本発明は組み換え産生ポリペプチドが天然に存在のヒト成長ホルモンとは明確に異なる一つ又は複数の新規導入Ｎ−連結又はＯ−連結グリコシル化部位を含有するヒト成長ホルモンの突然変異体に関する。突然変異体用配列コード化ポリペプチド、コード化配列含有発現カセット、突然変異体発現細胞及び突然変異体生成法も又開示する。更に突然変異体含有薬剤組成とこの突然変異体の使用法も開示されている。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
突然変異ヒト成長ホルモンコード化ポリヌクレオチド配列からなる単離核酸で、その突然変異ヒト成長ホルモンが対応野生型ヒト成長ホルモンには存在しない新規導入Ｎ−連結又はＯ−連結グリコシル化部位からなる核酸。
【請求項２】
対応野生型ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１かＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を持つ請求項１の核酸。
【請求項３】
新規導入グリコシル化部位がプロリン残基近辺である請求項１の核酸。
【請求項４】
プロリン残基がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２、５、３７、４８、５９、８９、１１３、１４０又は１９０位にある請求項３の核酸。
【請求項５】
突然変異ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４，５，６、７，８又は９のアミノ酸配列からなる請求項１の核酸。
【請求項６】
突然変異ヒト成長ホルモンが一つ以上の新規導入グリコシル部位からなる請求項１の核酸。
【請求項７】
請求項１の核酸からなる発現カセット。
【請求項８】
請求項１の核酸からなる細胞。
【請求項９】
対応野生型ヒト成長ホルモンには存在しない新規導入Ｎ−連結又はＯ−連結グリコシル化部位からなる突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１０】
対応野生型ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１かＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を持つ請求項９の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１１】
新規導入グリコシル化部位がプロリン残基近辺である請求項９の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１２】
プロリン残基がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２、５、３７、４８、５９、８９、１１３、１４０又は１９０位にある請求項１１の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１３】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４，５，６、７，８又は９のアミノ酸配列からなる請求項９の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１４】
突然変異ヒト成長ホルモンが一つ以上の新規導入グリコシル部位からなる請求項９の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１５】
グリコシルリンカーによりグリコシル化部位に結合する水溶性ポリマーからなる請求項９の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１６】
このグリコシルリンカーが無傷グリコシルリンカーである請求項１５の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１７】
グリコシル化部位が突然変異グリコシル部位である請求項１５の突然変異ヒト成長ホルモン。
【請求項１８】
突然変異ヒト成長ホルモンの製造法で、対応野生型ヒト成長ホルモンに存在しない新規導入Ｎ−連結又はＯ−連結グリコシル化からなり、その段階が
（a）突然変異ヒト成長ホルモンの組み換え産成と
（ｂ）新規導入グリコシル化部位での突然変異ヒト成長ホルモンのグリコシル化
からなる方法。
【請求項１９】
対応野生型ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１かＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を持つ請求項１８の方法。
【請求項２０】
新規導入グリコシル化部位がプロリン残基近辺である請求項１８の方法。
【請求項２１】
プロリン残基がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２、５、３７、４８、５９、８９、１１３、１４０又は１９０位にある請求項２０の方法。
【請求項２２】
突然変異ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４，５，６、７，８又は９のアミノ酸配列からなる請求項１８の方法。
【請求項２３】
突然変異ヒト成長ホルモンが一つ以上の新規導入グリコシル部位からなる請求項１８の方法。
【請求項２４】
有効量の突然変異ヒト成長ホルモン含有薬剤組成で、そのホルモンが対応野生型ヒト成長ホルモンには存在しない新規導入Ｎ−連結又はＯ−連結グリコシル化を含む組成。
【請求項２５】
対応野生型ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１かＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を持つ請求項２４の組成。
【請求項２６】
新規導入グリコシル化部位がプロリン残基近辺である請求項２４の組成。
【請求項２７】
プロリン残基がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２、５、３７、４８、５９、８９、１１３、１４０又は１９０位にある請求項２６の組成。
【請求項２８】
突然変異ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４，５，６、７，８又は９のアミノ酸配列からなる請求項２４の組成。
【請求項２９】
突然変異ヒト成長ホルモンが一つ以上の新規導入グリコシル部位からなる請求項２４の組成。
【請求項３０】
ヒト成長ホルモン欠損患者の治療法で、有効量の突然変異ヒト成長ホルモンを患者に投与する段階からなり、その突然変異ヒト成長ホルモンが対応野生型ヒト成長ホルモンには存在しない新規導入Ｎ−連結又はＯ−連結グリコシル化を含む方法。
【請求項３１】
対応野生型ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１かＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を持つ請求項３０の方法。
【請求項３２】
新規導入グリコシル化部位がプロリン残基近辺である請求項３０の方法。
【請求項３３】
プロリン残基がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２、５、３７、４８、５９、８９、１１３、１４０又は１９０位にある請求項３２の方法。
【請求項３４】
突然変異ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４，５，６、７，８又は９のアミノ酸配列からなる請求項３０の方法。
【請求項３５】
突然変異ヒト成長ホルモンが一つ以上の新規導入グリコシル部位からなる請求項３０の方法。
【請求項３６】
突然変異ヒト成長ホルモンの糖質複合体製造法で、そのホルモンが対応野生型ヒト成長ホルモンに存在しない新規導入Ｎ−連結又はＯ−連結グリコシル化からなり、その段階が
（a）突然変異ヒト成長ホルモンの組み換え産成と
（ｂ）新規導入グリコシル化部位での突然変異ヒト成長ホルモンの修飾糖との酵素的グリコシル化からなる方法。
【請求項３７】
修飾糖がポリエチレングルコール及びｍ−ポリエチレングリコールから選んだ一員で修飾する請求項３６の方法。
【請求項３８】
対応野生型ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１かＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列を持つ請求項３６の方法。
【請求項３９】
新規導入グリコシル化部位がプロリン残基近辺である請求項３６の方法。
【請求項４０】
プロリン残基がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の２、５、３７、４８、５９、８９、１１３、１４０又は１９０位にある請求項３６の方法。
【請求項４１】
突然変異ヒト成長ホルモンがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、４，５，６、７，８又は９のアミノ酸配列からなる請求項３６の方法。
【請求項４２】
突然変異ヒト成長ホルモンが一つ以上の新規導入グリコシル部位からなる請求項３６の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図９Ｄ】

【図９Ｅ】

【図９Ｆ】

【図９Ｇ】

【図９Ｈ】

【図９Ｉ】

【公表番号】特表２００７−５２３６３０（Ｐ２００７−５２３６３０Ａ）
【公表日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３２８４４（Ｐ２００６−５３２８４４）
【出願日】平成１６年５月７日（２００４．５．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１４２５４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１０３２７５
【国際公開日】平成１６年１２月２日（２００４．１２．２）
【出願人】（５０００６２２５４）ネオス　テクノロジーズ　インコーポレイテッド (19)
【Ｆターム（参考）】