本発明は、組成物およびそれらの製造の方法、ならびに哺乳類細胞の脱Ｎ−アセチルシアル酸抗原の増加における使用およびそのような細胞上のｄｅＮＡｃシアル酸抗原の増加を利用する方法を含む使用に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん細胞の脱Ｎ−アセチル化抗原を増加させる方法であって、
脱Ｎ−アセチルシアル酸抗原を有するがん細胞を、前記細胞の脱Ｎ−アセチルシアル酸抗原の量を増加させるのに有効な量のポリシアル酸誘導体を含む組成物と接触させる段階を含み、前記ポリシアル酸誘導体が実質的に非酸化で、精製されており、（ｉ）Ｎ−アセチルシアル酸および脱Ｎ−アセチルシアル酸残基の混合物ならびに（ｉｉ）エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチルシアル酸残基を含む、方法。
【請求項２】
前記がん細胞が神経芽腫細胞、白血病細胞または黒色腫細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞が対象に存在し、前記接触が前記対象に有効な量の前記組成物を投与する段階を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記投与が注入または局所注射によるものである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記投与ががん細胞を除去するための外科的介入の前である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記投与ががん細胞を除去するための外科的介入の時点または後である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
免疫療法、がん化学療法または放射線療法の少なくとも１つを前記対象に適用することをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
脱Ｎ−アセチル化シアル酸抗原を有する細胞に対する抗体の結合を促進する方法であって、
前記細胞上の前記抗原の量を増加させるように、脱Ｎ−アセチルシアル酸抗原を有する細胞をポリシアル酸誘導体を含む有効な量の組成物と接触させる段階を含み、前記ポリシアル酸誘導体が、実質的に非酸化で、精製されており、（ｉ）Ｎ−アセチルシアル酸および脱Ｎ−アセチルシアル酸残基の混合物、ならびに（ｉｉ）エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチルシアル酸残基を含み、
前記細胞を前記抗原に対して特異的な抗体と接触させて、前記細胞に対する前記抗体の結合を促進する段階を含む、方法。
【請求項９】
前記細胞に対する前記抗体の結合が細胞に対して細胞傷害性である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が結合体を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記結合体が検出可能な標識または細胞傷害性薬物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞ががん細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
対象における脱Ｎ−アセチルシアル酸抗原を有する細胞に対する抗体を誘発する方法であって、
前記細胞による前記抗原の発現を増大させるように、抗原を含む有効な量の免疫原性組成物を前記対象に投与する段階を含み、前記抗原が、（ｉ）Ｎ−アセチルシアル酸および脱Ｎ−アセチルシアル酸残基の混合物、ならびに（ｉｉ）エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチルシアル酸残基を有する実質的に非酸化で、精製されたポリシアル酸誘導体を含み、前記投与が、前記細胞に特異的に結合する前記対象における抗体の産生を誘発するのに有効である、方法。
【請求項１４】
がん細胞の生存能を低下させる方法であって、
がん細胞の生存能を低下させるように、前記細胞をポリシアル酸誘導体を含む有効な量の組成物と接触させる段階を含み、前記ポリシアル酸誘導体が還元端および非還元端を有し、前記ポリシアル酸誘導体が、（ｉ）Ｎ−アセチルシアル酸および脱Ｎ−アセチルシアル酸残基の混合物、ならびに（ｉｉ）前記非還元端においてエキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性である脱Ｎ−アセチルシアル酸残基を含む実質的に非酸化で、精製されたオリゴ糖である、方法。
【請求項１５】
前記がん細胞が神経芽腫細胞、白血病細胞または黒色腫細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリシアル誘導体がα（２→８）およびα（２→９）から選択されるグルコシド結合により連結された脱Ｎ−アセチルシアル酸およびＮ−アセチルシアル酸の少なくとも１つの二量体を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ポリシアル誘導体が約２〜１０の重合度を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリシアル誘導体が約２〜５の重合度を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記ポリシアル誘導体が約２〜４の重合度を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ポリシアル誘導体が約２の重合度を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記混合物が約１０％〜６０％の量の脱Ｎ−アセチルシアル残基を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記ポリシアル誘導体がポリシアル酸誘導体鎖当たり約１つの脱Ｎ−アセチルシアル残基を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記ポリシアル酸誘導体が結合体を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
前記非還元端脱Ｎ−アセチルシアル酸が、前記ポリシアル酸誘導体の非還元端において脱Ｎ−アセチルシアル酸抗原を形成するように、グリコシド結合を介して隣接Ｎ−アセチルシアル酸に連結している、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
前記脱Ｎ−アセチルシアル酸がノイラミン酸であり、前記Ｎ−アセチルシアル酸がＮ−アセチルノイラミン酸である、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ノイラミン酸および前記Ｎ−アセチルノイラミン酸の少なくとも１つが少なくとも１つのＯ−アセチル化基を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ポリシアル酸が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｋ１、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清グループＢおよび髄膜炎菌血清グループＣからなる群から選択される細菌の莢膜多糖ホモポリマーから得られる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２８】
前記細胞が対象に存在し、前記接触が前記対象に有効な量の前記組成物を投与する段階を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２９】
規定の重合度およびエキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチル残基を有する分離ポリシアル酸誘導体を製造する方法であって、
（ｉ）異なる重合度、（ｉｉ）Ｎ−アセチル残基および脱Ｎ−アセチル残基の異なる混合物、ならびに（ｉｉｉ）非還元端Ｎ−アセチルシアル酸残基をそれぞれが有するポリシアル酸誘導体の混合物を含む溶液を準備する段階、
前記溶液をイオン交換クロマトグラフィーにかけて、画分を得る段階、ならびに
１つまたは複数の前記画分から規定の重合度およびエキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチル残基を有するポリシアル酸誘導体を分離し、それにより前記分離ポリシアル酸誘導体を製造する段階を含む、方法。
【請求項３０】
前記イオン交換クロマトグラフィーが陰イオン交換クロマトグラフィーである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記分離ポリシアル酸誘導体が約２〜１０の重合度を有する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記分離ポリシアル酸誘導体が実質的に非酸化である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
請求項２９により製造される分離ポリシアル酸誘導体。
【請求項３４】
請求項３３に記載の分離ポリシアル酸誘導体を含む医薬組成物。
【請求項３５】
実質的に非酸化であり、（ｉ）Ｎ−アセチルシアル酸および脱Ｎ−アセチルシアル残基の混合物、ならびに（ｉｉ）エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性のある非還元端脱Ｎ−アセチル残基を含む分離ポリシアル酸誘導体を含み、非還元端Ｎ−アセチルシアル酸残基を有するポリシアル酸を実質的に含まない、組成物。
【請求項３６】
前記分離ポリシアル誘導体がα（２→８）およびα（２→９）から選択されるグルコシド結合により連結された脱Ｎ−アセチルシアル酸およびＮ−アセチルシアル酸の少なくとも１つの二量体を含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記分離ポリシアル誘導体が約２〜１０の重合度を有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
前記分離ポリシアル誘導体が約２〜５の重合度を有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３９】
前記分離ポリシアル誘導体が約２〜４の重合度を有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４０】
前記分離ポリシアル酸誘導体が約２の重合度を有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４１】
前記非還元端脱Ｎ−アセチルシアル酸残基がグリコシド結合を介してＮ−アセチルシアル酸残基に連結している、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４２】
前記混合物が約１０％〜６０％の量の脱Ｎ−アセチルシアル残基を含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４３】
前記分離ポリシアル誘導体がポリシアル酸誘導体鎖当たり約１つの脱Ｎ−アセチルシアル残基を有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４４】
前記分離ポリシアル酸誘導体が結合体を含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４５】
前記脱Ｎ−アセチルシアル酸がノイラミン酸であり、前記Ｎ−アセチルシアル酸がＮ−アセチルノイラミン酸である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４６】
前記ノイラミン酸および前記Ｎ−アセチルノイラミン酸の少なくとも１つが少なくとも１つのＯ−アセチル化基を含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記分離ポリシアル酸誘導体が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｋ１、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清グループＢおよび髄膜炎菌血清グループＣからなる群から選択される細菌の莢膜多糖ホモポリマーから得られる、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
ポリシアル酸誘導体を含む凝集体を製造する方法であって、
実質的に非酸化で、精製されたポリシアル酸誘導体を凝集体を形成するように凝集条件下におく段階を含み、前記ポリシアル酸誘導体が（ｉ）Ｎ−アセチルおよび脱Ｎ−アセチル残基の混合物（前記脱Ｎ−アセチル残基が前記混合物の約１０％〜８０％を含む）ならびに（ｉｉ）エキソノイラミニダーゼによる分解に対して抵抗性である非還元端を含む、方法。
【請求項４９】
前記凝集条件が加熱または凝集賦形剤の添加である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記加熱が約３０℃〜７０℃である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記凝集賦形剤が水酸化アルミニウムである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記凝集体が粒子である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記粒子が顕微鏡的である、請求項５２に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公表番号】特表２０１０−５３２３８９（Ｐ２０１０−５３２３８９Ａ）
【公表日】平成２２年１０月７日（２０１０．１０．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１５２７９（Ｐ２０１０−５１５２７９）
【出願日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６９２３２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００６６１３
【国際公開日】平成２１年１月８日（２００９．１．８）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５０５３０７５６３）チルドレンズ　ホスピタル　アンド　リサーチ　センター　アット　オークランド (12)
【Ｆターム（参考）】