パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩ
【課題】天然の動植物、微生物などに含まれる新規の化学成分を提供する。
【解決手段】ショウガ科植物 Curcuma parvifloraの成分研究を行って （１）式で示されるパルビフロレンＨ、及びパルビフロレンＩを得た。これらの物質は細胞毒性物質として利用できる。
【解決手段】ショウガ科植物 Curcuma parvifloraの成分研究を行って （１）式で示されるパルビフロレンＨ、及びパルビフロレンＩを得た。これらの物質は細胞毒性物質として利用できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物であるパルビフロレンＨ及びパルビフロレンＩに関する。
【背景技術】
【０００２】
２１世紀となった現在でも、地球上の人口の６割以上の人は、普段の病気や怪我の治療に、身近な自然の中にある植物や菌類（キノコなど）あるいはそれ由来の生薬を用いていると言われている。また、一方では、現在病院や家庭で使われている医薬品の中には、もともと天然の動植物、微生物などの体の中に含まれる化学成分として見つけ出されたもの（以下、「天然物」という）が沢山ある。また、天然の化学成分を原形として化学構造に改良を加えることにより、元の天然物よりも更に有効で安全な合成化合物も数多く開発されている。このように新しい有用な天然物を探すという研究は、薬を創り出す出発点とも言うべき大変重要なことと位置づけることができる。
【０００３】
しかしながら、地球上の全ての生物種の中で、これまでに有効成分を探すための材料として研究されたものは未だ１０％にも満たないと言われている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、上述した事情に鑑み、天然の動植物、微生物などに含まれる新規の化学成分を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、人間と地球環境との共存・保全の立場を十分尊重しつつ、未利用資源の開発と有効成分の探索研究に力を注いで、野外採取したショウガ科植物Ｃｕｒｃｕｍａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａの成分研究を行い、新規化合物を見出した。
【０００６】
かかる本発明の第一の態様は、下記（１）で示されることを特徴とするパルビフロレンＨにある。
【化１】
【０００７】
また、本発明の第二の態様は、下記（２）式で示されることを特徴とするパルビフロレンＩにある。
【化２】
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、ショウガ科植物Ｃｕｒｃｕｍａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ由来の新規化合物であるパルビフロレンＨ及びパルビフロレンＩを提供することができる。この新規化合物は有用な生物活性が期待でき、大いに有用な医薬品となることが期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下本発明の実施形態について詳細に説明する。
【００１０】
本実施形態にかかる化合物は、 本発明の新規化合物は、上記（１）式で表されるパルビフロレンＨ（ｐａｒｖｉｆｌｏｒｅｎｅ Ｈ）および上記（２）式で表されるパルビフロレンＩ（ｐａｒｖｉｆｌｏｒｅｎｅ Ｉ）である。このパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩは、ショウガ科植物から単離することにより製造することができる。例えば、野外採取したショウガ科植物からメタノール及びアセトンを溶媒として成分を抽出し、分画することにより得ることができ、その方法は限定されない。また、合成してもよい。
【００１１】
また、本実施形態にかかるパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩは、細胞毒性物質として利用できる。本実施形態にかかるパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩはヒト子宮頸がんＨｅＬａ細胞に対する細胞毒性を有しており、しかも従来前例のない新規化学構造を有するため、新規細胞毒性物質（治療薬）としての有用性が期待される。
【００１２】
以下、本発明について実施例に基づき説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００１３】
（実施例）
（１）パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩの単離
野外にて採取したショウガ科植物Ｃｕｃｕｍａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａの地下部（計２８０ ｇ）をメタノール８００ ｍＬで２回、アセトン５００
ｍＬで１回抽出し、それらの抽出物をあわせて溶媒留去し、抽出物１２．６ ｇを得た。この抽出物を水（２００ ｍｌ）と酢酸エチル（４００ ｍｌを２回及び２００ ｍｌを１回）用いて溶媒分画を行い、酢酸エチル可溶画分８．１ｇを得た。この酢酸エチル可溶画分に相当するフラクション（２．８
ｇ）を別途採取した同植物全草（１７０ ｇ）からも同様の操作によって得た。
【００１４】
これらのフラクションをあわせてシリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラムＡ；φ４５×５７０
ｍｍ）を行い、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒で溶出した。まず、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）の溶媒で溶出したフラクション（２．５７ｇ）について、２回目のシリカゲルカラムクロマトグラフィー（φ５０×４００
ｍｍ）を行い、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒で溶出した。本カラムのヘキサン：酢酸エチル（１００：１）の溶媒で溶出したフラクション（１．６８ｇ）についてセファデックスＬＨ２０によって精製した（φ１５×５５０
ｍｍ；溶出液、ＭｅＯＨ）。その結果１０５ ｍｌから１２０ ｍｌのフラクションにパルビフロレンＨ（５．０ ｍｇ）を得た。なお、このスキームについて図１に示す。
【００１５】
次に、最初のシリカゲルカラム（カラムＡ）のヘキサン：酢酸エチル（１:１から０：１）の溶媒で溶出したフラクション（０．２９ ｇ）について、２回目のシリカゲルカラムクロマトグラフィー（φ２５×２００
ｍｍ）を行い、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒で溶出した。本カラムのヘキサン：酢酸エチル（２：１から４：３）の溶媒で溶出したフラクション（７１ｍｇ）についてセファデックスＬＨ２０によって精製した（φ１５×５００
ｍｍ；溶出液、ＭｅＯＨ）。その結果５３５ｍｌから５５５ ｍｌのフラクションにパルビフロレンＩ（８．６ ｍｇ）を得た。（図１のスキーム参照）
【００１６】
（２）構造
得られたパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩの物理化学的性質を調べた。具体的には、ＥＩＭＳ、ＨＲＦＡＢＭＳ、［α］、ＵＶ、ＩＲ、ＣＤについてそれぞれ測定を行った。
【００１７】
（２−１）パルビフロレンＨの構造
高性能ＦＡＢＭＳにより［Ｍ+］と推測されるｍ／ｚ４２６．２５２３のピークが観測されたことから、分子式Ｃ３０Ｈ３４Ｏ２
をもつと推定された。
【００１８】
またＵＶスペクトル及びＩＲスペクトルについても測定を行ったところ、ＵＶスペクトルにおいては波長２４２．０ｎｍにおいてε６４０００、波長３０３．０ｎｍにおいてε１００００の値を示し（図２参照）、ＩＲスペクトルにおいては３５００、２９６０、２９３０、２８７０、１６５０、１４３０
ｃｍ−１においてそれぞれ吸収ピークが観測された。なおこれら値を表１に示す。
【表１】
【００１９】
また、１Ｈ ＮＭＲおよび １３Ｃ ＮＭＲによっても測定を行った。１Ｈ ＮＭＲのスペクトルを図３に、１Ｈ ＮＭＲ及び１３Ｃ ＮＭＲのデータを表２に示す。１３Ｃ ＮＭＲでは推定した分子式に含まれる炭素数（３０個）のちょうど半分の１５本のシグナルしか観測されなかったため、本化合物は対称なニ量体構造をもつと推定した。また１Ｈ
ＮＭＲではメチル基由来のシグナルが４本、芳香環上の水素のシグナルが３本、ＯＨ由来のシグナルが１本観測された。更に、１Ｈ−１Ｈ
ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルの解析により本化合物は芳香環化した２個のカジナン型セスキテルペンの２位同士が結合した二量体型化合物であることが明らかとなった。なお図４に１Ｈ−１Ｈ
ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにより得られた相関データを示す。
【表２】
【００２０】
また本化合物についてＣＤおよび[α]Ｄも測定したところ、ゼロを示したことから軸不斉に関する光学活性体ではないことが判明した。よってラセミ混合物と推定された。
【００２１】
（２−２） パルビフロレンＩの構造
高性能ＦＡＢＭＳにより［Ｍ+］と推測されるｍ／ｚ４１２．１７４２のピークが観測されたことから、分子式Ｃ２７Ｈ２４Ｏ４をもつと推定された（表１参照）。これまでに本植物から単離したパルビフロレン類はすべて炭素３０個含んでいたのに対して，本化合物はそれらより炭素３個少なく２７個しか含まないことがわかった。
【００２２】
またＵＶスペクトル及びＩＲスペクトルについても測定を行ったところ、ＵＶスペクトルにおいては波長２２３．０ｎｍにおいてε３６０００、波長３１３．０ｎｍにおいてε４００００の値を示し（図５参照）、ＩＲスペクトルにおいては３３９０、２９６０、２９２０、２８６０、１７００、１６１０、１５８０、１３００ｃｍ−１においてそれぞれ吸収ピークが観測された（表１参照）。
【００２３】
１Ｈ ＮＭＲおよび １３Ｃ ＮＭＲについても測定を行った（表２参照）。１Ｈ ＮＭＲのスペクトルを図６に示す。１Ｈ
ＮＭＲおよび １３Ｃ ＮＭＲ から，イソプロピル基は１個のみ存在することが示唆された。またカルボニル炭素のシグナルが２本観測された。２次元ＮＭＲスペクトルの解析により本化合物はセスキテルペン二量体型骨格からＣ１１、Ｃ１２、Ｃ１３位のイソプロピル基が脱離し、６位にケトンが存在する構造をもつことが判明した。また７位にもケトンが存在し、α−ジケトン型構造をもつことが明らかとなった。なお、１Ｈ−１Ｈ
ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにおいて観測された相関データを図７に示す。
【００２４】
以上のことから、パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩの構造を下記に示すものと推定した。
【化３】
【００２５】
（３）細胞毒性
パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩのＨｅＬａ細胞に対する細胞毒性を調べたところ、ＩＣ５０値は，各々> ２５ および ０．６３ μｇ/ｍＬであった。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩ抽出の一連のスキームを示す図。
【図２】パルビフロレンＨのＵＶスペクトル。
【図３】パルビフロレンＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図４】パルビフロレンＨの１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにおいて観測された相関図。
【図５】パルビフロレンＩのＵＶスペクトル。
【図６】パルビフロレンＩの１Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図７】パルビフロレンＩの１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにおいて観測された相関図。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物であるパルビフロレンＨ及びパルビフロレンＩに関する。
【背景技術】
【０００２】
２１世紀となった現在でも、地球上の人口の６割以上の人は、普段の病気や怪我の治療に、身近な自然の中にある植物や菌類（キノコなど）あるいはそれ由来の生薬を用いていると言われている。また、一方では、現在病院や家庭で使われている医薬品の中には、もともと天然の動植物、微生物などの体の中に含まれる化学成分として見つけ出されたもの（以下、「天然物」という）が沢山ある。また、天然の化学成分を原形として化学構造に改良を加えることにより、元の天然物よりも更に有効で安全な合成化合物も数多く開発されている。このように新しい有用な天然物を探すという研究は、薬を創り出す出発点とも言うべき大変重要なことと位置づけることができる。
【０００３】
しかしながら、地球上の全ての生物種の中で、これまでに有効成分を探すための材料として研究されたものは未だ１０％にも満たないと言われている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、上述した事情に鑑み、天然の動植物、微生物などに含まれる新規の化学成分を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、人間と地球環境との共存・保全の立場を十分尊重しつつ、未利用資源の開発と有効成分の探索研究に力を注いで、野外採取したショウガ科植物Ｃｕｒｃｕｍａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａの成分研究を行い、新規化合物を見出した。
【０００６】
かかる本発明の第一の態様は、下記（１）で示されることを特徴とするパルビフロレンＨにある。
【化１】
【０００７】
また、本発明の第二の態様は、下記（２）式で示されることを特徴とするパルビフロレンＩにある。
【化２】
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、ショウガ科植物Ｃｕｒｃｕｍａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ由来の新規化合物であるパルビフロレンＨ及びパルビフロレンＩを提供することができる。この新規化合物は有用な生物活性が期待でき、大いに有用な医薬品となることが期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下本発明の実施形態について詳細に説明する。
【００１０】
本実施形態にかかる化合物は、 本発明の新規化合物は、上記（１）式で表されるパルビフロレンＨ（ｐａｒｖｉｆｌｏｒｅｎｅ Ｈ）および上記（２）式で表されるパルビフロレンＩ（ｐａｒｖｉｆｌｏｒｅｎｅ Ｉ）である。このパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩは、ショウガ科植物から単離することにより製造することができる。例えば、野外採取したショウガ科植物からメタノール及びアセトンを溶媒として成分を抽出し、分画することにより得ることができ、その方法は限定されない。また、合成してもよい。
【００１１】
また、本実施形態にかかるパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩは、細胞毒性物質として利用できる。本実施形態にかかるパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩはヒト子宮頸がんＨｅＬａ細胞に対する細胞毒性を有しており、しかも従来前例のない新規化学構造を有するため、新規細胞毒性物質（治療薬）としての有用性が期待される。
【００１２】
以下、本発明について実施例に基づき説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００１３】
（実施例）
（１）パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩの単離
野外にて採取したショウガ科植物Ｃｕｃｕｍａ ｐａｒｖｉｆｌｏｒａの地下部（計２８０ ｇ）をメタノール８００ ｍＬで２回、アセトン５００
ｍＬで１回抽出し、それらの抽出物をあわせて溶媒留去し、抽出物１２．６ ｇを得た。この抽出物を水（２００ ｍｌ）と酢酸エチル（４００ ｍｌを２回及び２００ ｍｌを１回）用いて溶媒分画を行い、酢酸エチル可溶画分８．１ｇを得た。この酢酸エチル可溶画分に相当するフラクション（２．８
ｇ）を別途採取した同植物全草（１７０ ｇ）からも同様の操作によって得た。
【００１４】
これらのフラクションをあわせてシリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラムＡ；φ４５×５７０
ｍｍ）を行い、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒で溶出した。まず、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）の溶媒で溶出したフラクション（２．５７ｇ）について、２回目のシリカゲルカラムクロマトグラフィー（φ５０×４００
ｍｍ）を行い、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒で溶出した。本カラムのヘキサン：酢酸エチル（１００：１）の溶媒で溶出したフラクション（１．６８ｇ）についてセファデックスＬＨ２０によって精製した（φ１５×５５０
ｍｍ；溶出液、ＭｅＯＨ）。その結果１０５ ｍｌから１２０ ｍｌのフラクションにパルビフロレンＨ（５．０ ｍｇ）を得た。なお、このスキームについて図１に示す。
【００１５】
次に、最初のシリカゲルカラム（カラムＡ）のヘキサン：酢酸エチル（１:１から０：１）の溶媒で溶出したフラクション（０．２９ ｇ）について、２回目のシリカゲルカラムクロマトグラフィー（φ２５×２００
ｍｍ）を行い、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合溶媒で溶出した。本カラムのヘキサン：酢酸エチル（２：１から４：３）の溶媒で溶出したフラクション（７１ｍｇ）についてセファデックスＬＨ２０によって精製した（φ１５×５００
ｍｍ；溶出液、ＭｅＯＨ）。その結果５３５ｍｌから５５５ ｍｌのフラクションにパルビフロレンＩ（８．６ ｍｇ）を得た。（図１のスキーム参照）
【００１６】
（２）構造
得られたパルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩの物理化学的性質を調べた。具体的には、ＥＩＭＳ、ＨＲＦＡＢＭＳ、［α］、ＵＶ、ＩＲ、ＣＤについてそれぞれ測定を行った。
【００１７】
（２−１）パルビフロレンＨの構造
高性能ＦＡＢＭＳにより［Ｍ+］と推測されるｍ／ｚ４２６．２５２３のピークが観測されたことから、分子式Ｃ３０Ｈ３４Ｏ２
をもつと推定された。
【００１８】
またＵＶスペクトル及びＩＲスペクトルについても測定を行ったところ、ＵＶスペクトルにおいては波長２４２．０ｎｍにおいてε６４０００、波長３０３．０ｎｍにおいてε１００００の値を示し（図２参照）、ＩＲスペクトルにおいては３５００、２９６０、２９３０、２８７０、１６５０、１４３０
ｃｍ−１においてそれぞれ吸収ピークが観測された。なおこれら値を表１に示す。
【表１】
【００１９】
また、１Ｈ ＮＭＲおよび １３Ｃ ＮＭＲによっても測定を行った。１Ｈ ＮＭＲのスペクトルを図３に、１Ｈ ＮＭＲ及び１３Ｃ ＮＭＲのデータを表２に示す。１３Ｃ ＮＭＲでは推定した分子式に含まれる炭素数（３０個）のちょうど半分の１５本のシグナルしか観測されなかったため、本化合物は対称なニ量体構造をもつと推定した。また１Ｈ
ＮＭＲではメチル基由来のシグナルが４本、芳香環上の水素のシグナルが３本、ＯＨ由来のシグナルが１本観測された。更に、１Ｈ−１Ｈ
ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルの解析により本化合物は芳香環化した２個のカジナン型セスキテルペンの２位同士が結合した二量体型化合物であることが明らかとなった。なお図４に１Ｈ−１Ｈ
ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにより得られた相関データを示す。
【表２】
【００２０】
また本化合物についてＣＤおよび[α]Ｄも測定したところ、ゼロを示したことから軸不斉に関する光学活性体ではないことが判明した。よってラセミ混合物と推定された。
【００２１】
（２−２） パルビフロレンＩの構造
高性能ＦＡＢＭＳにより［Ｍ+］と推測されるｍ／ｚ４１２．１７４２のピークが観測されたことから、分子式Ｃ２７Ｈ２４Ｏ４をもつと推定された（表１参照）。これまでに本植物から単離したパルビフロレン類はすべて炭素３０個含んでいたのに対して，本化合物はそれらより炭素３個少なく２７個しか含まないことがわかった。
【００２２】
またＵＶスペクトル及びＩＲスペクトルについても測定を行ったところ、ＵＶスペクトルにおいては波長２２３．０ｎｍにおいてε３６０００、波長３１３．０ｎｍにおいてε４００００の値を示し（図５参照）、ＩＲスペクトルにおいては３３９０、２９６０、２９２０、２８６０、１７００、１６１０、１５８０、１３００ｃｍ−１においてそれぞれ吸収ピークが観測された（表１参照）。
【００２３】
１Ｈ ＮＭＲおよび １３Ｃ ＮＭＲについても測定を行った（表２参照）。１Ｈ ＮＭＲのスペクトルを図６に示す。１Ｈ
ＮＭＲおよび １３Ｃ ＮＭＲ から，イソプロピル基は１個のみ存在することが示唆された。またカルボニル炭素のシグナルが２本観測された。２次元ＮＭＲスペクトルの解析により本化合物はセスキテルペン二量体型骨格からＣ１１、Ｃ１２、Ｃ１３位のイソプロピル基が脱離し、６位にケトンが存在する構造をもつことが判明した。また７位にもケトンが存在し、α−ジケトン型構造をもつことが明らかとなった。なお、１Ｈ−１Ｈ
ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにおいて観測された相関データを図７に示す。
【００２４】
以上のことから、パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩの構造を下記に示すものと推定した。
【化３】
【００２５】
（３）細胞毒性
パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩのＨｅＬａ細胞に対する細胞毒性を調べたところ、ＩＣ５０値は，各々> ２５ および ０．６３ μｇ/ｍＬであった。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】パルビフロレンＨおよびパルビフロレンＩ抽出の一連のスキームを示す図。
【図２】パルビフロレンＨのＵＶスペクトル。
【図３】パルビフロレンＨの１Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図４】パルビフロレンＨの１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにおいて観測された相関図。
【図５】パルビフロレンＩのＵＶスペクトル。
【図６】パルビフロレンＩの１Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図７】パルビフロレンＩの１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣスペクトルにおいて観測された相関図。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）式で示されることを特徴とするパルビフロレンＨ
【化１】
【請求項２】
下記（２）式で示されることを特徴とするパルビフロレンＩ
【化２】
【請求項１】
下記（１）式で示されることを特徴とするパルビフロレンＨ
【化１】
【請求項２】
下記（２）式で示されることを特徴とするパルビフロレンＩ
【化２】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公開番号】特開２００６−２５６９８３（Ｐ２００６−２５６９８３Ａ）
【公開日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−７３９２３（Ｐ２００５−７３９２３）
【出願日】平成１７年３月１５日（２００５．３．１５）
【出願人】（３０４０２１８３１）国立大学法人 千葉大学 (601)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年３月１５日（２００５．３．１５）
【出願人】（３０４０２１８３１）国立大学法人 千葉大学 (601)
【Ｆターム（参考）】
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