サルコイドーシスの治療薬と治療方法
全身性肉芽腫症の一つであるサルコイドーシスの治療薬や、サルコイドーシスの治療方法を提供するものである。塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン等のプロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質を有効成分とするサルコイドーシスの治療薬を調製する。また、このサルコイドーシスの治療薬をサルコイドーシス患者に投与してサルコイドーシスを治療する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質を有効成分とするサルコイドーシスの治療薬や、かかる治療薬をサルコイドーシス患者に投与するサルコイドーシスの治療方法に関する。
【背景技術】
サルコイドーシスは、最も良く知られた、全身性肉芽腫症の一つであるが、多くの集中的な研究にも関わらず、その病因は１００年以上も解明されていない（例えば、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７参照）。肺は、最も一般的に影響をうける臓器であり、肺肉芽腫性炎症は処置されないまま放置されると、ガス交換が妨害され、しばしば回復不能な線維化に陥り、予後不良である。継続した肺の炎症又は線維症を伴う長期的な呼吸障害の発生は、一般の人々に非常に多く見られる。肺は常に病原体を含む風媒性物質にさらされており、多くの研究者が原因となりうる伝播性病原体、及びその肺肉芽腫形成機序への関与を特定すべく研究を続けている（例えば、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ．３１，５４３−５５４，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌｍ．Ｍｅｄ．８，４３５−４４０，２００２参照）。
臨床的及び免疫病理学的類似点のため、最も一般的なマイコバクテリアの感染症である結核がサルコイドーシスに関与しているかもしれないと考えられている。しかしながら、バクテリア培養システム及び組織学的手法、並びにポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）の利用にも関わらず、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及びサルコイドーシスの関係については議論中である（例えば、非特許文献Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５６，１０００−１００３，１９９７，Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．２８，７９６−８００，１９９７，Ｔｈｏｒａｘ．５１，５３０−５３３，１９９６参照）。Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ（Ｐ．ａｃｎｅｓ）は、皮膚又は粘膜表面に常在する嫌気性胞子非形成型グラム陽性桿菌であるが（例えば、Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，５８７−６０２，１９９５参照）、近年、サルコイドーシスの原因抗原の有力候補であることが示唆されている（例えば、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３参照）。定量的ＰＣＲを使ったいくつかの研究により、サルコイドーシス患者の縦隔又は表在性リンパ節（ＬＮｓ）におけるＰ．ａｃｎｅｓゲノムのレベルは、対象者のそれに比べて顕著に高いということが明らかになり、このことは患者体内においてＰ．ａｃｎｅｓによる「内因性感染」がある可能性を示唆している（例えば、Ｌａｎｃｅｔ．３５４，１２０−１２３，１９９９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｏｌ．４０，１９８−２０４，２００２，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９８，５４１−５４７，２００２参照）。
肺肉芽腫形成の誘因となる過程では、風媒性又は血液由来の抗原が肺に定着し、マクロファージ（貪食細胞）又は樹状細胞（ＤＣｓ）（例えば、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６，６７１−６７９，２００２参照）のような抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）が、貪食やその後の抗原提示のためにそれらの抗原を集積して取り囲むと考えられている（例えば、Ｔｈｅ Ｌｕｎｇ．Ｖｏｌ．１．２３９５−２４０９，１９９７参照）。この見解に基づいて、肺肉芽腫のいくつかの動物モデル、特にマウスの住血吸虫症モデルにおいて、抗原を肺に留めるための抗原塞栓術を用いた方法が提案されている（例えば、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１５０３−１５１５，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６，３４２３−３４３９，２００１参照）。しかしながら、肺間質における長期的な抗原の堆積は実地肺臨床には不適合であり、又、血液由来抗原の播種が肺肉芽腫の全症例の原因になるとは考えにくい。
本発明の課題は、全身性肉芽腫症の一つであるサルコイドーシスの治療薬やサルコイドーシスの治療方法を提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究し、以下（１）〜（７）の知見を得て、本発明を完成するに至った。
（１）抗Ｐ．ａｃｎｅｓモノクローナル抗体を用いた健常マウス肺の免疫染色により、無菌とされてきた正常下気道肺に主にマクロファージに貪食されているＰ．ａｃｎｅｓが存在することがわかった。
（２）Ｐ．ａｃｎｅｓの１６ｓリボゾーマルＲＮＡのプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲにより、健常下気道肺にＰ．ａｃｎｅｓが検出され、（１）をサポートする結果となった。
（３）正常肺所属リンパ節についても（２）と同様にＰ．ａｃｎｅｓが検出された。また、リンパ球増殖アッセイによりＰ．ａｃｎｅｓ特異的な免疫反応も認められた。
（４）正常マウスに対するＰ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞の経静脈的移入実験により、肺・肝肉芽腫が形成された。
（５）上記（４）の応用モデルとしてマウスにＰ．ａｃｎｅｓの肺外（足床）反復免疫（４００μｇ・二週間隔）を行ったところ、胸膜直下・気管支血管周囲束優位に分布するＴｈ１型の肉芽腫が形成された。これらのマウスは抗原投与量依存的に血清カルシウム・ＡＣＥレベルが上昇し、ＢＡＬ（気管支肺胞洗浄）リンパ球のＣＤ４／８比は血清カルシウム値に正の相関をもっていた。また、肺外病変として、肝肉芽腫・ＣＤ４陽性Ｔ細胞の赤脾髄への異常集積もみられた。これらの結果は肺サルコイドーシスの免疫組織学的特徴に酷似するものであった。
（６）上述のサルコイドーシス様肺肉芽腫形成において、健常肺に常在するＰ．ａｃｎｅｓが重要であることを示すために、反復免疫の開始一週間前にＰ．ａｃｎｅｓ生菌を前投与し、肉芽腫形成の増幅の有無をみた。すると、投与菌量依存的に肉芽腫形成が増幅しＢＡＬ細胞数も増加した。
（７）上記（６）と同様の目的で、Ｐ．ａｃｎｅｓに対する抗菌操作が肺肉芽腫形成にあたえる影響をみた。Ｐ．ａｃｎｅｓに対して抗菌作用の分かっている塩酸ミノサイクリン・クリンダマイシンの投与群ではＰＢＳ投与群に比し、ＢＡＬ総細胞・ＣＤ４陽性細胞数が減少しており、肉芽腫形成も抑制されていた。
【発明の開示】
すなわち本発明は、（１）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質を有効成分とすることを特徴とするサルコイドーシスの治療薬や、（２）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする（１）記載のサルコイドーシスの治療薬や、（３）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする（１）又は（２）記載のサルコイドーシスの治療薬に関する。
また本発明は、（４）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質をサルコイドーシス患者に投与することを特徴とするサルコイドーシスの治療方法や、（５）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする（４）記載のサルコイドーシスの治療方法や、（６）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする（４）又は（５）記載のサルコイドーシスの治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
第１図は、健常マウス肺の肺胞におけるＰ．ａｃｎｅｓの存在を示す実験の結果を示す写真である。
ａ，ｂ 正常マウス肺の肺胞におけるＰ．ａｃｎｅｓの免疫染色（茶色）。拡大率を大きくしたＰ．ａｃｎｅｓ含有細胞。スケールバー；５μｍ（ａ）、２０μｍ（ｂ）。
ｃ〜ｅ Ｐ．ａｃｎｅｓ（茶色）及びＦ４／８０（青）の二重染色（ｃ）、Ｐ．ａｃｎｅｓ（茶色）及びＣＤ１１ｃ（青）の二重染色（ｄ）、Ｐ．ａｃｎｅｓ（茶色）及びＤＥＣ２０５（青）の二重染色（ｅ）。Ｆ４／８０提示細胞のみがＰ．ａｃｎｅｓを貪食する。スケールバー、２０μｍ。
ｆ 健常マウスの下気道肺におけるＰ．ａｃｎｅｓの検出。Ｐ．ａｃｎｅｓ生菌から抽出した全ＲＮＡを陽性コントロールとして使用し、正常な末梢血単核細胞を陰性コントロールとして使用した。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとったものである。ｎ＝５。マウスに＃１−５の番号をふった。
第２図は、正常末梢ＬＮｓ内のＰ．ａｃｎｅｓに対する免疫応答の結果を示す写真である。
ａ 正常末梢ＬＮｓのＰ．ａｃｎｅｓの１６ｓリボゾーマルＲＮＡの検出。Ｐ．ａｃｎｅｓ生菌から抽出した全ＲＮＡを陽性コントロールとして使用した。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとったものである。
ｂ Ｐ．ａｃｎｅｓ及びコントロール抗原に反応する白血球増殖アッセイ。白いバー、刺激受けず；黒いバー、Ｐ．ａｃｎｅｓ刺激受けた；ストライプバー、ＯＶＡ−刺激受けた。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。ｎ＝７。データは平均値±平均値標準誤差。＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、刺激受けていないグループ及びＯＶＡ−刺激受けたグループの両グループに対して。
第３図は、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ヘルパーＴ細胞の養子移植の結果を示す写真である。
ａ，ｂ Ｈ＆Ｅ染色はＰ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性細胞を第１４日目に注射されたマウスの肺（ａ）及び肝臓（ｂ）の肉芽腫を示している。
ｃ，ｄ ａ及びｂに対応する、未感作ＣＤ４陽性細胞を注射されたマウスの肺（ｃ）及び肝臓（ｄ）をそれぞれ示す。スケールバー、１００μｍ。
第４図は、Ｐ．ａｃｎｅｓ反復免疫付与の結果を示す写真である。
ａ Ｈ＆Ｅ染色が、３回免疫付与されたマウスの肺の主に末梢（上パネル）及び気管支周囲血管により（下パネル）における多数の肺肉芽腫を示した。スケールバー、１００μｍＢ。気管支；Ｌ、リンパ管；Ｖ、肺血管。
ｂ，ｃ 肺肉芽腫の細胞構成。肉芽腫の末梢のＣＤ４陽性Ｔ細胞（茶色）、肉芽腫中央のＦ４／８０陽性（ｂ）及びＣＤ１１ｃ陽性（ｃ）細胞（両方青色）。スケールバー、１００μｍ。ｄ 肺肉芽腫におけるＴｈ１／２サイトカイン発現。ＩＦＮ−γを発現し、ＩＬ−４（いずれも赤色）は発現しなかった肉芽腫ＣＤ４陽性細胞（緑色）。ＣＤ４陽性ＩＦＮ−γ陽性細胞（黄色）は、ＣＤ４陽性細胞の層の周辺であった。ｅ〜ｉ ＢＡＬ数及び細胞構成、血清カルシウムレベル、及びＡＣＥ活性。全ＢＡＬ細胞（ｅ）及びＢＡＬ内リンパ球数（ｆ）は、免疫付与の頻度が上がると上昇し、ＣＤ４／８比（ｇ）及び血清カルシウムレベル（ｈ）は、二回免疫付与されたグループにおいて最大で、２回以上の免疫付与を受けたグループの血清ＡＣＥ活性（ｉ）は増加した。ｎ＝５．データは平均値±平均値標準誤差（ｈを除く）。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。ｊ，ｋ 高頻度の免疫付与が、多数の肝臓肉芽腫（ｊ）及び赤脾髄におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞（矢印）の異常な集積（ｋ）を誘発した。試料は免疫付与が９回行われたマウスから入手した。スケールバーはそれぞれ、１００、５０μｍ。ＲＰ，赤脾髄；ＷＰ，白脾髄。
第５図は、肉芽腫形成に対するＰ．ａｃｎｅｓコロニー常在量の影響を示す写真である。
ａ Ｐ．ａｃｎｅｓによる免疫付与を３回行ったマウスのＢＡＬ細胞総数。ｎ＝５。データは平均値±平均値標準誤差。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。
ｂ Ｈ＆Ｅ染色による組織学的所見。スケールバー、１００μｍ。
第６図は、本発明の抗生物質投与によるサルコイドーシスの治療効果を示す写真である。
ａ，ｂ Ｐ．ａｃｎｅｓによる免疫付与を３回行ったマウスの全ＢＡＬ細胞（ａ）、ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ｂ）。ｎ＝４〜６。データは平均値±平均値標準誤差。＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１（各ＰＢＳ処置グループに対して）。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。
ｃ Ｈ＆Ｅ染色による組織学的所見。スケールバー、１００μｍ。
第７図は、Ｐ．ａｃｎｅｓの肺外免疫を３回受けるマウスに対し、ペニシリン系：アンピシリン（ＡＢＰＣ）、セフェム系：セファゾリンナトリウム（ＣＥＺ）、アミノ配糖体系：硫酸ゲンタマイシン（ＧＭ）、ホスホマイシン系：ホスホマイシン（ＦＯＭ）、マクロライド系：クラリスロマイシン（ＣＡＭ）についてのＢＡＬ（気管支肺胞洗浄）中のＣＤ４陽性細胞数比を調べた結果を示す図である。また、ＭＩＮＯ ｓｈｏｒｔ、ＣＬＤＭ ｓｈｏｒｔとして短期間投与群（肉芽腫誘導モデルマウスの処置後一ヶ月後（最終免疫時）より抗生物質投与）についてのＢＡＬ中ＣＤ４陽性細胞数を調べた結果を示す図である。
第８図は、抗生物質投与によって肺内の常在Ｐ．ａｃｎｅｓが減少していることを示すＰＣＲデータを示す写真である。
第９図は、抗生物質投与により非特異的な免疫抑制現象が起こっているかどうかを調べた結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
本発明のサルコイドーシスの治療薬としては、Ｐ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質を有効成分と治療薬であれば特に制限されるものではなく、また、本発明のサルコイドーシスの治療方法としては、Ｐ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質をサルコイドーシス患者に投与する治療方法であれば特に制限されるものではなく、ここでサルコイドーシスとは、サルコイド症、ベック類肉腫、ベニエー・ベック・シャウマン病、血管類狼瘡などとも呼ばれる多臓器にわたる肉芽腫性疾患をいう。
上記Ｐ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質としては、Ｐ．ａｃｎｅｓに対して抗菌活性を有する化学物質であればどのような物質でもよく、アモキシシリン（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ、ＡＭＰＣ）、アモキシシリン・クラブラン酸（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ／Ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ、ＡＭＰＣ／ＣＶＡ）、アスポキシシリン（Ａｓｐｏｘｉｃｉｌｌｉｎ、ＡＳＰＣ）、ベンジルペニシリン（Ｂｅｎｚｙｌｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ、ＰＣＧ）、アンピシリン（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ、ＡＢＰＣ）、バカンピシリン（Ｂａｃａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ、ＢＡＰＣ）、シクラシリン（Ｃｉｃｌａｃｉｌｌｉｎ、ＡＣＰＣ）、ピペラシリン（Ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ、ＰＩＰＣ）等のペニシリン系抗生物質や、セフジトレンピポキシル（Ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ Ｐｉｖｏｘｉｌ、ＣＤＴＲ−ＰＩ）、セフェタメトピボキシル（Ｃｅｆｅｔａｍｅｔ ｐｉｖｏｘｉｌ ｈｙｄｒｏｃｈｏｒｉｄｅ、ＣＥＭＴ−ＰＩ）、セフジニル（Ｃｅｆｄｉｎｉｒ、ＣＦＤＮ）、セフィキシム（Ｃｅｆｉｘｉｍｅ、ＣＦＩＸ）、セフカペンピボキシル（ｃｅｆｃａｐｅｎｅ ｐｉｖｏｘｉｌ、ＣＦＰＮ−ＰＩ）、セフポドキシムプロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ ｐｒｏｘｅｔｉｌ、ＣＰＤＸ−ＰＲ）等のセフェム系抗生物質や、ファロペネムナトリウム（Ｆａｒｏｐｅｎｅｍ、ＦＲＰＭ）、イミペネム・シラスタチン（Ｉｍｉｐｅｎｅｍ／Ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ、ＩＰＭ／ＣＳ）、メロペネム（Ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ、ＭＥＰＭ）、パニペネム／ベタミプロン（Ｐａｎｉｐｅｎｅｍ／Ｂｅｔａｍｉｐｒｏｎ、ＰＡＰＭ／ＢＰ）等のαラクタム系抗生物質や、セプタジダイム（Ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ、ＣＡＺ）、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｉｎ、ＣＥＴ）、セファゾリン（Ｃｅｆａｚｏｌｉｎ、ＣＥＺ）、セフォチアム（Ｃｅｆｏｔｉａｍ、ＣＴＭ）、セフォタキシム（Ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ、ＣＴＸ）、セフォペラゾン（Ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ、ＣＰＺ）、セフチゾキシム（Ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ、ＣＺＸ）、セフメノキシム（Ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｍｅ、ＣＭＸ）、セフピロム（Ｃｅｆｐｉｒｏｍｅ、ＣＰＲ）、セフェピム（Ｃｅｆｅｐｉｍｅ、ＣＦＰＭ）、セフォゾプラン（Ｃｅｆｏｚｏｐｒａｎ、ＣＺＯＰ）等のセファロスポリン系抗生物質や、クリンダマイシン（Ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ、ＣＬＤＭ）、リンコマイシン（Ｌｉｎｃｏｍｙｃｉｎ、ＬＣＭ）、エリスロマイシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ、ＥＭ）、クラリスロマイシン（Ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ、ＣＡＭ）、ロキタマイシン（Ｒｏｋｉｔａｍｙｃｉｎ、ＲＫＭ）等のマクロライド・リンコマイシン系抗生物質や、ミノサイクリン（Ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ、ＭＩＮＯ）、ドキシサイクリン（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ、ＤＯＸＹ）等のテトラサイクリン系抗生物質や、キノロン（ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、クロラムフェニコール（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ、ＣＰ）、リファマイシン（ｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＲＦＭ）、スルホンアミド（ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ、ＳＡ）薬、コトリモキサゾール（ｃｏｔｒｉｍｏｘａｚｏｌｅ）、オキサゾリジノン（ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ）等や、ロキシスロマイシン（Ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ、ＲＸＭ）、バンコマイシン（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ、ＶＣＭ）等の抗菌性抗生物質や、スパルフロキサシン（Ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ、ＳＰＦＸ）、シプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ、ＣＰＦＸ）、レボフロキサシン（Ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ、ＬＶＦＸ）トスフロキサシン（Ｔｏｓｕｆｌｏｘａｃｉｎ、ＴＦＬＸ）、フレロキサシン（Ｆｌｅｒｏｘａｃｉｎ、ＦＬＲＸ）等の合成抗菌剤を挙げることができるが、これらの中でもクリンダマイシン、ミノサイクリン（塩酸ミノサイクリン）、アンピシリン、クラリスロマイシンが好ましい。
本発明のサルコイドーシスの治療薬は、サルコイドーシスの予防薬としても用いることができ、有効成分であるＰ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質を医薬用の治療剤として用いる場合は、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。これら治療剤は、経口的又は非経口的に投与することができ、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で経口的に投与することができ、あるいは、例えば溶液、乳剤、懸濁液等の剤型にしたものを注射の型で非経口投与することができる他、スプレー剤の型で鼻孔内投与及び経気道投与することもできる。
経口的に投与する製剤の場合、薬理学的に許容される担体としては、慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、例えば錠剤には乳糖、デンプン等の賦形剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロース等の崩壊剤等を配合することができ、懸濁液製剤には生理的食塩水アルコール等の溶剤、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等の溶解補助剤、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、レシチン等の懸濁化剤、グリセリン、Ｄ−マンニトール等の等張化剤、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩等の緩衝剤などを配合することができる。また必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加物を配合することもできる。非経口的に投与する製剤の場合、蒸留水、生理的食塩水等の水溶性溶剤、サリチル酸ナトリウム等の溶解補助剤、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等の等張化剤、ヒト血清アルブミン等の安定化剤、メチルパラベン等の保存剤、ベンジルアルコール等の局麻剤を配合することができる。
また、本発明のサルコイドーシスの治療薬の投与量は、疾病の種類、患者の体重や年齢、投与形態、症状等により適宜選定することができるが、例えば成人に投与する場合、有効成分であるＰ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質およびそれらの薬学的に許容される塩を通常１回量として約０．００１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜５０ｍｇであり、この量を１日１回〜３回投与するのが望ましい。本発明のサルコイドーシスの治療薬を非経口的に投与するには、たとえば、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、骨髄腔内投与、経粘膜投与及び経気道投与などを挙げることができるが、静脈内投与や皮下投与及び経気道投与が好ましい。
【実施例１】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
（結果）
［健常マウス肺の肺胞におけるＰ．ａｃｎｅｓの存在］
Ｐ．ａｃｎｅｓに対する既存の免疫反応があるのならば、健常肺においてＰ．ａｃｎｅｓを検出することが可能なはずである。従って本発明者らは、健常なＣ５７ＢＬ／６マウスから採取された新鮮凍結肺切片上で、Ｐ．ａｃｎｅｓの存在について免疫組織化学的な検討を行った。２〜５の円形顆粒（ｒｏｕｎｄ ｇｒａｎｕｌｅｓ）が集合するＰ．ａｃｎｅｓ陽性染色像を観察した。これらは全て、肺細胞により貪食され、その肺細胞の大半は肺胞に隣接していた（図１ａ，ｂ）。二重免疫染色により、Ｐ．ａｃｎｅｓ陽性細胞が、ＣＤ１１ｃ（図１ｄ）又はＤＥＣ２０５（図１ｅ）といった樹状細胞マーカーではなく、既知のマクロファージマーカーであるＦ４／８０（図１ｃ）を発現することが明らかになった（Ｂｌｏｏｄ．９５，１３８−１４６，２０００、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６，２０７１−２０７９，２００１）。さらに、上部気道を除去した、正常な肺のＲＴ−ＰＣＲ分析により、Ｐ．ａｃｎｅｓ−ゲノムの存在が明らかになり（図１ｆ）、免疫染色の結果をサポートする結果となった。
［定常状態の局所リンパ節におけるリンパ球のＰ．ａｃｎｅｓに対する特異的免疫応答］
末梢ＡＰＣｓは、定常状態においても、提示のために抗原を所属リンパ節に輸送する（Ｎａｔｕｒｅ．３９２，２４５−２５２，１９９８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，６７５６−６７６４，２００１）、また、Ｐ．ａｃｎｅｓは、皮膚又は口腔及び腸の粘膜表面に常在する（Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．５８７−６０２，１９９５）。正常肺リンパ節におけるＰ．ａｃｎｅｓ特異的免疫反応をテストするため、本発明者らは先ず、ＲＴ−ＰＣＲにより、他のリンパ節と同様に正常肺リンパ節にもＰ．ａｃｎｅｓゲノムが存在することを証明した（図２ａ）。本発明者らはその後、これらＬＮｓにおいて、Ｐ．ａｃｎｅｓに対して特異的な免疫反応が確立されているかをテストし、肺所属リンパ節のリンパ球が、鼠径部、肝臓、及び膵臓のリンパ節細胞と同様に、Ｐ．ａｃｎｅｓに反応して特異的に増殖することを見出した（図２ｂ）。
［肺及び肝臓の肉芽腫は、未処置マウスへのＰ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞の経静脈的養子移植により、誘発される］
本発明者らは次に、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞を経静脈的に移入すると、正常肺及び正常肝にも肉芽腫が形成されるかどうかを検定した。本発明者らは、Ｐ．ａｃｎｅｓの免疫付与が繰返し行われた足床（ｆｏｏｔｐａｄ）の所属リンパ節から、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞を入手し、正常なマウスの尾静脈に注射した。２×１０６のＴ細胞移植の２週間後、本発明者らは、肺及び肝臓の類上皮細胞及び単核細胞の集合体としての肉芽腫の変化を観察した（図３ａ，ｂ）。一方対照実験において未感作Ｔ細胞の養子移植はそのような結果を生み出さなかった（図３ｃ，ｄ）。
［Ｐ．ａｃｎｅｓの反復免疫付与により、肺サルコイドーシスに酷似する肺肉芽腫が誘発される］
上記移植モデルの応用モデルとして、本発明者らは足床経由の反復免疫付与により、正常マウス肺に経循環的なＰ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞の供給を、継続的に誘導した。特徴的な肉芽腫が、主にこのように処置されたマウスの肺の胸膜下、及び気管支血管周囲（ｐｅｒｉｂｒｏｎｃｈｏｖａｓｃｕｌａｒ）領域に形成された（図４ａ）。免疫組織化学的な分析により、肉芽腫は、中核原提示細胞、及び周辺部のＣＤ４陽性Ｔ細胞から成ることが明らかになった（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６，６７１−６７９，２００２）（図４ｂ，ｃ）。さらに、これらＣＤ４陽性Ｔ細胞は、ＩＬ−４ではなく、ＩＦＮ−γを発現したことから、肉芽腫はＴｈ１型（図４ｄ）であることが示唆されている。本発明者らはＢＡＬ細胞の数を数えることにより、肉芽腫の病変の程度を予測することができた。ＢＡＬ液中の全白血球及びリンパ球の合計数の増加は、投与回数に伴って増加したが（図４ｅ，ｆ）、二回注射されたグループの中では、ＣＤ４／８細胞の比が最も大きかった（図４ｇ）。
この実験的モデルで得られた結果は、サルコイドーシス患者の特徴と合致したため、本発明者らは血清カルシウムレベル及びＡＣＥ（アンギオテンシン転換酵素）活性を評価することにより、それらの血清学的類似性を検証した（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＨＥＳＴ Ｖｏｌ．１，１５３３−１５８３，１９９９）。血清カルシウムは２回注射されたグループで最も増加し（図４ｈ）、ＡＣＥ活性は抗原投与量依存的に増加した（図４ｉ）。サルコイドーシスにおいて、しばしば病変がみられる肝臓及び脾臓の免疫組織化学的分析により、頻繁に免疫付与されていたマウスにおいて、肝臓に多数の肉芽腫（図４ｊ）及び、脾臓の赤脾髄にＣＤ４陽性Ｔ細胞の異常な蓄積が見られた。
［健常肺的常在Ｐ．ａｃｎｅｓが増加すると肺肉芽腫形成が増進される］
正常な肺に常在するＰ．ａｃｎｅｓが肺肉芽腫をもたらすのであれば、その数量が病変の程度に影響するはずである。この仮説を検証するために、本発明者らは、免疫付与の前の健常マウス肺にＰ．ａｃｎｅｓ生菌を前投与した。気管内単独投与により肉芽腫が誘発される可能性を排除するために、本発明者らは、実験の初期段階及び最終段階のいずれにおいてもコントロールの肺に肉芽腫が存在していないことを確認した。３回の免疫付与の後に回収されたＢＡＬ内の白血球の総数は前投与されたＰ．ａｃｎｅｓの数量依存的に増加し（図５ａ）、肉芽腫病変の組織学的検討の結果はこの所見と一致した（図５ｂ）。
［抗生物質治療はマウスサルコイドーシス肺の肉芽腫病変を軽減する］
常在するＰ．ａｃｎｅｓの重要性をさらに評価するために、本発明者らは、抗菌性物質である塩酸ミノサイクリン（ＭＩＮＯ）及びクリンダマイシン（ＣＬＤＭ）を用いて健常肺に常在するＰ．ａｃｎｅｓの数を免疫付与に先立って減らした（Ｊ．Ｅｕｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．１５，５１−５５，２００１、Ｓｅｍｉｎ．Ｃｕｔａｎ．Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．２０，１３９−１４３，２００１）。３回目の免疫付与から２週間後、ＭＩＮＯ−及びＣＬＤＭ−処置マウスには、ＢＡＬ白血球総数の大幅な減少が見られた（図６ａ）；これら２グループのＣＤ４陽性ＢＡＬ細胞数はそれぞれ、５３．５％及び４２．１％減少した（図６ｂ）。組織学的検証により、肉芽腫の病変の減少も明らかになった（図６ｃ）。
また、上記塩酸ミノサイクリン及びクリンダマイシンと同様に、ペニシリン系：アンピシリン（ＡＢＰＣ）、セフェム系：セファゾリンナトリウム（ＣＥＺ）、アミノ配糖体系：硫酸ゲンタマイシン（ＧＭ）、ホスホマイシン系：ホスホマイシン（ＦＯＭ）、マクロライド系：クラリスロマイシン（ＣＡＭ）についてのＢＡＬ（気管支肺胞洗浄）中のＣＤ４陽性細胞数比を調べた。また、ＭＩＮＯ ｓｈｏｒｔ、ＣＬＤＭ ｓｈｏｒｔとして短期間投与群（肉芽腫誘導モデルマウスの処置後一ヶ月後（最終免疫時）より抗生物質投与）についても調べた。結果を図７に示す。図７は、コントロール（ＰＢＳ）群を１００とした％表示で示されている。その結果、前述のＭＩＮＯ（５３．５％改善）、ＣＬＤＭ（４２．１％改善）に加え、ＡＢＰＣ（４６．１％改善）、ＣＡＭ（４８．３％改善）、ＣＬＤＭ ｓｈｏｒｔ（７４．３％改善）投与群において、ＢＡＬ白血球総数の大幅な減少が見られた。ＧＭでは効果が見られなかったが、これはＧＭが元来Ｐ．ａｃｎｅｓに対して低感受性であることと合致する。
［抗生物質投与により肺内常在のＰ．ａｃｎｅｓゲノムは減少する］
抗生物質によりマウス肺内常在のＰ．ａｃｎｅｓが減少するかについて、ＰＢＳをコントロールとするＰＣＲで調べた結果を図８に示す。その結果、ＭＩＮＯ及びＣＬＤＭを用いた場合にＰ．ａｃｎｅｓが減少することがわかった。また、ＧＭを用いた場合、ＭＩＮＯやＣＬＤＭを用いた場合と比較して、Ｐ．ａｃｎｅはそれほど減少しなかったが、これはＧＭが元来Ｐ．ａｃｎｅｓに対して低感受性であることと合致するものであり、図７に示すＢＡＬの結果と呼応している。
［肉芽腫病変の改善は抗生物質の抗菌作用によりもたらされる］
サルコイドーシスに対して抗生物質としての機能を有するＭＩＮＯとＭＯＮＯとが、非特異的な免疫抑制現象を引き起こしているかにつき調べた。ＭＩＮＯ及びＣＬＤＭが耳腫脹の大きさや膵臓値を改善するかにつき調べた結果を図９に示す。その結果、コントロールであるＰＢＳと顕著な差はみられなかった。このことから、肉芽腫病変の改善が、純粋な抗生物質の抗菌作用によりもたらされたことがわかった。
【実施例２】
（考察）
生物は常に異種抗原にさらされているが、肺の下気道は不可侵の無菌空間であり、病原体の肺への侵入が肺の疾患を引き起こすと考えられてきた。この前提に基づき、肺疾患の動物モデルは、気管、鼻腔、又は抗原塞栓肺血管を経由した抗原の強制的投与に立脚していた（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１５０３−１５１５，２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６，３４２３−３４３９，２００１、Ｎａｔｕｒｅ．３９２，２４５−２５２，１９９８、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１０８，３５２−３６４，２００３）。しかしながら、臨床医は病原菌への明らかな曝露のない原因不明の肺疾患、特に間質性肺疾患にしばしば直面している。従って本発明者らは、ある一定の条件下で病原体となりうる生物が健常肺に常在するのかもしれないと推測した。
Ｐ．ａｃｎｅｓが健常者の皮膚及び粘膜表面に分布し、尋常性ざ瘡（ａｃｎｅｖｕｌｇａｒｉｓ）の病原となり（Ｓｅｍｉｎ．Ｃｕｔａｎ．Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．２０，１３９−１４３，２００１）また実験モデルにおいて肉芽腫形成（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５，１２５７−１２６６，２００２）を顕著に誘導することから、Ｐ．ａｃｎｅｓは病原菌の有力候補と見られている。実際、先行の報告は、Ｐ．ａｃｎｅｓとサルコイドーシスの関係を強調している（Ｌａｎｃｅｔ．３５４，１２０−１２３，１９９９、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４０，１９８−２０４，２００２）。上述のように、本発明者らは免疫染色により正常なマウスの肺胞細胞のＰ．ａｃｎｅｓを同定した（図１ａ，ｂ）。これらＰ．ａｃｎｅｓ含有細胞は、ＣＤ１１ｃ又はＤＥＣ２０５ではなくＦ４／８０を発現しており、肺において抗原を貪食し、抗原情報を樹状細胞へ伝播するというマクロファージの既知の知見と一致している（図１ｃ〜ｅ）（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６２，Ｓ１５１−Ｓ１５６，２０００、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．８１，３４３−３５１，１９９４）。健常肺に、Ｐ．ａｃｎｅｓを貪食している抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）が存在するという引き続いて、本発明者らは正常なマウスの肺所属リンパ節におけるＰ．ａｃｎｅｓに対する免疫反応の存在を調べた。確かに、正常な肺リンパ節のリンパ球はＰ．ａｃｎｅｓ特異的な増殖を示しており（図２ｂ）、このことは、これらの細胞が定常状態において既に肺由来のＡＰＣによりＰ．ａｃｎｅｓに対する免疫応答を確立していることを示唆している。
本発明者らは次に、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作Ｔリンパ球が、人工的な抗原定着化（ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｃｈｏｒｉｎｇ）がなくても肺の炎症を引き起こすと仮定した。Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞の未処置マウスへの養子移植は、肺及び肝の肉芽腫変化をもたらした（図３ａ）。このことはＰ．ａｃｎｅｓに感作した肺外リンパ節のＣＤ４陽性Ｔ細胞は、経循環的に正常な肺に流入することによって肉芽腫形成を誘導し得ることを示している。従って本発明者らは、正常マウスに、継続的なＰ．ａｃｎｅｓ肺外感作をすることでＰ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞が継続的に供給され、慢性的な肺肉芽腫形成が起こると仮定した。これらのマウスには、胸膜下、胸膜、及び血管周囲領域などのリンパに富む領域（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．１，２３９５−２４０９，１９９７）に特徴的な肺肉芽腫が見られ（図４ａ）、典型的な肉芽腫（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．２，２３９５−２４０９，１９９７）（図４ｂ，ｃ）及びＴｈ１サイトカインの発現が見られた（図４ｄ）。これらの特徴は肺サルコイドーシスの特徴と酷似している（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌｍ．Ｍｅｄ．８，４３５−４４０，２００２、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＨＥＳＴ Ｖｏｌ．１，１５３３−１５８３，１９９９）。また、モデルマウスではＢＡＬ内ＣＤ／ＣＤ８細胞比の増加（図４ｇ）に加えて、ＡＣＥ活性の増加（図４ｉ）及びカルシウムレベルの上昇（図４ｈ）が認められた。これらの所見は、サルコイドーシス患者の血清カルシウムレベル及びＢＡＬ ＣＤ４／ＣＤ８比の正の相関を示した先行研究と一致している（Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１０，６８７−６９３，２００１）。さらに、本発明者らは、サルコイドーシスにおいて頻繁に影響を受けている肝臓と脾臓について、このモデルマウスにおいても同様の肺外病変を見出した（図４ｊ，ｋ）（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＨＥＳＴ Ｖｏｌ．１，１５３３−１５８３，１９９９）。以上より、Ｐ．ａｃｎｅｓ反復免疫付与モデルには、サルコイドーシス患者との著しい類似性が認められた。
Ｐ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞の経循環的な肺内への流入は肉芽腫の形成を誘発しうるので（図３ａ）、Ｐ．ａｃｎｅｓを貪食している肺ＡＰＣと肺リンパ節内Ｔ細胞の相互作用は肉芽腫の発生に不可欠であると考えた。この点を確認するために、健常肺内に常在するＰ．ａｃｎｅｓの総量の変化が肺肉芽腫形成に影響を与えるか否かを調べた。予想通り、抗菌性物質治療によりＰ．ａｃｎｅｓを減少させると、肺の肉芽腫病変が減少したのに対して、Ｐ．ａｃｎｅｓの肺内前投与は、肺の病変を悪化させた（図６ａ，ｂ）。これらの結果は、常在しているＰ．ａｃｎｅｓが、肺外Ｐ．ａｃｎｅｓ感作により肺肉芽腫形成に極めて重要な役割を果たしているばかりでなく、肺サルコイドーシス治療としての抗菌性物質による除菌療法の臨床的有用性の可能性も示唆している。
サルコイドーシスの原因は現在に至るまで不明とされている。主に皮質ステロイドによる免疫抑制療法が、この疾患に対して５０年以上も用いられてきたが、慢性的な肺サルコイドーシスに対するステロイド治療の長期的な効果については、未だに議論中であり（Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３）、治療後の再発率の高さがしばしば臨床的問題となっている（Ｃｈｅｓｔ．１１１，６２３−６３１，１９９７）。本実施例においては、肺サルコイドーシスと著しく類似している新規のマウス肺肉芽腫モデルを作製した。本発明者らが提示したように、もしＰ．ａｃｎｅｓが健常者肺にも存在するのであれば、サルコイドーシス患者について報告されているような、独特の遺伝的背景をもつ人間においては（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，６７５６−６７６４，２００１）、尋常性ざ瘡のような肺外の領域においてもＰ．ａｃｎｅｓの過剰な感作に引き続いて、肺の病変がおきる可能性がある。従って、この病原体の根絶は、サルコイドーシスの従来の免疫抑制治療に先駆けて考慮されるべきである。本発明者らはこの新しい肺サルコイドーシスの見解が更なる研究に値し、新規の治療戦略の基礎を提供することを提言する。
【実施例３】
（材料と方法）
［マウス］
５〜７週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、日本クレア社（日本、静岡県）又は日本エスエルシー社（日本、東京都）から入手し、東京大学医学系研究科分子予防医学教室の動物用施設内で、特定病原体除去（ＳＰＦ）条件下においた。全ての動物実験は、東京大学の指針に従って行った。
［免疫染色］
以下の抗−マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）を使用した。
ＣＤ４（クローン；ＲＭ４−５）、ビオチン化ＩＦＮ−γ（ＸＭＧ１．２）、ビオチン化ＩＬ−４（ＢＶＤ６−２４Ｇ２）−以上全てＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ社製（カリフォルニア、サンディエゴ）−、ビオチン化Ｆ４／８０（ＣＩ：Ａ３−１）、ＣＤ１１ｃ（Ｎ４１８）−以上いずれもＳｅｒｏｔｅｃ社製（イギリス、オックスフォード）−、ＤＥＣ−２０５（ＮＬＤＣ−１４５；ＢＭＡ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製Ａｕｇｓｔ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、及び原形質膜のリポテイコ酸認識用のＰ．ａｃｎｅｓに対するマウスｍＡｂ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１）。
２次抗体として、アルカリフォスファターゼ標識化抗ラットＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、アルカリフォスファターゼ標識化抗ハムスターＩｇＧ抗体（Ｃｅｄｅｒｌａｎｅ社製、Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）又はアビジン（ニチレイ社製、東京、日本）、及びペルオキシダーゼ標識化抗ラットＩｇ抗体（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ社製、Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、又はペルオキシダーゼ標識化抗マウスＩｇ抗体（ＤＡＫＯ社製、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用した。
一重及び二重の免疫染色を間接的免疫アルカリフォスフォターゼ及び免疫ペルオキシダーゼ法により行った（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３，１８６５−１８７８，１９９６）。二重免疫染色については、アセトン固定化６μｍ新鮮凍結組織切片を抗ＣＤ４抗体に続いて、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８抗ラットＩｇ抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社製、Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）を用いてインキュベートした。次いで、ビオチン化ＩＦＮ−γ又はビオチン化ＩＬ−４を用いてインキュベートし、さらに、Ａｌｅｘａ５９４−結合アビジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社製）を用いてインキュベートし、蛍光顕微鏡観察により観察した（Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９７，３３−４２，２０００）。
［ＲＴ−ＰＣＲ］
１μｇの全ＲＮＡサンプルを肺、並びにＳＰＦマウスの肺、肝臓、皮膚及び膵臓の所属リンパ節試料から、トライゾル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて、製造者の指示通りに単離した。その後ＲＮＡサンプルをｃＤＮＡへ逆転写し、増幅した（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２，１９３３−１９４１，１９９８）。Ｐ．ａｃｎｅｓの１６ｓリボソームＲＮＡのＰＣＲ産物を、２．５％のアガロースゲル上で電気泳動した。臭化エチジウム染色により可視化されたバンドは各ｍＲＮＡ産物の予想されたサイズであった。Ｐ．ａｃｎｅｓのオリゴヌクレオチドプライマーを文献（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４０，１９８−２０４，２００２）記載に準じて設計した：ｆｏｒｗａｒｄ、５’−ＧＣＧＴＧＡＧＴＧＡＣＧＧＴＡＡＴＧＧＧＴＡ−３’（配列番号１）；ｒｅｖｅｒｓｅ、５’−ＴＴＣＣＧＡＣＧＣＧＡＴＣＡＡＣＣＡ−３’（配列番号２）。実験中のＰ．ａｃｎｅｓのコンタミネーションは、バッファーコントロールでチェックした。内部標準としてのＧＡＰＤＨのプライマーは、文献（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１）記載のものを用いた。ＰＣＲ条件は：９５℃で５分間加温した後、９５℃で３０秒、５８℃で６０秒、７２℃で６０秒のサイクルを４０サイクル繰返し、最後に７２℃で１０分間加温した。
［抗原特異的増殖アッセイ］
インビトロでの細胞増殖アッセイを、文献（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１）記載の方法に準じて行った。すなわち、通常マウスの気管支周囲、腋窩、鼠径、肝臓、膵臓のリンパ節細胞（１０５細胞／１９０μｌ／ウェル）を、抗原（Ｐ．ａｃｎｅｓ及びＯＶＡ；１０μｇ／培養液１０μｌ）を用いて３７℃で７２時間刺激した。インキュベーション後、細胞増殖をＰｒｅｍｉｘ ＷＳＴ−１細胞増殖測定システム（タカラバイオ社製、滋賀、日本）を用いて、製造者の指示通りに測定した。
［Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ヘルパーＴ細胞の養子移植］
Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞を、正常マウス及び３回免疫付与されたマウスの鼠径部より単離した。免疫付与は、熱死滅処理した４００μｇのＰ．ａｃｎｅｓ（ＡＴＣＣ１１８２８、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ製、Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）とフロイント完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ社製、Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ）を、２週間隔で足床に皮下注射して実施した。ＣＤ４陽性細胞を、ＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて製造者の指示通りに単離した。ＣＤ４陽性細胞集団の純度は９４％以上で、免疫染色流動細胞計測法によって確認された通りであった。単離されたＣＤ４陽性細胞（２×１０６細胞／ＰＢＳ２００μｌ）を、正常マウスの尾静脈に注射し、二週間後に肺を組織学的に分析した。
［気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）細胞のフローサイトメトリー分析］
ＢＡＬ細胞を２％のＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ社製、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）及び２ｍＭのＥＤＴＡを含有する無菌ＰＢＳ ０．８ｍｌを５回注射することにより収集した。ＢＡＬ白血球総数は血球計数器により計算した。ＢＡＬ細胞を、ＥＰＩＣＳ Ｅｌｉｔｅ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社製、Ｍｉａｍｉ、Ｆｒｏｌｉｄａ）で分析する前、ラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（クローン；２．４Ｇ２）ｍＡｂを用いて、ＦｃＲを介する結合をブロックするためにプレインキュベートし、その後、いずれもＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ社製のＦＩＴＣ結合抗ＣＤ４（Ｈ１２９．１９）ｍＡｂ及びＰＥ結合抗ＣＤ８α（５３−６．７）ｍＡｂを用いて４℃で２５分間インキュベートした。
［血清学的分析］
血清カルシウムレベルを、Ｆｕｊｉ ＤＲＩ−ＣＨＥＭ ５５００Ｖ（Ｆｕｊｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ社製、東京、日本）により測定し、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）活性をＡＣＥ ｃｏｌｏｒ（Ｆｕｊｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ社製、東京、日本）により製造者の指示どおりに測定した。
［抗生物質治療］
塩酸ミノサイクリン（ＭＩＮＯ）（Ｗｙｅｔｈ Ｌｅｄｅｌｅ社製、東京、日本）及びクリンダマイシン（ＣＬＤＭ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製、東京、日本）を使用した。第一日目に１３３μｇのＭＩＮＯ、及び１．６ｍｇのＣＬＤＭを気管内投与（ｉ．ｔ．）する。その後、同用量の各抗生物質を免疫付与前の一週間、毎日腹腔内に投与（ｉ．ｐ．）したあと、腹腔内注射を週に３回行う。実験の間、マウスには上記と同量の各抗生物質を含有した水を与えた。同様に、アンピシリン（ＡＢＰＣ）、セファゾリンナトリウム（ＣＥＺ））、硫酸ゲンタマイシン（ＧＭ）、ホスホマイシン（ＦＯＭ）、クラリスロマイシン（ＣＡＭ）を使用し、これら抗生物質の一回投与量も同じく、成人常用最大量を体重換算して設定した。
［統計分析］
二つの要素、すなわち、要因の分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びＦｉｓｈｅｒ’ｓ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ｌｅａｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｅｃｅを用いて、差異を評価した。０．０５未満のＰ値（Ｐ．ｖａｌｕｅ＜０．０５）は統計的に有意であると判断した。
【産業上の利用可能性】
本発明によると、全身性肉芽腫症の一つであるサルコイドーシスの治療薬やサルコイドーシスの治療方法を提供することができる。
【配列表】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【技術分野】
本発明は、プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質を有効成分とするサルコイドーシスの治療薬や、かかる治療薬をサルコイドーシス患者に投与するサルコイドーシスの治療方法に関する。
【背景技術】
サルコイドーシスは、最も良く知られた、全身性肉芽腫症の一つであるが、多くの集中的な研究にも関わらず、その病因は１００年以上も解明されていない（例えば、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７参照）。肺は、最も一般的に影響をうける臓器であり、肺肉芽腫性炎症は処置されないまま放置されると、ガス交換が妨害され、しばしば回復不能な線維化に陥り、予後不良である。継続した肺の炎症又は線維症を伴う長期的な呼吸障害の発生は、一般の人々に非常に多く見られる。肺は常に病原体を含む風媒性物質にさらされており、多くの研究者が原因となりうる伝播性病原体、及びその肺肉芽腫形成機序への関与を特定すべく研究を続けている（例えば、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ．３１，５４３−５５４，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌｍ．Ｍｅｄ．８，４３５−４４０，２００２参照）。
臨床的及び免疫病理学的類似点のため、最も一般的なマイコバクテリアの感染症である結核がサルコイドーシスに関与しているかもしれないと考えられている。しかしながら、バクテリア培養システム及び組織学的手法、並びにポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）の利用にも関わらず、ヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及びサルコイドーシスの関係については議論中である（例えば、非特許文献Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５６，１０００−１００３，１９９７，Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．２８，７９６−８００，１９９７，Ｔｈｏｒａｘ．５１，５３０−５３３，１９９６参照）。Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ（Ｐ．ａｃｎｅｓ）は、皮膚又は粘膜表面に常在する嫌気性胞子非形成型グラム陽性桿菌であるが（例えば、Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，５８７−６０２，１９９５参照）、近年、サルコイドーシスの原因抗原の有力候補であることが示唆されている（例えば、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３参照）。定量的ＰＣＲを使ったいくつかの研究により、サルコイドーシス患者の縦隔又は表在性リンパ節（ＬＮｓ）におけるＰ．ａｃｎｅｓゲノムのレベルは、対象者のそれに比べて顕著に高いということが明らかになり、このことは患者体内においてＰ．ａｃｎｅｓによる「内因性感染」がある可能性を示唆している（例えば、Ｌａｎｃｅｔ．３５４，１２０−１２３，１９９９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｏｌ．４０，１９８−２０４，２００２，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１９８，５４１−５４７，２００２参照）。
肺肉芽腫形成の誘因となる過程では、風媒性又は血液由来の抗原が肺に定着し、マクロファージ（貪食細胞）又は樹状細胞（ＤＣｓ）（例えば、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６，６７１−６７９，２００２参照）のような抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）が、貪食やその後の抗原提示のためにそれらの抗原を集積して取り囲むと考えられている（例えば、Ｔｈｅ Ｌｕｎｇ．Ｖｏｌ．１．２３９５−２４０９，１９９７参照）。この見解に基づいて、肺肉芽腫のいくつかの動物モデル、特にマウスの住血吸虫症モデルにおいて、抗原を肺に留めるための抗原塞栓術を用いた方法が提案されている（例えば、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１５０３−１５１５，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６，３４２３−３４３９，２００１参照）。しかしながら、肺間質における長期的な抗原の堆積は実地肺臨床には不適合であり、又、血液由来抗原の播種が肺肉芽腫の全症例の原因になるとは考えにくい。
本発明の課題は、全身性肉芽腫症の一つであるサルコイドーシスの治療薬やサルコイドーシスの治療方法を提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究し、以下（１）〜（７）の知見を得て、本発明を完成するに至った。
（１）抗Ｐ．ａｃｎｅｓモノクローナル抗体を用いた健常マウス肺の免疫染色により、無菌とされてきた正常下気道肺に主にマクロファージに貪食されているＰ．ａｃｎｅｓが存在することがわかった。
（２）Ｐ．ａｃｎｅｓの１６ｓリボゾーマルＲＮＡのプライマーを用いたＲＴ−ＰＣＲにより、健常下気道肺にＰ．ａｃｎｅｓが検出され、（１）をサポートする結果となった。
（３）正常肺所属リンパ節についても（２）と同様にＰ．ａｃｎｅｓが検出された。また、リンパ球増殖アッセイによりＰ．ａｃｎｅｓ特異的な免疫反応も認められた。
（４）正常マウスに対するＰ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞の経静脈的移入実験により、肺・肝肉芽腫が形成された。
（５）上記（４）の応用モデルとしてマウスにＰ．ａｃｎｅｓの肺外（足床）反復免疫（４００μｇ・二週間隔）を行ったところ、胸膜直下・気管支血管周囲束優位に分布するＴｈ１型の肉芽腫が形成された。これらのマウスは抗原投与量依存的に血清カルシウム・ＡＣＥレベルが上昇し、ＢＡＬ（気管支肺胞洗浄）リンパ球のＣＤ４／８比は血清カルシウム値に正の相関をもっていた。また、肺外病変として、肝肉芽腫・ＣＤ４陽性Ｔ細胞の赤脾髄への異常集積もみられた。これらの結果は肺サルコイドーシスの免疫組織学的特徴に酷似するものであった。
（６）上述のサルコイドーシス様肺肉芽腫形成において、健常肺に常在するＰ．ａｃｎｅｓが重要であることを示すために、反復免疫の開始一週間前にＰ．ａｃｎｅｓ生菌を前投与し、肉芽腫形成の増幅の有無をみた。すると、投与菌量依存的に肉芽腫形成が増幅しＢＡＬ細胞数も増加した。
（７）上記（６）と同様の目的で、Ｐ．ａｃｎｅｓに対する抗菌操作が肺肉芽腫形成にあたえる影響をみた。Ｐ．ａｃｎｅｓに対して抗菌作用の分かっている塩酸ミノサイクリン・クリンダマイシンの投与群ではＰＢＳ投与群に比し、ＢＡＬ総細胞・ＣＤ４陽性細胞数が減少しており、肉芽腫形成も抑制されていた。
【発明の開示】
すなわち本発明は、（１）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質を有効成分とすることを特徴とするサルコイドーシスの治療薬や、（２）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする（１）記載のサルコイドーシスの治療薬や、（３）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする（１）又は（２）記載のサルコイドーシスの治療薬に関する。
また本発明は、（４）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質をサルコイドーシス患者に投与することを特徴とするサルコイドーシスの治療方法や、（５）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする（４）記載のサルコイドーシスの治療方法や、（６）プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする（４）又は（５）記載のサルコイドーシスの治療方法に関する。
【図面の簡単な説明】
第１図は、健常マウス肺の肺胞におけるＰ．ａｃｎｅｓの存在を示す実験の結果を示す写真である。
ａ，ｂ 正常マウス肺の肺胞におけるＰ．ａｃｎｅｓの免疫染色（茶色）。拡大率を大きくしたＰ．ａｃｎｅｓ含有細胞。スケールバー；５μｍ（ａ）、２０μｍ（ｂ）。
ｃ〜ｅ Ｐ．ａｃｎｅｓ（茶色）及びＦ４／８０（青）の二重染色（ｃ）、Ｐ．ａｃｎｅｓ（茶色）及びＣＤ１１ｃ（青）の二重染色（ｄ）、Ｐ．ａｃｎｅｓ（茶色）及びＤＥＣ２０５（青）の二重染色（ｅ）。Ｆ４／８０提示細胞のみがＰ．ａｃｎｅｓを貪食する。スケールバー、２０μｍ。
ｆ 健常マウスの下気道肺におけるＰ．ａｃｎｅｓの検出。Ｐ．ａｃｎｅｓ生菌から抽出した全ＲＮＡを陽性コントロールとして使用し、正常な末梢血単核細胞を陰性コントロールとして使用した。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとったものである。ｎ＝５。マウスに＃１−５の番号をふった。
第２図は、正常末梢ＬＮｓ内のＰ．ａｃｎｅｓに対する免疫応答の結果を示す写真である。
ａ 正常末梢ＬＮｓのＰ．ａｃｎｅｓの１６ｓリボゾーマルＲＮＡの検出。Ｐ．ａｃｎｅｓ生菌から抽出した全ＲＮＡを陽性コントロールとして使用した。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとったものである。
ｂ Ｐ．ａｃｎｅｓ及びコントロール抗原に反応する白血球増殖アッセイ。白いバー、刺激受けず；黒いバー、Ｐ．ａｃｎｅｓ刺激受けた；ストライプバー、ＯＶＡ−刺激受けた。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。ｎ＝７。データは平均値±平均値標準誤差。＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１、刺激受けていないグループ及びＯＶＡ−刺激受けたグループの両グループに対して。
第３図は、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ヘルパーＴ細胞の養子移植の結果を示す写真である。
ａ，ｂ Ｈ＆Ｅ染色はＰ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性細胞を第１４日目に注射されたマウスの肺（ａ）及び肝臓（ｂ）の肉芽腫を示している。
ｃ，ｄ ａ及びｂに対応する、未感作ＣＤ４陽性細胞を注射されたマウスの肺（ｃ）及び肝臓（ｄ）をそれぞれ示す。スケールバー、１００μｍ。
第４図は、Ｐ．ａｃｎｅｓ反復免疫付与の結果を示す写真である。
ａ Ｈ＆Ｅ染色が、３回免疫付与されたマウスの肺の主に末梢（上パネル）及び気管支周囲血管により（下パネル）における多数の肺肉芽腫を示した。スケールバー、１００μｍＢ。気管支；Ｌ、リンパ管；Ｖ、肺血管。
ｂ，ｃ 肺肉芽腫の細胞構成。肉芽腫の末梢のＣＤ４陽性Ｔ細胞（茶色）、肉芽腫中央のＦ４／８０陽性（ｂ）及びＣＤ１１ｃ陽性（ｃ）細胞（両方青色）。スケールバー、１００μｍ。ｄ 肺肉芽腫におけるＴｈ１／２サイトカイン発現。ＩＦＮ−γを発現し、ＩＬ−４（いずれも赤色）は発現しなかった肉芽腫ＣＤ４陽性細胞（緑色）。ＣＤ４陽性ＩＦＮ−γ陽性細胞（黄色）は、ＣＤ４陽性細胞の層の周辺であった。ｅ〜ｉ ＢＡＬ数及び細胞構成、血清カルシウムレベル、及びＡＣＥ活性。全ＢＡＬ細胞（ｅ）及びＢＡＬ内リンパ球数（ｆ）は、免疫付与の頻度が上がると上昇し、ＣＤ４／８比（ｇ）及び血清カルシウムレベル（ｈ）は、二回免疫付与されたグループにおいて最大で、２回以上の免疫付与を受けたグループの血清ＡＣＥ活性（ｉ）は増加した。ｎ＝５．データは平均値±平均値標準誤差（ｈを除く）。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。ｊ，ｋ 高頻度の免疫付与が、多数の肝臓肉芽腫（ｊ）及び赤脾髄におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞（矢印）の異常な集積（ｋ）を誘発した。試料は免疫付与が９回行われたマウスから入手した。スケールバーはそれぞれ、１００、５０μｍ。ＲＰ，赤脾髄；ＷＰ，白脾髄。
第５図は、肉芽腫形成に対するＰ．ａｃｎｅｓコロニー常在量の影響を示す写真である。
ａ Ｐ．ａｃｎｅｓによる免疫付与を３回行ったマウスのＢＡＬ細胞総数。ｎ＝５。データは平均値±平均値標準誤差。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。
ｂ Ｈ＆Ｅ染色による組織学的所見。スケールバー、１００μｍ。
第６図は、本発明の抗生物質投与によるサルコイドーシスの治療効果を示す写真である。
ａ，ｂ Ｐ．ａｃｎｅｓによる免疫付与を３回行ったマウスの全ＢＡＬ細胞（ａ）、ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ｂ）。ｎ＝４〜６。データは平均値±平均値標準誤差。＊、Ｐ＜０．０５；＊＊、Ｐ＜０．０１（各ＰＢＳ処置グループに対して）。示されているデータは３回以上の独立した実験の代表例からとった。
ｃ Ｈ＆Ｅ染色による組織学的所見。スケールバー、１００μｍ。
第７図は、Ｐ．ａｃｎｅｓの肺外免疫を３回受けるマウスに対し、ペニシリン系：アンピシリン（ＡＢＰＣ）、セフェム系：セファゾリンナトリウム（ＣＥＺ）、アミノ配糖体系：硫酸ゲンタマイシン（ＧＭ）、ホスホマイシン系：ホスホマイシン（ＦＯＭ）、マクロライド系：クラリスロマイシン（ＣＡＭ）についてのＢＡＬ（気管支肺胞洗浄）中のＣＤ４陽性細胞数比を調べた結果を示す図である。また、ＭＩＮＯ ｓｈｏｒｔ、ＣＬＤＭ ｓｈｏｒｔとして短期間投与群（肉芽腫誘導モデルマウスの処置後一ヶ月後（最終免疫時）より抗生物質投与）についてのＢＡＬ中ＣＤ４陽性細胞数を調べた結果を示す図である。
第８図は、抗生物質投与によって肺内の常在Ｐ．ａｃｎｅｓが減少していることを示すＰＣＲデータを示す写真である。
第９図は、抗生物質投与により非特異的な免疫抑制現象が起こっているかどうかを調べた結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
本発明のサルコイドーシスの治療薬としては、Ｐ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質を有効成分と治療薬であれば特に制限されるものではなく、また、本発明のサルコイドーシスの治療方法としては、Ｐ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質をサルコイドーシス患者に投与する治療方法であれば特に制限されるものではなく、ここでサルコイドーシスとは、サルコイド症、ベック類肉腫、ベニエー・ベック・シャウマン病、血管類狼瘡などとも呼ばれる多臓器にわたる肉芽腫性疾患をいう。
上記Ｐ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質としては、Ｐ．ａｃｎｅｓに対して抗菌活性を有する化学物質であればどのような物質でもよく、アモキシシリン（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ、ＡＭＰＣ）、アモキシシリン・クラブラン酸（Ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ／Ｃｌａｖｕｌａｎａｔｅ、ＡＭＰＣ／ＣＶＡ）、アスポキシシリン（Ａｓｐｏｘｉｃｉｌｌｉｎ、ＡＳＰＣ）、ベンジルペニシリン（Ｂｅｎｚｙｌｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ、ＰＣＧ）、アンピシリン（Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ、ＡＢＰＣ）、バカンピシリン（Ｂａｃａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ、ＢＡＰＣ）、シクラシリン（Ｃｉｃｌａｃｉｌｌｉｎ、ＡＣＰＣ）、ピペラシリン（Ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ、ＰＩＰＣ）等のペニシリン系抗生物質や、セフジトレンピポキシル（Ｃｅｆｄｉｔｏｒｅｎ Ｐｉｖｏｘｉｌ、ＣＤＴＲ−ＰＩ）、セフェタメトピボキシル（Ｃｅｆｅｔａｍｅｔ ｐｉｖｏｘｉｌ ｈｙｄｒｏｃｈｏｒｉｄｅ、ＣＥＭＴ−ＰＩ）、セフジニル（Ｃｅｆｄｉｎｉｒ、ＣＦＤＮ）、セフィキシム（Ｃｅｆｉｘｉｍｅ、ＣＦＩＸ）、セフカペンピボキシル（ｃｅｆｃａｐｅｎｅ ｐｉｖｏｘｉｌ、ＣＦＰＮ−ＰＩ）、セフポドキシムプロキセチル（ｃｅｆｐｏｄｏｘｉｍｅ ｐｒｏｘｅｔｉｌ、ＣＰＤＸ−ＰＲ）等のセフェム系抗生物質や、ファロペネムナトリウム（Ｆａｒｏｐｅｎｅｍ、ＦＲＰＭ）、イミペネム・シラスタチン（Ｉｍｉｐｅｎｅｍ／Ｃｉｌａｓｔａｔｉｎ、ＩＰＭ／ＣＳ）、メロペネム（Ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ、ＭＥＰＭ）、パニペネム／ベタミプロン（Ｐａｎｉｐｅｎｅｍ／Ｂｅｔａｍｉｐｒｏｎ、ＰＡＰＭ／ＢＰ）等のαラクタム系抗生物質や、セプタジダイム（Ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ、ＣＡＺ）、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｉｎ、ＣＥＴ）、セファゾリン（Ｃｅｆａｚｏｌｉｎ、ＣＥＺ）、セフォチアム（Ｃｅｆｏｔｉａｍ、ＣＴＭ）、セフォタキシム（Ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ、ＣＴＸ）、セフォペラゾン（Ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ、ＣＰＺ）、セフチゾキシム（Ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ、ＣＺＸ）、セフメノキシム（Ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｍｅ、ＣＭＸ）、セフピロム（Ｃｅｆｐｉｒｏｍｅ、ＣＰＲ）、セフェピム（Ｃｅｆｅｐｉｍｅ、ＣＦＰＭ）、セフォゾプラン（Ｃｅｆｏｚｏｐｒａｎ、ＣＺＯＰ）等のセファロスポリン系抗生物質や、クリンダマイシン（Ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ、ＣＬＤＭ）、リンコマイシン（Ｌｉｎｃｏｍｙｃｉｎ、ＬＣＭ）、エリスロマイシン（Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ、ＥＭ）、クラリスロマイシン（Ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ、ＣＡＭ）、ロキタマイシン（Ｒｏｋｉｔａｍｙｃｉｎ、ＲＫＭ）等のマクロライド・リンコマイシン系抗生物質や、ミノサイクリン（Ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ、ＭＩＮＯ）、ドキシサイクリン（Ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ、ＤＯＸＹ）等のテトラサイクリン系抗生物質や、キノロン（ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、クロラムフェニコール（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ、ＣＰ）、リファマイシン（ｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＲＦＭ）、スルホンアミド（ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅ、ＳＡ）薬、コトリモキサゾール（ｃｏｔｒｉｍｏｘａｚｏｌｅ）、オキサゾリジノン（ｏｘａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ）等や、ロキシスロマイシン（Ｒｏｘｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ、ＲＸＭ）、バンコマイシン（Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ、ＶＣＭ）等の抗菌性抗生物質や、スパルフロキサシン（Ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ、ＳＰＦＸ）、シプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ、ＣＰＦＸ）、レボフロキサシン（Ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ、ＬＶＦＸ）トスフロキサシン（Ｔｏｓｕｆｌｏｘａｃｉｎ、ＴＦＬＸ）、フレロキサシン（Ｆｌｅｒｏｘａｃｉｎ、ＦＬＲＸ）等の合成抗菌剤を挙げることができるが、これらの中でもクリンダマイシン、ミノサイクリン（塩酸ミノサイクリン）、アンピシリン、クラリスロマイシンが好ましい。
本発明のサルコイドーシスの治療薬は、サルコイドーシスの予防薬としても用いることができ、有効成分であるＰ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質を医薬用の治療剤として用いる場合は、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。これら治療剤は、経口的又は非経口的に投与することができ、例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で経口的に投与することができ、あるいは、例えば溶液、乳剤、懸濁液等の剤型にしたものを注射の型で非経口投与することができる他、スプレー剤の型で鼻孔内投与及び経気道投与することもできる。
経口的に投与する製剤の場合、薬理学的に許容される担体としては、慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、例えば錠剤には乳糖、デンプン等の賦形剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロース等の崩壊剤等を配合することができ、懸濁液製剤には生理的食塩水アルコール等の溶剤、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等の溶解補助剤、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、レシチン等の懸濁化剤、グリセリン、Ｄ−マンニトール等の等張化剤、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩等の緩衝剤などを配合することができる。また必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加物を配合することもできる。非経口的に投与する製剤の場合、蒸留水、生理的食塩水等の水溶性溶剤、サリチル酸ナトリウム等の溶解補助剤、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール等の等張化剤、ヒト血清アルブミン等の安定化剤、メチルパラベン等の保存剤、ベンジルアルコール等の局麻剤を配合することができる。
また、本発明のサルコイドーシスの治療薬の投与量は、疾病の種類、患者の体重や年齢、投与形態、症状等により適宜選定することができるが、例えば成人に投与する場合、有効成分であるＰ．ａｃｎｅｓを標的とした抗生物質およびそれらの薬学的に許容される塩を通常１回量として約０．００１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜５０ｍｇであり、この量を１日１回〜３回投与するのが望ましい。本発明のサルコイドーシスの治療薬を非経口的に投与するには、たとえば、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、骨髄腔内投与、経粘膜投与及び経気道投与などを挙げることができるが、静脈内投与や皮下投与及び経気道投与が好ましい。
【実施例１】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
（結果）
［健常マウス肺の肺胞におけるＰ．ａｃｎｅｓの存在］
Ｐ．ａｃｎｅｓに対する既存の免疫反応があるのならば、健常肺においてＰ．ａｃｎｅｓを検出することが可能なはずである。従って本発明者らは、健常なＣ５７ＢＬ／６マウスから採取された新鮮凍結肺切片上で、Ｐ．ａｃｎｅｓの存在について免疫組織化学的な検討を行った。２〜５の円形顆粒（ｒｏｕｎｄ ｇｒａｎｕｌｅｓ）が集合するＰ．ａｃｎｅｓ陽性染色像を観察した。これらは全て、肺細胞により貪食され、その肺細胞の大半は肺胞に隣接していた（図１ａ，ｂ）。二重免疫染色により、Ｐ．ａｃｎｅｓ陽性細胞が、ＣＤ１１ｃ（図１ｄ）又はＤＥＣ２０５（図１ｅ）といった樹状細胞マーカーではなく、既知のマクロファージマーカーであるＦ４／８０（図１ｃ）を発現することが明らかになった（Ｂｌｏｏｄ．９５，１３８−１４６，２０００、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６，２０７１−２０７９，２００１）。さらに、上部気道を除去した、正常な肺のＲＴ−ＰＣＲ分析により、Ｐ．ａｃｎｅｓ−ゲノムの存在が明らかになり（図１ｆ）、免疫染色の結果をサポートする結果となった。
［定常状態の局所リンパ節におけるリンパ球のＰ．ａｃｎｅｓに対する特異的免疫応答］
末梢ＡＰＣｓは、定常状態においても、提示のために抗原を所属リンパ節に輸送する（Ｎａｔｕｒｅ．３９２，２４５−２５２，１９９８、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，６７５６−６７６４，２００１）、また、Ｐ．ａｃｎｅｓは、皮膚又は口腔及び腸の粘膜表面に常在する（Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．５８７−６０２，１９９５）。正常肺リンパ節におけるＰ．ａｃｎｅｓ特異的免疫反応をテストするため、本発明者らは先ず、ＲＴ−ＰＣＲにより、他のリンパ節と同様に正常肺リンパ節にもＰ．ａｃｎｅｓゲノムが存在することを証明した（図２ａ）。本発明者らはその後、これらＬＮｓにおいて、Ｐ．ａｃｎｅｓに対して特異的な免疫反応が確立されているかをテストし、肺所属リンパ節のリンパ球が、鼠径部、肝臓、及び膵臓のリンパ節細胞と同様に、Ｐ．ａｃｎｅｓに反応して特異的に増殖することを見出した（図２ｂ）。
［肺及び肝臓の肉芽腫は、未処置マウスへのＰ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞の経静脈的養子移植により、誘発される］
本発明者らは次に、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞を経静脈的に移入すると、正常肺及び正常肝にも肉芽腫が形成されるかどうかを検定した。本発明者らは、Ｐ．ａｃｎｅｓの免疫付与が繰返し行われた足床（ｆｏｏｔｐａｄ）の所属リンパ節から、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞を入手し、正常なマウスの尾静脈に注射した。２×１０６のＴ細胞移植の２週間後、本発明者らは、肺及び肝臓の類上皮細胞及び単核細胞の集合体としての肉芽腫の変化を観察した（図３ａ，ｂ）。一方対照実験において未感作Ｔ細胞の養子移植はそのような結果を生み出さなかった（図３ｃ，ｄ）。
［Ｐ．ａｃｎｅｓの反復免疫付与により、肺サルコイドーシスに酷似する肺肉芽腫が誘発される］
上記移植モデルの応用モデルとして、本発明者らは足床経由の反復免疫付与により、正常マウス肺に経循環的なＰ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞の供給を、継続的に誘導した。特徴的な肉芽腫が、主にこのように処置されたマウスの肺の胸膜下、及び気管支血管周囲（ｐｅｒｉｂｒｏｎｃｈｏｖａｓｃｕｌａｒ）領域に形成された（図４ａ）。免疫組織化学的な分析により、肉芽腫は、中核原提示細胞、及び周辺部のＣＤ４陽性Ｔ細胞から成ることが明らかになった（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６，６７１−６７９，２００２）（図４ｂ，ｃ）。さらに、これらＣＤ４陽性Ｔ細胞は、ＩＬ−４ではなく、ＩＦＮ−γを発現したことから、肉芽腫はＴｈ１型（図４ｄ）であることが示唆されている。本発明者らはＢＡＬ細胞の数を数えることにより、肉芽腫の病変の程度を予測することができた。ＢＡＬ液中の全白血球及びリンパ球の合計数の増加は、投与回数に伴って増加したが（図４ｅ，ｆ）、二回注射されたグループの中では、ＣＤ４／８細胞の比が最も大きかった（図４ｇ）。
この実験的モデルで得られた結果は、サルコイドーシス患者の特徴と合致したため、本発明者らは血清カルシウムレベル及びＡＣＥ（アンギオテンシン転換酵素）活性を評価することにより、それらの血清学的類似性を検証した（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＨＥＳＴ Ｖｏｌ．１，１５３３−１５８３，１９９９）。血清カルシウムは２回注射されたグループで最も増加し（図４ｈ）、ＡＣＥ活性は抗原投与量依存的に増加した（図４ｉ）。サルコイドーシスにおいて、しばしば病変がみられる肝臓及び脾臓の免疫組織化学的分析により、頻繁に免疫付与されていたマウスにおいて、肝臓に多数の肉芽腫（図４ｊ）及び、脾臓の赤脾髄にＣＤ４陽性Ｔ細胞の異常な蓄積が見られた。
［健常肺的常在Ｐ．ａｃｎｅｓが増加すると肺肉芽腫形成が増進される］
正常な肺に常在するＰ．ａｃｎｅｓが肺肉芽腫をもたらすのであれば、その数量が病変の程度に影響するはずである。この仮説を検証するために、本発明者らは、免疫付与の前の健常マウス肺にＰ．ａｃｎｅｓ生菌を前投与した。気管内単独投与により肉芽腫が誘発される可能性を排除するために、本発明者らは、実験の初期段階及び最終段階のいずれにおいてもコントロールの肺に肉芽腫が存在していないことを確認した。３回の免疫付与の後に回収されたＢＡＬ内の白血球の総数は前投与されたＰ．ａｃｎｅｓの数量依存的に増加し（図５ａ）、肉芽腫病変の組織学的検討の結果はこの所見と一致した（図５ｂ）。
［抗生物質治療はマウスサルコイドーシス肺の肉芽腫病変を軽減する］
常在するＰ．ａｃｎｅｓの重要性をさらに評価するために、本発明者らは、抗菌性物質である塩酸ミノサイクリン（ＭＩＮＯ）及びクリンダマイシン（ＣＬＤＭ）を用いて健常肺に常在するＰ．ａｃｎｅｓの数を免疫付与に先立って減らした（Ｊ．Ｅｕｒ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．１５，５１−５５，２００１、Ｓｅｍｉｎ．Ｃｕｔａｎ．Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．２０，１３９−１４３，２００１）。３回目の免疫付与から２週間後、ＭＩＮＯ−及びＣＬＤＭ−処置マウスには、ＢＡＬ白血球総数の大幅な減少が見られた（図６ａ）；これら２グループのＣＤ４陽性ＢＡＬ細胞数はそれぞれ、５３．５％及び４２．１％減少した（図６ｂ）。組織学的検証により、肉芽腫の病変の減少も明らかになった（図６ｃ）。
また、上記塩酸ミノサイクリン及びクリンダマイシンと同様に、ペニシリン系：アンピシリン（ＡＢＰＣ）、セフェム系：セファゾリンナトリウム（ＣＥＺ）、アミノ配糖体系：硫酸ゲンタマイシン（ＧＭ）、ホスホマイシン系：ホスホマイシン（ＦＯＭ）、マクロライド系：クラリスロマイシン（ＣＡＭ）についてのＢＡＬ（気管支肺胞洗浄）中のＣＤ４陽性細胞数比を調べた。また、ＭＩＮＯ ｓｈｏｒｔ、ＣＬＤＭ ｓｈｏｒｔとして短期間投与群（肉芽腫誘導モデルマウスの処置後一ヶ月後（最終免疫時）より抗生物質投与）についても調べた。結果を図７に示す。図７は、コントロール（ＰＢＳ）群を１００とした％表示で示されている。その結果、前述のＭＩＮＯ（５３．５％改善）、ＣＬＤＭ（４２．１％改善）に加え、ＡＢＰＣ（４６．１％改善）、ＣＡＭ（４８．３％改善）、ＣＬＤＭ ｓｈｏｒｔ（７４．３％改善）投与群において、ＢＡＬ白血球総数の大幅な減少が見られた。ＧＭでは効果が見られなかったが、これはＧＭが元来Ｐ．ａｃｎｅｓに対して低感受性であることと合致する。
［抗生物質投与により肺内常在のＰ．ａｃｎｅｓゲノムは減少する］
抗生物質によりマウス肺内常在のＰ．ａｃｎｅｓが減少するかについて、ＰＢＳをコントロールとするＰＣＲで調べた結果を図８に示す。その結果、ＭＩＮＯ及びＣＬＤＭを用いた場合にＰ．ａｃｎｅｓが減少することがわかった。また、ＧＭを用いた場合、ＭＩＮＯやＣＬＤＭを用いた場合と比較して、Ｐ．ａｃｎｅはそれほど減少しなかったが、これはＧＭが元来Ｐ．ａｃｎｅｓに対して低感受性であることと合致するものであり、図７に示すＢＡＬの結果と呼応している。
［肉芽腫病変の改善は抗生物質の抗菌作用によりもたらされる］
サルコイドーシスに対して抗生物質としての機能を有するＭＩＮＯとＭＯＮＯとが、非特異的な免疫抑制現象を引き起こしているかにつき調べた。ＭＩＮＯ及びＣＬＤＭが耳腫脹の大きさや膵臓値を改善するかにつき調べた結果を図９に示す。その結果、コントロールであるＰＢＳと顕著な差はみられなかった。このことから、肉芽腫病変の改善が、純粋な抗生物質の抗菌作用によりもたらされたことがわかった。
【実施例２】
（考察）
生物は常に異種抗原にさらされているが、肺の下気道は不可侵の無菌空間であり、病原体の肺への侵入が肺の疾患を引き起こすと考えられてきた。この前提に基づき、肺疾患の動物モデルは、気管、鼻腔、又は抗原塞栓肺血管を経由した抗原の強制的投与に立脚していた（Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８，１５０３−１５１５，２００１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６，３４２３−３４３９，２００１、Ｎａｔｕｒｅ．３９２，２４５−２５２，１９９８、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１０８，３５２−３６４，２００３）。しかしながら、臨床医は病原菌への明らかな曝露のない原因不明の肺疾患、特に間質性肺疾患にしばしば直面している。従って本発明者らは、ある一定の条件下で病原体となりうる生物が健常肺に常在するのかもしれないと推測した。
Ｐ．ａｃｎｅｓが健常者の皮膚及び粘膜表面に分布し、尋常性ざ瘡（ａｃｎｅｖｕｌｇａｒｉｓ）の病原となり（Ｓｅｍｉｎ．Ｃｕｔａｎ．Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．２０，１３９−１４３，２００１）また実験モデルにおいて肉芽腫形成（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５，１２５７−１２６６，２００２）を顕著に誘導することから、Ｐ．ａｃｎｅｓは病原菌の有力候補と見られている。実際、先行の報告は、Ｐ．ａｃｎｅｓとサルコイドーシスの関係を強調している（Ｌａｎｃｅｔ．３５４，１２０−１２３，１９９９、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４０，１９８−２０４，２００２）。上述のように、本発明者らは免疫染色により正常なマウスの肺胞細胞のＰ．ａｃｎｅｓを同定した（図１ａ，ｂ）。これらＰ．ａｃｎｅｓ含有細胞は、ＣＤ１１ｃ又はＤＥＣ２０５ではなくＦ４／８０を発現しており、肺において抗原を貪食し、抗原情報を樹状細胞へ伝播するというマクロファージの既知の知見と一致している（図１ｃ〜ｅ）（Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１６２，Ｓ１５１−Ｓ１５６，２０００、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．８１，３４３−３５１，１９９４）。健常肺に、Ｐ．ａｃｎｅｓを貪食している抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）が存在するという引き続いて、本発明者らは正常なマウスの肺所属リンパ節におけるＰ．ａｃｎｅｓに対する免疫反応の存在を調べた。確かに、正常な肺リンパ節のリンパ球はＰ．ａｃｎｅｓ特異的な増殖を示しており（図２ｂ）、このことは、これらの細胞が定常状態において既に肺由来のＡＰＣによりＰ．ａｃｎｅｓに対する免疫応答を確立していることを示唆している。
本発明者らは次に、Ｐ．ａｃｎｅｓ感作Ｔリンパ球が、人工的な抗原定着化（ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｃｈｏｒｉｎｇ）がなくても肺の炎症を引き起こすと仮定した。Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞の未処置マウスへの養子移植は、肺及び肝の肉芽腫変化をもたらした（図３ａ）。このことはＰ．ａｃｎｅｓに感作した肺外リンパ節のＣＤ４陽性Ｔ細胞は、経循環的に正常な肺に流入することによって肉芽腫形成を誘導し得ることを示している。従って本発明者らは、正常マウスに、継続的なＰ．ａｃｎｅｓ肺外感作をすることでＰ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞が継続的に供給され、慢性的な肺肉芽腫形成が起こると仮定した。これらのマウスには、胸膜下、胸膜、及び血管周囲領域などのリンパに富む領域（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．１，２３９５−２４０９，１９９７）に特徴的な肺肉芽腫が見られ（図４ａ）、典型的な肉芽腫（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌ．２，２３９５−２４０９，１９９７）（図４ｂ，ｃ）及びＴｈ１サイトカインの発現が見られた（図４ｄ）。これらの特徴は肺サルコイドーシスの特徴と酷似している（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｕｌｍ．Ｍｅｄ．８，４３５−４４０，２００２、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＨＥＳＴ Ｖｏｌ．１，１５３３−１５８３，１９９９）。また、モデルマウスではＢＡＬ内ＣＤ／ＣＤ８細胞比の増加（図４ｇ）に加えて、ＡＣＥ活性の増加（図４ｉ）及びカルシウムレベルの上昇（図４ｈ）が認められた。これらの所見は、サルコイドーシス患者の血清カルシウムレベル及びＢＡＬ ＣＤ４／ＣＤ８比の正の相関を示した先行研究と一致している（Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．１１０，６８７−６９３，２００１）。さらに、本発明者らは、サルコイドーシスにおいて頻繁に影響を受けている肝臓と脾臓について、このモデルマウスにおいても同様の肺外病変を見出した（図４ｊ，ｋ）（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３、Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＨＥＳＴ Ｖｏｌ．１，１５３３−１５８３，１９９９）。以上より、Ｐ．ａｃｎｅｓ反復免疫付与モデルには、サルコイドーシス患者との著しい類似性が認められた。
Ｐ．ａｃｎｅｓ感作Ｔ細胞の経循環的な肺内への流入は肉芽腫の形成を誘発しうるので（図３ａ）、Ｐ．ａｃｎｅｓを貪食している肺ＡＰＣと肺リンパ節内Ｔ細胞の相互作用は肉芽腫の発生に不可欠であると考えた。この点を確認するために、健常肺内に常在するＰ．ａｃｎｅｓの総量の変化が肺肉芽腫形成に影響を与えるか否かを調べた。予想通り、抗菌性物質治療によりＰ．ａｃｎｅｓを減少させると、肺の肉芽腫病変が減少したのに対して、Ｐ．ａｃｎｅｓの肺内前投与は、肺の病変を悪化させた（図６ａ，ｂ）。これらの結果は、常在しているＰ．ａｃｎｅｓが、肺外Ｐ．ａｃｎｅｓ感作により肺肉芽腫形成に極めて重要な役割を果たしているばかりでなく、肺サルコイドーシス治療としての抗菌性物質による除菌療法の臨床的有用性の可能性も示唆している。
サルコイドーシスの原因は現在に至るまで不明とされている。主に皮質ステロイドによる免疫抑制療法が、この疾患に対して５０年以上も用いられてきたが、慢性的な肺サルコイドーシスに対するステロイド治療の長期的な効果については、未だに議論中であり（Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３）、治療後の再発率の高さがしばしば臨床的問題となっている（Ｃｈｅｓｔ．１１１，６２３−６３１，１９９７）。本実施例においては、肺サルコイドーシスと著しく類似している新規のマウス肺肉芽腫モデルを作製した。本発明者らが提示したように、もしＰ．ａｃｎｅｓが健常者肺にも存在するのであれば、サルコイドーシス患者について報告されているような、独特の遺伝的背景をもつ人間においては（Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，１２２４−１２３４，１９９７、Ｌａｎｃｅｔ．３６１，１１１１−１１１８，２００３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７，６７５６−６７６４，２００１）、尋常性ざ瘡のような肺外の領域においてもＰ．ａｃｎｅｓの過剰な感作に引き続いて、肺の病変がおきる可能性がある。従って、この病原体の根絶は、サルコイドーシスの従来の免疫抑制治療に先駆けて考慮されるべきである。本発明者らはこの新しい肺サルコイドーシスの見解が更なる研究に値し、新規の治療戦略の基礎を提供することを提言する。
【実施例３】
（材料と方法）
［マウス］
５〜７週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、日本クレア社（日本、静岡県）又は日本エスエルシー社（日本、東京都）から入手し、東京大学医学系研究科分子予防医学教室の動物用施設内で、特定病原体除去（ＳＰＦ）条件下においた。全ての動物実験は、東京大学の指針に従って行った。
［免疫染色］
以下の抗−マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）を使用した。
ＣＤ４（クローン；ＲＭ４−５）、ビオチン化ＩＦＮ−γ（ＸＭＧ１．２）、ビオチン化ＩＬ−４（ＢＶＤ６−２４Ｇ２）−以上全てＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ社製（カリフォルニア、サンディエゴ）−、ビオチン化Ｆ４／８０（ＣＩ：Ａ３−１）、ＣＤ１１ｃ（Ｎ４１８）−以上いずれもＳｅｒｏｔｅｃ社製（イギリス、オックスフォード）−、ＤＥＣ−２０５（ＮＬＤＣ−１４５；ＢＭＡ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製Ａｕｇｓｔ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、及び原形質膜のリポテイコ酸認識用のＰ．ａｃｎｅｓに対するマウスｍＡｂ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１）。
２次抗体として、アルカリフォスファターゼ標識化抗ラットＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）、アルカリフォスファターゼ標識化抗ハムスターＩｇＧ抗体（Ｃｅｄｅｒｌａｎｅ社製、Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）又はアビジン（ニチレイ社製、東京、日本）、及びペルオキシダーゼ標識化抗ラットＩｇ抗体（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ社製、Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、又はペルオキシダーゼ標識化抗マウスＩｇ抗体（ＤＡＫＯ社製、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用した。
一重及び二重の免疫染色を間接的免疫アルカリフォスフォターゼ及び免疫ペルオキシダーゼ法により行った（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３，１８６５−１８７８，１９９６）。二重免疫染色については、アセトン固定化６μｍ新鮮凍結組織切片を抗ＣＤ４抗体に続いて、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８抗ラットＩｇ抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社製、Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇｏｎ）を用いてインキュベートした。次いで、ビオチン化ＩＦＮ−γ又はビオチン化ＩＬ−４を用いてインキュベートし、さらに、Ａｌｅｘａ５９４−結合アビジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ社製）を用いてインキュベートし、蛍光顕微鏡観察により観察した（Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９７，３３−４２，２０００）。
［ＲＴ−ＰＣＲ］
１μｇの全ＲＮＡサンプルを肺、並びにＳＰＦマウスの肺、肝臓、皮膚及び膵臓の所属リンパ節試料から、トライゾル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて、製造者の指示通りに単離した。その後ＲＮＡサンプルをｃＤＮＡへ逆転写し、増幅した（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２，１９３３−１９４１，１９９８）。Ｐ．ａｃｎｅｓの１６ｓリボソームＲＮＡのＰＣＲ産物を、２．５％のアガロースゲル上で電気泳動した。臭化エチジウム染色により可視化されたバンドは各ｍＲＮＡ産物の予想されたサイズであった。Ｐ．ａｃｎｅｓのオリゴヌクレオチドプライマーを文献（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４０，１９８−２０４，２００２）記載に準じて設計した：ｆｏｒｗａｒｄ、５’−ＧＣＧＴＧＡＧＴＧＡＣＧＧＴＡＡＴＧＧＧＴＡ−３’（配列番号１）；ｒｅｖｅｒｓｅ、５’−ＴＴＣＣＧＡＣＧＣＧＡＴＣＡＡＣＣＡ−３’（配列番号２）。実験中のＰ．ａｃｎｅｓのコンタミネーションは、バッファーコントロールでチェックした。内部標準としてのＧＡＰＤＨのプライマーは、文献（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１）記載のものを用いた。ＰＣＲ条件は：９５℃で５分間加温した後、９５℃で３０秒、５８℃で６０秒、７２℃で６０秒のサイクルを４０サイクル繰返し、最後に７２℃で１０分間加温した。
［抗原特異的増殖アッセイ］
インビトロでの細胞増殖アッセイを、文献（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，３５−４９，２００１）記載の方法に準じて行った。すなわち、通常マウスの気管支周囲、腋窩、鼠径、肝臓、膵臓のリンパ節細胞（１０５細胞／１９０μｌ／ウェル）を、抗原（Ｐ．ａｃｎｅｓ及びＯＶＡ；１０μｇ／培養液１０μｌ）を用いて３７℃で７２時間刺激した。インキュベーション後、細胞増殖をＰｒｅｍｉｘ ＷＳＴ−１細胞増殖測定システム（タカラバイオ社製、滋賀、日本）を用いて、製造者の指示通りに測定した。
［Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ヘルパーＴ細胞の養子移植］
Ｐ．ａｃｎｅｓ感作ＣＤ４陽性Ｔ細胞を、正常マウス及び３回免疫付与されたマウスの鼠径部より単離した。免疫付与は、熱死滅処理した４００μｇのＰ．ａｃｎｅｓ（ＡＴＣＣ１１８２８、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ製、Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ）とフロイント完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ社製、Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ）を、２週間隔で足床に皮下注射して実施した。ＣＤ４陽性細胞を、ＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ社製、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて製造者の指示通りに単離した。ＣＤ４陽性細胞集団の純度は９４％以上で、免疫染色流動細胞計測法によって確認された通りであった。単離されたＣＤ４陽性細胞（２×１０６細胞／ＰＢＳ２００μｌ）を、正常マウスの尾静脈に注射し、二週間後に肺を組織学的に分析した。
［気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）細胞のフローサイトメトリー分析］
ＢＡＬ細胞を２％のＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ社製、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）及び２ｍＭのＥＤＴＡを含有する無菌ＰＢＳ ０．８ｍｌを５回注射することにより収集した。ＢＡＬ白血球総数は血球計数器により計算した。ＢＡＬ細胞を、ＥＰＩＣＳ Ｅｌｉｔｅ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社製、Ｍｉａｍｉ、Ｆｒｏｌｉｄａ）で分析する前、ラット抗マウスＣＤ１６／ＣＤ３２（クローン；２．４Ｇ２）ｍＡｂを用いて、ＦｃＲを介する結合をブロックするためにプレインキュベートし、その後、いずれもＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ社製のＦＩＴＣ結合抗ＣＤ４（Ｈ１２９．１９）ｍＡｂ及びＰＥ結合抗ＣＤ８α（５３−６．７）ｍＡｂを用いて４℃で２５分間インキュベートした。
［血清学的分析］
血清カルシウムレベルを、Ｆｕｊｉ ＤＲＩ−ＣＨＥＭ ５５００Ｖ（Ｆｕｊｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ社製、東京、日本）により測定し、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）活性をＡＣＥ ｃｏｌｏｒ（Ｆｕｊｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ社製、東京、日本）により製造者の指示どおりに測定した。
［抗生物質治療］
塩酸ミノサイクリン（ＭＩＮＯ）（Ｗｙｅｔｈ Ｌｅｄｅｌｅ社製、東京、日本）及びクリンダマイシン（ＣＬＤＭ）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製、東京、日本）を使用した。第一日目に１３３μｇのＭＩＮＯ、及び１．６ｍｇのＣＬＤＭを気管内投与（ｉ．ｔ．）する。その後、同用量の各抗生物質を免疫付与前の一週間、毎日腹腔内に投与（ｉ．ｐ．）したあと、腹腔内注射を週に３回行う。実験の間、マウスには上記と同量の各抗生物質を含有した水を与えた。同様に、アンピシリン（ＡＢＰＣ）、セファゾリンナトリウム（ＣＥＺ））、硫酸ゲンタマイシン（ＧＭ）、ホスホマイシン（ＦＯＭ）、クラリスロマイシン（ＣＡＭ）を使用し、これら抗生物質の一回投与量も同じく、成人常用最大量を体重換算して設定した。
［統計分析］
二つの要素、すなわち、要因の分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びＦｉｓｈｅｒ’ｓ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ｌｅａｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｅｃｅを用いて、差異を評価した。０．０５未満のＰ値（Ｐ．ｖａｌｕｅ＜０．０５）は統計的に有意であると判断した。
【産業上の利用可能性】
本発明によると、全身性肉芽腫症の一つであるサルコイドーシスの治療薬やサルコイドーシスの治療方法を提供することができる。
【配列表】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質を有効成分とすることを特徴とするサルコイドーシスの治療薬。
【請求項２】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする請求項１記載のサルコイドーシスの治療薬。
【請求項３】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする請求項１又は２記載のサルコイドーシスの治療薬。
【請求項４】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質をサルコイドーシス患者に投与することを特徴とするサルコイドーシスの治療方法。
【請求項５】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする請求項４記載のサルコイドーシスの治療方法。
【請求項６】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする請求項４又は５記載のサルコイドーシスの治療方法。
【請求項１】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質を有効成分とすることを特徴とするサルコイドーシスの治療薬。
【請求項２】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする請求項１記載のサルコイドーシスの治療薬。
【請求項３】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする請求項１又は２記載のサルコイドーシスの治療薬。
【請求項４】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質をサルコイドーシス患者に投与することを特徴とするサルコイドーシスの治療方法。
【請求項５】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質から選ばれる１種又は２種以上の抗生物質であることを特徴とする請求項４記載のサルコイドーシスの治療方法。
【請求項６】
プロピオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）を標的とした抗生物質が、塩酸ミノサイクリン、クリンダマイシン、アンピシリン又はクラリスロマイシンであることを特徴とする請求項４又は５記載のサルコイドーシスの治療方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００２６２３
【国際公開日】平成１７年１月１３日（２００５．１．１３）
【発行日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１１４３３（Ｐ２００５−５１１４３３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／００９８６１
【国際出願日】平成１６年７月２日（２００４．７．２）
【出願人】（５０３３６０１１５）独立行政法人科学技術振興機構 (1,734)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年１月１３日（２００５．１．１３）
【発行日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／００９８６１
【国際出願日】平成１６年７月２日（２００４．７．２）
【出願人】（５０３３６０１１５）独立行政法人科学技術振興機構 (1,734)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]