本開示は、成長および分化因子８（ＧＤＦ８）に関連する新規分子、具体的には、ＧＤＦ８に特異的なエピトープおよび他のＧＤＦ８特異的拮抗剤、特に、ＧＤＦ８活性およびシグナルをｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏで阻害し得る、抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質もしくはその断片を提供する。また、本開示は、ＧＤＦ８を検出および定量化するために使用する免疫アッセイも提供する。また、本開示は、ＧＤＦ８関連障害、たとえば、筋肉、骨、およびインスリン代謝の変性指令を診断、予防、寛解、および治療する方法も提供する。最後に、本開示は、本発明の抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、およびベクターを使用することによる、そのような障害を治療するための医薬品を提供する。
【図１】

【特許請求の範囲】
【請求項１】
成長および分化因子８（ＧＤＦ８）に特異的な拮抗剤であって、拮抗剤が、ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質であり、抗体または抗原結合タンパク質が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体、ヒト化抗体、四量体抗体、四価抗体、多特異性抗体、単鎖抗体、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、融合タンパク質、ＳｃＦｃ融合タンパク質、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、突然変異抗体、ＣＤＲ移植抗体、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）断片、Ｆｄ断片、ｄＡｂ断片を含む抗体断片、ならびに二重特異性抗体、ＣＤＲ３ペプチド、拘束されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチド、ナノ抗体、二価ナノ抗体、小モジュール免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、およびミニ抗体を含む抗原結合タンパク質からなる群から選択される拮抗剤。
【請求項２】
抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１９のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２７のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号２９のアミノ酸配列、配列番号３０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項１に記載の拮抗剤。
【請求項３】
抗体または抗原結合タンパク質が重鎖を含み、重鎖が第１、第２、および第３の相補性決定領域を含み、
第１の相補性決定領域が、配列番号１９のアミノ酸配列、および配列番号２５のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
第２の相補性決定領域が、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
第３の相補性決定領域が、配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２７のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項２に記載の拮抗剤。
【請求項４】
抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１４のアミノ酸配列および配列番号１８のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１に記載の拮抗剤。
【請求項５】
抗体または抗原結合タンパク質が軽鎖を含み、軽鎖が第１、第２、および第３の相補性決定領域を含み、
第１の相補性決定領域が、配列番号２２のアミノ酸配列、および配列番号２８のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
第２の相補性決定領域が、配列番号２３のアミノ酸配列、および配列番号２９のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、
第３の相補性決定領域が、配列番号２４のアミノ酸配列、および配列番号３０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項２に記載の拮抗剤。
【請求項６】
抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１６のアミノ酸配列および配列番号１７のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１に記載の拮抗剤。
【請求項７】
抗体または抗原結合タンパク質が配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項１に記載の拮抗剤。
【請求項８】
抗体または抗原結合タンパク質が配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項１に記載の拮抗剤。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか一項に記載のＧＤＦ８拮抗剤を含むアミノ酸をコードしているポリヌクレオチド。
【請求項１０】
調節配列と作動可能に連結している請求項９に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項１１】
請求項９に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１２】
請求項１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１２に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって発現されたＧＤＦ８拮抗剤を単離することとを含む、ＧＤＦ８拮抗剤を生成する方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法によって生成された、単離したＧＤＦ８拮抗剤。
【請求項１５】
（ａ）
（ｉ）試料、
（ｉｉ）ＧＤＦ８と特異的に結合する捕捉試薬、
（ｉｉｉ）ＧＤＦ８と特異的に結合する検出試薬
を合わせるステップと、
（ｂ）特異的結合が捕捉試薬とＧＤＦ８との間に起こるかどうかを検出するステップと
を含み、特異的結合の検出が試料中のＧＤＦ８の存在を示す、対象からの試料中のＧＤＦ８の存在を検出するためのアッセイ。
【請求項１６】
（ａ）の合わせるステップの前に試料を酸性緩衝液と合わせることをさらに含む、請求項１５に記載のアッセイ。
【請求項１７】
酸性緩衝液のｐＨが約ｐＨ１．０〜ｐＨ６．０である、請求項１６に記載のアッセイ。
【請求項１８】
酸性緩衝液のｐＨが約ｐＨ２．５である、請求項１６に記載のアッセイ。
【請求項１９】
捕捉試薬が、抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質、ＧＤＦ８結合タンパク質、およびＧＤＦ８結合ドメインからなる群から選択される、請求項１５に記載のアッセイ。
【請求項２０】
捕捉試薬が、抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質であり、ＲＫ３５およびＲＫ２２からなる群から選択される、請求項１９に記載のアッセイ。
【請求項２１】
捕捉試薬がＲＫ３５である請求項２０に記載のアッセイ。
【請求項２２】
捕捉試薬がＲＫ２２である請求項２０に記載のアッセイ。
【請求項２３】
検出試薬が、抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質、ＧＤＦ８結合タンパク質、およびＧＤＦ８結合ドメインからなる群から選択される、請求項１５に記載のアッセイ。
【請求項２４】
検出試薬が、抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質であり、ＲＫ３５およびＲＫ２２からなる群から選択される、請求項２３に記載のアッセイ。
【請求項２５】
検出試薬がＲＫ３５である請求項２４に記載のアッセイ。
【請求項２６】
検出試薬がＲＫ２２である請求項２４に記載のアッセイ。
【請求項２７】
（ａ）
（ｉ）試料、
（ｉｉ）ＧＤＦ８と特異的に結合する捕捉試薬、
（ｉｉｉ）ＧＤＦ８と特異的に結合する検出試薬
を合わせるステップと、
（ｂ）特異的結合が捕捉試薬とＧＤＦ８との間に起こるかどうかを検出するステップと、
（ｃ）ＧＤＦ８のレベルを定量化するステップと
を含み、試料中のＧＤＦ８の存在を示す特異的結合の検出を定量化することができる、対象からの試料中のＧＤＦ８を定量化するためのアッセイ。
【請求項２８】
（ａ）の合わせるステップの前に試料を酸性緩衝液と合わせることをさらに含む、請求項２７に記載のアッセイ。
【請求項２９】
酸性緩衝液のｐＨが約ｐＨ１．０〜ｐＨ６．０である、請求項２８に記載のアッセイ。
【請求項３０】
酸性緩衝液のｐＨが約ｐＨ２．５である、請求項２８に記載のアッセイ。
【請求項３１】
薬学的に許容できる担体とＧＤＦ８拮抗剤とを含む医薬組成物であって、拮抗剤が、ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質である医薬組成物。
【請求項３２】
ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは結合しない抗ＧＤＦ８抗体が、配列番号１９のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２７のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号２９のアミノ酸配列、配列番号３０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
ほぼ無毒から無毒である、治療上有効な量の、ＧＤＦ８に特異的な拮抗剤を患者に投与することを含む、哺乳動物患者においてＧＤＦ８関連障害を治療する方法。
【請求項３６】
ＧＤＦ８拮抗剤が、ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＧＤＦ８拮抗剤が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質であり、抗体が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＧＤＦ８拮抗剤が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質であり、抗体が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１９のアミノ酸配列、配列番号２０のアミノ酸配列、配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２７のアミノ酸配列、配列番号２８のアミノ酸配列、配列番号２９のアミノ酸配列、配列番号３０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
（ａ）対象から第１の試料を得るステップと、
（ｂ）第１の試料を請求項９に記載の拮抗剤と合わせるステップと、
（ｃ）第１の試料中のＧＤＦ８の存在を検出するステップと、
（ｄ）第１の試料中のＧＤＦ８のレベルを定量化するステップと、
（ｅ）第２の試料をＧＤＦ８関連障害に罹患していない対象から得るステップと、
（ｆ）第２の試料を拮抗剤と合わせるステップと、
（ｇ）第２の試料中のＧＤＦ８のレベルを検出するステップと、
（ｈ）第２の試料中のＧＤＦ８のレベルを定量化するステップと、
（ｉ）第１および第２の試料中のＧＤＦ８のレベルを比較するステップと
を含み、第２の試料と比較した第１の試料中のＧＤＦ８のレベルの増加、減少、または類似性が、対象がＧＤＦ８関連障害に罹患しているかどうかを示す、対象がＧＤＦ８関連障害に罹患しているかどうかを診断、予後決定、または検出する方法。
【請求項４１】
哺乳動物患者においてＧＤＦ８関連障害を治療するための医薬品の調製における医薬組成物の使用であって、医薬組成物が、薬学的に許容できる担体とＧＤＦ８拮抗剤とを含み、ＧＤＦ８拮抗剤が、ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合しない抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質である使用。
【請求項４２】
対象からの試料中のＧＤＦ８の存在を検出する、またはそれを定量化するためのキットであって、ＧＤＦ８と特異的に結合する捕捉試薬およびＧＤＦ８と特異的に結合する検出試薬を含み、ＧＤＦ８と捕捉および検出試薬との特異的結合の検出が試料中のＧＤＦ８の存在を示すキット。
【請求項４３】
酸性緩衝液をさらに含む、請求項７８に記載のキット。
【請求項４４】
成長および分化因子８（ＧＤＦ８）に特異的な抗体であって、抗ＧＤＦ８抗体または抗原結合タンパク質が、ＧＤＦ８とは特異的に結合するがＢＭＰ１１とは特異的に結合せず、抗体または抗原結合タンパク質が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体、ヒト化抗体、四量体抗体、四価抗体、多特異性抗体、単鎖抗体、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、融合タンパク質、ＳｃＦｃ融合タンパク質、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、突然変異抗体、ＣＤＲ移植抗体、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）断片、Ｆｄ断片、ｄＡｂ断片を含む抗体断片、ならびに二重特異性抗体、ＣＤＲ３ペプチド、拘束されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチド、ナノ抗体、二価ナノ抗体、小モジュール免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、およびミニ抗体を含む抗原結合タンパク質からなる群から選択される抗体。
【請求項４５】
抗体または抗原結合タンパク質がモノクローナル抗体である、請求項４４に記載の抗体。
【請求項４６】
抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項４５に記載の抗体。
【請求項４７】
抗体または抗原結合タンパク質がヒト化抗体である、請求項４４に記載の抗体。
【請求項４８】
抗体または抗原結合タンパク質が、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗体が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖をさらに含む、請求項４７に記載の抗体。

【図１−１】

【図１−２】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９−１】

【図９−２】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３−１】

【図１３−２】

【図１４−１】

【図１４−２】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９−１】

【図２９−２】

【図２９−３】

【図３０−１】

【図３０−２】

【図３０−３】

【図３１−１】

【図３１−２】

【図３２−１】

【図３２−２】

【図３２−３】

【図３３】

【公表番号】特表２０１１−５０４０９６（Ｐ２０１１−５０４０９６Ａ）
【公表日】平成２３年２月３日（２０１１．２．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３２０５８（Ｐ２０１０−５３２０５８）
【出願日】平成２０年１０月３１日（２００８．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０１２３３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０５８３４６
【国際公開日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【出願人】（３０９０４０７０１）ワイス・エルエルシー (181)
【Ｆターム（参考）】