に相当し、このタンパク質サブユニットは１７ｋＤａである（非特許文献５）。ＴＮＦの論評については、ＢＥＵＴＬＥＲら（非特許文献６）、ＯＬＤ（非特許文献７）、およびＬＥら（非特許文献８）を参照されたい。しかしながら、単球とマクロファージ以外の細胞はＴＮＦを生産する傾向がある。例として、非単球ヒト細胞株はＴＮＦを生産する（非特許文献９および非特許文献１０参照）。
【０００５】
ＴＮＦは、内皮血管細胞における凝固促進活性の誘発（非特許文献１１）、好中球およびリンパ球の接着の増加（非特許文献１２）、およびマクロファージ、好中球および内皮血管細胞による血小板活性化因子の放出刺激（非特許文献１３）等の組織損傷を生じさせる炎症性応答を引き起こす。
【０００６】
慢性関節リウマチ、クローン病、乾癬等の様々な炎症性疾患を治療するために、種々の「抗ＴＮＦ」治療が開発されており（非特許文献１４）、このような治療を用いて既に治療された世界における患者数は１００万人に達し、主として欧州諸国とアメリカでなされている。これらの治療の大多数は、特許文献１に記載されたようなＴＮＦに対する抗体を使用する。ＴＮＦに対する抗体であって治療に使用されるものの例としては、ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（ＡＢＯＴＴ社）、ＣＤＰ−８７０（ＵＣＢ Ｐｈａｒｍａ社）、ＡＦＥＬＩＭＯＭＡＢ（登録商標）（ＫＮＯＬＬ Ｇｍｂｈ社）、Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（登録商標）（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）およびＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（Ｓｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ社）を挙げることができる。
【０００７】
しかしながら、これらの種々の治療は、結核および日和見感染を発達させる傾向が増大する等の、不都合な作用を有することが明らかとなっている（非特許文献１５）。抗ＴＮＦ療法で治療された患者についての何千もの事例が報告されているが（非特許文献１６）、この大多数は診断が困難な非定型の結核であり、散在性および肺外結核に相当し、恐らく潜在性慢性完成症の差違活性化に関連する（非特許文献１７）。したがって、抗ＴＮＦ
で治療された患者の１〜２％以下は結核に罹りやすいが、抗ＴＮＦ療法のコストが低減しているために、罹患患者数が増加する可能性がある。大多数のこれらの感染症は潜在性感染症再活性化に相当し、事例の約３０％が第一感染に相当する。最後に、結核感染の先例を有する患者に対するかかる抗ＴＮＦ療法は、約９ヶ月の抗生物質治療を必要とする（非特許文献１８）。
【０００８】
ＩＬ−１２に対する治療は開発の初期段階であり、特に、ＩＬ−１２に対する抗体が特許文献２に記載され、ＩＬ−１２の発現を阻害する特異的ヒアルロン酸が特許文献３に記載されている。
【０００９】
ＴＮＦおよび／またはＩＬ−１２の過剰発現に関連する炎症性疾患および他の病気の新規な治療法を開発する必要性が未だ存在する。
ホスファチジル−ミオ−イノシトールマンノシド（ＰＩＭ）は、ミコバクテリウム壁の一部を形成することが知られている低分子量（約２５００）の分子である。ミコバクテリウム壁はリポアラビノマンナン（ＬＡＭ）とリポマンナン（ＬＭ；図１参照）も含んでいる。ＰＩＭは、一般に１〜４個のアシル化鎖と、グリセロリン酸ミオイノシトール基と、１〜６個のマンノシル化基とを有し、合成することも可能である。従来技術から、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓのような成長が早くて非病原性の種のいくつかのＬＡＭ（ＰＩＬＡＭ）が、ＴＮＦおよびＩＬ−１２の生産を刺激する炎症性分子であることが分かっている（非特許文献１９）。このように、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化するＴＬＲ２依存経路によりＰＩＬＡＭがマクロファージを活性化することが実証されている（非特許文献２０）。同様に、ＬＭの炎症活性も、特にウシ結核菌ＢＣＧにて明らかとなっている（非特許文献２１）。この炎症活性は、ＴＬＲ２受容体およびＭｙＤ８８アダプタタンパク質によるマクロファージと炎症性サイトカインの活性化によって生じる（非特許文献２１）。徹底的な精製によりＬＭのモノ−、ジ−、トリ−、およびテトラ−アシル化型とウシ結核菌ＢＣＧを分離した後、トリ−およびテトラ−アシル化ＬＭはＴＬＲ依存的炎症活性を示すことを実証することが可能である（非特許文献２２）。したがって、ミコバクテリウムのＬＭアシル化プロファイルは、宿主の炎症反応を制御する追加の手段を表わす。
【００１０】
ホスファチジル−ミオ−イノシトールジマンノシド（ＰＩＭ2）およびヘキサマンノシ
ド（ＰＩＭ6）は、ウシ結核菌ＢＣＧおよびヒト結核菌Ｈ３７Ｒｖｎにおける２つの最も
量が豊富なＰＩＭのクラスである。ＰＩＭ1、ＰＩＭ3、ＰＩＭ4およびＰＩＭ5の限られた量で観察されるが、これはそれらが生合成の中間体に相当することを示唆している。ＰＩＭは、特定の位置でマンノース基を逐次付加することにより、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）から合成される。最初の３つのユニットα−Ｍａｎｐに加え、マンノシルトランスフェラーゼをコードする３つの遺伝子が現在知られている。開始ステップは、酵素ｐｉｍＡ（非特許文献２３）による触媒作用であり、これはＰＩのミオイノシトールの２位にα−Ｍａｎｐ基を転移してＰＩＭ1を生成することから成るが、ＰＩのミオイノシトー
ルの６位への第２のα−Ｍａｎｐ基の付加は酵素ｐｉｍＢ（非特許文献２４）によって触媒される。次に、触媒ｐｉｍＣ（非特許文献２５）により、イノシトールに６位で結合されたα−Ｍａｎｐユニットに対して第３のα−Ｍａｎｐ基を付加することで、伸長が起こり、ＰＩＭ3が得られる。種々のＰＩＭの構造を決定することが可能である（非特許文献
２６〜２８）。ＰＩＭに関する研究により、ＰＩＭの種々のアシル化型のキャラクタライズも可能となった（非特許文献２７）。最後に、ＰＩＭ2とＰＩＭ6の完全な合成が最近実現された（非特許文献２９および３０）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第５，６９８，１９５号
【特許文献２】ＰＣＴ国際出願国際公開第９８／１６２４８号
【特許文献３】米国特許出願出願公開第２００４／０９７４６５号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Kobayashi et al., J. Exp. Med., vol.170, p:827-845., 1989
【非特許文献２】SEDER et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.90, p:10188-10192, 1993
【非特許文献３】LING et al., J. Immunol., vol.154, p:116-127, 1995
【非特許文献４】Podlaski et al., Arch. Biochem. Biophys., vol.294, p:230-237, 1995
【非特許文献５】SMITH et al., J. Biol. Chem., vol.294, p: 6951-6954, 1987
【非特許文献６】Nature, vol.320, p: 584, 1986
【非特許文献７】Science, vol.230, p: 630, 1986
【非特許文献８】Lab. Invest., vol.56, p:234
【非特許文献９】RUBIN et al., J. Exp. Med., vol.164, p: 1350, 1986
【非特許文献１０】Spriggs et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.84, p: 6563, 1987
【非特許文献１１】POBER et al., J. Immunol., vol. 136, p: 1680, 1986
【非特許文献１２】POBER et al., J. Immunol., vol. 138, p: 3319, 1987
【非特許文献１３】Camussi et al., J. Exp. Med., vol.166, p:1390, 1987
【非特許文献１４】SCHREIBER et al., 2001
【非特許文献１５】MOHAN et al., Curr. Opin. Rheumatol., vol.15, p: 179-184, 2003
【非特許文献１６】ASKLING et al., Arthritis Rheum, vol. 52, p: 1986-1992, 2005
【非特許文献１７】MOHAN et al., Clin. Infect. Dis., vol.39, p: 295-299, 2004
【非特許文献１８】KEANE, Rheumatology, placeCityOxford. 2005
【非特許文献１９】Chatterjee, Infect Immun, 1992; Gilleron, J. Biol. Chem., 1997
【非特許文献２０】MEANS et al., J. Immunol., vol.163, p: 3920-3927, 1999
【非特許文献２１】Quesniaux, J. Immunol., 2004; Vignal, J. Immunol., 2003
【非特許文献２２】GILLERON et al., Chem. Biol., vol.13, p:39-47, 2006
【非特許文献２３】KORDULAKOVA et al., J. Biol. Chem. 2002
【非特許文献２４】SCHAEFFER et al., J. Biol. Chem., vol.274, p: 31625-31631, 1999
【非特許文献２５】KREMER et al., Biochem. J., vol. 363, p: 437-447, 2002
【非特許文献２６】GILLERON et al., 1999
【非特許文献２７】GILLERON et al., 2001
【非特許文献２８】GILLERON et al., 2003
【非特許文献２９】STADELMAIER et al., Carbohydr. Res., vol.338, p: 2557-69, 2003
【非特許文献３０】LIU et al., J. Am. Chem. Soc., vol.128, p: 3638-48, 2006
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
驚いたことに、また予期せずして、発明者らは、ＰＩＭ2とＰＩＭ6のいくつかのアシル化型が炎症性サイトカイン応答の誘発を阻害することを示した。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、本発明の第１の目的は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物
【００１５】
【化１】
【００１６】
または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含む医薬組成物から成る。
式中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7は直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子であるか、または水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5は水素原子と、モノ、ジ、トリ、テトラまたはペンタ−マンノシルとから選択され
る。
【００１７】
有利には、１または複数のマンノシル基はα−マンノシル基である。好ましくは、Ｒ5
基は、水素原子、モノ−マンノシルおよびペンタ−マンノシルから成る群から選択される。
【００１８】
有利には、Ｒ7基は直鎖アルキル基である。好ましくは、Ｒ7は１１〜２１個の炭素原子、特に好ましくは１３〜１９個の炭素原子を有する。
式（Ｉ）の化合物は、実施例に記載したようにミコバクテリウムからＰＩＭを精製することにより、または非特許文献２９および３０に記載されたプロトコルに従う化学合成により、当業者に容易に得ることが可能である。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物の医薬として許容される塩は、限定されず、例えばアルカリ金属塩（ナトリウム、リチウム、カリウム等の塩）等の無機塩基塩、アンモニウム塩、およびジエチルアミン、シクロヘキサミンおよびアミノ酸塩等の有機塩基塩が含まれる。
【００２０】
好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、
式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3基のうちの１つがＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖、ま
たは環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であると共に、他の２つの基が水素原子であり、
Ｒ4が水素原子であり、
Ｒ5が水素原子である。
【００２１】
好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、
式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はマンノシルであり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの１つの基がＲ7−ＣＯ−基であり、他の３つの基が
水素原子である。
【００２２】
第３の好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、
式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はペンタ−マンノシルであり、
Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの少なくとも２つの基は、Ｒ7−ＣＯ−基に相当す
る。
【００２３】
有利には、Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの２つ、３または４つがＲ7−ＣＯ−基
に相当する。
本発明の組成物では、式（Ｉ）の化合物を、溶媒、ＤＭＳＯ、水または緩衝液への溶解またはエマルジョンおよびマイクロエマルジョンへの組み込み等の、周知の方法により調剤することが可能である。
【００２４】
また、本発明の組成物は、安定剤、乳化剤、等張化剤、防腐剤、着色剤、賦形剤、結合剤および潤滑剤のような、医薬の分野で周知の成分を含んでもよい。
本発明の第２の目的は、対象におけるＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病の予防または治療のための薬物を製造するための上記組成物の使用方法から成る。
【００２５】
「対象」とは、哺乳動物、好ましくはヒトを意味する。
「ＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病」とは、以下の疾病を意味する：
Ａ）免疫または自己免疫疾患、例えばリウマチ性多発性関節炎、移植片拒絶、糖尿病、散在性紅斑性狼瘡、バセドー病、
Ｂ）感染症、特に細菌、ウイルスおよび寄生源の少なくとも一つの慢性または急性感染に起因するショック、
Ｃ）炎症性疾患、例えば慢性炎症性疾患（サーコイドーシス、炎症性腹部疾患、慢性関節リウマチ、出血性直腸結腸炎、クローン病）および血管炎症性疾患（脱繊維素症候群、関節硬化症、川崎病）、
Ｄ）神経変性疾患、例えば脱髄疾患（多発性硬化症および急性横断性脊髄炎）、錐体外路および小脳の疾患（皮質脊髄系の病変および脳幹神経節障害）、
Ｅ）ＴＮＦ分泌腫瘍またはＴＮＦに関する悪性病変、例えば白血病（急性、骨髄性、リンパ球性、または慢性骨髄異形成性）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫）、または悪性種（バーキット腫）、および
Ｆ）アルコール性肝炎。
【００２６】
前記薬物は、好ましくは、対象の炎症性疾患の予防または治療を目的とする。
前記薬物は、注射（静脈内、筋肉内、皮下、皮内等）、経鼻、経口、経皮投与により、または吸入により投与することができる。投与態様によれば、前記薬物は、溶液、乳剤、丸剤、粉剤、軟膏、ローション、ゲル、坐薬または噴霧剤の形で調製可能である。
【００２７】
前記薬物では、化合物（Ｉ）または医薬として許容される同化合物の塩の濃度は限定されず、好ましくは０．１％から１００％（ｐ／ｐ）の間、特に好ましくは０．５％から２０％の間にある。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ヒト結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のエンベロープの模式図。
【図２】ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによる野生型マウスマクロファージの刺激によるＴＮＦ−αの合成の阻害を示すグラフ。
【図３】種々のＰＩＭ分画の存在下で同じマクロファージに対してＭＴＴ細胞毒性試験の結果を示すグラフ。
【図４】ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＴＬＲ2欠損マウスマクロファージの刺激によるＴＮＦ−αの合成の阻害を示すグラフ。
【図５】ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＳＩＧＮ−Ｒ１欠損マウスマクロファージの刺激によるＴＮＦ−αの合成の阻害を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
以下の実施例は本発明を例証するものであって、非限定的な例として与えられる。
実施例
１）ホスファチジル−ミオ−イノシトールジ−（ＰＩＭ2）およびヘキサ−（ＰＩＭ6）−マンノシドの種々のアシル化型の精製
ＰＩＭが豊富な脂質抽出物を、ミコバクテリウムの糖脂質の精製により得た。ウシ結核菌ＢＣＧは、VERCELLONE et al.（J. Biol. Chem., vol. 264, p: 7447-7454, 1989)およびGILLERON et al. J. Biol. Chem., vol.276, p: 34896-34904, 2001)に記載されたプロトコルにより得た。
【００３０】
アセトンに不溶なリン脂質を含む脂質抽出物を、中性の化合物を溶出するためにクロロホルム、クロロホルム／メタノール（１：１，ｖ／ｖ）、及びメタノールの溶液で予め平衡化しておいたＱＭＡ−ＳＰＨＥＲＯＳＩＬ Ｍ（ＢＩＯＳＥＰＲＡ Ｓ．Ａ．社）のカラムにかけた。その後、酢酸アンモニウムを含む有機溶媒を使用して、リン脂質を異なる分画中に溶出させた。
【００３１】
＊分画Ａ：７５０ｍｇのリン脂質（ホスファチジル−ミオ−イノシトール ジ−マンノシド（ＰＩＭ2）が豊富）、０．１Ｍ酢酸アンモニウムを含むクロロホルム／メタノール
混合物（１：２，ｖ／ｖ）で溶出
＊分画Ｂ（２つの分画に細分される）：４４０ｍｇのリン脂質（本質的カルジオ脂質）および１６０ｍｇのリン脂質（ホスファチジル−ミオ−イノシトール ジ−マンノシド（ＰＩＭ2）とヘキサ−マンノシド（ＰＩＭ6）の混合物）、０．２Ｍ酢酸アンモニウムを含むクロロホルム／メタノール混合物（１：２，ｖ／ｖ）で溶出
＊分画Ｃ：５５ｍｇのリン脂質（ホスファチジル−ミオ−イノシトール ヘキサ−マンノシド（ＰＩＭ6）が豊富）の。０．２Ｍ酢酸アンモニウムを含むメタノール溶液で溶出
種々の分画から酢酸アンモニウム塩を除去するために、連続的な凍結乾燥／再懸濁工程を行なった。
【００３２】
その後、得られた分画を使用して、種々のアシル型を精製した。
ホスファチジル−ミオ−イノシトール ヘキサ−マンノシド（ＰＩＭ6）の場合、分画
Ｃの２０ｍｇのリン脂質を、１５％（ｖ／ｖ）のプロパノール−１を含む０．１Ｍ酢酸アンモニウム溶液中に、同じ緩衝液で予め平衡化しておいたオクチルセファロースＣＬ−４Ｂカラム（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ社）で再懸濁した。カラムは最初５０ｍｌの平衡化緩衝液で、その後１５％から６５％（ｖ／ｖ）（各２５０ｍｌ）のプロパノール−１の０．１Ｍ
酢酸アンモニウム溶液の線形勾配で５ｍｌ／ｈの速度で溶出させた。分画は３０分毎に採取した。２０μｌの各分画を乾燥させ、酸加水分解させた（１００μｌの２Ｍトリフルオロ酢酸、１１０℃で２時間）。加水分解物を乾燥し、水に再懸濁し、次に、そのマンノース含量を調べるためにＧＩＬＬＥＲＯＮら（前掲、２００３年）に記載の通り高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィ（ＨＰＡＥＣ）で分析した。得られた分画を、その精製プロフィールに従ってグループ化し、凍結乾燥を繰り返して酢酸アンモニウム塩を除去した。アセトンによる沈殿工程を各分画に対して行い、プロパノール−１から出る汚染物質を除去した。最後に、１．２ｍｇ、１ｍｇ、７．５ｍｇおよび３ｍｇの分画Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶがそれぞれ得られた。
【００３３】
ホスファチジル−ミオ−イノシトール ジ−マンノシド（ＰＩＭ2）の場合、分画Ａの
２０ｍｇのリン脂質を、２５％（ｖ／ｖ）のプロパノール−１を含む０．１Ｍ酢酸アンモニウム溶液中に、同じ緩衝液で予め平衡化しておいたオクチルセファロースＣＬ−４Ｂカラム（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ社）で再懸濁した。
カラムは最初５０ｍｌの平衡化緩衝液で、その後２５％から５０％（ｖ／ｖ）（各１２５ｍｌ）のプロパノール−１の０．１Ｍ酢酸アンモニウム溶液の線形勾配で５ｍｌ／ｈの速度で溶出させた。分画は１５分毎に採取した。２０μｌの各分画を乾燥させ、酸加水分解させた（１００μｌの２Ｍトリフルオロ酢酸、１１０℃で２時間）。加水分解物を乾燥し、水に再懸濁し、次に、そのマンノース含量を調べるためＧＩＬＬＥＲＯＮら（前掲、２００３年）に記載の通り高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィ（ＨＰＡＥＣ）で分析した。得られた分画を、その精製プロフィールに従ってグループ化し、凍結乾燥を繰り返して酢酸アンモニウム塩を除去した。
【００３４】
２）初代マクロファージ培養物の調製
マウス骨髄細胞を、野生型マウス系統であってＴＬＲ２（MICHELSEN et al., J. Biol.
Chem., vol. 276, p: 25680-25686, 2001）またはＳＩＧＮ−１（LANOUE et al., J. Exp. Med., vol. 200, p: 1383-1393, 2004）が欠損したＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウスと
、対応する対照系統とから得た。得られた細胞を、２０％ウマ血清および３０％Ｌ９２９調製細胞培地で補足したＤＭＥＭ環境（ＤＵＢＥＣＣＯ）で７日間培養した（１０6個／
ｍｌ）（Ｍ−ＣＳＦの供給源についてはMULLER et al., Mol. Med., vol.2, p:247-255, 1996参照）。培地を新たに交換して３日後、細胞調製物はマクロファージの均質な集団を含む。
【００３５】
３）ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによる野生型マウスマクロファージの刺激
野生型マウス骨髄Ｂ６に由来するマクロファージを、１０5個／ウェルの細胞の割合に
なるよう９６ウェル培養プレート上で培養し、次に、ＰＩＭ（６．７μｇ／ｍｌ）の存在下および不在下で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、セロタイプ Ｏ１１１：Ｂ４、ＳＩＧＭＡ社）により刺激した。使用したＰＩＭの分画は、ＰＩＭ6の種々のアシル化型（Ａｃ1ＰＩＭ6からＡｃ4ＰＩＭ6まで）と、ＰＩＭ2の２つの分画（すなわちＰＩおよびＰＩＭ2のモノアシル化型（ＰＩＣ16とＰＩＭ2Ｃ16）を含む分画と、ＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型（Ａｃ３ＰＩＭ2とＡｃ４ＰＩＭ2）を含む
分画）に相当した。使用した凍結乾燥ＰＩＭのすべての調製物はＤＭＳＯに溶解し、１％の非細胞毒性終濃度になるよう培地に加えた。
【００３６】
２４時間の刺激後、培養液の上清を採取し、ＥＬＩＳＡ法（ＤＵＯＳＥＴ）でＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０サイトカインを分析すると共に、ＧＲＩＥＳＳ反応で亜硝酸塩含量を分析した。
【００３７】
その結果、ＰＩＭ6のジ、トリ、およびテトラアシル化型と、ＰＩＭ2のモノアシル化型が、ＬＰＳの存在下でマクロファージで引き起こされるＴＮＦ−αの合成を強く阻害する
ことが示された。さらに、ＰＩＭ6のモノアシル化型とＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型も、程度は低いものの、やはりＴＮＦ−αの合成を阻害し、特にＰＩＭ2のトリおよ
びテトラアシル化型の場合に阻害した（図２）。同様の結果が、ＮＯおよびＩＬ−１２ｐ４０の発現に対しても得られた。種々のＰＩＭ分画の存在下で同じマクロファージに対してＭＴＴ細胞毒性試験を行ったところ、ＰＩＭ6のモノアシル型の分画だけが細胞に対し
て低い細胞毒性を示した（図３）。
【００３８】
ＰＩＭ2とＰＩＭ6の調製物が、マクロファージの初代培養物によるＴＮＦとＩＬ−１２ｐ４０の分泌刺激の刺激剤として最初に同定されていたため、ＰＩＭの非分画調製物（分画ＡからＣ）を２０μｇ／ｍｌ濃度のＬＰＳにより引き起こされる反応について試験した。
【００３９】
得られた結果、非分画ＰＩＭ調製物の存在下では、ＬＰＳにより引き起こされるマクロファージの初代培養物の炎症性反応（ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０）の阻害は示されなかった。
【００４０】
このことは、ＰＩＭ2および／またはＰＩＭ6のアシル化型の精製度のみならず由来および性質も炎症性反応の阻害効果に影響することを実証している。
４）ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＴＬＲ2欠損マウスマクロファージ
の刺激
ＰＩＭの非分画調製物がＴＬＲ2アゴニストを構成し（JONES et al., J. Leukoc. Biol., vol. 69, p: 1036-1044, 2001）、ＰＩＭ2またはＰＩＭ6の存在下でのマクロファージの弱い活性化がＴＬＲ2依存的なものであること（ＧＩＬＬＥＲＯＮら、前掲、２００３
年）が、以前に確認されていた。
【００４１】
ＰＩＭのアシル化分画の抗炎症活性にＴＬＲ2が関与するだろうという仮説について検
討するために、ＴＬＲ2が欠損しているマウス骨髄由来のマクロファージを培養し、以前
に記載されたように（段落３を参照）、ＰＩＭ2またはＰＩＭ6の種々のアシル化型を含む分画が有る場合と無い場合とでＬＰＳの存在下で試験した。
【００４２】
その結果、ＰＩＭ6のジ、トリ、およびテトラアシル化型と、ＰＩおよびＰＩＭ2のモノアシル化型が、ＬＰＳの存在下でマクロファージで引き起こされるＴＮＦ−αの合成を強く阻害することが示された。さらに、ＰＩＭ6のモノアシル化型とＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型も、程度は低いものの、やはりＴＮＦ−αの合成を阻害し、特にＰＩＭ2
のトリおよびテトラアシル化型の場合に阻害した（図４）。従って、これらの分画の抗炎症作用はＴＬＲ2には依存しない。
【００４３】
５）ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＳＩＧＮ−Ｒ１欠損マウスマクロファージの刺激
ヒトＤＣ−ＳＩＧＮ受容体は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ヒト結核菌）を（ＭａｎＬＡＭおよびＬＭを介して）固定するための必須の受容体であることが知られている。
【００４４】
仮説を考察するために、どれによって、ＤＣ−ＳＩＧＮファミリーのマウス受容体がＰＩＭのアシル化分画の抗炎症作用に関与するだろうという仮説について検討するために、ＳＩＧＮ−Ｒ１が欠損しているマウス骨髄由来のマクロファージを培養し、以前に記載されたように（段落３を参照）、ＰＩＭ2またはＰＩＭ6の種々のアシル化型を含む分画が有る場合と無い場合とでＬＰＳの存在下で試験した。
【００４５】
その結果、ＰＩＭ6のジ、トリ、およびテトラアシル化型と、ＰＩおよびＰＩＭ2のモノアシル化型が、ＬＰＳの存在下でＳＩＧＮ−Ｒ１欠損マクロファージで引き起こされるＴ
ＮＦ−αの合成を強く阻害することが示された。さらに、ＰＩＭ6のモノアシル化型とＰ
ＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型も、程度は低いものの、やはりＴＮＦ−αの合成を
阻害し、特にＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型の場合に阻害した（図５）。従って
、これらの分画の抗炎症作用はＳＩＧＮ−Ｒ１には依存しない。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、対象におけるＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病の予防または治療の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチまたはクローン病等の炎症性疾患の発生率が、先進国で、特に欧州諸国で絶えず増加している。これらの病気については、ＴＮＦおよびＩＬ−１２が重要なエフェクターを構成している。
【０００３】
インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は、固有の構造と多面的作用サイトカインである（非特許文献１〜４）。ＩＬ−１２は、活性型ヘテロ二量体または阻害型ｐ４０ホモ二量体を形成する２つのサブユニット（ｐ４０とｐ３５）から成る。ＩＬ−１２は、マクロファージと単球によって主に生産され、本質的にこの後に、特に微生物、細胞内寄生体、細菌または細菌産物の製品である内因性か外因性かを問わない種々の起源の活性化を伴う。機能的研究により、ＩＬ−１２がＮＫ（ナチュラルキラー）細胞とマクロファージの細胞溶解活性を刺激することが示された。最後に、ＩＬ−１２はＴｈ１型Ｔ細胞の分化における中心的役割を果たし、ＩＦＮ−γの生産を誘導する。
【０００４】
ＴＦＮαは、エンドトキシンまたは他の刺激に応答して単球とマクロファージにより分泌されるサイトカインである。ＴＮＦαは可溶性ホモ三量体に相当し、このタンパク質サブユニットは１７ｋＤａである（非特許文献５）。ＴＮＦの論評については、ＢＥＵＴＬＥＲら（非特許文献６）、ＯＬＤ（非特許文献７）、およびＬＥら（非特許文献８）を参照されたい。しかしながら、単球とマクロファージ以外の細胞はＴＮＦを生産する傾向がある。例として、非単球ヒト細胞株はＴＮＦを生産する（非特許文献９および非特許文献１０参照）。
【０００５】
ＴＮＦは、内皮血管細胞における凝固促進活性の誘発（非特許文献１１）、好中球およびリンパ球の接着の増加（非特許文献１２）、およびマクロファージ、好中球および内皮血管細胞による血小板活性化因子の放出刺激（非特許文献１３）等の組織損傷を生じさせる炎症性応答を引き起こす。
【０００６】
慢性関節リウマチ、クローン病、乾癬等の様々な炎症性疾患を治療するために、種々の「抗ＴＮＦ」治療が開発されており（非特許文献１４）、このような治療を用いて既に治療された世界における患者数は１００万人に達し、主として欧州諸国とアメリカでなされている。これらの治療の大多数は、特許文献１に記載されたようなＴＮＦに対する抗体を使用する。ＴＮＦに対する抗体であって治療に使用されるものの例としては、ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（ＡＢＯＴＴ社）、ＣＤＰ−８７０（ＵＣＢ Ｐｈａｒｍａ社）、ＡＦＥＬＩＭＯＭＡＢ（登録商標）（ＫＮＯＬＬ Ｇｍｂｈ社）、Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（登録商標）（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ社）およびＲｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（Ｓｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ社）を挙げることができる。
【０００７】
しかしながら、これらの種々の治療は、結核および日和見感染を発達させる傾向が増大する等の、不都合な作用を有することが明らかとなっている（非特許文献１５）。抗ＴＮＦ療法で治療された患者についての何千もの事例が報告されているが（非特許文献１６）、この大多数は診断が困難な非定型の結核であり、散在性および肺外結核に相当し、恐らく潜在性慢性完成症の差違活性化に関連する（非特許文献１７）。したがって、抗ＴＮＦ
で治療された患者の１〜２％以下は結核に罹りやすいが、抗ＴＮＦ療法のコストが低減しているために、罹患患者数が増加する可能性がある。大多数のこれらの感染症は潜在性感染症再活性化に相当し、事例の約３０％が第一感染に相当する。最後に、結核感染の先例を有する患者に対するかかる抗ＴＮＦ療法は、約９ヶ月の抗生物質治療を必要とする（非特許文献１８）。
【０００８】
ＩＬ−１２に対する治療は開発の初期段階であり、特に、ＩＬ−１２に対する抗体が特許文献２に記載され、ＩＬ−１２の発現を阻害する特異的ヒアルロン酸が特許文献３に記載されている。
【０００９】
ＴＮＦおよび／またはＩＬ−１２の過剰発現に関連する炎症性疾患および他の病気の新規な治療法を開発する必要性が未だ存在する。
ホスファチジル−ミオ−イノシトールマンノシド（ＰＩＭ）は、ミコバクテリウム壁の一部を形成することが知られている低分子量（約２５００）の分子である。ミコバクテリウム壁はリポアラビノマンナン（ＬＡＭ）とリポマンナン（ＬＭ；図１参照）も含んでいる。ＰＩＭは、一般に１〜４個のアシル化鎖と、グリセロリン酸ミオイノシトール基と、１〜６個のマンノシル化基とを有し、合成することも可能である。従来技術から、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓのような成長が早くて非病原性の種のいくつかのＬＡＭ（ＰＩＬＡＭ）が、ＴＮＦおよびＩＬ−１２の生産を刺激する炎症性分子であることが分かっている（非特許文献１９）。このように、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を活性化するＴＬＲ２依存経路によりＰＩＬＡＭがマクロファージを活性化することが実証されている（非特許文献２０）。同様に、ＬＭの炎症活性も、特にウシ結核菌ＢＣＧにて明らかとなっている（非特許文献２１）。この炎症活性は、ＴＬＲ２受容体およびＭｙＤ８８アダプタタンパク質によるマクロファージと炎症性サイトカインの活性化によって生じる（非特許文献２１）。徹底的な精製によりＬＭのモノ−、ジ−、トリ−、およびテトラ−アシル化型とウシ結核菌ＢＣＧを分離した後、トリ−およびテトラ−アシル化ＬＭはＴＬＲ依存的炎症活性を示すことを実証することが可能である（非特許文献２２）。したがって、ミコバクテリウムのＬＭアシル化プロファイルは、宿主の炎症反応を制御する追加の手段を表わす。
【００１０】
ホスファチジル−ミオ−イノシトールジマンノシド（ＰＩＭ2）およびヘキサマンノシ
ド（ＰＩＭ6）は、ウシ結核菌ＢＣＧおよびヒト結核菌Ｈ３７Ｒｖｎにおける２つの最も
量が豊富なＰＩＭのクラスである。ＰＩＭ1、ＰＩＭ3、ＰＩＭ4およびＰＩＭ5の限られた量で観察されるが、これはそれらが生合成の中間体に相当することを示唆している。ＰＩＭは、特定の位置でマンノース基を逐次付加することにより、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）から合成される。最初の３つのユニットα−Ｍａｎｐに加え、マンノシルトランスフェラーゼをコードする３つの遺伝子が現在知られている。開始ステップは、酵素ｐｉｍＡ（非特許文献２３）による触媒作用であり、これはＰＩのミオイノシトールの２位にα−Ｍａｎｐ基を転移してＰＩＭ1を生成することから成るが、ＰＩのミオイノシトー
ルの６位への第２のα−Ｍａｎｐ基の付加は酵素ｐｉｍＢ（非特許文献２４）によって触媒される。次に、触媒ｐｉｍＣ（非特許文献２５）により、イノシトールに６位で結合されたα−Ｍａｎｐユニットに対して第３のα−Ｍａｎｐ基を付加することで、伸長が起こり、ＰＩＭ3が得られる。種々のＰＩＭの構造を決定することが可能である（非特許文献
２６〜２８）。ＰＩＭに関する研究により、ＰＩＭの種々のアシル化型のキャラクタライズも可能となった（非特許文献２７）。最後に、ＰＩＭ2とＰＩＭ6の完全な合成が最近実現された（非特許文献２９および３０）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第５，６９８，１９５号
【特許文献２】ＰＣＴ国際出願国際公開第９８／１６２４８号
【特許文献３】米国特許出願出願公開第２００４／０９７４６５号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Kobayashi et al., J. Exp. Med., vol.170, p:827-845., 1989
【非特許文献２】SEDER et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.90, p:10188-10192, 1993
【非特許文献３】LING et al., J. Immunol., vol.154, p:116-127, 1995
【非特許文献４】Podlaski et al., Arch. Biochem. Biophys., vol.294, p:230-237, 1995
【非特許文献５】SMITH et al., J. Biol. Chem., vol.294, p: 6951-6954, 1987
【非特許文献６】Nature, vol.320, p: 584, 1986
【非特許文献７】Science, vol.230, p: 630, 1986
【非特許文献８】Lab. Invest., vol.56, p:234
【非特許文献９】RUBIN et al., J. Exp. Med., vol.164, p: 1350, 1986
【非特許文献１０】Spriggs et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.84, p: 6563, 1987
【非特許文献１１】POBER et al., J. Immunol., vol. 136, p: 1680, 1986
【非特許文献１２】POBER et al., J. Immunol., vol. 138, p: 3319, 1987
【非特許文献１３】Camussi et al., J. Exp. Med., vol.166, p:1390, 1987
【非特許文献１４】SCHREIBER et al., 2001
【非特許文献１５】MOHAN et al., Curr. Opin. Rheumatol., vol.15, p: 179-184, 2003
【非特許文献１６】ASKLING et al., Arthritis Rheum, vol. 52, p: 1986-1992, 2005
【非特許文献１７】MOHAN et al., Clin. Infect. Dis., vol.39, p: 295-299, 2004
【非特許文献１８】KEANE, Rheumatology, placeCityOxford. 2005
【非特許文献１９】Chatterjee, Infect Immun, 1992; Gilleron, J. Biol. Chem., 1997
【非特許文献２０】MEANS et al., J. Immunol., vol.163, p: 3920-3927, 1999
【非特許文献２１】Quesniaux, J. Immunol., 2004; Vignal, J. Immunol., 2003
【非特許文献２２】GILLERON et al., Chem. Biol., vol.13, p:39-47, 2006
【非特許文献２３】KORDULAKOVA et al., J. Biol. Chem. 2002
【非特許文献２４】SCHAEFFER et al., J. Biol. Chem., vol.274, p: 31625-31631, 1999
【非特許文献２５】KREMER et al., Biochem. J., vol. 363, p: 437-447, 2002
【非特許文献２６】GILLERON et al., 1999
【非特許文献２７】GILLERON et al., 2001
【非特許文献２８】GILLERON et al., 2003
【非特許文献２９】STADELMAIER et al., Carbohydr. Res., vol.338, p: 2557-69, 2003
【非特許文献３０】LIU et al., J. Am. Chem. Soc., vol.128, p: 3638-48, 2006
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
驚いたことに、また予期せずして、発明者らは、ＰＩＭ2とＰＩＭ6のいくつかのアシル化型が炎症性サイトカイン応答の誘発を阻害することを示した。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、本発明の第１の目的は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物
【００１５】
【化１】
【００１６】
または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含む医薬組成物から成る。
式中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7は直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子であるか、または水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5は水素原子と、モノ、ジ、トリ、テトラまたはペンタ−マンノシルとから選択され
る。
【００１７】
有利には、１または複数のマンノシル基はα−マンノシル基である。好ましくは、Ｒ5
基は、水素原子、モノ−マンノシルおよびペンタ−マンノシルから成る群から選択される。
【００１８】
有利には、Ｒ7基は直鎖アルキル基である。好ましくは、Ｒ7は１１〜２１個の炭素原子、特に好ましくは１３〜１９個の炭素原子を有する。
式（Ｉ）の化合物は、実施例に記載したようにミコバクテリウムからＰＩＭを精製することにより、または非特許文献２９および３０に記載されたプロトコルに従う化学合成により、当業者に容易に得ることが可能である。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物の医薬として許容される塩は、限定されず、例えばアルカリ金属塩（ナトリウム、リチウム、カリウム等の塩）等の無機塩基塩、アンモニウム塩、およびジエチルアミン、シクロヘキサミンおよびアミノ酸塩等の有機塩基塩が含まれる。
【００２０】
好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、
式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3基のうちの１つがＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖、ま
たは環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であると共に、他の２つの基が水素原子であり、
Ｒ4が水素原子であり、
Ｒ5が水素原子である。
【００２１】
好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、
式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はマンノシルであり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの１つの基がＲ7−ＣＯ−基であり、他の３つの基が
水素原子である。
【００２２】
第３の好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、
式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はペンタ−マンノシルであり、
Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの少なくとも２つの基は、Ｒ7−ＣＯ−基に相当す
る。
【００２３】
有利には、Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの２つ、３または４つがＲ7−ＣＯ−基
に相当する。
本発明の組成物では、式（Ｉ）の化合物を、溶媒、ＤＭＳＯ、水または緩衝液への溶解またはエマルジョンおよびマイクロエマルジョンへの組み込み等の、周知の方法により調剤することが可能である。
【００２４】
また、本発明の組成物は、安定剤、乳化剤、等張化剤、防腐剤、着色剤、賦形剤、結合剤および潤滑剤のような、医薬の分野で周知の成分を含んでもよい。
本発明の第２の目的は、対象におけるＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病の予防または治療のための薬物を製造するための上記組成物の使用方法から成る。
【００２５】
「対象」とは、哺乳動物、好ましくはヒトを意味する。
「ＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病」とは、以下の疾病を意味する：
Ａ）免疫または自己免疫疾患、例えばリウマチ性多発性関節炎、移植片拒絶、糖尿病、散在性紅斑性狼瘡、バセドー病、
Ｂ）感染症、特に細菌、ウイルスおよび寄生源の少なくとも一つの慢性または急性感染に起因するショック、
Ｃ）炎症性疾患、例えば慢性炎症性疾患（サーコイドーシス、炎症性腹部疾患、慢性関節リウマチ、出血性直腸結腸炎、クローン病）および血管炎症性疾患（脱繊維素症候群、関節硬化症、川崎病）、
Ｄ）神経変性疾患、例えば脱髄疾患（多発性硬化症および急性横断性脊髄炎）、錐体外路および小脳の疾患（皮質脊髄系の病変および脳幹神経節障害）、
Ｅ）ＴＮＦ分泌腫瘍またはＴＮＦに関する悪性病変、例えば白血病（急性、骨髄性、リンパ球性、または慢性骨髄異形成性）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫）、または悪性種（バーキット腫）、および
Ｆ）アルコール性肝炎。
【００２６】
前記薬物は、好ましくは、対象の炎症性疾患の予防または治療を目的とする。
前記薬物は、注射（静脈内、筋肉内、皮下、皮内等）、経鼻、経口、経皮投与により、または吸入により投与することができる。投与態様によれば、前記薬物は、溶液、乳剤、丸剤、粉剤、軟膏、ローション、ゲル、坐薬または噴霧剤の形で調製可能である。
【００２７】
前記薬物では、化合物（Ｉ）または医薬として許容される同化合物の塩の濃度は限定されず、好ましくは０．１％から１００％（ｐ／ｐ）の間、特に好ましくは０．５％から２０％の間にある。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ヒト結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）のエンベロープの模式図。
【図２】ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによる野生型マウスマクロファージの刺激によるＴＮＦ−αの合成の阻害を示すグラフ。
【図３】種々のＰＩＭ分画の存在下で同じマクロファージに対してＭＴＴ細胞毒性試験の結果を示すグラフ。
【図４】ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＴＬＲ2欠損マウスマクロファージの刺激によるＴＮＦ−αの合成の阻害を示すグラフ。
【図５】ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＳＩＧＮ−Ｒ１欠損マウスマクロファージの刺激によるＴＮＦ−αの合成の阻害を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
以下の実施例は本発明を例証するものであって、非限定的な例として与えられる。
実施例
１）ホスファチジル−ミオ−イノシトールジ−（ＰＩＭ2）およびヘキサ−（ＰＩＭ6）−マンノシドの種々のアシル化型の精製
ＰＩＭが豊富な脂質抽出物を、ミコバクテリウムの糖脂質の精製により得た。ウシ結核菌ＢＣＧは、VERCELLONE et al.（J. Biol. Chem., vol. 264, p: 7447-7454, 1989)およびGILLERON et al. J. Biol. Chem., vol.276, p: 34896-34904, 2001)に記載されたプロトコルにより得た。
【００３０】
アセトンに不溶なリン脂質を含む脂質抽出物を、中性の化合物を溶出するためにクロロホルム、クロロホルム／メタノール（１：１，ｖ／ｖ）、及びメタノールの溶液で予め平衡化しておいたＱＭＡ−ＳＰＨＥＲＯＳＩＬ Ｍ（ＢＩＯＳＥＰＲＡ Ｓ．Ａ．社）のカラムにかけた。その後、酢酸アンモニウムを含む有機溶媒を使用して、リン脂質を異なる分画中に溶出させた。
【００３１】
＊分画Ａ：７５０ｍｇのリン脂質（ホスファチジル−ミオ−イノシトール ジ−マンノシド（ＰＩＭ2）が豊富）、０．１Ｍ酢酸アンモニウムを含むクロロホルム／メタノール
混合物（１：２，ｖ／ｖ）で溶出
＊分画Ｂ（２つの分画に細分される）：４４０ｍｇのリン脂質（本質的カルジオ脂質）および１６０ｍｇのリン脂質（ホスファチジル−ミオ−イノシトール ジ−マンノシド（ＰＩＭ2）とヘキサ−マンノシド（ＰＩＭ6）の混合物）、０．２Ｍ酢酸アンモニウムを含むクロロホルム／メタノール混合物（１：２，ｖ／ｖ）で溶出
＊分画Ｃ：５５ｍｇのリン脂質（ホスファチジル−ミオ−イノシトール ヘキサ−マンノシド（ＰＩＭ6）が豊富）の。０．２Ｍ酢酸アンモニウムを含むメタノール溶液で溶出
種々の分画から酢酸アンモニウム塩を除去するために、連続的な凍結乾燥／再懸濁工程を行なった。
【００３２】
その後、得られた分画を使用して、種々のアシル型を精製した。
ホスファチジル−ミオ−イノシトール ヘキサ−マンノシド（ＰＩＭ6）の場合、分画
Ｃの２０ｍｇのリン脂質を、１５％（ｖ／ｖ）のプロパノール−１を含む０．１Ｍ酢酸アンモニウム溶液中に、同じ緩衝液で予め平衡化しておいたオクチルセファロースＣＬ−４Ｂカラム（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ社）で再懸濁した。カラムは最初５０ｍｌの平衡化緩衝液で、その後１５％から６５％（ｖ／ｖ）（各２５０ｍｌ）のプロパノール−１の０．１Ｍ
酢酸アンモニウム溶液の線形勾配で５ｍｌ／ｈの速度で溶出させた。分画は３０分毎に採取した。２０μｌの各分画を乾燥させ、酸加水分解させた（１００μｌの２Ｍトリフルオロ酢酸、１１０℃で２時間）。加水分解物を乾燥し、水に再懸濁し、次に、そのマンノース含量を調べるためにＧＩＬＬＥＲＯＮら（前掲、２００３年）に記載の通り高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィ（ＨＰＡＥＣ）で分析した。得られた分画を、その精製プロフィールに従ってグループ化し、凍結乾燥を繰り返して酢酸アンモニウム塩を除去した。アセトンによる沈殿工程を各分画に対して行い、プロパノール−１から出る汚染物質を除去した。最後に、１．２ｍｇ、１ｍｇ、７．５ｍｇおよび３ｍｇの分画Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶがそれぞれ得られた。
【００３３】
ホスファチジル−ミオ−イノシトール ジ−マンノシド（ＰＩＭ2）の場合、分画Ａの
２０ｍｇのリン脂質を、２５％（ｖ／ｖ）のプロパノール−１を含む０．１Ｍ酢酸アンモニウム溶液中に、同じ緩衝液で予め平衡化しておいたオクチルセファロースＣＬ−４Ｂカラム（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ社）で再懸濁した。
カラムは最初５０ｍｌの平衡化緩衝液で、その後２５％から５０％（ｖ／ｖ）（各１２５ｍｌ）のプロパノール−１の０．１Ｍ酢酸アンモニウム溶液の線形勾配で５ｍｌ／ｈの速度で溶出させた。分画は１５分毎に採取した。２０μｌの各分画を乾燥させ、酸加水分解させた（１００μｌの２Ｍトリフルオロ酢酸、１１０℃で２時間）。加水分解物を乾燥し、水に再懸濁し、次に、そのマンノース含量を調べるためＧＩＬＬＥＲＯＮら（前掲、２００３年）に記載の通り高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィ（ＨＰＡＥＣ）で分析した。得られた分画を、その精製プロフィールに従ってグループ化し、凍結乾燥を繰り返して酢酸アンモニウム塩を除去した。
【００３４】
２）初代マクロファージ培養物の調製
マウス骨髄細胞を、野生型マウス系統であってＴＬＲ２（MICHELSEN et al., J. Biol.
Chem., vol. 276, p: 25680-25686, 2001）またはＳＩＧＮ−１（LANOUE et al., J. Exp. Med., vol. 200, p: 1383-1393, 2004）が欠損したＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウスと
、対応する対照系統とから得た。得られた細胞を、２０％ウマ血清および３０％Ｌ９２９調製細胞培地で補足したＤＭＥＭ環境（ＤＵＢＥＣＣＯ）で７日間培養した（１０6個／
ｍｌ）（Ｍ−ＣＳＦの供給源についてはMULLER et al., Mol. Med., vol.2, p:247-255, 1996参照）。培地を新たに交換して３日後、細胞調製物はマクロファージの均質な集団を含む。
【００３５】
３）ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによる野生型マウスマクロファージの刺激
野生型マウス骨髄Ｂ６に由来するマクロファージを、１０5個／ウェルの細胞の割合に
なるよう９６ウェル培養プレート上で培養し、次に、ＰＩＭ（６．７μｇ／ｍｌ）の存在下および不在下で、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、セロタイプ Ｏ１１１：Ｂ４、ＳＩＧＭＡ社）により刺激した。使用したＰＩＭの分画は、ＰＩＭ6の種々のアシル化型（Ａｃ1ＰＩＭ6からＡｃ4ＰＩＭ6まで）と、ＰＩＭ2の２つの分画（すなわちＰＩおよびＰＩＭ2のモノアシル化型（ＰＩＣ16とＰＩＭ2Ｃ16）を含む分画と、ＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型（Ａｃ３ＰＩＭ2とＡｃ４ＰＩＭ2）を含む
分画）に相当した。使用した凍結乾燥ＰＩＭのすべての調製物はＤＭＳＯに溶解し、１％の非細胞毒性終濃度になるよう培地に加えた。
【００３６】
２４時間の刺激後、培養液の上清を採取し、ＥＬＩＳＡ法（ＤＵＯＳＥＴ）でＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０サイトカインを分析すると共に、ＧＲＩＥＳＳ反応で亜硝酸塩含量を分析した。
【００３７】
その結果、ＰＩＭ6のジ、トリ、およびテトラアシル化型と、ＰＩＭ2のモノアシル化型が、ＬＰＳの存在下でマクロファージで引き起こされるＴＮＦ−αの合成を強く阻害する
ことが示された。さらに、ＰＩＭ6のモノアシル化型とＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型も、程度は低いものの、やはりＴＮＦ−αの合成を阻害し、特にＰＩＭ2のトリおよ
びテトラアシル化型の場合に阻害した（図２）。同様の結果が、ＮＯおよびＩＬ−１２ｐ４０の発現に対しても得られた。種々のＰＩＭ分画の存在下で同じマクロファージに対してＭＴＴ細胞毒性試験を行ったところ、ＰＩＭ6のモノアシル型の分画だけが細胞に対し
て低い細胞毒性を示した（図３）。
【００３８】
ＰＩＭ2とＰＩＭ6の調製物が、マクロファージの初代培養物によるＴＮＦとＩＬ−１２ｐ４０の分泌刺激の刺激剤として最初に同定されていたため、ＰＩＭの非分画調製物（分画ＡからＣ）を２０μｇ／ｍｌ濃度のＬＰＳにより引き起こされる反応について試験した。
【００３９】
得られた結果、非分画ＰＩＭ調製物の存在下では、ＬＰＳにより引き起こされるマクロファージの初代培養物の炎症性反応（ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０）の阻害は示されなかった。
【００４０】
このことは、ＰＩＭ2および／またはＰＩＭ6のアシル化型の精製度のみならず由来および性質も炎症性反応の阻害効果に影響することを実証している。
４）ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＴＬＲ2欠損マウスマクロファージ
の刺激
ＰＩＭの非分画調製物がＴＬＲ2アゴニストを構成し（JONES et al., J. Leukoc. Biol., vol. 69, p: 1036-1044, 2001）、ＰＩＭ2またはＰＩＭ6の存在下でのマクロファージの弱い活性化がＴＬＲ2依存的なものであること（ＧＩＬＬＥＲＯＮら、前掲、２００３
年）が、以前に確認されていた。
【００４１】
ＰＩＭのアシル化分画の抗炎症活性にＴＬＲ2が関与するだろうという仮説について検
討するために、ＴＬＲ2が欠損しているマウス骨髄由来のマクロファージを培養し、以前
に記載されたように（段落３を参照）、ＰＩＭ2またはＰＩＭ6の種々のアシル化型を含む分画が有る場合と無い場合とでＬＰＳの存在下で試験した。
【００４２】
その結果、ＰＩＭ6のジ、トリ、およびテトラアシル化型と、ＰＩおよびＰＩＭ2のモノアシル化型が、ＬＰＳの存在下でマクロファージで引き起こされるＴＮＦ−αの合成を強く阻害することが示された。さらに、ＰＩＭ6のモノアシル化型とＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型も、程度は低いものの、やはりＴＮＦ−αの合成を阻害し、特にＰＩＭ2
のトリおよびテトラアシル化型の場合に阻害した（図４）。従って、これらの分画の抗炎症作用はＴＬＲ2には依存しない。
【００４３】
５）ＰＩＭの存在下および不在下でのＬＰＳによるＳＩＧＮ−Ｒ１欠損マウスマクロファージの刺激
ヒトＤＣ−ＳＩＧＮ受容体は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ヒト結核菌）を（ＭａｎＬＡＭおよびＬＭを介して）固定するための必須の受容体であることが知られている。
【００４４】
仮説を考察するために、どれによって、ＤＣ−ＳＩＧＮファミリーのマウス受容体がＰＩＭのアシル化分画の抗炎症作用に関与するだろうという仮説について検討するために、ＳＩＧＮ−Ｒ１が欠損しているマウス骨髄由来のマクロファージを培養し、以前に記載されたように（段落３を参照）、ＰＩＭ2またはＰＩＭ6の種々のアシル化型を含む分画が有る場合と無い場合とでＬＰＳの存在下で試験した。
【００４５】
その結果、ＰＩＭ6のジ、トリ、およびテトラアシル化型と、ＰＩおよびＰＩＭ2のモノアシル化型が、ＬＰＳの存在下でＳＩＧＮ−Ｒ１欠損マクロファージで引き起こされるＴ
ＮＦ−αの合成を強く阻害することが示された。さらに、ＰＩＭ6のモノアシル化型とＰ
ＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型も、程度は低いものの、やはりＴＮＦ−αの合成を
阻害し、特にＰＩＭ2のトリおよびテトラアシル化型の場合に阻害した（図５）。従って
、これらの分画の抗炎症作用はＳＩＧＮ−Ｒ１には依存しない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物、
【化１】
または医薬として許容される同化合物の塩の１つ
を含む医薬組成物であって、
式中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7は直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子であるか、または水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5は水素原子と、モノ、ジ、トリ、テトラまたはペンタ−マンノシルとから選択され
る、
医薬組成物。
【請求項２】
前記Ｒ7基が直鎖アルキル基であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記Ｒ7基が１１〜２１個の炭素原子、好ましくは１３〜１９個の炭素原子を有するこ
とを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3基のうちの１つがＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖、ま
たは環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であると共に、他の２つの基が水素原子であり、
Ｒ4が水素原子であり、
Ｒ5が水素原子である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はマンノシルであり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの１つの基がＲ7−ＣＯ−基であり、他の３つの基が
水素原子である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はペンタ−マンノシルであり、
Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの少なくとも２つの基は、Ｒ7−ＣＯ−基に相当す
る、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの２つ、３つ、または４つがＲ7−ＣＯ−基に相当
することを特徴とする請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
安定剤、乳化剤、等張化剤、防腐剤、着色剤、賦形剤、結合剤および潤滑剤群から選択された少なくとも１つの化合物をさらに含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
対象におけるＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病の予防または治療のための薬物を製造するための請求項１〜８のいずれかに記載の組成物の使用方法。
【請求項１０】
前記ＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病が、免疫または自己免疫疾患、感染症、炎症性疾患、神経変性疾患、ＴＮＦ分泌腫瘍またはＴＮＦに関する悪性病変、およびアルコール性肝炎から成る群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の使用方法。
【請求項１１】
前記ＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病が、炎症性疾患から選択されることを特徴とする、請求項１０に記載の使用方法。
【請求項１】
式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物、
【化１】
または医薬として許容される同化合物の塩の１つ
を含む医薬組成物であって、
式中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7は直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子であるか、または水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5は水素原子と、モノ、ジ、トリ、テトラまたはペンタ−マンノシルとから選択され
る、
医薬組成物。
【請求項２】
前記Ｒ7基が直鎖アルキル基であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記Ｒ7基が１１〜２１個の炭素原子、好ましくは１３〜１９個の炭素原子を有するこ
とを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3基のうちの１つがＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖、ま
たは環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であると共に、他の２つの基が水素原子であり、
Ｒ4が水素原子であり、
Ｒ5が水素原子である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はマンノシルであり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの１つの基がＲ7−ＣＯ−基であり、他の３つの基が
水素原子である、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物または医薬として許容される同化合物の塩の１つを含み、式（Ｉ）中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立して水素またはＲ7−ＣＯ−基であり、−Ｒ7が直鎖、分岐鎖
、または環式の２〜２４個の炭素原子を有するアルキル、アルケンまたはアルキン基であり、
Ｒ4は、水素原子およびＲ7−ＣＯ−基から成る群から選択されたＲ6基によって６位で
置換されたマンノシル基であり、
Ｒ5はペンタ−マンノシルであり、
Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの少なくとも２つの基は、Ｒ7−ＣＯ−基に相当す
る、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
Ｒ1基、Ｒ2、Ｒ3およびＲ6基のうちの２つ、３つ、または４つがＲ7−ＣＯ−基に相当
することを特徴とする請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
安定剤、乳化剤、等張化剤、防腐剤、着色剤、賦形剤、結合剤および潤滑剤群から選択された少なくとも１つの化合物をさらに含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
対象におけるＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病の予防または治療のための薬物を製造するための請求項１〜８のいずれかに記載の組成物の使用方法。
【請求項１０】
前記ＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病が、免疫または自己免疫疾患、感染症、炎症性疾患、神経変性疾患、ＴＮＦ分泌腫瘍またはＴＮＦに関する悪性病変、およびアルコール性肝炎から成る群から選択されることを特徴とする、請求項９に記載の使用方法。
【請求項１１】
前記ＴＮＦおよびＩＬ−１２のうちの少なくとも一方の過剰発現に関連する疾病が、炎症性疾患から選択されることを特徴とする、請求項１０に記載の使用方法。
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図１】
【図３】
【図４】
【図５】
【図１】
【公表番号】特表２０１０−５１０２９８（Ｐ２０１０−５１０２９８Ａ）
【公表日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３７６７３（Ｐ２００９−５３７６７３）
【出願日】平成１９年１１月２０日（２００７．１１．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００７／００１８９８
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６８４２９
【国際公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【出願人】（５０５０４５６１０）サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ スィヤンティフィック（セーエヌエルエス） (41)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ（ＣＮＲＳ）
【出願人】（５０９１４２３１３）ユニベルシテ ドルレアン (1)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ Ｄ’ＯＲＬＥＡＮＳ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月２０日（２００７．１１．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００７／００１８９８
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６８４２９
【国際公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【出願人】（５０５０４５６１０）サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ スィヤンティフィック（セーエヌエルエス） (41)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＮＴＲＥ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＱＵＥ（ＣＮＲＳ）
【出願人】（５０９１４２３１３）ユニベルシテ ドルレアン (1)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥ Ｄ’ＯＲＬＥＡＮＳ
【Ｆターム（参考）】
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