【課題】本発明は、ＲＮＡ干渉(ＲＮＡｉ)を利用するヘッジホッグシグナリングと拮抗するための方法及び試薬を提供すること。
【解決手段】望ましくない細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを阻止するためのヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストであって、該細胞は哺乳動物の細胞でありＳｈｈを発現し、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ヘッジホッグ経路の正のレギュレーターである標的配列に対するものであり、該標的配列はＳｈｈ遺伝子であり、該細胞を有効量の該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることが細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させ、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５〜６、９〜１２いずれかの核酸配列と少なくとも９０％同一である配列を有することを特徴とする、当該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
望ましくない細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを阻止するためのヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストであって、該細胞は哺乳動物の細胞でありＳｈｈを発現し、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ヘッジホッグ経路の正のレギュレーターである標的配列に対するものであり、該標的配列はＳｈｈ遺伝子であり、該細胞を有効量の該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることが細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させ、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５〜６、９〜１０いずれかの核酸配列と同一である配列を有することを特徴とする、当該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２】
前記の細胞が、ｇｌｉ遺伝子を発現する、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３】
前記の望ましくない細胞増殖が、癌である、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項４】
前記の望ましくない細胞増殖が、良性の肥厚である、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項５】
前記の癌が、泌尿生殖器癌である、請求項３に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項６】
前記の癌が、悪性の神経膠腫、髄膜腫、髄芽細胞腫、神経外胚葉性腫瘍又は上衣細胞腫を含む神経系の癌である、請求項３に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項７】
前記の癌が、肺、前立腺、乳房、卵巣、子宮、筋肉、膀胱、結腸、腎臓、膵臓及び肝臓組織の少なくとも一つと関係している、請求項４に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項８】
前記の前立腺と関係する癌が、腺癌である、請求項７に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項９】
望ましくない細胞増殖が、望ましくない血管形成である、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１０】
望ましくない血管形成が、新血管新生疾患、加齢関連黄斑変性、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植の拒絶、新血管新生性緑内障、水晶体後繊維増殖症、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズ疲労症、アトピー性角膜炎、上輪部角結膜炎、表皮爪膜乾燥症、シェーグレン酒性座瘡、フリクテン症、梅毒、ミコバクテリア感染症、脂質退行変性、化学的火傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染症、帯状疱疹、原虫感染症、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン辺縁変性、辺縁表皮剥離、慢性関節リウマチ、全身性狼瘡、多発性動脈炎、外傷、ウェゲナー肉芽腫症、類肉腫症、鞏膜炎、スティーヴンズ−ジョンソン病、周辺放射角膜切開、角膜移植片拒絶、慢性関節リウマチ、骨関節症慢性的炎症(例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病)、血管腫、遺伝性出血性毛細管拡張症及び遺伝性出血性毛細管拡張症を含む、腫瘍成長、腫瘍転移、又は内皮細胞による異常成長において起きる、請求項９に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１１】
前記の望ましくない血管形成が、傷の治癒、排卵、及び受精後の胞胚の着床を含む正常な生理的過程において起きる、請求項９に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１２】
前記の細胞の望ましくない成長、増殖又は生存が、正常な毛髪の成長、異所発毛症、多毛症、多毛性早熟症、又は、脱毛性毛嚢炎、網状瘢痕性紅斑性毛嚢炎、ケロイド毛嚢炎及び擬似毛嚢炎を含む毛嚢炎において起きる、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１３】
ＲＮＡｉアンタゴニストが、ｓｉＲＮＡである、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１４】
前記のｓｉＲＮＡが、前記のプラスミド(ＲＮＡｉ発現ベクター)の単一プロモーターからの転写後に形成されるショートヘアピンｓｉＲＮＡである、請求項１３に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１５】
前記のｓｉＲＮＡが、約１９〜３０ヌクレオチド長である、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１６】
前記のｓｉＲＮＡが、２１〜２３ヌクレオチド長である、請求項１５に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１７】
前記のｓｉＲＮＡが、二本鎖であり、一端又は両端にショートオーバーハングを含む、請求項１６に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１８】
前記のショートオーバーハングが、３’末端で１〜６ヌクレオチド長であり、３’末端で２〜４ヌクレオチド長であり、又は３’末端で１〜３ヌクレオチド長である、請求項１７に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項１９】
前記のｓｉＲＮＡの一の鎖が３’オーバーハングを有して、他の鎖は平滑末端であり、又は他の鎖も同じ若しくは異なる長さのオーバーハングを有する、請求項１８に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２０】
前記の３’オーバーハングが、分解に対して安定化されている、請求項１７〜１９に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２１】
前記の３’オーバーハングが、プリンヌクレオチドのアデノシン又はグアノシンを含有することにより分解に対して安定化されている、請求項２０に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２２】
前記の３’オーバーハングが、ピリミジンヌクレオチドを改変類似体により置換することにより、又はウリジンヌクレオチド３’オーバーハングの２’−デオキシチミジンによる置換により、分解に対して安定化されている、請求項２０に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２３】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストが、前記の標的核酸配列と同一若しくは実質的に同一である二本鎖ＲＮＡの長いストレッチ、又は該標的核酸配列の一領域にのみ同一若しくは実質的に同一である二本鎖ＲＮＡのショートストレッチの何れかを含む、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２４】
前記のＲＮＡｉアンタゴニストが、ＨＨシグナリング経路に特異的であり、他の細胞シグナリング経路に有意の影響を与えない、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２５】
前記の他の細胞シグナリング経路が、ウイングレス経路である、請求項２４に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２６】
患者の腫瘍を治療するためのヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストであって、有効量の該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを患者へ投与することが、腫瘍の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させるのに十分であり、且つ該腫瘍が、ヘッジホッグ遺伝子又はｇｌｉ遺伝子の少なくとも一つを発現し、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５〜６、９〜１０いずれかの核酸配列と同一である配列を有する当該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２７】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを、癌治療養生法の部分として投与する、請求項２６に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項２８】
望ましくない哺乳動物細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを阻害するイン・ビトロの方法であって、該方法は、下記：
(ａ)該細胞がヘッジホッグ遺伝子を発現するかどうか測定して、
(ｂ)該ヘッジホッグ遺伝子を発現する該細胞を、Ｓｈｈ遺伝子に対するものである有効量のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させる；
ことを含み、該細胞を該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることが細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させ、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５〜６、９〜１０いずれかの核酸配列と同一である配列を有する当該方法。
【請求項２９】
前記の望ましくない細胞の成長、増殖又は生存が、癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
製薬上許容しうるキャリアー中に配合される、請求項１〜２７何れか１項に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３１】
患者の腫瘍を治療するための医薬組成物を製造するための、Ｓｈｈ遺伝子に対するものであるヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストであって、該腫瘍はＳｈｈを発現し、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５〜６、９〜１０いずれかの核酸配列と同一である配列を有する、ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３２】
癌治療養生法の部分として投与される、請求項３１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３３】
望ましくない細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを阻害するための、Ｓｈｈ遺伝子に対するものであるヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストであって、該細胞は哺乳動物の細胞でありＳｈｈを発現し、該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５〜６、９〜１０いずれかの核酸配列と同一である配列を有する、ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３４】
癌治療養生法の部分として投与される、請求項３３に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３５】
前記の標的配列が、野生型配列である、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３６】
前記の野生型標的配列が、細胞において活動過多である、請求項３５に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３７】
前記の標的配列が、活動過多突然変異を含む、請求項１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３８】
前記の癌がパッチト−１の変異を特徴としていない、請求項３に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項３９】
前記の腫瘍がパッチト−１の変異を特徴としていない、請求項２６又は３１に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項４０】
前記ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストがＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５又は６で表される核酸配列と同一の配列を含む、請求項１〜２７又は３０〜３９のいずれか１項に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項４１】
前記ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストがＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：９又は１０で表される核酸配列と同一の配列を含む、請求項１〜２７又は３０〜３９のいずれか１項に記載のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニスト。
【請求項４２】
前記ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストがＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：５又は６で表される核酸配列と同一の配列を含む、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項４３】
前記ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストがＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：９又は１０で表される核酸配列と同一の配列を含む、請求項２８又は２９に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【公開番号】特開２０１２−１１６８４５（Ｐ２０１２−１１６８４５Ａ）
【公開日】平成２４年６月２１日（２０１２．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１０３７５（Ｐ２０１２−１０３７５）
【出願日】平成２４年１月２０日（２０１２．１．２０）
【分割の表示】特願２００７−５０５１４９（Ｐ２００７−５０５１４９）の分割
【原出願日】平成１７年３月２３日（２００５．３．２３）
【出願人】（５０１１８８８８９）キュリス，インコーポレイテッド (23)
【Ｆターム（参考）】