スピロインドリノンピリジン誘導体
一般式（Ｉ）の化合物、又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体が提供される（式中、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｖ、Ｒ１、及びＲ２は、明細書に記載の通りである）。この化合物は抗増殖剤として、特に抗がん剤として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式（Ｉ）を持つスピロインドリノンのピリジン類似体：
【化１】
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体に関する（式中、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｖ、Ｒ１、及びＲ２は、明細書に記載の通りである）。
この化合物は抗増殖剤として、特に抗がん剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
ｐ５３は、がん発生の予防に中心的な役割を果たす腫瘍抑制タンパク質である。ｐ５３は細胞の完全性を監視し、回復不能な損傷を受けた細胞のクローンを、増殖阻害又はアポトーシス誘導により増殖防止する。分子レベルでは、ｐ５３は、細胞周期及びアポトーシスの調節に関与する遺伝子群を活性化し得る転写因子である。細胞レベルでは、ｐ５３は、ＭＤＭ２により強固に調節される強力な細胞周期阻害剤である。ＭＤＭ２とｐ５３とは、フィードバック制御ループを形成する。ＭＤＭ２はｐ５３に結合し、ｐ５３調節性遺伝子群の転写活性化能を抑制し得る。更に、ＭＤＭ２は、ｐ５３のユビキチン依存性分解を媒介する。ｐ５３はＭＤＭ２遺伝子の発現を活性化し、ＭＤＭ２タンパク質の細胞内レベルを上昇させ得る。このフィードバック制御ループにより、正常増殖細胞ではＭＤＭ２及びｐ５３の両方が低レベルに維持される。また、ＭＤＭ２は、細胞周期の調節において中心的な役割を果たすＥ２Ｆの補因子でもある。
【０００３】
多くのがんにおいては、ｐ５３に対するＭＤＭ２（Ｅ２Ｆ）の比が調節不全となっている。例えば、ｐ１６ＩＮＫ４／ｐ１９ＡＲＦ遺伝子座において頻繁に生じる分子欠陥は、ＭＤＭ２タンパク質の分解に影響を与えることが示されている。野生型ｐ５３を有する腫瘍細胞においてＭＤＭ２−ｐ５３相互作用を抑制すると、ｐ５３の蓄積、及び／又は、細胞周期の停止、及び／又は、アポトーシスが引き起こされ得る。従って、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いれば、単剤療法として、或いは広範囲の他の抗がん療法との組み合わせ療法として、がん治療に対する新たなアプローチが提供される。この方策が実現可能であることは、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用を抑制する様々な高分子ツール（例えば抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド等）によって示されてきた。ＭＤＭ２は、ｐ５３の保存結合領域を介してＥ２Ｆとも結合し、サイクリンＡのＥ２Ｆ依存性転写を活性化することから、ＭＤＭ２アンタゴニストがｐ５３変異細胞に有効である可能性も示唆される。
【０００４】
これまでＭＤＭ２アンタゴニストとして、種々のスピロインドリノンが、J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 10130 及び ２００７年９月１３日に公開された米国特許出願公開第２００７−０２１３３４１−Ａ１号に開示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の小分子阻害剤であるスピロインドリノン誘導体を提供する。無細胞アッセイ及び細胞アッセイにおいて、本発明の化合物は、ＭＤＭ２タンパク質とｐ５３様ペプチドとの相互作用を抑制することが示された。細胞アッセイでは、これらの化合物は機構的な活性を示す。がん細胞を野生型ｐ５３と共にインキュベートすると、ｐ５３タンパク質が蓄積し、ｐ５３により調節されるｐ２１遺伝子が誘導され、Ｇ１期及びＧ２期で細胞周期が停止する結果、インビボの野生型ｐ５３細胞に対する強力な抗増殖活性が生じる。逆に、変異したｐ５３を有するがん細胞では、化合物が同程度の濃度のときにはこの活性は観察されなかった。従って、ＭＤＭ２アンタゴニストの活性はその作用機構と関連している可能性が高い。これらの化合物は強力且つ選択的な抗がん剤になり得る。
【０００６】
本発明は、一般式（Ｉ）のスピロインドリノン：
【化２】
（式中、
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ又はＦであり、
Ｖは、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１は、Ｍｅ、Ｅｔ、又はｎＰｒであり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＭｅ、又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである）、
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体に関する。
【０００７】
より好ましいのは、一般式（Ｉ）において、
Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙが、Ｈであり、
Ｖが、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１が、Ｍｅ又はＥｔであり、
Ｒ２が、ＯＨ又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗが、Ｃｌである化合物である。
【０００８】
最も好ましい化合物を以下に示す。
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本明細書において、表示のある箇所では、種々の基が、１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基で置換されていてもよい。斯かる置換基は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、（ベンゾジオキシル基等を形成する）ジオキソ−低級アルキレン、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）、Ｎ（低級アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級アルコキシ、チオ−低級アルコキシ、低級アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級アルキルカルボニル、低級アルキルカルボニルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級アルキル、フルオロ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−カルボニル−低級アルコキシ、カルボキシ−低級アルコキシ、カルバモイル−低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、ＮＨ２−低級アルコキシ、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）−低級アルコキシ、Ｎ（低級アルキル）２−低級アルコキシ、ベンジルオキシ−低級アルコキシ、モノ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル、ジ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル、並びに、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２で置換されていてもよい低級アルキルからなる群から選択される。前記のアリール環、ヘテロアリール環、及び複素環の好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、及びアミノである。
【００１０】
アルキル、アルケニル、アルキニル等の基が同一部分構造の両端に結合すると、環構造が形成される場合がある。ここで前記部分構造の２つの水素が、アルキル、アルケニル、アルキニル等の基の両端によって置換されると、テトラリン、マクロ環、又はスピロ化合物等の環構造が作り出される。
【００１１】
「アルキル」という用語は、１〜約２０個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を表わす。特定の実施態様によれば、アルキル置換基は低級アルキル置換基である。「低級アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有するアルキル基を表わし、特定の実施態様によれば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表わす。アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｓ−ペンチル等が挙げられる。
【００１２】
本明細書において、「シクロアルキル」は、任意の安定な単環系又は多環系で、炭素原子のみからなり、いずれの環も飽和しているものを表わし、「シクロアルケニル」という用語は、任意の安定な単環系又は多環系で、炭素原子のみからなり、少なくとも１つの環が部分的に不飽和であるものを表わす。シクロアルキルの例としては、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、ビシクロアルキル（その中にはビシクロオクタン（例えば［２．２．２］ビシクロオクタンや［３．３．０］ビシクロオクタン）、ビシクロノナン（例えば［４．３．０］ビシクロノナン等）、ビシクロデカン（例えば［４．４．０］ビシクロデカン（デカリン））等）、スピロ化合物等が挙げられる。シクロアルケニルの例としては、これらに限定されるものではないが、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等が挙げられる。
【００１３】
本明細書において、「アルケニル」という用語は、二重結合を１つ有し、２〜８個、好ましくは２〜６個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖の不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルケニル基」の例としては、ビニル（エテニル）、アリル、イソプロペニル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、及び５−ヘキセニルが挙げられる。
【００１４】
本明細書では、「アルキニル」という用語は、三重結合を１つ有し、２〜６個、好ましくは２〜４個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖の不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルキニル基」の例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシニルである。
【００１５】
定義において用いる「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、ヨウ素、又は臭素を意味する。中でもフッ素及び塩素が好ましい。
【００１６】
「アリール」は、単環又は二環の１価の芳香族炭素環炭化水素基を意味する。中でも６〜１０員の芳香族環系が好ましい。好ましいアリール基としては、これらに限定されるものではないが、フェニル、ナフチル、トリル、及びキシリル等が挙げられる。
【００１７】
「ヘテロアリール」は、最大２つの環を有する芳香族複素環系を意味する。好ましいヘテロアリール基としては、これらに限定されるものではないが、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、オキサゾリル、チアオキソリル、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール、及びテトラゾリル等が挙げられる。
【００１８】
二環のアリール又はヘテロアリールの場合は、一方の環がアリール、他方の環がヘテロアリールであってもよく、いずれも置換されていてもいなくてもよいと解すべきである。
【００１９】
「複素環」は、置換又は無置換の５〜８員の単環又は二環の芳香族炭化水素又は非芳香族炭化水素において、１〜３個の炭素原子が、窒素原子、酸素原子、又はイオウ原子から選択されるヘテロ原子で置換されたものを意味する。例としては、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、ピペリジニル、及びモルホリン−４−イル等が挙げられる。
【００２０】
「ヘテロ原子」は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される原子を意味する。
【００２１】
「アルコキシ、アルコキシル、低級アルコキシ」は、上記の任意の低級アルキル基が、１個の酸素原子に結合してなる基を表わす。典型的な低級アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、プロポキシ、及びブチルオキシ等が挙げられる。更に、アルコキシには、多重アルコキシ側鎖（例えばエトキシエトキシ、メトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシ等）や、置換アルコキシ側鎖（例えばジメチルアミノエトキシ、ジエチルアミノエトキシ、ジメトキシホスホリルメトキシ等）も含まれる。
【００２２】
医薬的に許容可能な基剤、賦形剤等の「医薬的に許容可能な」は、当該化合物を投与される患者にとって医薬的に許容可能で実質的に非毒性であることを意味する。
【００２３】
「医薬的に許容可能な塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持する従来の酸添加塩又は塩基添加塩であって、適切な非毒性の有機若しくは無機酸又は有機若しくは無機塩基から形成されるものを表わす。酸添加塩の例としては、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸）に由来するものと、有機酸（例えばｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸等）に由来するものとが挙げられる。塩基添加塩の例としては、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化第四級アンモニウム（例えば水酸化テトラメチルアンモニウム）に由来するもの等が挙げられる。医薬化合物（即ち薬物）の化学修飾による塩の形成は、その物理的安定性、化学的安定性、吸湿性、流動性、溶解性を向上させる技術として、薬理化学者には周知である。例えばAnsel et al., "Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995)の１９６頁及び４５６〜４５７頁を参照されたい。
【００２４】
一般式（Ｉ）の化合物及びその塩は、少なくとも１つの不斉炭素原子を有するため、ラセミ混合物や種々の立体異性体として存在し得る。種々の異性体は公知の分離法（例えばクロマトグラフィー）により分離できる。本発明にはあらゆる立体異性体が含まれる。
【００２５】
本発明の化合物は、細胞増殖性疾患、特に腫瘍性疾患の治療又は制御に有用である。この化合物及びこれを含む製剤は、固形腫瘍（例えば乳房、大腸、肺、及び前立腺腫瘍等）の治療又は制御に有用である可能性がある。
【００２６】
本発明に係る化合物の治療有効量とは、疾患の症状を予防、緩和、又は改善するか、或いは治療対象の生存期間を延長する、化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、当業者の能力の範囲である。
【００２７】
本発明に係る化合物の治療有効量又は投与量は、広い範囲の中から、当業者に公知の手法で決定し得る。斯かる投与量は個別の事案毎に、個々の要請（例えば投与する具体的な化合物、投与経路、治療対象の疾患、治療対象の患者）に応じて調整すればよい。一般に、体重約７０ｋｇの成人への経口又は非経口投与の場合は、１日投与量約１０ｍｇ〜約１０，０００ｍｇ、好ましくは約２００ｍｇ〜約１，０００ｍｇが適切であるが、指示のある場合は上限を超えてもよい。１日投与量は１回で投与しても、複数回に分けて投与してもよく、非経口投与の場合は連続輸液で投与してもよい。
【００２８】
本発明の製剤としては、経口、鼻腔、局所（口腔及び舌下を含む）、直腸内、膣内、及び／又は非経口投与に適した製剤が挙げられる。製剤は便宜上、単位投与形態で供してもよい。これは薬剤学で周知の任意の方法で調製し得る。単回投与剤形の製造において担体材料と組み合わせ得る活性成分の量は、治療対象の患者や、具体的な投与形態に応じて異なる。単回投与形態の製造において担体材料と組み合わせ得る活性成分の量は、一般に、一般式（Ｉ）又は（II）又は（III）の化合物が治療効果を生じる量である。一般にこの量は、１００％に対し、活性成分が約１％〜約９９％、好ましくは約５％〜約７０％、最も好ましくは約１０％〜約３０％となる。
【００２９】
これらの製剤や組成物を調製する方法は、本発明の化合物を基剤と、更に任意により１種類以上の補助成分と、混合する工程を有する。一般に、前記製剤は、本発明の化合物を、液状担体若しくは微粉化した固状担体、又はその両方と一様且つ密に混合した後、必要に応じて製品を整形することにより調製される。
【００３０】
経口投与に適した本発明の製剤としては、カプセル、カシェ、サシェ、ピル、錠剤、ロゼンジ（風味剤、通常はスクロースとアラビアゴム又はトラガカントゴムを用いる）、粉末、顆粒の形態や、水性又は非水性液体中の溶液又は懸濁液、水中油エマルジョン、油中水エマルジョン、エリキシル、シロップ、トローチ（不活性基剤、例えばゼラチンやグリセリン等、又はスクロース及びアラビアゴムを用いる）、マウスウォッシュ等の形態であって、各々所定量の本発明の化合物を活性成分として含有する形態が挙げられる。また、本発明の化合物はボーラス、舐剤、又はペーストとして投与してもよい。
【００３１】
「有効量」は、疾患の症状を予防、緩和、又は改善するか、或いは治療対象の生存期間を延長するのに有効な量を意味する。
【００３２】
「ＩＣ５０」は、測定する特定の活性を５０％抑制するのに必要な対象化合物の濃度を表わす。ＩＣ５０は、特に、後述の方法に従って測定し得る。
【００３３】
「医薬的に許容可能なエステル」は、カルボキシル基又はヒドロキシ基を有する一般式（Ｉ）の化合物を従来法でエステル化したものであって、一般式（Ｉ）の化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、インビボで（生体内で）開裂して、対応する活性なカルボン酸又はアルコールを生じるものを意味する。
【００３４】
合成
本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、以下の一般スキームに従って合成することができる。当業者には容易に理解し得るように、一般合成経路の試薬や薬剤を置換すれば、種々の一般式（Ｉ）の化合物を調製可能である。キラルクロマトグラフィーによる精製を用いれば、種々の一般式（Ｉ）の化合物を、光学的に純粋な、或いは豊富化された鏡像異性体として得ることができる。
【００３５】
【化３】
【００３６】
一般に、適切に選択したアルデヒド（Ｉ）を、リチウムヘキサメチルジシラミド、クロロトリアルキルシラン、塩化アセチルと、ワンポット複数ステップ法で反応させ（スキーム１）、生成した２−アザ−１，３−ブタジエン（II）を粗成物として使用し得る。Ghosez, L.らは、２−アザ−１，３−ブタジエンの調製法と、それを用いてアザ・ディールス・アルダー反応により複素環を形成する方法を報告している（参考：Tetrahedron, 1995, 11021；J. Am. Chem. Soc., 1999, 2617；及びこれらにおいて引用される文献）。適切に選択したアルデヒド（Ｉ）は、市販品が入手可能であるか、或いは汎用されている種々の文献記載の方法で合成可能である。
【００３７】
【化４】
【００３８】
オキシインドール（III）を、適切に置換されたアルデヒド（VI）と、塩基の存在下、加熱条件下、メタノールやエタノール等のプロトン性溶媒、或いはトルエン、ｏ−キシレン等の非プロトン性溶媒中で反応させることにより、中間体（IV）を得ることができる。一般に利用される塩基は、ピロリジン又はピペリジンである。保護反応によって中間体（IV）を変換して中間体（Ｖ）にすることができる。保護基（Ｐｇ）は、汎用されている種々の文献記載の方法に従い、クロロギ酸エチル、ジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル、ＳＥＭ−Ｃｌ、臭化ベンジルや、塩基（例えば４−（ジメチルアミン）ピリジン（ＤＭＡＰ）、トリエチルアミン、ＮａＨ、ＬｉＨ等）を用いて結合させることができる。保護基の形成法及びそれらの脱保護法の例は、Greene, T. W.らの"Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition", John Wiley & Sons Inc.に包括的に記載・概説されている。
【００３９】
【化５】
【００４０】
中間体（Ｖ）を、スキーム１で選択的に調製した２−アザ−ブタジエン（II）と、トルエン又はｏ−キシレン中、１１０℃〜１６０℃の加熱下、無水条件下にて反応させることにより、主生成物として、中間体（VII）及び（VII’）を形成することができる。ここでは２種類の鏡像異性体のラセミ混合物として示す。その後、保護基（Ｐｇ）を除去する反応によって、種々のＲ２由来の化合物（VIII）及び（VIII’）が得られる（スキーム３）。ＰｇがＢｏｃ基である場合、Ｂｏｃ基の除去は、トリフルオロ酢酸によって、或いはトリフルオロ酢酸を用いない場合は、化合物（Ｖ）と（II）とのアザ・ディールス・アルダー反応時に、１１０〜１１６℃の温度で長時間加熱することによって行うことができる。化合物（VII）と（VII’）、或いは化合物（VIII）と（VIII’）のラセミ混合物は、キラル超流体クロマトグラフィー（Super Fluid Chromatography：ＳＦＣ）によって、又はキラルＨＰＬＣによって、又はキラル・カラムクロマトグラフィーによって、２種類のキラル鏡像異性体に容易に分割することができる。
【００４１】
【化６】
【００４２】
スキーム４の中間体（VI）は、アルデヒド（Ｘ）を、試薬（IX）と、Ｋ２ＣＯ３やＣｓ２ＣＯ３等の塩基とともに、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、加熱条件下にて処理することにより調製できる（スキーム４）。アルデヒド（Ｘ）及び試薬（IX）は、市販品が入手可能であるか、或いは汎用されている種々の文献記載の方法で合成可能である。類似体（XI）及び（XII）は、スキーム５に示す方法で調製される。
【００４３】
化合物（VIII）を加水分解して酸（XI）にした後、周知の方法を利用してカップリング反応を実施すると、類似体（XII）が得られる。Ｒ３がメチル基でない場合には、酸（XI）を類似体（XIII）に変換することができる。
【００４４】
【化７】
【００４５】
本発明の更なる実施態様は、一般スキーム１〜５による、一般式（Ｉ）の化合物の合成法に関する。
【００４６】
以下の実施例及び参考文献は、本発明の理解の助けとして提示するものであり、本発明の真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載の通りである。
【実施例】
【００４７】
［実施例１］
中間体３−ブロモ−５−クロロ−ピリジン−２−オールの調製
【００４８】
【化８】
【００４９】
氷酢酸（２５ｍｌ）に５−クロロ−２−ピリジノール（２．９ｇ、２０ミリモル）を溶かした溶液に、室温にて臭素（１．２ｍｌ、２４ミリモル）を一滴ずつ添加した。室温で一晩にわたって撹拌した後、酢酸エチルと水を添加した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残留物をジエチルエーテルと研和し、沈殿物を濾過し、乾燥させると、表題の化合物が得られた（１．５ｇ）。
【００５０】
［実施例２］
中間体５−クロロ−２−ヒドロキシ−ピリジン−３−カルバルデヒドの調製
【００５１】
【化９】
【００５２】
アルゴン雰囲気下にて、無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）にＮａＨ（０．２２ｇ、油中の６０％懸濁液、５．５ミリモル）を懸濁させた懸濁液に３−ブロモ−５−クロロ−ピリジン−２−オール（１．０３ｇ、５ミリモル）を少量ずつ添加した。水素の発生が終了した後、この混合物を−７８℃に冷却し、温度が−６５℃よりも高くならないようにしながらｔ−ブチルリチウム（１０ミリモル）を添加した。この混合物を５分間にわたって撹拌した後、温度を−５０℃未満に維持しながらＤＭＦ（１５ミリモル）を添加した。この混合物を放置して室温まで温めた後、酢酸エチルと１Ｎ ＨＣｌに分けた。有機層を分離し、飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、表題の化合物が得られた（３００ｍｇ）。
【００５３】
［実施例３］
中間体２−（５−クロロ−３−ホルミル−ピリジン−２−イルオキシ）−２−メチル−プロピオン酸の調製
【００５４】
【化１０】
【００５５】
５−クロロ−２−ヒドロキシ−ピリジン−３−カルバルデヒド（８ｇ、５１ミリモル）と、２−ブロモ−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル（２７．６ｇ、１５３ミリモル）と、Ｃｓ２ＣＯ３（２８ｇ、８６．７ミリモル）の混合物を含むＤＭＦ（８０ｍｌ）を３時間にわたって１２６℃に加熱した。この混合物を室温まで冷却した後、水の中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水とブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が得られた（６．２ｇ）。
【００５６】
［実施例４］
中間体Ｅ／Ｚ−２−［５−クロロ−３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドル−３−イリデンメチル）−ピリジン−２−イルオキシ］−２−メチル−プロピオン酸メチルエステルの調製
【００５７】
【化１１】
【００５８】
６−クロロオキシインドール（４．９ｇ、２９．３ミリモル）と２−（５−クロロ−３−ホルミル−ピリジン−２−イルオキシ）−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル（７．２ｇ、２８ミリモル）の混合物を含むメタノール（５０ｍｌ）にピロリジン（２．３ｍｌ、２８ミリモル）を一滴ずつ添加した。次にこの混合物を１時間にわたって７０℃に加熱した。この混合物を室温まで冷却した後、濾過し、沈殿物を回収し、乾燥させると、表題の化合物が黄色の固形物として得られた（９ｇ）。
【００５９】
［実施例５］
中間体Ｅ／Ｚ−６−クロロ−３−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステルの調製
【００６０】
【化１２】
【００６１】
Ｅ／Ｚ−２−［５−クロロ−３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドル−３−イリデンメチル）−ピリジン−２−イルオキシ］−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル（９ｇ、０．０２２モル）をジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶かした溶液に室温にてジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル（５．３ｇ、０．０２４モル）を添加した後、４−ジメチルアミノピリジン（１ｇ、０．００８モル）を添加した。この混合物を室温にて０．５時間にわたって撹拌した後、濃縮した。残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が得られた（１１ｇ）。
【００６２】
［実施例６］
中間体１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの調製
【００６３】
【化１３】
【００６４】
窒素雰囲気下で室温にて１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（２．１８ｍｌ、１０．５ミリモル）（オールドリッチ社）にｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、４．２ｍｌ、１０．５ミリモル）（オールドリッチ社）を添加した、この反応混合物を室温にて１０分間にわたって撹拌した。次に乾燥テトラヒドロフラン（３０ｍｌ）を添加し、次いで５−フルオロ−２−メチル−ベンズアルデヒド（１．３８ｇ、１０ミリモル）（プラット社）を添加した。この混合物を室温にて０．５時間にわたって撹拌した後、塩化トリメチルシリル（１．３３ｍｌ、１０．５ミリモル）（オールドリッチ社）を一滴ずつ添加した。次に、冷却用の氷浴の上でこの混合物の温度を０℃まで下げた。この混合物にトリエチルアミン（１．９ｍｌ、１３．６ミリモル）を一度に添加した後、ジエチルエーテル（５０ｍｌ）に塩化アセチル（０．９７ｍｌ、１３．６ミリモル）を溶かした溶液を一滴ずつ添加した。冷却用の浴を除去し、混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した。窒素雰囲気下にてこの混合物をセライト上で素早く濾過し、濾液を減圧下で濃縮すると、粗１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンが黄色のゴムとして得られた。それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【００６５】
［実施例７］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００６６】
【化１４】
【００６７】
１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（１８ミリモル）のトルエン溶液（５０ｍｌ）にＥ／Ｚ−６−クロロ−３−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３ｇ、６ミリモル）を添加した。次にこの反応混合物を２時間にわたって１３０℃に加熱した。この溶液を室温まで冷却した後、メタノールを添加し、次いでこの混合物を濃縮した。次に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）とジクロロメタン（３０ｍｌ）の混合物を添加した。得られた反応混合物を室温にて１０分間にわたって撹拌した。この溶液を濃縮し、残留物を分離用ＨＰＬＣによって精製すると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（１７０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５８６
【００６８】
［実施例８］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００６９】
【化１５】
【００７０】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（１６０ｍｇ、０．２７ミリモル）と、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２５０ｍｇ、５．９４ミリモル）と、Ｈ２Ｏ（５ｍｌ）と、メタノール（１５ｍｌ）の混合物を４０分間にわたって８０℃に加熱した。この溶液を室温まで冷却した後、１ＮのＨＣｌ溶液を添加することによって酸性化して「ｐＨ」を１にした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水とブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、表題の化合物が明るい黄色の固形物として得られた（１４０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５７２
【００７１】
［実施例９］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００７２】
【化１６】
【００７３】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（５０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１１ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１０ｍｇ）得られた。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５７２
【００７４】
［実施例１０］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００７５】
【化１７】
【００７６】
実施例８で調製したラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（１００ｍｇ、０．１７ミリモル）とＣＤＩ（５７ｍｇ、０．３５ミリモル）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶かした溶液を２時間にわたって６０℃に加熱した。次に、この溶液に、メタンスルホンアミド（１２９．２ｍｇ、１．３６ミリモル）とＮａＨ（５４．４ｍｇ、６０％、１．３６ミリモル）の混合物を含むＤＭＦ（２ｍｌ）を室温にて２時間にわたって撹拌しておいたものを添加した。得られた混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した後、水の中に注ぎ、濃塩酸を添加することによって水溶液を酸性化して「ｐＨ」を１〜２にした。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した後、１つにまとめた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（８０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６４９
【００７７】
［実施例１１］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００７８】
【化１８】
【００７９】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（５０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１９ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１８ｍｇ）得られた。
【００８０】
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６４９
【００８１】
［実施例１２］
中間体１−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの調製
【００８２】
【化１９】
【００８３】
Ａｒ雰囲気下で室温にて乾燥テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）にＬｉＨＭＤＳ（９７ミリモル、９７ｍｌ）の１Ｍ ＴＨＦ溶液を添加した後、５−クロロ−２−メチル−ベンズアルデヒド（１５ｇ、９７ミリモル）を添加した。この混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した後、塩化トリメチルシリル（１２．３ｍｌ、９７ミリモル）を一滴ずつ添加した。次に、冷却用の氷浴の上でこの混合物の温度を０℃まで下げた。この混合物にトリエチルアミン（１７．６ｍｌ、１２６ミリモル）を一度に添加した後、塩化アセチルをジエチルエーテル（２００ｍｌ）に溶かした溶液を一滴ずつ添加した。冷却用の氷浴を除去し、混合物を室温にて一晩にわたって撹拌した。窒素雰囲気下にてこの混合物をセライト上で素早く濾過し、濾液を減圧下で濃縮すると、粗１−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンが黄色のゴムとして得られた。それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【００８４】
［実施例１３］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００８５】
【化２０】
【００８６】
実施例８に記載した方法と同様にして、実施例５で調製したＥ／Ｚ−６−クロロ−３−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３ｇ、６ミリモル）を、１−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（１７ミリモル）を含むトルエンと反応させ、次いでトリフルオロ酢酸を含むジクロロメタンと反応させると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（２００ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６０２
【００８７】
［実施例１４］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００８８】
【化２１】
【００８９】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（２００ｍｇ、０．３３ミリモル）と、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２８０ｍｇ、６．６ミリモル）と、Ｈ２Ｏ（５ｍｌ）と、メタノール（１５ｍｌ）の混合物を４０分間にわたって８０℃に加熱した。この溶液を室温まで冷却した後、１ＮのＨＣｌ溶液を添加することによって酸性化して「ｐＨ」を１にした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水とブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、表題の化合物が明るい黄色の固形物として得られた（２００ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５８８
【００９０】
［実施例１５］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００９１】
【化２２】
【００９２】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（６０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（２０ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（２１ｍｇ）得られた。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５８８
【００９３】
［実施例１６］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００９４】
【化２３】
【００９５】
実施例１４で調製したラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（１００ｍｇ、０．１７ミリモル）とＣＤＩ（５７ｍｇ、０．３５ミリモル）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶かした溶液を２時間にわたって６０℃に加熱した。次に、この溶液に、メタンスルホンアミド（１２９．２ｍｇ、１．３６ミリモル）とＮａＨ（５４．４ｍｇ、６０％、１．３６ミリモル）の混合物を含むＤＭＦ（２ｍｌ）を室温にて２時間にわたって撹拌しておいたものを添加した。得られた混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した後、水の中に注ぎ、濃塩酸を添加することによって水溶液を酸性化して「ｐＨ」を１〜２にした。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した後、１つにまとめた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（８０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６６５
【００９６】
［実施例１７］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００９７】
【化２４】
【００９８】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（５０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１９ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１８ｍｇ）得られた。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６６５
【００９９】
［実施例１８］
インビトロ活性アッセイ
【０１００】
化合物がｐ５３タンパク質とＭＤＭ２タンパク質の間の相互作用を抑制する能力をＨＴＲＦ（ホモジニアス時間分解蛍光）アッセイによって測定した。このアッセイでは、組み換えＧＳＴをタグとして有するＭＤＭ２が、ｐ５３のＭＤＭ２相互作用領域と似たペプチドに結合する（Ｌａｎｅ他）。ＧＳＴ−ＭＤＭ２タンパク質とｐ５３ペプチド（そのＮ末端がビオチニル化されている）の結合は、ユーロピウム（Ｅｕ）で標識した抗ＧＳＴ抗体とストレプトアビジンを共役させたアロフィコシアニン（ＡＰＣ）の間のＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）によって記録される。
【０１０１】
黒色の平底３８４ウエル・プレート（コスター社）の中で、全体積４０μｌにて試験を実施する。その体積に含まれるのは、９０ｎＭのビオチニル化したペプチドと、１６０ｎｇ／ｍｌのＧＳＴ−ＭＤＭ２と、２０ｎＭのストレプトアビジン−ＡＰＣ（パーキンエルマーウォラック社）と、２ｎＭのＥｕ標識化抗ＧＳＴ抗体（パーキンエルマーウォラック社）と、０．２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と、１ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）と、２０ｍＭのトリス−ホウ酸緩衝化生理食塩水（ＴＢＳ）である。この試験は以下のようにして実施する。１０μｌのＧＳＴ−ＭＤＭ２（６４０ｎｇ／ｍｌの作業溶液）を含む反応緩衝液を各ウエルに添加する。希釈した１０μｌの化合物（反応緩衝液中で１：５に希釈）を各ウエルに添加し、振盪することによって混合する。２０μｌのビオチニル化されたｐ５３ペプチド（１８０ｎＭの作業溶液）を含む反応緩衝液を各ウエルに添加し、振盪装置の上で混合する。３７℃にて１時間にわたってインキュベートする。０．２％ＢＳＡを含むＴＢＳ緩衝液にストレプトアビジン−ＡＰＣとＥｕ−抗ＧＳＴ抗体の混合物２０μｌを添加し、室温にて３０分間にわたって振盪し、ＴＲＦが可能なプレート読み取り装置（Victor 5、パーキンエルマーウォラック社）を用いて６６５ｎｍと６１５ｎｍで読み取る。特に記載していない場合の試薬はシグマ・ケミカル社から購入した。
【０１０２】
本発明の生物学的活性を表わすＩＣ５０は、約１０μＭ未満の活性を示す。
代表的な値は、例えば以下の通りである。
実施例 ＩＣ５０（μＭ、０．０２％ＢＳＡ）
８ ０．１４５
９ ０．１０８
１１ ０．１３５
１５ ０．０５６
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般式（Ｉ）を持つスピロインドリノンのピリジン類似体：
【化１】
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体に関する（式中、Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｖ、Ｒ１、及びＲ２は、明細書に記載の通りである）。
この化合物は抗増殖剤として、特に抗がん剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
ｐ５３は、がん発生の予防に中心的な役割を果たす腫瘍抑制タンパク質である。ｐ５３は細胞の完全性を監視し、回復不能な損傷を受けた細胞のクローンを、増殖阻害又はアポトーシス誘導により増殖防止する。分子レベルでは、ｐ５３は、細胞周期及びアポトーシスの調節に関与する遺伝子群を活性化し得る転写因子である。細胞レベルでは、ｐ５３は、ＭＤＭ２により強固に調節される強力な細胞周期阻害剤である。ＭＤＭ２とｐ５３とは、フィードバック制御ループを形成する。ＭＤＭ２はｐ５３に結合し、ｐ５３調節性遺伝子群の転写活性化能を抑制し得る。更に、ＭＤＭ２は、ｐ５３のユビキチン依存性分解を媒介する。ｐ５３はＭＤＭ２遺伝子の発現を活性化し、ＭＤＭ２タンパク質の細胞内レベルを上昇させ得る。このフィードバック制御ループにより、正常増殖細胞ではＭＤＭ２及びｐ５３の両方が低レベルに維持される。また、ＭＤＭ２は、細胞周期の調節において中心的な役割を果たすＥ２Ｆの補因子でもある。
【０００３】
多くのがんにおいては、ｐ５３に対するＭＤＭ２（Ｅ２Ｆ）の比が調節不全となっている。例えば、ｐ１６ＩＮＫ４／ｐ１９ＡＲＦ遺伝子座において頻繁に生じる分子欠陥は、ＭＤＭ２タンパク質の分解に影響を与えることが示されている。野生型ｐ５３を有する腫瘍細胞においてＭＤＭ２−ｐ５３相互作用を抑制すると、ｐ５３の蓄積、及び／又は、細胞周期の停止、及び／又は、アポトーシスが引き起こされ得る。従って、ＭＤＭ２アンタゴニストを用いれば、単剤療法として、或いは広範囲の他の抗がん療法との組み合わせ療法として、がん治療に対する新たなアプローチが提供される。この方策が実現可能であることは、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用を抑制する様々な高分子ツール（例えば抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド等）によって示されてきた。ＭＤＭ２は、ｐ５３の保存結合領域を介してＥ２Ｆとも結合し、サイクリンＡのＥ２Ｆ依存性転写を活性化することから、ＭＤＭ２アンタゴニストがｐ５３変異細胞に有効である可能性も示唆される。
【０００４】
これまでＭＤＭ２アンタゴニストとして、種々のスピロインドリノンが、J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 10130 及び ２００７年９月１３日に公開された米国特許出願公開第２００７−０２１３３４１−Ａ１号に開示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ＭＤＭ２−ｐ５３相互作用の小分子阻害剤であるスピロインドリノン誘導体を提供する。無細胞アッセイ及び細胞アッセイにおいて、本発明の化合物は、ＭＤＭ２タンパク質とｐ５３様ペプチドとの相互作用を抑制することが示された。細胞アッセイでは、これらの化合物は機構的な活性を示す。がん細胞を野生型ｐ５３と共にインキュベートすると、ｐ５３タンパク質が蓄積し、ｐ５３により調節されるｐ２１遺伝子が誘導され、Ｇ１期及びＧ２期で細胞周期が停止する結果、インビボの野生型ｐ５３細胞に対する強力な抗増殖活性が生じる。逆に、変異したｐ５３を有するがん細胞では、化合物が同程度の濃度のときにはこの活性は観察されなかった。従って、ＭＤＭ２アンタゴニストの活性はその作用機構と関連している可能性が高い。これらの化合物は強力且つ選択的な抗がん剤になり得る。
【０００６】
本発明は、一般式（Ｉ）のスピロインドリノン：
【化２】
（式中、
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ又はＦであり、
Ｖは、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１は、Ｍｅ、Ｅｔ、又はｎＰｒであり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＭｅ、又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである）、
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体に関する。
【０００７】
より好ましいのは、一般式（Ｉ）において、
Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙが、Ｈであり、
Ｖが、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１が、Ｍｅ又はＥｔであり、
Ｒ２が、ＯＨ又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗが、Ｃｌである化合物である。
【０００８】
最も好ましい化合物を以下に示す。
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本明細書において、表示のある箇所では、種々の基が、１〜５個、好ましくは１〜３個の置換基で置換されていてもよい。斯かる置換基は、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、（ベンゾジオキシル基等を形成する）ジオキソ−低級アルキレン、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ３、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）、Ｎ（低級アルキル）２、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ２、低級アルコキシ、チオ−低級アルコキシ、低級アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級アルキルカルボニル、低級アルキルカルボニルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級アルキル、フルオロ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−カルボニル−低級アルコキシ、カルボキシ−低級アルコキシ、カルバモイル−低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、ＮＨ２−低級アルコキシ、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）−低級アルコキシ、Ｎ（低級アルキル）２−低級アルコキシ、ベンジルオキシ−低級アルコキシ、モノ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル、ジ−低級アルキル置換アミノ−スルホニル、並びに、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ２、Ｎ（Ｈ，低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）２で置換されていてもよい低級アルキルからなる群から選択される。前記のアリール環、ヘテロアリール環、及び複素環の好ましい置換基は、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル、及びアミノである。
【００１０】
アルキル、アルケニル、アルキニル等の基が同一部分構造の両端に結合すると、環構造が形成される場合がある。ここで前記部分構造の２つの水素が、アルキル、アルケニル、アルキニル等の基の両端によって置換されると、テトラリン、マクロ環、又はスピロ化合物等の環構造が作り出される。
【００１１】
「アルキル」という用語は、１〜約２０個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を表わす。特定の実施態様によれば、アルキル置換基は低級アルキル置換基である。「低級アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有するアルキル基を表わし、特定の実施態様によれば、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表わす。アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｓ−ペンチル等が挙げられる。
【００１２】
本明細書において、「シクロアルキル」は、任意の安定な単環系又は多環系で、炭素原子のみからなり、いずれの環も飽和しているものを表わし、「シクロアルケニル」という用語は、任意の安定な単環系又は多環系で、炭素原子のみからなり、少なくとも１つの環が部分的に不飽和であるものを表わす。シクロアルキルの例としては、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、ビシクロアルキル（その中にはビシクロオクタン（例えば［２．２．２］ビシクロオクタンや［３．３．０］ビシクロオクタン）、ビシクロノナン（例えば［４．３．０］ビシクロノナン等）、ビシクロデカン（例えば［４．４．０］ビシクロデカン（デカリン））等）、スピロ化合物等が挙げられる。シクロアルケニルの例としては、これらに限定されるものではないが、シクロペンテニル、シクロヘキセニル等が挙げられる。
【００１３】
本明細書において、「アルケニル」という用語は、二重結合を１つ有し、２〜８個、好ましくは２〜６個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖の不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルケニル基」の例としては、ビニル（エテニル）、アリル、イソプロペニル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、及び５−ヘキセニルが挙げられる。
【００１４】
本明細書では、「アルキニル」という用語は、三重結合を１つ有し、２〜６個、好ましくは２〜４個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖の不飽和脂肪族炭化水素基を意味する。このような「アルキニル基」の例は、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシニルである。
【００１５】
定義において用いる「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、ヨウ素、又は臭素を意味する。中でもフッ素及び塩素が好ましい。
【００１６】
「アリール」は、単環又は二環の１価の芳香族炭素環炭化水素基を意味する。中でも６〜１０員の芳香族環系が好ましい。好ましいアリール基としては、これらに限定されるものではないが、フェニル、ナフチル、トリル、及びキシリル等が挙げられる。
【００１７】
「ヘテロアリール」は、最大２つの環を有する芳香族複素環系を意味する。好ましいヘテロアリール基としては、これらに限定されるものではないが、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、オキサゾリル、チアオキソリル、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール、及びテトラゾリル等が挙げられる。
【００１８】
二環のアリール又はヘテロアリールの場合は、一方の環がアリール、他方の環がヘテロアリールであってもよく、いずれも置換されていてもいなくてもよいと解すべきである。
【００１９】
「複素環」は、置換又は無置換の５〜８員の単環又は二環の芳香族炭化水素又は非芳香族炭化水素において、１〜３個の炭素原子が、窒素原子、酸素原子、又はイオウ原子から選択されるヘテロ原子で置換されたものを意味する。例としては、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、ピペリジニル、及びモルホリン−４−イル等が挙げられる。
【００２０】
「ヘテロ原子」は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される原子を意味する。
【００２１】
「アルコキシ、アルコキシル、低級アルコキシ」は、上記の任意の低級アルキル基が、１個の酸素原子に結合してなる基を表わす。典型的な低級アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、プロポキシ、及びブチルオキシ等が挙げられる。更に、アルコキシには、多重アルコキシ側鎖（例えばエトキシエトキシ、メトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシ等）や、置換アルコキシ側鎖（例えばジメチルアミノエトキシ、ジエチルアミノエトキシ、ジメトキシホスホリルメトキシ等）も含まれる。
【００２２】
医薬的に許容可能な基剤、賦形剤等の「医薬的に許容可能な」は、当該化合物を投与される患者にとって医薬的に許容可能で実質的に非毒性であることを意味する。
【００２３】
「医薬的に許容可能な塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性及び特性を保持する従来の酸添加塩又は塩基添加塩であって、適切な非毒性の有機若しくは無機酸又は有機若しくは無機塩基から形成されるものを表わす。酸添加塩の例としては、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸）に由来するものと、有機酸（例えばｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸等）に由来するものとが挙げられる。塩基添加塩の例としては、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化第四級アンモニウム（例えば水酸化テトラメチルアンモニウム）に由来するもの等が挙げられる。医薬化合物（即ち薬物）の化学修飾による塩の形成は、その物理的安定性、化学的安定性、吸湿性、流動性、溶解性を向上させる技術として、薬理化学者には周知である。例えばAnsel et al., "Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995)の１９６頁及び４５６〜４５７頁を参照されたい。
【００２４】
一般式（Ｉ）の化合物及びその塩は、少なくとも１つの不斉炭素原子を有するため、ラセミ混合物や種々の立体異性体として存在し得る。種々の異性体は公知の分離法（例えばクロマトグラフィー）により分離できる。本発明にはあらゆる立体異性体が含まれる。
【００２５】
本発明の化合物は、細胞増殖性疾患、特に腫瘍性疾患の治療又は制御に有用である。この化合物及びこれを含む製剤は、固形腫瘍（例えば乳房、大腸、肺、及び前立腺腫瘍等）の治療又は制御に有用である可能性がある。
【００２６】
本発明に係る化合物の治療有効量とは、疾患の症状を予防、緩和、又は改善するか、或いは治療対象の生存期間を延長する、化合物の量を意味する。治療有効量の決定は、当業者の能力の範囲である。
【００２７】
本発明に係る化合物の治療有効量又は投与量は、広い範囲の中から、当業者に公知の手法で決定し得る。斯かる投与量は個別の事案毎に、個々の要請（例えば投与する具体的な化合物、投与経路、治療対象の疾患、治療対象の患者）に応じて調整すればよい。一般に、体重約７０ｋｇの成人への経口又は非経口投与の場合は、１日投与量約１０ｍｇ〜約１０，０００ｍｇ、好ましくは約２００ｍｇ〜約１，０００ｍｇが適切であるが、指示のある場合は上限を超えてもよい。１日投与量は１回で投与しても、複数回に分けて投与してもよく、非経口投与の場合は連続輸液で投与してもよい。
【００２８】
本発明の製剤としては、経口、鼻腔、局所（口腔及び舌下を含む）、直腸内、膣内、及び／又は非経口投与に適した製剤が挙げられる。製剤は便宜上、単位投与形態で供してもよい。これは薬剤学で周知の任意の方法で調製し得る。単回投与剤形の製造において担体材料と組み合わせ得る活性成分の量は、治療対象の患者や、具体的な投与形態に応じて異なる。単回投与形態の製造において担体材料と組み合わせ得る活性成分の量は、一般に、一般式（Ｉ）又は（II）又は（III）の化合物が治療効果を生じる量である。一般にこの量は、１００％に対し、活性成分が約１％〜約９９％、好ましくは約５％〜約７０％、最も好ましくは約１０％〜約３０％となる。
【００２９】
これらの製剤や組成物を調製する方法は、本発明の化合物を基剤と、更に任意により１種類以上の補助成分と、混合する工程を有する。一般に、前記製剤は、本発明の化合物を、液状担体若しくは微粉化した固状担体、又はその両方と一様且つ密に混合した後、必要に応じて製品を整形することにより調製される。
【００３０】
経口投与に適した本発明の製剤としては、カプセル、カシェ、サシェ、ピル、錠剤、ロゼンジ（風味剤、通常はスクロースとアラビアゴム又はトラガカントゴムを用いる）、粉末、顆粒の形態や、水性又は非水性液体中の溶液又は懸濁液、水中油エマルジョン、油中水エマルジョン、エリキシル、シロップ、トローチ（不活性基剤、例えばゼラチンやグリセリン等、又はスクロース及びアラビアゴムを用いる）、マウスウォッシュ等の形態であって、各々所定量の本発明の化合物を活性成分として含有する形態が挙げられる。また、本発明の化合物はボーラス、舐剤、又はペーストとして投与してもよい。
【００３１】
「有効量」は、疾患の症状を予防、緩和、又は改善するか、或いは治療対象の生存期間を延長するのに有効な量を意味する。
【００３２】
「ＩＣ５０」は、測定する特定の活性を５０％抑制するのに必要な対象化合物の濃度を表わす。ＩＣ５０は、特に、後述の方法に従って測定し得る。
【００３３】
「医薬的に許容可能なエステル」は、カルボキシル基又はヒドロキシ基を有する一般式（Ｉ）の化合物を従来法でエステル化したものであって、一般式（Ｉ）の化合物の生物学的有効性及び特性を保持し、インビボで（生体内で）開裂して、対応する活性なカルボン酸又はアルコールを生じるものを意味する。
【００３４】
合成
本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、以下の一般スキームに従って合成することができる。当業者には容易に理解し得るように、一般合成経路の試薬や薬剤を置換すれば、種々の一般式（Ｉ）の化合物を調製可能である。キラルクロマトグラフィーによる精製を用いれば、種々の一般式（Ｉ）の化合物を、光学的に純粋な、或いは豊富化された鏡像異性体として得ることができる。
【００３５】
【化３】
【００３６】
一般に、適切に選択したアルデヒド（Ｉ）を、リチウムヘキサメチルジシラミド、クロロトリアルキルシラン、塩化アセチルと、ワンポット複数ステップ法で反応させ（スキーム１）、生成した２−アザ−１，３−ブタジエン（II）を粗成物として使用し得る。Ghosez, L.らは、２−アザ−１，３−ブタジエンの調製法と、それを用いてアザ・ディールス・アルダー反応により複素環を形成する方法を報告している（参考：Tetrahedron, 1995, 11021；J. Am. Chem. Soc., 1999, 2617；及びこれらにおいて引用される文献）。適切に選択したアルデヒド（Ｉ）は、市販品が入手可能であるか、或いは汎用されている種々の文献記載の方法で合成可能である。
【００３７】
【化４】
【００３８】
オキシインドール（III）を、適切に置換されたアルデヒド（VI）と、塩基の存在下、加熱条件下、メタノールやエタノール等のプロトン性溶媒、或いはトルエン、ｏ−キシレン等の非プロトン性溶媒中で反応させることにより、中間体（IV）を得ることができる。一般に利用される塩基は、ピロリジン又はピペリジンである。保護反応によって中間体（IV）を変換して中間体（Ｖ）にすることができる。保護基（Ｐｇ）は、汎用されている種々の文献記載の方法に従い、クロロギ酸エチル、ジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル、ＳＥＭ−Ｃｌ、臭化ベンジルや、塩基（例えば４−（ジメチルアミン）ピリジン（ＤＭＡＰ）、トリエチルアミン、ＮａＨ、ＬｉＨ等）を用いて結合させることができる。保護基の形成法及びそれらの脱保護法の例は、Greene, T. W.らの"Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Edition", John Wiley & Sons Inc.に包括的に記載・概説されている。
【００３９】
【化５】
【００４０】
中間体（Ｖ）を、スキーム１で選択的に調製した２−アザ−ブタジエン（II）と、トルエン又はｏ−キシレン中、１１０℃〜１６０℃の加熱下、無水条件下にて反応させることにより、主生成物として、中間体（VII）及び（VII’）を形成することができる。ここでは２種類の鏡像異性体のラセミ混合物として示す。その後、保護基（Ｐｇ）を除去する反応によって、種々のＲ２由来の化合物（VIII）及び（VIII’）が得られる（スキーム３）。ＰｇがＢｏｃ基である場合、Ｂｏｃ基の除去は、トリフルオロ酢酸によって、或いはトリフルオロ酢酸を用いない場合は、化合物（Ｖ）と（II）とのアザ・ディールス・アルダー反応時に、１１０〜１１６℃の温度で長時間加熱することによって行うことができる。化合物（VII）と（VII’）、或いは化合物（VIII）と（VIII’）のラセミ混合物は、キラル超流体クロマトグラフィー（Super Fluid Chromatography：ＳＦＣ）によって、又はキラルＨＰＬＣによって、又はキラル・カラムクロマトグラフィーによって、２種類のキラル鏡像異性体に容易に分割することができる。
【００４１】
【化６】
【００４２】
スキーム４の中間体（VI）は、アルデヒド（Ｘ）を、試薬（IX）と、Ｋ２ＣＯ３やＣｓ２ＣＯ３等の塩基とともに、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中、加熱条件下にて処理することにより調製できる（スキーム４）。アルデヒド（Ｘ）及び試薬（IX）は、市販品が入手可能であるか、或いは汎用されている種々の文献記載の方法で合成可能である。類似体（XI）及び（XII）は、スキーム５に示す方法で調製される。
【００４３】
化合物（VIII）を加水分解して酸（XI）にした後、周知の方法を利用してカップリング反応を実施すると、類似体（XII）が得られる。Ｒ３がメチル基でない場合には、酸（XI）を類似体（XIII）に変換することができる。
【００４４】
【化７】
【００４５】
本発明の更なる実施態様は、一般スキーム１〜５による、一般式（Ｉ）の化合物の合成法に関する。
【００４６】
以下の実施例及び参考文献は、本発明の理解の助けとして提示するものであり、本発明の真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載の通りである。
【実施例】
【００４７】
［実施例１］
中間体３−ブロモ−５−クロロ−ピリジン−２−オールの調製
【００４８】
【化８】
【００４９】
氷酢酸（２５ｍｌ）に５−クロロ−２−ピリジノール（２．９ｇ、２０ミリモル）を溶かした溶液に、室温にて臭素（１．２ｍｌ、２４ミリモル）を一滴ずつ添加した。室温で一晩にわたって撹拌した後、酢酸エチルと水を添加した。有機層を水で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残留物をジエチルエーテルと研和し、沈殿物を濾過し、乾燥させると、表題の化合物が得られた（１．５ｇ）。
【００５０】
［実施例２］
中間体５−クロロ−２−ヒドロキシ−ピリジン−３−カルバルデヒドの調製
【００５１】
【化９】
【００５２】
アルゴン雰囲気下にて、無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）にＮａＨ（０．２２ｇ、油中の６０％懸濁液、５．５ミリモル）を懸濁させた懸濁液に３−ブロモ−５−クロロ−ピリジン−２−オール（１．０３ｇ、５ミリモル）を少量ずつ添加した。水素の発生が終了した後、この混合物を−７８℃に冷却し、温度が−６５℃よりも高くならないようにしながらｔ−ブチルリチウム（１０ミリモル）を添加した。この混合物を５分間にわたって撹拌した後、温度を−５０℃未満に維持しながらＤＭＦ（１５ミリモル）を添加した。この混合物を放置して室温まで温めた後、酢酸エチルと１Ｎ ＨＣｌに分けた。有機層を分離し、飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、表題の化合物が得られた（３００ｍｇ）。
【００５３】
［実施例３］
中間体２−（５−クロロ−３−ホルミル−ピリジン−２−イルオキシ）−２−メチル−プロピオン酸の調製
【００５４】
【化１０】
【００５５】
５−クロロ−２−ヒドロキシ−ピリジン−３−カルバルデヒド（８ｇ、５１ミリモル）と、２−ブロモ−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル（２７．６ｇ、１５３ミリモル）と、Ｃｓ２ＣＯ３（２８ｇ、８６．７ミリモル）の混合物を含むＤＭＦ（８０ｍｌ）を３時間にわたって１２６℃に加熱した。この混合物を室温まで冷却した後、水の中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水とブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮した。残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が得られた（６．２ｇ）。
【００５６】
［実施例４］
中間体Ｅ／Ｚ−２−［５−クロロ−３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドル−３−イリデンメチル）−ピリジン−２−イルオキシ］−２−メチル−プロピオン酸メチルエステルの調製
【００５７】
【化１１】
【００５８】
６−クロロオキシインドール（４．９ｇ、２９．３ミリモル）と２−（５−クロロ−３−ホルミル−ピリジン−２−イルオキシ）−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル（７．２ｇ、２８ミリモル）の混合物を含むメタノール（５０ｍｌ）にピロリジン（２．３ｍｌ、２８ミリモル）を一滴ずつ添加した。次にこの混合物を１時間にわたって７０℃に加熱した。この混合物を室温まで冷却した後、濾過し、沈殿物を回収し、乾燥させると、表題の化合物が黄色の固形物として得られた（９ｇ）。
【００５９】
［実施例５］
中間体Ｅ／Ｚ−６−クロロ−３−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステルの調製
【００６０】
【化１２】
【００６１】
Ｅ／Ｚ−２−［５−クロロ−３−（６−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドル−３−イリデンメチル）−ピリジン−２−イルオキシ］−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル（９ｇ、０．０２２モル）をジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶かした溶液に室温にてジカルボン酸ジ−ｔ−ブチル（５．３ｇ、０．０２４モル）を添加した後、４−ジメチルアミノピリジン（１ｇ、０．００８モル）を添加した。この混合物を室温にて０．５時間にわたって撹拌した後、濃縮した。残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が得られた（１１ｇ）。
【００６２】
［実施例６］
中間体１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの調製
【００６３】
【化１３】
【００６４】
窒素雰囲気下で室温にて１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（２．１８ｍｌ、１０．５ミリモル）（オールドリッチ社）にｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍ、４．２ｍｌ、１０．５ミリモル）（オールドリッチ社）を添加した、この反応混合物を室温にて１０分間にわたって撹拌した。次に乾燥テトラヒドロフラン（３０ｍｌ）を添加し、次いで５−フルオロ−２−メチル−ベンズアルデヒド（１．３８ｇ、１０ミリモル）（プラット社）を添加した。この混合物を室温にて０．５時間にわたって撹拌した後、塩化トリメチルシリル（１．３３ｍｌ、１０．５ミリモル）（オールドリッチ社）を一滴ずつ添加した。次に、冷却用の氷浴の上でこの混合物の温度を０℃まで下げた。この混合物にトリエチルアミン（１．９ｍｌ、１３．６ミリモル）を一度に添加した後、ジエチルエーテル（５０ｍｌ）に塩化アセチル（０．９７ｍｌ、１３．６ミリモル）を溶かした溶液を一滴ずつ添加した。冷却用の浴を除去し、混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した。窒素雰囲気下にてこの混合物をセライト上で素早く濾過し、濾液を減圧下で濃縮すると、粗１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンが黄色のゴムとして得られた。それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【００６５】
［実施例７］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００６６】
【化１４】
【００６７】
１−（５−フルオロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（１８ミリモル）のトルエン溶液（５０ｍｌ）にＥ／Ｚ−６−クロロ−３−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３ｇ、６ミリモル）を添加した。次にこの反応混合物を２時間にわたって１３０℃に加熱した。この溶液を室温まで冷却した後、メタノールを添加し、次いでこの混合物を濃縮した。次に、トリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）とジクロロメタン（３０ｍｌ）の混合物を添加した。得られた反応混合物を室温にて１０分間にわたって撹拌した。この溶液を濃縮し、残留物を分離用ＨＰＬＣによって精製すると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（１７０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５８６
【００６８】
［実施例８］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００６９】
【化１５】
【００７０】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（１６０ｍｇ、０．２７ミリモル）と、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２５０ｍｇ、５．９４ミリモル）と、Ｈ２Ｏ（５ｍｌ）と、メタノール（１５ｍｌ）の混合物を４０分間にわたって８０℃に加熱した。この溶液を室温まで冷却した後、１ＮのＨＣｌ溶液を添加することによって酸性化して「ｐＨ」を１にした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水とブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、表題の化合物が明るい黄色の固形物として得られた（１４０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５７２
【００７１】
［実施例９］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００７２】
【化１６】
【００７３】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（５０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１１ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１０ｍｇ）得られた。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５７２
【００７４】
［実施例１０］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００７５】
【化１７】
【００７６】
実施例８で調製したラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（１００ｍｇ、０．１７ミリモル）とＣＤＩ（５７ｍｇ、０．３５ミリモル）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶かした溶液を２時間にわたって６０℃に加熱した。次に、この溶液に、メタンスルホンアミド（１２９．２ｍｇ、１．３６ミリモル）とＮａＨ（５４．４ｍｇ、６０％、１．３６ミリモル）の混合物を含むＤＭＦ（２ｍｌ）を室温にて２時間にわたって撹拌しておいたものを添加した。得られた混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した後、水の中に注ぎ、濃塩酸を添加することによって水溶液を酸性化して「ｐＨ」を１〜２にした。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した後、１つにまとめた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（８０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６４９
【００７７】
［実施例１１］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００７８】
【化１８】
【００７９】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（５０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１９ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１８ｍｇ）得られた。
【００８０】
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６４９
【００８１】
［実施例１２］
中間体１−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンの調製
【００８２】
【化１９】
【００８３】
Ａｒ雰囲気下で室温にて乾燥テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）にＬｉＨＭＤＳ（９７ミリモル、９７ｍｌ）の１Ｍ ＴＨＦ溶液を添加した後、５−クロロ−２−メチル−ベンズアルデヒド（１５ｇ、９７ミリモル）を添加した。この混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した後、塩化トリメチルシリル（１２．３ｍｌ、９７ミリモル）を一滴ずつ添加した。次に、冷却用の氷浴の上でこの混合物の温度を０℃まで下げた。この混合物にトリエチルアミン（１７．６ｍｌ、１２６ミリモル）を一度に添加した後、塩化アセチルをジエチルエーテル（２００ｍｌ）に溶かした溶液を一滴ずつ添加した。冷却用の氷浴を除去し、混合物を室温にて一晩にわたって撹拌した。窒素雰囲気下にてこの混合物をセライト上で素早く濾過し、濾液を減圧下で濃縮すると、粗１−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエンが黄色のゴムとして得られた。それをさらに精製せずに次のステップで使用した。
【００８４】
［実施例１３］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００８５】
【化２０】
【００８６】
実施例８に記載した方法と同様にして、実施例５で調製したＥ／Ｚ−６−クロロ−３−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（３ｇ、６ミリモル）を、１−（５−クロロ−２−メチルフェニル）−３−トリメチルシリオキシ−２−アザ−１，３−ブタジエン（１７ミリモル）を含むトルエンと反応させ、次いでトリフルオロ酢酸を含むジクロロメタンと反応させると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（２００ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６０２
【００８７】
［実施例１４］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００８８】
【化２１】
【００８９】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（２００ｍｇ、０．３３ミリモル）と、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２８０ｍｇ、６．６ミリモル）と、Ｈ２Ｏ（５ｍｌ）と、メタノール（１５ｍｌ）の混合物を４０分間にわたって８０℃に加熱した。この溶液を室温まで冷却した後、１ＮのＨＣｌ溶液を添加することによって酸性化して「ｐＨ」を１にした。水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水とブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮すると、表題の化合物が明るい黄色の固形物として得られた（２００ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５８８
【００９０】
［実施例１５］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００９１】
【化２２】
【００９２】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（６０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（２０ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（２１ｍｇ）得られた。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：５８８
【００９３】
［実施例１６］
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００９４】
【化２３】
【００９５】
実施例１４で調製したラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（１００ｍｇ、０．１７ミリモル）とＣＤＩ（５７ｍｇ、０．３５ミリモル）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶かした溶液を２時間にわたって６０℃に加熱した。次に、この溶液に、メタンスルホンアミド（１２９．２ｍｇ、１．３６ミリモル）とＮａＨ（５４．４ｍｇ、６０％、１．３６ミリモル）の混合物を含むＤＭＦ（２ｍｌ）を室温にて２時間にわたって撹拌しておいたものを添加した。得られた混合物を室温にて１時間にわたって撹拌した後、水の中に注ぎ、濃塩酸を添加することによって水溶液を酸性化して「ｐＨ」を１〜２にした。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出した後、１つにまとめた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、残留物をフラッシュ・カラムによって精製すると、表題の化合物が白色の固形物として得られた（８０ｍｇ）。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６６５
【００９６】
［実施例１７］
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンの調製
【００９７】
【化２４】
【００９８】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン（５０ｍｇ）からキラルＳＦＣによって２種類の鏡像異性体を分離すると、キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１９ｍｇ）、キラル（２’Ｒ，３Ｒ，４’Ｓ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオンが白色の固形物として（１８ｍｇ）得られた。
ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）＋：６６５
【００９９】
［実施例１８］
インビトロ活性アッセイ
【０１００】
化合物がｐ５３タンパク質とＭＤＭ２タンパク質の間の相互作用を抑制する能力をＨＴＲＦ（ホモジニアス時間分解蛍光）アッセイによって測定した。このアッセイでは、組み換えＧＳＴをタグとして有するＭＤＭ２が、ｐ５３のＭＤＭ２相互作用領域と似たペプチドに結合する（Ｌａｎｅ他）。ＧＳＴ−ＭＤＭ２タンパク質とｐ５３ペプチド（そのＮ末端がビオチニル化されている）の結合は、ユーロピウム（Ｅｕ）で標識した抗ＧＳＴ抗体とストレプトアビジンを共役させたアロフィコシアニン（ＡＰＣ）の間のＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）によって記録される。
【０１０１】
黒色の平底３８４ウエル・プレート（コスター社）の中で、全体積４０μｌにて試験を実施する。その体積に含まれるのは、９０ｎＭのビオチニル化したペプチドと、１６０ｎｇ／ｍｌのＧＳＴ−ＭＤＭ２と、２０ｎＭのストレプトアビジン−ＡＰＣ（パーキンエルマーウォラック社）と、２ｎＭのＥｕ標識化抗ＧＳＴ抗体（パーキンエルマーウォラック社）と、０．２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と、１ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）と、２０ｍＭのトリス−ホウ酸緩衝化生理食塩水（ＴＢＳ）である。この試験は以下のようにして実施する。１０μｌのＧＳＴ−ＭＤＭ２（６４０ｎｇ／ｍｌの作業溶液）を含む反応緩衝液を各ウエルに添加する。希釈した１０μｌの化合物（反応緩衝液中で１：５に希釈）を各ウエルに添加し、振盪することによって混合する。２０μｌのビオチニル化されたｐ５３ペプチド（１８０ｎＭの作業溶液）を含む反応緩衝液を各ウエルに添加し、振盪装置の上で混合する。３７℃にて１時間にわたってインキュベートする。０．２％ＢＳＡを含むＴＢＳ緩衝液にストレプトアビジン−ＡＰＣとＥｕ−抗ＧＳＴ抗体の混合物２０μｌを添加し、室温にて３０分間にわたって振盪し、ＴＲＦが可能なプレート読み取り装置（Victor 5、パーキンエルマーウォラック社）を用いて６６５ｎｍと６１５ｎｍで読み取る。特に記載していない場合の試薬はシグマ・ケミカル社から購入した。
【０１０２】
本発明の生物学的活性を表わすＩＣ５０は、約１０μＭ未満の活性を示す。
代表的な値は、例えば以下の通りである。
実施例 ＩＣ５０（μＭ、０．０２％ＢＳＡ）
８ ０．１４５
９ ０．１０８
１１ ０．１３５
１５ ０．０５６
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式の化合物：
【化１】
（式中、
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ又はＦであり、
Ｖは、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１は、Ｍｅ、Ｅｔ、又はｎＰｒであり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＭｅ、又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである）、
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体。
【請求項２】
Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙが、Ｈであり、
Ｖが、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１が、Ｍｅ又はＥｔであり、
Ｒ２が、ＯＨ又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗが、Ｃｌである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
一般式の化合物：
【化２】
（式中、
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ又はＦであり、
Ｖは、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１は、Ｍｅ、Ｅｔ、又はｎＰｒであり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＭｅ、又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである）、
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体と、医薬的に許容可能な基剤又は賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項５】
がん、特に固形腫瘍、とりわけ乳房腫瘍、大腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍を治療又は制御するための、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
医薬として使用される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
がん、特に固形腫瘍、とりわけ乳房腫瘍、大腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍を治療又は制御するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
がん、特に固形腫瘍、とりわけ乳房腫瘍、大腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍を治療又は制御するための医薬の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１】
一般式の化合物：
【化１】
（式中、
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ又はＦであり、
Ｖは、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１は、Ｍｅ、Ｅｔ、又はｎＰｒであり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＭｅ、又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである）、
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体。
【請求項２】
Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙが、Ｈであり、
Ｖが、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１が、Ｍｅ又はＥｔであり、
Ｒ２が、ＯＨ又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗが、Ｃｌである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−フルオロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−メトキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−６−クロロ−４’−［５−クロロ−２−（１−ヒドロキシカルボニル−１−メチル−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
ラセミ（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン；
キラル（２’Ｓ，３Ｓ，４’Ｒ）−４’−［５−クロロ−２−（２−メタンスルホニルアミノ−１，１−メチル−２−オキソ−エトキシ）−ピリジン−３−イル］−６−クロロ−２’−（５−クロロ−２−メチル−フェニル）スピロ［３Ｈ−インドール−３，３’−ピペリジン］−２，６’（１Ｈ）−ジオン
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
一般式の化合物：
【化２】
（式中、
Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒであり、
Ｙは、Ｈ又はＦであり、
Ｖは、Ｆ又はＣｌであり、
Ｒ１は、Ｍｅ、Ｅｔ、又はｎＰｒであり、
Ｒ２は、ＯＨ、ＯＭｅ、又はＮＨＳＯ２Ｍｅであり、
Ｗは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒである）、
又は医薬的に許容可能なその塩、エステル、若しくは鏡像異性体と、医薬的に許容可能な基剤又は賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項５】
がん、特に固形腫瘍、とりわけ乳房腫瘍、大腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍を治療又は制御するための、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
医薬として使用される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
がん、特に固形腫瘍、とりわけ乳房腫瘍、大腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍を治療又は制御するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
がん、特に固形腫瘍、とりわけ乳房腫瘍、大腸腫瘍、肺腫瘍、前立腺腫瘍を治療又は制御するための医薬の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【公表番号】特表２０１２−５１２８４９（Ｐ２０１２−５１２８４９Ａ）
【公表日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４１５２１（Ｐ２０１１−５４１５２１）
【出願日】平成２２年２月２日（２０１０．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５１２５２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９１９７９
【国際公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月２日（２０１０．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５１２５２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９１９７９
【国際公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
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