ベンゾクロメノン化合物
【課題】蛍光官能基を含む新規な化合物、特に、溶媒の極性増加など、周囲の環境の変化に伴ってΦｆ値が変動する環境応答性の蛍光特性を有する化合物、ならびに当該化合物を含む蛍光標識化試薬、および蛍光試薬の提供。
【解決手段】式（Ｉ）：
［Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル等；Ｘは、ＯまたはＳ；Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル；Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基；Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ等］で表される化合物またはその塩。
【解決手段】式（Ｉ）：
［Ｒ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル等；Ｘは、ＯまたはＳ；Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル；Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基；Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ等］で表される化合物またはその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンゾクロメノン化合物、および当該化合物を含む蛍光標識化用試薬に関する。さらに、本発明は、当該化合物より調製されるポリマー、当該ポリマーを含む蛍光試薬、および当該ポリマーの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
蛍光法は一分子でも検出可能なほど高感度であり、現在までに多くの蛍光試薬が開発されている。最近、蛍光試薬の新しい利用例として、外部刺激に伴うタンパク質や合成高分子の構造変化を環境応答性の蛍光団のラベルによって追跡する報告や、その蛍光応答から外部刺激の程度を測定する報告がなされている（非特許文献１〜４）。現在のところ、これらの研究には、溶媒の極性低下に伴い蛍光量子収率（Φｆ）が増加する環境応答性の蛍光団が用いられており、高分子の局所的な極性が低下する場合に蛍光シグナルが得られる。逆に局所的な極性の増加に対しては、それに伴ってΦｆ値が増加する蛍光団の適用が望ましい。
【０００３】
溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する環境応答性の蛍光団としては、ピレン−３−カルボキサルデヒドおよび７−メトキシ−４−メチルクマリンの二例が報告されている（非特許文献５および６）。しかし、前者は安定性の面からさらなる官能基の導入に制約があり標識化試薬としての利用が難しい。後者は吸収、蛍光波長が３１８、３８０ｎｍ程度と短波長であるため、測定系に共存する芳香環により検出妨害を受けやすいという欠点を有している。
【０００４】
【非特許文献１】Ｃｏｈｅｎ，Ｂ．Ｅ．；ＭｃＡｎａｎｅｙ，Ｔ．Ｂ．；Ｐａｒｋ，Ｅ．Ｓ．；Ｊａｎ，Ｙ．Ｎ．；Ｂｏｘｅｒ，Ｓ．Ｇ．；Ｊａｎ，Ｌ．Ｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２年，第２９６巻，第１７００〜１７０３頁
【非特許文献２】Ｗａｄａ，Ａ．；Ｍｉｅ，Ｍ．；Ａｉｚａｗａ，Ｍ．；Ｌａｈｏｕｄ，Ｐ．；Ｃａｓｓ，Ａ．Ｅ．Ｇ．；Ｋｏｂａｔａｋｅ，Ｅ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３年，第１２５巻，第１６２２８〜１６２３４頁
【非特許文献３】Ｕｃｈｉｙａｍａ，Ｓ．；Ｋａｗａｉ，Ｎ．；ｄｅ Ｓｉｌｖａ，Ａ．Ｐ．；Ｉｗａｉ，Ｋ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００４年，第１２６巻，第３０３２〜３０３３頁
【非特許文献４】Ｋａｌｙａｎａｓｕｎｄａｒａｍ，Ｋ．；Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｋ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９７７年，第８１巻，第２１７６〜２１８０頁
【非特許文献５】ｄｅ Ｍｅｌｏ，Ｊ．Ｓ．Ｓ．；Ｂｅｃｋｅｒ，Ｒ．Ｓ．；Ｍａcａｎｉｔａ，Ａ．Ｌ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９９４年，第９８巻，第６０５４〜６０５８頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、蛍光官能基を含む新規な化合物、特に、溶媒の極性増加など、周囲の環境の変化に伴ってΦｆ値が変動する環境応答性の蛍光特性を有する化合物、ならびに当該化合物を含む蛍光標識化試薬、および蛍光試薬を提供することである。さらに、本発明の目的は、蛍光官能基を含む新規なポリマーおよび当該ポリマーの新規な用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を達成するために鋭意研究を進めたところ、溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する環境応答性の蛍光特性を有する２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−２−オン化合物を見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
本発明の１つの側面によれば、式（Ｉ）：
【０００８】
【化１】
【０００９】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩が提供される。
【００１０】
式（Ｉ）において、基−Ｑ−ＹおよびＲ１は、ベンゾクロメノン環に含まれる置換可能ないずれの炭素原子に連結していてもよい。
本発明の別の側面によれば、式（Ｉａ）：
【００１１】
【化２】
【００１２】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙは既に定義したとおりである］
で表される、上記の化合物またはその塩が提供される。
本発明の１つの態様において、上記式（Ｉ）または（Ｉａ）においてＸはＯであってもよい。また本発明の１つ態様において、Ｒ１は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択されてもよい。
【００１３】
本発明の１つの態様において、Ｙは、ハロゲン原子またはヒドロキシであってもよい。また、本発明の別の態様において、Ｙがアクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシであってもよい。
【００１４】
本発明の別の側面によれば、 式（ＩＩ）：
【００１５】
【化３】
【００１６】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＸ１は既に定義したとおりであり；
Ｒ３は水素原子またはＣ１−６アルキル（例えば、メチル）である］
で表される繰り返し単位を含むポリマーが提供される。本発明の１つの態様において、本発明のポリマーは、式（ＩＩＩ）：
【００１７】
【化４】
【００１８】
［式中、Ｒ３１は水素原子またはＣ１−６アルキル（例えば、メチル）であり；
Ｒ３２はヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノであり、ここで当該Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノは、それぞれ独立に、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される繰り返し単位をさらに含んでいてもよい。本発明の１つの態様において、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位および式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位からなるポリマーもまた提供される。
【００１９】
本発明の１つの側面によれば、式（ＩＩａ）：
【００２０】
【化５】
【００２１】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｒ３、ＱおよびＸ１は既に定義したとおりである］
で表されるモノマー、および式（ＩＩＩａ）：
【００２２】
【化６】
【００２３】
（ＩＩＩａ）
［式中、Ｒ３１およびＲ３２は既に定義したとおりである］
で表されるモノマーから調製されうるポリマーが提供される。
【００２４】
本発明のポリマーにおいて、分子中に含まれる全繰り返し単位数に対する、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位数の比は、特に限定はされないが、例えば０．００１〜１０％、好ましくは０．０１〜１％であってもよい。また、本発明のポリマーの重量平均分子量は、特には限定されないが、例えば５０００〜１００００００、好ましくは１００００〜２０００００である。
【００２５】
本発明の別の側面によれば、上記式（Ｉ）または（Ｉａ）で表される化合物を含む、蛍光標識化用試薬が提供される。
さらに、本発明の別の側面によれば、上記のポリマーを含む蛍光試薬が提供される。当該蛍光試薬の用途は特には限定されないが、例えば液体の温度の測定に使用されうる。
【００２６】
さらに、本発明の別の側面によれば、式（Ｉｂ）：
【００２７】
【化７】
【００２８】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩を含む、蛍光試薬が提供される。
【００２９】
さらに、本発明の別の側面によれば、式（Ｉｄ）：
【００３０】
【化８】
【００３１】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙ１は既に定義したとおりである］
で表される化合物またはその塩を含む、既に記載の蛍光試薬が提供される。上記蛍光試薬は、例えば溶液の極性の変化の測定に使用されうる。
【００３２】
さらに、本発明の別の側面によれば、液体に前記蛍光試薬を溶解する工程；および励起光照射下、蛍光強度を測定する工程、を含む、液体の温度測定方法もまた提供される。
【発明の効果】
【００３３】
本発明の化合物は、蛍光標識化試薬または蛍光試薬として好適な特性を有する。特に本発明の化合物に含まれる蛍光官能基であるベンゾクロメノンイル基は、酸性条件下およびアルカリ性条件下でも安定であり、官能基導入のための種々の反応に適用可能である。また、本発明の化合物の蛍光波長は極性溶媒中で約４６０ｎｍ以上であり、蛍光の検出について測定系に共存する芳香環による影響を受けにくいという特性を有する。さらに、本発明の化合物は、溶媒の極性増加などの環境応答に伴って蛍光量子収率（Φｆ）が増加するという蛍光特性を有するので、当該化合物を含む溶液中の環境変化または当該化合物で標識化した分子の変化を追跡するための蛍光試薬としても使用することができる。
【発明の実施の形態】
【００３４】
以下、本発明を更に具体的に説明する。
本明細書において「Ｃ１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３−エチルブチル、および２−エチルブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロプロピルメチルなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルキルなども含まれる。
【００３５】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニル」とは、炭素数２〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルケニル基を意味し、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル（アリル）、１−メチルビニル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルなどが含まれ、例えば、Ｃ２−４アルケニルおよびＣ２−３アルケニルなども含まれる。
【００３６】
本明細書において「Ｃ２−６アルキニル」とは、炭素数２〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルケニル基を意味し、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル（プロパルギル）、２−シクロプロピルエチニルなどが含まれ、例えば、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ２−３アルキニルなども含まれる。
【００３７】
本明細書において「Ｃ１−６アルコキシ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１〜６のアルキル基を有するアルキルオキシ基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、３−メチルブトキシ、２−メチルブトキシ、１−メチルブトキシ、１−エチルプロポキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、４−メチルペントキシ、３−メチルペントキシ、２−メチルペントキシ、１−メチルペントキシ、３−エチルブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、シクロプロピルメチルオキシなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルコキシおよびＣ１−３アルコキシなども含まれる。また、本明細書において「Ｃ１−４アルコキシ」には、例えばＣ１−３アルコキシなども含まれる。
【００３８】
本明細書において「Ｃ１−６アルキルカルボニル」とは、アルキル部分として既に定義したＣ１−６アルキル基を有するアルキルカルボニル基を意味し、例えばＣ１−６アルキルカルボニルが含まれる。
【００３９】
本明細書において「Ｃ１−６アルコキシカルボニル」とは、アルコキシ部分として既に定義したＣ１−６アルキル基を有するアルコキシカルボニル基を意味し、例えばＣ１−３アルコキシカルボニルが含まれる。
【００４０】
本明細書において「Ｃ７−１４アラルキル」とはアリール基を含む炭素数が７〜１４のアリールアルキル基を意味し、例えば、ベンジル、１−フェネチル、２−フェネチル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチルなどが含まれる。
【００４１】
本明細書においてハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素原子などが挙げられる。
本明細書において「Ｃ１−１０アルキレン」とは、炭素数１〜１０の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキレン基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンなどが含まれる。
【００４２】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルチオ」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルチオ基を意味し、例えばビニルチオ、アリルチオなどが含まれる。
【００４３】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルスルホニル」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルスルホニル基を意味し、例えばビニルスルホニル、アリルスルホニルなどが含まれる。
【００４４】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルカルボニル」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルカルボニル基を意味し、例えばアクリロイル、メタクリロイルなどが含まれる。
【００４５】
本明細書において「Ｃ２−６アルキニルスルホニル」とは、アルキニル部分として既に定義したＣ２−６アルキニル基を有するアルキニルカルボニル基を意味し、例えばエチニルカルボニルなどが含まれる。
【００４６】
本明細書における「Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキル」には、例えばベンジルオキシメチルなどが含まれる。
本明細書における「Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル」には、例えばメトキシメチル、エトキシメチル、２−メトキシエチル、１−メトキシエチルなどが含まれる。
【００４７】
本明細書における「Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニル」には、例えばベンジルオキシカルボニルなどが含まれる。
本明細書における「ハロカルボニル」には、例えばクロロカルボニルなどが含まれる。
【００４８】
本明細書において「−ＳＯｑＲ５」には、例えば、−ＳＯ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルコキシスルフィニル、Ｃ１−６アルコキシスルホニル、スルファモイル、Ｃ１−６アルキルスルファモイル、ジ（Ｃ１−６アルキル）スルファモイルなどが含まれる。
【００４９】
本明細書において「Ｃ１−６アルキルチオ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１〜６のアルキル基を有するアルキルチオ基を意味し、例えば、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｉ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｓ−ブチルチオ、ｉ−ブチルチオ、ｔ−ブチルチオなどが含まれる。
【００５０】
上記式（Ｉ）および（Ｉａ）で表される化合物に関する本発明には、互変異性体、幾何異性体、光学異性体等の各種の立体異性体、およびそれらの混合物が含まれる。
本発明の化合物の塩とは、有機化学において通常使用されうる塩であれば特に限定されない。本発明化合物が塩基と形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。当該塩は、酸付加塩であってもよく、かかる塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸；および、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸等の有機酸酸との酸付加塩が挙げられる。
【００５１】
更に、本発明化合物には、水和物、各種溶媒和物や結晶多形等も含まれる。
本発明に係る式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、例えば、以下のスキームに示す工程により合成することができる。
【００５２】
【化９】
【００５３】
［式中、Ｒ１、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＹは既に定義したとおりであるか、または含まれる官能基が適切な保護基により保護されていてもよく、ｐは１〜５から選択される整数であり、Ｒ４１はＣ１−６アルキルである］
本発明の化合物は、化合物１−１とアセト酢酸エステルを酸性条件下で縮合させることにより調製することができる。ここで、化合物１−１に反応性の官能基が含まれる場合はこれを適当な保護基で保護した後に上記反応を行い、その後適当な脱保護条件に付すことにより、目的の化合物１−２を得ることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、スルファミン酸、過塩素酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。上記工程は、特に限定はされないが、例えば０〜１００℃、好ましくは２０〜３０℃の反応温度、および例えば０．１〜２４時間、好ましくは１〜８時間の反応時間で行うことができる。
【００５４】
【化１０】
【００５５】
［式中、Ｒ１、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＹは既に定義したとおりであるか、または含まれる官能基が適切な保護基により保護されていてもよく、ｐは１〜５から選択される整数であり、Ｒ４２はＣ１−６アルキルである］
本発明の化合物は、化合物２−１とβ−ケトカルボン酸エステルを酸性条件下で縮合させることによっても調製することができる。ここで、化合物１−１またはβ−ケトカルボン酸エステルに反応性の官能基が含まれる場合はこれを適当な保護基で保護した後に上記反応を行い、その後適当な脱保護条件に付すことにより、目的の化合物２−２を得ることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、スルファミン酸、過塩素酸、トルエンスルホン酸などが挙げられる。上記工程は、特に限定はされないが、例えば０〜１００℃、好ましくは２０〜３０℃の反応温度、および例えば０．１〜２４時間、好ましくは１〜８時間の反応時間で行うことができる。
【００５６】
本発明のポリマーは、上記式（ＩＩ）で表される繰り返し単位を有する限りにおいて、特に限定はされないが、例えば、ポリエチレン、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸アミド、ポリアクリル酸エステル、ポリスチレン、ポリスチレン誘導体などとのコポリマーであってもよい。
【００５７】
本発明のポリマーは、当業者に周知の通常の重合条件、好ましくはラジカル重合の条件を使用して調製することができる。使用する反応溶媒としては、例えば、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ベンゼン、メタノールなどが挙げられる。使用するラジカル開始剤としては、例えば、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（以下、ＡＩＢＮとも称する）、過酸化ベンゾイル、過硫酸アンモニウムを使用することができる。該重合反応の条件は使用するモノマーおよびの量などに依存して決定されるが、例えば０〜１００℃、好ましくは５０〜７０℃の反応温度、および例えば１〜２４時間、好ましくは８〜１２時間の反応時間で行うことができる。
【００５８】
本発明に係る式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、蛍光標識化試薬および当該試薬を調製するための合成中間体として使用されうる。例えば、式（Ｉ）および（Ｉａ）においてＹが−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニルである化合物は、ヒドロキシ基またはアミノ基を含む化合物の蛍光標識化に使用することができる。特にＹが−ＮＣＳである化合物はペプチドまたはタンパク質中のリシン残基などの修飾による蛍光標識化に使用することができる。同様に、Ｙがカルボキシである化合物を、適当な試薬を用いて活性エステルに変換し、ペプチドまたはタンパク質の蛍光標識化に使用することができる。ここで、用いられ得る活性エステル化試薬としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ′−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド、ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、ペンタフルオロフェノールなどが挙げられる。
【００５９】
Ｙにメルカプト基を含む化合物は、二重結合への付加反応による分子中に二重結合を含む化合物の蛍光標識化に使用することができる。また、システイン残基などとＳ−Ｓ結合を形成することによるペプチドまたはタンパク質の蛍光標識化に使用することもできる。
【００６０】
Ｙに二重結合または三重結合を含む化合物（例えば、Ｙがマレイミド、アクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシである化合物）は、システイン残基などとの付加反応によりペプチドまたはタンパク質の標識化に使用することができる。
【００６１】
Ｙにアミノ酸構造を有する化合物は、蛍光標識化されたペプチドまたはタンパク質の合成に使用することができる。
蛍光標識化試薬は、本発明の化合物に加えて、任意の添加物（例えば、溶媒、安定化剤など）を含んでいてもよい。
【実施例】
【００６２】
以下、本発明の好適な実施例についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
試薬およびデータ測定
試薬は特に言及がない限り購入したものをさらに精製することなく使用した。１Ｈ−ＮＭＲは、ＢＲＵＫＥＲ ＡＶＡＮＣＥ４００スペクトロメーター（４００ＭＨｚ）を使用して測定し、ケミカルシフトはｐｐｍで表示した。質量分析はＢＲＵＫＥＲ ｍｉｃｒＯＴＯＦ−０５スペクトロメーターを使用し、元素分析はＹａｎａｃｏ ＭＴ−６ ＣＨＮ ＣＯＲＤＥＲスペクトロメーターを使用して行った。融点の測定はＹａｎａｃｏ Ｍｉｃｒｏ Ｍｅｌｔｉｎｇ Ｐｏｉｎｔ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＭＰ−Ｊ３を使用して測定し、補正は行わなかった。数平均分子量、重量平均分子量はＪＡＳＣＯ ＧＰＣ ｓｙｓｔｅｍ（ＪＡＳＣＯ ＰＵ−２０８０ポンプ、ＪＡＳＣＯ ＲＩ−２０３１示差屈折計、ＪＡＳＣＯ ＣＯ−２０６０カラムオーブン、Ｓｈｏｄｅｘ ＧＰＣ ＫＤ−８０６Ｍカラム）を使用し、ポリスチレン標準試料により得られる較正曲線を用いて算出した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーには、関東化学ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０Ｎ（４０−５０μｍ）を使用した。
【００６３】
［実施例１］８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００６４】
【化１１】
【００６５】
７−メトキシ−２−ナフトール（２００ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を８０％硫酸水溶液（１．５ｍＬ）に懸濁させ、氷浴下３−オキソブタン酸エチル（０．４ｍＬ）を加えた後、室温にて１４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン−ヘキサン＝１：１→塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を白色結晶（８４ｍｇ，３０％）として得た。
【００６６】
融点 ２２２〜２２３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．９７（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．５５（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｓ），６．２７（１Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），２．５１（３Ｈ，ｓ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ２４１［Ｍ＋Ｈ］＋；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１２Ｏ３） Ｃ：７４．９９、Ｈ：５．０３；測定値 Ｃ：７４．８３、Ｈ：５．３１。
【００６７】
［実施例２］４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００６８】
【化１２】
【００６９】
７−メトキシ−２−ナフトール（１ｇ，５．７４ｍｍｏｌ）を８０％硫酸水溶液（８ｍＬ）に懸濁させ、氷浴下４−クロロアセト酢酸エチル（２ｍＬ）を加えた後、室温にて１４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（７１ｍｇ，４．５％）として得た。
【００７０】
融点 ２３４−２３５℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０７（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｓ），７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｓ），４．７８（２Ｈ，ｓ），３．９７（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１２ＣｌＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋２７５．０４７５；測定値２７５．０４８６；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１１ＣｌＯ３） Ｃ：６５．５８、Ｈ：４．０４；測定値 Ｃ：６５．０１、Ｈ：４．１７。
【００７１】
［実施例３］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート
【００７２】
【化１３】
【００７３】
４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン（５０ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）とトリエチルアミン（１ｍＬ）の混合液に懸濁させ、アクリル酸（１ｍＬ）を加えた後、８０℃にて１３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（４５ｍｇ，８０％）として得た。
【００７４】
融点 ２３７−２３８℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．９５（１Ｈ，ｓ），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｓ），７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｓ），６．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．４，１０．４Ｈｚ），６．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），５．５１（２Ｈ，ｓ），３．９６（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１８Ｈ１５Ｏ５）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３１１．０９２０、測定値３１１．０９１９。
【００７５】
［実施例４］４−ヒドロキシメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００７６】
【化１４】
【００７７】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（１０ｍｇ，０．０３２２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解させ、水酸化ナトリウム水溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ、５ｍＬ）を加えた後、６０℃にて１時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン−メタノール＝１０：１を使用）にて精製を行い、表題の化合物を白色結晶（５．９ｍｇ，７１％）として得た。
【００７８】
融点 ２１０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．２４（１Ｈ，ｓ），７．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４Ｈｚ），６．５７（１Ｈ，ｓ），５．０６（２Ｈ，ｓ），３．９８（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１５Ｈ１３Ｏ４）［Ｍ＋Ｈ］＋ ２５７．０８１４；測定値２５７．０８５１。
【００７９】
［実施例５］８−メトキシ−４−［メチル（オクチル）アミノ］メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００８０】
【化１５】
【００８１】
４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン（１０ｍｇ，０．０３６４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、Ｎ−メチル−ｎ−オクチルアミン（５００μＬ）、トリエチルアミン（４．４ｍｇ）を加えた後４０℃にて３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒は塩化メチレン-メタノール＝１０：１）にて精製を行い、白色結晶（１３．２ｍｇ，９５％）を得た。
【００８２】
融点９９−１００℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３１（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．４Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），３．７０（２Ｈ，ｓ），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．２９（３Ｈ，ｓ），１．５６（２Ｈ，ｍ），１．３０（１０Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ２４Ｈ３２ＮＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８２．２３８２；測定値３８２．２３７４。
【００８３】
［実施例６］９−ブロモ−８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００８４】
【化１６】
【００８５】
８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−２−オン（３０ｍｇ，０．１２５ｍｍｏｌ）を四塩化炭素（２ｍＬ）に溶解させ、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（２５ｍｇ，１．１ｅｑ）、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（１ｍｇ）を加えた。溶液の溶存酸素を除去した後、７０℃にて２時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン：ｎ−ヘキサン＝３：１を使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（２５ｍｇ，６３％）として得た。
【００８６】
融点 ＞２８０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１２（１Ｈ，ｓ），８．０４（１Ｈ，ｓ），７．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．３３（１Ｈ，ｓ），４．０７（３Ｈ，ｓ），２．５４（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１５Ｈ１２ＢｒＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３１８．９９７０；測定値３１８．９９５２；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１１ＢｒＯ３） Ｃ：５６．４５、Ｈ：３．４７；測定値 Ｃ：５６．７２、Ｈ：３．７３。
【００８７】
［実施例７］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アクリルアミド／Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド共重合体
【００８８】
【化１７】
【００８９】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ；以下、ＢＣとも称する）、Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アクリルアミド（３９．１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ；以下、ＤＭＡＰＡＭとも称する）、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド（２５５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ；以下、ＮＮＰＡＭとも称する）、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ、以下、ＡＩＢＮとも称する）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１６８ｍｇ、５６％）として得た。
【００９０】
数平均分子量：３９１００、重量平均分子量：９６１００、共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＤＭＡＰＡＭ：ＮＮＰＡＭ＝０．０５８：１０：９０。なお、共重合体におけるＤＭＡＰＡＭユニットとＮＮＰＡＭユニットの割合は１Ｈ−ＮＭＲ測定における積分値より、ＢＣユニットの割合はメタノール中の吸光度を８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オンの吸光度（３４３ｎｍにおいてモル吸光係数１８４００Ｍ−１ｃｍ−１）と比較することにより算出した。
【００９１】
［実施例８］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド共重合体
【００９２】
【化１８】
【００９３】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド（ＮＮＰＡＭ、２８３ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１９４ｍｇ、６８％）として得た。
【００９４】
数平均分子量；３７８００，重量平均分子量；８７１００，共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＮＰＡＭ＝０．０５０：１００。
【００９５】
［実施例９］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−イソプロピルアクリルアミド共重合体
【００９６】
【化１９】
【００９７】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（２８３ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ；以下、ＮＩＰＡＭとも称する）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（ジオキサン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（２１９ｍｇ、７６％）として得た。
【００９８】
数平均分子量：５１５００，重量平均分子量：１４８０００，共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＩＰＡＭ＝０．０４９：１００。
【００９９】
［実施例１０］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド共重合体
【０１００】
【化２０】
【０１０１】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド（ＮＩＰＭＡＭ、３１８ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ，２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて１６時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ｎ−ヘキサン１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１５０ｍｇ、４７％）を得た。
【０１０２】
数平均分子量：１５６００、重量平均分子量：２９９０００、共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＩＰＭＡＭ＝０．１４：１００。
【０１０３】
蛍光特性測定
実施例１で製造した化合物（以下、化合物１と称する）の吸光および蛍光特性を以下の手順により測定した。吸光特性の試験には、ＪＡＳＣＯ Ｖ−５５０紫外可視光分光光度計を使用した。紫外部吸収スペクトル用純溶媒を用い、２５℃、濃度１０μＭの条件で測定を行った。蛍光特性の試験には、ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用した。蛍光分析用純溶媒を用い、２５℃、濃度１〜１０μＭの条件で測定を行った。各溶媒を用いた際の励起波長は、最大吸収波長とし、蛍光量子収率の算出には硫酸キニーネを標準試料（蛍光量子収率：０．５４６）として用いた。
【０１０４】
測定結果を表１および図１に示す。
【０１０５】
【表１】
【０１０６】
化合物１は非極性溶媒であるヘキサン中では全く蛍光を示さない一方で、極性溶媒であるメタノールや、水−メタノールの混合液中では強い蛍光性を示した。さらに、極性溶媒中における蛍光波長は約４６０ｎｍ以上であり、溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する性質が知られている他の蛍光試薬と比較しても長波長であることが判明した。吸収波長と蛍光波長の差であるストークスシフトは、極性溶媒中において１００ｎｍ以上であった。また、化合物１は、上記の溶媒中で光照射下、安定に存在しうることを確認した。
【０１０７】
安定性試験
化合物１のアルカリ条件下における安定性試験を以下の手順で行った。ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用し、溶媒として０．０１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ９）を用いた。化合物２の初期濃度は１０μＭとし、測定中、化合物１の最大励起波長である３４７ｎｍの光を連続照射した。
【０１０８】
試験結果を図２に示す。ｐＨ９、６０℃の条件下、化合物１は少なくとも２．５時間蛍光強度に認められず、塩基性条件下における光照射に対しても化合物１は安定であることが確認された。
【０１０９】
感熱応答性試験
実施例７、８、９および１０で製造した共重合体（それぞれ以下、化合物２、３、４および５と称する）の感熱応答性試験を以下の手順で行った。ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用し、溶媒として０．０５Ｍフタル酸緩衝液（ｐＨ４）を用いた。化合物２、３，４および５の初期濃度は０．０１ｗ／ｖ％とし、励起波長は３４５ｎｍとした。溶液の温度制御にはＪＡＳＣＯ ＥＴＣ−２７３Ｔ水冷ペルチェ式恒温セルホルダを使用し、付属の熱電対により温度を測定した。
試験結果を図３に示す。いずれの化合物も、低温領域で強い蛍光を示し、温度の変化に鋭敏に反応して蛍光強度が変化することが確認された。この挙動は、本発明により導入された蛍光性官能基が、温度上昇に伴う高分子の構造変化による官能基近傍の極性低下を感知していることによると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【０１１０】
【図１】化合物１のメタノール中における吸収スペクトル、および酢酸エチル、アセトニトリルおよびメタノールの各溶媒中における蛍光スペクトルの測定結果の一例を示す図である。
【図２】化合物１のアルカリ条件下における安定性試験結果の一例を示す図である。
【図３】化合物２〜５の蛍光強度の感熱応答性の試験結果の一例である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンゾクロメノン化合物、および当該化合物を含む蛍光標識化用試薬に関する。さらに、本発明は、当該化合物より調製されるポリマー、当該ポリマーを含む蛍光試薬、および当該ポリマーの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
蛍光法は一分子でも検出可能なほど高感度であり、現在までに多くの蛍光試薬が開発されている。最近、蛍光試薬の新しい利用例として、外部刺激に伴うタンパク質や合成高分子の構造変化を環境応答性の蛍光団のラベルによって追跡する報告や、その蛍光応答から外部刺激の程度を測定する報告がなされている（非特許文献１〜４）。現在のところ、これらの研究には、溶媒の極性低下に伴い蛍光量子収率（Φｆ）が増加する環境応答性の蛍光団が用いられており、高分子の局所的な極性が低下する場合に蛍光シグナルが得られる。逆に局所的な極性の増加に対しては、それに伴ってΦｆ値が増加する蛍光団の適用が望ましい。
【０００３】
溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する環境応答性の蛍光団としては、ピレン−３−カルボキサルデヒドおよび７−メトキシ−４−メチルクマリンの二例が報告されている（非特許文献５および６）。しかし、前者は安定性の面からさらなる官能基の導入に制約があり標識化試薬としての利用が難しい。後者は吸収、蛍光波長が３１８、３８０ｎｍ程度と短波長であるため、測定系に共存する芳香環により検出妨害を受けやすいという欠点を有している。
【０００４】
【非特許文献１】Ｃｏｈｅｎ，Ｂ．Ｅ．；ＭｃＡｎａｎｅｙ，Ｔ．Ｂ．；Ｐａｒｋ，Ｅ．Ｓ．；Ｊａｎ，Ｙ．Ｎ．；Ｂｏｘｅｒ，Ｓ．Ｇ．；Ｊａｎ，Ｌ．Ｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２年，第２９６巻，第１７００〜１７０３頁
【非特許文献２】Ｗａｄａ，Ａ．；Ｍｉｅ，Ｍ．；Ａｉｚａｗａ，Ｍ．；Ｌａｈｏｕｄ，Ｐ．；Ｃａｓｓ，Ａ．Ｅ．Ｇ．；Ｋｏｂａｔａｋｅ，Ｅ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３年，第１２５巻，第１６２２８〜１６２３４頁
【非特許文献３】Ｕｃｈｉｙａｍａ，Ｓ．；Ｋａｗａｉ，Ｎ．；ｄｅ Ｓｉｌｖａ，Ａ．Ｐ．；Ｉｗａｉ，Ｋ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００４年，第１２６巻，第３０３２〜３０３３頁
【非特許文献４】Ｋａｌｙａｎａｓｕｎｄａｒａｍ，Ｋ．；Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｋ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９７７年，第８１巻，第２１７６〜２１８０頁
【非特許文献５】ｄｅ Ｍｅｌｏ，Ｊ．Ｓ．Ｓ．；Ｂｅｃｋｅｒ，Ｒ．Ｓ．；Ｍａcａｎｉｔａ，Ａ．Ｌ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９９４年，第９８巻，第６０５４〜６０５８頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、蛍光官能基を含む新規な化合物、特に、溶媒の極性増加など、周囲の環境の変化に伴ってΦｆ値が変動する環境応答性の蛍光特性を有する化合物、ならびに当該化合物を含む蛍光標識化試薬、および蛍光試薬を提供することである。さらに、本発明の目的は、蛍光官能基を含む新規なポリマーおよび当該ポリマーの新規な用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を達成するために鋭意研究を進めたところ、溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する環境応答性の蛍光特性を有する２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−２−オン化合物を見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
本発明の１つの側面によれば、式（Ｉ）：
【０００８】
【化１】
【０００９】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩が提供される。
【００１０】
式（Ｉ）において、基−Ｑ−ＹおよびＲ１は、ベンゾクロメノン環に含まれる置換可能ないずれの炭素原子に連結していてもよい。
本発明の別の側面によれば、式（Ｉａ）：
【００１１】
【化２】
【００１２】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙは既に定義したとおりである］
で表される、上記の化合物またはその塩が提供される。
本発明の１つの態様において、上記式（Ｉ）または（Ｉａ）においてＸはＯであってもよい。また本発明の１つ態様において、Ｒ１は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択されてもよい。
【００１３】
本発明の１つの態様において、Ｙは、ハロゲン原子またはヒドロキシであってもよい。また、本発明の別の態様において、Ｙがアクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシであってもよい。
【００１４】
本発明の別の側面によれば、 式（ＩＩ）：
【００１５】
【化３】
【００１６】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＸ１は既に定義したとおりであり；
Ｒ３は水素原子またはＣ１−６アルキル（例えば、メチル）である］
で表される繰り返し単位を含むポリマーが提供される。本発明の１つの態様において、本発明のポリマーは、式（ＩＩＩ）：
【００１７】
【化４】
【００１８】
［式中、Ｒ３１は水素原子またはＣ１−６アルキル（例えば、メチル）であり；
Ｒ３２はヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノであり、ここで当該Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノは、それぞれ独立に、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される繰り返し単位をさらに含んでいてもよい。本発明の１つの態様において、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位および式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位からなるポリマーもまた提供される。
【００１９】
本発明の１つの側面によれば、式（ＩＩａ）：
【００２０】
【化５】
【００２１】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｒ３、ＱおよびＸ１は既に定義したとおりである］
で表されるモノマー、および式（ＩＩＩａ）：
【００２２】
【化６】
【００２３】
（ＩＩＩａ）
［式中、Ｒ３１およびＲ３２は既に定義したとおりである］
で表されるモノマーから調製されうるポリマーが提供される。
【００２４】
本発明のポリマーにおいて、分子中に含まれる全繰り返し単位数に対する、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位数の比は、特に限定はされないが、例えば０．００１〜１０％、好ましくは０．０１〜１％であってもよい。また、本発明のポリマーの重量平均分子量は、特には限定されないが、例えば５０００〜１００００００、好ましくは１００００〜２０００００である。
【００２５】
本発明の別の側面によれば、上記式（Ｉ）または（Ｉａ）で表される化合物を含む、蛍光標識化用試薬が提供される。
さらに、本発明の別の側面によれば、上記のポリマーを含む蛍光試薬が提供される。当該蛍光試薬の用途は特には限定されないが、例えば液体の温度の測定に使用されうる。
【００２６】
さらに、本発明の別の側面によれば、式（Ｉｂ）：
【００２７】
【化７】
【００２８】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩を含む、蛍光試薬が提供される。
【００２９】
さらに、本発明の別の側面によれば、式（Ｉｄ）：
【００３０】
【化８】
【００３１】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙ１は既に定義したとおりである］
で表される化合物またはその塩を含む、既に記載の蛍光試薬が提供される。上記蛍光試薬は、例えば溶液の極性の変化の測定に使用されうる。
【００３２】
さらに、本発明の別の側面によれば、液体に前記蛍光試薬を溶解する工程；および励起光照射下、蛍光強度を測定する工程、を含む、液体の温度測定方法もまた提供される。
【発明の効果】
【００３３】
本発明の化合物は、蛍光標識化試薬または蛍光試薬として好適な特性を有する。特に本発明の化合物に含まれる蛍光官能基であるベンゾクロメノンイル基は、酸性条件下およびアルカリ性条件下でも安定であり、官能基導入のための種々の反応に適用可能である。また、本発明の化合物の蛍光波長は極性溶媒中で約４６０ｎｍ以上であり、蛍光の検出について測定系に共存する芳香環による影響を受けにくいという特性を有する。さらに、本発明の化合物は、溶媒の極性増加などの環境応答に伴って蛍光量子収率（Φｆ）が増加するという蛍光特性を有するので、当該化合物を含む溶液中の環境変化または当該化合物で標識化した分子の変化を追跡するための蛍光試薬としても使用することができる。
【発明の実施の形態】
【００３４】
以下、本発明を更に具体的に説明する。
本明細書において「Ｃ１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３−エチルブチル、および２−エチルブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロプロピルメチルなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−３アルキルなども含まれる。
【００３５】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニル」とは、炭素数２〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルケニル基を意味し、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル（アリル）、１−メチルビニル、シクロペンテニル、およびシクロヘキセニルなどが含まれ、例えば、Ｃ２−４アルケニルおよびＣ２−３アルケニルなども含まれる。
【００３６】
本明細書において「Ｃ２−６アルキニル」とは、炭素数２〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルケニル基を意味し、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル（プロパルギル）、２−シクロプロピルエチニルなどが含まれ、例えば、Ｃ２−４アルキニルおよびＣ２−３アルキニルなども含まれる。
【００３７】
本明細書において「Ｃ１−６アルコキシ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１〜６のアルキル基を有するアルキルオキシ基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、３−メチルブトキシ、２−メチルブトキシ、１−メチルブトキシ、１−エチルプロポキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、４−メチルペントキシ、３−メチルペントキシ、２−メチルペントキシ、１−メチルペントキシ、３−エチルブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、シクロプロピルメチルオキシなどが含まれ、例えば、Ｃ１−４アルコキシおよびＣ１−３アルコキシなども含まれる。また、本明細書において「Ｃ１−４アルコキシ」には、例えばＣ１−３アルコキシなども含まれる。
【００３８】
本明細書において「Ｃ１−６アルキルカルボニル」とは、アルキル部分として既に定義したＣ１−６アルキル基を有するアルキルカルボニル基を意味し、例えばＣ１−６アルキルカルボニルが含まれる。
【００３９】
本明細書において「Ｃ１−６アルコキシカルボニル」とは、アルコキシ部分として既に定義したＣ１−６アルキル基を有するアルコキシカルボニル基を意味し、例えばＣ１−３アルコキシカルボニルが含まれる。
【００４０】
本明細書において「Ｃ７−１４アラルキル」とはアリール基を含む炭素数が７〜１４のアリールアルキル基を意味し、例えば、ベンジル、１−フェネチル、２−フェネチル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチルなどが含まれる。
【００４１】
本明細書においてハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素原子などが挙げられる。
本明細書において「Ｃ１−１０アルキレン」とは、炭素数１〜１０の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキレン基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンなどが含まれる。
【００４２】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルチオ」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルチオ基を意味し、例えばビニルチオ、アリルチオなどが含まれる。
【００４３】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルスルホニル」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルスルホニル基を意味し、例えばビニルスルホニル、アリルスルホニルなどが含まれる。
【００４４】
本明細書において「Ｃ２−６アルケニルカルボニル」とは、アルケニル部分として既に定義したＣ２−６アルケニル基を有するアルケニルカルボニル基を意味し、例えばアクリロイル、メタクリロイルなどが含まれる。
【００４５】
本明細書において「Ｃ２−６アルキニルスルホニル」とは、アルキニル部分として既に定義したＣ２−６アルキニル基を有するアルキニルカルボニル基を意味し、例えばエチニルカルボニルなどが含まれる。
【００４６】
本明細書における「Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキル」には、例えばベンジルオキシメチルなどが含まれる。
本明細書における「Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル」には、例えばメトキシメチル、エトキシメチル、２−メトキシエチル、１−メトキシエチルなどが含まれる。
【００４７】
本明細書における「Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニル」には、例えばベンジルオキシカルボニルなどが含まれる。
本明細書における「ハロカルボニル」には、例えばクロロカルボニルなどが含まれる。
【００４８】
本明細書において「−ＳＯｑＲ５」には、例えば、−ＳＯ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルコキシスルフィニル、Ｃ１−６アルコキシスルホニル、スルファモイル、Ｃ１−６アルキルスルファモイル、ジ（Ｃ１−６アルキル）スルファモイルなどが含まれる。
【００４９】
本明細書において「Ｃ１−６アルキルチオ」とは、アルキル部分として既に定義した炭素数１〜６のアルキル基を有するアルキルチオ基を意味し、例えば、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｉ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、ｓ−ブチルチオ、ｉ−ブチルチオ、ｔ−ブチルチオなどが含まれる。
【００５０】
上記式（Ｉ）および（Ｉａ）で表される化合物に関する本発明には、互変異性体、幾何異性体、光学異性体等の各種の立体異性体、およびそれらの混合物が含まれる。
本発明の化合物の塩とは、有機化学において通常使用されうる塩であれば特に限定されない。本発明化合物が塩基と形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。当該塩は、酸付加塩であってもよく、かかる塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の鉱酸；および、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸等の有機酸酸との酸付加塩が挙げられる。
【００５１】
更に、本発明化合物には、水和物、各種溶媒和物や結晶多形等も含まれる。
本発明に係る式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、例えば、以下のスキームに示す工程により合成することができる。
【００５２】
【化９】
【００５３】
［式中、Ｒ１、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＹは既に定義したとおりであるか、または含まれる官能基が適切な保護基により保護されていてもよく、ｐは１〜５から選択される整数であり、Ｒ４１はＣ１−６アルキルである］
本発明の化合物は、化合物１−１とアセト酢酸エステルを酸性条件下で縮合させることにより調製することができる。ここで、化合物１−１に反応性の官能基が含まれる場合はこれを適当な保護基で保護した後に上記反応を行い、その後適当な脱保護条件に付すことにより、目的の化合物１−２を得ることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、スルファミン酸、過塩素酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。上記工程は、特に限定はされないが、例えば０〜１００℃、好ましくは２０〜３０℃の反応温度、および例えば０．１〜２４時間、好ましくは１〜８時間の反応時間で行うことができる。
【００５４】
【化１０】
【００５５】
［式中、Ｒ１、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＹは既に定義したとおりであるか、または含まれる官能基が適切な保護基により保護されていてもよく、ｐは１〜５から選択される整数であり、Ｒ４２はＣ１−６アルキルである］
本発明の化合物は、化合物２−１とβ−ケトカルボン酸エステルを酸性条件下で縮合させることによっても調製することができる。ここで、化合物１−１またはβ−ケトカルボン酸エステルに反応性の官能基が含まれる場合はこれを適当な保護基で保護した後に上記反応を行い、その後適当な脱保護条件に付すことにより、目的の化合物２−２を得ることもできる。使用する酸としては、例えば硫酸、スルファミン酸、過塩素酸、トルエンスルホン酸などが挙げられる。上記工程は、特に限定はされないが、例えば０〜１００℃、好ましくは２０〜３０℃の反応温度、および例えば０．１〜２４時間、好ましくは１〜８時間の反応時間で行うことができる。
【００５６】
本発明のポリマーは、上記式（ＩＩ）で表される繰り返し単位を有する限りにおいて、特に限定はされないが、例えば、ポリエチレン、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸アミド、ポリアクリル酸エステル、ポリスチレン、ポリスチレン誘導体などとのコポリマーであってもよい。
【００５７】
本発明のポリマーは、当業者に周知の通常の重合条件、好ましくはラジカル重合の条件を使用して調製することができる。使用する反応溶媒としては、例えば、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、ベンゼン、メタノールなどが挙げられる。使用するラジカル開始剤としては、例えば、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（以下、ＡＩＢＮとも称する）、過酸化ベンゾイル、過硫酸アンモニウムを使用することができる。該重合反応の条件は使用するモノマーおよびの量などに依存して決定されるが、例えば０〜１００℃、好ましくは５０〜７０℃の反応温度、および例えば１〜２４時間、好ましくは８〜１２時間の反応時間で行うことができる。
【００５８】
本発明に係る式（Ｉ）および（Ｉａ）の化合物は、蛍光標識化試薬および当該試薬を調製するための合成中間体として使用されうる。例えば、式（Ｉ）および（Ｉａ）においてＹが−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニルである化合物は、ヒドロキシ基またはアミノ基を含む化合物の蛍光標識化に使用することができる。特にＹが−ＮＣＳである化合物はペプチドまたはタンパク質中のリシン残基などの修飾による蛍光標識化に使用することができる。同様に、Ｙがカルボキシである化合物を、適当な試薬を用いて活性エステルに変換し、ペプチドまたはタンパク質の蛍光標識化に使用することができる。ここで、用いられ得る活性エステル化試薬としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ′−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド、ｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、ペンタフルオロフェノールなどが挙げられる。
【００５９】
Ｙにメルカプト基を含む化合物は、二重結合への付加反応による分子中に二重結合を含む化合物の蛍光標識化に使用することができる。また、システイン残基などとＳ−Ｓ結合を形成することによるペプチドまたはタンパク質の蛍光標識化に使用することもできる。
【００６０】
Ｙに二重結合または三重結合を含む化合物（例えば、Ｙがマレイミド、アクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシである化合物）は、システイン残基などとの付加反応によりペプチドまたはタンパク質の標識化に使用することができる。
【００６１】
Ｙにアミノ酸構造を有する化合物は、蛍光標識化されたペプチドまたはタンパク質の合成に使用することができる。
蛍光標識化試薬は、本発明の化合物に加えて、任意の添加物（例えば、溶媒、安定化剤など）を含んでいてもよい。
【実施例】
【００６２】
以下、本発明の好適な実施例についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
試薬およびデータ測定
試薬は特に言及がない限り購入したものをさらに精製することなく使用した。１Ｈ−ＮＭＲは、ＢＲＵＫＥＲ ＡＶＡＮＣＥ４００スペクトロメーター（４００ＭＨｚ）を使用して測定し、ケミカルシフトはｐｐｍで表示した。質量分析はＢＲＵＫＥＲ ｍｉｃｒＯＴＯＦ−０５スペクトロメーターを使用し、元素分析はＹａｎａｃｏ ＭＴ−６ ＣＨＮ ＣＯＲＤＥＲスペクトロメーターを使用して行った。融点の測定はＹａｎａｃｏ Ｍｉｃｒｏ Ｍｅｌｔｉｎｇ Ｐｏｉｎｔ Ａｐｐａｒａｔｕｓ ＭＰ−Ｊ３を使用して測定し、補正は行わなかった。数平均分子量、重量平均分子量はＪＡＳＣＯ ＧＰＣ ｓｙｓｔｅｍ（ＪＡＳＣＯ ＰＵ−２０８０ポンプ、ＪＡＳＣＯ ＲＩ−２０３１示差屈折計、ＪＡＳＣＯ ＣＯ−２０６０カラムオーブン、Ｓｈｏｄｅｘ ＧＰＣ ＫＤ−８０６Ｍカラム）を使用し、ポリスチレン標準試料により得られる較正曲線を用いて算出した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーには、関東化学ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０Ｎ（４０−５０μｍ）を使用した。
【００６３】
［実施例１］８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００６４】
【化１１】
【００６５】
７−メトキシ−２−ナフトール（２００ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を８０％硫酸水溶液（１．５ｍＬ）に懸濁させ、氷浴下３−オキソブタン酸エチル（０．４ｍＬ）を加えた後、室温にて１４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン−ヘキサン＝１：１→塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を白色結晶（８４ｍｇ，３０％）として得た。
【００６６】
融点 ２２２〜２２３℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．９７（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．５５（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．０９（１Ｈ，ｓ），６．２７（１Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），２．５１（３Ｈ，ｓ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ ２４１［Ｍ＋Ｈ］＋；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１２Ｏ３） Ｃ：７４．９９、Ｈ：５．０３；測定値 Ｃ：７４．８３、Ｈ：５．３１。
【００６７】
［実施例２］４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００６８】
【化１２】
【００６９】
７−メトキシ−２−ナフトール（１ｇ，５．７４ｍｍｏｌ）を８０％硫酸水溶液（８ｍＬ）に懸濁させ、氷浴下４−クロロアセト酢酸エチル（２ｍＬ）を加えた後、室温にて１４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（７１ｍｇ，４．５％）として得た。
【００７０】
融点 ２３４−２３５℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０７（１Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｓ），７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｓ），４．７８（２Ｈ，ｓ），３．９７（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１２ＣｌＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋２７５．０４７５；測定値２７５．０４８６；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１１ＣｌＯ３） Ｃ：６５．５８、Ｈ：４．０４；測定値 Ｃ：６５．０１、Ｈ：４．１７。
【００７１】
［実施例３］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート
【００７２】
【化１３】
【００７３】
４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン（５０ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍＬ）とトリエチルアミン（１ｍＬ）の混合液に懸濁させ、アクリル酸（１ｍＬ）を加えた後、８０℃にて１３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ、塩化メチレン（２００ｍＬ）を用いて抽出操作を行った。得られた塩化メチレン層を水（１００ｍＬ）で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。塩化メチレン溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレンを使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（４５ｍｇ，８０％）として得た。
【００７４】
融点 ２３７−２３８℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．９５（１Ｈ，ｓ），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｓ），７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｓ），６．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．４，１０．４Ｈｚ），６．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），５．５１（２Ｈ，ｓ），３．９６（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１８Ｈ１５Ｏ５）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３１１．０９２０、測定値３１１．０９１９。
【００７５】
［実施例４］４−ヒドロキシメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００７６】
【化１４】
【００７７】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（１０ｍｇ，０．０３２２ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）に溶解させ、水酸化ナトリウム水溶液（０．１ｍｏｌ／Ｌ、５ｍＬ）を加えた後、６０℃にて１時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン−メタノール＝１０：１を使用）にて精製を行い、表題の化合物を白色結晶（５．９ｍｇ，７１％）として得た。
【００７８】
融点 ２１０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ８．２４（１Ｈ，ｓ），７．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．４Ｈｚ），６．５７（１Ｈ，ｓ），５．０６（２Ｈ，ｓ），３．９８（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１５Ｈ１３Ｏ４）［Ｍ＋Ｈ］＋ ２５７．０８１４；測定値２５７．０８５１。
【００７９】
［実施例５］８−メトキシ−４−［メチル（オクチル）アミノ］メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００８０】
【化１５】
【００８１】
４−クロロメチル−８−メトキシ−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン（１０ｍｇ，０．０３６４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解させ、Ｎ−メチル−ｎ−オクチルアミン（５００μＬ）、トリエチルアミン（４．４ｍｇ）を加えた後４０℃にて３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒は塩化メチレン-メタノール＝１０：１）にて精製を行い、白色結晶（１３．２ｍｇ，９５％）を得た。
【００８２】
融点９９−１００℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３１（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｓ），７．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．４Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｓ），３．９５（３Ｈ，ｓ），３．７０（２Ｈ，ｓ），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．２９（３Ｈ，ｓ），１．５６（２Ｈ，ｍ），１．３０（１０Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ２４Ｈ３２ＮＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３８２．２３８２；測定値３８２．２３７４。
【００８３】
［実施例６］９−ブロモ−８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オン
【００８４】
【化１６】
【００８５】
８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−２−オン（３０ｍｇ，０．１２５ｍｍｏｌ）を四塩化炭素（２ｍＬ）に溶解させ、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（２５ｍｇ，１．１ｅｑ）、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（１ｍｇ）を加えた。溶液の溶存酸素を除去した後、７０℃にて２時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧乾固させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒として塩化メチレン：ｎ−ヘキサン＝３：１を使用）にて精製を行い、表題の化合物を黄色結晶（２５ｍｇ，６３％）として得た。
【００８６】
融点 ＞２８０℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．１２（１Ｈ，ｓ），８．０４（１Ｈ，ｓ），７．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．３３（１Ｈ，ｓ），４．０７（３Ｈ，ｓ），２．５４（３Ｈ，ｓ）；ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ 計算値（Ｃ１５Ｈ１２ＢｒＯ３）［Ｍ＋Ｈ］＋ ３１８．９９７０；測定値３１８．９９５２；元素分析：計算値（Ｃ１５Ｈ１１ＢｒＯ３） Ｃ：５６．４５、Ｈ：３．４７；測定値 Ｃ：５６．７２、Ｈ：３．７３。
【００８７】
［実施例７］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アクリルアミド／Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド共重合体
【００８８】
【化１７】
【００８９】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ；以下、ＢＣとも称する）、Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アクリルアミド（３９．１ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ；以下、ＤＭＡＰＡＭとも称する）、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド（２５５ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ；以下、ＮＮＰＡＭとも称する）、α，α−アゾビスイソブチロニトリル（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ、以下、ＡＩＢＮとも称する）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１６８ｍｇ、５６％）として得た。
【００９０】
数平均分子量：３９１００、重量平均分子量：９６１００、共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＤＭＡＰＡＭ：ＮＮＰＡＭ＝０．０５８：１０：９０。なお、共重合体におけるＤＭＡＰＡＭユニットとＮＮＰＡＭユニットの割合は１Ｈ−ＮＭＲ測定における積分値より、ＢＣユニットの割合はメタノール中の吸光度を８−メトキシ−４−メチル−２Ｈ−ベンソ［ｇ］クロメン−２−オンの吸光度（３４３ｎｍにおいてモル吸光係数１８４００Ｍ−１ｃｍ−１）と比較することにより算出した。
【００９１】
［実施例８］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド共重合体
【００９２】
【化１８】
【００９３】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド（ＮＮＰＡＭ、２８３ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１９４ｍｇ、６８％）として得た。
【００９４】
数平均分子量；３７８００，重量平均分子量；８７１００，共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＮＰＡＭ＝０．０５０：１００。
【００９５】
［実施例９］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−イソプロピルアクリルアミド共重合体
【００９６】
【化１９】
【００９７】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（２８３ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ；以下、ＮＩＰＡＭとも称する）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ、２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて８時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（ジオキサン５ｍＬ−ジエチルエーテル１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（２１９ｍｇ、７６％）として得た。
【００９８】
数平均分子量：５１５００，重量平均分子量：１４８０００，共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＩＰＡＭ＝０．０４９：１００。
【００９９】
［実施例１０］（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート／Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド共重合体
【０１００】
【化２０】
【０１０１】
（８−メトキシ−２−オキソ−２Ｈ−ベンゾ［ｇ］クロメン−４−イル）メチル アクリレート（７７６μｇ、２．５μｍｏｌ）、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド（ＮＩＰＭＡＭ、３１８ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＡＩＢＮ（４．１１ｍｇ，２５μｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、３０分間窒素ガスを通じることにより溶存酸素を除去した。その後、６０℃にて１６時間反応させ、反応溶液をジエチルエーテル（１００ｍＬ）に注いだ。得られた結晶を濾取し、再沈操作（アセトン５ｍＬ−ｎ−ヘキサン１００ｍＬ）にて精製を行い、表題の共重合体を白色結晶（１５０ｍｇ、４７％）を得た。
【０１０２】
数平均分子量：１５６００、重量平均分子量：２９９０００、共重合体の各ユニットの組成比 ＢＣ：ＮＩＰＭＡＭ＝０．１４：１００。
【０１０３】
蛍光特性測定
実施例１で製造した化合物（以下、化合物１と称する）の吸光および蛍光特性を以下の手順により測定した。吸光特性の試験には、ＪＡＳＣＯ Ｖ−５５０紫外可視光分光光度計を使用した。紫外部吸収スペクトル用純溶媒を用い、２５℃、濃度１０μＭの条件で測定を行った。蛍光特性の試験には、ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用した。蛍光分析用純溶媒を用い、２５℃、濃度１〜１０μＭの条件で測定を行った。各溶媒を用いた際の励起波長は、最大吸収波長とし、蛍光量子収率の算出には硫酸キニーネを標準試料（蛍光量子収率：０．５４６）として用いた。
【０１０４】
測定結果を表１および図１に示す。
【０１０５】
【表１】
【０１０６】
化合物１は非極性溶媒であるヘキサン中では全く蛍光を示さない一方で、極性溶媒であるメタノールや、水−メタノールの混合液中では強い蛍光性を示した。さらに、極性溶媒中における蛍光波長は約４６０ｎｍ以上であり、溶媒の極性増加に伴ってΦｆ値が上昇する性質が知られている他の蛍光試薬と比較しても長波長であることが判明した。吸収波長と蛍光波長の差であるストークスシフトは、極性溶媒中において１００ｎｍ以上であった。また、化合物１は、上記の溶媒中で光照射下、安定に存在しうることを確認した。
【０１０７】
安定性試験
化合物１のアルカリ条件下における安定性試験を以下の手順で行った。ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用し、溶媒として０．０１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ９）を用いた。化合物２の初期濃度は１０μＭとし、測定中、化合物１の最大励起波長である３４７ｎｍの光を連続照射した。
【０１０８】
試験結果を図２に示す。ｐＨ９、６０℃の条件下、化合物１は少なくとも２．５時間蛍光強度に認められず、塩基性条件下における光照射に対しても化合物１は安定であることが確認された。
【０１０９】
感熱応答性試験
実施例７、８、９および１０で製造した共重合体（それぞれ以下、化合物２、３、４および５と称する）の感熱応答性試験を以下の手順で行った。ＪＡＳＣＯ ＦＰ−６５００分光蛍光光度計を使用し、溶媒として０．０５Ｍフタル酸緩衝液（ｐＨ４）を用いた。化合物２、３，４および５の初期濃度は０．０１ｗ／ｖ％とし、励起波長は３４５ｎｍとした。溶液の温度制御にはＪＡＳＣＯ ＥＴＣ−２７３Ｔ水冷ペルチェ式恒温セルホルダを使用し、付属の熱電対により温度を測定した。
試験結果を図３に示す。いずれの化合物も、低温領域で強い蛍光を示し、温度の変化に鋭敏に反応して蛍光強度が変化することが確認された。この挙動は、本発明により導入された蛍光性官能基が、温度上昇に伴う高分子の構造変化による官能基近傍の極性低下を感知していることによると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【０１１０】
【図１】化合物１のメタノール中における吸収スペクトル、および酢酸エチル、アセトニトリルおよびメタノールの各溶媒中における蛍光スペクトルの測定結果の一例を示す図である。
【図２】化合物１のアルカリ条件下における安定性試験結果の一例を示す図である。
【図３】化合物２〜５の蛍光強度の感熱応答性の試験結果の一例である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩。
【請求項２】
式（Ｉａ）：
【化２】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙは請求項１に定義したとおりである］
で表される、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
ＸがＯである、請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
Ｒ１が、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
Ｙが、ハロゲン原子またはヒドロキシである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ｙがアクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項７】
式（ＩＩ）：
【化３】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＸ１は請求項１に定義したとおりであり；
Ｒ３は水素原子またはＣ１−６アルキルである］
で表される繰り返し単位を含むポリマー。
【請求項８】
式（ＩＩＩ）：
【化４】
［式中、Ｒ３１は水素原子またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ３２はヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノであり、ここで当該Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノは、それぞれ独立に、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される繰り返し単位をさらに含む、請求項７に記載のポリマー。
【請求項９】
分子中に含まれる全繰り返し単位数に対する、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位数の比が０．００１〜１０％である請求項７または８に記載のポリマー。
【請求項１０】
数平均分子量が５０００〜１００００００である、請求項７〜９のいずれか１項に記載のポリマー。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を含む、蛍光標識化用試薬。
【請求項１２】
請求項７〜１０のいずれか１項に記載のポリマーを含む、蛍光試薬。
【請求項１３】
式（Ｉｂ）：
【化５】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩を含む、蛍光試薬。
【請求項１４】
式（Ｉｄ）：
【化６】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙ１は請求項１３に定義したとおりである］
で表される化合物またはその塩を含む、請求項１３に記載の蛍光試薬。
【請求項１５】
液体の温度の測定に使用する、請求項１２に記載の蛍光試薬。
【請求項１６】
溶液の極性の変化の測定に使用する、請求項１３または１４に記載の蛍光試薬。
【請求項１７】
液体に請求項１２の蛍光試薬を溶解する工程；および励起光照射下、蛍光強度を測定する工程、を含む、液体の温度測定方法。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩。
【請求項２】
式（Ｉａ）：
【化２】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙは請求項１に定義したとおりである］
で表される、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
ＸがＯである、請求項１または２に記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
Ｒ１が、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
Ｙが、ハロゲン原子またはヒドロキシである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ｙがアクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項７】
式（ＩＩ）：
【化３】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、ＱおよびＸ１は請求項１に定義したとおりであり；
Ｒ３は水素原子またはＣ１−６アルキルである］
で表される繰り返し単位を含むポリマー。
【請求項８】
式（ＩＩＩ）：
【化４】
［式中、Ｒ３１は水素原子またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ３２はヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノであり、ここで当該Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノは、それぞれ独立に、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ１−１０アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−１０アルキル）アミノから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい］
で表される繰り返し単位をさらに含む、請求項７に記載のポリマー。
【請求項９】
分子中に含まれる全繰り返し単位数に対する、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位数の比が０．００１〜１０％である請求項７または８に記載のポリマー。
【請求項１０】
数平均分子量が５０００〜１００００００である、請求項７〜９のいずれか１項に記載のポリマー。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物を含む、蛍光標識化用試薬。
【請求項１２】
請求項７〜１０のいずれか１項に記載のポリマーを含む、蛍光試薬。
【請求項１３】
式（Ｉｂ）：
【化５】
［式中、Ｒ１は、独立に、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、−ＳＯｑＲ５、Ｃ１−６アルキル（当該アルキルは、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１１Ｒ１２、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、−ＮＲ１３Ｒ１４およびＣ１−６アルコキシカルボニルから選択され；
ｑは１〜２の整数から選択され；
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノ、Ｃ１−６アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−６アルキル）アミノであり；
ｎは１〜６の整数から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｒ２は、水素原子またはＣ１−６アルキル（当該アルキル基は、独立に、ハロゲン原子、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ１５Ｒ１６、−ＳＯ２ＯＨから選択される１以上の置換基により置換されていてもよい）であり；
Ｑは、Ｃ１−１０アルキレン基であり；
Ｙ１は、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、メルカプト、−ＮＣＳ、−ＮＣＯ、ハロカルボニル、カルボキシ、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、−ＮＲ１７Ｒ１８、マレイミド、Ｃ２−６アルケニルチオ、Ｃ２−６アルケニルスルホニル、−ＣＨ（ＮＨＲ２１）ＣＯＯＲ２２または−Ｘ１−Ｚであり；
Ｘ１は、ＯまたはＮＲ１９であり；
Ｚは、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ２−６アルケニルカルボニル、Ｃ２−６アルキニルカルボニル、または−（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨＲ２３）ＣＯＯＲ２４であり；
ｍは１〜６の整数から選択され；
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびＲ１９は、独立に、水素原子およびＣ１−６アルキルから選択され；
Ｒ２１およびＲ２３は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ７−１４アラルキルオキシカルボニルおよびフルオレン−９−イルメチルオキシカルボニルから選択され；
Ｒ２２およびＲ２４は、独立に、水素原子、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ７−１４アラルキル、Ｃ７−１４アラルキルオキシＣ１−６アルキルから選択される］
で表される化合物またはその塩を含む、蛍光試薬。
【請求項１４】
式（Ｉｄ）：
【化６】
［式中、Ｒ１、ｎ、Ｘ、Ｒ２、Ｑ、Ｙ１は請求項１３に定義したとおりである］
で表される化合物またはその塩を含む、請求項１３に記載の蛍光試薬。
【請求項１５】
液体の温度の測定に使用する、請求項１２に記載の蛍光試薬。
【請求項１６】
溶液の極性の変化の測定に使用する、請求項１３または１４に記載の蛍光試薬。
【請求項１７】
液体に請求項１２の蛍光試薬を溶解する工程；および励起光照射下、蛍光強度を測定する工程、を含む、液体の温度測定方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００７−２３８４６７（Ｐ２００７−２３８４６７Ａ）
【公開日】平成１９年９月２０日（２００７．９．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５９８０２（Ｐ２００６−５９８０２）
【出願日】平成１８年３月６日（２００６．３．６）
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年９月２０日（２００７．９．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年３月６日（２００６．３．６）
【出願人】（５０４１３７９１２）国立大学法人 東京大学 (1,942)
【Ｆターム（参考）】
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