ヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルに基づく新規抗菌剤
本発明は、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸との脂肪酸エステルと、ポリリジン、プロタミン、それらの塩及びこの混合物から選ばれる抗菌剤との組み合わせに基づく抗菌性組成物に関する。該ヒドロキシカルボン酸は、その遊離形、その塩形及び／又はそのエステル形にある酸として存在しうる。本発明はさらに、種々の製品、適用及び方法において、該組成物をグラム陰性菌に対する抗菌剤として用いる方法に向けられる。さらに、本発明は、該抗菌剤を含む製品に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルに基づく抗菌性組成物、及び種々の製品及び適用におけるグラム陰性菌に対する抗菌剤としてのその使用方法に関する。本発明はさらに、該抗菌剤を含む製品及び特には食品製品に関する。
【０００２】
本発明の脂肪酸エステルは、例えば乳酸、クエン酸、リンゴ酸、グルコン酸及び酒石酸などのヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルを含み、ここで該ヒドロキシカルボン酸は、塩又はエステルの形にもありうる。さらに、該ヒドロキシカルボン酸は、例えばラクチレートの場合などにおいて、１以上の重合した酸モノマーを含みうる。
【背景技術】
【０００３】
ヒドロキシカルボン酸のこれらの脂肪酸エステルの大部分は、乳化剤として適用される。例えば、乳酸の脂肪酸エステル、ラクチレート及びアシルラクチレートとも呼ばれる、はそれらの乳化効果についてよく知られている。それらは一般に、ベーカリー産業において適用される。
【０００４】
関心のあるラクチレートのいくつかが、米国特許第３，２７５，５０３号明細書、欧州特許出願公開第０５７２２７１号明細書及び欧州特許出願公開第１０００５４２号明細書に記載されており、そして、一般式：
【化１】
により表され、ここで、ＲＣＯは、４〜１２の炭素原子を有する脂肪酸のアシル基であり、Ｙは、水素、アルカリ金属、アルカリ土類金属、亜鉛、銀、アンモニウム又は、１以上のＣ１〜Ｃ３アルキル又はヒドロキシアルキル基を有する置換アンモニウムから選ばれる陽イオンであり、ｎは該陽イオンの価数を表し且つｍは１〜ｎの整数であり、ｘは１〜６、好ましくは１〜３、の数である。
【０００５】
米国特許第３，２７５，５０３号明細書に記載されたラクチレートは、８〜１２の炭素原子を有するアシル基ＲＣＯを有し、そして、例えばＲｈｉｚｏｐｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ及びＳａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓに由来する酵母及び菌類による白カビ及びカビ発達の成長を抑制すると記載されている。問題の該ラクチレートは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｕｓ（両方ともグラム陽性菌である）に対するいくらかの抗菌活性も示す。
【０００６】
欧州特許出願公開第０５７２２７１号明細書に記載されたラクチレートは、４〜７の炭素原子を有するアシル基ＲＣＯを有し、そして、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ（グラム陰性菌である）に対するいくらかの抗菌活性を有する。
【０００７】
欧州特許出願公開第１０００５４２号明細書は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ（グラム陽性菌である）に対する、及びＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（真菌である）に対するいくらかの抗菌活性を有するカプリル−ラクチル−ラクチレートのナトリウム塩を記載する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、ラクチレート及びより特には８〜１２の炭素原子を有するアシル基ＲＣＯを有する上記式のラクチレートは、グラム陰性菌、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒなど、に対して非常に有効であると知られていない。それ故に、それらは、抗菌剤として用いられない。実際に、それらの規制状況は、乳化剤として用いられているそれらの規制だけである。
【０００９】
同じことが、他のヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステル、例えばクエン酸、リンゴ酸及び酒石酸の脂肪酸エステルなど、に当てはまる。これらのエステルは主に種々の種類の製品において乳化剤として用いられ、そして抗菌の目的の為に用いられていない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、グラム陰性菌に対する能力の上記言及された欠如を打破する為の解決策を提供する。本発明は、上記で記載されたとおりのヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルのグループを、グラム陰性菌に対して有意により活性にする為の手段を提供し、それにより、それらを、広くさまざまな食品製品、飲料製品及び他の製品における、例えば餌用途における、洗剤及び化粧料製品におけるなど、の適用の為の抗菌剤として非常に有用なものにする。
【００１１】
ここに、本発明は、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸並びに／又は該ヒドロキシカルボン酸の塩及び／若しくはエステルとの脂肪酸エステル、及びポリリジン、プロタミン及びそれらの塩から選ばれる１以上の抗菌剤の組み合わせを含む抗菌性組成物に向けられる。
【発明の効果】
【００１２】
上記言及された抗菌剤は、ヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルの活性を単に増大せず（該増大する効果は該脂肪酸エステルと該抗菌剤との個々の活性の合計である）、本発明の該抗菌剤及び該脂肪酸は相乗的に働き、該抗菌性組成物の個々の成分の活性の合計よりも有意に高い抗菌活性を結果する。この相乗作用に起因して、本発明の該脂肪酸エステルは、ポリリジン、プロタミン、それらの塩又はこれの任意の組み合わせを含む組成物において、抗微生物剤として非常に有効に用いられうる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図２】Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ・ｐＬｙｓ）対Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図３】Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図４】Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図５】Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図６】Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図７】Ｃ１４−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１４Ｌ・ｐＬｙｓ）対Ｃ１４−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１４Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図８】Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ ｐＬｙｓ）対Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
ポリリジンは、グラム陰性菌に対して抗菌活性を発揮すると知られている。α−ポリリジン及びε−ポリリジンの両方が、抗菌活性を有するが、後者は、Ｓｈｉｍａら（Nov. 1984）により記載されるとおり、有意により大きな程度で抗菌活性を有する。該文献は、ε−ポリリジンが、グラム陽性菌及びグラム陰性菌、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなど、に対して、１ｍｌ当たり約１〜８μｇの濃度で有効に用いられうることを記載する。
【００１５】
Ｈｉｒａｋｉら（２０００）は、ε−ポリリジンと、抗菌剤、例えばグリシン、酢酸／酢、エタノール又はチアミンラウリルスルホネートなど、との組み合わせを記載する。しかしながら、ポリリジンが、グラム陰性菌に対する抗菌剤として有効であるヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルと組み合わせられるところの組成物は言及されていない。
【００１６】
特開２０００−２７０８２１号公報、特開平０７−１３５９４３号公報、特開平０４−８２７３号公報は、グリセロール脂肪酸エステル、プロタミン、エタノール、グリシン及び／又はヒドロキシカルボン酸及びそれらの塩と一緒にε−ポリリジンを含む組成物を記載する。上記言及された組成物は、酵母、真菌及び腐敗細菌又は食品損傷細菌、例えばＣａｎｄｉｄａ及びＬｕｃｏｎｏｓｔｏｃなど、に対して有効であると記載されている。しかしながら、ポリリジン及び／又はこの塩とヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルとの特定の組み合わせは開示されていない。
【００１７】
プロタミンもまた、一般に適用される抗菌剤である。多くの日本の特許出願が、プロタミンと、種々の他の抗菌性成分、例えばグリセリド、ヒドロキシカルボン酸及び／又はそれらの塩、アミノ酸、ポリリジン、エタノールなど、との組み合わせを含む抗菌性組成物を記載する。しかしながら、プロタミン及び／又はこの塩とヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルとの特定の組み合わせは言及されていない。
【００１８】
すなわち、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸及び／又はその塩との脂肪酸エステルと、遊離形及び／又は塩の形にあるポリリジン又はプロタミン並びに／又はこの任意の組み合わせとの上記言及された組み合わせは、以前に記載されていない。グラム陰性菌に対する該組み合わせの相乗的抗菌活性も、以前に認められていない。本発明は、ポリリジン（及び／又はこの塩）、プロタミン（及び／又はこの塩）又はこれらの任意の組み合わせを含む組成物中において、抗微生物剤として、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸との該脂肪酸エステルを使用する方法に関する。
【００１９】
本発明の抗菌性組成物中において用いられるときの該脂肪酸エステルは、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸及び／又はこの塩とのエステルである。当技術分野の当業者が知るとおり、そのようなエステルは、例えばエステル化又は酵素的処理を介して得られうる。一般に知られているとおり、脂肪酸エステルの製造の為の大抵の処理は、脂肪酸エステルの混合物を結果し、該混合物は例えば種々の脂肪酸尾部又は種々のエステル尾部の脂肪酸エステルの混合物である。純粋な形にある特定の脂肪酸は、当技術分野の当業者によく知られている種々の手段により、この混合物から得られうる。
【００２０】
該脂肪酸反応物質は、４〜１８、好ましくは８〜１８の炭素原子を含む飽和又は不飽和脂肪酸でありうる。この非限定的な例は、酪酸（すなわちブタン酸（Ｃ４））、カプロン酸（すなわちヘキサン酸（Ｃ６））、ミリスチン酸（すなわちテトラデカン酸（Ｃ１４））、ステアリン酸（すなわちオクタデカン酸（Ｃ１８））、ミリストレイン酸（Ｃ１４）及び／又はオレイン酸（Ｃ１８）である。
【００２１】
該ヒドロキシカルボン酸は、ヒドロキシカルボン酸の１つのモノマー又は重合化結合により互いに連結されたヒドロキシカルボン酸のいくつかのモノマーを含みうる。ヒドロキシカルボン酸の該モノマーは、１〜６の炭素原子を含んでよく、例えば乳酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸及び酒石酸のモノマーなどでありうる。さらに、該ヒドロキシカルボン酸の該塩及び／又はエステルもまた、本発明に従う抗菌性組成物にとって非常に適当である。
【００２２】
本発明の好ましい実施態様において、該抗菌性組成物は、乳酸及び／又は乳酸の塩の脂肪酸エステル、ラクチレートとも言われる、を含む。
【００２３】
本発明のラクチレートは、以下の式：
【化２】
を有し、
ここでＲＣＯは４〜１８の炭素原子、好ましくは８〜１８の炭素原子、を有する脂肪酸のアシル基であり、Ｙは水素、アルカリ金属、アルカリ土類金属、亜鉛、鉄、アンモニウム及び、１以上のＣ１〜Ｃ３アルキル又はヒドロキシアルキルの基を有する置換アンモニウムから選ばれる陽イオンであり；ｎは該陽イオンの価数を表し且つｍは１〜ｎの整数であり；ｘはモノマー単位の数を表し且つ１〜６、好ましくは１〜３の値を有する。
【００２４】
ｘが例えば１であるところの成分は、モノラクチレート（すなわち１つだけの乳酸分子を含む）と言われ、そしてｘが２であるところの成分は、ジラクチレート（２つの重合化した／エステル化した乳酸分子を含む）と呼ばれる。該ラクチレート成分はしばしば、例えば、それらが調製される方法に起因して、大部分がモノラクチレートの混合物の、及び、さらにジラクチレートを含む混合物として得られる。より多く重合化されたラクチレートも該混合物中に存在することは、非常によく可能でありうる。上記で記載された該パラメータｘ、ｍ及びｎは、すなわち、平均の数を示す。
【００２５】
該ラクチレートは、例えばクロマトグラフィーの分離の手段により、又は当技術分野の当業者に既知の任意の他の手段によりそれらの純粋な形（例えばモノ形だけ）で得られうる。
【００２６】
良い結果が、オクタン酸（Ｃ８）、又はデカン酸（Ｃ１０）、又はドデカン酸（Ｃ１２）、又はテトラデカン酸（Ｃ１４）、又はパルミチン酸（Ｃ１６）、又はオレイン酸（Ｃ１８：１）及びこのナトリウム、カリウム及びカルシウム塩のモノ−及び／又はジ−ラクチレートエステルを主に含む混合物により得られた。
【００２７】
例えば、オクタン酸のモノ−ラクチレートエステルのカルシウム塩は、ＲＣＯがオクタン酸のアシル基であり、ｘが１であり、Ｙがカルシウムでありそしてすなわち該陽イオンの価数を表すｎが２であり、及び最後のパラメータｍが１でありうる（すなわち水酸化カルシウム塩）が好ましくは２である、上記式により表される。
【００２８】
乳酸のエステルも、脂肪酸エステルを形成するために用いられうること、そして次に本発明の抗菌性組成物において用いられうることが観察された。すなわち、脂肪酸、例えばオクタン酸又はドデカン酸など、と、ラクテートエステル、例えばエチルラクテートなど、との脂肪酸エステルは、本発明に従い、１以上の抗菌剤、例えばポリリジン、プロタミン及び／又はこの塩と一緒に、抗菌剤又は抗微生物剤として、よく働く。
【００２９】
ポリリジンは、ε−ポリリジンとして、α−ポリリジンとして又はこれらの混合物として存在しうる。ε−ポリリジンは、それが、他の形のポリリジンよりもグラム陰性菌に対してより高い抗菌活性を有し及びすなわち適用においてより少ない量のこの抗菌剤が必要とされるので好ましい。ε−ポリリジンは、２５〜３５のＬ−リジン残基を含むホモポリマーである。ε−ポリリジンの系統名は、ポリ（イミノ（２−アミノ−１−オキソ−１，６−ヘキサンジイル））である。典型的なε−ポリリジンホモポリマーについての実験式は、約４７００の分子量（３０のＬ−リジン残基）を有するＣ１８０Ｈ３６２Ｎ６０Ｏ３１である。ε−ポリリジンについてのＣｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）番号は、２８２１１−０４−３である。本発明の脂肪酸エステルは、１以上のポリリジン塩とも一緒にされうる。この例は、無機酸、例えば塩化水素酸、硫酸、リン酸など、の塩、又は有機酸、例えば乳酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸など、の塩である。抗菌効果における実質的な差異は無いが、ポリリジンは、塩形におけるポリリジンの限られた溶解性の故に、ときどき好ましくは遊離形で用いられる。
【００３０】
プロタミン（アルギニンに富む小さなタンパク質）もまた、その遊離形において及びその塩形において用いられうる。適当なプロタミンは例えば、プロタミンサルフェート又はプロタミンハイドロクロライドである。
【００３１】
任意的に、本発明の抗菌性組成物はさらに、１以上の金属キレート剤を含みうる。該キレート剤は例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びその塩、ジエチレントリアミン五酢酸及びその塩、種々のホスフェートに基づく化合物、例えばヘキサメタホスフェートナトリウム、酸性ピロホスフェートナトリウム（sodium acid pyrophosphate）及びポリリン酸、オルガノホスフェートキレーティング化合物、例えば：フィチン酸、１，１−ジホスホン酸、シデロフォア及び鉄結合性タンパク質、例えばエンテロバクテリン（enterobacterin）及びラクトフェリンなど、及びヒドロキシカルボン酸及び／又はその塩、例えばコハク酸、アスコルビン酸、グリコール酸、安息香酸、ソルビン酸、オクタン酸、アジピン酸などであるがこれらに限定されない、から選ばれうる。
【００３２】
本発明の抗菌性組成物は好ましくは、乳酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、酒石酸、グルコン酸、プロピオン酸、カプロン酸及びフィチン酸から選ばれる１以上の有機酸及び／又はそれらの塩若しくはエステルを好ましくは含みうる。なぜなら、これらの酸はさらに抗菌活性を増大し、一方で、例えば味、テクスチャー、色及び臭いの点でそれらが適用される製品の品質に悪影響を及ぼさないからである。
【００３３】
さらに好ましい実施態様において、本発明の抗菌性組成物はさらに、グリセロールに基づく脂肪酸エステルを含む。該グリセロール脂肪酸エステル（グリセリドとも言われる）は、グリセロールのモノエステル、ジエステル若しくはトリエステル又はこれらの混合物を含みうる。該グリセリドは、グラム陰性菌に対する抗菌効果をさらに増すことが観察された。
【００３４】
本発明はさらに、グラム陰性菌に対する抗菌剤として、本発明の抗菌性組成物を使用する方法に関する。本発明の抗菌性組成物は特にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種に対する非常に高い（相乗的な）活性を示すことがわかる。従って、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸との脂肪酸エステル（及び／又はこのエステルの塩）は、グラム陰性菌に対して、及び特には、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種に対して、本発明に従う組成物（すなわちポリリジン、プロタミン、この塩及びこの任意の組み合わせを含む）において抗菌剤として有効に用いられうる。
【００３５】
本発明の種々の記載された抗菌性組成物は、低い及び高いｐＨ値の製品、非常に濃厚な及び希釈された製品、例えば工業的分野において（例えば産業的な使用又は家庭用の使用の為の洗剤において）、医薬の分野において（例えば装置の洗浄／殺菌の為の又は医薬組成物の調製又はそれらのパッケージングにおいて）、パーソナルケアにおいて（例えば化粧料、シャンプー、クリーム及びローションの製造において）、飼料産業において（例えば装置の洗浄の為、動物の飼料及び飲料製品の製造、貯蔵、取扱い及び調製において）及び食品及び飲料の産業において使用可能な製品に及ぶ、非常に広くさまざまな製品及び用途に適用可能である。
【００３６】
従って、本発明は、食品製品若しくは飲料品製品、動物の為の飼料製品又は飲料製品、化粧料又はパーソナルケア製品、クリーニング製品又は洗剤の製造、取扱い、貯蔵及び調製において又はそれらの為に、グラム陰性菌、及び特にはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ又はＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒのファミリーからの菌、の存在、増殖又は活動の減少又は防止の為に、本発明の抗菌性組成物を使用する方法に関する。
【００３７】
さらに、本発明は、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸との脂肪酸エステル（及び／又はこのエステルの塩）、特にはオクタン酸（Ｃ８）、又はデカン酸（Ｃ１０）、又はドデカン酸（Ｃ１２）、又はテトラデカン酸（Ｃ１４）、又はパルミチン酸（Ｃ１６）、又はオレイン酸（Ｃ１８：１）のモノ−及び／又はジ−ラクチレートエステル、並びにこれらのナトリウム、カリウム及びカルシウムの塩を、抗菌剤として、特にはグラム陰性菌に対する抗菌剤として、ポリリジン、プロタミン及び／又はこれらの任意の塩又は組み合わせを含む組成物において使用する方法に向けられる。
【００３８】
本発明の抗菌性組成物は特に、食品製品及び飲料品製品の製造、取扱い、適用、貯蔵及び調製において、任意のグラム陰性菌細胞の存在、増殖及び／又は活動を減少し及び／又は防止する為に非常に適している。
【００３９】
それは、食品及び飲料品製品、例えば飲料（例えば炭酸ソフトドリンク、果実／野菜に基づくジュース）、タンパク質高含有製品、例えば食肉製品及び魚製品、ドレッシング及びトッピング、すぐに食べられる（ready-to-eat）製品及びすぐに飲むことができる（ready-to-drink）製品、冷凍された製品及び高温処理された製品など、における適用にとって非常に適当である。
【００４０】
該食品製品又は飲料品製品において適用されるときに、本発明の脂肪酸エステル、例えばラクチレートなど、は、通常は、該製品において、該製品の多くとも１重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１重量％、又は０．０００１重量％〜０．１重量％さえ、及び最も好ましくは０．０００１重量％〜０．０１重量％の量で存在するであろう。
【００４１】
ポリリジン及び／又はプロタミンは、食品製品又は飲料品製品において、該製品の最大で１重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１重量％、又は０．０００１重量％〜０．１重量％さえ、より好ましくは０．０００１重量％〜０．０１重量％、及び最も好ましくは０．０００１重量％〜０．００１重量％の量で存在しうる。
【００４２】
ＥＤＴＡ、オルガノホスフェート及びポリホスフェートは通常、食品製品又は飲料品製品中において、該製品の多くとも１重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１重量％の量で、存在するであろう。
【００４３】
有機酸、例えば乳酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、アスコルビン酸、グリコール酸、安息香酸、クエン酸、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、リンゴ酸及びアジピン酸など、が食品製品又は飲料品製品において、該製品の多くとも１０重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１０重量％、好ましくは０．０００１重量％〜５重量％の量で存在しうる。
【００４４】
上記言及された適用において、本発明の抗菌性組成物は、該最終的な食品製品又は飲料品製品において成分として存在する。
【００４５】
該抗菌性組成物は、該製品の表面に又は該製品の内側に存在しうる。本発明は、食品製品又は飲料品製品におけるグラム陰性菌の存在、増殖又は活動を減少し又は防止する為の方法であって、該食品製品又は飲料品製品の製造、取扱い、貯蔵及び／又は調製の工程を含む、食品処理プロセスにおける１以上の種々の工程の間に該食品製品又は飲料品製品と、本発明の抗菌性組成物とを接触させることを含む上記方法に関する。それは、最終製品工程においてだけでなく、例えば食肉製品の製造における枝肉の殺菌の間若しくは当該殺菌において又は果実及び野菜に適用される洗浄工程においても、適用されうる。該抗菌性組成物は、例えばスプレー、リンス若しくは洗浄溶液として又は種々の食品製品が浸される溶液としてなど、種々の手段により施与され又は導入されうる。本発明の抗菌性組成物は、該食品製品及び／又は飲料品製品へと、注入により導入されてもよい。さらに、該抗菌性組成物は、該食品製品及び飲料品製品をパッケージングする前に、当該パッケージングと同時に、又は当該パッケージングの後に、容器を処理する為に用いられうる。
【００４６】
適用の種類によって及び本発明の抗菌性組成物が最終製品中の活性成分として又は例えば洗浄溶液若しくはスプレー溶液の成分として用いられるかどうかによって、抗菌性組成物の成分は、当技術分野の当業者に明らかであろう濃度及び内部比で変わるであろう。
【００４７】
該抗菌性組成物は、固体又は液体の形で利用可能でありうる。もし該抗菌性組成物が液体の形にあるならば、それは一般的に、水性組成物の形にあり、これは溶液又は分散物でありうる。本発明に従うそのような水性の抗菌性組成物は一般的に、該溶液の合計重量に基づき、０．０００１重量％〜最大で４０重量％、より好ましくは０．１重量％〜３５重量％、及び最も好ましくは１〜２５重量％の本発明の抗菌剤、例えばポリリジンなど、と、０．０００１重量％〜最大で４５重量％、より好ましくは１〜４０重量％、及び最も好ましくは５〜３５重量％の本発明に従う脂肪酸エステル、例えばラクチレートなど、とを含む。該抗菌性組成物は、０〜４５重量％、より好ましくは０〜３５重量％、の量のグリセリド、及びさらに０〜４５重量％、及びより好ましくは０〜３０重量％の有機酸を、さらに含みうる。
【００４８】
本発明に従う抗菌性組成物の成分は、キャリアにより該液体の抗菌性組成物中に導入されうる。当技術分野の当業者は、どのタイプのキャリアが用いられうるかを知っている。種々のよく知られたキャリアのなかで、ポリエチレングリコール及び／又はラクテートがキャリアとして非常に良く働くことが分かった。該キャリアは、約５０〜９８重量％の濃度で存在しうる。さらに、当技術分野の当業者に既知の種々の乳化剤が添加されうる。好ましくは、乳化剤、例えばポリソルベート（例えばポリソルベート６０又は８０）及びレシチンが、１００％脂肪酸誘導体、例えばグリセリド及び／又はラクチレートなど、に基づき、例えば０．１〜２５％、より好ましくは１〜１０％及び最も好ましくは２〜４％の濃度で適用される。
【００４９】
もし該抗菌性組成物が固体の形にあるならば、それは一般に、適切な成分の粒子を含む粉の形にあるであろう。固体の形にある該抗菌性組成物は一般に、該粉の合計重量に基づき、０．０００１重量％〜最大で４０重量％、より好ましくは０．１重量％〜３５重量％、及び最も好ましくは１〜２５重量％の本発明の抗菌剤、例えばポリリジンなど、と、０．０００１重量％〜最大で４５重量％、より好ましくは１〜４０重量％、及び最も好ましくは５〜３５重量％の本発明に従う脂肪酸エステル誘導体、例えばラクチレートなど、とを含む。
【００５０】
キャリアが使用されうる。非常に適当なキャリアはシリカ及び／又はマルトデキストリンであり、これらは最大で５０〜９８重量％の濃度で存在する。
【００５１】
該抗菌性組成物は、０〜４５重量％及びより好ましくは０〜３５重量％の量でグリセリドと、さらに０〜４５重量％及びより好ましくは０〜３０重量％の有機酸とをさらに含みうる。
【００５２】
以下の非限定的な実施例がさらに本発明を説明する。
【実施例１】
【００５３】
以下の培養物が研究において用いられた：Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ 血清型Ｏ１５７：Ｈ７（ＡＴＣＣ ７００７２８）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（ＡＴＣＣ １３３１１）及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓ（ＡＴＣＣ １３０７６）。全ての培養物は、１０ｍｌのブレインハートインフュージン培地を含むスクリューキャップチューブ中に毎日移された。培養物は、攪拌無しで、３０℃でインキュベートされた。ブレインハートインフュージョン培地は、ラクチレート及びポリリジンの増加する量とともに調製された。カプリリック（Ｃ８）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．０５％ステップで０から０．４５％までのとおりであり、カプリック（Ｃ１０）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．０１％ステップで０から０．０９％までのとおりであり、ラウリック（Ｃ１２）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．００１％ステップで０から０．００９までのとおりであり、そしてテトラデカノイック（Ｃ１４）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．００１％ステップで０から０．００９％までのとおりであった。ラクチレートはポリリジンと一緒にされた。該ポリリジンの濃度範囲は、１０の０．００７５％ステップで０から０．０６７５％までのとおりであった。これは、１００の異なる培地を結果した。該培地のｐＨは、１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨにより６．１〜６．２に調節された。培地は、１０ｍｌの量で調製され、そしてろ過により滅菌された。３００μｌのそれぞれの培地が、滅菌したＢｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）ハニカム１００ウェルプレートのパネルに移された。ウェルプレートが、ブレインハートインフュージョン培地中で一晩増殖された培養物の５μｌにより、滅菌した５μｌのリピーティングディスペンサーを用いて植菌された。増殖速度は、垂直測光（vertical photometry）により濁度の発達を動的に測定するＢｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）Ｃにより決定された。該プレートは３７℃で１６〜２４時間インキュベートされ、該培養物の光学密度は、ワイドバンドフィルターを用いて４２０−５８０ｎｍで３０分毎に測定された。Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）は、設定時間間隔で、該培養物の光学密度を測定する。これらのデータから、Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）は、最大の比増殖速度を計算する。さらなるデータ処理の目的は、２つのアミノ酸が互いに独立して働くかどうか又はそれらがそれらの抑制作用において互いに刺激するか（相乗作用）若しくは抑制効果を互いに打ち消すか（拮抗作用）どうかを確認することである。或る化合物が生物に対して効果を有さない場合、この生物の比増殖速度（μ）は、例えばモノーの方程式により、増殖限定性基質濃度（ｓ）の関数（ｆ）として表されうる、これはμ＝μｍａｘ・ｓ／（Ｋｓ＋ｓ）と読め、ここでμｍａｘは、最大比増殖速度を表し、ｓは培地中の増殖限定性基質の不変濃度（standing concentration）を表し、そしてＫｓはμ＝０．５μｍａｘであるところの基質濃度を表す。しかしながら、インヒビターＰの存在が細胞増殖に影響する場合、μについての関数ｆは修正されなければならない、すなわちμ＝ｆ（ｓ，ｐ）、ここでｐはインヒビターＰの濃度を表す。バクテリアの増殖抑制速度論のたくさんの研究が、多くのインヒビターが非競合的インヒビターとして振舞うことを示している。これは、最大比増殖速度（μｍａｘ）の値だけが影響され、そして、親和性（Ｋｓ）は影響されないことを暗示する。それ故に、インヒビターの存在下における比増殖速度は、
、ここでμiはインヒビターＰの存在下における最大比増殖速度である、として記載されうる。μiとμｍａｘとの間の関係及びインヒビターＰの濃度は、ロジスティック用量応答方程式を用いて記載され、これは
と読める（Jungbauer, A. (2001). The logistic dose response function: a robust fitting function for transition phenomena in life sciences. J. Clinical Ligand Assay 24: 270 - 274）。この方程式において、ｐはインヒビターＰの濃度を表し、そして、ｐ０．５は、μi＝０．５μｍａｘであるところのＰの濃度を表す；μｍａｘは、インヒビターＰの不在下における比増殖速度である最大比増殖速度であり、ｂは次元の無い量であり、これはμiとｐとの間の関係を決定する。モノー方程式及びロジスティック用量応答方程式とを併せると、
と記載されることができる。ｓが通常、Ｋｓよりも何倍も大きいバッチカルチャーにおいて、この方程式は
に変形される。同じ条件下で増殖された異なる生物を比較する場合、又は異なる条件下で増殖された同じ生物を比較する場合、比較の基準として絶対的増殖速度よりもむしろ、相対的増殖速度を用いることがより意味がある。相対的増殖速度（Ｏ）は、最大増殖速度（μｍａｘ）に対する増殖速度（μ）の比であり、すなわちＯ＝μ／μｍａｘである。μ及びμｍａｘが（時間）−１の次元を有する一方で、それらの比Ｏは次元無し、すなわち純粋な数であると見られることができる。同様に、我々は、相対的インヒビター濃度εをｐ／ｐ０．５として定義することができる。該変形されたモノー及びロジスティック用量応答方程式は今、
として記載されうる。２つのインヒビターＸ及びＹについて、例えばＯについての以下の２つの式が定義されうる：
。Ｏｘ及びＯｙは、標的生物の増殖速度に対するＸ又はＹのいずれかの抑制効果を試験することにより実験的に評価されうる。Ｏｘ及びＯｙについての該評価された関数を知ることにより、理論的な独立の効果がＯｘ・Ｏｙとして定義される。該相対的増殖速度に対するＸ及びＹの組み合わせの実験的に観察された効果はＯｘｙとして定義される。Ｘ及びＹが或る生物に対して互いに独立に作用するという仮説は、数学的に
に言い換えられる。この仮説の棄却は、Ｘ及びＹの組み合わせられた効果が、独立の効果でなく、相乗的又は拮抗的であることをほのめかす。インヒビターＸ及びＹが該標的生物に対して相乗的に作用する場合、
（しかし＞０）である。インヒビターＸ及びＹの組み合わされた効果が拮抗的である場合、
である。
【００５４】
相乗作用、独立の効果、及び拮抗作用は、Ｏｘｙ対Ｏｘ・Ｏｙのプロットにおいて可視化されうる。これは図１〜８において例示され、ここでＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（ＡＴＣＣ １３３１１）及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓ（ＡＴＣＣ １３０７６）についてのＯＣｘＬ ｐＬｙｓ（ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下において実験的に観察された相対的増殖速度）対ＯＣｘＬ・ＯｐＬｙｓ（ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下において予測された相対的増殖速度）の種々のプロットが与えられ、ラクチレートとポリリジンとの間の、抑制における相乗作用を示す。これらのグラフ中の実線は、該実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣｘＬ ｐＬｙｓ）が該予測された相対的増殖速度（ＯＣｘＬ・ＯｐＬｙｓ）に等しく且つ該ラクチレート及びポリリジンが独立的なインヒビターとして作用するところの線を表す。
【００５５】
図１〜８は、Ｏｘｙ／Ｏｘ・Ｏｙ＜１及び＞０である（実線の下のドットにより表される）ので、試験された種々の組み合わせにおけるポリリジン及びラクチレートが、該標的生物に対して相乗的に作用することを実証する。
【００５６】
表１に、相乗作用のさらなる例、例えば０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．４５％（ｗ／ｗ）Ｃ８−ラクチレートの間の、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．０９％（ｗ／ｗ）Ｃ１０−ラクチレートの間の、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１２−ラクチレートの間の、又は０．０２２５（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１４−ラクチレートの間の相乗作用など、が与えられる。
【００５７】
該表から観察されうるとおり、０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．４５％（ｗ／ｗ）Ｃ８−ラクチレート、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．０９％（ｗ／ｗ）Ｃ１０−ラクチレート、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１２−ラクチレート、又は０．０２２５（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１４−ラクチレートを含む培地中における、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＡＴＣＣ ８７３９）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ血清型Ｏ１５７：Ｈ７（ＡＴＣＣ ７００７２８）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（ＡＴＣＣ １３３１１）又はＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓ（ＡＴＣＣ １３０７６）の相対的増殖速度は、ポリリジン又は該ラクチレートエステルの１つを含む培地中におけるこれらの生物の相対的増殖速度に基づき予測されうるものよりも低い。
【００５８】
【表１】
【実施例２】
【００５９】
汚染されたチキンフィレ及び乳における抗微生物効果
【００６０】
材料及び方法
【００６１】
培養及び培養条件
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＡＴＣＣ １３３１１及びＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７ ＡＴＣＣ ７００７２８が、ブレインハートインフュージョン培地を含む滅菌されたスクリューキャップチューブ中で、１８〜２４時間、３０℃で増殖された。
【００６２】
チキンフィレの調製
チキンフィレ（１５０〜２００ｇ）が切り取られ、真空パックされ、そして４〜７℃で保蔵された。フィレは次にガンマ線照射により滅菌された（平均放射線量：１２キログレイ）。
【００６３】
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍによるチキンフィレの接種
ブレインハートインフュージョン培地中のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの一晩培養物の１ｍｌが、滅菌された０．８％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ及び０．１％（ｗ／ｖ）ペプトンにより１０００倍に希釈された。この希釈された培養物の０．５ｍｌが、該フィレの一面に移された。該接種材料が、該フィレの全部の表面に穏やかにこすりつけることにより分布された。これが、該フィレの他方の面についても繰り返された。接種は６℃で実施された。接種されたフィレは、６℃で６０〜１２０分間休まされて、細胞の付着を許した。
【００６４】
チキンフィレの汚染除去
チキンフィレは、適切な処方を有する１ｌの溶液中に手短に浸され且つ完全に沈められ、そして次に、適切な処方の５ｍｌを含む、４００ｍｌのＢａｇｆｉｌｔｅｒ（商標）ラテラルフィルターバッグ（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｔ Ｎｏｍ、フランス）に移された。バッグは真空シールされ、そして、さらなる分析まで、最大で７日間、１２℃でインキュベートされた。時間ゼロの試料が、浸漬後３０分以内にプレートされた。
【００６５】
チキンフィレの微生物分析
チキンフィレ上に生存しているＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍが以下のとおりに計数された：封されたバッグが開けられ、そしてこれに、合計重量の２倍の滅菌された希釈流体（８．５％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ及び０．１％（ｗ／ｖ）細菌学的ペプトン（bacteriological peptone））が添加された。同じフィレが、１分間、Ｂａｇｍｉｘｅｒ（商標）４００パドルラボブレンダー（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｔ Ｎｏｍ、フランス）中で、ホモジナイズされた。５０μｌのホモジネート又はその希釈物が、Ｅｄｄｙｊｅｔタイプ１．２３スパイラルプレーター（ＩＵＬ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、バルセロナ、スペイン）を用いて、セフスロジン、ノボビオシンの補充（ＳＲ０１９４）（Ｏｘｏｉｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を有する同じＳａｌｍｏｎｅｌｌａ発色アガープレート（ＣＭ１００７）上にプレートされた。プレートは、３０℃で２４〜４８時間インキュベートされ、そして次に計数された。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａの数は、１ｍｌのホモジネート当たりのｌｏｇ１０コロニー形成ユニットとして表された。
【００６６】
抗微生物性処方物により処理された乳の接種
滅菌された低脂肪乳が地域のスーパーマーケットから購入され、そして１００ｍｌの量が、一連の滅菌スクリューキャップボトルに移された。ε−ポリリジン、オクタノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ８−ラクチレート）及びデカノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ１０−ラクチレート）が、表２に示されるとおりの濃度に添加された。種々の乳調製物が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７の一晩培養物により接種された。開始時の細胞密度はｌｏｇ１０ ２．５〜３．０であった。
【００６７】
乳培養物の微生物分析
生存しているＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７が以下のとおりに計数された：乳培養物又はその希釈物の同じ５０μｌ試料が、Ｅｄｄｙｊｅｔタイプ１．２３スパイラルプレーター（ＩＵＬ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、バルセロナ、スペイン）を用いて、同じＶｉｏｌｅｔ Ｒｅｄ Ｂｉｌｅ Ｇｌｕｃｏｓｅ（ＶＲＢＧ）アガープレート（ＣＭ０４８５ Ｏｘｏｉｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）上にプレートされた。プレートは、２４〜４８時間、３０℃でインキュベートされ、そして次に計数された。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉの数は、１ｍｌのホモジネート当たりのｌｏｇ１０コロニー形成ユニットとして表された。
【００６８】
抗微生物性処方物の調製
研究された処方物の組成が表２に示される。ε−ポリリジン及びラクチレートが脱塩水中に溶解され、そして２０分間、１２０℃で滅菌された。
【００６９】
【表２】
【００７０】
化学物質
ε−ポリリジンは、Ｃｈｉｓｓｏ Ａｍｅｒｉｃａ Ｉｎｃ（ニューヨーク、米国）から購入された。オクタノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ８−ラクチレート）及びデカノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ１０ ラクチレート）は、Ｃａｒａｖａｎ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ（Ｌｅｎｅｘａ、カンザス、ＵＳＡ）から購入された。
【００７１】
チキンフィレの汚染除去の結果
チキンフィレ上に存在するＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＡＴＣＣ １３３１１の、ε−ポリリジンと中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせへの曝露は、約９０％だけ、生存細胞数のほぼ即時の減少を結果した（表３）。１２℃での１日後、数における減少は、４ｌｏｇ１０より大きい。該試験された組み合わせによる増殖抑制は永続的でない；４日後に数は増加したが、接種後７日後で該処方物と該ブランク処方物との間の差異は２ｌｏｇ１０以上であり、そしてすなわち、本発明の組成物は抗微生物活性をなお発揮する。
【００７２】
表３
１２℃でのチキンフィレ上のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍに対する、ε−ポリリジン（ε−ＰＬ）と中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせの効果；ｌｏｇ１０コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／ｍｌで表される
【表３】
【００７３】
個々には、該ラクチレートは、表４において観察されうるとおり、ε−ポリリジンの不在下において、殺傷する効果又は増殖を抑制する効果を何も示さなかった。ε−ポリリジンそれ自体は細胞数を減少するが、その効果は、脂肪酸誘導体の１つと組み合わされた場合よりも小さかった。これは特に、インキュベーションの１日後に明らかであった。該組み合わせについての数の減少は４ｌｏｇ１０から５ｌｏｇ１０に及んだが（表３）、単独添加としてのε−ポリリジンについての減少は２ｌｏｇ１０だけであった（表４）。これは、ε−ポリリジンと該脂肪酸誘導体との間の抑制における相乗作用の形があることを示唆する。これは、これらの組み合わせの効果が培養物中において研究されたｉｎ ｖｉｔｒｏ研究により確認される（実験１）。
【００７４】
表４
１２℃でのチキンフィレ上のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍに対する、ε−ポリリジン並びに中鎖脂肪酸エステルのＣ８及びＣ１０乳酸エステルの個々の効果；ｌｏｇ１０コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／ｍｌで表される
【表４】
【００７５】
乳中のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７の抑制の結果
ε−ポリリジンと中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせによる強力な増殖抑制も、無脂肪乳において増殖するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７について観察された（表５）。
【００７６】
表５
１２℃での乳中におけるＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７に対する、ε−ポリリジン（ε−ＰＬ）と中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせの効果；ｌｏｇ１０コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／ｍｌで表される（ＮＤ：データ無し）
【表５】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルに基づく抗菌性組成物、及び種々の製品及び適用におけるグラム陰性菌に対する抗菌剤としてのその使用方法に関する。本発明はさらに、該抗菌剤を含む製品及び特には食品製品に関する。
【０００２】
本発明の脂肪酸エステルは、例えば乳酸、クエン酸、リンゴ酸、グルコン酸及び酒石酸などのヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルを含み、ここで該ヒドロキシカルボン酸は、塩又はエステルの形にもありうる。さらに、該ヒドロキシカルボン酸は、例えばラクチレートの場合などにおいて、１以上の重合した酸モノマーを含みうる。
【背景技術】
【０００３】
ヒドロキシカルボン酸のこれらの脂肪酸エステルの大部分は、乳化剤として適用される。例えば、乳酸の脂肪酸エステル、ラクチレート及びアシルラクチレートとも呼ばれる、はそれらの乳化効果についてよく知られている。それらは一般に、ベーカリー産業において適用される。
【０００４】
関心のあるラクチレートのいくつかが、米国特許第３，２７５，５０３号明細書、欧州特許出願公開第０５７２２７１号明細書及び欧州特許出願公開第１０００５４２号明細書に記載されており、そして、一般式：
【化１】
により表され、ここで、ＲＣＯは、４〜１２の炭素原子を有する脂肪酸のアシル基であり、Ｙは、水素、アルカリ金属、アルカリ土類金属、亜鉛、銀、アンモニウム又は、１以上のＣ１〜Ｃ３アルキル又はヒドロキシアルキル基を有する置換アンモニウムから選ばれる陽イオンであり、ｎは該陽イオンの価数を表し且つｍは１〜ｎの整数であり、ｘは１〜６、好ましくは１〜３、の数である。
【０００５】
米国特許第３，２７５，５０３号明細書に記載されたラクチレートは、８〜１２の炭素原子を有するアシル基ＲＣＯを有し、そして、例えばＲｈｉｚｏｐｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ及びＳａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓに由来する酵母及び菌類による白カビ及びカビ発達の成長を抑制すると記載されている。問題の該ラクチレートは、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ及びＢａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｕｓ（両方ともグラム陽性菌である）に対するいくらかの抗菌活性も示す。
【０００６】
欧州特許出願公開第０５７２２７１号明細書に記載されたラクチレートは、４〜７の炭素原子を有するアシル基ＲＣＯを有し、そして、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｅｐａｃｉａ（グラム陰性菌である）に対するいくらかの抗菌活性を有する。
【０００７】
欧州特許出願公開第１０００５４２号明細書は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ（グラム陽性菌である）に対する、及びＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ（真菌である）に対するいくらかの抗菌活性を有するカプリル−ラクチル−ラクチレートのナトリウム塩を記載する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、ラクチレート及びより特には８〜１２の炭素原子を有するアシル基ＲＣＯを有する上記式のラクチレートは、グラム陰性菌、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒなど、に対して非常に有効であると知られていない。それ故に、それらは、抗菌剤として用いられない。実際に、それらの規制状況は、乳化剤として用いられているそれらの規制だけである。
【０００９】
同じことが、他のヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステル、例えばクエン酸、リンゴ酸及び酒石酸の脂肪酸エステルなど、に当てはまる。これらのエステルは主に種々の種類の製品において乳化剤として用いられ、そして抗菌の目的の為に用いられていない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、グラム陰性菌に対する能力の上記言及された欠如を打破する為の解決策を提供する。本発明は、上記で記載されたとおりのヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルのグループを、グラム陰性菌に対して有意により活性にする為の手段を提供し、それにより、それらを、広くさまざまな食品製品、飲料製品及び他の製品における、例えば餌用途における、洗剤及び化粧料製品におけるなど、の適用の為の抗菌剤として非常に有用なものにする。
【００１１】
ここに、本発明は、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸並びに／又は該ヒドロキシカルボン酸の塩及び／若しくはエステルとの脂肪酸エステル、及びポリリジン、プロタミン及びそれらの塩から選ばれる１以上の抗菌剤の組み合わせを含む抗菌性組成物に向けられる。
【発明の効果】
【００１２】
上記言及された抗菌剤は、ヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルの活性を単に増大せず（該増大する効果は該脂肪酸エステルと該抗菌剤との個々の活性の合計である）、本発明の該抗菌剤及び該脂肪酸は相乗的に働き、該抗菌性組成物の個々の成分の活性の合計よりも有意に高い抗菌活性を結果する。この相乗作用に起因して、本発明の該脂肪酸エステルは、ポリリジン、プロタミン、それらの塩又はこれの任意の組み合わせを含む組成物において、抗微生物剤として非常に有効に用いられうる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図２】Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ・ｐＬｙｓ）対Ｃ８−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ８Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図３】Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図４】Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１０−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１０Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図５】Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図６】Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ．ｐＬｙｓ）対Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図７】Ｃ１４−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１４Ｌ・ｐＬｙｓ）対Ｃ１４−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１４Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【図８】Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下におけるＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓの実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ ｐＬｙｓ）対Ｃ１２−ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下における予測された相対的増殖速度（ＯＣ１２Ｌ・ＯｐＬｙｓ）のプロットを表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
ポリリジンは、グラム陰性菌に対して抗菌活性を発揮すると知られている。α−ポリリジン及びε−ポリリジンの両方が、抗菌活性を有するが、後者は、Ｓｈｉｍａら（Nov. 1984）により記載されるとおり、有意により大きな程度で抗菌活性を有する。該文献は、ε−ポリリジンが、グラム陽性菌及びグラム陰性菌、例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなど、に対して、１ｍｌ当たり約１〜８μｇの濃度で有効に用いられうることを記載する。
【００１５】
Ｈｉｒａｋｉら（２０００）は、ε−ポリリジンと、抗菌剤、例えばグリシン、酢酸／酢、エタノール又はチアミンラウリルスルホネートなど、との組み合わせを記載する。しかしながら、ポリリジンが、グラム陰性菌に対する抗菌剤として有効であるヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルと組み合わせられるところの組成物は言及されていない。
【００１６】
特開２０００−２７０８２１号公報、特開平０７−１３５９４３号公報、特開平０４−８２７３号公報は、グリセロール脂肪酸エステル、プロタミン、エタノール、グリシン及び／又はヒドロキシカルボン酸及びそれらの塩と一緒にε−ポリリジンを含む組成物を記載する。上記言及された組成物は、酵母、真菌及び腐敗細菌又は食品損傷細菌、例えばＣａｎｄｉｄａ及びＬｕｃｏｎｏｓｔｏｃなど、に対して有効であると記載されている。しかしながら、ポリリジン及び／又はこの塩とヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルとの特定の組み合わせは開示されていない。
【００１７】
プロタミンもまた、一般に適用される抗菌剤である。多くの日本の特許出願が、プロタミンと、種々の他の抗菌性成分、例えばグリセリド、ヒドロキシカルボン酸及び／又はそれらの塩、アミノ酸、ポリリジン、エタノールなど、との組み合わせを含む抗菌性組成物を記載する。しかしながら、プロタミン及び／又はこの塩とヒドロキシカルボン酸の脂肪酸エステルとの特定の組み合わせは言及されていない。
【００１８】
すなわち、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸及び／又はその塩との脂肪酸エステルと、遊離形及び／又は塩の形にあるポリリジン又はプロタミン並びに／又はこの任意の組み合わせとの上記言及された組み合わせは、以前に記載されていない。グラム陰性菌に対する該組み合わせの相乗的抗菌活性も、以前に認められていない。本発明は、ポリリジン（及び／又はこの塩）、プロタミン（及び／又はこの塩）又はこれらの任意の組み合わせを含む組成物中において、抗微生物剤として、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸との該脂肪酸エステルを使用する方法に関する。
【００１９】
本発明の抗菌性組成物中において用いられるときの該脂肪酸エステルは、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸及び／又はこの塩とのエステルである。当技術分野の当業者が知るとおり、そのようなエステルは、例えばエステル化又は酵素的処理を介して得られうる。一般に知られているとおり、脂肪酸エステルの製造の為の大抵の処理は、脂肪酸エステルの混合物を結果し、該混合物は例えば種々の脂肪酸尾部又は種々のエステル尾部の脂肪酸エステルの混合物である。純粋な形にある特定の脂肪酸は、当技術分野の当業者によく知られている種々の手段により、この混合物から得られうる。
【００２０】
該脂肪酸反応物質は、４〜１８、好ましくは８〜１８の炭素原子を含む飽和又は不飽和脂肪酸でありうる。この非限定的な例は、酪酸（すなわちブタン酸（Ｃ４））、カプロン酸（すなわちヘキサン酸（Ｃ６））、ミリスチン酸（すなわちテトラデカン酸（Ｃ１４））、ステアリン酸（すなわちオクタデカン酸（Ｃ１８））、ミリストレイン酸（Ｃ１４）及び／又はオレイン酸（Ｃ１８）である。
【００２１】
該ヒドロキシカルボン酸は、ヒドロキシカルボン酸の１つのモノマー又は重合化結合により互いに連結されたヒドロキシカルボン酸のいくつかのモノマーを含みうる。ヒドロキシカルボン酸の該モノマーは、１〜６の炭素原子を含んでよく、例えば乳酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸及び酒石酸のモノマーなどでありうる。さらに、該ヒドロキシカルボン酸の該塩及び／又はエステルもまた、本発明に従う抗菌性組成物にとって非常に適当である。
【００２２】
本発明の好ましい実施態様において、該抗菌性組成物は、乳酸及び／又は乳酸の塩の脂肪酸エステル、ラクチレートとも言われる、を含む。
【００２３】
本発明のラクチレートは、以下の式：
【化２】
を有し、
ここでＲＣＯは４〜１８の炭素原子、好ましくは８〜１８の炭素原子、を有する脂肪酸のアシル基であり、Ｙは水素、アルカリ金属、アルカリ土類金属、亜鉛、鉄、アンモニウム及び、１以上のＣ１〜Ｃ３アルキル又はヒドロキシアルキルの基を有する置換アンモニウムから選ばれる陽イオンであり；ｎは該陽イオンの価数を表し且つｍは１〜ｎの整数であり；ｘはモノマー単位の数を表し且つ１〜６、好ましくは１〜３の値を有する。
【００２４】
ｘが例えば１であるところの成分は、モノラクチレート（すなわち１つだけの乳酸分子を含む）と言われ、そしてｘが２であるところの成分は、ジラクチレート（２つの重合化した／エステル化した乳酸分子を含む）と呼ばれる。該ラクチレート成分はしばしば、例えば、それらが調製される方法に起因して、大部分がモノラクチレートの混合物の、及び、さらにジラクチレートを含む混合物として得られる。より多く重合化されたラクチレートも該混合物中に存在することは、非常によく可能でありうる。上記で記載された該パラメータｘ、ｍ及びｎは、すなわち、平均の数を示す。
【００２５】
該ラクチレートは、例えばクロマトグラフィーの分離の手段により、又は当技術分野の当業者に既知の任意の他の手段によりそれらの純粋な形（例えばモノ形だけ）で得られうる。
【００２６】
良い結果が、オクタン酸（Ｃ８）、又はデカン酸（Ｃ１０）、又はドデカン酸（Ｃ１２）、又はテトラデカン酸（Ｃ１４）、又はパルミチン酸（Ｃ１６）、又はオレイン酸（Ｃ１８：１）及びこのナトリウム、カリウム及びカルシウム塩のモノ−及び／又はジ−ラクチレートエステルを主に含む混合物により得られた。
【００２７】
例えば、オクタン酸のモノ−ラクチレートエステルのカルシウム塩は、ＲＣＯがオクタン酸のアシル基であり、ｘが１であり、Ｙがカルシウムでありそしてすなわち該陽イオンの価数を表すｎが２であり、及び最後のパラメータｍが１でありうる（すなわち水酸化カルシウム塩）が好ましくは２である、上記式により表される。
【００２８】
乳酸のエステルも、脂肪酸エステルを形成するために用いられうること、そして次に本発明の抗菌性組成物において用いられうることが観察された。すなわち、脂肪酸、例えばオクタン酸又はドデカン酸など、と、ラクテートエステル、例えばエチルラクテートなど、との脂肪酸エステルは、本発明に従い、１以上の抗菌剤、例えばポリリジン、プロタミン及び／又はこの塩と一緒に、抗菌剤又は抗微生物剤として、よく働く。
【００２９】
ポリリジンは、ε−ポリリジンとして、α−ポリリジンとして又はこれらの混合物として存在しうる。ε−ポリリジンは、それが、他の形のポリリジンよりもグラム陰性菌に対してより高い抗菌活性を有し及びすなわち適用においてより少ない量のこの抗菌剤が必要とされるので好ましい。ε−ポリリジンは、２５〜３５のＬ−リジン残基を含むホモポリマーである。ε−ポリリジンの系統名は、ポリ（イミノ（２−アミノ−１−オキソ−１，６−ヘキサンジイル））である。典型的なε−ポリリジンホモポリマーについての実験式は、約４７００の分子量（３０のＬ−リジン残基）を有するＣ１８０Ｈ３６２Ｎ６０Ｏ３１である。ε−ポリリジンについてのＣｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）番号は、２８２１１−０４−３である。本発明の脂肪酸エステルは、１以上のポリリジン塩とも一緒にされうる。この例は、無機酸、例えば塩化水素酸、硫酸、リン酸など、の塩、又は有機酸、例えば乳酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸など、の塩である。抗菌効果における実質的な差異は無いが、ポリリジンは、塩形におけるポリリジンの限られた溶解性の故に、ときどき好ましくは遊離形で用いられる。
【００３０】
プロタミン（アルギニンに富む小さなタンパク質）もまた、その遊離形において及びその塩形において用いられうる。適当なプロタミンは例えば、プロタミンサルフェート又はプロタミンハイドロクロライドである。
【００３１】
任意的に、本発明の抗菌性組成物はさらに、１以上の金属キレート剤を含みうる。該キレート剤は例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及びその塩、ジエチレントリアミン五酢酸及びその塩、種々のホスフェートに基づく化合物、例えばヘキサメタホスフェートナトリウム、酸性ピロホスフェートナトリウム（sodium acid pyrophosphate）及びポリリン酸、オルガノホスフェートキレーティング化合物、例えば：フィチン酸、１，１−ジホスホン酸、シデロフォア及び鉄結合性タンパク質、例えばエンテロバクテリン（enterobacterin）及びラクトフェリンなど、及びヒドロキシカルボン酸及び／又はその塩、例えばコハク酸、アスコルビン酸、グリコール酸、安息香酸、ソルビン酸、オクタン酸、アジピン酸などであるがこれらに限定されない、から選ばれうる。
【００３２】
本発明の抗菌性組成物は好ましくは、乳酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、酒石酸、グルコン酸、プロピオン酸、カプロン酸及びフィチン酸から選ばれる１以上の有機酸及び／又はそれらの塩若しくはエステルを好ましくは含みうる。なぜなら、これらの酸はさらに抗菌活性を増大し、一方で、例えば味、テクスチャー、色及び臭いの点でそれらが適用される製品の品質に悪影響を及ぼさないからである。
【００３３】
さらに好ましい実施態様において、本発明の抗菌性組成物はさらに、グリセロールに基づく脂肪酸エステルを含む。該グリセロール脂肪酸エステル（グリセリドとも言われる）は、グリセロールのモノエステル、ジエステル若しくはトリエステル又はこれらの混合物を含みうる。該グリセリドは、グラム陰性菌に対する抗菌効果をさらに増すことが観察された。
【００３４】
本発明はさらに、グラム陰性菌に対する抗菌剤として、本発明の抗菌性組成物を使用する方法に関する。本発明の抗菌性組成物は特にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種に対する非常に高い（相乗的な）活性を示すことがわかる。従って、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸との脂肪酸エステル（及び／又はこのエステルの塩）は、グラム陰性菌に対して、及び特には、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種及びＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種に対して、本発明に従う組成物（すなわちポリリジン、プロタミン、この塩及びこの任意の組み合わせを含む）において抗菌剤として有効に用いられうる。
【００３５】
本発明の種々の記載された抗菌性組成物は、低い及び高いｐＨ値の製品、非常に濃厚な及び希釈された製品、例えば工業的分野において（例えば産業的な使用又は家庭用の使用の為の洗剤において）、医薬の分野において（例えば装置の洗浄／殺菌の為の又は医薬組成物の調製又はそれらのパッケージングにおいて）、パーソナルケアにおいて（例えば化粧料、シャンプー、クリーム及びローションの製造において）、飼料産業において（例えば装置の洗浄の為、動物の飼料及び飲料製品の製造、貯蔵、取扱い及び調製において）及び食品及び飲料の産業において使用可能な製品に及ぶ、非常に広くさまざまな製品及び用途に適用可能である。
【００３６】
従って、本発明は、食品製品若しくは飲料品製品、動物の為の飼料製品又は飲料製品、化粧料又はパーソナルケア製品、クリーニング製品又は洗剤の製造、取扱い、貯蔵及び調製において又はそれらの為に、グラム陰性菌、及び特にはＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ又はＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒのファミリーからの菌、の存在、増殖又は活動の減少又は防止の為に、本発明の抗菌性組成物を使用する方法に関する。
【００３７】
さらに、本発明は、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸との脂肪酸エステル（及び／又はこのエステルの塩）、特にはオクタン酸（Ｃ８）、又はデカン酸（Ｃ１０）、又はドデカン酸（Ｃ１２）、又はテトラデカン酸（Ｃ１４）、又はパルミチン酸（Ｃ１６）、又はオレイン酸（Ｃ１８：１）のモノ−及び／又はジ−ラクチレートエステル、並びにこれらのナトリウム、カリウム及びカルシウムの塩を、抗菌剤として、特にはグラム陰性菌に対する抗菌剤として、ポリリジン、プロタミン及び／又はこれらの任意の塩又は組み合わせを含む組成物において使用する方法に向けられる。
【００３８】
本発明の抗菌性組成物は特に、食品製品及び飲料品製品の製造、取扱い、適用、貯蔵及び調製において、任意のグラム陰性菌細胞の存在、増殖及び／又は活動を減少し及び／又は防止する為に非常に適している。
【００３９】
それは、食品及び飲料品製品、例えば飲料（例えば炭酸ソフトドリンク、果実／野菜に基づくジュース）、タンパク質高含有製品、例えば食肉製品及び魚製品、ドレッシング及びトッピング、すぐに食べられる（ready-to-eat）製品及びすぐに飲むことができる（ready-to-drink）製品、冷凍された製品及び高温処理された製品など、における適用にとって非常に適当である。
【００４０】
該食品製品又は飲料品製品において適用されるときに、本発明の脂肪酸エステル、例えばラクチレートなど、は、通常は、該製品において、該製品の多くとも１重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１重量％、又は０．０００１重量％〜０．１重量％さえ、及び最も好ましくは０．０００１重量％〜０．０１重量％の量で存在するであろう。
【００４１】
ポリリジン及び／又はプロタミンは、食品製品又は飲料品製品において、該製品の最大で１重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１重量％、又は０．０００１重量％〜０．１重量％さえ、より好ましくは０．０００１重量％〜０．０１重量％、及び最も好ましくは０．０００１重量％〜０．００１重量％の量で存在しうる。
【００４２】
ＥＤＴＡ、オルガノホスフェート及びポリホスフェートは通常、食品製品又は飲料品製品中において、該製品の多くとも１重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１重量％の量で、存在するであろう。
【００４３】
有機酸、例えば乳酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、アスコルビン酸、グリコール酸、安息香酸、クエン酸、酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、リンゴ酸及びアジピン酸など、が食品製品又は飲料品製品において、該製品の多くとも１０重量％、好ましくは０．０００１重量％〜１０重量％、好ましくは０．０００１重量％〜５重量％の量で存在しうる。
【００４４】
上記言及された適用において、本発明の抗菌性組成物は、該最終的な食品製品又は飲料品製品において成分として存在する。
【００４５】
該抗菌性組成物は、該製品の表面に又は該製品の内側に存在しうる。本発明は、食品製品又は飲料品製品におけるグラム陰性菌の存在、増殖又は活動を減少し又は防止する為の方法であって、該食品製品又は飲料品製品の製造、取扱い、貯蔵及び／又は調製の工程を含む、食品処理プロセスにおける１以上の種々の工程の間に該食品製品又は飲料品製品と、本発明の抗菌性組成物とを接触させることを含む上記方法に関する。それは、最終製品工程においてだけでなく、例えば食肉製品の製造における枝肉の殺菌の間若しくは当該殺菌において又は果実及び野菜に適用される洗浄工程においても、適用されうる。該抗菌性組成物は、例えばスプレー、リンス若しくは洗浄溶液として又は種々の食品製品が浸される溶液としてなど、種々の手段により施与され又は導入されうる。本発明の抗菌性組成物は、該食品製品及び／又は飲料品製品へと、注入により導入されてもよい。さらに、該抗菌性組成物は、該食品製品及び飲料品製品をパッケージングする前に、当該パッケージングと同時に、又は当該パッケージングの後に、容器を処理する為に用いられうる。
【００４６】
適用の種類によって及び本発明の抗菌性組成物が最終製品中の活性成分として又は例えば洗浄溶液若しくはスプレー溶液の成分として用いられるかどうかによって、抗菌性組成物の成分は、当技術分野の当業者に明らかであろう濃度及び内部比で変わるであろう。
【００４７】
該抗菌性組成物は、固体又は液体の形で利用可能でありうる。もし該抗菌性組成物が液体の形にあるならば、それは一般的に、水性組成物の形にあり、これは溶液又は分散物でありうる。本発明に従うそのような水性の抗菌性組成物は一般的に、該溶液の合計重量に基づき、０．０００１重量％〜最大で４０重量％、より好ましくは０．１重量％〜３５重量％、及び最も好ましくは１〜２５重量％の本発明の抗菌剤、例えばポリリジンなど、と、０．０００１重量％〜最大で４５重量％、より好ましくは１〜４０重量％、及び最も好ましくは５〜３５重量％の本発明に従う脂肪酸エステル、例えばラクチレートなど、とを含む。該抗菌性組成物は、０〜４５重量％、より好ましくは０〜３５重量％、の量のグリセリド、及びさらに０〜４５重量％、及びより好ましくは０〜３０重量％の有機酸を、さらに含みうる。
【００４８】
本発明に従う抗菌性組成物の成分は、キャリアにより該液体の抗菌性組成物中に導入されうる。当技術分野の当業者は、どのタイプのキャリアが用いられうるかを知っている。種々のよく知られたキャリアのなかで、ポリエチレングリコール及び／又はラクテートがキャリアとして非常に良く働くことが分かった。該キャリアは、約５０〜９８重量％の濃度で存在しうる。さらに、当技術分野の当業者に既知の種々の乳化剤が添加されうる。好ましくは、乳化剤、例えばポリソルベート（例えばポリソルベート６０又は８０）及びレシチンが、１００％脂肪酸誘導体、例えばグリセリド及び／又はラクチレートなど、に基づき、例えば０．１〜２５％、より好ましくは１〜１０％及び最も好ましくは２〜４％の濃度で適用される。
【００４９】
もし該抗菌性組成物が固体の形にあるならば、それは一般に、適切な成分の粒子を含む粉の形にあるであろう。固体の形にある該抗菌性組成物は一般に、該粉の合計重量に基づき、０．０００１重量％〜最大で４０重量％、より好ましくは０．１重量％〜３５重量％、及び最も好ましくは１〜２５重量％の本発明の抗菌剤、例えばポリリジンなど、と、０．０００１重量％〜最大で４５重量％、より好ましくは１〜４０重量％、及び最も好ましくは５〜３５重量％の本発明に従う脂肪酸エステル誘導体、例えばラクチレートなど、とを含む。
【００５０】
キャリアが使用されうる。非常に適当なキャリアはシリカ及び／又はマルトデキストリンであり、これらは最大で５０〜９８重量％の濃度で存在する。
【００５１】
該抗菌性組成物は、０〜４５重量％及びより好ましくは０〜３５重量％の量でグリセリドと、さらに０〜４５重量％及びより好ましくは０〜３０重量％の有機酸とをさらに含みうる。
【００５２】
以下の非限定的な実施例がさらに本発明を説明する。
【実施例１】
【００５３】
以下の培養物が研究において用いられた：Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ 血清型Ｏ１５７：Ｈ７（ＡＴＣＣ ７００７２８）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（ＡＴＣＣ １３３１１）及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓ（ＡＴＣＣ １３０７６）。全ての培養物は、１０ｍｌのブレインハートインフュージン培地を含むスクリューキャップチューブ中に毎日移された。培養物は、攪拌無しで、３０℃でインキュベートされた。ブレインハートインフュージョン培地は、ラクチレート及びポリリジンの増加する量とともに調製された。カプリリック（Ｃ８）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．０５％ステップで０から０．４５％までのとおりであり、カプリック（Ｃ１０）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．０１％ステップで０から０．０９％までのとおりであり、ラウリック（Ｃ１２）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．００１％ステップで０から０．００９までのとおりであり、そしてテトラデカノイック（Ｃ１４）ラクチレートについての濃度範囲は、１０の０．００１％ステップで０から０．００９％までのとおりであった。ラクチレートはポリリジンと一緒にされた。該ポリリジンの濃度範囲は、１０の０．００７５％ステップで０から０．０６７５％までのとおりであった。これは、１００の異なる培地を結果した。該培地のｐＨは、１ＮのＨＣｌ又は１ＮのＮａＯＨにより６．１〜６．２に調節された。培地は、１０ｍｌの量で調製され、そしてろ過により滅菌された。３００μｌのそれぞれの培地が、滅菌したＢｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）ハニカム１００ウェルプレートのパネルに移された。ウェルプレートが、ブレインハートインフュージョン培地中で一晩増殖された培養物の５μｌにより、滅菌した５μｌのリピーティングディスペンサーを用いて植菌された。増殖速度は、垂直測光（vertical photometry）により濁度の発達を動的に測定するＢｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）Ｃにより決定された。該プレートは３７℃で１６〜２４時間インキュベートされ、該培養物の光学密度は、ワイドバンドフィルターを用いて４２０−５８０ｎｍで３０分毎に測定された。Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）は、設定時間間隔で、該培養物の光学密度を測定する。これらのデータから、Ｂｉｏｓｃｒｅｅｎ（商標）は、最大の比増殖速度を計算する。さらなるデータ処理の目的は、２つのアミノ酸が互いに独立して働くかどうか又はそれらがそれらの抑制作用において互いに刺激するか（相乗作用）若しくは抑制効果を互いに打ち消すか（拮抗作用）どうかを確認することである。或る化合物が生物に対して効果を有さない場合、この生物の比増殖速度（μ）は、例えばモノーの方程式により、増殖限定性基質濃度（ｓ）の関数（ｆ）として表されうる、これはμ＝μｍａｘ・ｓ／（Ｋｓ＋ｓ）と読め、ここでμｍａｘは、最大比増殖速度を表し、ｓは培地中の増殖限定性基質の不変濃度（standing concentration）を表し、そしてＫｓはμ＝０．５μｍａｘであるところの基質濃度を表す。しかしながら、インヒビターＰの存在が細胞増殖に影響する場合、μについての関数ｆは修正されなければならない、すなわちμ＝ｆ（ｓ，ｐ）、ここでｐはインヒビターＰの濃度を表す。バクテリアの増殖抑制速度論のたくさんの研究が、多くのインヒビターが非競合的インヒビターとして振舞うことを示している。これは、最大比増殖速度（μｍａｘ）の値だけが影響され、そして、親和性（Ｋｓ）は影響されないことを暗示する。それ故に、インヒビターの存在下における比増殖速度は、
、ここでμiはインヒビターＰの存在下における最大比増殖速度である、として記載されうる。μiとμｍａｘとの間の関係及びインヒビターＰの濃度は、ロジスティック用量応答方程式を用いて記載され、これは
と読める（Jungbauer, A. (2001). The logistic dose response function: a robust fitting function for transition phenomena in life sciences. J. Clinical Ligand Assay 24: 270 - 274）。この方程式において、ｐはインヒビターＰの濃度を表し、そして、ｐ０．５は、μi＝０．５μｍａｘであるところのＰの濃度を表す；μｍａｘは、インヒビターＰの不在下における比増殖速度である最大比増殖速度であり、ｂは次元の無い量であり、これはμiとｐとの間の関係を決定する。モノー方程式及びロジスティック用量応答方程式とを併せると、
と記載されることができる。ｓが通常、Ｋｓよりも何倍も大きいバッチカルチャーにおいて、この方程式は
に変形される。同じ条件下で増殖された異なる生物を比較する場合、又は異なる条件下で増殖された同じ生物を比較する場合、比較の基準として絶対的増殖速度よりもむしろ、相対的増殖速度を用いることがより意味がある。相対的増殖速度（Ｏ）は、最大増殖速度（μｍａｘ）に対する増殖速度（μ）の比であり、すなわちＯ＝μ／μｍａｘである。μ及びμｍａｘが（時間）−１の次元を有する一方で、それらの比Ｏは次元無し、すなわち純粋な数であると見られることができる。同様に、我々は、相対的インヒビター濃度εをｐ／ｐ０．５として定義することができる。該変形されたモノー及びロジスティック用量応答方程式は今、
として記載されうる。２つのインヒビターＸ及びＹについて、例えばＯについての以下の２つの式が定義されうる：
。Ｏｘ及びＯｙは、標的生物の増殖速度に対するＸ又はＹのいずれかの抑制効果を試験することにより実験的に評価されうる。Ｏｘ及びＯｙについての該評価された関数を知ることにより、理論的な独立の効果がＯｘ・Ｏｙとして定義される。該相対的増殖速度に対するＸ及びＹの組み合わせの実験的に観察された効果はＯｘｙとして定義される。Ｘ及びＹが或る生物に対して互いに独立に作用するという仮説は、数学的に
に言い換えられる。この仮説の棄却は、Ｘ及びＹの組み合わせられた効果が、独立の効果でなく、相乗的又は拮抗的であることをほのめかす。インヒビターＸ及びＹが該標的生物に対して相乗的に作用する場合、
（しかし＞０）である。インヒビターＸ及びＹの組み合わされた効果が拮抗的である場合、
である。
【００５４】
相乗作用、独立の効果、及び拮抗作用は、Ｏｘｙ対Ｏｘ・Ｏｙのプロットにおいて可視化されうる。これは図１〜８において例示され、ここでＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（ＡＴＣＣ １３３１１）及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓ（ＡＴＣＣ １３０７６）についてのＯＣｘＬ ｐＬｙｓ（ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下において実験的に観察された相対的増殖速度）対ＯＣｘＬ・ＯｐＬｙｓ（ラクチレート及びポリリジンの混合物の存在下において予測された相対的増殖速度）の種々のプロットが与えられ、ラクチレートとポリリジンとの間の、抑制における相乗作用を示す。これらのグラフ中の実線は、該実験的に観察された相対的増殖速度（ＯＣｘＬ ｐＬｙｓ）が該予測された相対的増殖速度（ＯＣｘＬ・ＯｐＬｙｓ）に等しく且つ該ラクチレート及びポリリジンが独立的なインヒビターとして作用するところの線を表す。
【００５５】
図１〜８は、Ｏｘｙ／Ｏｘ・Ｏｙ＜１及び＞０である（実線の下のドットにより表される）ので、試験された種々の組み合わせにおけるポリリジン及びラクチレートが、該標的生物に対して相乗的に作用することを実証する。
【００５６】
表１に、相乗作用のさらなる例、例えば０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．４５％（ｗ／ｗ）Ｃ８−ラクチレートの間の、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．０９％（ｗ／ｗ）Ｃ１０−ラクチレートの間の、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１２−ラクチレートの間の、又は０．０２２５（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１４−ラクチレートの間の相乗作用など、が与えられる。
【００５７】
該表から観察されうるとおり、０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．４５％（ｗ／ｗ）Ｃ８−ラクチレート、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．０９％（ｗ／ｗ）Ｃ１０−ラクチレート、又は０．０２２５％（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１２−ラクチレート、又は０．０２２５（ｗ／ｗ）ポリリジン及び０．００９％Ｃ１４−ラクチレートを含む培地中における、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ＡＴＣＣ ８７３９）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ血清型Ｏ１５７：Ｈ７（ＡＴＣＣ ７００７２８）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（ＡＴＣＣ １３３１１）又はＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｉｒｉｔｉｄｉｓ（ＡＴＣＣ １３０７６）の相対的増殖速度は、ポリリジン又は該ラクチレートエステルの１つを含む培地中におけるこれらの生物の相対的増殖速度に基づき予測されうるものよりも低い。
【００５８】
【表１】
【実施例２】
【００５９】
汚染されたチキンフィレ及び乳における抗微生物効果
【００６０】
材料及び方法
【００６１】
培養及び培養条件
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＡＴＣＣ １３３１１及びＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７ ＡＴＣＣ ７００７２８が、ブレインハートインフュージョン培地を含む滅菌されたスクリューキャップチューブ中で、１８〜２４時間、３０℃で増殖された。
【００６２】
チキンフィレの調製
チキンフィレ（１５０〜２００ｇ）が切り取られ、真空パックされ、そして４〜７℃で保蔵された。フィレは次にガンマ線照射により滅菌された（平均放射線量：１２キログレイ）。
【００６３】
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍによるチキンフィレの接種
ブレインハートインフュージョン培地中のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの一晩培養物の１ｍｌが、滅菌された０．８％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ及び０．１％（ｗ／ｖ）ペプトンにより１０００倍に希釈された。この希釈された培養物の０．５ｍｌが、該フィレの一面に移された。該接種材料が、該フィレの全部の表面に穏やかにこすりつけることにより分布された。これが、該フィレの他方の面についても繰り返された。接種は６℃で実施された。接種されたフィレは、６℃で６０〜１２０分間休まされて、細胞の付着を許した。
【００６４】
チキンフィレの汚染除去
チキンフィレは、適切な処方を有する１ｌの溶液中に手短に浸され且つ完全に沈められ、そして次に、適切な処方の５ｍｌを含む、４００ｍｌのＢａｇｆｉｌｔｅｒ（商標）ラテラルフィルターバッグ（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｔ Ｎｏｍ、フランス）に移された。バッグは真空シールされ、そして、さらなる分析まで、最大で７日間、１２℃でインキュベートされた。時間ゼロの試料が、浸漬後３０分以内にプレートされた。
【００６５】
チキンフィレの微生物分析
チキンフィレ上に生存しているＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍが以下のとおりに計数された：封されたバッグが開けられ、そしてこれに、合計重量の２倍の滅菌された希釈流体（８．５％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌ及び０．１％（ｗ／ｖ）細菌学的ペプトン（bacteriological peptone））が添加された。同じフィレが、１分間、Ｂａｇｍｉｘｅｒ（商標）４００パドルラボブレンダー（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｔ Ｎｏｍ、フランス）中で、ホモジナイズされた。５０μｌのホモジネート又はその希釈物が、Ｅｄｄｙｊｅｔタイプ１．２３スパイラルプレーター（ＩＵＬ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、バルセロナ、スペイン）を用いて、セフスロジン、ノボビオシンの補充（ＳＲ０１９４）（Ｏｘｏｉｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）を有する同じＳａｌｍｏｎｅｌｌａ発色アガープレート（ＣＭ１００７）上にプレートされた。プレートは、３０℃で２４〜４８時間インキュベートされ、そして次に計数された。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａの数は、１ｍｌのホモジネート当たりのｌｏｇ１０コロニー形成ユニットとして表された。
【００６６】
抗微生物性処方物により処理された乳の接種
滅菌された低脂肪乳が地域のスーパーマーケットから購入され、そして１００ｍｌの量が、一連の滅菌スクリューキャップボトルに移された。ε−ポリリジン、オクタノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ８−ラクチレート）及びデカノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ１０−ラクチレート）が、表２に示されるとおりの濃度に添加された。種々の乳調製物が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７の一晩培養物により接種された。開始時の細胞密度はｌｏｇ１０ ２．５〜３．０であった。
【００６７】
乳培養物の微生物分析
生存しているＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７が以下のとおりに計数された：乳培養物又はその希釈物の同じ５０μｌ試料が、Ｅｄｄｙｊｅｔタイプ１．２３スパイラルプレーター（ＩＵＬ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、バルセロナ、スペイン）を用いて、同じＶｉｏｌｅｔ Ｒｅｄ Ｂｉｌｅ Ｇｌｕｃｏｓｅ（ＶＲＢＧ）アガープレート（ＣＭ０４８５ Ｏｘｏｉｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、英国）上にプレートされた。プレートは、２４〜４８時間、３０℃でインキュベートされ、そして次に計数された。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉの数は、１ｍｌのホモジネート当たりのｌｏｇ１０コロニー形成ユニットとして表された。
【００６８】
抗微生物性処方物の調製
研究された処方物の組成が表２に示される。ε−ポリリジン及びラクチレートが脱塩水中に溶解され、そして２０分間、１２０℃で滅菌された。
【００６９】
【表２】
【００７０】
化学物質
ε−ポリリジンは、Ｃｈｉｓｓｏ Ａｍｅｒｉｃａ Ｉｎｃ（ニューヨーク、米国）から購入された。オクタノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ８−ラクチレート）及びデカノイルラクチレートのナトリウム塩（Ｃ１０ ラクチレート）は、Ｃａｒａｖａｎ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ（Ｌｅｎｅｘａ、カンザス、ＵＳＡ）から購入された。
【００７１】
チキンフィレの汚染除去の結果
チキンフィレ上に存在するＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＡＴＣＣ １３３１１の、ε−ポリリジンと中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせへの曝露は、約９０％だけ、生存細胞数のほぼ即時の減少を結果した（表３）。１２℃での１日後、数における減少は、４ｌｏｇ１０より大きい。該試験された組み合わせによる増殖抑制は永続的でない；４日後に数は増加したが、接種後７日後で該処方物と該ブランク処方物との間の差異は２ｌｏｇ１０以上であり、そしてすなわち、本発明の組成物は抗微生物活性をなお発揮する。
【００７２】
表３
１２℃でのチキンフィレ上のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍに対する、ε−ポリリジン（ε−ＰＬ）と中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせの効果；ｌｏｇ１０コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／ｍｌで表される
【表３】
【００７３】
個々には、該ラクチレートは、表４において観察されうるとおり、ε−ポリリジンの不在下において、殺傷する効果又は増殖を抑制する効果を何も示さなかった。ε−ポリリジンそれ自体は細胞数を減少するが、その効果は、脂肪酸誘導体の１つと組み合わされた場合よりも小さかった。これは特に、インキュベーションの１日後に明らかであった。該組み合わせについての数の減少は４ｌｏｇ１０から５ｌｏｇ１０に及んだが（表３）、単独添加としてのε−ポリリジンについての減少は２ｌｏｇ１０だけであった（表４）。これは、ε−ポリリジンと該脂肪酸誘導体との間の抑制における相乗作用の形があることを示唆する。これは、これらの組み合わせの効果が培養物中において研究されたｉｎ ｖｉｔｒｏ研究により確認される（実験１）。
【００７４】
表４
１２℃でのチキンフィレ上のＳａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍに対する、ε−ポリリジン並びに中鎖脂肪酸エステルのＣ８及びＣ１０乳酸エステルの個々の効果；ｌｏｇ１０コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／ｍｌで表される
【表４】
【００７５】
乳中のＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７の抑制の結果
ε−ポリリジンと中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせによる強力な増殖抑制も、無脂肪乳において増殖するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７について観察された（表５）。
【００７６】
表５
１２℃での乳中におけるＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｏ１５７：Ｈ７に対する、ε−ポリリジン（ε−ＰＬ）と中鎖脂肪酸エステルの乳酸エステルとの組み合わせの効果；ｌｏｇ１０コロニー形成ユニット（ＣＦＵ）／ｍｌで表される（ＮＤ：データ無し）
【表５】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．脂肪酸とヒドロキシカルボン酸又はこの塩若しくはエステルとの脂肪酸エステルと、
ｂ．ポリリジン及びその塩、プロタミン及びその塩、並びにこれらの混合物から選ばれる抗菌剤
との組み合わせを含む抗菌性組成物。
【請求項２】
該脂肪酸が４〜１８の炭素原子を含む、請求項１の抗菌性組成物。
【請求項３】
該ヒドロキシカルボン酸が、ヒドロキシカルボン酸の１以上のモノマーを含みうる、請求項１又は２の抗菌性組成物。
【請求項４】
該ヒドロキシカルボン酸が１〜６の炭素原子を含みうる、請求項１、２又は３の抗菌性組成物。
【請求項５】
該ヒドロキシカルボン酸が、乳酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸及びこれらの混合物から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項６】
該脂肪酸エステルが、以下の式
【化３】
により表されるラクチレート又はラクチレートの混合物であって、
ＲＣＯは４〜１８の炭素原子を有する脂肪酸のアシル基であり、Ｙは水素、アルカリ金属、アルカリ土類金属、亜鉛、鉄、アンモニウム又は、１以上のＣ１〜Ｃ３アルキル又はヒドロキシアルキル基を有する置換アンモニウムから選ばれるカチオンであり；ｎは、該カチオンの価数を表し；ｍは１からｎの整数であり、ｘは１〜６の数であり、且つｘ、ｍ及びｎが平均の数を表す、請求項１〜５のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項７】
ｘが１〜３の値を有し且つ、該ラクチレートが、遊離形にある又は塩としての、オクタノイルラクチレート、デカノイルラクチレート、ドデカノイルラクチレート、テトラデカノイル−ラクチレート、オレイック−ラクチレート、及びこれらの混合物から選ばれる、請求項６の抗菌性組成物。
【請求項８】
ポリリジンがε−ポリリジンである、請求項１〜７のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項９】
金属キレート剤、有機酸又はこの塩もしくはエステル、グリセロールに基づく脂肪酸エステル又はこれらの混合物から選ばれる１以上の添加物をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項１０】
該有機酸が、乳酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、酒石酸、グルコン酸、プロピオン酸、カプロン酸及びフィチン酸から選ばれる、請求項９の抗菌性組成物。
【請求項１１】
該グリセロールの脂肪酸エステルが、グリセロールのモノ−若しくはジ−エステル又はこれらの混合物である、請求項９の抗菌性組成物。
【請求項１２】
該組成物が液体の形又は固体の形にあり、且つ、該組成物が０．０００１〜４０重量％の該抗菌剤、０．０００１〜４５重量％の、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸又はこの塩若しくはエステルとの該脂肪酸エステル、０〜４５重量％の、グリセロールに基づく脂肪酸エステル、０〜４５重量％の有機酸又はこの塩若しくはエステル、及び０〜９８重量％のキャリアを含む、請求項１〜１１のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項１３】
製品又は表面の中の又は上のグラム陰性菌の存在、増殖又は活動の減少又は防止の為の方法であって、製品又は表面の中の又は上の該バクテリアを、請求項１〜１２のいずれか１項の抗菌性組成物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項１４】
該菌が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ又はＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒのファミリーからの菌である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項の抗菌性組成物を含む、食品製品若しくは飲料製品、化粧料製品、パーソナルケア製品、クリーニング製品、洗剤又は動物の為の飼料製品若しくは飲料製品。
【請求項１】
ａ．脂肪酸とヒドロキシカルボン酸又はこの塩若しくはエステルとの脂肪酸エステルと、
ｂ．ポリリジン及びその塩、プロタミン及びその塩、並びにこれらの混合物から選ばれる抗菌剤
との組み合わせを含む抗菌性組成物。
【請求項２】
該脂肪酸が４〜１８の炭素原子を含む、請求項１の抗菌性組成物。
【請求項３】
該ヒドロキシカルボン酸が、ヒドロキシカルボン酸の１以上のモノマーを含みうる、請求項１又は２の抗菌性組成物。
【請求項４】
該ヒドロキシカルボン酸が１〜６の炭素原子を含みうる、請求項１、２又は３の抗菌性組成物。
【請求項５】
該ヒドロキシカルボン酸が、乳酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸及びこれらの混合物から選ばれる、請求項１〜４のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項６】
該脂肪酸エステルが、以下の式
【化３】
により表されるラクチレート又はラクチレートの混合物であって、
ＲＣＯは４〜１８の炭素原子を有する脂肪酸のアシル基であり、Ｙは水素、アルカリ金属、アルカリ土類金属、亜鉛、鉄、アンモニウム又は、１以上のＣ１〜Ｃ３アルキル又はヒドロキシアルキル基を有する置換アンモニウムから選ばれるカチオンであり；ｎは、該カチオンの価数を表し；ｍは１からｎの整数であり、ｘは１〜６の数であり、且つｘ、ｍ及びｎが平均の数を表す、請求項１〜５のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項７】
ｘが１〜３の値を有し且つ、該ラクチレートが、遊離形にある又は塩としての、オクタノイルラクチレート、デカノイルラクチレート、ドデカノイルラクチレート、テトラデカノイル−ラクチレート、オレイック−ラクチレート、及びこれらの混合物から選ばれる、請求項６の抗菌性組成物。
【請求項８】
ポリリジンがε−ポリリジンである、請求項１〜７のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項９】
金属キレート剤、有機酸又はこの塩もしくはエステル、グリセロールに基づく脂肪酸エステル又はこれらの混合物から選ばれる１以上の添加物をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項１０】
該有機酸が、乳酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、酒石酸、グルコン酸、プロピオン酸、カプロン酸及びフィチン酸から選ばれる、請求項９の抗菌性組成物。
【請求項１１】
該グリセロールの脂肪酸エステルが、グリセロールのモノ−若しくはジ−エステル又はこれらの混合物である、請求項９の抗菌性組成物。
【請求項１２】
該組成物が液体の形又は固体の形にあり、且つ、該組成物が０．０００１〜４０重量％の該抗菌剤、０．０００１〜４５重量％の、脂肪酸とヒドロキシカルボン酸又はこの塩若しくはエステルとの該脂肪酸エステル、０〜４５重量％の、グリセロールに基づく脂肪酸エステル、０〜４５重量％の有機酸又はこの塩若しくはエステル、及び０〜９８重量％のキャリアを含む、請求項１〜１１のいずれか１項の抗菌性組成物。
【請求項１３】
製品又は表面の中の又は上のグラム陰性菌の存在、増殖又は活動の減少又は防止の為の方法であって、製品又は表面の中の又は上の該バクテリアを、請求項１〜１２のいずれか１項の抗菌性組成物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項１４】
該菌が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ又はＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒのファミリーからの菌である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項の抗菌性組成物を含む、食品製品若しくは飲料製品、化粧料製品、パーソナルケア製品、クリーニング製品、洗剤又は動物の為の飼料製品若しくは飲料製品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公表番号】特表２０１０−５３８６３０（Ｐ２０１０−５３８６３０Ａ）
【公表日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２４５２５（Ｐ２０１０−５２４５２５）
【出願日】平成２０年９月１７日（２００８．９．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６２３４０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３７２６９
【国際公開日】平成２１年３月２６日（２００９．３．２６）
【出願人】（３０６００３４１９）ピュラック バイオケム ビー．ブイ． (40)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月１７日（２００８．９．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６２３４０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３７２６９
【国際公開日】平成２１年３月２６日（２００９．３．２６）
【出願人】（３０６００３４１９）ピュラック バイオケム ビー．ブイ． (40)
【Ｆターム（参考）】
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