イムノグロブリンの産生のための組成物および方法
細胞又は細胞系、例えばハイブリドーマから、ヒト抗体ｃＤＮＡを単離するためのオリゴヌクレオチドが提供される。本発明はまた、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原へと結合するヒトモノクローナル抗体の、少なくとも１つの所定の重鎖又は軽鎖のＣＤＲをコードするｃＤＮＡ；及び、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子へと結合するヒトモノクローナル抗体の、少なくとも１つの所定の重鎖又は軽鎖のＣＤＲをコードするｃＤＮＡ、を提供する。本発明はさらに、本発明の方法に従って単離された１以上のｃＤＮＡを含む発現ベクター、１以上の本発明のｃＤＮＡを発現する宿主細胞、及び１以上の本発明のｃＤＮＡを発現するトランスジェニック植物及び動物を提供する。本発明の特定の実施形態において、発現系は植物をベースとした発現系である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００５年８月３日に出願した米国仮特許第60/705,653号（この内容は、本明細書中にその全体が参考として援用される。）の優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
炭疽病は、胞子形成菌のＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓにより引き起こされる、よく知られた感染性疾患である。この疾患は、歴史的に、動物感染、特にウシ、ヒツジ及びヤギ等の草食動物に関連し、通常はヒトでは見られない。しかしながら、感染が起きている場所で動物製品に携わるヒトは、炭疽病と接触する危険を有する。この生物は世界の多くの領域で見出されているにも関わらず、中東のある領域、及び、サハラ砂漠下のアフリカは、炭疽病の多発地域である。この疾患は３つの異なる方法で現れ：皮膚炭疽、胃腸炭疽及び吸入炭疽は、汚染された肉製品中の胞子、摂食胞子に外傷部が曝されることにより、又は胞子を吸入することにより、それぞれ引き起こされる。皮膚炭疽の致死率が２５％までであるのに対し、胃腸炭疽又は吸入炭疽は、ほぼ１００％の致死率をもたらす。炭疽病感染の確定診断は、蘇生的なケアを提供するには既に手遅れであることがしばしばある。
【０００３】
Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの主たる病原性因子は、その生物によって分泌される多成分からなる毒素である。毒素は、防御抗原（ＰＡ）、致死因子（ＬＦ）及び浮腫因子（ＥＦ）と称される３つのタンパク質からなり、遺伝子ｐａｇ、ｌｅｆ、及びｃｙａにより、それぞれコードされる。ＰＡは、分子量８３ｋＤａの７３５アミノ酸からなるタンパク質である。それは哺乳類細胞表面上の炭疽病毒素受容体（ＡＴＲ）と結合して、フミンにより介在される開裂を受けた結果として、６３ｋＤａの受容体結合産物を生じる。６３ｋＤａのＰＡ断片は、細胞表面上にＬＦ又はＥＦのいずれかと相互作用し得る６量体の複合体を形成し、この複合体はその後、内在化される。ＬＦは、亜鉛金属タンパク質であり、ＭＡＰキナーゼキナーゼのいくつかのアイソフォームを開裂させ、それにより細胞内のシグナル伝達事象を破壊して、最終的に細胞死をもたらす。ＬＦは、炭疽病感染の致死的な転帰に関与すると考えられる。ＥＦは、細胞生理の脱制御を引き起こすカルモジュリン依存性アデニレートシクラーゼであり、浮腫を含む臨床的徴候をもたらす。ＰＡ及びＬＦは共に、致死的毒素と称される。
【０００４】
ＣＤＣは、炭疽病をカテゴリーＡの病原体としてリスト化し、炭疽病の攻撃による損失を、攻撃に曝されたヒト１００，０００人につき２６０億ドルを超えるものと見積もっている。現在、米国でのヒトへの使用に関して認可されている唯一のワクチンであるＢｉｏｔｈｒａｘ（かつての吸着炭疽ワクチン、又はＡＶＡ）は、防御抗原であるＰＡをベースとした、水酸化アルミニウム吸着されてホルマリン処理された、サブユニットワクチンである。それは皮下注射により送達され、ｂａｃｉｌｌｕｓが分泌する致死毒素に対する免疫を誘導する。ワクチンは、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ Ｖ７７０−ＮＰ１−Ｒ株の濾過培養上清から製造される。製造工程は複雑であり、ワクチン調製のロットによりバッチ間にぶれを有し、かつ、ワクチンの厳密な組成は不確定である。さらに、現在のワクチンと共存するアジュバントとしてミョウバンを含むため、ワクチンの保存及び流通の間は低温流通を維持しなければならず、不便性及びコストの負荷がかかる。ワクチンは注射によって投与され、このことが、一括的処理としての対応作業を複雑なものとし得る。従って、炭疽病の発症又は攻撃に関する感染可能性に対して対抗可能な、さらなる試薬が望まれているといえよう。
【０００５】
各種の治療的ならびに診断的な、また工業的及び研究的な目的に関し、モノクローナル抗体の重要性は高まっている。例えば、いくつかの動物における研究により、ワクチン接種した動物由来の炭疽病毒素に特異的な抗体が、感染による致死的な影響から、接種を受けた個体を受動的に守ることが示されている。しかしながら、動物由来の血清には、治療薬として広範に使用することを妨げる明白な欠点がある。ハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマが培養される培地から回収されるか、又はマウス腹水から回収される。残念なことに、これらの産生システムは高価であり、手間がかかり、かつ、その他の顕著な不都合を有している。これらの理由等により、組み換えＤＮＡ技術を含む製造システム等による、モノクローナル抗体の代替的製造システムを利用することが望ましいといえよう。
【０００６】
試薬への十分な要求及び限られた供給に関する懸念、製品コスト、及び試薬の純度により、改良された製品及び試薬に対する緊急の必要性はさらに高まっている。従って、潜在的な炭疽病感染に対抗する改良されたアプローチ、ならびに診断的検出方法の改良、及び、炭疽病感染メカニズムを調べるために有用なリサーチツールに対する明確なニーズ及び緊急性が存在する。さらに、合理的なコストでこのような適用を行うために有用な、大量生産を可能にする製造方法の提供が望まれている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
本発明は、組み換え系で抗体を調製するために有用な核酸及びタンパク質配列を提供する。特に、軽鎖抗体配列及び重鎖抗体配列をコードする核酸配列の調製に関して有用な、オリゴヌクレオチドプライマー配列を提供する。さらに、少なくとも１つの重鎖ポリペプチド又はその機能的な断片からなるポリペプチドをコードする抗体の核酸配列；及び、少なくとも１つの軽鎖ポリペプチド又はその機能的な断片からなるポリペプチドをコードする抗体の核酸配列を提供する。また、重鎖及び軽鎖ポリペプチド及びその機能的な断片を提供する。本発明はさらに、少なくとも１つのＣＤＲ重鎖ポリペプチド及び少なくとも１つのＣＤＲ軽鎖ポリペプチドをそれぞれ独立に含んでなる、ＰＡ−１及びＬＦ−１抗体の抗体配列を提供する。また、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する１以上のＣＤＲをそれぞれ独立に含んでなり、ＰＡ−１又はＬＦ−１結合活性が向上されている、ＰＡ−１及びＬＦ−１抗体の抗体配列を提供する。ＰＡ−１及びＬＦ−１の重鎖及び軽鎖をコードする核酸、ならびにＰＡ−１及びＬＦ−１抗体をコードする核酸が付加的に提供される。このようなコード核酸の機能的な断片が同様に提供される。提供される組成物の製造方法及び用途も、本明細書中で提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
定義
用語「抗体」、「抗体鎖」、「可変領域又はドメイン」、「定常領域又はドメイン」、「γ鎖」、「κ鎖」、「λ鎖」、「重鎖」、「軽鎖」、及びその他の抗体に関連する用語は、例えば、Ｇｏｌｄｂｙ，Ｒ．Ａ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上掲．及び／又はＨａｒｌｏｗ，上掲．に記載されるようなそれらの技術分野において認められる意味にしたがって使用される。
【０００９】
用語「ｃＤＮＡ」とは、ｍＲＮＡと相補的である一本鎖ＤＮＡ分子、又はｍＲＮＡと相補的である鎖を含んでなる二本鎖ＤＮＡ分子のことをいう。二本鎖ｃＤＮＡのもう一方の鎖は、ｍＲＮＡと同じ配列を有することになり、したがって、ｍＲＮＡと同じポリペプチドをコードすることになる。
【００１０】
「発現ベクター」は、調節配列（例えば、プロモーター及び／又はその他の発現シグナル並びに、場合により、３’調節配列等の３’配列又は機能可能に連結している核酸部分の転写を推進させるために十分な停止シグナルを含むベクターである。発現ベクターはさらに、核酸部分の適当な転写のために必要とされる、機能可能に連結された配列を含んでもよい。核酸部分は、必ずしもそうでなくてもよいが、タンパク質コード配列であってもよい。核酸部分は、組み換えＤＮＡ技法により一緒に結合され、天然には存在しないヌクレオチド配列を生じる、別由来の１以上の配列を含むことを意味する、キメラであってもよい。用語「発現ベクター」とは、機能可能に連結される核酸部分の挿入前又は後いずれかのベクターのことをいい得る。特定の発現ベクターは、細菌−酵母、又は細菌−動物細胞、又は細菌−真菌細胞、又は細菌−無脊椎動物細胞、又は細菌−植物細胞等の宿主間でのＤＮＡの往復を可能にしている。典型的な発現ベクターは、宿主細胞中での自己複製のための複製開始起源、１以上の選択マーカー、１以上の（通常は複数の）有用な制限酵素部位、及び（多いコピー数のために有効であることの多い）１以上のプロモーターを含み得る。
【００１１】
「同一性」とは、２以上の核酸の配列が同じである度合のことをいう。評価ウィンドウ上の第１の核酸と第２の核酸との間のパーセント同一性は、核酸を整列させ、同一性を最大にするためにギャップの導入を可能にする、評価ウィンドウ内の反対に位置し同一であるヌクレオチド数を調べ、ウィンドウ内の全ヌクレオチド数で割り、１００を掛けることにより、計算することができる。特定の％同一性を得るために必要とされる同一なヌクレオチド数を計算する場合、割合は最も近い自然数に四捨五入される。２以上の配列を比較する場合、そのうちのいずれかを参照配列と考えてもよい。
【００１２】
パーセント同一性は、当技術分野において公知の様々なコンピュータープログラムを用いて計算することができる。例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ等のコンピュータープログラムは、アラインメントを作成し、対象配列と様々な公開されているデータベースのいずれかの配列との％同一性を提供する。Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７，１９９３中に記載されるのものを改変した、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌのアルゴリズム（Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２２６４−２２６８，１９９０）が、ＡｌｔｓｃｈｕｌらのＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０）に組み入れられる。比較目的のためにギャップのあるアラインメントを得るためには、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（Ａｌｔｓｃｈｕｌ， ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７）に記載されているようにしてギャップＢＬＡＳＴが利用される。ＢＬＡＳＴ及びギャップＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各プログラムのデフォルトのパラメーターが使用される。ＵＲＬ ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を有するウェブサイトを参照されたい。ＰＡＭ２５０又はＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを使用してもよい。
【００１３】
用語「単離される」とは、１）天然において通常それと関連する少なくともいくつかの成分から分離されること；２）ヒトの手が関係する工程によって調製又は精製されること；及び／又は３）天然には存在しないこと、を意味する。天然に見られるより大きな核酸（例えば、染色体、エピソーム、ウィルス又は細菌のゲノム）から切り出された又は増幅された核酸は、単離されているとみなされる。いくつかの実施形態において、切り出された又は増幅された核酸はこれ以上、非コード領域とは結合しないか（しかし、その天然の調節領域又はその一部とは結合し得る）、又は、より大きな核酸において見られるような、単離された核酸の上流又は下流に位置するその他の遺伝子とは結合しない。単離された核酸には、プラスミド、コスミド、人工染色体、ウィルスベクター等中に挿入される核酸、すなわち、単離されていると考えられる組み換え核酸構築物の一部を形成する核酸が含まれる。単離された核酸は、増幅産物（例えば、ＰＣＲ産物）、単離されたｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、制限断片等であってもよい。単離されたポリペプチドは、異種発現系において発現された、すなわち、天然にはそのポリペプチドを発現しない細胞によって発現されたポリペプチドであってもよい。単離された抗体は、血液又は血清以外の組成中に存在する抗体であってもよい。単離された核酸から発現される抗体は単離された抗体であると考えられる。任意の本発明の核酸、抗体鎖、抗体は、単離された形態で提供することができる。
【００１４】
用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」、及び「オリゴヌクレオチド」は、少なくとも３種類のヌクレオチド類のポリマーを言及するために本明細書において同義的に使用される。糖分子と結合した窒素含有塩基をヌクレオシドは含んでなる。ポリヌクレオチドにおいて、リン酸基は隣接するヌクレオシドと共有結合してポリマーを形成する。ポリマーとしては、天然のヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）、ヌクレオシドアナログ、化学的に修飾された塩基、生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化された塩基）、介在塩基、修飾された糖（例えば、修飾されたプリン又はピリミジン）を挙げることができる。本明細書において開示されるポリヌクレオチドにおいて使用され得る各種ヌクレオチド類、ヌクレオチド類、及び骨格構造並びにその製造方法のさらなる検討のために、Ｋｏｒｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＤＮＡ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，２ｎｄ Ｅｄ．（Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９９２）、Ｓｃｈｅｉｔ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８０）、及び米国特許公開第２００４００９２４７０号並びにそれらの中に記載される参考文献を参照されたい。ペプチド核酸、ロック核酸等のアナログも本発明の範囲にある。ポリヌクレオチドは任意の大きさ又は配列であってもよく、一本鎖又は二本鎖であってもよい。オリゴヌクレオチドは通常、１００ヌクレオチド長より短い。本明細書において開示される任意の核酸は、一本鎖又は二本鎖形態であることができる。本発明が核酸配列を提供する場合、相補的配列も提供される。さらに、ある配列がＤＮＡとして提供される場合、対応するＲＮＡ配列（すなわち、Ｔの代わりにＵである配列）も提供される。
【００１５】
用語「核酸構築物」は、ヒトの手により修飾されている核酸又はかかる核酸に由来するもののことを指すために用いられる。例えば、核酸構築物は、天然の核酸分子と比較した変異、欠失、又は置換を含むことができる。核酸構築物は、異なる生物等の異なる供給源に由来する又はそこから生じた２以上の核酸セグメント、例えば、組み換えポリヌクレオチドを含み得る。核酸構築物の１以上の部分の配列は、ヒトによって全体が創作されてもよい。
【００１６】
本明細書において使用する場合、用語「核酸配列」とは、核酸物質自体のことをいうこともでき、特定の核酸、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を生化学的に特徴付ける配列情報（すなわち、５種類の塩基の文字Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、又はＵの中から選択される連続文字）に限定されない。
【００１７】
「機能可能に連結している」又は「機能可能に結合している」とは、一方の配列の発現、活性、局在性等が他方の核酸により調節される、指示される、制御される、変調される等、２つの核酸間の機能的な関係のことをいう。２つの核酸は機能可能に連結している又は機能可能に結合していると称される。「機能可能に連結している」又は「機能可能に結合している」とはさらに、一方のポリペプチドの発現が他方のポリペプチドにより調節される、指示される、制御される、変調される等、２つのポリペプチド間の機能的な関係のことをもいう。２つの核酸は機能可能に連結している又は機能可能に結合していると称される。例えば、核酸の転写は、機能可能に連結しているプロモーターによって指示され；核酸の転写後プロセシングは、機能可能に連結しているプロセス配列によって指示され；核酸の翻訳は機能可能に連結している翻訳調節配列、例えば、翻訳開始配列によって指示され；核酸又はポリペプチドの輸送、安定性、又は局在性は、機能可能に連結している輸送又は局在配列、例えば、分泌シグナル配列によって指示され；ポリペプチドの翻訳後プロセシングは機能可能に連結しているプロセス配列によって指示される。好ましくは、第２の核酸配列と機能可能に連結している第１の核酸配列、又は、第２のポリペプチド配列と機能可能に連結している第１のポリペプチド配列は、かかる配列と直接的又は間接的に共有結合しているが、任意の有効な３次元的結合も許容され得る。当業者であれば、複数の核酸、又は複数のポリペプチドが機能可能に連結又は結合し得ることを理解するであろう。
【００１８】
用語「プライマー」とは、好適な温度にて、任意の必要な共同因子を含む適当なバッファー溶液中の適当な条件下（例えば、４つの異なるヌクレオシド三リン酸及びＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ又は逆転写酵素等のポリメライゼ−ション試薬の存在下）で、テンプレートによって指示されるＤＮＡ合成の開始点として機能する一本鎖オリゴヌクレオチドのことをいう。プライマーの適当な長さは意図されるプライマーの用途によって左右されるが、通常は約１０〜約５０ヌクレオチドの範囲である。プライマーはテンプレートと完全に相補的である必要はないが、テンプレートとハイブリダイズするために十分に相補的であるべきである。プライマーは二本鎖形態で提供することができ、すなわち、その相補鎖とハイブリダイズすることができる。
【００１９】
本明細書において使用する場合、「精製されている」とは、ある実体又は物質が、精製される前に従前にそれとともに見出されている１以上の他の実体又は物質と分離されていることを意味する。実体又は物質は、部分的に精製されていても、実質的に精製されていても、又は純粋であってもよい。核酸又はポリペプチド等の物質又は実体は、溶媒及び溶媒中に含まれる任意のイオン以外の実質的に全ての他の化合物又は実体からかかる物質又は実体が除去された場合に純粋であるとみなされ、すなわち、それは、組成物の乾燥重量の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％以上を構成する。部分的に又は実質的に精製された、核酸又はポリペプチド等の化合物又は実体は、天然にそれとともに見出される物質、例えば、細胞タンパク質及び／又は核酸等の細胞物質の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％から除去され得る。特定の実施形態において、精製された核酸又はポリペプチドは、組成物中でそれぞれ、全核酸又はポリペプチドの乾燥重量の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上を構成する。純度を評価するための方法は当技術分野において公知であり、クロマトグラフィー方法、免疫学的方法、電気泳動方法等が挙げられる。
【００２０】
核酸に関連して用語「調節エレメント」又は「調節配列」は、通常、それと機能し得るように連結している核酸配列の発現における１以上の工程（特に転写であるが、いくつかのケースにおいては、スプライシング又はプロセシング等のその他の事象）を指示又は調節する核酸部分を記載するために本明細書においては使用される。この用語にはプロモーターが含まれ、エンハンサー、サイレンサー、及びその他の転写調節エレメントのことも言い得る。プロモーターとは、転写開始前にＲＮＡポリメラーゼが結合する部位を含み、通常は基底レベルの転写ですら起こるのに必要である核酸領域である。一般的にはかかるエレメントはＴＡＴＡボックスを含んでなる。エンハンサーとは、そのエンハンサーの非存在下で起こり得る発現のいくつかの基底レベルを通常は上回って、近位に又は遠位に位置するプロモーターの転写活性を上昇させるタンパク質のための結合部位を包含する核酸領域である。本発明のいくつかの実施形態において、調節配列はヌクレオチド配列の構成的発現を指示することができ、例えば、発現は、多くの又は全ての細胞型において且つ／又は多くの又は全ての条件において起こり得、他の実施形態においては、調節配列は、細胞又は組織特異的且つ／又は誘導性の発現を生じ得る。例えば、発現は、ホルモン又はその他小分子等の誘導物質の存在又は添加、温度の上昇等により誘導することができる。調節エレメントは、機能可能に連結した核酸の発現を抑制又は減少させることもある。このように挙動する調節エレメントは、本明細書において「負の調節エレメント」と称され得る。
【００２１】
通常、発現レベルは、ｍＲＮＡ又はタンパク質を測定するための標準的技法を用いて測定することができる。かかる方法としては、ノーザンブロッティング、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲ、配列決定、イムノブロッティング等の免疫学的方法、免疫学的検出、又は蛍光検出に続く蛍光標識抗体による染色、オリゴヌクレオチド又はｃＤＮＡマイクロアレイ又は膜アレイ、タンパク質アレイ分析、質量分析等が挙げられる。発現レベルを調べるための簡便な方法は、発現ベクター中で調節エレメントと機能可能に連結させて容易に検出可能なマーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質又はルシフェラーゼ等の蛍光又は発光タンパク質、アルカリホスファターゼ等の酵素等）をコードする核酸を配置して、ベクターを対象の細胞型又は生物中に導入し、一定時間細胞又は生物を維持し、次いで、容易に検出可能なマーカーの発現を測定することであり、容易に検出し得る特性（例えば、蛍光、発光、基質の光学的特性の変化等）を利用し得る。調節エレメントの非存在下及び存在下での発現を比較することにより、調節エレメントが機能可能に連結している配列の発現に影響を及ぼす程度が示される。
【００２２】
「特異的結合」とは、通常、標的ポリペプチド（又は、より一般的には標的分子）と、抗体又はリガンド等の結合分子との間の物理的結合のことをいう。この結合は通常、結合する分子によって認識される抗原決定基又はエピトープ等の標的における特定の構造的特徴の存在に依存する。例えば、
抗体がエピトープＡに対して特異的である場合、エピトープＡを含むポリペプチドの存在又は遊離している標識されたＡとそれに結合する分子の両方を含有する反応物中で遊離している非標識Ａの存在は、結合分子と結合する標識されたＡの量を減少させる。特異性は絶対的である必要はないが、通常、結合が起こる状況のことをいうことを理解すべきである。例えば、多数の抗体が、標的分子に存在するものに加えて、その他のエピトープと交差反応することは、当技術分野において周知である。かかる交差反応性は、抗体を使用する用途に応じて許容され得る。当業者であれば、任意の所定の用途（例えば、標的分子の検出のため、治療目的のため等）において適切に実行しうるように、十分な程度の特異性を有する抗体又はリガンドを選択し得る。結合分子のその他の標的、例えば、競合分子との親和性に対する、標的に対する結合分子の親和性等の付加的因子との関連において評価し得る事も理解すべきである。結合分子が、検出されることが望まれる標的分子に対して高い親和性を示し、非標的分子に対しては低い親和性を示す場合、抗体は恐らく許容可能な試薬となり得る。結合分子の特異性が１以上の状況において一旦確立されたならば、それは、必ずしもその特異性を再評価することなく、その他の、好ましくは類似の状況において使用することができる。２以上の分子の結合は、親和性（平衡解離定数，Ｋｄ）が、試験条件下、例えば、生理学的条件下で少なくとも１０−３Ｍ、好ましくは１０−４Ｍ、より好ましくは１０−５Ｍ、例えば、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、又は１０−９Ｍである場合に、２以上の分子の結合は特異的であるとみなすことができる。
【００２３】
本明細書において使用する場合、「対象」とは、例えば、実験、診断、及び／又は治療目的のために、抗体組成物が送達される個体のことをいう。好ましい対象は哺乳動物、特に家畜（例えば、イヌ、ネコ等）、霊長類、又はヒトである。
【００２４】
本明細書において使用する場合、「治療すること」とは、通常、かかる用語が適用される疾患、障害、又は症状の進行を逆転すること、軽減すること、低下させること、抑制すること、又は、それらの可能性を低減すること、又はかかる用語が適用される疾患、障害、又は症状の１以上の症候又は徴候を低減することを含み得る。「予防すること」とは、疾患、障害、症状、又はそれらの症候もしくは徴候が、又はそれらの重篤度の悪化が生じなくすることをいう。
【００２５】
「ベクター」は、本明細書において、例えば、移送、輸送等、核酸分子の細胞への進入を介在し得る核酸又はウィルス、ウィルスゲノム、又はそれらの部分（例えば、ウィルスキャプシド又はウィルスゲノム成分）のことを称するために用いられる。ベクターが核酸である場合、移送される核酸分子は通常、ベクター核酸分子と連結、例えば、その中へ挿入される。核酸ベクターは、好適な宿主細胞内において自己複製を指示する配列（例えば、複製開始点）を含んでもよく、あるいは、宿主細胞ＤＮＡ中へ核酸の一部又は全部が組み込まれることを可能にするのに十分な配列を含んでもよい。有用な核酸ベクターとしては、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡプラスミド、コスミド、及び天然の又は修飾されたウィルスゲノム又はその一部又はウィルスキャプシド中にパッケージングされ得る核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）が挙げられる。プラスミドベクターは、通常、複製開始点及び１以上の選択マーカーを含む。プラスミドはウィルスゲノムの一部又は全てを含んでもよい（例えば、ウィルスのプロモーター、エンハンサー、プロセシングシグナル又はパッケージングシグナル等）。核酸分子を細胞中に導入し得るウィルス又はその一部（例えば、ウィルスキャプシド）はウィルスベクターと呼ばれる。有用な動物ウィルスベクターとしては、アデノウィルス、レトロウィルス、レンチウィルス、ワクシニアウィルス及びその他のポックスウィルス、単純ヘルペスウィルス等が挙げられる。有用な植物ウィルスベクターとしては、トバモウィルス、イラルウィルス等をベースとするものが挙げられる。ウィルスベクターは、宿主細胞に導入された場合に、感染性ウィルスの産生に関する十分なウィルス遺伝情報を含んでいても、含んでいなくてもよく、すなわち、ウィルスベクターは複製欠損的であり、かかる複製欠損性ウィルスベクターが本発明の特定の実施形態に対しては望ましい。十分な情報が欠如している場合、必ずしも宿主細胞によって情報が提供される必要もなく、又は細胞に導入される別のベクターによって提供される必要もない。
【００２６】
発明の特定の実施形態の詳細な説明
本発明は、モノクローナル抗体（ｍａｂ）ＰＡをコードする核酸、及びモノクローナル抗体ＬＦをコードする核酸に関する。核酸及びその機能的な断片によりコードされる抗体は、炭疽病タンパク質ＰＡ及びＬＦをそれぞれ特異的に認識し、活性及び炭疽病感染の発生を阻害する。本発明はまた、ＰＡ及び／又はＬＦ、及びその機能的な断片の修飾された形態を含んでなるポリペプチドをコードする核酸に関する。これらの抗体及び機能的な断片は、結合特異性及び、親マウス抗体ＰＡ及び／又はＬＦの阻害活性を維持している。本発明はさらに、ＰＡ及び／又はＬＦ 抗体の親形態と比較して結合親和性及び特異性が上昇していることを示すＰＡ及び／又はＬＦ抗体の形態を最適化することに関する。
【００２７】
Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５，１９７５により最初に記載されたハイブリドーマ法は、所望の結合特性を呈するモノクローナル抗体の同定に広く使用されている。手短に言えば、この技術は、通常、免疫した哺乳動物からリンパ球を単離し、このリンパ球をメラノーマ細胞と融合させて、融合により作製されたクローン細胞株（ハイブリドーマ）を単離することを含む。これらの細胞株から、対象のポリペプチド又はその特定の部分、又は抗原決定基に対し結合する抗体を産生するものをスクリーニングする。株はまた、標的ポリペプチドに対する所望の親和性を有する抗体を産生するものを特定するために、スクリーニングすることができる。免疫した哺乳動物は、例えば、ワクチン接種により意図的に免疫されていてもよく、又は感染性生物により感染されているか、抗原等に曝されていてもよい。従って、「免疫した哺乳動物」とは、対象のポリペプチドに特異的に結合する抗体を産生する、任意の哺乳動物をいう。本発明の好ましい実施形態において、哺乳動物は、例えば、病原菌に対するワクチン接種をされたヒト、病原菌に曝されたヒト等のヒトである。
【００２８】
本発明は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、ハイブリドーマ由来の抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードするｃＤＮＡを単離する際に使用するための、オリゴヌクレオチドプライマー及びプライマーのセットを提供する。
【００２９】
一実施形態において、オリゴヌクレオチドは、配列番号１〜４４の任意のものを含んでなる。別の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、配列番号１〜４４のうちの任意のものからなる。その他の態様において、特定のプライマー中で提供される制限酵素部は、任意の好ましい制限酵素部位に対し、望ましいベクター挿入部位へとプライマーを適合させるために修飾することができる。
【００３０】
別の態様において、本発明は、抗体鎖又はその部分をコードする核酸を単離する方法を提供する。一実施形態において、この方法は、（ａ）抗体産生細胞から得られる核酸を、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプライマーと接触させるステップ；及び、（ｂ）増幅反応を行うステップ、を含んでなる。増幅反応は通常、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。本発明の特定の実施形態において、ステップ（ａ）は、核酸を、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーとｃｏｎｔａｉｎｃｔさせることを含んでなる。本発明のプライマー及び方法が、ハイブリドーマから抗体鎖ｃＤＮＡをクローニングするための特定の用途（すなわち、抗体鎖をコードするｃＤＮＡ）を有し得る一方、それらがその用途に限定される理由も何らなく、任意の抗体産生細胞、細胞株等由来の抗体鎖ｃＤＮＡをクローニングするために使用し得ることが理解されるだろう。好ましくは、抗体鎖はヒト抗体鎖である。
【００３１】
別の態様において、本発明は、炭疽病タンパク質に結合する抗体ポリペプチド鎖、その又は機能的な断片をコードする核酸組成物を提供する。一実施形態において、抗体ポリペプチド鎖又はその機能的な断片をコードする核酸組成物は、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合する機能的タンパク質を含んでなる。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のκ軽鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のγ重鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、核酸はｃＤＮＡ配列であるか、又はｃＤＮＡ配列を含んでなる。
【００３２】
一実施形態において、抗体ポリペプチド鎖又はその機能的な断片をコードする核酸組成物は、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子と結合する機能的タンパク質を含んでなる。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のκ軽鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のγ重鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、核酸はｃＤＮＡ配列であるか、又はｃＤＮＡ配列を含んでなる。
【００３３】
さらに、１以上の本発明の核酸、例えば、抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸を含んでなる多様性を有する核酸構築物が提供され、該核酸は、例えば、１以上の抗体重鎖又は抗体軽鎖を発現する本発明のプライマーを用いて、細胞又は細胞株から単離される。例えば、本発明は、ベクター、例えば、１以上の本発明の核酸を含む発現ベクターを提供する。特定の実施形態において、ベクターはアグロバクテリウムにより介在される形質転換にとって好適なバイナリーベクターである。特定の実施形態において、ベクターは植物ウィルスである。特定の実施形態において、ベクターは、植物ウィルス、例えば、１以上の植物ウィルスのゲノム要素を含むウィルスに基づく。
【００３４】
本発明はさらに、１以上の提供される核酸を発現し、モノクローナル抗体の重鎖又は軽鎖又はその機能的な断片を産生する宿主細胞を提供する。
【００３５】
本発明はさらに、（ｉ）モノクローナル抗体の重鎖又は軽鎖、又はその機能的な断片をコードする核酸であって、本発明の１以上のプライマーを用いて単離され、前記核酸は発現系中で核酸の発現を方向付けるプロモーター等の調節エレメントへと制御可能な形で連結されている、前記核酸を含む発現システムを提供すること、（ｉｉ）発現が生じる条件下に発現系を維持すること、を含んでなる、抗体重鎖又は抗体軽鎖を産生する方法を提供する。この方法はさらに、（ｉｉｉ）抗体又はその機能的な断片を回収することを含んでなる。抗体又はその機能的な断片は、当技術分野で公知の各種の技術の任意のものを用いて精製することができる。発現系は、例えば、細胞培養物、トランスジェニック植物又は動物、クローン根又は植物株等の任意の好適な発現系であり得る。完全な抗体は、重鎖及び軽鎖を互いに関連するようにさせることにより、産生され得る。
【００３６】
本発明はさらに、（ｉ）抗体の重鎖又はその機能的な断片をコードし、さらに抗体の軽鎖又はその機能的な断片をコードする核酸であって、本発明の１以上のプライマーのいずれか又は両方を用いて単離され、前記核酸の各々は発現系中で核酸の発現を方向付けるプロモーター等の調節エレメントへと制御可能な形で連結されている、前記核酸を含む発現システムを提供すること、（ｉｉ）発現が生じる条件下に発現系を維持すること、を含んでなる、抗体重鎖又は抗体軽鎖を産生する方法を提供する。抗体鎖はいずれもこの発現系により産生され、互いに関連付けられ得る。任意の好適な発現システムが使用可能である。
【００３７】
本発明はさらに、一方又は両方の鎖が本明細書中に記載の本発明の方法に従って産生される、重鎖及び軽鎖又はその機能的な断片を含んでなる抗体を投与することを含んでなる。
【００３８】
本特許出願は、各種の特許、特許出願、定期刊行物記事、及びその他の刊行物を参照し、それらの全てを本明細書中に参照により組み入れるものとする。さらに、以下の標準的な参考文献を参照により本明細書中に組み入れるものとする：Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｆ．，（ｅｄ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ａｎｄ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，２００２年７月の版；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｒｕｓｓｅｌｌ， ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ２００１；Ｈａｒｌｏｗ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ． １９８８）；Ｇｏｌｄｓｂｙ，Ｒ．Ａ．， ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０００；及びＧｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ Ｅｄ．．ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，２００１。組み入れられた参考文献のうち、任意の物の間での不一致又は矛盾を有する事象及び、即時の具体化又は当業者の理解に関しては、不一致又は矛盾が発明者の判断の範囲内であるかどうかが理解されるように、明細書が具体的に調整を行うものとし、このことは任意の時点で起こり得る。
【００３９】
本発明は、例えば、抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードするｃＤＮＡ等の核酸を、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いてハイブリドーマから単離する際に使用するための、新規なオリゴヌクレオチドプライマー及びプライマーのセットを提供する。ＰＣＲは当技術分野でよく知られ、例えば、ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ，Ｃ．Ｗ． ａｎｄ Ｄｖｅｋｓｌｅｒ，Ｇ．Ｓ．（Ｅｄｓ．）；ＰＣＲ Ｂａｓｉｃｓ：Ｆｒｏｍ Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｔｏ Ｂｅｎｃｈ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，２０００；Ｍ．Ｊ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，ｅｔ ａｌ；Ｍａｔｔｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：４９６７ （１９９１）；Ｅｃｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１：１７ （１９９１）；ＰＣＲ （ｅｄｓ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）；及び、米国特許第４，６８３，２０２号中に記載されている。本発明の特定の実施形態において、例えば、ｍＲＮＡ等のＲＮＡは、ハイブリドーマ等の細胞又は細胞株から単離される。ＲＮＡは逆転写に供されて、ｃＤＮＡを産生する。抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸は、本発明の１以上のオリゴヌクレオチドプライマー又はプライマーセットを用いて増幅される。本発明のプライマーは、その他の増幅技術を同様に用いて増幅に使用することができる。
【００４０】
本発明のオリゴヌクレオチドを表１に列挙する。表には、例えば、それに対しプライマーがハイブリダイズする、γ鎖の定常領域（ＣＧ）、λ鎖の定常領域（ＣＬ）、κ鎖の定常領域（ＣＫ）、重鎖の可変領域（ＶＧ）、λ鎖の可変領域（ＶＬ）、又はκ鎖の可変領域（ＶＫ）等の抗体遺伝子又はｃＤＮＡの部分をも示している。特定のプライマーがコード領域又は非コード領域に対しハイブリダイズすることが理解され、従って「ハイブリダイズする」とは、これらの可能性のいずれかを包含することが意図されるであろう。表１はまた、ＧｅｎＢａｎｋより入手可能な個々の配列の数を示し、特定のプライマーを用いて増幅可能な「ファミリー」にグルーピングすることができる。プライマーのうち、「短」と記載した特定のものについては、設計された制限部位を含有しない、より長いその他のプライマーは、抗体遺伝子又はｃＤＮＡへとハイブリダイズする部分に関する５’側に位置するＳｆｉＩに対する制限部位を含む。これらのプライマーはまた、５’末端にＣＴＣ又はＣＴＣＧＣのいずれかを含み、制限酵素による開裂の効率が向上している。本発明は、表１の「短」プライマーの配列を有する部分を含んでなる付加的なオリゴヌクレオチドを包含し、さらに、短プライマーの配列を有する部分に関する、５’側に位置する制限部位を含んでなる。ＳｆｉＩ部位（太字で示す）を含んでなるプライマーは、どのようにして本発明の短プライマーが修飾され、制限部位へと組み入れられるかの例示を提供する。
【００４１】
従って、一態様において、本発明は、その配列が配列番号１〜４４のいずれかを含んでなる、又はいずれかからなるオリゴヌクレオチドを提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも３つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも４つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも５つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも６つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。本発明の特定の実施形態において、プライマー混合物中の少なくとも１つのプライマーは定常領域プライマーであり、プライマー混合物中の少なくとも１つのプライマーは可変領域プライマーである。
【００４２】
いくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも１つの、γ鎖の定常領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＣＧプライマー）及び、少なくとも１つの、重鎖の可変領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＶＧプライマー）を含む。いくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも１つの、λ鎖の定常領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＣＬプライマー）及び、少なくとも１つの、λ鎖の可変領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＶＬプライマー）を含む。いくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも１つの、κ鎖の定常領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＣＫプライマー）及び、少なくとも１つの、κ鎖の可変領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＶＫプライマー）を含む。本発明のいくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも２つ又は３つのＶＧプライマー及び、少なくとも１つのＣＧプライマーを含む。本発明のいくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも２つ又は３つのＶＬプライマー及び、少なくとも１つのＣＬプライマーを含む。本発明のいくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも２つ又は３つのＶＫプライマー及び、少なくとも１つのＣＫプライマーを含む。前記実施形態のいずれかにおいて、プライマーは短い場合があり、又は長い場合がある。本発明のいくつかの実施形態においては、プライマーセット又は一対の短プライマーを用いて第１のＰＣＲ反応を行い、制限部位を含むプライマーセット又は一対のプライマー（長プライマー）を用いて第２のＰＣＲ反応を行う。長プライマーは、実施例１に記載の短プライマーの配列を含んでなり得る。
【００４３】
表１． ＲＴ−ＰＣＲプライマー
【００４４】
【表１−１】
【００４５】
【表１−２】
【００４６】
【表１−３】
表１に列挙された配列は、列挙された配列を有する単一のオリゴヌクレオチド分子であるか、又は、列挙された配列を有する各オリゴヌクレオチド分子の集合であるかの、いずれかを表すことが理解されるであろう。表１に列挙された特定のプライマーは縮重であり、すなわち、縮重位置においてその配列が異なっている個々の要素を含む配列により示される、オリゴヌクレオチド分子の集合である。用語「位置」は、ポリヌクレオチド中の各ヌクレオチドに対し割り振られた数値をいい、通常は５’末端に対する値である。
【００４７】
縮重プライマーの概念は、当技術分野でよく知られており、本明細書中で当技術分野での理解と一致している。表２は、ＩＵＰＡＣの多義性コードを含み、縮重位置に存在するヌクレオチドを表す略号を列挙している。例えば、Ｋは、Ｇ又はＴを表す。
【００４８】
表２：多義性コード
【００４９】
【表２】
オリゴヌクレオチド中の所定の位置に「Ｎ」個の可能性を有するヌクレオチドが存在する場合、この位置はＮ倍縮重であると称される。すなわち、プライマー配列「ＣＧ」、すなわち５’−ＣＴＣＧＣＧＧＣＣＴＣＣＧＡＧＧＣＣＴＣＡＴＴＴＡＣＣＣＫＧＡＧＡＣＡＧＧ−３’（配列番号１）は、２９の位置がＧであるいくつかのメンバーと２９の位置がＴであるいくつかのメンバーを含むオリゴヌクレオチドの集合を示す。本発明は、その位置に考えられ得る任意の代替物により縮重位置が占められている、オリゴヌクレオチドを含む。例えば、本発明は、２９の位置がＧとなっている配列番号１の配列を有するオリゴヌクレオチドを包含し、加えて、２９の位置がＴとなっている配列番号１の配列を有するオリゴヌクレオチドをも包含する。全ての可能性が包含される。例えば、プライマー「ＶＧ１＋７短」（配列番号１３）は、９及び１１の位置で２倍縮重である。すなわち、本発明は、配列番号１３で示される縮重オリゴヌクレオチドを包含することに加えて、４つの異なる任意の配列を有するオリゴヌクレオチド分子を含む配列番号１３の４倍非縮重変化物を包含する。本発明はまた、表１に示すよりも少ない位置が縮重している実施形態をも包含する。例えば、本発明は、配列番号１３における９の位置のみが縮重している（かつ、１１の位置はＹにより示されるヌクレオチドのいずれかである）実施形態を包含する。
【００５０】
縮重オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド集合中の異なるオリゴヌクレオチドの比率は異なり得る。通常、配列は、集合中にほぼ同様に表れる。しかしながら、混合物の組成を偏らせることが望ましい場合があり得る。表１中に列挙された縮重オリゴヌクレオチドの、任意の具体的なパーセント組成は、本発明の範囲内である。オリゴヌクレオチドの全体的な縮重度は、オリゴヌクレオチド集合中に存在し得る、異なる配列の総数である。例えば、３つの縮重位置が存在し、そのそれぞれが２倍縮重である場合、そのオリゴヌクレオチド集合の縮重度は２３＝８である。
【００５１】
発現系及び抗体産生
本発明のオリゴヌクレオチドプライマーの任意のものを用いて単離された抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸は、多様な発現系の任意のものにおいて発現され得る。発現系は、ポリペプチドを合成可能な細胞株又はトランスジェニック動物又は植物等の、任意の好適な生物学的システムである。通常、核酸は、各種知られた発現ベクターへと挿入される。対象のポリヌクレオチドを発現するための好適な方法は、当技術分野で知られ、Ａｕｓｕｂｅｌ，上掲、及びＳａｍｂｒｏｏｋ，上掲、中に記載されている。米国特許第４，８１６，５６７号及び同第６，３３１，４１５号も参照されたい。任意の原核生物又は真核生物発現システムが使用可能である。本発明の特定の実施形態において、発現系はハイブリドーマではなく、ヒトでもなく、すなわち、発現系は、天然には抗体鎖を産生しないものである。
【００５２】
本発明の特定の実施形態において、植物に基づく発現系が用いられる。植物に基づく発現系は、植物細胞又はその一部を利用する任意の発現系である。発現系は、植物細胞株、植物体全体、クローン根等であり得る。植物細胞株、植物体全体、クローン根等、及び、トランスジェニック又は非トランスジェニックなものであり得る。
【００５３】
植物に基づく発現系において、例えば、抗体重鎖又は抗体軽鎖等の対象のポリヌクレオチドを発現するための方法及びベクターは、当技術分野においてよく知られている。米国特許第６，８５２，３１９号参照。本発明の特定の実施形態においては、植物ウィルスのゲノムに基づくベクターが用いられる。限定することなしに、本発明は、例えば、ＲＮＡ植物ウィルス又はウィルスゲノム、ＤＮＡ植物ウィルス又はウィルスゲノム等の植物ウィルス又はウィルスゲノムに基づく任意のベクターの利用を包含する。例えば、米国特許第５，６０２，２４２号、同第５，５００，３６０号、及び同第５，８４６，７９５号を参照。
【００５４】
本発明の特定の実施形態において、トランスジェニック又は非トランスジェニックの芽が発現システムとして使用される。米国特許出願公開第２００４００９３６４３号及び、２００５年２月１１日に提出された米国特許出願第６０／６５２，１８６号、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ Ｓｐｒｏｕｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ」Ｅｎｓｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．、参照。本発明の特定の実施形態において、クローン根又はその他のクローン株が用いられる。例えば、２００５年２月１８日に提出された米国特許出願第１１／０６１，９８０号、「ＳＹＳＴＥＭＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＳ ＦＯＲ ＣＬＯＮＡＬ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＩＮ ＰＬＡＮＴＳ」参照。その他の特許出願には、対象のポリヌクレオチドを発現するための関連情報を含む。米国特許出願公開第２００５００２６２９１号、同第２００５０１１４９２０号、国際公開第ＷＯ２００５０２６３７５号、同第ＷＯ００４６３５０号、同第ＷＯ００２５５７４号、同第ＷＯ２００５０４９８３９号、及び米国特許第６４４８０７０号を参照されたい。
【００５５】
本発明は、抗体の軽鎖又は重鎖をコードする核酸の発現を明確に意図し、該核酸は、本セクションで列挙される特許出願及び刊行物の任意のものに記載の、又はそれを参照する発現系及び方法を用いて、本明細書中で開示される方法及び／又はプライマーを用いて単離される。本明細書中に記載の任意の具体的な植物、植物ウィルス、植物ウィルスレプリコン等が使用可能である。いくつかの実施形態において、ウィルスレプリコンは、植物細胞中で複製され得る十分な配列要素を含み、所望により、トランス植物（例えば、植物がトランスジェニックであるか、又はＲＮＡポリメラーゼを発現した別のベクターを含んでなる）により供給されるＲＮＡポリメラーゼ等の要素を利用することができる。レプリコンは、コートタンパク質遺伝子又は移動タンパク質遺伝子を含む場合があり、又は含まない場合がある。植物ウィルス又はレプリコンを植物又は植物細胞又は植物の部分へと導入するための、任意の特定の方法が使用され得る。例としては、葉等の植物の部分に対する適用、（例えば、葉へとウィルス転写物を導入するための）表皮剥離、アグロインフィルトレーション、アグロバクテリウムが介在する形質転換、微粒子銃等を含む。本発明は、例えば組み換え植物ウィルスベクター又はレプリコン等の、本明細書中で記載する方法に従って単離された核酸を含んでなる、任意の植物ウィルスベクター又はレプリコンを包含し、さらに、ベクターを含んでなる植物、植物の一部、又は植物由来のクローン培養物を包含する。本発明はさらに、そのゲノムが核酸を含んでなるトランスジェニック植物を包含する。
【００５６】
本発明のいくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列は、それらの鎖が互いに会合して、回収前に完全な抗体を形成するように共発現される。
【００５７】
本発明の方法に従って産生される抗体鎖又は抗体を回収するために、及び、所望により精製するために、任意の好適な方法を用いることができる。
【００５８】
勿論、抗体の重鎖又は軽鎖は、化学的に合成することもできる。重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を調べれば、アミノ酸配列が得られる。
【００５９】
本発明の任意のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて単離された抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸は、各種の方法により修飾することができる。例えば、真核細胞中で別途生じるグリコシル化事象や、又はその他の翻訳後工程を行わせないために、修飾を行う場合がある。例えば、グリコシル化されたアミノ酸、又はアジュバント、又は近傍の部位を変化させる変異を作製することができる。当技術分野でよく知られるように、Ａｓｎ−Ｘ−（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）は、グリコシル化機構に連結された、真核生物のＮ−結合グリコシル化により認識される配列である。就職される特定の部位は、使用される発現系中で見られる特定のグリコシル化の機構を考慮して選択され得る。それはポリペプチドタグ（すなわち、精製を助けるための）や、特定のオルガネラ等に対する抗体鎖を標的化する配列をコードする部分を含むように改変される場合がある。本発明の範囲内で、抗体の特異的抗原結合特性に干渉することなく、広範な変化を利用することができる。特定の実施形態において、変化は、天然の抗体の配列と少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一である。
【００６０】
本発明の方法に従って産生される抗体は、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ（一本鎖可変）等の抗体断片、又は、抗原結合部位を保持するその他の断片であり得る。断片は、その断片のみを核酸のみが発現されるように発現される場合もあれば、又は、開裂又は消化等の公知の手法を用い、完全な抗体を処理して断片を産生させる場合もある。
【００６１】
ベクター
上述のように、本発明のプライマー及び方法を用いて単離されたｃＤＮＡを、広範なベクターへと挿入し、広範な細胞タイプ及び発現系にて発現させることができる。本発明は、制限部位を含んでなる本発明のプライマーを用いて単離された、核酸を挿入するために好適な、さらなるベクターを提供する。ベクターは、プライマー中に存在するのと同様の制限部位を含む。制限部位は、ベクター中の１以上の位置に存在する。いくつかの実施形態において、ベクター中の望まない位置に存在する制限部位は、例えば、部位指定変異を用いて除去される。いくつかの実施形態において、制限部位とはＳｆｉＩのための制限部位である。
【００６２】
本発明の具体的実施形態において、アグロバクテリウムに介在される形質転換のために好適なバイナリーベクターであるｐＢＩ１２１の修飾型が提供され、そこでは、１１０３１の位置の内部ＳｆｉＩ部位が変異されて、１以上の新たなＳｆｉＩのための部位が作られている。手短に言えば、ｐＢＩ１２１はネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子及びα−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）遺伝子を担持する（Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ， ６：３９０１−３９０７，１９８７）。ネオマイシンネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子は、ノパリンシンターゼ（ｎｏｓ）プロモーター及び、ポリアデニル化シグナルを与えるノパリンシンターゼ（ｎｏｓ）由来のターミネーターの制御下にある。このネオマイシンネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子は、カナマイシン耐性を付与する。α−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）遺伝子活性は、カリフラワーモザイクウィルスの３５Ｓプロモーター及び、ポリアデニル化シグナルを与えるノパリンシンターゼ（ｎｏｓ）由来のターミネーターの制御下にある。本発明は、本来のＳｆｉＩ部が変異されて２つの新たな位ＳｆｉＩ部位が導入され、抗体重鎖又は抗体軽鎖等をコードする異種核酸の簡便な挿入を可能にするためのｐＢＩ１２１の修飾型を提供する。
【００６３】
キット
本発明は、表１に列挙された１以上のオリゴヌクレオチドを含んでなるキットを提供する。好ましくは、キットは、少なくとも２つのオリゴヌクレオチドを含む。具体的実施形態において、キットは、少なくとも３〜４４の間の任意の数のオリゴヌクレオチドを含む。通常、キットは、例えばγ重鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチドを含み、及び／又は、例えばλ軽鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、キットは、γ重鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチド、κ軽鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチド、及び、λ軽鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチドを含む。上述の任意の対又はセットのオリゴヌクレオチドがキット中に含まれ得る。キットは、通常、ハイブリドーマ等の細胞又は細胞株から抗体の１以上の鎖をコードする核酸を単離するためのキットの使用に関する説明書を含む。
【００６４】
１以上のオリゴヌクレオチドに加えて、キットは、任意の数の付加的な試薬をさらに含んでもよい。例えば、キットは、ＲＴ−ＰＣＲ反応等のＰＣＲ反応を行うための試薬を含み得る。キットは、従って、例えば、逆転写酵素、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ヌクレオチド類、緩衝液等を含み得る。キットは、ハイブリドーマ又はその他の細胞性のＲＮＡ供給源からＲＮＡを精製するための試薬を含み得る。
【００６５】
キットは、キットを用いて増幅した核酸をその中へと挿入し得る１以上のベクターを含んでも良い。ベクターは、例えば、植物細胞、細菌細胞、真菌細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞等の細胞中での発現を充分に方向付けるためのプロモーター等の調節エレメントを含む発現ベクターであり得る。広範な発現ベクターが当技術分野で入手可能であり、これらの任意のものをキット中に含むことが可能である。一実施形態において、ベクターは、アグロバクテリウムにより介在される形質転換にとって好適なバイナリーベクターである。
【００６６】
ベクターは、制限酵素によるベクターの開裂が「付着末端」をもたらすように、すなわち、キット中に存在する１以上のオリゴヌクレオチドプライマー中に存在する制限部位へとハイブリダイズするように、１以上の便利な制限部位を含み得る。いくつかの実施形態において、ベクターは、８ヌクレオチド認識部位を認識する酵素に対する１以上の制限部位を含む。この８ヌクレオチドは、連続的である場合もあり、又は、認識にとってその間隔が必須ではあるが、特異的には認識されない１以上のその他のヌクレオチド（例えば、１〜１０ヌクレオチド）に分離されている場合もある。例えば、特定の実施形態において、酵素は、ＸＸＸＸＮＮＮＮＮＸＸＸＸの内部を、Ｎが任意のヌクレオチドを表し、かつＸが任意の特異的ヌクレオチド（すなわち、それぞれのＸは独立に選択される）を表す位置で切断する。このような部位は、挿入部の５’−及び３’−末端に５ヌクレオチドの異なる配列を有する配列を、ただ一種の酵素のみを用いて指定的にクローニングすることを可能にするために都合がよいものであり得る。いくつかの実施形態において、ベクターは、部位ＧＧＣＣＮＮＮＮＮＧＧＣＣの内部を切断する、ＳｆｉＩに対する１以上の制限部位を含む。ベクターは、直鎖状又は環状の形態で提供され得る。ベクターを開裂させるための制限酵素もまた提供される。例えば、リガーゼ、リガーゼ緩衝液等の、連結を行うための試薬が含まれ得る。
【００６７】
例えば、バーコード、高周波ＩＤタグ等の識別子が、キット中に又はキット上に存在し得る。識別子は、例えば、品質管理、在庫管理、追跡、ワークステーション間における移動等の目的のための個別識別を行うために使用され得る。
【００６８】
キットは、通常、特定の個々の試薬を別々に収納するための１以上の管又は容器を含む。キットは、また、市販するために、個々の容器を、例えば、プラスチック製の箱等の比較的厳重に管理された容器の中に収納するための手段をも含み、説明書、発泡スチレン等の包装資材等が同梱される場合もある。
【００６９】
炭疽病抗原に対するヒトモノクローナル抗体をコードするヌクレオチド配列及び、単離された重鎖及び軽鎖
実施例１中により詳細に記載するように、表１に列挙されたプライマーを、２つの異なるヒトモノクローナル抗体（ｈｕＭＡｂ）のγ重鎖及びκ軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列を単離するために使用した。これらのｃＤＮＡの単離は、本発明のオリゴヌクレオチドプライマーの使用の例である。１つのｈｕＭＡｂは、ＰＡ−１と称するＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原（ＰＡ）ポリペプチドのドメイン４に対し特異的に結合する。他方のｈｕＭＡｂは、ＬＦ−１と称するＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子（ＬＦ）ポリペプチドに対し特異的に結合する。Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓは、炭疽病の原因病原体である。病原細菌及び免疫応答におけるＰＡ及びＬＦの役割は当技術分野においてよく知られている。炭疽病のワクチン接種を受けた個体から得たリンパ球をミエローマ細胞と融合し、標準的な方法を用いてＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓに対する特異的な抗体をスクリーニングすることにより、ハイブリドーマ細胞株からｃＤＮＡ配列を単離した。
【００７０】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂのκ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号４５）、ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂのγ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号４７）、ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂのκ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号４９）、又はＬＦ−１ ｈｕＭＡｂのγ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号５１）を含んでなる単離された核酸が提供される。本発明はまた、ＴがＵに置換された、相当するＲＮＡ配列をも提供する。
【００７１】
本発明はまた、配列番号４５、４７、４９又は５１の任意のものによりコードされる単離されたポリペプチドを提供する。これらのポリペプチドのアミノ酸配列を、配列番号４６、４８、５０及び５２中に説明する。本発明はまた、配列番号４６、４８、５０及び５２のポリペプチドに対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又はそれ以上の同一性を有する単離されたポリペプチド提供する。本発明はまた、配列番号４５、４７、４９又は５１の１以上がハイブリドーマ又はヒト以外の発現システム中で発現される抗体組成物をも提供する。
【００７２】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：５’−
ＡＴＧＧＡＡＧＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＴＧＣＴＡＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＣＡＣＣＧＧＡＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＣＡＣＣＧＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ−３’ （配列番号４５）
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のアミノ酸配列：
【００７３】
【化１】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号４６のアミノ酸残基５０〜６１（ＰＡ−ｌＣＤＲ１）、アミノ酸残基７７〜８３（ＰＡ−ｌＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１１６〜１２４（ＰＡ−ｌＣＤＲ３）に相当する。単離されたＣＤＲ配列の各々は以下：
ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）
ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）
ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）
からなる。
【００７４】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：５’−
ＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＴＣＴＴＴＴＴＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＣＣＣＡＣＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＡＧＣＡＡＴＧＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＧＧＴＧＧＣＧＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＡＡＡＴＡＴＴＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＴＡＧＧＧＡＣＡＴＡＴＣＣＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＣＡＴＣＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＡＧＧＧＧＧＧＴＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ−３’ （配列番号４７）
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のアミノ酸配列：
【００７５】
【化２】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号４８のアミノ酸残基５１〜６０（ＰＡ−ｈＣＤＲ１）、アミノ酸残基７５〜９０（ＰＡ−ｈＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１２４〜１３３（ＰＡ−ｈＣＤＲ３）に相当する。
ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）
ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）
ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００７６】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００７７】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。
【００７８】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００７９】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００８０】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。
【００８１】
特定の実施形態において、ＰＡ−１抗体の機能的断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２又はｓｃＦＶ機能的断片のうち任意の１つである。
【００８２】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：
ＡＴＧＴＴＧＣＣＡＴＣＡＣＡＡＣＴＣＡＴＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＧＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＴＴＣＡＧＴＣＴＧＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＣＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＧＴＴＧＧＴＡＧＴＡＧＣＴＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＴＴＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＣＴＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＴＣＡＧＡＧＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡＣＣＴＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ （配列番号４９）
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のアミノ酸配列：
【００８３】
【化３】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号５０のアミノ酸残基５１〜６０（ＬＦ−ｌＣＤＲ１）、アミノ酸残基７５〜９０（ＬＦ−ｌＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１２４〜１３３（ＬＦ−ｌＣＤＲ３）に相当する。単離されたＣＤＲ配列の各々は以下：
ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）
ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）
ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）
からなる。
【００８４】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：
ＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＧＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＴＧＴＴＴＡＧＣＡＧＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＧＧＡＡＴＴＡＧＴＧＧＴＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＣＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＡＡＧＡＴＧＧＧＧＴＡＴＡＴＧＧＣＣＧＡＣＴＧＧＧＧＧＧＴＴＣＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＧＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ （配列番号５１）
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のアミノ酸配列：
【００８５】
【化４−１】
【００８６】
【化４−２】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号４８のアミノ酸残基５１〜６０（ＬＦ−ｈＣＤＲ１）、アミノ酸残基７５〜９０（ＬＦ−ｈＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１２４〜１３３（ＬＦ−ｈＣＤＲ３）に相当する。
ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）
ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）
ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００８７】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００８８】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。
【００８９】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００９０】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００９１】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。
【００９２】
特定の実施形態において、ＬＦ−１抗体の機能的断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２又はｓｃＦＶ機能的断片のうち任意の１つである。
【００９３】
抗体組成物及び送達ビヒクル及び方法
本発明は本発明の方法に従って調製した１以上の抗体を含んでなる抗体組成物を提供する。「抗体組成物」とは、１以上の抗体又はその機能的断片、及び、場合により、抗体精製プロセス中に除去されない産生システムの任意の成分を含んでなる組成物のことをいう。したがって、選択した発現系、例えば植物に基づく発現系、において本発明のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、単離されたｃＤＮＡを発現させることにより調製した抗体又はその機能的断片を含む第１の抗体組成物は、異なる発現系を用いて調製した、同じ抗体を含む第２の抗体組成物とは同一でない場合があることが理解されるであろう。例えば、組織培養として維持されたハイブリドーマにより産生された抗体を含んでなる抗体組成物は、組織培養培地中に見られる残りの成分を含み得るのに対して、植物に基づく発現系を用いて産生した抗体は通常これらの成分を含まない。したがって、特定の実施形態において、本発明の抗体組成物は、同じ抗体を含む他の抗体組成物と識別可能である。
【００９４】
いくつかの実施形態において、本発明の方法に従って調製した１以上の抗体は、診断及び／又は治療目的のために、対象への投与に適した医薬組成物として提供される。この場合、「治療目的」は、予防目的（すなわち、疾患又は症状の任意の徴候又は症状が生じる前の投与）及び治療目的（すなわち、疾患又は症状の１以上の徴候又は症状が生じた後の投与）を含むものとして理解される。本発明の抗体は、限定することなく、診断的に、予防的に、及び／又は、感染性疾患（例えば、細菌性、ウィルス性、真菌性、又は寄生虫疾患）、癌（この用語は、上皮性悪性腫瘍、非上皮性悪性腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄異形成症候群、良性腫瘍等を包含する）、炎症性症状、望ましくない血管新生により特徴付けられる疾患、移植拒絶、対宿主性移植片疾患等の治療のために使用することができる。本発明の抗体のその他の用途には、癌細胞、リンパ細胞等の望ましくない細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける免疫涸渇が含まれる。抗体は、その他の物質（例えば、診断的又は治療的物質）を、抗体によって認識される抗原が発現される体内のある部位を標的とするためにも使用することができる。
【００９５】
好適な調製物、例えば、実質的に純粋な抗体調製物は、適当な医薬組成物を製造するために、薬学的許容可能な担体、希釈剤、溶媒等と組み合わせてもよい。本発明は、従って、（ｉ）抗体；及び（ｉｉ）薬学的許容可能な担体、アジュバント、又はビヒクルを含んでなる、対象へ投与するための、様々な薬学的許容可能な組成物を提供する。対象へ投与する場合、本発明の医薬組成物は、好ましくは、投与される治療又は予防の疾患又は症状を治療又は予防するために十分な時間及び量で投与されることを理解すべきである。
【００９６】
本発明の各種実施形態において、有効量の医薬組成物は、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、吸入による、カテーテルによる、眼内、経口、経直腸、皮内、皮膚への適用による等を含む任意の好適な投与経路により対象に投与される。
【００９７】
本発明の組成物は、限定するものではないが、非経口、経口、肺への吸入による、経鼻、経気管支、眼科的、経皮（局所）、経粘膜、経直腸、及び経膣経路等の任意の利用可能な経路による送達のために製剤化することができる。本明細書において使用する場合、用語「非経口」には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、肝内、病変内及び頭蓋内への注射又は注入技法が含まれる。
【００９８】
用語「薬学的許容可能な担体、アジュバント、又はビヒクル」とは、共に製剤化する化合物の薬理活性を損なわない非毒性の担体、アジュバント、又はビヒクルのことをいう。本発明の組成物において使用され得る薬学的許容可能な担体、アジュバント、又はビヒクルとしては、限定するものではないが、イオン交換物質、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質、リン酸塩等のバッファー物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸のグリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩等の塩又は電解質、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。薬学的投与に適合し得る、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌物質及び抗真菌物質、等張剤及び吸収遅延剤等を含んでもよい。補助活性化合物、例えば、治療する疾患又は臨床症状に対して独立して活性である化合物、又は化合物の活性を促進する化合物も組成物中に組み入れることができる。
【００９９】
本発明の化合物の薬学的許容可能な塩には、薬学的許容可能な無機及び有機酸及び塩基に由来するものが含まれる。好適な塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンフル酸塩、カンフルスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミサルフェート、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、２−ヒドロキシエタンスルホネート、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモエート、ペクチネート、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアネート、トシル酸塩及びウンデカン酸塩が挙げられる。シュウ酸等のその他の酸は、それ自体は薬学的許容可能ではないが、本発明の化合物及びそれらの薬学的許容可能な酸付加塩を取得する際の中間体として有用な塩の調製に使用することができる。
【０１００】
適当な塩基に由来する塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウム及びＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。本発明は、本明細書において開示される任意の塩基性窒素含有化合物群の４級化も想定している。水又は油溶解性又は分散性生成物はかかる４級化によって得ることができる。
【０１０１】
医薬組成物は、その意図する投与経路と適合するように製剤化される。非経口（例えば、静脈内）、筋肉内、皮内、又は皮下への適用のために使用される溶液又は懸濁液は以下の成分を含んでもよい：注射用水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又はその他の合成溶媒等の無菌希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベン等の抗菌剤；アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム等の抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等のバッファー並びに塩化ナトリウム又はデキストロース等の等張性を調節するための物質。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウム等の酸又は塩基を用いて調整することができる。非経口調製物には、アンプル、使い捨て型シリンジ、又はガラスもしくはプラスチックから作られたマルチ用量バイアルが包含され得る。
【０１０２】
注射用途に適した医薬組成物としては、通常、無菌注射溶液又は分散液の即時調製のための水溶液（水溶性の場合）又は分散液及び無菌粉末が挙げられる。静脈内投与のための好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リンゲル溶液等が挙げられる。
【０１０３】
無菌の不揮発性油が通常、溶媒又は懸濁媒体として使用される。この目的のために、合成モノ又はジグリセリドを含む任意のブランドの不揮発性油を使用することができる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体等の脂肪酸は、オリーブ油又はヒマシ油等の油は特にそのポリオキシエチル化された状態で天然の薬学的許容可能であるので、注射用物質の調製において有用である。これらの油溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又はカルボキシメチルセルロース等の分散剤又はエマルジョン及び懸濁液を含む薬学的許容可能な剤形の製剤化において通常使用される同様の分散剤も含んでよい。Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ等の一般的に使用されているその他の界面活性剤及びその他の乳化剤又は薬学的許容可能な固体、液体、又はその他の剤形の製造に通常使用し得る生物学的活性促進剤もまた、製剤化の目的のために使用することができる。
【０１０４】
全ての場合において、組成物は無菌である必要があり、可能であれば、簡便な注射操作性となりうるように液体であるべきである。
【０１０５】
好ましい医薬製剤は、製造及び保存条件下で安定であり、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用に対抗して保存されなければならない。一般的に、関連する担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）を含む溶媒又は分散媒、及び好適なそれらの混合物であることができる。適当な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング剤の使用により、分散させる場合に必要とされる粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により、維持することができる。微生物の作用の抑制は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等の各種抗菌剤及び抗真菌剤によって達成することができる。多くの場合において、組成物中に、例えば、糖類、マニトール等の多価アルコール、ソルビトール、塩化ナトリウム等の等張剤を含有するのが好ましい。注射可能な組成物の持続吸収は、組成物中に吸収を遅延させる物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含有させることによりもたらすことができる。経口用組成物の持続吸収は、カプセル化等の各種手段により達成することができる。
【０１０６】
無菌の注射可能な溶液は、必要とされる量で活性化合物を上記列挙した成分の１つ又は組み合わせの適当な溶媒中に含有させ、必要であれば、次に滅菌濾過することにより、調製することができる。好ましくは注射のための溶液はエンドトキシンを含んでいない。通常、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒体と上記列挙したものから必要とされるその他の成分を含む無菌ビヒクル中に含有させることにより調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥であり、これにより活性成分の粉末と、従前にその滅菌濾過した溶液からの任意のさらなる所望の成分が得られる。
【０１０７】
経口用組成物は、通常、不活性希釈剤又は可食担体を含む。経口治療投与の目的のために、活性化合物は賦形剤と共に含有させることができ、錠剤、トローチ、又はゼラチンカプセル等のカプセルの形態で使用することができる。経口用組成物は、うがい薬として使用するために液体担体を用いて調製することもできる。薬学的に適合可能な結合剤及び／又はアジュバント物質は組成物の一部として含有させることができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチ等は任意の以下の成分又は同様の特性の化合物を含むことができる：微晶質セルロース、トラガカントガム又はゼラチン等の結合剤；デンプン又は乳糖等の賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、又はトウモロコシデンプン等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はＳｔｅｒｏｔｅｓ等の潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素等の流動促進剤；ショ糖又はサッカリン等の甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチルもしくはオレンジ香料等の香味剤。経口送達のための製剤は、有利には、消化管内において安定性を向上させるため及び／又は吸収を促進させるための物質を含んでもよい。
【０１０８】
吸入による投与のために、本発明の組成物は、好ましくは、好適な噴射剤、例えば、二酸化炭素等の気体、を含む加圧容器又は投薬装置又はネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で送達される。液体又は乾燥エアロゾル（例えば、ドライパウダー、大きな多孔質粒子等）を使用してもよい。本発明は鼻腔用スプレーを用いた組成物の送達も意図する。
【０１０９】
局所投与のために、薬学的許容可能な組成物は、１以上の担体中に懸濁させた又は溶解させた活性成分を含む適当な軟膏として製剤化することもできる。本発明の化合物の局所投与のための担体としては、限定するものではないが、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ろう及び水が挙げられる。あるいは、薬学的許容可能な組成物は、１以上の薬学的許容可能な担体中に懸濁させた又は溶解させた活性成分を含む適当なローション又はクリームとして製剤化することができる。好適な担体としては、限定するものではないが、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルろう、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水が挙げられる。
【０１１０】
眼への局所送達のために、薬学的許容可能な組成物は、等張性のｐＨ調整した無菌食塩水中の微小懸濁液として、又は、好ましくは、塩化ベンジルアルコニウム等の保存剤を含有していようがいまいと、等張性のｐＨ調整した無菌食塩水中の溶液として製剤化することができる。あるいは、眼への使用のために、薬学的許容可能な組成物は、ワセリン等の軟膏として製剤化することができる。
【０１１１】
本発明の薬学的許容可能な組成物は、鼻腔用エアロゾル又は吸入により投与することもできる。かかる組成物は、医薬製剤化の技術分野における周知の技法に従って調製され、ベンジルアルコール又はその他の好適な保存剤、バイオアベイラビリティーを増大させるための吸収促進剤、フルオロカーボン及び／又はその他の通常の可溶化剤又は分散剤を用いて、食塩水中の溶液として調製することができる。
【０１１２】
全身投与は、経粘膜的又は経皮的手段であってもよい。経粘膜又は経皮投与のために、バリアを通過するのに適当な浸透剤が製剤中で使用される。かかる浸透剤は通常、当技術分野において公知であり、経粘膜投与のためには、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻腔内スプレー又は座薬の使用により達成することができる。経皮投与のためには、抗体が、通常公知である、軟膏、サルベ、ゲル又はクリームの形態に製剤化される。
【０１１３】
抗体組成物は、（例えば、ココアバター等の従来の座薬基剤及びその他のグリセリド類と共に）座薬又は直腸送達のために滞留型浣腸の形態で調製することもできる。
【０１１４】
上記物質に加えて、本発明の特定の実施形態において、抗体組成物は、身体からの迅速な排除に対して抗体を保護し得る担体と共に調製される。例えば、移植及び微小カプセル化送達システムを含む、放出制御製剤である。エチレンビニルアセテート、多価無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリエーテル及びポリ乳酸等の生物分解性、生物適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の調製方法は当業者に明らかである。特定の物質は、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購入することもできる。リポソーム懸濁物も薬学的許容可能な担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号及び本明細書中に記載されるその他の参考文献に記載されるような、当業者に公知の方法にしたがって調製することができる。標的化リポソーム（例えば、抗体標的化リポソーム）を含むリポソーム及びＰＥＧ化リポソームについて記載されている（Ｈａｎｓｅｎ ＣＢ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１２３９（２）：１３３−４４，１９９５；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ ＶＰ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１５１１（２）：３９７−４１１，２００１；Ｉｓｈｉｄａ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４６０（１）：１２９−３３，１９９９）。当業者であれば、放出制御製剤、移植物等の調製のために選択される材料及び方法においては抗体の活性を維持すべきであることを理解するであろう。例えば、変性及び活性の喪失につながり得る、抗体等のポリペプチドを過剰に加熱することは避けるのが望ましい。
【０１１５】
投与の簡便性及び用量の均一性のためには、経口用組成物又は非経口用組成物を単位投与形態で製剤化することが通常は有利である。本明細書において使用する場合、単位投与形態とは、治療する対象に対して単位用量を最適化した物理的に分離した単位のことをいい；各単位は必要とされる医薬担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の抗体を含む。
【０１１６】
かかる組成物の毒性及び治療効力は、例えば、ＬＤ５０（全集団の５０％が死に至る用量）及びＥＤ５０（全集団の５０％において治療的に有効である用量）を、細胞培養又は実験動物における標準的薬学的方法によって調べることができる。毒性と治療効果との用量比が治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表し得る。高い治療指数を示す組成物が好ましい。毒性副作用を示す組成物は使用され得るが、感染していない細胞への潜在的な被害を最小にし、それにより副作用を減少させるために、影響を受ける組織部位に対してかかる組成物が標的とする送達システムを設計することに注意すべきである。
【０１１７】
細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータは、ヒトでの使用のために用量範囲を決定する際に使用することができる。用量は好ましくは、毒性をほとんど示さないか又は全く示さずに、ＥＤ５０を含む循環濃度範囲にある。用量は、使用される剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲で変動し得る。本発明の方法において使用される任意の抗体又はその他の化合物について、治療的有効な用量は、最初は細胞培養アッセイから計算し得る。動物モデルにおいては、細胞培養において決定されたＥＤ５０を含む循環血漿濃度範囲を達成するように、用量を決定し得る。かかる情報を用いることにより、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中レベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。
【０１１８】
医薬組成物の治療的有効量は、通常、約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１〜２５ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、さらにより好ましくは約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、２〜９ｍｇ／ｋｇ、３〜８ｍｇ／ｋｇ体重、４〜７ｍｇ／ｋｇ、又は５〜６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。医薬組成物は、様々な間隔、及び、必要とされる様々な期間に亘り、例えば、１日あたり複数回、毎日、１日置き、約１〜１０週間に亘り、２〜８週間に亘り、約３〜７週間に亘り、約４、５、又は６週間、１週間に１回等で投与することができる。対象を有効に治療するために必要とされる用量及び時間に、限定するものでないが、疾患又は障害の重篤度、従前の治療、対象の全体的な健康及び／又は年齢、並びに罹患しているその他の疾患等の特定の要素が影響を及ぼし得ることは、当業者であれば理解するであろう。通常、本発明の組成物による対象の治療には、単回治療が含まれ、多くの場合では、一連の治療を含み得る。一定の範囲の異なる用量の組み合わせ（すなわち、ある用量の２以上の抗体又は１以上の抗体と１以上の付加的活性物質）を使用することができる。
【０１１９】
例示的用量には、対象又はサンプル体重１キログラムあたりミリグラム又はマイクログラム量の抗体を含む（例えば、１キログラムあたり約１マイクログラム〜１キログラムあたり約５００ミリグラム、１キログラムあたり約１００マイクログラム〜１キログラムあたり約５ミリグラム、又は１キログラムあたり約１マイクログラム〜１キログラムあたり約５０マイクログラム）。局所投与（例えば、鼻腔内）に対しては、これらよりもずっと少ない用量が使用され得る。適当な用量は薬剤の効力に依存し、例えば、予め選択された所望の反応が得られるまで用量を増大させて投与することにより、特定の受容者に対して任意に対応し得ることがさらに理解される。任意の特定の対象に対する特定の用量レベルは、使用される具体的な化合物、対象の年齢、体重、全体的健康、性別及び食事、投与時間、投与経路、排泄速度、任意の薬物との組み合わせ、並びに変調し得る発現又は活性の程度等の様々な因子に依存し得ることが理解される。
【０１２０】
本発明はさらに、２又はそれ以上の本発明の抗体及び、所望により１以上の付加的な活性薬剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【実施例】
【０１２１】
以下の実施例は、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓのＰＡ又はＬＦタンパク質に対し特異的に結合する抗体を産生するヒトハイブリドーマ細胞株からｃＤＮＡをクローニングしたことを記載する。ＰＡ（本明細書中でＰＡとする）又はＬＦ（本明細書中でＬＦとする）を特異的に認識するモノクローナル抗体のヒト重鎖及び軽鎖に関するｃＤＮＡを、ライセンスされた炭疽病ワクチンを用いて免疫したヒト患者から単離した細胞から作製したハイブリドーマ細胞より単離した。
【０１２２】
実施例１：ヒトモノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡの、ハイブリドーマからの単離
この実施例は、ヒトモノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡを単離するための、表１中に列挙された特定のオリゴヌクレオチドプライマーの使用について記載する。全てのキットは、製造者の説明書に従って使用した。
【０１２３】
ハイブリドーマ細胞株からのＲＮＡ精製
１０５個の細胞の任意の所定のハイブリドーマ細胞株から、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて総ＲＮＡを精製した。ＲＮＡを５０μｌの水中に溶出し（収率未計算）、５μｌを各ＲＴ−ＰＣＲ反応に使用した。
【０１２４】
逆転写ＰＣＲ
ＲＴ−ＰＣＲに使用するプライマーを表１中に列挙する。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ ｗｉｔｈ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。任意の所定の重鎖又は軽鎖配列中の可能性を有する全ての可変領域を効果的に標的化するために、各ＲＴ−ＰＣＲ反応のためのプライマーの組み合わせを使用し、各抗体遺伝子を増幅するためにいくつかのＲＴ−ＰＣＲ反応を同時に行った。
【０１２５】
重鎖については、各２μＭのプライマーであるＶＧ１＋７短、ＶＧ２短、及びＶＧ３短を２μＭの不変γ短（ＣＧ短）プライマーと１反応で組み合わせ、各２μＭのプライマーであるＶＧ４−短、ＶＧ５−短、及びＶＧ６−短を各２μＭの不変γ短（ＣＧ−短）プライマーと第２の反応で組み合わせた。任意の産物を次いでＱｉａｅｘ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製し、その産物が第１の反応から生じる場合には、２μＭのプライマーＣＧと組み合わせた各２μＭのプライマーＶＧ１、ＶＧ２、及びＶＧ３により再増幅し、又は、その産物が第２のＲＴ−ＰＣＲ反応から生じる場合には、Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、２μＭのプライマーＣＧと組み合わせた各２μＭのプライマーＶＧ４、ＶＧ５、及びＶＧ６により再増幅し、異なる５’及び３’Ｓｆｉ Ｉ制限部位を導入した。
【０１２６】
軽鎖については、産物の迅速なクローニングのために、ＲＴ−ＰＣＲ産物の収量は常に十分なものとし、すなわち、短プライマーを用いた最初のＲＴ−ＰＣＲ反応の必要性をなくすようにした。代わりに、各２μＭの３つの可変領域プライマーを２μＭの定常領域プライマー（表１）と組み合わせて、λに関する３つの別々の反応及びκ軽鎖に関する２つの別々の反応を引き起こした。具体的には、反応は２つ又は３つの以下の可変プライマー：
ＣＫ ＋ ＶＫ１， ２＋１．８及び３
ＣＫ ＋ ＶＫ ４及び５
ＣＬ ＋ ＶＬ１， ２及び３
ＣＬ ＋ ＶＬ４， ５及び６＋９
ＣＬ ＋ ＶＬ７及び１０＋８、を含むものとした。
その他の組み合わせが使用され得ることが理解されるであろう。
【０１２７】
ＰＣＲサイクリングの条件は、Ｋｒｅｂｂｅｒ，Ａ．，Ｂｏｒｎｈａｕｓｅｒ，Ｓ．，Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ，Ｊ．，Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，Ａ．，Ｗｉｌｌｕｄａ，Ｊ．，Ｂｏｓｓｈａｒｄ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．（１９９７）によるものに適合させた。Ｒｅｌｉａｂｌｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ｆｒｏｍ ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ａｎｄ ｓｐｌｅｅｎ ｃｅｌｌ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ａ ｒｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｓｙｓｔｅｍ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０１，３５−５５。ＲＴ−ＰＣＲのために、サイクリング条件を以下のようにした：４５℃にて３０分間、９４℃にて２分間：９４℃にて１分間、６３℃にて３０秒間、５８℃にて５０秒間、７２℃にて３分間、の７サイクル：９４℃にて１分間、６３℃にて１分間、及び７２℃にて３分間の３３サイクル、次いで７２℃にて７分間。通常のＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲではない）のためには、４５℃にて３０分間、及び９４℃にて２分間の開始時のステップを除いた。
【０１２８】
増幅産物をバイナリーベクターであるｐＢＩＳｆｉへとクローニングし、その構築を実施例２に記載する。
【０１２９】
実施例２： ｐＢＩＳｆｉベクターの構築
この実施例は、植物中での抗体発現のために使用することを助けるためのバイナリーベクターｐＢＩ１２１の修飾について記載する。最初に、ｐＢＩ１２１ベクターの１１０３１ｂｐの内部Ｓｆｉ Ｉ部位を以下のように変異させた：ベクターをＳｆｉ Ｉで消化し、Ｋｌｅｎｏｗを用いて、得られた一本鎖の突出部を埋め、得られた平滑末端を再度連結した。５’に唯一のＳｆｉ Ｉ部位を作製するために、オリゴヌクレオチドＢａｍＳｆｉ １（５’−ＧＡＴＣＣＧＧＣＣＣＡＧＣＣＧＧＣＣＧ−３’；配列番号５３）及びＢａｍＳｆｉ ２（５’−ＧＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＧＣＣＧ−３’；配列番号５４）を互いにアニールし、（内部Ｓｆｉ Ｉ部位を欠損した）ｐＢＩ１２１ベクターのＢａｍＨ Ｉ部位へと連結した。同様に、オリゴヌクレオチドＳａｃＳｆｉ １（５’−ＧＣＣＴＣＧＧＧＧＧＣＣＧＡＧＣＴ−３’；配列番号５５）及びＳａｃＳｆｉ ２（５’−ＧＣＣＣＣＣＧＡＧＧＣＣＧＡＧＣＴ−３’；配列番号５６）をアニールし、（内部Ｓｆｉ Ｉ部位を欠損した）ｐＢＩ１２１ベクターのＳａｃ Ｉ部位へと連結して、３’に唯一のＳｆｉ Ｉ部位を作製した。
【０１３０】
実施例３： ＰＡ抗体重鎖をコードするｃＤＮＡの変異
ＰＡγ鎖の３１８の位置におけるＮ−グリコシル化部位を変化させるために、製造者の推奨に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ’ｓ ＧｅｎｅＴａｉｌｏｒ ｋｉｔを使用し、ＰＡγ鎖をコードするｃＤＮＡを変異させた。以下の変異プライマーを使用した：５’−ｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃＣＡＡａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔ−３’（配列番号５７）。逆向きプライマーは以下を用いた：ｇｔａｃｔｇｃｔｃｃｔｃｃｃｇｃｇｇｃｔｔｔｇｔｃｔｔｇｇｃａ（配列番号５８）。変異の結果として、ＡＡＣコドンがＣＡＡコドンに置き換えられ、Ａｓｎ→Ｇｌｎの変化がもたらされた。
【０１３１】
実施例４： 植物中でのグリコシル化された及びグリコシル化されなＰＡ抗体の製造
ｐＢＩＳｆｉＩ中の３５Ｓプロモーター下での、軽鎖又は重鎖ｃＤＮＡを担持するアグロバクテリウム培養物の１：１混合物を用いたアグロインフィルトレーション法により、ベンサミアナタバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）植物体の葉から、グリコシル化された及びグリコシル化されないＰＡ抗体（それぞれＰＡ及びＰＡＮＧ）を精製した。抗体をタンパク質Ａ−及びＴ−ゲルクロマトグラフィーを用いて精製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて比較した。図１はゲルのイメージを示し、グリコシル化の欠損によりＰＡＮＧ重鎖の電気泳動移動度に差が出ていること、すなわち、ＰＡＮＧ重鎖が、より軽いＰＡ重鎖よりも早く移動することが明確に示されている。ウェスタンブロット及びＥＬＩＳＡ分析の結果、それぞれＰＡ及びＬＦのためのＰＡ、ＰＡＮＧ及びＬＦ抗体の特異的結合活性が示され、植物中での製造が抗体結合の特異性を損なわないことが示された。
【０１３２】
実施例５： ラットにおける抗ＰＡ及び抗ＬＦヒトモノクローナル抗体の半減期の検討
雄Ｆｉｓｃｈｅｒラットの腹腔内に、植物が産生したＰＡ、植物が産生したＰＡＮＧ、又は、植物が産生したＬＦのいずれかを５０μｇ注射した。注射前、ならびに注射２時間後、１、２、３、４、５、１０、１５及び２０日後に血清サンプルを採取した。血清を、ＰＡ−又はＬＦ−特異的結合ＥＬＩＳＡのいずれかにより分析した。植物が産生したＰＡ及びＰＡＮＧは同様の半減期を示し、一方、ＬＦ抗体は、植物が産生したＰＡ抗体のいずれと比較した時でも、いくらか短い半減期を有していた。
【０１３３】
実施例６： 動物防御試験
Ｂｅｅｄｈａｍ及び同僚らの方法に従い、植物が産生したＰＡの、Ａ／Ｊ マウスをＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓのＳｔｅｒｎｅ株の胞子を用いた攻撃から守るための能力を試験した。５匹のマウスの群に１８０μｇの植物が産生したＰＡ ｍＡｂをＰＢＳ中、腹腔内の経路により投与した。対照マウスにはＰＢＳを与えた。受動免疫２．５時間後に、動物に対し、０．１ｍＬのＰＢＳ中に１×１０４個の胞子（ほぼ３０半数致死投与量）を含むようにＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの胞子を与えた。ｃｈａｌｌｅｎｄに続き、罹患率又は死亡率の徴候に関し、１４日間毎日動物を観察した。植物が産生したｍＡｂを与えた動物では疾患症状が進行せず、健康を維持し、攻撃に対して生存した。一方、対象の動物では疾患が進行し、攻撃後３日以内で死亡した。
【０１３４】
当業者であれば、定型的な実験をこれ以上行うことなく、本明細書中に記載する本発明の具体的実施形態に対する多くの均等物を認識し、又は確認できるであろう。本発明の範囲は上述の記載に限定されることを意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に説明されるようなものであることが意図される。特許請求の範囲の項目において、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」等の語は、それに反する記載がない限り、又は文脈から明らかである場合、１以上を意味する場合がある。グループの中の１又はそれ以上の要素の間に「又は」を含む請求項又は記載は、それに反する記載がない限り、又は文脈から明らかである場合、所定の製品又はプロセス中に存在し、利用され、又は関連する場合、１つの、１つ以上の、又は全ての要素が充足されるものと考えられる。さらに、本発明が、全ての変形、組み合わせ及び置換を包含し、１以上の限定、要素、節、記述的な用語等が、１以上の列挙された請求項から別の請求項へと導入されることが理解されるべきである。具体的には、他の請求項に依存する任意の請求項は、同様の基礎となる請求項に依存する、その他の任意の請求項中に見られる１以上の限定を含むように修飾され得る。さらに、先行技術の範囲内に含まれる本発明の任意の特定の実施形態は、請求項から明確に除外されることが理解される。このような実施形態は、それらが本明細書中で明確に説明されない場合であっても、当業者にとっては知られているものと考えられる。例えば、任意の具体的なオリゴヌクレオチド、ｃＤＮＡ、核酸、又は抗体が請求項から除外され得る。
【図面の簡単な説明】
【０１３５】
【図１】図１は、ＰＡ及びＰＡＮＧ（非グリコシル型）植物産生抗体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示すゲルの写真である。ＩｇＧ標準は精製された総ヒトＩｇＧである。重（Ｈ）鎖及び軽（Ｌ）鎖の位置を矢印で示す。
【図２】図２は、植物によって産生されるＰＡ（ＰＡ）、又はＰＡＮＧ（ＰＡＮＧ）、ＬＦ（ＬＦ）抗体の半減期に関する研究の結果を表すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００５年８月３日に出願した米国仮特許第60/705,653号（この内容は、本明細書中にその全体が参考として援用される。）の優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
炭疽病は、胞子形成菌のＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓにより引き起こされる、よく知られた感染性疾患である。この疾患は、歴史的に、動物感染、特にウシ、ヒツジ及びヤギ等の草食動物に関連し、通常はヒトでは見られない。しかしながら、感染が起きている場所で動物製品に携わるヒトは、炭疽病と接触する危険を有する。この生物は世界の多くの領域で見出されているにも関わらず、中東のある領域、及び、サハラ砂漠下のアフリカは、炭疽病の多発地域である。この疾患は３つの異なる方法で現れ：皮膚炭疽、胃腸炭疽及び吸入炭疽は、汚染された肉製品中の胞子、摂食胞子に外傷部が曝されることにより、又は胞子を吸入することにより、それぞれ引き起こされる。皮膚炭疽の致死率が２５％までであるのに対し、胃腸炭疽又は吸入炭疽は、ほぼ１００％の致死率をもたらす。炭疽病感染の確定診断は、蘇生的なケアを提供するには既に手遅れであることがしばしばある。
【０００３】
Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの主たる病原性因子は、その生物によって分泌される多成分からなる毒素である。毒素は、防御抗原（ＰＡ）、致死因子（ＬＦ）及び浮腫因子（ＥＦ）と称される３つのタンパク質からなり、遺伝子ｐａｇ、ｌｅｆ、及びｃｙａにより、それぞれコードされる。ＰＡは、分子量８３ｋＤａの７３５アミノ酸からなるタンパク質である。それは哺乳類細胞表面上の炭疽病毒素受容体（ＡＴＲ）と結合して、フミンにより介在される開裂を受けた結果として、６３ｋＤａの受容体結合産物を生じる。６３ｋＤａのＰＡ断片は、細胞表面上にＬＦ又はＥＦのいずれかと相互作用し得る６量体の複合体を形成し、この複合体はその後、内在化される。ＬＦは、亜鉛金属タンパク質であり、ＭＡＰキナーゼキナーゼのいくつかのアイソフォームを開裂させ、それにより細胞内のシグナル伝達事象を破壊して、最終的に細胞死をもたらす。ＬＦは、炭疽病感染の致死的な転帰に関与すると考えられる。ＥＦは、細胞生理の脱制御を引き起こすカルモジュリン依存性アデニレートシクラーゼであり、浮腫を含む臨床的徴候をもたらす。ＰＡ及びＬＦは共に、致死的毒素と称される。
【０００４】
ＣＤＣは、炭疽病をカテゴリーＡの病原体としてリスト化し、炭疽病の攻撃による損失を、攻撃に曝されたヒト１００，０００人につき２６０億ドルを超えるものと見積もっている。現在、米国でのヒトへの使用に関して認可されている唯一のワクチンであるＢｉｏｔｈｒａｘ（かつての吸着炭疽ワクチン、又はＡＶＡ）は、防御抗原であるＰＡをベースとした、水酸化アルミニウム吸着されてホルマリン処理された、サブユニットワクチンである。それは皮下注射により送達され、ｂａｃｉｌｌｕｓが分泌する致死毒素に対する免疫を誘導する。ワクチンは、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ Ｖ７７０−ＮＰ１−Ｒ株の濾過培養上清から製造される。製造工程は複雑であり、ワクチン調製のロットによりバッチ間にぶれを有し、かつ、ワクチンの厳密な組成は不確定である。さらに、現在のワクチンと共存するアジュバントとしてミョウバンを含むため、ワクチンの保存及び流通の間は低温流通を維持しなければならず、不便性及びコストの負荷がかかる。ワクチンは注射によって投与され、このことが、一括的処理としての対応作業を複雑なものとし得る。従って、炭疽病の発症又は攻撃に関する感染可能性に対して対抗可能な、さらなる試薬が望まれているといえよう。
【０００５】
各種の治療的ならびに診断的な、また工業的及び研究的な目的に関し、モノクローナル抗体の重要性は高まっている。例えば、いくつかの動物における研究により、ワクチン接種した動物由来の炭疽病毒素に特異的な抗体が、感染による致死的な影響から、接種を受けた個体を受動的に守ることが示されている。しかしながら、動物由来の血清には、治療薬として広範に使用することを妨げる明白な欠点がある。ハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマが培養される培地から回収されるか、又はマウス腹水から回収される。残念なことに、これらの産生システムは高価であり、手間がかかり、かつ、その他の顕著な不都合を有している。これらの理由等により、組み換えＤＮＡ技術を含む製造システム等による、モノクローナル抗体の代替的製造システムを利用することが望ましいといえよう。
【０００６】
試薬への十分な要求及び限られた供給に関する懸念、製品コスト、及び試薬の純度により、改良された製品及び試薬に対する緊急の必要性はさらに高まっている。従って、潜在的な炭疽病感染に対抗する改良されたアプローチ、ならびに診断的検出方法の改良、及び、炭疽病感染メカニズムを調べるために有用なリサーチツールに対する明確なニーズ及び緊急性が存在する。さらに、合理的なコストでこのような適用を行うために有用な、大量生産を可能にする製造方法の提供が望まれている。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
本発明は、組み換え系で抗体を調製するために有用な核酸及びタンパク質配列を提供する。特に、軽鎖抗体配列及び重鎖抗体配列をコードする核酸配列の調製に関して有用な、オリゴヌクレオチドプライマー配列を提供する。さらに、少なくとも１つの重鎖ポリペプチド又はその機能的な断片からなるポリペプチドをコードする抗体の核酸配列；及び、少なくとも１つの軽鎖ポリペプチド又はその機能的な断片からなるポリペプチドをコードする抗体の核酸配列を提供する。また、重鎖及び軽鎖ポリペプチド及びその機能的な断片を提供する。本発明はさらに、少なくとも１つのＣＤＲ重鎖ポリペプチド及び少なくとも１つのＣＤＲ軽鎖ポリペプチドをそれぞれ独立に含んでなる、ＰＡ−１及びＬＦ−１抗体の抗体配列を提供する。また、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する１以上のＣＤＲをそれぞれ独立に含んでなり、ＰＡ−１又はＬＦ−１結合活性が向上されている、ＰＡ−１及びＬＦ−１抗体の抗体配列を提供する。ＰＡ−１及びＬＦ−１の重鎖及び軽鎖をコードする核酸、ならびにＰＡ−１及びＬＦ−１抗体をコードする核酸が付加的に提供される。このようなコード核酸の機能的な断片が同様に提供される。提供される組成物の製造方法及び用途も、本明細書中で提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
定義
用語「抗体」、「抗体鎖」、「可変領域又はドメイン」、「定常領域又はドメイン」、「γ鎖」、「κ鎖」、「λ鎖」、「重鎖」、「軽鎖」、及びその他の抗体に関連する用語は、例えば、Ｇｏｌｄｂｙ，Ｒ．Ａ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，上掲．及び／又はＨａｒｌｏｗ，上掲．に記載されるようなそれらの技術分野において認められる意味にしたがって使用される。
【０００９】
用語「ｃＤＮＡ」とは、ｍＲＮＡと相補的である一本鎖ＤＮＡ分子、又はｍＲＮＡと相補的である鎖を含んでなる二本鎖ＤＮＡ分子のことをいう。二本鎖ｃＤＮＡのもう一方の鎖は、ｍＲＮＡと同じ配列を有することになり、したがって、ｍＲＮＡと同じポリペプチドをコードすることになる。
【００１０】
「発現ベクター」は、調節配列（例えば、プロモーター及び／又はその他の発現シグナル並びに、場合により、３’調節配列等の３’配列又は機能可能に連結している核酸部分の転写を推進させるために十分な停止シグナルを含むベクターである。発現ベクターはさらに、核酸部分の適当な転写のために必要とされる、機能可能に連結された配列を含んでもよい。核酸部分は、必ずしもそうでなくてもよいが、タンパク質コード配列であってもよい。核酸部分は、組み換えＤＮＡ技法により一緒に結合され、天然には存在しないヌクレオチド配列を生じる、別由来の１以上の配列を含むことを意味する、キメラであってもよい。用語「発現ベクター」とは、機能可能に連結される核酸部分の挿入前又は後いずれかのベクターのことをいい得る。特定の発現ベクターは、細菌−酵母、又は細菌−動物細胞、又は細菌−真菌細胞、又は細菌−無脊椎動物細胞、又は細菌−植物細胞等の宿主間でのＤＮＡの往復を可能にしている。典型的な発現ベクターは、宿主細胞中での自己複製のための複製開始起源、１以上の選択マーカー、１以上の（通常は複数の）有用な制限酵素部位、及び（多いコピー数のために有効であることの多い）１以上のプロモーターを含み得る。
【００１１】
「同一性」とは、２以上の核酸の配列が同じである度合のことをいう。評価ウィンドウ上の第１の核酸と第２の核酸との間のパーセント同一性は、核酸を整列させ、同一性を最大にするためにギャップの導入を可能にする、評価ウィンドウ内の反対に位置し同一であるヌクレオチド数を調べ、ウィンドウ内の全ヌクレオチド数で割り、１００を掛けることにより、計算することができる。特定の％同一性を得るために必要とされる同一なヌクレオチド数を計算する場合、割合は最も近い自然数に四捨五入される。２以上の配列を比較する場合、そのうちのいずれかを参照配列と考えてもよい。
【００１２】
パーセント同一性は、当技術分野において公知の様々なコンピュータープログラムを用いて計算することができる。例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ等のコンピュータープログラムは、アラインメントを作成し、対象配列と様々な公開されているデータベースのいずれかの配列との％同一性を提供する。Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７，１９９３中に記載されるのものを改変した、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌのアルゴリズム（Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２２６４−２２６８，１９９０）が、ＡｌｔｓｃｈｕｌらのＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０）に組み入れられる。比較目的のためにギャップのあるアラインメントを得るためには、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（Ａｌｔｓｃｈｕｌ， ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７）に記載されているようにしてギャップＢＬＡＳＴが利用される。ＢＬＡＳＴ及びギャップＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、各プログラムのデフォルトのパラメーターが使用される。ＵＲＬ ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を有するウェブサイトを参照されたい。ＰＡＭ２５０又はＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを使用してもよい。
【００１３】
用語「単離される」とは、１）天然において通常それと関連する少なくともいくつかの成分から分離されること；２）ヒトの手が関係する工程によって調製又は精製されること；及び／又は３）天然には存在しないこと、を意味する。天然に見られるより大きな核酸（例えば、染色体、エピソーム、ウィルス又は細菌のゲノム）から切り出された又は増幅された核酸は、単離されているとみなされる。いくつかの実施形態において、切り出された又は増幅された核酸はこれ以上、非コード領域とは結合しないか（しかし、その天然の調節領域又はその一部とは結合し得る）、又は、より大きな核酸において見られるような、単離された核酸の上流又は下流に位置するその他の遺伝子とは結合しない。単離された核酸には、プラスミド、コスミド、人工染色体、ウィルスベクター等中に挿入される核酸、すなわち、単離されていると考えられる組み換え核酸構築物の一部を形成する核酸が含まれる。単離された核酸は、増幅産物（例えば、ＰＣＲ産物）、単離されたｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、制限断片等であってもよい。単離されたポリペプチドは、異種発現系において発現された、すなわち、天然にはそのポリペプチドを発現しない細胞によって発現されたポリペプチドであってもよい。単離された抗体は、血液又は血清以外の組成中に存在する抗体であってもよい。単離された核酸から発現される抗体は単離された抗体であると考えられる。任意の本発明の核酸、抗体鎖、抗体は、単離された形態で提供することができる。
【００１４】
用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」、及び「オリゴヌクレオチド」は、少なくとも３種類のヌクレオチド類のポリマーを言及するために本明細書において同義的に使用される。糖分子と結合した窒素含有塩基をヌクレオシドは含んでなる。ポリヌクレオチドにおいて、リン酸基は隣接するヌクレオシドと共有結合してポリマーを形成する。ポリマーとしては、天然のヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）、ヌクレオシドアナログ、化学的に修飾された塩基、生物学的に修飾された塩基（例えば、メチル化された塩基）、介在塩基、修飾された糖（例えば、修飾されたプリン又はピリミジン）を挙げることができる。本明細書において開示されるポリヌクレオチドにおいて使用され得る各種ヌクレオチド類、ヌクレオチド類、及び骨格構造並びにその製造方法のさらなる検討のために、Ｋｏｒｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＤＮＡ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，２ｎｄ Ｅｄ．（Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９９２）、Ｓｃｈｅｉｔ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８０）、及び米国特許公開第２００４００９２４７０号並びにそれらの中に記載される参考文献を参照されたい。ペプチド核酸、ロック核酸等のアナログも本発明の範囲にある。ポリヌクレオチドは任意の大きさ又は配列であってもよく、一本鎖又は二本鎖であってもよい。オリゴヌクレオチドは通常、１００ヌクレオチド長より短い。本明細書において開示される任意の核酸は、一本鎖又は二本鎖形態であることができる。本発明が核酸配列を提供する場合、相補的配列も提供される。さらに、ある配列がＤＮＡとして提供される場合、対応するＲＮＡ配列（すなわち、Ｔの代わりにＵである配列）も提供される。
【００１５】
用語「核酸構築物」は、ヒトの手により修飾されている核酸又はかかる核酸に由来するもののことを指すために用いられる。例えば、核酸構築物は、天然の核酸分子と比較した変異、欠失、又は置換を含むことができる。核酸構築物は、異なる生物等の異なる供給源に由来する又はそこから生じた２以上の核酸セグメント、例えば、組み換えポリヌクレオチドを含み得る。核酸構築物の１以上の部分の配列は、ヒトによって全体が創作されてもよい。
【００１６】
本明細書において使用する場合、用語「核酸配列」とは、核酸物質自体のことをいうこともでき、特定の核酸、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を生化学的に特徴付ける配列情報（すなわち、５種類の塩基の文字Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、又はＵの中から選択される連続文字）に限定されない。
【００１７】
「機能可能に連結している」又は「機能可能に結合している」とは、一方の配列の発現、活性、局在性等が他方の核酸により調節される、指示される、制御される、変調される等、２つの核酸間の機能的な関係のことをいう。２つの核酸は機能可能に連結している又は機能可能に結合していると称される。「機能可能に連結している」又は「機能可能に結合している」とはさらに、一方のポリペプチドの発現が他方のポリペプチドにより調節される、指示される、制御される、変調される等、２つのポリペプチド間の機能的な関係のことをもいう。２つの核酸は機能可能に連結している又は機能可能に結合していると称される。例えば、核酸の転写は、機能可能に連結しているプロモーターによって指示され；核酸の転写後プロセシングは、機能可能に連結しているプロセス配列によって指示され；核酸の翻訳は機能可能に連結している翻訳調節配列、例えば、翻訳開始配列によって指示され；核酸又はポリペプチドの輸送、安定性、又は局在性は、機能可能に連結している輸送又は局在配列、例えば、分泌シグナル配列によって指示され；ポリペプチドの翻訳後プロセシングは機能可能に連結しているプロセス配列によって指示される。好ましくは、第２の核酸配列と機能可能に連結している第１の核酸配列、又は、第２のポリペプチド配列と機能可能に連結している第１のポリペプチド配列は、かかる配列と直接的又は間接的に共有結合しているが、任意の有効な３次元的結合も許容され得る。当業者であれば、複数の核酸、又は複数のポリペプチドが機能可能に連結又は結合し得ることを理解するであろう。
【００１８】
用語「プライマー」とは、好適な温度にて、任意の必要な共同因子を含む適当なバッファー溶液中の適当な条件下（例えば、４つの異なるヌクレオシド三リン酸及びＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ又は逆転写酵素等のポリメライゼ−ション試薬の存在下）で、テンプレートによって指示されるＤＮＡ合成の開始点として機能する一本鎖オリゴヌクレオチドのことをいう。プライマーの適当な長さは意図されるプライマーの用途によって左右されるが、通常は約１０〜約５０ヌクレオチドの範囲である。プライマーはテンプレートと完全に相補的である必要はないが、テンプレートとハイブリダイズするために十分に相補的であるべきである。プライマーは二本鎖形態で提供することができ、すなわち、その相補鎖とハイブリダイズすることができる。
【００１９】
本明細書において使用する場合、「精製されている」とは、ある実体又は物質が、精製される前に従前にそれとともに見出されている１以上の他の実体又は物質と分離されていることを意味する。実体又は物質は、部分的に精製されていても、実質的に精製されていても、又は純粋であってもよい。核酸又はポリペプチド等の物質又は実体は、溶媒及び溶媒中に含まれる任意のイオン以外の実質的に全ての他の化合物又は実体からかかる物質又は実体が除去された場合に純粋であるとみなされ、すなわち、それは、組成物の乾燥重量の少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％以上を構成する。部分的に又は実質的に精製された、核酸又はポリペプチド等の化合物又は実体は、天然にそれとともに見出される物質、例えば、細胞タンパク質及び／又は核酸等の細胞物質の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％から除去され得る。特定の実施形態において、精製された核酸又はポリペプチドは、組成物中でそれぞれ、全核酸又はポリペプチドの乾燥重量の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又はそれ以上を構成する。純度を評価するための方法は当技術分野において公知であり、クロマトグラフィー方法、免疫学的方法、電気泳動方法等が挙げられる。
【００２０】
核酸に関連して用語「調節エレメント」又は「調節配列」は、通常、それと機能し得るように連結している核酸配列の発現における１以上の工程（特に転写であるが、いくつかのケースにおいては、スプライシング又はプロセシング等のその他の事象）を指示又は調節する核酸部分を記載するために本明細書においては使用される。この用語にはプロモーターが含まれ、エンハンサー、サイレンサー、及びその他の転写調節エレメントのことも言い得る。プロモーターとは、転写開始前にＲＮＡポリメラーゼが結合する部位を含み、通常は基底レベルの転写ですら起こるのに必要である核酸領域である。一般的にはかかるエレメントはＴＡＴＡボックスを含んでなる。エンハンサーとは、そのエンハンサーの非存在下で起こり得る発現のいくつかの基底レベルを通常は上回って、近位に又は遠位に位置するプロモーターの転写活性を上昇させるタンパク質のための結合部位を包含する核酸領域である。本発明のいくつかの実施形態において、調節配列はヌクレオチド配列の構成的発現を指示することができ、例えば、発現は、多くの又は全ての細胞型において且つ／又は多くの又は全ての条件において起こり得、他の実施形態においては、調節配列は、細胞又は組織特異的且つ／又は誘導性の発現を生じ得る。例えば、発現は、ホルモン又はその他小分子等の誘導物質の存在又は添加、温度の上昇等により誘導することができる。調節エレメントは、機能可能に連結した核酸の発現を抑制又は減少させることもある。このように挙動する調節エレメントは、本明細書において「負の調節エレメント」と称され得る。
【００２１】
通常、発現レベルは、ｍＲＮＡ又はタンパク質を測定するための標準的技法を用いて測定することができる。かかる方法としては、ノーザンブロッティング、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ＲＴ−ＰＣＲ、配列決定、イムノブロッティング等の免疫学的方法、免疫学的検出、又は蛍光検出に続く蛍光標識抗体による染色、オリゴヌクレオチド又はｃＤＮＡマイクロアレイ又は膜アレイ、タンパク質アレイ分析、質量分析等が挙げられる。発現レベルを調べるための簡便な方法は、発現ベクター中で調節エレメントと機能可能に連結させて容易に検出可能なマーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質又はルシフェラーゼ等の蛍光又は発光タンパク質、アルカリホスファターゼ等の酵素等）をコードする核酸を配置して、ベクターを対象の細胞型又は生物中に導入し、一定時間細胞又は生物を維持し、次いで、容易に検出可能なマーカーの発現を測定することであり、容易に検出し得る特性（例えば、蛍光、発光、基質の光学的特性の変化等）を利用し得る。調節エレメントの非存在下及び存在下での発現を比較することにより、調節エレメントが機能可能に連結している配列の発現に影響を及ぼす程度が示される。
【００２２】
「特異的結合」とは、通常、標的ポリペプチド（又は、より一般的には標的分子）と、抗体又はリガンド等の結合分子との間の物理的結合のことをいう。この結合は通常、結合する分子によって認識される抗原決定基又はエピトープ等の標的における特定の構造的特徴の存在に依存する。例えば、
抗体がエピトープＡに対して特異的である場合、エピトープＡを含むポリペプチドの存在又は遊離している標識されたＡとそれに結合する分子の両方を含有する反応物中で遊離している非標識Ａの存在は、結合分子と結合する標識されたＡの量を減少させる。特異性は絶対的である必要はないが、通常、結合が起こる状況のことをいうことを理解すべきである。例えば、多数の抗体が、標的分子に存在するものに加えて、その他のエピトープと交差反応することは、当技術分野において周知である。かかる交差反応性は、抗体を使用する用途に応じて許容され得る。当業者であれば、任意の所定の用途（例えば、標的分子の検出のため、治療目的のため等）において適切に実行しうるように、十分な程度の特異性を有する抗体又はリガンドを選択し得る。結合分子のその他の標的、例えば、競合分子との親和性に対する、標的に対する結合分子の親和性等の付加的因子との関連において評価し得る事も理解すべきである。結合分子が、検出されることが望まれる標的分子に対して高い親和性を示し、非標的分子に対しては低い親和性を示す場合、抗体は恐らく許容可能な試薬となり得る。結合分子の特異性が１以上の状況において一旦確立されたならば、それは、必ずしもその特異性を再評価することなく、その他の、好ましくは類似の状況において使用することができる。２以上の分子の結合は、親和性（平衡解離定数，Ｋｄ）が、試験条件下、例えば、生理学的条件下で少なくとも１０−３Ｍ、好ましくは１０−４Ｍ、より好ましくは１０−５Ｍ、例えば、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、又は１０−９Ｍである場合に、２以上の分子の結合は特異的であるとみなすことができる。
【００２３】
本明細書において使用する場合、「対象」とは、例えば、実験、診断、及び／又は治療目的のために、抗体組成物が送達される個体のことをいう。好ましい対象は哺乳動物、特に家畜（例えば、イヌ、ネコ等）、霊長類、又はヒトである。
【００２４】
本明細書において使用する場合、「治療すること」とは、通常、かかる用語が適用される疾患、障害、又は症状の進行を逆転すること、軽減すること、低下させること、抑制すること、又は、それらの可能性を低減すること、又はかかる用語が適用される疾患、障害、又は症状の１以上の症候又は徴候を低減することを含み得る。「予防すること」とは、疾患、障害、症状、又はそれらの症候もしくは徴候が、又はそれらの重篤度の悪化が生じなくすることをいう。
【００２５】
「ベクター」は、本明細書において、例えば、移送、輸送等、核酸分子の細胞への進入を介在し得る核酸又はウィルス、ウィルスゲノム、又はそれらの部分（例えば、ウィルスキャプシド又はウィルスゲノム成分）のことを称するために用いられる。ベクターが核酸である場合、移送される核酸分子は通常、ベクター核酸分子と連結、例えば、その中へ挿入される。核酸ベクターは、好適な宿主細胞内において自己複製を指示する配列（例えば、複製開始点）を含んでもよく、あるいは、宿主細胞ＤＮＡ中へ核酸の一部又は全部が組み込まれることを可能にするのに十分な配列を含んでもよい。有用な核酸ベクターとしては、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡプラスミド、コスミド、及び天然の又は修飾されたウィルスゲノム又はその一部又はウィルスキャプシド中にパッケージングされ得る核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）が挙げられる。プラスミドベクターは、通常、複製開始点及び１以上の選択マーカーを含む。プラスミドはウィルスゲノムの一部又は全てを含んでもよい（例えば、ウィルスのプロモーター、エンハンサー、プロセシングシグナル又はパッケージングシグナル等）。核酸分子を細胞中に導入し得るウィルス又はその一部（例えば、ウィルスキャプシド）はウィルスベクターと呼ばれる。有用な動物ウィルスベクターとしては、アデノウィルス、レトロウィルス、レンチウィルス、ワクシニアウィルス及びその他のポックスウィルス、単純ヘルペスウィルス等が挙げられる。有用な植物ウィルスベクターとしては、トバモウィルス、イラルウィルス等をベースとするものが挙げられる。ウィルスベクターは、宿主細胞に導入された場合に、感染性ウィルスの産生に関する十分なウィルス遺伝情報を含んでいても、含んでいなくてもよく、すなわち、ウィルスベクターは複製欠損的であり、かかる複製欠損性ウィルスベクターが本発明の特定の実施形態に対しては望ましい。十分な情報が欠如している場合、必ずしも宿主細胞によって情報が提供される必要もなく、又は細胞に導入される別のベクターによって提供される必要もない。
【００２６】
発明の特定の実施形態の詳細な説明
本発明は、モノクローナル抗体（ｍａｂ）ＰＡをコードする核酸、及びモノクローナル抗体ＬＦをコードする核酸に関する。核酸及びその機能的な断片によりコードされる抗体は、炭疽病タンパク質ＰＡ及びＬＦをそれぞれ特異的に認識し、活性及び炭疽病感染の発生を阻害する。本発明はまた、ＰＡ及び／又はＬＦ、及びその機能的な断片の修飾された形態を含んでなるポリペプチドをコードする核酸に関する。これらの抗体及び機能的な断片は、結合特異性及び、親マウス抗体ＰＡ及び／又はＬＦの阻害活性を維持している。本発明はさらに、ＰＡ及び／又はＬＦ 抗体の親形態と比較して結合親和性及び特異性が上昇していることを示すＰＡ及び／又はＬＦ抗体の形態を最適化することに関する。
【００２７】
Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５，１９７５により最初に記載されたハイブリドーマ法は、所望の結合特性を呈するモノクローナル抗体の同定に広く使用されている。手短に言えば、この技術は、通常、免疫した哺乳動物からリンパ球を単離し、このリンパ球をメラノーマ細胞と融合させて、融合により作製されたクローン細胞株（ハイブリドーマ）を単離することを含む。これらの細胞株から、対象のポリペプチド又はその特定の部分、又は抗原決定基に対し結合する抗体を産生するものをスクリーニングする。株はまた、標的ポリペプチドに対する所望の親和性を有する抗体を産生するものを特定するために、スクリーニングすることができる。免疫した哺乳動物は、例えば、ワクチン接種により意図的に免疫されていてもよく、又は感染性生物により感染されているか、抗原等に曝されていてもよい。従って、「免疫した哺乳動物」とは、対象のポリペプチドに特異的に結合する抗体を産生する、任意の哺乳動物をいう。本発明の好ましい実施形態において、哺乳動物は、例えば、病原菌に対するワクチン接種をされたヒト、病原菌に曝されたヒト等のヒトである。
【００２８】
本発明は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、ハイブリドーマ由来の抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードするｃＤＮＡを単離する際に使用するための、オリゴヌクレオチドプライマー及びプライマーのセットを提供する。
【００２９】
一実施形態において、オリゴヌクレオチドは、配列番号１〜４４の任意のものを含んでなる。別の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、配列番号１〜４４のうちの任意のものからなる。その他の態様において、特定のプライマー中で提供される制限酵素部は、任意の好ましい制限酵素部位に対し、望ましいベクター挿入部位へとプライマーを適合させるために修飾することができる。
【００３０】
別の態様において、本発明は、抗体鎖又はその部分をコードする核酸を単離する方法を提供する。一実施形態において、この方法は、（ａ）抗体産生細胞から得られる核酸を、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプライマーと接触させるステップ；及び、（ｂ）増幅反応を行うステップ、を含んでなる。増幅反応は通常、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。本発明の特定の実施形態において、ステップ（ａ）は、核酸を、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーとｃｏｎｔａｉｎｃｔさせることを含んでなる。本発明のプライマー及び方法が、ハイブリドーマから抗体鎖ｃＤＮＡをクローニングするための特定の用途（すなわち、抗体鎖をコードするｃＤＮＡ）を有し得る一方、それらがその用途に限定される理由も何らなく、任意の抗体産生細胞、細胞株等由来の抗体鎖ｃＤＮＡをクローニングするために使用し得ることが理解されるだろう。好ましくは、抗体鎖はヒト抗体鎖である。
【００３１】
別の態様において、本発明は、炭疽病タンパク質に結合する抗体ポリペプチド鎖、その又は機能的な断片をコードする核酸組成物を提供する。一実施形態において、抗体ポリペプチド鎖又はその機能的な断片をコードする核酸組成物は、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合する機能的タンパク質を含んでなる。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のκ軽鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のγ重鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、核酸はｃＤＮＡ配列であるか、又はｃＤＮＡ配列を含んでなる。
【００３２】
一実施形態において、抗体ポリペプチド鎖又はその機能的な断片をコードする核酸組成物は、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子と結合する機能的タンパク質を含んでなる。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のκ軽鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原と結合するモノクローナル抗体、又はその機能的な断片のγ重鎖をコードする核酸が提供される。一実施形態において、核酸はｃＤＮＡ配列であるか、又はｃＤＮＡ配列を含んでなる。
【００３３】
さらに、１以上の本発明の核酸、例えば、抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸を含んでなる多様性を有する核酸構築物が提供され、該核酸は、例えば、１以上の抗体重鎖又は抗体軽鎖を発現する本発明のプライマーを用いて、細胞又は細胞株から単離される。例えば、本発明は、ベクター、例えば、１以上の本発明の核酸を含む発現ベクターを提供する。特定の実施形態において、ベクターはアグロバクテリウムにより介在される形質転換にとって好適なバイナリーベクターである。特定の実施形態において、ベクターは植物ウィルスである。特定の実施形態において、ベクターは、植物ウィルス、例えば、１以上の植物ウィルスのゲノム要素を含むウィルスに基づく。
【００３４】
本発明はさらに、１以上の提供される核酸を発現し、モノクローナル抗体の重鎖又は軽鎖又はその機能的な断片を産生する宿主細胞を提供する。
【００３５】
本発明はさらに、（ｉ）モノクローナル抗体の重鎖又は軽鎖、又はその機能的な断片をコードする核酸であって、本発明の１以上のプライマーを用いて単離され、前記核酸は発現系中で核酸の発現を方向付けるプロモーター等の調節エレメントへと制御可能な形で連結されている、前記核酸を含む発現システムを提供すること、（ｉｉ）発現が生じる条件下に発現系を維持すること、を含んでなる、抗体重鎖又は抗体軽鎖を産生する方法を提供する。この方法はさらに、（ｉｉｉ）抗体又はその機能的な断片を回収することを含んでなる。抗体又はその機能的な断片は、当技術分野で公知の各種の技術の任意のものを用いて精製することができる。発現系は、例えば、細胞培養物、トランスジェニック植物又は動物、クローン根又は植物株等の任意の好適な発現系であり得る。完全な抗体は、重鎖及び軽鎖を互いに関連するようにさせることにより、産生され得る。
【００３６】
本発明はさらに、（ｉ）抗体の重鎖又はその機能的な断片をコードし、さらに抗体の軽鎖又はその機能的な断片をコードする核酸であって、本発明の１以上のプライマーのいずれか又は両方を用いて単離され、前記核酸の各々は発現系中で核酸の発現を方向付けるプロモーター等の調節エレメントへと制御可能な形で連結されている、前記核酸を含む発現システムを提供すること、（ｉｉ）発現が生じる条件下に発現系を維持すること、を含んでなる、抗体重鎖又は抗体軽鎖を産生する方法を提供する。抗体鎖はいずれもこの発現系により産生され、互いに関連付けられ得る。任意の好適な発現システムが使用可能である。
【００３７】
本発明はさらに、一方又は両方の鎖が本明細書中に記載の本発明の方法に従って産生される、重鎖及び軽鎖又はその機能的な断片を含んでなる抗体を投与することを含んでなる。
【００３８】
本特許出願は、各種の特許、特許出願、定期刊行物記事、及びその他の刊行物を参照し、それらの全てを本明細書中に参照により組み入れるものとする。さらに、以下の標準的な参考文献を参照により本明細書中に組み入れるものとする：Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｆ．，（ｅｄ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ａｎｄ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，２００２年７月の版；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｒｕｓｓｅｌｌ， ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ２００１；Ｈａｒｌｏｗ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ． １９８８）；Ｇｏｌｄｓｂｙ，Ｒ．Ａ．， ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０００；及びＧｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ Ｅｄ．．ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，２００１。組み入れられた参考文献のうち、任意の物の間での不一致又は矛盾を有する事象及び、即時の具体化又は当業者の理解に関しては、不一致又は矛盾が発明者の判断の範囲内であるかどうかが理解されるように、明細書が具体的に調整を行うものとし、このことは任意の時点で起こり得る。
【００３９】
本発明は、例えば、抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードするｃＤＮＡ等の核酸を、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いてハイブリドーマから単離する際に使用するための、新規なオリゴヌクレオチドプライマー及びプライマーのセットを提供する。ＰＣＲは当技術分野でよく知られ、例えば、ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ，Ｃ．Ｗ． ａｎｄ Ｄｖｅｋｓｌｅｒ，Ｇ．Ｓ．（Ｅｄｓ．）；ＰＣＲ Ｂａｓｉｃｓ：Ｆｒｏｍ Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｔｏ Ｂｅｎｃｈ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，２０００；Ｍ．Ｊ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，ｅｔ ａｌ；Ｍａｔｔｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９：４９６７ （１９９１）；Ｅｃｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１：１７ （１９９１）；ＰＣＲ （ｅｄｓ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ）；及び、米国特許第４，６８３，２０２号中に記載されている。本発明の特定の実施形態において、例えば、ｍＲＮＡ等のＲＮＡは、ハイブリドーマ等の細胞又は細胞株から単離される。ＲＮＡは逆転写に供されて、ｃＤＮＡを産生する。抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸は、本発明の１以上のオリゴヌクレオチドプライマー又はプライマーセットを用いて増幅される。本発明のプライマーは、その他の増幅技術を同様に用いて増幅に使用することができる。
【００４０】
本発明のオリゴヌクレオチドを表１に列挙する。表には、例えば、それに対しプライマーがハイブリダイズする、γ鎖の定常領域（ＣＧ）、λ鎖の定常領域（ＣＬ）、κ鎖の定常領域（ＣＫ）、重鎖の可変領域（ＶＧ）、λ鎖の可変領域（ＶＬ）、又はκ鎖の可変領域（ＶＫ）等の抗体遺伝子又はｃＤＮＡの部分をも示している。特定のプライマーがコード領域又は非コード領域に対しハイブリダイズすることが理解され、従って「ハイブリダイズする」とは、これらの可能性のいずれかを包含することが意図されるであろう。表１はまた、ＧｅｎＢａｎｋより入手可能な個々の配列の数を示し、特定のプライマーを用いて増幅可能な「ファミリー」にグルーピングすることができる。プライマーのうち、「短」と記載した特定のものについては、設計された制限部位を含有しない、より長いその他のプライマーは、抗体遺伝子又はｃＤＮＡへとハイブリダイズする部分に関する５’側に位置するＳｆｉＩに対する制限部位を含む。これらのプライマーはまた、５’末端にＣＴＣ又はＣＴＣＧＣのいずれかを含み、制限酵素による開裂の効率が向上している。本発明は、表１の「短」プライマーの配列を有する部分を含んでなる付加的なオリゴヌクレオチドを包含し、さらに、短プライマーの配列を有する部分に関する、５’側に位置する制限部位を含んでなる。ＳｆｉＩ部位（太字で示す）を含んでなるプライマーは、どのようにして本発明の短プライマーが修飾され、制限部位へと組み入れられるかの例示を提供する。
【００４１】
従って、一態様において、本発明は、その配列が配列番号１〜４４のいずれかを含んでなる、又はいずれかからなるオリゴヌクレオチドを提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも３つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも４つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも５つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。別の態様において、本発明は、配列番号１〜４４からなる群から選択される少なくとも６つのオリゴヌクレオチドを含むプライマー混合物を提供する。本発明の特定の実施形態において、プライマー混合物中の少なくとも１つのプライマーは定常領域プライマーであり、プライマー混合物中の少なくとも１つのプライマーは可変領域プライマーである。
【００４２】
いくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも１つの、γ鎖の定常領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＣＧプライマー）及び、少なくとも１つの、重鎖の可変領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＶＧプライマー）を含む。いくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも１つの、λ鎖の定常領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＣＬプライマー）及び、少なくとも１つの、λ鎖の可変領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＶＬプライマー）を含む。いくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも１つの、κ鎖の定常領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＣＫプライマー）及び、少なくとも１つの、κ鎖の可変領域の少なくとも一部をコードする配列に対しハイブリダイズするプライマー（ＶＫプライマー）を含む。本発明のいくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも２つ又は３つのＶＧプライマー及び、少なくとも１つのＣＧプライマーを含む。本発明のいくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも２つ又は３つのＶＬプライマー及び、少なくとも１つのＣＬプライマーを含む。本発明のいくつかの実施形態において、プライマー混合物は、少なくとも２つ又は３つのＶＫプライマー及び、少なくとも１つのＣＫプライマーを含む。前記実施形態のいずれかにおいて、プライマーは短い場合があり、又は長い場合がある。本発明のいくつかの実施形態においては、プライマーセット又は一対の短プライマーを用いて第１のＰＣＲ反応を行い、制限部位を含むプライマーセット又は一対のプライマー（長プライマー）を用いて第２のＰＣＲ反応を行う。長プライマーは、実施例１に記載の短プライマーの配列を含んでなり得る。
【００４３】
表１． ＲＴ−ＰＣＲプライマー
【００４４】
【表１−１】
【００４５】
【表１−２】
【００４６】
【表１−３】
表１に列挙された配列は、列挙された配列を有する単一のオリゴヌクレオチド分子であるか、又は、列挙された配列を有する各オリゴヌクレオチド分子の集合であるかの、いずれかを表すことが理解されるであろう。表１に列挙された特定のプライマーは縮重であり、すなわち、縮重位置においてその配列が異なっている個々の要素を含む配列により示される、オリゴヌクレオチド分子の集合である。用語「位置」は、ポリヌクレオチド中の各ヌクレオチドに対し割り振られた数値をいい、通常は５’末端に対する値である。
【００４７】
縮重プライマーの概念は、当技術分野でよく知られており、本明細書中で当技術分野での理解と一致している。表２は、ＩＵＰＡＣの多義性コードを含み、縮重位置に存在するヌクレオチドを表す略号を列挙している。例えば、Ｋは、Ｇ又はＴを表す。
【００４８】
表２：多義性コード
【００４９】
【表２】
オリゴヌクレオチド中の所定の位置に「Ｎ」個の可能性を有するヌクレオチドが存在する場合、この位置はＮ倍縮重であると称される。すなわち、プライマー配列「ＣＧ」、すなわち５’−ＣＴＣＧＣＧＧＣＣＴＣＣＧＡＧＧＣＣＴＣＡＴＴＴＡＣＣＣＫＧＡＧＡＣＡＧＧ−３’（配列番号１）は、２９の位置がＧであるいくつかのメンバーと２９の位置がＴであるいくつかのメンバーを含むオリゴヌクレオチドの集合を示す。本発明は、その位置に考えられ得る任意の代替物により縮重位置が占められている、オリゴヌクレオチドを含む。例えば、本発明は、２９の位置がＧとなっている配列番号１の配列を有するオリゴヌクレオチドを包含し、加えて、２９の位置がＴとなっている配列番号１の配列を有するオリゴヌクレオチドをも包含する。全ての可能性が包含される。例えば、プライマー「ＶＧ１＋７短」（配列番号１３）は、９及び１１の位置で２倍縮重である。すなわち、本発明は、配列番号１３で示される縮重オリゴヌクレオチドを包含することに加えて、４つの異なる任意の配列を有するオリゴヌクレオチド分子を含む配列番号１３の４倍非縮重変化物を包含する。本発明はまた、表１に示すよりも少ない位置が縮重している実施形態をも包含する。例えば、本発明は、配列番号１３における９の位置のみが縮重している（かつ、１１の位置はＹにより示されるヌクレオチドのいずれかである）実施形態を包含する。
【００５０】
縮重オリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド集合中の異なるオリゴヌクレオチドの比率は異なり得る。通常、配列は、集合中にほぼ同様に表れる。しかしながら、混合物の組成を偏らせることが望ましい場合があり得る。表１中に列挙された縮重オリゴヌクレオチドの、任意の具体的なパーセント組成は、本発明の範囲内である。オリゴヌクレオチドの全体的な縮重度は、オリゴヌクレオチド集合中に存在し得る、異なる配列の総数である。例えば、３つの縮重位置が存在し、そのそれぞれが２倍縮重である場合、そのオリゴヌクレオチド集合の縮重度は２３＝８である。
【００５１】
発現系及び抗体産生
本発明のオリゴヌクレオチドプライマーの任意のものを用いて単離された抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸は、多様な発現系の任意のものにおいて発現され得る。発現系は、ポリペプチドを合成可能な細胞株又はトランスジェニック動物又は植物等の、任意の好適な生物学的システムである。通常、核酸は、各種知られた発現ベクターへと挿入される。対象のポリヌクレオチドを発現するための好適な方法は、当技術分野で知られ、Ａｕｓｕｂｅｌ，上掲、及びＳａｍｂｒｏｏｋ，上掲、中に記載されている。米国特許第４，８１６，５６７号及び同第６，３３１，４１５号も参照されたい。任意の原核生物又は真核生物発現システムが使用可能である。本発明の特定の実施形態において、発現系はハイブリドーマではなく、ヒトでもなく、すなわち、発現系は、天然には抗体鎖を産生しないものである。
【００５２】
本発明の特定の実施形態において、植物に基づく発現系が用いられる。植物に基づく発現系は、植物細胞又はその一部を利用する任意の発現系である。発現系は、植物細胞株、植物体全体、クローン根等であり得る。植物細胞株、植物体全体、クローン根等、及び、トランスジェニック又は非トランスジェニックなものであり得る。
【００５３】
植物に基づく発現系において、例えば、抗体重鎖又は抗体軽鎖等の対象のポリヌクレオチドを発現するための方法及びベクターは、当技術分野においてよく知られている。米国特許第６，８５２，３１９号参照。本発明の特定の実施形態においては、植物ウィルスのゲノムに基づくベクターが用いられる。限定することなしに、本発明は、例えば、ＲＮＡ植物ウィルス又はウィルスゲノム、ＤＮＡ植物ウィルス又はウィルスゲノム等の植物ウィルス又はウィルスゲノムに基づく任意のベクターの利用を包含する。例えば、米国特許第５，６０２，２４２号、同第５，５００，３６０号、及び同第５，８４６，７９５号を参照。
【００５４】
本発明の特定の実施形態において、トランスジェニック又は非トランスジェニックの芽が発現システムとして使用される。米国特許出願公開第２００４００９３６４３号及び、２００５年２月１１日に提出された米国特許出願第６０／６５２，１８６号、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ Ｓｐｒｏｕｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ」Ｅｎｓｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．、参照。本発明の特定の実施形態において、クローン根又はその他のクローン株が用いられる。例えば、２００５年２月１８日に提出された米国特許出願第１１／０６１，９８０号、「ＳＹＳＴＥＭＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＳ ＦＯＲ ＣＬＯＮＡＬ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＩＮ ＰＬＡＮＴＳ」参照。その他の特許出願には、対象のポリヌクレオチドを発現するための関連情報を含む。米国特許出願公開第２００５００２６２９１号、同第２００５０１１４９２０号、国際公開第ＷＯ２００５０２６３７５号、同第ＷＯ００４６３５０号、同第ＷＯ００２５５７４号、同第ＷＯ２００５０４９８３９号、及び米国特許第６４４８０７０号を参照されたい。
【００５５】
本発明は、抗体の軽鎖又は重鎖をコードする核酸の発現を明確に意図し、該核酸は、本セクションで列挙される特許出願及び刊行物の任意のものに記載の、又はそれを参照する発現系及び方法を用いて、本明細書中で開示される方法及び／又はプライマーを用いて単離される。本明細書中に記載の任意の具体的な植物、植物ウィルス、植物ウィルスレプリコン等が使用可能である。いくつかの実施形態において、ウィルスレプリコンは、植物細胞中で複製され得る十分な配列要素を含み、所望により、トランス植物（例えば、植物がトランスジェニックであるか、又はＲＮＡポリメラーゼを発現した別のベクターを含んでなる）により供給されるＲＮＡポリメラーゼ等の要素を利用することができる。レプリコンは、コートタンパク質遺伝子又は移動タンパク質遺伝子を含む場合があり、又は含まない場合がある。植物ウィルス又はレプリコンを植物又は植物細胞又は植物の部分へと導入するための、任意の特定の方法が使用され得る。例としては、葉等の植物の部分に対する適用、（例えば、葉へとウィルス転写物を導入するための）表皮剥離、アグロインフィルトレーション、アグロバクテリウムが介在する形質転換、微粒子銃等を含む。本発明は、例えば組み換え植物ウィルスベクター又はレプリコン等の、本明細書中で記載する方法に従って単離された核酸を含んでなる、任意の植物ウィルスベクター又はレプリコンを包含し、さらに、ベクターを含んでなる植物、植物の一部、又は植物由来のクローン培養物を包含する。本発明はさらに、そのゲノムが核酸を含んでなるトランスジェニック植物を包含する。
【００５６】
本発明のいくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列は、それらの鎖が互いに会合して、回収前に完全な抗体を形成するように共発現される。
【００５７】
本発明の方法に従って産生される抗体鎖又は抗体を回収するために、及び、所望により精製するために、任意の好適な方法を用いることができる。
【００５８】
勿論、抗体の重鎖又は軽鎖は、化学的に合成することもできる。重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を調べれば、アミノ酸配列が得られる。
【００５９】
本発明の任意のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて単離された抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸は、各種の方法により修飾することができる。例えば、真核細胞中で別途生じるグリコシル化事象や、又はその他の翻訳後工程を行わせないために、修飾を行う場合がある。例えば、グリコシル化されたアミノ酸、又はアジュバント、又は近傍の部位を変化させる変異を作製することができる。当技術分野でよく知られるように、Ａｓｎ−Ｘ−（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）は、グリコシル化機構に連結された、真核生物のＮ−結合グリコシル化により認識される配列である。就職される特定の部位は、使用される発現系中で見られる特定のグリコシル化の機構を考慮して選択され得る。それはポリペプチドタグ（すなわち、精製を助けるための）や、特定のオルガネラ等に対する抗体鎖を標的化する配列をコードする部分を含むように改変される場合がある。本発明の範囲内で、抗体の特異的抗原結合特性に干渉することなく、広範な変化を利用することができる。特定の実施形態において、変化は、天然の抗体の配列と少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一である。
【００６０】
本発明の方法に従って産生される抗体は、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ（一本鎖可変）等の抗体断片、又は、抗原結合部位を保持するその他の断片であり得る。断片は、その断片のみを核酸のみが発現されるように発現される場合もあれば、又は、開裂又は消化等の公知の手法を用い、完全な抗体を処理して断片を産生させる場合もある。
【００６１】
ベクター
上述のように、本発明のプライマー及び方法を用いて単離されたｃＤＮＡを、広範なベクターへと挿入し、広範な細胞タイプ及び発現系にて発現させることができる。本発明は、制限部位を含んでなる本発明のプライマーを用いて単離された、核酸を挿入するために好適な、さらなるベクターを提供する。ベクターは、プライマー中に存在するのと同様の制限部位を含む。制限部位は、ベクター中の１以上の位置に存在する。いくつかの実施形態において、ベクター中の望まない位置に存在する制限部位は、例えば、部位指定変異を用いて除去される。いくつかの実施形態において、制限部位とはＳｆｉＩのための制限部位である。
【００６２】
本発明の具体的実施形態において、アグロバクテリウムに介在される形質転換のために好適なバイナリーベクターであるｐＢＩ１２１の修飾型が提供され、そこでは、１１０３１の位置の内部ＳｆｉＩ部位が変異されて、１以上の新たなＳｆｉＩのための部位が作られている。手短に言えば、ｐＢＩ１２１はネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子及びα−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）遺伝子を担持する（Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ， ６：３９０１−３９０７，１９８７）。ネオマイシンネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子は、ノパリンシンターゼ（ｎｏｓ）プロモーター及び、ポリアデニル化シグナルを与えるノパリンシンターゼ（ｎｏｓ）由来のターミネーターの制御下にある。このネオマイシンネオマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＮＰＴＩＩ）遺伝子は、カナマイシン耐性を付与する。α−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）遺伝子活性は、カリフラワーモザイクウィルスの３５Ｓプロモーター及び、ポリアデニル化シグナルを与えるノパリンシンターゼ（ｎｏｓ）由来のターミネーターの制御下にある。本発明は、本来のＳｆｉＩ部が変異されて２つの新たな位ＳｆｉＩ部位が導入され、抗体重鎖又は抗体軽鎖等をコードする異種核酸の簡便な挿入を可能にするためのｐＢＩ１２１の修飾型を提供する。
【００６３】
キット
本発明は、表１に列挙された１以上のオリゴヌクレオチドを含んでなるキットを提供する。好ましくは、キットは、少なくとも２つのオリゴヌクレオチドを含む。具体的実施形態において、キットは、少なくとも３〜４４の間の任意の数のオリゴヌクレオチドを含む。通常、キットは、例えばγ重鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチドを含み、及び／又は、例えばλ軽鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、キットは、γ重鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチド、κ軽鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチド、及び、λ軽鎖をコードする核酸を増幅するために好適な一対又はセットのオリゴヌクレオチドを含む。上述の任意の対又はセットのオリゴヌクレオチドがキット中に含まれ得る。キットは、通常、ハイブリドーマ等の細胞又は細胞株から抗体の１以上の鎖をコードする核酸を単離するためのキットの使用に関する説明書を含む。
【００６４】
１以上のオリゴヌクレオチドに加えて、キットは、任意の数の付加的な試薬をさらに含んでもよい。例えば、キットは、ＲＴ−ＰＣＲ反応等のＰＣＲ反応を行うための試薬を含み得る。キットは、従って、例えば、逆転写酵素、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ヌクレオチド類、緩衝液等を含み得る。キットは、ハイブリドーマ又はその他の細胞性のＲＮＡ供給源からＲＮＡを精製するための試薬を含み得る。
【００６５】
キットは、キットを用いて増幅した核酸をその中へと挿入し得る１以上のベクターを含んでも良い。ベクターは、例えば、植物細胞、細菌細胞、真菌細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞等の細胞中での発現を充分に方向付けるためのプロモーター等の調節エレメントを含む発現ベクターであり得る。広範な発現ベクターが当技術分野で入手可能であり、これらの任意のものをキット中に含むことが可能である。一実施形態において、ベクターは、アグロバクテリウムにより介在される形質転換にとって好適なバイナリーベクターである。
【００６６】
ベクターは、制限酵素によるベクターの開裂が「付着末端」をもたらすように、すなわち、キット中に存在する１以上のオリゴヌクレオチドプライマー中に存在する制限部位へとハイブリダイズするように、１以上の便利な制限部位を含み得る。いくつかの実施形態において、ベクターは、８ヌクレオチド認識部位を認識する酵素に対する１以上の制限部位を含む。この８ヌクレオチドは、連続的である場合もあり、又は、認識にとってその間隔が必須ではあるが、特異的には認識されない１以上のその他のヌクレオチド（例えば、１〜１０ヌクレオチド）に分離されている場合もある。例えば、特定の実施形態において、酵素は、ＸＸＸＸＮＮＮＮＮＸＸＸＸの内部を、Ｎが任意のヌクレオチドを表し、かつＸが任意の特異的ヌクレオチド（すなわち、それぞれのＸは独立に選択される）を表す位置で切断する。このような部位は、挿入部の５’−及び３’−末端に５ヌクレオチドの異なる配列を有する配列を、ただ一種の酵素のみを用いて指定的にクローニングすることを可能にするために都合がよいものであり得る。いくつかの実施形態において、ベクターは、部位ＧＧＣＣＮＮＮＮＮＧＧＣＣの内部を切断する、ＳｆｉＩに対する１以上の制限部位を含む。ベクターは、直鎖状又は環状の形態で提供され得る。ベクターを開裂させるための制限酵素もまた提供される。例えば、リガーゼ、リガーゼ緩衝液等の、連結を行うための試薬が含まれ得る。
【００６７】
例えば、バーコード、高周波ＩＤタグ等の識別子が、キット中に又はキット上に存在し得る。識別子は、例えば、品質管理、在庫管理、追跡、ワークステーション間における移動等の目的のための個別識別を行うために使用され得る。
【００６８】
キットは、通常、特定の個々の試薬を別々に収納するための１以上の管又は容器を含む。キットは、また、市販するために、個々の容器を、例えば、プラスチック製の箱等の比較的厳重に管理された容器の中に収納するための手段をも含み、説明書、発泡スチレン等の包装資材等が同梱される場合もある。
【００６９】
炭疽病抗原に対するヒトモノクローナル抗体をコードするヌクレオチド配列及び、単離された重鎖及び軽鎖
実施例１中により詳細に記載するように、表１に列挙されたプライマーを、２つの異なるヒトモノクローナル抗体（ｈｕＭＡｂ）のγ重鎖及びκ軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列を単離するために使用した。これらのｃＤＮＡの単離は、本発明のオリゴヌクレオチドプライマーの使用の例である。１つのｈｕＭＡｂは、ＰＡ−１と称するＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原（ＰＡ）ポリペプチドのドメイン４に対し特異的に結合する。他方のｈｕＭＡｂは、ＬＦ−１と称するＢａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子（ＬＦ）ポリペプチドに対し特異的に結合する。Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓは、炭疽病の原因病原体である。病原細菌及び免疫応答におけるＰＡ及びＬＦの役割は当技術分野においてよく知られている。炭疽病のワクチン接種を受けた個体から得たリンパ球をミエローマ細胞と融合し、標準的な方法を用いてＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓに対する特異的な抗体をスクリーニングすることにより、ハイブリドーマ細胞株からｃＤＮＡ配列を単離した。
【００７０】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂのκ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号４５）、ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂのγ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号４７）、ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂのκ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号４９）、又はＬＦ−１ ｈｕＭＡｂのγ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列（配列番号５１）を含んでなる単離された核酸が提供される。本発明はまた、ＴがＵに置換された、相当するＲＮＡ配列をも提供する。
【００７１】
本発明はまた、配列番号４５、４７、４９又は５１の任意のものによりコードされる単離されたポリペプチドを提供する。これらのポリペプチドのアミノ酸配列を、配列番号４６、４８、５０及び５２中に説明する。本発明はまた、配列番号４６、４８、５０及び５２のポリペプチドに対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又はそれ以上の同一性を有する単離されたポリペプチド提供する。本発明はまた、配列番号４５、４７、４９又は５１の１以上がハイブリドーマ又はヒト以外の発現システム中で発現される抗体組成物をも提供する。
【００７２】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：５’−
ＡＴＧＧＡＡＧＣＣＣＣＡＧＣＧＣＡＧＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＴＣＣＴＧＣＴＡＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＡＴＡＣＣＡＣＣＧＧＡＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＣＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＴＡＡＣＴＣＡＣＣＧＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ−３’ （配列番号４５）
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のアミノ酸配列：
【００７３】
【化１】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号４６のアミノ酸残基５０〜６１（ＰＡ−ｌＣＤＲ１）、アミノ酸残基７７〜８３（ＰＡ−ｌＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１１６〜１２４（ＰＡ−ｌＣＤＲ３）に相当する。単離されたＣＤＲ配列の各々は以下：
ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）
ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）
ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）
からなる。
【００７４】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：５’−
ＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＴＣＴＴＴＴＴＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＣＣＣＡＣＴＣＣＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＴＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＡＧＣＡＡＴＧＣＴＡＴＡＣＡＡＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＴＴＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＧＧＴＧＧＣＧＡＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＡＡＡＴＡＴＴＣＡＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＴＡＧＴＡＧＧＧＡＣＡＴＡＴＣＣＧＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＣＡＴＣＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＡＧＧＧＧＧＧＴＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ−３’ （配列番号４７）
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のアミノ酸配列：
【００７５】
【化２】
ＰＡ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号４８のアミノ酸残基５１〜６０（ＰＡ−ｈＣＤＲ１）、アミノ酸残基７５〜９０（ＰＡ−ｈＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１２４〜１３３（ＰＡ−ｈＣＤＲ３）に相当する。
ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）
ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）
ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００７６】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００７７】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。
【００７８】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００７９】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００８０】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）；（ｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）；（ｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合し得る。
【００８１】
特定の実施形態において、ＰＡ−１抗体の機能的断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２又はｓｃＦＶ機能的断片のうち任意の１つである。
【００８２】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：
ＡＴＧＴＴＧＣＣＡＴＣＡＣＡＡＣＴＣＡＴＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＧＧＧＴＧＡＡＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＴＴＣＡＧＴＣＴＧＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＣＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＧＴＴＧＧＴＡＧＴＡＧＣＴＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＡＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＴＣＣＴＴＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＣＴＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＴＣＡＧＡＧＴＡＧＴＡＧＴＴＴＡＣＣＴＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ （配列番号４９）
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のアミノ酸配列：
【００８３】
【化３】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ κ軽鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号５０のアミノ酸残基５１〜６０（ＬＦ−ｌＣＤＲ１）、アミノ酸残基７５〜９０（ＬＦ−ｌＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１２４〜１３３（ＬＦ−ｌＣＤＲ３）に相当する。単離されたＣＤＲ配列の各々は以下：
ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）
ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）
ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）
からなる。
【００８４】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖ｃＤＮＡのＤＮＡ配列：
ＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＧＧＣＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＣＴＡＴＴＴＴＡＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＴＧＴＴＴＡＧＣＡＧＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＧＧＡＡＴＴＡＧＴＧＧＴＡＧＣＧＧＴＧＧＴＡＣＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＡＡＧＡＴＧＧＧＧＴＡＴＡＴＧＧＣＣＧＡＣＴＧＧＧＧＧＧＴＴＣＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＧＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ （配列番号５１）
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のアミノ酸配列：
【００８５】
【化４−１】
【００８６】
【化４−２】
ＬＦ−１ ｈｕＭＡｂ γ重鎖のＣＤＲ配列を太字で示し、配列番号４８のアミノ酸残基５１〜６０（ＬＦ−ｈＣＤＲ１）、アミノ酸残基７５〜９０（ＬＦ−ｈＣＤＲ２）、及びアミノ酸残基１２４〜１３３（ＬＦ−ｈＣＤＲ３）に相当する。
ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）
ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）
ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００８７】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３から選択される３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００８８】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び（ｉｉｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。
【００８９】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、から選択される１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、から選択される２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、この抗体又はその機能的断片はＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００９０】
特定の実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）から選択される１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）から選択される２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。前述の抗体又は断片配列をコードする核酸組成物がさらに提供される。
【００９１】
ある実施形態において、単離された抗体又はその機能的な断片が提供され、前記抗体は、（ｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）；（ｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）；及び（ｉｉｉ）軽鎖ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）、からなる３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び、（ｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）；（ｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；及び（ｉｉｉ）重鎖ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）からなる３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでなり、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの致死因子に対し特異的に結合し得る。
【００９２】
特定の実施形態において、ＬＦ−１抗体の機能的断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２又はｓｃＦＶ機能的断片のうち任意の１つである。
【００９３】
抗体組成物及び送達ビヒクル及び方法
本発明は本発明の方法に従って調製した１以上の抗体を含んでなる抗体組成物を提供する。「抗体組成物」とは、１以上の抗体又はその機能的断片、及び、場合により、抗体精製プロセス中に除去されない産生システムの任意の成分を含んでなる組成物のことをいう。したがって、選択した発現系、例えば植物に基づく発現系、において本発明のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、単離されたｃＤＮＡを発現させることにより調製した抗体又はその機能的断片を含む第１の抗体組成物は、異なる発現系を用いて調製した、同じ抗体を含む第２の抗体組成物とは同一でない場合があることが理解されるであろう。例えば、組織培養として維持されたハイブリドーマにより産生された抗体を含んでなる抗体組成物は、組織培養培地中に見られる残りの成分を含み得るのに対して、植物に基づく発現系を用いて産生した抗体は通常これらの成分を含まない。したがって、特定の実施形態において、本発明の抗体組成物は、同じ抗体を含む他の抗体組成物と識別可能である。
【００９４】
いくつかの実施形態において、本発明の方法に従って調製した１以上の抗体は、診断及び／又は治療目的のために、対象への投与に適した医薬組成物として提供される。この場合、「治療目的」は、予防目的（すなわち、疾患又は症状の任意の徴候又は症状が生じる前の投与）及び治療目的（すなわち、疾患又は症状の１以上の徴候又は症状が生じた後の投与）を含むものとして理解される。本発明の抗体は、限定することなく、診断的に、予防的に、及び／又は、感染性疾患（例えば、細菌性、ウィルス性、真菌性、又は寄生虫疾患）、癌（この用語は、上皮性悪性腫瘍、非上皮性悪性腫瘍、リンパ腫、白血病、骨髄異形成症候群、良性腫瘍等を包含する）、炎症性症状、望ましくない血管新生により特徴付けられる疾患、移植拒絶、対宿主性移植片疾患等の治療のために使用することができる。本発明の抗体のその他の用途には、癌細胞、リンパ細胞等の望ましくない細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏにおける免疫涸渇が含まれる。抗体は、その他の物質（例えば、診断的又は治療的物質）を、抗体によって認識される抗原が発現される体内のある部位を標的とするためにも使用することができる。
【００９５】
好適な調製物、例えば、実質的に純粋な抗体調製物は、適当な医薬組成物を製造するために、薬学的許容可能な担体、希釈剤、溶媒等と組み合わせてもよい。本発明は、従って、（ｉ）抗体；及び（ｉｉ）薬学的許容可能な担体、アジュバント、又はビヒクルを含んでなる、対象へ投与するための、様々な薬学的許容可能な組成物を提供する。対象へ投与する場合、本発明の医薬組成物は、好ましくは、投与される治療又は予防の疾患又は症状を治療又は予防するために十分な時間及び量で投与されることを理解すべきである。
【００９６】
本発明の各種実施形態において、有効量の医薬組成物は、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、吸入による、カテーテルによる、眼内、経口、経直腸、皮内、皮膚への適用による等を含む任意の好適な投与経路により対象に投与される。
【００９７】
本発明の組成物は、限定するものではないが、非経口、経口、肺への吸入による、経鼻、経気管支、眼科的、経皮（局所）、経粘膜、経直腸、及び経膣経路等の任意の利用可能な経路による送達のために製剤化することができる。本明細書において使用する場合、用語「非経口」には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、髄腔内、肝内、病変内及び頭蓋内への注射又は注入技法が含まれる。
【００９８】
用語「薬学的許容可能な担体、アジュバント、又はビヒクル」とは、共に製剤化する化合物の薬理活性を損なわない非毒性の担体、アジュバント、又はビヒクルのことをいう。本発明の組成物において使用され得る薬学的許容可能な担体、アジュバント、又はビヒクルとしては、限定するものではないが、イオン交換物質、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質、リン酸塩等のバッファー物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸のグリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩等の塩又は電解質、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。薬学的投与に適合し得る、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌物質及び抗真菌物質、等張剤及び吸収遅延剤等を含んでもよい。補助活性化合物、例えば、治療する疾患又は臨床症状に対して独立して活性である化合物、又は化合物の活性を促進する化合物も組成物中に組み入れることができる。
【００９９】
本発明の化合物の薬学的許容可能な塩には、薬学的許容可能な無機及び有機酸及び塩基に由来するものが含まれる。好適な塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンフル酸塩、カンフルスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミサルフェート、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、２−ヒドロキシエタンスルホネート、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモエート、ペクチネート、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアネート、トシル酸塩及びウンデカン酸塩が挙げられる。シュウ酸等のその他の酸は、それ自体は薬学的許容可能ではないが、本発明の化合物及びそれらの薬学的許容可能な酸付加塩を取得する際の中間体として有用な塩の調製に使用することができる。
【０１００】
適当な塩基に由来する塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウム及びＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。本発明は、本明細書において開示される任意の塩基性窒素含有化合物群の４級化も想定している。水又は油溶解性又は分散性生成物はかかる４級化によって得ることができる。
【０１０１】
医薬組成物は、その意図する投与経路と適合するように製剤化される。非経口（例えば、静脈内）、筋肉内、皮内、又は皮下への適用のために使用される溶液又は懸濁液は以下の成分を含んでもよい：注射用水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又はその他の合成溶媒等の無菌希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベン等の抗菌剤；アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム等の抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸等のキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等のバッファー並びに塩化ナトリウム又はデキストロース等の等張性を調節するための物質。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウム等の酸又は塩基を用いて調整することができる。非経口調製物には、アンプル、使い捨て型シリンジ、又はガラスもしくはプラスチックから作られたマルチ用量バイアルが包含され得る。
【０１０２】
注射用途に適した医薬組成物としては、通常、無菌注射溶液又は分散液の即時調製のための水溶液（水溶性の場合）又は分散液及び無菌粉末が挙げられる。静脈内投与のための好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、リンゲル溶液等が挙げられる。
【０１０３】
無菌の不揮発性油が通常、溶媒又は懸濁媒体として使用される。この目的のために、合成モノ又はジグリセリドを含む任意のブランドの不揮発性油を使用することができる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体等の脂肪酸は、オリーブ油又はヒマシ油等の油は特にそのポリオキシエチル化された状態で天然の薬学的許容可能であるので、注射用物質の調製において有用である。これらの油溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又はカルボキシメチルセルロース等の分散剤又はエマルジョン及び懸濁液を含む薬学的許容可能な剤形の製剤化において通常使用される同様の分散剤も含んでよい。Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ等の一般的に使用されているその他の界面活性剤及びその他の乳化剤又は薬学的許容可能な固体、液体、又はその他の剤形の製造に通常使用し得る生物学的活性促進剤もまた、製剤化の目的のために使用することができる。
【０１０４】
全ての場合において、組成物は無菌である必要があり、可能であれば、簡便な注射操作性となりうるように液体であるべきである。
【０１０５】
好ましい医薬製剤は、製造及び保存条件下で安定であり、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用に対抗して保存されなければならない。一般的に、関連する担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）を含む溶媒又は分散媒、及び好適なそれらの混合物であることができる。適当な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング剤の使用により、分散させる場合に必要とされる粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により、維持することができる。微生物の作用の抑制は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等の各種抗菌剤及び抗真菌剤によって達成することができる。多くの場合において、組成物中に、例えば、糖類、マニトール等の多価アルコール、ソルビトール、塩化ナトリウム等の等張剤を含有するのが好ましい。注射可能な組成物の持続吸収は、組成物中に吸収を遅延させる物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含有させることによりもたらすことができる。経口用組成物の持続吸収は、カプセル化等の各種手段により達成することができる。
【０１０６】
無菌の注射可能な溶液は、必要とされる量で活性化合物を上記列挙した成分の１つ又は組み合わせの適当な溶媒中に含有させ、必要であれば、次に滅菌濾過することにより、調製することができる。好ましくは注射のための溶液はエンドトキシンを含んでいない。通常、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒体と上記列挙したものから必要とされるその他の成分を含む無菌ビヒクル中に含有させることにより調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥であり、これにより活性成分の粉末と、従前にその滅菌濾過した溶液からの任意のさらなる所望の成分が得られる。
【０１０７】
経口用組成物は、通常、不活性希釈剤又は可食担体を含む。経口治療投与の目的のために、活性化合物は賦形剤と共に含有させることができ、錠剤、トローチ、又はゼラチンカプセル等のカプセルの形態で使用することができる。経口用組成物は、うがい薬として使用するために液体担体を用いて調製することもできる。薬学的に適合可能な結合剤及び／又はアジュバント物質は組成物の一部として含有させることができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチ等は任意の以下の成分又は同様の特性の化合物を含むことができる：微晶質セルロース、トラガカントガム又はゼラチン等の結合剤；デンプン又は乳糖等の賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、又はトウモロコシデンプン等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はＳｔｅｒｏｔｅｓ等の潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素等の流動促進剤；ショ糖又はサッカリン等の甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチルもしくはオレンジ香料等の香味剤。経口送達のための製剤は、有利には、消化管内において安定性を向上させるため及び／又は吸収を促進させるための物質を含んでもよい。
【０１０８】
吸入による投与のために、本発明の組成物は、好ましくは、好適な噴射剤、例えば、二酸化炭素等の気体、を含む加圧容器又は投薬装置又はネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で送達される。液体又は乾燥エアロゾル（例えば、ドライパウダー、大きな多孔質粒子等）を使用してもよい。本発明は鼻腔用スプレーを用いた組成物の送達も意図する。
【０１０９】
局所投与のために、薬学的許容可能な組成物は、１以上の担体中に懸濁させた又は溶解させた活性成分を含む適当な軟膏として製剤化することもできる。本発明の化合物の局所投与のための担体としては、限定するものではないが、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ろう及び水が挙げられる。あるいは、薬学的許容可能な組成物は、１以上の薬学的許容可能な担体中に懸濁させた又は溶解させた活性成分を含む適当なローション又はクリームとして製剤化することができる。好適な担体としては、限定するものではないが、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルろう、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水が挙げられる。
【０１１０】
眼への局所送達のために、薬学的許容可能な組成物は、等張性のｐＨ調整した無菌食塩水中の微小懸濁液として、又は、好ましくは、塩化ベンジルアルコニウム等の保存剤を含有していようがいまいと、等張性のｐＨ調整した無菌食塩水中の溶液として製剤化することができる。あるいは、眼への使用のために、薬学的許容可能な組成物は、ワセリン等の軟膏として製剤化することができる。
【０１１１】
本発明の薬学的許容可能な組成物は、鼻腔用エアロゾル又は吸入により投与することもできる。かかる組成物は、医薬製剤化の技術分野における周知の技法に従って調製され、ベンジルアルコール又はその他の好適な保存剤、バイオアベイラビリティーを増大させるための吸収促進剤、フルオロカーボン及び／又はその他の通常の可溶化剤又は分散剤を用いて、食塩水中の溶液として調製することができる。
【０１１２】
全身投与は、経粘膜的又は経皮的手段であってもよい。経粘膜又は経皮投与のために、バリアを通過するのに適当な浸透剤が製剤中で使用される。かかる浸透剤は通常、当技術分野において公知であり、経粘膜投与のためには、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻腔内スプレー又は座薬の使用により達成することができる。経皮投与のためには、抗体が、通常公知である、軟膏、サルベ、ゲル又はクリームの形態に製剤化される。
【０１１３】
抗体組成物は、（例えば、ココアバター等の従来の座薬基剤及びその他のグリセリド類と共に）座薬又は直腸送達のために滞留型浣腸の形態で調製することもできる。
【０１１４】
上記物質に加えて、本発明の特定の実施形態において、抗体組成物は、身体からの迅速な排除に対して抗体を保護し得る担体と共に調製される。例えば、移植及び微小カプセル化送達システムを含む、放出制御製剤である。エチレンビニルアセテート、多価無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリエーテル及びポリ乳酸等の生物分解性、生物適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の調製方法は当業者に明らかである。特定の物質は、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から購入することもできる。リポソーム懸濁物も薬学的許容可能な担体として使用することができる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号及び本明細書中に記載されるその他の参考文献に記載されるような、当業者に公知の方法にしたがって調製することができる。標的化リポソーム（例えば、抗体標的化リポソーム）を含むリポソーム及びＰＥＧ化リポソームについて記載されている（Ｈａｎｓｅｎ ＣＢ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１２３９（２）：１３３−４４，１９９５；Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ ＶＰ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１５１１（２）：３９７−４１１，２００１；Ｉｓｈｉｄａ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４６０（１）：１２９−３３，１９９９）。当業者であれば、放出制御製剤、移植物等の調製のために選択される材料及び方法においては抗体の活性を維持すべきであることを理解するであろう。例えば、変性及び活性の喪失につながり得る、抗体等のポリペプチドを過剰に加熱することは避けるのが望ましい。
【０１１５】
投与の簡便性及び用量の均一性のためには、経口用組成物又は非経口用組成物を単位投与形態で製剤化することが通常は有利である。本明細書において使用する場合、単位投与形態とは、治療する対象に対して単位用量を最適化した物理的に分離した単位のことをいい；各単位は必要とされる医薬担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の抗体を含む。
【０１１６】
かかる組成物の毒性及び治療効力は、例えば、ＬＤ５０（全集団の５０％が死に至る用量）及びＥＤ５０（全集団の５０％において治療的に有効である用量）を、細胞培養又は実験動物における標準的薬学的方法によって調べることができる。毒性と治療効果との用量比が治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表し得る。高い治療指数を示す組成物が好ましい。毒性副作用を示す組成物は使用され得るが、感染していない細胞への潜在的な被害を最小にし、それにより副作用を減少させるために、影響を受ける組織部位に対してかかる組成物が標的とする送達システムを設計することに注意すべきである。
【０１１７】
細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータは、ヒトでの使用のために用量範囲を決定する際に使用することができる。用量は好ましくは、毒性をほとんど示さないか又は全く示さずに、ＥＤ５０を含む循環濃度範囲にある。用量は、使用される剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲で変動し得る。本発明の方法において使用される任意の抗体又はその他の化合物について、治療的有効な用量は、最初は細胞培養アッセイから計算し得る。動物モデルにおいては、細胞培養において決定されたＥＤ５０を含む循環血漿濃度範囲を達成するように、用量を決定し得る。かかる情報を用いることにより、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中レベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。
【０１１８】
医薬組成物の治療的有効量は、通常、約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１〜２５ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、さらにより好ましくは約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、２〜９ｍｇ／ｋｇ、３〜８ｍｇ／ｋｇ体重、４〜７ｍｇ／ｋｇ、又は５〜６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。医薬組成物は、様々な間隔、及び、必要とされる様々な期間に亘り、例えば、１日あたり複数回、毎日、１日置き、約１〜１０週間に亘り、２〜８週間に亘り、約３〜７週間に亘り、約４、５、又は６週間、１週間に１回等で投与することができる。対象を有効に治療するために必要とされる用量及び時間に、限定するものでないが、疾患又は障害の重篤度、従前の治療、対象の全体的な健康及び／又は年齢、並びに罹患しているその他の疾患等の特定の要素が影響を及ぼし得ることは、当業者であれば理解するであろう。通常、本発明の組成物による対象の治療には、単回治療が含まれ、多くの場合では、一連の治療を含み得る。一定の範囲の異なる用量の組み合わせ（すなわち、ある用量の２以上の抗体又は１以上の抗体と１以上の付加的活性物質）を使用することができる。
【０１１９】
例示的用量には、対象又はサンプル体重１キログラムあたりミリグラム又はマイクログラム量の抗体を含む（例えば、１キログラムあたり約１マイクログラム〜１キログラムあたり約５００ミリグラム、１キログラムあたり約１００マイクログラム〜１キログラムあたり約５ミリグラム、又は１キログラムあたり約１マイクログラム〜１キログラムあたり約５０マイクログラム）。局所投与（例えば、鼻腔内）に対しては、これらよりもずっと少ない用量が使用され得る。適当な用量は薬剤の効力に依存し、例えば、予め選択された所望の反応が得られるまで用量を増大させて投与することにより、特定の受容者に対して任意に対応し得ることがさらに理解される。任意の特定の対象に対する特定の用量レベルは、使用される具体的な化合物、対象の年齢、体重、全体的健康、性別及び食事、投与時間、投与経路、排泄速度、任意の薬物との組み合わせ、並びに変調し得る発現又は活性の程度等の様々な因子に依存し得ることが理解される。
【０１２０】
本発明はさらに、２又はそれ以上の本発明の抗体及び、所望により１以上の付加的な活性薬剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【実施例】
【０１２１】
以下の実施例は、Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓのＰＡ又はＬＦタンパク質に対し特異的に結合する抗体を産生するヒトハイブリドーマ細胞株からｃＤＮＡをクローニングしたことを記載する。ＰＡ（本明細書中でＰＡとする）又はＬＦ（本明細書中でＬＦとする）を特異的に認識するモノクローナル抗体のヒト重鎖及び軽鎖に関するｃＤＮＡを、ライセンスされた炭疽病ワクチンを用いて免疫したヒト患者から単離した細胞から作製したハイブリドーマ細胞より単離した。
【０１２２】
実施例１：ヒトモノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡの、ハイブリドーマからの単離
この実施例は、ヒトモノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡを単離するための、表１中に列挙された特定のオリゴヌクレオチドプライマーの使用について記載する。全てのキットは、製造者の説明書に従って使用した。
【０１２３】
ハイブリドーマ細胞株からのＲＮＡ精製
１０５個の細胞の任意の所定のハイブリドーマ細胞株から、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて総ＲＮＡを精製した。ＲＮＡを５０μｌの水中に溶出し（収率未計算）、５μｌを各ＲＴ−ＰＣＲ反応に使用した。
【０１２４】
逆転写ＰＣＲ
ＲＴ−ＰＣＲに使用するプライマーを表１中に列挙する。Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ＲＴ−ＰＣＲ ｗｉｔｈ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｔａｑ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。任意の所定の重鎖又は軽鎖配列中の可能性を有する全ての可変領域を効果的に標的化するために、各ＲＴ−ＰＣＲ反応のためのプライマーの組み合わせを使用し、各抗体遺伝子を増幅するためにいくつかのＲＴ−ＰＣＲ反応を同時に行った。
【０１２５】
重鎖については、各２μＭのプライマーであるＶＧ１＋７短、ＶＧ２短、及びＶＧ３短を２μＭの不変γ短（ＣＧ短）プライマーと１反応で組み合わせ、各２μＭのプライマーであるＶＧ４−短、ＶＧ５−短、及びＶＧ６−短を各２μＭの不変γ短（ＣＧ−短）プライマーと第２の反応で組み合わせた。任意の産物を次いでＱｉａｅｘ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製し、その産物が第１の反応から生じる場合には、２μＭのプライマーＣＧと組み合わせた各２μＭのプライマーＶＧ１、ＶＧ２、及びＶＧ３により再増幅し、又は、その産物が第２のＲＴ−ＰＣＲ反応から生じる場合には、Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、２μＭのプライマーＣＧと組み合わせた各２μＭのプライマーＶＧ４、ＶＧ５、及びＶＧ６により再増幅し、異なる５’及び３’Ｓｆｉ Ｉ制限部位を導入した。
【０１２６】
軽鎖については、産物の迅速なクローニングのために、ＲＴ−ＰＣＲ産物の収量は常に十分なものとし、すなわち、短プライマーを用いた最初のＲＴ−ＰＣＲ反応の必要性をなくすようにした。代わりに、各２μＭの３つの可変領域プライマーを２μＭの定常領域プライマー（表１）と組み合わせて、λに関する３つの別々の反応及びκ軽鎖に関する２つの別々の反応を引き起こした。具体的には、反応は２つ又は３つの以下の可変プライマー：
ＣＫ ＋ ＶＫ１， ２＋１．８及び３
ＣＫ ＋ ＶＫ ４及び５
ＣＬ ＋ ＶＬ１， ２及び３
ＣＬ ＋ ＶＬ４， ５及び６＋９
ＣＬ ＋ ＶＬ７及び１０＋８、を含むものとした。
その他の組み合わせが使用され得ることが理解されるであろう。
【０１２７】
ＰＣＲサイクリングの条件は、Ｋｒｅｂｂｅｒ，Ａ．，Ｂｏｒｎｈａｕｓｅｒ，Ｓ．，Ｂｕｒｍｅｓｔｅｒ，Ｊ．，Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，Ａ．，Ｗｉｌｌｕｄａ，Ｊ．，Ｂｏｓｓｈａｒｄ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．（１９９７）によるものに適合させた。Ｒｅｌｉａｂｌｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ｆｒｏｍ ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ａｎｄ ｓｐｌｅｅｎ ｃｅｌｌ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ ａ ｒｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｓｙｓｔｅｍ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０１，３５−５５。ＲＴ−ＰＣＲのために、サイクリング条件を以下のようにした：４５℃にて３０分間、９４℃にて２分間：９４℃にて１分間、６３℃にて３０秒間、５８℃にて５０秒間、７２℃にて３分間、の７サイクル：９４℃にて１分間、６３℃にて１分間、及び７２℃にて３分間の３３サイクル、次いで７２℃にて７分間。通常のＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲではない）のためには、４５℃にて３０分間、及び９４℃にて２分間の開始時のステップを除いた。
【０１２８】
増幅産物をバイナリーベクターであるｐＢＩＳｆｉへとクローニングし、その構築を実施例２に記載する。
【０１２９】
実施例２： ｐＢＩＳｆｉベクターの構築
この実施例は、植物中での抗体発現のために使用することを助けるためのバイナリーベクターｐＢＩ１２１の修飾について記載する。最初に、ｐＢＩ１２１ベクターの１１０３１ｂｐの内部Ｓｆｉ Ｉ部位を以下のように変異させた：ベクターをＳｆｉ Ｉで消化し、Ｋｌｅｎｏｗを用いて、得られた一本鎖の突出部を埋め、得られた平滑末端を再度連結した。５’に唯一のＳｆｉ Ｉ部位を作製するために、オリゴヌクレオチドＢａｍＳｆｉ １（５’−ＧＡＴＣＣＧＧＣＣＣＡＧＣＣＧＧＣＣＧ−３’；配列番号５３）及びＢａｍＳｆｉ ２（５’−ＧＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＧＣＣＧ−３’；配列番号５４）を互いにアニールし、（内部Ｓｆｉ Ｉ部位を欠損した）ｐＢＩ１２１ベクターのＢａｍＨ Ｉ部位へと連結した。同様に、オリゴヌクレオチドＳａｃＳｆｉ １（５’−ＧＣＣＴＣＧＧＧＧＧＣＣＧＡＧＣＴ−３’；配列番号５５）及びＳａｃＳｆｉ ２（５’−ＧＣＣＣＣＣＧＡＧＧＣＣＧＡＧＣＴ−３’；配列番号５６）をアニールし、（内部Ｓｆｉ Ｉ部位を欠損した）ｐＢＩ１２１ベクターのＳａｃ Ｉ部位へと連結して、３’に唯一のＳｆｉ Ｉ部位を作製した。
【０１３０】
実施例３： ＰＡ抗体重鎖をコードするｃＤＮＡの変異
ＰＡγ鎖の３１８の位置におけるＮ−グリコシル化部位を変化させるために、製造者の推奨に従ってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ’ｓ ＧｅｎｅＴａｉｌｏｒ ｋｉｔを使用し、ＰＡγ鎖をコードするｃＤＮＡを変異させた。以下の変異プライマーを使用した：５’−ｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃＣＡＡａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔ−３’（配列番号５７）。逆向きプライマーは以下を用いた：ｇｔａｃｔｇｃｔｃｃｔｃｃｃｇｃｇｇｃｔｔｔｇｔｃｔｔｇｇｃａ（配列番号５８）。変異の結果として、ＡＡＣコドンがＣＡＡコドンに置き換えられ、Ａｓｎ→Ｇｌｎの変化がもたらされた。
【０１３１】
実施例４： 植物中でのグリコシル化された及びグリコシル化されなＰＡ抗体の製造
ｐＢＩＳｆｉＩ中の３５Ｓプロモーター下での、軽鎖又は重鎖ｃＤＮＡを担持するアグロバクテリウム培養物の１：１混合物を用いたアグロインフィルトレーション法により、ベンサミアナタバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）植物体の葉から、グリコシル化された及びグリコシル化されないＰＡ抗体（それぞれＰＡ及びＰＡＮＧ）を精製した。抗体をタンパク質Ａ−及びＴ−ゲルクロマトグラフィーを用いて精製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて比較した。図１はゲルのイメージを示し、グリコシル化の欠損によりＰＡＮＧ重鎖の電気泳動移動度に差が出ていること、すなわち、ＰＡＮＧ重鎖が、より軽いＰＡ重鎖よりも早く移動することが明確に示されている。ウェスタンブロット及びＥＬＩＳＡ分析の結果、それぞれＰＡ及びＬＦのためのＰＡ、ＰＡＮＧ及びＬＦ抗体の特異的結合活性が示され、植物中での製造が抗体結合の特異性を損なわないことが示された。
【０１３２】
実施例５： ラットにおける抗ＰＡ及び抗ＬＦヒトモノクローナル抗体の半減期の検討
雄Ｆｉｓｃｈｅｒラットの腹腔内に、植物が産生したＰＡ、植物が産生したＰＡＮＧ、又は、植物が産生したＬＦのいずれかを５０μｇ注射した。注射前、ならびに注射２時間後、１、２、３、４、５、１０、１５及び２０日後に血清サンプルを採取した。血清を、ＰＡ−又はＬＦ−特異的結合ＥＬＩＳＡのいずれかにより分析した。植物が産生したＰＡ及びＰＡＮＧは同様の半減期を示し、一方、ＬＦ抗体は、植物が産生したＰＡ抗体のいずれと比較した時でも、いくらか短い半減期を有していた。
【０１３３】
実施例６： 動物防御試験
Ｂｅｅｄｈａｍ及び同僚らの方法に従い、植物が産生したＰＡの、Ａ／Ｊ マウスをＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓのＳｔｅｒｎｅ株の胞子を用いた攻撃から守るための能力を試験した。５匹のマウスの群に１８０μｇの植物が産生したＰＡ ｍＡｂをＰＢＳ中、腹腔内の経路により投与した。対照マウスにはＰＢＳを与えた。受動免疫２．５時間後に、動物に対し、０．１ｍＬのＰＢＳ中に１×１０４個の胞子（ほぼ３０半数致死投与量）を含むようにＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの胞子を与えた。ｃｈａｌｌｅｎｄに続き、罹患率又は死亡率の徴候に関し、１４日間毎日動物を観察した。植物が産生したｍＡｂを与えた動物では疾患症状が進行せず、健康を維持し、攻撃に対して生存した。一方、対象の動物では疾患が進行し、攻撃後３日以内で死亡した。
【０１３４】
当業者であれば、定型的な実験をこれ以上行うことなく、本明細書中に記載する本発明の具体的実施形態に対する多くの均等物を認識し、又は確認できるであろう。本発明の範囲は上述の記載に限定されることを意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に説明されるようなものであることが意図される。特許請求の範囲の項目において、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」等の語は、それに反する記載がない限り、又は文脈から明らかである場合、１以上を意味する場合がある。グループの中の１又はそれ以上の要素の間に「又は」を含む請求項又は記載は、それに反する記載がない限り、又は文脈から明らかである場合、所定の製品又はプロセス中に存在し、利用され、又は関連する場合、１つの、１つ以上の、又は全ての要素が充足されるものと考えられる。さらに、本発明が、全ての変形、組み合わせ及び置換を包含し、１以上の限定、要素、節、記述的な用語等が、１以上の列挙された請求項から別の請求項へと導入されることが理解されるべきである。具体的には、他の請求項に依存する任意の請求項は、同様の基礎となる請求項に依存する、その他の任意の請求項中に見られる１以上の限定を含むように修飾され得る。さらに、先行技術の範囲内に含まれる本発明の任意の特定の実施形態は、請求項から明確に除外されることが理解される。このような実施形態は、それらが本明細書中で明確に説明されない場合であっても、当業者にとっては知られているものと考えられる。例えば、任意の具体的なオリゴヌクレオチド、ｃＤＮＡ、核酸、又は抗体が請求項から除外され得る。
【図面の簡単な説明】
【０１３５】
【図１】図１は、ＰＡ及びＰＡＮＧ（非グリコシル型）植物産生抗体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示すゲルの写真である。ＩｇＧ標準は精製された総ヒトＩｇＧである。重（Ｈ）鎖及び軽（Ｌ）鎖の位置を矢印で示す。
【図２】図２は、植物によって産生されるＰＡ（ＰＡ）、又はＰＡＮＧ（ＰＡＮＧ）、ＬＦ（ＬＦ）抗体の半減期に関する研究の結果を表すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含む、単離された抗体又はその機能性断片であって、前記抗体又はその機能性断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合することができ、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択される、前記抗体又はその機能的断片。
【請求項２】
（ａ）２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）２又はそれ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合することができる、請求項１記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択される、抗体又はその機能的断片。
【請求項３】
（ａ）３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合することができる、請求項１記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）が、以下：
（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなり、
該（ｂ）が、以下：
（ｉｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる、抗体又はその機能的断片。
【請求項４】
（ａ）１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含む、単離された抗体又はその機能的断片であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ致死因子に対し特異的に結合することができ、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群より選択される、抗体又はその機能的断片。
【請求項５】
（ａ）２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ致死因子に対し特異的に結合することができる、請求項４記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）；に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択される、抗体又はその機能的断片。
【請求項６】
（ａ）３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ致死因子に対し特異的に結合し得る、請求項４記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなり、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる、抗体又はその機能的断片。
【請求項７】
前記機能性断片が、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２及びｓｃＦＶからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体又はその機能性断片。
【請求項８】
請求項１に記載の抗体又は機能性断片をコードする核酸。
【請求項９】
請求項１に記載の抗体又は機能性断片及び薬学的許容可能な担体を含む組成物。
【請求項１０】
前記機能性断片が、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２及びｓｃＦＶからなる群より選択される、請求項４に記載の抗体又はその機能性断片。
【請求項１１】
請求項４に記載の抗体又は機能性断片をコードする核酸。
【請求項１２】
請求項４に記載の抗体又は機能性断片及び薬学的許容可能な担体を含む組成物。
【請求項１３】
配列番号４６、４８、５０、又は５２のいずれかからなるポリペプチド配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
配列番号４６、４８、５０、又は５２のいずれか一つのポリペプチド配列からなる単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
前記ポリペプチドがグリコシル化されていない、請求項１３又は請求項１４に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１３に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項１７】
前記核酸配列が天然の配列でない、請求項１６に記載の単離された核酸。
【請求項１８】
配列が配列番号１〜４４のいずれかからなる、又はいずれかを含む、オリゴヌクレオチドプライマー。
【請求項１９】
請求項１８に記載のオリゴヌクレオチドプライマーを少なくとも２つ含むプライマー混合物。
【請求項２０】
少なくとも２つのプライマーを含み、該少なくとも２つのプライマーが抗体重鎖又は抗体軽鎖を増幅させるための増幅反応において利用される、請求項１９に記載のプライマー混合物。
【請求項２１】
請求項１８に記載のプライマーを用いて、抗体産生細胞又は細胞系から増幅された核酸。
【請求項２２】
請求項２１に記載の核酸を含む、発現ベクター、細胞、トランスジェニック動物、又はトランスジェニック植物。
【請求項２３】
請求項２１に記載の核酸を含む植物ウィルスベクター又はレプリコン。
【請求項２４】
適当な発現系において、請求項２１に記載の核酸を発現させる工程を含む、抗体鎖の産生方法。
【請求項２５】
前記発現系が植物に基づく発現系である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
配列番号１〜４４からなる群より選択される１又はそれ以上のプライマーを用いて、抗体重鎖又は抗体軽鎖を産生する細胞又は細胞系から前記核酸を増幅させる工程を含む、抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸の単離方法。
【請求項２７】
配列番号４５、４７、４９、又は５１のいずれかからなる核酸配列を含む単離された核酸。
【請求項２８】
配列番号４５、４７、４９、又は５１のいずれか一つの核酸配列からなる単離された核酸。
【請求項２９】
請求項２７又は請求項２８に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項３０】
請求項２９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３１】
植物細胞である、請求項３０に記載の宿主細胞。
【請求項３２】
請求項３０又は請求項３１に記載の前記宿主細胞を、抗体産生にとって十分な条件下で培養する工程、及び、産生された抗体を精製する工程を含む、抗体又はその機能性断片の産生方法。
【請求項１】
（ａ）１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含む、単離された抗体又はその機能性断片であって、前記抗体又はその機能性断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合することができ、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択される、前記抗体又はその機能的断片。
【請求項２】
（ａ）２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）２又はそれ以上の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合することができる、請求項１記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択される、抗体又はその機能的断片。
【請求項３】
（ａ）３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓの防御抗原に対し特異的に結合することができる、請求項１記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）が、以下：
（ｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＳＹＳＳＬＡ（配列番号５９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ２：ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号６０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＰＡ−ｌＣＤＲ３：ＱＨＹＧＮＳＰＹＴ（配列番号６１）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなり、
該（ｂ）が、以下：
（ｉｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ１：ＧＹＴＦＴＳＮＡＩＱ（配列番号６２）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＰＡ−ｈＣＤＲ２：ＷＩＮＧＧＤＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧ（配列番号６３）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＰＡ−ｈＣＤＲ３：ＨＲＬＱＲＧＧＦＤＰ（配列番号６４）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる、抗体又はその機能的断片。
【請求項４】
（ａ）１又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）１又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含む、単離された抗体又はその機能的断片であって、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ致死因子に対し特異的に結合することができ、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群より選択される、抗体又はその機能的断片。
【請求項５】
（ａ）２又はそれ以上の軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）２又はそれ以上の重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ致死因子に対し特異的に結合することができる、請求項４記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択され、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）；に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる群から選択される、抗体又はその機能的断片。
【請求項６】
（ａ）３つの軽鎖（ＬＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）；および
（ｂ）３つの重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）、
を含み、前記抗体又はその機能的断片がＢ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ致死因子に対し特異的に結合し得る、請求項４記載の抗体又はその機能的断片であって、
該（ａ）は、以下：
（ｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ１：ＲＡＳＱＳＶＧＳＳＬＨ（配列番号６５）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ２：ＹＡＳＱＳＦＳ（配列番号６６）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｉｉｉ）ＬＦ−ｌＣＤＲ３：ＨＱＳＳＳＬＰＬＴ（配列番号６７）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲ３、
からなり、
該（ｂ）は、以下：
（ｉｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ１：ＧＦＭＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号６８）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＬＦ−ｈＣＤＲ２：ＧＩＳＧＳＧＧＴＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６９）；に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｖｉ）ＬＦ−ｈＣＤＲ３：ＤＧＶＹＧＲＬＧＧＳＤＹ（配列番号７０）に対し、少なくとも９０％の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲ３、
からなる、抗体又はその機能的断片。
【請求項７】
前記機能性断片が、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２及びｓｃＦＶからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体又はその機能性断片。
【請求項８】
請求項１に記載の抗体又は機能性断片をコードする核酸。
【請求項９】
請求項１に記載の抗体又は機能性断片及び薬学的許容可能な担体を含む組成物。
【請求項１０】
前記機能性断片が、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２及びｓｃＦＶからなる群より選択される、請求項４に記載の抗体又はその機能性断片。
【請求項１１】
請求項４に記載の抗体又は機能性断片をコードする核酸。
【請求項１２】
請求項４に記載の抗体又は機能性断片及び薬学的許容可能な担体を含む組成物。
【請求項１３】
配列番号４６、４８、５０、又は５２のいずれかからなるポリペプチド配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
配列番号４６、４８、５０、又は５２のいずれか一つのポリペプチド配列からなる単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
前記ポリペプチドがグリコシル化されていない、請求項１３又は請求項１４に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１３に記載のポリペプチドをコードする単離された核酸。
【請求項１７】
前記核酸配列が天然の配列でない、請求項１６に記載の単離された核酸。
【請求項１８】
配列が配列番号１〜４４のいずれかからなる、又はいずれかを含む、オリゴヌクレオチドプライマー。
【請求項１９】
請求項１８に記載のオリゴヌクレオチドプライマーを少なくとも２つ含むプライマー混合物。
【請求項２０】
少なくとも２つのプライマーを含み、該少なくとも２つのプライマーが抗体重鎖又は抗体軽鎖を増幅させるための増幅反応において利用される、請求項１９に記載のプライマー混合物。
【請求項２１】
請求項１８に記載のプライマーを用いて、抗体産生細胞又は細胞系から増幅された核酸。
【請求項２２】
請求項２１に記載の核酸を含む、発現ベクター、細胞、トランスジェニック動物、又はトランスジェニック植物。
【請求項２３】
請求項２１に記載の核酸を含む植物ウィルスベクター又はレプリコン。
【請求項２４】
適当な発現系において、請求項２１に記載の核酸を発現させる工程を含む、抗体鎖の産生方法。
【請求項２５】
前記発現系が植物に基づく発現系である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
配列番号１〜４４からなる群より選択される１又はそれ以上のプライマーを用いて、抗体重鎖又は抗体軽鎖を産生する細胞又は細胞系から前記核酸を増幅させる工程を含む、抗体重鎖又は抗体軽鎖をコードする核酸の単離方法。
【請求項２７】
配列番号４５、４７、４９、又は５１のいずれかからなる核酸配列を含む単離された核酸。
【請求項２８】
配列番号４５、４７、４９、又は５１のいずれか一つの核酸配列からなる単離された核酸。
【請求項２９】
請求項２７又は請求項２８に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項３０】
請求項２９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項３１】
植物細胞である、請求項３０に記載の宿主細胞。
【請求項３２】
請求項３０又は請求項３１に記載の前記宿主細胞を、抗体産生にとって十分な条件下で培養する工程、及び、産生された抗体を精製する工程を含む、抗体又はその機能性断片の産生方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００９−５０２２０７（Ｐ２００９−５０２２０７Ａ）
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２５２４８（Ｐ２００８−５２５２４８）
【出願日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３０５４５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１７２６４
【国際公開日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【出願人】（５０８０３３５９１）フラウンホーファー ユーエスエー， インコーポレイテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３０５４５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１７２６４
【国際公開日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【出願人】（５０８０３３５９１）フラウンホーファー ユーエスエー， インコーポレイテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
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