人参の乳酸菌発酵物、それを含有する人参ヨーグルト及びそれに利用される乳酸菌の菌株
本発明は、乳酸菌で人参を発酵させて製造される人参の乳酸菌発酵物、上記人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルト、及び上記人参の乳酸菌発酵物を得るために利用される乳酸菌の菌株に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌で人参を発酵させて製造される人参の乳酸菌発酵物、上記人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルト、及び上記人参の乳酸菌発酵物を得るために利用される乳酸菌の菌株に関する。
【背景技術】
【０００２】
人参は、植物分類学上五加科人参属に属する多年生宿根草であって、地球上に約１１種が知られており、代表的な種の例としては、アジア極東地域（北緯３３〜４８：韓国、北満州、ロシアの一部）に自生し、薬効が極めて優れた高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）；米国、カナダで自生及び栽培されている米国参（Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ Ｌ．；一名、花旗参）；中国雲南省東南部から広西省西南部地域で野生又は栽培されている田七参（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ）；及び日本、中国西南部、ネパールに至るまで分布している竹節参（Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）等がある。
【０００３】
人参は、神農本草経に商品として収載されているだけでなく、古くから貴重な補薬として用いられてきた。これまで多くの薬理実験を通じて、人参はストレスに対する生体の非特異的抵抗性を強化させ、抗酸性作用を有していることが明らかになっている。その他に、高血圧の改善、インシュリン作用の増強、アロキサン（ＡＬＬＯＸＡＮ）糖尿マウスにおける血糖降下効果、白ネズミの肝ＲＮＡ合成、蛋白質合成、糖及び脂質代謝の促進効果、抗癌効果等があることが明らかになった。
【０００４】
上記人参は、主に韓国、中国、日本等のアジア国家において生薬の形態で精神医学的疾病、神経系の疾病及び糖尿病等の様々な疾病に対して用いられてきており、上記人参の主要成分であるサポニンは、強壮、強精、鎮静及び抗高血圧等に効果を示すものと知られている。
【０００５】
現在人参の使用は、栽培して採取した状態のままの水参を常温で乾燥させた白参、水参を９８−１００℃で加熱処理して製造される紅参、又は１２０−１８０℃で加熱処理して製造される仙参の形態で用いられている。
【０００６】
一方、人参の根には約４−１０％の人参サポニン（韓国産人参は４−８％であり、米国産人参は４−１０％である）が含有されているが、上記人参サポニンは、多様なジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）の混合物であり、特に韓国産はジンセノサイドＲｂ１、Ｒｃ及びＲｇ１の含量が比較的高い方であり、米国産はジンセノサイドＲｂ１及びＲｅの含量が比較的高い。
【０００７】
人参に含有されるジンセノサイドの成分及びその薬理学的な効能は、下記の表１のとおりである。
【０００８】
【表１】
【０００９】
現在知られているところによると、人参の薬理効能を示す主成分であるジンセノサイドはＲｂ１、Ｒｂ２及びＲｃのサポニンである。しかし、実質的に抗癌作用又は癌細胞の癌転移を抑制したり、抗アレルギー作用を有する成分は人参に極少量含有されているか、人参サポニンの腸内細菌代謝物である化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２のサポニン成分であるものと知られている。
【００１０】
従って、人参の抗癌作用、抗アレルギー作用、免疫増強作用等を得るために使用するためには、上記人参に極少量含有されている化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２（ジンセノサイドＲｋ２とジンセノサイドＲｈ３の混合物を意味する）のサポニン成分の含量を増加させることが好ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
そこで、本発明者もまた、人参から化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２のサポニン成分をより効率的に得るために多くの研究を行った結果、人参を乳酸菌で発酵させることにより得られる人参の乳酸菌発酵物に化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の含量が相当であることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
従って、本発明の目的は、人参の乳酸菌発酵物を提供することである。
【００１３】
また、本発明の他の目的は、上記人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルトを提供することである。
【００１４】
さらに、本発明のまた他の目的は、上記人参の乳酸菌発酵物を得るために用いられる乳酸菌を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、（１）人参を乳酸菌で発酵させて得られる人参の乳酸菌発酵物、（２）上記人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルト、及び（３）上記乳酸菌発酵物を得るのに有効に利用される乳酸菌の菌株を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明をより具体的に説明する。
【００１７】
本発明によると、人参を乳酸菌で発酵させる場合、発酵前の人参に主に含有されているサポニン成分は、発酵前の人参には存在しないか、又は極少量存在する化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２に生物転換される。
【００１８】
そして、人参の乳酸菌発酵物は、化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイドＲｈ１、ジンセノサイドＲｈ２およびΔ20−ジンセノサイドＲｈ２からなる群から選ばれる１種以上の成分を含有する。
【００１９】
当業界の通常の知識によると、化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２のサポニン成分は、ジンセノサイドＲｂ１、Ｒｂ２及びＲｃ等のサポニン成分に比してさらに優れた抗癌活性、抗アレルギー活性及び癌転移抑制活性を有する（Ｂａｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２５、７４３−７４７、２００２；Ｂａｅ ｅｔ ａｌ．，２５、５８−６３、２００２；Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．，９、４１１−４１７、１９９８；Ｓａｉｋｉ
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ８ｔｈ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｇｉｎｓｅｎｇ（ソウル、高麗人参学会）、３０５−３１６、２００２；Ｈａｓｅｇａｗａ ａｎｄ Ｓａｉｋｉ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ８ｔｈ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｇｉｎｓｅｎｇ（ソウル、高麗人参学会）、３１７−３３４、２００２）。
【００２０】
一方、上記人参の乳酸菌発酵のために用いられ得る人参の原材料が特に限定されず、人参（高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、花旗参（Ｐａｎａｘ
ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ Ｌ．）、田七参（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ）、竹節参（Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ））のそれ自体又はその加工物であり得、より具体的には、水参、紅参、白参、尾参、花旗参（以下、高麗参、花旗参、田七参、竹節参を包括して人参という）；人参の葉、人参抽出液及び人参粉末のうちいずれか一つ以上を用いることができる。加工処理別には、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理人参等が本発明の人参の乳酸菌発酵物を得るための原料物質として好ましく用いられ得る。
【００２１】
また、上記乾燥粉末状の人参の粉末化の程度は特に限定されず、乳酸菌が人参組織又は繊維素内に高い効率で浸透できる程度に粉末化され得、そのような粉末化の程度は、当業者により容易に認識され得、粉末化の方法も当業界に通常公知になっている。一方、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理人参は、人参それ自体から製造できるが、上記乾燥粉末状の人参から得られることが、人参処理効果及びその後の発酵効率において好ましい。この場合も、乾燥粉末状の人参の粉末化の程度は特に限定されない。
【００２２】
人参は、水参、紅参、白参、尾参、花旗参、人参の葉、人参抽出液及び人参粉末のうちいずれか一つ以上の粉末を乳酸菌で発酵させる場合、人参の乳酸菌発酵物に特に化合物Ｋ成分の含量が上昇するようになる。
【００２３】
酸処理人参は、水参、紅参、白参、尾参、花旗参、人参の葉、人参抽出液及び人参粉末のうちいずれか一つ以上の粉末を酸、好ましくは酢酸、乳酸、クエン酸、酪酸、酒石酸、プロピオン酸又は塩酸を添加した後、６０℃で５時間培養し、カルシウム塩で中和させることにより得られる。本発明によると、酸処理人参を乳酸菌で発酵させる場合、人参の乳酸菌発酵物において特にジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２成分の含量が上昇するようになる。
【００２４】
高温処理人参、例えば紅参は、上記人参の原材料の粉末を１００℃で２−５時間加温することにより得られる。本発明によると、高温処理人参を乳酸菌で発酵させて得られる人参の乳酸菌発酵物においては、特に化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２成分の含量が上昇するようになる。
【００２５】
加圧処理人参は、上記人参の原材料の粉末を１１０乃至１３０℃で２−５時間加圧下に熱処理することにより得られる。本発明によると、このような加圧処理人参を乳酸菌で発酵させて得られる人参の乳酸菌発酵物には、たとえ化合物Ｋの含量は低くなるとしても、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２成分、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の含量が増加するようになる。
【００２６】
一方、人参発酵物を得る方法は特に限定されず、当業界における通常の方法を用いて、本発明により人参発酵に用いる乳酸菌の適当な発酵条件で発酵を行うことができ、具体的には、例えば、人参の原材料を水に懸濁した後、乳酸菌を入れ、上記乳酸菌の適当な発酵温度で４８時間乃至７２時間内外で培養して人参の乳酸菌発酵物を得る生物転換過程、及び上記過程を経た人参の乳酸菌発酵物を遠心分離し、上清液のみを濾過して人参の乳酸菌発酵物を得る濃縮過程を含む方法により得られる。
【００２７】
一方、人参の乳酸菌発酵に用いることができる乳酸菌としては、人参中のサポニン成分の化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２への転換効率が高ければ、特に限定されず、例えば、ラクトバチルス属の菌株、ストレプトコッカス属の菌株又はビフィドバクテリウム属の菌株を用いることができ、より具体的には
、ビフィドバクテリウムＫ−１０３（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１、５４−６１、１９９８参照）、ビフィドバクテリウムＫ−５０６（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１、５４−６１、１９９８参照）、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１（ＫＣＣＭ−１０３６４）、ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２（ＫＣＣＭ−１０３６５）、ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）、ビフィドバクテリウムＫＫ−１１（慶熙大学校薬大の金東鉉教授室）のうちいずれか一つ以上の菌株を用いることができる。
【００２８】
その中で、ビフィドバクテリウムＨ−１、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２は、人参の乳酸菌発酵物を得るために本発明者により開発された微生物であって、上記ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１は寄託番号ＫＣＣＭ−１０３６４（２００３．０３．２２）として、上記ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２は寄託番号ＫＣＣＭ−１０３６５（２００３．０３．２２）として、ビフィドバクテリウムＨ−１はＫＣＣＭ−１０４９３（２００３．０５．０１）としてそれぞれ韓国微生物保存センター（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）に寄託されている。本発明のビフィドバクテリウムＫＫ−１、ＫＫ−２、Ｈ−１及びＫＫ−１１の菌株はグラム陽性菌であり、桿菌であり、嫌気性の菌株であり、フルクトース６−フォスフェートホスホケトラーゼ（ｆｒｕｃｔｏｓｅ ６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｐｈｏｓｐｈｏｋｅｔｏｌａｓｅ）陽性を示し、下記のような糖利用性を有する。
【００２９】
【表２】
【００３０】
一方、上記ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ＫＫ−２、Ｈ−１、ＫＫ−１１は、同一種に属する菌株と比較して一般的な分類学的特性は同一であるが、人参の乳酸菌発酵に利用する場合、より多くの含量の化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２を含有する人参の乳酸菌発酵物を提供することができる。
【００３１】
一方、本発明による人参の乳酸菌発酵物は、乳酸菌発酵を通じてより多くの含量の化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２を含有し、より具体的には人参の乳酸菌発酵物内（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）、（ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）、（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）又は（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）の発酵成分の総量が、（ジンセノサイドＲｃ＋ジンセノサイドＲｄ＋ジンセノサイドＲｂ１＋ジンセノサイドＲｂ２＋ジンセノサイドＲｅ＋ジンセノサイドＲｇ１）の総量に対して０．１以上の比率で含有することが好ましい。より好ましくは、（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）が生成される場合、２つの成分の比は１：５０乃至５０：１の範囲内であり；（ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）が生成される場合、２つの成分の比は１：５０乃至５０：１であり；（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）が生成される場合、ジンセノサイドＲｈ２とΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の和と、ジンセノサイドＲｈ１の比が１：５０乃至５０：１で
あり；（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）が生成される場合は、化合物Ｋとジンセノサイドの比が１：５０乃至５０：１である。本発明によると、本来紅参の中には化合物Ｋが存在しないが、本発明による方法により紅参を乳酸菌発酵させる場合、特に化合物Ｋの含量が増加するようになる。
【００３２】
本発明の前記乳産菌の菌株は、腸内有害菌を抑制し、および／または、腸内有害酵素活性を抑制し、および／または、癌細胞の成長を抑制することが分かる。
【００３３】
また、本発明は、上記説明した人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルトを提供する。
【００３４】
上記人参ヨーグルトは、本発明による人参の乳酸菌発酵物を含有しているため、即ち、化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の人参サポニン成分の発酵収得物を多量に含有するため、化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の高い生理活性機能、より具体的には、抗癌効能、抗アレルギー効能及び免疫増強効能等を有する機能性ヨーグルトである。このような人参ヨーグルトの製造は通常のヨーグルトに、例えば、０．１重量％乃至１０重量％の上記人参の乳酸菌発酵物を単に添加させることにより製造できる。しかし、このような製造方法は、ヨーグルトを製造するために、ヨーグルト原料乳を乳酸菌発酵させることと、人参の乳酸菌発酵物を得るためにもう一度人参を乳酸菌発酵させることが要求されるため、産業的な経済性の面において好ましくない。従って、本発明による人参ヨーグルトは、ヨーグルト原料乳と、それに対して０．１重量％乃至１０重量％の人参を同時に乳酸菌発酵させることにより、本発明による人参ヨーグルトを製造することができる。上記発酵のための反応物にはビタミンをさらに含有させることができる。
【００３５】
一方、上記人参ヨーグルトを製造するために用いられる乳酸菌としては、ヨーグルト原料乳と人参を同時に乳酸菌発酵させることができるものであれば、特に限定されず、例えば、ラクトバチルス属の菌株、ストレプトコッカス属の菌株又はビフィドバクテリウム属の菌株を用いることができ、より好ましくは、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−１１のうちいずれか一つ以上の菌株を用いることができる。
【００３６】
上記ヨーグルト原料乳は、特に限定されないが、牛乳、山羊乳、緬羊乳、脱脂乳、全脂牛乳等を用いることができる。
【００３７】
ヨーグルトの製造のための乳酸菌発酵の後に、乳酸菌を除去することもあり、そうしないこともあるが、乳酸菌は体の腸内環境を改善させる等の有利な機能を有するため、上記乳酸菌は除去しない方が好ましい。従って、本発明によるヨーグルトは腸内環境を改善させる機能も行うことができる。
【００３８】
一方、上記得られたヨーグルトに粉乳等を添加して粉末人参ヨーグルトも得ることができる。従って、上記ヨーグルトがその形態において特に限定されず、牛乳等のヨーグルト原料乳の乳酸菌発酵を通じて得られる、従来に公知になった多様な形態を有し得る。
【００３９】
以下、本発明は、実施例を通じてより具体的に説明するが、本発明がこれにより限定されないことから、当業者に自明な変形等を行うことができ、当業者は、上記変形も本発明の範囲内であることを自明に認識するだろう。
【００４０】
＜実施例Ａ１＞
水参（京東市場で購入した錦山産高麗人参５年根）を熱水でよく洗浄して乾燥させ、微細に粉末化した水参粉１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養してヨーグルトを得た。
【００４１】
＜実施例Ａ２＞
水参又は尾参をよく乾燥させて作った粉末２ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫ−１０３及びビフィドバクテリウムＫ−５０６の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養してヨーグルトを得た。
【００４２】
＜実施例Ａ３＞
水参をよく乾燥させて作った粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス、ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で１２時間培養してヨーグルトを得た。
【００４３】
＜実施例Ａ４＞
白参粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス及びビフィドバクテリウムＫＫ−１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養してヨーグルトを得た。
【００４４】
＜実施例Ａ５＞
乾燥した人参粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して人参ヨーグルトを得た。
【００４５】
＜実施例Ａ６＞
乾燥した人参粉末に０．５％となるように乳酸を入れ、６０℃で５時間処理し、中和した後、乾燥させて得た人参粉末（酸処理人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して酸処理人参ヨーグルトを得た。
【００４６】
＜実施例Ａ７＞
乾燥した人参粉末を蒸留水に懸濁して１００℃で２時間蒸し、乾燥させて得た人参粉末（加熱人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加熱人参ヨーグルトを得た。
【００４７】
＜実施例Ａ８＞
乾燥した人参粉末を１２０℃で２時間加圧処理し、乾燥させて得た人参粉末（加圧人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加圧処理人参ヨ
ーグルトを得た。
【００４８】
＜実施例Ａ９＞
乾燥した人参粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して人参ヨーグルトを得た。
【００４９】
＜実施例Ａ１０＞
乾燥した人参粉末に５％となるように乳酸を入れ、６０℃で５時間処理して中和させてから、乾燥させて得た人参粉末（加熱人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加熱人参ヨーグルトを得た。
【００５０】
＜実施例Ａ１１＞
乾燥した人参粉末を蒸留水に懸濁して１００℃で２時間蒸し、乾燥させて得た人参粉末（加熱人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加熱人参ヨーグルトを得た。
【００５１】
＜実施例Ａ１２＞
乾燥した人参粉末を１２０℃で２時間加圧処理し、乾燥させて得た人参粉末（加圧人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加圧人参ヨーグルトを得た。
【００５２】
＜実施例Ａ１３〜Ａ２４＞
上記実施例Ａ１乃至Ａ１２において、１００ｍｌの牛乳の代わりに、１００ｍｌの水と予め培養した乳酸菌２ｇ（湿重量）を用いたことを除いては、上記実施例Ａ１乃至Ａ１２と同一の過程を繰り返してそれぞれの乳酸菌発酵物を得た。
【００５３】
＜実験例Ａ１：サポニン成分の含量分析＞
市販品である一般の人参（京東市場で購入した農協高麗人参錦山産４−６年根）、及びその乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理人参（上記実施例と同一の方法により製造）それぞれ１ｇをビタミンＣの０．１ｇを含有する牛乳１００ｍｌに加えた後、乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｇ入れ、３７℃で７２時間発酵させて減圧濃縮し、人参発酵ヨーグルト、高温処理人参発酵ヨーグルト、酸処理人参発酵ヨーグルト、加圧処理人参発酵ヨーグルトを得た。次いで、人参、及びその乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参、加圧処理人参、及び上記得られたそれぞれの人参発酵ヨーグルトを２ｇずつ取ってメタノール１００ｍｌずつで３回抽出し、濃縮した後に水に懸濁させ、エーテル１００ｍｌずつで３回抽出した。次いで、ブタノール１００ｍｌずつで３回抽出した後にブタノール分画を濃縮させ、得られた濃縮物をメタノールに溶解させてＴＬＣで分析し（溶媒としてはＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６５：３５：１０/CHCl3:EtOAc:MeOH:H2O＝１５:４０:２２:９；発色試薬としてはＭｅＯＨ中の５％硫酸溶液；検出器としてはＳｈｉｍａｄｚｕ ＴＬＣ ｓｃａｎｎｅｒＣＳ−９３０１ＰＣを使用）、下記表２のような結果を得た。成分含量は、最終抽出分画１００％に含有された各成分の含量で計算した。
【００５４】
実施例Ａ１乃至Ａ４、及び実施例Ａ９乃至Ａ１２も、上記表２と類似する結果を示し、実施例Ａ１３乃至Ａ２４の人参の乳酸菌発酵物は、上記発酵ヨーグルトと類似するサポニン成分含量を示した。
【００５５】
【表３】
【００５６】
＜実験例Ａ２：抗癌効果の分析＞
ＨｅｐＧ２（人間肝癌細胞株；ＫＣＬＢ−１００２３）、Ａ−５４９（人間肺癌細胞株；ＫＣＬＢ−１０１８５）、Ｐ−３８８（マウスリンパ液の新生血漿細胞株；ＫＣＬＢ−１００４６）、Ｌ−１２１０（マウスリンパ球の白血病細胞株；ＫＣＬＢ−１０２１９）を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質−抗菌剤（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ−ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓ；ＧＩＢＣＯ社、米国）及び２．２ｇの重炭酸ナトリウムを補充したＲＰＭＩ１６４０の培地で培養した。上記ＨｅｐＧ２、Ａ−５４９は、０．２５％トリプシンで処理して細胞をフラスコから剥し、細胞数を３×１０4細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートの各ウェルに１８０μｌずつ播いて２４時間の間３７℃で、５％ＣＯ2が飽和したＣＯ2インキュベーターでインキュベートした。Ｐ−３８８及びＬ−１２１０細胞は、
４×１０4細胞／ウェルとなるように細胞数を合わせて、各ウェルに１８０μｌを入れて２時間の間インキューベートした。次いで、白参のブタノール抽出物及び表３に記載された乳酸菌発酵人参のブタノール分画のそれぞれを高圧蒸気滅菌した後、１０ｍｇ／ｍｌとなるようにウェル当たり２０μｌずつを添加して、試料を添加し、４８時間の間３７℃の５％ＣＯ2が飽和したＣＯ2培養器でインキュベートした。その後、ウェル当たり２０ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ試薬を５０μｌずつ添加し、４時間後、培地を取り除き、沈殿物にＤＭＳＯの１００μｌを添加してから、５８０ｎｍでＥＬＩＳＡ読取器で吸光度を測定することによって細胞の毒性を測定した。測定結果を下記の表３に示した。
【００５７】
【表４】
【００５８】
＜実験例Ａ３：Ｅ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３及び腸内有害酵素に及ぼす効果＞
上記実施例において得られた人参発酵物、２４時間培養したＥ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、一般的なＥ．Ｃｏｌｉの特性とほぼ同一）と共に、ビフィドバクテリウムＫＫ−１又はビフィドバクテリウムＫＫ−２をそれぞれ１０7個となるように５ｍｌのＧＡＭ培養液に移植し、２４時間インキュベートした後、菌株が生産した大腸癌及び肝障害の原因となる酵素であるβ−グルクロニダーゼとトリプトファナーゼの酵素活性を測定した。
【００５９】
β−グルクロニダーゼ酵素活性の測定は、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．３８ｍｌに１０ｍＭのｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロニド０．０２ｍｌ、酵素液０．１ｍｌを加えて３７℃で１時間反応させ、０．５ＮのＮａＯＨの０．５ｍｌを添加して反応を終了させ、蒸留水１ｍｌを加えた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液に対して４０５ｎｍで吸光度を測定した。
【００６０】
トリプトファナーゼの酵素活性は、完全反応混合物（０．１ＭのＢＩＣＩＮＥ；ｐＨ８．０、４％ピリドキサル５−フォスフェート、２０％子牛血清アルブミン）０．２ｍｌ、０．０２Ｍトリプトファン０．２ｍｌ及び酵素液０．１ｍｌを加えて３０分反応させ、着色剤（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１４．７ｇ、９５％エタノール９４８ｍｌ、Ｃ−Ｈ2ＳＯ4の５２ｍｌ）２ｍｌを加えて反応を終了させた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液で５５０ｎｍで吸光度を測定した。
【００６１】
上記測定結果は、ビフィドバクテリウムＫＫ−１を移植した場合を表４に、ビフィドバクテリウムＫＫ−２を移植した場合を表５に示した。
【００６２】
【表５】
【００６３】
【表６】
【００６４】
上記表４及び表５から見られるように、人参の乳酸菌発酵物は人体に吸収されるとき、抗癌効果及び腸内細菌が生産するβ−グルクロニダーゼ及びトリプトファナーゼの活性を阻害して大腸癌及び肝損傷を予防する効果を示し得ることが分かる。
【００６５】
＜実施例Ｂ１＞
花旗参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス及びビフィドバクテリウムＫＫ−１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６６】
＜実施例Ｂ２＞
花旗参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６７】
＜実施例Ｂ３＞
乾燥した花旗参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６８】
＜実施例Ｂ４＞
乾燥した花旗参粉末を水に懸濁し、１％となるように乳酸を入れて６０℃で５時間インキュベートし、中和して乾燥させ、粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６９】
＜実施例Ｂ５＞
乾燥した花旗参粉末１ｇを水に浸し、１００℃で２時間蒸した人参（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００７０】
＜実施例Ｂ６＞
乾燥した花旗参粉末を１２０℃で２時間加圧処理した人参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００７１】
＜実施例Ｂ７＞
乾燥した花旗参粉末を１２０℃で２時間加圧処理した人参粉末（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に５％となるように入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００７２】
＜実施例Ｂ８〜Ｂ１４＞
上記実施例Ｂ１乃至Ｂ７において、１００ｍｌの牛乳の代わりに、１００ｍｌの蒸留水と予め培養した乳酸菌２ｇ（湿重量）を用いたことを除いては、上記実施例Ｂ１乃至Ｂ７と同一の過程を繰り返して、それぞれの乳酸菌発酵物を得た。
【００７３】
＜実験例Ｂ１：サポニン成分の含量分析＞
市販品である一般の花旗参（ホンリム株式会社から購入したカナダ産の花旗参４年根）、及びその乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理花旗参（上記実施例と同一の方法により製造）のそれぞれ１ｇをビタミンＣの０．１ｇを含有する牛乳１００ｍｌに加えた後、乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｇ入れ、３７℃で７２時間培養して減圧濃縮し、乾燥花旗参発酵ヨーグルト、高温処理花旗参発酵ヨーグルト、酸処理花旗参発酵ヨーグルト、加圧処理花旗参発酵ヨーグルトを得た。次いで、花旗参、及びその乾燥花旗参粉末、酸処理花旗参、高温処理花旗参、加圧処理花旗参、及び上記得られたそれぞれの人参発酵ヨーグルト（２−２０ｇ）を取ってメタノール１００ｍｌずつで３回抽出し、濃縮した後に水に懸濁させ、エーテル１００ｍｌずつで３回抽出した。次いで、ブタノール１００ｍｌずつで３回抽出した後にブタノール分画を濃縮させ、得られた濃縮物をメタノールに溶解してＴＬＣで分析し（溶媒としてはＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６５：３５：１０/CHCl3:EtOAc:MeOH:H2O＝１５:４０:２２:９；発色試薬としてはＭｅＯＨ中の５％硫酸溶液；検出器としてはＳｈｉｍａｄｚｕ ＴＬＣ ｓｃａｎｎｅｒ ＣＳ−９３０１ＰＣを使用）、下記表６のような結果を得た。成分含量は、最終抽出分画１００％に含有された各成分の含量で計算した。対照試験は、人参を入れずに分析したヨーグルトを同じ方法により処理して比較した。
【００７４】
【表７】
【００７５】
＜実験例Ｂ２：抗癌効果の分析＞
ＨｅｐＧ２（人間肝癌細胞株；ＫＣＬＢ−１００２３）、Ａ−５４９（人間肺癌細胞株；ＫＣＬＢ−１０１８５）、Ｐ−３８８（マウスリンパ液の新生血漿細胞株；ＫＣＬＢ−１００４６）、Ｌ−１２１０（マウスリンパ球の白血病細胞株；ＫＣＬＢ−１０２１９）を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質−抗菌剤（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ−ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓ；ＧＩＢＣＯ社、米国）及び２．２ｇの重炭酸ナトリウムを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。上記ＨｅｐＧ２、Ａ−５４９は、０．２５％トリプシンで処理して細胞をフラスコから剥し、細胞数を３×１０4細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートの各ウェルに１８０μｌずつ播いて２４時間の間３７℃で、５％ＣＯ2が飽和したＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。Ｐ−３８８及びＬ−１２１０細胞は、４×１０４細胞／ウェルとなるように細胞数を合わせて、各ウェルに１８０μｌを入れて２時間の間インキュベートした。次いで、花旗参の抽出物及び表３に記載された乳酸菌発酵人参（乳酸菌で発酵した後、ＢｕＯＨで抽出した分画である）のそれぞれを高圧蒸気滅菌した後、１０ｍｇ／ｍｌとなるように９６ウェルプレートのウェル当たり２０μｌずつを添加し、試料を添加して、４８時間の間３７℃の５％ＣＯ2が飽和したＣＯ2インキュベーターでインキュベートした。その後、ウェル当たり２０ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ試薬を５０μ
ｌずつ添加して、４時間の間ＣＯ２インキュベーターで反応させた後、培地を取り除き、沈殿物にＤＭＳＯの１００μｌを添加してから、５８０ｎｍでＥＬＩＳＡ読取器で吸光度を測定することによって細胞の毒性を測定した。測定結果を下記の表７に示した。
【００７６】
【表８】
【００７７】
＜実験例Ｂ３：Ｅ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３及び腸内有害酵素に及ぼす効果＞
２４時間培養したＥ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、一般的なＥ．Ｃｏｌｉの特性とほぼ同一）（又は新鮮な人間の腸内細菌叢）、及びビフィドバクテリウムＫＫ−１（又はビフィドバクテリウムＫＫ−２又はビフィドバクテリウムＨ−１又はビフィドバクテリウムＫＫ−１１）をそれぞれ１０5個となるように５ｍｌのＧＡＭ培養液（前回には人参を含有；人参を含有しない）に移植し、２４時間インキュベートした後、菌株が生産した大腸癌及び肝障害の原因となる酵素であるβ−グルクロニダーゼとトリプトファナーゼの酵素活性を測定した。
【００７８】
β−グルクロニダーゼ酵素活性の測定は、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．３８ｍｌに１０ｍＭのｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロニド０．０２ｍｌ、酵素液０．１ｍｌを加えて３７℃で１時間反応させ、０．５ＮのＮａＯＨの０．５ｍｌを添加して反応を終了させ、蒸留水１ｍｌを加えた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液に対して４０５ｎｍで吸光度を測定した。
【００７９】
トリプトファナーゼの酵素活性は、完全反応混合物（０．１ＭのＢＩＣＩＮＥ；ｐＨ８．０）、４％ピリドキサル５−フォスフェート、２０％子牛血清アルブミン）０．２ｍｌ、０．０２Ｍトリプトファン０．２ｍｌ及び酵素液０．１ｍｌを加えて３０分インキュベートさせ、着色剤（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１４．７ｇ、９５％エタノール９４８ｍｌ、Ｃ−Ｈ2ＳＯ4の５２ｍｌ）２ｍｌを加えて反応を終了させた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液で５５０ｎｍで吸光度を測定した。
【００８０】
０．１Ｍのｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．０）、分画懸濁液２０μｌを加え、１ＮのＨ2ＳＯ4の１００μｌを加えた後、混合溶液１（１％プロパノール、０．００５％ｓｏｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ）、混合溶液２（０．１％ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ、０．５％ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ、５．５％ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉｂａｓｉｃ）をそれぞれ１ｍｌずつ加えた後、６０℃で２０分間加熱してから、常温に冷やして６６０ｎｍで吸光度を測定し、産生されたアンモニアの定量分析を行った。
【００８１】
上記測定結果は、大腸菌ＨＧＵ−３と乳酸菌、腸内細菌叢と乳酸菌とを混合培養した場合の大腸癌誘発酵素の阻害率を表８に示した（対照群は、Ｅ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３の菌株のみを培養した場合である）。
【００８２】
【表９】
【００８３】
上記表８から見られるように、人参の乳酸菌発酵物は人体に吸収されるとき、抗癌効果及び腸内細菌が生産するβ−グルクロニダーゼ及びトリプトファナーゼの活性、そしてアンモニアの生産性を阻害して大腸癌及び肝損傷を予防する効果を示し得ることが分かる。
【００８４】
＜実験例Ｂ４：Ｅ．ＣｏｌｉＯ１５７有害菌の成長抑制効果＞
Ｅ．ＣｏｌｉＯ−１５７の成長に人参発酵乳酸菌が及ぼす影響を調査した。Ｅ．ＣｏｌｉＯ−１５７を１ｍｌ当たり１０5となるようにＧＡＭ培地５ｍｌに移植し、それぞれの菌株に対して乳酸菌をそれぞれ１：１と１：１０の比率となるように移植して、３７℃で２０時間インキュベートした後、ＴＳ寒天プレートに移植して３７℃で２０時間インキュベートした後、得られる有害菌のコロニー数を測定した。
【００８５】
【表１０】
【産業上の利用可能性】
【００８６】
以上において検討したとおり、本発明による高麗人参及び花旗参を含む人参の乳酸菌発酵物は、人参の原材料においては極少量含有されているか、ほとんど含有されていない化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２を多量に含有しており、抗癌作用、抗アレルギー作用及び腸内環境の改善作用が可能なことが分かる。また、大腸癌予防、肝障害保護効果、有害菌の成長を阻害する活性が強い。従って、上記人参の乳酸菌発酵物を有効成分として含有するヨーグルトは、上記サポニン成分の示す生理活性を提供する機能性ヨーグルトとして有用に利用できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌で人参を発酵させて製造される人参の乳酸菌発酵物、上記人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルト、及び上記人参の乳酸菌発酵物を得るために利用される乳酸菌の菌株に関する。
【背景技術】
【０００２】
人参は、植物分類学上五加科人参属に属する多年生宿根草であって、地球上に約１１種が知られており、代表的な種の例としては、アジア極東地域（北緯３３〜４８：韓国、北満州、ロシアの一部）に自生し、薬効が極めて優れた高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）；米国、カナダで自生及び栽培されている米国参（Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ Ｌ．；一名、花旗参）；中国雲南省東南部から広西省西南部地域で野生又は栽培されている田七参（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ）；及び日本、中国西南部、ネパールに至るまで分布している竹節参（Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）等がある。
【０００３】
人参は、神農本草経に商品として収載されているだけでなく、古くから貴重な補薬として用いられてきた。これまで多くの薬理実験を通じて、人参はストレスに対する生体の非特異的抵抗性を強化させ、抗酸性作用を有していることが明らかになっている。その他に、高血圧の改善、インシュリン作用の増強、アロキサン（ＡＬＬＯＸＡＮ）糖尿マウスにおける血糖降下効果、白ネズミの肝ＲＮＡ合成、蛋白質合成、糖及び脂質代謝の促進効果、抗癌効果等があることが明らかになった。
【０００４】
上記人参は、主に韓国、中国、日本等のアジア国家において生薬の形態で精神医学的疾病、神経系の疾病及び糖尿病等の様々な疾病に対して用いられてきており、上記人参の主要成分であるサポニンは、強壮、強精、鎮静及び抗高血圧等に効果を示すものと知られている。
【０００５】
現在人参の使用は、栽培して採取した状態のままの水参を常温で乾燥させた白参、水参を９８−１００℃で加熱処理して製造される紅参、又は１２０−１８０℃で加熱処理して製造される仙参の形態で用いられている。
【０００６】
一方、人参の根には約４−１０％の人参サポニン（韓国産人参は４−８％であり、米国産人参は４−１０％である）が含有されているが、上記人参サポニンは、多様なジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）の混合物であり、特に韓国産はジンセノサイドＲｂ１、Ｒｃ及びＲｇ１の含量が比較的高い方であり、米国産はジンセノサイドＲｂ１及びＲｅの含量が比較的高い。
【０００７】
人参に含有されるジンセノサイドの成分及びその薬理学的な効能は、下記の表１のとおりである。
【０００８】
【表１】
【０００９】
現在知られているところによると、人参の薬理効能を示す主成分であるジンセノサイドはＲｂ１、Ｒｂ２及びＲｃのサポニンである。しかし、実質的に抗癌作用又は癌細胞の癌転移を抑制したり、抗アレルギー作用を有する成分は人参に極少量含有されているか、人参サポニンの腸内細菌代謝物である化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２のサポニン成分であるものと知られている。
【００１０】
従って、人参の抗癌作用、抗アレルギー作用、免疫増強作用等を得るために使用するためには、上記人参に極少量含有されている化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２（ジンセノサイドＲｋ２とジンセノサイドＲｈ３の混合物を意味する）のサポニン成分の含量を増加させることが好ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
そこで、本発明者もまた、人参から化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２のサポニン成分をより効率的に得るために多くの研究を行った結果、人参を乳酸菌で発酵させることにより得られる人参の乳酸菌発酵物に化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の含量が相当であることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
従って、本発明の目的は、人参の乳酸菌発酵物を提供することである。
【００１３】
また、本発明の他の目的は、上記人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルトを提供することである。
【００１４】
さらに、本発明のまた他の目的は、上記人参の乳酸菌発酵物を得るために用いられる乳酸菌を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、（１）人参を乳酸菌で発酵させて得られる人参の乳酸菌発酵物、（２）上記人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルト、及び（３）上記乳酸菌発酵物を得るのに有効に利用される乳酸菌の菌株を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明をより具体的に説明する。
【００１７】
本発明によると、人参を乳酸菌で発酵させる場合、発酵前の人参に主に含有されているサポニン成分は、発酵前の人参には存在しないか、又は極少量存在する化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２に生物転換される。
【００１８】
そして、人参の乳酸菌発酵物は、化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイドＲｈ１、ジンセノサイドＲｈ２およびΔ20−ジンセノサイドＲｈ２からなる群から選ばれる１種以上の成分を含有する。
【００１９】
当業界の通常の知識によると、化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２のサポニン成分は、ジンセノサイドＲｂ１、Ｒｂ２及びＲｃ等のサポニン成分に比してさらに優れた抗癌活性、抗アレルギー活性及び癌転移抑制活性を有する（Ｂａｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２５、７４３−７４７、２００２；Ｂａｅ ｅｔ ａｌ．，２５、５８−６３、２００２；Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．，９、４１１−４１７、１９９８；Ｓａｉｋｉ
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ８ｔｈ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｇｉｎｓｅｎｇ（ソウル、高麗人参学会）、３０５−３１６、２００２；Ｈａｓｅｇａｗａ ａｎｄ Ｓａｉｋｉ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ８ｔｈ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｇｉｎｓｅｎｇ（ソウル、高麗人参学会）、３１７−３３４、２００２）。
【００２０】
一方、上記人参の乳酸菌発酵のために用いられ得る人参の原材料が特に限定されず、人参（高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）、花旗参（Ｐａｎａｘ
ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ Ｌ．）、田七参（Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ）、竹節参（Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ））のそれ自体又はその加工物であり得、より具体的には、水参、紅参、白参、尾参、花旗参（以下、高麗参、花旗参、田七参、竹節参を包括して人参という）；人参の葉、人参抽出液及び人参粉末のうちいずれか一つ以上を用いることができる。加工処理別には、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理人参等が本発明の人参の乳酸菌発酵物を得るための原料物質として好ましく用いられ得る。
【００２１】
また、上記乾燥粉末状の人参の粉末化の程度は特に限定されず、乳酸菌が人参組織又は繊維素内に高い効率で浸透できる程度に粉末化され得、そのような粉末化の程度は、当業者により容易に認識され得、粉末化の方法も当業界に通常公知になっている。一方、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理人参は、人参それ自体から製造できるが、上記乾燥粉末状の人参から得られることが、人参処理効果及びその後の発酵効率において好ましい。この場合も、乾燥粉末状の人参の粉末化の程度は特に限定されない。
【００２２】
人参は、水参、紅参、白参、尾参、花旗参、人参の葉、人参抽出液及び人参粉末のうちいずれか一つ以上の粉末を乳酸菌で発酵させる場合、人参の乳酸菌発酵物に特に化合物Ｋ成分の含量が上昇するようになる。
【００２３】
酸処理人参は、水参、紅参、白参、尾参、花旗参、人参の葉、人参抽出液及び人参粉末のうちいずれか一つ以上の粉末を酸、好ましくは酢酸、乳酸、クエン酸、酪酸、酒石酸、プロピオン酸又は塩酸を添加した後、６０℃で５時間培養し、カルシウム塩で中和させることにより得られる。本発明によると、酸処理人参を乳酸菌で発酵させる場合、人参の乳酸菌発酵物において特にジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２成分の含量が上昇するようになる。
【００２４】
高温処理人参、例えば紅参は、上記人参の原材料の粉末を１００℃で２−５時間加温することにより得られる。本発明によると、高温処理人参を乳酸菌で発酵させて得られる人参の乳酸菌発酵物においては、特に化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２成分の含量が上昇するようになる。
【００２５】
加圧処理人参は、上記人参の原材料の粉末を１１０乃至１３０℃で２−５時間加圧下に熱処理することにより得られる。本発明によると、このような加圧処理人参を乳酸菌で発酵させて得られる人参の乳酸菌発酵物には、たとえ化合物Ｋの含量は低くなるとしても、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２成分、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の含量が増加するようになる。
【００２６】
一方、人参発酵物を得る方法は特に限定されず、当業界における通常の方法を用いて、本発明により人参発酵に用いる乳酸菌の適当な発酵条件で発酵を行うことができ、具体的には、例えば、人参の原材料を水に懸濁した後、乳酸菌を入れ、上記乳酸菌の適当な発酵温度で４８時間乃至７２時間内外で培養して人参の乳酸菌発酵物を得る生物転換過程、及び上記過程を経た人参の乳酸菌発酵物を遠心分離し、上清液のみを濾過して人参の乳酸菌発酵物を得る濃縮過程を含む方法により得られる。
【００２７】
一方、人参の乳酸菌発酵に用いることができる乳酸菌としては、人参中のサポニン成分の化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２への転換効率が高ければ、特に限定されず、例えば、ラクトバチルス属の菌株、ストレプトコッカス属の菌株又はビフィドバクテリウム属の菌株を用いることができ、より具体的には
、ビフィドバクテリウムＫ−１０３（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１、５４−６１、１９９８参照）、ビフィドバクテリウムＫ−５０６（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１、５４−６１、１９９８参照）、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１（ＫＣＣＭ−１０３６４）、ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２（ＫＣＣＭ−１０３６５）、ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）、ビフィドバクテリウムＫＫ−１１（慶熙大学校薬大の金東鉉教授室）のうちいずれか一つ以上の菌株を用いることができる。
【００２８】
その中で、ビフィドバクテリウムＨ−１、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２は、人参の乳酸菌発酵物を得るために本発明者により開発された微生物であって、上記ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１は寄託番号ＫＣＣＭ−１０３６４（２００３．０３．２２）として、上記ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２は寄託番号ＫＣＣＭ−１０３６５（２００３．０３．２２）として、ビフィドバクテリウムＨ−１はＫＣＣＭ−１０４９３（２００３．０５．０１）としてそれぞれ韓国微生物保存センター（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）に寄託されている。本発明のビフィドバクテリウムＫＫ−１、ＫＫ−２、Ｈ−１及びＫＫ−１１の菌株はグラム陽性菌であり、桿菌であり、嫌気性の菌株であり、フルクトース６−フォスフェートホスホケトラーゼ（ｆｒｕｃｔｏｓｅ ６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｐｈｏｓｐｈｏｋｅｔｏｌａｓｅ）陽性を示し、下記のような糖利用性を有する。
【００２９】
【表２】
【００３０】
一方、上記ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ＫＫ−２、Ｈ−１、ＫＫ−１１は、同一種に属する菌株と比較して一般的な分類学的特性は同一であるが、人参の乳酸菌発酵に利用する場合、より多くの含量の化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２を含有する人参の乳酸菌発酵物を提供することができる。
【００３１】
一方、本発明による人参の乳酸菌発酵物は、乳酸菌発酵を通じてより多くの含量の化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２を含有し、より具体的には人参の乳酸菌発酵物内（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）、（ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）、（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）又は（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）の発酵成分の総量が、（ジンセノサイドＲｃ＋ジンセノサイドＲｄ＋ジンセノサイドＲｂ１＋ジンセノサイドＲｂ２＋ジンセノサイドＲｅ＋ジンセノサイドＲｇ１）の総量に対して０．１以上の比率で含有することが好ましい。より好ましくは、（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）が生成される場合、２つの成分の比は１：５０乃至５０：１の範囲内であり；（ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）が生成される場合、２つの成分の比は１：５０乃至５０：１であり；（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）が生成される場合、ジンセノサイドＲｈ２とΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の和と、ジンセノサイドＲｈ１の比が１：５０乃至５０：１で
あり；（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）が生成される場合は、化合物Ｋとジンセノサイドの比が１：５０乃至５０：１である。本発明によると、本来紅参の中には化合物Ｋが存在しないが、本発明による方法により紅参を乳酸菌発酵させる場合、特に化合物Ｋの含量が増加するようになる。
【００３２】
本発明の前記乳産菌の菌株は、腸内有害菌を抑制し、および／または、腸内有害酵素活性を抑制し、および／または、癌細胞の成長を抑制することが分かる。
【００３３】
また、本発明は、上記説明した人参の乳酸菌発酵物を含有する人参ヨーグルトを提供する。
【００３４】
上記人参ヨーグルトは、本発明による人参の乳酸菌発酵物を含有しているため、即ち、化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の人参サポニン成分の発酵収得物を多量に含有するため、化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２の高い生理活性機能、より具体的には、抗癌効能、抗アレルギー効能及び免疫増強効能等を有する機能性ヨーグルトである。このような人参ヨーグルトの製造は通常のヨーグルトに、例えば、０．１重量％乃至１０重量％の上記人参の乳酸菌発酵物を単に添加させることにより製造できる。しかし、このような製造方法は、ヨーグルトを製造するために、ヨーグルト原料乳を乳酸菌発酵させることと、人参の乳酸菌発酵物を得るためにもう一度人参を乳酸菌発酵させることが要求されるため、産業的な経済性の面において好ましくない。従って、本発明による人参ヨーグルトは、ヨーグルト原料乳と、それに対して０．１重量％乃至１０重量％の人参を同時に乳酸菌発酵させることにより、本発明による人参ヨーグルトを製造することができる。上記発酵のための反応物にはビタミンをさらに含有させることができる。
【００３５】
一方、上記人参ヨーグルトを製造するために用いられる乳酸菌としては、ヨーグルト原料乳と人参を同時に乳酸菌発酵させることができるものであれば、特に限定されず、例えば、ラクトバチルス属の菌株、ストレプトコッカス属の菌株又はビフィドバクテリウム属の菌株を用いることができ、より好ましくは、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−１１のうちいずれか一つ以上の菌株を用いることができる。
【００３６】
上記ヨーグルト原料乳は、特に限定されないが、牛乳、山羊乳、緬羊乳、脱脂乳、全脂牛乳等を用いることができる。
【００３７】
ヨーグルトの製造のための乳酸菌発酵の後に、乳酸菌を除去することもあり、そうしないこともあるが、乳酸菌は体の腸内環境を改善させる等の有利な機能を有するため、上記乳酸菌は除去しない方が好ましい。従って、本発明によるヨーグルトは腸内環境を改善させる機能も行うことができる。
【００３８】
一方、上記得られたヨーグルトに粉乳等を添加して粉末人参ヨーグルトも得ることができる。従って、上記ヨーグルトがその形態において特に限定されず、牛乳等のヨーグルト原料乳の乳酸菌発酵を通じて得られる、従来に公知になった多様な形態を有し得る。
【００３９】
以下、本発明は、実施例を通じてより具体的に説明するが、本発明がこれにより限定されないことから、当業者に自明な変形等を行うことができ、当業者は、上記変形も本発明の範囲内であることを自明に認識するだろう。
【００４０】
＜実施例Ａ１＞
水参（京東市場で購入した錦山産高麗人参５年根）を熱水でよく洗浄して乾燥させ、微細に粉末化した水参粉１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養してヨーグルトを得た。
【００４１】
＜実施例Ａ２＞
水参又は尾参をよく乾燥させて作った粉末２ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫ−１０３及びビフィドバクテリウムＫ−５０６の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養してヨーグルトを得た。
【００４２】
＜実施例Ａ３＞
水参をよく乾燥させて作った粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス、ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で１２時間培養してヨーグルトを得た。
【００４３】
＜実施例Ａ４＞
白参粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス及びビフィドバクテリウムＫＫ−１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養してヨーグルトを得た。
【００４４】
＜実施例Ａ５＞
乾燥した人参粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して人参ヨーグルトを得た。
【００４５】
＜実施例Ａ６＞
乾燥した人参粉末に０．５％となるように乳酸を入れ、６０℃で５時間処理し、中和した後、乾燥させて得た人参粉末（酸処理人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して酸処理人参ヨーグルトを得た。
【００４６】
＜実施例Ａ７＞
乾燥した人参粉末を蒸留水に懸濁して１００℃で２時間蒸し、乾燥させて得た人参粉末（加熱人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加熱人参ヨーグルトを得た。
【００４７】
＜実施例Ａ８＞
乾燥した人参粉末を１２０℃で２時間加圧処理し、乾燥させて得た人参粉末（加圧人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加圧処理人参ヨ
ーグルトを得た。
【００４８】
＜実施例Ａ９＞
乾燥した人参粉末１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して人参ヨーグルトを得た。
【００４９】
＜実施例Ａ１０＞
乾燥した人参粉末に５％となるように乳酸を入れ、６０℃で５時間処理して中和させてから、乾燥させて得た人参粉末（加熱人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加熱人参ヨーグルトを得た。
【００５０】
＜実施例Ａ１１＞
乾燥した人参粉末を蒸留水に懸濁して１００℃で２時間蒸し、乾燥させて得た人参粉末（加熱人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加熱人参ヨーグルトを得た。
【００５１】
＜実施例Ａ１２＞
乾燥した人参粉末を１２０℃で２時間加圧処理し、乾燥させて得た人参粉末（加圧人参）１ｇ及びビタミンＣの０．１ｇを１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間培養して加圧人参ヨーグルトを得た。
【００５２】
＜実施例Ａ１３〜Ａ２４＞
上記実施例Ａ１乃至Ａ１２において、１００ｍｌの牛乳の代わりに、１００ｍｌの水と予め培養した乳酸菌２ｇ（湿重量）を用いたことを除いては、上記実施例Ａ１乃至Ａ１２と同一の過程を繰り返してそれぞれの乳酸菌発酵物を得た。
【００５３】
＜実験例Ａ１：サポニン成分の含量分析＞
市販品である一般の人参（京東市場で購入した農協高麗人参錦山産４−６年根）、及びその乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理人参（上記実施例と同一の方法により製造）それぞれ１ｇをビタミンＣの０．１ｇを含有する牛乳１００ｍｌに加えた後、乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｇ入れ、３７℃で７２時間発酵させて減圧濃縮し、人参発酵ヨーグルト、高温処理人参発酵ヨーグルト、酸処理人参発酵ヨーグルト、加圧処理人参発酵ヨーグルトを得た。次いで、人参、及びその乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参、加圧処理人参、及び上記得られたそれぞれの人参発酵ヨーグルトを２ｇずつ取ってメタノール１００ｍｌずつで３回抽出し、濃縮した後に水に懸濁させ、エーテル１００ｍｌずつで３回抽出した。次いで、ブタノール１００ｍｌずつで３回抽出した後にブタノール分画を濃縮させ、得られた濃縮物をメタノールに溶解させてＴＬＣで分析し（溶媒としてはＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６５：３５：１０/CHCl3:EtOAc:MeOH:H2O＝１５:４０:２２:９；発色試薬としてはＭｅＯＨ中の５％硫酸溶液；検出器としてはＳｈｉｍａｄｚｕ ＴＬＣ ｓｃａｎｎｅｒＣＳ−９３０１ＰＣを使用）、下記表２のような結果を得た。成分含量は、最終抽出分画１００％に含有された各成分の含量で計算した。
【００５４】
実施例Ａ１乃至Ａ４、及び実施例Ａ９乃至Ａ１２も、上記表２と類似する結果を示し、実施例Ａ１３乃至Ａ２４の人参の乳酸菌発酵物は、上記発酵ヨーグルトと類似するサポニン成分含量を示した。
【００５５】
【表３】
【００５６】
＜実験例Ａ２：抗癌効果の分析＞
ＨｅｐＧ２（人間肝癌細胞株；ＫＣＬＢ−１００２３）、Ａ−５４９（人間肺癌細胞株；ＫＣＬＢ−１０１８５）、Ｐ−３８８（マウスリンパ液の新生血漿細胞株；ＫＣＬＢ−１００４６）、Ｌ−１２１０（マウスリンパ球の白血病細胞株；ＫＣＬＢ−１０２１９）を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質−抗菌剤（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ−ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓ；ＧＩＢＣＯ社、米国）及び２．２ｇの重炭酸ナトリウムを補充したＲＰＭＩ１６４０の培地で培養した。上記ＨｅｐＧ２、Ａ−５４９は、０．２５％トリプシンで処理して細胞をフラスコから剥し、細胞数を３×１０4細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートの各ウェルに１８０μｌずつ播いて２４時間の間３７℃で、５％ＣＯ2が飽和したＣＯ2インキュベーターでインキュベートした。Ｐ−３８８及びＬ−１２１０細胞は、
４×１０4細胞／ウェルとなるように細胞数を合わせて、各ウェルに１８０μｌを入れて２時間の間インキューベートした。次いで、白参のブタノール抽出物及び表３に記載された乳酸菌発酵人参のブタノール分画のそれぞれを高圧蒸気滅菌した後、１０ｍｇ／ｍｌとなるようにウェル当たり２０μｌずつを添加して、試料を添加し、４８時間の間３７℃の５％ＣＯ2が飽和したＣＯ2培養器でインキュベートした。その後、ウェル当たり２０ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ試薬を５０μｌずつ添加し、４時間後、培地を取り除き、沈殿物にＤＭＳＯの１００μｌを添加してから、５８０ｎｍでＥＬＩＳＡ読取器で吸光度を測定することによって細胞の毒性を測定した。測定結果を下記の表３に示した。
【００５７】
【表４】
【００５８】
＜実験例Ａ３：Ｅ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３及び腸内有害酵素に及ぼす効果＞
上記実施例において得られた人参発酵物、２４時間培養したＥ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、一般的なＥ．Ｃｏｌｉの特性とほぼ同一）と共に、ビフィドバクテリウムＫＫ−１又はビフィドバクテリウムＫＫ−２をそれぞれ１０7個となるように５ｍｌのＧＡＭ培養液に移植し、２４時間インキュベートした後、菌株が生産した大腸癌及び肝障害の原因となる酵素であるβ−グルクロニダーゼとトリプトファナーゼの酵素活性を測定した。
【００５９】
β−グルクロニダーゼ酵素活性の測定は、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．３８ｍｌに１０ｍＭのｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロニド０．０２ｍｌ、酵素液０．１ｍｌを加えて３７℃で１時間反応させ、０．５ＮのＮａＯＨの０．５ｍｌを添加して反応を終了させ、蒸留水１ｍｌを加えた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液に対して４０５ｎｍで吸光度を測定した。
【００６０】
トリプトファナーゼの酵素活性は、完全反応混合物（０．１ＭのＢＩＣＩＮＥ；ｐＨ８．０、４％ピリドキサル５−フォスフェート、２０％子牛血清アルブミン）０．２ｍｌ、０．０２Ｍトリプトファン０．２ｍｌ及び酵素液０．１ｍｌを加えて３０分反応させ、着色剤（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１４．７ｇ、９５％エタノール９４８ｍｌ、Ｃ−Ｈ2ＳＯ4の５２ｍｌ）２ｍｌを加えて反応を終了させた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液で５５０ｎｍで吸光度を測定した。
【００６１】
上記測定結果は、ビフィドバクテリウムＫＫ−１を移植した場合を表４に、ビフィドバクテリウムＫＫ−２を移植した場合を表５に示した。
【００６２】
【表５】
【００６３】
【表６】
【００６４】
上記表４及び表５から見られるように、人参の乳酸菌発酵物は人体に吸収されるとき、抗癌効果及び腸内細菌が生産するβ−グルクロニダーゼ及びトリプトファナーゼの活性を阻害して大腸癌及び肝損傷を予防する効果を示し得ることが分かる。
【００６５】
＜実施例Ｂ１＞
花旗参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス及びビフィドバクテリウムＫＫ−１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６６】
＜実施例Ｂ２＞
花旗参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ラクトバチルスブルガリクス、ストレプトコッカスサーモフィルス及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６７】
＜実施例Ｂ３＞
乾燥した花旗参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−２の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６８】
＜実施例Ｂ４＞
乾燥した花旗参粉末を水に懸濁し、１％となるように乳酸を入れて６０℃で５時間インキュベートし、中和して乾燥させ、粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００６９】
＜実施例Ｂ５＞
乾燥した花旗参粉末１ｇを水に浸し、１００℃で２時間蒸した人参（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００７０】
＜実施例Ｂ６＞
乾燥した花旗参粉末を１２０℃で２時間加圧処理した人参粉末１ｇ（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００７１】
＜実施例Ｂ７＞
乾燥した花旗参粉末を１２０℃で２時間加圧処理した人参粉末（ビタミンＣを０．１ｇ含有し得る）を１００ｍｌの牛乳に５％となるように入れて懸濁した後、予め培養した乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｍｌ（約１０9細胞／ｍｌ）ずつ移植し、３７℃で２４時間インキュベートしてヨーグルトを得た。
【００７２】
＜実施例Ｂ８〜Ｂ１４＞
上記実施例Ｂ１乃至Ｂ７において、１００ｍｌの牛乳の代わりに、１００ｍｌの蒸留水と予め培養した乳酸菌２ｇ（湿重量）を用いたことを除いては、上記実施例Ｂ１乃至Ｂ７と同一の過程を繰り返して、それぞれの乳酸菌発酵物を得た。
【００７３】
＜実験例Ｂ１：サポニン成分の含量分析＞
市販品である一般の花旗参（ホンリム株式会社から購入したカナダ産の花旗参４年根）、及びその乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参及び加圧処理花旗参（上記実施例と同一の方法により製造）のそれぞれ１ｇをビタミンＣの０．１ｇを含有する牛乳１００ｍｌに加えた後、乳酸菌ビフィドバクテリウムＫＫ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１の菌株をそれぞれ１ｇ入れ、３７℃で７２時間培養して減圧濃縮し、乾燥花旗参発酵ヨーグルト、高温処理花旗参発酵ヨーグルト、酸処理花旗参発酵ヨーグルト、加圧処理花旗参発酵ヨーグルトを得た。次いで、花旗参、及びその乾燥花旗参粉末、酸処理花旗参、高温処理花旗参、加圧処理花旗参、及び上記得られたそれぞれの人参発酵ヨーグルト（２−２０ｇ）を取ってメタノール１００ｍｌずつで３回抽出し、濃縮した後に水に懸濁させ、エーテル１００ｍｌずつで３回抽出した。次いで、ブタノール１００ｍｌずつで３回抽出した後にブタノール分画を濃縮させ、得られた濃縮物をメタノールに溶解してＴＬＣで分析し（溶媒としてはＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６５：３５：１０/CHCl3:EtOAc:MeOH:H2O＝１５:４０:２２:９；発色試薬としてはＭｅＯＨ中の５％硫酸溶液；検出器としてはＳｈｉｍａｄｚｕ ＴＬＣ ｓｃａｎｎｅｒ ＣＳ−９３０１ＰＣを使用）、下記表６のような結果を得た。成分含量は、最終抽出分画１００％に含有された各成分の含量で計算した。対照試験は、人参を入れずに分析したヨーグルトを同じ方法により処理して比較した。
【００７４】
【表７】
【００７５】
＜実験例Ｂ２：抗癌効果の分析＞
ＨｅｐＧ２（人間肝癌細胞株；ＫＣＬＢ−１００２３）、Ａ−５４９（人間肺癌細胞株；ＫＣＬＢ−１０１８５）、Ｐ−３８８（マウスリンパ液の新生血漿細胞株；ＫＣＬＢ−１００４６）、Ｌ−１２１０（マウスリンパ球の白血病細胞株；ＫＣＬＢ−１０２１９）を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質−抗菌剤（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ−ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃｓ；ＧＩＢＣＯ社、米国）及び２．２ｇの重炭酸ナトリウムを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。上記ＨｅｐＧ２、Ａ−５４９は、０．２５％トリプシンで処理して細胞をフラスコから剥し、細胞数を３×１０4細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートの各ウェルに１８０μｌずつ播いて２４時間の間３７℃で、５％ＣＯ2が飽和したＣＯ２インキュベーターでインキュベートした。Ｐ−３８８及びＬ−１２１０細胞は、４×１０４細胞／ウェルとなるように細胞数を合わせて、各ウェルに１８０μｌを入れて２時間の間インキュベートした。次いで、花旗参の抽出物及び表３に記載された乳酸菌発酵人参（乳酸菌で発酵した後、ＢｕＯＨで抽出した分画である）のそれぞれを高圧蒸気滅菌した後、１０ｍｇ／ｍｌとなるように９６ウェルプレートのウェル当たり２０μｌずつを添加し、試料を添加して、４８時間の間３７℃の５％ＣＯ2が飽和したＣＯ2インキュベーターでインキュベートした。その後、ウェル当たり２０ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ試薬を５０μ
ｌずつ添加して、４時間の間ＣＯ２インキュベーターで反応させた後、培地を取り除き、沈殿物にＤＭＳＯの１００μｌを添加してから、５８０ｎｍでＥＬＩＳＡ読取器で吸光度を測定することによって細胞の毒性を測定した。測定結果を下記の表７に示した。
【００７６】
【表８】
【００７７】
＜実験例Ｂ３：Ｅ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３及び腸内有害酵素に及ぼす効果＞
２４時間培養したＥ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３（慶熙大学校薬大の金東鉉教授の実験室、一般的なＥ．Ｃｏｌｉの特性とほぼ同一）（又は新鮮な人間の腸内細菌叢）、及びビフィドバクテリウムＫＫ−１（又はビフィドバクテリウムＫＫ−２又はビフィドバクテリウムＨ−１又はビフィドバクテリウムＫＫ−１１）をそれぞれ１０5個となるように５ｍｌのＧＡＭ培養液（前回には人参を含有；人参を含有しない）に移植し、２４時間インキュベートした後、菌株が生産した大腸癌及び肝障害の原因となる酵素であるβ−グルクロニダーゼとトリプトファナーゼの酵素活性を測定した。
【００７８】
β−グルクロニダーゼ酵素活性の測定は、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．３８ｍｌに１０ｍＭのｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルクロニド０．０２ｍｌ、酵素液０．１ｍｌを加えて３７℃で１時間反応させ、０．５ＮのＮａＯＨの０．５ｍｌを添加して反応を終了させ、蒸留水１ｍｌを加えた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液に対して４０５ｎｍで吸光度を測定した。
【００７９】
トリプトファナーゼの酵素活性は、完全反応混合物（０．１ＭのＢＩＣＩＮＥ；ｐＨ８．０）、４％ピリドキサル５−フォスフェート、２０％子牛血清アルブミン）０．２ｍｌ、０．０２Ｍトリプトファン０．２ｍｌ及び酵素液０．１ｍｌを加えて３０分インキュベートさせ、着色剤（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１４．７ｇ、９５％エタノール９４８ｍｌ、Ｃ−Ｈ2ＳＯ4の５２ｍｌ）２ｍｌを加えて反応を終了させた後、遠心分離（２０００×ｇ、２０分）し、上清液で５５０ｎｍで吸光度を測定した。
【００８０】
０．１Ｍのｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ７．０）、分画懸濁液２０μｌを加え、１ＮのＨ2ＳＯ4の１００μｌを加えた後、混合溶液１（１％プロパノール、０．００５％ｓｏｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ）、混合溶液２（０．１％ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ、０．５％ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ、５．５％ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｉｂａｓｉｃ）をそれぞれ１ｍｌずつ加えた後、６０℃で２０分間加熱してから、常温に冷やして６６０ｎｍで吸光度を測定し、産生されたアンモニアの定量分析を行った。
【００８１】
上記測定結果は、大腸菌ＨＧＵ−３と乳酸菌、腸内細菌叢と乳酸菌とを混合培養した場合の大腸癌誘発酵素の阻害率を表８に示した（対照群は、Ｅ．ＣｏｌｉＨＧＵ−３の菌株のみを培養した場合である）。
【００８２】
【表９】
【００８３】
上記表８から見られるように、人参の乳酸菌発酵物は人体に吸収されるとき、抗癌効果及び腸内細菌が生産するβ−グルクロニダーゼ及びトリプトファナーゼの活性、そしてアンモニアの生産性を阻害して大腸癌及び肝損傷を予防する効果を示し得ることが分かる。
【００８４】
＜実験例Ｂ４：Ｅ．ＣｏｌｉＯ１５７有害菌の成長抑制効果＞
Ｅ．ＣｏｌｉＯ−１５７の成長に人参発酵乳酸菌が及ぼす影響を調査した。Ｅ．ＣｏｌｉＯ−１５７を１ｍｌ当たり１０5となるようにＧＡＭ培地５ｍｌに移植し、それぞれの菌株に対して乳酸菌をそれぞれ１：１と１：１０の比率となるように移植して、３７℃で２０時間インキュベートした後、ＴＳ寒天プレートに移植して３７℃で２０時間インキュベートした後、得られる有害菌のコロニー数を測定した。
【００８５】
【表１０】
【産業上の利用可能性】
【００８６】
以上において検討したとおり、本発明による高麗人参及び花旗参を含む人参の乳酸菌発酵物は、人参の原材料においては極少量含有されているか、ほとんど含有されていない化合物Ｋ、ジンセノサイドＲｈ１及びＲｈ２、並びにΔ20−ジンセノサイドＲｈ２を多量に含有しており、抗癌作用、抗アレルギー作用及び腸内環境の改善作用が可能なことが分かる。また、大腸癌予防、肝障害保護効果、有害菌の成長を阻害する活性が強い。従って、上記人参の乳酸菌発酵物を有効成分として含有するヨーグルトは、上記サポニン成分の示す生理活性を提供する機能性ヨーグルトとして有用に利用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌で人参を発酵させて製造される人参の乳酸菌発酵物。
【請求項２】
前記人参が、乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参、加圧処理人参からなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項３】
前記人参の発酵物が、化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｈ１、ジンセノサイドＲｈ２及びΔ20−ジンセノサイドＲｈ２からなる群より選ばれた一つ以上の発酵成分を含有することを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項４】
（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）、又は（ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）、あるいは（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）又は（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）の発酵成分の総量が、（ジンセノサイドＲｃ＋ジンセノサイドＲｄ＋ジンセノサイドＲｂ１＋ジンセノサイドＲｂ２＋ジンセノサイドＲｅ＋ジンセノサイドＲｇ１）の量に対して０．１以上の比率で前記人参の発酵物中に含有されることを特徴とする請求項３に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項５】
前記乳酸菌が、人参内に含まれているジンセノサイド成分を生物転換させることができる乳酸菌であることを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項６】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項５に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項７】
請求項１又は２による人参の乳酸菌発酵物を含有することを特徴とする人参ヨーグルト。
【請求項８】
前記乳酸菌発酵物が、ヨーグルト原料乳と人参を乳酸菌で同時に発酵させることにより前記人参ヨーグルトに含有されることを特徴とする請求項７に記載の人参ヨーグルト。
【請求項９】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項８に記載の人参ヨーグルト。
【請求項１０】
前記乳酸菌が、腸内有害菌の抑制及び／又は腸内有害酵素活性の抑制及び／又は癌細胞成長の抑制を含む機能を有することを特徴とする請求項７に記載の人参ヨーグルト。
【請求項１１】
ビフィドバクテリウムＫＫ−１（ＫＣＣＭ−１０３６４）。
【請求項１２】
ビフィドバクテリウムＫＫ−２（ＫＣＣＭ−１０３６５）。
【請求項１３】
ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジンセノサイド成分に生物転換できる乳酸菌で人参を発酵させて製造される人参の乳酸菌発酵物。
【請求項２】
前記人参が、乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参、加圧処理人参からなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項３】
前記人参の発酵物が、化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｈ１、ジンセノサイドＲｈ２及びΔ20−ジンセノサイドＲｈ２からなる群より選ばれた一つ以上の発酵成分を含有することを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項４】
（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）、又は（ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ１）、あるいは（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）又は（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）の発酵成分の総量が、ジンセノサイドＲｃ＋ジンセノサイドＲｄ＋ジンセノサイドＲｂ１＋ジンセノサイドＲｂ２＋ジンセノサイドＲｅ＋ジンセノサイドＲｇ１の量に対して０．１以上の比率で前記人参の発酵物中に含有されることを特徴とする請求項３に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項５】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項６】
請求項１又は２による人参の乳酸菌発酵物を含有することを特徴とする人参ヨーグルト。
【請求項７】
前記乳酸菌発酵物が、ヨーグルト原料乳と人参を乳酸菌で同時に発酵させることにより前記人参ヨーグルトに含有されることを特徴とする請求項６に記載の人参ヨーグルト。
【請求項８】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項７に記載の人参ヨーグルト。
【請求項９】
前記乳酸菌が、腸内有害菌の抑制及び／又は腸内有害酵素活性の抑制及び／又は癌細胞成長の抑制を含む機能を有することを特徴とする請求項６に記載の人参ヨーグルト。
【請求項１０】
ビフィドバクテリウムＫＫ−１（ＫＣＣＭ−１０３６４）。
【請求項１１】
ビフィドバクテリウムＫＫ−２（ＫＣＣＭ−１０３６５）。
【請求項１２】
ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）。
【請求項１】
乳酸菌で人参を発酵させて製造される人参の乳酸菌発酵物。
【請求項２】
前記人参が、乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参、加圧処理人参からなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項３】
前記人参の発酵物が、化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｈ１、ジンセノサイドＲｈ２及びΔ20−ジンセノサイドＲｈ２からなる群より選ばれた一つ以上の発酵成分を含有することを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項４】
（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）、又は（ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）、あるいは（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）又は（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）の発酵成分の総量が、（ジンセノサイドＲｃ＋ジンセノサイドＲｄ＋ジンセノサイドＲｂ１＋ジンセノサイドＲｂ２＋ジンセノサイドＲｅ＋ジンセノサイドＲｇ１）の量に対して０．１以上の比率で前記人参の発酵物中に含有されることを特徴とする請求項３に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項５】
前記乳酸菌が、人参内に含まれているジンセノサイド成分を生物転換させることができる乳酸菌であることを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項６】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項５に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項７】
請求項１又は２による人参の乳酸菌発酵物を含有することを特徴とする人参ヨーグルト。
【請求項８】
前記乳酸菌発酵物が、ヨーグルト原料乳と人参を乳酸菌で同時に発酵させることにより前記人参ヨーグルトに含有されることを特徴とする請求項７に記載の人参ヨーグルト。
【請求項９】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項８に記載の人参ヨーグルト。
【請求項１０】
前記乳酸菌が、腸内有害菌の抑制及び／又は腸内有害酵素活性の抑制及び／又は癌細胞成長の抑制を含む機能を有することを特徴とする請求項７に記載の人参ヨーグルト。
【請求項１１】
ビフィドバクテリウムＫＫ−１（ＫＣＣＭ−１０３６４）。
【請求項１２】
ビフィドバクテリウムＫＫ−２（ＫＣＣＭ−１０３６５）。
【請求項１３】
ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジンセノサイド成分に生物転換できる乳酸菌で人参を発酵させて製造される人参の乳酸菌発酵物。
【請求項２】
前記人参が、乾燥人参粉末、酸処理人参、高温処理人参、加圧処理人参からなる群より選ばれることを特徴とする請求項１に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項３】
前記人参の発酵物が、化合物Ｋ（２０−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール）、ジンセノサイド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｈ１、ジンセノサイドＲｈ２及びΔ20−ジンセノサイドＲｈ２からなる群より選ばれた一つ以上の発酵成分を含有することを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項４】
（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１）、又は（ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ１）、あるいは（ジンセノサイドＲｈ２＋Δ20−ジンセノサイドＲｈ２＋ジンセノサイドＲｈ１）又は（化合物Ｋ＋ジンセノサイドＲｈ１＋ジンセノサイドＲｈ２）の発酵成分の総量が、ジンセノサイドＲｃ＋ジンセノサイドＲｄ＋ジンセノサイドＲｂ１＋ジンセノサイドＲｂ２＋ジンセノサイドＲｅ＋ジンセノサイドＲｇ１の量に対して０．１以上の比率で前記人参の発酵物中に含有されることを特徴とする請求項３に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項５】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムコレリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムミニマムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項１又は２に記載の人参の乳酸菌発酵物。
【請求項６】
請求項１又は２による人参の乳酸菌発酵物を含有することを特徴とする人参ヨーグルト。
【請求項７】
前記乳酸菌発酵物が、ヨーグルト原料乳と人参を乳酸菌で同時に発酵させることにより前記人参ヨーグルトに含有されることを特徴とする請求項６に記載の人参ヨーグルト。
【請求項８】
前記乳酸菌が、ビフィドバクテリウムＫ−１０３、ビフィドバクテリウムＫ−５０６、ビフィドバクテリウムＫＫ−１、ビフィドバクテリウムＫＫ−２、ビフィドバクテリウムＨ−１及びビフィドバクテリウムＫＫ−１１からなる群より選ばれた一つ以上の乳酸菌であることを特徴とする請求項７に記載の人参ヨーグルト。
【請求項９】
前記乳酸菌が、腸内有害菌の抑制及び／又は腸内有害酵素活性の抑制及び／又は癌細胞成長の抑制を含む機能を有することを特徴とする請求項６に記載の人参ヨーグルト。
【請求項１０】
ビフィドバクテリウムＫＫ−１（ＫＣＣＭ−１０３６４）。
【請求項１１】
ビフィドバクテリウムＫＫ−２（ＫＣＣＭ−１０３６５）。
【請求項１２】
ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）。
【公表番号】特表２００６−５０８６６０（Ｐ２００６−５０８６６０Ａ）
【公表日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５５６９５７（Ｐ２００４−５５６９５７）
【出願日】平成１５年１１月２９日（２００３．１１．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００３／００２６０９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５０８９２
【国際公開日】平成１６年６月１７日（２００４．６．１７）
【出願人】（５０４３７４７５７）ホングリム トレーディング カンパニー リミテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】Ｈｏｎｇｒｉｍ Ｔｒａｄｉｎｇ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年３月１６日（２００６．３．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１１月２９日（２００３．１１．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００３／００２６０９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５０８９２
【国際公開日】平成１６年６月１７日（２００４．６．１７）
【出願人】（５０４３７４７５７）ホングリム トレーディング カンパニー リミテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】Ｈｏｎｇｒｉｍ Ｔｒａｄｉｎｇ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．
【Ｆターム（参考）】
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