モナチンの生体内分泌のための生成物及び方法
【課題】モナチン甘味料の生体内生産のための生成物及び方法が提供される。
【解決手段】該生成物は、モナチンを分泌するように又はモナチン分泌を向上させるように遺伝子操作されている微生物；モナチンを生産するように遺伝子操作されている微生物；及び、モナチンを分泌するか又はモナチンの分泌を向上させるように且つモナチンを生産するように遺伝子操作されている微生物を包含する。該方法は、そのような遺伝子操作された微生物においてモナチンを生産することを含んで成る。
【解決手段】該生成物は、モナチンを分泌するように又はモナチン分泌を向上させるように遺伝子操作されている微生物；モナチンを生産するように遺伝子操作されている微生物；及び、モナチンを分泌するか又はモナチンの分泌を向上させるように且つモナチンを生産するように遺伝子操作されている微生物を包含する。該方法は、そのような遺伝子操作された微生物においてモナチンを生産することを含んで成る。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子操作された微生物を使ってモナチンを分泌させることを含んで成る方法。
【請求項２】
前記微生物が、モナチンを分泌することができる輸送体系の１又は複数の成分を発現又は過剰発現するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記微生物が、モナチンを分泌することができ且つ前記微生物にとって異種である輸送体系の１又は複数の成分を発現するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記微生物が、モナチンを分泌することができ且つ前記微生物にとって生来である輸送体系の１又は複数の成分を過剰発現するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記微生物が、モナチンを合成するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記微生物がAcrAB輸送体系、AcrAB輸送体系の同族体、EmrAB輸送体系、及びEmrAB輸送体系の同族体から選択された１又は複数の輸送体系を含有する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
微生物においてモナチンを生産する方法であって、前記モナチンを分泌することができる輸送体系又は前記モナチンを分泌することができる輸送体系の成分を発現又は過剰発現するように前記微生物を誘導し；そして前記微生物から前記モナチンを分泌させることを含んで成る方法。
【請求項８】
前記輸送体系がAcrAB輸送体系であり、そして前記誘導段階が培地にデカン酸ナトリウムを供給することを含んで成る、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記輸送体系がEmrAB輸送体系であり、そして前記誘導段階が培地にカルボニルシアニド−３−クロロフェニルヒドラゾンを供給することを含んで成る、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
前記モナチンの分泌が、適当な対照に比較して増加されたモナチン排出である、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
TolC, RobA, RamA, MarA, BaeR及びその同族体から選択された１又は複数のタンパク質を発現又は過剰発現するように遺伝子操作された微生物を使って、生体内でモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１２】
グルタミン酸栄養素要求体においてモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１３】
前記微生物が、モナチンを生産するように遺伝子操作されているか、モナチンを分泌することができる輸送体系の１又は複数の成分を発現又は過剰発現するように遺伝子操作されているか、あるいはその両方である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
リンゴ酸と引き換えにグルタミン酸又はグルタミン酸に類似した溶質をトランスロケートすることができる微生物においてモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１５】
前記誘導段階が培地にサリチル酸を供給することを含んで成る、請求項７記載の方法。
【請求項１６】
オーキシン輸送体、オーキシン輸送体の同族体又はその組み合わせを生産するかあるいは生産又は過剰発現するように遺伝子操作されている微生物において、モナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１７】
前記オーキシン輸送体の前記同族体が、図１に示されるようにAtPGP1, BrABB97035, StAAD10836, ZmPGP1_AAR00316, SbAAR10387, OsXP_483819, OS_CAD59580及びAtPGP19と共に整列した時に、図１に示される共通配列を有するアミノ酸配列を含んで成る、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記オーキシン輸送体の前記同族体が、
PXGKTXAXVGXSGSGKSTVVSLXERFYXPXXGXXXLDG、LXLXXLRXQIGLVXQEPXLFATXIXENXLG、及びQVGERGXQLSGGQKQRIAIARAMLXXPXILLLDEATSALDから選択された１又は複数のアミノ酸配列を含んで成り、ここでＸは、図１Ｂに示されるように前記アミノ酸配列と共に整列した時にAtPGP1, BrABB97035, StAAD10836, ZmPGP1_AAR00316, SbAAR10387, OsXp_483819, OS_CAD59580及びAtPGP19のいずれか１つの指摘の位置にあるアミノ酸である、請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
前記オーキシン輸送体の前記同族体が、
LPXGYXTXVGERGVQLSGGQXQRIAIARA及びLLDEATSALDAESEXXXQEALから選択された１又は複数のアミノ酸配列を含んで成り、ここでＸは、図１Ｄに示されるように前記アミノ酸配列と共に整列した時にAtPGP1, BrABB97035, StAAD10836, ZmPGP1_AAR00316, SbAAR10387, OsXp_483819, OS_CAD59580及びAtPGP19のいずれか１つの指摘の位置にあるアミノ酸である、請求項１６記載の方法。
【請求項２０】
cysH遺伝子を欠失している微生物においてモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項２１】
前記微生物がcysH遺伝子を欠失するように遺伝子操作されている、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
遺伝子操作前の微生物に比較してその細胞エンベロープ中のミコール酸のレベルが不足または低下するように遺伝子操作されている微生物を使って、モナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項２３】
前記微生物がパントエ（Pantoea）科のメンバーである、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
前記微生物がコリネバクテリウム（Corynebacterium）科のメンバーである、請求項1記載の方法。
【請求項２５】
前記微生物が、適当な対照に比較してモナチン生産、モナチン排出又はモナチン生産とモナチン排出の両方を増加させる化合物に暴露される、請求項７記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物がアンピシリン、エタムブトール、ピルビン酸塩、Tween及びその組み合わせから選択される、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記遺伝子操作された微生物がYhcP(AaeB)、YccS、YjcQ及びYhfKから選択された１又は複数の輸送体を欠いている、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
モナチンを分泌する輸送体効果を確かめることにより、モナチン輸送体を同定することを含んで成る方法。
【請求項２９】
モナチンを分泌することができる遺伝子操作された微生物。
【請求項３０】
前記微生物がモナチンを生産又は過剰生産するように遺伝子操作されている、請求項２９記載の微生物。
【請求項３１】
前記微生物が、モナチンを分泌することができる１又は複数の輸送体系を発現又は過剰発現するように遺伝子操作されている、請求項２９記載の微生物。
【請求項１】
遺伝子操作された微生物を使ってモナチンを分泌させることを含んで成る方法。
【請求項２】
前記微生物が、モナチンを分泌することができる輸送体系の１又は複数の成分を発現又は過剰発現するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記微生物が、モナチンを分泌することができ且つ前記微生物にとって異種である輸送体系の１又は複数の成分を発現するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記微生物が、モナチンを分泌することができ且つ前記微生物にとって生来である輸送体系の１又は複数の成分を過剰発現するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記微生物が、モナチンを合成するように遺伝子操作されている、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記微生物がAcrAB輸送体系、AcrAB輸送体系の同族体、EmrAB輸送体系、及びEmrAB輸送体系の同族体から選択された１又は複数の輸送体系を含有する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
微生物においてモナチンを生産する方法であって、前記モナチンを分泌することができる輸送体系又は前記モナチンを分泌することができる輸送体系の成分を発現又は過剰発現するように前記微生物を誘導し；そして前記微生物から前記モナチンを分泌させることを含んで成る方法。
【請求項８】
前記輸送体系がAcrAB輸送体系であり、そして前記誘導段階が培地にデカン酸ナトリウムを供給することを含んで成る、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記輸送体系がEmrAB輸送体系であり、そして前記誘導段階が培地にカルボニルシアニド−３−クロロフェニルヒドラゾンを供給することを含んで成る、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
前記モナチンの分泌が、適当な対照に比較して増加されたモナチン排出である、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
TolC, RobA, RamA, MarA, BaeR及びその同族体から選択された１又は複数のタンパク質を発現又は過剰発現するように遺伝子操作された微生物を使って、生体内でモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１２】
グルタミン酸栄養素要求体においてモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１３】
前記微生物が、モナチンを生産するように遺伝子操作されているか、モナチンを分泌することができる輸送体系の１又は複数の成分を発現又は過剰発現するように遺伝子操作されているか、あるいはその両方である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
リンゴ酸と引き換えにグルタミン酸又はグルタミン酸に類似した溶質をトランスロケートすることができる微生物においてモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１５】
前記誘導段階が培地にサリチル酸を供給することを含んで成る、請求項７記載の方法。
【請求項１６】
オーキシン輸送体、オーキシン輸送体の同族体又はその組み合わせを生産するかあるいは生産又は過剰発現するように遺伝子操作されている微生物において、モナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項１７】
前記オーキシン輸送体の前記同族体が、図１に示されるようにAtPGP1, BrABB97035, StAAD10836, ZmPGP1_AAR00316, SbAAR10387, OsXP_483819, OS_CAD59580及びAtPGP19と共に整列した時に、図１に示される共通配列を有するアミノ酸配列を含んで成る、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記オーキシン輸送体の前記同族体が、
PXGKTXAXVGXSGSGKSTVVSLXERFYXPXXGXXXLDG、LXLXXLRXQIGLVXQEPXLFATXIXENXLG、及びQVGERGXQLSGGQKQRIAIARAMLXXPXILLLDEATSALDから選択された１又は複数のアミノ酸配列を含んで成り、ここでＸは、図１Ｂに示されるように前記アミノ酸配列と共に整列した時にAtPGP1, BrABB97035, StAAD10836, ZmPGP1_AAR00316, SbAAR10387, OsXp_483819, OS_CAD59580及びAtPGP19のいずれか１つの指摘の位置にあるアミノ酸である、請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
前記オーキシン輸送体の前記同族体が、
LPXGYXTXVGERGVQLSGGQXQRIAIARA及びLLDEATSALDAESEXXXQEALから選択された１又は複数のアミノ酸配列を含んで成り、ここでＸは、図１Ｄに示されるように前記アミノ酸配列と共に整列した時にAtPGP1, BrABB97035, StAAD10836, ZmPGP1_AAR00316, SbAAR10387, OsXp_483819, OS_CAD59580及びAtPGP19のいずれか１つの指摘の位置にあるアミノ酸である、請求項１６記載の方法。
【請求項２０】
cysH遺伝子を欠失している微生物においてモナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項２１】
前記微生物がcysH遺伝子を欠失するように遺伝子操作されている、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
遺伝子操作前の微生物に比較してその細胞エンベロープ中のミコール酸のレベルが不足または低下するように遺伝子操作されている微生物を使って、モナチンを生産することを含んで成る方法。
【請求項２３】
前記微生物がパントエ（Pantoea）科のメンバーである、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
前記微生物がコリネバクテリウム（Corynebacterium）科のメンバーである、請求項1記載の方法。
【請求項２５】
前記微生物が、適当な対照に比較してモナチン生産、モナチン排出又はモナチン生産とモナチン排出の両方を増加させる化合物に暴露される、請求項７記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物がアンピシリン、エタムブトール、ピルビン酸塩、Tween及びその組み合わせから選択される、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記遺伝子操作された微生物がYhcP(AaeB)、YccS、YjcQ及びYhfKから選択された１又は複数の輸送体を欠いている、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
モナチンを分泌する輸送体効果を確かめることにより、モナチン輸送体を同定することを含んで成る方法。
【請求項２９】
モナチンを分泌することができる遺伝子操作された微生物。
【請求項３０】
前記微生物がモナチンを生産又は過剰生産するように遺伝子操作されている、請求項２９記載の微生物。
【請求項３１】
前記微生物が、モナチンを分泌することができる１又は複数の輸送体系を発現又は過剰発現するように遺伝子操作されている、請求項２９記載の微生物。
【公表番号】特表２００８−５３６５２３（Ｐ２００８−５３６５２３Ａ）
【公表日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５０７８８７（Ｐ２００８−５０７８８７）
【出願日】平成１８年４月２０日（２００６．４．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０１４９６８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１３８９７
【国際公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【出願人】（５０５０４００６２）カーギル，インコーポレイティド (23)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年４月２０日（２００６．４．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０１４９６８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１３８９７
【国際公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【出願人】（５０５０４００６２）カーギル，インコーポレイティド (23)
【Ｆターム（参考）】
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