ジオレイルパルミトイルグリセリドの製造方法
1,3-ジオレイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）を含有する組成物の製造方法は、約２〜約１２のヨウ素価（ＩＶ）を有するパーム油ステアリンを、オレイン酸又はそれらの非グリセリドエステルとともに、酵素によるエステル交換にかけることを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はある方法に関するものである。特に、本発明は、トリグリセリドである1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯともいう）の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリグリセリドは多くの製品、特に食品製品の重要な成分である。トリグリセリド、1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリドは人乳脂肪の重要なグリセリド成分である。
【０００３】
人乳脂肪中に存在する主要脂肪酸を類似した量で含む脂肪組成物は、植物起源のオイル及び脂肪から誘導されうる。しかし、自然源から誘導されたミルク代替脂肪の組成と人乳脂肪の組成との間には大きな違いが残っている。この違いは、植物起源の多くのグリセリドは、２位が不飽和であることによって生じる。対照的に、多量のパルミチン酸が、人乳脂肪中のグリセリドの２位を占めている。
【０００４】
グリセリドの位置に沿った酸の分布の違いは、重要な栄養上の結果をもたらすと考えられる。栄養上重要ないくつかの乳脂肪のトリグリセリド中の脂肪酸の分布は、Freemanら（J. Dairy Sci., 1965, p. 853）によって研究された。Freemanらは人乳脂肪が、反芻動物の乳脂肪よりも、多い割合の２位のパルミチン酸と、多量の１、３位のステアリン酸及びオレイン酸を含んでいることを報告した。乳児によるトリグリセリドの２位のパルミチン酸のより大きな吸収は、Filerら（J. Nutrition, 99, pp. 293-298）によって報告されており、Filerらは、人乳脂肪と比較して、乳児によるバター脂肪の比較的低い吸収は、その脂肪のグリセリド位置間におけるパルミチン酸の実質的に均一な分布に起因することを示唆している。
【０００５】
自然源から得られるトリグリセリド脂肪又はオイルの化学的及び／又は物理的特性を人乳脂肪のそれにもっと近づけて合わせるためには、グリセリド位置上の脂肪酸残基の分布を制御する必要がある。
【０００６】
欧州特許出願公開第0209327号は、トリグリセリドである1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）を含むミルク代替脂肪組成物を開示している。欧州特許出願公開第0209327号によれば、これらの脂肪組成物は、より飽和された2-パルミトイルグリセリドから実質的になるグリセリドを含む脂肪混合物に、転位触媒、例えばリパーゼ（これはグリセリドの１位及び３位における活性が位置特異的である）の作用を受けさせることによって得ることができる。この種の酵素過程も英国特許第1577933号明細書に記載されている。触媒の影響下で、不飽和のフリーの脂肪酸又はそれらのアルキルエステルとの交換によって2-パルミトイルグリセリドの１位及び３位に不飽和脂肪酸残基が導入されうる。
【０００７】
国際出願公開WO 2005/036987号パンフレットは、パルミチン酸が多いオイルを、オレイン酸などの不飽和脂肪酸と反応させることによって、脂肪ベースを製造する方法を開示している。この脂肪ベースの全パルミチン酸残基量はたかだか３８％であり、この脂肪酸残基の少なくとも６０％がグリセリド骨格の２位にある。関連する開示を、同日に出願された国際出願公開WO 2005/037373号パンフレットに見ることができる。
【０００８】
ＯＰＯを製造する方法は、米国特許第5,658,768号明細書中にも開示されている。この方法は、組成物中のトリ飽和物の量を低減するためのさらなる酵素的変換を含んでいる。
【０００９】
欧州特許出願公開第0882797号公報は、水の活性を制御した条件下で、1,3-特異的酵素を用いたＡＢＡトリグリセリドを製造する方法を開示している。
【００１０】
ＯＰＯトリグリセリドを製造するための選択的方法は、Schmidら, Biotechnology and Bioengineering, vol 64, no 6, 1999, 679-684に開示されている。パーム油からのＯＰＯの合成は、Ming-Jungら, JAOCS, vol 81, no 6, 2004, 525-532に記載されている。どちらの場合も、ＯＰＯはトリパルミチン（ＰＰＰ）から合成された。
【特許文献１】欧州特許出願公開第0209327号公報
【特許文献２】欧州特許出願公開第0209327号公報
【特許文献３】英国特許第1577933号明細書
【特許文献４】国際出願公開WO2005/036987号パンフレット
【特許文献５】国際出願公開WO2005/037373号パンフレット
【特許文献６】米国特許第5,658,768号明細書
【特許文献７】欧州特許出願公開第0882797号公報
【非特許文献１】Freemanら, J. Dairy Sci., 1965, p. 853
【非特許文献２】Filerら, J. Nutrition, 99, pp. 293-298
【非特許文献３】Schmidら, Biotechnology and Bioengineering, vol 64, no 6, 1999, 679-684
【非特許文献４】Ming-Jungら, JAOCS, vol 81, no 6, 2004, 525-532
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）の製造のためのより有効な方法を提供する必要性が残っている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、1,3-ジオレイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）を含む組成物の製造方法を提供し、本方法は、約２〜約１２のヨウ素価（ＩＶ）をもつパーム油ステアリン(palm oil stearin)に、オレイン酸又はその非グリセリドエステル（例えば、オレイン酸と１〜６の炭素原子を有するアルコールとのアルキルエステル）とともに、酵素によるエステル交換を受けさせる工程を含む。
【００１３】
一つの態様においては、本発明の方法は以下のステップを含む。
(i) トリパルミトイルグリセリドを含み、かつ約２〜約１２のヨウ素価を有するパーム油ステアリンを準備するステップ；
(ii) 任意選択により、上記パーム油ステアリンを漂白し且つ脱臭するステップ；
(iii) 上記パーム油ステアリンを、オレイン酸又はその非グリセリドエステルとともに酵素によるエステル交換反応を受けさせるステップ；
(iv) 上記(iii)で得られた生成物からパルミチン酸又はパルミチン酸の非グリセリドエステルを分離するステップ；及び
(v) 任意選択により、上記(iv)で得られた生成物を乾式分画して、増大した量のＯＰＯを含む画分（フラクション）を形成させるステップ。
【００１４】
本発明の方法は、本方法の生成物中に形成されたＯＰＯの量を増大させることを目的としている。本方法のさらなる目的は、生成物の栄養学的品質の向上である。
【００１５】
予期せぬことに、トリパルミトイルグリセリドの高い純度を有するパーム油ステアリン（例えば、１未満のヨウ素価（ＩＶ）を有するもの）を用いた場合には、本方法はうまく作用しないことを発見した。理論に拘束されることは望まないが、本発明者らは、このことは低い酵素的エステル交換、おそらく酵素阻害によるかもしれないと考えている。しかし、驚くべきことに、トリパルミトイルグリセリドについて低い純度であり、且つ典型的には２〜１２、好ましくは３〜１１、より好ましくは４〜１１、特に６〜１１、たとえば、８〜１０、あるいは８と１０の間のヨウ素価を有するパーム油ステアリンを用いることによって良好な結果が達成されることを発見した。ヨウ素価は、当分野で公知の標準法（例えば、ASTM D5554-95 (2001)）に準拠して測定される。
【００１６】
ＯＰＯ組成物の品質は、組成物中の成分であるトリグリセリドの炭素数から決定できる。本方法のための反応原料グリセリドはＰＰＰであり、４８の炭素数（Ｃ４８）を有し、生成物であるＯＰＯは５２の炭素数を有し、ＯＰＰ及びＯＯＯはそれぞれ５０及び５４の炭素数を有する。生成物中のＯＯＯ、ＰＰＰ、及びＯＰＰ量を最小化する一方、ＯＰＯの量は最大化することが望ましい。グリセリドの２位のパルミトイル基の存在（すなわち、パルミチン酸残基）は、特に重要である。しかし、生成物の品質の決定において、１-及び３-パルミトイルグリセリド、例えば、ＰＰＰ及びＯＰＰの公知の低い消化率を考慮に入れる必要がある。したがって、生成物の品質は、Ｃ５４以外のトリグリセリドの量、すなわち（１００−Ｃ５４）に、（（３×Ｃ４８）＋（２×Ｃ５０）＋（Ｃ５２））に対する全（Ｃ４８＋Ｃ５０＋Ｃ５２）の割合（これはトリグリセリド中のパルミトイル残基の数に対する因子を含んでいる）を乗じて、及び／又はグリセリドの２位のパルミチン酸残基の量によって、表すことができる。
【００１７】
本発明の方法によって製造した組成物又は画分は、以下の割合：
(１００−Ｃ５４)×[(Ｃ４８＋Ｃ５０＋Ｃ５２)／(３Ｃ４８＋２Ｃ５０＋Ｃ５２)]
に対して、５０より大きな、より好ましくは５２〜６０、例えば５３〜５９、あるいは５４〜５８、あるいは５５〜５７、あるいは５６〜５７の値であることが好ましい。炭素数、Ｃ４８〜Ｃ５４は、実施例で示した方法によって決定することが好ましい。
【００１８】
本発明の方法に用いるためのトリパルミトイルグリセリド（ＰＰＰ）の適切な原料は、パーム油ステアリンである。パーム油は、典型的には、トリパルミトイルグリセリド（ＰＰＰ、トリパルミチンともいう）を含めたトリ飽和脂肪酸グリセリドを最大１２質量％含んでいる。パーム油ステアリンは、質量で４部のトリパルミチンと１部の対称ジ飽和トリグリセリドを含みうる。したがって、本方法のステップ(i)で用いるパーム油ステアリンは、パーム油又はその誘導体を分画することによって提供されることが好ましい。このパーム油ステアリンは、全脂肪酸残基含有量を基準にして、少なくとも６０質量％、より好ましくは少なくとも７０質量％、例えば、少なくとも７５質量％、少なくとも８０質量％、又は少なくとも８５質量％、たとえば少なくとも９０質量％のパルミチン酸含有量を有することが好ましい。
【００１９】
本発明の方法のステップ(i)で用いるパーム油ステアリンは、パーム油の溶媒（湿式）分画、Lanza分画、又は乾式分画、例えば、パーム油の多段階向流乾式分画で得ることができる。このパーム油は、粗製パーム油、精製パーム油、パーム油の画分（例えば、乾式分画によって得られるもの）、パーム油のその他の誘導物、あるいはそれらの混合物であることができる。
【００２０】
ステップ(i)で用いるパーム油ステアリンは、2-パルミトイルグリセリドを、典型的には５０質量％より多い量で、例えば５５質量％より多い量で、又は６０質量％より多い量で含んでいることが好ましい。
【００２１】
上記パーム油ステアリンは約２〜約１２の、好ましくは約４〜約１１の、さらに好ましくは約６〜約１１の、例えば約８〜約１０のヨウ素価（ＩＶ）を有する。
【００２２】
パーム油ステアリンを酵素によるエステル交換にかける前に、パーム油ステアリンは典型的には任意選択によるステップ(ii)で精製されてもよく、このステップは漂白及び脱臭を含むことが好ましい。本発明の方法におけるパーム油ステアリンの漂白は、約９５℃より上、より好ましくは１００℃より上（例えば、１０５℃〜１２０℃）で行われる。脱臭ステップにおいては、典型的には２００℃より高い温度で、揮発性不純物がパーム油ステアリンから除去されて、脱臭されたパーム油ステアリンを生じる。この脱臭ステップで除去される不純物は、通常、フリー脂肪酸、アルデヒド、ケトン、アルコール、及びその他の炭化水素不純物を含む。この漂白と脱臭は、当分野で公知の標準条件下で行われ、単一工程又は２以上の工程で実施されうる。例えば、これらのステップは減圧下で実施でき（例えば、１０ｍｍＨｇ以下）、そこでパーム油ステアリンは不純物を揮発させることを助ける蒸気と接触させられる。パーム油ステアリンを漂白及び脱臭することは、本方法の収率向上を助けることができる。
【００２３】
「ステアリン」の用語には、本明細書で用いるように、少なくとも１０％の低融点成分が何らかの分画、例えば、乾式分画、Lanza分画、又は溶媒分画によってそこから除去されたトリグリセリド混合物又は脂肪ブレンドが含まれる。したがって、オレインの用語は、少なくとも１０％の高融点成分が何らかの分画、例えば、乾式分画、Lanza分画、又は溶媒分画によってそこから除去されたトリグリセリド混合物又は脂肪ブレンドを意味する。
【００２４】
本明細書で用いる、脂肪酸、脂肪アシル基の用語、及び関連する用語は、４〜２４の炭素原子、好ましくは１２〜２２の炭素原子を有する飽和又は不飽和の直鎖カルボン酸をいう。不飽和酸は、１つ、２つ、又はそれより多くの二重結合、好ましくは１つ又は２つの二重結合を含みうる。
【００２５】
アルキルの用語は、本明細書で用いるように、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝した飽和炭化水素をいう。
【００２６】
本発明の方法にしたがう酵素によるエステル交換は、生体触媒として１，３特異的リパーゼを用いて行うことが好ましい。この酵素によるエステル交換では、トリグリセリドの２位の脂肪酸は変化しない（例えば、２位の脂肪アシル基の１０モル％未満、より好ましくは５％未満、例えば１％未満しか本方法の間に変化しない）。
【００２７】
１，３リパーゼの影響下で、不飽和脂肪酸残基は、その他のグリセリドの脂肪酸残基との交換によって、あるいはより好ましくは脂肪混合物中でのエステル交換によって、2-パルミトイルグリセリドの１及び３位に導入されうる。交換は、不飽和フリー脂肪酸類、好ましくはオレイン酸、又はオレイン酸と１〜６の炭素原子を有するアルコールとのアルキルエステル類の間で起こることが好ましい。この方法で変性された2-パルミトイルグリセリドは、反応混合物から分離されうる。
【００２８】
本発明の方法における酵素によるエステル交換反応は、２位よりもむしろ１，３位で、パルミチン酸をオレイン酸で交換する。このエステル交換反応が行われて、典型的には、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、最も好ましくは少なくとも７０％の転化率で平衡に達するか又は平衡に近づく。
【００２９】
好ましくは、エステル交換反応において、パーム油ステアリンは、例えば、オレイン酸濃縮物（これは、６５質量％より高い、好ましくは７０質量％より高い、最も好ましくは７５質量％より高い濃度でのフリーのオレイン酸を含む）と混合される。あるいは、オレイン酸は、（好ましくは６５質量％より多い量の）オレイン酸、リノール酸、及び任意選択で１以上のその他の脂肪酸、を含む混合物として提供されうる。パーム油ステアリンとオレイン酸濃縮物との比は、好ましくは、質量基準で、０．１：１〜２：１、より好ましくは０．４：１〜１．２：１、なおさらに好ましくは０．４：１〜１：１、最も好ましくは１：１．１〜１：２である。反応は、３０℃〜９０℃、好ましくは５０℃〜８０℃、例えば、約６０℃〜７０℃の温度で行うことが好ましく、水と混和性の有機溶媒を用いるか又は用いずに、回分法又は連続法で実施できる。
【００３０】
酵素によるエステル交換反応の前に、用いる生体触媒システムの種類に応じて、水分を０．０５〜０．５５、好ましくは０．１〜０．５の水分活性に調節することが好ましい。この反応は、例えば、６０℃にて、撹拌タンク中又は充填床反応器中で、リパーゼＤ（以前はリゾパス・デレマール（Rhizopus delemar）として分類されていたリゾパス・オリザエ(Rhizopus oryzae)、Amano Enzyme社（日本）から）の濃縮物又はリゾムコール・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)の固定化濃縮物（Nobozymes A/S（デンマーク）のLipozyme RM IM）の上で行うことができる。
【００３１】
ステップ(iv)においてＯＰＯから、パルミチン酸とその他の脂肪酸、又はパルミチン非グリセリドエステル及びその他のグリセリドを分離するためには、（任意選択で、さらなる処理、例えば脂肪相の単離などの後で）エステル交換した混合物を蒸留することが好ましい。蒸留は低圧（例えば、１０mbar未満）かつ高温（例えば、２００℃より高い）で行い、生成物トリグリセリド画分から脂肪酸を除去することが好ましい。
【００３２】
ステップ(iv)で得られた組成物は、ステップ(v)で分画してオレイン画分（すなわち低融点画分）を回収することが好ましい。これは、溶媒分画、Lanza分画、又は乾式分画を用い、一段階、二段階、又は多段階分画法を用いて行うことができるが、一段階乾式分画を用いて行うことが好ましい。オレインは、エステル交換した混合物を多段向流乾式分画にかけることによって得ることもできる。
【００３３】
トリグリセリド画分の分画は、転化されていないトリパルミチン（ＰＰＰ）を、１５質量％未満、好ましくは１０質量％未満、より好ましくは８質量％未満の量に低下するまで除去する。ステップ(V)の後で得られるオレイン画分は、典型的には、さらに精製又は純化して全ての残存脂肪酸及び不純物を除去して、精製されたオレイン画分が製造される。
【００３４】
驚くべきことに、本発明の範囲内のヨウ素価を有するパーム油ステアリンを用いることが、満足できる生成物のためにステップ(V)での生成物のさらなる分画を必要としないことを意味しうることを発見した。
【００３５】
本方法は、ステップ(i)から(v)の前、その間、又は後に、さらなるステップ、例えば、部分的精製又は所望する成分の生成物の濃縮などを任意選択により含むこともできる。
【００３６】
本発明の方法においてステップ(iv)の後で得られる組成物、又はステップ(v)の後で得られるＯＰＯグリセリドの増大した量を含む画分は、その画分中の全グリセリドを基準にして、少なくとも１０質量％のＯＰＯ、より好ましくは少なくとも１５％、なおさらに好ましくは少なくとも２０質量％の、例えば少なくとも２５質量％もしくは３０質量％もしくは４０質量％のＯＰＯを含むことが好ましい。残りは、典型的にはその他の非ＯＰＯトリグリセリドを含み、少量のジグリセリド及びモノグリセリドをさらに含みうる。少量のフリー脂肪酸も存在しうる。この画分は、トリグリセリドの混合物を含む組成物であることが好ましく、その中では不飽和脂肪酸残基も含めた様々な脂肪酸残基が１及び３位の間でランダムに分配され、２位の脂肪酸残基の少なくとも半分はＣ１６及び／又はＣ１８の飽和の好ましくは実質的にパルミチン酸残基からなり、特に全体の２位の脂肪酸残基の６０〜９０質量％が好ましくはパルミチン酸である。好ましくは、本組成物のグリセリド中の脂肪酸残基の全て又は実質的に全て（例えば９９質量％より多く）が偶数炭素のものであることが好ましい。１位及び３位の不飽和脂肪酸残基は、ほとんどがオレイン酸及びリノール酸からなることが好ましい。本組成物は、１位及び３位を合わせたなかの飽和脂肪酸と少なくとも同じくらいの量（モル基準で）の２位の飽和脂肪酸を含むことが好ましく、さらに好ましくは（モル基準で）最大２倍まで含むことが好ましい。1,3-位は、不飽和Ｃ１８及び飽和Ｃ４〜Ｃ１４脂肪酸の両方を含むことが好ましい。
【００３７】
これらの脂肪酸の割合及び種類は、必要とする組成物の食品及び物性としての必要性にしたがって定めることができる。例えば、ミルク代替脂肪は液体状食餌中で血温で乳化することができるべきであり、したがって、好ましくはこの温度（３７℃）で溶融可能であるべきである。脂肪の融点はその脂肪酸組成によって定まり、したがって選択可能である。正しい脂肪酸組成を有する脂肪が、したがって、特定の所望する物理特性をもつ脂肪組成物を製造する目的で、本発明での使用のために選択できる。
【００３８】
本発明によって製造される最も好ましい組成物は、存在する全脂肪酸残基の質量を基準に、グリセリドの２位に存在するパルミチン酸を少なくとも４０質量％、より好ましくは少なくとも４５質量％、例えば少なくとも５０質量％有するトリグリセリドを含むものである。加えて、あるいはそれに替えて、本組成物はトリグリセリドの全質量を基準に８質量％未満のＳＳＳグリセリド（ここでＳは少なくとも１８炭素原子、好ましくは１８炭素原子を有する飽和脂肪酸を表す）を含んでもよく、かつ、存在する全脂肪酸残基を基準にして少なくとも４０質量％の１及び３位のオレイン酸残基を含んでもよい。
【００３９】
本発明の方法によって製造される脂肪組成物は、少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも５２％、なおさらに好ましくは少なくとも５３％、たとえば、少なくとも５４％又は少なくとも５５％又は少なくとも５６％の量でグリセリドの２位にパルミチン酸基を有すること（ＳＮ−２値）が好ましい。ｘ％のＳＮ−２値とは、グリセリド中の全パルミチン酸残基のうちｘ％（重量％又はモル％）が２位にあり、パルミチン酸残基の（１００−ｘ）％がグリセリドの１位及び３位に分配されていることを意味する。この値は、実施例２に示した方法で説明するように測定されることが好ましい。
【００４０】
本発明の方法で得られた組成物は、１０質量％の未満の1,2,3-トリ飽和グリセリド、好ましくは８質量％未満の1,2,3-トリ飽和グリセリドしか含まないことが好ましい。
【００４１】
本発明は、生成物をさらにＯＰＯについて精製する追加のステップを含んでもよい。
【００４２】
本発明の方法は、加えて又は代わりに、ＯＰＯ画分をその他の脂肪及び／又はオイル、好ましくは少なくとも一種の植物油とブレンドして脂肪ブレンドを形成するさらなるステップ(vi)を含むことができる。適切な脂肪は以下のものを含む脂肪である：最大で４０質量％の中鎖トリグリセリド；最大で３０質量％のラウリン脂肪；最大で５０質量％のその他の植物性脂肪；又は最大で４０質量％のバター脂肪；又はこれらの脂肪の画分もしくは混合物。特に、ラウリン脂肪、好ましくはパーム核油、が組成物中に加えられて、ミルク脂肪の組成物又はその溶融特性に合わせることを目的とするブレンド物をもたらすことができ、及び／又は植物油、例えば、ひまわり油、高オレインヒマワリ油、パーム核油、なたね油及び大豆油、ココナツ油、高オレインサフラワー油（これらはポリ不飽和脂肪酸グリセリドの高い含有量をもち、本組成物の食餌としての利点を向上させる）を含めることができる。このようにして、本発明の方法によって製造された組成物は、ミルク脂肪の組成又はその溶融特性に合ったブレンド物を好ましくは提供する。得られるブレンド物は、非安定化脂肪対するＮＭＲパルスによって測定した固体含量指数（Solid Content Index）が以下の範囲内の値を有することが好ましい：ＮＯ＝３５〜５５；Ｎ１０＝２５〜５０；及びＮ３０＜／＝１０。これらの値は、脂肪を８０℃で溶かし、その脂肪を６０℃以上に少なくとも１０分間保ち、０℃に冷却し且つ０℃に１６時間保持し、その脂肪を測定温度Ｎに加熱し且つＮ値を測定する前の３０分間その脂肪をその温度に保持することによって得ることが好ましい。
【００４３】
本発明の方法によって製造される脂肪組成物又は脂肪ブレンド物は、乳児食配合物中の脂肪の少なくとも一部を置き換えるために適している。したがって、本発明はまた、脂肪、タンパク質、及び炭水化物成分を、概略の相対質量比２．５：１：５で含む幼児食組成物の製造方法も提供し、そのような配合物中に通常用いる脂肪の少なくとも一部が、本発明に従って作られた脂肪組成物又は脂肪ブレンド物によって置き換えられる。この混合物をそのような配合物中に慣用の追加成分とともに含む乾燥配合物は、使用するために、充分な水中に分散させて、１００ｍｌの分散物当たり約３．５グラムの脂肪のエマルションを作るべきである。したがって、別な側面では、本発明は、本方法のステップ(v)又はステップ(vi)の後で得られるＯＰＯトリグリセリドを含む組成物を包装し且つラベル添付することによって幼児食配合物を製造する方法を提供する。
【００４４】
以下の非制限的な実施例は本発明を例証し、いかなる意味でもその範囲を制限しない。実施例において及び本明細書を通じて、全てのパーセント割合、部、及び比は別に示されていない限り質量による。
【実施例】
【００４５】
［実施例１］
ａ）精製したオレイン画分の製造
パーム油ストレインをパーム油の乾式又は溶媒分画によって製造し、７８％より高いパルミチン酸濃度と１４ｍｅｑＯ２／ｋｇ（ＩＶ＝１４）より低いヨウ素価とを有する画分を作った。
【００４６】
このパーム油ストレインを物理的に精製した（漂白し且つ脱臭した）。精製後、このパーム油ストレインをオレイン酸濃縮物（Ｃ１８：１濃度＞７５％）と混合した。オレイン酸濃縮物に対するパーム油ストレインの比は、質量基準で１．２〜２であった。混合比は酵素の活性、パーム油ストレインの品質、及びオレイン酸の品質（パルミチン酸とオレイン酸の濃度）によって決定した。
【００４７】
反応の前に、用いた生体触媒酵素の種類に応じて、水分を０．１〜０．５の間の水分活性に注意深く調節した。反応を、リパーゼＤの濃縮物（リゾパス・オリザエ（Rhizopus oryzae、以前はリゾパス・デレマールとして分類されていた。Amano Enzyme社、日本）又はリゾムコル・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）の固定化濃縮物（Novozymes A/S（デンマーク）からのLipozyme RM IM）に基づく生体触媒上で、撹拌したタンク又は充填床反応器中で、６０℃にて行った。この酵素によるエステル交換反応は、２位よりもむしろ１，３位で、パルミチン酸をオレイン酸に置き換える。本反応を行って、最少７０％交換の平衡に達した。
【００４８】
反応後、脂肪酸を、生成物トリグリセリド画分から低圧（＜１０ｍｂａｒ）かつ高温（＞２００℃）での蒸留によって除去した。トリグリセリド画分は乾式分画して、変換されていないトリパルミチンを最大でも６質量％の量に下がるまで除去した。オレイン分画を完全に精製して全ての残存する脂肪酸と不純物を除去して精製されたＯＰＯ組成物を製造した。
【００４９】
ｂ）人乳脂肪代替物の調製
ベースのオレイン画分を多くの植物油（なたね油、コーン油、ココナツ油、パーム核油、ひまわり油）と混合して人乳脂肪と類似した脂肪酸組成をもつ混合物を製造した。
【００５０】
［実施例２］
異なるヨウ素価（ＩＶ）を有する様々なパーム油ストレイン（ＰＯＳ）画分の酸分解を、触媒としての固定化リパーゼＤ上で、０．３〜０．４の水分活性にて６０℃で、充填床反応器中で行い、ＰＯＳに対するオレイン酸の比１．２〜１．６を用いて９０％平衡に近づけた。Ｃ４８〜Ｃ５４量を、AOCS Ce 5-86法「ＧＣによるトリグリセリド」に準拠したキャピラリーガスクロマトグラフィーによって測定した。結果は以下の通りであった。
【００５１】
【表１】
【００５２】
酸分解後の生成物は以下の組成を有していた。
【表２】
＊以下の知見によって測定した、２位のパルミチン酸残基のパーセンテージ：
(a) ＦＡＭＥ（表面内部標準Ｃ１７：０）による脂肪の全Ｃ１６：０含有量；及び
(b) 膵リパーゼを用いた１-及び３-残基の加水分解によって2-モノグリセリドを形成させた後の脂肪のサンプルのＦＡＭＥ（同じ標準）による２位のＣ１６：０含有量。ＳＮ−２値は（(b)×１００）／（(a)×３）である。
【００５３】
生成物を約３５℃で分画した。分画された生成物は以下の組成をもっていた。
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明はある方法に関するものである。特に、本発明は、トリグリセリドである1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯともいう）の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリグリセリドは多くの製品、特に食品製品の重要な成分である。トリグリセリド、1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリドは人乳脂肪の重要なグリセリド成分である。
【０００３】
人乳脂肪中に存在する主要脂肪酸を類似した量で含む脂肪組成物は、植物起源のオイル及び脂肪から誘導されうる。しかし、自然源から誘導されたミルク代替脂肪の組成と人乳脂肪の組成との間には大きな違いが残っている。この違いは、植物起源の多くのグリセリドは、２位が不飽和であることによって生じる。対照的に、多量のパルミチン酸が、人乳脂肪中のグリセリドの２位を占めている。
【０００４】
グリセリドの位置に沿った酸の分布の違いは、重要な栄養上の結果をもたらすと考えられる。栄養上重要ないくつかの乳脂肪のトリグリセリド中の脂肪酸の分布は、Freemanら（J. Dairy Sci., 1965, p. 853）によって研究された。Freemanらは人乳脂肪が、反芻動物の乳脂肪よりも、多い割合の２位のパルミチン酸と、多量の１、３位のステアリン酸及びオレイン酸を含んでいることを報告した。乳児によるトリグリセリドの２位のパルミチン酸のより大きな吸収は、Filerら（J. Nutrition, 99, pp. 293-298）によって報告されており、Filerらは、人乳脂肪と比較して、乳児によるバター脂肪の比較的低い吸収は、その脂肪のグリセリド位置間におけるパルミチン酸の実質的に均一な分布に起因することを示唆している。
【０００５】
自然源から得られるトリグリセリド脂肪又はオイルの化学的及び／又は物理的特性を人乳脂肪のそれにもっと近づけて合わせるためには、グリセリド位置上の脂肪酸残基の分布を制御する必要がある。
【０００６】
欧州特許出願公開第0209327号は、トリグリセリドである1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）を含むミルク代替脂肪組成物を開示している。欧州特許出願公開第0209327号によれば、これらの脂肪組成物は、より飽和された2-パルミトイルグリセリドから実質的になるグリセリドを含む脂肪混合物に、転位触媒、例えばリパーゼ（これはグリセリドの１位及び３位における活性が位置特異的である）の作用を受けさせることによって得ることができる。この種の酵素過程も英国特許第1577933号明細書に記載されている。触媒の影響下で、不飽和のフリーの脂肪酸又はそれらのアルキルエステルとの交換によって2-パルミトイルグリセリドの１位及び３位に不飽和脂肪酸残基が導入されうる。
【０００７】
国際出願公開WO 2005/036987号パンフレットは、パルミチン酸が多いオイルを、オレイン酸などの不飽和脂肪酸と反応させることによって、脂肪ベースを製造する方法を開示している。この脂肪ベースの全パルミチン酸残基量はたかだか３８％であり、この脂肪酸残基の少なくとも６０％がグリセリド骨格の２位にある。関連する開示を、同日に出願された国際出願公開WO 2005/037373号パンフレットに見ることができる。
【０００８】
ＯＰＯを製造する方法は、米国特許第5,658,768号明細書中にも開示されている。この方法は、組成物中のトリ飽和物の量を低減するためのさらなる酵素的変換を含んでいる。
【０００９】
欧州特許出願公開第0882797号公報は、水の活性を制御した条件下で、1,3-特異的酵素を用いたＡＢＡトリグリセリドを製造する方法を開示している。
【００１０】
ＯＰＯトリグリセリドを製造するための選択的方法は、Schmidら, Biotechnology and Bioengineering, vol 64, no 6, 1999, 679-684に開示されている。パーム油からのＯＰＯの合成は、Ming-Jungら, JAOCS, vol 81, no 6, 2004, 525-532に記載されている。どちらの場合も、ＯＰＯはトリパルミチン（ＰＰＰ）から合成された。
【特許文献１】欧州特許出願公開第0209327号公報
【特許文献２】欧州特許出願公開第0209327号公報
【特許文献３】英国特許第1577933号明細書
【特許文献４】国際出願公開WO2005/036987号パンフレット
【特許文献５】国際出願公開WO2005/037373号パンフレット
【特許文献６】米国特許第5,658,768号明細書
【特許文献７】欧州特許出願公開第0882797号公報
【非特許文献１】Freemanら, J. Dairy Sci., 1965, p. 853
【非特許文献２】Filerら, J. Nutrition, 99, pp. 293-298
【非特許文献３】Schmidら, Biotechnology and Bioengineering, vol 64, no 6, 1999, 679-684
【非特許文献４】Ming-Jungら, JAOCS, vol 81, no 6, 2004, 525-532
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
1,3-ジオレオイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）の製造のためのより有効な方法を提供する必要性が残っている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、1,3-ジオレイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）を含む組成物の製造方法を提供し、本方法は、約２〜約１２のヨウ素価（ＩＶ）をもつパーム油ステアリン(palm oil stearin)に、オレイン酸又はその非グリセリドエステル（例えば、オレイン酸と１〜６の炭素原子を有するアルコールとのアルキルエステル）とともに、酵素によるエステル交換を受けさせる工程を含む。
【００１３】
一つの態様においては、本発明の方法は以下のステップを含む。
(i) トリパルミトイルグリセリドを含み、かつ約２〜約１２のヨウ素価を有するパーム油ステアリンを準備するステップ；
(ii) 任意選択により、上記パーム油ステアリンを漂白し且つ脱臭するステップ；
(iii) 上記パーム油ステアリンを、オレイン酸又はその非グリセリドエステルとともに酵素によるエステル交換反応を受けさせるステップ；
(iv) 上記(iii)で得られた生成物からパルミチン酸又はパルミチン酸の非グリセリドエステルを分離するステップ；及び
(v) 任意選択により、上記(iv)で得られた生成物を乾式分画して、増大した量のＯＰＯを含む画分（フラクション）を形成させるステップ。
【００１４】
本発明の方法は、本方法の生成物中に形成されたＯＰＯの量を増大させることを目的としている。本方法のさらなる目的は、生成物の栄養学的品質の向上である。
【００１５】
予期せぬことに、トリパルミトイルグリセリドの高い純度を有するパーム油ステアリン（例えば、１未満のヨウ素価（ＩＶ）を有するもの）を用いた場合には、本方法はうまく作用しないことを発見した。理論に拘束されることは望まないが、本発明者らは、このことは低い酵素的エステル交換、おそらく酵素阻害によるかもしれないと考えている。しかし、驚くべきことに、トリパルミトイルグリセリドについて低い純度であり、且つ典型的には２〜１２、好ましくは３〜１１、より好ましくは４〜１１、特に６〜１１、たとえば、８〜１０、あるいは８と１０の間のヨウ素価を有するパーム油ステアリンを用いることによって良好な結果が達成されることを発見した。ヨウ素価は、当分野で公知の標準法（例えば、ASTM D5554-95 (2001)）に準拠して測定される。
【００１６】
ＯＰＯ組成物の品質は、組成物中の成分であるトリグリセリドの炭素数から決定できる。本方法のための反応原料グリセリドはＰＰＰであり、４８の炭素数（Ｃ４８）を有し、生成物であるＯＰＯは５２の炭素数を有し、ＯＰＰ及びＯＯＯはそれぞれ５０及び５４の炭素数を有する。生成物中のＯＯＯ、ＰＰＰ、及びＯＰＰ量を最小化する一方、ＯＰＯの量は最大化することが望ましい。グリセリドの２位のパルミトイル基の存在（すなわち、パルミチン酸残基）は、特に重要である。しかし、生成物の品質の決定において、１-及び３-パルミトイルグリセリド、例えば、ＰＰＰ及びＯＰＰの公知の低い消化率を考慮に入れる必要がある。したがって、生成物の品質は、Ｃ５４以外のトリグリセリドの量、すなわち（１００−Ｃ５４）に、（（３×Ｃ４８）＋（２×Ｃ５０）＋（Ｃ５２））に対する全（Ｃ４８＋Ｃ５０＋Ｃ５２）の割合（これはトリグリセリド中のパルミトイル残基の数に対する因子を含んでいる）を乗じて、及び／又はグリセリドの２位のパルミチン酸残基の量によって、表すことができる。
【００１７】
本発明の方法によって製造した組成物又は画分は、以下の割合：
(１００−Ｃ５４)×[(Ｃ４８＋Ｃ５０＋Ｃ５２)／(３Ｃ４８＋２Ｃ５０＋Ｃ５２)]
に対して、５０より大きな、より好ましくは５２〜６０、例えば５３〜５９、あるいは５４〜５８、あるいは５５〜５７、あるいは５６〜５７の値であることが好ましい。炭素数、Ｃ４８〜Ｃ５４は、実施例で示した方法によって決定することが好ましい。
【００１８】
本発明の方法に用いるためのトリパルミトイルグリセリド（ＰＰＰ）の適切な原料は、パーム油ステアリンである。パーム油は、典型的には、トリパルミトイルグリセリド（ＰＰＰ、トリパルミチンともいう）を含めたトリ飽和脂肪酸グリセリドを最大１２質量％含んでいる。パーム油ステアリンは、質量で４部のトリパルミチンと１部の対称ジ飽和トリグリセリドを含みうる。したがって、本方法のステップ(i)で用いるパーム油ステアリンは、パーム油又はその誘導体を分画することによって提供されることが好ましい。このパーム油ステアリンは、全脂肪酸残基含有量を基準にして、少なくとも６０質量％、より好ましくは少なくとも７０質量％、例えば、少なくとも７５質量％、少なくとも８０質量％、又は少なくとも８５質量％、たとえば少なくとも９０質量％のパルミチン酸含有量を有することが好ましい。
【００１９】
本発明の方法のステップ(i)で用いるパーム油ステアリンは、パーム油の溶媒（湿式）分画、Lanza分画、又は乾式分画、例えば、パーム油の多段階向流乾式分画で得ることができる。このパーム油は、粗製パーム油、精製パーム油、パーム油の画分（例えば、乾式分画によって得られるもの）、パーム油のその他の誘導物、あるいはそれらの混合物であることができる。
【００２０】
ステップ(i)で用いるパーム油ステアリンは、2-パルミトイルグリセリドを、典型的には５０質量％より多い量で、例えば５５質量％より多い量で、又は６０質量％より多い量で含んでいることが好ましい。
【００２１】
上記パーム油ステアリンは約２〜約１２の、好ましくは約４〜約１１の、さらに好ましくは約６〜約１１の、例えば約８〜約１０のヨウ素価（ＩＶ）を有する。
【００２２】
パーム油ステアリンを酵素によるエステル交換にかける前に、パーム油ステアリンは典型的には任意選択によるステップ(ii)で精製されてもよく、このステップは漂白及び脱臭を含むことが好ましい。本発明の方法におけるパーム油ステアリンの漂白は、約９５℃より上、より好ましくは１００℃より上（例えば、１０５℃〜１２０℃）で行われる。脱臭ステップにおいては、典型的には２００℃より高い温度で、揮発性不純物がパーム油ステアリンから除去されて、脱臭されたパーム油ステアリンを生じる。この脱臭ステップで除去される不純物は、通常、フリー脂肪酸、アルデヒド、ケトン、アルコール、及びその他の炭化水素不純物を含む。この漂白と脱臭は、当分野で公知の標準条件下で行われ、単一工程又は２以上の工程で実施されうる。例えば、これらのステップは減圧下で実施でき（例えば、１０ｍｍＨｇ以下）、そこでパーム油ステアリンは不純物を揮発させることを助ける蒸気と接触させられる。パーム油ステアリンを漂白及び脱臭することは、本方法の収率向上を助けることができる。
【００２３】
「ステアリン」の用語には、本明細書で用いるように、少なくとも１０％の低融点成分が何らかの分画、例えば、乾式分画、Lanza分画、又は溶媒分画によってそこから除去されたトリグリセリド混合物又は脂肪ブレンドが含まれる。したがって、オレインの用語は、少なくとも１０％の高融点成分が何らかの分画、例えば、乾式分画、Lanza分画、又は溶媒分画によってそこから除去されたトリグリセリド混合物又は脂肪ブレンドを意味する。
【００２４】
本明細書で用いる、脂肪酸、脂肪アシル基の用語、及び関連する用語は、４〜２４の炭素原子、好ましくは１２〜２２の炭素原子を有する飽和又は不飽和の直鎖カルボン酸をいう。不飽和酸は、１つ、２つ、又はそれより多くの二重結合、好ましくは１つ又は２つの二重結合を含みうる。
【００２５】
アルキルの用語は、本明細書で用いるように、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分枝した飽和炭化水素をいう。
【００２６】
本発明の方法にしたがう酵素によるエステル交換は、生体触媒として１，３特異的リパーゼを用いて行うことが好ましい。この酵素によるエステル交換では、トリグリセリドの２位の脂肪酸は変化しない（例えば、２位の脂肪アシル基の１０モル％未満、より好ましくは５％未満、例えば１％未満しか本方法の間に変化しない）。
【００２７】
１，３リパーゼの影響下で、不飽和脂肪酸残基は、その他のグリセリドの脂肪酸残基との交換によって、あるいはより好ましくは脂肪混合物中でのエステル交換によって、2-パルミトイルグリセリドの１及び３位に導入されうる。交換は、不飽和フリー脂肪酸類、好ましくはオレイン酸、又はオレイン酸と１〜６の炭素原子を有するアルコールとのアルキルエステル類の間で起こることが好ましい。この方法で変性された2-パルミトイルグリセリドは、反応混合物から分離されうる。
【００２８】
本発明の方法における酵素によるエステル交換反応は、２位よりもむしろ１，３位で、パルミチン酸をオレイン酸で交換する。このエステル交換反応が行われて、典型的には、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、最も好ましくは少なくとも７０％の転化率で平衡に達するか又は平衡に近づく。
【００２９】
好ましくは、エステル交換反応において、パーム油ステアリンは、例えば、オレイン酸濃縮物（これは、６５質量％より高い、好ましくは７０質量％より高い、最も好ましくは７５質量％より高い濃度でのフリーのオレイン酸を含む）と混合される。あるいは、オレイン酸は、（好ましくは６５質量％より多い量の）オレイン酸、リノール酸、及び任意選択で１以上のその他の脂肪酸、を含む混合物として提供されうる。パーム油ステアリンとオレイン酸濃縮物との比は、好ましくは、質量基準で、０．１：１〜２：１、より好ましくは０．４：１〜１．２：１、なおさらに好ましくは０．４：１〜１：１、最も好ましくは１：１．１〜１：２である。反応は、３０℃〜９０℃、好ましくは５０℃〜８０℃、例えば、約６０℃〜７０℃の温度で行うことが好ましく、水と混和性の有機溶媒を用いるか又は用いずに、回分法又は連続法で実施できる。
【００３０】
酵素によるエステル交換反応の前に、用いる生体触媒システムの種類に応じて、水分を０．０５〜０．５５、好ましくは０．１〜０．５の水分活性に調節することが好ましい。この反応は、例えば、６０℃にて、撹拌タンク中又は充填床反応器中で、リパーゼＤ（以前はリゾパス・デレマール（Rhizopus delemar）として分類されていたリゾパス・オリザエ(Rhizopus oryzae)、Amano Enzyme社（日本）から）の濃縮物又はリゾムコール・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)の固定化濃縮物（Nobozymes A/S（デンマーク）のLipozyme RM IM）の上で行うことができる。
【００３１】
ステップ(iv)においてＯＰＯから、パルミチン酸とその他の脂肪酸、又はパルミチン非グリセリドエステル及びその他のグリセリドを分離するためには、（任意選択で、さらなる処理、例えば脂肪相の単離などの後で）エステル交換した混合物を蒸留することが好ましい。蒸留は低圧（例えば、１０mbar未満）かつ高温（例えば、２００℃より高い）で行い、生成物トリグリセリド画分から脂肪酸を除去することが好ましい。
【００３２】
ステップ(iv)で得られた組成物は、ステップ(v)で分画してオレイン画分（すなわち低融点画分）を回収することが好ましい。これは、溶媒分画、Lanza分画、又は乾式分画を用い、一段階、二段階、又は多段階分画法を用いて行うことができるが、一段階乾式分画を用いて行うことが好ましい。オレインは、エステル交換した混合物を多段向流乾式分画にかけることによって得ることもできる。
【００３３】
トリグリセリド画分の分画は、転化されていないトリパルミチン（ＰＰＰ）を、１５質量％未満、好ましくは１０質量％未満、より好ましくは８質量％未満の量に低下するまで除去する。ステップ(V)の後で得られるオレイン画分は、典型的には、さらに精製又は純化して全ての残存脂肪酸及び不純物を除去して、精製されたオレイン画分が製造される。
【００３４】
驚くべきことに、本発明の範囲内のヨウ素価を有するパーム油ステアリンを用いることが、満足できる生成物のためにステップ(V)での生成物のさらなる分画を必要としないことを意味しうることを発見した。
【００３５】
本方法は、ステップ(i)から(v)の前、その間、又は後に、さらなるステップ、例えば、部分的精製又は所望する成分の生成物の濃縮などを任意選択により含むこともできる。
【００３６】
本発明の方法においてステップ(iv)の後で得られる組成物、又はステップ(v)の後で得られるＯＰＯグリセリドの増大した量を含む画分は、その画分中の全グリセリドを基準にして、少なくとも１０質量％のＯＰＯ、より好ましくは少なくとも１５％、なおさらに好ましくは少なくとも２０質量％の、例えば少なくとも２５質量％もしくは３０質量％もしくは４０質量％のＯＰＯを含むことが好ましい。残りは、典型的にはその他の非ＯＰＯトリグリセリドを含み、少量のジグリセリド及びモノグリセリドをさらに含みうる。少量のフリー脂肪酸も存在しうる。この画分は、トリグリセリドの混合物を含む組成物であることが好ましく、その中では不飽和脂肪酸残基も含めた様々な脂肪酸残基が１及び３位の間でランダムに分配され、２位の脂肪酸残基の少なくとも半分はＣ１６及び／又はＣ１８の飽和の好ましくは実質的にパルミチン酸残基からなり、特に全体の２位の脂肪酸残基の６０〜９０質量％が好ましくはパルミチン酸である。好ましくは、本組成物のグリセリド中の脂肪酸残基の全て又は実質的に全て（例えば９９質量％より多く）が偶数炭素のものであることが好ましい。１位及び３位の不飽和脂肪酸残基は、ほとんどがオレイン酸及びリノール酸からなることが好ましい。本組成物は、１位及び３位を合わせたなかの飽和脂肪酸と少なくとも同じくらいの量（モル基準で）の２位の飽和脂肪酸を含むことが好ましく、さらに好ましくは（モル基準で）最大２倍まで含むことが好ましい。1,3-位は、不飽和Ｃ１８及び飽和Ｃ４〜Ｃ１４脂肪酸の両方を含むことが好ましい。
【００３７】
これらの脂肪酸の割合及び種類は、必要とする組成物の食品及び物性としての必要性にしたがって定めることができる。例えば、ミルク代替脂肪は液体状食餌中で血温で乳化することができるべきであり、したがって、好ましくはこの温度（３７℃）で溶融可能であるべきである。脂肪の融点はその脂肪酸組成によって定まり、したがって選択可能である。正しい脂肪酸組成を有する脂肪が、したがって、特定の所望する物理特性をもつ脂肪組成物を製造する目的で、本発明での使用のために選択できる。
【００３８】
本発明によって製造される最も好ましい組成物は、存在する全脂肪酸残基の質量を基準に、グリセリドの２位に存在するパルミチン酸を少なくとも４０質量％、より好ましくは少なくとも４５質量％、例えば少なくとも５０質量％有するトリグリセリドを含むものである。加えて、あるいはそれに替えて、本組成物はトリグリセリドの全質量を基準に８質量％未満のＳＳＳグリセリド（ここでＳは少なくとも１８炭素原子、好ましくは１８炭素原子を有する飽和脂肪酸を表す）を含んでもよく、かつ、存在する全脂肪酸残基を基準にして少なくとも４０質量％の１及び３位のオレイン酸残基を含んでもよい。
【００３９】
本発明の方法によって製造される脂肪組成物は、少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも５２％、なおさらに好ましくは少なくとも５３％、たとえば、少なくとも５４％又は少なくとも５５％又は少なくとも５６％の量でグリセリドの２位にパルミチン酸基を有すること（ＳＮ−２値）が好ましい。ｘ％のＳＮ−２値とは、グリセリド中の全パルミチン酸残基のうちｘ％（重量％又はモル％）が２位にあり、パルミチン酸残基の（１００−ｘ）％がグリセリドの１位及び３位に分配されていることを意味する。この値は、実施例２に示した方法で説明するように測定されることが好ましい。
【００４０】
本発明の方法で得られた組成物は、１０質量％の未満の1,2,3-トリ飽和グリセリド、好ましくは８質量％未満の1,2,3-トリ飽和グリセリドしか含まないことが好ましい。
【００４１】
本発明は、生成物をさらにＯＰＯについて精製する追加のステップを含んでもよい。
【００４２】
本発明の方法は、加えて又は代わりに、ＯＰＯ画分をその他の脂肪及び／又はオイル、好ましくは少なくとも一種の植物油とブレンドして脂肪ブレンドを形成するさらなるステップ(vi)を含むことができる。適切な脂肪は以下のものを含む脂肪である：最大で４０質量％の中鎖トリグリセリド；最大で３０質量％のラウリン脂肪；最大で５０質量％のその他の植物性脂肪；又は最大で４０質量％のバター脂肪；又はこれらの脂肪の画分もしくは混合物。特に、ラウリン脂肪、好ましくはパーム核油、が組成物中に加えられて、ミルク脂肪の組成物又はその溶融特性に合わせることを目的とするブレンド物をもたらすことができ、及び／又は植物油、例えば、ひまわり油、高オレインヒマワリ油、パーム核油、なたね油及び大豆油、ココナツ油、高オレインサフラワー油（これらはポリ不飽和脂肪酸グリセリドの高い含有量をもち、本組成物の食餌としての利点を向上させる）を含めることができる。このようにして、本発明の方法によって製造された組成物は、ミルク脂肪の組成又はその溶融特性に合ったブレンド物を好ましくは提供する。得られるブレンド物は、非安定化脂肪対するＮＭＲパルスによって測定した固体含量指数（Solid Content Index）が以下の範囲内の値を有することが好ましい：ＮＯ＝３５〜５５；Ｎ１０＝２５〜５０；及びＮ３０＜／＝１０。これらの値は、脂肪を８０℃で溶かし、その脂肪を６０℃以上に少なくとも１０分間保ち、０℃に冷却し且つ０℃に１６時間保持し、その脂肪を測定温度Ｎに加熱し且つＮ値を測定する前の３０分間その脂肪をその温度に保持することによって得ることが好ましい。
【００４３】
本発明の方法によって製造される脂肪組成物又は脂肪ブレンド物は、乳児食配合物中の脂肪の少なくとも一部を置き換えるために適している。したがって、本発明はまた、脂肪、タンパク質、及び炭水化物成分を、概略の相対質量比２．５：１：５で含む幼児食組成物の製造方法も提供し、そのような配合物中に通常用いる脂肪の少なくとも一部が、本発明に従って作られた脂肪組成物又は脂肪ブレンド物によって置き換えられる。この混合物をそのような配合物中に慣用の追加成分とともに含む乾燥配合物は、使用するために、充分な水中に分散させて、１００ｍｌの分散物当たり約３．５グラムの脂肪のエマルションを作るべきである。したがって、別な側面では、本発明は、本方法のステップ(v)又はステップ(vi)の後で得られるＯＰＯトリグリセリドを含む組成物を包装し且つラベル添付することによって幼児食配合物を製造する方法を提供する。
【００４４】
以下の非制限的な実施例は本発明を例証し、いかなる意味でもその範囲を制限しない。実施例において及び本明細書を通じて、全てのパーセント割合、部、及び比は別に示されていない限り質量による。
【実施例】
【００４５】
［実施例１］
ａ）精製したオレイン画分の製造
パーム油ストレインをパーム油の乾式又は溶媒分画によって製造し、７８％より高いパルミチン酸濃度と１４ｍｅｑＯ２／ｋｇ（ＩＶ＝１４）より低いヨウ素価とを有する画分を作った。
【００４６】
このパーム油ストレインを物理的に精製した（漂白し且つ脱臭した）。精製後、このパーム油ストレインをオレイン酸濃縮物（Ｃ１８：１濃度＞７５％）と混合した。オレイン酸濃縮物に対するパーム油ストレインの比は、質量基準で１．２〜２であった。混合比は酵素の活性、パーム油ストレインの品質、及びオレイン酸の品質（パルミチン酸とオレイン酸の濃度）によって決定した。
【００４７】
反応の前に、用いた生体触媒酵素の種類に応じて、水分を０．１〜０．５の間の水分活性に注意深く調節した。反応を、リパーゼＤの濃縮物（リゾパス・オリザエ（Rhizopus oryzae、以前はリゾパス・デレマールとして分類されていた。Amano Enzyme社、日本）又はリゾムコル・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）の固定化濃縮物（Novozymes A/S（デンマーク）からのLipozyme RM IM）に基づく生体触媒上で、撹拌したタンク又は充填床反応器中で、６０℃にて行った。この酵素によるエステル交換反応は、２位よりもむしろ１，３位で、パルミチン酸をオレイン酸に置き換える。本反応を行って、最少７０％交換の平衡に達した。
【００４８】
反応後、脂肪酸を、生成物トリグリセリド画分から低圧（＜１０ｍｂａｒ）かつ高温（＞２００℃）での蒸留によって除去した。トリグリセリド画分は乾式分画して、変換されていないトリパルミチンを最大でも６質量％の量に下がるまで除去した。オレイン分画を完全に精製して全ての残存する脂肪酸と不純物を除去して精製されたＯＰＯ組成物を製造した。
【００４９】
ｂ）人乳脂肪代替物の調製
ベースのオレイン画分を多くの植物油（なたね油、コーン油、ココナツ油、パーム核油、ひまわり油）と混合して人乳脂肪と類似した脂肪酸組成をもつ混合物を製造した。
【００５０】
［実施例２］
異なるヨウ素価（ＩＶ）を有する様々なパーム油ストレイン（ＰＯＳ）画分の酸分解を、触媒としての固定化リパーゼＤ上で、０．３〜０．４の水分活性にて６０℃で、充填床反応器中で行い、ＰＯＳに対するオレイン酸の比１．２〜１．６を用いて９０％平衡に近づけた。Ｃ４８〜Ｃ５４量を、AOCS Ce 5-86法「ＧＣによるトリグリセリド」に準拠したキャピラリーガスクロマトグラフィーによって測定した。結果は以下の通りであった。
【００５１】
【表１】
【００５２】
酸分解後の生成物は以下の組成を有していた。
【表２】
＊以下の知見によって測定した、２位のパルミチン酸残基のパーセンテージ：
(a) ＦＡＭＥ（表面内部標準Ｃ１７：０）による脂肪の全Ｃ１６：０含有量；及び
(b) 膵リパーゼを用いた１-及び３-残基の加水分解によって2-モノグリセリドを形成させた後の脂肪のサンプルのＦＡＭＥ（同じ標準）による２位のＣ１６：０含有量。ＳＮ−２値は（(b)×１００）／（(a)×３）である。
【００５３】
生成物を約３５℃で分画した。分画された生成物は以下の組成をもっていた。
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
約２〜約１２のヨウ素価（ＩＶ）をもつパーム油ステアリンに、オレイン酸又はその非グリセリドエステルとともに、酵素的エステル交換を受けさせる工程を含む、1,3-ジオレイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）を含む組成物の製造方法。
【請求項２】
以下のステップ：
(i) トリパルミトイルグリセリドを含むパーム油ステアリンを準備するステップ；
(ii) 任意選択により、前記パーム油ステアリンを漂白し且つ脱臭するステップ；
(iii) 前記パーム油ステアリンを、オレイン酸又はその非グリセリドエステルとともに酵素によるエステル交換を受けさせるステップ；
(iv) (iii)で得られた生成物からパルミチン酸又はパルミチン酸の非グリセリドエステルを分離して、ＯＰＯグリセリドを含む組成物を生成させるステップ；及び
(v) 任意選択により、(iv)で得られた生成物を乾式分画して、増大した量のＯＰＯを含む画分を形成させるステップ、
を含む、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記パーム油ステアリンがパーム油又はその誘導体を分画することによってもたらされる、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記パーム油ステアリンがパーム油の乾式分画によってもたらされる、請求項３に記載の製造方法。
【請求項５】
前記パーム油ステアリンが約４〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項６】
前記パーム油ステアリンが約６〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項７】
前記パーム油ステアリンが約８〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項８】
前記(iv)の組成物又は前記(v)の画分を、少なくとも一種の植物油とブレンドするステップをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項９】
前記植物油が、ひまわり油、高オレインヒマワリ油、パーム核油、なたね油、及び大豆油から選択される、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記組成物又は画分が、グリセリドの２位に存在する全脂肪酸残基の質量を基準にして、グリセリドの２位に存在するパルミチン酸残基を少なくとも５０質量％含み、トリグリセリドの全質量を基準にして８質量％未満のＳＳＳグリセリド（Ｓは少なくとも１８の炭素原子、好ましくは１８の炭素原子を有する飽和脂肪酸を表す）を含み、かつ１及び３位に存在する全脂肪酸残基の質量を基準にして、１及び３位に存在するオレイン酸残基を少なくとも４０質量％含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記組成物又は画分が、約８質量％未満のトリ飽和グリセリドしか含まない、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記パーム油ストレインが９５℃より高い温度で漂白される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記パーム油ストレインが約７〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１４】
前記パーム油ストレインが約８〜約１０のヨウ素価を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１５】
前記組成物又は画分が、下記比：
(１００−Ｃ５４)×[(Ｃ４８＋Ｃ５０＋Ｃ５２)／(３Ｃ４８＋２Ｃ５０＋Ｃ５２)]
が５０より大きな値を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１６】
前記比が５２〜５７の値を有する、請求項１５に記載の製造方法。
【請求項１】
約２〜約１２のヨウ素価（ＩＶ）をもつパーム油ステアリンに、オレイン酸又はその非グリセリドエステルとともに、酵素的エステル交換を受けさせる工程を含む、1,3-ジオレイル-2-パルミトイルグリセリド（ＯＰＯ）を含む組成物の製造方法。
【請求項２】
以下のステップ：
(i) トリパルミトイルグリセリドを含むパーム油ステアリンを準備するステップ；
(ii) 任意選択により、前記パーム油ステアリンを漂白し且つ脱臭するステップ；
(iii) 前記パーム油ステアリンを、オレイン酸又はその非グリセリドエステルとともに酵素によるエステル交換を受けさせるステップ；
(iv) (iii)で得られた生成物からパルミチン酸又はパルミチン酸の非グリセリドエステルを分離して、ＯＰＯグリセリドを含む組成物を生成させるステップ；及び
(v) 任意選択により、(iv)で得られた生成物を乾式分画して、増大した量のＯＰＯを含む画分を形成させるステップ、
を含む、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記パーム油ステアリンがパーム油又はその誘導体を分画することによってもたらされる、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記パーム油ステアリンがパーム油の乾式分画によってもたらされる、請求項３に記載の製造方法。
【請求項５】
前記パーム油ステアリンが約４〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項６】
前記パーム油ステアリンが約６〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項７】
前記パーム油ステアリンが約８〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項８】
前記(iv)の組成物又は前記(v)の画分を、少なくとも一種の植物油とブレンドするステップをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項９】
前記植物油が、ひまわり油、高オレインヒマワリ油、パーム核油、なたね油、及び大豆油から選択される、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記組成物又は画分が、グリセリドの２位に存在する全脂肪酸残基の質量を基準にして、グリセリドの２位に存在するパルミチン酸残基を少なくとも５０質量％含み、トリグリセリドの全質量を基準にして８質量％未満のＳＳＳグリセリド（Ｓは少なくとも１８の炭素原子、好ましくは１８の炭素原子を有する飽和脂肪酸を表す）を含み、かつ１及び３位に存在する全脂肪酸残基の質量を基準にして、１及び３位に存在するオレイン酸残基を少なくとも４０質量％含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記組成物又は画分が、約８質量％未満のトリ飽和グリセリドしか含まない、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記パーム油ストレインが９５℃より高い温度で漂白される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記パーム油ストレインが約７〜約１１のヨウ素価を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１４】
前記パーム油ストレインが約８〜約１０のヨウ素価を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１５】
前記組成物又は画分が、下記比：
(１００−Ｃ５４)×[(Ｃ４８＋Ｃ５０＋Ｃ５２)／(３Ｃ４８＋２Ｃ５０＋Ｃ５２)]
が５０より大きな値を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項１６】
前記比が５２〜５７の値を有する、請求項１５に記載の製造方法。
【公表番号】特表２００９−５０７４８０（Ｐ２００９−５０７４８０Ａ）
【公表日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２９６９３（Ｐ２００８−５２９６９３）
【出願日】平成１８年９月８日（２００６．９．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００３３４３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０２９０１８
【国際公開日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【出願人】（５０３３５２６６０）ローダース・クロクラーン・ベスローテンフェンノートシャップ (10)
【住所又は居所原語表記】Ｈｏｇｅｗｅｇ １， ＮＬ−１５２１ ＡＺ Ｗｏｒｍｅｒｖｅｅｒ， Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年９月８日（２００６．９．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００３３４３
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０２９０１８
【国際公開日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【出願人】（５０３３５２６６０）ローダース・クロクラーン・ベスローテンフェンノートシャップ (10)
【住所又は居所原語表記】Ｈｏｇｅｗｅｇ １， ＮＬ−１５２１ ＡＺ Ｗｏｒｍｅｒｖｅｅｒ， Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
【Ｆターム（参考）】
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