イマチニブジクロロ酢酸塩及びそれを含む抗癌剤組成物
本発明は、イマチニブジクロロ酢酸塩及びそれを含む抗癌剤組成物に関するものである。本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、チロシンキナーゼの抑制活性のみならず、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を通じて癌細胞が自ら消滅するように誘導することにより癌の成長を抑制し、究極的には癌細胞を消滅させることができ、イマチニブとジクロロ酢酸のシナジー効果を通じて抗癌効果を顕著に向上させることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イマチニブジクロロ酢酸塩及びそれを含む抗癌剤組成物に関する。より具体的に、本発明は、チロシンキナーゼの抑制活性のみならず、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を通じて癌細胞が自ら消滅するように誘導することにより癌の成長を抑制し、究極的には癌細胞を消滅させることができ、イマチニブとジクロロ酢酸のシナジー効果を通じて抗癌効果が顕著に増加したイマチニブジクロロ酢酸塩及びそれを含む抗癌剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）は、下記化学式（ＩＩ）で表される４‐［（４‐メチル‐１‐ピペラジニル）メチル］‐Ｎ‐［４‐メチル‐３‐［［４‐（３‐ピリジル）‐２‐ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンゾアミドの一般名で、米国特許登録第５，５２１，１８４号に開示されている。
【０００３】
【化１】
イマチニブは、正常細胞にはほとんど作用せず、フィラデルフィア染色体（９番と２２番染色体が遺伝子を転座して新たに作られた奇形的染色体）という非正常的な染色体を持つ白血病癌細胞にのみ選択的に作用して癌細胞の増殖を抑制する化合物であり、最初の標的抗癌剤として開発された。
【０００４】
イマチニブは、多様な類型の癌治療に特に有用なタンパク質であるチロシンキナーゼの阻害剤として作用し、慢性骨髄性白血病、転移性悪性消化管間質腫瘍（ｇａｓｔｒｏ‐ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｔｕｍｏｕｒ， ＧＩＳＴ）、固形腫瘍及び隆起性皮膚繊維肉腫、再発・不応フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ， Ｐｈ＋ ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群／骨髄増殖性疾患（ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ／ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ， ＭＤＳ／ＭＰＤ）、過好酸球症候群／慢性好酸球性白血病（ｈｙｐｅｒｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ／ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ， ＨＥＳ／ＣＥＬ）及び侵襲性全身性肥満細胞症（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｍａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ， ＡＳＭ）の治療薬として使用されている。
【０００５】
イマチニブは、薬剤学的に許容可能な酸との塩の形態で最も適するように投与される。具体的に、イマチニブは、下記化学式（ＩＩＩ）で表されるイマチニブメタンスルホン酸塩（ｉｍａｔｉｎｉｂ ｍｅｓｙｌａｔｅ）として製造され、多くの国でグリベック（ＧＬＩＶＥＣ又はＧＬＥＥＶＥＣ）という商品名で市販されている。
【０００６】
【化２】
しかし、現在までの研究の結果は、イマチニブは、癌患者の延命のための有用な治療剤ではあるが、イマチニブの単独療法により癌の完治を可能にすることはないものと報告されている。また、イマチニブは、他の抗癌剤のように投与中に耐性が発生するだけでなく、投与中に吐き気、嘔吐、浮腫、皮膚発疹、血液数値減少等の副作用が現れるという問題点がある。
【０００７】
こうした限界を克服する一つの方法として、イマチニブとともに抗癌効果を補完することのできる他の薬物を同時に投与する併用療法が提案されている。しかし、こうした併用製剤も癌細胞を究極的に消滅させることのできる方法を提示できずにおり、２種類の活性成分を複合剤として投与する際、同一投薬単位内で２種類の物質を完全に均一に混合することが難しいという問題点も存在している。
【０００８】
一方、ジクロロ酢酸は、酢酸の誘導体であってメチル基の３つの水素原子のうち２つが塩素原子で置換された構造を有しており、乳酸アシドーシス（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄｏｓｉｓ）と癌の治療に効能がある物質である。しかし、ジクロロ酢酸自体は強い腐食性を有しており、粘膜や上気道組織に損傷を与えるため、ジクロロ酢酸ナトリウム塩やジクロロ酢酸カリウム塩といった塩の形態で使用されている。
【０００９】
具体的に、ジクロロ酢酸塩は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ｐｙｒｕｖａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ）を阻害してピルビン酸デヒドロゲナーゼを活性化させることにより、乳酸アシドーシスを治療する薬物として使用されている（Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ １０８（１）： ５８〜６３（１９８８））。
【００１０】
また、最近発表された研究によると、試験管内における癌細胞効能試験（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ａｓｓａｙ）とラットを利用した実験において、ジクロロ酢酸がミトコンドリアの機能を回復させることにより、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を誘発するだけでなく、試験管内において（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）癌細胞を殺し、ラットにおいて癌を抑制するということが究明された（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １１（１）： ３７〜５１（２００７））。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者らは、イマチニブの抗癌効果を改善し、副作用を減少させるために鋭意研究検討した結果、イマチニブと、毒性が低くかつアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を通じて癌細胞が自ら消滅するように誘導することができる物質であるジクロロ酢酸から製造されるイマチニブジクロロ酢酸塩が驚くべきことにより強力な抗癌効果を示すだけでなく、複合剤として投与する際に同一投薬単位内で２種類の物質を完全に均一に混合することが困難であった問題を克服できることを発見し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、優れた抗癌効果を示す新規な酸付加塩であるイマチニブジクロロ酢酸塩を提供することである。
【００１３】
本発明の他の目的は、イマチニブジクロロ酢酸塩を含む抗癌剤組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、下記化学式（Ｉ）で表されるイマチニブジクロロ酢酸塩に関する。
【００１５】
【化３】
本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、好ましくは、結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩であり、より好ましくは、Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、５．３±０．２、９．１±０．２、１０．５±０．２、１１．５±０．２、１２．３±０．２、１３．１±０．２、１４．１±０．２、１５．６±０．２、１６．６±０．２、１８．７±０．２、１９．８±０．２、２０．２±０．２、２０．９±０．２、２１．８±０．２、２２．５±０．２、２３．４±０．２、２４．７±０．２、２６．２±０．２、２７．９±０．２、２９．３±０．２、３１．３±０．２であることを特徴とする結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩（以下、「結晶型Ｉ」と命名する）である。
【００１６】
代案的に、本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、好ましくは、Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、９．８±０．２、１１．０±０．２、１１．５±０．２、１３．２±０．２、１３．８±０．２、１４．７±０．２、１５．６±０．２、１６．１±０．２、１６．９±０．２、１７．４±０．２、１９．９±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２２．４±０．２、２３．６±０．２、２４．５±０．２、２６．０±０．２、２７．２±０．２、２７．６±０．２、２９．４±０．２であることを特徴とする結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩（以下、「結晶型ＩＩ」と命名する）である。
【００１７】
本発明で使用したジクロロ酢酸は、ＬＤ５０（ラットへの経口投与時、５０％の致死量）の値が２，８２０ｍｇ／Ｋｇで非常に安全であるだけでなく［参考文献：Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ， １３ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）］、分子量も１２８．９４ｇ／ｍｏｌで相対的に小さいため、酸付加塩の製造に非常に有利な有機酸である。特に、ジクロロ酢酸塩は、過去３０年以上乳酸アシドーシスの治療薬として安全に使用されてきたため、その安全性は臨床的に検証されている。
【００１８】
本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩は、イマチニブが持っているチロシンキナーゼの抑制能力だけでなく、ジクロロ酢酸が癌細胞のアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を誘発させることにより、白血病をはじめとする多様な癌治療剤として非常に有利な長所を有する。
【００１９】
本発明に係る前記化学式（Ｉ）で表されるイマチニブジクロロ酢酸塩は、下記化学式（ＩＩ）で表されるイマチニブと下記化学式（ＩＶ）で表されるジクロロ酢酸とを反応させて製造してもよい。
【００２０】
【化４】
【００２１】
【化５】
以下、本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩の製造方法をさらに詳細に説明する。
【００２２】
本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩の製造方法は、イマチニブを有機溶媒に懸濁させてからジクロロ酢酸を滴下し、撹拌して反応させる段階の次に、
（ｉ）反応溶液を減圧濃縮し、得られた残渣に析出溶媒を加えて撹拌した後に得られた固体をろ過するステップ；又は
（ｉｉ）反応溶液を攪拌して得られた固体を濾過するステップを含んでいてよい。
【００２３】
使用するジクロロ酢酸の量は、イマチニブに対して約１当量が好ましい。
【００２４】
前記有機溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、１‐ブタノール、１‐ヘキサノール等のアルコール類、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類、アセトニトリル等のニトリル類、アセトン、２‐ブタノン等のケトン類、及びエチルアセテート、イソプロピルアセテート等のエステル類から選択された１種以上が使用されてよい。
【００２５】
前記析出溶媒としては、イソプロパノール、１‐ブタノール、１‐ヘキサノール等のアルコール類、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類、アセトニトリル等のニトリル類、アセトン、２‐ブタノン等のケトン類、ｎ‐ペンタン、ｎ‐ヘキサン等の炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、エチルアセテート、イソプロピルアセテート等のエステル類、及びジクロロメタン、クロロホルム、１，２‐ジクロロエタン等の塩化炭化水素類から選択された１種以上が使用されてよい。
【００２６】
反応時間は、１〜５時間が好ましく、反応温度は、１０〜４０℃が好ましい。
【００２７】
本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩の製造方法は、前記得られた固体を濾過するステップの次に、洗滌し、乾燥するステップをさらに含んでいてもよい。
【００２８】
一方、本発明は、イマチニブジクロロ酢酸塩を薬剤学的に許容される担体とともに含む抗癌剤組成物、特に、慢性骨髄性白血病又は転移性悪性消化管間質腫瘍の治療のための抗癌剤組成物に関する。本発明の抗癌剤組成物は、イマチニブジクロロ酢酸塩以外に、他の生理活性物質をともに含んでいてよい。
【００２９】
本発明に係る抗癌剤組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、乳濁液剤、懸濁液剤、シロップ剤等、多様な形態で剤形化されてよい。前記多様な形態の抗癌剤組成物は、賦形剤、充填剤、増量剤、結合剤、崩解剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ）、潤滑剤、防腐剤、抗酸化剤、等張剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）、緩衝剤、被膜剤、甘味剤、溶解剤、基剤（ｂａｓｅ）、分散剤、湿潤剤、懸濁剤、安定剤、着色剤、芳香剤等、各剤形に通常的に使用される薬剤学的に許容される担体（ｃａｒｒｉｅｒ）を使用して、公知技術により製造されてよい。
【００３０】
前記薬剤の製造において、本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩の含量は、薬剤の形態によって異なるが、好ましくは、１〜９０重量％の濃度、より好ましくは、５〜３０重量％の濃度である。
【００３１】
本発明の抗癌剤組成物の投与量は、治療される人間を含む哺乳動物の種類、投与経路、体重、性別、年齢、疾患の程度、医師の判断等に応じて広い範囲で多様に変化する。一般的に、経口投与の場合には、体重１ｋｇ当たり１日に活性成分１〜３０ｍｇが投与されてよい。上述した一日投与量は、疾患の程度、医師の判断等により、一度に又は分けて使用されてよい。
【発明の効果】
【００３２】
本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、チロシンキナーゼの抑制活性のみならず、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を通じて癌細胞が自ら消滅するように誘導することにより癌の成長を抑制し、究極的には癌細胞を消滅させることができ、イマチニブとジクロロ酢酸のシナジー効果を通じて抗癌効果を高めることができる。また、こうしたシナジー効果を通じ、有効成分の使用量を下げても同一又は同一以上の効果を出すことができるため、副作用を下げることもできる。
【００３３】
また、本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、イマチニブとジクロロ酢酸を同一投薬単位に含める過程において均質に混合して製剤化することが困難であった問題を解決した長所を有する。
【００３４】
さらに、本発明に係る結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩は、水分及び熱に対する安定性に優れ、吸湿性が非常に低く、薬剤学的組成物に有用に使用することができる。
【００３５】
したがって、本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩は、抗癌剤組成物、特に、慢性骨髄性白血病又は転移性悪性消化管間質腫瘍の治療のための抗癌剤組成物に効果的に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】実施例１で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）のＸ線回折分光図を示した図である。
【図２】実施例１で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の示差走査熱量分析を示した図である。
【図３】実施例５で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）のＸ線回折分光図を示した図である。
【図４】実施例５で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の示差走査熱量分析を示した図である。
【図５】試験例４において、薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたときの、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値を％で表した図である。
【図６】試験例４において、薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたときの、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値を％で表した図である。
【図７】試験例４において、薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたときの、ジクロロ酢酸を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値を％で表した図である。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明しようとする。これらの実施例はただ本発明を説明するためのもので、本発明の範囲はこれら実施例に限定されないということは当業者にとって自明である。
【００３８】
＜実施例１：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にアセトン１００ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。
【００３９】
生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、アセトン１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）６．１０ｇを収得した。収率は９６．７％であった。得られた結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩のＸ線回折分析及び示差走査熱量分析を行い、その結果をそれぞれ図１及び図２に示した。
【００４０】
融点：１４２〜１４６℃
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）：δ＝１０．１８（ｓ，１Ｈ），９．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，４．８Ｈｚ），８．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），８．４５〜８．４２（ｍ，１Ｈ），８．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５０〜７．３８（ｍ，５Ｈ），７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．０（ｓ，１Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ），３．０６（ｂｒｓ，４Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｂｒｓ，４Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ）。
【００４１】
＜実施例２：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をエタノール６０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で３時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、冷却されたエタノール１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）５．５５ｇを収得した。収率は８８．０％であった。
【００４２】
＜実施例３：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をイソプロパノール６０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で３時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、イソプロパノール１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）６．３０ｇを収得した。収率は１００．０％であった。
【００４３】
＜実施例４：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にジクロロメタン１２５ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、ジクロロメタン１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）６．０５ｇを収得した。収率は９６．０％であった。
【００４４】
＜実施例５：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）を２‐ブタノン７０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で３時間、強く攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、２‐ブタンオン１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）６．１１ｇを収得した。収率は９６．９％であった。得られた結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩のＸ線回折分析及び示差走査熱量分析を行い、その結果をそれぞれ図３及び図４に示した。
【００４５】
融点：１７６〜１７８℃
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）：δ＝１０．１８（ｓ，１Ｈ），９．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，４．８Ｈｚ），８．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），８．４５〜８．４２（ｍ，１Ｈ），８．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５０〜７．３８（ｍ，５Ｈ），７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．０（ｓ，１Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ），３．０６（ｂｒｓ，４Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｂｒｓ，４Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ）。
【００４６】
＜実施例６：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間、強く攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にエチルアセテート７０ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、エチルアセテート１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）６．２０ｇを収得した。収率は９８．３％であった。
【００４７】
＜実施例７：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間、強く攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にアセトニトリル１００ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、アセトニトリル２０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）５．８２ｇを収得した。収率は９２．１％であった。
【００４８】
＜実施例８：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間、強く攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して溶媒の体積を１／３に濃縮させた後、濃縮液にジエチルエーテル７５ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、ジエチルエーテル１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）５．９２ｇを収得した。収率は９３．７％であった。
【００４９】
＜比較例１：イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）の製造＞
米国特許登録第６，８９４，０５１号に記載の方法により、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）を次のように製造した。
【００５０】
イマチニブ５．０ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール４８ｍＬに懸濁させ、メタンスルホン酸０．９７ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）とメタノール２ｍＬを加えた。反応溶液を５０℃に加熱し、活性炭０．５ｇを加えた後、３０分間還流させた。反応溶液をろ過して減圧濃縮した後、残渣をメタノール１５ｍＬに溶解させ、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）をシード結晶に添加して生成物の結晶化を誘導した。６０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）５．１８ｇを収得した。
【００５１】
＜試験例１：結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩のＸ線回折分析＞
図１及び図３から、前記実施例１及び実施例５でそれぞれ製造された結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）は、粉末Ｘ線回折分析ではそれぞれ特徴的な結晶形を有することを確認することができた。図１及び図３の粉末Ｘ線回折分光図に示された特徴的なピーク（ｐｅａｋ）をそれぞれ下記表１及び表２に示した。ここで、「２θ」は回折角を、「ｄ」は結晶面間の距離を、「Ｉ／Ｉ０」はピーク（ｐｅａｋ）の相対強度を意味する。
【００５２】
【表１】
【００５３】
【表２】
＜試験例２：水分及び熱に対する安定性試験＞
薬剤学的組成物に使用される活性成分の水分及び熱に対する安定性は、組成物の製造工程はもちろん、組成物の長期保管において重要な要素であるため、前記実施例１及び実施例５でそれぞれ製造されたイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）と、比較例１で製造されたイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）の水分及び熱に対する安定性を測定した。
【００５４】
具体的に、前述したイマチニブ酸付加塩それぞれを温度４０℃及び相対湿度７５％の加速条件において密封状態で保管しつつ、それぞれ０日、３日、７日、１４日及び２８日経過した後の試料について、初期活性成分値の残渣率を高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した。その結果を下記表３に示した。
【００５５】
【表３】
前記表３に見られるように、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）は、２８日間の加速条件の実験において、公知のイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）と対等又は優れた安定性を示した。この結果から、本発明の結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩は、薬剤学的組成物として有用に使用することができる化学的安定性を持っていることを確認することができた。
【００５６】
＜試験例３：非吸湿性試験＞
前記実施例１及び実施例５でそれぞれ製造されたイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）に対する吸湿性を、公知のイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）の吸湿性と比較した。それぞれの化合物を、温度４０℃及び相対湿度７５％の条件で、２時間、８時間、２４時間及び３日間、持続的に露出させた後、水分含量をカールフィッシャー（Ｋａｒｌ‐Ｆｉｓｈｅｒ）水分測定器で測定した。活性成分に含まれる水分の含量を含水率（重量％）で表した測定数値を下記表４に示した。
【００５７】
【表４】
前記表４に見られるように、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）は、多湿条件においても公知のイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）と対等に優れた非吸湿性であることを示した。こうした結果から、本発明に係る結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩は、水分に非常に安定的であり、薬剤学的組成物の活性成分として有用に利用することができることを確認することができた。
【００５８】
＜試験例４：細胞毒性試験＞
１０％ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ： ＦＢＳ）、ロズウェルパーク記念研究所培地（Ｒｏｓｅｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｍｅｄｉｕｍ： ＲＰＭＩ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）を含有する培地を利用して、２×１０５細胞／ｍＬの結腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）培養細胞ＨＴ２９の懸濁液を製造した。製造された懸濁液を、９４ウェルの各ウェルに注入して２４時間培養した。このとき、各サンプル当たり３つのウェルに注入培養した（ｎ＝３）。
【００５９】
２４時間経過した後、各ウェルから培地を除去し、リン酸塩緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ： ＰＢＳ）溶液で洗滌した。イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形Ｉ）、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）及びジクロロ酢酸を、それぞれジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ： ＤＭＳＯ）に溶かした溶液（１０ｍＭ）を製造し、無血清培地（ｓｅｒｕｍ ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ）を利用して１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭの溶液をそれぞれ製造した。これをウェルに１００μｌずつそれぞれ注入し、３７℃のインキュベータで７２時間さらに培養した。
【００６０】
それぞれのサンプルに、３‐（４，５‐ジメチルチアゾール‐２‐イル）‐２，５‐ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（３‐（４，５‐ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ‐２‐ｙｌ）‐２，５‐ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ： ＭＴＴ）を１０μｌずつ添加して４時間さらに培養し、ＥＬＩＳＡ分析器を利用して５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６１】
対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）は、薬物を含まなかった無血清培地で測定されたＭＴＴの吸光度の値を示した。イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形Ｉ）、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）及びジクロロ酢酸をそれぞれ処理した３つの結果値の平均値を求めた後、％値を計算して、その結果を図５、図６及び図７に示した。
【００６２】
薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたとき、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値は、それぞれ３８．５％、４７．８％及び６７．９％と確認された。
【００６３】
また、同じ方法でイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値は、それぞれ５９．７％、５５．２％及び６７．９％と確認された。また、同じ方法でジクロロ酢酸を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値は、それぞれ９５．２％、９８．６％及び１０１．２％と確認された。
【００６４】
前記結果から、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）がイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）よりも優れた抗癌抑制力を示すだけでなく、ジクロロ酢酸の付加によりシナジー効果を示すことを知ることができた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イマチニブジクロロ酢酸塩及びそれを含む抗癌剤組成物に関する。より具体的に、本発明は、チロシンキナーゼの抑制活性のみならず、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を通じて癌細胞が自ら消滅するように誘導することにより癌の成長を抑制し、究極的には癌細胞を消滅させることができ、イマチニブとジクロロ酢酸のシナジー効果を通じて抗癌効果が顕著に増加したイマチニブジクロロ酢酸塩及びそれを含む抗癌剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）は、下記化学式（ＩＩ）で表される４‐［（４‐メチル‐１‐ピペラジニル）メチル］‐Ｎ‐［４‐メチル‐３‐［［４‐（３‐ピリジル）‐２‐ピリミジニル］アミノ］フェニル］ベンゾアミドの一般名で、米国特許登録第５，５２１，１８４号に開示されている。
【０００３】
【化１】
イマチニブは、正常細胞にはほとんど作用せず、フィラデルフィア染色体（９番と２２番染色体が遺伝子を転座して新たに作られた奇形的染色体）という非正常的な染色体を持つ白血病癌細胞にのみ選択的に作用して癌細胞の増殖を抑制する化合物であり、最初の標的抗癌剤として開発された。
【０００４】
イマチニブは、多様な類型の癌治療に特に有用なタンパク質であるチロシンキナーゼの阻害剤として作用し、慢性骨髄性白血病、転移性悪性消化管間質腫瘍（ｇａｓｔｒｏ‐ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｔｕｍｏｕｒ， ＧＩＳＴ）、固形腫瘍及び隆起性皮膚繊維肉腫、再発・不応フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ， Ｐｈ＋ ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群／骨髄増殖性疾患（ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ／ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ， ＭＤＳ／ＭＰＤ）、過好酸球症候群／慢性好酸球性白血病（ｈｙｐｅｒｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ／ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ， ＨＥＳ／ＣＥＬ）及び侵襲性全身性肥満細胞症（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｍａｓｔｏｃｙｔｏｓｉｓ， ＡＳＭ）の治療薬として使用されている。
【０００５】
イマチニブは、薬剤学的に許容可能な酸との塩の形態で最も適するように投与される。具体的に、イマチニブは、下記化学式（ＩＩＩ）で表されるイマチニブメタンスルホン酸塩（ｉｍａｔｉｎｉｂ ｍｅｓｙｌａｔｅ）として製造され、多くの国でグリベック（ＧＬＩＶＥＣ又はＧＬＥＥＶＥＣ）という商品名で市販されている。
【０００６】
【化２】
しかし、現在までの研究の結果は、イマチニブは、癌患者の延命のための有用な治療剤ではあるが、イマチニブの単独療法により癌の完治を可能にすることはないものと報告されている。また、イマチニブは、他の抗癌剤のように投与中に耐性が発生するだけでなく、投与中に吐き気、嘔吐、浮腫、皮膚発疹、血液数値減少等の副作用が現れるという問題点がある。
【０００７】
こうした限界を克服する一つの方法として、イマチニブとともに抗癌効果を補完することのできる他の薬物を同時に投与する併用療法が提案されている。しかし、こうした併用製剤も癌細胞を究極的に消滅させることのできる方法を提示できずにおり、２種類の活性成分を複合剤として投与する際、同一投薬単位内で２種類の物質を完全に均一に混合することが難しいという問題点も存在している。
【０００８】
一方、ジクロロ酢酸は、酢酸の誘導体であってメチル基の３つの水素原子のうち２つが塩素原子で置換された構造を有しており、乳酸アシドーシス（ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄｏｓｉｓ）と癌の治療に効能がある物質である。しかし、ジクロロ酢酸自体は強い腐食性を有しており、粘膜や上気道組織に損傷を与えるため、ジクロロ酢酸ナトリウム塩やジクロロ酢酸カリウム塩といった塩の形態で使用されている。
【０００９】
具体的に、ジクロロ酢酸塩は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ｐｙｒｕｖａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ）を阻害してピルビン酸デヒドロゲナーゼを活性化させることにより、乳酸アシドーシスを治療する薬物として使用されている（Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ １０８（１）： ５８〜６３（１９８８））。
【００１０】
また、最近発表された研究によると、試験管内における癌細胞効能試験（ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ａｓｓａｙ）とラットを利用した実験において、ジクロロ酢酸がミトコンドリアの機能を回復させることにより、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を誘発するだけでなく、試験管内において（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）癌細胞を殺し、ラットにおいて癌を抑制するということが究明された（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １１（１）： ３７〜５１（２００７））。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者らは、イマチニブの抗癌効果を改善し、副作用を減少させるために鋭意研究検討した結果、イマチニブと、毒性が低くかつアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を通じて癌細胞が自ら消滅するように誘導することができる物質であるジクロロ酢酸から製造されるイマチニブジクロロ酢酸塩が驚くべきことにより強力な抗癌効果を示すだけでなく、複合剤として投与する際に同一投薬単位内で２種類の物質を完全に均一に混合することが困難であった問題を克服できることを発見し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、優れた抗癌効果を示す新規な酸付加塩であるイマチニブジクロロ酢酸塩を提供することである。
【００１３】
本発明の他の目的は、イマチニブジクロロ酢酸塩を含む抗癌剤組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、下記化学式（Ｉ）で表されるイマチニブジクロロ酢酸塩に関する。
【００１５】
【化３】
本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、好ましくは、結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩であり、より好ましくは、Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、５．３±０．２、９．１±０．２、１０．５±０．２、１１．５±０．２、１２．３±０．２、１３．１±０．２、１４．１±０．２、１５．６±０．２、１６．６±０．２、１８．７±０．２、１９．８±０．２、２０．２±０．２、２０．９±０．２、２１．８±０．２、２２．５±０．２、２３．４±０．２、２４．７±０．２、２６．２±０．２、２７．９±０．２、２９．３±０．２、３１．３±０．２であることを特徴とする結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩（以下、「結晶型Ｉ」と命名する）である。
【００１６】
代案的に、本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、好ましくは、Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、９．８±０．２、１１．０±０．２、１１．５±０．２、１３．２±０．２、１３．８±０．２、１４．７±０．２、１５．６±０．２、１６．１±０．２、１６．９±０．２、１７．４±０．２、１９．９±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２２．４±０．２、２３．６±０．２、２４．５±０．２、２６．０±０．２、２７．２±０．２、２７．６±０．２、２９．４±０．２であることを特徴とする結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩（以下、「結晶型ＩＩ」と命名する）である。
【００１７】
本発明で使用したジクロロ酢酸は、ＬＤ５０（ラットへの経口投与時、５０％の致死量）の値が２，８２０ｍｇ／Ｋｇで非常に安全であるだけでなく［参考文献：Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ， １３ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）］、分子量も１２８．９４ｇ／ｍｏｌで相対的に小さいため、酸付加塩の製造に非常に有利な有機酸である。特に、ジクロロ酢酸塩は、過去３０年以上乳酸アシドーシスの治療薬として安全に使用されてきたため、その安全性は臨床的に検証されている。
【００１８】
本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩は、イマチニブが持っているチロシンキナーゼの抑制能力だけでなく、ジクロロ酢酸が癌細胞のアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を誘発させることにより、白血病をはじめとする多様な癌治療剤として非常に有利な長所を有する。
【００１９】
本発明に係る前記化学式（Ｉ）で表されるイマチニブジクロロ酢酸塩は、下記化学式（ＩＩ）で表されるイマチニブと下記化学式（ＩＶ）で表されるジクロロ酢酸とを反応させて製造してもよい。
【００２０】
【化４】
【００２１】
【化５】
以下、本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩の製造方法をさらに詳細に説明する。
【００２２】
本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩の製造方法は、イマチニブを有機溶媒に懸濁させてからジクロロ酢酸を滴下し、撹拌して反応させる段階の次に、
（ｉ）反応溶液を減圧濃縮し、得られた残渣に析出溶媒を加えて撹拌した後に得られた固体をろ過するステップ；又は
（ｉｉ）反応溶液を攪拌して得られた固体を濾過するステップを含んでいてよい。
【００２３】
使用するジクロロ酢酸の量は、イマチニブに対して約１当量が好ましい。
【００２４】
前記有機溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、１‐ブタノール、１‐ヘキサノール等のアルコール類、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類、アセトニトリル等のニトリル類、アセトン、２‐ブタノン等のケトン類、及びエチルアセテート、イソプロピルアセテート等のエステル類から選択された１種以上が使用されてよい。
【００２５】
前記析出溶媒としては、イソプロパノール、１‐ブタノール、１‐ヘキサノール等のアルコール類、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類、アセトニトリル等のニトリル類、アセトン、２‐ブタノン等のケトン類、ｎ‐ペンタン、ｎ‐ヘキサン等の炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、エチルアセテート、イソプロピルアセテート等のエステル類、及びジクロロメタン、クロロホルム、１，２‐ジクロロエタン等の塩化炭化水素類から選択された１種以上が使用されてよい。
【００２６】
反応時間は、１〜５時間が好ましく、反応温度は、１０〜４０℃が好ましい。
【００２７】
本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩の製造方法は、前記得られた固体を濾過するステップの次に、洗滌し、乾燥するステップをさらに含んでいてもよい。
【００２８】
一方、本発明は、イマチニブジクロロ酢酸塩を薬剤学的に許容される担体とともに含む抗癌剤組成物、特に、慢性骨髄性白血病又は転移性悪性消化管間質腫瘍の治療のための抗癌剤組成物に関する。本発明の抗癌剤組成物は、イマチニブジクロロ酢酸塩以外に、他の生理活性物質をともに含んでいてよい。
【００２９】
本発明に係る抗癌剤組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、乳濁液剤、懸濁液剤、シロップ剤等、多様な形態で剤形化されてよい。前記多様な形態の抗癌剤組成物は、賦形剤、充填剤、増量剤、結合剤、崩解剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ）、潤滑剤、防腐剤、抗酸化剤、等張剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）、緩衝剤、被膜剤、甘味剤、溶解剤、基剤（ｂａｓｅ）、分散剤、湿潤剤、懸濁剤、安定剤、着色剤、芳香剤等、各剤形に通常的に使用される薬剤学的に許容される担体（ｃａｒｒｉｅｒ）を使用して、公知技術により製造されてよい。
【００３０】
前記薬剤の製造において、本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩の含量は、薬剤の形態によって異なるが、好ましくは、１〜９０重量％の濃度、より好ましくは、５〜３０重量％の濃度である。
【００３１】
本発明の抗癌剤組成物の投与量は、治療される人間を含む哺乳動物の種類、投与経路、体重、性別、年齢、疾患の程度、医師の判断等に応じて広い範囲で多様に変化する。一般的に、経口投与の場合には、体重１ｋｇ当たり１日に活性成分１〜３０ｍｇが投与されてよい。上述した一日投与量は、疾患の程度、医師の判断等により、一度に又は分けて使用されてよい。
【発明の効果】
【００３２】
本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、チロシンキナーゼの抑制活性のみならず、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を通じて癌細胞が自ら消滅するように誘導することにより癌の成長を抑制し、究極的には癌細胞を消滅させることができ、イマチニブとジクロロ酢酸のシナジー効果を通じて抗癌効果を高めることができる。また、こうしたシナジー効果を通じ、有効成分の使用量を下げても同一又は同一以上の効果を出すことができるため、副作用を下げることもできる。
【００３３】
また、本発明のイマチニブジクロロ酢酸塩は、イマチニブとジクロロ酢酸を同一投薬単位に含める過程において均質に混合して製剤化することが困難であった問題を解決した長所を有する。
【００３４】
さらに、本発明に係る結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩は、水分及び熱に対する安定性に優れ、吸湿性が非常に低く、薬剤学的組成物に有用に使用することができる。
【００３５】
したがって、本発明に係るイマチニブジクロロ酢酸塩は、抗癌剤組成物、特に、慢性骨髄性白血病又は転移性悪性消化管間質腫瘍の治療のための抗癌剤組成物に効果的に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】実施例１で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）のＸ線回折分光図を示した図である。
【図２】実施例１で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の示差走査熱量分析を示した図である。
【図３】実施例５で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）のＸ線回折分光図を示した図である。
【図４】実施例５で収得したイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の示差走査熱量分析を示した図である。
【図５】試験例４において、薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたときの、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値を％で表した図である。
【図６】試験例４において、薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたときの、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値を％で表した図である。
【図７】試験例４において、薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたときの、ジクロロ酢酸を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値を％で表した図である。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明しようとする。これらの実施例はただ本発明を説明するためのもので、本発明の範囲はこれら実施例に限定されないということは当業者にとって自明である。
【００３８】
＜実施例１：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にアセトン１００ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。
【００３９】
生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、アセトン１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）６．１０ｇを収得した。収率は９６．７％であった。得られた結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩のＸ線回折分析及び示差走査熱量分析を行い、その結果をそれぞれ図１及び図２に示した。
【００４０】
融点：１４２〜１４６℃
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）：δ＝１０．１８（ｓ，１Ｈ），９．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，４．８Ｈｚ），８．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），８．４５〜８．４２（ｍ，１Ｈ），８．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５０〜７．３８（ｍ，５Ｈ），７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．０（ｓ，１Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ），３．０６（ｂｒｓ，４Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｂｒｓ，４Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ）。
【００４１】
＜実施例２：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をエタノール６０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で３時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、冷却されたエタノール１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）５．５５ｇを収得した。収率は８８．０％であった。
【００４２】
＜実施例３：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をイソプロパノール６０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で３時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、イソプロパノール１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）６．３０ｇを収得した。収率は１００．０％であった。
【００４３】
＜実施例４：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にジクロロメタン１２５ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、ジクロロメタン１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）６．０５ｇを収得した。収率は９６．０％であった。
【００４４】
＜実施例５：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）を２‐ブタノン７０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で３時間、強く攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、２‐ブタンオン１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）６．１１ｇを収得した。収率は９６．９％であった。得られた結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩のＸ線回折分析及び示差走査熱量分析を行い、その結果をそれぞれ図３及び図４に示した。
【００４５】
融点：１７６〜１７８℃
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）：δ＝１０．１８（ｓ，１Ｈ），９．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），８．９４（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，４．８Ｈｚ），８．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），８．４５〜８．４２（ｍ，１Ｈ），８．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．５０〜７．３８（ｍ，５Ｈ），７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．０（ｓ，１Ｈ），３．６０（ｓ，２Ｈ），３．０６（ｂｒｓ，４Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｂｒｓ，４Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ）。
【００４６】
＜実施例６：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間、強く攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にエチルアセテート７０ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、エチルアセテート１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）６．２０ｇを収得した。収率は９８．３％であった。
【００４７】
＜実施例７：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間、強く攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して完全に濃縮させた後、残渣にアセトニトリル１００ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、アセトニトリル２０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）５．８２ｇを収得した。収率は９２．１％であった。
【００４８】
＜実施例８：イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）の製造＞
イマチニブ５．００ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール５０ｍＬに懸濁させ、ジクロロ酢酸０．８３ｍＬ（１０．１ｍｍｏｌ）を徐々に滴下して２０〜２５℃で１時間、強く攪拌した。反応溶液を減圧蒸留して溶媒の体積を１／３に濃縮させた後、濃縮液にジエチルエーテル７５ｍＬを加え、２０〜２５℃で２時間攪拌した。生成された淡黄色の結晶性固体を濾過し、ジエチルエーテル１０ｍＬで洗滌した後、５０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）５．９２ｇを収得した。収率は９３．７％であった。
【００４９】
＜比較例１：イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）の製造＞
米国特許登録第６，８９４，０５１号に記載の方法により、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）を次のように製造した。
【００５０】
イマチニブ５．０ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）をメタノール４８ｍＬに懸濁させ、メタンスルホン酸０．９７ｇ（１０．１ｍｍｏｌ）とメタノール２ｍＬを加えた。反応溶液を５０℃に加熱し、活性炭０．５ｇを加えた後、３０分間還流させた。反応溶液をろ過して減圧濃縮した後、残渣をメタノール１５ｍＬに溶解させ、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）をシード結晶に添加して生成物の結晶化を誘導した。６０℃の真空下で２４時間乾燥してイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）５．１８ｇを収得した。
【００５１】
＜試験例１：結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩のＸ線回折分析＞
図１及び図３から、前記実施例１及び実施例５でそれぞれ製造された結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）は、粉末Ｘ線回折分析ではそれぞれ特徴的な結晶形を有することを確認することができた。図１及び図３の粉末Ｘ線回折分光図に示された特徴的なピーク（ｐｅａｋ）をそれぞれ下記表１及び表２に示した。ここで、「２θ」は回折角を、「ｄ」は結晶面間の距離を、「Ｉ／Ｉ０」はピーク（ｐｅａｋ）の相対強度を意味する。
【００５２】
【表１】
【００５３】
【表２】
＜試験例２：水分及び熱に対する安定性試験＞
薬剤学的組成物に使用される活性成分の水分及び熱に対する安定性は、組成物の製造工程はもちろん、組成物の長期保管において重要な要素であるため、前記実施例１及び実施例５でそれぞれ製造されたイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）と、比較例１で製造されたイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）の水分及び熱に対する安定性を測定した。
【００５４】
具体的に、前述したイマチニブ酸付加塩それぞれを温度４０℃及び相対湿度７５％の加速条件において密封状態で保管しつつ、それぞれ０日、３日、７日、１４日及び２８日経過した後の試料について、初期活性成分値の残渣率を高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した。その結果を下記表３に示した。
【００５５】
【表３】
前記表３に見られるように、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）は、２８日間の加速条件の実験において、公知のイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）と対等又は優れた安定性を示した。この結果から、本発明の結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩は、薬剤学的組成物として有用に使用することができる化学的安定性を持っていることを確認することができた。
【００５６】
＜試験例３：非吸湿性試験＞
前記実施例１及び実施例５でそれぞれ製造されたイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）に対する吸湿性を、公知のイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）の吸湿性と比較した。それぞれの化合物を、温度４０℃及び相対湿度７５％の条件で、２時間、８時間、２４時間及び３日間、持続的に露出させた後、水分含量をカールフィッシャー（Ｋａｒｌ‐Ｆｉｓｈｅｒ）水分測定器で測定した。活性成分に含まれる水分の含量を含水率（重量％）で表した測定数値を下記表４に示した。
【００５７】
【表４】
前記表４に見られるように、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）及びイマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形ＩＩ）は、多湿条件においても公知のイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）と対等に優れた非吸湿性であることを示した。こうした結果から、本発明に係る結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩は、水分に非常に安定的であり、薬剤学的組成物の活性成分として有用に利用することができることを確認することができた。
【００５８】
＜試験例４：細胞毒性試験＞
１０％ウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ： ＦＢＳ）、ロズウェルパーク記念研究所培地（Ｒｏｓｅｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｍｅｄｉｕｍ： ＲＰＭＩ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）を含有する培地を利用して、２×１０５細胞／ｍＬの結腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）培養細胞ＨＴ２９の懸濁液を製造した。製造された懸濁液を、９４ウェルの各ウェルに注入して２４時間培養した。このとき、各サンプル当たり３つのウェルに注入培養した（ｎ＝３）。
【００５９】
２４時間経過した後、各ウェルから培地を除去し、リン酸塩緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ： ＰＢＳ）溶液で洗滌した。イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形Ｉ）、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）及びジクロロ酢酸を、それぞれジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ： ＤＭＳＯ）に溶かした溶液（１０ｍＭ）を製造し、無血清培地（ｓｅｒｕｍ ｆｒｅｅ ｍｅｄｉａ）を利用して１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭの溶液をそれぞれ製造した。これをウェルに１００μｌずつそれぞれ注入し、３７℃のインキュベータで７２時間さらに培養した。
【００６０】
それぞれのサンプルに、３‐（４，５‐ジメチルチアゾール‐２‐イル）‐２，５‐ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（３‐（４，５‐ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ‐２‐ｙｌ）‐２，５‐ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ： ＭＴＴ）を１０μｌずつ添加して４時間さらに培養し、ＥＬＩＳＡ分析器を利用して５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６１】
対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）は、薬物を含まなかった無血清培地で測定されたＭＴＴの吸光度の値を示した。イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶形Ｉ）、イマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）及びジクロロ酢酸をそれぞれ処理した３つの結果値の平均値を求めた後、％値を計算して、その結果を図５、図６及び図７に示した。
【００６２】
薬物を処理しなかった対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ）の吸光度の値を１００％としたとき、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値は、それぞれ３８．５％、４７．８％及び６７．９％と確認された。
【００６３】
また、同じ方法でイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値は、それぞれ５９．７％、５５．２％及び６７．９％と確認された。また、同じ方法でジクロロ酢酸を１００ｎＭ、１０ｎＭ及び１ｎＭの濃度で投与して得られた吸光度の値は、それぞれ９５．２％、９８．６％及び１０１．２％と確認された。
【００６４】
前記結果から、イマチニブジクロロ酢酸塩（結晶型Ｉ）がイマチニブメタンスルホン酸塩（β結晶型）よりも優れた抗癌抑制力を示すだけでなく、ジクロロ酢酸の付加によりシナジー効果を示すことを知ることができた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるイマチニブジクロロ酢酸塩。
【化１】
【請求項２】
結晶性であることを特徴とする請求項１に記載のイマチニブジクロロ酢酸塩。
【請求項３】
Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、５．３±０．２、９．１±０．２、１０．５±０．２、１１．５±０．２、１２．３±０．２、１３．１±０．２、１４．１±０．２、１５．６±０．２、１６．６±０．２、１８．７±０．２、１９．８±０．２、２０．２±０．２、２０．９±０．２、２１．８±０．２、２２．５±０．２、２３．４±０．２、２４．７±０．２、２６．２±０．２、２７．９±０．２、２９．３±０．２、３１．３±０．２であることを特徴とする請求項１に記載の結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩。
【請求項４】
Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、９．８±０．２、１１．０±０．２、１１．５±０．２、１３．２±０．２、１３．８±０．２、１４．７±０．２、１５．６±０．２、１６．１±０．２、１６．９±０．２、１７．４±０．２、１９．９±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２２．４±０．２、２３．６±０．２、２４．５±０．２、２６．０±０．２、２７．２±０．２、２７．６±０．２、２９．４±０．２であることを特徴とする請求項１に記載の結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のイマチニブジクロロ酢酸塩を薬剤学的に許容される担体とともに含む抗癌剤組成物。
【請求項６】
慢性骨髄性白血病又は転移性悪性消化管間質腫瘍の治療のためのものであることを特徴とする請求項５に記載の抗癌剤組成物。
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるイマチニブジクロロ酢酸塩。
【化１】
【請求項２】
結晶性であることを特徴とする請求項１に記載のイマチニブジクロロ酢酸塩。
【請求項３】
Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、５．３±０．２、９．１±０．２、１０．５±０．２、１１．５±０．２、１２．３±０．２、１３．１±０．２、１４．１±０．２、１５．６±０．２、１６．６±０．２、１８．７±０．２、１９．８±０．２、２０．２±０．２、２０．９±０．２、２１．８±０．２、２２．５±０．２、２３．４±０．２、２４．７±０．２、２６．２±０．２、２７．９±０．２、２９．３±０．２、３１．３±０．２であることを特徴とする請求項１に記載の結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩。
【請求項４】
Ｘ線回折分析においてＩ／Ｉ０（Ｉ：各回折角におけるピークの強度、Ｉ０：最大ピークの強度）が１０％以上である回折角（２θ）の値が、９．８±０．２、１１．０±０．２、１１．５±０．２、１３．２±０．２、１３．８±０．２、１４．７±０．２、１５．６±０．２、１６．１±０．２、１６．９±０．２、１７．４±０．２、１９．９±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２２．４±０．２、２３．６±０．２、２４．５±０．２、２６．０±０．２、２７．２±０．２、２７．６±０．２、２９．４±０．２であることを特徴とする請求項１に記載の結晶性イマチニブジクロロ酢酸塩。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のイマチニブジクロロ酢酸塩を薬剤学的に許容される担体とともに含む抗癌剤組成物。
【請求項６】
慢性骨髄性白血病又は転移性悪性消化管間質腫瘍の治療のためのものであることを特徴とする請求項５に記載の抗癌剤組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２０１３−５１５７６６（Ｐ２０１３−５１５７６６Ａ）
【公表日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４７０１７（Ｐ２０１２−５４７０１７）
【出願日】平成２２年１２月２８日（２０１０．１２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２０１０／００９４２３
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０８１４０８
【国際公開日】平成２３年７月７日（２０１１．７．７）
【出願人】（５１１２８５３８１）セルトリオン ケミカル リサーチ インスティテュート (2)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＬＬＴＲＩＯＮ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ
【住所又は居所原語表記】＃８０１，ＫＩＴＩ，Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｕｗｏｎ，Ｓａｎ２−２，Ｗａｕ−ｒｉ，Ｂｏｎｇｄａｍ−ｅｕｐ，Ｈｗａｓｅｏｎｇ−ｓｉ，Ｇｙｅｏｎｇｇｉ−ｄｏ ４４５−７４３，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【出願人】（５１１２８５３９２）セルトリオン ファーム，インコーポレイテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＬＬＴＲＩＯＮ ＰＨＡＲＭ，ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】４１４−６，Ｊａｎｇａｎ−ｄｏｎｇ，Ｄｏｎｇｄａｅｍｕｎ−ｇｕ，Ｓｅｏｕｌ １３０−１００，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月２８日（２０１０．１２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２０１０／００９４２３
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０８１４０８
【国際公開日】平成２３年７月７日（２０１１．７．７）
【出願人】（５１１２８５３８１）セルトリオン ケミカル リサーチ インスティテュート (2)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＬＬＴＲＩＯＮ ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ
【住所又は居所原語表記】＃８０１，ＫＩＴＩ，Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｕｗｏｎ，Ｓａｎ２−２，Ｗａｕ−ｒｉ，Ｂｏｎｇｄａｍ−ｅｕｐ，Ｈｗａｓｅｏｎｇ−ｓｉ，Ｇｙｅｏｎｇｇｉ−ｄｏ ４４５−７４３，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【出願人】（５１１２８５３９２）セルトリオン ファーム，インコーポレイテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＬＬＴＲＩＯＮ ＰＨＡＲＭ，ＩＮＣ．
【住所又は居所原語表記】４１４−６，Ｊａｎｇａｎ−ｄｏｎｇ，Ｄｏｎｇｄａｅｍｕｎ−ｇｕ，Ｓｅｏｕｌ １３０−１００，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
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