修飾可変ドメイン分子、ならびにその産生および使用方法
本開示は、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位に負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、単離したタンパク質を提供し、本タンパク質は抗原に特異的に結合することができる。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される２つ以上の位置にて、負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質はニワトリリゾチーム、βガラクトシダーゼ、αアミラーゼおよびＢ５Ｒ以外の抗原に特異的に結合することができるか、または
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項２】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される位置にて、２つ以上の負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質は１０μＭを超える親和性で抗原に特異的に結合することができ、
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項３】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３３位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質はニワトリリゾチーム、βガラクトシダーゼ、αアミラーゼおよびＢ５Ｒ以外の抗原に特異的に結合することができるか、または
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項４】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３３位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質は１０μＭを超える親和性で抗原に特定に結合することができ、
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項５】
前記タンパク質は１００ｎＭを超える親和性で抗原に特異的に結合することができる、請求項２または４のいずれかに記載の単離したタンパク質。
【請求項６】
前記Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位の負荷電アミノ酸無しのタンパク質と比較すると凝集する傾向が少ない、前記請求項１〜５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項７】
前記Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位の負荷電アミノ酸無しのタンパク質と比較すると少なくとも約６０ｏＣまで加熱した後、凝集する傾向が少ない、前記請求項１〜５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項８】
少なくとも約６０ｏＣまで加熱した後、抗原に特異的に結合する能力を有する、前記請求項１〜７のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項９】
少なくとも約８０ｏＣまで加熱した後、凝集する傾向が少ない、および／または抗原に特異的に結合する能力を有する、前記請求項７または８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
ヒトタンパク質と結合することができる、前記請求項１〜９のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１１】
ヒト疾患に関連する、またはその原因となるタンパク質と結合することができる、前記請求項１〜１０のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記３２位の負荷電アミノ酸はグルタミン酸である、前記請求項１〜１１のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記負荷電アミノ酸は、アスパラギン酸である、前記請求項１〜１２のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１４】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２６位、３０位、３９位、４０位、５０位、５２位、５２ａ位および５３位からなる群から個別に、または集団として選択される、１つ以上の残基にて負荷電アミノ酸を更に含む、前記請求項１〜１３のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１５】
負荷電アミノ酸はアスパラギン酸である、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１６】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う３１位、３２位および３３位にて負荷電アミノ酸を含む、請求項１〜１５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１７】
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３１位にてアスパラギン酸と、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位にてグルタミン酸またはアスパラギン酸と、
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３３位にてアスパラギン酸と
を含む、請求項１６に記載のタンパク質。
【請求項１８】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位および３３位にて負荷電アミノ酸を含む、前記請求項１〜１５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１９】
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位にてグルタミン酸またはアスパラギン酸と、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３３位にてアスパラギン酸と
を含む、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２０】
２８位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を更に含む、請求項１６〜１９のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項２１】
前記２８位および／または３５位の負荷電アミノ酸はアスパラギン酸である、請求項２０に記載のタンパク質。
【請求項２２】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／もしくは３１位および／もしくは３２位および／もしくは３３位および／もしくは３５位以外の位置にてヒトであるか、ヒト化されるか、または脱免疫化されるか、あるいはヒトタンパク質もしくはその領域に融合されたものである、請求項１〜２１のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項２３】
抗原に特異的に結合することができる修飾された抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨはＫａｂａｔ付番システムに従う２８位、３１位、３３位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を含み、ＶＨの未修飾形態は前記負荷電アミノ酸を含まない、タンパク質。
【請求項２４】
抗原に特異的に結合することができる修飾された抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨはＫａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される２つ以上の位置にてアミノ酸を含み、未修飾タンパク質はＫａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて前記２つ以上の負荷電アミノ酸を含まない、タンパク質。
【請求項２５】
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３１位にてアスパラギン酸および／または、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位にてグルタミン酸および／または、
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３３位にてアスパラギン酸
を含む、請求項２３または２４に記載のタンパク質。
【請求項２６】
２８位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を更に含む、請求項２５に記載のタンパク質。
【請求項２７】
前記２８位および／または３５位の負荷電アミノ酸はアスパラギン酸である、請求項２６に記載のタンパク質。
【請求項２８】
前記タンパク質は、
（ｉ）抗体と、
（ｉｉ）単一ドメイン抗体と、
（ｉｉｉ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含むタンパク質と、
（ｉｖ）二重特異性抗体、三重特異性抗体または四重特異性抗体と、
（ｖ）（ｉｉ）〜（ｉｖ）のいずれかと抗体またはそのドメインのＦｃドメインとを含む融合タンパク質と、
からなる群から選択される、請求項１〜２７のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項２９】
化合物と結合した、請求項１〜２８のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項３０】
前記化合物は、放射性同位体、検出可能なラベル、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象において前記タンパク質の半減期を増加させる化合物、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２９に記載のタンパク質。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質および薬学的に許容可能な担体を含む、組成物。
【請求項３２】
多数の請求項１〜３０のいずれかに記載の複数種類のタンパク質を含む、ライブラリ。
【請求項３３】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質を含み、ＶＨの少なくとも３０％は、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位から選択される２箇所以上にて負荷電アミノ酸を含む、ライブラリ。
【請求項３４】
請求項１〜２８のいずれかに記載のタンパク質を単離する方法であって、請求項３２または３３に記載のライブラリを抗原に接触させ、そこに結合するタンパク質を単離することを含む、方法。
【請求項３５】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の凝集抵抗を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３１位、３２位、３３位および／または３５位のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することを含む、方法。
【請求項３６】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の凝集抵抗を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて２つ以上のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することを含み、未修飾タンパク質は置換位置にて負荷電アミノ酸を含まない、方法。
【請求項３７】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の凝集抵抗を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される２つ以上の位置にて負荷電アミノ酸を含むようにＶＨを修飾することを含み、未修飾タンパク質はＫａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて前記２つ以上の負荷電アミノ酸を含まない、方法。
【請求項３８】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、可溶性タンパク質の生産率を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて２つ以上のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することを含み、可溶性タンパク質の生産率が負荷電アミノ酸を欠くタンパク質の生産率と比較して増加する、方法。
【請求項３９】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、可溶性タンパク質の生産率を向上する方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３３位および／または３５位にてアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾し、前記タンパク質を生成することを含み、可溶性タンパク質の生産率が負荷電アミノ酸を欠くタンパク質の生産率と比較して増加する、方法。
【請求項４０】
クロマトグラフィ樹脂からの抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の回収率を増加させる、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積を減少させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて２つ以上のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換ることによってＶＨを修飾することと、前記タンパク質をクロマトグラフィ樹脂に接触させることを含み、負荷電アミノ酸を欠くタンパク質と比較して、クロマトグラフィ樹脂から回収されたタンパク質の回収率が増加するか、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積が減少する、方法。
【請求項４１】
クロマトグラフィ樹脂からの抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の回収率を増加させる、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積を減少させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３１位、３３位および／または３５位のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することと、前記タンパク質をクロマトグラフィ樹脂に接触させることを含み、負荷電アミノ酸を欠くタンパク質と比較して、クロマトグラフィ樹脂から回収されたタンパク質の回収率が増加するか、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積が減少する、方法。
【請求項４２】
医療における請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質、または請求項３１に記載の組成物の使用。
【請求項４３】
対象において疾患を治療する、または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質、または請求項３１に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４４】
細胞へ化合物を送達する方法であって、細胞を請求項２９あるいは３０に記載のタンパク質、または請求項３１に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
【請求項４５】
対象において疾患を診断する、または予後診断する方法であって、前記方法は、対象からの試料と、請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質または請求項３１に記載の組成物とを、前記タンパク質が抗原に結合し、複合体を形成するように接触させることと、前記複合体を検出することと、を含み、前記複合体の検出は前記対象の前記疾患の診断または予後診断となる、方法。
【請求項４６】
複合体のレベルを特定することを含み、前記複合体において増加したレベルまたは減少したレベルは、対象の疾患において診断または予後診断となる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
対象において抗原の場所を特定するまたは検出する方法であって、
（ｉ）請求項２９または３０に記載のタンパク質または請求項３１に記載の組成物と、検出可能なラベルに結合された前記タンパク質が抗原に結合するように対象に投与することと、
（ｉｉ）生体内で検出可能なラベルを検出するか、またはその場所を特定することと、
を含む、方法。
【請求項１】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される２つ以上の位置にて、負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質はニワトリリゾチーム、βガラクトシダーゼ、αアミラーゼおよびＢ５Ｒ以外の抗原に特異的に結合することができるか、または
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項２】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される位置にて、２つ以上の負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質は１０μＭを超える親和性で抗原に特異的に結合することができ、
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項３】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３３位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質はニワトリリゾチーム、βガラクトシダーゼ、αアミラーゼおよびＢ５Ｒ以外の抗原に特異的に結合することができるか、または
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項４】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３３位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を含有する抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む単離したタンパク質であって、
前記タンパク質は１０μＭを超える親和性で抗原に特定に結合することができ、
（ｉ）前記タンパク質は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合し、３２位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２９位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有し、
（ｉｉ）前記タンパク質は、ヒトＶＥＧＦに結合し、３１位および３３位にてアスパラギン酸を含む場合、２８位と３５位の間に少なくとも１つの負荷電アミノ酸を更に含有する
単離したタンパク質。
【請求項５】
前記タンパク質は１００ｎＭを超える親和性で抗原に特異的に結合することができる、請求項２または４のいずれかに記載の単離したタンパク質。
【請求項６】
前記Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位の負荷電アミノ酸無しのタンパク質と比較すると凝集する傾向が少ない、前記請求項１〜５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項７】
前記Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位の負荷電アミノ酸無しのタンパク質と比較すると少なくとも約６０ｏＣまで加熱した後、凝集する傾向が少ない、前記請求項１〜５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項８】
少なくとも約６０ｏＣまで加熱した後、抗原に特異的に結合する能力を有する、前記請求項１〜７のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項９】
少なくとも約８０ｏＣまで加熱した後、凝集する傾向が少ない、および／または抗原に特異的に結合する能力を有する、前記請求項７または８に記載のタンパク質。
【請求項１０】
ヒトタンパク質と結合することができる、前記請求項１〜９のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１１】
ヒト疾患に関連する、またはその原因となるタンパク質と結合することができる、前記請求項１〜１０のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記３２位の負荷電アミノ酸はグルタミン酸である、前記請求項１〜１１のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記負荷電アミノ酸は、アスパラギン酸である、前記請求項１〜１２のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１４】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２６位、３０位、３９位、４０位、５０位、５２位、５２ａ位および５３位からなる群から個別に、または集団として選択される、１つ以上の残基にて負荷電アミノ酸を更に含む、前記請求項１〜１３のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１５】
負荷電アミノ酸はアスパラギン酸である、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項１６】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う３１位、３２位および３３位にて負荷電アミノ酸を含む、請求項１〜１５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１７】
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３１位にてアスパラギン酸と、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位にてグルタミン酸またはアスパラギン酸と、
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３３位にてアスパラギン酸と
を含む、請求項１６に記載のタンパク質。
【請求項１８】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位および３３位にて負荷電アミノ酸を含む、前記請求項１〜１５のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項１９】
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位にてグルタミン酸またはアスパラギン酸と、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３３位にてアスパラギン酸と
を含む、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２０】
２８位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を更に含む、請求項１６〜１９のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項２１】
前記２８位および／または３５位の負荷電アミノ酸はアスパラギン酸である、請求項２０に記載のタンパク質。
【請求項２２】
Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／もしくは３１位および／もしくは３２位および／もしくは３３位および／もしくは３５位以外の位置にてヒトであるか、ヒト化されるか、または脱免疫化されるか、あるいはヒトタンパク質もしくはその領域に融合されたものである、請求項１〜２１のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項２３】
抗原に特異的に結合することができる修飾された抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨはＫａｂａｔ付番システムに従う２８位、３１位、３３位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を含み、ＶＨの未修飾形態は前記負荷電アミノ酸を含まない、タンパク質。
【請求項２４】
抗原に特異的に結合することができる修飾された抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、前記ＶＨはＫａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される２つ以上の位置にてアミノ酸を含み、未修飾タンパク質はＫａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて前記２つ以上の負荷電アミノ酸を含まない、タンパク質。
【請求項２５】
（ｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３１位にてアスパラギン酸および／または、
（ｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３２位にてグルタミン酸および／または、
（ｉｉｉ）Ｋａｂａｔ付番システムに従う３３位にてアスパラギン酸
を含む、請求項２３または２４に記載のタンパク質。
【請求項２６】
２８位および／または３５位にて負荷電アミノ酸を更に含む、請求項２５に記載のタンパク質。
【請求項２７】
前記２８位および／または３５位の負荷電アミノ酸はアスパラギン酸である、請求項２６に記載のタンパク質。
【請求項２８】
前記タンパク質は、
（ｉ）抗体と、
（ｉｉ）単一ドメイン抗体と、
（ｉｉｉ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含むタンパク質と、
（ｉｖ）二重特異性抗体、三重特異性抗体または四重特異性抗体と、
（ｖ）（ｉｉ）〜（ｉｖ）のいずれかと抗体またはそのドメインのＦｃドメインとを含む融合タンパク質と、
からなる群から選択される、請求項１〜２７のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項２９】
化合物と結合した、請求項１〜２８のいずれかに記載のタンパク質。
【請求項３０】
前記化合物は、放射性同位体、検出可能なラベル、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象において前記タンパク質の半減期を増加させる化合物、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項２９に記載のタンパク質。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質および薬学的に許容可能な担体を含む、組成物。
【請求項３２】
多数の請求項１〜３０のいずれかに記載の複数種類のタンパク質を含む、ライブラリ。
【請求項３３】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質を含み、ＶＨの少なくとも３０％は、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位から選択される２箇所以上にて負荷電アミノ酸を含む、ライブラリ。
【請求項３４】
請求項１〜２８のいずれかに記載のタンパク質を単離する方法であって、請求項３２または３３に記載のライブラリを抗原に接触させ、そこに結合するタンパク質を単離することを含む、方法。
【請求項３５】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の凝集抵抗を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３１位、３２位、３３位および／または３５位のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することを含む、方法。
【請求項３６】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の凝集抵抗を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて２つ以上のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することを含み、未修飾タンパク質は置換位置にて負荷電アミノ酸を含まない、方法。
【請求項３７】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の凝集抵抗を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位からなる群から選択される２つ以上の位置にて負荷電アミノ酸を含むようにＶＨを修飾することを含み、未修飾タンパク質はＫａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて前記２つ以上の負荷電アミノ酸を含まない、方法。
【請求項３８】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、可溶性タンパク質の生産率を増加させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて２つ以上のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することを含み、可溶性タンパク質の生産率が負荷電アミノ酸を欠くタンパク質の生産率と比較して増加する、方法。
【請求項３９】
抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、可溶性タンパク質の生産率を向上する方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３３位および／または３５位にてアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾し、前記タンパク質を生成することを含み、可溶性タンパク質の生産率が負荷電アミノ酸を欠くタンパク質の生産率と比較して増加する、方法。
【請求項４０】
クロマトグラフィ樹脂からの抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の回収率を増加させる、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積を減少させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位および／または３１位および／または３２位および／または３３位および／または３５位にて２つ以上のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換ることによってＶＨを修飾することと、前記タンパク質をクロマトグラフィ樹脂に接触させることを含み、負荷電アミノ酸を欠くタンパク質と比較して、クロマトグラフィ樹脂から回収されたタンパク質の回収率が増加するか、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積が減少する、方法。
【請求項４１】
クロマトグラフィ樹脂からの抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むタンパク質の回収率を増加させる、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積を減少させる方法であって、Ｋａｂａｔ付番システムに従う２８位、３１位、３３位および／または３５位のアミノ酸を負荷電アミノ酸に置換することによってＶＨを修飾することと、前記タンパク質をクロマトグラフィ樹脂に接触させることを含み、負荷電アミノ酸を欠くタンパク質と比較して、クロマトグラフィ樹脂から回収されたタンパク質の回収率が増加するか、またはクロマトグラフィ樹脂からタンパク質を回収するのに必要とする溶液の体積が減少する、方法。
【請求項４２】
医療における請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質、または請求項３１に記載の組成物の使用。
【請求項４３】
対象において疾患を治療する、または予防する方法であって、それを必要とする対象に対して請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質、または請求項３１に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４４】
細胞へ化合物を送達する方法であって、細胞を請求項２９あるいは３０に記載のタンパク質、または請求項３１に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
【請求項４５】
対象において疾患を診断する、または予後診断する方法であって、前記方法は、対象からの試料と、請求項１〜３０のいずれかに記載のタンパク質または請求項３１に記載の組成物とを、前記タンパク質が抗原に結合し、複合体を形成するように接触させることと、前記複合体を検出することと、を含み、前記複合体の検出は前記対象の前記疾患の診断または予後診断となる、方法。
【請求項４６】
複合体のレベルを特定することを含み、前記複合体において増加したレベルまたは減少したレベルは、対象の疾患において診断または予後診断となる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
対象において抗原の場所を特定するまたは検出する方法であって、
（ｉ）請求項２９または３０に記載のタンパク質または請求項３１に記載の組成物と、検出可能なラベルに結合された前記タンパク質が抗原に結合するように対象に投与することと、
（ｉｉ）生体内で検出可能なラベルを検出するか、またはその場所を特定することと、
を含む、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【公表番号】特表２０１３−５０８３０８（Ｐ２０１３−５０８３０８Ａ）
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３４５０１（Ｐ２０１２−５３４５０１）
【出願日】平成２２年１０月２５日（２０１０．１０．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１０／００１４１６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４７４４２
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５１００２９９９９）ガーバン インスティテュート オブ メディカル リサーチ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月２５日（２０１０．１０．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２０１０／００１４１６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４７４４２
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５１００２９９９９）ガーバン インスティテュート オブ メディカル リサーチ (2)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]