不飽和脂肪酸誘導体の製造方法
【課題】不飽和脂肪酸化合物から簡便な操作でかつ高い効率で不飽和脂肪酸誘導体を得る手段を提供する。
【解決手段】以下の式（Ｉ）の不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有するカンジダ属に属する微生物又はヤロウイア属に属する微生物等とを接触させる不飽和脂肪酸誘導体の製造方法（式において、Ｒ1は水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2の炭素数２〜１５のアルキル基をヒドロキシル基又はケトン基を有する炭素数２〜１５のアルキル基を有する誘導体に変換する）。
【解決手段】以下の式（Ｉ）の不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有するカンジダ属に属する微生物又はヤロウイア属に属する微生物等とを接触させる不飽和脂肪酸誘導体の製造方法（式において、Ｒ1は水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2の炭素数２〜１５のアルキル基をヒドロキシル基又はケトン基を有する炭素数２〜１５のアルキル基を有する誘導体に変換する）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不飽和脂肪酸誘導体の製造方法に関する。さらに詳しくは、例えば、不飽和
脂肪酸化合物からヒドロキシ不飽和脂肪酸、オキソ不飽和脂肪酸などの所望の不飽和脂肪
酸誘導体を得るのに有用な不飽和脂肪酸誘導体の製造方法および前記不飽和脂肪酸誘導体
を製造するためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪酸は、ヒトなどの生体内で一般にエネルギー源として好気的に代謝される化合物で
あることから、近年、脂肪酸の生体内における機能が注目されている。例えば、脂肪酸の
一種である共役リノール酸は、マウス前胃新生物形成を阻害すること（例えば、非特許文
献１参照）、動物の体重または脂肪の低下をもたらすこと（例えば、特許文献１および２
参照）などが知られている。
【０００３】
しかしながら、脂肪酸は、その種類によっては動物、植物などにごく微量でしか含まれ
ないため、一般に、脂肪酸を工業的に大量に生産し、安定的に供給することが困難である
と考えられている。そこで、脂肪酸を化学的に合成する方法が考えられるが、この方法に
は、通常、煩雑な工程を必要とし、生産効率が低いという欠点がある。
【０００４】
【特許文献１】特表２００１−５０８０８５号公報
【特許文献２】特開２００２−２２３７２２号公報
【非特許文献１】ワイエル ハー（ＹＬ Ｈａ）ら著、「リノール酸の共役二重結合型誘導体によるベンゾ（ザ）ピレン誘導マウス前胃新生物形成の阻害(Inhibition of benzo(a)pyrene-induced mouse forestomach neoplasia byconjugated dienoic derivatives of linoleic acid)」、キャンサー・リサーチ(Cancer Res.)、１９９０年発行、第５０巻、第１０９７頁−第１１０１頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導体を製造すること、不飽和脂肪酸化合物から
不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ることなどの少なくとも１つの目的を達成しうる不飽
和脂肪酸誘導体の製造方法を提供することを課題とする。また、本発明は、不飽和脂肪酸
化合物から不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ることができる不飽和脂肪酸誘導体製造用
キットを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、
（１）（Ａ）一般式（Ｉ）：
【０００７】
【化１】
【０００８】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物と、
（Ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【０００９】
【化２】
【００１０】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物
または前記微生物の無細胞抽出物と
を接触させることを特徴とする一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪酸誘導体の製造方法
、
（２）前記微生物が、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）、カン
ジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）、カンジダ ピグナリエ
（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）、カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ
ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）およびヤロウイア リポリチカ（Ｙａｌｌｏｗｉａ ｌｙ
ｐｏｌｙｔｉｃａ）からなる群より選ばれた少なくとも１種である前記（１）記載の不飽
和脂肪酸誘導体の製造方法、
（３）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を含有する培地中で前記微生物を培養
する前記（１）または（２）に記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法、
（４）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物が、トランス−２−デセン酸である前
記（１）〜（３）のいずれかに記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法、ならびに
（５）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸において、Ｒ1が炭素数１〜４のアルキル基
であるとき、該不飽和脂肪酸アルキルエステルから一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪
酸誘導体を製造した後、さらに該不飽和脂肪酸誘導体に、該不飽和脂肪酸誘導体のエステ
ル結合を加水分解させる酵素を作用させる前記（１）〜（３）いずれか記載の不飽和脂肪
酸誘導体の製造方法、および
（６）（ａ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）で表される不
飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属もしくはヤ
ロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微
生物の無細胞抽出物と、
（ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地と
を含有してなる不飽和脂肪酸誘導体製造用キット
に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法によれば、簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導体を
製造することができるという優れた効果が奏される。また、本発明の不飽和脂肪酸誘導体
の製造方法によれば、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ること
ができるという優れた効果が奏される。さらに、本発明の不飽和脂肪酸誘導体製造用キッ
トによれば、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ることができる
という優れた効果が奏される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法は、前記したように、
（Ａ）一般式（Ｉ）：
【００１３】
【化３】
【００１４】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物（以下、単に「不飽和脂肪酸化合物」という）と、
（Ｂ）前記不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【００１５】
【化４】
【００１６】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体（以下、単に「不飽和脂肪酸誘導体」という）に変換する
能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ
）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽出物と
を接触させることを特徴とする。
【００１７】
本発明は、不飽和脂肪酸誘導体を製造する際に、前記微生物、前記微生物の培養物、前
記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽出物が用いられている点に、１つの大
きな特徴を有する。
【００１８】
したがって、本発明によれば、例えば、化学的合成法によって不飽和脂肪酸誘導体を製
造する場合のような煩雑な工程を必要としないので、より簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導
体を製造することができるという優れた効果が奏される。また、本発明によれば、不飽和
脂肪酸誘導体を製造する際に前記微生物などが用いられているので、本質的に内在してい
る酵素を利用して不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換反応を行なうこと
ができることから、安定した変換活性が得られるという優れた効果が奏される。
【００１９】
本発明に用いられる微生物としては、不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に変換
する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物およびヤロウイア（
Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物が挙げられる。
【００２０】
前記微生物としては、例えば、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓ
ａ）、カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）、カンジダ
ピグナリエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）、カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）、ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ
ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）などが挙げられる。前記微生物のなかでは、例えば、不飽和脂
肪酸誘導体として１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を製造する場合、この１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を高い効率でより短時間で製造する観点から、カ
ンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）およびヤロウイア リポリチカ
（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）が好ましく、カンジダ マルトーザ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）がより好ましい。
【００２１】
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）としては、例えば、カンジ
ダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株、ＩＡＭ
１２２４８株などが挙げられる。カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉ
ｐｈｉｌａ）としては、例えば、カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉ
ｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２４８５株などが挙げられる。カンジダ ピグナリエ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）としては、例えば、カンジダ ピグナリエ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ） ＩＡＭ １２９０６株などが挙げられる。カンジダ ニト
ラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）としては、例えば、カンジダ
ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２８８３
株などが挙げられる。ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃ
ａ）としては、例えば、ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉ
ｃａ） ＡＴＣＣ ２０４６０株などが挙げられる。
【００２２】
なお、前記ＩＡＭ株の微生物は、当業者が東京大学分子細胞生物学研究所 細胞機能情
報研究センター（ＩＡＭ）から容易に入手しうる微生物である。また、前記ＡＴＣＣ株の
微生物は、当業者がアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から容易に入
手しうる微生物である。
【００２３】
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株は
、識別の表示：Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ ＫＵ８３と命名・表示され、受託日：
２００６年１０月４日、受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ-２６６として、独立行政法人製品評価
技術基盤機構 特許微生物寄託センター〔日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（
郵便番号：２９２−０８１８）〕に寄託されている。
【００２４】
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株（
Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ ＫＵ８３株）は、
（ｉ）菌の形態は、球形または短卵形であり、偽菌糸を形成する、
（ｉｉ）菌の大きさは、（３．６〜７．２μｍ）×（３．６〜７．９μｍ）である、
（ｉｉｉ）２５℃で１ヵ月間培養したコロニーは、クリーム色を呈し、円滑な外観を有し
、偽菌糸の周縁部にはシワを形成する、
（ｉｖ）グルコース、シュクロースおよびトレハロースをそれぞれ発酵する、
（ｖ）ガラクトース、シュクロース、マルトース、トレハロース、メレジトース、Ｄ−キ
シロース、グリセロール、Ｄ−マンニトール、Ｄ−グルシトール、サリシンおよびコハク
酸をそれぞれ資化することができる、
（ｖｉ）アルブチンを分解することができる、
（ｖｉｉ）キノンの種類は、Ｑ９である、
（ｖｉｉｉ）Ｇ＋Ｃ含量は、３５．６〜３６．８ｍｏｌ％である
という微生物学的性質を有する。
【００２５】
前記微生物の選別は、例えば、
（１）トランス−２−デセン酸を含有する液体培地中で候補となるカンジダ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ）属に属する微生物を培養するステップ、
（２）前記ステップ（１）で得られた培養物から微生物細胞を除去して培養上清を得るス
テップ、および
（３）前記ステップ（２）で得られた培養上清中における９−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸および／または１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の存在の有無を評
価するステップ
を含み、培養上清中に９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１０−ヒ
ドロキシ−トランス−２−デセン酸が検出された場合、前記培養上清に対応する微生物が
、前記トランス−２−デセン酸を９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／また
は１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換する能力を有する微生物、すなわち
前記（Ｂ）の微生物であることの指標となる微生物のスクリーニング方法によって行なう
ことができる。
【００２６】
前記ステップ（１）において、微生物の培養は、微生物の生育状態を良好に維持する観
点から、好ましくは２０〜３７℃、より好ましくは２２〜３０℃、さらに好ましくは２６
〜２９℃の培養温度で、２４〜６０時間の培養時間で行なうことができる。
【００２７】
前記ステップ（１）で用いられるトランス−２−デセン酸を含有する液体培地としては
、特に限定されないが、例えば、イーストアンドモールド（ＹＭ）培地、ポテトデキスト
ロース（ＰＤ）培地、サブロー培地、ツァペック酵母エキス培地、ソイビーン・カゼイン
・ダイジェスト・ブロス（ＳＣＤ）培地、半合成培地などの培地にトランス−２−デセン
酸を添加して得られた培地などが挙げられる。
【００２８】
トランス−２−デセン酸を含有する液体培地としては、特に限定されないが、例えば、
トランス−２−デセン酸とグルコースとＫＨ2ＰＯ4とＮａ2ＨＰＯ4と酵母エキスとを含有
し、さらに任意にポリペプトン、尿素、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、Ｚｎ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏなどを含有する培地などが挙げられる。
【００２９】
トランス−２−デセン酸を含有する液体培地としては、特に限定されないが、例えば、
トランス−２−デセン酸０．１質量％と、グルコース３．０質量％と、ＫＨ2ＰＯ4 ０．
２質量％と、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％と、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％と
、酵母エキス０．０２５質量％と、ポリペプトン０．０２５質量％と、尿素０．３質量％
と、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％と、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％
と、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％とを含有する培地（ｐＨ６．９）、トランス
−２−デセン酸０．１質量％を含有し、イーストアンドモールド（ＹＭ）培地を基本培地
とした培地〔組成：酵母エキス０．３質量％、麦芽エキス０．３質量％、ポリペプトン０
．５質量％、グルコース１．０質量％、蒸留水（残部）〕などが挙げられる。
【００３０】
前記ステップ（２）において、培養上清は、前記ステップ（１）で得られた培養物を遠
心分離に供し、微生物細胞とそれ以外の液体成分とを分離する方法、前記培養物を適切な
孔径（例えば、０．４５μｍ）のフィルターに供し、微生物細胞とそれ以外の液体成分と
を分離する方法などによって得ることができる。
【００３１】
前記ステップ（３）において、前記ステップ（２）で得られた培養上清中における９−
ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１０−ヒドロキシ−トランス−２−
デセン酸の存在の有無は、例えば、前記培養上清を、適切な溶離液を用いた高速液体クロ
マトグラフィー（以下、ＨＰＬＣという）に供し、波長２１５ｎｍにおける吸光度をモニ
ターし、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品および／または１０−ヒドロキ
シ−トランス−２−デセン酸の標品と同じ保持時間のピークの有無を検出することにより
、確認することができる。
【００３２】
前記ＨＰＬＣには、例えば、全多孔性球状シリカゲル（例えば、平均粒子径：約５μｍ
、平均細孔径：約１２０Å、比表面積：約３００ｍ2／ｇ、化学結合：三反応性基型オク
タデシル基結合など）を用いたカラム（カラムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）など
を用いることができる。カラムとしては、特に限定されないが、ナカライテスク(株)製、
商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（カラ
ムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４５−２１）などが挙げ
られる。
【００３３】
このカラムを用いる場合、例えば、カラム温度３５℃および流速１ｍＬ／ｍｉｎで、溶
出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４
／４２．０〕による１５分間の溶出、溶出液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出
、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶出を順に行なうことにより、ＨＰＬＣを行なう
ことができる。
【００３４】
前記ステップ（３）において、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品および
／または１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品と同じ保持時間のピークが検
出されることは、培養上清に９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１
０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が存在することの指標となる。このようにして
、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸が検出された培養上清に対応する微生物として、目的の微生物を得ること
ができる。
【００３５】
本発明においては、不飽和脂肪酸化合物と、前記微生物、前記微生物の細胞破砕物また
は前記微生物の無細胞抽出物とを接触させる点にも、１つの大きな特徴がある。本発明は
、前記特徴を有するので、不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に高い効率で安定し
て変換することができる。
【００３６】
前記微生物、前記微生物の細胞破砕物および前記微生物の無細胞抽出物のなかでは、不
飽和脂肪酸誘導体を安定的に製造する観点から、前記微生物が好ましい。
【００３７】
一般式（Ｉ）において、Ｒ1は、水素原子または炭素数１〜４のアルキル基である。こ
のアルキル基の炭素数は、前記微生物による基質特異性の観点から、１以上、好ましくは
２以上であり、工業的生産性の観点から、４以下、好ましくは３以下である。炭素数１〜
４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基およびブチル基が挙げられる
。
【００３８】
一般式（Ｉ）において、Ｒ2は、炭素数２〜１５のアルキル基である。このアルキル基
の炭素数は、前記微生物による基質特異性の観点から、２以上、好ましくは３以上であり
、工業的生産性の観点から、１５以下、好ましくは９以下である。炭素数２〜１５のアル
キル基としては、例えば、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、
ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などに代表される炭素数２〜１５の直鎖ア
ルキル基、およびイソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル
基などに代表される分岐鎖を有する炭素数２〜１５のアルキル基などが挙げられる。Ｒ2
のなかでは、前記微生物による基質選択性の観点から、ヘキシル基が好ましい。
【００３９】
一般式（ＩＩ）において、Ｒ1は、一般式（Ｉ）におけるＲ1と同じである。また、Ｒ3
は、一般式（Ｉ）におけるＲ2がヒドロキシル化またはケトン化された基であり、より具
体的には、ヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５のアルキル基である。
Ｒ3の炭素数は、前記微生物による基質特異性の観点から、２以上、好ましくは３以上で
あり、工業的生産性の観点から、１５以下、好ましくは９以下である。Ｒ3の具体例とし
ては、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシプロピル基、
３−ヒドロキシプロピル基、３−ヒドロキシブチル基、４−ヒドロキシブチル基、４−ヒ
ドロキシペンチル基、５−ヒドロキシペンチル基、５−ヒドロキシヘキシル基、６−ヒド
ロキシヘキシル基、６−ヒドロキシヘプチル基、７−ヒドロキシヘプチル基、７−ヒドロ
キシオクチル基、８−ヒドロキシオクチル基などに代表される炭素数２〜１５のヒドロキ
シアルキル基；２−プロパノニル基、３−ブタノニル基、４−ペンタノニル基、５−ヘキ
サノニル基などに代表される炭素数２〜１５のケトン基含有アルキル基などが挙げられる
。Ｒ3のなかでは、前記微生物による基質選択性の観点から、５−ヘキサノニル基が好ま
しい。
【００４０】
不飽和脂肪酸化合物と前記微生物との接触は、例えば、不飽和脂肪酸化合物を含有する
培地中で前記微生物を培養する方法、前記微生物を担体に固定化させた固定化微生物担体
または前記微生物を包括剤に包括固定化させた微生物包括物を、不飽和脂肪酸化合物を含
有する培地または不飽和脂肪酸化合物を含有する緩衝液中で維持する方法などによって行
うことができる。
【００４１】
不飽和脂肪酸化合物を含有する培地中で前記微生物を培養する場合、用いられる培地（
以下、「変換培地」ともいう）としては、例えば、不飽和脂肪酸化合物とグルコースとを
含有する培地などが挙げられる。
【００４２】
前記変換培地中の不飽和脂肪酸化合物の濃度は、不飽和脂肪酸誘導体への変換率を高め
る観点から、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０５質量％以上であり
、微生物を良好な生育状態で維持させる観点から、好ましくは１０質量％以下、より好ま
しくは５質量％以下、さらに好ましくは１質量％以下である。
【００４３】
また、前記培地中のグルコース濃度は、微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂
肪酸誘導体への変換効率をより高める観点から、好ましくは３質量％以上、より好ましく
は５質量％以上、さらに好ましくは７．５質量％以上であり、不飽和脂肪酸誘導体への変
換を十分に行ない、かつ不飽和脂肪酸誘導体への変換の経済性を高める観点から、好まし
くは２０質量％以下、より好ましくは１５質量％以下である。
【００４４】
前記変換培地のｐＨは、微生物の生育を良好にする観点から、好ましくは５以上、より
好ましくは６．５以上であり、高い効率で変換反応を行なう観点から、好ましくは８以下
、より好ましくは７．５以下である。前記変換培地には、所望のｐＨとなるようにするた
めに、例えば、ＫＨ2ＰＯ4、Ｎａ2ＨＰＯ4などを用いることができる。前記変換培地中の
ＫＨ2ＰＯ4の濃度は、微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換
効率をより高める観点から、好ましくは０．０５〜５質量％、より好ましくは０．１〜１
質量％、さらに好ましくは０．１〜０．３質量％である。また、前記変換培地中のＮａ2
ＨＰＯ4の濃度は、微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換効
率をより高める観点から、好ましくは０．０５〜５質量％、より好ましくは０．１〜１質
量％、さらに好ましくは０．３〜０．５質量％である。
【００４５】
前記変換培地には、前記微生物の生育能や前記微生物による変換効率を高める観点から
、酵母エキスが含まれていてもよい。前記変換培地中の酵母エキスの濃度は、前記微生物
による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換効率をより高める観点から、
好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０２質量％以上であり、不飽和脂肪
酸誘導体への変換を十分に行なうとともに、不飽和脂肪酸誘導体への変換の経済性を高め
る観点から、好ましくは５質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは
０．０３質量％以下である。
【００４６】
前記変換培地には、必要により、ポリペプトン、尿素、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、ＦｅＳＯ
4・７Ｈ2Ｏ、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏなどが含まれていてもよい。
【００４７】
前記変換培地としては、特に限定がないが、例えば、不飽和脂肪酸化合物がトランス−
２−デセン酸である場合、トランス−２−デセン酸を０．０１〜１０質量％（例えば、０
．１質量％など）と、グルコースを３〜２０質量％（例えば、３質量％など）と、ＫＨ2
ＰＯ4を０．０５〜５質量％（例えば、０．２質量％など）と、Ｎａ2ＨＰＯ4を０．０５
〜５質量％（例えば、０．３５質量％など）と、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏを０．０１〜１質量
％（例えば、０．０５質量％など）と、酵母エキスを０．０１〜５質量％（例えば、０．
０２５質量％など）と、ポリペプトンを０〜１質量％（例えば、０．０２５質量％など）
と、尿素を０．０３〜３質量％（例えば、０．３質量％など）と、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏを
０．０００１〜０．０１質量％（例えば、０．００２質量％など）と、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2
Ｏを０．０００１〜０．０１質量％（例えば、０．００２質量％など）と、ＺｎＳＯ4・
７Ｈ2Ｏを０．０００１〜０．０１質量％（例えば、０．００２質量％など）と、蒸留水
（残部）とを含有する培地〔ｐＨ５〜８（例えば、ｐＨ６．９など）〕、トランス−２−
デセン酸を０．０１〜１０質量％（例えば、０．１質量％など）を含有し、かつイースト
アンドモールド（ＹＭ）培地を基本培地とした培地などが挙げられる。前記変換培地は、
例えば、乾燥状態の組成物として入手することができる。前記変換培地は、例えば、乾燥
状態の変換培地の組成物を水に溶解させ、滅菌フィルターなどで濾過することにより、得
ることができる。
【００４８】
前記微生物の培養温度は、微生物の生育状態を良好に維持する観点から、好ましくは２
０〜３７℃、より好ましくは２４〜３０℃、さらに好ましくは２７〜２９℃である。前記
微生物の培養時間は、不飽和脂肪酸誘導体の生産性を高める観点から、好ましくは１２〜
１２０時間、より好ましくは２４〜６０時間である。
【００４９】
なお、より高い変換効率で１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を製造する観点
から、前記ステップ（１）において、例えば、ドデカンなどの中鎖の炭化水素、好ましく
は炭素数５〜１２の炭化水素を含む培地を用いて前培養を行なった後、前記変換培地で培
養することが好ましい。
【００５０】
前記微生物を担体に固定化させた固定化微生物担体は、物理的吸着法、イオン結合法、
共有結合法、生化学的特異的結合法などの方法により、前記微生物を適切な担体に固定化
させることによって得ることができる。前記担体としては、特に限定されないが、例えば
、セルロース、アガロースなどに代表される多糖；多孔質ガラス、金属酸化物などに代表
される無機物質；ポリアクリルアミド、ポリスチレンなどの合成高分子化合物などが挙げ
られる。
【００５１】
前記微生物を包括剤に包括固定化させた微生物包括物は、包括剤で前記微生物を包むこ
とによって得ることができる。前記包括剤としては、特に限定されないが、例えば、アル
ギン酸、カラギーナンなどの多糖；ポリアクリルアミドなどが挙げられる。
【００５２】
不飽和脂肪酸化合物と前記微生物とを接触させる際に用いられる緩衝液としては、例え
ば、リン酸緩衝化生理的食塩水などが挙げられる。
【００５３】
また、不飽和脂肪酸化合物と前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽出物
との接触は、前記と同様の緩衝液中で不飽和脂肪酸化合物と前記微生物の細胞破砕物とを
混合することなどによって行なうことができる。
【００５４】
本発明においては、前記微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽
出物が不飽和脂肪酸化合物に作用するので、不飽和脂肪酸化合物が目的とする不飽和脂肪
酸誘導体に変換し、変換した不飽和脂肪酸誘導体が培養上清または緩衝液中に蓄積される
。
【００５５】
前記不飽和脂肪酸誘導体が蓄積された培養上清または緩衝液を、適切な溶離液が用いら
れたＨＰＬＣなどの分取手段に供し、波長２１５ｎｍにおける吸光度をモニターし、不飽
和脂肪酸化合物の標品と同じ保持時間を示す画分を分取することにより、不飽和脂肪酸誘
導体を実質的に単離することができる。
【００５６】
より具体的には、例えば、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が蓄積された培
養上清または緩衝液を、全多孔性球状シリカゲル（例えば、平均粒子径：約５μｍ、平均
細孔径：約１２０Å、比表面積：約３００ｍ2／ｇ、化学結合：三反応性基型オクタデシ
ル基結合など）を用いたカラム（カラムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）、例えば、
商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム〔カラ
ムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、ナカライテスク(株)製、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１
４５−２１〕などに供し、カラム温度３５℃で、溶出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒド
ロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕による１５分間の溶出、
溶出液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間
の溶出をこの順序で流速１ｍＬ／ｍｉｎで行ない、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸の標品（保持時間約３．２分間）に相当する画分を分取することにより、１０−ヒ
ドロキシ−トランス−２−デセン酸を単離することができる。
【００５７】
また、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が蓄積された培養上清または緩衝液を
用いる場合、前記と同様にして９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品に相当す
る画分を分取することにより、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を単離すること
ができる。
【００５８】
本発明においては、不飽和脂肪酸化合物としてトランス−２−デセン酸を用いた場合、
９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸または１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸を効率よく得ることができる。より具体的には、例えば、不飽和脂肪酸化合物として
トランス−２−デセン酸を用いた場合、トランス−２−デセン酸から実質的に単離された
１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を高い変換効率で得ることができる。
【００５９】
なお、本発明において、一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物において、Ｒ1が
炭素数１〜４のアルキル基であるとき、対応する不飽和脂肪酸誘導体を効率よく製造する
観点から、前記不飽和脂肪酸アルキルエステルから一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪
酸誘導体を製造した後、さらに該不飽和脂肪酸誘導体に、該不飽和脂肪酸誘導体のエステ
ル結合を加水分解させる酵素を作用させることが好ましい。これにより、一般式（ＩＩ）
において、Ｒ1が水素原子であり、Ｒ3がヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２
〜１５のアルキル基である不飽和脂肪酸アルキルエステルを得ることができる。
【００６０】
前記酵素としては、例えば、リパーゼ、エステラーゼなどが挙げられる。
【００６１】
前記酵素を作用させる不飽和脂肪酸誘導体として、９−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸アルキルエステルを用い、該９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸アルキルエ
ステルに、前記酵素を作用させた場合、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を効率
よく得ることができる。
【００６２】
また、前記酵素を作用させる不飽和脂肪酸誘導体として、１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸アルキルエステルを用い、該１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸
アルキルエステルに、前記酵素を作用させた場合、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸を効率よく得ることができる。
【００６３】
以上説明したように、本発明の製造方法によれば、簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導体を
製造することができる。また、本発明の製造方法によれば、不飽和脂肪酸化合物から不飽
和脂肪酸誘導体を高い効率で製造することができる。
したがって、本発明の製造方法は、例えば、不飽和脂肪酸化合物からヒドロキシ不飽和
脂肪酸、オキソ不飽和脂肪酸などの所望の不飽和脂肪酸誘導体を製造するのに有用である
。
【００６４】
本発明の不飽和脂肪酸誘導体製造用キットは、（ａ）不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪
酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属またはヤロウイア（
Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細
胞抽出物と、（ｂ）不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地とを含有する。
【００６５】
本発明の代表的なキットとして、（ａ）不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に変
換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属またはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗ
ｉａ）属に属する微生物と、（ｂ）不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地
とを含有するキットが挙げられる。このキットは、前記微生物および前記培地を有するの
で、本発明のキットを用いることにより、前記微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽
和脂肪酸誘導体への変換を至適条件下で行なうことができる。
【００６６】
したがって、前記キットを用いれば、このキットに含まれている前記微生物と前記培地
とを混合するだけで、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を簡便にかつ効率よく
製造することができる。
【００６７】
本発明のキットは、前記微生物に代えて、（ａ’）不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸
誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物もしく
はヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物の細胞破砕物または前記微生物の無
細胞抽出物を含有し、かつ前記培地に代えて、（ｂ’）不飽和脂肪酸化合物およびグルコ
ースを含有する溶液を有するキットであってもよい。このキットは、前記（ａ’）細胞破
砕物または無細胞抽出物および前記（ｂ’）溶液を有するので、このキットを用いること
により、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を簡便にかつ効率よく製造すること
ができる。
【００６８】
なお、本発明のキットは、不飽和脂肪酸誘導体の単離をより容易に行なう観点から、前
記微生物および前記培地を含有することが好ましい。前記微生物は、生菌体、凍結乾燥微
生物、および凍結保護剤に懸濁させた凍結保存微生物のいずれであってもよい。また、前
記微生物は、例えば、アンプルなどの滅菌済容器に封入されていてもよい。さらに、乾燥
粉末培地であってもよく、滅菌培養液であってもよい。前記培地は、例えば、培養用フラ
スコ、培養用試験管、保存用容器などの滅菌済容器に封入されていてもよい。
【００６９】
前記微生物は、前記固定化微生物担体または微生物包括物であってもよい。前記培地と
しては、本発明の製造方法に用いられる変換培地と同様の培地が挙げられる。
【００７０】
なお、本発明のキットには、必要により、他の助剤などが含まれていてもよい。
【００７１】
以上説明したように、本発明のキットを用いることにより、不飽和脂肪酸化合物から不
飽和脂肪酸誘導体を高い効率で製造することができる。したがって、本発明のキットは、
不飽和脂肪酸誘導体の製造用キットとして有用である。
【実施例】
【００７２】
次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例によって
限定されるものではない。
【００７３】
なお、各実施例などで用いられた培地は、あらかじめオートクレーブ中で１２０℃の温
度で１５分間滅菌された培地である。
【００７４】
（実施例１）
種々の供試微生物を、それぞれ、ＹＭ寒天培地｛培地（１０００ｍＬ）の組成：酵母エ
キス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓ
ｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）社製〕３．０ｇ（０．３質量％）、麦芽エキス３．０ｇ
（０．３質量％）、グルコース１０．０ｇ（１．０質量％）、ポリペプトン〔日本製薬(
株)製〕５．０ｇ（０．５質量％）、寒天〔ナカライテスク(株)製〕１５．０ｇ（１．５
質量％）、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２｝に塗布し、２８℃で４８時間培養した。その後
、前記培地から微生物細胞を回収した。得られた微生物細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、
ＯＤ660が１．０である供試微生物懸濁液を得た。
【００７５】
次に、前記供試微生物懸濁液０．１ｍＬを、Ｌ字型試験管中のＡＭ−１培地〔培地（１
０００ｍＬ）の組成：ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、Ｍｇ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カ
ンパニー社製〕０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、
尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．
００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−デセン酸〔東京
化成工業(株)製〕０．１質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕４．９ｍＬに添加した。
その後、微生物細胞を７１ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。なお、ＡＭ−１培地
による培養開始から０時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間およ
び１６８時間の時点で、０．５ｍＬずつ培養物を採取した。
【００７６】
得られた培養物を、内部標準（１−ナフトール）を含有する溶出液Ａ〔アセトニトリル
／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕で１０倍に
希釈し、試料を得た。
【００７７】
得られた試料を、(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＣＬ−６Ａおよび
ナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ
Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４５
−２１）を用いて高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供し、トランス−２−デセ
ン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【００７８】
なお、ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃および流速１ｍＬ／ｍｉｎで、溶出液Ａ〔アセト
ニトリル／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕に
よる１５分間の溶出、溶出液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶
出液Ａによる２５分間の溶出を順に行なうことによって実施した。また、トランス−２−
デセン酸およびその変換産物を２１５ｎｍの波長で検出した。各試料を分析した結果の一
部を表１に示す。
【００７９】
表１には、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に対応するピーク面積（保持時
間３．２分間）から算出された、試料中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸量が示されている。
【００８０】
表１中の「−」はピークなし（試料中に１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が
検出されず）、「＋」は試料中の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量が０質量
ｐｐｍを超え２０質量ｐｐｍ未満、「＋＋」は試料中の１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸量が２０質量ｐｐｍ以上であることを示す。
【００８１】
【表１】
【００８２】
表１に示された結果から、前記ＡＭ−１培地を用いることにより、前記培地中に含まれ
るトランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換する微生
物を選別することができることがわかる。また、表１に示されるように、選別された微生
物のなかでも特にＫＵ８３株は、他の供試微生物と対比して、より高い効率でトランス−
２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することができること
がわかる。
【００８３】
次に、前記ＫＵ８３株の培養物中におけるトランス−２−デセン酸量および１０−ヒド
ロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。それらのうち、１０−ヒドロ
キシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を図１に示す。
【００８４】
図１に示されるように、培養物中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸
量は、ＡＭ−１培地による培養開始から約２４時間経過後に最も多くなることがわかる。
【００８５】
なお、ＫＵ８３株によるトランス−２−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸へのモル変換率は、ＡＭ−１培地による培養開始から２４時間の時点で３５％
であった。
【００８６】
表１に示される供試微生物のうち、ＫＵ８３株およびＫＵ８４株は、カンジダ マルト
ーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）〔カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍ
ａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａ
ｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４８株〕である。ＫＵ１２３株は、カンジダ スクシフィ
ラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）〔カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２４８５株〕である。ＫＵ１１０株は、カンジ
ダ ピグナリエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）〔カンジダ ピグナリエ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ） ＩＡＭ １２９０６株〕である。ＫＵ１０３株は、
カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）〔カンジダ
ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２８８３株
〕である。ＫＵ１２９株は、ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙ
ｔｉｃａ）〔ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ） Ａ
ＴＣＣ ２０４６０株〕である。
【００８７】
前記ＩＡＭ株の微生物は、東京大学分子細胞生物学研究所 細胞機能情報研究センター
（ＩＡＭ）から入手しうる微生物である。前記ＡＴＣＣ株の微生物は、アメリカンタイプ
カルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手しうる微生物である。また、前記カンジダ
マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株は、Ｃａｎｄ
ｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ ＫＵ８３株と命名・表示され、受託日：２００６年１０月４日
、受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ-２６６として、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微
生物寄託センター〔日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（郵便番号：２９２−０
８１８）〕に寄託されている。
【００８８】
（比較例１）
実施例１において、ＡＭ−１培地の代わりに２ＤＡ−１培地〔培地（１０００ｍＬ）の
組成：イーストナイトロジェンベース（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー
社製）０．６７質量％、塩化アンモニウム０．５質量％、ポリ（オキシエチレン）スルビ
タンモノオレエート〔商品名：Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０〕０．０２質量％、トランス
−２−デセン酸０．１質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．８〕を用いたことを除き、実施
例１と同様にして、供試微生物の培養物中のトランス−２−デセン酸およびその変換産物
の存在を分析した。
【００８９】
その結果、いずれの試料からもトランス−２−デセン酸の変換産物である１０−ヒドロ
キシ−トランス−２−デセン酸が検出されなかった。この結果から、前記供試微生物に２
ＤＡ−１培地を用いた場合には、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸に変換することができる微生物の選別が困難であることが示唆される。
【００９０】
（比較例２）
実施例１において、ＡＭ−１培地の代わりに２ＤＡ−２培地〔培地（１０００ｍＬ）中
の組成：イーストナイトロジェンベース（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニ
ー社製）０．６７質量％、塩化アンモニウム０．５質量％、トランス−２−デセン酸０．
１質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．８〕を用いたことを除き、実施例１と同様にして、
供試微生物の培養物中のトランス−２−デセン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【００９１】
その結果、トランス−２−デセン酸の変換産物である１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸は、いずれの試料中にも検出されなかった。この結果から、前記供試微生物を
培養する際に２ＤＡ−２培地を用いた場合には、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロ
キシ−トランス−２−デセン酸に変換することができる微生物の選別が困難であることが
示唆される。
【００９２】
（比較例３）
実施例１において、ＡＭ−１培地の代わりにＥＬ培地〔培地（１０００ｍＬ）中の組成
：ＫＨ2ＰＯ4 ０．８質量％、塩化ナトリウム０．１質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．
１質量％、酵母エキス０．０５質量％、ポリペプトン０．０１５質量％、尿素０．１５質
量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．０００１質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０００１質
量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０００１質量％、トランス−２−デセン酸０．１質量％
、蒸留水（残部）、ｐＨ６．８〕を用いたことを除き、実施例１と同様にして、供試微生
物の培養物中のトランス−２−デセン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【００９３】
その結果、トランス−２−デセン酸の変換産物である１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸は、いずれの試料中にも検出されなかった。この結果から、前記供試微生物の
培養に際し、ＥＬ培地を用いた場合には、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−
トランス−２−デセン酸に変換することができる微生物の選別が困難であることが示唆さ
れる。
【００９４】
（試験例１）
ＫＵ８３株を前記ＹＭ寒天培地に塗布し、２８℃で４８時間培養した。その後、このＹ
Ｍ寒天培地からＫＵ８３株の細胞を回収した。得られた細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、
ＯＤ660が１．０であるＫＵ８３株懸濁液を得た。
【００９５】
また、前記ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度が０質量％（実験番号１）、０．０５質量
％（実験番号２）、０．１質量％（実験番号３）、０．１５質量％（実験番号４）、０．
２質量％（実験番号５）または０．３質量％（実験番号６）となるように調整された変換
培地を作製した。
【００９６】
前記ＫＵ８３株懸濁液０．１ｍＬを実験番号１〜６の各変換培地４．９ｍＬに添加した
。その後、微生物細胞を１４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。なお、培養開始
から０時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間および１２０時間の時点で、各変
換培地から培養物０．５ｍＬを採取した。各時点で得られた培養物について、ｐＨおよび
ＯＤ660を測定した。
【００９７】
また、内部標準（１−ナフトール）を含有する溶出液Ａ（アセトニトリル／テトラヒド
ロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０）で前記培養物を１０倍希
釈し、試料を得た。得られた試料を、(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ Ｓ
ＣＬ−６Ａおよびナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ
18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ
Ｎｏ．３８１４５−２１）を用いてＨＰＬＣに供し、トランス−２−デセン酸およびその
変換産物の存在を分析した。
【００９８】
なお、ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃、流速１ｍＬ／ｍｉｎで、溶出液Ａ（アセトニト
リル／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０）による
１５分間の溶出、溶出液Ｃ（アセトニトリル／テトラヒドロフラン（容量比）＝４０．６
／１７．４）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶出を順に行
なうことにより実施した。また、トランス−２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トラ
ンス−２−デセン酸の検出は、波長２１５ｎｍで行なった。１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸に対応するピーク面積（保持時間３．２分間）より、試料中における１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量を算出した。また、トランス−２−デセン酸に
対応するピーク面積（保持時間９．１分間）より、試料中におけるトランス−２−デセン
酸量を算出した。
【００９９】
各ＫＨ2ＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１
０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果をそれぞれ
順に図２のパネル（Ａ）〜（Ｄ）に示す。
【０１００】
図２中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のＫＨ2ＰＯ4濃度が０質量％（実験番号１）、０．０５質量％（実験番号２）、０．１質
量％（実験番号３）、０．１５質量％（実験番号４）、０．２質量％（実験番号５）およ
び０．３質量％（実験番号６）における測定結果を示す。
【０１０１】
図２のパネル（Ｂ）および（Ｃ）に示されるように、培養初期にＯＤが増加すると、Ｋ
Ｕ８３株によって培地中のトランス−２−デセン酸がより多く消費されることがわかる。
より具体的には、図２のパネル（Ｂ）および（Ｃ）に示されるように、ＫＨ2ＰＯ4濃度が
０質量％の場合、培養開始から２４時間の時点で、ＫＨ2ＰＯ4濃度が０．０５質量％の場
合、培養開始から４８時間の時点で、また、ＫＨ2ＰＯ4濃度が０．１質量％の場合、培養
開始から７２時間の時点で、それぞれトランス−２−デセン酸量が０質量％（０質量ｐｐ
ｍ）となることがわかる。
【０１０２】
特に、図２のパネル（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）に示されるように、ＫＵ８３株は、Ｋ
Ｈ2ＰＯ4濃度が０．１質量％の場合、ＯＤの上昇、すなわち菌の増殖とともにトランス−
２−デセン酸が消費される傾向があり、培養開始から４８時間の時点で、培地中で約０．
０１２４質量％（１２４質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を生
産することがわかる。また、図２のパネル（Ａ）および（Ｂ）に示されるように、ＯＤが
上昇するとｐＨが７．０以上に上昇し、その後、ｐＨは６．９〜７．２の範囲で推移する
ことがわかる。
【０１０３】
これらの結果より、培地中におけるＫＨ2ＰＯ4濃度は、０．１質量％前後が好適である
ことがわかる。
【０１０４】
（試験例２）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度が０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4濃
度が０質量％（実験番号７）、０．０５質量％（実験番号８）、０．１質量％（実験番号
９）、０．１５質量％（実験番号１０）、０．２質量％（実験番号１１）または０．３質
量％（実験番号１２）となるように調整し、変換培地を作製したことを除き、試験例１と
同様にして、各Ｎａ2ＨＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン
酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結
果を図３に示す。
【０１０５】
図３において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各Ｎａ2ＨＰＯ4濃度における
培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１０６】
図３中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のＮａ2ＨＰＯ4濃度が０質量％（実験番号７）、０．０５質量％（実験番号８）、０．１
質量％（実験番号９）、０．１５質量％（実験番号１０）、０．２質量％（実験番号１１
）および０．３質量％（実験番号１２）であるときの測定結果を示す。
【０１０７】
図３のパネル（Ａ）および（Ｂ）に示されるように、ｐＨが約６．０以下の場合、ＫＵ
８３株の生育が阻害される傾向があることがわかる。また、図３のパネル（Ａ）、（Ｂ）
および（Ｃ）に示されるように、培養初期にＯＤが増加すると、ＫＵ８３株によって、培
地中のトランス−２−デセン酸がより多く消費される傾向があり、ｐＨが６．６〜６．９
の範囲で推移することがわかる。また、図３のパネル（Ｄ）に示されるように、Ｎａ2Ｈ
ＰＯ4濃度が０．３質量％の場合、ＫＵ８３株は、培養開始から７２時間の時点で、培地
中で約０．０１７４質量％（１７４質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸を生産することがわかる。これらの結果から、培地中のＮａ2ＨＰＯ4濃度は、０．
３質量％前後が好適であることが示唆される。
【０１０８】
（試験例３）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の組み合
わせを、「０．１質量％および０．３質量％」（実験番号１３）、「０．１質量％および
０．４質量％」（実験番号１４）、「０．２質量％および０．２質量％」（実験番号１５
）、「０．２質量％および０．３質量％」（実験番号１６）、「０．２質量％および０．
４質量％」（実験番号１７）または「０．２質量％および０．５質量％」（実験番号１８
）となるように調整して変換培地を作製したことを除き、試験例１と同様にしてＫＨ2Ｐ
Ｏ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の各組み合わせにおける培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス
−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調
べた。その結果を図４に示す。
【０１０９】
図４において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、ＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2
ＨＰＯ4濃度の各組み合わせにおける培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量お
よび１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１１０】
図４中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の組み合わせがそれぞれ「０．１質量％および
０．３質量％」（実験番号１３）、「０．１質量％および０．４質量％」（実験番号１４
）、「０．２質量％および０．２質量％」（実験番号１５）、「０．２質量％および０．
３質量％」（実験番号１６）、「０．２質量％および０．４質量％」（実験番号１７）な
らびに「０．２質量％および０．５質量％」（実験番号１８）であるときの測定結果を示
す。
【０１１１】
図４のパネル（Ａ）〜（Ｃ）に示されるように、高いｐＨ条件になるほど、ＫＵ８３株
によってトランス−２−デセン酸がより多く消費され、かつＯＤが高くなることがわかる
。また、図４のパネル（Ａ）、（Ｂ）および（Ｄ）に示されるように、ｐＨが６．６〜７
．２である場合、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸がＫＵ８３株によってより
多く生産される傾向があることがわかる。一方、培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2Ｈ
ＰＯ4濃度の組み合わせが「０．２質量％および０．２質量％」である場合、ｐＨが６．
５である条件下であっても、ＫＵ８３株によって培地中で最大で約０．０２２４質量％（
２２４質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が生産されることがわ
かる。
【０１１２】
これらの結果から、培地中におけるＫＨ2ＰＯ4濃度／Ｎａ2ＨＰＯ4濃度の比（質量比）
が１／３〜２／５であることが好適であることがわかる。
【０１１３】
（試験例４）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度を０．２質量％に、Ｎａ2ＨＰＯ4
濃度を０．３５質量％に、酵母エキス濃度を０質量％（実験番号１９）、０．０２５質量
％（実験番号２０）、０．０５質量％（実験番号２１）、０．０７５質量％（実験番号２
２）、０．１質量％（実験番号２３）または０．２質量％（実験番号２４）に調整して変
換培地を作製したことを除き、試験例１と同様にして各酵母エキス濃度における培地のｐ
Ｈ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図５に示す。
【０１１４】
図５において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各酵母エキス濃度における培
地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１１５】
図５中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
の酵母エキス濃度が０質量％（実験番号１９）、０．０２５質量％（実験番号２０）、０
．０５質量％（実験番号２１）、０．０７５質量％（実験番号２２）、０．１質量％（実
験番号２３）および０．２質量％（実験番号２４）であるときの測定結果を示す。
【０１１６】
図５のパネル（Ａ）に示されるように、培地のｐＨは、６．６〜７．２の範囲で推移す
ることがわかる。また、図５のパネル（Ｂ）および（Ｃ）に示されるように、酵母エキス
濃度が０．０５質量％、０．０７５質量％または０．１質量％であるとき、培養開始から
４８時間の時点からトランス−２−デセン酸がＫＵ８３株によって消費されはじめ、ＯＤ
も増加する傾向があることがわかる。さらに、酵母エキス濃度が０．０２５質量％または
０．２質量％であるとき、培養開始から７２時間の時点から、トランス−２−デセン酸が
ＫＵ８３株によって消費されはじめ、ＯＤも増加する傾向があることがわかる。
【０１１７】
なかでもパネル（Ｄ）に示されるように、酵母エキス濃度が０．１質量％であるとき、
培養開始から９６時間の時点で１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の生産量が最
大となり、培地中で約０．０２６６質量％（２６６質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−ト
ランス−２−デセン酸が生産されることがわかる。これらの結果から、培地中における酵
母エキス濃度は、０．０２５質量％以上、好ましくは０．１質量％前後であることが好適
であることが示唆される。
【０１１８】
（試験例５）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度を０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4濃
度を０．３５質量％に、酵母エキス濃度を０．１質量％に、ポリペプトン濃度を０質量％
（実験番号２５）、０．００５質量％（実験番号２６）、０．０１質量％（実験番号２７
）、０．０１５質量％（実験番号２８）、０．０２質量％（実験番号２９）または０．０
３質量％（実験番号３０）に調整して変換培地を作製したことを除き、試験例１と同様に
して各ポリペプトン濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量およ
び１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図６
に示す。
【０１１９】
図６において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各ポリペプトン濃度における
培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１２０】
図６中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のポリペプトン濃度が０質量％（実験番号２５）、０．００５質量％（実験番号２６）、
０．０１質量％（実験番号２７）、０．０１５質量％（実験番号２８）、０．０２質量％
（実験番号２９）および０．０３質量％（実験番号３０）であるときの測定結果を示す。
【０１２１】
図６のパネル（Ａ）〜（Ｄ）に示されるように、培地中のポリペプトン濃度が０質量％
であるとき、培養開始から４８時間の時点で、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン
酸の生産量が最大となり、約１９４質量ｐｐｍの１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸が生産されることがわかる。これらの結果から、１０−ヒドロキシ−トランス−２−
デセン酸の生産には、ポリペプトンが用いられなくてもよいことが示唆される。
【０１２２】
（試験例６）
実施例１で用いた各試料について、変換培地〔培地（１０００ｍＬ）中の組成：ＫＨ2
ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５
質量％、酵母エキス（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製）０．０２５
質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣ
ｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4
・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−デセン酸〔東京化成工業(株)製〕０．１
質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕を用いたことを除き、実施例１と同様にしてトラ
ンス−２−デセン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【０１２３】
その結果、用いられた試料のうち、ＫＵ８３株、ＫＵ１２３株およびＫＵ１２９株のそ
れぞれの培養上清から１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が特に顕著に検出され
、各培養上清には、それぞれ３５０質量ｐｐｍ、１４０質量ｐｐｍおよび１４０質量ｐｐ
ｍの１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が含まれていた。このことから、ＫＵ８
３株、ＫＵ１２３株およびＫＵ１２９株を用いた場合には、より高い効率でトランス−２
−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を得ることができることがわ
かる。
【０１２４】
なお、ＫＵ１２９株は、ヤロウイア リポリチカ ＡＴＣＣ２０４６０株として容易に
入手しうる株である。
【０１２５】
（実施例２）
ＫＵ８３株を前記ＹＭ寒天培地に塗布し、２８℃で４８時間培養した。その後、前記培
地から微生物細胞を回収した。得られた微生物細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660
が１００である供試微生物懸濁液を得た。
【０１２６】
次に、前記供試微生物懸濁液１ｍＬを変換培地｛培地（１０００ｍＬ）中の組成：ＫＨ
2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５
質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製〕０．０２５
質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣ
ｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4
・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−デセン酸〔東京化成工業(株)製〕０．１
質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９｝１００ｍＬに添加した。その後、微生物細胞を１
４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で、２４〜４８時間培養した。
【０１２７】
得られた培養物を、内部標準（１−ナフトール）を含有する溶出液Ａ〔アセトニトリル
／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕で１０倍に
希釈し、試料を得た。得られた試料を(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ Ｓ
ＣＬ−６Ａおよびナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ
18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ
Ｎｏ．３８１４５−２１）を用いてＨＰＬＣに供した。
【０１２８】
なお、ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃で、溶出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒドロフ
ラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕による１５分間の溶出、溶出
液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶
出をそれぞれ流速１ｍＬ／ｍｉｎで順に行なうことによって実施した。また、トランス−
２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の検出は、波長２１５ｎ
ｍで行なった。
【０１２９】
反応液にクロロホルムを添加し、振盪してクロロホルム層を回収した。減圧乾固してク
ロロホルムを除去した後、残渣を溶出液Ａに溶解した。得られた試料を(株)日立製作所製
、商品名：Ｄ−２０００ＨＰＬＣおよびナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩ
Ｌ（登録商標） ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム〔１０．０×２５
０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４９−８１〕を用いてＨＰＬＣに供し、保持時間３．２
分間で溶出される画分を分取した。
【０１３０】
その後、分取した画分を減圧乾固することによって得られた物質をＧＣ−ＭＳ分析、1
Ｈ−ＮＭＲ分析、13Ｃ−ＮＭＲ分析およびＩＲ分析に供した。なお、ＧＣ−ＭＳ分析に際
して、三フッ化ホウ素メタノール錯体のメタノール溶液により、前記物質をメチルエステ
ル化させた。ＧＣ−ＭＳ分析の結果を図７に示す。
【０１３１】
得られた物質は、以下の物性を有していることから、１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸であることが確認された。
【０１３２】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（質量ｐｐｍ）：１．３３（２Ｈ，ｓ，Ｃ６〜Ｃ８），１．
４８（２Ｈ，ｍ，Ｃ５），１．５６（２Ｈ，ｍ，Ｃ９），２．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
０Ｈｚ，Ｃ４），２．２７（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），３．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，
Ｃ１０），５．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，Ｃ２），７．１０（１Ｈ，ｍ，Ｃ３
），１１．０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）
【０１３３】
13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣl3）δ（質量ｐｐｍ）：２５．６（Ｃ８），２７．８（Ｃ５），２
９．０（Ｃ６），２９．１（Ｃ７），３２．２（Ｃ９），３２．６（Ｃ４），６３．０（
Ｃ１０），７６．５〜７７．４（ＣＨＣｌ3），１２０．５（Ｃ２），１５２．１（Ｃ３
），１７１．１（Ｃ１）
【０１３４】
ＩＲ（液膜法）：１６５２．９ｃｍ-1（ｔｒａｎｓ−ＣＨ＝ＣＨ−），１６９５．３，２
９３１．６ｃｍ-1（−ＣＯＯＨ），３３９４．５ｃｍ-1（−ＣＨ２−ＯＨ）
【０１３５】
ＧＣ−ＭＳ：分子イオンピークは検出されなかったが、１６８、１１３および５９ｍ／ｚ
にフラグメントピークが検出された。
【０１３６】
（試験例７）
ＹＭ培地〔組成：酵母エキス０．３質量％、麦芽エキス０．３質量％、ポリペプトン０
．５質量％、グルコース１．０質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２〕を用いて２８℃の
温度で４８時間、ＫＵ株の前培養を行なった。得られた培養物を遠心分離に供し、菌体を
回収した。得られた菌体を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660が１００である懸濁液を得
た。
【０１３７】
次に、得られた懸濁液１ｍＬを各種濃度でグルコースを含有する変換培地〔培地（１０
００ｍＬ）中の組成：トランス−２−デセン酸〔東京化成工業(株)製〕０．１質量％、グ
ルコース１質量％（実験番号３１）、２質量％（実験番号３２）または３質量％（実験番
号３３）、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー
社製〕０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．
３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質
量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕 １００
ｍＬに添加した。その後、微生物細胞を１４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。
【０１３８】
次に、試験例１と同様にして各グルコース濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トラン
ス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を
調べた。その結果を図８に示す。
【０１３９】
図８において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各グルコース濃度における培
地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１４０】
また、図８中の黒丸、黒四角および黒三角は、変換培地中のグルコース濃度が、それぞ
れ順に、１質量％（実験番号３１）、２質量％（実験番号３２）および３質量％（実験番
号３３）であるときの測定結果を示す。
【０１４１】
図８の黒三角（実験番号３３）に示されるように、ＹＭ培地で前培養した菌を、３質量
％グルコースを含有する変換培地で培養を行なった場合、より早くトランス−２−デセン
酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することができることがわかる。
【０１４２】
（試験例８）
試験例７において、ＹＭ培地の代わりに中鎖の炭化水素であるドデカンを含有する培地
（前培養ドデカン培地）〔組成：ドデカン１質量％、ポリペプトン０．５質量％、酵母エ
キス０．３質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２〕で前培養したことを除き、試験例７と
同様にして培養を行ない、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図９に示す
。
【０１４３】
図９において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、培地のｐＨ、ＯＤ660、トラ
ンス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化
の測定結果を示す。
【０１４４】
図９中の黒丸、黒四角および黒三角は、それぞれ順に、培地中のグルコース濃度が１質
量％（実験番号３４）、２質量％（実験番号３５）および３質量％（実験番号３６）であ
るときの測定結果を示す。
【０１４５】
図９に示された結果から、前培養ドデカン培地で前培養した場合、効率よくトランス−
２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することがわかる。ま
た、実験番号３６の結果に示されるように、前培養ドデカン培地で前培養することによっ
て得られた菌体を、３質量％グルコースを含有する変換培地で培養すると、より一層早く
トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することが
できることがわかる。
【０１４６】
（試験例９）
ドデカン培地〔ドデカン１質量％、ポリペプトン０．５質量％、酵母エキス０．３質量
％〕を用いて２８℃の温度で４８時間、ＫＵ８３株の前培養を行なった。得られた培養物
を遠心分離に供し、菌体を回収した。得られた菌体を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660
が１００である懸濁液を得た。
【０１４７】
次に、得られた懸濁液１ｍＬを、トランス−２−デセン酸無添加グルコース含有培地〔
培地（１０００ｍＬ）中の組成：グルコース３質量％、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ
2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス（ベクト
ン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製）０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本
製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質
量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％
、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕、または３、５もしくは７．５質量％グルコースを含有
する変換培地〔培地（１０００ｍＬ）中の組成：トランス−２−デセン酸〔東京化成工業
(株)製〕０．１質量％、グルコース３質量％、５質量％または７．５質量％、ＫＨ2ＰＯ4
０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％
、酵母エキス（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製）０．０２５質量％
、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・
４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ ０．００２質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕１００ｍＬに添加した。その後
、微生物細胞を１４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。
【０１４８】
次に、試験例１と同様にして培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および
１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図１０
に示す。
【０１４９】
図１０において、パネル〜（Ｄ）は、それぞれ順に、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス
−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測
定結果を示す。
【０１５０】
図１０中の黒丸、黒四角、黒三角、および白丸は、それぞれ順に、トランス−２−デセ
ン酸無添加・３質量％グルコース含有培地（実験番号３７）、３質量％グルコースを含有
する変換培地（実験番号３８）、５質量％グルコースを含有する変換培地（実験番号３９
）および７．５質量％グルコースを含有する変換培地（実験番号４０）であるときの測定
結果を示す。
【０１５１】
図１０に示された結果から、さらにドデカン培地で前培養した菌を３〜７．５質量％グ
ルコースを含有する変換培地で培養した場合、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキ
シ−トランス−２−デセン酸に効率よく変換することができることがわかる。また、７．
５質量％グルコースを含有する変換培地で培養した場合、１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸がより効率よく得られることがわかる。
【０１５２】
（参考例１）
寒天平板希釈法にしたがって、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓ
ａ）ＫＵ８３株に対するトランス−２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸それぞれの最小発育阻止濃度を調べた。その結果を表２に示す。
【０１５３】
【表２】
【０１５４】
表２に示されているように、トランス−２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トラン
ス−２−デセン酸の最小発育阻止濃度は、それぞれ５．９ｍＭおよび６．７ｍＭであるこ
とがわかる。この結果より、トランス−２−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸に変換するに際して、培地中におけるトランス−２−デセン酸の濃度が５．
９ｍＭ以上である場合には、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）
ＫＵ８３株によるトランス−２−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン
酸への変換効率が低下する可能性が示唆される。
【０１５５】
（実施例３）
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株に対する種々の
トランス−２−デセン酸アルキルエステルの最小発育阻止濃度を調べ、トランス−２−デ
セン酸よりも最小発育阻止濃度が高く、抗菌活性が低いトランス−２−デセン酸アルキル
エステルをスクリーニングした。
【０１５６】
その結果、トランス−２−デセン酸エチルエステルが、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株に対して、５０ｍＭを超える最小発育阻止濃度を
示し、トランス−２−デセン酸と比べて抗菌活性が著しく低いことが確認された。この結
果から、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株を培養す
る際に、トランス−２−デセン酸に代えてトランス−２−デセン酸エチルエステルを用い
ることにより、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エステルを高い効率で製造す
ることができる可能性があることが示唆される。
【０１５７】
（実施例４）
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株をＹＭ寒天培地
｛培地（１０００ｍＬ）の組成：ベクトン・ディッキンソン社製、商品名：ＹＭ ｂｒｏ
ｔｈ ２．１ｇ（２．１質量％）、寒天〔ナカライテスク（株）製〕１５ｇ（１．５質量
％）、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２｝で、２８℃で２４時間培養した。その後、前記培地
から微生物細胞を回収した。得られた微生物細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660が
１００である供試微生物懸濁液を得た。
【０１５８】
次に、前記供試微生物懸濁液１ｍＬをトランス−２−デセン酸エチルエステル変換培地
｛培地（１０００ｍＬ）中の組成：ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５
質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン
・アンド・カンパニー社製〕０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０
２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・
７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−
デセン酸エチルエステル〔東京化成工業（株）製〕３５質量％（３５００００質量ｐｐｍ
）、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９｝１００ｍＬに添加した。その後、微生物細胞を１４０
ｒｐｍで振盪しながら２８℃で、４８時間培養した。
【０１５９】
次に、得られた培養物の上清に、該上清に対して等量の酢酸エチルを添加した。得られ
た混合物を撹拌し、静置した後、得られた混合物から、酢酸エチル層の溶液を分取し、減
圧乾固した。得られた減圧乾固物をｎ−ヘキサン５ｍＬに溶解させた。得られた溶液をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、
シリカゲルカラム〔和光純薬(株)製、商品名：Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００、２２ｍｍ×
３５０ｍｍ〕を用い、カラム温度３５℃で、溶出液Ｄ（ｎ−ヘキサン）による１５００分
間の溶出、溶出液Ｅ〔ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（容量比）＝９／１〕による５３０分間
の溶出および溶出液Ｆ〔ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（容量比）＝８／２〕による５３０分
間の溶出を順序で流速１ｍＬ／ｍｉｎで行なうことにより実施した。前記溶出液Ｆで溶出
された画分を回収し、減圧乾固した。
【０１６０】
その後、得られた乾固物を、アセトニトリル１ｍＬに溶解させ、試料を得た。得られた
試料を(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＣＬ−６Ａおよびナカライテス
ク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ
ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４５−２１）を用
いてＨＰＬＣに供した。なお、対照として、トランス−２−デセン酸エチルエステル変換
培地を用いて、前記と同様に、ＨＰＬＣを行なった。
【０１６１】
ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃で、溶出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒドロフラン／
蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕による１５分間の溶出、溶出液Ｂ（
アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶出をこ
の順序で流速１ｍＬ／ｍｉｎで行なうことにより実施した。溶出される画分は、波長２１
０ｎｍでモニターした。実施例４におけるＨＰＬＣのクロマトグラムを図１１に示す。図
１１中、パネル（Ａ）は、対照のクロマトグラムであり、パネル（Ｂ）は、４８時間培養
後の培養物から得られた画分のＨＰＬＣのクロマトグラムである。
【０１６２】
図１１に示された結果から、前記トランス−２−デセン酸エチルエステル変換培地中で
、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株を培養すること
により、トランス−２−デセン酸エチルエステルに対応すると考えられるピーク１の保持
時間とは異なる保持時間８．９分間において、新たな単一のピークが出現することがわか
る。
【０１６３】
前記保持時間８．９分間の画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲを調べた。実施例４で得
られた画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲの測定結果を以下および図１２に示す。
【０１６４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（質量ｐｐｍ）：１．３３（２Ｈ，ｍ，Ｃ１，Ｃ７〜Ｃ１
０），１．４８（２Ｈ，ｍ，Ｃ１１），１．９６（２Ｈ，ｍ，Ｃ６），３．６５（２Ｈ，
ｔ，Ｃ１２），４．２３（２Ｈ，ｍ，Ｃ２），５．８３（１Ｈ，ｄ，Ｃ４），６．９２（
１Ｈ，ｍ，Ｃ５）
【０１６５】
図１２に示された結果から、保持時間８．９分間の画分に含まれる物質は、１０−ヒド
ロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステルであることが確認された。
【０１６６】
また、図１１および図１２の結果から、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａ
ｌｔｏｓａ）が、トランス−２−デセン酸エチルエステルを、１０−ヒドロキシ−トラン
ス−２−デセン酸エチルエステルに変換することができることがわかる。
【０１６７】
（実施例５）
０．０１Ｍ ＣａＣｌ2を含有する０．０５Ｍ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．６）５．０ｍＬ
に、実施例４で得られた１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステルを含
む画分（画分中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステル含有
量：０．３質量％）１．０ｍＬと、リパーゼ溶液（シグマ・アルドリッチ社製、商品名：
Ｌｉｐａｓｅ、１８７Ｕ／ｍＬ）０．１〜０．５ｍＬを添加した。得られた混合物を５０
０ｒｐｍで撹拌しながら３０℃で、３０分間保温した。その後、保温後の混合物にエタノ
ール２０ｍＬを添加した。得られた混合物を減圧濃縮することにより、エタノールを除去
した。エタノールを除去した後、この混合物に、該混合物と等量の酢酸エチルを添加した
。得られた混合物を撹拌し、静置した。静置後の混合物から、酢酸エチル層の溶液を分取
し、減圧乾固した。得られた乾固物を実施例４と同様にしてＨＰＬＣに供した。
【０１６８】
その結果、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の保持時間と同じ保持時間３．
１分間において、図１１のピーク１およびピーク２とは異なる新たなピークが出現するこ
とが確認された。
【０１６９】
また、保持時間３．１分間におけるピークの画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲを調べ
た。その結果を以下に示す。
【０１７０】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（質量ｐｐｍ）：１．３３（２Ｈ，ｓ，Ｃ６〜Ｃ８），１．
４８（２Ｈ，ｍ，Ｃ５），１．５６（２Ｈ，ｍ，Ｃ９），２．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
０Ｈｚ，Ｃ４），２．２７（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），３．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，
Ｃ１０），５．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，Ｃ２），７．１０（１Ｈ，ｍ，Ｃ３
），１１．０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）
【０１７１】
上記の結果から、前記物質が１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸であることが
確認された。
【０１７２】
また、上記の結果から、リパーゼにより、実施例４で得られた１０−ヒドロキシ−トラ
ンス−２−デセン酸エチルエステルから１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を製
造することができることがわかる。
【０１７３】
（実施例６）
実施例５で用いられたリパーゼ溶液（シグマ・アルドリッチ社製、商品名：Ｌｉｐａｓ
ｅ）の代わりに、リパーゼ溶液（アマノエンザイム社製、商品名：Ｌｉｐａｓｅ ＰＳ）
を用いたこと以外は、実施例５と同様の操作を行なったところ、実施例５と同様に、１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステルから１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸を得ることができた。
【０１７４】
以上の結果から、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）により、
トランス−２−デセン酸エチルエステルから変換された１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸エチルエステルに、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステ
ルのエステル結合を加水分解するリパーゼなどの酵素を作用させることにより、１０−ヒ
ドロキシ−トランス−２−デセン酸を得ることができることがわかる。
【０１７５】
また、以上の結果から、本発明の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法によれば、簡便な操作
で不飽和脂肪酸誘導体を製造することができ、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導
体を高い効率で得ることができることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【０１７６】
【図１】実施例１において、培養物中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図２】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例１において、各ＫＨ2ＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図３】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例２において、各Ｎａ2ＨＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図４】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例３において、ＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の各組み合わせにおける培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図５】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例４において、各酵母エキス濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図６】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例５において、各ポリペプトン濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図７】実施例２におけるＧＣ−ＭＳの結果を示すグラフである。
【図８】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例７において、培地中の各グルコース濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図９】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例８において、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を示すグラフである。
【図１０】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例９において、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を示すグラフである。
【図１１】パネル（Ａ）は、実施例４における対照のクロマトグラムであり、パネル（Ｂ）は、実施例４において４８時間培養後の培養物から得られた画分のＨＰＬＣのクロマトグラムである。
【図１２】実施例４で得られた画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲの測定結果を示すチャートである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、不飽和脂肪酸誘導体の製造方法に関する。さらに詳しくは、例えば、不飽和
脂肪酸化合物からヒドロキシ不飽和脂肪酸、オキソ不飽和脂肪酸などの所望の不飽和脂肪
酸誘導体を得るのに有用な不飽和脂肪酸誘導体の製造方法および前記不飽和脂肪酸誘導体
を製造するためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪酸は、ヒトなどの生体内で一般にエネルギー源として好気的に代謝される化合物で
あることから、近年、脂肪酸の生体内における機能が注目されている。例えば、脂肪酸の
一種である共役リノール酸は、マウス前胃新生物形成を阻害すること（例えば、非特許文
献１参照）、動物の体重または脂肪の低下をもたらすこと（例えば、特許文献１および２
参照）などが知られている。
【０００３】
しかしながら、脂肪酸は、その種類によっては動物、植物などにごく微量でしか含まれ
ないため、一般に、脂肪酸を工業的に大量に生産し、安定的に供給することが困難である
と考えられている。そこで、脂肪酸を化学的に合成する方法が考えられるが、この方法に
は、通常、煩雑な工程を必要とし、生産効率が低いという欠点がある。
【０００４】
【特許文献１】特表２００１−５０８０８５号公報
【特許文献２】特開２００２−２２３７２２号公報
【非特許文献１】ワイエル ハー（ＹＬ Ｈａ）ら著、「リノール酸の共役二重結合型誘導体によるベンゾ（ザ）ピレン誘導マウス前胃新生物形成の阻害(Inhibition of benzo(a)pyrene-induced mouse forestomach neoplasia byconjugated dienoic derivatives of linoleic acid)」、キャンサー・リサーチ(Cancer Res.)、１９９０年発行、第５０巻、第１０９７頁−第１１０１頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導体を製造すること、不飽和脂肪酸化合物から
不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ることなどの少なくとも１つの目的を達成しうる不飽
和脂肪酸誘導体の製造方法を提供することを課題とする。また、本発明は、不飽和脂肪酸
化合物から不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ることができる不飽和脂肪酸誘導体製造用
キットを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、
（１）（Ａ）一般式（Ｉ）：
【０００７】
【化１】
【０００８】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物と、
（Ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【０００９】
【化２】
【００１０】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物
または前記微生物の無細胞抽出物と
を接触させることを特徴とする一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪酸誘導体の製造方法
、
（２）前記微生物が、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）、カン
ジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）、カンジダ ピグナリエ
（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）、カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ
ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）およびヤロウイア リポリチカ（Ｙａｌｌｏｗｉａ ｌｙ
ｐｏｌｙｔｉｃａ）からなる群より選ばれた少なくとも１種である前記（１）記載の不飽
和脂肪酸誘導体の製造方法、
（３）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を含有する培地中で前記微生物を培養
する前記（１）または（２）に記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法、
（４）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物が、トランス−２−デセン酸である前
記（１）〜（３）のいずれかに記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法、ならびに
（５）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸において、Ｒ1が炭素数１〜４のアルキル基
であるとき、該不飽和脂肪酸アルキルエステルから一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪
酸誘導体を製造した後、さらに該不飽和脂肪酸誘導体に、該不飽和脂肪酸誘導体のエステ
ル結合を加水分解させる酵素を作用させる前記（１）〜（３）いずれか記載の不飽和脂肪
酸誘導体の製造方法、および
（６）（ａ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）で表される不
飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属もしくはヤ
ロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微
生物の無細胞抽出物と、
（ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地と
を含有してなる不飽和脂肪酸誘導体製造用キット
に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法によれば、簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導体を
製造することができるという優れた効果が奏される。また、本発明の不飽和脂肪酸誘導体
の製造方法によれば、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ること
ができるという優れた効果が奏される。さらに、本発明の不飽和脂肪酸誘導体製造用キッ
トによれば、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を高い効率で得ることができる
という優れた効果が奏される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法は、前記したように、
（Ａ）一般式（Ｉ）：
【００１３】
【化３】
【００１４】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物（以下、単に「不飽和脂肪酸化合物」という）と、
（Ｂ）前記不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【００１５】
【化４】
【００１６】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体（以下、単に「不飽和脂肪酸誘導体」という）に変換する
能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ
）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽出物と
を接触させることを特徴とする。
【００１７】
本発明は、不飽和脂肪酸誘導体を製造する際に、前記微生物、前記微生物の培養物、前
記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽出物が用いられている点に、１つの大
きな特徴を有する。
【００１８】
したがって、本発明によれば、例えば、化学的合成法によって不飽和脂肪酸誘導体を製
造する場合のような煩雑な工程を必要としないので、より簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導
体を製造することができるという優れた効果が奏される。また、本発明によれば、不飽和
脂肪酸誘導体を製造する際に前記微生物などが用いられているので、本質的に内在してい
る酵素を利用して不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換反応を行なうこと
ができることから、安定した変換活性が得られるという優れた効果が奏される。
【００１９】
本発明に用いられる微生物としては、不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に変換
する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物およびヤロウイア（
Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物が挙げられる。
【００２０】
前記微生物としては、例えば、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓ
ａ）、カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）、カンジダ
ピグナリエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）、カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）、ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ
ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）などが挙げられる。前記微生物のなかでは、例えば、不飽和脂
肪酸誘導体として１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を製造する場合、この１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を高い効率でより短時間で製造する観点から、カ
ンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）およびヤロウイア リポリチカ
（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）が好ましく、カンジダ マルトーザ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）がより好ましい。
【００２１】
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）としては、例えば、カンジ
ダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株、ＩＡＭ
１２２４８株などが挙げられる。カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉ
ｐｈｉｌａ）としては、例えば、カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉ
ｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２４８５株などが挙げられる。カンジダ ピグナリエ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）としては、例えば、カンジダ ピグナリエ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ） ＩＡＭ １２９０６株などが挙げられる。カンジダ ニト
ラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）としては、例えば、カンジダ
ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２８８３
株などが挙げられる。ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃ
ａ）としては、例えば、ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉ
ｃａ） ＡＴＣＣ ２０４６０株などが挙げられる。
【００２２】
なお、前記ＩＡＭ株の微生物は、当業者が東京大学分子細胞生物学研究所 細胞機能情
報研究センター（ＩＡＭ）から容易に入手しうる微生物である。また、前記ＡＴＣＣ株の
微生物は、当業者がアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から容易に入
手しうる微生物である。
【００２３】
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株は
、識別の表示：Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ ＫＵ８３と命名・表示され、受託日：
２００６年１０月４日、受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ-２６６として、独立行政法人製品評価
技術基盤機構 特許微生物寄託センター〔日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（
郵便番号：２９２−０８１８）〕に寄託されている。
【００２４】
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株（
Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ ＫＵ８３株）は、
（ｉ）菌の形態は、球形または短卵形であり、偽菌糸を形成する、
（ｉｉ）菌の大きさは、（３．６〜７．２μｍ）×（３．６〜７．９μｍ）である、
（ｉｉｉ）２５℃で１ヵ月間培養したコロニーは、クリーム色を呈し、円滑な外観を有し
、偽菌糸の周縁部にはシワを形成する、
（ｉｖ）グルコース、シュクロースおよびトレハロースをそれぞれ発酵する、
（ｖ）ガラクトース、シュクロース、マルトース、トレハロース、メレジトース、Ｄ−キ
シロース、グリセロール、Ｄ−マンニトール、Ｄ−グルシトール、サリシンおよびコハク
酸をそれぞれ資化することができる、
（ｖｉ）アルブチンを分解することができる、
（ｖｉｉ）キノンの種類は、Ｑ９である、
（ｖｉｉｉ）Ｇ＋Ｃ含量は、３５．６〜３６．８ｍｏｌ％である
という微生物学的性質を有する。
【００２５】
前記微生物の選別は、例えば、
（１）トランス−２−デセン酸を含有する液体培地中で候補となるカンジダ（Ｃａｎｄｉ
ｄａ）属に属する微生物を培養するステップ、
（２）前記ステップ（１）で得られた培養物から微生物細胞を除去して培養上清を得るス
テップ、および
（３）前記ステップ（２）で得られた培養上清中における９−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸および／または１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の存在の有無を評
価するステップ
を含み、培養上清中に９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１０−ヒ
ドロキシ−トランス−２−デセン酸が検出された場合、前記培養上清に対応する微生物が
、前記トランス−２−デセン酸を９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／また
は１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換する能力を有する微生物、すなわち
前記（Ｂ）の微生物であることの指標となる微生物のスクリーニング方法によって行なう
ことができる。
【００２６】
前記ステップ（１）において、微生物の培養は、微生物の生育状態を良好に維持する観
点から、好ましくは２０〜３７℃、より好ましくは２２〜３０℃、さらに好ましくは２６
〜２９℃の培養温度で、２４〜６０時間の培養時間で行なうことができる。
【００２７】
前記ステップ（１）で用いられるトランス−２−デセン酸を含有する液体培地としては
、特に限定されないが、例えば、イーストアンドモールド（ＹＭ）培地、ポテトデキスト
ロース（ＰＤ）培地、サブロー培地、ツァペック酵母エキス培地、ソイビーン・カゼイン
・ダイジェスト・ブロス（ＳＣＤ）培地、半合成培地などの培地にトランス−２−デセン
酸を添加して得られた培地などが挙げられる。
【００２８】
トランス−２−デセン酸を含有する液体培地としては、特に限定されないが、例えば、
トランス−２−デセン酸とグルコースとＫＨ2ＰＯ4とＮａ2ＨＰＯ4と酵母エキスとを含有
し、さらに任意にポリペプトン、尿素、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ、Ｚｎ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏなどを含有する培地などが挙げられる。
【００２９】
トランス−２−デセン酸を含有する液体培地としては、特に限定されないが、例えば、
トランス−２−デセン酸０．１質量％と、グルコース３．０質量％と、ＫＨ2ＰＯ4 ０．
２質量％と、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％と、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％と
、酵母エキス０．０２５質量％と、ポリペプトン０．０２５質量％と、尿素０．３質量％
と、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％と、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％
と、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％とを含有する培地（ｐＨ６．９）、トランス
−２−デセン酸０．１質量％を含有し、イーストアンドモールド（ＹＭ）培地を基本培地
とした培地〔組成：酵母エキス０．３質量％、麦芽エキス０．３質量％、ポリペプトン０
．５質量％、グルコース１．０質量％、蒸留水（残部）〕などが挙げられる。
【００３０】
前記ステップ（２）において、培養上清は、前記ステップ（１）で得られた培養物を遠
心分離に供し、微生物細胞とそれ以外の液体成分とを分離する方法、前記培養物を適切な
孔径（例えば、０．４５μｍ）のフィルターに供し、微生物細胞とそれ以外の液体成分と
を分離する方法などによって得ることができる。
【００３１】
前記ステップ（３）において、前記ステップ（２）で得られた培養上清中における９−
ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１０−ヒドロキシ−トランス−２−
デセン酸の存在の有無は、例えば、前記培養上清を、適切な溶離液を用いた高速液体クロ
マトグラフィー（以下、ＨＰＬＣという）に供し、波長２１５ｎｍにおける吸光度をモニ
ターし、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品および／または１０−ヒドロキ
シ−トランス−２−デセン酸の標品と同じ保持時間のピークの有無を検出することにより
、確認することができる。
【００３２】
前記ＨＰＬＣには、例えば、全多孔性球状シリカゲル（例えば、平均粒子径：約５μｍ
、平均細孔径：約１２０Å、比表面積：約３００ｍ2／ｇ、化学結合：三反応性基型オク
タデシル基結合など）を用いたカラム（カラムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）など
を用いることができる。カラムとしては、特に限定されないが、ナカライテスク(株)製、
商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（カラ
ムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４５−２１）などが挙げ
られる。
【００３３】
このカラムを用いる場合、例えば、カラム温度３５℃および流速１ｍＬ／ｍｉｎで、溶
出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４
／４２．０〕による１５分間の溶出、溶出液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出
、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶出を順に行なうことにより、ＨＰＬＣを行なう
ことができる。
【００３４】
前記ステップ（３）において、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品および
／または１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品と同じ保持時間のピークが検
出されることは、培養上清に９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１
０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が存在することの指標となる。このようにして
、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸および／または１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸が検出された培養上清に対応する微生物として、目的の微生物を得ること
ができる。
【００３５】
本発明においては、不飽和脂肪酸化合物と、前記微生物、前記微生物の細胞破砕物また
は前記微生物の無細胞抽出物とを接触させる点にも、１つの大きな特徴がある。本発明は
、前記特徴を有するので、不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に高い効率で安定し
て変換することができる。
【００３６】
前記微生物、前記微生物の細胞破砕物および前記微生物の無細胞抽出物のなかでは、不
飽和脂肪酸誘導体を安定的に製造する観点から、前記微生物が好ましい。
【００３７】
一般式（Ｉ）において、Ｒ1は、水素原子または炭素数１〜４のアルキル基である。こ
のアルキル基の炭素数は、前記微生物による基質特異性の観点から、１以上、好ましくは
２以上であり、工業的生産性の観点から、４以下、好ましくは３以下である。炭素数１〜
４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基およびブチル基が挙げられる
。
【００３８】
一般式（Ｉ）において、Ｒ2は、炭素数２〜１５のアルキル基である。このアルキル基
の炭素数は、前記微生物による基質特異性の観点から、２以上、好ましくは３以上であり
、工業的生産性の観点から、１５以下、好ましくは９以下である。炭素数２〜１５のアル
キル基としては、例えば、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、
ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などに代表される炭素数２〜１５の直鎖ア
ルキル基、およびイソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル
基などに代表される分岐鎖を有する炭素数２〜１５のアルキル基などが挙げられる。Ｒ2
のなかでは、前記微生物による基質選択性の観点から、ヘキシル基が好ましい。
【００３９】
一般式（ＩＩ）において、Ｒ1は、一般式（Ｉ）におけるＲ1と同じである。また、Ｒ3
は、一般式（Ｉ）におけるＲ2がヒドロキシル化またはケトン化された基であり、より具
体的には、ヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５のアルキル基である。
Ｒ3の炭素数は、前記微生物による基質特異性の観点から、２以上、好ましくは３以上で
あり、工業的生産性の観点から、１５以下、好ましくは９以下である。Ｒ3の具体例とし
ては、１−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシプロピル基、
３−ヒドロキシプロピル基、３−ヒドロキシブチル基、４−ヒドロキシブチル基、４−ヒ
ドロキシペンチル基、５−ヒドロキシペンチル基、５−ヒドロキシヘキシル基、６−ヒド
ロキシヘキシル基、６−ヒドロキシヘプチル基、７−ヒドロキシヘプチル基、７−ヒドロ
キシオクチル基、８−ヒドロキシオクチル基などに代表される炭素数２〜１５のヒドロキ
シアルキル基；２−プロパノニル基、３−ブタノニル基、４−ペンタノニル基、５−ヘキ
サノニル基などに代表される炭素数２〜１５のケトン基含有アルキル基などが挙げられる
。Ｒ3のなかでは、前記微生物による基質選択性の観点から、５−ヘキサノニル基が好ま
しい。
【００４０】
不飽和脂肪酸化合物と前記微生物との接触は、例えば、不飽和脂肪酸化合物を含有する
培地中で前記微生物を培養する方法、前記微生物を担体に固定化させた固定化微生物担体
または前記微生物を包括剤に包括固定化させた微生物包括物を、不飽和脂肪酸化合物を含
有する培地または不飽和脂肪酸化合物を含有する緩衝液中で維持する方法などによって行
うことができる。
【００４１】
不飽和脂肪酸化合物を含有する培地中で前記微生物を培養する場合、用いられる培地（
以下、「変換培地」ともいう）としては、例えば、不飽和脂肪酸化合物とグルコースとを
含有する培地などが挙げられる。
【００４２】
前記変換培地中の不飽和脂肪酸化合物の濃度は、不飽和脂肪酸誘導体への変換率を高め
る観点から、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０５質量％以上であり
、微生物を良好な生育状態で維持させる観点から、好ましくは１０質量％以下、より好ま
しくは５質量％以下、さらに好ましくは１質量％以下である。
【００４３】
また、前記培地中のグルコース濃度は、微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂
肪酸誘導体への変換効率をより高める観点から、好ましくは３質量％以上、より好ましく
は５質量％以上、さらに好ましくは７．５質量％以上であり、不飽和脂肪酸誘導体への変
換を十分に行ない、かつ不飽和脂肪酸誘導体への変換の経済性を高める観点から、好まし
くは２０質量％以下、より好ましくは１５質量％以下である。
【００４４】
前記変換培地のｐＨは、微生物の生育を良好にする観点から、好ましくは５以上、より
好ましくは６．５以上であり、高い効率で変換反応を行なう観点から、好ましくは８以下
、より好ましくは７．５以下である。前記変換培地には、所望のｐＨとなるようにするた
めに、例えば、ＫＨ2ＰＯ4、Ｎａ2ＨＰＯ4などを用いることができる。前記変換培地中の
ＫＨ2ＰＯ4の濃度は、微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換
効率をより高める観点から、好ましくは０．０５〜５質量％、より好ましくは０．１〜１
質量％、さらに好ましくは０．１〜０．３質量％である。また、前記変換培地中のＮａ2
ＨＰＯ4の濃度は、微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換効
率をより高める観点から、好ましくは０．０５〜５質量％、より好ましくは０．１〜１質
量％、さらに好ましくは０．３〜０．５質量％である。
【００４５】
前記変換培地には、前記微生物の生育能や前記微生物による変換効率を高める観点から
、酵母エキスが含まれていてもよい。前記変換培地中の酵母エキスの濃度は、前記微生物
による不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体への変換効率をより高める観点から、
好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０２質量％以上であり、不飽和脂肪
酸誘導体への変換を十分に行なうとともに、不飽和脂肪酸誘導体への変換の経済性を高め
る観点から、好ましくは５質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは
０．０３質量％以下である。
【００４６】
前記変換培地には、必要により、ポリペプトン、尿素、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、ＦｅＳＯ
4・７Ｈ2Ｏ、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏなどが含まれていてもよい。
【００４７】
前記変換培地としては、特に限定がないが、例えば、不飽和脂肪酸化合物がトランス−
２−デセン酸である場合、トランス−２−デセン酸を０．０１〜１０質量％（例えば、０
．１質量％など）と、グルコースを３〜２０質量％（例えば、３質量％など）と、ＫＨ2
ＰＯ4を０．０５〜５質量％（例えば、０．２質量％など）と、Ｎａ2ＨＰＯ4を０．０５
〜５質量％（例えば、０．３５質量％など）と、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏを０．０１〜１質量
％（例えば、０．０５質量％など）と、酵母エキスを０．０１〜５質量％（例えば、０．
０２５質量％など）と、ポリペプトンを０〜１質量％（例えば、０．０２５質量％など）
と、尿素を０．０３〜３質量％（例えば、０．３質量％など）と、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏを
０．０００１〜０．０１質量％（例えば、０．００２質量％など）と、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2
Ｏを０．０００１〜０．０１質量％（例えば、０．００２質量％など）と、ＺｎＳＯ4・
７Ｈ2Ｏを０．０００１〜０．０１質量％（例えば、０．００２質量％など）と、蒸留水
（残部）とを含有する培地〔ｐＨ５〜８（例えば、ｐＨ６．９など）〕、トランス−２−
デセン酸を０．０１〜１０質量％（例えば、０．１質量％など）を含有し、かつイースト
アンドモールド（ＹＭ）培地を基本培地とした培地などが挙げられる。前記変換培地は、
例えば、乾燥状態の組成物として入手することができる。前記変換培地は、例えば、乾燥
状態の変換培地の組成物を水に溶解させ、滅菌フィルターなどで濾過することにより、得
ることができる。
【００４８】
前記微生物の培養温度は、微生物の生育状態を良好に維持する観点から、好ましくは２
０〜３７℃、より好ましくは２４〜３０℃、さらに好ましくは２７〜２９℃である。前記
微生物の培養時間は、不飽和脂肪酸誘導体の生産性を高める観点から、好ましくは１２〜
１２０時間、より好ましくは２４〜６０時間である。
【００４９】
なお、より高い変換効率で１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を製造する観点
から、前記ステップ（１）において、例えば、ドデカンなどの中鎖の炭化水素、好ましく
は炭素数５〜１２の炭化水素を含む培地を用いて前培養を行なった後、前記変換培地で培
養することが好ましい。
【００５０】
前記微生物を担体に固定化させた固定化微生物担体は、物理的吸着法、イオン結合法、
共有結合法、生化学的特異的結合法などの方法により、前記微生物を適切な担体に固定化
させることによって得ることができる。前記担体としては、特に限定されないが、例えば
、セルロース、アガロースなどに代表される多糖；多孔質ガラス、金属酸化物などに代表
される無機物質；ポリアクリルアミド、ポリスチレンなどの合成高分子化合物などが挙げ
られる。
【００５１】
前記微生物を包括剤に包括固定化させた微生物包括物は、包括剤で前記微生物を包むこ
とによって得ることができる。前記包括剤としては、特に限定されないが、例えば、アル
ギン酸、カラギーナンなどの多糖；ポリアクリルアミドなどが挙げられる。
【００５２】
不飽和脂肪酸化合物と前記微生物とを接触させる際に用いられる緩衝液としては、例え
ば、リン酸緩衝化生理的食塩水などが挙げられる。
【００５３】
また、不飽和脂肪酸化合物と前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽出物
との接触は、前記と同様の緩衝液中で不飽和脂肪酸化合物と前記微生物の細胞破砕物とを
混合することなどによって行なうことができる。
【００５４】
本発明においては、前記微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細胞抽
出物が不飽和脂肪酸化合物に作用するので、不飽和脂肪酸化合物が目的とする不飽和脂肪
酸誘導体に変換し、変換した不飽和脂肪酸誘導体が培養上清または緩衝液中に蓄積される
。
【００５５】
前記不飽和脂肪酸誘導体が蓄積された培養上清または緩衝液を、適切な溶離液が用いら
れたＨＰＬＣなどの分取手段に供し、波長２１５ｎｍにおける吸光度をモニターし、不飽
和脂肪酸化合物の標品と同じ保持時間を示す画分を分取することにより、不飽和脂肪酸誘
導体を実質的に単離することができる。
【００５６】
より具体的には、例えば、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が蓄積された培
養上清または緩衝液を、全多孔性球状シリカゲル（例えば、平均粒子径：約５μｍ、平均
細孔径：約１２０Å、比表面積：約３００ｍ2／ｇ、化学結合：三反応性基型オクタデシ
ル基結合など）を用いたカラム（カラムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）、例えば、
商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム〔カラ
ムの大きさ：４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、ナカライテスク(株)製、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１
４５−２１〕などに供し、カラム温度３５℃で、溶出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒド
ロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕による１５分間の溶出、
溶出液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間
の溶出をこの順序で流速１ｍＬ／ｍｉｎで行ない、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸の標品（保持時間約３．２分間）に相当する画分を分取することにより、１０−ヒ
ドロキシ−トランス−２−デセン酸を単離することができる。
【００５７】
また、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が蓄積された培養上清または緩衝液を
用いる場合、前記と同様にして９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の標品に相当す
る画分を分取することにより、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を単離すること
ができる。
【００５８】
本発明においては、不飽和脂肪酸化合物としてトランス−２−デセン酸を用いた場合、
９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸または１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸を効率よく得ることができる。より具体的には、例えば、不飽和脂肪酸化合物として
トランス−２−デセン酸を用いた場合、トランス−２−デセン酸から実質的に単離された
１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を高い変換効率で得ることができる。
【００５９】
なお、本発明において、一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物において、Ｒ1が
炭素数１〜４のアルキル基であるとき、対応する不飽和脂肪酸誘導体を効率よく製造する
観点から、前記不飽和脂肪酸アルキルエステルから一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪
酸誘導体を製造した後、さらに該不飽和脂肪酸誘導体に、該不飽和脂肪酸誘導体のエステ
ル結合を加水分解させる酵素を作用させることが好ましい。これにより、一般式（ＩＩ）
において、Ｒ1が水素原子であり、Ｒ3がヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２
〜１５のアルキル基である不飽和脂肪酸アルキルエステルを得ることができる。
【００６０】
前記酵素としては、例えば、リパーゼ、エステラーゼなどが挙げられる。
【００６１】
前記酵素を作用させる不飽和脂肪酸誘導体として、９−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸アルキルエステルを用い、該９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸アルキルエ
ステルに、前記酵素を作用させた場合、９−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を効率
よく得ることができる。
【００６２】
また、前記酵素を作用させる不飽和脂肪酸誘導体として、１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸アルキルエステルを用い、該１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸
アルキルエステルに、前記酵素を作用させた場合、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸を効率よく得ることができる。
【００６３】
以上説明したように、本発明の製造方法によれば、簡便な操作で不飽和脂肪酸誘導体を
製造することができる。また、本発明の製造方法によれば、不飽和脂肪酸化合物から不飽
和脂肪酸誘導体を高い効率で製造することができる。
したがって、本発明の製造方法は、例えば、不飽和脂肪酸化合物からヒドロキシ不飽和
脂肪酸、オキソ不飽和脂肪酸などの所望の不飽和脂肪酸誘導体を製造するのに有用である
。
【００６４】
本発明の不飽和脂肪酸誘導体製造用キットは、（ａ）不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪
酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属またはヤロウイア（
Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物または前記微生物の無細
胞抽出物と、（ｂ）不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地とを含有する。
【００６５】
本発明の代表的なキットとして、（ａ）不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸誘導体に変
換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属またはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗ
ｉａ）属に属する微生物と、（ｂ）不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地
とを含有するキットが挙げられる。このキットは、前記微生物および前記培地を有するの
で、本発明のキットを用いることにより、前記微生物による不飽和脂肪酸化合物から不飽
和脂肪酸誘導体への変換を至適条件下で行なうことができる。
【００６６】
したがって、前記キットを用いれば、このキットに含まれている前記微生物と前記培地
とを混合するだけで、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を簡便にかつ効率よく
製造することができる。
【００６７】
本発明のキットは、前記微生物に代えて、（ａ’）不飽和脂肪酸化合物を不飽和脂肪酸
誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物もしく
はヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物の細胞破砕物または前記微生物の無
細胞抽出物を含有し、かつ前記培地に代えて、（ｂ’）不飽和脂肪酸化合物およびグルコ
ースを含有する溶液を有するキットであってもよい。このキットは、前記（ａ’）細胞破
砕物または無細胞抽出物および前記（ｂ’）溶液を有するので、このキットを用いること
により、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導体を簡便にかつ効率よく製造すること
ができる。
【００６８】
なお、本発明のキットは、不飽和脂肪酸誘導体の単離をより容易に行なう観点から、前
記微生物および前記培地を含有することが好ましい。前記微生物は、生菌体、凍結乾燥微
生物、および凍結保護剤に懸濁させた凍結保存微生物のいずれであってもよい。また、前
記微生物は、例えば、アンプルなどの滅菌済容器に封入されていてもよい。さらに、乾燥
粉末培地であってもよく、滅菌培養液であってもよい。前記培地は、例えば、培養用フラ
スコ、培養用試験管、保存用容器などの滅菌済容器に封入されていてもよい。
【００６９】
前記微生物は、前記固定化微生物担体または微生物包括物であってもよい。前記培地と
しては、本発明の製造方法に用いられる変換培地と同様の培地が挙げられる。
【００７０】
なお、本発明のキットには、必要により、他の助剤などが含まれていてもよい。
【００７１】
以上説明したように、本発明のキットを用いることにより、不飽和脂肪酸化合物から不
飽和脂肪酸誘導体を高い効率で製造することができる。したがって、本発明のキットは、
不飽和脂肪酸誘導体の製造用キットとして有用である。
【実施例】
【００７２】
次に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例によって
限定されるものではない。
【００７３】
なお、各実施例などで用いられた培地は、あらかじめオートクレーブ中で１２０℃の温
度で１５分間滅菌された培地である。
【００７４】
（実施例１）
種々の供試微生物を、それぞれ、ＹＭ寒天培地｛培地（１０００ｍＬ）の組成：酵母エ
キス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓ
ｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）社製〕３．０ｇ（０．３質量％）、麦芽エキス３．０ｇ
（０．３質量％）、グルコース１０．０ｇ（１．０質量％）、ポリペプトン〔日本製薬(
株)製〕５．０ｇ（０．５質量％）、寒天〔ナカライテスク(株)製〕１５．０ｇ（１．５
質量％）、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２｝に塗布し、２８℃で４８時間培養した。その後
、前記培地から微生物細胞を回収した。得られた微生物細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、
ＯＤ660が１．０である供試微生物懸濁液を得た。
【００７５】
次に、前記供試微生物懸濁液０．１ｍＬを、Ｌ字型試験管中のＡＭ−１培地〔培地（１
０００ｍＬ）の組成：ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、Ｍｇ
ＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カ
ンパニー社製〕０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、
尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．
００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−デセン酸〔東京
化成工業(株)製〕０．１質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕４．９ｍＬに添加した。
その後、微生物細胞を７１ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。なお、ＡＭ−１培地
による培養開始から０時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間およ
び１６８時間の時点で、０．５ｍＬずつ培養物を採取した。
【００７６】
得られた培養物を、内部標準（１−ナフトール）を含有する溶出液Ａ〔アセトニトリル
／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕で１０倍に
希釈し、試料を得た。
【００７７】
得られた試料を、(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＣＬ−６Ａおよび
ナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ
Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４５
−２１）を用いて高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供し、トランス−２−デセ
ン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【００７８】
なお、ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃および流速１ｍＬ／ｍｉｎで、溶出液Ａ〔アセト
ニトリル／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕に
よる１５分間の溶出、溶出液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶
出液Ａによる２５分間の溶出を順に行なうことによって実施した。また、トランス−２−
デセン酸およびその変換産物を２１５ｎｍの波長で検出した。各試料を分析した結果の一
部を表１に示す。
【００７９】
表１には、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に対応するピーク面積（保持時
間３．２分間）から算出された、試料中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸量が示されている。
【００８０】
表１中の「−」はピークなし（試料中に１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が
検出されず）、「＋」は試料中の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量が０質量
ｐｐｍを超え２０質量ｐｐｍ未満、「＋＋」は試料中の１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸量が２０質量ｐｐｍ以上であることを示す。
【００８１】
【表１】
【００８２】
表１に示された結果から、前記ＡＭ−１培地を用いることにより、前記培地中に含まれ
るトランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換する微生
物を選別することができることがわかる。また、表１に示されるように、選別された微生
物のなかでも特にＫＵ８３株は、他の供試微生物と対比して、より高い効率でトランス−
２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することができること
がわかる。
【００８３】
次に、前記ＫＵ８３株の培養物中におけるトランス−２−デセン酸量および１０−ヒド
ロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。それらのうち、１０−ヒドロ
キシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を図１に示す。
【００８４】
図１に示されるように、培養物中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸
量は、ＡＭ−１培地による培養開始から約２４時間経過後に最も多くなることがわかる。
【００８５】
なお、ＫＵ８３株によるトランス−２−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸へのモル変換率は、ＡＭ−１培地による培養開始から２４時間の時点で３５％
であった。
【００８６】
表１に示される供試微生物のうち、ＫＵ８３株およびＫＵ８４株は、カンジダ マルト
ーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）〔カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍ
ａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａ
ｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４８株〕である。ＫＵ１２３株は、カンジダ スクシフィ
ラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）〔カンジダ スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２４８５株〕である。ＫＵ１１０株は、カンジ
ダ ピグナリエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）〔カンジダ ピグナリエ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ） ＩＡＭ １２９０６株〕である。ＫＵ１０３株は、
カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）〔カンジダ
ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ） ＩＡＭ １２８８３株
〕である。ＫＵ１２９株は、ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙ
ｔｉｃａ）〔ヤロウイア リポリチカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ） Ａ
ＴＣＣ ２０４６０株〕である。
【００８７】
前記ＩＡＭ株の微生物は、東京大学分子細胞生物学研究所 細胞機能情報研究センター
（ＩＡＭ）から入手しうる微生物である。前記ＡＴＣＣ株の微生物は、アメリカンタイプ
カルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手しうる微生物である。また、前記カンジダ
マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ） ＩＡＭ １２２４７株は、Ｃａｎｄ
ｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ ＫＵ８３株と命名・表示され、受託日：２００６年１０月４日
、受託番号：ＮＩＴＥ Ｐ-２６６として、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微
生物寄託センター〔日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（郵便番号：２９２−０
８１８）〕に寄託されている。
【００８８】
（比較例１）
実施例１において、ＡＭ−１培地の代わりに２ＤＡ−１培地〔培地（１０００ｍＬ）の
組成：イーストナイトロジェンベース（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー
社製）０．６７質量％、塩化アンモニウム０．５質量％、ポリ（オキシエチレン）スルビ
タンモノオレエート〔商品名：Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０〕０．０２質量％、トランス
−２−デセン酸０．１質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．８〕を用いたことを除き、実施
例１と同様にして、供試微生物の培養物中のトランス−２−デセン酸およびその変換産物
の存在を分析した。
【００８９】
その結果、いずれの試料からもトランス−２−デセン酸の変換産物である１０−ヒドロ
キシ−トランス−２−デセン酸が検出されなかった。この結果から、前記供試微生物に２
ＤＡ−１培地を用いた場合には、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸に変換することができる微生物の選別が困難であることが示唆される。
【００９０】
（比較例２）
実施例１において、ＡＭ−１培地の代わりに２ＤＡ−２培地〔培地（１０００ｍＬ）中
の組成：イーストナイトロジェンベース（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニ
ー社製）０．６７質量％、塩化アンモニウム０．５質量％、トランス−２−デセン酸０．
１質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．８〕を用いたことを除き、実施例１と同様にして、
供試微生物の培養物中のトランス−２−デセン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【００９１】
その結果、トランス−２−デセン酸の変換産物である１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸は、いずれの試料中にも検出されなかった。この結果から、前記供試微生物を
培養する際に２ＤＡ−２培地を用いた場合には、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロ
キシ−トランス−２−デセン酸に変換することができる微生物の選別が困難であることが
示唆される。
【００９２】
（比較例３）
実施例１において、ＡＭ−１培地の代わりにＥＬ培地〔培地（１０００ｍＬ）中の組成
：ＫＨ2ＰＯ4 ０．８質量％、塩化ナトリウム０．１質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．
１質量％、酵母エキス０．０５質量％、ポリペプトン０．０１５質量％、尿素０．１５質
量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．０００１質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０００１質
量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０００１質量％、トランス−２−デセン酸０．１質量％
、蒸留水（残部）、ｐＨ６．８〕を用いたことを除き、実施例１と同様にして、供試微生
物の培養物中のトランス−２−デセン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【００９３】
その結果、トランス−２−デセン酸の変換産物である１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸は、いずれの試料中にも検出されなかった。この結果から、前記供試微生物の
培養に際し、ＥＬ培地を用いた場合には、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−
トランス−２−デセン酸に変換することができる微生物の選別が困難であることが示唆さ
れる。
【００９４】
（試験例１）
ＫＵ８３株を前記ＹＭ寒天培地に塗布し、２８℃で４８時間培養した。その後、このＹ
Ｍ寒天培地からＫＵ８３株の細胞を回収した。得られた細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、
ＯＤ660が１．０であるＫＵ８３株懸濁液を得た。
【００９５】
また、前記ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度が０質量％（実験番号１）、０．０５質量
％（実験番号２）、０．１質量％（実験番号３）、０．１５質量％（実験番号４）、０．
２質量％（実験番号５）または０．３質量％（実験番号６）となるように調整された変換
培地を作製した。
【００９６】
前記ＫＵ８３株懸濁液０．１ｍＬを実験番号１〜６の各変換培地４．９ｍＬに添加した
。その後、微生物細胞を１４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。なお、培養開始
から０時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間および１２０時間の時点で、各変
換培地から培養物０．５ｍＬを採取した。各時点で得られた培養物について、ｐＨおよび
ＯＤ660を測定した。
【００９７】
また、内部標準（１−ナフトール）を含有する溶出液Ａ（アセトニトリル／テトラヒド
ロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０）で前記培養物を１０倍希
釈し、試料を得た。得られた試料を、(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ Ｓ
ＣＬ−６Ａおよびナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ
18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ
Ｎｏ．３８１４５−２１）を用いてＨＰＬＣに供し、トランス−２−デセン酸およびその
変換産物の存在を分析した。
【００９８】
なお、ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃、流速１ｍＬ／ｍｉｎで、溶出液Ａ（アセトニト
リル／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０）による
１５分間の溶出、溶出液Ｃ（アセトニトリル／テトラヒドロフラン（容量比）＝４０．６
／１７．４）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶出を順に行
なうことにより実施した。また、トランス−２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トラ
ンス−２−デセン酸の検出は、波長２１５ｎｍで行なった。１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸に対応するピーク面積（保持時間３．２分間）より、試料中における１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量を算出した。また、トランス−２−デセン酸に
対応するピーク面積（保持時間９．１分間）より、試料中におけるトランス−２−デセン
酸量を算出した。
【００９９】
各ＫＨ2ＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１
０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果をそれぞれ
順に図２のパネル（Ａ）〜（Ｄ）に示す。
【０１００】
図２中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のＫＨ2ＰＯ4濃度が０質量％（実験番号１）、０．０５質量％（実験番号２）、０．１質
量％（実験番号３）、０．１５質量％（実験番号４）、０．２質量％（実験番号５）およ
び０．３質量％（実験番号６）における測定結果を示す。
【０１０１】
図２のパネル（Ｂ）および（Ｃ）に示されるように、培養初期にＯＤが増加すると、Ｋ
Ｕ８３株によって培地中のトランス−２−デセン酸がより多く消費されることがわかる。
より具体的には、図２のパネル（Ｂ）および（Ｃ）に示されるように、ＫＨ2ＰＯ4濃度が
０質量％の場合、培養開始から２４時間の時点で、ＫＨ2ＰＯ4濃度が０．０５質量％の場
合、培養開始から４８時間の時点で、また、ＫＨ2ＰＯ4濃度が０．１質量％の場合、培養
開始から７２時間の時点で、それぞれトランス−２−デセン酸量が０質量％（０質量ｐｐ
ｍ）となることがわかる。
【０１０２】
特に、図２のパネル（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）に示されるように、ＫＵ８３株は、Ｋ
Ｈ2ＰＯ4濃度が０．１質量％の場合、ＯＤの上昇、すなわち菌の増殖とともにトランス−
２−デセン酸が消費される傾向があり、培養開始から４８時間の時点で、培地中で約０．
０１２４質量％（１２４質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を生
産することがわかる。また、図２のパネル（Ａ）および（Ｂ）に示されるように、ＯＤが
上昇するとｐＨが７．０以上に上昇し、その後、ｐＨは６．９〜７．２の範囲で推移する
ことがわかる。
【０１０３】
これらの結果より、培地中におけるＫＨ2ＰＯ4濃度は、０．１質量％前後が好適である
ことがわかる。
【０１０４】
（試験例２）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度が０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4濃
度が０質量％（実験番号７）、０．０５質量％（実験番号８）、０．１質量％（実験番号
９）、０．１５質量％（実験番号１０）、０．２質量％（実験番号１１）または０．３質
量％（実験番号１２）となるように調整し、変換培地を作製したことを除き、試験例１と
同様にして、各Ｎａ2ＨＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン
酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結
果を図３に示す。
【０１０５】
図３において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各Ｎａ2ＨＰＯ4濃度における
培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１０６】
図３中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のＮａ2ＨＰＯ4濃度が０質量％（実験番号７）、０．０５質量％（実験番号８）、０．１
質量％（実験番号９）、０．１５質量％（実験番号１０）、０．２質量％（実験番号１１
）および０．３質量％（実験番号１２）であるときの測定結果を示す。
【０１０７】
図３のパネル（Ａ）および（Ｂ）に示されるように、ｐＨが約６．０以下の場合、ＫＵ
８３株の生育が阻害される傾向があることがわかる。また、図３のパネル（Ａ）、（Ｂ）
および（Ｃ）に示されるように、培養初期にＯＤが増加すると、ＫＵ８３株によって、培
地中のトランス−２−デセン酸がより多く消費される傾向があり、ｐＨが６．６〜６．９
の範囲で推移することがわかる。また、図３のパネル（Ｄ）に示されるように、Ｎａ2Ｈ
ＰＯ4濃度が０．３質量％の場合、ＫＵ８３株は、培養開始から７２時間の時点で、培地
中で約０．０１７４質量％（１７４質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デ
セン酸を生産することがわかる。これらの結果から、培地中のＮａ2ＨＰＯ4濃度は、０．
３質量％前後が好適であることが示唆される。
【０１０８】
（試験例３）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の組み合
わせを、「０．１質量％および０．３質量％」（実験番号１３）、「０．１質量％および
０．４質量％」（実験番号１４）、「０．２質量％および０．２質量％」（実験番号１５
）、「０．２質量％および０．３質量％」（実験番号１６）、「０．２質量％および０．
４質量％」（実験番号１７）または「０．２質量％および０．５質量％」（実験番号１８
）となるように調整して変換培地を作製したことを除き、試験例１と同様にしてＫＨ2Ｐ
Ｏ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の各組み合わせにおける培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス
−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調
べた。その結果を図４に示す。
【０１０９】
図４において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、ＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2
ＨＰＯ4濃度の各組み合わせにおける培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量お
よび１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１１０】
図４中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の組み合わせがそれぞれ「０．１質量％および
０．３質量％」（実験番号１３）、「０．１質量％および０．４質量％」（実験番号１４
）、「０．２質量％および０．２質量％」（実験番号１５）、「０．２質量％および０．
３質量％」（実験番号１６）、「０．２質量％および０．４質量％」（実験番号１７）な
らびに「０．２質量％および０．５質量％」（実験番号１８）であるときの測定結果を示
す。
【０１１１】
図４のパネル（Ａ）〜（Ｃ）に示されるように、高いｐＨ条件になるほど、ＫＵ８３株
によってトランス−２−デセン酸がより多く消費され、かつＯＤが高くなることがわかる
。また、図４のパネル（Ａ）、（Ｂ）および（Ｄ）に示されるように、ｐＨが６．６〜７
．２である場合、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸がＫＵ８３株によってより
多く生産される傾向があることがわかる。一方、培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2Ｈ
ＰＯ4濃度の組み合わせが「０．２質量％および０．２質量％」である場合、ｐＨが６．
５である条件下であっても、ＫＵ８３株によって培地中で最大で約０．０２２４質量％（
２２４質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が生産されることがわ
かる。
【０１１２】
これらの結果から、培地中におけるＫＨ2ＰＯ4濃度／Ｎａ2ＨＰＯ4濃度の比（質量比）
が１／３〜２／５であることが好適であることがわかる。
【０１１３】
（試験例４）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度を０．２質量％に、Ｎａ2ＨＰＯ4
濃度を０．３５質量％に、酵母エキス濃度を０質量％（実験番号１９）、０．０２５質量
％（実験番号２０）、０．０５質量％（実験番号２１）、０．０７５質量％（実験番号２
２）、０．１質量％（実験番号２３）または０．２質量％（実験番号２４）に調整して変
換培地を作製したことを除き、試験例１と同様にして各酵母エキス濃度における培地のｐ
Ｈ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図５に示す。
【０１１４】
図５において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各酵母エキス濃度における培
地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１１５】
図５中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
の酵母エキス濃度が０質量％（実験番号１９）、０．０２５質量％（実験番号２０）、０
．０５質量％（実験番号２１）、０．０７５質量％（実験番号２２）、０．１質量％（実
験番号２３）および０．２質量％（実験番号２４）であるときの測定結果を示す。
【０１１６】
図５のパネル（Ａ）に示されるように、培地のｐＨは、６．６〜７．２の範囲で推移す
ることがわかる。また、図５のパネル（Ｂ）および（Ｃ）に示されるように、酵母エキス
濃度が０．０５質量％、０．０７５質量％または０．１質量％であるとき、培養開始から
４８時間の時点からトランス−２−デセン酸がＫＵ８３株によって消費されはじめ、ＯＤ
も増加する傾向があることがわかる。さらに、酵母エキス濃度が０．０２５質量％または
０．２質量％であるとき、培養開始から７２時間の時点から、トランス−２−デセン酸が
ＫＵ８３株によって消費されはじめ、ＯＤも増加する傾向があることがわかる。
【０１１７】
なかでもパネル（Ｄ）に示されるように、酵母エキス濃度が０．１質量％であるとき、
培養開始から９６時間の時点で１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の生産量が最
大となり、培地中で約０．０２６６質量％（２６６質量ｐｐｍ）の１０−ヒドロキシ−ト
ランス−２−デセン酸が生産されることがわかる。これらの結果から、培地中における酵
母エキス濃度は、０．０２５質量％以上、好ましくは０．１質量％前後であることが好適
であることが示唆される。
【０１１８】
（試験例５）
試験例１において、ＡＭ−１培地中のＫＨ2ＰＯ4濃度を０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4濃
度を０．３５質量％に、酵母エキス濃度を０．１質量％に、ポリペプトン濃度を０質量％
（実験番号２５）、０．００５質量％（実験番号２６）、０．０１質量％（実験番号２７
）、０．０１５質量％（実験番号２８）、０．０２質量％（実験番号２９）または０．０
３質量％（実験番号３０）に調整して変換培地を作製したことを除き、試験例１と同様に
して各ポリペプトン濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量およ
び１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図６
に示す。
【０１１９】
図６において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各ポリペプトン濃度における
培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１２０】
図６中の黒丸、黒四角、黒三角、白丸、白四角および白三角は、それぞれ順に、培地中
のポリペプトン濃度が０質量％（実験番号２５）、０．００５質量％（実験番号２６）、
０．０１質量％（実験番号２７）、０．０１５質量％（実験番号２８）、０．０２質量％
（実験番号２９）および０．０３質量％（実験番号３０）であるときの測定結果を示す。
【０１２１】
図６のパネル（Ａ）〜（Ｄ）に示されるように、培地中のポリペプトン濃度が０質量％
であるとき、培養開始から４８時間の時点で、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン
酸の生産量が最大となり、約１９４質量ｐｐｍの１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセ
ン酸が生産されることがわかる。これらの結果から、１０−ヒドロキシ−トランス−２−
デセン酸の生産には、ポリペプトンが用いられなくてもよいことが示唆される。
【０１２２】
（試験例６）
実施例１で用いた各試料について、変換培地〔培地（１０００ｍＬ）中の組成：ＫＨ2
ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５
質量％、酵母エキス（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製）０．０２５
質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣ
ｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4
・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−デセン酸〔東京化成工業(株)製〕０．１
質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕を用いたことを除き、実施例１と同様にしてトラ
ンス−２−デセン酸およびその変換産物の存在を分析した。
【０１２３】
その結果、用いられた試料のうち、ＫＵ８３株、ＫＵ１２３株およびＫＵ１２９株のそ
れぞれの培養上清から１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が特に顕著に検出され
、各培養上清には、それぞれ３５０質量ｐｐｍ、１４０質量ｐｐｍおよび１４０質量ｐｐ
ｍの１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸が含まれていた。このことから、ＫＵ８
３株、ＫＵ１２３株およびＫＵ１２９株を用いた場合には、より高い効率でトランス−２
−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を得ることができることがわ
かる。
【０１２４】
なお、ＫＵ１２９株は、ヤロウイア リポリチカ ＡＴＣＣ２０４６０株として容易に
入手しうる株である。
【０１２５】
（実施例２）
ＫＵ８３株を前記ＹＭ寒天培地に塗布し、２８℃で４８時間培養した。その後、前記培
地から微生物細胞を回収した。得られた微生物細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660
が１００である供試微生物懸濁液を得た。
【０１２６】
次に、前記供試微生物懸濁液１ｍＬを変換培地｛培地（１０００ｍＬ）中の組成：ＫＨ
2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５
質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製〕０．０２５
質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣ
ｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4
・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−デセン酸〔東京化成工業(株)製〕０．１
質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９｝１００ｍＬに添加した。その後、微生物細胞を１
４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で、２４〜４８時間培養した。
【０１２７】
得られた培養物を、内部標準（１−ナフトール）を含有する溶出液Ａ〔アセトニトリル
／テトラヒドロフラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕で１０倍に
希釈し、試料を得た。得られた試料を(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ Ｓ
ＣＬ−６Ａおよびナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ
18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ
Ｎｏ．３８１４５−２１）を用いてＨＰＬＣに供した。
【０１２８】
なお、ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃で、溶出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒドロフ
ラン／蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕による１５分間の溶出、溶出
液Ｂ（アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶
出をそれぞれ流速１ｍＬ／ｍｉｎで順に行なうことによって実施した。また、トランス−
２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の検出は、波長２１５ｎ
ｍで行なった。
【０１２９】
反応液にクロロホルムを添加し、振盪してクロロホルム層を回収した。減圧乾固してク
ロロホルムを除去した後、残渣を溶出液Ａに溶解した。得られた試料を(株)日立製作所製
、商品名：Ｄ−２０００ＨＰＬＣおよびナカライテスク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩ
Ｌ（登録商標） ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ ｔｙｐｅカラム〔１０．０×２５
０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４９−８１〕を用いてＨＰＬＣに供し、保持時間３．２
分間で溶出される画分を分取した。
【０１３０】
その後、分取した画分を減圧乾固することによって得られた物質をＧＣ−ＭＳ分析、1
Ｈ−ＮＭＲ分析、13Ｃ−ＮＭＲ分析およびＩＲ分析に供した。なお、ＧＣ−ＭＳ分析に際
して、三フッ化ホウ素メタノール錯体のメタノール溶液により、前記物質をメチルエステ
ル化させた。ＧＣ−ＭＳ分析の結果を図７に示す。
【０１３１】
得られた物質は、以下の物性を有していることから、１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸であることが確認された。
【０１３２】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（質量ｐｐｍ）：１．３３（２Ｈ，ｓ，Ｃ６〜Ｃ８），１．
４８（２Ｈ，ｍ，Ｃ５），１．５６（２Ｈ，ｍ，Ｃ９），２．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
０Ｈｚ，Ｃ４），２．２７（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），３．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，
Ｃ１０），５．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，Ｃ２），７．１０（１Ｈ，ｍ，Ｃ３
），１１．０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）
【０１３３】
13Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣl3）δ（質量ｐｐｍ）：２５．６（Ｃ８），２７．８（Ｃ５），２
９．０（Ｃ６），２９．１（Ｃ７），３２．２（Ｃ９），３２．６（Ｃ４），６３．０（
Ｃ１０），７６．５〜７７．４（ＣＨＣｌ3），１２０．５（Ｃ２），１５２．１（Ｃ３
），１７１．１（Ｃ１）
【０１３４】
ＩＲ（液膜法）：１６５２．９ｃｍ-1（ｔｒａｎｓ−ＣＨ＝ＣＨ−），１６９５．３，２
９３１．６ｃｍ-1（−ＣＯＯＨ），３３９４．５ｃｍ-1（−ＣＨ２−ＯＨ）
【０１３５】
ＧＣ−ＭＳ：分子イオンピークは検出されなかったが、１６８、１１３および５９ｍ／ｚ
にフラグメントピークが検出された。
【０１３６】
（試験例７）
ＹＭ培地〔組成：酵母エキス０．３質量％、麦芽エキス０．３質量％、ポリペプトン０
．５質量％、グルコース１．０質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２〕を用いて２８℃の
温度で４８時間、ＫＵ株の前培養を行なった。得られた培養物を遠心分離に供し、菌体を
回収した。得られた菌体を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660が１００である懸濁液を得
た。
【０１３７】
次に、得られた懸濁液１ｍＬを各種濃度でグルコースを含有する変換培地〔培地（１０
００ｍＬ）中の組成：トランス−２−デセン酸〔東京化成工業(株)製〕０．１質量％、グ
ルコース１質量％（実験番号３１）、２質量％（実験番号３２）または３質量％（実験番
号３３）、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７
Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー
社製〕０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．
３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質
量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕 １００
ｍＬに添加した。その後、微生物細胞を１４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。
【０１３８】
次に、試験例１と同様にして各グルコース濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トラン
ス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を
調べた。その結果を図８に示す。
【０１３９】
図８において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、各グルコース濃度における培
地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示す。
【０１４０】
また、図８中の黒丸、黒四角および黒三角は、変換培地中のグルコース濃度が、それぞ
れ順に、１質量％（実験番号３１）、２質量％（実験番号３２）および３質量％（実験番
号３３）であるときの測定結果を示す。
【０１４１】
図８の黒三角（実験番号３３）に示されるように、ＹＭ培地で前培養した菌を、３質量
％グルコースを含有する変換培地で培養を行なった場合、より早くトランス−２−デセン
酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することができることがわかる。
【０１４２】
（試験例８）
試験例７において、ＹＭ培地の代わりに中鎖の炭化水素であるドデカンを含有する培地
（前培養ドデカン培地）〔組成：ドデカン１質量％、ポリペプトン０．５質量％、酵母エ
キス０．３質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２〕で前培養したことを除き、試験例７と
同様にして培養を行ない、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図９に示す
。
【０１４３】
図９において、パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、培地のｐＨ、ＯＤ660、トラ
ンス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化
の測定結果を示す。
【０１４４】
図９中の黒丸、黒四角および黒三角は、それぞれ順に、培地中のグルコース濃度が１質
量％（実験番号３４）、２質量％（実験番号３５）および３質量％（実験番号３６）であ
るときの測定結果を示す。
【０１４５】
図９に示された結果から、前培養ドデカン培地で前培養した場合、効率よくトランス−
２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することがわかる。ま
た、実験番号３６の結果に示されるように、前培養ドデカン培地で前培養することによっ
て得られた菌体を、３質量％グルコースを含有する変換培地で培養すると、より一層早く
トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸に変換することが
できることがわかる。
【０１４６】
（試験例９）
ドデカン培地〔ドデカン１質量％、ポリペプトン０．５質量％、酵母エキス０．３質量
％〕を用いて２８℃の温度で４８時間、ＫＵ８３株の前培養を行なった。得られた培養物
を遠心分離に供し、菌体を回収した。得られた菌体を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660
が１００である懸濁液を得た。
【０１４７】
次に、得られた懸濁液１ｍＬを、トランス−２−デセン酸無添加グルコース含有培地〔
培地（１０００ｍＬ）中の組成：グルコース３質量％、ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ
2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス（ベクト
ン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製）０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本
製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質
量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％
、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕、または３、５もしくは７．５質量％グルコースを含有
する変換培地〔培地（１０００ｍＬ）中の組成：トランス−２−デセン酸〔東京化成工業
(株)製〕０．１質量％、グルコース３質量％、５質量％または７．５質量％、ＫＨ2ＰＯ4
０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％
、酵母エキス（ベクトン、ディッキンソン・アンド・カンパニー社製）０．０２５質量％
、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・
４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ
2Ｏ ０．００２質量％、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９〕１００ｍＬに添加した。その後
、微生物細胞を１４０ｒｐｍで振盪しながら２８℃で培養した。
【０１４８】
次に、試験例１と同様にして培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および
１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を調べた。その結果を図１０
に示す。
【０１４９】
図１０において、パネル〜（Ｄ）は、それぞれ順に、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス
−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測
定結果を示す。
【０１５０】
図１０中の黒丸、黒四角、黒三角、および白丸は、それぞれ順に、トランス−２−デセ
ン酸無添加・３質量％グルコース含有培地（実験番号３７）、３質量％グルコースを含有
する変換培地（実験番号３８）、５質量％グルコースを含有する変換培地（実験番号３９
）および７．５質量％グルコースを含有する変換培地（実験番号４０）であるときの測定
結果を示す。
【０１５１】
図１０に示された結果から、さらにドデカン培地で前培養した菌を３〜７．５質量％グ
ルコースを含有する変換培地で培養した場合、トランス−２−デセン酸を１０−ヒドロキ
シ−トランス−２−デセン酸に効率よく変換することができることがわかる。また、７．
５質量％グルコースを含有する変換培地で培養した場合、１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸がより効率よく得られることがわかる。
【０１５２】
（参考例１）
寒天平板希釈法にしたがって、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓ
ａ）ＫＵ８３株に対するトランス−２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸それぞれの最小発育阻止濃度を調べた。その結果を表２に示す。
【０１５３】
【表２】
【０１５４】
表２に示されているように、トランス−２−デセン酸および１０−ヒドロキシ−トラン
ス−２−デセン酸の最小発育阻止濃度は、それぞれ５．９ｍＭおよび６．７ｍＭであるこ
とがわかる。この結果より、トランス−２−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−
２−デセン酸に変換するに際して、培地中におけるトランス−２−デセン酸の濃度が５．
９ｍＭ以上である場合には、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）
ＫＵ８３株によるトランス−２−デセン酸から１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン
酸への変換効率が低下する可能性が示唆される。
【０１５５】
（実施例３）
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株に対する種々の
トランス−２−デセン酸アルキルエステルの最小発育阻止濃度を調べ、トランス−２−デ
セン酸よりも最小発育阻止濃度が高く、抗菌活性が低いトランス−２−デセン酸アルキル
エステルをスクリーニングした。
【０１５６】
その結果、トランス−２−デセン酸エチルエステルが、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株に対して、５０ｍＭを超える最小発育阻止濃度を
示し、トランス−２−デセン酸と比べて抗菌活性が著しく低いことが確認された。この結
果から、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株を培養す
る際に、トランス−２−デセン酸に代えてトランス−２−デセン酸エチルエステルを用い
ることにより、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エステルを高い効率で製造す
ることができる可能性があることが示唆される。
【０１５７】
（実施例４）
カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株をＹＭ寒天培地
｛培地（１０００ｍＬ）の組成：ベクトン・ディッキンソン社製、商品名：ＹＭ ｂｒｏ
ｔｈ ２．１ｇ（２．１質量％）、寒天〔ナカライテスク（株）製〕１５ｇ（１．５質量
％）、蒸留水（残部）、ｐＨ６．２｝で、２８℃で２４時間培養した。その後、前記培地
から微生物細胞を回収した。得られた微生物細胞を滅菌生理食塩水に懸濁し、ＯＤ660が
１００である供試微生物懸濁液を得た。
【０１５８】
次に、前記供試微生物懸濁液１ｍＬをトランス−２−デセン酸エチルエステル変換培地
｛培地（１０００ｍＬ）中の組成：ＫＨ2ＰＯ4 ０．２質量％、Ｎａ2ＨＰＯ4 ０．３５
質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、酵母エキス〔ベクトン、ディッキンソン
・アンド・カンパニー社製〕０．０２５質量％、ポリペプトン〔日本製薬(株)製〕０．０
２５質量％、尿素０．３質量％、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＦｅＳＯ4・
７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００２質量％、トランス−２−
デセン酸エチルエステル〔東京化成工業（株）製〕３５質量％（３５００００質量ｐｐｍ
）、蒸留水（残部）、ｐＨ６．９｝１００ｍＬに添加した。その後、微生物細胞を１４０
ｒｐｍで振盪しながら２８℃で、４８時間培養した。
【０１５９】
次に、得られた培養物の上清に、該上清に対して等量の酢酸エチルを添加した。得られ
た混合物を撹拌し、静置した後、得られた混合物から、酢酸エチル層の溶液を分取し、減
圧乾固した。得られた減圧乾固物をｎ−ヘキサン５ｍＬに溶解させた。得られた溶液をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、
シリカゲルカラム〔和光純薬(株)製、商品名：Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００、２２ｍｍ×
３５０ｍｍ〕を用い、カラム温度３５℃で、溶出液Ｄ（ｎ−ヘキサン）による１５００分
間の溶出、溶出液Ｅ〔ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（容量比）＝９／１〕による５３０分間
の溶出および溶出液Ｆ〔ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（容量比）＝８／２〕による５３０分
間の溶出を順序で流速１ｍＬ／ｍｉｎで行なうことにより実施した。前記溶出液Ｆで溶出
された画分を回収し、減圧乾固した。
【０１６０】
その後、得られた乾固物を、アセトニトリル１ｍＬに溶解させ、試料を得た。得られた
試料を(株)島津製作所製、商品名：ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＣＬ−６Ａおよびナカライテス
ク(株)製、商品名：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標） ５Ｃ18−ＡＲ−ＩＩ Ｗａｔｅｒｓ
ｔｙｐｅカラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃｏｄｅ Ｎｏ．３８１４５−２１）を用
いてＨＰＬＣに供した。なお、対照として、トランス−２−デセン酸エチルエステル変換
培地を用いて、前記と同様に、ＨＰＬＣを行なった。
【０１６１】
ＨＰＬＣは、カラム温度３５℃で、溶出液Ａ〔アセトニトリル／テトラヒドロフラン／
蒸留水（容量比）＝４０．６／１７．４／４２．０〕による１５分間の溶出、溶出液Ｂ（
アセトニトリル）による１５分間の溶出、および前記溶出液Ａによる２５分間の溶出をこ
の順序で流速１ｍＬ／ｍｉｎで行なうことにより実施した。溶出される画分は、波長２１
０ｎｍでモニターした。実施例４におけるＨＰＬＣのクロマトグラムを図１１に示す。図
１１中、パネル（Ａ）は、対照のクロマトグラムであり、パネル（Ｂ）は、４８時間培養
後の培養物から得られた画分のＨＰＬＣのクロマトグラムである。
【０１６２】
図１１に示された結果から、前記トランス−２−デセン酸エチルエステル変換培地中で
、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）ＫＵ８３株を培養すること
により、トランス−２−デセン酸エチルエステルに対応すると考えられるピーク１の保持
時間とは異なる保持時間８．９分間において、新たな単一のピークが出現することがわか
る。
【０１６３】
前記保持時間８．９分間の画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲを調べた。実施例４で得
られた画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲの測定結果を以下および図１２に示す。
【０１６４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（質量ｐｐｍ）：１．３３（２Ｈ，ｍ，Ｃ１，Ｃ７〜Ｃ１
０），１．４８（２Ｈ，ｍ，Ｃ１１），１．９６（２Ｈ，ｍ，Ｃ６），３．６５（２Ｈ，
ｔ，Ｃ１２），４．２３（２Ｈ，ｍ，Ｃ２），５．８３（１Ｈ，ｄ，Ｃ４），６．９２（
１Ｈ，ｍ，Ｃ５）
【０１６５】
図１２に示された結果から、保持時間８．９分間の画分に含まれる物質は、１０−ヒド
ロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステルであることが確認された。
【０１６６】
また、図１１および図１２の結果から、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａ
ｌｔｏｓａ）が、トランス−２−デセン酸エチルエステルを、１０−ヒドロキシ−トラン
ス−２−デセン酸エチルエステルに変換することができることがわかる。
【０１６７】
（実施例５）
０．０１Ｍ ＣａＣｌ2を含有する０．０５Ｍ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．６）５．０ｍＬ
に、実施例４で得られた１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステルを含
む画分（画分中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステル含有
量：０．３質量％）１．０ｍＬと、リパーゼ溶液（シグマ・アルドリッチ社製、商品名：
Ｌｉｐａｓｅ、１８７Ｕ／ｍＬ）０．１〜０．５ｍＬを添加した。得られた混合物を５０
０ｒｐｍで撹拌しながら３０℃で、３０分間保温した。その後、保温後の混合物にエタノ
ール２０ｍＬを添加した。得られた混合物を減圧濃縮することにより、エタノールを除去
した。エタノールを除去した後、この混合物に、該混合物と等量の酢酸エチルを添加した
。得られた混合物を撹拌し、静置した。静置後の混合物から、酢酸エチル層の溶液を分取
し、減圧乾固した。得られた乾固物を実施例４と同様にしてＨＰＬＣに供した。
【０１６８】
その結果、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸の保持時間と同じ保持時間３．
１分間において、図１１のピーク１およびピーク２とは異なる新たなピークが出現するこ
とが確認された。
【０１６９】
また、保持時間３．１分間におけるピークの画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲを調べ
た。その結果を以下に示す。
【０１７０】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ（質量ｐｐｍ）：１．３３（２Ｈ，ｓ，Ｃ６〜Ｃ８），１．
４８（２Ｈ，ｍ，Ｃ５），１．５６（２Ｈ，ｍ，Ｃ９），２．２３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
０Ｈｚ，Ｃ４），２．２７（１Ｈ，ｓ，ＯＨ），３．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，
Ｃ１０），５．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，Ｃ２），７．１０（１Ｈ，ｍ，Ｃ３
），１１．０（１Ｈ，ｓ，ＯＨ）
【０１７１】
上記の結果から、前記物質が１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸であることが
確認された。
【０１７２】
また、上記の結果から、リパーゼにより、実施例４で得られた１０−ヒドロキシ−トラ
ンス−２−デセン酸エチルエステルから１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸を製
造することができることがわかる。
【０１７３】
（実施例６）
実施例５で用いられたリパーゼ溶液（シグマ・アルドリッチ社製、商品名：Ｌｉｐａｓ
ｅ）の代わりに、リパーゼ溶液（アマノエンザイム社製、商品名：Ｌｉｐａｓｅ ＰＳ）
を用いたこと以外は、実施例５と同様の操作を行なったところ、実施例５と同様に、１０
−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステルから１０−ヒドロキシ−トランス
−２−デセン酸を得ることができた。
【０１７４】
以上の結果から、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）により、
トランス−２−デセン酸エチルエステルから変換された１０−ヒドロキシ−トランス−２
−デセン酸エチルエステルに、１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸エチルエステ
ルのエステル結合を加水分解するリパーゼなどの酵素を作用させることにより、１０−ヒ
ドロキシ−トランス−２−デセン酸を得ることができることがわかる。
【０１７５】
また、以上の結果から、本発明の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法によれば、簡便な操作
で不飽和脂肪酸誘導体を製造することができ、不飽和脂肪酸化合物から不飽和脂肪酸誘導
体を高い効率で得ることができることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【０１７６】
【図１】実施例１において、培養物中における１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図２】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例１において、各ＫＨ2ＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図３】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例２において、各Ｎａ2ＨＰＯ4濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図４】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例３において、ＫＨ2ＰＯ4濃度およびＮａ2ＨＰＯ4濃度の各組み合わせにおける培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図５】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例４において、各酵母エキス濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図６】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例５において、各ポリペプトン濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図７】実施例２におけるＧＣ−ＭＳの結果を示すグラフである。
【図８】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例７において、培地中の各グルコース濃度における培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化の測定結果を示すグラフである。
【図９】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例８において、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を示すグラフである。
【図１０】パネル（Ａ）〜（Ｄ）は、それぞれ順に、試験例９において、培地のｐＨ、ＯＤ660、トランス−２−デセン酸量および１０−ヒドロキシ−トランス−２−デセン酸量の経時的変化を示すグラフである。
【図１１】パネル（Ａ）は、実施例４における対照のクロマトグラムであり、パネル（Ｂ）は、実施例４において４８時間培養後の培養物から得られた画分のＨＰＬＣのクロマトグラムである。
【図１２】実施例４で得られた画分に含まれる物質の１Ｈ−ＮＭＲの測定結果を示すチャートである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）一般式（Ｉ）：
【化１】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物と、
（Ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【化２】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物
または前記微生物の無細胞抽出物と
を接触させることを特徴とする一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪酸誘導体の製造方法
。
【請求項２】
前記微生物が、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）、カンジダ
スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）、カンジダ ピグナリエ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）、カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎ
ｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）およびヤロウイア リポリチカ（Ｙａｌｌｏｗｉａ ｌｙｐｏ
ｌｙｔｉｃａ）からなる群より選ばれた少なくとも１種である請求項１記載の不飽和脂肪
酸誘導体の製造方法。
【請求項３】
一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を含有する培地中で前記微生物を培養する
請求項１または２記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法。
【請求項４】
一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物が、トランス−２−デセン酸である請求項
１〜３いずれか記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法。
【請求項５】
一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸において、Ｒ1が炭素数１〜４のアルキル基であ
るとき、該不飽和脂肪酸アルキルエステルから一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪酸誘
導体を製造した後、さらに該不飽和脂肪酸誘導体に、該不飽和脂肪酸誘導体のエステル結
合を加水分解させる酵素を作用させる請求項１〜３いずれか記載の不飽和脂肪酸誘導体の
製造方法。
【請求項６】
（ａ）一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【化４】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物
または前記微生物の無細胞抽出物と、
（ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地と
を含有してなる不飽和脂肪酸誘導体製造用キット。
【請求項１】
（Ａ）一般式（Ｉ）：
【化１】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物と、
（Ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【化２】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物
または前記微生物の無細胞抽出物と
を接触させることを特徴とする一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪酸誘導体の製造方法
。
【請求項２】
前記微生物が、カンジダ マルトーザ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ）、カンジダ
スクシフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）、カンジダ ピグナリエ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ｐｉｇｎａｌｉａｅ）、カンジダ ニトラトフィラ（Ｃａｎｄｉｄａ ｎ
ｉｔｒａｔｏｐｈｉｌａ）およびヤロウイア リポリチカ（Ｙａｌｌｏｗｉａ ｌｙｐｏ
ｌｙｔｉｃａ）からなる群より選ばれた少なくとも１種である請求項１記載の不飽和脂肪
酸誘導体の製造方法。
【請求項３】
一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物を含有する培地中で前記微生物を培養する
請求項１または２記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法。
【請求項４】
一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物が、トランス−２−デセン酸である請求項
１〜３いずれか記載の不飽和脂肪酸誘導体の製造方法。
【請求項５】
一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸において、Ｒ1が炭素数１〜４のアルキル基であ
るとき、該不飽和脂肪酸アルキルエステルから一般式（ＩＩ）で表される不飽和脂肪酸誘
導体を製造した後、さらに該不飽和脂肪酸誘導体に、該不飽和脂肪酸誘導体のエステル結
合を加水分解させる酵素を作用させる請求項１〜３いずれか記載の不飽和脂肪酸誘導体の
製造方法。
【請求項６】
（ａ）一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、Ｒ1は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基、Ｒ2は炭素数２〜１５のアルキ
ル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸化合物を一般式（ＩＩ）：
【化４】
（式中、Ｒ1は前記と同じ。Ｒ3はヒドロキシル基またはケトン基を有する炭素数２〜１５
のアルキル基を示す）
で表される不飽和脂肪酸誘導体に変換する能力を有し、かつカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）
属もしくはヤロウイア（Ｙａｌｌｏｗｉａ）属に属する微生物、前記微生物の細胞破砕物
または前記微生物の無細胞抽出物と、
（ｂ）一般式（Ｉ）で表される不飽和脂肪酸化合物およびグルコースを含有する培地と
を含有してなる不飽和脂肪酸誘導体製造用キット。
【図１１】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１２】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１２】
【公開番号】特開２００８−１３６４８８（Ｐ２００８−１３６４８８Ａ）
【公開日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２９１０６２（Ｐ２００７−２９１０６２）
【出願日】平成１９年１１月８日（２００７．１１．８）
【出願人】（８０１００００６１）財団法人大阪産業振興機構 (168)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月８日（２００７．１１．８）
【出願人】（８０１００００６１）財団法人大阪産業振興機構 (168)
【Ｆターム（参考）】
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