代謝機能障害の治療のためのリコピン
本発明は、リコピン化合物を使用する、代謝機能障害及び代謝機能障害に伴う疾患の治療に関する。治療の方法、及びこのような方法におけるリコピン化合物の使用が提供される。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細奈説明】
【０００１】
本発明は、インスリン抵抗性、耐糖能、高血圧、多嚢胞性卵巣症候群、肥満症、脂肪肝、慢性肝炎及び肝硬変を含む代謝機能障害の治療のための方法及び物質に関する。
インスリン抵抗性、不良な耐糖能、高血圧、肥満及び代謝症候群のような代謝異常は、先進国世界では次第に普通になり、そして米国単独で５千万人を超える人口がこのような機能障害を有することが推定されている。代謝機能障害は、糖尿病、心血管病、末梢部閉塞性疾病、脳及び他の形態のアテローム性動脈硬化症のその後の発症に対する有意な危険因子である。
【０００２】
これらの症状のための有効な治療法の更なる発展は、世界の人口の健康に対して有意な影響を有するものである。
本発明人は、リコピンが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、動物モデル及びヒトの臨床治験における代謝機能障害に対して、劇的な効果を有することを見出した。
【０００３】
本発明の一つの側面は；
リコピン化合物を、治療的に有効な量で、それを必要とする個体に投与すること；
を含んでなる代謝機能障害の治療の方法を提供する。
【０００４】
リコピン化合物は、リコピン及びリコピンと同様な生物学的特性を保有するリコピンの誘導体を含むことができる。リコピンは、以下の構造Ｉ（ケミカルアブストラクト登録番号５０２−６５−８）：
【０００５】
【化１】
【０００６】
の開鎖の不飽和Ｃ４０カロテノイドであり、これは、トマト、グアバ、ローズヒップ、スイカ及びピンクグレープフルーツのような植物中に天然に存在する。
本明細書中に記載されるような使用のためのリコピンは、一つ又はそれより多い異なった異性体を含んでなることができる。例えば、リコピンは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の（Ｚ）−異性体、（全て−Ｅ）−異性体、或いはｔｒａｎｓに対して改良されたバイオアベイラビリティーを有する５−ｃｉｓ−又は９−ｃｉｓ−或いは１３−ｃｉｓ−異性体のようなｃｉｓ−異性体を含んでなることができる。Ｔｒａｎｓ異性体は、ｉｎ ｖｉｖｏで、或いは保存又は加工中にｃｉｓの形態に異性化することができる。
【０００７】
リコピンと同様な生物学的特性を保有するリコピン誘導体は、例えば、レチノイン酸のようなカロテノイド、合成アシクロ−レチノイン酸；又は１−ＨＯ−３’，４’−ジデヒドロリコピン、３，１’−（ＨＯ）２−ガンマ−カロテン、１，１’−（ＨＯ）２−３，４，３’，４’−テトラデヒドロリコピン、及び１，１’−（ＨＯ）２−３，４−ジデヒドロリコピンを含むことができる。
【０００８】
本明細書中に記載されるような使用のためのリコピン化合物は、天然の、即ち、天然の供給源から得た、例えばトマト又はメロンのような植物から抽出されたものであることができる。植物からリコピン化合物を抽出、濃縮及び／又は精製するための一連の方法は、当技術において既知である。例えば、エタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、ヘキサン、アセトン、ダイズ又は他の植物油、或いは非植物油を使用する溶媒抽出法を、使用することができる。
【０００９】
本明細書中に記載されるような使用のためのリコピン化合物は、合成、即ち、人工的手段、例えば化学合成によって製造されたものであることができる。リコピン及び他のカロテノイドの化学合成のための一連の方法は、当技術において既知である。例えば、カロテノイド合成のための、標準的なＷｉｔｔｉｇオレフィン化反応スキームに基づく三段階化学合成法を使用することができ、ここにおいて、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中のメタンスルホン酸Ｃ１５ホスホニウムの有機溶液及びトルエン中のＣ１０ジアルデヒドの有機溶液を製造し、そして二つの有機溶液を、ナトリウムメトキシド溶液と徐々に混合し、そして縮合反応を起こさせて、粗製のリコピンを形成する。次いで粗製のリコピンを、ルーチンの技術を使用して、例えば氷酢酸及び脱イオン水を混合物に加え、激しく撹拌し、水及び有機相を分離させ、そしてＤＣＭ及び粗製リコピンを含有する有機相を水で抽出することによって精製することができる。メタノールを有機相に加え、そしてＤＣＭを減圧下の蒸留によって除去する。次いで粗製のメタノール性リコピン溶液を加熱し、そして結晶質のスラリーまで冷却し、これを濾過し、そしてメタノールで洗浄する。次いでリコピンの結晶を再結晶し、そして加熱窒素下で乾燥する。合成リコピンも、更に商業的な供給業者（例えばＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ，ＮＪ ＵＳＡ）から入手可能である。
【００１０】
合成リコピンは、天然のリコピンに対して、増加した比率のｃｉｓ異性体を含んでなることができる。例えば、合成リコピンは、２５％までの５−ｃｉｓ、１％の９−ｃｉｓ、１％の１３−ｃｉｓ、及び３％の他のｃｉｓ異性体であることができ、一方トマトから製造されたリコピンは、３−５％の５−ｃｉｓ、０−１％の９−ｃｉｓ、１％の１３−ｃｉｓ、及び＜１％の他のｃｉｓ異性体であることができる。ｃｉｓ−リコピンが、ｔｒａｎｓ−リコピンに対して増加したバイオアベイラビリティーを有するために、従って合成リコピンが、ある目的のために好ましいものであることができる。
【００１１】
先に記載したようなリコピンの誘導体は、先に記載した合成法と類似の化学合成法によって、又は植物物質から抽出された天然のリコピンの化学修飾によって製造することができる。
【００１２】
リコピン化合物は、いずれかの好都合な形態又は処方で投与することができる。適した処方は、リコピン化合物の吸収性及びその身体内のバイオアベイラビリティーを亢進又は増加することができる。例えば、リコピン化合物は、リコピン化合物を、一つ又はそれより多い医薬的に受容可能な担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、安定剤、乳化剤、保存剤、潤滑剤、又は当業者にとって公知の他の物質、並びに所望により、他の治療又は予防剤と一緒に含んでなる医薬組成物として投与することができる。例えば、ある態様において、リコピン化合物は、リコピン化合物を、イソフラボン、例えばダイズイソフラボン及び／又はビタミンＣと一緒に含んでなる医薬組成物として投与することができる。
【００１３】
適した医薬組成物は、リコピン化合物を単独の活性成分として含んでなることができ、そしてリコピン化合物を、一つ又はそれより多い本明細書中に記載したような医薬的に受容可能な担体、賦形剤、緩衝剤、アジュバント、安定剤、又は他の物質と一緒に混合することによって、処方することができる。
【００１４】
用語“医薬的に受容可能な”は、本明細書中で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題又は合併症を伴わずに患者（例えばヒト）の組織と接触して使用するために適している、妥当な利益／危険度比で均衡している化合物、物質、組成物、及び／又は剤形に関する。それぞれの担体、賦形剤、等も、更に処方の他の成分と適合性であると言う意味において“受容可能”でなければならない。
【００１５】
適した担体、賦形剤、等は、標準的な製薬の教科書、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０中に見出すことができ、そして油、例えばトマト油、ダイズ油、又はラッカセイ油のような植物油、或いは非植物油、グリセロール、ゼラチン、スクロース、グルコース、パルミチン酸アスコルビル、コーンスターチ及び二酸化ケイ素を含むことができる。適した乳化剤は、ポリソルベート８０を含む。
【００１６】
適した安定剤は、スクロースエステル、レシチン、ｄｌ−ａ−トコフェロール及びパルミチン酸アスコルビルのような抗酸化剤、フラバノイド、セルロース、ワックス、マンニトール、シェラック、タルク、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、及びアラビア又はアカシアゴムを含むことができる。
【００１７】
例えば、リコピンは、植物油、魚ゼラチン、スクロース及びコーンスターチのような担体物質に加えて、約１０％のリコピン、それぞれ１．５％及び５．０％の抗酸化剤ｄｌ−ａ−トコフェロール及びパルミチン酸アスコルビルを含有する、ビーズ、錠剤又は他の固体物体中に処方することができる。
【００１８】
リコピンの適した製剤は、商業的に入手可能であり、そしてＬｙｃｏＶｉｔＴＭ１０パーセント、ＬｙｃｏＶｉｔＴＭ １０冷水分散物（ＣＷＤ）、及びＬｙｃｏＶｉｔＴＭ分散物２０パーセント（全てＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ，ＮＪ，ＵＳＡ）、Ｌｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ（ＬＭ）、ＬｙｃｏＢｅａｄｓＴＭ、及びＴｏｍａｔｏ−Ｏ−ＲｅｄＴＭ（Ｄａｌｉｄａｒ Ｐｈａｒｍａ，ＬｙｃｏＲｅｄ Ｌｔｄ ＵＫ）を含む。
【００１９】
ある態様において、リコピン化合物は、可溶化剤と共に処方することができる。可溶化剤は、水溶液中に可溶性であり、そして更に有機溶媒中に不溶性であることもできる親水性化合物を含む。適した親水性可溶化剤は、可溶性タンパク質、特にカゼイン、ベータ−ラクトグロブリン、アルファ−ラクトアルブミンのような乳タンパク質、及び血清アルブミンを含む。好都合には、乳清タンパク質を可溶化剤として使用することができる。乳清タンパク質は、牛乳からのチーズ製造の副産物である乳清から単離された球状タンパク質の収集物である。乳清タンパク質は、ベータ−ラクトグロブリン（約６５％）、アルファ−ラクトアルブミン（約２５％）、及び血清アルブミン（約８％）の混合物であり、これらは、ｐＨに関わらずその天然の形態で可溶性である。乳清タンパク質を伴うリコピン製剤（‘ラクトリコピン’と呼ばれる）は、当技術において既知であり（例えば、Ｒｉｃｈｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３２：４０４−４０８，２００２及びＥＰ−Ｂ−１２８９３８３（ＰＣＴ／ＥＰ０１／０６１４５）を参照されたい）、そして商業的に入手可能である（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）。乳清タンパク質を伴うリコピン製剤の調製のための方法は、混合物を形成するために十分な条件下で、乳清タンパク質をリコピンと混合することを含んでなることができる。例えば、乳清タンパク質を水中に溶解することができ、そしてリコピンをアセトン、エタノール又はイソプロパノールのような溶媒中に溶解し、二つの溶液を混合し、そして溶媒を蒸発して、ラクト−リコピン組成物を形成することができる。
【００２０】
別の方法として、組成物は、リコピンを溶媒と混合して、第１の混合物を形成し、第１の混合物を、粉末又は水溶液の形態の乳清タンパク質と混合して、第２の混合物を形成し、そして第２の混合物から溶媒を蒸発して、組成物を分散物として製造することによって形成することができる。適した溶媒は、アセトン、エタノール及びイソプロパノールを含む。好都合には、水相が溶媒と混合される場合、容量で約６０：４０の溶媒：水比を使用することができる。組成物は、５０％までのリコピン化合物及び９０％までの乳清タンパク質を含んでなることができる。
【００２１】
分散物は、ゲルを製造するために所望により加熱処理されるか、或いは粉末を製造するために噴霧又は凍結乾燥によって乾燥することができる。
次いで組成物を、先に記載したような担体、賦形剤、安定剤及び乳化剤と調合することができる。例えば、適したラクトリコピン製剤は、２％（重量／重量）のリコピン、２０％（重量／重量）の乳清タンパク質、５０．５％（重量／重量）の微結晶セルロース、５％（重量／重量）の二酸化ケイ素、３％（重量／重量）のポリソルベート８０及び１．５％（重量／重量）のダイズレシチンを含んでなることができる。
【００２２】
本明細書中に記載されるような使用のためのラクトリコピン製剤は、先に記載したように得ることができるか、又は得ることが可能である。
本明細書中に記載されるようなリコピンで治療することができる代謝機能障害は、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症及び肝硬変のような肝臓疾患、並びに代謝症候群を含む。
【００２３】
ある態様において、本発明の方法によって治療される個体は、糖尿病ではなく（即ち、１型又は２型糖尿病に罹っていない）、及び／又はＣＨＤ、脳卒中又は末梢血管性疾病のようなアテローム性動脈硬化の症状に罹っていない。
【００２４】
肥満症は、過剰な体脂肪によって特徴づけられる症状である。例えば、肥満の個体は、３０より大きい肥満度指数（ＢＭＩ：体重／身長２）を有することができる。肥満症は、糖尿病、並びにアテローム性動脈硬化症、虚血性（冠動脈）心疾患、心筋虚血（狭心症）及び脳卒中のような心血管性疾患を含むある範囲の医学的症状に対する危険因子である。肥満症は、腹部肥満を含むことができ、これは、普通、欧州の男性において９４ｃｍより大きい、そして欧州の女性において８０ｃｍより大きい、南アジアの男性において９０ｃｍより大きい、そして南アジアの女性において８０ｃｍより大きい、そして日本人の男性において８５ｃｍより大きい、そして日本人の女性において９０ｃｍより大きい腰周りとして定義される。本明細書中に記載される方法は、体重制御及び肥満症の治療において有用であることができる。
【００２５】
インスリン抵抗性は、与えられたインスリンの量に対して生理学的反応を示す細胞、組織又は全身の無能である。結果として、対照と比較して、インスリンの生理学的効果を達成するために、より高いインスリンの量が必要である。インスリン抵抗性は、非糖尿病の人口の２５％に存在し、インスリン抵抗性の状態から２型糖尿病への推定転換率は、年間２−１２％である。
【００２６】
耐糖能の低下は、経口糖負荷試験の１２０分後に、７．８ｍｍｏｌより多い糖濃度が血漿中に持続する場合に起こる。耐糖能の低下は、インスリン抵抗性及び高血糖を伴う。
多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）は、卵巣の嚢胞が正常な卵巣のホルモン産生のサイクルを妨害する、女性の５−１０％に影響する内分泌疾病である。ＰＣＯＳは、しばしばインスリン抵抗性、代償性高インスリン血症、代謝症候群、肥満症及び高アンドロゲン血症を伴う。
【００２７】
高血圧は、１４０と９０ｍｍＨｇを超える（＞１４０の収縮期圧；＞９０の拡張期圧）一貫して高い血圧によって特徴づけられる。
肝臓疾患は、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症及び肝硬変を含む。脂肪肝は、肝臓中の異常な脂質の蓄積によって特徴付けられ、これは、脂肪酸の酸化の低下及び／又はリポタンパク質の合成及び放出の減少によって起きることができる。脂肪肝は、その後、肝線維症及び肝硬変に転換することができる。肝線維症は、肝臓中の線維組織の成長によって特徴づけられる。線維症は、肝硬変に導くことができ、ここにおいて、肝臓は低下した機能を有し、そして永久に損傷し、線維性に、そして脂肪質になる。
【００２８】
慢性肝炎は、肝臓の炎症であり、これは、細菌又はウイルスによる感染、寄生虫の感染、アルコール、薬物、毒素、又は不適合性の血液の輸血によって起こることができる。
代謝症候群は、肥満及び；インスリン抵抗性、高血圧、高血液トリグリセリドレベル及び／又は血液中の低ＨＤＬコレステロールレベル、の一つ又はそれより多くによって特徴づけられる症状である。例えば、ＩＤＦ（国際糖尿病連合）は、代謝症候群を：腹部肥満並びに次のもの：トリグリセリドレベルの増加（約１．７ｍｍｏｌ／Ｌより上）；ＨＤＬコレステロールの減少（男性において０．９ｍｍｏｌ／Ｌか又はそれより低い、そして女性において１．１ｍｍｏｌ／Ｌか又はそれより低い）；血圧の上昇（１３０／８５より上）；及び空腹時血糖値の上昇（５．６ｍｍｏｌ／Ｌより上）；のいずれか二つとして定義している。
【００２９】
代謝症候群のような代謝機能障害は、更に高コレステロール血症、低ＨＤＬコレステロール（例えば、男性＜０．９ｍｍｏｌｌ−１；女性＜１．０ｍｍｏｌｌ−１）、高トリグリセリド血症（例えば、血漿ＴＡＧ≧１．７ｍｍｏｌｌ−１）及び微量アルブミン尿症（例えば、尿アルブミン排出速度≧２０μｇ分−１；アルブミン：クレアチニン比≧３０ｍｇ分−１）を含むある範囲の症状を伴う。
【００３０】
本明細書中に記載される方法は、代謝機能障害に伴う症状の治療において有用であることができる。例えば、代謝機能障害に伴う症状を治療する方法は；
リコピン化合物を、それを必要とする個体に投与すること；
を含んでなることができる。
【００３１】
代謝機能障害に伴う症状は、高コレステロール血症、低ＨＤＬコレステロール、高トリグリセリド血症及び微量アルブミン尿症を含むことができる。
本発明の方法は、更に予防的適用も有する。例えば、代謝機能障害の発症を予防又は遅延する方法は、リコピン化合物をそれを必要とする個体に投与することを含んでなることができる。
【００３２】
本明細書中に記載されるような代謝機能障害の発症を予防又は遅延する方法を受けるために適した個体は、代謝機能障害の危険にあるか又はそれに感受性であることができ、例えば、個体は、代謝機能障害の発症に伴う一つ又はそれより多い危険因子を有することができる。
【００３３】
本明細書中に記載される方法は、リコピン化合物を、スタチン（即ち、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ Ｃｏ Ａ）レダクターゼ阻害剤）との組合せで投与することを含んでなることができる。
【００３４】
適したスタチン類は、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬＴＭ）、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲＴＭ）、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲＴＭ）、セリバスタチン（ＬＩＰＯＢＡＹＴＭ）、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬＴＭ）、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲＴＭ）、メバスタチン及びロスバスタチン（ＣｒｅｓｔｏｒＴＭ）を含む。他の適したスタチン類、は当技術において既知であり、そして当技術において公知であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼアッセイを使用することによって容易に確認することができる。このようなアッセイの例は、米国特許第４，２３１，９３８号中に開示されている。
【００３５】
本発明のもう一つの側面は、代謝機能障害又は先に記載したような代謝機能障害に伴う症状の治療、或いは代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の発症を予防又は遅延することにおいて使用するための、医薬の製造におけるリコピン化合物の使用を提供する。
【００３６】
本発明のもう一つの側面は、代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の治療において使用するためのリコピン化合物、並びに代謝機能障害、或いは代謝機能障害に伴う症状の発症を予防又は遅延することにおいて使用するためのリコピン化合物を提供する。
【００３７】
リコピン化合物を含んでなる組成物又は医薬は、更にスタチン（即ち、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ Ｃｏ Ａ）レダクターゼ阻害剤を含んでなることができる。
【００３８】
適したスタチン類の例は、先に記載されている。本発明の方法において有用な他のスタチン類は、当業者にとって明白であるものである。
本発明のもう一つの側面は、代謝機能障害を治療するための組合せにおいて使用するための、リコピン化合物及びスタチンを含んでなるキットである。
【００３９】
キットは、リコピン化合物を単独で、又は他の化合物との組成物中で、シリンジで（このような部品は一般的に滅菌されている）投与するための手段のような方法或いは本発明の実行のための、一つ又はそれより多い他の物品及び／又は試薬を含むことができる。
【００４０】
キットは、更に本発明の方法の全て又は一部、例えばリコピン化合物及び／又はスタチンの投与管理を行うための説明書を含むことができる。
本発明のなおもう一つの側面は、先に記載したような代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の治療、或いは代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の発症を予防又は遅延するための医薬の製造における、リコピン化合物及びスタチンの組合せの使用である。
【００４１】
本発明の方法において使用するためのリコピン化合物の製剤は、好都合には単位剤形で存在することができ、そして薬学の技術において公知のいずれかの方法によって調製することができる。このような方法は、活性化合物を一つ又はそれより多い補助的成分を構成する担体と会合させる工程を含む。一般的に、製剤は、活性化合物を液体担体又は微細に分割された固体担体と、或いは両方と均一に、そして密接に会合させ、そして次いで必要な場合生産物を成形することによって調製する。
【００４２】
製剤は、液体、溶液、懸濁液、分散物、乳液、エリキシル、シロップ、錠剤、ロゼンジ、顆粒、粉末、カプセル、カシェ、ビーズ、丸薬、アンプル、座薬、ペッサリー、軟膏、ゲル、ペースト、クリーム、噴霧物、霧状物、泡状物、ローション、油状物、巨丸剤、舐剤、又はエアゾールの形態であることができる。
【００４３】
経口投与（例えば摂取による）のために適した製剤は、それぞれが、所定の量の活性化合物を；粉末又は顆粒として；水性若しくは非水性液体中の溶液又は懸濁液として；或いは水中油の液体乳剤又は油中水液体乳剤として；巨丸剤として；舐剤として；或いはペーストとして含有するカプセル、カシェ又は錠剤のような分割された単位として与えることができる。液体医薬組成物は、一般的に水、石油、動物又は植物油、鉱油又は合成油のような液体担体を含む。生理食塩溶液、デキストロース又は他の糖類溶液或いはエチレングリコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールのようなグリコールを含むことができる。
【００４４】
錠剤は、慣用的な手段、例えば、所望により一つ又はそれより多い補助成分と共に、圧縮又は成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、粉末又は顆粒のような易流動形態の活性化合物を、所望により一つ又はそれより多い結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、アラビアゴム、ソルビトール、トラガカントゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤又は希釈剤（例えばラクトース、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）；崩壊剤（例えばグリコール酸デンプンナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）；表面活性剤又は分散剤或いは湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）；及び保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）と混合して、適した機械中で圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、適した機械中で、不活性な液体希釈剤で加湿した粉末の化合物の混合物を成形することによって製造することができる。錠剤は、所望により被覆され又は分割線を入れられ、そしてその中の活性化合物の徐放又は制御放出を得るために、例えば、所望の放出特性を得るために、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを異なった比率で使用して調合することができる。錠剤は、胃以外の腸の部分で放出するために、所望により腸溶被覆を与えることができる。
【００４５】
静脈内、皮膚又は皮下注射、或いは苦痛の部位における注射のために、活性成分は、発熱物質を含まない、そして適したｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に受容可能な水溶液の形態であるものである。当業者は、例えば、塩化ナトリウム液、リンゲル液、乳酸加リンゲル液のような等張ベヒクルを使用して適した溶液を調製することが十分に可能である。保存剤、安定剤、緩衝液、抗酸化剤、及び／又は他の添加剤を、必要に応じて含むことができる。
【００４６】
上述の技術及びプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ），１９８０中に見出すことができる。
【００４７】
投与は、好ましくは“治療的に有効な量”であり、これは、個体に対して利益を示すために十分である。活性化合物、及び活性化合物を含んでなる組成物の適当な投与量が、患者によって変化することができることは認識されるものである。最適投与量の決定は、一般的に本発明の治療のいずれかの危険度又は有害な副作用に対する、治療的利益のレベルを均衡させることに関係するものである。選択された投与量レベルは、制約されるものではないが、特定の化合物の活性、投与の経路、投与の時間、化合物の排出の速度、治療の期間、組合わせて使用される他の薬物、化合物及び／又は物質、並びに患者の年齢、性別、体重、症状、一般的健康状態、及び既往履歴を含む各種の因子に依存するものである。化合物の量及び投与の経路は、最終的に医師の判断によるが、一般的に投与量は、実質的に危険な又は有害な副作用を起こさずに所望の効果を達成する、作用の部位における局所濃度を達成するためのものである。
【００４８】
Ｉｎ ｖｉｖｏの投与は、治療の過程を通して一回の投与、連続的又は間欠的に（例えば適当な間隔の分割投与で）行うことができる。投与の最も有効な手段及び投与量を決定する方法は、当業者にとって公知であり、そして治療のために使用される製剤、治療の目的、治療される標的細胞、及び治療される対象によって変化するものである。担当医師によって選択される投与量レベル及び様式で、一回又は複数回の投与を行うことができる。
【００４９】
一般的に、リコピンの適した投与量は、一日当り対象の体重のキログラム当り約１００μｇないし約２５０ｍｇの範囲である。活性化合物が塩、エステル、プロドラッグ、等である場合、投与される量は、母体化合物に基づいて計算され、そして従って使用される実際の重量は、比例的に増加される。
【００５０】
リコピンのようなリコピン化合物を含んでなる組成物は、単独で、或いは他の治療剤との組合せで、治療される症状によって同時又は連続的に投与することができる。
リコピン化合物は、食品生産物中に含まれることができる。例えば、これは、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物（例えばマーガリン）、チーズ、ヨーグルト又は飲料中に含まれることができる。他の適した食品生産物は、当業者にとって明白であるものである。
【００５１】
リコピン化合物は、加熱調理（例えばパン焼き）の前に食品生産物の成分と混合し、及び／又は加熱調理後に食品生産物に加えることができる。本明細書中のデータは、リコピン化合物を、食品の品質の損失なく食品性産物中に組込むことができ、そして食品性産物中で加熱料理された後も活性なままであることを示す。
【００５２】
好ましくは、異種構造のリコピン化合物が、食品生産物中に含まれる。例えば、先に記載したような合成リコピン化合物、又は天然には食品生産物中に存在しない天然のリコピン化合物。例えば果物又は野菜からのリコピン化合物を、パン又はシリアル中に組込むことができる。
【００５３】
従って、本発明のなお更なる側面は、代謝機能障害を治療するためのリコピン化合物を含んでなる食品生産物であり、ここにおいて、リコピン化合物は、食品生産物中に天然には存在しない。
【００５４】
食品生産物は、リコピン化合物によって補充又は強化することができる。ある好ましい態様において、食品生産物は、先に記載したような乳清タンパク質と調合されたリコピン化合物（‘ラクトリコピン’）で補充される。
【００５５】
代謝機能障害の発症を治療又は遅延或いは予防するための食品生産物を製造する方法も、更に提供され、前記の方法は：
（ｉ）食品生産物の成分を用意し、
（ｉｉ）リコピン化合物を前記成分と混合し、
（ｉｉｉ）前記成分及び前記リコピン化合物を食品生産物に調合すること；
を含んでなる。
【００５６】
本発明の各種の更なる側面及び態様は、本開示の観点から当業者にとって明白であるものである。本明細書中に記述される全ての文書は、そのすべてが本明細書中に参考文献として援用される。
【００５７】
本発明のある側面及び態様は、ここに実施例によって、そして以下に記載される図面を参照して例示されるものである。
図１は、ＨｅｐＧ２細胞の膜及び核画分中のＳＲＥＢＰ−１及び−２の量に対するリコピンの影響を示す。
【００５８】
図２は、リコピン処理後のズッカー肥満型（ＺＦＲ）及び痩せ型（ＬＺＲ）ラットの肝臓膜及び核抽出物中のＳＲＥＢＰ−１、−２及びＬＤＬ−Ｒの免疫ブロット分析を示す。
表１は、ステロールの存在及び非存在中で１０μＭのリコピンとインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞中のｍＲＮＡの変化を示す。
【００５９】
表２は、１００ｎＭのインスリンの非存在及び存在中で１０μＭのリコピンとインキュベートしたラットの初代肝細胞中のｍＲＮＡの変化を示す。
表３は、０．２％リコピンの食餌で処置したズッカー肥満型（ＺＦＲ）及びズッカー痩せ型（ＬＺＲ）ラットの生理学的パラメータを示す（４匹のラット中の４個の測定値からのＭ±ｍ）。
【００６０】
表４は、０．２％リコピンの食餌で処置したズッカー肥満型（ＺＦＲ）及びズッカー痩せ型（ＬＺＲ）ラットの肝臓中のｍＲＮＡの変化を示す。
表５は、志願者のヒトの血清脂質のレベルに対する、ラクトリコピン、ＬＬの影響を示す。
【００６１】
表６は、ＬＬによる２ヶ月の処置後の、志願者のヒトの血清脂質の平均レベルに対するＬＬの影響を示す。
表７は、志願者のヒトの血清脂質のレベルに対する、Ｌｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ、ＬＭの影響を示す。
【００６２】
表８は、ＬＭによる２ヶ月の処置後の、志願者のヒトの血清脂質の平均レベルに対するＬＭの影響を示す。
表９は、糖尿病患者の血清中の糖濃度に対するＬＬの影響を示す。
【００６３】
表１０は、糖尿病患者の血清中の糖濃度に対するＬＭの影響を示す。
表１１は、志願者のヒトの血清インスリンのレベルに対する、ラクトリコピン、ＬＬの影響を示す。
【００６４】
表１２は、志願者のヒトの体重に対する、ＬＬ及びＬＭの影響を示す。
表１３は、志願者のヒトの血清脂質のレベルに対する、Ｌｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍｅｒ（アトルバスタチン）の影響を示す。
【００６５】
表１４は、ラクトリコピン（ＬＬ）を含んでなる、異なった焼いた食品基質（パンの塊り及びスコーン）のｉｎ ｖｉｔｒｏの抗酸化物活性を示す。
表１５は、ヒトの血液血清中の脂質代謝のパラメータに対する、ラクトリコピンの影響を示す。
【００６６】
表１６は、ヒトの血漿中の糖レベルに対する、ラクトリコピンの影響を示す。
実験
材料
標準的な分子生物学的技術を使用した。培養細胞及びラット肝臓からの全ＲＮＡを、ＲＮＡ−ＳＴＡＴ−６０単離試薬（Ｔｅｌ−Ｔｅｓｔ，Ｉｎｃ，ＵＳＡ）を使用して抽出した。ＳＹＢＲ緑色ｑＰＣＲ試薬系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）を、定量的ＲＮＡ分析のために使用した。血漿インスリンレベルは、ＥＬＩＳＡキット（Ｌｉｎｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＵＳＡ）を、血漿の糖は、比色測定を使用して測定した。
【００６７】
他に記述しない限り、リコピンは、商業的な形態中で使用され（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）、更に添加物としてダイズイソフラボン及びビタミンＣを含有する、乳清タンパク質結合ラクトリコピン製剤（ＬＬ）であるか、或いは２０ｇのトマト抽出物（１０％のラクトリコピンを含有）を、２０ｇの乳清タンパク質、５０．５ｇの微結晶セルロース、５ｇの二酸化ケイ素、３ｇのポリソルベート８０及び１．５ｇのダイズレシチンと混合して、１００ｇのラクトリコピン製剤を製造することによって製造された単離された形態（ＩＮＤＥＮＡ）であった。
【００６８】
ラクトリコピン製剤は、ＥＰ１２８９３８３中に記載されているように調製された。
他の一般的な試薬は、Ｓｉｇｍａ（ＵＳＡ）から得た。
細胞培養物
ヒト肝細胞腫細胞系−ＨｅｐＧ２の単層膜を、１００万細胞／１００ｍｍシャーレの密度で構成し、そして６％ＣＯ２の３７Ｃで、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を伴う１０％ＦＣＳで補充されたＤＭＥＭ中で培養した。４８時間後、細胞を二回ＰＢＳで洗浄し、そしてステロールの非存在又は存在（１μｇ／ｍｌの２５−ヒドロキシコレステロール及び１０μｇ／ｍｌのコレステロール）中で、５％のリポタンパク質欠損血清、５０μＭのメバロン酸及び５０μＭのコンパクチン（ラクトン型）を含有するＤＭＥＭに切り替えた。シャーレの半数に、更に１０μＭの最終濃度までテトラヒドロフラン中に溶解されたＩＮＮＥＯＶラクトリコピンを入れた。他の半数に、溶媒のみのアリコートを入れた。細胞を、免疫ブロット分析及びＲＮＡ抽出のために１８時間後に回収した。
【００６９】
初代肝細胞を、非絶食のＳｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットのラット肝臓から、コラゲナーゼ消化法によって単離した。ハロタン麻酔下で、それぞれの肝臓を、門脈を通して肝臓潅流液で、そしてその後肝臓分離液（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ，ＵＳＡ）でｉｎ ｓｉｔｕで潅流した。肝臓を切取り、肝細胞を分離し、そして１００ｍｍのコラーゲンＩで被覆したシャーレ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，ＵＳＡ）上に、シャーレ当り６００万細胞の密度で、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を伴う５％の胎児ウシ血清を含有するＤＭＥＭ中に入れた。３時間の付着後、細胞を、１００ｎＭのデキサメタゾン、１ｎＭのインスリン、１００ｎＭのトリヨードチロニン、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンで補充された血清を含まないＤＭＥＭに切替えた。生存細胞をトリパンブルー排除試験で数えた。少なくとも８５％の生存細胞を持つ肝細胞を研究に使用した。一晩のインキュベーション後、テトラヒドロフラン中のラクトリコピン（ＩＮＮＥＯＶ）溶液の１０μＭの最終濃度までの添加を、１００ｎＭのインスリンの存在又は非存在で行った。対照シャーレには、テトラヒドロフランのみを入れた。ＲＮＡの単離を、リコピン及び／又はインスリンによる肝細胞の補充の１８時間後に行った。
【００７０】
動物及び処置
ズッカー肥満型ラット（ｆａ／ｆａ）及びその痩せ型の同腹仔を、生後８−９週で実験に使用した。ラットをコロニーケージに収容し、１２時間照明／１２時間暗所のサイクルで飼育し、そして標準固形飼料の食餌を給餌した。コロニー環境への適合の１０日後、ラットを、０．２％のラクトリコピン（ＩＮＮＥＯＶ）で補充された標準固形飼料の食餌に切替えた。ラットを、食物への２４時間の接近で自由に給餌した。毎日のモニターは、リコピン処置／非処置グループ間のラットの食物摂取に、実質的な差を示さなかった。８日間の食餌処置後、ラットをハロタン麻酔下で殺した。血液試料を収集し、そして体重／肝臓重量を記録した。
【００７１】
ＲＮＡ分析
培養細胞及びラットの肝臓からの全ＲＮＡを抽出し、そしてそれぞれの試料からの２μｇのＲＮＡを、ｃＤＮＡを合成するために使用し、そしてＲＴ−ＰＣＲ反応を三重で行った。それぞれの個々の遺伝子のためのプライマーを、公共のデータベース遺伝子銀行を使用して命名した。特異的プライマーとインキュベートしたそれぞれのＲＮＡ試料に対する実際のＣＴ値を、そのＣＴ絶対値がそれぞれの実験において示されるハウスキーピング遺伝子−ＧＡＰＤＨ又は３６Ｂ４のＣＴ値（内部対照）に対して参照した。それぞれの遺伝子に対して正規化されたＣＴ値を、ステロール及びの非存在中のＨｅｐＧ２細胞中で観察した値を１．００とした。他のグループのｍＲＮＡレベルの変化を、１．００に対して参照し、そして対照値（１．００）に対する倍数の変化を示した。
【００７２】
免疫ブロッティング
免疫ブロット分析のために、核抽出物及び膜画分を、培養細胞及びラットの肝臓から調製した。細胞を２２．５ゲージの針を通して通過させて、細胞を、低張性緩衝液（ｐＨ７．４の１０ｍＭのＨｅｐｅｓ−ＫＯＨ）中で破壊した。ラットの肝臓からの核抽出物及び膜画分を他の場所で記載したように単離した。
【００７３】
臨床治験
この治験の目的は、ラクトリコピン自体が、その特定の処方に関係なく、ヒトの代謝パラメータに影響することができるか否かを研究することであった。この治験のために、１４人の臨床的に健康な志願者を採用した。この内１２人は、何らかの形態の異脂質血症を有し、この内３人は、これに加えて高い空腹時血糖を有し、一人は高い空腹時血糖のみを有し、そして一人はこれらの代謝性疾患のいずれをも有していなかった。７人の志願者に、ＬＬを３００ｍｇの投与量で、又は６ｍｇのＨＰＬＣリコピンを投与し、他の７人に対する投与は、８００ｍｇのＬＬ、又は１４ｍｇのＨＰＬＣリコピンであった。生産物を２ヶ月間、毎日一回経口的に食物と共に投与した。治験前及び終了時の志願者の血液を試験し、そして比較した。
【００７４】
結果
実施例１
ヒト肝細胞腫細胞系ＨｅｐＧ２を、培養細胞中の脂質代謝の転写制御に対する、ラクトリコピンの影響を明白にするために使用した。表１に示すように、実験の全てのグループにおいて、基本的ハウスキーピング遺伝子に対するｍＲＮＡレベルは、殆んど変わらないままであり、そして１７．５４ないし１７．７３で変化した。これは、薬物毒性の非存在、ＲＮＡ分解及び細胞単層膜の健康な状態を確証する。
【００７５】
表１に示すように、１０μＭのラクトリコピンの添加は、ステロールの存在又は非存在中のＳＲＥＢＰ−１のｍＲＮＡレベルに有意には影響しなかった。ステロールに反応するＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡの減少は、ラクトリコピンの存在に関わらず両方のグループにおいて同一であった。
【００７６】
ステロールは、培養細胞中のＳＲＥＢＰ−２の転写を遮断し、コレステロールの生合成及びコレステロール生成酵素に対するｍＲＮＡのその後の低下を起こすことが知られている。表１は、ＨｅｐＧ２細胞へのステロールの添加が、ＳＲＥＢＰ−２に対するｍＲＮＡ及びコレステロール生合成の主要な酵素−ＦＰＰＳ、ＨＭＧ−ＣｏＡ Ｒｅｄ及びＨＭＧ ＣｏＡ Ｓｙｎを有効に減少することを示す。然しながら、ステロールの非存在中でさえ、１０μＭのラクトリコピン単独とインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞中のＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡレベルの明白な低下（４２％減少）が存在する。ラクトリコピンの存在中のＳＲＥＢＰ−２レベルの減少は、コレステロール生成及び脂質生成のｍＲＮＡの殆んどに影響しなかった。然しながら、脂質生成遺伝子の殆んど（ＦＡＳ、ＡＣＣ、ＨＭＧ−ＣｏＡ Ｓｙｎ及びＨＭＧ−ＣｏＡ Ｒｅｄ）は、ラクトリコピンの存在中で僅かに高いステロール感受性を示す。単独のラクトリコピンは、ＳＣＡＰのｍＲＮＡに対するステロールの影響の増強を伴わずに、ＳＣＡＰに対するｍＲＮＡを減少する。
【００７７】
ラクトリコピンによって影響される唯一のＳＲＥＢＰ−１の下流の遺伝子は、ＩＮＳＩＧ−１であり、このｍＲＮＡは、基底レベルの殆んど２／３低下した。免疫ブロットデータ（図１）は、ｍＲＮＡの結果を確認し、そして説明する。ステロールの非存在において、ＨｅｐＧ２細胞の膜画分中に、ＳＲＥＢＰ−１及び−２の形態の検出可能な前駆体の形態は存在していない。然しながら、ステロールの存在中でＳＲＥＢＰ−１の開裂が停止した場合、ラクトリコピンの存在中のＳＲＥＢＰ−１タンパク質の量は、明らかにより高く、これは、約１．４のＳＲＥＢＰ−１のｍＲＮＡの上方制御を反映する。免疫ブロットの結果は、更にラクトリコピンとインキュベートされたＨｅｐＧ２細胞中に見られるＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡの低下を確認し、−ＳＲＥＢＰ−２前駆体及び成熟した形態の量は、ラクトリコピンとインキュベートしたＨｅｐＧ−２細胞において明らかに低下する。
【００７８】
同じプロトコルを使用して行った研究の別個の組において、本出願人等は、ラクトリコピンのＳＣＡＰ及びＩＮＳＩＧ−１のｍＲＮＡに対する阻害効果を確認し、そして再現している。
【００７９】
ラクトリコピンは、主要なコレステロール生成転写因子ＳＲＥＢＰ−２及びインスリン誘導生遺伝子−１（ＩＮＳＩＧ−１）に対するｍＲＮＡを減少し、ヒト肝細胞腫細胞系ＨｅｐＧ２中の脂質生成遺伝子に対する僅かに高いステロール感受性を与える。まとめれば、本出願人等の結果は、ラクトリコピンが、脂質生成のいくつかの転写機構に、そして恐らくヒト肝細胞中の肝臓特異的インスリン反応に影響していることへの指標を与える。
【００８０】
実施例２
ＨｅｐＧ２細胞中のいくつかのインスリン制御遺伝子（ＳＲＥＢＰ−１及びＩＮＳＩＧ−１）に対するリコピンの注目すべき効果のために、ラットの初代肝細胞系及びインスリン処置プロトコルを、ラクトリコピンの生理学的特性を更に研究するために選択した。表２に示すように、１０μＭのラクトリコピンによる初代肝細胞の処置は、主要なハウスキーピング遺伝子−３６Ｂ４に対するＣＴの絶対値に大きく影響しなかった。これは、毒性の影響の非存在、初代肝細胞の生存性及び細胞から抽出されたＲＮＡの良好な品質を確認する。
【００８１】
結果から、インスリンが、主要な肝臓特異的脂質生成転写因子−ＳＲＥＢＰ−１ｃに対するｍＲＮＡを、選択的に上方制御することは明白であり、この修正されたＣＴ値は、基底値の５６．５倍まで上昇した。ラクトリコピン自体は、基底ＳＲＥＢＰ−１ｃレベルを４倍亢進した。一方、インスリンによるＳＲＥＢＰ−１ｃの誘導は、２倍（わずか２７．５倍）までのラクトリコピンの添加によって減少した。
【００８２】
ＨｅｐＧ−２研究と同様に、ラクトリコピンの存在は、主要なコレステロール生成転写因子−ＳＲＥＢＰ−２に対するｍＲＮＡを、特にインスリンの存在中で減少することが見出された。ＳＲＥＢＰ−１ｃのインスリンに対する鈍化した反応、並びにラクトリコピンの存在中のインスリンに対するＳＲＥＢＰ−２のレベルの減少は、機能的に有意であるように見受けられ、そして初代肝細胞中で代謝的な重要性を有する。特に、ラクトリコピンの存在は、ＳＲＥＢＰに対する標的遺伝子であることが知られている、主要な脂質生成ｍＲＮＡ−ＦＡＳ、ＳＣＤ−１、ＡＣＬ及びＩＮＳＩＧ−１のインスリン反応を、完全に消滅した。これらのｍＲＮＡレベルは、ラクトリコピン処置後、近辺の対照値に対して修正された。
【００８３】
ラクトリコピンの作用のもう一つの重要な特徴は、主要な糖新生酵素−ＰＥＰＣＫ及びＧ−６−パーゼに対する活性を制御することであり、これらのｍＲＮＡレベルは、ラクトリコピンのみで、それぞれ６６．０％及び７０％に減少した。インスリンは、ＰＥＰＣＫのｍＲＮＡを殆んど９０％低下し、そしてラクトリコピンの存在中で同じ効力を示した。対照的に、インスリンに対するＧ−６−パーゼの反応は、それほど激的ではなかった。注目すべきは、ラクトリコピンとのインキュベーションは、より高いインスリン感受性をＧ−６−パーゼに与えた。このｍＲＮＡは、インスリン単独によりほんの僅か減少される（対照レベルの９０％に）が、しかし両方−ラクトリコピン及びインスリンの存在中で、更に有意に減少（対照レベルの６２％に）された。
【００８４】
ラクトリコピンは、糖新生に関係しない、いくつかの他のインスリン標的遺伝子のインスリン感受性を亢進する。初代肝細胞がラクトリコピンの存在中でインスリンに暴露された場合、インスリンのＩＮＳＩＧ−２、ＩＲＳ−２及びＩＧＦＢＰ−１のｍＲＮＡに対する更に深刻な負の効果が存在する。
【００８５】
従って、ラクトリコピンは、転写的脂質生成反応を減少し、そしてＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡは、インスリンの存在中でラットの初代肝細胞中の糖新生酵素に対するより高いインスリン感受性を与えた。
【００８６】
実施例３
肝臓の代謝に対するラクトリコピンの影響の機構を更に研究するために、本出願人等は、代謝症候群の最も重要な特徴を示すことが知られたズッカー肥満型ラット（ＺＦＲ）を使用して研究を行った。若い（生後９週間）のＺＦＲのオスを照合対照（ズッカーの痩せ型同腹仔）と共に、表３に要約した実験に使用した。
【００８７】
表３は、生後９週においてさえ、ＺＦＲが有意に高い体重及び肝臓重量、増加した血漿トリグリセリド及びコレステロールを有することを示す。然しながら、実質的に誘導されたインスリンレベルにも関わらず、血漿糖濃度は対照レベルのままであった。ラクトリコピン（Ｉｎｎｅｏｖ）は、痩せ型ラットの体重を減少しなかったが、ラクトリコピンによる８日間の食餌処置は、ＺＦＲの体重及び肝臓重量の注目すべき減少に導いた。肝臓重量のある程度の減少も、更にラクトリコピンで処置された対照ラット（ＺＬＲ）において見られた。最も強烈な変化は、血漿トリグリセリド及びコレステロールレベルに起こった−これらの両方は、ラクトリコピン処置により、それぞれ８３．１％及び６４．３％低下した。更にラクトリコピンで飼われたＺＦＲの血漿インスリンレベルに統計的に有意な減少も存在した。
【００８８】
表４に示すように、ＺＦＲは、増加した量のＳＲＥＢＰ−１ｃ転写物、並びに主要な脂質生成酵素−ＦＡＳ、ＳＣＤ−１、ＡＣＬに対する高いｍＲＮＡを有していた。ラクトリコピン処置は、ラクトリコピン食餌のＺＦＲにおける残存抗インスリン血症を反映して、影響は部分的であったが、脂質生成のｍＲＮＡの誘導を減少した。図２に示した免疫ブロットの結果は、ＺＦＲが、肝臓の核抽出物中のＳＲＥＢＰ−１タンパク質の有意に高いレベルを有し、そしてこの量が、ラクトリコピン処置により変化しないことを示した。
【００８９】
対照値まで低下した唯一のｍＲＮＡは、脂肪酸シンターゼであった。肝臓のＡＣＬ及びＳＣＤ−１のｍＲＮＡは、ＺＦＲ非処置グループと比較して２倍まで減少した。これらの脂質生成ｍＲＮＡの変化は、ラクトリコピンで処置されたＺＦＲの血漿トリグリセリドレベルの減少を説明し、そして実施例２に与えられたデータを確認する。
【００９０】
ＳＲＥＢＰ−２の変化しないレベルは、非処置のＺＦＲの肝臓中のコレステロール生成酵素（ＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｒ及びＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｓ）の正常値と一致し、そしてこれは、免疫ブロットのデータ（図２参照）によって確認された。従って、若いＺＦＲの高コレステロール血症は、肝細胞におけるコレステロールの生合成の活性化より、むしろ肝臓の減少したＬＤＬ再取り込みに起因する。表現型に関わらず、ラクトリコピン処置は、コレステロール生合成の主要な転写活性化因子に対するｍＲＮＡレベルを減少した−ＳＲＥＢＰ−２（約２倍）。この発見は、実施例１及び２として示されたＨｅｐＧ２及び初代肝細胞の研究からの結果を支持する。然しながら、ＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡの減少は、糖尿病及び非糖尿病のラットの肝臓のＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｒ及びＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｓ転写に対して異なった影響を有していた。肥満型ラットは、ＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｒ及びＨＭＧ−ＣｏＡ−ＳのｍＲＮＡレベルの両方の有意な減少を示し、一方痩せ型の同腹仔は、対照レベルの近辺の値を有していた。
【００９１】
更にラクトリコピンで処置されたＺＦＲの肝臓における免疫ブロット分析（図１）によって確認されたＬＤＲ−Ｒタンパク質の注目すべき誘導が存在する。この観察は、ＺＦＲの血漿脂質レベルに対するラクトリコピン食餌の顕著な正常化効果を説明する。ＬＤＬ−受容体の代謝回転は、ラットの肝臓中のＳＲＥＢＰ−２によって制御される。ラクトリコピンで処置されたＺＦＲの肝臓中のＳＲＥＢＰ−２の核の形態の実質的な上方制御が存在する。このような増加は、ラクトリコピンによる肝臓のＬＤＬ−受容体活性化の機構を説明することができる。
【００９２】
ラクトリコピン食餌は、胆汁へのコレステロールの分泌に責任のある酵素、Ｃｙｐ−７アルファのｍＲＮＡに効果を有しなかった。ズッカー肥満型ラットは、異常に低い胆汁コレステロール分泌速度を示す独特の動物モデルであることで知られている。この問題は、その肝臓におけるＣＹＰ−７アルファ転写の減少した速度の結果として発生する。実際、表４に示すように、ＣＹＰ７αのｍＲＮＡのレベルは、ＺＦＲにおいて減少し、そして行われた処置に関係なくほぼ同一レベル近辺のままである。
【００９３】
ズッカー肥満型ラットは、その極端な、そして迅速な表現型の形成のために選択され、これは、ヒトにおける代謝症候群に似ており、そして高インスリン血症、体重増加、高脂質血症及び脂肪肝をもたらす。全てのこれらの特質は、ラクトリコピン処置によってある程度矯正された。
【００９４】
然しながら、表３に示すように、生後９週間のＺＦＲは、高インスリン血症にも関わらず、正常血糖のままである。これは、研究に使用されたラットが、ＩＩ型糖尿病の重要な特質であり、そしてもう一つの密接に関係するズッカーラットの系統−ズッカー糖尿病ラット（ＺＤＲ）の明白な特徴である活性化された糖新生を、なお発症していないことの指標を与える。損なわれた（しかしなお機能している）インスリン感受性の結果として、非処置のＺＦＲの肝臓中のインスリン感受性のｍＲＮＡ（ＰＥＰＣＫ、Ｇ−６−パーゼ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＲＳ−２）の有意な減少が存在する。従って、このようなＺＦＲの肝臓中のインスリン反応の保存されたレベルは、本出願人等が、糖新生の機構に対するラクトリコピンの可能性のあるｉｎ ｖｉｖｏの効果及びラットの初代肝細胞研究（実施例２）において見られた肝臓のインスリン感受性を評価することを不可能にする。
【００９５】
ヒト肝細胞腫細胞系ＨｅｐＧ２（実施例１参照）において、ラクトリコピンは、主要な遺伝子の転写を抑制し、コレステロールの恒常性を制御する−ＳＲＥＢＰ−２。この観察は、もう一つの種類の細胞−初代ラット肝細胞を使用して確認された（実施例２参照）。ＳＲＥＢＰ−２に対するラクトリコピンの影響は、更にズッカー肥満型ラットにおいて再現され、これの血漿コレステロール及びトリグリセリドレベルは、０．２％ラクトリコピン食餌による８日間の処置後、対照値近辺に低下した。血漿脂質レベルに対するラクトリコピンの正常化効果は、本出願人等の観点では、肝臓中のＳＲＥＢＰ−２の減少したレベルだけでなく、更にラクトリコピン食餌のラットにおいて観察された肝臓のＬＤＬ−Ｒ（ｍＲＮＡ及びタンパク質）の亢進されたレベルにも関連する。従って、実施例１、２及び３は、ラクトリコピンが、コレステロールの恒常性に異なったレベルで−ＳＲＥＢＰ−２の転写、ＬＤＬ−受容体発現の制御、ＳＣＡＰのｍＲＮＡレベルへの影響及び全体のコレステロール合成速度で影響することを明らかにする。
【００９６】
ＨｅｐＧ２細胞のラクトリコピンとのインキュベーションが、インスリン誘導遺伝子−１（ＩＮＳＩＧ−１）の抑圧に導くことが予期せずに見出され、そして独立の研究で再現された。本出願人等は、ラクトリコピンが、培養細胞及び肝臓中の肝臓特異的なインスリン反応を制御することができると仮定した。ラクトリコピンのＩＮＳＩＧ−１のｍＲＮＡに対する負の影響も、更にラットの初代肝細胞において、特にインスリンの存在中で観察された。驚くべきことに、本出願人等は、更にラクトリコピンによる短期の食餌的処置が、ズッカー肥満型ラットの体重及び肝臓重量、血漿インスリンレベルを低下し、そして血漿脂質プロファイルの正常化に導くことも観察した。
【００９７】
従って、ＩＮＮＥＯＶラクトリコピン製剤は、代謝症候群の多数の特徴−ラクトリコピンで処置されたズッカー肥満型ラットの、血漿インスリンレベルの減少、血漿脂質、肝臓重量／体重比、脂質生成遺伝子の転写の正常化及び肝臓のＬＤＬ−受容体タンパク質の増加に対する深在性の影響を有する。
【００９８】
実施例４
Ａ．血漿脂質、糖及びインスリンレベルに対するラクトリコピン生産物の影響
血漿脂質、糖及びインスリンレベルに対するラクトリコピン生産物の影響を、志願者のヒトにおいて研究し、そして結果を表５−１１に示した。
【００９９】
４５−６２歳の年齢の１６人の志願者（男性８人及び女性８人）を、このパイロット臨床治験のために選択した。この内１２人（男性６人及び女性６人）に、ラクトリコピン（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）、ＬＬ、を与え、そしてこの内４人（男性２人及び女性２人）に、Ｌｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ、ＬＭ、（Ｖｉｔａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を与えた。最初のグループに糖尿病を持つ二人の患者がおり、そして後者のグループには糖尿病を持つ二人の患者がいた。これらの糖尿病患者に対して、脂質レベルに加えて、糖の濃度も更にモニターした。インスリンの濃度も、更に全ての１６人の患者においてモニターした。ＬＬを、３人の患者に一日二回食事と供に１錠のドラジェで；他の９人の患者に一日三回食事と共に１錠のドラジェで与えた。ＬＭは、毎日３カプセル食事と共に与えた。
【０１００】
血清試料を、患者の血液から、処置の前及びこれが始まった後２週間ごとに収集した。両方のリコピン生産物による処置を、２ヶ月間続けた。
これらの志願者の血清脂質パラメータに対するＬＬ及びＬＭの影響の結果を、表５、６、７及び８に示す。これらの結果は、一日当り２又は３錠のＬＬのドラジェ（表５及び６）、或いは３カプセルのＬＭ（表７及び８）のいずれかの投与が、全コレステロール及びトリグリセリドの濃度の減少を起こしたことを示す。ＬＬのみの投与も、更にＣＨ−ＬＤＬの濃度の有意な減少（ｐ＜０．０５）を起こした。志願者の他の脂質パラメータは、有意には影響されなかった。
【０１０１】
処置前のこれらの脂質のレベルがより高いほど、より激しい血清中のその濃度の減少が見出されたことを注記することは興味あることである。例えば、９番の患者において、ＬＬによる僅か２週間の処置後、全コレステロールのレベルは、２４７から１５８ｍｇ／ｄＬへ殆んど３６％減少した（表５）。
【０１０２】
リコピンの異なった製剤の投与の影響の比較は、血清の全コレステロール、ＬＤＬコレステロール及びトリグリセリドのレベルに対して、ＬＬがＬＭより激しい影響を有することを示した。
【０１０３】
更に、ＬＬ又はＬＭのいずれかの処方の吸収性の、即ち生体利用可能なリコピン製剤の使用が、高いレベルの血清糖濃度を持つ患者の血清糖濃度の減少をもたらすことも更に重要であった（表９及び１０）。
【０１０４】
ＬＬ又はＬＭの投与が、非高血糖症の患者の血清中の糖の生理学的レベルに影響しなかったが、しかし高血糖を持つ患者における糖を、減少又は正常化することが可能であること（太字の数字）を観察することは興味あることであった。
【０１０５】
高血糖症の患者は、６ｍｍｏｌ／ｌより大きい血清糖濃度を持つ者である。
リコピンの異なった製剤の投与の影響の比較は、ＬＬが、高血糖を持つ患者の血漿糖レベルを平均２８％減少することが可能であり、一方ＬＭは、このパラメータを僅か１６％減少することが可能であることを示した。
【０１０６】
ＬＬの同様な影響は、インスリンレベルに関して観察された。高いインスリンレベルを持つ患者において、ＬＬの２週間の投与は、その正常化をもたらす（太字の数字）。然しながら、この製剤は、インスリンの正常な生理学的レベルを持つ患者のインスリンの濃度に影響しなかった（表１１）。
【０１０７】
Ｂ．ヒトの体重に対するリコピン生産物の影響
体重に対するリコピン生産物の影響を、４５−６２歳の年齢の１８人の志願者、男子１０人及び女性８人を含む第２のパイロット臨床治験において研究した。９人の志願者、男性５人及び女性４人に、１錠のＬａｃｔｏ−ＬｙｃｏｐｅｎｅＴＭ（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）のドラジェ、ＬＬを、一日三回食事と共に与えた。他の９人、男性５人及び女性４人に、１カプセルのＬｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ、ＬＭ （Ｖｉｔａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、一日三回食事と共に与えた。
【０１０８】
治験を２ヶ月続け、そして志願者の体重を治験の前及び後に測定した。治験の結果を、表１２に示す。
ＬＬ及びＬＭの両方の２ヶ月間の投与は、それぞれの処置グループのそれぞれ５及び３人の志願者の体重減少をもたらした。然しながら、全ＬＬグループの全体重減少は、ＬＭグループより３倍大きく、即ち、前者で１５ｋｇ、そして後者で５ｋｇであった。平均して、ＬＬグループのそれぞれのヒトは、１．７ｋｇ減少し、そしてＬＭグループのそれぞれのヒトは、０．６ｋｇ減少した。過体重の志願者が、ＬＬのこの影響からの利益をより多く有意に受けることを注記することは興味あることである。彼等の５人中の４人は、２ないし５ｋｇ間の体重を損失した。ＬＭグループにおいて、５人の過体重のヒトの１人のみが体重を損失した。
【０１０９】
従って、リコピン処置は、患者の代謝症候群の基本的な臨床的特徴（高コレステロール血症、高トリグリセリド血症及び高血糖症）を減少する。
これらの臨床的データは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び動物における実験で観察された実験結果を支持し、そしてラクトリコピン制剤の吸収性の、そして生体利用可能な形態が、代謝症候群、インスリン抵抗性（重症のインスリン抵抗性の症候群を含む）、耐糖能、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変の治療において、そして更に体重調節及び肥満症の治療において使用することができる有効な治療生産物であることができる可能性があることを示す。
【０１１０】
Ｃ．血清脂質に対するスタチンの影響
Ｌｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒ（アトルバスタチン）の血清脂質レベルに対する影響を、志願者のヒトにおいて研究し、そして結果を表１３に示す。
【０１１１】
４５−５５歳の年齢の１０人の志願者、男性５人及び女性５人を、このパイロット臨床治験のために選択した。４０ｍｇのＬｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒを、経口的に食事と共にそれぞれの患者に毎日、２ヶ月間与えた。
【０１１２】
血清試料を患者の血液から、処置の前及び２ヵ月の処置後収集した。
これらの志願者の血清脂質に対するＬｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒの影響の結果を、表１３に示す。表に示されたデータは、Ｌｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒ、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が、ＬＬより良好にＣＨ−ＬＤＬを減少すること（前者において３５％、そして後者において１３．３％）を証明している。然しながら、ラクトリコピンは、全コレステロール及びトリグリセリドの両方をスタチンより低いレベルまで減少する：リピトールにおける全コレステロール（ＣＨ）の減少は、１７％であり、そしてＬＬにおいて、これは２７％であった；リピトールにおけるトリグリセリド（ＴＧ）の減少は、２２％であり、そしてＬＬにおいて、これは３４％であった（表６及び１３）。
【０１１３】
血清脂質レベルを減少することにおける少ない効果と同様に、スタチンは、患者の０．５％ないし２．０％において、ある程度の副作用を有することで知られている。例えば、スタチンは、トランスアミナーゼの高いレベル又は筋肉痛、圧痛或いは脱力感を起こすことができる。これらの症状は、ある患者において、発熱又はインフルエンザ様症状、腹痛又は説明できない疲れによって伴われることができる。更に、肝臓疾患及び筋肉炎は、スタチン類を摂取することにおける禁忌の中にあり、そしてこれらは、妊娠中に処方されるべきではない。他方、ラクトリコピン製剤の長期の投与は、既知の禁忌又は副作用を有しない。
【０１１４】
これは、先に与えたデータと共に、ＬＬのようなラクトリコピン製剤を、代謝症候群、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、高血圧、多嚢胞性卵巣症候群、肥満症、脂肪肝、慢性肝炎、及び肝硬変を含む各種の疾患の治療におけるスタチン類の代替物として使用することができることへの指標を提供する。
【０１１５】
更に、ＬＬのようなラクトリコピン製剤は、スタチン類との組合せにおいて有用であることができ、後者の治療的投与量を減少することを可能にする。これは、スタチン類におけるより少ない禁忌をもたらし、そしてその可能性のある副作用を最小化する。
【０１１６】
Ｄ．更なる製剤
血清脂質レベルに対する単離されたラクトリコピン製剤（ＩＮＤＥＮＡ）の影響を、志願者のヒトにおいて研究し、そして結果を表１５及び１６に示す。
【０１１７】
これらの結果は、ラクトリコピン製剤（ＩＮＤＥＮＡ）は、血清脂質レベルを減少するが、しかしヒトの血漿中の糖レベルに対して有意な影響を有しないことを示す。然しながら、これは、これらの高いレベルを持つ全ての患者の血清中の全コレステロール及びトリグリセリドの濃度を正常化する。治療前のこれらのパラメータがより高いレベルである場合、より有意な減少が観察される。例えば、２５０ｍｇ／ｄＬより上の全コレステロールを持つ患者において、減少は平均９４ｍｇ／ｄＬであるか、又は３５％より多かった。
【０１１８】
２５０ｍｇ／ｄＬより少ないが、しかしなお２００ｍｇ／ｄＬの正常なレベルより上の初期濃度を持つ患者において、減少は、平均５４ｍｇ／ｄＬ、又は２５％であった。同様なパターンは、トリグリセリドにおいても観察された。両方のパラメータの減少は、これらの脂質の生理学的に正常なレベル−１５％の全コレステロール及び２０％のトリグリセリドを持つ患者においてさえ観察された。
【０１１９】
より激しくない影響は、ＣＨ−ＨＤＬ及びＣＨ−ＬＤＬ濃度において観察された。前者の減少したレベルを持つ５人の患者において、４人は、処置後この脂質の正常化されたレベルを有していた。初期にＣＨ−ＬＤＬの高いレベルを持っていた４人の患者の内、２人のみにおいて、このパラメータが正常化された。
【０１２０】
実施例５
食品基質へのラクトリコピンの組込み
一塊のパンのためのレシピは：
イースト−茶匙（ｔｓｐ）３／４、強力粉−４００ｇ、砂糖−茶匙１、バター−１５ｇ、粉乳−茶匙１、塩−茶匙１、ラクトリコピン（ＬＬ）（ＩＮＮＥＯＶ）のドラジェを溶解した水２８０ｍｌであった。
【０１２１】
四つの塊りを焼いた：一つ（対照）は、ＬＬを含有せず、２番目は、５錠のＬＬのドラジェを、３番目は、１０錠のＬＬのドラジェを、そして４番目は、２０錠のＬＬのドラジェを含有していた。
【０１２２】
試験
パンを目隠し試験した５人の志願者は、これらの塊りの全ての四つ間の質感及び風味に差を見出せなかった。更に、パンの抗酸化活性を試験した。これは、ＡｔｈｅｒｏＡｂｚｙｍｅＴＭＥＬＩＳＡキット（ＣＴＬ，ＵＫ）を使用して、製造業者の説明書に記載されたプロトコルに従って行った。ラクトリコピンを含んでなるパンは、抗酸化活性を有していたが、一方対照のパンは有していなかった（表１４）。
【０１２３】
実施例６
食品基質へのリコピンの組込み
四個のスコーンのバッチのためのレシピは：
膨らし粉入り小麦粉−１７５ｇ、膨らし粉−茶匙１、塩−一抓み、上白糖−２０ｇ、無塩バター−３７ｇ、ＩＮＮＥＯＶドラジェの形態のＬＬを溶解した牛乳−９０ｍｌであった。四つのスコーンのバッチを焼いた：一つ（対照）は、ＬＬを含有していなく、二番目は、スコーン当り０．５錠のドラジェのＬＬを、三番目は、スコーン当り１錠のドラジェのＬＬを、そして四番目は、スコーン当り２錠のドラジェのＬＬを含有していた。
【０１２４】
試験
これらのスコーンを目隠しで試験した５人の志願者は、これらの全ての四つのバッチからのスコーン間に質感又は風味に差を見出さなかった。更に、スコーンの抗酸化活性を試験した。これは、ＡｔｈｅｒｏＡｂｚｙｍｅＴＭＥＬＩＳＡキット（ＣＴＬ，ＵＫ）を使用して、製造業者の説明書に記載されたプロトコルに従って行った。ラクトリコピンを含んでなるスコーンは、抗酸化活性を有していたが、一方対照のスコーンは有していなかった（表１４）。
【０１２５】
【表１】
【０１２６】
【表２】
【０１２７】
【表３】
【０１２８】
【表４】
【０１２９】
【表５ａ】
【０１３０】
【表５ｂ】
【０１３１】
【表５ｃ】
【０１３２】
【表６】
【０１３３】
【表７ａ】
【０１３４】
【表７ｂ】
【０１３５】
【表８】
【０１３６】
【表９】
【０１３７】
【表１０】
【０１３８】
【表１１】
【０１３９】
【表１２】
【０１４０】
【表１３】
【０１４１】
【表１４】
【０１４２】
【表１５ａ】
【０１４３】
【表１５ｂ】
【０１４４】
【表１６】
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】図１は、ＨｅｐＧ２細胞の膜及び核画分中のＳＲＥＢＰ−１及び−２の量に対するリコピンの影響を示す。
【図２】図２は、リコピン処理後のズッカー肥満型（ＺＦＲ）及び痩せ型（ＬＺＲ）ラットの肝臓膜及び核抽出物中のＳＲＥＢＰ−１、−２及びＬＤＬ−Ｒの免疫ブロット分析を示す。
【発明の詳細奈説明】
【０００１】
本発明は、インスリン抵抗性、耐糖能、高血圧、多嚢胞性卵巣症候群、肥満症、脂肪肝、慢性肝炎及び肝硬変を含む代謝機能障害の治療のための方法及び物質に関する。
インスリン抵抗性、不良な耐糖能、高血圧、肥満及び代謝症候群のような代謝異常は、先進国世界では次第に普通になり、そして米国単独で５千万人を超える人口がこのような機能障害を有することが推定されている。代謝機能障害は、糖尿病、心血管病、末梢部閉塞性疾病、脳及び他の形態のアテローム性動脈硬化症のその後の発症に対する有意な危険因子である。
【０００２】
これらの症状のための有効な治療法の更なる発展は、世界の人口の健康に対して有意な影響を有するものである。
本発明人は、リコピンが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、動物モデル及びヒトの臨床治験における代謝機能障害に対して、劇的な効果を有することを見出した。
【０００３】
本発明の一つの側面は；
リコピン化合物を、治療的に有効な量で、それを必要とする個体に投与すること；
を含んでなる代謝機能障害の治療の方法を提供する。
【０００４】
リコピン化合物は、リコピン及びリコピンと同様な生物学的特性を保有するリコピンの誘導体を含むことができる。リコピンは、以下の構造Ｉ（ケミカルアブストラクト登録番号５０２−６５−８）：
【０００５】
【化１】
【０００６】
の開鎖の不飽和Ｃ４０カロテノイドであり、これは、トマト、グアバ、ローズヒップ、スイカ及びピンクグレープフルーツのような植物中に天然に存在する。
本明細書中に記載されるような使用のためのリコピンは、一つ又はそれより多い異なった異性体を含んでなることができる。例えば、リコピンは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％の（Ｚ）−異性体、（全て−Ｅ）−異性体、或いはｔｒａｎｓに対して改良されたバイオアベイラビリティーを有する５−ｃｉｓ−又は９−ｃｉｓ−或いは１３−ｃｉｓ−異性体のようなｃｉｓ−異性体を含んでなることができる。Ｔｒａｎｓ異性体は、ｉｎ ｖｉｖｏで、或いは保存又は加工中にｃｉｓの形態に異性化することができる。
【０００７】
リコピンと同様な生物学的特性を保有するリコピン誘導体は、例えば、レチノイン酸のようなカロテノイド、合成アシクロ−レチノイン酸；又は１−ＨＯ−３’，４’−ジデヒドロリコピン、３，１’−（ＨＯ）２−ガンマ−カロテン、１，１’−（ＨＯ）２−３，４，３’，４’−テトラデヒドロリコピン、及び１，１’−（ＨＯ）２−３，４−ジデヒドロリコピンを含むことができる。
【０００８】
本明細書中に記載されるような使用のためのリコピン化合物は、天然の、即ち、天然の供給源から得た、例えばトマト又はメロンのような植物から抽出されたものであることができる。植物からリコピン化合物を抽出、濃縮及び／又は精製するための一連の方法は、当技術において既知である。例えば、エタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、ヘキサン、アセトン、ダイズ又は他の植物油、或いは非植物油を使用する溶媒抽出法を、使用することができる。
【０００９】
本明細書中に記載されるような使用のためのリコピン化合物は、合成、即ち、人工的手段、例えば化学合成によって製造されたものであることができる。リコピン及び他のカロテノイドの化学合成のための一連の方法は、当技術において既知である。例えば、カロテノイド合成のための、標準的なＷｉｔｔｉｇオレフィン化反応スキームに基づく三段階化学合成法を使用することができ、ここにおいて、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中のメタンスルホン酸Ｃ１５ホスホニウムの有機溶液及びトルエン中のＣ１０ジアルデヒドの有機溶液を製造し、そして二つの有機溶液を、ナトリウムメトキシド溶液と徐々に混合し、そして縮合反応を起こさせて、粗製のリコピンを形成する。次いで粗製のリコピンを、ルーチンの技術を使用して、例えば氷酢酸及び脱イオン水を混合物に加え、激しく撹拌し、水及び有機相を分離させ、そしてＤＣＭ及び粗製リコピンを含有する有機相を水で抽出することによって精製することができる。メタノールを有機相に加え、そしてＤＣＭを減圧下の蒸留によって除去する。次いで粗製のメタノール性リコピン溶液を加熱し、そして結晶質のスラリーまで冷却し、これを濾過し、そしてメタノールで洗浄する。次いでリコピンの結晶を再結晶し、そして加熱窒素下で乾燥する。合成リコピンも、更に商業的な供給業者（例えばＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ，ＮＪ ＵＳＡ）から入手可能である。
【００１０】
合成リコピンは、天然のリコピンに対して、増加した比率のｃｉｓ異性体を含んでなることができる。例えば、合成リコピンは、２５％までの５−ｃｉｓ、１％の９−ｃｉｓ、１％の１３−ｃｉｓ、及び３％の他のｃｉｓ異性体であることができ、一方トマトから製造されたリコピンは、３−５％の５−ｃｉｓ、０−１％の９−ｃｉｓ、１％の１３−ｃｉｓ、及び＜１％の他のｃｉｓ異性体であることができる。ｃｉｓ−リコピンが、ｔｒａｎｓ−リコピンに対して増加したバイオアベイラビリティーを有するために、従って合成リコピンが、ある目的のために好ましいものであることができる。
【００１１】
先に記載したようなリコピンの誘導体は、先に記載した合成法と類似の化学合成法によって、又は植物物質から抽出された天然のリコピンの化学修飾によって製造することができる。
【００１２】
リコピン化合物は、いずれかの好都合な形態又は処方で投与することができる。適した処方は、リコピン化合物の吸収性及びその身体内のバイオアベイラビリティーを亢進又は増加することができる。例えば、リコピン化合物は、リコピン化合物を、一つ又はそれより多い医薬的に受容可能な担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、安定剤、乳化剤、保存剤、潤滑剤、又は当業者にとって公知の他の物質、並びに所望により、他の治療又は予防剤と一緒に含んでなる医薬組成物として投与することができる。例えば、ある態様において、リコピン化合物は、リコピン化合物を、イソフラボン、例えばダイズイソフラボン及び／又はビタミンＣと一緒に含んでなる医薬組成物として投与することができる。
【００１３】
適した医薬組成物は、リコピン化合物を単独の活性成分として含んでなることができ、そしてリコピン化合物を、一つ又はそれより多い本明細書中に記載したような医薬的に受容可能な担体、賦形剤、緩衝剤、アジュバント、安定剤、又は他の物質と一緒に混合することによって、処方することができる。
【００１４】
用語“医薬的に受容可能な”は、本明細書中で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題又は合併症を伴わずに患者（例えばヒト）の組織と接触して使用するために適している、妥当な利益／危険度比で均衡している化合物、物質、組成物、及び／又は剤形に関する。それぞれの担体、賦形剤、等も、更に処方の他の成分と適合性であると言う意味において“受容可能”でなければならない。
【００１５】
適した担体、賦形剤、等は、標準的な製薬の教科書、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０中に見出すことができ、そして油、例えばトマト油、ダイズ油、又はラッカセイ油のような植物油、或いは非植物油、グリセロール、ゼラチン、スクロース、グルコース、パルミチン酸アスコルビル、コーンスターチ及び二酸化ケイ素を含むことができる。適した乳化剤は、ポリソルベート８０を含む。
【００１６】
適した安定剤は、スクロースエステル、レシチン、ｄｌ−ａ−トコフェロール及びパルミチン酸アスコルビルのような抗酸化剤、フラバノイド、セルロース、ワックス、マンニトール、シェラック、タルク、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、及びアラビア又はアカシアゴムを含むことができる。
【００１７】
例えば、リコピンは、植物油、魚ゼラチン、スクロース及びコーンスターチのような担体物質に加えて、約１０％のリコピン、それぞれ１．５％及び５．０％の抗酸化剤ｄｌ−ａ−トコフェロール及びパルミチン酸アスコルビルを含有する、ビーズ、錠剤又は他の固体物体中に処方することができる。
【００１８】
リコピンの適した製剤は、商業的に入手可能であり、そしてＬｙｃｏＶｉｔＴＭ１０パーセント、ＬｙｃｏＶｉｔＴＭ １０冷水分散物（ＣＷＤ）、及びＬｙｃｏＶｉｔＴＭ分散物２０パーセント（全てＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ，ＮＪ，ＵＳＡ）、Ｌｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ（ＬＭ）、ＬｙｃｏＢｅａｄｓＴＭ、及びＴｏｍａｔｏ−Ｏ−ＲｅｄＴＭ（Ｄａｌｉｄａｒ Ｐｈａｒｍａ，ＬｙｃｏＲｅｄ Ｌｔｄ ＵＫ）を含む。
【００１９】
ある態様において、リコピン化合物は、可溶化剤と共に処方することができる。可溶化剤は、水溶液中に可溶性であり、そして更に有機溶媒中に不溶性であることもできる親水性化合物を含む。適した親水性可溶化剤は、可溶性タンパク質、特にカゼイン、ベータ−ラクトグロブリン、アルファ−ラクトアルブミンのような乳タンパク質、及び血清アルブミンを含む。好都合には、乳清タンパク質を可溶化剤として使用することができる。乳清タンパク質は、牛乳からのチーズ製造の副産物である乳清から単離された球状タンパク質の収集物である。乳清タンパク質は、ベータ−ラクトグロブリン（約６５％）、アルファ−ラクトアルブミン（約２５％）、及び血清アルブミン（約８％）の混合物であり、これらは、ｐＨに関わらずその天然の形態で可溶性である。乳清タンパク質を伴うリコピン製剤（‘ラクトリコピン’と呼ばれる）は、当技術において既知であり（例えば、Ｒｉｃｈｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３２：４０４−４０８，２００２及びＥＰ−Ｂ−１２８９３８３（ＰＣＴ／ＥＰ０１／０６１４５）を参照されたい）、そして商業的に入手可能である（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）。乳清タンパク質を伴うリコピン製剤の調製のための方法は、混合物を形成するために十分な条件下で、乳清タンパク質をリコピンと混合することを含んでなることができる。例えば、乳清タンパク質を水中に溶解することができ、そしてリコピンをアセトン、エタノール又はイソプロパノールのような溶媒中に溶解し、二つの溶液を混合し、そして溶媒を蒸発して、ラクト−リコピン組成物を形成することができる。
【００２０】
別の方法として、組成物は、リコピンを溶媒と混合して、第１の混合物を形成し、第１の混合物を、粉末又は水溶液の形態の乳清タンパク質と混合して、第２の混合物を形成し、そして第２の混合物から溶媒を蒸発して、組成物を分散物として製造することによって形成することができる。適した溶媒は、アセトン、エタノール及びイソプロパノールを含む。好都合には、水相が溶媒と混合される場合、容量で約６０：４０の溶媒：水比を使用することができる。組成物は、５０％までのリコピン化合物及び９０％までの乳清タンパク質を含んでなることができる。
【００２１】
分散物は、ゲルを製造するために所望により加熱処理されるか、或いは粉末を製造するために噴霧又は凍結乾燥によって乾燥することができる。
次いで組成物を、先に記載したような担体、賦形剤、安定剤及び乳化剤と調合することができる。例えば、適したラクトリコピン製剤は、２％（重量／重量）のリコピン、２０％（重量／重量）の乳清タンパク質、５０．５％（重量／重量）の微結晶セルロース、５％（重量／重量）の二酸化ケイ素、３％（重量／重量）のポリソルベート８０及び１．５％（重量／重量）のダイズレシチンを含んでなることができる。
【００２２】
本明細書中に記載されるような使用のためのラクトリコピン製剤は、先に記載したように得ることができるか、又は得ることが可能である。
本明細書中に記載されるようなリコピンで治療することができる代謝機能障害は、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症及び肝硬変のような肝臓疾患、並びに代謝症候群を含む。
【００２３】
ある態様において、本発明の方法によって治療される個体は、糖尿病ではなく（即ち、１型又は２型糖尿病に罹っていない）、及び／又はＣＨＤ、脳卒中又は末梢血管性疾病のようなアテローム性動脈硬化の症状に罹っていない。
【００２４】
肥満症は、過剰な体脂肪によって特徴づけられる症状である。例えば、肥満の個体は、３０より大きい肥満度指数（ＢＭＩ：体重／身長２）を有することができる。肥満症は、糖尿病、並びにアテローム性動脈硬化症、虚血性（冠動脈）心疾患、心筋虚血（狭心症）及び脳卒中のような心血管性疾患を含むある範囲の医学的症状に対する危険因子である。肥満症は、腹部肥満を含むことができ、これは、普通、欧州の男性において９４ｃｍより大きい、そして欧州の女性において８０ｃｍより大きい、南アジアの男性において９０ｃｍより大きい、そして南アジアの女性において８０ｃｍより大きい、そして日本人の男性において８５ｃｍより大きい、そして日本人の女性において９０ｃｍより大きい腰周りとして定義される。本明細書中に記載される方法は、体重制御及び肥満症の治療において有用であることができる。
【００２５】
インスリン抵抗性は、与えられたインスリンの量に対して生理学的反応を示す細胞、組織又は全身の無能である。結果として、対照と比較して、インスリンの生理学的効果を達成するために、より高いインスリンの量が必要である。インスリン抵抗性は、非糖尿病の人口の２５％に存在し、インスリン抵抗性の状態から２型糖尿病への推定転換率は、年間２−１２％である。
【００２６】
耐糖能の低下は、経口糖負荷試験の１２０分後に、７．８ｍｍｏｌより多い糖濃度が血漿中に持続する場合に起こる。耐糖能の低下は、インスリン抵抗性及び高血糖を伴う。
多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）は、卵巣の嚢胞が正常な卵巣のホルモン産生のサイクルを妨害する、女性の５−１０％に影響する内分泌疾病である。ＰＣＯＳは、しばしばインスリン抵抗性、代償性高インスリン血症、代謝症候群、肥満症及び高アンドロゲン血症を伴う。
【００２７】
高血圧は、１４０と９０ｍｍＨｇを超える（＞１４０の収縮期圧；＞９０の拡張期圧）一貫して高い血圧によって特徴づけられる。
肝臓疾患は、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症及び肝硬変を含む。脂肪肝は、肝臓中の異常な脂質の蓄積によって特徴付けられ、これは、脂肪酸の酸化の低下及び／又はリポタンパク質の合成及び放出の減少によって起きることができる。脂肪肝は、その後、肝線維症及び肝硬変に転換することができる。肝線維症は、肝臓中の線維組織の成長によって特徴づけられる。線維症は、肝硬変に導くことができ、ここにおいて、肝臓は低下した機能を有し、そして永久に損傷し、線維性に、そして脂肪質になる。
【００２８】
慢性肝炎は、肝臓の炎症であり、これは、細菌又はウイルスによる感染、寄生虫の感染、アルコール、薬物、毒素、又は不適合性の血液の輸血によって起こることができる。
代謝症候群は、肥満及び；インスリン抵抗性、高血圧、高血液トリグリセリドレベル及び／又は血液中の低ＨＤＬコレステロールレベル、の一つ又はそれより多くによって特徴づけられる症状である。例えば、ＩＤＦ（国際糖尿病連合）は、代謝症候群を：腹部肥満並びに次のもの：トリグリセリドレベルの増加（約１．７ｍｍｏｌ／Ｌより上）；ＨＤＬコレステロールの減少（男性において０．９ｍｍｏｌ／Ｌか又はそれより低い、そして女性において１．１ｍｍｏｌ／Ｌか又はそれより低い）；血圧の上昇（１３０／８５より上）；及び空腹時血糖値の上昇（５．６ｍｍｏｌ／Ｌより上）；のいずれか二つとして定義している。
【００２９】
代謝症候群のような代謝機能障害は、更に高コレステロール血症、低ＨＤＬコレステロール（例えば、男性＜０．９ｍｍｏｌｌ−１；女性＜１．０ｍｍｏｌｌ−１）、高トリグリセリド血症（例えば、血漿ＴＡＧ≧１．７ｍｍｏｌｌ−１）及び微量アルブミン尿症（例えば、尿アルブミン排出速度≧２０μｇ分−１；アルブミン：クレアチニン比≧３０ｍｇ分−１）を含むある範囲の症状を伴う。
【００３０】
本明細書中に記載される方法は、代謝機能障害に伴う症状の治療において有用であることができる。例えば、代謝機能障害に伴う症状を治療する方法は；
リコピン化合物を、それを必要とする個体に投与すること；
を含んでなることができる。
【００３１】
代謝機能障害に伴う症状は、高コレステロール血症、低ＨＤＬコレステロール、高トリグリセリド血症及び微量アルブミン尿症を含むことができる。
本発明の方法は、更に予防的適用も有する。例えば、代謝機能障害の発症を予防又は遅延する方法は、リコピン化合物をそれを必要とする個体に投与することを含んでなることができる。
【００３２】
本明細書中に記載されるような代謝機能障害の発症を予防又は遅延する方法を受けるために適した個体は、代謝機能障害の危険にあるか又はそれに感受性であることができ、例えば、個体は、代謝機能障害の発症に伴う一つ又はそれより多い危険因子を有することができる。
【００３３】
本明細書中に記載される方法は、リコピン化合物を、スタチン（即ち、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ Ｃｏ Ａ）レダクターゼ阻害剤）との組合せで投与することを含んでなることができる。
【００３４】
適したスタチン類は、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬＴＭ）、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲＴＭ）、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲＴＭ）、セリバスタチン（ＬＩＰＯＢＡＹＴＭ）、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬＴＭ）、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲＴＭ）、メバスタチン及びロスバスタチン（ＣｒｅｓｔｏｒＴＭ）を含む。他の適したスタチン類、は当技術において既知であり、そして当技術において公知であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼアッセイを使用することによって容易に確認することができる。このようなアッセイの例は、米国特許第４，２３１，９３８号中に開示されている。
【００３５】
本発明のもう一つの側面は、代謝機能障害又は先に記載したような代謝機能障害に伴う症状の治療、或いは代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の発症を予防又は遅延することにおいて使用するための、医薬の製造におけるリコピン化合物の使用を提供する。
【００３６】
本発明のもう一つの側面は、代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の治療において使用するためのリコピン化合物、並びに代謝機能障害、或いは代謝機能障害に伴う症状の発症を予防又は遅延することにおいて使用するためのリコピン化合物を提供する。
【００３７】
リコピン化合物を含んでなる組成物又は医薬は、更にスタチン（即ち、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ Ｃｏ Ａ）レダクターゼ阻害剤を含んでなることができる。
【００３８】
適したスタチン類の例は、先に記載されている。本発明の方法において有用な他のスタチン類は、当業者にとって明白であるものである。
本発明のもう一つの側面は、代謝機能障害を治療するための組合せにおいて使用するための、リコピン化合物及びスタチンを含んでなるキットである。
【００３９】
キットは、リコピン化合物を単独で、又は他の化合物との組成物中で、シリンジで（このような部品は一般的に滅菌されている）投与するための手段のような方法或いは本発明の実行のための、一つ又はそれより多い他の物品及び／又は試薬を含むことができる。
【００４０】
キットは、更に本発明の方法の全て又は一部、例えばリコピン化合物及び／又はスタチンの投与管理を行うための説明書を含むことができる。
本発明のなおもう一つの側面は、先に記載したような代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の治療、或いは代謝機能障害又は代謝機能障害に伴う症状の発症を予防又は遅延するための医薬の製造における、リコピン化合物及びスタチンの組合せの使用である。
【００４１】
本発明の方法において使用するためのリコピン化合物の製剤は、好都合には単位剤形で存在することができ、そして薬学の技術において公知のいずれかの方法によって調製することができる。このような方法は、活性化合物を一つ又はそれより多い補助的成分を構成する担体と会合させる工程を含む。一般的に、製剤は、活性化合物を液体担体又は微細に分割された固体担体と、或いは両方と均一に、そして密接に会合させ、そして次いで必要な場合生産物を成形することによって調製する。
【００４２】
製剤は、液体、溶液、懸濁液、分散物、乳液、エリキシル、シロップ、錠剤、ロゼンジ、顆粒、粉末、カプセル、カシェ、ビーズ、丸薬、アンプル、座薬、ペッサリー、軟膏、ゲル、ペースト、クリーム、噴霧物、霧状物、泡状物、ローション、油状物、巨丸剤、舐剤、又はエアゾールの形態であることができる。
【００４３】
経口投与（例えば摂取による）のために適した製剤は、それぞれが、所定の量の活性化合物を；粉末又は顆粒として；水性若しくは非水性液体中の溶液又は懸濁液として；或いは水中油の液体乳剤又は油中水液体乳剤として；巨丸剤として；舐剤として；或いはペーストとして含有するカプセル、カシェ又は錠剤のような分割された単位として与えることができる。液体医薬組成物は、一般的に水、石油、動物又は植物油、鉱油又は合成油のような液体担体を含む。生理食塩溶液、デキストロース又は他の糖類溶液或いはエチレングリコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールのようなグリコールを含むことができる。
【００４４】
錠剤は、慣用的な手段、例えば、所望により一つ又はそれより多い補助成分と共に、圧縮又は成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、粉末又は顆粒のような易流動形態の活性化合物を、所望により一つ又はそれより多い結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、アラビアゴム、ソルビトール、トラガカントゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤又は希釈剤（例えばラクトース、微結晶セルロース、リン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ）；崩壊剤（例えばグリコール酸デンプンナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）；表面活性剤又は分散剤或いは湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）；及び保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸）と混合して、適した機械中で圧縮することによって調製することができる。成形錠剤は、適した機械中で、不活性な液体希釈剤で加湿した粉末の化合物の混合物を成形することによって製造することができる。錠剤は、所望により被覆され又は分割線を入れられ、そしてその中の活性化合物の徐放又は制御放出を得るために、例えば、所望の放出特性を得るために、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを異なった比率で使用して調合することができる。錠剤は、胃以外の腸の部分で放出するために、所望により腸溶被覆を与えることができる。
【００４５】
静脈内、皮膚又は皮下注射、或いは苦痛の部位における注射のために、活性成分は、発熱物質を含まない、そして適したｐＨ、等張性及び安定性を有する非経口的に受容可能な水溶液の形態であるものである。当業者は、例えば、塩化ナトリウム液、リンゲル液、乳酸加リンゲル液のような等張ベヒクルを使用して適した溶液を調製することが十分に可能である。保存剤、安定剤、緩衝液、抗酸化剤、及び／又は他の添加剤を、必要に応じて含むことができる。
【００４６】
上述の技術及びプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ），１９８０中に見出すことができる。
【００４７】
投与は、好ましくは“治療的に有効な量”であり、これは、個体に対して利益を示すために十分である。活性化合物、及び活性化合物を含んでなる組成物の適当な投与量が、患者によって変化することができることは認識されるものである。最適投与量の決定は、一般的に本発明の治療のいずれかの危険度又は有害な副作用に対する、治療的利益のレベルを均衡させることに関係するものである。選択された投与量レベルは、制約されるものではないが、特定の化合物の活性、投与の経路、投与の時間、化合物の排出の速度、治療の期間、組合わせて使用される他の薬物、化合物及び／又は物質、並びに患者の年齢、性別、体重、症状、一般的健康状態、及び既往履歴を含む各種の因子に依存するものである。化合物の量及び投与の経路は、最終的に医師の判断によるが、一般的に投与量は、実質的に危険な又は有害な副作用を起こさずに所望の効果を達成する、作用の部位における局所濃度を達成するためのものである。
【００４８】
Ｉｎ ｖｉｖｏの投与は、治療の過程を通して一回の投与、連続的又は間欠的に（例えば適当な間隔の分割投与で）行うことができる。投与の最も有効な手段及び投与量を決定する方法は、当業者にとって公知であり、そして治療のために使用される製剤、治療の目的、治療される標的細胞、及び治療される対象によって変化するものである。担当医師によって選択される投与量レベル及び様式で、一回又は複数回の投与を行うことができる。
【００４９】
一般的に、リコピンの適した投与量は、一日当り対象の体重のキログラム当り約１００μｇないし約２５０ｍｇの範囲である。活性化合物が塩、エステル、プロドラッグ、等である場合、投与される量は、母体化合物に基づいて計算され、そして従って使用される実際の重量は、比例的に増加される。
【００５０】
リコピンのようなリコピン化合物を含んでなる組成物は、単独で、或いは他の治療剤との組合せで、治療される症状によって同時又は連続的に投与することができる。
リコピン化合物は、食品生産物中に含まれることができる。例えば、これは、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物（例えばマーガリン）、チーズ、ヨーグルト又は飲料中に含まれることができる。他の適した食品生産物は、当業者にとって明白であるものである。
【００５１】
リコピン化合物は、加熱調理（例えばパン焼き）の前に食品生産物の成分と混合し、及び／又は加熱調理後に食品生産物に加えることができる。本明細書中のデータは、リコピン化合物を、食品の品質の損失なく食品性産物中に組込むことができ、そして食品性産物中で加熱料理された後も活性なままであることを示す。
【００５２】
好ましくは、異種構造のリコピン化合物が、食品生産物中に含まれる。例えば、先に記載したような合成リコピン化合物、又は天然には食品生産物中に存在しない天然のリコピン化合物。例えば果物又は野菜からのリコピン化合物を、パン又はシリアル中に組込むことができる。
【００５３】
従って、本発明のなお更なる側面は、代謝機能障害を治療するためのリコピン化合物を含んでなる食品生産物であり、ここにおいて、リコピン化合物は、食品生産物中に天然には存在しない。
【００５４】
食品生産物は、リコピン化合物によって補充又は強化することができる。ある好ましい態様において、食品生産物は、先に記載したような乳清タンパク質と調合されたリコピン化合物（‘ラクトリコピン’）で補充される。
【００５５】
代謝機能障害の発症を治療又は遅延或いは予防するための食品生産物を製造する方法も、更に提供され、前記の方法は：
（ｉ）食品生産物の成分を用意し、
（ｉｉ）リコピン化合物を前記成分と混合し、
（ｉｉｉ）前記成分及び前記リコピン化合物を食品生産物に調合すること；
を含んでなる。
【００５６】
本発明の各種の更なる側面及び態様は、本開示の観点から当業者にとって明白であるものである。本明細書中に記述される全ての文書は、そのすべてが本明細書中に参考文献として援用される。
【００５７】
本発明のある側面及び態様は、ここに実施例によって、そして以下に記載される図面を参照して例示されるものである。
図１は、ＨｅｐＧ２細胞の膜及び核画分中のＳＲＥＢＰ−１及び−２の量に対するリコピンの影響を示す。
【００５８】
図２は、リコピン処理後のズッカー肥満型（ＺＦＲ）及び痩せ型（ＬＺＲ）ラットの肝臓膜及び核抽出物中のＳＲＥＢＰ−１、−２及びＬＤＬ−Ｒの免疫ブロット分析を示す。
表１は、ステロールの存在及び非存在中で１０μＭのリコピンとインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞中のｍＲＮＡの変化を示す。
【００５９】
表２は、１００ｎＭのインスリンの非存在及び存在中で１０μＭのリコピンとインキュベートしたラットの初代肝細胞中のｍＲＮＡの変化を示す。
表３は、０．２％リコピンの食餌で処置したズッカー肥満型（ＺＦＲ）及びズッカー痩せ型（ＬＺＲ）ラットの生理学的パラメータを示す（４匹のラット中の４個の測定値からのＭ±ｍ）。
【００６０】
表４は、０．２％リコピンの食餌で処置したズッカー肥満型（ＺＦＲ）及びズッカー痩せ型（ＬＺＲ）ラットの肝臓中のｍＲＮＡの変化を示す。
表５は、志願者のヒトの血清脂質のレベルに対する、ラクトリコピン、ＬＬの影響を示す。
【００６１】
表６は、ＬＬによる２ヶ月の処置後の、志願者のヒトの血清脂質の平均レベルに対するＬＬの影響を示す。
表７は、志願者のヒトの血清脂質のレベルに対する、Ｌｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ、ＬＭの影響を示す。
【００６２】
表８は、ＬＭによる２ヶ月の処置後の、志願者のヒトの血清脂質の平均レベルに対するＬＭの影響を示す。
表９は、糖尿病患者の血清中の糖濃度に対するＬＬの影響を示す。
【００６３】
表１０は、糖尿病患者の血清中の糖濃度に対するＬＭの影響を示す。
表１１は、志願者のヒトの血清インスリンのレベルに対する、ラクトリコピン、ＬＬの影響を示す。
【００６４】
表１２は、志願者のヒトの体重に対する、ＬＬ及びＬＭの影響を示す。
表１３は、志願者のヒトの血清脂質のレベルに対する、Ｌｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍｅｒ（アトルバスタチン）の影響を示す。
【００６５】
表１４は、ラクトリコピン（ＬＬ）を含んでなる、異なった焼いた食品基質（パンの塊り及びスコーン）のｉｎ ｖｉｔｒｏの抗酸化物活性を示す。
表１５は、ヒトの血液血清中の脂質代謝のパラメータに対する、ラクトリコピンの影響を示す。
【００６６】
表１６は、ヒトの血漿中の糖レベルに対する、ラクトリコピンの影響を示す。
実験
材料
標準的な分子生物学的技術を使用した。培養細胞及びラット肝臓からの全ＲＮＡを、ＲＮＡ−ＳＴＡＴ−６０単離試薬（Ｔｅｌ−Ｔｅｓｔ，Ｉｎｃ，ＵＳＡ）を使用して抽出した。ＳＹＢＲ緑色ｑＰＣＲ試薬系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）を、定量的ＲＮＡ分析のために使用した。血漿インスリンレベルは、ＥＬＩＳＡキット（Ｌｉｎｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＵＳＡ）を、血漿の糖は、比色測定を使用して測定した。
【００６７】
他に記述しない限り、リコピンは、商業的な形態中で使用され（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）、更に添加物としてダイズイソフラボン及びビタミンＣを含有する、乳清タンパク質結合ラクトリコピン製剤（ＬＬ）であるか、或いは２０ｇのトマト抽出物（１０％のラクトリコピンを含有）を、２０ｇの乳清タンパク質、５０．５ｇの微結晶セルロース、５ｇの二酸化ケイ素、３ｇのポリソルベート８０及び１．５ｇのダイズレシチンと混合して、１００ｇのラクトリコピン製剤を製造することによって製造された単離された形態（ＩＮＤＥＮＡ）であった。
【００６８】
ラクトリコピン製剤は、ＥＰ１２８９３８３中に記載されているように調製された。
他の一般的な試薬は、Ｓｉｇｍａ（ＵＳＡ）から得た。
細胞培養物
ヒト肝細胞腫細胞系−ＨｅｐＧ２の単層膜を、１００万細胞／１００ｍｍシャーレの密度で構成し、そして６％ＣＯ２の３７Ｃで、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を伴う１０％ＦＣＳで補充されたＤＭＥＭ中で培養した。４８時間後、細胞を二回ＰＢＳで洗浄し、そしてステロールの非存在又は存在（１μｇ／ｍｌの２５−ヒドロキシコレステロール及び１０μｇ／ｍｌのコレステロール）中で、５％のリポタンパク質欠損血清、５０μＭのメバロン酸及び５０μＭのコンパクチン（ラクトン型）を含有するＤＭＥＭに切り替えた。シャーレの半数に、更に１０μＭの最終濃度までテトラヒドロフラン中に溶解されたＩＮＮＥＯＶラクトリコピンを入れた。他の半数に、溶媒のみのアリコートを入れた。細胞を、免疫ブロット分析及びＲＮＡ抽出のために１８時間後に回収した。
【００６９】
初代肝細胞を、非絶食のＳｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットのラット肝臓から、コラゲナーゼ消化法によって単離した。ハロタン麻酔下で、それぞれの肝臓を、門脈を通して肝臓潅流液で、そしてその後肝臓分離液（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ，ＵＳＡ）でｉｎ ｓｉｔｕで潅流した。肝臓を切取り、肝細胞を分離し、そして１００ｍｍのコラーゲンＩで被覆したシャーレ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｌａｂｗａｒｅ，ＵＳＡ）上に、シャーレ当り６００万細胞の密度で、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を伴う５％の胎児ウシ血清を含有するＤＭＥＭ中に入れた。３時間の付着後、細胞を、１００ｎＭのデキサメタゾン、１ｎＭのインスリン、１００ｎＭのトリヨードチロニン、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンで補充された血清を含まないＤＭＥＭに切替えた。生存細胞をトリパンブルー排除試験で数えた。少なくとも８５％の生存細胞を持つ肝細胞を研究に使用した。一晩のインキュベーション後、テトラヒドロフラン中のラクトリコピン（ＩＮＮＥＯＶ）溶液の１０μＭの最終濃度までの添加を、１００ｎＭのインスリンの存在又は非存在で行った。対照シャーレには、テトラヒドロフランのみを入れた。ＲＮＡの単離を、リコピン及び／又はインスリンによる肝細胞の補充の１８時間後に行った。
【００７０】
動物及び処置
ズッカー肥満型ラット（ｆａ／ｆａ）及びその痩せ型の同腹仔を、生後８−９週で実験に使用した。ラットをコロニーケージに収容し、１２時間照明／１２時間暗所のサイクルで飼育し、そして標準固形飼料の食餌を給餌した。コロニー環境への適合の１０日後、ラットを、０．２％のラクトリコピン（ＩＮＮＥＯＶ）で補充された標準固形飼料の食餌に切替えた。ラットを、食物への２４時間の接近で自由に給餌した。毎日のモニターは、リコピン処置／非処置グループ間のラットの食物摂取に、実質的な差を示さなかった。８日間の食餌処置後、ラットをハロタン麻酔下で殺した。血液試料を収集し、そして体重／肝臓重量を記録した。
【００７１】
ＲＮＡ分析
培養細胞及びラットの肝臓からの全ＲＮＡを抽出し、そしてそれぞれの試料からの２μｇのＲＮＡを、ｃＤＮＡを合成するために使用し、そしてＲＴ−ＰＣＲ反応を三重で行った。それぞれの個々の遺伝子のためのプライマーを、公共のデータベース遺伝子銀行を使用して命名した。特異的プライマーとインキュベートしたそれぞれのＲＮＡ試料に対する実際のＣＴ値を、そのＣＴ絶対値がそれぞれの実験において示されるハウスキーピング遺伝子−ＧＡＰＤＨ又は３６Ｂ４のＣＴ値（内部対照）に対して参照した。それぞれの遺伝子に対して正規化されたＣＴ値を、ステロール及びの非存在中のＨｅｐＧ２細胞中で観察した値を１．００とした。他のグループのｍＲＮＡレベルの変化を、１．００に対して参照し、そして対照値（１．００）に対する倍数の変化を示した。
【００７２】
免疫ブロッティング
免疫ブロット分析のために、核抽出物及び膜画分を、培養細胞及びラットの肝臓から調製した。細胞を２２．５ゲージの針を通して通過させて、細胞を、低張性緩衝液（ｐＨ７．４の１０ｍＭのＨｅｐｅｓ−ＫＯＨ）中で破壊した。ラットの肝臓からの核抽出物及び膜画分を他の場所で記載したように単離した。
【００７３】
臨床治験
この治験の目的は、ラクトリコピン自体が、その特定の処方に関係なく、ヒトの代謝パラメータに影響することができるか否かを研究することであった。この治験のために、１４人の臨床的に健康な志願者を採用した。この内１２人は、何らかの形態の異脂質血症を有し、この内３人は、これに加えて高い空腹時血糖を有し、一人は高い空腹時血糖のみを有し、そして一人はこれらの代謝性疾患のいずれをも有していなかった。７人の志願者に、ＬＬを３００ｍｇの投与量で、又は６ｍｇのＨＰＬＣリコピンを投与し、他の７人に対する投与は、８００ｍｇのＬＬ、又は１４ｍｇのＨＰＬＣリコピンであった。生産物を２ヶ月間、毎日一回経口的に食物と共に投与した。治験前及び終了時の志願者の血液を試験し、そして比較した。
【００７４】
結果
実施例１
ヒト肝細胞腫細胞系ＨｅｐＧ２を、培養細胞中の脂質代謝の転写制御に対する、ラクトリコピンの影響を明白にするために使用した。表１に示すように、実験の全てのグループにおいて、基本的ハウスキーピング遺伝子に対するｍＲＮＡレベルは、殆んど変わらないままであり、そして１７．５４ないし１７．７３で変化した。これは、薬物毒性の非存在、ＲＮＡ分解及び細胞単層膜の健康な状態を確証する。
【００７５】
表１に示すように、１０μＭのラクトリコピンの添加は、ステロールの存在又は非存在中のＳＲＥＢＰ−１のｍＲＮＡレベルに有意には影響しなかった。ステロールに反応するＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡの減少は、ラクトリコピンの存在に関わらず両方のグループにおいて同一であった。
【００７６】
ステロールは、培養細胞中のＳＲＥＢＰ−２の転写を遮断し、コレステロールの生合成及びコレステロール生成酵素に対するｍＲＮＡのその後の低下を起こすことが知られている。表１は、ＨｅｐＧ２細胞へのステロールの添加が、ＳＲＥＢＰ−２に対するｍＲＮＡ及びコレステロール生合成の主要な酵素−ＦＰＰＳ、ＨＭＧ−ＣｏＡ Ｒｅｄ及びＨＭＧ ＣｏＡ Ｓｙｎを有効に減少することを示す。然しながら、ステロールの非存在中でさえ、１０μＭのラクトリコピン単独とインキュベートしたＨｅｐＧ２細胞中のＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡレベルの明白な低下（４２％減少）が存在する。ラクトリコピンの存在中のＳＲＥＢＰ−２レベルの減少は、コレステロール生成及び脂質生成のｍＲＮＡの殆んどに影響しなかった。然しながら、脂質生成遺伝子の殆んど（ＦＡＳ、ＡＣＣ、ＨＭＧ−ＣｏＡ Ｓｙｎ及びＨＭＧ−ＣｏＡ Ｒｅｄ）は、ラクトリコピンの存在中で僅かに高いステロール感受性を示す。単独のラクトリコピンは、ＳＣＡＰのｍＲＮＡに対するステロールの影響の増強を伴わずに、ＳＣＡＰに対するｍＲＮＡを減少する。
【００７７】
ラクトリコピンによって影響される唯一のＳＲＥＢＰ−１の下流の遺伝子は、ＩＮＳＩＧ−１であり、このｍＲＮＡは、基底レベルの殆んど２／３低下した。免疫ブロットデータ（図１）は、ｍＲＮＡの結果を確認し、そして説明する。ステロールの非存在において、ＨｅｐＧ２細胞の膜画分中に、ＳＲＥＢＰ−１及び−２の形態の検出可能な前駆体の形態は存在していない。然しながら、ステロールの存在中でＳＲＥＢＰ−１の開裂が停止した場合、ラクトリコピンの存在中のＳＲＥＢＰ−１タンパク質の量は、明らかにより高く、これは、約１．４のＳＲＥＢＰ−１のｍＲＮＡの上方制御を反映する。免疫ブロットの結果は、更にラクトリコピンとインキュベートされたＨｅｐＧ２細胞中に見られるＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡの低下を確認し、−ＳＲＥＢＰ−２前駆体及び成熟した形態の量は、ラクトリコピンとインキュベートしたＨｅｐＧ−２細胞において明らかに低下する。
【００７８】
同じプロトコルを使用して行った研究の別個の組において、本出願人等は、ラクトリコピンのＳＣＡＰ及びＩＮＳＩＧ−１のｍＲＮＡに対する阻害効果を確認し、そして再現している。
【００７９】
ラクトリコピンは、主要なコレステロール生成転写因子ＳＲＥＢＰ−２及びインスリン誘導生遺伝子−１（ＩＮＳＩＧ−１）に対するｍＲＮＡを減少し、ヒト肝細胞腫細胞系ＨｅｐＧ２中の脂質生成遺伝子に対する僅かに高いステロール感受性を与える。まとめれば、本出願人等の結果は、ラクトリコピンが、脂質生成のいくつかの転写機構に、そして恐らくヒト肝細胞中の肝臓特異的インスリン反応に影響していることへの指標を与える。
【００８０】
実施例２
ＨｅｐＧ２細胞中のいくつかのインスリン制御遺伝子（ＳＲＥＢＰ−１及びＩＮＳＩＧ−１）に対するリコピンの注目すべき効果のために、ラットの初代肝細胞系及びインスリン処置プロトコルを、ラクトリコピンの生理学的特性を更に研究するために選択した。表２に示すように、１０μＭのラクトリコピンによる初代肝細胞の処置は、主要なハウスキーピング遺伝子−３６Ｂ４に対するＣＴの絶対値に大きく影響しなかった。これは、毒性の影響の非存在、初代肝細胞の生存性及び細胞から抽出されたＲＮＡの良好な品質を確認する。
【００８１】
結果から、インスリンが、主要な肝臓特異的脂質生成転写因子−ＳＲＥＢＰ−１ｃに対するｍＲＮＡを、選択的に上方制御することは明白であり、この修正されたＣＴ値は、基底値の５６．５倍まで上昇した。ラクトリコピン自体は、基底ＳＲＥＢＰ−１ｃレベルを４倍亢進した。一方、インスリンによるＳＲＥＢＰ−１ｃの誘導は、２倍（わずか２７．５倍）までのラクトリコピンの添加によって減少した。
【００８２】
ＨｅｐＧ−２研究と同様に、ラクトリコピンの存在は、主要なコレステロール生成転写因子−ＳＲＥＢＰ−２に対するｍＲＮＡを、特にインスリンの存在中で減少することが見出された。ＳＲＥＢＰ−１ｃのインスリンに対する鈍化した反応、並びにラクトリコピンの存在中のインスリンに対するＳＲＥＢＰ−２のレベルの減少は、機能的に有意であるように見受けられ、そして初代肝細胞中で代謝的な重要性を有する。特に、ラクトリコピンの存在は、ＳＲＥＢＰに対する標的遺伝子であることが知られている、主要な脂質生成ｍＲＮＡ−ＦＡＳ、ＳＣＤ−１、ＡＣＬ及びＩＮＳＩＧ−１のインスリン反応を、完全に消滅した。これらのｍＲＮＡレベルは、ラクトリコピン処置後、近辺の対照値に対して修正された。
【００８３】
ラクトリコピンの作用のもう一つの重要な特徴は、主要な糖新生酵素−ＰＥＰＣＫ及びＧ−６−パーゼに対する活性を制御することであり、これらのｍＲＮＡレベルは、ラクトリコピンのみで、それぞれ６６．０％及び７０％に減少した。インスリンは、ＰＥＰＣＫのｍＲＮＡを殆んど９０％低下し、そしてラクトリコピンの存在中で同じ効力を示した。対照的に、インスリンに対するＧ−６−パーゼの反応は、それほど激的ではなかった。注目すべきは、ラクトリコピンとのインキュベーションは、より高いインスリン感受性をＧ−６−パーゼに与えた。このｍＲＮＡは、インスリン単独によりほんの僅か減少される（対照レベルの９０％に）が、しかし両方−ラクトリコピン及びインスリンの存在中で、更に有意に減少（対照レベルの６２％に）された。
【００８４】
ラクトリコピンは、糖新生に関係しない、いくつかの他のインスリン標的遺伝子のインスリン感受性を亢進する。初代肝細胞がラクトリコピンの存在中でインスリンに暴露された場合、インスリンのＩＮＳＩＧ−２、ＩＲＳ−２及びＩＧＦＢＰ−１のｍＲＮＡに対する更に深刻な負の効果が存在する。
【００８５】
従って、ラクトリコピンは、転写的脂質生成反応を減少し、そしてＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡは、インスリンの存在中でラットの初代肝細胞中の糖新生酵素に対するより高いインスリン感受性を与えた。
【００８６】
実施例３
肝臓の代謝に対するラクトリコピンの影響の機構を更に研究するために、本出願人等は、代謝症候群の最も重要な特徴を示すことが知られたズッカー肥満型ラット（ＺＦＲ）を使用して研究を行った。若い（生後９週間）のＺＦＲのオスを照合対照（ズッカーの痩せ型同腹仔）と共に、表３に要約した実験に使用した。
【００８７】
表３は、生後９週においてさえ、ＺＦＲが有意に高い体重及び肝臓重量、増加した血漿トリグリセリド及びコレステロールを有することを示す。然しながら、実質的に誘導されたインスリンレベルにも関わらず、血漿糖濃度は対照レベルのままであった。ラクトリコピン（Ｉｎｎｅｏｖ）は、痩せ型ラットの体重を減少しなかったが、ラクトリコピンによる８日間の食餌処置は、ＺＦＲの体重及び肝臓重量の注目すべき減少に導いた。肝臓重量のある程度の減少も、更にラクトリコピンで処置された対照ラット（ＺＬＲ）において見られた。最も強烈な変化は、血漿トリグリセリド及びコレステロールレベルに起こった−これらの両方は、ラクトリコピン処置により、それぞれ８３．１％及び６４．３％低下した。更にラクトリコピンで飼われたＺＦＲの血漿インスリンレベルに統計的に有意な減少も存在した。
【００８８】
表４に示すように、ＺＦＲは、増加した量のＳＲＥＢＰ−１ｃ転写物、並びに主要な脂質生成酵素−ＦＡＳ、ＳＣＤ−１、ＡＣＬに対する高いｍＲＮＡを有していた。ラクトリコピン処置は、ラクトリコピン食餌のＺＦＲにおける残存抗インスリン血症を反映して、影響は部分的であったが、脂質生成のｍＲＮＡの誘導を減少した。図２に示した免疫ブロットの結果は、ＺＦＲが、肝臓の核抽出物中のＳＲＥＢＰ−１タンパク質の有意に高いレベルを有し、そしてこの量が、ラクトリコピン処置により変化しないことを示した。
【００８９】
対照値まで低下した唯一のｍＲＮＡは、脂肪酸シンターゼであった。肝臓のＡＣＬ及びＳＣＤ−１のｍＲＮＡは、ＺＦＲ非処置グループと比較して２倍まで減少した。これらの脂質生成ｍＲＮＡの変化は、ラクトリコピンで処置されたＺＦＲの血漿トリグリセリドレベルの減少を説明し、そして実施例２に与えられたデータを確認する。
【００９０】
ＳＲＥＢＰ−２の変化しないレベルは、非処置のＺＦＲの肝臓中のコレステロール生成酵素（ＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｒ及びＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｓ）の正常値と一致し、そしてこれは、免疫ブロットのデータ（図２参照）によって確認された。従って、若いＺＦＲの高コレステロール血症は、肝細胞におけるコレステロールの生合成の活性化より、むしろ肝臓の減少したＬＤＬ再取り込みに起因する。表現型に関わらず、ラクトリコピン処置は、コレステロール生合成の主要な転写活性化因子に対するｍＲＮＡレベルを減少した−ＳＲＥＢＰ−２（約２倍）。この発見は、実施例１及び２として示されたＨｅｐＧ２及び初代肝細胞の研究からの結果を支持する。然しながら、ＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡの減少は、糖尿病及び非糖尿病のラットの肝臓のＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｒ及びＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｓ転写に対して異なった影響を有していた。肥満型ラットは、ＨＭＧ−ＣｏＡ−Ｒ及びＨＭＧ−ＣｏＡ−ＳのｍＲＮＡレベルの両方の有意な減少を示し、一方痩せ型の同腹仔は、対照レベルの近辺の値を有していた。
【００９１】
更にラクトリコピンで処置されたＺＦＲの肝臓における免疫ブロット分析（図１）によって確認されたＬＤＲ−Ｒタンパク質の注目すべき誘導が存在する。この観察は、ＺＦＲの血漿脂質レベルに対するラクトリコピン食餌の顕著な正常化効果を説明する。ＬＤＬ−受容体の代謝回転は、ラットの肝臓中のＳＲＥＢＰ−２によって制御される。ラクトリコピンで処置されたＺＦＲの肝臓中のＳＲＥＢＰ−２の核の形態の実質的な上方制御が存在する。このような増加は、ラクトリコピンによる肝臓のＬＤＬ−受容体活性化の機構を説明することができる。
【００９２】
ラクトリコピン食餌は、胆汁へのコレステロールの分泌に責任のある酵素、Ｃｙｐ−７アルファのｍＲＮＡに効果を有しなかった。ズッカー肥満型ラットは、異常に低い胆汁コレステロール分泌速度を示す独特の動物モデルであることで知られている。この問題は、その肝臓におけるＣＹＰ−７アルファ転写の減少した速度の結果として発生する。実際、表４に示すように、ＣＹＰ７αのｍＲＮＡのレベルは、ＺＦＲにおいて減少し、そして行われた処置に関係なくほぼ同一レベル近辺のままである。
【００９３】
ズッカー肥満型ラットは、その極端な、そして迅速な表現型の形成のために選択され、これは、ヒトにおける代謝症候群に似ており、そして高インスリン血症、体重増加、高脂質血症及び脂肪肝をもたらす。全てのこれらの特質は、ラクトリコピン処置によってある程度矯正された。
【００９４】
然しながら、表３に示すように、生後９週間のＺＦＲは、高インスリン血症にも関わらず、正常血糖のままである。これは、研究に使用されたラットが、ＩＩ型糖尿病の重要な特質であり、そしてもう一つの密接に関係するズッカーラットの系統−ズッカー糖尿病ラット（ＺＤＲ）の明白な特徴である活性化された糖新生を、なお発症していないことの指標を与える。損なわれた（しかしなお機能している）インスリン感受性の結果として、非処置のＺＦＲの肝臓中のインスリン感受性のｍＲＮＡ（ＰＥＰＣＫ、Ｇ−６−パーゼ、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＲＳ−２）の有意な減少が存在する。従って、このようなＺＦＲの肝臓中のインスリン反応の保存されたレベルは、本出願人等が、糖新生の機構に対するラクトリコピンの可能性のあるｉｎ ｖｉｖｏの効果及びラットの初代肝細胞研究（実施例２）において見られた肝臓のインスリン感受性を評価することを不可能にする。
【００９５】
ヒト肝細胞腫細胞系ＨｅｐＧ２（実施例１参照）において、ラクトリコピンは、主要な遺伝子の転写を抑制し、コレステロールの恒常性を制御する−ＳＲＥＢＰ−２。この観察は、もう一つの種類の細胞−初代ラット肝細胞を使用して確認された（実施例２参照）。ＳＲＥＢＰ−２に対するラクトリコピンの影響は、更にズッカー肥満型ラットにおいて再現され、これの血漿コレステロール及びトリグリセリドレベルは、０．２％ラクトリコピン食餌による８日間の処置後、対照値近辺に低下した。血漿脂質レベルに対するラクトリコピンの正常化効果は、本出願人等の観点では、肝臓中のＳＲＥＢＰ−２の減少したレベルだけでなく、更にラクトリコピン食餌のラットにおいて観察された肝臓のＬＤＬ−Ｒ（ｍＲＮＡ及びタンパク質）の亢進されたレベルにも関連する。従って、実施例１、２及び３は、ラクトリコピンが、コレステロールの恒常性に異なったレベルで−ＳＲＥＢＰ−２の転写、ＬＤＬ−受容体発現の制御、ＳＣＡＰのｍＲＮＡレベルへの影響及び全体のコレステロール合成速度で影響することを明らかにする。
【００９６】
ＨｅｐＧ２細胞のラクトリコピンとのインキュベーションが、インスリン誘導遺伝子−１（ＩＮＳＩＧ−１）の抑圧に導くことが予期せずに見出され、そして独立の研究で再現された。本出願人等は、ラクトリコピンが、培養細胞及び肝臓中の肝臓特異的なインスリン反応を制御することができると仮定した。ラクトリコピンのＩＮＳＩＧ−１のｍＲＮＡに対する負の影響も、更にラットの初代肝細胞において、特にインスリンの存在中で観察された。驚くべきことに、本出願人等は、更にラクトリコピンによる短期の食餌的処置が、ズッカー肥満型ラットの体重及び肝臓重量、血漿インスリンレベルを低下し、そして血漿脂質プロファイルの正常化に導くことも観察した。
【００９７】
従って、ＩＮＮＥＯＶラクトリコピン製剤は、代謝症候群の多数の特徴−ラクトリコピンで処置されたズッカー肥満型ラットの、血漿インスリンレベルの減少、血漿脂質、肝臓重量／体重比、脂質生成遺伝子の転写の正常化及び肝臓のＬＤＬ−受容体タンパク質の増加に対する深在性の影響を有する。
【００９８】
実施例４
Ａ．血漿脂質、糖及びインスリンレベルに対するラクトリコピン生産物の影響
血漿脂質、糖及びインスリンレベルに対するラクトリコピン生産物の影響を、志願者のヒトにおいて研究し、そして結果を表５−１１に示した。
【００９９】
４５−６２歳の年齢の１６人の志願者（男性８人及び女性８人）を、このパイロット臨床治験のために選択した。この内１２人（男性６人及び女性６人）に、ラクトリコピン（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）、ＬＬ、を与え、そしてこの内４人（男性２人及び女性２人）に、Ｌｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ、ＬＭ、（Ｖｉｔａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を与えた。最初のグループに糖尿病を持つ二人の患者がおり、そして後者のグループには糖尿病を持つ二人の患者がいた。これらの糖尿病患者に対して、脂質レベルに加えて、糖の濃度も更にモニターした。インスリンの濃度も、更に全ての１６人の患者においてモニターした。ＬＬを、３人の患者に一日二回食事と供に１錠のドラジェで；他の９人の患者に一日三回食事と共に１錠のドラジェで与えた。ＬＭは、毎日３カプセル食事と共に与えた。
【０１００】
血清試料を、患者の血液から、処置の前及びこれが始まった後２週間ごとに収集した。両方のリコピン生産物による処置を、２ヶ月間続けた。
これらの志願者の血清脂質パラメータに対するＬＬ及びＬＭの影響の結果を、表５、６、７及び８に示す。これらの結果は、一日当り２又は３錠のＬＬのドラジェ（表５及び６）、或いは３カプセルのＬＭ（表７及び８）のいずれかの投与が、全コレステロール及びトリグリセリドの濃度の減少を起こしたことを示す。ＬＬのみの投与も、更にＣＨ−ＬＤＬの濃度の有意な減少（ｐ＜０．０５）を起こした。志願者の他の脂質パラメータは、有意には影響されなかった。
【０１０１】
処置前のこれらの脂質のレベルがより高いほど、より激しい血清中のその濃度の減少が見出されたことを注記することは興味あることである。例えば、９番の患者において、ＬＬによる僅か２週間の処置後、全コレステロールのレベルは、２４７から１５８ｍｇ／ｄＬへ殆んど３６％減少した（表５）。
【０１０２】
リコピンの異なった製剤の投与の影響の比較は、血清の全コレステロール、ＬＤＬコレステロール及びトリグリセリドのレベルに対して、ＬＬがＬＭより激しい影響を有することを示した。
【０１０３】
更に、ＬＬ又はＬＭのいずれかの処方の吸収性の、即ち生体利用可能なリコピン製剤の使用が、高いレベルの血清糖濃度を持つ患者の血清糖濃度の減少をもたらすことも更に重要であった（表９及び１０）。
【０１０４】
ＬＬ又はＬＭの投与が、非高血糖症の患者の血清中の糖の生理学的レベルに影響しなかったが、しかし高血糖を持つ患者における糖を、減少又は正常化することが可能であること（太字の数字）を観察することは興味あることであった。
【０１０５】
高血糖症の患者は、６ｍｍｏｌ／ｌより大きい血清糖濃度を持つ者である。
リコピンの異なった製剤の投与の影響の比較は、ＬＬが、高血糖を持つ患者の血漿糖レベルを平均２８％減少することが可能であり、一方ＬＭは、このパラメータを僅か１６％減少することが可能であることを示した。
【０１０６】
ＬＬの同様な影響は、インスリンレベルに関して観察された。高いインスリンレベルを持つ患者において、ＬＬの２週間の投与は、その正常化をもたらす（太字の数字）。然しながら、この製剤は、インスリンの正常な生理学的レベルを持つ患者のインスリンの濃度に影響しなかった（表１１）。
【０１０７】
Ｂ．ヒトの体重に対するリコピン生産物の影響
体重に対するリコピン生産物の影響を、４５−６２歳の年齢の１８人の志願者、男子１０人及び女性８人を含む第２のパイロット臨床治験において研究した。９人の志願者、男性５人及び女性４人に、１錠のＬａｃｔｏ−ＬｙｃｏｐｅｎｅＴＭ（ＩＮＮＥＯＶ，Ｌ’Ｏｒｅａｌ（ＵＫ）Ｌｔｄ，Ｌｏｎｄｏｎ）のドラジェ、ＬＬを、一日三回食事と共に与えた。他の９人、男性５人及び女性４人に、１カプセルのＬｙｃ−Ｏ−ＭａｔｏＴＭ、ＬＭ （Ｖｉｔａ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、一日三回食事と共に与えた。
【０１０８】
治験を２ヶ月続け、そして志願者の体重を治験の前及び後に測定した。治験の結果を、表１２に示す。
ＬＬ及びＬＭの両方の２ヶ月間の投与は、それぞれの処置グループのそれぞれ５及び３人の志願者の体重減少をもたらした。然しながら、全ＬＬグループの全体重減少は、ＬＭグループより３倍大きく、即ち、前者で１５ｋｇ、そして後者で５ｋｇであった。平均して、ＬＬグループのそれぞれのヒトは、１．７ｋｇ減少し、そしてＬＭグループのそれぞれのヒトは、０．６ｋｇ減少した。過体重の志願者が、ＬＬのこの影響からの利益をより多く有意に受けることを注記することは興味あることである。彼等の５人中の４人は、２ないし５ｋｇ間の体重を損失した。ＬＭグループにおいて、５人の過体重のヒトの１人のみが体重を損失した。
【０１０９】
従って、リコピン処置は、患者の代謝症候群の基本的な臨床的特徴（高コレステロール血症、高トリグリセリド血症及び高血糖症）を減少する。
これらの臨床的データは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び動物における実験で観察された実験結果を支持し、そしてラクトリコピン制剤の吸収性の、そして生体利用可能な形態が、代謝症候群、インスリン抵抗性（重症のインスリン抵抗性の症候群を含む）、耐糖能、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変の治療において、そして更に体重調節及び肥満症の治療において使用することができる有効な治療生産物であることができる可能性があることを示す。
【０１１０】
Ｃ．血清脂質に対するスタチンの影響
Ｌｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒ（アトルバスタチン）の血清脂質レベルに対する影響を、志願者のヒトにおいて研究し、そして結果を表１３に示す。
【０１１１】
４５−５５歳の年齢の１０人の志願者、男性５人及び女性５人を、このパイロット臨床治験のために選択した。４０ｍｇのＬｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒを、経口的に食事と共にそれぞれの患者に毎日、２ヶ月間与えた。
【０１１２】
血清試料を患者の血液から、処置の前及び２ヵ月の処置後収集した。
これらの志願者の血清脂質に対するＬｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒの影響の結果を、表１３に示す。表に示されたデータは、Ｌｉｐｉｔｏｒ−Ｌｉｐｒｉｍａｒ、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が、ＬＬより良好にＣＨ−ＬＤＬを減少すること（前者において３５％、そして後者において１３．３％）を証明している。然しながら、ラクトリコピンは、全コレステロール及びトリグリセリドの両方をスタチンより低いレベルまで減少する：リピトールにおける全コレステロール（ＣＨ）の減少は、１７％であり、そしてＬＬにおいて、これは２７％であった；リピトールにおけるトリグリセリド（ＴＧ）の減少は、２２％であり、そしてＬＬにおいて、これは３４％であった（表６及び１３）。
【０１１３】
血清脂質レベルを減少することにおける少ない効果と同様に、スタチンは、患者の０．５％ないし２．０％において、ある程度の副作用を有することで知られている。例えば、スタチンは、トランスアミナーゼの高いレベル又は筋肉痛、圧痛或いは脱力感を起こすことができる。これらの症状は、ある患者において、発熱又はインフルエンザ様症状、腹痛又は説明できない疲れによって伴われることができる。更に、肝臓疾患及び筋肉炎は、スタチン類を摂取することにおける禁忌の中にあり、そしてこれらは、妊娠中に処方されるべきではない。他方、ラクトリコピン製剤の長期の投与は、既知の禁忌又は副作用を有しない。
【０１１４】
これは、先に与えたデータと共に、ＬＬのようなラクトリコピン製剤を、代謝症候群、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、高血圧、多嚢胞性卵巣症候群、肥満症、脂肪肝、慢性肝炎、及び肝硬変を含む各種の疾患の治療におけるスタチン類の代替物として使用することができることへの指標を提供する。
【０１１５】
更に、ＬＬのようなラクトリコピン製剤は、スタチン類との組合せにおいて有用であることができ、後者の治療的投与量を減少することを可能にする。これは、スタチン類におけるより少ない禁忌をもたらし、そしてその可能性のある副作用を最小化する。
【０１１６】
Ｄ．更なる製剤
血清脂質レベルに対する単離されたラクトリコピン製剤（ＩＮＤＥＮＡ）の影響を、志願者のヒトにおいて研究し、そして結果を表１５及び１６に示す。
【０１１７】
これらの結果は、ラクトリコピン製剤（ＩＮＤＥＮＡ）は、血清脂質レベルを減少するが、しかしヒトの血漿中の糖レベルに対して有意な影響を有しないことを示す。然しながら、これは、これらの高いレベルを持つ全ての患者の血清中の全コレステロール及びトリグリセリドの濃度を正常化する。治療前のこれらのパラメータがより高いレベルである場合、より有意な減少が観察される。例えば、２５０ｍｇ／ｄＬより上の全コレステロールを持つ患者において、減少は平均９４ｍｇ／ｄＬであるか、又は３５％より多かった。
【０１１８】
２５０ｍｇ／ｄＬより少ないが、しかしなお２００ｍｇ／ｄＬの正常なレベルより上の初期濃度を持つ患者において、減少は、平均５４ｍｇ／ｄＬ、又は２５％であった。同様なパターンは、トリグリセリドにおいても観察された。両方のパラメータの減少は、これらの脂質の生理学的に正常なレベル−１５％の全コレステロール及び２０％のトリグリセリドを持つ患者においてさえ観察された。
【０１１９】
より激しくない影響は、ＣＨ−ＨＤＬ及びＣＨ−ＬＤＬ濃度において観察された。前者の減少したレベルを持つ５人の患者において、４人は、処置後この脂質の正常化されたレベルを有していた。初期にＣＨ−ＬＤＬの高いレベルを持っていた４人の患者の内、２人のみにおいて、このパラメータが正常化された。
【０１２０】
実施例５
食品基質へのラクトリコピンの組込み
一塊のパンのためのレシピは：
イースト−茶匙（ｔｓｐ）３／４、強力粉−４００ｇ、砂糖−茶匙１、バター−１５ｇ、粉乳−茶匙１、塩−茶匙１、ラクトリコピン（ＬＬ）（ＩＮＮＥＯＶ）のドラジェを溶解した水２８０ｍｌであった。
【０１２１】
四つの塊りを焼いた：一つ（対照）は、ＬＬを含有せず、２番目は、５錠のＬＬのドラジェを、３番目は、１０錠のＬＬのドラジェを、そして４番目は、２０錠のＬＬのドラジェを含有していた。
【０１２２】
試験
パンを目隠し試験した５人の志願者は、これらの塊りの全ての四つ間の質感及び風味に差を見出せなかった。更に、パンの抗酸化活性を試験した。これは、ＡｔｈｅｒｏＡｂｚｙｍｅＴＭＥＬＩＳＡキット（ＣＴＬ，ＵＫ）を使用して、製造業者の説明書に記載されたプロトコルに従って行った。ラクトリコピンを含んでなるパンは、抗酸化活性を有していたが、一方対照のパンは有していなかった（表１４）。
【０１２３】
実施例６
食品基質へのリコピンの組込み
四個のスコーンのバッチのためのレシピは：
膨らし粉入り小麦粉−１７５ｇ、膨らし粉−茶匙１、塩−一抓み、上白糖−２０ｇ、無塩バター−３７ｇ、ＩＮＮＥＯＶドラジェの形態のＬＬを溶解した牛乳−９０ｍｌであった。四つのスコーンのバッチを焼いた：一つ（対照）は、ＬＬを含有していなく、二番目は、スコーン当り０．５錠のドラジェのＬＬを、三番目は、スコーン当り１錠のドラジェのＬＬを、そして四番目は、スコーン当り２錠のドラジェのＬＬを含有していた。
【０１２４】
試験
これらのスコーンを目隠しで試験した５人の志願者は、これらの全ての四つのバッチからのスコーン間に質感又は風味に差を見出さなかった。更に、スコーンの抗酸化活性を試験した。これは、ＡｔｈｅｒｏＡｂｚｙｍｅＴＭＥＬＩＳＡキット（ＣＴＬ，ＵＫ）を使用して、製造業者の説明書に記載されたプロトコルに従って行った。ラクトリコピンを含んでなるスコーンは、抗酸化活性を有していたが、一方対照のスコーンは有していなかった（表１４）。
【０１２５】
【表１】
【０１２６】
【表２】
【０１２７】
【表３】
【０１２８】
【表４】
【０１２９】
【表５ａ】
【０１３０】
【表５ｂ】
【０１３１】
【表５ｃ】
【０１３２】
【表６】
【０１３３】
【表７ａ】
【０１３４】
【表７ｂ】
【０１３５】
【表８】
【０１３６】
【表９】
【０１３７】
【表１０】
【０１３８】
【表１１】
【０１３９】
【表１２】
【０１４０】
【表１３】
【０１４１】
【表１４】
【０１４２】
【表１５ａ】
【０１４３】
【表１５ｂ】
【０１４４】
【表１６】
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
【図１】図１は、ＨｅｐＧ２細胞の膜及び核画分中のＳＲＥＢＰ−１及び−２の量に対するリコピンの影響を示す。
【図２】図２は、リコピン処理後のズッカー肥満型（ＺＦＲ）及び痩せ型（ＬＺＲ）ラットの肝臓膜及び核抽出物中のＳＲＥＢＰ−１、−２及びＬＤＬ−Ｒの免疫ブロット分析を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リコピン化合物を、治療的に有効な量で、それを必要とする個体に投与することを含んでなる、代謝機能障害を治療する方法。
【請求項２】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記代謝機能障害が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項１ないし５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に含まれる、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記リコピン化合物が、スタチンとの組合せによる投与のためのものである、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記リコピン化合物を、スタチンとの組合せで投与することを含んでなる、請求項１ないし８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
代謝機能障害の治療のための、医薬の製造におけるリコピン化合物の使用。
【請求項１３】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記代謝機能障害が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項１２又は１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項１２ないし１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項１２ないし１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項１２ないし１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項１２ないし１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に含まれる、請求項１２ないし１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
前記医薬が、スタチンとの投与のためのものである、請求項１２ないし２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
前記医薬が、更にスタチンを含んでなる、請求項１２ないし２１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２３】
代謝機能障害に伴う症状の治療のための方法であって：
リコピン化合物を、治療的に有効な量で、それを必要とする個体に投与すること；
を含んでなる、前記方法。
【請求項２４】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項２３又は２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項２３ないし２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項２３ないし２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項２３ないし２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項２４ないし２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に含まれる、請求項２４ないし２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記リコピン化合物が、スタチンとの投与のためのものである、請求項２４ないし３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記リコピン化合物を、スタチンとの組合せで投与することを含んでなる、請求項２４ないし３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
代謝機能障害に伴う症状の治療において使用するための、医薬の製造におけるリコピン化合物の使用。
【請求項３５】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項３４又は３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項３４ないし３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３８】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項３４ないし３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３９】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項３４ないし３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４０】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項３５ないし３９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４１】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に処方される、請求項３５ないし４０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４２】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記医薬が、スタチンとの投与のためのものである、請求項３５ないし４２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４４】
前記医薬が、更にスタチンを含んでなる、請求項３３ないし３９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４５】
代謝機能障害を治療するための組合せにおいて使用するための、リコピン化合物及びスタチンを含有するキット。
【請求項４６】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
前記代謝機能障害が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項４５又は４６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４８】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項４５ないし４７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４９】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項４５ないし４７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５０】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項４５ないし４７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５１】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項４６ないし５０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５２】
代謝機能障害に伴う症状を治療するための組合せにおいて使用するための、リコピン化合物及びスタチンを含有するキット。
【請求項５３】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
前記症状が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項５２又は５３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５５】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５６】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５７】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５８】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項５２ないし５７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５９】
代謝機能障害の治療のための医薬の製造における、リコピン化合物及びスタチンの組合せの使用。
【請求項６０】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項５９に記載の使用。
【請求項６１】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項５９又は６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項５９ないし６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６３】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項５９ないし６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６４】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項５９ないし６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６５】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項６１ないし６４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６６】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に処方される、請求項６０ないし６５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６７】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
代謝機能障害に伴う症状の治療のための医薬の製造における、リコピン化合物及びスタチンの組合せの使用。
【請求項６９】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項６８に記載の使用。
【請求項７０】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項６８又は６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項６８ないし７０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７２】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項６８ないし７０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７３】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項６８ないし７０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７４】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項６９ないし７３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７５】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に処方される、請求項６９ないし７４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７６】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項７５に記載の使用。
【請求項７７】
代謝機能障害を治療するためのリコピン化合物を含んでなる食品生産物であって、ここにおいて、前記食品生産物中に、前記リコピン化合物が天然には存在していない、前記食品生産物。
【請求項７８】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項７７に記載の食品生産物。
【請求項７９】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項７７又は７８のいずれか１項に記載の食品生産物。
【請求項８０】
前記代謝機能障害が：
肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群；
からなる群から選択される、請求項７７ないし７９のいずれか１項に記載の食品生産物。
【請求項８１】
更にスタチンを含んでなる、請求項７７ないし８０のいずれか１項に記載の食品生産物。
【請求項８２】
（ｉ）食品生産物の成分を用意し、
（ｉｉ）リコピン化合物を前記成分と混合し、
（ｉｉｉ）前記成分及び前記リコピン化合物を食品生産物に調合すること
を含んでなる、代謝機能障害を治療するための食品生産物を製造する方法。
【請求項８３】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項８２又は８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記代謝機能障害が：
肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群；
からなる群から選択される、請求項８２ないし８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１】
リコピン化合物を、治療的に有効な量で、それを必要とする個体に投与することを含んでなる、代謝機能障害を治療する方法。
【請求項２】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記代謝機能障害が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項１又は２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項１ないし５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に含まれる、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記リコピン化合物が、スタチンとの組合せによる投与のためのものである、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記リコピン化合物を、スタチンとの組合せで投与することを含んでなる、請求項１ないし８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
代謝機能障害の治療のための、医薬の製造におけるリコピン化合物の使用。
【請求項１３】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記代謝機能障害が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項１２又は１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項１２ないし１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項１２ないし１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項１２ないし１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項１２ないし１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に含まれる、請求項１２ないし１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
前記医薬が、スタチンとの投与のためのものである、請求項１２ないし２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
前記医薬が、更にスタチンを含んでなる、請求項１２ないし２１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２３】
代謝機能障害に伴う症状の治療のための方法であって：
リコピン化合物を、治療的に有効な量で、それを必要とする個体に投与すること；
を含んでなる、前記方法。
【請求項２４】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項２３又は２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項２３ないし２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項２３ないし２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項２３ないし２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項２４ないし２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に含まれる、請求項２４ないし２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記リコピン化合物が、スタチンとの投与のためのものである、請求項２４ないし３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記リコピン化合物を、スタチンとの組合せで投与することを含んでなる、請求項２４ないし３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
代謝機能障害に伴う症状の治療において使用するための、医薬の製造におけるリコピン化合物の使用。
【請求項３５】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項３４又は３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項３４ないし３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３８】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項３４ないし３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３９】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項３４ないし３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４０】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項３５ないし３９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４１】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に処方される、請求項３５ないし４０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４２】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記医薬が、スタチンとの投与のためのものである、請求項３５ないし４２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４４】
前記医薬が、更にスタチンを含んでなる、請求項３３ないし３９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４５】
代謝機能障害を治療するための組合せにおいて使用するための、リコピン化合物及びスタチンを含有するキット。
【請求項４６】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
前記代謝機能障害が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項４５又は４６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４８】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項４５ないし４７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４９】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項４５ないし４７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５０】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項４５ないし４７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５１】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項４６ないし５０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５２】
代謝機能障害に伴う症状を治療するための組合せにおいて使用するための、リコピン化合物及びスタチンを含有するキット。
【請求項５３】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
前記症状が、肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群からなる群から選択される、請求項５２又は５３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５５】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５６】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５７】
前記リコピン化合物が、イソフラボンと共に処方される、請求項５２ないし５４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５８】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項５２ないし５７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項５９】
代謝機能障害の治療のための医薬の製造における、リコピン化合物及びスタチンの組合せの使用。
【請求項６０】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項５９に記載の使用。
【請求項６１】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項５９又は６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項５９ないし６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６３】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項５９ないし６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６４】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項５９ないし６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６５】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項６１ないし６４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６６】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に処方される、請求項６０ないし６５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６７】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
代謝機能障害に伴う症状の治療のための医薬の製造における、リコピン化合物及びスタチンの組合せの使用。
【請求項６９】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項６８に記載の使用。
【請求項７０】
前記代謝機能障害に伴う症状が、血圧の上昇、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、高ＬＤＬコレステロール及び／又は低ＨＤＬコレステロール並びに微量アルブミン尿症からなる群から選択される、請求項６８又は６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
前記リコピン化合物が、乳清タンパク質と共に処方される、請求項６８ないし７０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７２】
前記リコピン化合物が、油と共に処方される、請求項６８ないし７０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７３】
前記リコピン化合物が、一つ又はそれより多いイソフラボンと共に処方される、請求項６８ないし７０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７４】
前記リコピン化合物が、医薬組成物中に、医薬的に受容可能な賦形剤と共に含まれる、請求項６９ないし７３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７５】
前記リコピン化合物が、食品生産物中に処方される、請求項６９ないし７４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７６】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項７５に記載の使用。
【請求項７７】
代謝機能障害を治療するためのリコピン化合物を含んでなる食品生産物であって、ここにおいて、前記食品生産物中に、前記リコピン化合物が天然には存在していない、前記食品生産物。
【請求項７８】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項７７に記載の食品生産物。
【請求項７９】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項７７又は７８のいずれか１項に記載の食品生産物。
【請求項８０】
前記代謝機能障害が：
肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群；
からなる群から選択される、請求項７７ないし７９のいずれか１項に記載の食品生産物。
【請求項８１】
更にスタチンを含んでなる、請求項７７ないし８０のいずれか１項に記載の食品生産物。
【請求項８２】
（ｉ）食品生産物の成分を用意し、
（ｉｉ）リコピン化合物を前記成分と混合し、
（ｉｉｉ）前記成分及び前記リコピン化合物を食品生産物に調合すること
を含んでなる、代謝機能障害を治療するための食品生産物を製造する方法。
【請求項８３】
前記食品生産物が、パン、シリアル、ビスケット、バター、食品塗布物、チーズ、ヨーグルト又は飲料である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記リコピン化合物が、リコピンである、請求項８２又は８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記代謝機能障害が：
肥満症、インスリン抵抗性、耐糖能の低下、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、脂肪肝、慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、及び代謝症候群；
からなる群から選択される、請求項８２ないし８４のいずれか１項に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００９−５３５３０３（Ｐ２００９−５３５３０３Ａ）
【公表日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０４８２５（Ｐ２００９−５０４８２５）
【出願日】平成１９年４月１３日（２００７．４．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００７／００１３６８
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２２３８２
【国際公開日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【出願人】（５０８３０５９１５）ケムメディカ・リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年４月１３日（２００７．４．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００７／００１３６８
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１２２３８２
【国際公開日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【出願人】（５０８３０５９１５）ケムメディカ・リミテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
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