ここに開示された組成物は、化学式（Ｉ）及び（ＩＩ）の構造を有する化合物、又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、及びプロドラッグであり、当該化学式中のＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^６、Ｒ^５、及びＲ^４は本明細書内において定義される。
【化１】


これら化合物は、ｈＥＲＧイオンチャネルを変調する治療剤として、また、ｈＥＲＧに関する心筋再分極障害の予防及び治療を改善する治療剤として有益なものである。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２００９年１２月３１日に出願された米国仮出願第６１／２９１７４２号の米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
ヒト遅延整流性カリウムイオンチャネル遺伝子（human ether-a-go-go related gene （ｈＥＲＧ））は、電位依存性カリウムチャネル（KV11.1）における細孔を形成するαサブユニットをコード化する。ｈＥＲＧチャネルは、心筋細胞、ニューロン、膵臓β細胞、平滑筋、及びいくつかの癌細胞を含む様々な組織内において発現される。
【０００３】
ｈＥＲＧ電流は、活動電位の再分極において重要な心臓内の遅延整流電流Ｉ_ｋｒの主要な成分として最もよく知られている。ｈＥＲＧチャネルにおける遺伝子の突然変異は、突然死を引き起こし得る疾病である遺伝性ＱＴ延長症候群（ＬＱＴ）の原因となることが知られている。ｈＥＲＧ電流を遮断することができる薬剤、すなわちｈＥＲＧチャネルのタンパク質輸送を阻害することができる薬剤は後天性（acquired）ＬＱＴを引き起こし得る。薬物誘発性の心リスクを最小化するために、研究新薬（Investigational New Drug）（ＩＮＤ）の申請を検討している全ての化合物は、ＩＣＨ Ｓ７Ａガイドライン及びＩＣＨ Ｓ７Ｂガイドラインに従ってかつＧＬＰ原則を遵守してｈＥＲＧ相互作用について試験されなければならない。
【０００４】
心筋細胞において重要な役割を果たす一方、ｈＥＲＧチャネルの発現レベルが白血病、大腸癌、胃癌、乳癌、及び肺癌の細胞を含むいくつかの種類の癌細胞内において上昇したことを示す証拠が増えてきている。なぜ癌細胞内においてｈＥＲＧチャネルが多く発現されるかは明らかではないが、ｈＥＲＧチャネルが癌細胞の増殖に影響を与えることが示された。
【０００５】
ｈＥＲＧチャネルの機能はプロテインキナーゼＡ及びプロテインキナーゼＣに関する経路によって変調される。ｈＥＲＧタンパク質がｃＡＭＰ依存性ＰＫＡの活性化によってリン酸化された際にｈＥＲＧ電流は急性的に阻害される。ｃＡＭＰレベルの上昇及びＰＫＡ活性の延長もｈＥＲＧタンパク質の発現を増大させることがある。さらに、ｈＥＲＧ電流はＰＫＡ及びＰＫＣを介してアドレナリン受容体によって変調されることがある。
【０００６】
ｈＥＲＧチャネルは様々な構造のチャネル遮断剤を収容することができる特有の細孔領域を有している。比較的大きな内部空洞及び当該チャネルの内部（Ｓ６）へリックスにおける特定の芳香族アミノ酸残基（Ｙ６５２及びＦ６５６）の存在は、ｈＥＲＧに異なる薬剤を収容及び結合させる重要な特徴である。
【０００７】
最も一般に使われるクラスＩＩＩ抗不整脈剤は、特に抗アドレナリン作用薬として、複数の標的に影響を及ぼした。例えば、アミオダロンは薬物動態学的な薬剤間の相互作用及び多くの潜在的な副作用を有している。しかし、ｈＥＲＧ遮断は、リエントリ性不整脈の予防に使用される抗不整脈性の薬剤作用として用いられている。他のクラスＩＩＩ抗不整脈薬（例えばアミオダロンおよびラセミソタロール）と異なり、ＦＤＡ承認済みの高親和性ｈＥＲＧ遮断剤であるドフェチリドはｈＥＲＧ遮断を介した純粋なクラスＩＩＩ活性を有している。いくつかの他のｈＥＲＧを遮断するクラスＩＩＩ抗不整脈薬（例えば、イブチリドおよびクロフィリウム）が開発されているが、クロフィリウムは実際の臨床では使われていない。ｈＥＲＧの遮断にはいくつかのメカニズムがある。これらの臨床薬の全てはポア・キャビティ内部の正準的な（canonical）ｈＥＲＧ薬剤結合位置におけるチャネル遮断によって作用し、当該遮断は、薬剤がその標的結合位置に到達する前のチャネル開閉に依存する（開口状態又は不活性状態での遮断）。しかし、薬剤によるｈＥＲＧ遮断の他の状態依存メカニズムが存在する（例えば、閉口状態依存及び混合状態依存）。ｈＥＲＧ遮断の異なる例は、しばしばそれらの作用位置によって区別することができる。すなわち、いくつかのｈＥＲＧ遮断剤は必ずしも厳密にポア・キャビティ内部のＳ６の芳香族残基に関連する正準的なｈＥＲＧ薬剤結合位置を介して作用するわけではなく、また、クラスＩＩＩ抗不整脈薬のドロネダロンは、その開口／不活性状態依存性にもかかわらず、正確にその位置で作用するわけではないことが示されている。異なるタイプのｈＥＲＧ遮断（すなわち、異なる状態依存性又は作用位置）が異なるレベルの催不整脈性リスクと関連するかもしれず、単にｈＥＲＧＩＣ５０値を測定することが特定のｈＥＲＧ遮断薬に関連する「真の」ｈＥＲＧの障害（催不整脈性のリスク）を理解するのに必ずしも充分でないことが示唆されてきた。
【０００８】
様々なｈＥＲＧチャネル遮断剤に加えて、ＲＰＲ２６０２４３、ＮＳ１６４３、ＮＳ３６２３、ＰＤ−１１８０５７、ＰＤ−３０７２４３、マロトキシン、及びＡ−９３５１４２を含む７つのｈＥＲＧチャネル活性剤が同定された（Su, Z等. Electrophysiologic characterization of a novel hERG channel activator. Biochem Pharm 77:1383, 2009を参照）。これらｈＥＲＧ活性剤は異なる化学構造を有しており、かつ異なるメカニズムによってｈＥＲＧチャネルの活性を強化する。その中で、マロトキシン及びＡ−９３５１４２は電位依存性のチャネル活性化をシフトして脱分極電位を小さくすることができる。電気生理の研究は、１０マイクロモルのＭＴＸが最大活性電位の半分の電位（Ｖ１／２）を２５ｍＶの過分極方向へシフトすることを示した。これら既知のｈＥＲＧ活性剤の中で、ＰＤ−１１８０５７、ＮＳ３６２３、及びＲＰＲ２６０２４３は、心室内ＡＰ期間及びＱＴ間隔の両方を短くすることが示された。ＲＰＲ２６０２４３及びＰＤ−１１８０５７はドフェチリド（dofetilide）のＡＰ延長効果を逆行させることがある。これらチャネル活性剤の作用メカニズムは様々である。ＮＳ１６４３及びＮＳ３６２３はｈＥＲＧの電位依存性を右方向へシフトすることによってｈＥＲＧの不活性化を一次的に低減するが、両方の化合物はＳ５−ポア（pore）のリンカ（linker）と相互作用するように構成されておらず、ｈＥＲＧチャネルとの作用部位は未知である。マロトキシンは活性化曲線を大きく左方向へシフトするだけでなく非活性化を遅延させ、かつ不活性化への小さな効果を有している。さらに、ｈＥＲＧ電流がプロテインキナーゼＡ及びプロテインキナーゼＣの活性によって変調されると、プロテインキナーゼ上で作用する薬剤を用いてｈＥＲＧ活性を変調できるかもしれない。これら構造的に異なるｈＥＲＧ活性剤の発見は、ｈＥＲＧ標的を用いた臨床症状の治療に関する大きな進歩であり、さらにｈＥＲＧを遮断することが知られている他の薬剤の安全性を高める可能性がある。
【発明の概要】
【０００９】
ここに開示されているのはｈＥＲＧを変調する組成物である。
【００１０】
ここに開示されているのは、化学式（Ｉ）及び（ＩＩ）の構造を有する組成物、又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、及びプロドラッグであり、当該化学式中のＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^６、Ｒ^５、及びＲ^４は本明細書内において定義される。
【００１１】
【化１】

【００１２】
これら化合物は、ｈＥＲＧイオンチャネルを変調する治療剤として、また、ｈＥＲＧに関する心筋再分極障害の予防及び治療を改善する治療剤として有益なものである。
【００１３】
さらに、ここに開示されているのは、無標識（ラベルフリー）アッセイにおいてｈＥＲＧを活性化することが可能であるが、イオンフラックスアッセイにおいてイオンフラックスを大きく変化させないｈＥＲＧ経路活性剤である。これらｈＥＲＧ経路活性剤は、毒性アッセイに関するアッセイのみならず、無標識アッセイにおいて、ｈＥＲＧ活性剤を試験して同定するのに用いられ得る。
【００１４】
ここに開示されているｈＥＲＧ活性剤は、ＬＱＴＳを引き起こす薬を無効にするのに使用されることができ、従って、既存の新しい薬剤の治療上の可能性及び安全面を改善するのに使用されることができる。これらｈＥＲＧ活性剤はｈＥＲＧイオンチャネル内において結合されたｈＥＲＧ遮断薬分子を除去することができ、従って、ｈＥＲＧチャネルを介して作用する薬剤分子の潜在的な障害を減少させることができる。
【００１５】
さらに、ここに開示されているクラスｈＥＲＧ活性剤の構造−活性関連機能は、潜在的なＬＱＴＳを最小化するｈＥＲＧとの所望の交差反応性プロファイルを有する新世代の抗癌薬の設計に使用されることができる。ｈＥＲＧチャネルは、いくつかの癌において発現し、更にこれらの癌の成長において増殖的な役割を果たすことが知られている。このように、ｈＥＲＧ電流に大きな影響を与えることなくｈＥＲＧが介在するシグナル伝達（シグナリング）を遮断するｈＥＲＧ遮断剤は、癌の進行の予防又は抑制に有益なものであるはずである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１Ａ−図１Ｄは、例示的なｈＥＲＧ活性剤の無標識光学バイオセンサのＤＭＲプロファイルを示す。（Ａ）大腸癌細胞株ＨＴ２９の化合物ＥのＤＭＲシグナル、（Ｂ）ｈＥＲＧを安定して発現する人工のＨＥＫ２９3細胞株（ＨＥＫ−ｈＥＲＧ）の化合物ＥのＤＭＲシグナル、（Ｃ）天然のＨＥＫ２９３細胞の化合物ＥのＤＭＲシグナル、（Ｄ）ＨＴ２９およびＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞株のマロトキシンＤＭＲシグナルに対する化合物Ｅの変調インデックス、である。化合物Ｅは全ての細胞において１０マイクロモルにてアッセイされ、マロトキシンは１６マイクロモルでアッセイされた。グラフＡ、ＢおよびＣには、それぞれ、ネガティブコントロールして、賦形剤（すなわちバッファ）に反応する細胞の正味ゼロのＤＭＲシグナルのみが含まれた。
【図２】図２Ａ−図２Ｄは、例示的なｈＥＲＧ活性剤の無標識光学バイオセンサのＤＭＲプロファイルを示す。（Ａ）大腸癌細胞株ＨＴ２９の化合物ＤのＤＭＲシグナル、（Ｂ）ｈＥＲＧを安定して発現する人工のＨＥＫ２９3細胞株（ＨＥＫ−ｈＥＲＧ）の化合物ＤのＤＭＲシグナル、（Ｃ）天然のＨＥＫ２９３細胞の化合物ＤのＤＭＲシグナル、（Ｄ）ＨＴ２９及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞株のマロトキシンＤＭＲシグナルに対する化合物Ｄの変調インデックス、である。化合物Ｄは全ての細胞において１０マイクロモルにてアッセイされ、マロトキシンは１６マイクロモルでアッセイされた。グラフＡ、ＢおよびＣには、それぞれ、ネガティブコントロールして、賦形剤（すなわちバッファ）に反応する細胞の正味ゼロのＤＭＲシグナルのみが含まれた。
【図３】図３は、５ｍＭのＫＣｌの下でＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞を用いた場合の例示的なｈＥＲＧ活性剤の化合物Ｄ及びＥのＲｂ^＋フラックス測定を、周知のｈＥＲＧ遮断剤のドフェチリドと同様に周知のｈＥＲＧ活性剤のマロトキシンと比較して示す。当該変調剤は、ＫＣｌを５ｍＭで維持しつつ１０マイクロモル又は５０マイクロモルのいずれかでアッセイされた。
【図４】図４は、化合物Ｅ、Ｄ、及びＵ（全て２５マイクロモル）が体外の培養条件下で癌細胞株ＨＴ２９に細胞毒性を呈しなかったことを示している。少なくとも４つの複製物を用いて平均反応値を算出した。
【図５】図５Ａ−図５Ｅは、例示的なｈＥＲＧ活性剤であるフルフェナム酸のプロファイルを示す。（Ａ）大腸癌細胞株ＨＴ２９における抗炎症薬フルフェナム酸のＤＭＲシグナル、（Ｂ）ｈＥＲＧを安定して発現する人工のＨＥＫ２９3細胞株（ＨＥＫ−ｈＥＲＧ）におけるフルフェナム酸のＤＭＲシグナル、（Ｃ）天然のＨＥＫ２９３細胞におけるフルフェナム酸のＤＭＲシグナル、（Ｄ）ＨＴ２９及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞株のマロトキシンＤＭＲシグナルに対するフルフェナム酸の変調インデックス、である。フルフェナム酸は全ての細胞において１０マイクロモルにてアッセイされ、マロトキシンは１６マイクロモルでアッセイされた。グラフＡ、ＢおよびＣには、それぞれ、ネガティブコントロールして、賦形剤（すなわちバッファ）に反応する細胞の正味ゼロのＤＭＲシグナルのみが含まれた。（Ｅ）はＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電流における５０マイクロモルのフルフェナム酸の効果を示す電気生理学的ダイアグラムである。グレーの曲線はフルフェナム酸の添加前におけるＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電気生理学的記録を示し、黒の曲線はフルフェナム酸の添加後における当該細胞の電気生理学的記録を示した。（ａ、ｂ、ｃ）はここに定義されているｈＥＲＧ電流の測定結果の３つの段階を示した。
【図６】図６Ａ−図６Ｅは、例示的なｈＥＲＧ経路活性剤であるジフルニサルのプロファイルを示す。ジフルニサルはプロスタグランジン合成酵素阻害剤としても知られている。（Ａ）大腸癌細胞株ＨＴ２９におけるジフルニサルのＤＭＲシグナル、（Ｂ）ｈＥＲＧを安定して発現する人工のＨＥＫ２９3細胞株（ＨＥＫ−ｈＥＲＧ）におけるジフルニサルのＤＭＲシグナル、（Ｃ）天然のＨＥＫ２９３細胞におけるジフルニサルのＤＭＲシグナル、（Ｄ）ＨＴ２９及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞株のマロトキシンＤＭＲシグナルに対するジフルニサルの変調インデックス、である。ジフルニサルは全ての細胞において１０マイクロモルにてアッセイされ、マロトキシンは１６マイクロモルでアッセイされた。グラフＡ、ＢおよびＣには、それぞれ、ネガティブコントロールして、賦形剤（すなわちバッファ）に反応する細胞の正味ゼロのＤＭＲシグナルのみが含まれた。（Ｅ）はＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電流における５０マイクロモルのジフルニサルの効果を示す電気生理学的ダイアグラムである。グレーの曲線はジフルニサルの添加前におけるＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電気生理学的記録を示し、黒の曲線はジフルニサルの添加後における当該細胞の電気生理学的記録を示した。
【図７】図７Ａ−図７Ｅは、例示的なｈＥＲＧ活性剤である化合物Ｂのプロファイルを示す。（Ａ）大腸癌細胞株ＨＴ２９における化合物ＢのＤＭＲシグナル、（Ｂ）ｈＥＲＧを安定して発現する人工のＨＥＫ２９3細胞株（ＨＥＫ−ｈＥＲＧ）における化合物ＢのＤＭＲシグナル、（Ｃ）天然のＨＥＫ２９３細胞における化合物ＢのＤＭＲシグナル、（Ｄ）ＨＴ２９及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞株のマロトキシンＤＭＲシグナルに対する化合物Ｂの変調インデックス、である。化合物Ｂは全ての細胞において１０マイクロモルにてアッセイされ、マロトキシンは１６マイクロモルでアッセイされた。グラフＡ、ＢおよびＣには、それぞれ、ネガティブコントロールして、賦形剤（すなわちバッファ）に反応する細胞の正味ゼロのＤＭＲシグナルのみが含まれた。（Ｅ）はＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電流における５０マイクロモルの化合物Ｂの効果を示す電気生理学的ダイアグラムである。グレーの曲線は化合物Ｂの添加前におけるＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電気生理学的記録を示し、黒の曲線は化合物Ｂの添加後における当該細胞の電気生理学的記録を示した。
【図８】図８Ａ−図８Ｈは一組のｈＥＲＧ活性剤の電気生理学的プロファイルを示している。（Ａ）から（Ｈ）は、化合物Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、及びＵである。電気生理学的ダイアグラムはＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電流におけるこれら化合物の効果を示す。グレーの曲線は化合物の添加前におけるＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電気生理学的記録を示し、黒の曲線は化合物の添加後における当該細胞の電気生理学的記録を示した。（ｂ）はｈＥＲＧ電流のテール電流を反映する段階を示している。全ての化合物は５０マイクロモルにてアッセイされた。
【図９】図９は周知のｈＥＲＧ遮断剤であるドフェチリドの電気生理学的プロファイルを示す。当該電気生理学的ダイアグラムはＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電流における１００ｎＭのドフェチリドの効果を示す。グレーの曲線９１０はドフェチリドの添加前におけるＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞の電気生理学的記録を示し、黒の曲線９２０はドフェチリドの添加後における当該細胞の電気生理学的記録を示した。（ｂ）はｈＥＲＧ電流のテール電流を反映する段階を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
ｈＥＲＧイオンチャネルは大きな四量体のタンパク質であり、細胞背景（バックグラウンド）によっては他のタンパク質と錯体（複合体）を形成し得る。従って、当該細胞背景はｈＥＲＧの変調を観察するアッセイに影響を与えることがある。ここに開示されたアッセイは、３種類の細胞及び細胞株、すなわち、天然のｈＥＲＧ発現細胞株、ｈＥＲＧを発現しない天然の細胞株、及びｈＥＲＧを発現するように操作された人工の細胞株を使用する。無標識（ラベルフリー）バイオセンサの細胞アッセイは光学バイオセンサを用いたＤＭＲシグナル又は電気バイオセンサを用いたインピーダンスシグナルなどの汎用の読み出し情報に依存しており、かつ当該バイオセンサのシグナルはしばしば対象となる標的（例えばｈＥＲＧチャネル）におけるシステム細胞生態情報を含んでいるため、単一のｈＥＲＧ発現細胞を用いたスクリーニング検査結果には高い確率で偽陽性のものが存在し得る。３つの細胞型を結合して無標識バイオセンサを用いたｈＥＲＧ変調を検出することは、偽陽性を大きく減少させるだけでなく、同定されたｈＥＲＧ変調電位の質を高めることができる。さらに、当該３つの細胞株を使用することによって、ｈＥＲＧ特有の変調剤（モジュレータ）の高い分解能の評価が作成される。また、ここに開示されたアッセイはマロトキシンなどのｈＥＲＧ活性剤を使用し、これによってｈＥＲＧを発現する細胞株の両方におけるｈＥＲＧ活性剤に誘発されたＤＭＲシグナルに対する分子の変調インデックスを生成する。当該変調インデックスはｈＥＲＧチャネル又はｈＥＲＧチャネルのシグナル伝達錯体（複合体）上において作用する分子の作用モードを分類することに使用されることもできる。
【００１８】
例えばトール（toll）受容体などの他のイオンチャネルのような他のタンパク質は、３つの異なる細胞株及び既知の変調剤を用いて、同様にスクリーニング検査されかつ特性化（キャラクタライズ）されることができる。
【００１９】
ある無標識の細胞アッセイ方法において、その１つは細胞株、標的、活性剤（すなわち変調剤）、及びマーカを有している。これらの組合せは他の変調剤のアッセイに使用されることができる（例えば、国際公開第２００６１０８１８３号（発明者Fang, Y.等、発明の名称「Label-free biosensors and cells」）を参照）。
【００２０】
典型的な無標識の細胞アッセイ標的法は高い偽陽性を有している。経路の無標識細胞アッセイ試験はこれらに含まれる経路及び標的に関する情報を得るが、標的レベルにおいていくつかの特異性は失われる。ここに開示された方法は、無標識の標的アッセイ及び無標識の経路アッセイから得られる情報を使用して標的レベルにおいて高い特異性のスクリーニング検査結果を実現する。
【００２１】
ここに開示された方法は、特定の標的において、例えば米国出願第１２／６２３，７０８号（発明者Fang, Y.等、発明の名称「Methods of creating an index」）及び米国出願第１２／６２３，６９３号（発明者Fang, Y.等、発明の名称「Methods for Characterizing Molecules」）に開示されているような従来の無標識の統合された薬理方法よりも高い分解能の評価を提供する。米国出願第１２／６２３，６９３号（発明者Fang, Y.等、発明の名称「Methods for Characterizing Molecules」）に開示されている方法においては、マーカパネルが選択されてアッセイされており、この情報は当該マーカに接続された細胞の経路に関する情報を提供する。ここに開示された方法は、特定の標的における適切な経路に基づいて同定された細胞を使用する。特定の実施例において、米国出願第１２／６２３，６９３号（発明者Fang, Y.等、発明の名称「Methods for Characterizing Molecules」）に開示された方法に使用されている情報は、ここに開示された方法に使用され得る情報及び同定された細胞を提供するのに使用されることができる。
【００２２】
ここに開示されているのは従来未知であった活性、特にｈＥＲＧチャネルにおける活性を有する分子である。ここに開示されているのはｈＥＲＧイオンチャネルの無標識バイオセンサの細胞アッセイにおいて試験された３０００を超える化合物である。これら化合物は、BioMol 640というＦＤＡ承認済み薬剤ライブラリ、BioMol 80というキナーゼ阻害剤ライブラリ、BioMol ActiComライブラリ、コーニング社内参照化合物ライブラリ、及びコーニング社内化合物ライブラリを含む。ここに開示された方法に従って、これら化合物のサブセットはｈＥＲＧ変調剤として同定され、ｈＥＲＧ変調剤は、ｈＥＲＧ電流への影響の有無にかかわらずｈＥＲＧシグナル伝達を活性化するｈＥＲＧシグナル伝達活性剤、ｈＥＲＧ阻害剤、及びｈＥＲＧ活性剤の３つのクラスに分類されることができる。
【００２３】
従来のｈＥＲＧイオンチャネルアッセイは、イオン吸収アッセイを使用してＲｂ^＋フラックスなどのイオンフラックスをアッセイすること、すなわちパッチクランプ法を用いてｈＥＲＧ電流を直接アッセイすることを含む。従来から、Ｒｂ＋フラックス及び／又はｈＥＲＧ電流を増加させる分子はｈＥＲＧ活性剤と称され、Ｒｂ＋フラックス及び／又はｈＥＲＧ電流を阻害する分子はｈＥＲＧ阻害剤と称されている。ここに開示された方法は、ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤及びｈＥＲＧ経路活性剤を含むｈＥＲＧ活性剤の異なるクラスを同定した。これらｈＥＲＧ活性剤は無標識バイオセンサの細胞アッセイを用いた場合の細胞における検出可能なバイオセンサシグナルとなる場合とならない場合がある。ｈＥＲＧシグナル伝達錯体又はｈＥＲＧを介したｈＥＲＧ発現細胞において検出可能なバイオセンサシグナルとなるｈＥＲＧ活性剤は無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤とも称される。ｈＥＲＧ経路活性剤は、細胞内においてｈＥＲＧ又はｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体を介してもたらされる細胞シグナル伝達を引き起こす分子である。これらｈＥＲＧ経路活性剤はｈＥＲＧシグナル伝達活性剤とも称される。ｈＥＲＧ経路活性剤は、従来的には、ｈＥＲＧイオンフラックス及び／又はｈＥＲＧ電流を増強するものについてはｈＥＲＧ活性剤、阻害するものについてはｈＥＲＧ阻害剤とすることができる。本願のデータが開示するのは、従来は未知であった、ｈＥＲＧチャネルを介したイオンチャネルフラックス活性に依存するｈＥＲＧの細胞シグナル伝達活性又は依存しないｈＥＲＧの細胞シグナル伝達活性が存在するということである。ｈＥＲＧ経路活性剤は、ｈＥＲＧチャネルの直下又はｈＥＲＧチャネルに関するシグナル伝達錯体の下流にある特定の経路の活性化を導出し、そして細胞内の検出可能なバイオセンサシグナルを誘発することができる。これら経路は、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）、プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）、ＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）の経路、インテグリン経路、又はこれら経路の組合せを含み得る。
【００２４】
本願のデータが明示することの１つは、プロドラッグ及び薬剤が、従来のｈＥＲＧイオンフラックス活性剤として、またｈＥＲＧ経路活性剤として、ｈＥＲＧチャネルに異なった影響を及ぼし得るということである。
【００２５】
マロトキシンは市販されており、無標識バイオセンサのｈＥＲＧ経路活性剤であり、ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤である。
【００２６】
さらに同定されたのは、フルフェナム酸がｈＥＲＧ経路活性剤であり、無標識バイオセンサのｈＥＲＧ経路活性剤であり、弱いｈＥＲＧイオンフラックス活性剤であり、弱いｈＥＲＧ電流活性剤であることである。
【００２７】
さらに同定されたのは、ＲＰＲ２６０２４３、ＮＳ１６４３、ＮＳ３６２３、ＰＤ−１１８０５７、ＰＤ−３０７２４３、Ａ−９３５１４２、ニフルム酸、及びジフルニサルが無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤であることである。
【００２８】
ここに開示されているのは、ｈＥＲＧ変調剤、ｈＥＲＧ活性剤、無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤、ｈＥＲＧ経路活性剤、ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤、ｈＥＲＧ阻害剤、ｈＥＲＧ経路阻害剤、及びｈＥＲＧイオンチャネル阻害剤である。これらクラス及び各々の特定の例は例えばここに開示された方法において使用されることができる。
【００２９】
ここに開示された方法、並びに当該方法において使用される組成物及び化合物は、材料、物質、分子、及びリガンドなどの複数の異なるクラスから生ずることができる。さらに、例えばｈＥＲＧ活性化用のマーカとしてのマロトキシンなど、マーカと呼ばれる無標識バイオセンサアッセイ特有のこれらクラスの特定のサブセットも開示されている。
【００３０】
さらに、分子混合物などのこれらクラスの混合物も開示されており、かつここに開示された方法に使用される。
【００３１】
ある方法においては、既知の分子のみならず未知の分子、試験分子、薬剤候補分子を使用することができる。
【００３２】
ある方法又は状況においては、変調が行われ又は変調剤がその機能を果たす。同様に、既知の変調剤が使用される。
【００３３】
ある方法においては、組成物のみならず細胞が関与しており、本明細書に記載しているように細胞が培養され、細胞培養物を使用することができる。
【００３４】
ここに開示された方法はバイオセンサを使用するアッセイを含む。特定のアッセイにおいては、バイオセンサはアゴニズムモード又はアンタゴニズムモードにおいて実行される。しばしば、当該アッセイは、材料、物質、又は分子などの１つ以上のクラスで細胞を処理することを含む。本明細書に記載しているように、物質はさらに処理されることができる。
【００３５】
ある方法においては、例えば細胞と分子とを接触させるステップを実行することができる。ここに開示された方法において、ＤＭＲ反応などのバイオセンサ反応として表現される細胞反応などの反応が検出されることができる。これらの反応及び他の反応はアッセイされることができる。特定の方法においては、バイオセンサからのシグナルはロバストなバイオセンサシグナルすなわちロバストなＤＭＲシグナルである。
【００３６】
ここに開示された方法は、無標識バイオセンサを使用して、一次プロファイル、二次プロファイル、及び変調プロファイルなどのプロファイルを生成することができる。これらプロファイル及び他のプロファイルは、分子に関するマーキング判定に使用されることができ、例えば本明細書に記載されているクラスに対して使用されることができる。
【００３７】
さらに、ここに開示されているのは、分子、細胞、材料、又はここに開示された物質などの化合物又は組成物のライブラリ及びパネルである。さらに、マーカパネル及び細胞パネルなどの特定のパネルが開示されている。
【００３８】
ここに開示された方法は様々な特徴を使用し、当該特徴は、バイオセンサシグナル、ＤＭＲシグナル、正規化すること、コントロール、ポジティブコントロール、変調比較、インデックス、バイオセンサインデックス、ＤＭＲインデックス、分子バイオセンサインデックス、分子ＤＭＲインデックス、分子インデックス、変調剤バイオセンサインデックス、変調剤ＤＭＲインデックス、分子変調インデックス、既知の変調剤バイオセンサインデックス、既知の変調剤ＤＭＲインデックス、マーカバイオセンサインデックス、マーカＤＭＲインデックス、マーカのバイオセンサインデックスを変調すること、ＤＭＲシグナルを変調すること、増強すること、及びインデックスの類似性である。
【００３９】
ここに開示されている組成物、化合物、又は他のものはここに開示されている方法によって特性化されることができる。
【００４０】
ここに開示されているのは、より高い、阻害、及びこれらと同様の用語のような特性化に依存する方法である。
【００４１】
特定の方法においては、受容体すなわち細胞標的が使用される。特定の方法はシグナル伝達経路、分子処理された細胞、及び他の細胞プロセスに関する情報を提供することができる。
【００４２】
ある実施例においては、特定の効力又は効能が特性となり、その直接の作用（例えば薬剤候補分子の）がアッセイされることができる。
【００４３】
ここに開示された方法は、サンプル上で又はサンプルと共に実行されることができる。
【００４４】
Ａ．定義
ここに開示されている様々な実施例は、図がある場合には図を参照して詳細に説明される。様々な実施例に対する参照物は本開示の範囲を限定するものではなく、特許請求の範囲によってのみ限定される。さらに、本明細書に記載されている例は限定的なものではなく、特許請求の範囲の実施可能な多くの実施例のいくつかを記載しているに過ぎない。
【００４５】
１．「不定冠詞、単数形（A）」
本明細書及び特許請求の範囲に使用されている「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」等の単数系の用語は明示されない限り複数の対象を含む。従って、例えば「薬剤担体」は２つ以上の担体の混合物等を含む。
【００４６】
２．「省略形（Abbreviation）」
当業者には広く知られている省略形が使用されることがある（例えば、時間に対する「ｈ」又は「ｈｒ」、グラムに対する「ｇ」又は「ｇｍ」、ミリリットルに対する「ｍＬ」、室温に対する「ｒｔ」、ナノメートルに対する「ｎｍ」、モルに対する「Ｍ」など）。
【００４７】
３．「約（About）」
例えば、組成物内の成分数、濃度、体積、処理温度、処理時間、収率、流速、圧力などの値、及びその範囲であって本開示の実施例に記載されているものに「約」が修飾されている場合、その数量は変化することを示し、当該変化は、例えば、化合物、組成物、濃縮物、又は使用する製剤を作製するのに使用される典型的な測定手順及び取扱手順によって、これら手順における故意でない間違いによって、生成物、原料、出発材料の純度、又は本方法を実施するのに使用される成分の差によって、及びこれらと同様の要因によって生じ得る。さらに、用語「約」は特定の初期濃度又は初期混合における組成物又は製剤の老化によって変化する量及び特定の初期濃度又は初期混合における組成物又は製剤の混合又は処理によって変化する量を含む。用語「約」が修飾されているかに関わらず、特許請求の範囲はこれら数量に均等なものを含む。
【００４８】
４．「アッセイすること（Assaying）」
アッセイすること、アッセイする等の用語は細胞又は分子などの物質の特性を判定するための分析をいい、当該特性は例えばリガンド又はマーカなどの１つ以上の外因性刺激剤に刺激された際の細胞の光学反応又は生体インピーダンス反応の有無、量、範囲、速度、動態、又は種類である。刺激剤に対する細胞反応のバイオセンサシグナルを生成することがアッセイであってもよい。
【００４９】
５．「反応をアッセイすること（Assaying the response）」
「反応をアッセイすること」等の用語は、当該反応を特性化する手段を使用することを意味する。例えば、分子が細胞に接触させられる場合、当該分子にさらされた当該細胞の反応をアッセイするのにバイオセンサを使用することができる。
【００５０】
６．「アゴニズムモード及びアンタゴニズムモード（Agonism and antagonism mode）」
アゴニズムモード等の用語は、例えばＤＭＲシグナルなどのバイオセンサシグナルのきっかけとなる分子の能力を判定するために細胞が分子にさらされるようなアッセイをいい、一方、アンタゴニズムモードは、マーカに反応する細胞のバイオセンサシグナルを変調する分子の能力を判定するために細胞が分子の存在するマーカにさらされるようなアッセイをいう。
【００５１】
７．「バイオセンサ（Biosensor）」
バイオセンサ等の用語は、生物学的成分に物理化学的検出成分を組み合わせた検体を検出するデバイスをいう。典型的な場合バイオセンサは３つの部分からなり、当該部分は、生物学的成分又は要素（例えば、組織、微生物、病原体、細胞、又はこれらの組合せ）、検出要素（光学的、圧電的、電気化学的、温度的、又は磁気的などの物理化学的手法において機能するもの）、及び両成分に関するトランスデューサである。当該生物学的成分又は要素は、例えば、生細胞、病原体、又はこれらの組合せであることができる。実施例において、光学バイオセンサは、生細胞、病原体、又はこれらの組合せにおける分子認識事象又は分子刺激事象を定量化可能なシグナルへ変換する光学トランスデューサを含み得る。
【００５２】
８．「バイオセンサ反応（Biosensor response）」
「バイオセンサ反応」、「バイオセンサ出力シグナル」、「バイオセンサシグナル」等の用語は、細胞を有するセンサシステムの細胞反応に対する応答をいう。バイオセンサは細胞反応を定量化可能なセンサ反応へ変換する。バイオセンサ反応は、ＲＷＧ又はＳＰＲなどの光学バイオセンサによって測定された刺激に対する光学反応又は電気バイオセンサによって測定された刺激に対する細胞の生体インピーダンス反応である。本開示の実施例において、バイオセンサ反応は刺激に対する細胞反応に直結しているため、当該バイオセンサ及び当該細胞反応は同じ意味で使用され得る。
【００５３】
９．「バイオセンサシグナル（Biosensor signal）」
「バイオセンサシグナル」等の用語は、バイオセンサを用いて測定された細胞のシグナルであって、刺激に対する細胞の反応によって生成されたものをいう。
【００５４】
１０．「細胞（Cell）」
細胞等の用語は、半透膜によって外部を囲まれた原形質の小さく通常は顕微鏡でしか見ることができない原形質のかたまりをいい、細胞は選択的に１つ以上の核及び様々なオルガネラを含み、細胞は生命体の全ての基本的な働きを単独で又は他の同様のかたまりと相互作用して行うことができ、細胞は独立して働くことができる生命体の最小の構造単位を形成し、細胞は人工の細胞構造、細胞モデルシステム、及び同様の人工細胞系を含む。
【００５５】
細胞は異なる細胞型を含むことができ、当該細胞型は例えば、特定の疾病に関する細胞、特定の起源に由来する細胞型、特定の標的に関する細胞型、又は特定の生理機能に関する細胞型である。さらに、細胞は、天然の細胞、人工の細胞、形質転換細胞、不死化細胞、一次細胞、胚性幹細胞、成体幹細胞、癌幹細胞、又は細胞から派生した幹細胞であってもよい。
【００５６】
ヒトは約２１０の既知の異なる細胞型からなる。どのように細胞が準備されるか（例えば、人工的に作り出された、形質転換された、不死化された、又はヒトの体から新鮮分離されたなど）、及び、どこで（例えば、異なる年齢のヒトの体又は異なる病期のヒトの体など）細胞が得られたかを考慮すると、当該細胞型の数はほぼ無限である。
【００５７】
１１．「細胞培養する（Cell culture）」
「細胞培養する」又は「細胞培養すること」は、管理された状況下において原核細胞又は真核細胞が培養されるプロセスをいう。「細胞培養する」は、多細胞真核生物、特に動物細胞から派生した細胞を培養することだけでなく、複合組織及び複合器官を培養することもいう。
【００５８】
１２．「細胞パネル（Cell panel）」
「細胞パネル」等の用語は、少なくとも２つの細胞型を含むパネルをいう。当該細胞はここに開示されたものの任意の組合せであり得る。
【００５９】
１３．「細胞反応（Cellular Response）」
「細胞反応」等の用語は、刺激に対する細胞の応答をいう。
【００６０】
１４．「細胞プロセス（Cellular process）」
「細胞プロセス」等の用語は細胞内において又は細胞によって起こる応答をいう。細胞プロセスの例は、増殖、アポトーシス、壊死、分化、細胞シグナル変換、極性変化、移動、又は形質転換を含むが、これらに限定されない。
【００６１】
１５．「細胞標的（Cellular target）」
「細胞標的」等の用語はタンパク質又は核酸などのバイオポリマであって、当該バイオポリマの活性が外部刺激によって変形されることができるものをいう。細胞標的は、酵素、キナーゼ、イオンチャネル、及び受容体のような最も普及しているタンパク質である。
【００６２】
１６．「特性化すること（Characterizing）」
「特性化すること」等の用語は、リガンド、分子、マーカ、又は細胞などの物質の特徴に関する情報を収集することをいい、例えばリガンド、分子、又は細胞に対するプロファイルを得ることをいう。
【００６３】
１７．「含む（Comprise）」
本明細書及び特許請求の範囲を通して、単語「含む」、「含んでいる」、及びその変形は、「含むがこれに限定されない」という意味であり、例えば他の添加物、成分、整数、又はステップを除外するという意味ではない。
【００６４】
１８．「基本的に構成されている（Consisting essentially of）」
実施例において、「基本的に構成されている」とは、例えば、表面組成、バイオセンサ表面上における表面組成、製剤又は組成物を構成又は使用する方法、及び本開示の物質、デバイス、又は装置について説明するものであり、これらが、特許請求の範囲に記載された成分又はステップに加えて、ここに開示されている組成物、物質、装置、及び方法を作製・構成及び使用することに関する基礎的かつ新規な特徴に大きな影響を与えない他の成分又はステップを含み得ることをいい、当該他の成分又はステップは、例えば、特定の反応剤、特定の添加剤若しくは材料、特定の作用物質、特定の細胞若しくは細胞株、特定の表面改質剤若しくは表面調節剤、特定のリガンド候補、又はこれらと同様の変更可能な構造体、材料、若しくはプロセスである。当該本開示の成分又はステップの基礎的な特徴に大きな影響を与え得る項目又は本開示に望ましくない特性を与え得る項目は、例えば、バイオセンサ表面に対する細胞の親和性低下、細胞表面受容体又は細胞内受容体に対する刺激剤の親和性異常、リガンド候補又は同様の刺激剤に対する異常な細胞活性又は逆の細胞活性、及びこれらと同様の特性を含む。
【００６５】
１９．「成分（Components）」
ここに開示されているのは、開示された組成物を準備するのに使用される成分と、本明細書に開示された方法に使用される組成物自体と、である。これら及び他の材料は本明細書に開示されており、かつ、これら材料の組合せ、サブセット、相互作用、グループ等が開示されている場合において、これら分子の各々、集合的組合せ、及びその置換のうちの特定のものが明確に開示されていなくても、その各々は詳細に検討されて本明細書に記載されているものとする。従って、分子クラスＡ、Ｂ、及びＣと分子クラスＤ、Ｅ、及びＦとが開示され、分子の組合せ例Ａ−Ｄが開示されているならば、各々が個別に記載されていない場合であってもその各々は個別かつ集合的に検討されており、すなわち組合せＡ−Ｅ、Ａ−Ｆ、Ｂ−Ｄ、Ｂ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、Ｃ−Ｄ、Ｃ−Ｅ、及びＣ−Ｆも開示されていることを意味する。同様にこれらのサブセット又は組合せも開示されているものとする。従って、例えば、Ａ−Ｅ、Ｂ−Ｆ、及びＣ−Ｅのサブグループも開示されているものとする。このコンセプトは、ここに開示された組成物を作製及び使用する方法におけるステップ（これらに限定されない）を含む本願の全ての特徴に適用される。従って、実行されることができる様々な追加ステップが存在するならば、これら追加ステップの各々は開示された方法の任意の特定の実施例又は実施例の組合せに伴って実行されることができるものとする。
【００６６】
２０．「接触させること（Contacting）」
接触させること等の用語は、少なくとも２つのもの、例えば分子、細胞、マーカ、化合物若しくは組成物、少なくとも２つの組成物、又は生成物若しくは機械を含むこれらの任意のものの間に分子相互作用が起こり得る場合において、分子相互作用が起こり得るように近接させることを意味する。例えば、接触させることは、少なくとも２つの組成物、分子、生成物、又は物質を、接触させるすなわちこれらが近接して混合又は触れるような状態にさせることをいう。例えば、組成物Ａの溶液と培養された細胞Ｂとを有しており、組成物Ａの溶剤を培養された細胞Ｂ上に注入することは、組成物Ａを細胞培養物Ｂに接触させることである。細胞をリガンドに接触させることは、リガンドを、当該細胞に対して、当該細胞が当該リガンドへのアクセスを有する状態を保証させることである。
【００６７】
ここに開示されている全てのものは、他のものに接触することができるものとする。例えば、細胞は、マーカすなわち分子、バイオセンサ等に接触することができる。
【００６８】
２１．「化合物及び組成物（Compounds and compositions）」
化合物及び組成物は当該技術分野におけるその標準的な意味を有している。特定の指定物、例えば分子、物質、マーカ、細胞、又は試薬であってこれら指定物を含むもの、これら指定物で構成されているもの、及びこれら指定物で基本的に構成されているものが開示されているものとする。従って、特定の指定マーカが使用される場合、当該マーカを含む組成物、当該マーカで構成されている組成物、又は当該マーカで基本的に構成されている組成物も開示されているものとする。特定の指定物が作製される場合、当該指定物の化合物も開示されているものとする。例えば、ＥＧＦなどの特定の生物学的材料が開示されているならば、化合物の形態をとったＥＧＦも開示されているものとする。
【００６９】
２２．「コントロール（Control）」
「コントロール」、「コントロールレベル」、又は「コントロール細胞」等の用語は、変化が測定される基準として定義されるものをいい、例えば、コントロールは実験によるものではなく所定のパラメータセットによるものであり、又はコントロールは前処理レベル若しくは後処理レベルに基づくものである。これらは試験の実行と同時、試験の実行前、若しくは試験の実行後に実行されるものであるか、又は予め決められた基準であり得る。例えば、コントロールは、並行試験として主体物、客体物、試薬等が試験手順、試験用の作用物質、試験変数等の不備・不作為を除いて処理される場合の試験結果、及び、試験効果の判断における比較基準として使用される試験結果をいう。従って、コントロールは、手順、作用物質、変数等に関する効果を判定するのに使用されることができる。例えば、細胞上の試験分子の効果が対象であるならば、ａ）当該分子の存在下における当該細胞の特性を記録し、ｂ）ａを実行した後に既知の活性若しくは活性不足を備えたコントロール分子又はコントロール組成物（例えばアッセイバッファ溶液（賦形剤））を追加してその効果を記録し、そして試験分子のコントロールに対する効果を比較することができる。特定の状況においては、一旦コントロールが実行されると当該コントロールは基準として使用されることができ、再度コントロール実験が行われる必要はなく、他の状況においては、コントロール実験は比較が行われる度に毎回実行されなければならない。
【００７０】
２３．「化学用語（Chemistry terms）」
ａ）「アルキル（alkyl）」
本明細書で使用されている用語「アルキル」は、分岐型又は非分岐型の飽和炭化水素部分をいう。「非分岐型」又は「分岐型」アルキルは、非環状であり、飽和しており、かつ直鎖又は分岐鎖の炭化水素部分であって、１−２４個の炭素、１−２０個の炭素、１−１５個の炭素、１−１２個の炭素、１−８個の炭素、１−６個の炭素、又は１−４個の炭素原子を有するものを含む。さらに、用語「アルキル」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の炭化水素部分を含む。このようなアルキルラジカルの例は、メチル（methyl）、エチル（ethyl）、プロピル（propyl）、ブチル（butyl）、ペンチル（pentyl）、ヘキシル（hexyl）、ヘプチル（heptyl）、オクチル（octyl）、ｎ−プロピル、イソプロピル（iso-propyl）、ブチル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、アミル（amyl）、ｔ−アミル、ｎ−ペンチルなどを含む。低級アルキル（lower alkyl）は、非環状であり、飽和しており、かつ直鎖又は分岐鎖の炭化水素残基であって、１−４個の炭素原子を有するもの、すなわちＣ_１−Ｃ_４アルキルを含む。
【００７１】
さらに、本明細書及び特許請求の範囲に亘って使用されている用語「アルキル」は、「非置換（unsubstituted）アルキル」と「置換（substituted）アルキル」の両方を含み、後者は上記のアルキルラジカルに類似したものであって、１つ以上の有機又は無機の置換基にさらに置換されたものを意味する。適切な置換基は、水素、アルキル、アルケニル（alkenyl）、アルキニル（alkynyl）、ヒドロキシル（hydroxyl）、シクロアルキル（cycloalkyl）、ヘテロシクリル（heterocyclyl）、アミノ（amino）、モノ置換（mono-substituted）アミノ、ジ置換（di-substituted）アミノ、非置換若しくは置換アミノ、カルボニル（carbonyl）、ハロゲン（halogen）、スルフヒドリル（sulfhydryl）、スルホニル（sulfonyl）、スルホナト（sulfonato）、スルファモイル（sulfamoyl）、スルホンアミド（sulfonamide）、アジド（azido）、アシルオキシ（acyloxy）、ニトロ（nitro）、シアノ（cyano）、カルボキシ（carboxy）、カルボアルコキシ（carboalkoxy）、アルキルカルボキサミド（alkylcarboxamido）、置換アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミド（dialkylcarboxamido）、置換ジアルキルカルボキサミド、アルキルスルホニル（alkylsulfonyl）、アルキルスルフィニル（alkylsulfinyl）、チオアルキル（thioalkyl）、チオハロアルキル（thiohaloalkyl）、アルコキシ（alkoxy）、置換アルコキシ、ハロアルコキシ（haloalkoxy）、ヘテロアリール（heteroaryl）、置換ヘテロアリール、アリール（aryl）、又は置換アリールを含むが、これらに限定されない。当業者であれば、「アルコキシ」がエステル（ester）を形成するカルボニル置換「アルキル」の置換基であり得ることを理解するであろう。２つ以上の置換基が存在する場合、それらは同一のもの又は異なるものである。有機置換部分は、１−１２個の炭素原子、１−６個の炭素原子、又は１−４個の炭素原子を含み得る。当業者であれば、「アルキル」鎖上で置換された部分それ自体が上記したように必要に応じて置換されることができることを理解するであろう。
【００７２】
ｂ）「アルケニル（alkenyl）」
本明細書で使用されている用語「アルケニル」は、上記アルキルの残基であって、炭化水素鎖の主鎖において少なくとも１つの炭素間二重結合を含むものをいう。その例は、ビニル（vinyl）、アリル（allyl）、２−ブテニル（2-butenyl）、３−ブテニル、２−ペンテニル（2-pentenyl）、３−ペンテニル、４−ペンテニル、２−ヘキセニル（2-hexenyl）３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニル、２−ヘプテニル（2-heptenyl）、３−ヘプテニル、４−ヘプテニル、５−ヘプテニル、６−ヘプテニル等を含むが、これらに限定されない。用語「アルケニル」は直鎖及び分岐鎖のジエン（dienes）及びトリエン（trienes）を含む。
【００７３】
ｃ）「アルキニル（alkynyl）」
本明細書で使用されている用語「アルキニル」は上記アルキルの残基であって、炭化水素鎖の主鎖において少なくとも１つの炭素間三重結合を含むものをいう。その例は、エチニル（ethynyl）、１−プロピニル（1-propynyl）、２−プロピニル、１−ブチニル（1-butynyl）、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル（1-pentynyl）、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル（1-hexnyl）、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシニル等を含むが、これらに限定されない。用語「アルキニル」はジイン（diynes）及びトリイン（triynes）を含む。
【００７４】
ｄ）「シクロアルキル（cycloalkyl）」
本明細書で使用されている用語「シクロアルキル」は、飽和炭化水素構造であってその構造が少なくとも１つの環（ring）を形成するように閉じているものをいう。シクロアルキルは典型的な場合３−８個の環炭素を含む環状ラジカルであり、例えばシクロプロピル（cyclopropyl）、シクロブチル（cyclobutyl）、シクロペンチル（cyclypentyl）、シクロペニル（cyclopenyl）、シクロヘキシル（cyclohexyl）、シクロヘプチル（cycloheptyl）等である。シクロアルキルラジカルは多環（multicyclic）のものであってもよく、合計３−１８個の炭素、好ましくは４−１２個の炭素、又は５−８個の炭素を含み得る。その例は、デカヒドロナフチル（decahydronapthyl）、アダマンチル（adamantyl）等のラジカルを含む多環シクロアルキルである。
【００７５】
さらに、本明細書及び特許請求の範囲に亘って使用されている用語「シクロアルキル」は、「非置換シクロアルキル」と「置換シクロアルキル」の両方を含み、後者は上記のシクロアルキルラジカルに類似したものであって、１つ以上の有機又は無機の置換基にさらに置換されたものを意味する。シクロアルキルは、ヒドロキシル、シクロアルキル、アミノ、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、非置換アミノ若しくは置換アミノ、カルボニル、ハロゲン、スフルヒドリル（sulfhydryl）、スルホニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、アジド、アシルオキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、カルボアルコキシ、アルキルカルボキサミド、置換アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミド、置換ジアルキルカルボキサミド、アルキルスルホニル、アルキルスルフィニル、チオアルキル、チオハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロアルコキシ、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アリール、又は置換アリールを含むが、これらに限定されない。シクロアルキルが２つ以上の置換基に置換される場合、それらは同一のもの又は異なるものである。当該有機の置換基は１−１２個の炭素原子、１−６個の炭素原子、又は１−４個の炭素原子を含み得る。
【００７６】
ｅ）「シクロアルケニル（cycloalkenyl）」
本明細書で使用されている用語「シクロアルケニル」は、上記シクロアルキルラジカルであって、少なくとも１つの炭素間二重結合を含むものをいう。その例は、シクロプロペニル（cyclopropenyl）、１−シクロブテニル（cyclobutenyl）、２−シクロブテニル、１−シクロペンテニル（cyclopentenyl）、２−シクロペンテニル、３−シクロペンテニル、１−シクロヘキシル、２−シクロヘキシル、３−シクロヘキシル等を含むが、これらに限定されない。
【００７７】
ｆ）「アルコキシ（alkoxy）」
本明細書で使用されている用語「アルコキシ」は、上記アルキルの残基であって、酸素原子に直接結合して他の部分に結合するものをいう。その例は、メトキシ（methoxy）、エトキシ（ethoxy）、ｎ−プロポキシ（propoxy）、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ（butoxy）、ｔ−ブトキシ、イソブトキシ等を含むが、これらに限定されない。
【００７８】
ｇ）「アミノ（amino）」
本明細書で使用されている用語「アミノ」は、ゼロ、１、又は２個の有機置換基に置換されたＮラジカルからなる部分であり、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、又はアリールラジカルを含むが、これらに限定されない。２つの置換基がある場合、それらは同一のものか又は異なるものであり得る。アミノ基の例は、−ＮＨ_２、メチルアミノ（−ＮＨ−ＣＨ_３）、エチルアミノ（−ＮＨＣＨ_２ＣＨ_３）、ヒドロキシエチルアミノ（−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ）、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノ、ジエチルアミノ等を含む。
【００７９】
ｈ）「モノ置換アミノ（mono-substituted amino）」
本明細書で使用されている用語「モノ置換アミノ」は、置換アルキル、シクロアルキル、アリール、又はアリールアルキル（arylalkyl）（これらに限定されない）を含む１つの有機置換基に置換されたＮＨラジカルを含む部分をいう。モノ置換アミノ基の例は、メチルアミノ（methylamino）（−ＮＨ−ＣＨ_３）、エチルアミノ（ethylamino）（−ＮＨＣＨ_２ＣＨ_３）、ヒドロキシエチルアミノ（hydroxyethylamino）（−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ）等を含む。
【００８０】
ｉ）「ジ置換アミノ（di-substituted amino）」
本明細書で使用されている用語「ジ置換アミノ」は、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、又はアリールアルキル（これらに限定されない）から選択された同一又は異なる２つの有機ラジカルに置換された窒素原子を含む部分をいい、用語の定義はここに記載されているものと同じである。そのいくつかの例はジメチルアミノ（dimethylamino）、メチルエチルアミノ（methylethylamino）、ジエチルアミノ（diethylamino）等を含む。
【００８１】
ｊ）「アジド（azide）」
本明細書で使用されている用語「アジド（azide）」、「アジド基（azido）」、及びその変形した用語は、一価の基−Ｎ_３又は一価のイオン−Ｎ_３を含む部分又は化合物をいう。
【００８２】
ｋ）「ハロアルキル（haloalkyl）」
本明細書で使用されている用語「ハロアルキル」は、上記アルキルの残基であって、１つ以上のハロゲン、好ましくはフッ素、例えばトリフルオロメチル（trifluoromethyl）、ペンタフルオロエチル（pentafluoroethyl）等に置換されたものをいう。
【００８３】
ｌ）「ハロアルコキシ（haloalkoxy）」
本明細書で使用されている用語「ハロアルコキシ」は、上記ハロアルキルの残基であって、酸素に直接結合してトリフルオロメトキシ（trifluoromethoxy）、ペンタフルオロエトキシ（pentafluoroethoxy）等を形成するものをいう。
【００８４】
ｍ）「アシル（acyl）」
本明細書で使用されている用語「アシル」は１−８個の炭素を含むＲ基を有するＲ−Ｃ（Ｏ）−残基をいう。用語「アシル」は、ハロゲン化アシル（acyl halide）のＲ−（Ｏ）−ハロゲンを含む。その例は、ホルミル（hormyl）、アセチル（acetyl）、プロピオニル（propionyl）、ブタノイル（butanoyl）、イソブタノイル、ペンタノイル（pentanoyl）、ヘキサノイル（hexanoyl）、ヘプタノイル（heptanoyl）、ベンゾイル（benzoyl）、天然アミノ酸若しくは非天然アミノ酸などを含むが、これらに限定されない。
【００８５】
ｎ）「アシルオキシ（acyloxy）」
本明細書で使用されている用語「アシルオキシ」は上記アシルラジカルが酸素に直接結合してＲ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−残基を形成したものをいう。その例はアセチルオキシ（acetyloxy）、プロピオニルオキシ（propionyloxy）、ブタノイルオキシ（butanoyloxy）、イソブタノイルオキシ、ベンゾイルオキシ（benzoyloxy）等を含むが、これらに限定されない。
【００８６】
ｏ）「アリール（aryl）」
本明細書で使用されている用語「アリール」は６−１８個の炭素、好ましくは６−１２個の炭素を含む環ラジカルであって、その中に少なくとも１つの芳香族残基を含むものをいう。当該アリールラジカルの例はフェニル（phenyl）、ナフチル（naphthyl）、及びイソクロマン（isochroman）ラジカルを含む。さらに、本明細書及び特許請求の範囲に亘って使用されている用語「アリール」は「非置換アリール」と「置換アリール」の両方を含み、後者は上記アリール環ラジカルであって１つ以上、好ましくは１−３個の有機又は無機の置換基に置換されたものを意味する。当該置換基は、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシル、シクロアルキル、アミノ、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、非置換若しくは置換アミノ、カルボニル、ハロゲン、スルフヒドリル、スルホニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、アジド、アシルオキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、カルボアルコキシ、アルキルカルボキサミド、置換アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミド、置換ジアルキルカルボキサミド、アルキルスルホニル、アルキルスルフィニル、チオアルキル、チオハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、複素環（heterocyclic ring）を含むが、これらに限定されない。環の用語はここに定義されている。当該有機の置換基は１−１２個の炭素原子、１−６個の炭素原子、又は１−４個の炭素原子を含み得る。１、２、又は３個のアルキル置換基を含むアリール部分は「アリールアルキル（arylalkyl）」と呼ばれる。当業者であれば、上記したように、「アリール」上で置換された部分それ自体が必要に応じて置換されることができることを理解するであろう。
【００８７】
ｐ）「ヘテロアリール（heteroaryl）」
本明細書で使用されている用語「ヘテロアリール」は、上記アリール環ラジカルであって、少なくとも環炭素のうちの１つ、好ましくはアリール芳香族環の１−３個の炭素が、窒素、酸素、及び硫黄原子（これらに限定されない）を含むヘテロ原子に置換されたものをいう。ヘテロアリール残基の例は、ピリジル（pyridyl）、ビピリジル（bipyridyl）、フラニル（furanyl）、及びチオフラニル（thiofuranyl）残基を含む。置換された「ヘテロアリール」残基は、１つ以上の有機又は無機の置換基、好ましくはアリール基において上記した１−３個の置換基を有することができ、芳香族複素環の炭素原子となる。当該有機の置換基は１−１２個の炭素原子、１−６個の炭素原子、又は１−４個の炭素原子を含み得る。
【００８８】
ｑ）「ヘテロシクリル（heterocyclyl）」
本明細書で使用されている用語「ヘテロシクリル」又は「ヘテロシクリル基」は、３−１６個のメンバ（member）、好ましくは４−１０個のメンバを有する非芳香族の単環又は多環のラジカル構造であって、少なくとも１つの環構造が１−４個のヘテロ原子（例えばO、N、Ｓ、Ｐ等）を含むものをいう。ヘテロシクリル基は、例えば、ピロリジン（pyrrolidine）、オキソラン（oxolane）、チオラン（thiolane）、イミダゾール（imidazole）、オキサゾール（oxazole）、ピペリジン（piperidine）、ピペラジン（piperazine）、モルホリン（morpholine）、ラクトン（lactones）、ラクタム（lactams）、アゼチジノン（azetidinones）、ピロリジノン（pyrrolidinones）、スルタム（sultams）、スルトン（sultones）等を含む。さらに、本明細書及び特許請求の範囲に亘って使用されている用語「ヘテロシクリル」は、「非置換アルキル」と「置換アルキル」の両方を含み、後者は上記アリール環ラジカルであって１つ以上、好ましくは１−３個の有機又は無機の置換基に置換されたものを意味する。当該置換基は、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシル、シクロアルキル、アミノ、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、非置換若しくは置換アミノ、カルボニル、ハロゲン、スルフヒドリル、スルホニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、アジド、アシルオキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、カルボアルコキシ、アルキルカルボキサミド、置換アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミド、置換ジアルキルカルボキサミド、アルキルスルホニル、アルキルスルフィニル、チオアルキル、チオハロアルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、複素環を含むが、これらに限定されない。環の用語はここに定義されている。当該有機の置換基は１−１２個の炭素原子、１−６個の炭素原子、又は１−４個の炭素原子を含み得る。当業者であれば、上記したように、「ヘテロシクリル」上で置換された部分それ自体が必要に応じて置換されることができることを理解するであろう。
【００８９】
ｒ）「ハロゲン（halogen）又はハロ（halo）」
用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ（fluoro）、クロロ（chloro）、ブロモ（bromo）、又はヨード（iodo）基をいう。
【００９０】
ｓ）「部分（moiety）」
「部分」は分子（又は化合物、又は類似物質等）の一部をいう。「官能基（functional group）」は分子における特定の原子群である。部分は官能基であるか、１つ以上の官能基を含み得る。
【００９１】
ｔ）「エステル（ester）」
本明細書で使用されている用語「エステル」は式Ｃ（Ｏ）ＯＡで表されるものをいい、式中のＡは、上記した、アルキル、ハロゲン化（halogenated）アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル（cycloalkenyl）、ヘテロシクロアルキル（heterocycloalkyl）、又はヘテロシクロアルケニル（heterocycloalkenyl）基であり得る。
【００９２】
ｕ）「炭酸塩基（carbonate group）」
本明細書で使用されている用語「炭酸塩基」は式ＯＣ（Ｏ）ＯＲで表されるものをいい、式中のＲは、上記した、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル（aralkyl）、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、又はヘテロシクロアルキル基であり得る。
【００９３】
ｖ）「ケト基（keto group）」
本明細書で使用されている用語「ケト基」は式Ｃ（Ｏ）Ｒで表されるものをいい、式中のＲは、上記した、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、又はヘテロシクロアルキル基であり得る。
【００９４】
ｗ）「アルデヒド（aldehyde）」
本明細書で使用されている用語「アルデヒド」は式Ｃ（Ｏ）Ｈ又は−Ｒ−Ｃ（Ｏ）Ｈで表されるものをいい、式中のＲは、上記したアルキル、アルケニル、アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロシクロアルケニル基であり得る。
【００９５】
ｘ）「カルボン酸（carboxylic acid）」
本明細書で使用されている用語「カルボン酸」は式Ｃ（Ｏ）ＯＨで表されるものをいう。
【００９６】
ｙ）「カルボニル基（carbonyl group）」
本明細書で使用されている用語「カルボニル基」は式Ｃ＝Ｏで表されるものをいう。
【００９７】
ｚ）「エーテル（ether）」
本明細書で使用されている用語「エーテル」は式ＡＯＡ^１で表されるものをいい、式中のＡ及びＡ^１は、それぞれ無関係に、アルキル、ハロゲン化アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、又はヘテロシクロアルケニル基（これらは上記されている）であり得る。
【００９８】
ａａ）「ウレタン（urethane）」
本明細書で使用されている用語「ウレタン」は式ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ´で表されるものをいい、式中のＲ及びＲ´は、それぞれ無関係に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、又はヘテロシクロアルキル基（これらは上記されている）であり得る。
【００９９】
ｂｂ）「シリル基（silyl group）」
本明細書で使用されている用語「シリル基」は式ＳｉＲＲ´Ｒ´´で表されるものをいい、式中のＲ、Ｒ´、Ｒ´´は、それぞれ無関係に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、アルコキシ、又はヘテロシクロアルキル基（これらは上記されている）であり得る。
【０１００】
ｃｃ）「スルホオキソ基（sulfo-oxo group）」
本明細書で使用されている用語「スフホオキソ基」は式Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、ＯＳ（Ｏ）_２Ｒ、又はＯＳ（Ｏ）_２ＯＲで表されるものをいい、式中のＲは、水素、又は上記した、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、又はヘテロシクロアルキル基であり得る。
【０１０１】
２４．「クラスレート（Clathrate）」
本発明に使用される化合物は薬剤ホスト包接（drug-host inclusion）錯体の「クラスレート」のような錯体を形成することがあり、薬剤ホスト包接錯体において、薬剤及びホストは、溶媒和物（solvate）とは異なり、化学量論的又は非化学量論的な量で存在する。さらに、ここで使用されている化合物は、２つ以上の有機成分及び／又は無機成分であって化学量論的又は非化学量論的な量のものを含み得る。得られる錯体は、イオン化されたもの、部分的にイオン化されたもの、又はイオン化されていないものであり得る。当該錯体については、HaleblianによるJ. Pharm. ScL, 64(8), 1269-1288（１９７５年８月）を参照されたい。
【０１０２】
２５．「検出する（Detect）」
検出する等の用語は、本開示の装置及び方法の能力であって、分子又はマーカに誘発された細胞反応を発見又は検知し、かつ異なる分子に対する当該検知された反応を区別する能力をいう。
【０１０３】
２６．「（薬剤候補分子の）直接作用（Direct action）」
「直接作用」等の用語は、細胞上において独立して作用する（薬剤候補分子の）結果をいう。
【０１０４】
２７．「ＤＭＲシグナル（DMR signal）」
「ＤＭＲシグナル」等の用語は、光学バイオセンサを用いて測定された細胞のシグナルであって、刺激の際に細胞の反応によって生成されたものをいう。
【０１０５】
２８．「ＤＭＲ反応（DMR response）」
「ＤＭＲ反応」等の用語は、光学バイオセンサを用いたバイオセンサ反応をいう。ＤＭＲは動的質量再分布すなわち動的な細胞物質の再分布をいう。Ｐ−ＤＭＲはポジティブなＤＭＲ反応であり、Ｎ−ＤＭＲはネガティブなＤＭＲ反応であり、ＰＲ−ＤＭＲは回復した（recovery）Ｐ−ＤＭＲ反応である。
【０１０６】
２９．「薬剤候補分子（Drug candidate molecule）」
薬剤候補分子等の用語は、薬剤又はファーマコフォアとして機能する能力を試験される試験分子をいう。この分子は鉛分子と考慮されてもよい。
【０１０７】
３０．「効能（Efficacy）」
効能等の用語は、理想的又は最適な条件下での所望の効果の大きさを生成する能力をいう。効能は、現実の条件下での変化に関するものである有効性（effectiveness）に関する概念とは区別されるものである。効能は、分子レベル、細胞レベル、組織レベル、又は系レベルにおける反応を起こす能力と受容体占有率との間の関係である。
【０１０８】
３１．「ｈＥＲＧ変調剤（hERG modulator）」
ｈＥＲＧ変調剤（モジュレータ）は、直接的又は間接的にｈＥＲＧイオンチャネルの活性を変調することができる分子である。ｈＥＲＧチャネルの活性を直接変調するｈＥＲＧ変調剤は、ｈＥＲＧチャネルに結合して、ｈＥＲＧ電流、ｈＥＲＧを介したイオンフラックス、及び／又はｈＥＲＧを介した細胞シグナル伝達などのｈＥＲＧ活性に変化を起こす分子である。ｈＥＲＧチャネルの活性を間接的に変調するｈＥＲＧ変調剤は、細胞内のｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体に結合して、ｈＥＲＧ電流、ｈＥＲＧを介したイオンフラックス、及び／又はｈＥＲＧチャネル若しくはｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体を介した細胞シグナル伝達などのｈＥＲＧ活性に変化を起こす分子である。ｈＥＲＧ活性の変化については、変調剤の非存在下での細胞におけるｈＥＲＧチャネル又はｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体の基礎活性が参照される。
【０１０９】
３２．「ｈＥＲＧ活性剤（hERG activator）」
ｈＥＲＧ活性剤は、適切な印加電圧においてｈＥＲＧチャネルを介した電流を増大させる分子、及び／又は適切なＫＣｌ濃縮物の存在下においてｈＥＲＧチャネルを介したイオンフラックスを増大させる分子、及び／又はｈＥＲＧチャネル又は細胞内のｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体を介した細胞シグナル伝達を引き起こす分子である。その例は、マロトキシン、フルフェナム酸、及びニフルム酸である。
【０１１０】
３３．「ｈＥＲＧ経路活性剤（hERG pathway activator）」
ｈＥＲＧ経路活性剤はｈＥＲＧチャネル又は細胞内のｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体を介した細胞シグナル伝達を引き起こす分子である。ｈＥＲＧ経路活性剤は、ｈＥＲＧ電流の変化及び／又はｈＥＲＧチャネルを介したイオンフラックスの変化を引き起こす場合とそうでない場合がある。当該変化は増大する場合と減少する場合がある。例としてはジフルニサル、ＡＧ１２６、及びチルホスチン５１がある。
【０１１１】
３４．「ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤（hERG ion channel activator）」
ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤は、ｈＥＲＧチャネルに直接結合してｈＥＲＧチャネルを活性化し、これによってｈＥＲＧ電流の増加、及び／又はｈＥＲＧイオンフラックスの増加、及び／又はｈＥＲＧチャネルを介した細胞シグナル伝達を導く分子である。その例はマロトキシン、フルフェナム酸、及びニフルム酸である。ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤は細胞シグナル伝達を引き起こす場合と引き起こさない場合とがある。
【０１１２】
３５．「無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤（label-free biosensor hERG activator）」
無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤等の用語は、ｈＥＲＧ活性剤であって、無標識バイオセンサの細胞アッセイによってｈＥＲＧ発現細胞における検出可能なバイオセンサシグナルのきっかけとなることができる分子をいう。当該バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤は、ｈＥＲＧ活性剤、ｈＥＲＧ経路活性剤、又はｈＥＲＧイオンチャネル活性剤であり得る。その例は、マロトキシン、ＲＰＲ２６０２４３、ＮＳ１６４３、ＮＳ３６２３、ＰＤ−１１８０５７、ＰＤ−３０７２４３、Ａ−９３５１４２、フルフェナム酸、ニフルム酸、又はジフルニサルである。
【０１１３】
３６．「ｈＥＲＧ阻害剤（hERG inhibitor）」
ｈＥＲＧ阻害剤は、ｈＥＲＧチャネル又はｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体に結合してｈＥＲＧ電流及び／又はｈＥＲＧイオンフラックスを阻害する分子である。
【０１１４】
３７．「ｈＥＲＧ経路阻害剤（hERG pathway inhibitor）」
ｈＥＲＧ経路阻害剤は、ｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体に結合してｈＥＲＧ電流及び／又はｈＥＲＧイオンフラックスを阻害する分子である。その例はチロシン５１を含む。
【０１１５】
３８．「ｈＥＲＧイオンチャネル阻害剤（hERG ion channel inhibitor）」
ｈＥＲＧイオンチャネル阻害剤は、ｈＥＲＧチャネルに直接結合してｈＥＲＧ電流及び／又はｈＥＲＧイオンフラックスを阻害する分子である。その例はドフェチリドを含む。
【０１１６】
３９．「より高い（Higher）、阻害する（inhibit）等の単語」
より高い、増大する（increase）、上昇する（elevate）、上昇（elevation）等の用語、又はこれらの変形は、例えばコントロールと比較して、基礎レベルよりも大きく（高く）増大（上昇）することをいう。低い（low）、より低い（lower）、低下する（reduce）、減少する（decrease）、低下（reduction）等の用語、又はこれらの変形は、例えばコントロールと比較して、基礎レベルよりも小さく（低く）減少（低下）することをいう。例えば、基礎レベルは、アゴニスト又はアンタゴニストなどの分子を細胞に加える前すなわち当該分子の非存在下における通常の生体内レベルである。阻害する、阻害形態等の用語は低下させる又は抑制することをいう。
【０１１７】
４０．「分子の存在下（In the presence of the molecule）」
「分子の存在下」等の用語は、培養された細胞が分子に接触又はさらされていることをいう。当該接触又はさらすことは刺激剤が細胞に接触する前又は同時に行われ得る。
【０１１８】
４１．「インデックス（Index）」
インデックス等の用語はデータの集合をいう。例えば、インデックスは１つ以上の変調プロファイルを含む一覧、表、ファイル、又はカタログであり得る。インデックスはデータの組合せから生成されることもできる。例えば、ＤＭＲプロファイルは、Ｐ−ＤＭＲ、Ｎ−ＤＭＲ、及びＲＰ−ＤＭＲを含み得る。インデックスは、完成したプロファイルのデータ、Ｐ−ＤＭＲデータ、Ｎ−ＤＭＲデータ、ＲＰ−ＤＭＲデータ、これらの任意のデータ点、又はこれら若しくは他のデータの組合せを用いて生成され得る。インデックスはこのような情報の集合である。典型的な場合、インデックスを比較する際のインデックスは同様のデータ（すなわちＰ−ＤＭＲとＰ−ＤＭＲデータ）である。
【０１１９】
ａ）「バイオセンサインデックス（Biosensor index）」
「バイオセンサインデックス」等の用語は、バイオセンサデータの集合からなるインデックスをいう。バイオセンサインデックスは、一次プロファイル又は二次プロファイルなどのバイオセンサプロファイルの集合であり得る。当該インデックスは任意の種類のデータを含み得る。例えば、プロファイルのインデックスは、Ｎ−ＤＭＲデータ点、Ｐ−ＤＭＲデータ点、その両方、又はインピーダンスデータ点からなることができる。当該インデックスはプロファイル曲線に関する全てのデータ点であってもよい。
【０１２０】
ｂ）「ＤＭＲインデックス（DMR index）」
「ＤＭＲインデックス」等の用語はＤＭＲデータの集合からなるバイオセンサインデックスをいう。
【０１２１】
４２．「既知の分子（Known molecule）」
既知の分子等の用語は、既知の薬理学的／生物学的／生理学的／病態生理学的な活性を有する分子をいい、その正確な作用モードは既知の場合未知の場合がある。
【０１２２】
４３．「既知の変調剤（Known modulator）」
既知の変調剤等の用語は、標的の内の少なくとも１つが既知であり既知の親和性を有する変調剤をいう。例えば、既知の変調剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＰＫＡ阻害剤、ＧＰＣＲアンタゴニスト、ＧＰＣＲアゴニスト、ＰＴＫ阻害剤、抗体を中和させる上皮成長因子受容体、ホスホジエステラーゼ（phosphodiesterase）阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、又はＰＫＣ活性剤であり得る。
【０１２３】
４４．「既知の変調剤のバイオセンサインデックス（Known modulator biosensor index）」
「既知の変調剤のバイオセンサインデックス」等の用語は、既知の変調剤に対して収集されたデータによって生成された変調剤のバイオセンサインデックスをいう。例えば、既知の変調剤のバイオセンサインデックスは、細胞パネル上において作用する既知の変調剤のプロファイル、及びマーカパネルに対する既知の変調剤の変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネル内の細胞用である。
【０１２４】
４５．「既知の変調剤のＤＭＲインデックス（Known modulator DMR index）」
「既知の変調剤のＤＭＲインデックス」等の用語は、既知の変調剤に対して収集されたデータによって生成されたＤＭＲインデックスをいう。例えば、既知の変調剤のＤＭＲインデックスは、細胞パネル上において作用する既知の変調剤のプロファイル、及びマーカパネルに対する既知の変調剤の変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネル内の細胞用である。
【０１２５】
４６．「リガンド（Ligand）」
リガンド等の用語は、物質、組成物、又は分子であって、生物学的目的を果たす生体分子に結合して当該分子との錯体を形成することができるものをいう。リガンドとその標的分子との間の実際の不可逆的な共有結合は生物系においては希少である。受容体に結合するリガンドは化学的配座すなわち受容体タンパク質の立体形状を変化させる。受容体タンパク質の配座状態は受容体の機能状態を決定する。結合傾向すなわち結合強度は親和性と呼ばれている。リガンドは、基質、遮断剤、阻害剤、活性剤、及び神経伝達物質を含む。放射性リガンドは放射標識付きリガンドであり、一方、蛍光リガンドは蛍光標識付きリガンドであり、その両方は、受容体生物学及び受容体生物化学の研究用のトレーサとしてしばしば使用されるリガンドと考慮されてもよい。リガンドと変調剤はほぼ同じ意味で使用される。
【０１２６】
４７．「ライブラリ（Library）」
ライブラリ等の用語は集合をいう。ライブラリはここに開示された全てものの集合であり得る。例えば、インデックスの集合であるインデックスライブラリ、プロファイルの集合であるプロファイルライブラリ、ＤＭＥインデックスの集合であるＤＭＲインデックスライブラリ、分子の集合である分子ライブラリ、細胞の集合である細胞ライブラリ、及びマーカの集合であるマーカライブラリであってもよい。ライブラリは、例えば、ランダム又は非ランダムのもの、判定された又は未判定のものであってもよい。例えば、ここに開示されているのは既知の変調剤のバイオセンサインデックス又はＤＭＲインデックスのライブラリである。
【０１２７】
４８．「マーカ（Marker）」
マーカ等の用語は、バイオセンサの細胞アッセイにおけるシグナルを生成するリガンドをいう。さらに、当該シグナルは、少なくとも１つの特定の細胞シグナル伝達経路及び／又は少なくとも１つの特定の標的介した少なくとも１つの特定の細胞プロセスの特性でなければならない。当該シグナルは、ポジティブ若しくはネガティブ、又はその組合せ（振動）であり得る。マロトキシンなどのｈＥＲＧチャネル活性剤は、ｈＥＲＧチャネルが安定して発現される又は細胞毎に内因的に発現されるＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞又はＨＴ２９細胞に対するマーカであり得る。
【０１２８】
４９．「マーカパネル（Marker panel）」
「マーカパネル」等の用語は、少なくとも２つのマーカを含むパネルをいう。当該マーカは異なる経路、同一の経路、異なる標的、又は同一の標的に対するものであり得る。例えば、マロトキシンは、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞とＨＴ２９細胞の両方に対する単一のマーカとして使用されることができる。従って、ｈＥＲＧチャネル変調剤の同定及び区別において、マロトキシンは効果的なマーカパネルとして機能する。
【０１２９】
５０．「マーカバイオセンサインデックス（Marker biosensor index）」
「マーカバイオセンサインデックス」等の用語は、マーカに対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサインデックスをいう。例えば、マーカバイオセンサインデックスは、細胞パネル上で作用するマーカのプロファイル、及びマーカパネルに対するマーカの変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネルにおける細胞用である。ｈＥＲＧチャネル変調剤の同定及び区別において、マーカバイオセンサインデックスは、３つの異なる細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞、及びＨＴ２９細胞）における分子の一次プロファイルと、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞及びＨＴ２９細胞におけるマロトキシンＤＭＲシグナルに対する分子の変調インデックスと、を含み、これらは図１、図２、図５、図６、及び図７に例示されている。
【０１３０】
５１．「マーカＤＭＲインデックス（Marker DMR index）」
「マーカＤＭＲインデックス」等の用語は、マーカに対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサのＤＭＲインデックスをいう。例えば、マーカＤＭＲインデックスは、細胞パネル上で作用するマーカのプロファイル、及びマーカパネルに対するマーカの変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネルにおける細胞用である。
【０１３１】
５２．「材料（Material）」
材料は、物理的客体物の構造に進入するもの（化学的なもの、生物化学的なもの、生物学的なもの、又はその混合物）の有形部分である。
【０１３２】
５３．「模倣する（Mimic）」
本明細書で使用されている「模倣する」等の用語は、対象となる客体物の１つ以上の機能を実行することをいう。例えば、分子模倣体は分子の１つ以上の機能を実行する。
【０１３３】
５４．「変調する（Modulate）」
変調すること又はその変形は、細胞標的を介した細胞活性を増大、減少、又は維持することを意味する。これらの単語の内の１つが使用されている場合、コントロールから１％、５％、１０％、２０％、５０％、１００％、５００％、若しくは１０００％増加する、又はコントロールから１％、５％、１０％、２０％、５０％、若しくは１００％減少し得ることが開示されているものとする。
【０１３４】
５５．「変調剤（Modulator）」
変調剤等の用語は、細胞標的の活性を制御するリガンドをいう。変調剤は標的タンパク質などの細胞標的に結合するシグナル変調分子である。
【０１３５】
５６．「変調比較（Modulation comparison）」
「変調比較」等の用語は、一次プロファイル及び二次プロファイルを正規化した結果をいう。
【０１３６】
５７．「変調剤のバイオセンサインデックス（Modulator biosensor index）」
「変調剤のバイオセンサインデックス」等の用語は、変調剤に対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサインデックスをいう。例えば、変調剤のバイオセンサインデックスは、細胞パネル上で作用する変調剤のプロファイル、及びマーカパネルに対する変調剤の変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネルにおける細胞用である。図１、図２、図５、図６、及び図７に例示されているように、ｈＥＲＧ変調剤のバイオセンサインデックスは、３種類の細胞（例えば、ＨＴ２９、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ、及びＨＥＫ２９３）における一次ＤＭＲシグナルと、ＨＴ２９細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞におけるマロトキシンＤＭＲシグナルに対する変調剤の変調ＤＭＲインデックスと、を含む。
【０１３７】
５８．「変調剤のＤＭＲインデックス（Modulator DMR index）」
「変調剤のＤＭＲインデックス」等の用語は、変調剤に対して収集されたデータによって生成されたＤＭＲインデックスをいう。例えば、変調剤のＤＭＲインデックスは、細胞パネル上で作用する変調剤のプロファイル、及びマーカパネルに対する変調剤の変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネルにおける細胞用である。図１ｄ、図２ｄ、図５ｄ、図６ｄ、及び図７ｄに例示されているように、ｈＥＲＧ変調剤のＤＭＲインデックスは、変調剤によるＨＴ２９細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞におけるマロトキシンＤＭＲシグナルの変調率である。
【０１３８】
５９．「マーカのバイオセンサシグナルを変調する（Modulate the biosensor signal of a marker）」
「マーカのバイオセンサシグナルを変調する」等の用語は、マーカを用いた刺激に対する細胞のバイオセンサシグナル又はプロファイルの変化を引き起こすことをいう。
【０１３９】
６０．「ＤＭＲシグナルを変調する（Modulate the DMR signal）」
「ＤＭＲシグナルを変調する」等の用語は、マーカを用いた刺激に対する細胞のＤＭＲシグナル又はプロファイルの変化を引き起こすことをいう。
【０１４０】
６１．「分子（Molecule）」
本明細書で使用されている「分子」等の用語は、生物学的、生物化学的、又は化学的存在であって、確定的な分子量を有する分子又は化学分子の形態をとって存在するものをいう。分子等の用語は、化学的、生物化学的、又は生物学的分子をいい、そのサイズは問わない。
【０１４１】
いくつかの分子は炭素を含まない（酸素分子などの単純な気体分子及びいくつかの硫黄ベースのポリマなどのより複雑な分子を含む）が、多くの分子は有機分子と呼ばれる形態をとるもの（炭素原子を含む分子であり、特に共有結合によって接続されているもの）である。一般用語の「分子」は、タンパク質、核酸、炭水化物、ステロイド、有機薬剤、小さな分子、受容体、抗体、及び脂質などの分子における多数の記述的クラス又はグループを含む。適切な場合は、１つ以上のこれらのより記述的な用語（タンパク質などの多くのものは分子のグループと重複して記載されている）が、分子のサブグループに対する本方法の用途のために、分子がタンパク質などのサブクラスと一般クラスとしての「分子」との両方を示すことなく、本明細書において使用される。明記されない限り、単語「分子」は、特定の分子及びその塩（例えば薬剤学的に許容できる塩）を含む。
【０１４２】
６２．「分子混合物（Molecule mixture）」
分子混合物等の用語は、少なくとも２つの分子を含む混合物をいう。当該２つの分子は、構造的に異なるもの（すなわち光学異性体（enantiomers））、組成的に異なるもの（例えば、プロテインアイソフォーム、グリコフォーム、又は異なるポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）の変形物を有する抗体など）、又は構造的及び組成的に異なるもの（例えば、未浄化の天然抽出物又は未浄化の合成化合物）であり得るが、これらに限定されない。
【０１４３】
６３．「分子のバイオセンサインデックス（Molecule biosensor index）」
「分子のバイオセンサインデックス」等の用語は、分子に対して収集されたデータによって生成されたバイオセンサインデックスをいう。例えば、分子のバイオセンサインデックスは、細胞パネル上で作用する分子のプロファイル、及びマーカパネルに対する分子の変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネルにおける細胞用である。
【０１４４】
６４．「分子のＤＭＲインデックス（Molecule DMR index）」
「分子のＤＭＲインデックス」等の用語は、分子に対して収集されたデータによって生成されたＤＭＲインデックスをいう。例えば、分子のＤＭＲインデックスは、細胞パネル上で作用する分子のプロファイル、及びマーカパネルに対する分子の変調プロファイルからなることができ、各マーカパネルは細胞パネルにおける細胞用である。
【０１４５】
６５．「分子インデックス（Molecule index）」
「分子インデックス」等の用語は分子に関するインデックスをいう。
【０１４６】
６６．「分子処理された細胞（Molecule-treated cell）」
分子処理された細胞等の用語は、分子にさらされた細胞をいう。
【０１４７】
６７．「分子変調インデックス（Molecule modulation index）」
「分子変調インデックス」等の用語は、細胞パネル上で作用するマーカパネルのバイオセンサ出力シグナルを変調する分子の能力を表示するインデックスをいう。当該変調インデックスは、分子の存在下におけるマーカを用いた刺激の際の細胞反応の特定のバイオセンサ出力シグナルのパラメータを、分子の非存在下におけるものに対して正規化することによって生成される。
【０１４８】
６８．「分子薬理（Molecule pharmacology）」
「分子薬理」等の用語は、システム細胞生態（systems cell biology）又はシステム細胞薬理（systems cell pharmacology）をいい、すなわち細胞上で作用する分子の作用モードである。分子薬理は、毒性、特定の細胞プロセス（例えば、増殖、分化、活性酸素種シグナル伝達）に影響を与える能力、又は特定の細胞標的（例えば、ｈＥＲＧチャネル、ｈＥＲＧに関するもの、ＰＩ３Ｋ、ＰＫＡ、ＰＫＣ、ＰＫＧ、ＪＡＫ２、ＭＡＰＫ、ＭＥＫ２、若しくはアクチン）を変調する能力（これらに限定されない）によってしばしば特性化される。
【０１４９】
６９．「正規化すること（Normalizing）」
正規化すること等の用語は、例えば少なくとも１つの共通変数を除去するために、データ、プロファイル、又は反応を調節することを意味する。例えば、２つの反応が生成され、その一方が細胞上で作用するマーカに対するものであり、他方が細胞上で作用するマーカ及び分子に対するものである場合、正規化することとは、分子の非存在下におけるマーカ誘発された反応と分子の存在下における当該反応とを比較してマーカのみによる反応を除去することをいい、これによって正規化された反応はマーカに対する分子の変調による反応を示すこととなる。変調比較はマーカの一次プロファイル及び分子の存在下におけるマーカの二次プロファイル（変調プロファイル）を正規化することによって得られる。
【０１５０】
７０．「任意の（Optional）」
「任意の」、「任意で」等の用語は、その後に記載されている事象又は状況が発生する場合と発生しない場合があることを意味し、かつ当該記載が当該事象又は状況の発生する例と発生しない例とを含むことを意味する。例えば、「任意で組成物は組合せを含む」との表現は、当該組成物が異なる分子の組合せを含む場合と組合せを含まない場合とがあることを意味し、この表現は当該組合せと当該組合せではないこと（すなわち当該組合せの個別のメンバ）との両方を含む。
【０１５１】
７１．「又は（Or）」
本明細書で使用されている「又は」等の用語は、特定の一覧の中の１のメンバ及び当該一覧のメンバの任意の組合せを含むことを意味する。
【０１５２】
７２．「プロファイル（profile）」
プロファイル等の用語は、細胞などの組成物に対して収集されたデータをいう。プロファイルは上記したように無標識バイオセンサによって収集され得る。
【０１５３】
ａ）「一次プロファイル（Primary profile）」
「一次プロファイル」等の用語は、バイオセンサ反応又はバイオセンサ出力シグナルであり、すなわち分子が細胞に接触した際に得られたプロファイルをいう。典型的な場合、一次プロファイルは、最初の細胞反応を正味ゼロ（すなわち基準線（baseline））のバイオセンサシグナルに対して正規化した後に得られる。
【０１５４】
ｂ）「二次プロファイル（Secondary profile）」
「二次プロファイル」等の用語は、分子の存在下におけるマーカに対する細胞のバイオセンサ反応又はバイオセンサ出力シグナルをいう。二次プロファイルは、マーカ誘発された細胞反応すなわちバイオセンサ反応を変調する分子の能力を示すものとして使用されることができる。
【０１５５】
ｃ）「変調プロファイル（Modulation profile）」
「変調プロファイル」等の用語は、分子の存在下におけるマーカの二次プロファイルと分子の非存在下におけるマーカの一次プロファイルとの間の比較をするものである。当該比較物は、例えば、二次プロファイルから一次プロファイルを差し引くこと又は一次プロファイルから二次プロファイルを差し引くこと、すなわち一次プロファイルに対して二次プロファイルを正規化することによるものである。
【０１５６】
７３．「パネル（Panel）」
パネル等の用語は、所定の組の試料（例えば、マーカ、細胞、又は経路）をいう。パネルはライブラリから試料を選定して作成され得る。
【０１５７】
７４．「ポジティブコントロール（Positive control）」
「ポジティブコントロール」等の用語は、データ収集条件がデータ収集を導き得ることを示すコントロールをいう。
【０１５８】
７５．「増強する（Potentiate）」
増強する、増強された等の用語は、分子によって引き起こされた細胞内のマーカのバイオセンサ反応の特定のパラメータを増大することをいう。分子の存在下における同一の細胞内におけるマーカの二次プロファイルと同一のマーカの一次プロファイルとを比較することによって、当該分子による細胞のマーカ誘発されたバイオセンサ反応の変調を計算することができる。ポジティブな変調は、マーカに誘発されたバイオセンサシグナルを増大させる分子を意味する。
【０１５９】
７６．「効力（Potency）」
効力等の用語は、所定の強度の効果を得るのに必要な量で表された分子活性の測定結果をいう。例えば、高効力薬剤は少ない濃度でも大きな反応を引き起こす。効力は親和性及び効能に比例する。親和性は受容体に結合する薬剤分子の能力である。
【０１６０】
７７．「プロドラッグ（Prodrug）」
「プロドラッグ」等の用語は、生体内において代謝された際に所望の薬理活性を有する化合物へ変換される化合物をいう。プロドラッグは、例えばH. BundgaarのDesign of Prodrugs（１９８５年）に記載されているような「プロ部分（Pro-moieties）」を有する薬理活性化合物内に存在する適切な官能基を置換することによって準備され得る。プロドラッグの例は、エステル、エーテル若しくは本明細書内の化合物のアミド誘導体、及びその医薬上許容可能な塩を含む。プロドラッグのさらなる説明については、例えば、T. Higuchi and V. Stella “Pro-drugs as Novel Delivery Systems”、ACS Symposium Series 14 (1975)、及びE. B. Roche ed., Bioreversible Carriers in Drug Design (1987)を参照されたい。
【０１６１】
７８．「刊行物（Publications）」
本願を通して、様々な刊行物が参照されている。これら刊行物の開示内容は、当該技術分野の状況をより完全に説明するために、その全てにおいて、参照することにより本願に組み込まれているものとする。開示された参照物は、当該参照物の属する文中において記載されている材料においても、個別かつ詳細に参照することにより本明細書に組み込まれているものとする。
【０１６２】
７９．「受容体（Receptor）」
受容体等の用語は、細胞の原形質膜又は細胞質に組み込まれているタンパク質分子であって、可動性のシグナル伝達分子（又は「シグナル」分子）が結合し得るものをいう。受容体に結合する分子は「リガンド」と呼ばれ、ペプチド（神経伝達物質など）、ホルモン、調合薬、又は毒素であることができ、さらに受容体は、当該結合が起きた際に、通常は細胞反応を開始する構造変化に進入する。しかし、いくつかのリガンドは反応を誘発することなく受容体を遮断するのみである（例えばアンタゴニスト）。受容体におけるリガンド誘発された変化は、当該リガンドの生物学的活性を構成する生理学的変化を引き起こす。
【０１６３】
８０．「ロバストなバイオセンサシグナル（Robust biosensor signal）」
「ロバストなバイオセンサシグナル」はバイオセンサシグナルであって、その振幅がノイズレベル又はネガティブコントロール反応よりも十分に（例えば、３倍、１０倍、２０倍、１００倍、又は１，０００倍）大きいシグナルである。しばしば、当該ネガティブコントロール反応はアッセイバッファ溶液（すなわち賦形剤）を加えた後の細胞のバイオセンサ反応である。当該ノイズレベルは他の溶液を加えない場合の細胞のバイオセンサシグナルである。細胞が他の溶液を加える前から溶液に浸されているのは影響しない。
【０１６４】
８１．「ロバストなＤＭＲシグナル（Robust DMR signal）」
「ロバストなＤＭＲシグナル」等の用語は「ロバストなバイオセンサシグナル」のＤＭＲの形態をとったものをいう。
【０１６５】
８２．「範囲（Ranges）」
範囲は、１の「約」に修飾された特定の値から、及び／又は他の「約」に修飾された特定の値まで、として本明細書において表現されることができる。このように範囲が表現された場合、他の実施例は、一方の特定の値から他方の特定の値までか、一方の特定の値以上か、又は他方の特定の値以下を含む。同様に、値が、先行詞「約」を使用することによって、近似値として表現された場合、この特定の値は他の実施例を形成する。さらに、当該範囲の終点の各々は、その他の終点に関連してかつ当該他の終点とは独立して重要なものである。さらに、本明細書には多数の値が開示されており、当該値の各々は、その値に加えて「約」に修飾された特定の値として本明細書に開示されているものとする。例えば、値「１０」が開示されているならば、「約１０」も開示されているものとする。さらに、当業者に適切に理解されるように、１の値が当該値「以下」と開示されている場合、「当該値以上」及びその値間の可能な範囲も開示されているものとする。例えば、値「１０」が開示されているならば、「１０以下」及び「１０以上」も開示されているものとする。さらに、本願を通して、データは多数の異なる形式で与えられており、このデータは、終点、始点、及び当該データ点の任意の組合せを表すものであるとする。例えば、特定のデータ点「１０」及び特定のデータ点１５が開示されているならば、１０より大きい、１５より大きい、１０以上、１５以上、１０未満、１５未満、１０以下、１５以下、１０、及び１５が１０と１５との間と同様に考慮され開示されているものとする。さらに、２つの特定の単位間の各単位も開示されているものとする。例えば、１０及び１５が開示されているならば、１１、１２、１３、及び１４も開示されているものとする。
【０１６６】
８３．「反応（Response）」
反応等の用語は刺激に対する応答をいう。
【０１６７】
８４．「サンプル（Sample）」
サンプル又はこれと同様の用語は動物、植物、真菌などであって、天然物、天然抽出物等、動物由来の組織若しくは器官、細胞（対象物内のもの、対象物から直接取出したもの、又は培養状態を維持している細胞若しくは培養された細胞株由来の細胞）、細胞溶解物（又は溶解物の一部）若しくは細胞抽出物、又は細胞若しくは細胞材料（例えば、ポリペプチド又は核酸）から派生した１つ以上の分子を含む溶液をいい、これらは本明細書に記載されているようにアッセイされる。サンプルは体液又は排出物（例えば、血液、尿、便、唾液、涙、胆汁であるがこれらに限定されない）であって細胞又は細胞成分を含むものであってもよい。
【０１６８】
８５．「塩及び医薬上許容可能な塩（Salt(s) and pharmaceutically acceptable salt(s)）」
本発明による化合物は、無機酸又は有機酸から派生した塩の態様をとって使用され得る。当該化合物の塩は、１つ以上の塩の物理的性質の故に有益なものであり、当該性質は、様々な温度及び湿度における強化された医薬安定性又は水中若しくは油中における所望の溶解性等である。いくつかの例において、化合物の塩は、化合物の分離、浄化、及び／又は溶解における補助剤としても使用され得る。
【０１６９】
塩が患者に投与されることが意図されている（例えば体外の状況において使用されるのとは対称的に）場合、塩は医薬上許容可能であることが好ましい。用語「医薬上許容可能な塩」は、式Ｉ又は式ＩＩの化合物とアニオン又は塩基性カチオンが食用に適していると一般に考慮されている酸とを結合することによって準備される塩をいう。医薬上許容可能な塩は、その親化合物に比べて高い水溶解性の故に、本発明の方法の生成物として特に有益なものである。薬物としての使用においては、本発明の化合物の塩は非毒性の「医薬上許容可能な塩」である。用語「医薬上許容可能な塩」に含まれる塩は、本発明の化合物の非毒性塩であって、適切な有機酸又は無機酸を用いて遊離塩基を反応させることによって概して準備されるものをいう。
【０１７０】
本発明の化合物の適切な医薬上許容可能な酸付加塩は、無機酸及び有機酸から派生したものを含み得る。当該無機酸は、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、ホウ酸、ホウフッ化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、炭酸、スルホン酸、及び硫酸等であり、当該有機酸は、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、コハク酸、トルエンスルホン酸、酒石酸、及びトリフルオロ酢酸等である。適切な有機酸は、一般的に、例えば、脂肪酸、シクロ脂肪酸（cycloaliphatic acid）、芳香族酸、アリール脂肪酸（araliphatic acid）、複素環酸、カルボン酸、及びスルホン基分類の有機酸を含む。
【０１７１】
適切な有機酸の特定の例は、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、グリコール酸塩、グルコン酸塩、ジグルコン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、グルクロン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ピルビン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、アントラニル酸、メシル酸塩、ステアリン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、フェニル酢酸塩、マンデル酸塩、エンボン酸塩（パモ酸塩）、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パントテン酸塩、トルエンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、スルファニル酸塩、シクロヘキシルアミノスルホン酸塩、アルギン酸、β−ヒドロキシ酪酸塩、ガラクタル酸塩、ガラクツロン酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、グリコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、及びウンデカン酸塩を含む。さらに、本発明による化合物が酸性部分を有している場合、その医薬上許容可能な塩は、アルカリ金属塩すなわちナトリウム塩又はカリウム塩、カルシウム塩又はマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、及び第４級アンモニウム塩などの適切な有機リガンドを含んで形成された塩を含み得る。他の実施例においては、塩基性塩は、アルミニウム塩、アルギニン塩、ベンザチン塩、コリン塩、ジエチルアミン塩、ジオラミン塩、グリシン塩、リジン塩、メグルミン塩、オラミン塩、トロメタミン塩、及び亜鉛塩を含む非毒性塩を形成する塩基から形成される。
【０１７２】
有機塩は、第２級、第３級、又は第４級アミン塩から作製されることができ、当該アミン塩は、例えば、トロメタミン、ジエチルアミン、Ｎ、Ｎ´−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、及びプロカインである。塩基性の窒素含有基は作用因子を用いて４級化されることができ、当該作用因子は、例えば、低級アルキル（ＣｒＣ_６）のハロゲン化物（例えば、メチル、エチル、プロピル、及びブチルの塩化物、臭化物、及びヨウ化物）、硫酸ジアルキル（すなわち、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、及び硫酸ジアミル）、長鎖ハロゲン化物（すなわち、デシル、ミリスチル、及びステアリルの塩化物、臭化物、及びヨウ化物）、アリールアルキルのハロゲン化物（すなわち、ベンジル及びフェネチルの臭化物）等である。
【０１７３】
１の実施例においては、さらに、ヘミ硫酸塩およびヘミカルシウム塩などの酸及び塩基のヘミ塩が形成され得る。
【０１７４】
本発明による化合物及びその塩は、溶媒和されていない形態及び溶媒和された形態の両方の形態をとって存在し得る。
【０１７５】
８６．「シグナル伝達経路（Signaling pathway）」
「定義された経路を」等の用語は、シグナル（例えば外因のリガンド）を受信することから細胞の応答（例えば細胞標的の発現増大）までの細胞の経路である。場合によっては、受容体に結合するリガンドによって生じる受容体活性化は、リガンドに対する細胞反応に直結する。例えば、神経伝達物質ＧＡＢＡは、イオンチャネルの部分である細胞表面受容体を活性化することができる。ニューロン上のＧＡＢＡ Ａ受容体に結合するＧＡＢＡは、当該受容体の一部である塩化物選択性イオンチャネルを開く。ＧＡＢＡ Ａ受容体の活性化は、負の電荷を帯びた塩化物イオンが、ニューロンへ進入して活動電位を生成するニューロンの能力を阻害することを可能にする。しかし、多くの細胞表面受容体において、リガンド−受容体相互作用は細胞の応答に直結していない。活性化された受容体は、細胞の挙動におけるリガンドの最終的な生理学的効果が生成される前に、まず細胞内部の他のタンパク質と相互作用しなければならない。しばしば、いくつかの相互作用する細胞タンパク質の鎖の挙動は受容体の活性化に従って変更される。受容体活性化によって誘発された細胞変化のすべてのセットはシグナル伝達機序すなわちシグナル伝達経路と呼ばれる。当該シグナル伝達経路は比較的単純であるか非常に複雑であり得る。
【０１７６】
８７．「インデックスの類似性（Similarity of indexes）」
「インデックスの類似性」等の用語は、インデックスのパターン及び／又はスコアのマトリクスに基づいて、分子に対する２つのインデックス間又は少なくとも３つのインデックスの間の類似性を表現する用語である。当該スコアのマトリクスはその比較対象・比較相手となるもの（counterparts）に大きく関係しており、当該比較対象・比較相手は、例えば、対応する細胞内における異なる分子の一次プロファイルの特徴と、各マーカに対する異なる分子の変調プロファイルの性質及び割合と、である。例えば、より高いスコアはより類似する特性に対して与えられ、より低い又はネガティブのスコアはあまり類似していない特性に対して与えられる。分子変調インデックスに見られる変調はポジティブ、ネガティブ、及びニュートラルの３種類であるため、類似性マトリクスは比較的単純である。例えば、単純なマトリクスにおいて、同一の変調（例えばポジティブ変調）には＋１のスコアが割り当てられ、同一でない変調には−１のスコアが割り当てられる。
【０１７７】
代替として、異なるスコアが異なるスケールの変調タイプに与えられることもできる。例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、１００％、２００％等のポジティブ変調に、それぞれ、＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、＋６、＋２０、＋２０のスコアの与えられることができる。一方、ネガティブ変調に対しては、同様であるが反対のスコアが与えられることができる。この手法に従うと、図５ｄに示されているように、２つの細胞におけるマロトキシンに対するフルフェナム酸の変調インデックスは、フルフェナム酸が当該２つの細胞におけるマロトキシンに誘発されたバイオセンサ反応を別々に変調することを示しており、すなわちＨＴ２９（−９０％）とＨＥＫ−ｈＥＲＧ（約１２％）である。従って、フルフェナム酸の変調インデックスのスコア座標には、（−９，１）と割り当てられることができる。同様に、ジフルニサルに対するスコア座標は（−９，１）である（図６ｄ）。フルフェナム酸とジフルニサルとの間のスコアを比較することによって、両方の分子がｈＥＲＧチャネルにおいて同様の作用モードを示すことがわかる。
【０１７８】
８８．「溶媒和する・溶媒和物（Solvate）」
本化合物及びその医薬上許容可能な塩は、完全な非結晶質のものから完全な結晶質のものまでに及ぶ連続した固体状態にて存在し得る。さらに、これらは溶媒和されていない形態及び溶媒和された形態をとって存在し得る。用語「溶媒和物」は、化合物及び１つ以上の医薬上許容可能な溶媒分子（例えばエタノール）を含む分子錯体をいう。用語「水和物」は溶媒が水である溶媒和物である。医薬上許容可能な溶媒和物は、溶媒が同位体で置換され得る（例えば、Ｄ_２Ｏ、ｄ_６−アセトン、ｄ_６−ＤＭＳＯ）溶媒和物を含む。
【０１７９】
有機化合物の溶媒和物及び水和物に対する現在認められている分類システムは、分離サイト溶媒和物及び水和物と、チャネル溶媒和物及び水和物と、金属イオン配位された溶媒和物及び水和物と、を識別するものである。これについては例えばK. R. Morris (H. G. Brittain ed.) Polymorphism in Pharmaceutical Solids (1995)を参照されたい。分離サイト溶媒和物及び水和物は、有機化合物の分子に介入することによって溶媒（例えば水）分子が互いの直接接触から分離されたものである。チャネル溶媒和物において、当該溶媒分子は他の溶媒分子に隣接する格子チャネル内に位置している。金属イオン配位された溶媒和物において、当該溶媒分子は金属イオンに結合されている。
【０１８０】
溶媒又は水が強固に結合されている場合、その錯体は特定の化学量論的に独立した湿度を有することとなる。しかし、溶媒又は水が例えばチャネル溶媒和物及び吸湿性化合物内において弱く結合されている場合、水又は溶媒の量は湿度条件及び乾燥条件に依存することとなる。このような場合において、不定比性が基準となる。
【０１８１】
本化合物及びその医薬上許容可能な塩は、化合物及び他の少なくとも１つの成分が化学量論的な量又は非化学量論的な量で存在する多成分錯体（塩及び溶媒和物以外）としても存在し得る。このタイプの錯体はクラスレート（薬剤ホスト包接錯体）及び共結晶（コクリスタル）を含む。後者は、非共有結合相互作用によって互いに結合されている中性分子成分の結晶質錯体として典型的に定義されるが、塩を含む中性分子の錯体でもあることができる。共結晶は、溶融結晶化によって、溶媒和物からの再結晶化によって、又は化合物を互いに物理的に研削することによって準備され得る。これについては、例えば、O. Almarsson and M. J. Zaworotko, Chem. Commun., 17:1889-1896 (2004)を参照されたい。多成分錯体の一般論については、J. K. Haleblian, J. Pharm. Sci. 64(8):1269-88 (1975)を参照されたい。
【０１８２】
８９．「安定した（Stable）」
医薬組成物に関して使用される場合、「安定した」等の用語は、当業者の間では、特定の保存条件下での所定期間の活性材料の喪失が特定の量未満、通常は１０％未満であることを意味する。組成物が安定していると考慮されるのに必要な時間は、生成物の用途に関係しており、かつ生成物の生成、品質管理及び検査のための保管、最終的な使用の前に再度保管される卸売業者への輸送又は消費者への直接の輸送における商業的実用性によって定められる。数ヶ月の安全率を含めると、医薬品の最低生成物寿命は通常１年であり、１８ヶ月よりも長いのが好ましい。本明細書で使用されている用語「安定した」は、これら市場の実情と、２度から８度の間の冷蔵状態などの容易に達成可能な環境条件で生成物を保管及び輸送する能力と、を考慮している。
【０１８３】
９０．「物質（Substance）」
物質等の用語は任意の物理的客体物をいう。材料は物質である。分子、リガンド、マーカ、細胞、タンパク質、及びＤＮＡは物質と考えられる。機械又は生成物は、物質そのものではなく、物質から作られているものと考えられる。
【０１８４】
９１．「対象物（Subject）」
本願を通して使用されている対象物等の用語は個体を意味する。従って、「対象物」は、例えば、犬、猫などの家畜化された動物、家畜類（牛、馬、豚、羊、ヤギなど）、実験動物（マウス、ウサギ、ラット、モルモットなど）、哺乳類、ヒト以外の哺乳類、霊長類、ヒト以外の霊長類、齧歯動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び他の動物を含むことができる。１つの対象物の態様は、霊長類又はヒトなどの哺乳類である。対象物はヒト以外であってもよい。
【０１８５】
９２．「試験分子（Test molecule）」
試験分子等の用語は、当該試験分子に関するいくつかの情報を得る手法において使用される分子をいう。試験分子は未知の分子又は既知の分子であることができる。
【０１８６】
９３．「処理・治療すること（Treating）」
処理すること、処理等の用語は少なくとも２つの意味で使用されることができる。第１に、処理すること、処理等の用語は投与すなわち対象物に向けてとられる行為をいう。第２に、処理すること、処理等の用語は２つのものを混合することをいい、当該２つのものは例えば分子及び細胞などの２つ以上の物質である。この混合は、当該少なくとも２つの物質を接触し得る状態にさせる。
【０１８７】
治療すること、治療等の用語が疾病に関する文脈において使用される場合、これらは例えば治癒又は症状の軽減を暗示するものではない。治療学的用語又はこれと同様の用語が治療すること、治療等の用語に伴って使用される場合、基礎疾病の症状が軽減すること及び／又は基礎的な１つ以上の細胞的原因、生理学的原因、若しくは生物化学的原因、若しくは症状を起こす機序が軽減されることを意味する。この文脈において使用される軽減とは、単に疾病の生理学的状態だけでなく、疾病の分子状態を含む疾病の状態が比較的低減されることを意味する。
【０１８８】
９４．「トリガ（Trigger）」
トリガ等の用語は反応などの事象を起こす又は開始する動作・作用をいう。
【０１８９】
９５．「値（Values）」
組成物、要素、添加物、細胞型、マーカなどの態様及びそれらの範囲のために開示された特定かつ好ましい値は、説明のためだけのものであり、それらは、定義された他の値又は定義された範囲中の他の値を除外するものではない。本開示の組成物、装置及び方法は、それらが有するどんな値又は値のどんな組み合わせ、特定の値、さらなる特定の値及びここに開示された好ましい値のものも含む。
【０１９０】
従って、ここに開示された方法、組成物、生成物及び機械は、本明細書に記載された様々な成分、ステップ、分子及び組成物等を含み、これらで構成され、又は本質的にこれらで構成されるような態様にて結合され得る。それらは、例えば、ここに定義したようなリガンドを含む分子を特性化する方法、ここに定義したようなインデックスを生成する方法、又は、ここに定義したような創薬の方法において使われることができる。
【０１９１】
９６．「未知の分子（Unknown molecule）」
未知の分子等の用語は、未知の生物学的、薬理学的、生理学的、病態生理学的な活性を有する分子をいう。
【０１９２】
９７．「最適化すること（Optimizing）」
最適化することは、より良くするプロセス、又は、あるもの若しくはあるプロセスがより良くなりそうかどうかを確認するプロセスをいう。
【０１９３】
９８．「治療効能（Therapeutic efficacy）」
治療効能は、対象物の治療による結果の程度又は度合いをいう。
【０１９４】
９９．「疾病マーカ（Disease marker）」
疾病マーカは、試薬、分子、物質等であって、ｈＥＲＧチャネル関連疾病を同定、診断、又は予知するのに使用され得るものである。
【０１９５】
１００．「ｈＥＲＧチャネル関連疾病（hERG channel related disease）」
ｈＥＲＧチャネル関連疾病は、疾病の原因又は疾病の治療がｈＥＲＧチャネルの変調によって変化し得るような疾病である。例示的な疾病は癌であり、例えば、白血病、大腸癌、胃癌、乳癌、又は肺癌である。例示的な疾病は、遺伝子の突然変異による遺伝的ＱＴ延長症候群（ＬＱＴＳ）、薬剤分子による後天性ＬＱＴＳ、及びクラス３不整脈（class III arrhythmics）である。
【０１９６】
１０１．「毒性マーカ（Toxicity marker）」
毒性マーカは、試薬、分子、物質等であって、有機体、細胞、組織、又は器官などの物質の毒性レベルを同定、診断、又は予知するのに使用され得るものである。
【０１９７】
１０２．「分析方法（Analytical Methods）」
分析方法は、例えば、分子又は物質を測定する方法である。例えば、ガスクロマトグラフィ（gas chromatography）、ゲル浸透クロマトグラフィ（gel permeation chromatography）、高分解能ガスクロマトグラフィ、高分解能質量分析（mass spectrometry）、又は質量分析は分析方法である。
【０１９８】
１０３．「毒性（Toxicity）」
毒性は、物質又は分子にさらされた際の細胞、組織、器官、又は有機体全体などのあるものに損傷を与えることができる物質又は分子の程度である。例えば、肝臓、又は肝臓内の細胞である肝細胞は特定の物質によって損傷を受け得る。
【０１９９】
Ｂ．電位依存性イオンチャネル
電位依存性イオンチャネルは、心臓及び神経などの興奮組織内における細胞表面膜に亘るタンパク質である。チャネルを通過するイオンは心筋活動電位の基礎を形成する。ＮＡ^＋イオン及びＣＡ^２＋イオンの流入は、それぞれ、脱分極の立ち上がり及び活動電位のプラトー相を制御する。Ｋ^＋イオンの流出は、細胞膜を再分極し、活動電位を終端し、かつ筋肉の弛緩を可能にする。再分極電流の急速成分は、ヒト遅延整流性カリウムイオンチャネル遺伝子（ｈＥＲＧ）によってコード化されたＫ^＋チャネルを通過する。再分極障害は、活動電位の持続時間を延長し、弛緩を遅らせ、かつ心拍障害を進めることがある。活動電位の延長は、心電図（ＥＣＧ）上で測定されるＱＴ間隔の長期化として臨床的に検出される。薬剤誘発性のＱＴ延長は再分極障害による薬剤の深刻な合併症であり、これは致死の心室性不整脈のリスクの増大に関連する。薬剤誘発性のＱＴ延長は、ほぼｈＥＲＧのＫ^＋チャネルの遮断に関連している。メタンスルホンアニリド、ドフェチリド、ＭＫ−４９９、及びＥ−４０３１などの薬剤の大量のものは、影響を受けやすい患者に対して命に関わる心臓発作及び心室性不整脈を起こすような心臓のｈＥＲＧなどのＫ^＋イオンチャネルを遮断することが知られている。残念ながら、薬剤誘発性の心室性不整脈の発生率は低く、臨床試験では検出されない。
【０２００】
テルフェナジン（抗ヒスタミン剤）、アステミゾール（抗ヒスタミン剤）、及びシサプリド（胃運動促進剤）などの非心血管性薬剤によってｈＥＲＧチャネルが遮断されることによる突然死は、市場からのこれら薬剤の撤退のきっかけとなった。近年、バイオックス（Vioxx）等の薬剤も危険な心臓副作用に関する懸念のために市場から撤退した。一方、Ｋ^＋チャネルに関する心臓への安全性は監督機関の大きな懸念事項となっている。高い損耗率を抑えるために、創薬において、リード化合物（lead compounds）におけるｈＥＲＧチャネルの阻害活性をできるだけ早く選別して排除することが最優先となっている。
【０２０１】
薬剤分子のｈＥＲＧ遮断活性に対する特性を試験する現在の方法はいくつかの制限を有している。細胞ベースのパッチクランプ型電気生理学的試験すなわち動物試験に基づく手法は、心臓安全試験における正確さ及び出力の要求を満たすものではなく、技術的に困難である。他のアッセイは、結合の定量化及び検出に、放射性標識マーカ、蛍光マーカ、染料結合マーカ、又はビオチン化マーカを使用する。しかし、これらマーカの多くは標識後に活性を低下させる。さらに、放射性物質は、放射性化合物を取り扱う複雑なインフラ及びライセンスの必要性などの実施上の制限をもたらす。本明細書ではｈＥＲＧ Ｋ^＋チャネル、ｈＥＲＧ、ｈＥＲＧイオンチャネル、又はｈＥＲＧチャネルと呼ばれるこのチャネルの無差別な性質は、多様な化学構造（Cavalli, A.等., J.Med. Chem. 2002, 45(18), 3844-53）との結合を導き、その相互作用によって致死的結果となる可能性を伴う。このことは、全ての新薬候補が天然型又は組み換え型で発現されたヒトのｈＥＲＧタンパク質（Bode, G.等., Fundam. Clin. Pharmacol. 2002, 16(2), 105-18）を用いた機能的パッチクランプアッセイの試験を受ける米国食品医薬品局（U.S. Food and Drug Administration）及び国際調和会議（International Congress of Harmonization）からの勧告をもたらした。自動化された高いスループットのパッチクランプ法が近年開発されたが、当該システムは専門のオペレータ、生細胞、及び多額の設備投資を必要とする（Bridgland-Taylor, M.等., J. Pharmacol. Toxicol. Methods 2006, 54(2), 189-99; Dubin, A., et al., J. Biomol. Screen. 2005, 10(2), 168-81）。従って、薬剤候補などの分子とｈＥＲＧチャネルとの結合を特性化及び定量化する新規な組成物及び方法を開発する必要がある。
【０２０２】
ＫＣＮＨ２すなわちヒト遅延整流性カリウムイオンチャネル遺伝子（ｈＥＲＧ）はKv11.1カリウムイオンチャネルを形成するために結合するKv11.1のαサブユニットをコード化する。当該ｈＥＲＧ遺伝子は、小胞体においてはコアグリコシル化された未成熟の１３５ｋＤａタンパク質（Kv11.1）と訳され、ゴルジ体においては複雑にグリコシル化された成熟の１５５ｋＤａタンパク質に変換される。（Warmke, J.W.ら（Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1994, 91(8), 3438-3442、参照することにより組み込まれている）は、ｈＥＲＧ遺伝子の配列及び構造とその野生型翻訳生成物のKv11.1とを開示している。ｈＥＲＧタンパク質の配列はSEQ ID NO: NP_000229に開示されている。ｈＥＲＧ遺伝子の配列はSEQ ID NO: NM_000238に開示されている。
【０２０３】
ここに開示されているのは、ｈＥＲＧ変調剤、ｈＥＲＧ活性剤、無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤、ｈＥＲＧ経路活性剤、ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤、ｈＥＲＧ阻害剤、ｈＥＲＧ経路阻害剤、及びｈＥＲＧイオンチャネル阻害剤である。薬剤分子によるｈＥＲＧ電流の変化を無効にすることができるｈＥＲＧイオンチャネル活性剤は、ｈＥＲＧ障害を減少させるため、臨床的に有益なものとなり得る。このようなｈＥＲＧイオンチャネル活性剤は、ｈＥＲＧ遮断剤でもある薬剤分子と組み合わせた薬剤として使用されることができる。ｈＥＲＧ電流を変化させないｈＥＲＧ経路阻害剤も抗癌剤として部分的に有益なものである。このようなｈＥＲＧ経路遮断剤は最小限のｈＥＲＧ障害を有し、癌に対する抗増殖活性を有している。
【０２０４】
ここに開示された方法及び組成物は、ｈＥＲＧイオンチャネルを変調する治療剤として、また、ｈＥＲＧに関する心筋再分極障害の予防及び治療を改善する治療剤として有益なものである。本化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグの構造式において、式中のＲ^６、Ｒ^５、Ｒ^４、Ｘ、及びＹは本明細書内において定義される。
【０２０５】
ここに開示された組成物は、２−ジシアノメチル−３−シアノ−２、５−ジヒドロフラン、及び式（Ｉ）及び（ＩＩ）に記載されているようなそれらの派生物、並びにそれらの医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、及びプロドラッグに関し、式中のＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^６、Ｒ^５、及びＲ^４は本明細書内において定義される。
【０２０６】
【化２】

【０２０７】
Ｒ^６及びＲ^５は、無関係に、−Ｈ、非置換又は置換アルキル、非置換又は置換アルキニル、非置換又は置換アルケニル、非置換又は置換アリール、非置換又は置換アルキルアリール、非置換又は置換炭素環、非置換又は置換ヘテロ環、非置換又は置換シクロヘキシル、及びｎが１−１０の（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎから選択されることができる。
【０２０８】
Ｒ^４は、無関係に、アルキルか、又は、二重結合によって結合された完全共役発色団であって電子的供与−架橋−受容構造又は供与−受容構造若しくは架橋−受容構造のみを有するものから選択される。
【０２０９】
好ましい電子供与基（electron donating group）は、例えば、米国特許第6,393,290B1号、第5,044,725号、第4,795,664号、第5,247,042号、第5,196,509号、第4,810,338号、第4,936,645号、第4,767,169号、第5,326,661号、第5,187,234号、第5,170,461号、第5,133,037号、第5,106,211号、及び第5,006,285号に説明されており、これら特許の全内容は参照することにより本明細書に組み込まれているものとする。好ましくは、当該電子供与基は、例えば、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアニリノ、１−ピペリジノ、１−ピペラジノ、１−ピロリジノ、アシルアミノ、ヒドロキシル、チオロ（thiolo）、アルキルチオ、アリールチオ、アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、ビニル、１、２、３、４−テトラヒドロキノリニル等によってパラ位置において置換されたフェニル環からなる基から選択されるが、これらに限定されない。
【０２１０】
好ましい架橋基（bridge group）は、置換又は非置換の２−ジシアノメチル−３−シアノ−２、５−ジヒドロフラン、及び電子供与基を結合する環状の架橋である。好ましくは、橋かけ基は少なくとも１つの二価の環である。好ましい環状の架橋は１つ又は複数の二価の環を含む。本願において環状の架橋として採用されることができる好ましい二価の環は、例えば、米国特許第5,044,725号、第4,795,664号、第5,247,042号、第5,196,509号、第4,810,338号、第4,936,645号、第4,767,169号、第5,326,661号、第5,187,234号、第5,170,461号、第5,133,037号、第5,106,211号、及び第5,006,285号に説明されており、これら特許の全内容は本明細書に援用されているものとする。環架橋は芳香族又は非芳香族であり得る。
【０２１１】
本発明の化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグは、ｈＥＲＧイオンチャネルを活性化するのに特に有益である。特に、本発明の化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグは、ｈＥＲＧ遮断剤によって誘発された潜在的ＬＱＴＳを無効にすることができ、これによってｈＥＲＧに関する心筋再分極障害の予防及び治療を改善することができる。
【０２１２】
ここに開示されているのは、体内及び体外の両方のｈＥＲＧイオンチャネルを特性化し、かつ心血管安全性の不利益を低減した薬剤を開発するのに有益な化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグである。
【０２１３】
さらに、ここに開示されているのは、効果的な量の化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグを含む医薬組成物と、医薬上許容可能な担体又は賦形剤である。さらに、これら組成物は添加剤を含み得る。これら組成物は、ｈＥＲＧに関する心筋再分極障害を治療又は予防するのに有益なものである。
【０２１４】
さらに、ここに開示されているのは、ｈＥＲＧに関する心筋再分極障害を治療又は予防する方法であり、当該方法は、本発明による化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグか、本発明による化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグを含む医薬組成物を必要としている対象にこれを投与するステップを含む。さらに、これら方法は、本発明による化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグとは別に、又は組み合わせて添加剤を対象に投与するステップを含む。
【０２１５】
さらに、ここに開示されているのは、本発明による化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグか、本発明による化合物又はその医薬上許容可能な塩、溶媒和物、クラスレート、若しくはプロドラッグを含む医薬組成物を用いて、体内又は体外において、ｈＥＲＧイオンチャネル及び癌細胞増殖を含む細胞機能を変調する方法である。
【０２１６】
ここに開示された全ての方法は、化合物のみ、又はｈＥＲＧ遮断剤若しくはＬＱＴＳを引き起こし得る薬剤などの他の作用因子と組み合わせて実施されることができる。
【０２１７】
ここに開示されているのは、客体内のｈＥＲＧイオンチャネルを変調する組成物及び方法であり、以下の化学式のものから選択される１つ以上の化合物を投与すること（ステップ）を含む。
【０２１８】
【化３】

【０２１９】
【化４】

【０２２０】
【化５】

【０２２１】
【化６】

【実施例】
【０２２２】
【実施例１】
【０２２３】
化学合成と特性化
化合物Ｅ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４、５−ジメチル−５−［４´−ｎ−ブチルフェニル］−２、５−ジヒドロフラン
１０．０グラム（０．０４５５モル）の３−ヒドロキシ−３−［４´−ｎ−ブチルフェニル］−２−ブタノン、６．０グラム（０．０９１モル）のマロノニトリル、２．３ｍｌ（２．３ｍモル）のリチウムエトキシド、及び５０ｍｌのＴＨＦが混合され、一晩還流においてボイル（boil）された。エタノール内において再結晶化によって純粋な化合物Ｅが得られ、これによって、収率６９．１％、mp:129.3-130.5℃、¹H NMR: δ 7.259 (d, 2H), 7.112 (d, 2H), 2.638 (t, 2H, CH₂), 2.225 (s, 3H, Me), 1.997 (s, 3H, Me), 1.60-1.28 (m, 4H, CH₂), 0.931 (t, 3H, CH₃)、¹³C NMR: 182.476, 175.753, 145.841, 131.069, 129.692 (2C), 125.075 (2C), 110.406, 109.088, 104.728, 101.724, 58.830, 35.236, 33.277, 22.335 (2C), 14.558, 13.873、HPLC:100%において９．９５グラムのものを与えた。
【０２２４】
化合物Ｄ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４、５−ジメチル−５−［２´、４´−ジフルオロフェニル］−２、５−ジヒドロフラン
８グラム（０．０４モル）の３−ヒドロキシ−３−［２´、４´−ジフルオロフェニル］−２−ブタノン、５．３グラム（０．０８モル）のマロノニトリル、及び２ｍｌ（２ｍモル）のリチウムエトキシドが５０ｍｌのＴＨＦ内で一晩還流された。精密検査の後には、エタノールから再結晶化によって純粋な化合物Ｄが得られた。収率３７．９％、Mp: 219.0-221.4、¹H NMR: δ 7.441 (d, 1H), 7.066 (dd, 1H), 6.945 (d, 1H), 2.274 (s, 3H, Me)、¹⁹F NMR: -104.81 (d, 1F), 107.294 (d, 1F)、HPLC: 100%において４．５グラムのものを与えた。
【０２２５】
化合物Ｑ：３−シアノ−２−（ジシアノメチリデン）−４−｛トランス、トランス、トランス−［３−（２−（４−（Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノ）−フェニル）ビニル）シクロヘキサ−２−エニリデン］−１−プロペニル｝−５−メチル−５−（４−ｎブチルフェニル）−２、５−ジヒドロフラン
３．０グラム（９．３ｍモル）の２−［３−［２−［４−（ジエチルアミノ）フェニル］エテニル］−５、５−ジメチル−２−シクロヘキセン−１−イリデン］−アセトアルデヒド、及び３．５グラム（１１．２ｍモル）の２−（ジシアノメチレン）−３−シアノ−４、５−ジメチル−５−（４−ｎ−ブチルフェニル）−２、５−ジヒドロフランがＴＨＦ／エタノール内において反応し、カラムクロマトグラフィシリカゲル（ヘキサン内において酢酸エチル２０％）を用いて精製された。クロマトグラフィの後には、１．５グラムの化合物Ｑが得られた。収率２６．０％、¹H NMR (溶媒CD₂Cl₂): δ 7.31 (m, 7), (m, 2), 6.62 (m, 2H), 6.37 (m, 2H), 6.25 (m, 1H), 3.40 (q, 4H), 2.64 (t, 2H), 2.34 (s, 2H), 2.09 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.60-1.36 (m, 4H), 1.17 (t, 6H), 1.00 (s, 3H), 0.92 (t, 3H), 0.85 (s, 3H)、¹³C NMR: 177.16, 174.00, 156.19, 149.74, 149.23, 146.25, 145.94, 134.94, 134.27, 129.94, 129.77, 129.77, 129.61, 127.86, 126.63, 125.88, 124.35, 116.27, 113.19, 112.71, 112.20, 98.92, 95.24, 55.32, 45.06, 39.84, 35.83, 34.08, 31.73, 29.18, 28.05, 22.91, 14.24, 13.00、分子式:C₄₂H₄₆N₄O、正確な質量+Na: 645.3569（計算）、645.3559（観測）、偏差(ppm): 0.6であった。
【０２２６】
化合物Ｕ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４−メチル−５−スピロ−シクロヘキシル−２、５−ジヒドロフラン
１４．２グラム（０．１モル）の１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル−エタノン、１３．２グラム（０．２モル）のマロノニトリル、１００ｍｌ（０．１モル、エタノール内において１Ｍ溶液）のナトリウムエトキシド、及び１００ｍｌのエタノールが混合され、室温にて一晩反応した。エタノール内において再結晶化から純粋な化合物Ｕが得られ、これによって、収率６７．５％、mp: 236.5-237.5℃、¹H NMR: δ 2.337 (s, 3H, Me), 1.86-1.70 (m, 11H, 環)、¹³C NMR: 182.387, 175.230, 110.980, 110.458, 108.999, 104.883, 101.437, 58.572, 33.123 (2C), 23.918, 21.289 (2C), 14.499、HPLC: 100%において１６．１グラムのものを与えた。
【０２２７】
化合物Ｂ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４−メチル−５−フェニル−５−ペルフルオロメチル−２、５−ジヒドロフラン
１０．０グラム（０．０４６モル）の３−ヒドロキシ−３−フェニル−４、４、４−トリフルオロ−２−ブタノン、６．１グラム（０．０９２モル）のマロノニトリル、２．５ｍｌ（２．５ｍモル）のリチウムエトキシド、及び２０ｍｌのＴＨＦが混合され、一晩還流された。カラムクロマトグラフィ（シリカゲル上の１００％ジクロロメタン、６０−２００メッシュ）を介して純粋な化合物Ｂが得られ、これによって、収率２５．９％、mp: 133-135℃、¹H NMR: 7.577-7.546 (m, 3H, Ar), 7.444-7.410 (m, 2H, Ar), 2.479 (s, 3H, Me)、¹⁹F NMR: -72.852、¹³C NMR: 174.224, 172.148, 131.908, 130.191, 127.467, 125.742, 121.682, 109.793, 109.511, 109.098, 108.099, 98.521, 62.938, 15.439、GC/MS: 317 (M+2), 247 (M-CF3)、HPLC: 100%において３．７５グラムのものを与えた。
【０２２８】
化合物Ｖ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４−メチル−５−スピロ−［７−（１´、１´、２´、２´、３´、３´、４´、４´、４´−ペルフルオロブチル）テトラリン］−２、５−ジヒドロフラン
６．８グラム（０．０１６７モル）の１−ヒドロキシ−１−アセチル−７−［１´、１´、２´、２´、３´、３´、４´、４´、４´−ノナフルオロブチル］テトラリン、２．２グラム（０．０３３モル）のマロノニトリル、１ｍｌ（１ｍモル、エタノール内において１Ｍ溶液）のリチウムエトキシド、及び２０ｍｌのＴＨＦが反応し、一晩還流された。エタノールから再結晶化によって純粋な化合物Ｖが得られ、これによって、収率１１．８６％、mp: 211.0-212.4℃、¹H NMR: δ 7.636 (dd, 1H), 7.479 (d, 1H), 6.925 (d, 1H), 3.148-2.879 (m, 2H), 2.252 (s, 3H, Me), 2.166 (m, 4H)、¹³C NMR: 178.962,173.437, 142.286, 130.305, 128.206, 127.779, 127.473, 124.453, 118.514, 116.378, 114.119 (2C), 109.570, 109.105 (2C), 107.892, 107.830, 106.571, 98.558, 58.921, 32.632, 27.877, 17.537, 13.797、¹⁹F NMR: -111.843 (2F), -123.282 (2F), -126.127 (3F)、HPLC: 100%において１グラムのものを与えた。
【０２２９】
【化７】

【０２３０】
化合物Ｔ：
３．０グラム（０．００８モル）の化合物Ａ２及び２．９グラム（０．００８モル）の化合物Ｂ２の混合物に対して、２０ｍＬのＴＨＦ及び３０ｍＬのエタノールが加えられた。この混合物が還流にて加熱され、その際無水ピペリジンが５滴加えられた。この混合物は当該温度にて１６時間加熱された。その後、反応混合物は室温にて冷却され、溶媒が減圧しながら除去され、塩化メチレン内に溶解した油を得た。この塩化メチレン溶液は水で洗浄され、無水ＭｇＳＯ_４上にて乾燥され、濃縮されて油状生成物を形成した。カラムクロマトグラフィ（シリカ上の１００％塩化メチレン）を介して純粋な化合物Ｔが得られ、収率５４％、HPLC: 100%において３．０グラムのものを与えた。
【０２３１】
化合物Ｗ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４−メチル−５−スピロ−フルオレニリジン−２、５−ジヒドロフラン
５．０グラム（０．０２２３モル）の９−ヒドロキシ−９−アセチル−フルオレン、２．９４グラム（０．０４４６モル）のマロノニトリル、３．１グラム（０．０２２３モル）の無水炭酸カリウム、１８−クラウン−６エーテル（触媒量）、及び５０ｍｌの乾燥したＴＨＦが混合され、一晩還流された。エタノールから再結晶化によって純粋な０４１が収集され、これによって、収率４５．０％、mp: 302-303℃、¹H NMR: δ 7.760 (d, 2H), 7.566 (t, 2H), 7.393 (t, 2H), 7.187 (d, 2H), 1.935 (s, 3H)、¹³C NMR: 177.504, 140.459、HPLC: 100%において３．２２グラムのものを与えた。
【０２３２】
化合物Ｇ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４、５−ジメチル−５−［２´、４´−ジクロロフェニル］−２、５−ジヒドロフラン
６．８グラム（０．０２９モル）の１−ヒドロキシ−１−メチル−１−［２´、４´−ジクロロフェニル］−２−プロパノン、３．８グラム（０．０５８モル）のマロノニトリル、１ｍｌ（１ｍモル）のリチウムエトキシド、及び１０ｍｌのＴＨＦが混合され、還流にて３６時間ボイルされた。上記精密検査の結果、エタノール及び酢酸エチルの混合物内において再結晶化によって固体生成物が得られ、これによって、収率１６．７％、mp: 239-240℃、¹H NMR: δ 7.501 (d, 1H), 7.472 (s, 1H), 7.427 (dd, 1H), 2.194 (s, 3H, Me), 2.032 (s, 3H, Me)、¹³C NMR: 180.244, 176.047, 138.409, 135.059, 132.545, 130.484, 128.649, 128.359, 110.807, 110.281, 109.033, 107.339, 99.563, 60.479, 25.521, 14.494、HPLC: 88.05%において１．６グラムの化合物Ｇを与えた。
【０２３３】
【化８】

【０２３４】
化合物Ｎ：
１．１１グラム（０．００３４モル）の化合物Ａ３、１．２２グラム（０．００４モル）の化合物Ｄ、及びピペリジンがＴＨＦ（３０ｍＬ）／エタノール（３０ｍＬ）内において混合された。この混合物は一晩還流された。室温にて冷却された後、この混合物は酢酸エチル／ヘキサンエチル内において精密検査された。エタノールから再結晶化によって純粋なＮが収集され、収率６３％、HPLC: 100%において１．２９グラムのものを与えた。
【０２３５】
化合物Ｆ：２−ジシアノメチレン−３−シアノ−４、５−ジメチル−５−［３´、４´−ジクロロフェニル］−２、５−ジヒドロフラン
１５グラム（０．０６４モル）の３−ヒドロキシ−３−［３´、４´−ジクロロフェニル］−２−ブタノン、８．５グラム（０．１２９モル）のマロノニトリル、及び３．２ｍｌ（３．２ｍモル、エタノール内において１Ｍ溶液）のリチウムエトキシドが８０ｍｌのＴＨＦ溶液内において混ぜられ、還流条件下において一晩ボイルされることを許容された。当該溶液は、吸引真空下のロータリーエバポレータ（rotary evaporator）上にて大部分のＴＨＦを除去することによって濃縮された。塩化メチレン内において残留物が吸い上げられ、塩水（２倍）を用いて洗浄され、その後脱イオン化水（２倍）を用いて洗浄された。有機層は無水ＭｇＳＯ_４上にて乾燥され、ろ過され、溶媒が除去された。変性アルコールから粗生成物が再結晶化され、目的の化合物Ｆを得て、これによって収率２５．９％、mp: 226.4-228.6℃、¹H NMR: δ 7.579 (d, 1H), 7.324 (d, 1H), 7.070 (dd, 1H), 2.254 (s, 3H, Me), 2.001 (s, 3H, Me)、¹³C NMR: 180.253, 175.015, 135.676, 134.630, 134.382, 131.982, 127.552, 124.595, 110.580, 109.966, 108.810, 105.822, 100.107, 60.573, 22.894, 22.894, 14.637、HPLC: 100%において５．５グラムのものを与えた。
【０２３６】
【化９】

【０２３７】
化合物Ｉ：
０．５グラム（０．００３モル）の化合物Ａ４及び１．０グラム（０．００３モル）の化合物Ｂ２の混合物に対して、４０ｍＬのＴＨＦ及び１０ｍＬのエタノールが加えられた。この混合物は７０において８００Ｃまで加熱され、その際無水ピペリジンが５滴加えられた。この混合物は同じ温度において１６時間加熱された。その後、反応混合物は室温にて冷却され、溶媒が減圧しながら除去され、塩化メチレンに溶解した油を得た。この塩化メチレン溶液は水で洗浄され、無水ＭｇＳＯ_４上にて乾燥され、濃縮されて油状生成物を形成した。シリカ上においてカラムクロマトグラフィを介して純粋な化合物Ｉが得られ、収率２０％、HPLC: 100%において０．３グラムのものを与えた。
【０２３８】
【化１０】

【０２３９】
化合物Ｋ：
０．４５グラム（０．００１モル）の化合物Ａ５、０．４５グラム（０．００１モル）の化合物Ｇ、及び３滴のピペリジンがＴＨＦ（４０ｍＬ）／エタノール（２０ｍＬ）内において混合された。この混合物は一晩還流された。室温での冷却後、この混合物は酢酸エチル／酢酸ヘキサン内において精密検査され、所望の生成物を得た。エタノールから再結晶化によって純粋な化合物Ｋが収集され、収率２３％、HPLC: 100%において０．１５グラムのものを与えた。
【実施例２】
【０２４０】
Ｂ．無標識光学バイオセンサの細胞アッセイにおける化合物の特性化
光学バイオセンサは表面に結合した電磁波を一次的に使用して細胞反応を特性化する。当該表面結合波は、光に励起された表面プラズモンを用いて金属（例えば金）基板上において得られる（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ））か、又は回折格子に結合された導波モード共鳴を用いて誘電体基板上において得られる（共鳴導波路回折格子（ＲＷＧ））ことができる。ＳＰＲにおいて、読み出しは発生する反射光の強度が最小の共鳴角度である。同様に、ＲＷＧバイオセンサにおいて、読み出しは得られる光取り込み（incoupling）効率が最大の共鳴角度又は共鳴波長である。光結晶バイオセンサはＲＷＧバイオセンサである。当該共鳴角度又は共鳴波長はセンサ表面又はその近傍における局所屈折率の関数である。アッセイにおいて数個のフローチャネルに限られるＳＰＲとは異なり、ＲＷＧバイオセンサは、機器及びアッセイの近年の進歩によって、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）及び細胞アッセイを受け入れる余地がある。典型的なＲＷＧにおいて、細胞は、高屈折率の材料を含むバイオセンサが組み込まれたマイクロタイタープレートのウェルに直接配置される。局所的な屈折率変化は、刺激された生細胞の動的質量再分布（ＤＭＲ）シグナルを導出する。これらバイオセンサは、受容体の生態、リガンドの薬理、及び細胞付着を含む様々な細胞プロセスの研究に使用されている。
全ての化合物は、ＲＷＧバイオセンサのコーニングＥｐｉｃ（登録済み）システムを用いて、生細胞内のｈＥＲＧイオンチャネルを変調する能力を、体系的に特性化された。Ｅｐｉｃ（登録済み）システムは、温度管理ユニット、光学検出ユニットから構成されており、さらにロボットを備えたオンボードの液体操作ユニットを含むか、又はロボットを備えた外部の液体補助システムを含む。当該検出ユニットは統合されたファイバ光学系の中央に設けられ、細胞反応の約７又は１５秒間隔での動態測定を可能にする。化合物溶液は当該オンボードの液体操作ユニット又は外部の液体補助システム（共に従来の液体操作システムを使用する）を用いて導入された。
【０２４１】
１．材料及び方法
ａ）細胞培養
全ての細胞培養試薬はインビトロジェンギブコ社（Invitrogen GIBCO）から購入した細胞培養である。ＨＥＫ２９３細胞、ＭＣＦ７細胞、及びＨＴ２９細胞はＡＴＣＣから購入された。ＨＥＫ２９３細胞は、ＡＴＣＣの指示に従って、１０％のウシ胎児血清及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含んだMEM-GlutoMax内に保存された。ＨＴ２９細胞は１０％のウシ胎児血清及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含んだMcCoy５Ａ培地内に保管された。ＭＣＦ７細胞は、ＡＴＣＣに処方された０．０１ｍｇ／ｍｌのウシインスリンのウシ胎児血清を含むイーグルの最小必須培地（Eagle’s Minimum Essential Medium）内において最終濃度が１０％になるまで保管された。ｈＥＲＧ安定発現ＨＥＫ細胞株（ＨＥＫ−ｈＥＲＧ）はSunら（J. Biol. Chem. 2006, 281, 5877）に従って保管された。細胞は週当たり１−２回二次培養され（subcultured）、１５未満の通過細胞が全ての実験に使用された。全ての細胞培養は、典型的な細胞培養器内において５％の二酸化炭素内にて行われた。
【０２４２】
ｂ）化合物
マロトキシン、フルフェナム酸、ジフルニサル、及びドフェチリドはエンゾライフサイエンス社（Enzo Lifesciences）から購入された。ドフェチリドはフィッシャーサイエンティフィック社（Fisher Scientific）からも購入された。
【０２４３】
ｃ）無標識バイオセンサの細胞アッセイ
Ｅｐｉｃ（登録済み）波長インタロゲーションシステム（コーニング社、コーニング、ＮＹ）が全ての細胞検知に使用された。このシステムは、温度管理ユニット、光学検出ユニット、及びオンボードのロボット付き液体操作ユニットで構成されている。当該検出ユニットは統合されたファイバ光学系の中央に設けられており、約１５秒間隔での細胞反応の動的測定を可能にする。
【０２４４】
細胞は、アッセイ前は、３８４ウェルのＥｐｉｃ（登録済み）細胞培養処理プレート（Corning Cat#5040）に１６−２０時間プレート化（plated）された（ＨＥＫ２９３細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞はウェル当たり１５０００細胞、ＨＴ２９細胞はウェル当たり３００００細胞）。ＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞及びその親のＨＥＫ２９３細胞については、それぞれ１０μｌの５μｇ／ｍｌフィブロネクチンに覆われた。アッセイ前の１時間、細胞は、２０ｍＭのヘペス（Hepes）を含むハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）を含有するBioTek ELx405セレクトウォッシャによって２回洗浄された。細胞は、Ｅｐｉｃシステム内における２８度のウェル当たり４０μｌのＨＢＳＳ内において１時間培養された。各アッセイにおいては、１０μｌの化合物溶液（５倍）の添加後２分を基準線として開始され、細胞反応が１時間連続で記録された。
【０２４５】
全ての調査は管理された温度（２８度）において実施された。少なくとも２つの独立した実験が、各々少なくとも３つの複製物に対して行われた。アッセイの変動係数は１０％未満であった。全ての用量依存性反応がグラフパッドプリズム５（GraphPad Prism 5）を用いた非線形回帰法によって分析された。
【０２４６】
ｄ）Ｒｂ^＋フラックスアッセイ
Ｒｂ^＋フラックスアッセイは上記文献（Sun, H., et al, J. Biol. Chem. 2006, 281, 5877）に記載してあるようにＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞を用いて実施された。つまり、９６ウェルの組織培養処理プレート内においてウェル当たり５０，０００の細胞がアッセイ前に２０時間プレート化された。翌日、細胞は、５ｍＭのＲｂＣｌを含む完全細胞培地を用いて、５％の二酸化炭素と共に３７度で３時間培養された。その後、ＨＢＳＳ内で希釈された化合物（１０倍）が細胞培地に添加され、細胞はさらに１時間、５％の二酸化炭素と共に３７度で培養された。細胞はＲｂ＋のない細胞培地を用いて２回洗浄され、異なる濃度のＫＣｌを含むウェル当たり１８０μｌの細胞培地を用いて厳密に１０分間培養された。各ウェルにおける浮遊物は新しい９６ウェルのプレートに直ちに移動された。細胞はＨＢＳＳ内においてウェル当たり１８０μｌの０．５％トリトン１００に溶解した。各サンプルのＲｂ^＋濃度がＩＣＲ８０００（Aurora Biomed社製）によって判定された。
【０２４７】
ｅ）細胞増殖アッセイ
CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay（技術告示#288、プロメガ社、マディソン、ＷＩ）を用いて増殖が測定された。細胞が加えられると、アッセイ試薬は生存細胞からＡＴＰの存在下において発光する。細胞は、９６ウェルCorning Costar TCT（組織培養処理）プレート内においてウェル当たり１０，０００細胞の密度にプレート化され、２４時間培養された。試験サンプルはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）内において超音波処理によって可溶化され、ろ過殺菌され、培地を用いて所望の処理濃度まで溶解された。細胞は１００μｌのコントロール培地又は試験サンプルを用いて処理され、４８時間の薬剤暴露期間において培養された。４８時間経過後、プレートは室温にて３０分間平衡化され、１００μｌのアッセイ試薬が各ウェルに加えられ、オービタルシェーカ（orbital shaker）上において２分間細胞の溶解が誘発された。プレートは室温にて１０分間培養されて発光シグナルが安定化され、Perkin Elmer Vector 3 Microplate Reader上にてその結果が読み込まれた。背景の発光に対する値を得るために、全てのプレートは細胞のない培地を含むコントロールウェルを有していた。データは３つの副生物に対するものとして表された。
【０２４８】
ｆ）IonWorksを用いた自動パッチクランプ記録
ｈＥＲＧチャネルを安定して発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＣＨＯ−ｈＥＲＧ）がＴ１７５フラスコ内において約７０％の密集度まで培養された。細胞はＰＢＳを用いて２回洗浄され、２．５ｍｌの０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡが２．５ｍｌのＰＢＳに混合され、Ｔ１７５フラスコへ加えられた。細胞は希釈されたトリプシン／ＥＤＴＡ溶液を用いて３７度で２分間培養され、その後室温で約３分間連続して培養された。２０ｍｌの新鮮培地（fresh medium）が懸濁された細胞に加えられ、５０ｍｌのチューブに移動された。細胞は７５０ｒｐｍにおいて５分間遠心分離された。余分な培地は除去され、細胞は６ｍｌの外部バッファ（１３７ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ_２、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、１０ｍＭのヘペス、１０ｍＭのグルコース、ｐＨ７．４）に懸濁された。その後細胞は４５０ｒｐｍにおいてさらに５分間遠心分離された。最後に、細胞は４ｍｌの外部バッファに懸濁され、血球計算機（hemacytometer）を用いて細胞数がカウントされた。細胞懸濁液は外部バッファを用いてｍｌ当たり２．５ｘ１０^６細胞まで希釈された。４ｍｌの再懸濁された細胞がIonWorks内の細胞リザボに加えられた。４０ｍMのＫＣｌ、１００ｍＭのグルコン酸カリウム、３．２ｍＭのＭｇＣｌ_２、２ｍＭのＣａＣｌ_２、５ｍＭのヘペス、ｐＨ７．２５（ＫＯＨを用いて調節されたもの）を含む内部溶液が使用された。２００μｌのＤＭＳＯストックからの５ｍｇのアンフォテリシンＢが６５ｍｌの内部溶液に加えられ、ウェルが混合され、パッチプレート上の細胞の内部への電気接続を得た。
【０２４９】
化合物は１０ｍＭのＤＭＳＯストックから準備され、外部バッファ内において希釈され、３倍の化合物溶液を作製した。ウェル当たり６０μｌの３倍化合物溶液は３８４ウェルのプレートの列Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤに移動された。ｈＥＲＧチャネル活性剤と報告されているＰＤ１１８５７（シグマアルドリッチ社）が活性剤ポジティブコントロールとして使用された（最終濃度は３０μＭ及び５０μＭ）。ｈＥＲＧ遮断剤のドフェリチドは遮断剤ポジティブコントロールとして使用された（最終濃度は１００ｎＭ）。IonWorks Quattro PatchPlate PPCプレート（Cat#9000-0902, モレキュラーデバイス社）の最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％であった。最終化合物濃度は５０μＭであった。各化合物は１つのＰＰＣプレートの４つのウェルに加えられた。
【０２５０】
ｈＥＲＧ電流はIonWorks Quattro（モレキュラーデバイス社）に記録された。ｈＥＲＧ電流を記録するために、細胞はまず−８０ｍＶにてクランプされ、次に＋４０ｍＶにて５秒間脱分極され、チャネルが活性化された。−３５ｍＶへの回帰を確保している間のテール電流が測定された。データ分析はIonWorks Quttro（登録済み）システムソフトウェアのバージョン２．０．４．４を用いて行われた。ウェルからのデータの５０ＭΩ未満のシール抵抗のもの又は０．１ｎＡ未満のｈＥＲＧテール電流のものは除外された。ｈＥＲＧテール電流比率（後化合物／前化合物）が平均的なＤＭＳＯコントロールの平均値＋２ＳＤ（標準偏差（standard deviation））よりも大きい場合に活性剤のヒットが選択された。ｈＥＲＧテール電流比率（後化合物／前化合物）が平均的なＤＭＳＯコントロールの平均値−２ＳＤ未満である場合に阻害剤のヒットが選択された。
【０２５１】
２．結果
ヒト遅延整流性カリウムイオンチャネル遺伝子（ｈＥＲＧ）生成物は、心筋活動電位の再分極を調節する遅延整流性Ｋ＋チャネルの急速成分（rapid component）における細孔を形成するサブユニットをコード化する。ｈＥＲＧは電位依存性イオンチャネルであり、かつ細胞の原形質膜においてカリウムイオンの移動を制御するのに関与する。ｈＥＲＧは非常に大きなイオンチャネルであるため、少なくとも多くの癌細胞において、大きなシグナル伝達錯体を形成する受容体チロシンキナーゼ及び／又はインテグリンを含むいくつかの他のシグナル伝達分子が共存し得る。ｈＥＲＧチャネルが細胞シグナル伝達に関与することを示す証拠が存在する。さらに、異なるメカニズムが介在しているが、最近発見されたいくつかのｈＥＲＧ活性剤は生理学的状態又はそれに近い状態のｈＥＲＧチャネルの活性化を引き起こすことができる。無標識のＲＷＧバイオセンサの細胞アッセイは、細胞に電位を付加することなく、当該活性化及びそれに続くｈＥＲＧチャネルのシグナル伝達を直接アッセイするために開発された。さらに、ｈＥＲＧイオンチャネルを変調、特に活性化する化合物の能力を実証する方法が開発された。ここに開示されている、ｈＥＲＧイオンチャネルを介して直接作用する変調剤又はｈＥＲＧに関するシグナル伝達錯体を介して間接的に作用する変調剤を特性化する方法は、無標識バイオセンサの細胞アッセイに関する。ここに開示されているのは、ｈＥＲＧ変調剤を特性化するために、３つの細胞型、すなわち、内因的にｈＥＲＧイオンチャネルを発現する癌細胞株、内因性ｈＥＲＧチャネルを含まない天然の細胞株、及び過剰にｈＥＲＧチャネルを発現する人工の細胞株を使用することである。さらに、ここに開示されているのは、ｈＥＲＧ変調剤の作用モードをさらに裏付ける読み出しとしてマロトキシン又他のｈＥＲＧ活性剤を使用することである。また、ここに開示されているのは、例えばＲｂ＋アッセイ、膜電位蛍光アッセイ、又はパッチクランプアッセイなどのイオンフラックスアッセイのようなさらなるアッセイを用いる方法である。
【０２５２】
内因的にｈＥＲＧチャネルを発現する天然の細胞株は、白血病細胞株のＨＬ６０、胃癌細胞株のＳＧＣ７９０１及びＭＧＣ８０３、神経芽腫細胞株のＳＨ−ＳＹ５Ｙ、乳癌細胞株のＭＣＦ−７、並びにヒト大腸癌細胞のＨＴ−２９、ＨＣＴ８、及びＨＣＴ１１６を含むが、これらに限定されない。ｈＥＲＧを含まない天然の細胞株は、ヒト胚性腎臓細胞株のＨＥＫ−２９３、及びチャイニーズハムスター卵巣細胞株のＣＨＯ−Ｋ１を含むが、これらに限定されない。過剰にｈＥＲＧを発現する人工の細胞株は、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ及びＣＨＯ−ｈＥＲＧ細胞を含むが、これらに限定されない。内因性ｈＥＲＧチャネルを有する一次細胞を含む心血管細胞又は神経細胞が使用されることもできる。
【０２５３】
ｈＥＲＧ活性剤は、マロトキシン、ＲＰＲ２６０２４３、ＮＳ１６４３、ＮＳ３６２３、ＰＤ−１１８０５７、ＰＤ−３０７２４３、及びＡ−９３５１４２を含むが、これらに限定されない。
【０２５４】
特定の手法において、化合物は、アゴニズムモード及びアンタゴニズムモードの両方において、３つの細胞型であるＨＴ２９細胞、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞、及びＨＥＫ−２９３細胞内においてプロファイル作製されることができる。ヒト大腸癌細胞株のＨＴ−２９は内因的にｈＥＲＧチャネルを発現することが知られている。ＨＥＫ２９３は内因的に発現されたｈＥＲＧチャネルを含まない天然の細胞株であり、一方ＨＥＫ−ｈＥＲＧは安定的に発現されたｈＥＲＧチャネルを有する人工のＨＥＫ２９３細胞である。マロトキシンは無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤としても選択された。マロトキシンは生理的条件（すなわち１倍のＨＢＳＳのバッファ条件）又はそれに近い条件においてｈＥＲＧチャネルを活性化するｈＥＲＧ活性剤である。
【０２５５】
図１及び図２に示されているように、化合物Ｅ及びＤはＨＴ２９細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞においてはロバストなＤＭＲシグナルを導出したが、ＨＥＫ−２９３細胞においては導出しなかった。さらに、それぞれ、１０マイクロモルの両化合物は、典型的なアンタゴニズムアッセイを用いると、ＨＴ２９細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞におけるマロトキシン反応の減衰したシグナルを生じさせた。ｈＥＲＧチャネルの異なる発現レベル及びｈＥＲＧチャネルシグナル伝達錯体の異なる組織の故に、ＨＴ２９細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞におけるマロトキシンＤＭＲシグナルの異なるｈＥＲＧ変調剤によって変調されたものは、大きく異なることが予想される。これら結果は化合物Ｅ及びＤがｈＥＲＧ活性剤として機能することを示している。化合物Ｐ、Ｍ、Ｑ、Ｕ、Ｒ、Ｂ、Ｖ、Ｔ、Ｗ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｎ、Ｏ、Ｆ、Ｊ、Ｈ、Ｉ、Ｃ、Ａ、Ｋについても同様の結果が観測された（データは示されていない）。
【０２５６】
これら発見を裏付けるために、Ｒｂ＋フラックスアッセイが使用されて両化合物を特性化した。図３に示されてるように、細胞が５ｍＭのＫＣｌを含むバッファ溶液内に保管された場合、１０μＭ又は５０μＭのマロトキシンはＲｂ^＋シグナル伝達の著しい同大を導出した。一方、既知のｈＥＲＧ遮断剤のドフェチリドは、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞におけるＲｂ^＋シグナルを抑制させた。さらに、化合物Ｅ及びＤ（１０マイクロモル又は５０マイクロモル）は、小さいが検出可能なＲｂ^＋フラックスの増大を導出した。これら結果は、化合物Ｅ及びＤがｈＥＲＧイオンフラックス活性剤として機能することを示している。
【０２５７】
ＨＴ２９及びＭＣＦ７の両方を用いた細胞増殖アッセイは、化合物Ｅ、Ｄ、及びＵの全てが細胞死又は細胞増殖率の変化を導出しない（図４、データは示されていない）ことを示した。
【０２５８】
同様の方法を用いて、非ステロイド系抗炎症薬剤のフルフェナム酸がｈＥＲＧ活性剤であることが分かった。１０マイクロモルのフルフェナム酸は、ＨＴ−２９細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞においてロバストなＤＭＲシグナルを導出した（それぞれ、図５Ａ及び図５Ｂ）が、ＨＥＫ２９３細胞においては導出しなかった（図５Ｃ）。フルフェナム酸は、ＨＴ−２９細胞においてマロトキシンＤＭＲシグナルを選択的に減衰させたが、ＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞においては減衰させなかった（図５Ｄ）。両方のｈＥＲＧ発現細胞株におけるフルフェナム酸のＤＭＲシグナルは対応するマロトキシンのＤＭＲシグナルとは大きく異なるものであるが、これら結果はフルフェナム酸が弱いｈＥＲＧ活性剤として機能することを示している。Ｒｂ^＋フラックスアッセイによる追跡調査が示したものは、ＨＥＫ−ｈＥＲＧが５ｍＭのＫＣｌ内においてアッセイされた場合にフルフェナム酸が確かにＲｂ^＋シグナルを小さくかつ用量依存的に増大させたということである（データは示されていない）。さらに、図５Ｅに示されているように、パッチクランプ記録は、フルフェナム酸がｈＥＲＧ電流活性剤であることを示唆している。曲線５１０はフルフェナム酸を加える前のｈＥＲＧ電流を示しており、曲線５２０はフルフェナム酸を加えた後のｈＥＲＧ電流を示している。図５Ｅ（ｂ）に示されているテール電流はフルフェナム酸によって強化される。さらに、同様に、ニフルム酸は、無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤であり、ｈＥＲＧ電流活性剤であり、かつｈＥＲＧ活性剤であることが分かった（データは示されていない）。しかし、ジフルニサルは無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤であり、ｈＥＲＧ経路活性剤であるが、ｈＥＲＧ電流活性剤ではないことが分かった（図６）。ｈＥＲＧ電流を記録するために、細胞はまず−８０ｍＶにてクランプされ、次に＋４０ｍＶにて５秒間脱分極され、チャネルが活性化された（図５Ｄの段階ａ）。−３５ｍＶへの回帰を確保している間のテール電流が２秒間測定された（図５Ｄの段階ｂ）。最終保持電位は−７０ｍＶにおけるものであった（図５Ｄの段階ｃ）。ニフルム酸がｈＥＲＧ活性剤であることは文献には報告されていなかった。
【０２５９】
興味深いことに、化合物Ｂは強力な無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤であることが分かり、これはＨＴ−２９細胞及びＨＥＫ−ｈＥＲＧ細胞においてロバストなＤＭＲシグナルであった（それぞれ、図７ａ及び図７ｂ）が、ＨＥＫ２９３細胞においてはそうでなかった（図７ｃ）ことから明らかである。化合物Ｂは後続のマロトキシン刺激に対して両細胞を脱感作させた（図７ｄ）。化合物Ｂは弱いｈＥＲＧ電流活性剤でもあり、これはＣＨＯ−ｈＥＲＧ細胞内のｈＥＲＧチャネルのテール電流（段階ｂ）を強化した（図７Ｅ）ことから明らかである。化合物Ｗは化合部Ｂに類似したプロファイルを導出した（データは示されていない）。
【０２６０】
一方、化合物Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、及びＵは無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤であることが分かったが、これら化合物はＣＨＯ−ｈＥＲＧ細胞内においてｈＥＲＧ電流にわずかな影響を与え、これは自動パッチクランプを用いて記録された（図８）。これら結果が示唆することが、これら化合物が、無標識バイオセンサのｈＥＲＧ活性剤及びｈＥＲＧ経路活性剤として機能し、非常に弱いｈＥＲＧイオンチャネル活性剤として機能するか又はｈＥＲＧイオンチャネル活性剤としては機能しないということである。化合物Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｏ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、及びＶは自動パッチクランプ法を用いては試験されなかった。
【０２６１】
コントロールとして、従来のｈＥＲＧ遮断剤である１００ｎＭのドフェチリドは、ＣＨＯ−ｈＥＲＧ細胞内においてｈＥＲＧチャネルのテール電流を完全に阻害した（図９）。
【０２６２】
ＩＩＩ．配列
ｈＥＲＧタンパク質の配列はSEQ ID NO: NP_000229に開示されている。ｈＥＲＧ遺伝子の配列はSEQ ID NO: NM_000238に開示されている。
【０２６３】
参考文献
米国出願第12/623,693号（発明者：Fang, Y., Ferrie, A.M., Lahiri, J., and Tran, E、発明の名称「Methods for Characterizing Molecules」、出願日2009年11月23日）
米国出願第12/623,708号（発明者：Fang, Y., Ferrie, A.M., Lahiri, J., and Tran, E、発明の名称「Methods of creating an index」、出願日2009年11月23日）
米国特許第6393190B1号（発明者：He, M., Leslie, T.M、発明の名称「Chromophores for polymeric thin films and optical waveguides and devices comprising the same」）
Cavalli, A.; Poluzzi, E.; De Ponti, F.; Recanatini, M., Toward a pharmacophore for drugs inducing the ling QT syndrome: insights from a CoMFA study of hERG K(+) channel blockers. J Med Chem 2002, 45, (18), 3844-53
Bridgland-Taylor, M. H.; Hargreaves, A. C; Easter, A.; Orme, A.; Henthorn, D. C; Ding, M.; Davis, A.; Small, B. G.; Heapy, C. G.; Abi-Gerges, N.; Persson, F.; Jacobson, L; Sullivan, M.; Albertson, N.; Hammond, T. G.; Sullivan, E.; Valentin, J. P.; Pollard, C. E., Oprimisation and validation of a medium-throughput electrophysiology-based hERG assay using IonWorks HT. J Pharmacol Toxicol Methods 2006, 54, (2), 189-99
Dubin, A. E.; Nasser, N.; Rohrbacher, J.; Hermans, A. N.; Marrannes, R.; Grantham, C; Van Rossem, K.; Cik, M.; Chaplan, S. R.; Gallacher, D.; Xu, J.; Guia, A.; Byrne, N. G.; Mathes, C, Identifying modulators of hERG channel activity using the PatchXpress planar patch clamp. J Biomol Screen 2005, 10, (2), 168-81
Warmke J. W.等. (A family of potassium channel genes related to eag in Drosophila and mammals. PNAS. 1994. 91 (8):3438-3442 incorporated by reference

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｈＥＲＧイオンチャネルを変調する方法であって、
化学式１を有する１つ以上の化合物を投与するステップを含み、
【化１】

前記化学式１において、Ｘは酸素又は硫黄であり、
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、それぞれシアン又は電子吸引基であり、
Ｒ^４は、水素、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、アルケニル、アルキニル、電子的供与−架橋−受容構造、供与−受容構造若しくは架橋−受容構造、又は化学式２を有する完全共役発色団であり、
【化２】

前記化学式２において、ｎは１−６であり、
Ｒ^７は、水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式３であり、
【化３】

前記化学式３において、ｍは０−１であり、
Ｒ^９は水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^７及びＲ^９は、任意に環化されて４−８メンバの環を形成するものであり、
Ｒ^１３及びＲ^１４は、それぞれ水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ^１５及びＲ^１６は、それぞれ水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又はアルコキシであり、
Ｒ^１７は、水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ^２３は、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアニリノ、１−ピペリジノ、１−ピペラジノ、１−ピロリジノ、アシルアミノ、水酸基、チオロ、アルキルチオ、アリールチオ、アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、ビニル、又は１、２、３、４−テトラヒドロキノリニルであり、
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式４であり、
【化４】

前記化学式４において、ｏは０−６であり、
Ｒ^１１は、水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^９及びＲ^１１は、任意に環化されて４−８メンバの環を形成するものであり、
Ｒ^１２は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式５であり、
【化５】

前記化学式５において、Ｒ^５は、水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、フェニル、アルキルアリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、シクロヘキシル、ｎが１−１０の−（ＣＨ_２)ｎ−O−(ＣＨ_２)ｎ、又は化学式６であり、
【化６】

前記化学式６において、Ｒ^１８、Ｒ^１９、Ｒ^２０、Ｒ^２１及びＲ^２２は、それぞれ水素、ハロゲン、塩素、フッ素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、Ｃ_３−Ｃ_８シクロアルキルであり、
Ｒ^６は、水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、フェニル、アルキルアリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、シクロヘキシル、ｎが１−１０の−（ＣＨ_２)ｎ−O−(ＣＨ_２)ｎ、又は化学式７であり、
【化７】

前記化学式７において、Ｒ^２４、Ｒ^２５、Ｒ^２６、Ｒ^２７及びＲ^２８は、それぞれ水素、ハロゲン、塩素、フッ素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、Ｃ_３−Ｃ_８シクロアルキルであり、
Ｒ^５およびＲ^６は、任意に環化されるものであり、
前記化合物はｈＥＲＧ変調剤であることを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記化合物は化学式８を有しており、
【化８】

前記化学式８において、Ｒ^４は、水素、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、アルケニル、アルキニル、電子的供与−架橋−受容構造、供与−受容構造若しくは架橋−受容構造、又は化学式９を有する完全共役発色団であり、
【化９】

前記化学式９において、ｎは１−６であり、
Ｒ^７は、水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式１０であり、
【化１０】

前記化学式１０において、ｍは０−１であり、
Ｒ^９は水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^７及びＲ^９は、任意に環化されて４−８メンバの環を形成するものであり、
Ｒ^１３及びＲ^１４は、それぞれ水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ^１５及びＲ^１６は、それぞれ水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又はアルコキシであり、
Ｒ^１７は水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ^２３は、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアニリノ、１−ピペリジノ、１−ピペラジノ、１−ピロリジノ、アシルアミノ、水酸基、チオロ、アルキルチオ、アリールチオ、アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、ビニル、又は１、２、３、４−テトラヒドロキノリニルであり、
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式１１であり、
【化１１】

前記化学式１１において、ｏは０−６であり、
Ｒ^１１は水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^９及びＲ^１１は、任意に環化されて４−８メンバの環を形成するものであり、
Ｒ^１２は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式１２であり、
【化１２】

前記化学式１２において、Ｒ^５は、水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、フェニル、アルキルアリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、シクロヘキシル、ｎが１−１０の−（ＣＨ_２)ｎ−O−(ＣＨ_２)ｎ、又は化学式１３であり、
【化１３】

前記化学式１３において、Ｒ^１８、Ｒ^１９、Ｒ^２０、Ｒ^２１及びＲ^２２は、それぞれ水素、ハロゲン、塩素、フッ素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、Ｃ_３−Ｃ_８シクロアルキルであり、
Ｒ^６は、水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、フェニル、アルキルアリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、シクロヘキシル、ｎが１−１０の−（ＣＨ_２)ｎ−O−(ＣＨ_２)ｎ、又は化学式１４であり、
【化１４】

前記化学式１４において、Ｒ^２４、Ｒ^２５、Ｒ^２６、Ｒ^２７及びＲ^２８は、それぞれ水素、ハロゲン、塩素、フッ素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、Ｃ_３−Ｃ_８シクロアルキルであることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、Ｒ^４が化学式１５であることを特徴とする方法。
【化１５】

【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記化合物は化学式１６を有しており、
【化１６】

前記化学式１６において、Ｒ^１８、Ｒ^１９、Ｒ^２０、Ｒ^２１及びＲ^２２は、それぞれ水素、ハロゲン、塩素、フッ素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はＣ_３−Ｃ_８シクロアルキルであることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物であって、前記化合物は化学式１７を有しており、
【化１７】

前記化学式１７において、Ｒ^４は、水素、Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、アルケニル、アルキニル、電子的供与−架橋−受容構造、供与−受容構造若しくは架橋−受容構造、又は化学式１８を有する完全共役発色団であり、
【化１８】

前記化学式１８において、ｎは１−６であり、
Ｒ^７は水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^８は、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式１９であり、
【化１９】

前記化学式１９において、ｍは０−１であり、
Ｒ^９は水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^７及びＲ^９は、任意に環化されて４−８メンバの環を形成するものであり、
Ｒ^１３及びＲ^１４は、それぞれ水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ^１５及びＲ^１６は、それぞれ水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又はアルコキシであり、
Ｒ^１７は水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、又はアルキニルであり、
Ｒ^２３は、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアニリノ、１−ピペリジノ、１−ピペラジノ、１−ピロリジノ、アシルアミノ、水酸基、チオロ、アルキルチオ、アリールチオ、アルコキシ、アリールオキシ、アシルオキシ、アルキル、ビニル、又は１、２、３、４−テトラヒドロキノリニルであり、
Ｒ^１０は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式２０であり、
【化２０】

前記化学式２０において、ｏは０−６であり、
Ｒ^１１は水素又はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^９およびＲ^１１は、任意に環化されて４−８メンバの環を形成するものであり、
Ｒ^１２は、水素、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、アルケニル、アルキニル、又は化学式２１であり、
【化２１】

前記化学式２１において、Ｒ^５は、水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、フェニル、アルキルアリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、シクロヘキシル、ｎが１−１０の−（ＣＨ_２)ｎ−O−(ＣＨ_２)ｎ、又は化学式２２であり、
【化２２】

前記化学式２２において、Ｒ^１８、Ｒ^１９、Ｒ^２０、Ｒ^２１及びＲ^２２は、それぞれ水素、ハロゲン、塩素、フッ素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、Ｃ_３−Ｃ_８シクロアルキルであり、
Ｒ^６は、水素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、フェニル、アルキルアリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、シクロヘキシル、ｎが１−１０の−（ＣＨ_２)ｎ−O−(ＣＨ_２)ｎ、又は化学式２３であり、
【化２３】

前記化学式２３において、Ｒ^２４、Ｒ^２５、Ｒ^２６、Ｒ^２７及びＲ^２８は、それぞれ水素、ハロゲン、塩素、フッ素、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、Ｃ_３−Ｃ_８シクロアルキルであることを特徴とする化合物。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、Ｒ４が化学式２４であることを特徴とする方法。
【化２４】

【請求項７】
請求項１に記載の方法であって、前記化合物が化学式２５−２８に記載されたものから選択されることを特徴とする方法。
【化２５】

【化２６】

【化２７】

【化２８】

【請求項８】
請求項１に記載の方法であって、客体に投与される前記化合物はｈＥＲＧ変調剤であることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記ｈＥＲＧ変調剤はｈＥＲＧ活性剤であることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、前記客体は疾病を治療又は予防するためにｈＥＲＧ活性剤を必要としていることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記疾病は薬剤誘発性の後天性ＬＱＴＳであることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の方法であって、
前記ｈＥＲＧ活性剤は、薬剤の安全性プロファイルを改善するために、ｈＥＲＧ遮断剤としての副作用を有する薬剤と共に投与されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項８に記載の方法であって、前記ｈＥＲＧ変調剤はｈＥＲＧ経路遮断剤であり、前記客体は疾病を治療又は予防するためにｈＥＲＧ経路遮断剤を必要としていることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、前記疾病は、白血病、大腸癌、胃癌、乳癌又は肺癌であることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の方法であって、疾病の存在をアッセイするステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１０に記載された客体の疾病が治療されていることをアッセイすることを含む疾病の存在をアッセイする方法。
【請求項１７】
ｈＥＲＧ変調剤を用いてｈＥＲＧイオンチャネルを含む細胞を培養するステップを含むｈＥＲＧイオンチャネルを変調する方法であって、前記変調剤は、ｈＥＲＧ経路活性剤であることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１５に記載の方法であって、前記ｈＥＲＧ経路活性剤は化合物Ｅ、Ｐ、Ｍ、Ｄ、Ｑ、Ｕ、Ｒ、Ｖ、Ｔ、Ｇ、Ｌ、Ｓ、Ｎ、Ｏ、Ｆ、Ｊ、Ｈ、Ｉ、Ｃ、Ａ、Ｋ、又はジフルニサルの中から選択された化合物を含むことを特徴とする方法。
【請求項１９】
ｈＥＲＧ変調剤を用いてｈＥＲＧイオンチャネルを含む細胞を培養するステップを含むｈＥＲＧイオンチャネルを変調する方法であって、前記変調剤は、ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤であることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載の方法であって、前記ｈＥＲＧイオンチャネル活性剤は化合物Ｂ、Ｗ、フルフェナム酸、又はニフルム酸の中から選択された化合物を含むことを特徴とする方法。
【請求項２１】
ｈＥＲＧ変調剤をアッセイする方法であって、
ａ．ｈＥＲＧを発現する少なくとも１つの細胞型を用いてラベルフリーバイオセンサのｈＥＲＧ活性剤を培養するステップと、
ｂ．ラベルフリーバイオセンサアッセイによって前記細胞型の各々におけるｈＥＲＧ活性剤の効果を分析するステップと、
ｃ．少なくとも１つの異なる細胞型を用いてｈＥＲＧ活性剤及び試験化合物を培養するステップと、
ｄ．ラベルフリーバイオセンサアッセイによって前記細胞型におけるｈＥＲＧ活活性剤よび試験化合物の効果を分析するステップと、
ｅ．ｂの効果とｄの効果とを比較するステップと、
ｆ．前記試験化合物がｈＥＲＧ変調剤であるかどうかを判定するステップと、を含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
ｈＥＲＧ変調剤をアッセイする方法であって、
ａ．ｈＥＲＧを発現する天然の細胞、ｈＥＲＧを発現しない天然の細胞、及びその人工の細胞を含む少なくとも３つの細胞型を用いてラベルフリーバイオセンサのｈＥＲＧ活性剤を培養するステップと、
ｂ．ラベルフリーバイオセンサアッセイによって前記細胞型の各々におけるｈＥＲＧ活性剤の効果を分析するステップと、
ｃ．少なくとも３つの異なる細胞型を用いてｈＥＲＧ活性剤及び試験化合物を培養するステップと、
ｄ．ラベルフリーバイオセンサアッセイによって前記細胞型におけるｈＥＲＧ活活性剤よび試験化合物の効果を分析するステップと、
ｅ．ｂの効果とｄの効果とを比較するステップと、
ｆ．前記試験化合物がｈＥＲＧ変調剤であるかどうかを判定するステップと、を含むことを特徴とする方法。
【請求項２３】
ｈＥＲＧチャネル関連疾病の治療のための治療効能を最適化する方法であって、
前記ｈＥＲＧチャネル関連疾病を有する対象に対してｈＥＲＧ変調剤を提供する薬剤を投与するステップと、
前記ｈＥＲＧチャネル関連疾病を有する前記対象におけるｈＥＲＧチャネル関連疾病に対するマーカのレベルを判定するステップと、を含み、
前記ｈＥＲＧチャネル関連疾病に対するマーカのレベルがその後投与するｈＥＲＧ変調剤の量に影響を与えることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であって、前記マーカは血液マーカ又は尿素マーカを含むことを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、前記マーカのレベルが前の時点でのマーカのレベル未満であることは、その後前記対象に投与される前記薬剤の量を増加する必要がなく、前記対象にその後投与されるｈＥＲＧ変調剤の量は同じままであるか又は前の投与量に対して増加されることを示していることを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２３に記載の方法であって、前記ｈＥＲＧチャネル関連疾病は、クラスIII不整脈、薬剤誘発性の後天性ＱＴ延長症候群、遺伝性ＱＴ延長症候群、白血病、大腸癌、胃癌、乳癌、又は肺癌からなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２３に記載の方法であって、前記ｈＥＲＧチャネル関連疾病に対する前記マーカのレベルは、血液サンプル内において判定されることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２３に記載の方法であって、前記レベルは、質量分析、高圧液体クロマトグラフィ、抗体ベースのアッセイなどの分析方法を使用して判定されることを特徴とする請求項２３記載の方法。ことを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２３に記載の方法であって、前記マーカは毒性マーカであることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項２３に記載の方法であって、前記毒性マーカは肝臓酵素又は血液酵素のレベルを測定することを特徴とする方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【公表番号】特表２０１３−５１６４１０（Ｐ２０１３−５１６４１０Ａ）
【公表日】平成２５年５月１３日（２０１３．５．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４７１１１（Ｐ２０１２−５４７１１１）
【出願日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０６０６５５
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０８１９７０
【国際公開日】平成２３年７月７日（２０１１．７．７）
【出願人】（３９７０６８２７４）コーニング　インコーポレイテッド (1,222)
【Ｆターム（参考）】