ヒト・サイトメガロウィルス感染に対するコドン最適化型ポリヌクレオチド系ワクチン
本発明は、ポリヌクレオチド系サイトメガロウィルス・ワクチンに関する。具体的には本発明は、HCMV抗原を作業可能にコードするプラスミドであり、これらのプラスミドにおいて、HCMV抗原に対応する自然発生型コード領域が、コドン最適化によってヒト又はその他の哺乳動物の細胞における翻訳が改善されるように修飾されている。本発明において有用なHCMV抗原の一例としては、pp65、糖タンパク質B(gB)、IE1及びこれらの抗原のいずれかの断片、変異体又は誘導体が挙げられる。或る実施態様の場合、配列、例えばpp65におけるArg435-Lys438の推定上のキナーゼ、及びgBにおける膜アンカー及び細胞内ドメインが欠失させられている。本発明はさらに、哺乳動物、例えばヒトにおいてHCMVに対する免疫応答を誘発する方法であって、上述のコドン最適化型HCMV抗原をコードするプラスミドを送達することを含む方法に関する。本発明はまた製薬組成物であって、上述のコドン最適化型HCMV抗原をコードするプラスミドを含み、そしてさらに、アジュバント、賦形剤又は免疫モジュレーターを含む製薬組成物に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
SEQ ID NO:2の最小50個の連続アミノ酸をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって；前記核酸が、SEQ ID NO:2のHCMV pp65ポリペプチドに対応するコドン最適化型コード領域の断片であり；
前記コドン最適化型コード領域が、
ala-GCGコドンがGCCに変化させられ；
arg-CGTコドンがCGCに変化させられ；
pro-CCGコドンがCCC, CCT又はCCAに変化させられ；
ser-TCGコドンがTCCに変化させられ；そして
thr-ACGコドンがACCに変化させられる
ことを除いて、野生型コード領域と同一であり；
前記50個の連続アミノ酸は、HCMVに対する免疫応答を誘発することができる
ことを特徴とする、前記単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:2の最小100個の連続アミノ酸をコードする、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記野生型コード領域がSEQ ID NO:1を含む、請求項1又は2に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記コドン最適化型コード領域がSEQ ID NO:3を含む、請求項1から3までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜561をコードする、請求項1から4までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記核酸断片が、異種核酸にライゲートされる、請求項1から5までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記異種核酸が、異種ポリペプチドをコードする、請求項6に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記異種ポリペプチドが、前記核酸断片によってコードされたポリペプチドに融合される、請求項7に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
該ポリヌクレオチドがDNAであり、前記核酸断片がプロモーターと作用可能な状態で連絡する、請求項1から8までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
RNAである、請求項1から8までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
メッセンジャーRNA(mRNA)である、請求項10に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項1から11までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１３】
前記ポリヌクレオチドがDNAであり、そして前記ベクターがプラスミドである、請求項12に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項1から11までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、及びキャリヤを含む組成物。
【請求項１５】
アジュバントとトランスフェクション促進化合物とから成る群から選択された成分をさらに含む、請求項14に記載の組成物。
【請求項１６】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が：
(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)及び中性脂質；
サイトカイン；
モノ-ホスホリル脂質A及びトレハロースジコリノミコレートAF(MPL + TDM)；
可溶化型モノ-ホスホリル脂質A配合物；
CRL1005/BAK；及び
(±)-N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(テトラデシルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(DMRIE)
から成る群から選択される、請求項15に記載の組成物。
【請求項１７】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)であり、そして前記中性脂質が：
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPyPE)、及び
1,2-ジミリストイル-グリセル-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)
から成る群から選択される、請求項16に記載の組成物。
【請求項１８】
前記中性脂質がDPyPEである、請求項17に記載の組成物。
【請求項１９】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、CRL1005及び塩化ベンザルコニウム(BAK)を含む、請求項16に記載の組成物。
【請求項２０】
前記CRL1005及びBAKが：
0.3 mM BAK及び7.5 mg/ml CRL1005、
0.3 mM BAK及び34 mg/ml CRL1005、及び
0.3 mM BAK及び50 mg/ml CRL1005
から成る群から選択された濃度で存在する、請求項19に記載の組成物。
【請求項２１】
CRL1005と、BAKと、ポリヌクレオチドとを、曇り点を上回る温度への熱サイクル処理を施さずに、曇り点未満の温度で合体することにより調製される、請求項19又は20に記載の組成物。
【請求項２２】
ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法であって：該治療又は予防を必要とするヒトに、請求項1から11までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項14から21までのいずれか1項に記載の組成物を投与することを含むことを特徴とする、ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法。
【請求項２３】
SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜561に対して最小90%だけ同一のポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって；前記核酸が、SEQ ID NO:2のHCMV pp65ポリペプチドに対応するコドン最適化型コード領域の変異体であり；
前記コドン最適化型コード領域が、
ala-GCGコドンがGCCに変化させられ；
arg-CGTコドンがCGCに変化させられ；
pro-CCGコドンがCCC, CCT又はCCAに変化させられ；
ser-TCGコドンがTCCに変化させられ；そして
thr-ACGコドンがACCに変化させられる
ことを除いて、野生型コード領域と同一であり；
前記ポリペプチドは、HCMVに対する免疫応答を誘発することができる
ことを特徴とする、単離ポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜561に対して最小95%だけ同一のポリペプチドをコードする、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】
SEQ ID NO:2のアミノ酸435〜438に対応する前記核酸断片中のコドンが欠失させられている、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:6のアミノ酸1〜557をコードする、請求項25に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記野生型コード領域がSEQ ID NO:1を含む、請求項23〜26のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
前記コドン最適化型コード領域がSEQ ID NO:4を含む、請求項23〜27のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
前記核酸断片が異種核酸にライゲートされる、請求項23〜28のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
前記異種核酸が、異種ポリペプチドをコードする、請求項29に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
前記異種ポリペプチドが、前記核酸断片によってコードされたポリペプチドに融合される、請求項30に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３２】
該ポリヌクレオチドがDNAであり、前記核酸断片がプロモーターと作用可能な状態で連絡する、請求項23〜31のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３３】
RNAである、請求項23〜31のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３４】
メッセンジャーRNA(mRNA)である、請求項33に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３５】
請求項23〜34のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３６】
前記ポリヌクレオチドがDNAであり、そして前記ベクターがプラスミドである、請求項35に記載のベクター。
【請求項３７】
請求項23〜34のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、及びキャリヤを含む、組成物。
【請求項３８】
アジュバントとトランスフェクション促進化合物とから成る群から選択された成分をさらに含む、請求項37に記載の組成物。
【請求項３９】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が：
(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)及び中性脂質；
サイトカイン；
モノ-ホスホリル脂質A及びトレハロースジコリノミコレートAF(MPL + TDM)；
可溶化型モノ-ホスホリル脂質A配合物；
CRL1005/BAK；及び
(±)-N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(テトラデシルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(DMRIE)
から成る群から選択される、請求項38に記載の組成物。
【請求項４０】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)であり、そして前記中性脂質が：
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPyPE)、及び
1,2-ジミリストイル-グリセル-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)
から成る群から選択される、請求項39に記載の組成物。
【請求項４１】
前記中性脂質がDPyPEである、請求項40に記載の組成物。
【請求項４２】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、CRL1005及び塩化ベンザルコニウム(BAK)を含む、請求項39に記載の組成物。
【請求項４３】
前記CRL1005及びBAKが：
0.3 mM BAK及び7.5 mg/ml CRL1005、
0.3 mM BAK及び34 mg/ml CRL1005、及び
0.3 mM BAK及び50 mg/ml CRL1005
から成る群から選択された濃度で存在する、請求項42に記載の組成物。
【請求項４４】
CRL1005と、BAKと、ポリヌクレオチドとを、曇り点を上回る温度への熱サイクル処理を施さずに、曇り点未満の温度で合体することにより調製される、請求項42又は43に記載の組成物。
【請求項４５】
ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法であって：該治療又は予防を必要とするヒトに、請求項23から34までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項37から44までのいずれか1項に記載の組成物を投与することを含む、ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法。
【請求項４６】
SEQ ID NO:12の最小50個の連続アミノ酸をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって；前記核酸が、SEQ ID NO:12のHCMV 糖タンパク質Bポリペプチドに対応するコドン最適化型コード領域の断片であり；
前記コドン最適化型コード領域が、
ala-GCGコドンがGCCに変化させられ；
arg-CGTコドンがCGCに変化させられ；
pro-CCGコドンがCCC, CCT又はCCAに変化させられ；
ser-TCGコドンがTCCに変化させられ；そして
thr-ACGコドンがACCに変化させられる
ことを除いて、野生型コード領域と同一であり；
前記50個の連続アミノ酸は、HCMVに対する免疫応答を誘発することができる
ことを特徴とする、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４７】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12の最小100個の連続アミノ酸をコードする、請求項46に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12のアミノ酸25〜713をコードする、請求項47に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12のアミノ酸25〜906をコードする、請求項48に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:11のアミノ酸1〜713をコードする、請求項47に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12のアミノ酸1〜906をコードする、請求項50に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
前記野生型コード領域がSEQ ID NO:11を含む、請求項46〜51のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記コドン最適化型コード領域がSEQ ID NO:13を含む、請求項46, 47, 48又は50のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５４】
前記核酸断片が、異種核酸にライゲートされる、請求項46〜50のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５５】
前記異種核酸が、異種ポリペプチドをコードする、請求項54に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５６】
前記異種ポリペプチドが、前記核酸断片によってコードされたポリペプチドに融合される、請求項55に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５７】
前記異種ポリペプチドが分泌シグナル・ペプチドである、請求項56に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５８】
該ポリヌクレオチドがDNAであり、前記核酸断片がプロモーターと作業連携する、請求項46〜57のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５９】
RNAである、請求項46〜57のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６０】
メッセンジャーRNA(mRNA)である、請求項59に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６１】
ベクターであって、請求項46〜60のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項６２】
前記ポリヌクレオチドがDNAであり、そして前記ベクターがプラスミドである、請求項61に記載のベクター。
【請求項６３】
請求項46〜60のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、及びキャリヤを含む組成物。
【請求項６４】
さらに、アジュバントとトランスフェクション促進化合物とから成る群から選択された成分を含む、請求項63に記載の組成物。
【請求項６５】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が：
(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)及び中性脂質；
サイトカイン；
モノ-ホスホリル脂質A及びトレハロースジコリノミコレートAF(MPL + TDM)；
可溶化型モノ-ホスホリル脂質A配合物；
CRL1005/BAK；及び
(±)-N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(テトラデシルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(DMRIE)
から成る群から選択される、請求項64に記載の組成物。
【請求項６６】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)であり、そして前記中性脂質が：
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPyPE)、及び
1,2-ジミリストイル-グリセル-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)
から成る群から選択される、請求項65に記載の組成物。
【請求項６７】
前記中性脂質がDPyPEである、請求項66に記載の組成物。
【請求項６８】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、CRL1005及び塩化ベンザルコニウム(BAK)を含む、請求項65に記載の組成物。
【請求項６９】
前記CRL1005及びBAKが：
0.3 mM BAK及び7.5 mg/ml CRL1005、
0.3 mM BAK及び34 mg/ml CRL1005、及び
0.3 mM BAK及び50 mg/ml CRL1005
から成る群から選択された濃度で存在する、請求項68に記載の組成物。
【請求項７０】
CRL1005と、BAKと、ポリヌクレオチドとを、曇り点を上回る温度への熱サイクル処理を施さずに、曇り点未満の温度で合体することにより調製される、請求項68又は69に記載の組成物。
【請求項７１】
ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法であって：該治療又は予防を必要とするヒトに、請求項46から60までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項63から70までのいずれか1項に記載の組成物を投与することを含む、ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法。
【請求項７２】
さらに、該HCMVポリペプチド、その断片、変異体又は誘導体をコードするコドン最適化型ポリヌクレオチドを含む、請求項14〜21、37〜44及び63〜70のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項７３】
該HCMVポリペプチド、その断片、変異体又は誘導体が、pp65、gB又はIE1のうちの1つ又は2つ以上である、請求項72に記載の組成物。
【請求項７４】
IE1をコードする該コドン最適化型ポリヌクレオチドが、プラスミドVR6250によってコードされる、請求項73に記載の組成物。
【請求項７５】
さらに、請求項46から60までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチドのうちの1つ又は2つ以上、或いは、不活化ウィルス、弱毒化ウィルス、単離HCMVポリペプチドを発現させるウィルス・ベクター、及びHCMVウィルス・タンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する分離型ポリペプチドから成る群から選択された従来型ワクチン成分を含む、請求項14〜21、37〜44、63〜70、及び72〜74までのいずれか1項に記載の組成物。
【請求項７６】
HCMVウィルス・タンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記分離型ポリペプチド、又は、ウィルス・ベクターから発現される前記単離HCMVポリペプチドが、HCMV gB、HCMV pp65、又はHCMV IE1、又はこれらの断片、変異体又は誘導体である、請求項75に記載の組成物。
【請求項７７】
HCMVウィルス・タンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記分離型ポリペプチド、又は、ウィルス・ベクターから発現される前記単離HCMVポリペプチドが、脊椎動物において免疫応答を誘発することができる1つ以上の免疫原性エピトープを含む、請求項75に記載の組成物。
【請求項７８】
コドン最適化型コード領域を含む1つ又は2つ以上のポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、同じ配合物中に存在する、請求項75に記載の組成物。
【請求項７９】
前記組成物が、複合ポリヌクレオチド・ワクチン組成物、又は単独調製異種プライム・ブースト・ワクチン組成物である、請求項78に記載の組成物。
【請求項８０】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、異なる配合物中に存在し、前記異なる配合物は順次又は同時に投与される、請求項75に記載の組成物。
【請求項８１】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、単独で投与される個々の成分と等しい免疫応答、又は該成分よりも高い免疫応答を可能にする、請求項75に記載の組成物。
【請求項８２】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、免疫応答を広げることを可能にする、請求項75に記載の組成物。
【請求項８３】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、単独で投与された治療上有益な量のどちらの成分よりも低い投与量で治療上の利益を提供する、請求項75に記載の組成物。
【請求項８４】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、ポリペプチド単独の投与量よりも最小5%、最小10%、最小20%、最小30%、最小40%、最小50%、最小60%又は最小70%だけ少ない単離ポリペプチド投与量で、治療上の利益を提供する、請求項83に記載の組成物。
【請求項８５】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、単独で投与された治療上有益な量のどちらの成分よりも低い投与量で、免疫応答を広げることを可能にする、請求項75に記載の組成物。
【請求項８６】
請求項75に記載の組成物を投与することによって免疫応答を誘発する方法であって、前記免疫応答が、請求項14〜21、27〜44、63〜70及び72〜74のいずれか1項に記載の組成物、又は、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドを投与することによって提供される応答と等しい、又は該応答よりも高い応答であることを特徴とする、免疫応答を誘発する方法。
【請求項８７】
前記免疫応答が、広げられた免疫応答である、請求項86に記載の方法。
【請求項８８】
前記免疫応答が、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドの節約投与量を投与することにより達成され、そして前記節約投与量が、単独で投与される場合に治療上有益な量よりも低い濃度である、請求項86に記載の方法。
【請求項８９】
前記免疫応答が、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記分離型ポリペプチドの節約投与量を投与することにより達成され、そして前記免疫応答が、広げられた免疫応答である、請求項88に記載の方法。
【請求項９０】
HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する単離ポリペプチドの前記節約投与量が、ポリペプチド単独の投与量よりも最小5%、最小10%、最小20%、最小30%、最小40%、最小50%、最小60%又は最小70%だけ少ない、請求項88に記載の方法。
【請求項９１】
前記免疫応答が、高められた細胞性免疫応答である、請求項87に記載の方法。
【請求項９２】
前記免疫応答が、高められた体液性免疫応答である、請求項84に記載の方法。
【請求項９３】
ヒトにおけるCMV感染を治療又は予防する方法であって、該治療又は予防を必要とする脊椎動物に、請求項72〜85のいずれか1項に記載の組成物を投与することを特徴とする、ヒトにおけるCMV感染を治療又は予防する方法。
【請求項１】
SEQ ID NO:2の最小50個の連続アミノ酸をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって；前記核酸が、SEQ ID NO:2のHCMV pp65ポリペプチドに対応するコドン最適化型コード領域の断片であり；
前記コドン最適化型コード領域が、
ala-GCGコドンがGCCに変化させられ；
arg-CGTコドンがCGCに変化させられ；
pro-CCGコドンがCCC, CCT又はCCAに変化させられ；
ser-TCGコドンがTCCに変化させられ；そして
thr-ACGコドンがACCに変化させられる
ことを除いて、野生型コード領域と同一であり；
前記50個の連続アミノ酸は、HCMVに対する免疫応答を誘発することができる
ことを特徴とする、前記単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:2の最小100個の連続アミノ酸をコードする、請求項1に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記野生型コード領域がSEQ ID NO:1を含む、請求項1又は2に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記コドン最適化型コード領域がSEQ ID NO:3を含む、請求項1から3までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜561をコードする、請求項1から4までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記核酸断片が、異種核酸にライゲートされる、請求項1から5までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記異種核酸が、異種ポリペプチドをコードする、請求項6に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記異種ポリペプチドが、前記核酸断片によってコードされたポリペプチドに融合される、請求項7に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
該ポリヌクレオチドがDNAであり、前記核酸断片がプロモーターと作用可能な状態で連絡する、請求項1から8までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
RNAである、請求項1から8までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
メッセンジャーRNA(mRNA)である、請求項10に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項1から11までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項１３】
前記ポリヌクレオチドがDNAであり、そして前記ベクターがプラスミドである、請求項12に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項1から11までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、及びキャリヤを含む組成物。
【請求項１５】
アジュバントとトランスフェクション促進化合物とから成る群から選択された成分をさらに含む、請求項14に記載の組成物。
【請求項１６】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が：
(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)及び中性脂質；
サイトカイン；
モノ-ホスホリル脂質A及びトレハロースジコリノミコレートAF(MPL + TDM)；
可溶化型モノ-ホスホリル脂質A配合物；
CRL1005/BAK；及び
(±)-N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(テトラデシルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(DMRIE)
から成る群から選択される、請求項15に記載の組成物。
【請求項１７】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)であり、そして前記中性脂質が：
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPyPE)、及び
1,2-ジミリストイル-グリセル-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)
から成る群から選択される、請求項16に記載の組成物。
【請求項１８】
前記中性脂質がDPyPEである、請求項17に記載の組成物。
【請求項１９】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、CRL1005及び塩化ベンザルコニウム(BAK)を含む、請求項16に記載の組成物。
【請求項２０】
前記CRL1005及びBAKが：
0.3 mM BAK及び7.5 mg/ml CRL1005、
0.3 mM BAK及び34 mg/ml CRL1005、及び
0.3 mM BAK及び50 mg/ml CRL1005
から成る群から選択された濃度で存在する、請求項19に記載の組成物。
【請求項２１】
CRL1005と、BAKと、ポリヌクレオチドとを、曇り点を上回る温度への熱サイクル処理を施さずに、曇り点未満の温度で合体することにより調製される、請求項19又は20に記載の組成物。
【請求項２２】
ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法であって：該治療又は予防を必要とするヒトに、請求項1から11までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項14から21までのいずれか1項に記載の組成物を投与することを含むことを特徴とする、ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法。
【請求項２３】
SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜561に対して最小90%だけ同一のポリペプチドをコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって；前記核酸が、SEQ ID NO:2のHCMV pp65ポリペプチドに対応するコドン最適化型コード領域の変異体であり；
前記コドン最適化型コード領域が、
ala-GCGコドンがGCCに変化させられ；
arg-CGTコドンがCGCに変化させられ；
pro-CCGコドンがCCC, CCT又はCCAに変化させられ；
ser-TCGコドンがTCCに変化させられ；そして
thr-ACGコドンがACCに変化させられる
ことを除いて、野生型コード領域と同一であり；
前記ポリペプチドは、HCMVに対する免疫応答を誘発することができる
ことを特徴とする、単離ポリヌクレオチド。
【請求項２４】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:2のアミノ酸1〜561に対して最小95%だけ同一のポリペプチドをコードする、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】
SEQ ID NO:2のアミノ酸435〜438に対応する前記核酸断片中のコドンが欠失させられている、請求項23に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:6のアミノ酸1〜557をコードする、請求項25に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】
前記野生型コード領域がSEQ ID NO:1を含む、請求項23〜26のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
前記コドン最適化型コード領域がSEQ ID NO:4を含む、請求項23〜27のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
前記核酸断片が異種核酸にライゲートされる、請求項23〜28のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
前記異種核酸が、異種ポリペプチドをコードする、請求項29に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
前記異種ポリペプチドが、前記核酸断片によってコードされたポリペプチドに融合される、請求項30に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３２】
該ポリヌクレオチドがDNAであり、前記核酸断片がプロモーターと作用可能な状態で連絡する、請求項23〜31のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３３】
RNAである、請求項23〜31のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３４】
メッセンジャーRNA(mRNA)である、請求項33に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３５】
請求項23〜34のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３６】
前記ポリヌクレオチドがDNAであり、そして前記ベクターがプラスミドである、請求項35に記載のベクター。
【請求項３７】
請求項23〜34のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、及びキャリヤを含む、組成物。
【請求項３８】
アジュバントとトランスフェクション促進化合物とから成る群から選択された成分をさらに含む、請求項37に記載の組成物。
【請求項３９】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が：
(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)及び中性脂質；
サイトカイン；
モノ-ホスホリル脂質A及びトレハロースジコリノミコレートAF(MPL + TDM)；
可溶化型モノ-ホスホリル脂質A配合物；
CRL1005/BAK；及び
(±)-N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(テトラデシルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(DMRIE)
から成る群から選択される、請求項38に記載の組成物。
【請求項４０】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)であり、そして前記中性脂質が：
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPyPE)、及び
1,2-ジミリストイル-グリセル-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)
から成る群から選択される、請求項39に記載の組成物。
【請求項４１】
前記中性脂質がDPyPEである、請求項40に記載の組成物。
【請求項４２】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、CRL1005及び塩化ベンザルコニウム(BAK)を含む、請求項39に記載の組成物。
【請求項４３】
前記CRL1005及びBAKが：
0.3 mM BAK及び7.5 mg/ml CRL1005、
0.3 mM BAK及び34 mg/ml CRL1005、及び
0.3 mM BAK及び50 mg/ml CRL1005
から成る群から選択された濃度で存在する、請求項42に記載の組成物。
【請求項４４】
CRL1005と、BAKと、ポリヌクレオチドとを、曇り点を上回る温度への熱サイクル処理を施さずに、曇り点未満の温度で合体することにより調製される、請求項42又は43に記載の組成物。
【請求項４５】
ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法であって：該治療又は予防を必要とするヒトに、請求項23から34までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項37から44までのいずれか1項に記載の組成物を投与することを含む、ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法。
【請求項４６】
SEQ ID NO:12の最小50個の連続アミノ酸をコードする核酸を含む単離ポリヌクレオチドであって；前記核酸が、SEQ ID NO:12のHCMV 糖タンパク質Bポリペプチドに対応するコドン最適化型コード領域の断片であり；
前記コドン最適化型コード領域が、
ala-GCGコドンがGCCに変化させられ；
arg-CGTコドンがCGCに変化させられ；
pro-CCGコドンがCCC, CCT又はCCAに変化させられ；
ser-TCGコドンがTCCに変化させられ；そして
thr-ACGコドンがACCに変化させられる
ことを除いて、野生型コード領域と同一であり；
前記50個の連続アミノ酸は、HCMVに対する免疫応答を誘発することができる
ことを特徴とする、単離ポリヌクレオチド。
【請求項４７】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12の最小100個の連続アミノ酸をコードする、請求項46に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12のアミノ酸25〜713をコードする、請求項47に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12のアミノ酸25〜906をコードする、請求項48に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:11のアミノ酸1〜713をコードする、請求項47に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
前記核酸断片が、SEQ ID NO:12のアミノ酸1〜906をコードする、請求項50に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
前記野生型コード領域がSEQ ID NO:11を含む、請求項46〜51のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
前記コドン最適化型コード領域がSEQ ID NO:13を含む、請求項46, 47, 48又は50のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５４】
前記核酸断片が、異種核酸にライゲートされる、請求項46〜50のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５５】
前記異種核酸が、異種ポリペプチドをコードする、請求項54に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５６】
前記異種ポリペプチドが、前記核酸断片によってコードされたポリペプチドに融合される、請求項55に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５７】
前記異種ポリペプチドが分泌シグナル・ペプチドである、請求項56に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５８】
該ポリヌクレオチドがDNAであり、前記核酸断片がプロモーターと作業連携する、請求項46〜57のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５９】
RNAである、請求項46〜57のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６０】
メッセンジャーRNA(mRNA)である、請求項59に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６１】
ベクターであって、請求項46〜60のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項６２】
前記ポリヌクレオチドがDNAであり、そして前記ベクターがプラスミドである、請求項61に記載のベクター。
【請求項６３】
請求項46〜60のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、及びキャリヤを含む組成物。
【請求項６４】
さらに、アジュバントとトランスフェクション促進化合物とから成る群から選択された成分を含む、請求項63に記載の組成物。
【請求項６５】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が：
(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)及び中性脂質；
サイトカイン；
モノ-ホスホリル脂質A及びトレハロースジコリノミコレートAF(MPL + TDM)；
可溶化型モノ-ホスホリル脂質A配合物；
CRL1005/BAK；及び
(±)-N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(テトラデシルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(DMRIE)
から成る群から選択される、請求項64に記載の組成物。
【請求項６６】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、(±)-N-(3-アミノプロピル)-N,N-ジメチル-2,3-ビス(syn-9-テトラデセンイルオキシ)-1-プロパンアミニウムブロミド(GAP-DMORIE)であり、そして前記中性脂質が：
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPyPE)、及び
1,2-ジミリストイル-グリセル-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)
から成る群から選択される、請求項65に記載の組成物。
【請求項６７】
前記中性脂質がDPyPEである、請求項66に記載の組成物。
【請求項６８】
前記アジュバント又は前記トランスフェクション促進化合物が、CRL1005及び塩化ベンザルコニウム(BAK)を含む、請求項65に記載の組成物。
【請求項６９】
前記CRL1005及びBAKが：
0.3 mM BAK及び7.5 mg/ml CRL1005、
0.3 mM BAK及び34 mg/ml CRL1005、及び
0.3 mM BAK及び50 mg/ml CRL1005
から成る群から選択された濃度で存在する、請求項68に記載の組成物。
【請求項７０】
CRL1005と、BAKと、ポリヌクレオチドとを、曇り点を上回る温度への熱サイクル処理を施さずに、曇り点未満の温度で合体することにより調製される、請求項68又は69に記載の組成物。
【請求項７１】
ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法であって：該治療又は予防を必要とするヒトに、請求項46から60までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項63から70までのいずれか1項に記載の組成物を投与することを含む、ヒトにおけるHCMV感染を治療又は予防する方法。
【請求項７２】
さらに、該HCMVポリペプチド、その断片、変異体又は誘導体をコードするコドン最適化型ポリヌクレオチドを含む、請求項14〜21、37〜44及び63〜70のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項７３】
該HCMVポリペプチド、その断片、変異体又は誘導体が、pp65、gB又はIE1のうちの1つ又は2つ以上である、請求項72に記載の組成物。
【請求項７４】
IE1をコードする該コドン最適化型ポリヌクレオチドが、プラスミドVR6250によってコードされる、請求項73に記載の組成物。
【請求項７５】
さらに、請求項46から60までのいずれか1項に記載のポリヌクレオチドのうちの1つ又は2つ以上、或いは、不活化ウィルス、弱毒化ウィルス、単離HCMVポリペプチドを発現させるウィルス・ベクター、及びHCMVウィルス・タンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する分離型ポリペプチドから成る群から選択された従来型ワクチン成分を含む、請求項14〜21、37〜44、63〜70、及び72〜74までのいずれか1項に記載の組成物。
【請求項７６】
HCMVウィルス・タンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記分離型ポリペプチド、又は、ウィルス・ベクターから発現される前記単離HCMVポリペプチドが、HCMV gB、HCMV pp65、又はHCMV IE1、又はこれらの断片、変異体又は誘導体である、請求項75に記載の組成物。
【請求項７７】
HCMVウィルス・タンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記分離型ポリペプチド、又は、ウィルス・ベクターから発現される前記単離HCMVポリペプチドが、脊椎動物において免疫応答を誘発することができる1つ以上の免疫原性エピトープを含む、請求項75に記載の組成物。
【請求項７８】
コドン最適化型コード領域を含む1つ又は2つ以上のポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、同じ配合物中に存在する、請求項75に記載の組成物。
【請求項７９】
前記組成物が、複合ポリヌクレオチド・ワクチン組成物、又は単独調製異種プライム・ブースト・ワクチン組成物である、請求項78に記載の組成物。
【請求項８０】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、異なる配合物中に存在し、前記異なる配合物は順次又は同時に投与される、請求項75に記載の組成物。
【請求項８１】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、単独で投与される個々の成分と等しい免疫応答、又は該成分よりも高い免疫応答を可能にする、請求項75に記載の組成物。
【請求項８２】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、免疫応答を広げることを可能にする、請求項75に記載の組成物。
【請求項８３】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、単独で投与された治療上有益な量のどちらの成分よりも低い投与量で治療上の利益を提供する、請求項75に記載の組成物。
【請求項８４】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、ポリペプチド単独の投与量よりも最小5%、最小10%、最小20%、最小30%、最小40%、最小50%、最小60%又は最小70%だけ少ない単離ポリペプチド投与量で、治療上の利益を提供する、請求項83に記載の組成物。
【請求項８５】
該コドン最適化型コード領域を含むポリヌクレオチドと、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドとが、単独で投与された治療上有益な量のどちらの成分よりも低い投与量で、免疫応答を広げることを可能にする、請求項75に記載の組成物。
【請求項８６】
請求項75に記載の組成物を投与することによって免疫応答を誘発する方法であって、前記免疫応答が、請求項14〜21、27〜44、63〜70及び72〜74のいずれか1項に記載の組成物、又は、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドを投与することによって提供される応答と等しい、又は該応答よりも高い応答であることを特徴とする、免疫応答を誘発する方法。
【請求項８７】
前記免疫応答が、広げられた免疫応答である、請求項86に記載の方法。
【請求項８８】
前記免疫応答が、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記単離ポリペプチドの節約投与量を投与することにより達成され、そして前記節約投与量が、単独で投与される場合に治療上有益な量よりも低い濃度である、請求項86に記載の方法。
【請求項８９】
前記免疫応答が、HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する前記分離型ポリペプチドの節約投与量を投与することにより達成され、そして前記免疫応答が、広げられた免疫応答である、請求項88に記載の方法。
【請求項９０】
HCMVタンパク質、その断片、変異体又は誘導体に由来する単離ポリペプチドの前記節約投与量が、ポリペプチド単独の投与量よりも最小5%、最小10%、最小20%、最小30%、最小40%、最小50%、最小60%又は最小70%だけ少ない、請求項88に記載の方法。
【請求項９１】
前記免疫応答が、高められた細胞性免疫応答である、請求項87に記載の方法。
【請求項９２】
前記免疫応答が、高められた体液性免疫応答である、請求項84に記載の方法。
【請求項９３】
ヒトにおけるCMV感染を治療又は予防する方法であって、該治療又は予防を必要とする脊椎動物に、請求項72〜85のいずれか1項に記載の組成物を投与することを特徴とする、ヒトにおけるCMV感染を治療又は予防する方法。
【図１】
【図１】
【図２】
【図２】
【図２】
【図３】
【図３】
【図３】
【図３】
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【図４】
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【図７】
【図７】
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【図８】
【図９】
【図１０】
【図１】
【図２】
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【図３】
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【図６】
【図６】
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【図７】
【図７】
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【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２００６−５１１２２１（Ｐ２００６−５１１２２１Ａ）
【公表日】平成１８年４月６日（２００６．４．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５６３８５１（Ｐ２００４−５６３８５１）
【出願日】平成１５年１２月１９日（２００３．１２．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０６８５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５８１６６
【国際公開日】平成１６年７月１５日（２００４．７．１５）
【出願人】（５０５２３５７８３）バイカル インコーポレイテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年４月６日（２００６．４．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１２月１９日（２００３．１２．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０６８５
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５８１６６
【国際公開日】平成１６年７月１５日（２００４．７．１５）
【出願人】（５０５２３５７８３）バイカル インコーポレイテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
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