ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤の燐酸塩
４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−＆ａｇｒ；］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶの強力な阻害剤であり、２型糖尿病とも呼ばれるインスリン非依存性糖尿病の予防および治療の少なくとも一方に有用である。本発明は、その燐酸二水素塩の結晶質一水和物およびその調製方法、この新規形を含有する医薬組成物、ならびに糖尿病、肥満および高血圧の治療のための使用方法にも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤の特定の塩に関する。更に詳細には、本発明は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶの強力な阻害剤である４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩に関する。この新規の塩およびその結晶質水和物は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶの阻害剤が指示される疾病および状態、特に２型糖尿病、肥満および高血圧、の治療および予防に有用である。更に、本発明は、２型糖尿病、肥満および高血圧の治療に有用な前記燐酸二水素塩およびその結晶質水和物を含む医薬組成物、ならびに前記燐酸二水素塩およびその結晶質水和物ならびにそれらの医薬組成物の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）とグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）の両方を不活性化する酵素であるジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）の阻害は、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）としても知られている２型糖尿病の治療および予防への新規アプローチの代表である。２型糖尿病の治療に関するＤＰ−ＩＶ阻害剤の治療上の可能性は、次の文献に総説されている：Ｃ．Ｆ．ＤｅａｃｏｎおよびＪ．Ｊ．Ｈｏｌｓｔ，「２型糖尿病の治療および予防へのアプローチとしてのジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶの阻害：歴史的背景（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｓ ａｎ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ： ａ ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ）」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２９４：１−４（２０００）；Ｋ．Ａｕｇｕｓｔｙｎｓら，「２型糖尿病治療用の新規治療薬としてのジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｓ ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ）」，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１３：４９９−５１０（２００３）；およびＤ．Ｊ．Ｄｒｕｃｋｅｒ，「２型糖尿病の治療に関するジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤の治療上の可能性（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ）」，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ．１２：８７−１００（２００３）。
【０００３】
メルク社（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．）に譲渡された国際公開公報第０３／００４４９８号（２００３年１月１６日発行）は、ＤＰ−ＩＶの強力な阻害剤であり、従って２型糖尿病の治療に有用であるβ−アミノテトラヒドロトリアゾロ［４，３−ａ］ピラジンの種類を記載している。具体的には、４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンが、国際公開公報第０３／００４４９８号に開示されている。この化合物の医薬適合性の塩は、一般に、国際公開公報第０３／００４４９８号の範囲に包含される。
【０００４】
しかし、上の参考文献には、新たに開示する下記構造式Ｉの４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの一塩基性燐酸二水素塩の具体的な開示はない。
【０００５】
本発明は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害剤４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの新規燐酸二水素塩およびその結晶質水和物、特に、結晶質一水和物に関する。本発明の燐酸二水素塩および結晶質水和物は、４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの医薬組成物の調製において、調製しやすさ、取扱いやすさおよび投薬しやすさなどの利点を有する。特に、それらは、応力、高温および湿度に対する安定性などの改善された物理的および化学的安定性、ならびに可溶性および溶解速度などの改善された物理化学的特性を示し、そうしたことが、それらを様々な医薬剤形の製造に特に適するものにしている。本発明は、特に２型糖尿病、肥満および高血圧の予防または治療のための、その新規の塩および水和物を含有する医薬組成物ならびにそれらのＤＰ−ＩＶ阻害剤としての使用方法にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、下記構造式Ｉ：
【０００７】
【化４】
の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの新規一塩基性燐酸二水素塩またはその結晶質水和物を提供する。詳細には、本発明は、式Ｉの燐酸二水素塩の結晶質一水和物を提供する。
【０００８】
本発明の燐酸二水素塩は、＊で示すステレオジェニック炭素原子での不斉中心を有し、故に、ラセミ体、ラセミ混合物および単一のエナンチオマーとして発生し得る。すべての異性体形が、本発明に包含される。実質的に他のものを含まない単独のエナンチオマー、ならびに２つのエナンチオマーの混合物も、本発明の範囲に包含される。
【０００９】
本発明の１つの実施態様は、下記構造式ＩＩ：
【００１０】
【化５】
の（２Ｒ）４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩またはその結晶質水和物を提供する。
【００１１】
本発明の第二の実施態様は、下記構造式ＩＩＩ：
【００１２】
【化６】
の（２Ｓ）４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩またはその結晶質水和物を提供する。
【００１３】
より具体的には、本発明の燐酸二水素塩は、１モル当量のモノプロトン化４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンカチオンおよび１モル当量の燐酸二水素（重燐酸）アニオンから成る。
【００１４】
本発明の更なる実施態様において、上記構造式ＩからＩＩＩの燐酸二水素塩は、結晶質水和物である。この実施態様の１つの類では、前記結晶質水和物は、結晶質一水和物である。
【００１５】
本発明の更なる実施態様は、検出可能な量で存在する結晶質一水和物を含む構造式ＩからＩＩＩの燐酸二水素塩原薬を提供する。「原薬」とは、活性医薬成分（「ＡＰＩ」）を意味する。その原薬中の結晶質一水和物の量は、Ｘ線粉末回折、固体フッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴分光法、固体炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴分光法、固体フーリエ変換赤外線分光法、およびラマン分光法などの物理学的方法の使用によって定量することができる。この実施態様の１つの類では、約５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第二の類では、約１０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第三の類では、約２５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第四の類では、約５０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第五の類では、約７５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第六の類では、その燐酸二水素塩原薬の実質的にすべてが、本発明の結晶質一水和物であり、すなわち、その燐酸二水素塩原薬は、実質的に単一相の一水和物である。
【００１６】
本発明の結晶質燐酸二水素塩は、薬理活性成分を含有する医薬品の調製において、遊離塩基および以前に開示された塩酸塩（国際公開公報第０３／００４４９８号）を越える製薬上の利点を有する。特に、本結晶質燐酸二水素塩一水和物の強化された化学的および物理的安定性は、薬理活性成分を含有する固体製剤形の調製において有利な特性の要因となる。
【００１７】
強力なＤＰ−ＩＶ阻害特性を示す本発明の燐酸二水素塩は、２型糖尿病、肥満および高血圧の予防または治療に特に有用である。
【００１８】
本発明のもう１つの局面は、ＤＰ−ＩＶの阻害剤が必要とされる臨床状態を予防または治療するための方法を提供し、この方法は、そうした予防または治療が必要な患者に予防または治療有効量の構造式Ｉの燐酸二水素塩またはその水和物、特にその結晶質一水和物を投与することを含む。そうした臨床状態には、糖尿病、特に２型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性および肥満が挙げられる。
【００１９】
本発明は、ＤＰ−ＩＶの阻害剤が必要とされる臨床状態の予防または治療用薬物を製造するための、構造式Ｉの燐酸二水素塩またはその水和物、特に結晶質一水和物の使用も提供する。
【００２０】
本発明は、構造式Ｉの燐酸二水素塩またはその水和物、特に結晶質一水和物を１つ以上の医薬適合性の担体または賦形剤とともに含む医薬組成物も提供する。１つの実施態様において、本医薬組成物は、治療有効量の活性医薬成分を医薬適合性の賦形剤との混合物の状態で含み、この場合、前記活性医薬成分は、検出可能な量の本発明の結晶質一水和物を含む。第二の実施態様において、本医薬組成物は、治療有効量の活性医薬成分を医薬適合性の賦形剤との混合物の状態で含み、この場合、前記活性医薬成分は、約５重量％から約１００重量％の本発明の結晶質一水和物を含む。この第二の実施態様の１つの類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約１０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第二の類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約２５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第三の類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約５０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第四の類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約７５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第五の類では、活性医薬成分の実質的にすべてが、本発明の結晶質燐酸二水素塩一水和物であり、すなわち、活性医薬成分は、実質的に単一相の燐酸二水素塩一水和物である。
【００２１】
本発明の組成物は、適切には、錠剤、ピル、カプセル、粉末、顆粒、無菌溶液もしくは懸濁液、定量エーロゾルもしくは液体噴霧剤、滴剤、アンプル、自己注射装置または坐剤などの単位剤形である。本組成物は、経口、非経口、鼻腔内、舌下もしくは直腸内投与、または吸入もしくは通気による投与のためのものである。本発明の組成物の調合は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，１９９５に記載されているような、当該技術分野では公知の方法によって適便に行うことができる。
【００２２】
薬剤投与計画は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および医療状態；治療すべき状態の重症度；投与形路；および患者の腎臓および肝臓機能を含む様々な因子に従って選択される。通常技能の医師、獣医、または臨床家は、その状態の進行を防止、対抗または阻止するために必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【００２３】
上述の作用のために用いられる時の本発明の経口投薬量は、１日につき体重のｋｇあたり約０．０１ｍｇ（０．０１ｍｇ／ｋｇ／日）から約１００ｍｇ／ｋｇ／日の間、好ましくは０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ／日、および最も好ましくは０．１から５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。経口投与のための本組成物は、その投薬量を治療すべき患者の症状に合わせるために、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２００および５００ミリグラムの活性成分を含有する錠剤の形態で好ましくは提供される。薬物は、典型的には約０．０１ｍｇから約５００ｍｇの活性成分、好ましくは約１ｍｇから約２００ｍｇの活性成分を含有する。静脈内への、最も好ましい用量は、定速注入の間、約０．１から約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲である。有利なことに、本発明の結晶形は、一回の日用量で投与してもよいし、または全日用量を１日につき２回、３回もしくは４回の分割量で投与してもよい。更に、本発明の結晶形は、適する鼻腔内用ビヒクルの局所使用により鼻腔内剤型で投与することができ、または通常の当業者によく知られている経皮パッチの形態を利用して経皮経路により投与することができる。経皮送達系の形態で投与するための用量投与は、勿論、その薬剤投与形画全体を通して、間欠的ではなく継続的なものある。
【００２４】
本発明の方法において、本明細書に詳細に記載されている燐酸二水素塩および結晶質水和物は、活性医薬成分に成ることができ、および所期の投与形態（すなわち、経口錠、カプセル、エリキシル、シロップなど）に対して適切に選択され、通常の薬学的実施に矛盾しない、適する製薬用希釈剤、賦形剤または担体（本明細書では総称して「担体」材料と呼ぶ）との混合物の状態で、典型的には投与される。
【００２５】
例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与については、本活性医薬成分をラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、燐酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどの経口用非毒性医薬適合性不活性担体と併せることができ、液体形での経口投与については、本活性医薬成分をエタノール、グリセロール、水などのあらゆる経口用非毒性医薬適合性不活性担体と併せることができる。更に、所望されるか必要な際には、適する結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤もその混合物に配合することができる。適する結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖（グルコースまたはβ−ラクトースなど）、トウモロコシ甘味料、天然および合成ゴム（アラビアゴム、トラガカントゴムまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、蝋などが挙げられる。これらの剤形に用いられる滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
構造式Ｉの燐酸二水素塩およびその結晶質一水和物は、水への高い溶解度を有し、その結果、調合物、特に、活性成分の比較的濃縮された水溶液が求められる鼻腔内および静脈内用調合物、の調製にとりわけ適用できるようになることが判明した。水への式Ｉの結晶質燐酸二水素塩一水和物の溶解度は、約７２ｍｇ／ｍＬであることが判明した。
【００２７】
更なる態様によると、本発明は、下記構造式ＩＶ：
【００２８】
【化７】
の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンを、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）およびイソアミルアルコール（ＩＡＡ）などの適するＣ１〜Ｃ５アルカノール、またはＣ１〜Ｃ５アルカノール水溶液中、約１当量の燐酸と反応させることを含む、式Ｉの燐酸二水素塩の調製方法を提供する。この反応は、約２５℃から約８０℃の温度範囲で行われる。その燐酸溶液をアミン溶液に添加してもよいし、またはその添加を逆方向に行ってもよい。その結晶質燐酸二水素塩一水和物は、下に記載するような燐酸二水素塩のＣ１〜Ｃ５アルカノール水溶液からの結晶化によって得られる。
【００２９】
構造式Ｉの燐酸二水素塩の一水和物を結晶化するための一般法
（ａ）２５℃、エタノール／水系中：
（１）水分濃度が３１重量％より高いようなエタノールおよび水における化合物Ｉの混合物から結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３０】
（ｂ）２５℃、イソアミルアルコール（ＩＡＡ）／水系中：
（１）水分濃度が２．９重量％より高いようなＩＡＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３１】
（ｃ）４０℃、ＩＡＡ／水系中：
（１）水分濃度が３．６重量％より高いようなＩＡＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３２】
（ｄ）６０℃、ＩＡＡ／水系中：
（１）水分濃度が４．５重量％より高いようなＩＡＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３３】
（ｅ）２５℃、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）／水系中：
（１）水分濃度が７．０重量％より高いようなＩＰＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３４】
（ｆ）４０℃、ＩＰＡ／水系中：
（１）水分濃度が８．１重量％より高いようなＩＰＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３５】
（ｇ）７５℃、ＩＰＡ／水系中：
（１）水分濃度が２０重量％より高いようなＩＰＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３６】
構造式ＩＶの出発化合物は、下の図式１から３および実施例１において詳述する手順によって調製することができる。
【００３７】
尚、更なる態様において、本発明は、ＤＰ−ＩＶ阻害剤が必要とされる臨床状態の治療および予防の少なくとも一方のための方法を提供し、この方法は、そうした予防または治療が必要な患者に予防または治療有効量の上で定義したとおりの式Ｉの塩またはその結晶質水和物を投与することを含む。
【００３８】
以下の非限定的実施例は、本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲または精神に対する制限とは見なさないでいただきたい。
【００３９】
本明細書に記載する化合物は、ケト−エノール互変異性体のような互変異性体として存在することがある。個々の互変異性体ならびにそれらの混合物は、構造式Ｉの化合物とともに包含される。
【００４０】
用語「％エナンチオマー過剰」（「ｅｅ」と略記する）は、少ない方の異性体（副異性体）の％を減じた多い方の異性体（主異性体）の％を意味することになる。従って、７０％エナンチオマー過剰は、一方のエナンチオマー８５％および他方１５％の構成に相当する。用語「エナンチオマー過剰」は、用語「光学純度」と同義である。
【００４１】
（実施例）
【００４２】
【化８】
（２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン燐酸二水素塩一水和物
３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン塩酸塩（１−４）の調製
【００４３】
【化９】
【００４４】
段階Ａ：ビスヒドラジド（１−１）の調製
ヒドラジン（２０．１ｇ、水中３５重量％、０．２２ｍｏｌ）を３１０ｍＬのアセトニトリルと混合した。３１．５ｇのトリフルオロ酢酸エチル（０．２２ｍｏｌ）を６０分かけて添加した。その内部温度を１４℃から２５℃に上昇させた。得られた溶液を２２から２５℃で６０分間、時間を経過させた。その溶液を７℃に冷却した。１６℃未満の温度で１３０分かけて１７．９ｇの５０重量％ＮａＯＨ水溶液（０．２２ｍｏｌ）および２５．３ｇの塩化クロロアセチル（０．２２ｍｏｌ）を同時に添加した。反応が完了したら、２７から３０℃、Ｈｇで２６〜２７の真空下でその混合物を真空蒸留して、水およびエタノールを除去した。その蒸留中、７２０ｍＬのアセトニトリルをゆっくりと添加して、一定量（約５００ｍＬ）を維持した。そのスラリーを濾過して、塩化ナトリウムを除去した。そのケークを約１００ｍＬのアセトニトリルですすいだ。溶媒を除去することによって、ビス−ヒドラジド１−１（４３．２ｇ、収率９６．５％、ＨＰＬＣアッセイによる純度９４．４面積％）を生じた。
【００４５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ４．２（ｓ，２Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ）、および１１．６（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。
【００４６】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ４１．０，１１６．１（ｑ，Ｊ＝３６２Ｈｚ），１５５．８（ｑ，Ｊ＝５０Ｈｚ）、および１６５．４ｐｐｍ。
【００４７】
段階Ｂ： ５−（トリフルオロメチル）−２−（クロロメチル）−１，３，４−オキサジアゾール（１−２）の調製
ＡＣＮ（８２ｍＬ）中の段階Ａからのビスヒドラジド１−１（４３．２ｇ、０．２１ｍｏｌ）を５℃に冷却した。温度を１０℃未満で維持しながらオキシ塩化燐（３２．２ｇ、０．２１ｍｏｌ）を添加した。その混合物を８０℃に加熱し、ＨＰＬＣが２面積％未満の１−１を示すまで２４時間この温度で時間を経過させた。別の容器で、２６０ｍＬのＩＰＡｃおよび２５０ｍＬの水を混合し、０℃に冷却した。内部温度を１０℃未満に保ちながら、その反応スラリーを前記冷却物に添加した。添加後、その混合物を３０分間、激しく攪拌し、その温度を室温まで上昇させて、水性層をカットした。その後、有機層を２１５ｍＬの水、２１５ｍＬの５重量％重炭酸ナトリウム水溶液、および最後に２１５ｍＬの２０重量％ブライン水溶液で洗浄した。処理後のＨＰＬＣアッセイ収率は、８６から９２％であった。７５から８０ｍｍＨｇ、５５℃での蒸留によって揮発成分を除去して油を生じた。それは更なる精製をせずに段階Ｃで直接用いることができた。そうでなければ、その生成物を蒸留によって精製して、収率７０から８０％で１−２を生じることができる。
【００４８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．８（ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ。
【００４９】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ３２．１，１１５．８（ｑ，Ｊ＝３３７Ｈｚ），１５６．２（ｑ，Ｊ＝５０Ｈｚ）、および１６４．４ｐｐｍ。
【００５０】
段階Ｃ：Ｎ−［（２Ｚ）−ピペラジン−２−イリデン］トリフルオロアセトヒドラジド（１−３）の調製
−２０℃に冷却したメタノール（１５０ｍＬ）中のエチレンジアミン（３３．１ｇ、０．５５ｍｏｌ）の溶液に、内部温度を−２０℃に保ちながら、段階Ｂからの蒸留オキサジアゾール１−２（２９．８ｇ、０．１６ｍｏｌ）を添加した。添加が完了した後、得られたスラリーを−２０℃で１時間、時間を経過させた。その後、エタノール（２２５ｍＬ）を添加し、そのスラリーをゆっくり−５℃に温めた。−５℃で６０分後、スラリーを濾過し、−５℃のエタノール（６０ｍＬ）で洗浄した。アミジン１−３を白色の固体として収率７２％で得た（２４．４ｇ、ＨＰＬＣによる純度９９．５面積重量％）。
【００５１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．９（ｔ，２Ｈ），３．２（ｔ，２Ｈ），３．６（ｓ，２Ｈ）、および８．３（ｂ，１Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ４０．８，４２．０，４３．３，１１９．３（ｑ，Ｊ＝３５０Ｈｚ），１５４．２、および１５６．２（ｑ，Ｊ＝３８Ｈｚ）ｐｐｍ。
【００５２】
段階Ｄ： ３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン塩酸塩（１−４）
１１０ｍＬのメタノール中のアミジン１−３（２７．３ｇ、０．１３ｍｏｌ）の懸濁液を５５℃に温めた。３７％塩酸（１１．２ｍＬ、０．１４ｍｏｌ）をこの温度で１５分かけて添加した。その添加中、すべての固体が溶解し、結果的に透明な溶液を生じた。反応を３０分間、時間を経過させた。その溶液を２０℃に冷却し、結晶種層が形成されるまで（１０分から１時間）この温度で時間を経過させた。３００ｍＬのＭＴＢＥを２０℃で１時間かけて添加した。得られたスラリーを２℃に冷却し、３０分間おいて、濾過した。固体を５０ｍＬのエタノール：ＭＴＢＥ（１：３）で洗浄し、真空下、４５℃で乾燥させた。トリアゾール１−４の収量は、２６．７ｇ（ＨＰＬＣによる純度９９．５面積重量％）であった。
【００５３】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．６（ｔ，２Ｈ），４．４（ｔ，２Ｈ），４．６（ｓ，２Ｈ）、および１０．６（ｂ，２Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３９．４，３９．６，４１．０，１１８．６（ｑ，Ｊ＝３２５Ｈｚ），１４２．９（ｑ，Ｊ＝５０Ｈｚ）、および１４８．８ｐｐｍ。
【００５４】
【化１０】
【００５５】
段階Ａ： ４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−オン（２−３）の調製
２，４，５−トリフルオロフェニル酢酸（２−１）（１５０ｇ、０．７８９ｍｏｌ）、メルドラム酸（１２５ｇ、０．８６８ｍｏｌ）、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（７．７ｇ、００６３ｍｏｌ）を５Ｌの３つ口フラスコに入れた。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）（５２５ｍＬ）を室温で一度に添加して、固体を溶解した。温度を４０℃未満で維持しながら、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８２ｍＬ、１．６２ｍｏｌ）を室温で一度に添加した。温度を０℃と５℃の間で維持しながら、塩化ピバロイル（１０７ｍＬ、０．８６８ｍｏｌ）を１から２時間かけて一滴ずつ添加した。その反応混合物を５℃で１時間おいた。塩酸トリアゾール１−４（１８０ｇ、０．７８９ｍｏｌ）を４０から５０℃で一度に添加した。その反応溶液を７０℃で数時間おいた。その後、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（６２５ｍＬ）を２０から４５℃で一滴ずつ添加した。そのバッチに結晶種を入れ、２０から３０℃で１から２時間おいた。その後、追加の５２５ｍＬの５％炭酸水素ナトリウム水溶液を２から３時間かけて一滴ずつ添加した。数時間、室温においた後、そのスラリーを０から５℃に冷却し、１時間おいた後、固体を濾過した。その湿潤ケークを、２０％ＤＭＡｃ水溶液（３００ｍＬ）、続いて追加の２バッチの２０％ＤＭＡｃ水溶液（４００ｍＬ）、および最後に水（４００ｍＬ）で置換洗浄した。そのケークを室温で吸引乾燥させた。最終生成物２−３の単離された収率は、８９％であった。
【００５６】
段階Ｂ： （２Ｚ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブト−２−エン−２−アミン（２−４）の調製
５Ｌ丸底フラスコにメタノール（１００ｍＬ）、ケトアミド２−３（２００ｇ）および酢酸アンモニウム（１１０．４ｇ）を入れた。その後、メタノール（１８０ｍＬ）および２８％水酸化アンモニウム水溶液（５８．６ｍＬ）を添加し、その添加中、温度は３０℃未満に保った。追加のメタノール（１００ｍＬ）をその反応混合物に添加した。その混合物を還流温度で加熱し、２時間おいた。反応を室温に冷却し、その後、氷浴で約５℃に冷却した。３０分後、固体を濾過し、乾燥させて、２−４を固体として生じた（１８０ｇ）；融点２７１．２℃。
【００５７】
段階Ｃ： （２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン（２−５）の調製
５００ｍＬフラスコに、窒素雰囲気下で、クロロ（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）ダイマー｛［Ｒｈ（ｃｏｄ）Ｃｌ］２｝（２９２ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）および（Ｒ，Ｓ）ｔ−ブチルＪｏｓｉｐｈｏｓ（７０８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を入れた。その後、脱気ＭｅＯＨを添加し（２００ｍＬ）、その混合物を室温で１時間攪拌した。４Ｌ水素化装置に、エナミンアミド２−４（１１８ｇ、０．２９ｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１Ｌ）とともに入れた。そのスラリーを脱気した。その後、前記触媒溶液を窒素下でその水素化装置に移した。３回脱気した後、そのエナミンアミドを２００ｐｓｉの水素ガスのもと、５０℃で１３時間水素化した。ＨＰＬＣにより、アッセイ収率は９３％であり、光学純度は９４％ｅｅであると判定された。
【００５８】
その光学純度を次の方法で更に高めた。その水素化反応からのメタノール溶液（ＭｅＯＨ １８０ｍＬ中１８ｇ）を濃縮し、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（４５ｍＬ）に交換した。この溶液にＨ３ＰＯ４水溶液（０．５Ｍ、９５ｍＬ）を添加した。層の分離後、３ＮのＮａＯＨ（３５ｍＬ）を水性層に添加し、その後、それをＭＴＢＥ（１８０ｍＬ＋１００ｍＬ）で抽出した。そのＭＴＢＥ溶液を濃縮し、溶媒を熱トルエン（１８０ｍＬ、約７５℃）に交換した。その後、その熱トルエン溶液を放置してゆっくりと０℃に冷却した（５から１０時間）。濾過によって結晶を単離した（１３ｇ、収率７２％、９８から９９％ｅｅ）；融点１１４．１から１１５．７℃。
【００５９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）：δ７．２６（ｍ），７．０８（ｍ），４．９０（ｓ），４．８９（ｓ），４．１４（ｍ），３．９５（ｍ），３．４０（ｍ），２．６８（ｍ），２．４９（ｍ），１．４０（ｂｓ）。
【００６０】
化合物２−５は、アミド結合回転異性体として存在する。指示がない限り、その主および副回転異性体は、それらの炭素１３シグナルが充分に分離されないので、一緒のグループにする。
【００６１】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：δ１７１．８，１５７．４（ｄｄｄ，ＪＣＦ＝２４２．４，９．２，２．５Ｈｚ），１５２．２（主），１５１．８（副），１４９．３（ｄｄｄ；ＪＣＦ＝２４６．７，１４．２，１２．９Ｈｚ），１４７．４（ｄｄｄ，ＪＣＦ＝２４１．２，１２．３，３．７Ｈｚ），１４４．２（ｑ，ＪＣＦ＝３８．８Ｈｚ），１２４．６（ｄｄｄ，ＪＣＦ＝１８．５，５．９，４．０Ｈｚ），１２０．４（ｄｄ，ＪＣＦ＝１９．１，６．２Ｈｚ），１１９．８（ｑ，ＪＣＦ＝２６８．９Ｈｚ），１０６．２（ｄｄ，ＪＣＦ＝２９．５，２０．９Ｈｚ），５０．１，４４．８，４４．３（副），４３．２（副），４２．４，４１．６（副），４１．４，３９．６，３８．５（副），３６．９。
【００６２】
結晶質遊離塩基は、次のようにして単離することもできる：
（ａ）水素化段階が完了したら、その反応混合物に２５重量％のエコソルブ（Ｅｃｏｓｏｒｂ）Ｃ−９４１を添加する。その混合物を窒素下で１時間攪拌し、その後、濾過する。そのケークを２Ｌ／ｋｇのメタノールで洗浄する。遊離塩基の回収は、約９５％であり、光学純度は、約９５％ｅｅである。
【００６３】
（ｂ）メタノール中のその遊離塩基の溶液を、（遊離塩基の添加量を基準にして）３．５から４．０Ｌ／ｋｇの量に濃縮し、その後、イソプロパノール（ＩＰＡ）に溶媒交換して、３．０Ｌ／ｋｇ ＩＰＡの最終量にする。
【００６４】
（ｃ）そのスラリーを４０℃に加熱し、４０℃で１時間おいて、その後、２時間かけて２５℃に冷却する。
【００６５】
（ｄ）ヘプタン（７Ｌ／ｋｇ）を７時間かけて添加し、そのスラリーを２２から２５℃で１２時間攪拌する。濾過前の上清濃度は、１０から１２ｍｇ／ｇである。
【００６６】
（ｅ）そのスラリーを濾過し、固体を３０％ＩＰＡ／ヘプタン（２Ｌ／ｋｇ）で洗浄する。
【００６７】
（ｆ）固体を４０℃の真空オーブンで乾燥させる。
【００６８】
（ｇ）その遊離塩基の光学純度は、約９９％ｅｅである。
【００６９】
次の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件を用いて、生成物への転化率を決定した。
【００７０】
カラム： ウォーター・シンメトリー（Ｗａｔｅｒ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ）Ｃ１８、２５０ｍｍ ｘ ４．６ｍｍ
溶離剤： 溶媒Ａ： ０．１容量％ＨＣｌＯ４／Ｈ２Ｏ
溶媒Ｂ： アセトニトリル
傾斜： ０分 ７５％ Ａ： ２５％ Ｂ
１０分 ２５％ Ａ： ７５％ Ｂ
１２．５分 ２５％ Ａ： ７５％ Ｂ
１５分 ７５％ Ａ： ２５％ Ｂ
流量： １ｍＬ／分
注入量： １０μＬ
ＵＶ検出： ２１０ｎｍ
カラム温度： ４０℃
保持時間： 化合物２−４： ９．１分
化合物２−５： ５．４分
ｔ−ブチルＪｏｓｉｐｈｏｓ： ８．７分
次の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件を用いて、光学純度を決定した：
カラム： キラパック（Ｃｈｉｒａｐａｋ）、ＡＤ−Ｈ、２５０ｍｍ ｘ ４．６ｍｍ
溶離剤： 溶媒Ａ： ヘプタン中の０．２容量％ジエチルアミン
溶媒Ｂ： エタノール中の０．１容量％ジエチルアミン
イソクラティック（Ｉｓｏｃｈｒａｔｉｃ）実行時間： １８分
流速： ０．７ｍＬ／分
注入量： ７μＬ
ＵＶ検出： ２６８ｎｍ
カラム温度： ３５℃
保持時間： （Ｒ）−アミン２−５： １３．８分
（Ｓ）−アミン２−５： １１．２分
（２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン燐酸二水素塩一水和物
オーバーヘッドスターラー、加熱マントルおよび熱電対を装備した２５０ｍＬ丸底フラスコに、３１．５ｍＬのイソプロパノール（ＩＰＡ）、１３．５ｍＬの水、１５．０ｇ（３６．９ｍｍｏｌ）の（２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン遊離塩基および４．２５ｇ（３６．９ｍｍｏｌ）の８５％燐酸水溶液を入れた。その混合物を７５℃に加熱した。濃厚な白色沈殿が低温で生成したが、７５℃に達すると溶解した。その溶液を６８℃に冷却し、その後、その温度で２時間保持した。この経過時間中に、固体のスラリー層が形成した［その溶液に、０．５から５重量％の小粒径（アルピーネミルド（ａｌｐｉｎｅ ｍｉｌｌｅｄ））一水和物の、結晶種を入れることができる］。その後、そのスラリーを４℃／時の速度で２１℃に冷却して、一晩保持した。その後、１０５ｍＬのＩＰＡをそのスラリーに添加した。１時間後、スラリーを濾過し、４５ｍＬのＩＰＡで洗浄した（固体を水／ＩＰＡ溶液で洗浄して、他の結晶形への転換を回避することもできる）。固体を外気に触れさせながら、フリットで乾燥させた。１８．６ｇの固体を回収した。それらの固体は、ＨＰＬＣ面積百分率（ＨＰＬＣ条件は、上で与えたものと同じであった）により純度９９．８％以上であることが判明した。単離した固体の粒径分布分析は、平均ＰＤＳが８０マイクロメートルであり、９５％が１８０マイクロメートル未満であることを示した。それらの固体の結晶形は、Ｘ線粉末回折および熱重量分析により、一水和物であることが証明された。
【００７１】
Ｘ線粉末回折検査は、分子構造、結晶性および多形性の特性付に幅広く用いられている。本結晶質燐酸二水素塩一水和物のＸ線粉末回折パターンは、ＰＷ３０４０／６０コンソールを備えたフィリップス・アナリティカル・エキスパート・プロ・Ｘ線回折システム（Ｐｈｉｌｉｐｓ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’Ｐｅｒｔ ＰＲＯ Ｘ−ｒａｙ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）で生成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ ＬＥＦ Ｘ線管Ｋ−アルファ照射をＸ線源として用いた。
【００７２】
図１は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についてのＸ線回折パターンを示すものである。この一水和物は、７．４２、５．４８および３．９６オングストロームの格子面間隔に対応する特性回折ピークを示した。この一水和物は、６．３０、４．７５および４．４８オングストロームの格子面間隔を更なる特徴とした。この一水和物は、５．８５、５．２１および３．５２オングストロームの格子面間隔を更にいっそうの特徴とした。
【００７３】
上に記載したＸ線粉末回折パターンに加えて、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形は、その固体炭素１３およびフッ素１９核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルによって更に特徴づけられた。その固体炭素１３ＮＭＲスペクトルは、ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）４ｍｍ二重共鳴ＣＰＭＡＳプローブを用いるブルカーＤＳＸ ４００ＷＢ ＮＭＲシステムで得た。その炭素１３ＮＭＲスペクトルは、可変増幅交差分極でのプロトン／炭素１３交差分極マジック角回転を利用したものだった。サンプルを１５．０ｋＨｚで回転させ、合計２０４８のスキャンを２０秒のリサイクル遅延で収集した。４０Ｈｚの線の広がりをスペクトルに適用した後、ＦＴを行った。化学シフトは、第二リファレンスとしてグリシンのカルボニル炭素（１７６．０３ｐ．ｐ．ｍ）を用いてＴＭＳスケールで報告される。
【００７４】
その固体フッ素１９ＮＭＲスペクトルは、ブルカー４ｍｍ ＣＲＡＭＰＳプローブを用いるブルカーＤＳＸ ４００ＷＢ ＮＭＲシステムで得た。このＮＭＲスペクトルは、単純パルス−獲得パルスプログラムを利用したものだった。サンプルを１５．０ｋＨｚで回転させ、合計１６のスキャンを３０秒のリサイクル遅延で収集した。ベスペル・エンドキャップを用いて、フッ素バックグラウンドを最小にした。１００Ｈｚの線の広がりをそのスペクトルに適用した後、ＦＴを行った。化学シフトは、−１２２ｐｐｍの化学シフトを割り当てられるポリ（テトラフルオロエチレン）（テフロン）を外部第二リファレンスとして用いて報告される。
【００７５】
図２は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての固体炭素１３ＣＰＭＡＳ ＮＭＲスペクトルを示すものである。この一水和物形は、１６９．１、１２０．８および４６．５ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値を有する特性シグナルを示した。この一水和物形の更なる特徴は、１５９．０、１５０．９および４０．７ｐｐｍの化学シフト値を有するシグナルであった。
【００７６】
図３は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての固体フッ素１９ＭＡＳ ＮＭＲスペクトルを示すものである。この一水和物形は、−６４．５、−１１４．７、−１３６．３および−１４６．２ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値を有する特性シグナルを示した。この一水和物形の更なる特徴は、−９６．５、−１０４．４、−１０６．３および−１５４．５ｐｐｍの化学シフト値を有するシグナルであった。
【００７７】
図４は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての特性熱重量分析（ＴＧＡ）曲線を示すものである。パーキン・エルマー・モデル（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ｍｏｄｅｌ）ＴＧＡ ７または同等の装置を使用した。実験は、窒素流のもと、約２５０℃の最高温度まで１０℃／分の昇温速度を用いて行った。バランスを自動的に控除した後、５から２０ｍｇのサンプルを白金皿に添加し、加熱炉を立ち上げて、昇温プログラムを開始させた。重量／温度データをその装置により自動的に収集した。結果の分析は、その装置のソフトウエアの中のデルタＹ（Ｄｅｌｔａ Ｙ）機能を選択すること、および重量損失を計算しなければならない温度を選択することによって行った。重量損失は、分解／蒸発の開始まで報告される。ＴＧＡは、周囲温度から約２５０℃までで約３．３６４７％の重量損失を示した。
【００７８】
図５は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての特性ＤＳＣ曲線を示すものである。ティー・エイ・インストルメンツ（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）ＤＳＣ ２９１０または同等の機器装備を使用した。２ｍｇと６ｍｇの間のサンプルを蓋のない皿に計り入れた。その後、この皿をクリンプさせて、その熱量計のセルのサンプル位置に置いた。空の皿をレファレンス位置に置いた。熱量計のセルを閉じ、窒素流をそのセルに通した。昇温プログラムは、約２５０℃の温度まで１０℃／分の昇温速度でサンプルを加熱するように設定した。昇温プログラムが開始された。その実行が完了したら、そのシステムソフトウエアに含まれているＤＳＣ分析プログラムを用いてデータを分析した。溶解吸熱は、吸熱が観察される温度範囲より高い基線温度のポイントと低い基線温度のポイントの間で積分したものだった。報告されたデータは、開始温度、ピーク温度、およびエンタルピーである。
【００７９】
本発明の結晶質燐酸二水素塩一水和物は、上記Ｘ線粉末回折、フッ素１９ＭＡＳ ＮＭＲ、炭素１３ＣＰＭＡＳ ＮＭＲ、およびＤＳＣ物理特性で、その形の少なくとも約５％の相純度を有する。１つの実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約１０％である。第２の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約２５％である。第３の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約５０％である。第４の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約７５％である。第５の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約９０％である。第６の実施態様において、本結晶質燐酸二水素塩一水和物は、上記固体物理特性で、実質的に単一相の形である。用語「相純度」とは、本出願に記載されている固体物理法によって決定されるような、燐酸二水素塩一水和物の、その塩の特定の結晶または非晶形に関する固体純度を意味する。
【００８０】
本結晶質燐酸二水素塩一水和物は、周囲条件下で安定であることが判明した。それは、非常に乾燥した窒素流のもとで４０℃より上に加熱した場合、脱水一水和物に転化することが判明した。脱水一水和物は、周囲条件下では一水和物に転化して戻った。
【００８１】
医薬組成物の実施例
１）直接圧縮法：
本燐酸二水素塩一水和物は、直接圧縮法によって錠剤に調合することができる。１００ｍｇ力価の錠剤を、１２８．４ｍｇの本活性成分、１２７．８ｍｇの微結晶性セルロース、１２７．８ｍｇのマンニトール（または１２７．８ｍｇの燐酸二カルシウム）、８ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、８ｍｇのステアリン酸マグネシウムおよび１６ｍｇのオパドライ・ホワイト（Ｏｐａｄｒｙ ｗｈｉｔｅ：ペンシルバニア州ウエストポイントのカラーコン（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）製の有標コーチング材料）から構成した。本活性成分、微結晶性セルロース、マンニトール（または燐酸二カルシウム）およびクロスカルメロースを先ずブレンドし、次に、その混合物をステアリン酸マグネシウムで潤滑させて、錠剤にプレスした。その後、それらの錠剤をオパドライ・ホワイトでフィルムコーチングした。
【００８２】
２）ローラー圧縮法：
本燐酸二水素塩一水和物は、ローラー圧縮法によって錠剤に調合することができる。１００ｍｇ力価の錠剤を、１２８．４ｍｇの本活性成分、４５ｍｇの微結晶性セルロース、１１１．６ｍｇの燐酸二カルシウム、６ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、９ｍｇのステアリン酸マグネシウムおよび１２ｍｇのオパドライ・ホワイト（ペンシルバニア州ウエストポイントのカラーコン製の有標コーチング材料）から構成した。本活性成分、微結晶性セルロース、燐酸二カルシウムおよびクロスカルメロースを先ずブレンドし、次に、その混合物を全体の３分の１の量のステアリン酸マグネシウムで潤滑させ、ローラー圧縮してリボンにした。その後、これらのリボンを粉砕し、その後、得られた顆粒をステアリン酸マグネシウムの残量で潤滑させて、錠剤にプレスした。その後、それらの錠剤をオパドライ・ホワイトでフィルムコーチングした。
【００８３】
３）静脈内（ｉ．ｖ．）用水性調合物は、ｐＨ４．５±０．２の１０ｍＭステアリン酸ナトリウム／０．８％食塩水中の式Ｉの燐酸二水素塩の一水和物と特徴づけられる。４．０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する調合物については、８００ｍｇのＮａＣｌを８０ｍＬの水に溶解し、その後、５７．５μＬの氷酢酸を添加し、続いて５１２ｍｇの本燐酸二水素塩一水和物を添加する。０．１ＮのＮａＯＨ溶液でｐＨを４．５±０．２にする。水で最終量を１００ｍＬにする。２．０ｍｇ／ｍＬ溶液は、５０．０ｍＬのその４．０ｍｇ／ｍＬ溶液をプラシーボで１００．０ｍＬに希釈することによって製造することができる。１．０ｍｇ／ｍＬ溶液は、２５．０ｍＬのその４．０ｍｇ／ｍＬ溶液をプラシーボで１００．０ｍＬに希釈することによって製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の特性Ｘ線回折パターンである。
【図２】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図３】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物のフッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図４】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の典型的な熱重量分析（ＴＧＡ）曲線である。
【図５】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の典型的な示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤の特定の塩に関する。更に詳細には、本発明は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶの強力な阻害剤である４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩に関する。この新規の塩およびその結晶質水和物は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶの阻害剤が指示される疾病および状態、特に２型糖尿病、肥満および高血圧、の治療および予防に有用である。更に、本発明は、２型糖尿病、肥満および高血圧の治療に有用な前記燐酸二水素塩およびその結晶質水和物を含む医薬組成物、ならびに前記燐酸二水素塩およびその結晶質水和物ならびにそれらの医薬組成物の調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルコース依存性インスリン分泌性ペプチド（ＧＩＰ）とグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）の両方を不活性化する酵素であるジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）の阻害は、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）としても知られている２型糖尿病の治療および予防への新規アプローチの代表である。２型糖尿病の治療に関するＤＰ−ＩＶ阻害剤の治療上の可能性は、次の文献に総説されている：Ｃ．Ｆ．ＤｅａｃｏｎおよびＪ．Ｊ．Ｈｏｌｓｔ，「２型糖尿病の治療および予防へのアプローチとしてのジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶの阻害：歴史的背景（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｓ ａｎ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ： ａ ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ）」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２９４：１−４（２０００）；Ｋ．Ａｕｇｕｓｔｙｎｓら，「２型糖尿病治療用の新規治療薬としてのジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤（Ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｓ ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ）」，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１３：４９９−５１０（２００３）；およびＤ．Ｊ．Ｄｒｕｃｋｅｒ，「２型糖尿病の治療に関するジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤の治療上の可能性（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ）」，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ．１２：８７−１００（２００３）。
【０００３】
メルク社（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．）に譲渡された国際公開公報第０３／００４４９８号（２００３年１月１６日発行）は、ＤＰ−ＩＶの強力な阻害剤であり、従って２型糖尿病の治療に有用であるβ−アミノテトラヒドロトリアゾロ［４，３−ａ］ピラジンの種類を記載している。具体的には、４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンが、国際公開公報第０３／００４４９８号に開示されている。この化合物の医薬適合性の塩は、一般に、国際公開公報第０３／００４４９８号の範囲に包含される。
【０００４】
しかし、上の参考文献には、新たに開示する下記構造式Ｉの４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの一塩基性燐酸二水素塩の具体的な開示はない。
【０００５】
本発明は、ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰ−ＩＶ）阻害剤４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの新規燐酸二水素塩およびその結晶質水和物、特に、結晶質一水和物に関する。本発明の燐酸二水素塩および結晶質水和物は、４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの医薬組成物の調製において、調製しやすさ、取扱いやすさおよび投薬しやすさなどの利点を有する。特に、それらは、応力、高温および湿度に対する安定性などの改善された物理的および化学的安定性、ならびに可溶性および溶解速度などの改善された物理化学的特性を示し、そうしたことが、それらを様々な医薬剤形の製造に特に適するものにしている。本発明は、特に２型糖尿病、肥満および高血圧の予防または治療のための、その新規の塩および水和物を含有する医薬組成物ならびにそれらのＤＰ−ＩＶ阻害剤としての使用方法にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、下記構造式Ｉ：
【０００７】
【化４】
の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの新規一塩基性燐酸二水素塩またはその結晶質水和物を提供する。詳細には、本発明は、式Ｉの燐酸二水素塩の結晶質一水和物を提供する。
【０００８】
本発明の燐酸二水素塩は、＊で示すステレオジェニック炭素原子での不斉中心を有し、故に、ラセミ体、ラセミ混合物および単一のエナンチオマーとして発生し得る。すべての異性体形が、本発明に包含される。実質的に他のものを含まない単独のエナンチオマー、ならびに２つのエナンチオマーの混合物も、本発明の範囲に包含される。
【０００９】
本発明の１つの実施態様は、下記構造式ＩＩ：
【００１０】
【化５】
の（２Ｒ）４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩またはその結晶質水和物を提供する。
【００１１】
本発明の第二の実施態様は、下記構造式ＩＩＩ：
【００１２】
【化６】
の（２Ｓ）４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩またはその結晶質水和物を提供する。
【００１３】
より具体的には、本発明の燐酸二水素塩は、１モル当量のモノプロトン化４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンカチオンおよび１モル当量の燐酸二水素（重燐酸）アニオンから成る。
【００１４】
本発明の更なる実施態様において、上記構造式ＩからＩＩＩの燐酸二水素塩は、結晶質水和物である。この実施態様の１つの類では、前記結晶質水和物は、結晶質一水和物である。
【００１５】
本発明の更なる実施態様は、検出可能な量で存在する結晶質一水和物を含む構造式ＩからＩＩＩの燐酸二水素塩原薬を提供する。「原薬」とは、活性医薬成分（「ＡＰＩ」）を意味する。その原薬中の結晶質一水和物の量は、Ｘ線粉末回折、固体フッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴分光法、固体炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴分光法、固体フーリエ変換赤外線分光法、およびラマン分光法などの物理学的方法の使用によって定量することができる。この実施態様の１つの類では、約５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第二の類では、約１０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第三の類では、約２５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第四の類では、約５０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第五の類では、約７５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物が、原薬中に存在する。この実施態様の第六の類では、その燐酸二水素塩原薬の実質的にすべてが、本発明の結晶質一水和物であり、すなわち、その燐酸二水素塩原薬は、実質的に単一相の一水和物である。
【００１６】
本発明の結晶質燐酸二水素塩は、薬理活性成分を含有する医薬品の調製において、遊離塩基および以前に開示された塩酸塩（国際公開公報第０３／００４４９８号）を越える製薬上の利点を有する。特に、本結晶質燐酸二水素塩一水和物の強化された化学的および物理的安定性は、薬理活性成分を含有する固体製剤形の調製において有利な特性の要因となる。
【００１７】
強力なＤＰ−ＩＶ阻害特性を示す本発明の燐酸二水素塩は、２型糖尿病、肥満および高血圧の予防または治療に特に有用である。
【００１８】
本発明のもう１つの局面は、ＤＰ−ＩＶの阻害剤が必要とされる臨床状態を予防または治療するための方法を提供し、この方法は、そうした予防または治療が必要な患者に予防または治療有効量の構造式Ｉの燐酸二水素塩またはその水和物、特にその結晶質一水和物を投与することを含む。そうした臨床状態には、糖尿病、特に２型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性および肥満が挙げられる。
【００１９】
本発明は、ＤＰ−ＩＶの阻害剤が必要とされる臨床状態の予防または治療用薬物を製造するための、構造式Ｉの燐酸二水素塩またはその水和物、特に結晶質一水和物の使用も提供する。
【００２０】
本発明は、構造式Ｉの燐酸二水素塩またはその水和物、特に結晶質一水和物を１つ以上の医薬適合性の担体または賦形剤とともに含む医薬組成物も提供する。１つの実施態様において、本医薬組成物は、治療有効量の活性医薬成分を医薬適合性の賦形剤との混合物の状態で含み、この場合、前記活性医薬成分は、検出可能な量の本発明の結晶質一水和物を含む。第二の実施態様において、本医薬組成物は、治療有効量の活性医薬成分を医薬適合性の賦形剤との混合物の状態で含み、この場合、前記活性医薬成分は、約５重量％から約１００重量％の本発明の結晶質一水和物を含む。この第二の実施態様の１つの類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約１０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第二の類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約２５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第三の類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約５０重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第四の類では、そうした組成物中の活性医薬成分は、約７５重量％から約１００重量％の本結晶質一水和物を含む。この実施態様の第五の類では、活性医薬成分の実質的にすべてが、本発明の結晶質燐酸二水素塩一水和物であり、すなわち、活性医薬成分は、実質的に単一相の燐酸二水素塩一水和物である。
【００２１】
本発明の組成物は、適切には、錠剤、ピル、カプセル、粉末、顆粒、無菌溶液もしくは懸濁液、定量エーロゾルもしくは液体噴霧剤、滴剤、アンプル、自己注射装置または坐剤などの単位剤形である。本組成物は、経口、非経口、鼻腔内、舌下もしくは直腸内投与、または吸入もしくは通気による投与のためのものである。本発明の組成物の調合は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，１９９５に記載されているような、当該技術分野では公知の方法によって適便に行うことができる。
【００２２】
薬剤投与計画は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および医療状態；治療すべき状態の重症度；投与形路；および患者の腎臓および肝臓機能を含む様々な因子に従って選択される。通常技能の医師、獣医、または臨床家は、その状態の進行を防止、対抗または阻止するために必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【００２３】
上述の作用のために用いられる時の本発明の経口投薬量は、１日につき体重のｋｇあたり約０．０１ｍｇ（０．０１ｍｇ／ｋｇ／日）から約１００ｍｇ／ｋｇ／日の間、好ましくは０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ／日、および最も好ましくは０．１から５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。経口投与のための本組成物は、その投薬量を治療すべき患者の症状に合わせるために、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２００および５００ミリグラムの活性成分を含有する錠剤の形態で好ましくは提供される。薬物は、典型的には約０．０１ｍｇから約５００ｍｇの活性成分、好ましくは約１ｍｇから約２００ｍｇの活性成分を含有する。静脈内への、最も好ましい用量は、定速注入の間、約０．１から約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲である。有利なことに、本発明の結晶形は、一回の日用量で投与してもよいし、または全日用量を１日につき２回、３回もしくは４回の分割量で投与してもよい。更に、本発明の結晶形は、適する鼻腔内用ビヒクルの局所使用により鼻腔内剤型で投与することができ、または通常の当業者によく知られている経皮パッチの形態を利用して経皮経路により投与することができる。経皮送達系の形態で投与するための用量投与は、勿論、その薬剤投与形画全体を通して、間欠的ではなく継続的なものある。
【００２４】
本発明の方法において、本明細書に詳細に記載されている燐酸二水素塩および結晶質水和物は、活性医薬成分に成ることができ、および所期の投与形態（すなわち、経口錠、カプセル、エリキシル、シロップなど）に対して適切に選択され、通常の薬学的実施に矛盾しない、適する製薬用希釈剤、賦形剤または担体（本明細書では総称して「担体」材料と呼ぶ）との混合物の状態で、典型的には投与される。
【００２５】
例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与については、本活性医薬成分をラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、燐酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどの経口用非毒性医薬適合性不活性担体と併せることができ、液体形での経口投与については、本活性医薬成分をエタノール、グリセロール、水などのあらゆる経口用非毒性医薬適合性不活性担体と併せることができる。更に、所望されるか必要な際には、適する結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤もその混合物に配合することができる。適する結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖（グルコースまたはβ−ラクトースなど）、トウモロコシ甘味料、天然および合成ゴム（アラビアゴム、トラガカントゴムまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、蝋などが挙げられる。これらの剤形に用いられる滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２６】
構造式Ｉの燐酸二水素塩およびその結晶質一水和物は、水への高い溶解度を有し、その結果、調合物、特に、活性成分の比較的濃縮された水溶液が求められる鼻腔内および静脈内用調合物、の調製にとりわけ適用できるようになることが判明した。水への式Ｉの結晶質燐酸二水素塩一水和物の溶解度は、約７２ｍｇ／ｍＬであることが判明した。
【００２７】
更なる態様によると、本発明は、下記構造式ＩＶ：
【００２８】
【化７】
の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンを、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）およびイソアミルアルコール（ＩＡＡ）などの適するＣ１〜Ｃ５アルカノール、またはＣ１〜Ｃ５アルカノール水溶液中、約１当量の燐酸と反応させることを含む、式Ｉの燐酸二水素塩の調製方法を提供する。この反応は、約２５℃から約８０℃の温度範囲で行われる。その燐酸溶液をアミン溶液に添加してもよいし、またはその添加を逆方向に行ってもよい。その結晶質燐酸二水素塩一水和物は、下に記載するような燐酸二水素塩のＣ１〜Ｃ５アルカノール水溶液からの結晶化によって得られる。
【００２９】
構造式Ｉの燐酸二水素塩の一水和物を結晶化するための一般法
（ａ）２５℃、エタノール／水系中：
（１）水分濃度が３１重量％より高いようなエタノールおよび水における化合物Ｉの混合物から結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３０】
（ｂ）２５℃、イソアミルアルコール（ＩＡＡ）／水系中：
（１）水分濃度が２．９重量％より高いようなＩＡＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３１】
（ｃ）４０℃、ＩＡＡ／水系中：
（１）水分濃度が３．６重量％より高いようなＩＡＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３２】
（ｄ）６０℃、ＩＡＡ／水系中：
（１）水分濃度が４．５重量％より高いようなＩＡＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３３】
（ｅ）２５℃、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）／水系中：
（１）水分濃度が７．０重量％より高いようなＩＰＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３４】
（ｆ）４０℃、ＩＰＡ／水系中：
（１）水分濃度が８．１重量％より高いようなＩＰＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３５】
（ｇ）７５℃、ＩＰＡ／水系中：
（１）水分濃度が２０重量％より高いようなＩＰＡおよび水における化合物Ｉの混合物からの結晶化、
（２）得られた固相の回収、および
（３）そこからの溶媒の除去。
【００３６】
構造式ＩＶの出発化合物は、下の図式１から３および実施例１において詳述する手順によって調製することができる。
【００３７】
尚、更なる態様において、本発明は、ＤＰ−ＩＶ阻害剤が必要とされる臨床状態の治療および予防の少なくとも一方のための方法を提供し、この方法は、そうした予防または治療が必要な患者に予防または治療有効量の上で定義したとおりの式Ｉの塩またはその結晶質水和物を投与することを含む。
【００３８】
以下の非限定的実施例は、本発明を説明するためのものであり、本発明の範囲または精神に対する制限とは見なさないでいただきたい。
【００３９】
本明細書に記載する化合物は、ケト−エノール互変異性体のような互変異性体として存在することがある。個々の互変異性体ならびにそれらの混合物は、構造式Ｉの化合物とともに包含される。
【００４０】
用語「％エナンチオマー過剰」（「ｅｅ」と略記する）は、少ない方の異性体（副異性体）の％を減じた多い方の異性体（主異性体）の％を意味することになる。従って、７０％エナンチオマー過剰は、一方のエナンチオマー８５％および他方１５％の構成に相当する。用語「エナンチオマー過剰」は、用語「光学純度」と同義である。
【００４１】
（実施例）
【００４２】
【化８】
（２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン燐酸二水素塩一水和物
３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン塩酸塩（１−４）の調製
【００４３】
【化９】
【００４４】
段階Ａ：ビスヒドラジド（１−１）の調製
ヒドラジン（２０．１ｇ、水中３５重量％、０．２２ｍｏｌ）を３１０ｍＬのアセトニトリルと混合した。３１．５ｇのトリフルオロ酢酸エチル（０．２２ｍｏｌ）を６０分かけて添加した。その内部温度を１４℃から２５℃に上昇させた。得られた溶液を２２から２５℃で６０分間、時間を経過させた。その溶液を７℃に冷却した。１６℃未満の温度で１３０分かけて１７．９ｇの５０重量％ＮａＯＨ水溶液（０．２２ｍｏｌ）および２５．３ｇの塩化クロロアセチル（０．２２ｍｏｌ）を同時に添加した。反応が完了したら、２７から３０℃、Ｈｇで２６〜２７の真空下でその混合物を真空蒸留して、水およびエタノールを除去した。その蒸留中、７２０ｍＬのアセトニトリルをゆっくりと添加して、一定量（約５００ｍＬ）を維持した。そのスラリーを濾過して、塩化ナトリウムを除去した。そのケークを約１００ｍＬのアセトニトリルですすいだ。溶媒を除去することによって、ビス−ヒドラジド１−１（４３．２ｇ、収率９６．５％、ＨＰＬＣアッセイによる純度９４．４面積％）を生じた。
【００４５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ４．２（ｓ，２Ｈ），１０．７（ｓ，１Ｈ）、および１１．６（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ。
【００４６】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ４１．０，１１６．１（ｑ，Ｊ＝３６２Ｈｚ），１５５．８（ｑ，Ｊ＝５０Ｈｚ）、および１６５．４ｐｐｍ。
【００４７】
段階Ｂ： ５−（トリフルオロメチル）−２−（クロロメチル）−１，３，４−オキサジアゾール（１−２）の調製
ＡＣＮ（８２ｍＬ）中の段階Ａからのビスヒドラジド１−１（４３．２ｇ、０．２１ｍｏｌ）を５℃に冷却した。温度を１０℃未満で維持しながらオキシ塩化燐（３２．２ｇ、０．２１ｍｏｌ）を添加した。その混合物を８０℃に加熱し、ＨＰＬＣが２面積％未満の１−１を示すまで２４時間この温度で時間を経過させた。別の容器で、２６０ｍＬのＩＰＡｃおよび２５０ｍＬの水を混合し、０℃に冷却した。内部温度を１０℃未満に保ちながら、その反応スラリーを前記冷却物に添加した。添加後、その混合物を３０分間、激しく攪拌し、その温度を室温まで上昇させて、水性層をカットした。その後、有機層を２１５ｍＬの水、２１５ｍＬの５重量％重炭酸ナトリウム水溶液、および最後に２１５ｍＬの２０重量％ブライン水溶液で洗浄した。処理後のＨＰＬＣアッセイ収率は、８６から９２％であった。７５から８０ｍｍＨｇ、５５℃での蒸留によって揮発成分を除去して油を生じた。それは更なる精製をせずに段階Ｃで直接用いることができた。そうでなければ、その生成物を蒸留によって精製して、収率７０から８０％で１−２を生じることができる。
【００４８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．８（ｓ，２Ｈ）ｐｐｍ。
【００４９】
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ３２．１，１１５．８（ｑ，Ｊ＝３３７Ｈｚ），１５６．２（ｑ，Ｊ＝５０Ｈｚ）、および１６４．４ｐｐｍ。
【００５０】
段階Ｃ：Ｎ−［（２Ｚ）−ピペラジン−２−イリデン］トリフルオロアセトヒドラジド（１−３）の調製
−２０℃に冷却したメタノール（１５０ｍＬ）中のエチレンジアミン（３３．１ｇ、０．５５ｍｏｌ）の溶液に、内部温度を−２０℃に保ちながら、段階Ｂからの蒸留オキサジアゾール１−２（２９．８ｇ、０．１６ｍｏｌ）を添加した。添加が完了した後、得られたスラリーを−２０℃で１時間、時間を経過させた。その後、エタノール（２２５ｍＬ）を添加し、そのスラリーをゆっくり−５℃に温めた。−５℃で６０分後、スラリーを濾過し、−５℃のエタノール（６０ｍＬ）で洗浄した。アミジン１−３を白色の固体として収率７２％で得た（２４．４ｇ、ＨＰＬＣによる純度９９．５面積重量％）。
【００５１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．９（ｔ，２Ｈ），３．２（ｔ，２Ｈ），３．６（ｓ，２Ｈ）、および８．３（ｂ，１Ｈ）ｐｐｍ。１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ４０．８，４２．０，４３．３，１１９．３（ｑ，Ｊ＝３５０Ｈｚ），１５４．２、および１５６．２（ｑ，Ｊ＝３８Ｈｚ）ｐｐｍ。
【００５２】
段階Ｄ： ３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン塩酸塩（１−４）
１１０ｍＬのメタノール中のアミジン１−３（２７．３ｇ、０．１３ｍｏｌ）の懸濁液を５５℃に温めた。３７％塩酸（１１．２ｍＬ、０．１４ｍｏｌ）をこの温度で１５分かけて添加した。その添加中、すべての固体が溶解し、結果的に透明な溶液を生じた。反応を３０分間、時間を経過させた。その溶液を２０℃に冷却し、結晶種層が形成されるまで（１０分から１時間）この温度で時間を経過させた。３００ｍＬのＭＴＢＥを２０℃で１時間かけて添加した。得られたスラリーを２℃に冷却し、３０分間おいて、濾過した。固体を５０ｍＬのエタノール：ＭＴＢＥ（１：３）で洗浄し、真空下、４５℃で乾燥させた。トリアゾール１−４の収量は、２６．７ｇ（ＨＰＬＣによる純度９９．５面積重量％）であった。
【００５３】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３．６（ｔ，２Ｈ），４．４（ｔ，２Ｈ），４．６（ｓ，２Ｈ）、および１０．６（ｂ，２Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３９．４，３９．６，４１．０，１１８．６（ｑ，Ｊ＝３２５Ｈｚ），１４２．９（ｑ，Ｊ＝５０Ｈｚ）、および１４８．８ｐｐｍ。
【００５４】
【化１０】
【００５５】
段階Ａ： ４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−オン（２−３）の調製
２，４，５−トリフルオロフェニル酢酸（２−１）（１５０ｇ、０．７８９ｍｏｌ）、メルドラム酸（１２５ｇ、０．８６８ｍｏｌ）、および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）（７．７ｇ、００６３ｍｏｌ）を５Ｌの３つ口フラスコに入れた。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）（５２５ｍＬ）を室温で一度に添加して、固体を溶解した。温度を４０℃未満で維持しながら、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８２ｍＬ、１．６２ｍｏｌ）を室温で一度に添加した。温度を０℃と５℃の間で維持しながら、塩化ピバロイル（１０７ｍＬ、０．８６８ｍｏｌ）を１から２時間かけて一滴ずつ添加した。その反応混合物を５℃で１時間おいた。塩酸トリアゾール１−４（１８０ｇ、０．７８９ｍｏｌ）を４０から５０℃で一度に添加した。その反応溶液を７０℃で数時間おいた。その後、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（６２５ｍＬ）を２０から４５℃で一滴ずつ添加した。そのバッチに結晶種を入れ、２０から３０℃で１から２時間おいた。その後、追加の５２５ｍＬの５％炭酸水素ナトリウム水溶液を２から３時間かけて一滴ずつ添加した。数時間、室温においた後、そのスラリーを０から５℃に冷却し、１時間おいた後、固体を濾過した。その湿潤ケークを、２０％ＤＭＡｃ水溶液（３００ｍＬ）、続いて追加の２バッチの２０％ＤＭＡｃ水溶液（４００ｍＬ）、および最後に水（４００ｍＬ）で置換洗浄した。そのケークを室温で吸引乾燥させた。最終生成物２−３の単離された収率は、８９％であった。
【００５６】
段階Ｂ： （２Ｚ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブト−２−エン−２−アミン（２−４）の調製
５Ｌ丸底フラスコにメタノール（１００ｍＬ）、ケトアミド２−３（２００ｇ）および酢酸アンモニウム（１１０．４ｇ）を入れた。その後、メタノール（１８０ｍＬ）および２８％水酸化アンモニウム水溶液（５８．６ｍＬ）を添加し、その添加中、温度は３０℃未満に保った。追加のメタノール（１００ｍＬ）をその反応混合物に添加した。その混合物を還流温度で加熱し、２時間おいた。反応を室温に冷却し、その後、氷浴で約５℃に冷却した。３０分後、固体を濾過し、乾燥させて、２−４を固体として生じた（１８０ｇ）；融点２７１．２℃。
【００５７】
段階Ｃ： （２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン（２−５）の調製
５００ｍＬフラスコに、窒素雰囲気下で、クロロ（１，５−シクロオクタジエン）ロジウム（Ｉ）ダイマー｛［Ｒｈ（ｃｏｄ）Ｃｌ］２｝（２９２ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）および（Ｒ，Ｓ）ｔ−ブチルＪｏｓｉｐｈｏｓ（７０８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を入れた。その後、脱気ＭｅＯＨを添加し（２００ｍＬ）、その混合物を室温で１時間攪拌した。４Ｌ水素化装置に、エナミンアミド２−４（１１８ｇ、０．２９ｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１Ｌ）とともに入れた。そのスラリーを脱気した。その後、前記触媒溶液を窒素下でその水素化装置に移した。３回脱気した後、そのエナミンアミドを２００ｐｓｉの水素ガスのもと、５０℃で１３時間水素化した。ＨＰＬＣにより、アッセイ収率は９３％であり、光学純度は９４％ｅｅであると判定された。
【００５８】
その光学純度を次の方法で更に高めた。その水素化反応からのメタノール溶液（ＭｅＯＨ １８０ｍＬ中１８ｇ）を濃縮し、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（４５ｍＬ）に交換した。この溶液にＨ３ＰＯ４水溶液（０．５Ｍ、９５ｍＬ）を添加した。層の分離後、３ＮのＮａＯＨ（３５ｍＬ）を水性層に添加し、その後、それをＭＴＢＥ（１８０ｍＬ＋１００ｍＬ）で抽出した。そのＭＴＢＥ溶液を濃縮し、溶媒を熱トルエン（１８０ｍＬ、約７５℃）に交換した。その後、その熱トルエン溶液を放置してゆっくりと０℃に冷却した（５から１０時間）。濾過によって結晶を単離した（１３ｇ、収率７２％、９８から９９％ｅｅ）；融点１１４．１から１１５．７℃。
【００５９】
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）：δ７．２６（ｍ），７．０８（ｍ），４．９０（ｓ），４．８９（ｓ），４．１４（ｍ），３．９５（ｍ），３．４０（ｍ），２．６８（ｍ），２．４９（ｍ），１．４０（ｂｓ）。
【００６０】
化合物２−５は、アミド結合回転異性体として存在する。指示がない限り、その主および副回転異性体は、それらの炭素１３シグナルが充分に分離されないので、一緒のグループにする。
【００６１】
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ）：δ１７１．８，１５７．４（ｄｄｄ，ＪＣＦ＝２４２．４，９．２，２．５Ｈｚ），１５２．２（主），１５１．８（副），１４９．３（ｄｄｄ；ＪＣＦ＝２４６．７，１４．２，１２．９Ｈｚ），１４７．４（ｄｄｄ，ＪＣＦ＝２４１．２，１２．３，３．７Ｈｚ），１４４．２（ｑ，ＪＣＦ＝３８．８Ｈｚ），１２４．６（ｄｄｄ，ＪＣＦ＝１８．５，５．９，４．０Ｈｚ），１２０．４（ｄｄ，ＪＣＦ＝１９．１，６．２Ｈｚ），１１９．８（ｑ，ＪＣＦ＝２６８．９Ｈｚ），１０６．２（ｄｄ，ＪＣＦ＝２９．５，２０．９Ｈｚ），５０．１，４４．８，４４．３（副），４３．２（副），４２．４，４１．６（副），４１．４，３９．６，３８．５（副），３６．９。
【００６２】
結晶質遊離塩基は、次のようにして単離することもできる：
（ａ）水素化段階が完了したら、その反応混合物に２５重量％のエコソルブ（Ｅｃｏｓｏｒｂ）Ｃ−９４１を添加する。その混合物を窒素下で１時間攪拌し、その後、濾過する。そのケークを２Ｌ／ｋｇのメタノールで洗浄する。遊離塩基の回収は、約９５％であり、光学純度は、約９５％ｅｅである。
【００６３】
（ｂ）メタノール中のその遊離塩基の溶液を、（遊離塩基の添加量を基準にして）３．５から４．０Ｌ／ｋｇの量に濃縮し、その後、イソプロパノール（ＩＰＡ）に溶媒交換して、３．０Ｌ／ｋｇ ＩＰＡの最終量にする。
【００６４】
（ｃ）そのスラリーを４０℃に加熱し、４０℃で１時間おいて、その後、２時間かけて２５℃に冷却する。
【００６５】
（ｄ）ヘプタン（７Ｌ／ｋｇ）を７時間かけて添加し、そのスラリーを２２から２５℃で１２時間攪拌する。濾過前の上清濃度は、１０から１２ｍｇ／ｇである。
【００６６】
（ｅ）そのスラリーを濾過し、固体を３０％ＩＰＡ／ヘプタン（２Ｌ／ｋｇ）で洗浄する。
【００６７】
（ｆ）固体を４０℃の真空オーブンで乾燥させる。
【００６８】
（ｇ）その遊離塩基の光学純度は、約９９％ｅｅである。
【００６９】
次の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件を用いて、生成物への転化率を決定した。
【００７０】
カラム： ウォーター・シンメトリー（Ｗａｔｅｒ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ）Ｃ１８、２５０ｍｍ ｘ ４．６ｍｍ
溶離剤： 溶媒Ａ： ０．１容量％ＨＣｌＯ４／Ｈ２Ｏ
溶媒Ｂ： アセトニトリル
傾斜： ０分 ７５％ Ａ： ２５％ Ｂ
１０分 ２５％ Ａ： ７５％ Ｂ
１２．５分 ２５％ Ａ： ７５％ Ｂ
１５分 ７５％ Ａ： ２５％ Ｂ
流量： １ｍＬ／分
注入量： １０μＬ
ＵＶ検出： ２１０ｎｍ
カラム温度： ４０℃
保持時間： 化合物２−４： ９．１分
化合物２−５： ５．４分
ｔ−ブチルＪｏｓｉｐｈｏｓ： ８．７分
次の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）条件を用いて、光学純度を決定した：
カラム： キラパック（Ｃｈｉｒａｐａｋ）、ＡＤ−Ｈ、２５０ｍｍ ｘ ４．６ｍｍ
溶離剤： 溶媒Ａ： ヘプタン中の０．２容量％ジエチルアミン
溶媒Ｂ： エタノール中の０．１容量％ジエチルアミン
イソクラティック（Ｉｓｏｃｈｒａｔｉｃ）実行時間： １８分
流速： ０．７ｍＬ／分
注入量： ７μＬ
ＵＶ検出： ２６８ｎｍ
カラム温度： ３５℃
保持時間： （Ｒ）−アミン２−５： １３．８分
（Ｓ）−アミン２−５： １１．２分
（２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン燐酸二水素塩一水和物
オーバーヘッドスターラー、加熱マントルおよび熱電対を装備した２５０ｍＬ丸底フラスコに、３１．５ｍＬのイソプロパノール（ＩＰＡ）、１３．５ｍＬの水、１５．０ｇ（３６．９ｍｍｏｌ）の（２Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン遊離塩基および４．２５ｇ（３６．９ｍｍｏｌ）の８５％燐酸水溶液を入れた。その混合物を７５℃に加熱した。濃厚な白色沈殿が低温で生成したが、７５℃に達すると溶解した。その溶液を６８℃に冷却し、その後、その温度で２時間保持した。この経過時間中に、固体のスラリー層が形成した［その溶液に、０．５から５重量％の小粒径（アルピーネミルド（ａｌｐｉｎｅ ｍｉｌｌｅｄ））一水和物の、結晶種を入れることができる］。その後、そのスラリーを４℃／時の速度で２１℃に冷却して、一晩保持した。その後、１０５ｍＬのＩＰＡをそのスラリーに添加した。１時間後、スラリーを濾過し、４５ｍＬのＩＰＡで洗浄した（固体を水／ＩＰＡ溶液で洗浄して、他の結晶形への転換を回避することもできる）。固体を外気に触れさせながら、フリットで乾燥させた。１８．６ｇの固体を回収した。それらの固体は、ＨＰＬＣ面積百分率（ＨＰＬＣ条件は、上で与えたものと同じであった）により純度９９．８％以上であることが判明した。単離した固体の粒径分布分析は、平均ＰＤＳが８０マイクロメートルであり、９５％が１８０マイクロメートル未満であることを示した。それらの固体の結晶形は、Ｘ線粉末回折および熱重量分析により、一水和物であることが証明された。
【００７１】
Ｘ線粉末回折検査は、分子構造、結晶性および多形性の特性付に幅広く用いられている。本結晶質燐酸二水素塩一水和物のＸ線粉末回折パターンは、ＰＷ３０４０／６０コンソールを備えたフィリップス・アナリティカル・エキスパート・プロ・Ｘ線回折システム（Ｐｈｉｌｉｐｓ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’Ｐｅｒｔ ＰＲＯ Ｘ−ｒａｙ Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）で生成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ ＬＥＦ Ｘ線管Ｋ−アルファ照射をＸ線源として用いた。
【００７２】
図１は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についてのＸ線回折パターンを示すものである。この一水和物は、７．４２、５．４８および３．９６オングストロームの格子面間隔に対応する特性回折ピークを示した。この一水和物は、６．３０、４．７５および４．４８オングストロームの格子面間隔を更なる特徴とした。この一水和物は、５．８５、５．２１および３．５２オングストロームの格子面間隔を更にいっそうの特徴とした。
【００７３】
上に記載したＸ線粉末回折パターンに加えて、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形は、その固体炭素１３およびフッ素１９核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルによって更に特徴づけられた。その固体炭素１３ＮＭＲスペクトルは、ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）４ｍｍ二重共鳴ＣＰＭＡＳプローブを用いるブルカーＤＳＸ ４００ＷＢ ＮＭＲシステムで得た。その炭素１３ＮＭＲスペクトルは、可変増幅交差分極でのプロトン／炭素１３交差分極マジック角回転を利用したものだった。サンプルを１５．０ｋＨｚで回転させ、合計２０４８のスキャンを２０秒のリサイクル遅延で収集した。４０Ｈｚの線の広がりをスペクトルに適用した後、ＦＴを行った。化学シフトは、第二リファレンスとしてグリシンのカルボニル炭素（１７６．０３ｐ．ｐ．ｍ）を用いてＴＭＳスケールで報告される。
【００７４】
その固体フッ素１９ＮＭＲスペクトルは、ブルカー４ｍｍ ＣＲＡＭＰＳプローブを用いるブルカーＤＳＸ ４００ＷＢ ＮＭＲシステムで得た。このＮＭＲスペクトルは、単純パルス−獲得パルスプログラムを利用したものだった。サンプルを１５．０ｋＨｚで回転させ、合計１６のスキャンを３０秒のリサイクル遅延で収集した。ベスペル・エンドキャップを用いて、フッ素バックグラウンドを最小にした。１００Ｈｚの線の広がりをそのスペクトルに適用した後、ＦＴを行った。化学シフトは、−１２２ｐｐｍの化学シフトを割り当てられるポリ（テトラフルオロエチレン）（テフロン）を外部第二リファレンスとして用いて報告される。
【００７５】
図２は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての固体炭素１３ＣＰＭＡＳ ＮＭＲスペクトルを示すものである。この一水和物形は、１６９．１、１２０．８および４６．５ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値を有する特性シグナルを示した。この一水和物形の更なる特徴は、１５９．０、１５０．９および４０．７ｐｐｍの化学シフト値を有するシグナルであった。
【００７６】
図３は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての固体フッ素１９ＭＡＳ ＮＭＲスペクトルを示すものである。この一水和物形は、−６４．５、−１１４．７、−１３６．３および−１４６．２ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値を有する特性シグナルを示した。この一水和物形の更なる特徴は、−９６．５、−１０４．４、−１０６．３および−１５４．５ｐｐｍの化学シフト値を有するシグナルであった。
【００７７】
図４は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての特性熱重量分析（ＴＧＡ）曲線を示すものである。パーキン・エルマー・モデル（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ｍｏｄｅｌ）ＴＧＡ ７または同等の装置を使用した。実験は、窒素流のもと、約２５０℃の最高温度まで１０℃／分の昇温速度を用いて行った。バランスを自動的に控除した後、５から２０ｍｇのサンプルを白金皿に添加し、加熱炉を立ち上げて、昇温プログラムを開始させた。重量／温度データをその装置により自動的に収集した。結果の分析は、その装置のソフトウエアの中のデルタＹ（Ｄｅｌｔａ Ｙ）機能を選択すること、および重量損失を計算しなければならない温度を選択することによって行った。重量損失は、分解／蒸発の開始まで報告される。ＴＧＡは、周囲温度から約２５０℃までで約３．３６４７％の重量損失を示した。
【００７８】
図５は、構造式ＩＩの燐酸二水素塩の結晶質一水和物形についての特性ＤＳＣ曲線を示すものである。ティー・エイ・インストルメンツ（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）ＤＳＣ ２９１０または同等の機器装備を使用した。２ｍｇと６ｍｇの間のサンプルを蓋のない皿に計り入れた。その後、この皿をクリンプさせて、その熱量計のセルのサンプル位置に置いた。空の皿をレファレンス位置に置いた。熱量計のセルを閉じ、窒素流をそのセルに通した。昇温プログラムは、約２５０℃の温度まで１０℃／分の昇温速度でサンプルを加熱するように設定した。昇温プログラムが開始された。その実行が完了したら、そのシステムソフトウエアに含まれているＤＳＣ分析プログラムを用いてデータを分析した。溶解吸熱は、吸熱が観察される温度範囲より高い基線温度のポイントと低い基線温度のポイントの間で積分したものだった。報告されたデータは、開始温度、ピーク温度、およびエンタルピーである。
【００７９】
本発明の結晶質燐酸二水素塩一水和物は、上記Ｘ線粉末回折、フッ素１９ＭＡＳ ＮＭＲ、炭素１３ＣＰＭＡＳ ＮＭＲ、およびＤＳＣ物理特性で、その形の少なくとも約５％の相純度を有する。１つの実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約１０％である。第２の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約２５％である。第３の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約５０％である。第４の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約７５％である。第５の実施態様において、相純度は、上記固体物理特性で、その形の少なくとも約９０％である。第６の実施態様において、本結晶質燐酸二水素塩一水和物は、上記固体物理特性で、実質的に単一相の形である。用語「相純度」とは、本出願に記載されている固体物理法によって決定されるような、燐酸二水素塩一水和物の、その塩の特定の結晶または非晶形に関する固体純度を意味する。
【００８０】
本結晶質燐酸二水素塩一水和物は、周囲条件下で安定であることが判明した。それは、非常に乾燥した窒素流のもとで４０℃より上に加熱した場合、脱水一水和物に転化することが判明した。脱水一水和物は、周囲条件下では一水和物に転化して戻った。
【００８１】
医薬組成物の実施例
１）直接圧縮法：
本燐酸二水素塩一水和物は、直接圧縮法によって錠剤に調合することができる。１００ｍｇ力価の錠剤を、１２８．４ｍｇの本活性成分、１２７．８ｍｇの微結晶性セルロース、１２７．８ｍｇのマンニトール（または１２７．８ｍｇの燐酸二カルシウム）、８ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、８ｍｇのステアリン酸マグネシウムおよび１６ｍｇのオパドライ・ホワイト（Ｏｐａｄｒｙ ｗｈｉｔｅ：ペンシルバニア州ウエストポイントのカラーコン（Ｃｏｌｏｒｃｏｎ）製の有標コーチング材料）から構成した。本活性成分、微結晶性セルロース、マンニトール（または燐酸二カルシウム）およびクロスカルメロースを先ずブレンドし、次に、その混合物をステアリン酸マグネシウムで潤滑させて、錠剤にプレスした。その後、それらの錠剤をオパドライ・ホワイトでフィルムコーチングした。
【００８２】
２）ローラー圧縮法：
本燐酸二水素塩一水和物は、ローラー圧縮法によって錠剤に調合することができる。１００ｍｇ力価の錠剤を、１２８．４ｍｇの本活性成分、４５ｍｇの微結晶性セルロース、１１１．６ｍｇの燐酸二カルシウム、６ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、９ｍｇのステアリン酸マグネシウムおよび１２ｍｇのオパドライ・ホワイト（ペンシルバニア州ウエストポイントのカラーコン製の有標コーチング材料）から構成した。本活性成分、微結晶性セルロース、燐酸二カルシウムおよびクロスカルメロースを先ずブレンドし、次に、その混合物を全体の３分の１の量のステアリン酸マグネシウムで潤滑させ、ローラー圧縮してリボンにした。その後、これらのリボンを粉砕し、その後、得られた顆粒をステアリン酸マグネシウムの残量で潤滑させて、錠剤にプレスした。その後、それらの錠剤をオパドライ・ホワイトでフィルムコーチングした。
【００８３】
３）静脈内（ｉ．ｖ．）用水性調合物は、ｐＨ４．５±０．２の１０ｍＭステアリン酸ナトリウム／０．８％食塩水中の式Ｉの燐酸二水素塩の一水和物と特徴づけられる。４．０ｍｇ／ｍＬの濃度を有する調合物については、８００ｍｇのＮａＣｌを８０ｍＬの水に溶解し、その後、５７．５μＬの氷酢酸を添加し、続いて５１２ｍｇの本燐酸二水素塩一水和物を添加する。０．１ＮのＮａＯＨ溶液でｐＨを４．５±０．２にする。水で最終量を１００ｍＬにする。２．０ｍｇ／ｍＬ溶液は、５０．０ｍＬのその４．０ｍｇ／ｍＬ溶液をプラシーボで１００．０ｍＬに希釈することによって製造することができる。１．０ｍｇ／ｍＬ溶液は、２５．０ｍＬのその４．０ｍｇ／ｍＬ溶液をプラシーボで１００．０ｍＬに希釈することによって製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の特性Ｘ線回折パターンである。
【図２】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の炭素１３交差分極マジック角回転（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図３】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物のフッ素１９マジック角回転（ＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図４】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の典型的な熱重量分析（ＴＧＡ）曲線である。
【図５】構造式ＩＩのリン酸二水素塩の結晶質一水和物の典型的な示差走査熱量測定（ＤＳＣ）曲線である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式Ｉ：
【化１】
の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩またはその医薬適合性の水和物。
【請求項２】
＊印を付けたキラル中心での（Ｒ）立体配置を有する下記構造式ＩＩ：
【化２】
の請求項１に記載の塩。
【請求項３】
＊印を付けたキラル中心での（Ｓ）立体配置を有する下記構造式ＩＩＩ：
【化３】
の請求項１に記載の塩。
【請求項４】
結晶質一水和物であることを特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項５】
７．４２、５．４８および３．９６オングストロームのスペクトル格子面間隔のＸ線粉末回折パターンから得られた特性吸収バンドによって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項６】
更に、６．３０、４．７５および４．４８オングストロームのスペクトル格子面間隔のＸ線粉末回折パターンから得られた特性吸収バンドによって特徴づけられる、請求項５に記載の一水和物。
【請求項７】
更に、５．８５、５．２１および３．５２オングストロームのスペクトル格子面間隔のＸ線粉末回折パターンから得られた特性吸収バンドによって特徴づけられる、請求項６に記載の一水和物。
【請求項８】
図１のＸ線粉末回折パターンによって更に特徴づけられる、請求項７に記載の一水和物。
【請求項９】
１６９．１、１２０．８および４６．５ｐｐｍでシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１０】
更に、１５９．０、１５０．９および４０．７ｐｐｍでシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項９に記載の一水和物。
【請求項１１】
更に、図２の固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項１０に記載の一水和物。
【請求項１２】
−６４．５、−１１４．７、−１３６．３および−１４６．２ｐｐｍでシグナルを示す固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１３】
更に、−９６．５、−１０４．４、−１０６．３および−１５４．５ｐｐｍでシグナルを示す固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項１２に記載の一水和物。
【請求項１４】
更に、図３の固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項１３に記載の一水和物。
【請求項１５】
図４の熱重量分析曲線によって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１６】
図５の示差走査熱量測定曲線によって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１７】
検出可能な量の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項１８】
約５重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項１９】
約１０重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２０】
約２５重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２１】
約５０重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２２】
約７５重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２３】
前記結晶質一水和物を実質的に全重量含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２４】
モノプロトン化４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンカチオンおよび燐酸二水素アニオンのイオンを含む塩。
【請求項２５】
予防または治療有効量の請求項１に記載の塩またはその医薬適合性の溶媒和物を１つ以上の医薬適合性の担体とともに含む医薬組成物。
【請求項２６】
予防または治療有効量の請求項４に記載の塩またはその医薬適合性の溶媒和物を１つ以上の医薬適合性の担体とともに含む医薬組成物。
【請求項２７】
２型糖尿病の治療方法であって、そうした治療が必要な患者に治療有効量の請求項１に記載の塩またはその医薬適合性の水和物を投与することを含む、２型糖尿病の治療方法。
【請求項２８】
２型糖尿病の治療方法であって、そうした治療が必要な患者に治療有効量の請求項４に記載の塩を投与することを含む、２型糖尿病の治療方法。
【請求項２９】
約２５から１００℃の範囲の温度で、有機溶媒または水性有機溶媒中の１当量の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンを約１当量の燐酸と接触させる段階を含む、請求項１に記載の塩の調製方法。
【請求項３０】
前記有機溶媒が、Ｃ１〜Ｃ５直鎖または分枝鎖アルカノールである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
２型糖尿病の治療において使用するための薬物の製造における、活性成分としての、請求項１に記載の塩の使用。
【請求項３２】
２型糖尿病の治療において使用するための薬物の製造における、活性成分としての、請求項４に記載の塩の使用。
【請求項３３】
静脈内投与に適応するようにした、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
請求項２９に記載の方法に従って調製された４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸塩。
【請求項３５】
（ａ）水分濃度が６．８重量パーセントより高いようなイソプロパノールと水の混合物から、２５℃で、請求項１に記載の前記燐酸二水素塩を結晶させる段階；
（ｂ）得られた固相を回収する段階；および
（ｃ）そこから溶媒を除去する段階
を含む、請求項４に記載の結晶質一水和物の調製方法。
【請求項１】
下記構造式Ｉ：
【化１】
の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸二水素塩またはその医薬適合性の水和物。
【請求項２】
＊印を付けたキラル中心での（Ｒ）立体配置を有する下記構造式ＩＩ：
【化２】
の請求項１に記載の塩。
【請求項３】
＊印を付けたキラル中心での（Ｓ）立体配置を有する下記構造式ＩＩＩ：
【化３】
の請求項１に記載の塩。
【請求項４】
結晶質一水和物であることを特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項５】
７．４２、５．４８および３．９６オングストロームのスペクトル格子面間隔のＸ線粉末回折パターンから得られた特性吸収バンドによって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項６】
更に、６．３０、４．７５および４．４８オングストロームのスペクトル格子面間隔のＸ線粉末回折パターンから得られた特性吸収バンドによって特徴づけられる、請求項５に記載の一水和物。
【請求項７】
更に、５．８５、５．２１および３．５２オングストロームのスペクトル格子面間隔のＸ線粉末回折パターンから得られた特性吸収バンドによって特徴づけられる、請求項６に記載の一水和物。
【請求項８】
図１のＸ線粉末回折パターンによって更に特徴づけられる、請求項７に記載の一水和物。
【請求項９】
１６９．１、１２０．８および４６．５ｐｐｍでシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１０】
更に、１５９．０、１５０．９および４０．７ｐｐｍでシグナルを示す固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項９に記載の一水和物。
【請求項１１】
更に、図２の固体炭素１３ＣＰＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項１０に記載の一水和物。
【請求項１２】
−６４．５、−１１４．７、−１３６．３および−１４６．２ｐｐｍでシグナルを示す固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１３】
更に、−９６．５、−１０４．４、−１０６．３および−１５４．５ｐｐｍでシグナルを示す固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項１２に記載の一水和物。
【請求項１４】
更に、図３の固体フッ素１９ＭＡＳ核磁気共鳴スペクトルによって特徴づけられる、請求項１３に記載の一水和物。
【請求項１５】
図４の熱重量分析曲線によって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１６】
図５の示差走査熱量測定曲線によって特徴づけられる、請求項４に記載の一水和物。
【請求項１７】
検出可能な量の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項１８】
約５重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項１９】
約１０重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２０】
約２５重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２１】
約５０重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２２】
約７５重量％から約１００重量％の前記結晶質一水和物を含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２３】
前記結晶質一水和物を実質的に全重量含む、請求項４に記載の塩。
【請求項２４】
モノプロトン化４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンカチオンおよび燐酸二水素アニオンのイオンを含む塩。
【請求項２５】
予防または治療有効量の請求項１に記載の塩またはその医薬適合性の溶媒和物を１つ以上の医薬適合性の担体とともに含む医薬組成物。
【請求項２６】
予防または治療有効量の請求項４に記載の塩またはその医薬適合性の溶媒和物を１つ以上の医薬適合性の担体とともに含む医薬組成物。
【請求項２７】
２型糖尿病の治療方法であって、そうした治療が必要な患者に治療有効量の請求項１に記載の塩またはその医薬適合性の水和物を投与することを含む、２型糖尿病の治療方法。
【請求項２８】
２型糖尿病の治療方法であって、そうした治療が必要な患者に治療有効量の請求項４に記載の塩を投与することを含む、２型糖尿病の治療方法。
【請求項２９】
約２５から１００℃の範囲の温度で、有機溶媒または水性有機溶媒中の１当量の４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンを約１当量の燐酸と接触させる段階を含む、請求項１に記載の塩の調製方法。
【請求項３０】
前記有機溶媒が、Ｃ１〜Ｃ５直鎖または分枝鎖アルカノールである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
２型糖尿病の治療において使用するための薬物の製造における、活性成分としての、請求項１に記載の塩の使用。
【請求項３２】
２型糖尿病の治療において使用するための薬物の製造における、活性成分としての、請求項４に記載の塩の使用。
【請求項３３】
静脈内投与に適応するようにした、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
請求項２９に記載の方法に従って調製された４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミンの燐酸塩。
【請求項３５】
（ａ）水分濃度が６．８重量パーセントより高いようなイソプロパノールと水の混合物から、２５℃で、請求項１に記載の前記燐酸二水素塩を結晶させる段階；
（ｂ）得られた固相を回収する段階；および
（ｃ）そこから溶媒を除去する段階
を含む、請求項４に記載の結晶質一水和物の調製方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２００６−５１６２６８（Ｐ２００６−５１６２６８Ａ）
【公表日】平成１８年６月２９日（２００６．６．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１８２９２（Ｐ２００５−５１８２９２）
【出願日】平成１６年６月１８日（２００４．６．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１９６８３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００３１３５
【国際公開日】平成１７年１月１３日（２００５．１．１３）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
テフロン
【出願人】（３９００２３５２６）メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド (924)
【氏名又は名称原語表記】ＭＥＲＣＫ ＆ ＣＯＭＰＡＮＹ ＩＮＣＯＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年６月２９日（２００６．６．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月１８日（２００４．６．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１９６８３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００３１３５
【国際公開日】平成１７年１月１３日（２００５．１．１３）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
テフロン
【出願人】（３９００２３５２６）メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド (924)
【氏名又は名称原語表記】ＭＥＲＣＫ ＆ ＣＯＭＰＡＮＹ ＩＮＣＯＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】
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