免疫刺激力が増強されたＣ−クラスのオリゴヌクレオチドアナログ
【課題】免疫刺激性核酸、その組成物およびこの免疫刺激性核酸を使用する方法を提供する。
【解決手段】ヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結合およびヌクレアーゼ感受性ヌクレオチド間結合を含むように改変された骨格を有し、その分子３’末端でまたはその付近で厳密なワトソン−クリックパリンドロームではなく介在配列またはヌクレオチドアナログが間に入り得る逆方向反復を有する二次構造を有する、免疫刺激性ＣＰＧ含有オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログからなる。
【解決手段】ヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結合およびヌクレアーゼ感受性ヌクレオチド間結合を含むように改変された骨格を有し、その分子３’末端でまたはその付近で厳密なワトソン−クリックパリンドロームではなく介在配列またはヌクレオチドアナログが間に入り得る逆方向反復を有する二次構造を有する、免疫刺激性ＣＰＧ含有オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログからなる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、免疫刺激性核酸、その組成物およびこの免疫刺激性核酸を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
細菌ＤＮＡは、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化させる免疫刺激効果を有するが、脊椎動物ＤＮＡは、その効果を有さない。非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；ならびに非特許文献４（総説Ｋｒｉｅｇ，１９９８）および非特許文献５。現在、細菌ＤＮＡのこれらの免疫刺激効果は、特に塩基の状況では、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧモチーフ）の存在の結果であり、この非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドは、細菌ＤＮＡにおいて共通するが、脊椎動物ＤＮＡでは、メチル化されており、かつ少ないことがわかっている。非特許文献６；非特許文献７。
【０００３】
細菌ＤＮＡの免疫刺激効果は、これらのＣｐＧモチーフを含む合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）で模倣され得る。このようなＣｐＧ ＯＤＮは、ヒトおよびマウス白血球に対して非常に刺激性の効果を有し、Ｂ細胞増殖；サイトカインおよび免疫グロブリン分泌；ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の溶解活性およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）分泌；ならびに樹状細胞（ＤＣ）、および同時刺激性分子を発現し、かつサイトカイン（特に、Ｔｈｌ様Ｔ細胞応答の発生を促進することにおいて重要なＴｈｌ様サイトカイン）を分泌する他の抗原提示細胞の活性化を誘導する。ネイティブのホスホジエステル骨格ＣｐＧ ＯＤＮのこれらの免疫刺激効果は、そのＣｐＧモチーフがメチル化され、ＧｐＣに変化されるか、または他の方法で排除されるかもしくは変化する場合に、その効果が劇的に低下するという点で、非常にＣｐＧ特異的である。非特許文献６；非特許文献８。
【０００４】
初期の研究において、その免疫刺激性ＣｐＧモチーフは、式 プリン−プリン−ＣｐＧ−ピリミジン−ピリミジンに従うと考えられていた。非特許文献６；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１。しかし、現在では、マウスリンパ球が、この「式」に従わないホスホジエステルＣｐＧモチーフに対して極めてよく応答することが明らかであり（非特許文献１２）、ヒトＢ細胞および樹状細胞でも同じことがいえる（非特許文献８；非特許文献１３）。
【非特許文献１】Ｔｏｋｕｎａｇａ Ｔら、Ｊｐｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（１９８８）７９：６８２−６
【非特許文献２】Ｔｏｋｕｎａｇａ Ｔら、ＪＮＣＩ（１９８４）７２：９５５−６２
【非特許文献３】Ｍｅｓｓｉｎａ ＪＰら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９１）１４７：１７５９−６４
【非特許文献４】Ｃ．Ａ．ＳｔｅｉｎおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ，（編），Ａｐｐｌｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ｐｐ．４３１−４４８
【非特許文献５】Ｋｒｉｅｇ ＡＭ、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００２）２０：７０９−６０
【非特許文献６】Ｋｒｉｅｇ ＡＭら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９５）３７４：５４６−９
【非特許文献７】Ｋｒｉｅｇ ＡＭ、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ（１９９９）１４８９：１０７−１６
【非特許文献８】Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ（１９９９）９６：９３０５−１０
【非特許文献９】Ｐｉｓｅｔｓｋｙ ＤＳ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９６）１５６：４２１−３
【非特許文献１０】Ｈａｃｋｅｒ Ｈら、ＥＭＢＯ Ｊ（１９９８）１７：６２３０−４０
【非特許文献１１】Ｌｉｐｆｏｒｄ ＧＢら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９８）６：４９６−５００
【非特許文献１２】Ｙｉ ＡＫら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９８）１６０：５８９８−９０６
【非特許文献１３】Ｌｉａｎｇ Ｈら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（１９９６）９８：１１１９−２９
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
以下の式Ｉ：
【化１】
の免疫刺激性核酸分子を含む組成物であって、ここで、
Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、ヌクレオチドであって、該ヌクレオチドは、チミン、ウラシル、アデニン、もしくは５−置換ウラシルを含むヌクレオチドであり；
Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシン（Ｃ）もしくは改変シトシンであり；
Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニン（Ｇ）もしくは改変グアニンであり；
ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｓ１は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであって、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、もしくは２’３’−ヌクレオシド間結合を必要に応じて提供し；
Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列もしくは非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであり；
Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；
ｋは、０〜５までの整数であり；
ｎは、２〜１６までの整数であり；
ｐは、１〜６までの整数であり；そして
ｑは、０〜１０までの整数であり、そしてここで
（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）が１０〜４２ヌクレオチド長である場合、Ｓ２は、４〜１０ヌクレオチド長であり、かつＳ２は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットを含み、かつ／または（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、２／３未満のＧＣ含量を有する、
組成物。
（項目２）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成する、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｔ、Ａ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＴはＡと塩基対を形成する、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成し、ＴはＧと塩基対を形成し、ＡはＴと塩基対を形成し、そしてＡはＧと塩基対を形成する、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択される、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々のうちの少なくとも１つは、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択される、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目７）
少なくとも１つのホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格をさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目８）
少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を有する骨格をさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目９）
前記オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、全てホスホロチオエート結合である、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１０）
Ｙ１Ｒ１もしくはＹ２Ｒ２のうちの少なくとも１つを結合するホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格をさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１１）
Ｙ１はＣである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１２）
Ｒ１はＧである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１３）
Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１４）
Ｘ１もしくはＸ２は、Ｔである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１５）
Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１である、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１６）
Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１であり、ｐは１であり、ＮおよびＮ’ならびにＺ３は、各々、ヌクレオチドを含まず、Ｚ２はＴＴＴＴもしくはｄ（ＵＵＵＵ）である、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１７）
Ｓ２は、非ヌクレオチドリンカーである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１８）
Ｓ２は、少なくとも１つの無塩基性ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１９）
前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの分枝状非ヌクレオシド結合を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２０）
少なくとも１つの二重ユニット、少なくとも１つの三重ユニット、または少なくとも１つの二重ユニットと少なくとも１つの三重ユニットをさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２１）
Ｓ１は二重ユニットまたは三重ユニットである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２２）
前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２３）
式ＩＩＩ：
（Ｚ’）ｍＺ３（Ｓ３） （式ＩＩＩ）
の免疫刺激性核酸分子であって、ここで
Ｚ’は、以下：
【化２】
であり；
Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、チミン、ウラシル、アデニン、または５−置換ウラシルを含むヌクレオチドであり；
Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシンまたは改変シトシンであり；
Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニンまたは改変グアニンであり；
ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｓ１は非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであって、必要に応じて、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を提供し；
Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列または非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであり；
Ｓ３は、直接的または間接的な２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合、または非ヌクレオチドリンカーであり、該非ヌクレオチドリンカーは、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニット、またはヘキサエチレングリコールユニットを含み、該無塩基性リンカーまたは該ユニットは、ｍ配列部分の２’５’−結合、５’５’−結合、３’３’−結合、２’２’−結合、または２’３’−結合を促進し；
Ｎ１，Ｎ２，．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドまたは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、Ｎ３は、Ｎ３＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；
ｋは、０〜５の整数であり；
ｍは、２〜１０の整数であり；
ｎは、２〜１６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；そして
ｑは、０〜１０の整数である、
免疫刺激性核酸分子。
（項目２４）
【化３】
は、非パリンドローム配列である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子を含む組成物。
（項目２５）
【化４】
は、
【化５】
であり、ＬはｄＳｐａｃｅｒである、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子を含む組成物。
（項目２６）
【化６】
は、パリンドローム配列である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子を含む組成物。
（項目２７）
【化７】
は、
【化８】
である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２８）
【化９】
は、
【化１０】
である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２９）
【化１１】
は、以下の配列
【化１２】
を含み、ここでＬは、ｄＳｐａｃｅｒである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３０）
【化１４】
は、以下の配列
【化１５】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３１）
以下の配列：
【化１６】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３２）
以下の配列：
【化１７】
を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３３）
以下の配列：
【化１９】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３４）
以下の配列：
【化２０】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３５）
以下：
【化２１】
から選択される配列を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒであり、
【化２１Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２１Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３６）
以下：
【化２３】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２３Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２３Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３７）
以下：
【化２４】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２４Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２４Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３８）
以下：
【化２５】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２５Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２５Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３９）
以下の配列：
【化２６】
を含み、ここで、
【化２６Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２６Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４０）
以下：
【化２７】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２７Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２７Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４１）
以下の配列：
【化２８】
を含み、ここで、
【化２８Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２８Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４２）
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４３）
前記置換ピリミジンは、Ｃ５−置換ピリミジンもしくはＣ６−置換ピリミジンである、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４４）
前記置換プリンは、Ｃ８−置換プリンもしくはＣ７−置換プリンである、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４５）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、５−置換シトシン、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ、およびウラシル誘導体、チミン誘導体、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、置換アデニン、８−置換グアニン、ならびに６−チオグアニンからなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４６）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、６−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、ならびに非置換型もしくは置換型の５−アルキニル−シトシン、Ｎ４−エチル−シトシン、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシン、フェノキサジン、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン、Ｎ２−メチル−グアニン、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニンからなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４７）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、ユニバーサル塩基（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ）、芳香族環系、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）からなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４８）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基、およびＫ−塩基、ベンズイミダゾール、ジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド、フルオロベンゼン、およびジフルオロベンゼンからなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４９）
Ｎ、Ｓ、Ｘ、またはＺのいずれかは、Ｃ６−Ｃ３０アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、コレステロール、オレイルリトコール酸、オレオイルコラン酸、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、ステロイド、ビタミン類、ビタミンＥ、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、トリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素類、シアニン色素Ｃｙ３、シアニン色素Ｃｙ５７６、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される残基によって置換されている、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５０）
（ａ）（ＴＣＧ）ｎＮおよびＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎから選択される免疫刺激性モチーフで始まる５’末端であって、ここでＴはチミンであり、Ｃは非メチル化シトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｒはプリンであり、ＤはＣでなく、Ｙ１およびＹ２の各々は、独立してピリミジンであり、ｎは１〜４の整数であり、Ｎは、０〜１２塩基長のあらゆる配列である、５’末端；
（ｂ）ヘアピン構造もしくはステム−ループ構造を形成することができる逆方向反復で終結する３’末端であって、該構造は、
２〜６個の連続する塩基対長のＧＣ−リッチのステム、および
少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基
を含む、３’末端；ならびに
（ｃ）少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む、複数の安定化された骨格、
を含む、免疫刺激性核酸分子。
（項目５１）
前記ＧＣ−リッチステムは、２個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５２）
前記ＧＣ−リッチステムは、３個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５３）
前記ＧＣ−リッチステムは、４個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５４）
前記ＧＣ−リッチステムは、５個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５５）
前記ＧＣ−リッチステムは、６個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５６）
前記ＧＣ−リッチステムは、少なくとも２個のＧ−Ｃ塩基対を含む、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５７）
前記ＧＣ−リッチステムは、少なくとも３個のＧ−Ｃ塩基対を含む、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５８）
前記少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基は、Ｔである、項目５０〜５７のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５９）
少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む前記部分的に安定化された骨格は、複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合をさらに含む、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６０）
前記５’末端は、
【化２８−１】
として提供される配列を有する、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６１）
前記逆方向反復で終結する３’末端は、
【化２８−２】
として提供される配列を有する、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６２）
前記逆方向反復で終結する３’末端は、
【化２９】
として提供される塩基配列を有する、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６３）
【化３０】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸。
（項目６４）
【化３１】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸。
（項目６５）
【化３２】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３２Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３２Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６６）
【化３３】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３３Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３３Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６７）
【化３４】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３４Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３４Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６８）
【化３５】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３５Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３５Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６９）
項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸分子および抗原を含む、ワクチン。
（項目７０）
項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸分子および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
（項目７１）
Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）発現を誘導するための方法であって、該方法は、
Ｉ型ＩＦＮを発現することができる細胞と、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸とを、Ｉ型ＩＦＮの発現を誘導するに有効な量で接触させる工程、
を包含する、方法。
（項目７２）
前記Ｉ型ＩＦＮは、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）である、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
γインターフェロン（ＩＦＮ−γ）発現を誘導するための方法であって、該方法は、
ＩＦＮ−γを発現することができる細胞と、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸とを、ＩＦＮ−γの発現を誘導するに有効な量で接触させる工程、
を包含する、方法。
（項目７４）
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するための方法であって、該方法は、
ＮＫ細胞と、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸とを、該ＮＫ細胞を活性化させるに有効な量で接触させる工程、
を包含する、方法。
（項目７５）
感染を処置するための方法であって、該方法は、
感染を有するか、または感染を発生させる危険性がある被験体に、該感染を処置または予防するに有効な量の、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目７６）
前記被験体は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生生物感染から選択される感染を有するかまたは該感染を発生させる危険性がある、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記被験体は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、パピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、または単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）から選択されるウイルスによるウイルス感染を有するかまたは該ウイルス感染を発生させる危険性がある、項目７５に記載の方法。
（項目７８）
前記被験体は、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、またはＡｎｔｈｒａｘから選択される細菌種による細菌感染を有するかまたは該細菌感染を発生させる危険性がある、項目７５に記載の方法。
（項目７９）
アレルギー状態を処置するための方法であって、該方法は、
アレルギー状態を有するかまたは該状態を発生させる危険性がある被験体に、該アレルギー状態を処置または予防するに有効な量の、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目８０）
前記アレルギー状態は、アレルギー性喘息である、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
癌を処置するための方法であって、該方法は、
癌を有するかまたは癌を発生させる危険性のある被験体に、該癌を処置または予防するに有効な量の、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸を投与する工程、を包含する、方法。
（項目８２）
前記癌は、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、咽頭癌、白血病、肝癌、肺癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋芽細胞腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系の癌、または他の癌腫および肉腫から選択される、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
前記癌は、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）での処置に感受性の癌である、項目８１に記載の方法。
（項目８４）
前記ＩＦＮ−αでの処置に感受性の癌は、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、前立腺癌腫、子宮頚部形成異常、または結腸癌腫から選択される、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
感染の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
（項目８６）
アレルギー状態の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
（項目８７）
アレルギー性喘息の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
（項目８８）
癌の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、一部、その分子の３’末端でまたはその付近で逆方向反復を有する二次構造を有する、免疫刺激性ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログに関する。この二次構造は、特定の条件下で、二重鎖またはより高次の構造の形成に関与する。本発明のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログの重要な特徴として、この逆方向反復は、厳密なワトソン−クリックパリンドロームではなく、介在配列またはヌクレオチドアナログが間に入り得る。本発明のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログの別の特徴として、その骨格は、戦略的に配置されたヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結合およびヌクレアーゼ感受性ヌクレオチド間結合を含むように改変され、それによって、共に、活性に好都合でありかつ潜在的な毒性を低下させ得る。さらに、これらのオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログは、Ａ−クラスおよびＢ−クラス両方の免疫刺激活性を発揮し、よって新規なＣ−クラス免疫刺激性核酸分子として分類されることが分かる。
【０００７】
本発明は、一部、その分子の３’末端にまたはその付近に不完全なパリンドロームを含む、ＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログが、それらの調製およびそれらの生物学的活性の両方に関して特定の利点を有するという本発明による発見に基づく。具体的には、本発明のＣ−クラスオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログは、溶液中で特徴的にモノマーである。これらの同じ核酸分子は、インビトロで分子内二重鎖構造を形成し、このことによってこれらの分子をヌクレアーゼ消化に対して安定にし得ると考えられる。これらの同じ核酸分子は、エンドソーム内区画の環境内で、分子内二重鎖、そしておそらくより高次の構造を形成し得、この環境では、これらの分子は、その生物学的活性を発揮すると考えられる。
【０００８】
一局面において、本発明は、以下の式Ｉ：
【０００９】
【化３６】
の免疫刺激性核酸分子を含む組成物を提供し、
ここでＺ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、ヌクレオチドであって、該ヌクレオチドは、チミン、ウラシル、アデニン、もしくは５−置換ウラシルを含み；Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシン（Ｃ）もしくは改変シトシンであり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニン（Ｇ）もしくは改変グアニンであり；ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｓ１は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであって、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、もしくは２’３’−ヌクレオシド間結合を必要に応じて提供し；Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列もしくは非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであり；Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；ｋは、０〜５までの整数であり；ｎは、２〜１６までの整数であり；ｐは、１〜６までの整数であり；そしてｑは、０〜１０までの整数であり、そしてここで（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）が１０〜４２ヌクレオチド長である場合、Ｓ２は、４〜１０ヌクレオチド長であり、かつＳ２は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットを含み、かつ／または（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、２／３未満のＧＣ含量を有する。
【００１０】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、ここでＣはＧと塩基対を形成する。
【００１１】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｔ、Ａ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＴはＡと塩基対を形成する。
【００１２】
これらおよび他の実施形態において、Ｃ、Ｇ、Ａ、およびＴの各々は、デオキシヌクレオチドであって、対応する塩基であるシトシン、グアニン、アデニン、およびチミンに言及され得る。
【００１３】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成し、ＴはＧと塩基対を形成し、ＡはＴと塩基対を形成し、そしてＡはＧと塩基対を形成する。
【００１４】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、各塩基対（Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃、．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃）は、ワトソン−クリック塩基対である。
【００１５】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々のうちの少なくとも１つは、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、少なくとも１つの塩基対（Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃、．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃）は、非ワトソン−クリック塩基対である。
【００１６】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つのホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００１７】
一実施形態において、免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を有する骨格を含む。
【００１８】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、全てホスホロチオエート結合である。
【００１９】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、Ｙ１Ｒ１もしくはＹ２Ｒ２のうちの少なくとも１つを結合するホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００２０】
一実施形態において、Ｙ１はＣである。
【００２１】
一実施形態において、Ｒ１はＧである。
【００２２】
一実施形態において、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧである。
【００２３】
一実施形態において、Ｘ１もしくはＸ２は、Ｔである。
【００２４】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１である。
【００２５】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１であり、ｐは１であり、ＮおよびＮ’ならびにＺ３は、各々、ヌクレオチドを含まず、Ｚ２はＴＴＴＴもしくはｄ（ＵＵＵＵ）であり、ここでｄ（ＵＵＵＵ）は、ｄＵｄＵｄＵｄＵ（すなわち、（デオキシＵ）４）を表す。
【００２６】
一実施形態において、Ｓ２は、非ヌクレオチドリンカーである。
【００２７】
一実施形態において、Ｓ２は、少なくとも１つの無塩基性ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む。
【００２８】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの分枝状非ヌクレオシド結合を含む。
【００２９】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの二重ユニット、少なくとも１つの三重ユニット、または少なくとも１つの二重ユニットと少なくとも１つの三重ユニットを含む。
【００３０】
一実施形態において、Ｓ１は二重ユニットまたは三重ユニットである。
【００３１】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を含む。
【００３２】
一実施形態において、式Ｉの免疫刺激性核酸分子は、アンチセンス核酸ではない。
【００３３】
一局面において、本発明は、式ＩＩ：
【００３４】
【化３７】
の免疫刺激性核酸分子を提供し、ここでＺ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２個のヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、チミン、ウラシル、アデニン、または５−置換ウラシルを含み；Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシン（Ｃ）または改変シトシンであり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニン（Ｇ）または改変グアニンであり；Ｎは、０〜１２個のヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｓ１は非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであって、必要に応じて、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を提供し；Ｓ２は、１〜１０個のヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列または非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであり；Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、．．．Ｎｎ−１は、Ｎｎ−１＃と塩基対を形成し、そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；ｋは、０〜５の整数であり；ｎは、２〜１６の整数であり；ｐは、１〜６の整数であり；そしてｑは、０〜１０の整数であり；そしてここで（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）が１０〜４２ヌクレオチド長である場合、Ｓ２は、４〜１０ヌクレオチド長であり、かつＳ２は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットを含み、かつ／または（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、２／３未満のＧＣ含量を有する。
【００３５】
一実施形態において、Ｚ１（Ｎｎ）（Ｎｎ−１）は、ＴＹＲであり、ここでＹは、シトシンもしくは改変シトシンであり、Ｒは、グアニンもしくは改変グアニンである。
【００３６】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｇ、またはこれらの改変から選択され、ここでＣは、Ｇと塩基対を形成する。
【００３７】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、Ｔ、Ａまたはこれらの改変から選択され、ここでＴは、Ａと塩基対を形成する。
【００３８】
これらおよび他の実施形態において、Ｃ、Ｇ、Ａ、およびＴの各々は、デオキシヌクレオチドであって、対応する塩基であるシトシン、グアニン、アデニン、およびチミンに言及され得る。
【００３９】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成し、ＴはＧと塩基対を形成し、ＡはＴと塩基対を形成し、そしてＡはＧと塩基対を形成する。
【００４０】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、各塩基対（Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃）は、ワトソン−クリック塩基対である。
【００４１】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々のうちの少なくとも１つは、非ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、少なくとも１つの塩基対Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃は、非ワトソン−クリック塩基対である。
【００４２】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つのホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００４３】
一実施形態において、免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を有する骨格を含む。
【００４４】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、全てホスホロチオエート結合である。
【００４５】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、Ｙ１Ｒ１もしくはＹ２Ｒ２のうちの少なくとも１つを結合するホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００４６】
一実施形態において、Ｙ１はＣである。
【００４７】
一実施形態において、Ｒ１はＧである。
【００４８】
一実施形態において、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧである。
【００４９】
一実施形態において、Ｘ１もしくはＸ２は、Ｔである。
【００５０】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１である。
【００５１】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１であり、ｐは１であり、ＮおよびＮ’ならびにＺ３は、各々、ヌクレオチドを含まず、Ｚ２はＴＴＴＴもしくはｄ（ＵＵＵＵ）であり、ここでｄ（ＵＵＵＵ）は、（デオキシＵ）４を表す。
【００５２】
一実施形態において、Ｓ２は、非ヌクレオチドリンカーである。
【００５３】
一実施形態において、Ｓ２は、少なくとも１つの無塩基性ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む。
【００５４】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの分枝状非ヌクレオシド結合を含む。
【００５５】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの二重ユニット、少なくとも１つの三重ユニット、または少なくとも１つの二重ユニットと少なくとも１つの三重ユニットを含む。
【００５６】
一実施形態において、Ｓ１は二重ユニットまたは三重ユニットである。
【００５７】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を含む。
【００５８】
一実施形態において、式Ｉの免疫刺激性核酸分子は、アンチセンス核酸ではない。
【００５９】
一局面において、本発明は、式ＩＩＩ：
（Ｚ’）ｍＺ３（Ｓ３） （式ＩＩＩ）
の免疫刺激性核酸分子を提供し、ここでＺ’は、以下：
【００６０】
【化３８】
であり；Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、チミン、ウラシル、アデニン、または５−置換ウラシルを含み；Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシンまたは改変シトシンであり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニンまたは改変グアニンであり；ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｓ１は非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであって、必要に応じて、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を提供し；Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列または非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであり；Ｓ３は、直接的または間接的な２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合、または非ヌクレオチドリンカーであり、この非ヌクレオチドリンカーは、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニット、またはヘキサエチレングリコールユニットを含み、該無塩基性リンカーまたは該ユニットは、ｍ配列部分の２’５’−結合、５’５’−結合、３’３’−結合、２’２’−結合、または２’３’−結合を促進し；Ｎ１，Ｎ２，．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドまたは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、Ｎ３は、Ｎ３＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；ｋは、０〜５までの整数であり；ｍは、２〜１０までの整数であり；ｎは、２〜１６までの整数であり；ｐは、１〜６までの整数であり；そしてｑは、０〜１０までの整数である。
【００６１】
特定の実施形態において、
【００６２】
【化３９】
は、非パリンドローム配列である。
【００６３】
特定の実施形態において、
【００６４】
【化４０】
は、
【００６５】
【化４１】
であり、ＬはｄＳｐａｃｅｒである。
【００６６】
特定の実施形態において、
【００６７】
【化４２】
は、パリンドローム配列である。
【００６８】
特定の実施形態において、
【００６９】
【化４３】
は、
【００７０】
【化４４】
である。
【００７１】
特定の実施形態において、
【００７２】
【化４５】
は、
【００７３】
【化４６】
である。
【００７４】
一実施形態において、（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）Ｚ３は、以下の配列：
【００７５】
【化４７】
を含み、ここでＬは、ｄＳｐａｃｅｒである。
【００７６】
一実施形態において、（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、以下の配列：
【００７７】
【化４８】
を含む。
【００７８】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、
以下の配列：
【００７９】
【化４９】
を含む。
【００８０】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【００８１】
【化５０】
を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒである。
【００８２】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【００８３】
【化５２】
を含む。
【００８４】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【００８５】
【化５３】
を含む。
【００８６】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００８７】
【化５４】
から選択される配列を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒであり、
【００８８】
【化５４Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【００８９】
【化５４Ｂ】
はホスホジエステルである。
【００９０】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００９１】
【化５６】
から選択される配列を含み、ここで、
【００９２】
【化５６Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【００９３】
【化５６Ｂ】
はホスホジエステルである。
【００９４】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００９５】
【化５７】
から選択される配列を含み、ここで、
【００９６】
【化５７Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【００９７】
【化５７Ｂ】
はホスホジエステルである。
【００９８】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００９９】
【化５８】
から選択される配列を含み、ここで、
【０１００】
【化５８Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１０１】
【化５８Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１０２】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【０１０３】
【化５９】
を含み、ここで、
【０１０４】
【化５９Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１０５】
【化５９Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１０６】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【０１０７】
【化６０】
から選択される配列を含み、ここで、
【０１０８】
【化６０Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１０９】
【化６０Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１１０】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【０１１１】
【化６１】
を含み、ここで、
【０１１２】
【化６１Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１１３】
【化６１Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１１４】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【０１１５】
【化６２】
を含み、ここで、
【０１１６】
【化６２Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１１７】
【化６２Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１１８】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンである。
【０１１９】
一実施形態において、この置換ピリミジンは、Ｃ５−置換ピリミジンもしくはＣ６−置換ピリミジンである。
【０１２０】
一実施形態において、この置換プリンは、Ｃ８−置換プリンもしくはＣ７−置換プリンである。
【０１２１】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしく
は改変ピリミジンは、５−置換シトシン、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ、およびウラシル誘導体、チミン誘導体、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、置換アデニン、８−置換グアニン、ならびに６−チオグアニンからなる群より選択される。
【０１２２】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、６−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、ならびに非置換型もしくは置換型の５−アルキニル−シトシン、Ｎ４−エチル−シトシン、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシン、フェノキサジン、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン、Ｎ２−メチル−グアニン、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニンからなる群より選択される。
【０１２３】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、ユニバーサル塩基（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ）、芳香族環系、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）からなる群より選択される。
【０１２４】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基、およびＫ−塩基、ベンズイミダゾール、ジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド、フルオロベンゼン、およびジフルオロベンゼンからなる群より選択される。
【０１２５】
一実施形態において、Ｎ、Ｓ、Ｘ、またはＺのいずれかは、Ｃ６−Ｃ３０アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、コレステロール、オレイルリトコール酸、オレオイルコラン酸（ｏｌｅｏｙｌ ｃｈｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ）、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、ステロイド、ビタミン類、ビタミンＥ、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、トリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素類、シアニン色素Ｃｙ３、シアニン色素Ｃｙ５７６、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される残基によって置換されている。
【０１２６】
一局面において、本発明は、以下の（ａ）〜（ｃ）：（ａ）（ＴＣＧ）ｎＮおよびＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎから選択される免疫刺激性モチーフで始まる５’末端であって、ここでＴはチミンであり、Ｃは非メチル化シトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｒはプリンであり、ＤはＣでなく、Ｙ１およびＹ２の各々は、独立してピリミジンであり、ｎは１〜４の整数であり、Ｎは、０〜１２塩基長のあらゆる配列である、５’末端；（ｂ）ヘアピン構造もしくはステム−ループ構造を形成することができる逆方向反復で終結する３’末端であって、この構造は、２〜６個の連続する塩基対長のＧＣ−リッチのステム、および少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基を含む、３’末端；ならびに（ｃ）
少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む、複数の安定化された骨格、を含む、免疫刺激性核酸分子を提供する。
【０１２７】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、２個の連続する塩基対長である。
【０１２８】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、３個の連続する塩基対長である。
【０１２９】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、４個の連続する塩基対長である。
【０１３０】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、５個の連続する塩基対長である。
【０１３１】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、６個の連続する塩基対長である。
【０１３２】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、少なくとも２個のＧ−Ｃ塩基対を含む。
【０１３３】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、少なくとも３個のＧ−Ｃ塩基対を含む。
【０１３４】
特定の実施形態において、この少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基は、Ｔである。
【０１３５】
一実施形態において、少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含むこの部分的に安定化された骨格は、複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合をさらに含む。
【０１３６】
一実施形態において、その５’末端は、
【０１３７】
【化６３】
として提供される配列を有する。
【０１３８】
一実施形態において、その逆方向反復で終結する３’末端は、
【０１３９】
【化６４】
として提供される塩基配列を有する。
【０１４０】
一実施形態において、その逆方向反復で終結する３’末端は、
【０１４１】
【化６５】
として提供される塩基配列を有する。
【０１４２】
一局面において、本発明は、
【０１４３】
【化６６】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸を提供する。
【０１４４】
一局面において、本発明は、
【０１４５】
【化６７】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸を提供する。
【０１４６】
一局面において、本発明は、
【０１４７】
【化６８】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１４８】
【化６８Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１４９】
【化６８Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１５０】
一局面において、本発明は、
【０１５１】
【化６９】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１５２】
【化６９Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１５３】
【化６９Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１５４】
一局面において、本発明は、
【０１５５】
【化７０】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１５６】
【化７０Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１５７】
【化７０Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１５８】
一局面において、本発明は、
【０１５９】
【化７１】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１６０】
【化７１Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１６１】
【化７１Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１６２】
一局面において、本発明は、本発明の免疫刺激性核酸分子および抗原を含む、ワクチンを提供する。
【０１６３】
一局面において、本発明は、本発明の免疫刺激性核酸分子および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物を提供する。
【０１６４】
一局面において、本発明は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）発現を誘導するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、Ｉ型ＩＦＮを発現することができる細胞と、本発明の免疫刺激性核酸とを、Ｉ型ＩＦＮの発現を誘導するに有効な量で接触させる工程を包含する。
【０１６５】
一実施形態において、このＩ型ＩＦＮは、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）である。
【０１６６】
一実施形態において、このＩ型ＩＦＮは、インターフェロンβ（ＩＦＮ−β）である。
【０１６７】
一局面において、本発明は、γインターフェロン（ＩＦＮ−γ）発現を誘導するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、ＩＦＮ−γを発現することができる細胞と、本発明の免疫刺激性核酸とを、ＩＦＮ−γの発現を誘導するに有効な量で接触させ
る工程を包含する。
【０１６８】
一局面において、本発明は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、ＮＫ細胞と、本発明の免疫刺激性核酸とを、このＮＫ細胞を活性化させるに有効な量で接触させる工程を包含する。
【０１６９】
一局面において、本発明は、感染を処置するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、感染を有するか、または感染を発生させる危険性がある被験体に、この感染を処置または予防するに有効な量の、本発明の免疫刺激性核酸を投与する工程を包含する。
【０１７０】
一実施形態において、その被験体は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生生物感染から選択される感染を有するかまたは該感染を発生させる危険性がある。
【０１７１】
一実施形態において、その被験体は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、パピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、または単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）から選択されるウイルスによるウイルス感染を有するかまたはこのウイルス感染を発生させる危険性がある。
【０１７２】
一実施形態において、その被験体は、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、またはＡｎｔｈｒａｘから選択される細菌種による細菌感染を有するかまたは該細菌感染を発生させる危険性がある。
【０１７３】
一局面において、本発明は、アレルギー状態を処置するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、アレルギー状態を有するかまたはこの状態を発生させる危険性がある被験体に、このアレルギー状態を処置または予防するに有効な量の、本発明の免疫刺激性核酸を投与する工程を包含する。
【０１７４】
一実施形態において、このアレルギー状態は、アレルギー性喘息である。
【０１７５】
一局面において、本発明は、癌を処置するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、癌を有するかまたは癌を発生させる危険性のある被験体に、この癌を処置または予防するに有効な量の、本発明の免疫刺激性核酸を投与する工程を包含する。
【０１７６】
一実施形態において、この癌は、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、咽頭癌、白血病、肝癌、肺癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋芽細胞腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系の癌、または他の癌腫および肉腫から選択される。
【０１７７】
一実施形態において、この癌は、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）での処置に感受性の癌である。
【０１７８】
一実施形態において、このＩＦＮ−αでの処置に感受性の癌は、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、前立腺癌腫、子宮頚部形成異常、または結腸癌腫から選択される。
【０１７９】
一局面において、本発明は、感染の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８０】
一局面において、本発明は、アレルギー状態の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８１】
一局面において、本発明は、アレルギー性喘息の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８２】
一局面において、本発明は、癌の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８３】
本発明の限定の各々は、本発明の種々の実施形態を包含し得る。従って、いずれか１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明の限定の各々は、本発明の各局面において含まれ得ることが理解される。
【０１８４】
【化７２−１】
【０１８５】
【化７２−２】
。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１８６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、一局面において、規定された二次構造を有するＣｐＧの免疫刺激性オリゴヌクレオチドの特定のサブクラスが、免疫刺激効果を媒介するのに高度に有効であるという知見を含む。これらのＣｐＧ核酸は、癌、感染病、アレルギー、喘息および他の障害を処置するために免疫系を刺激するため、そして、癌の化学療法の後の日和見感染症に対して防御するのに役立つために、治療的かつ予防的に有用である。ＣｐＧ刺激から生じる、強力で、さらにバランスの取れた、細胞性免疫応答および体液性免疫応答は、病原および癌性細胞の浸潤に対する身体自身の生来の防御系を反映する。
【０１８７】
本発明の配列は、ＣクラスまたはコンビネーションモチーフのＣｐＧオリゴヌクレオチドと呼ばれる、ＣｐＧオリゴヌクレオチドのあるクラスと、いくらかの構造的類似性を共有する。公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ ０３／０１５７１１パンフレットを参照のこと。以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドと同様に、本発明のＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、分子の一部として、規定された５’モチーフおよび３’モチーフを有する。これらの以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドは、従来の「刺激性」ＣｐＧ配列（一般に、分子の５’末端もしくは３’末端、またはその近くに位置する）、および「ＧＣリッチのパリンドローム」モチーフ（一般に、分子のもう一方の端、またはその近くに位置する）の両方を有する。これらの組み合わせモチーフの核酸は、従来の「Ｂクラス」のＣｐＧ ＯＤＮ（Ｂ細胞の活性化および樹状細胞の活性化の強力な誘導因子である）に関連する効果と、より最近記載されたクラスの免疫刺激性核酸（「Ａクラス」のＣｐＧ ＯＤＮ；ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞の活性化の強力な誘導因子であるが、Ｂ細胞およびＤＣの活性化については誘導性が比較的乏しい）に関連する効果との間のどこかに収まる、免疫刺激効果を有する。
【０１８８】
本発明の新規のＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドはまた、以前に記載されたＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドと構造的に異なる。以前に記載されたＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドと比較して、本発明の免疫刺激性核酸分子は、分子の一方の端にあるＧＣリッチなパリンドロームに関してのかなり緩い要件を特徴とする。例えば、以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドは、一実施形態において、少なくとも１０ヌクレオチド長であり、かつ、少なくとも２／３のＧＣ含量を有する厳密もしくは完全なパリンドロームを含む。いくつかの実施形態において、以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドのパリンドロームは、多くても、最小数の連続したミスマッチヌクレオチドを含み得る。
【０１８９】
以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドとは対照的に、本発明のＣクラスのオリゴヌクレオチドアナログは、種々の実施形態において、１０未満のヌクレオチド；０と２／３未満との間のＧＣ含量；任意の核酸塩基（ｄＳｐａｃｅｒ）を欠いたものを含む種々のヌクレオチドアナログおよび置換基；ワトソン−クリック塩基対を形成しない４つ以上の連続するヌクレオチドもしくはヌクレオチド置換基を含む伸長された介在配列；ならびにこれらの任意の組み合わせを有し得る、パリンドロームモチーフを特徴とする。さらに、いくつかの実施形態において、２つ以上の分子の３’部分は、その３’末端を介して互いに連結され得る。完全なパリンドロームを有さないこの新規サブクラスのオリゴヌクレオチドはなお、以前に記載された組み合わせモチーフのＣｐＧオリゴヌクレオチドと同様に、高いレベルのＩＦＮ産生を誘導し得、Ｉ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β）およびＩＦＮ−γを誘導し得ことが発見された。
【０１９０】
「パリンドローム」および同等に、「パリンドローム配列」とは、本明細書中で使用される場合、その自身の完全な反対方向の相補体（すなわち、ＡＢＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’（ここで、ＡとＡ’、ＢとＢ’、ＣとＣ’、ＤとＤ’、そしてＥとＥ’は、通常のワトソン−クリック塩基対（すなわち、Ｇ−Ｃ、Ａ−ＴおよびＡ−Ｕ）を形成し得る塩基である））である核酸配列を指す。本明細書中で使用される場合、「パリンドローム」は、厳密な意味において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しない、介在配列または介在非ヌクレオチド構造を除外する。
【０１９１】
「逆方向反復」とは、本明細書中で使用される場合、不完全なパリンドローム、すなわち、通常のワトソン−クリック塩基対を形成し得るヌクレオチドと、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたは他の構造（例えば、ＡＢＣＤＥ−Ｓ−Ｅ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列（ここで、ＡとＡ’、ＢとＢ’、ＣとＣ’、ＤとＤ’、そしてＥとＥ’は、通常のワトソン−クリック塩基対を形成し得る塩基であり、そして、Ｓは、非パリンドローム配列または非核酸塩基リンカーまたは無塩基性のリンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）である））の両方が存在する核酸配列を指す。特定の実施形態において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたは他の構造は、他の完全なパリンドロームを妨害する。特定の実施形態において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチドは、別のヌクレオチドと非ワトソン−クリック塩基対（例えば、Ｇ−Ｔ）を形成し得る。本明細書中で使用される場合、非ワトソン−クリック塩基対は、ワトソン−クリック塩基対以外の任意の塩基対であり、これらとしては、フーグスティーン塩基対、およびいわゆるウォブル塩基対が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチドはマッチせず、そして、ワトソン−クリック塩基対または非ワトソン−クリック塩基対を形成するためのヌクレオチド塩基またはヌクレオチド塩基アナログ（例えば、ｄＳｐａｃｅｒの逆のＧ）を有する。特定の実施形態において、塩基対形成に関与しないヌクレオチドは、別のヌクレオチドと非標準的な塩基対を形成し得る（例えば、ジアミノピリジンは、キサントシンと塩基対を形成し得る）。
【０１９２】
一実施形態において、核酸の５’末端は、（ＴＣＧ）ｎＮおよびＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎから選択される免疫刺激性モチーフから開始する。Ｔはチミンであり、Ｃは非メチル化シトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｒはプリンであり、ＤはＣではなく、Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、ピリミジンであり、ｎは１〜４の整数（端を含む）であり、そしてＮは、０〜１２塩基長の任意の配列である。
【０１９３】
核酸の３’末端は、ヘアピン構造またはステム−ループ構造を形成し得る逆方向反復で終結する。用語「終結する（ｔｅｒｍｉｎａｔｅ）」とは、３’末端またはその近くの構造をいう。従って、不完全なパリンドロームの末端は、分子の実際の３’末端に位置し得るか、あるいは、３’末端は、逆方向反復構造の一部ではない１つ以上のさらなるヌクレオチドを含み得る。好ましくは、分子の３’末端は、逆方向構造の一部を形成しない、３以下のヌクレオチドを含む。
【０１９４】
一実施形態において、「ヘアピン構造またはステム−ループ構造を形成し得る逆方向反復」とは、本明細書中で使用される場合、２〜１０の連続した塩基対長であるＧＣリッチなステムまたはヘアピンを形成するヌクレオチドの配列を指し、これは、少なくとも１つのマッチしていないか、またはミスマッチした塩基を含む。個々の実施形態において、ＧＣリッチなステムは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の連続した塩基対長である。いくつかの実施形態において、ＧＣリッチなステムは、少なくとも２、３または４のＧ−Ｃ塩基対を含む。
【０１９５】
一実施形態において、「ヘアピン構造またはステム−ループ構造を形成し得る逆方向反復」とは、本明細書中で使用される場合、２〜１０の連続した塩基対長であるＡＴリッチなステムまたはヘアピンを形成するヌクレオチドの配列を指し、これは、少なくとも１つのマッチしていないか、またはミスマッチした塩基を含む。個々の実施形態において、ＡＴリッチなステムは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の連続した塩基対長である。いくつかの実施形態において、ＡＴリッチなステムは、少なくとも２、３または４のＡ−Ｔ塩基対を含む。
【０１９６】
いくつかの場合において、少なくとも１つのマッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、ステムまたはヘアピンの末端をつなぐ。このことは、分子内に、ステムが塩基対形成し、そしてヘアピンを形成する柔軟な点を提供することにより、二次構造の形成を可能にし得る。あるいは、マッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、ステム内部にあり得る。好ましくは、ミスマッチした塩基がステム内部にある場合、このステムは、少なくとも３塩基対長である。マッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、任意のヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態において、マッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、Ｔである。二重鎖の末端にあるマッチしていないヌクレオチドはまた、二重鎖の形成またはヘパリンの形成を有意に安定化させ得る、オーバーハングヌクレオチドまたはダングリング末端として知られる。Ｆｒｅｉｅｒ ＳＭら（１９８３）Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ３’ｄａｎｇｌｉｎｇ ｅｎｄ ｓｔａｃｋｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＧＧＣＣ ａｎｄ ＣＣＧＧ ｄｏｕｂｌｅ ｈｅｌｉｘｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２２：６１９８−２０６。
【０１９７】
核酸はまた、少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む部分的に安定化された骨格を含む。
【０１９８】
いくつかの場合において、分子の二重鎖の部分はまた、非天然（非標準的）な塩基対（例えば、キサントシンと対になったジアミノピリジン）も含み得る。Ｌｕｔｚ ＭＪら（１９９８）Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｎ−ｓｔａｎｄａｒｄ ｂａｓｅ ｐａｉｒ ｂｙ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｓ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ８：１１４９−５２。
【０１９９】
式は、優れた免疫刺激特性を示したＣｐＧオリゴヌクレオチドのクラスのサブセットを規定する。この式において、５’は、オリゴヌクレオチドの遊離５’末端を指し、３’は、オリゴヌクレオチドの遊離３’末端を指す。
【０２００】
オリゴヌクレオチドは、１つ以上のアクセス可能な５’末端または３’末端を有し得る。いくつかの実施形態において、３’末端は、別の３’末端に連結され得る。５’および３’のモチーフの重要性が、本明細書中において発見され、記載されたので、２つのこのような５’末端または３’末端を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを作製することがまた可能である。このことは、例えば、３’−３’結合を介して２つのオリゴヌクレオチドを結合して、２つのアクセス可能な５’末端を有するオリゴヌクレオチドを作製することによって達成され得る。３’−３’結合または５’−５’結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、または、任意の他の修飾されたヌクレオシド間ブリッジであり得る。このような結合を達成するための方法は、当該分野で公知である。例えば、このような結合は、Ｓｅｌｉｇｅｒ Ｈら（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎａｌｏｇｓ ｗｉｔｈ ｔｅｒｍｉｎａｌ ３’−３’− ａｎｄ ５’−５’−ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃ ｌｉｎｋａｇｅｓ ａｓ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １０：４６９−７７、およびＪｉａｎｇ Ｚら（１９９９）Ｐｓｅｕｄｏ−ｃｙｃｌｉｃ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ７：２７２７−３５に記載されている。
【０２０１】
さらに、３’−３’結合または５’−５’結合したＯＤＮ（３’末端ヌクレオシドまたは５’末端ヌクレオシドとの間の結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、または他の修飾されたブリッジではない）は、トリ−、またはテトラーエチレングリコールホスフェート部分（Ｄｕｒａｎｄ Ｍら（１９９２）Ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ａｎ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｏｎｅ（ｄＡ）１２ ａｎｄ ｔｗｏ（ｄＴ）１２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｒｉｄｇｅｄ
ｂｙ ｔｗｏ ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｃｈａｉｎｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：９１９７−２０４；米国特許第５，６５８，７３８号；および米国特許第５，６６８，２６５号）のようなさらなるスペーサーを使用して調製され得る。あるいは、非ヌクレオチドリンカーは、エタンジオール、プロパンジオールからか、または、無塩基性のデオキシリボース（ｄＳｐａｃｅｒ）ユニット（Ｆｏｎｔａｎｅｌ ＭＬら（１９９４）Ｓｔｅｒｉｃａｌ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｔ４ ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｋｉｎａｓｅ ｏｆ ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｉｃ ｍｏｉｅｔｉｅｓ ５’−ａｔｔａｃｈｅｄ ｔｏ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２２：２０２２−７）から、標準的なホスホラミダイト化学を使用して誘導され得る。この非ヌクレオチドリンカーは、１回もしくは複数回組み込まれるか、または、互いに組み合わされて、任意の所望の距離の２つのＯＤＮの３’末端間の任意を連結することを可能にし得る。
【０２０２】
「非ヌクレオチドリンカー」は、本明細書中で使用される場合、ヌクレオチドまたはそのポリマー（すなわち、ポリヌクレオチド）ではない任意のリンカー要素を指し、ここで、このヌクレオチドとしては、プリン核酸塩基またはピリミジン核酸塩基、および糖リン酸が挙げられる。従って、非ヌクレオチドリンカーとしては、無塩基性のヌクレオチド（ｄＳｐａｃｅｒ）、すなわち、核酸塩基が水素原子により置き換えられるヌクレオチド様糖リン酸ユニットが挙げられる。非ヌクレオチドリンカーは、ポリエチレングリコールであり得、トリエチレングリコールおよびヘキサエチレングリコールが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下の構造：
【０２０４】
【化７３】
のうちの１つを有する。
【０２０５】
記号
【０２０６】
【化７４】
は、安定化されたヌクレオチド間結合の存在を表し、そして、
【０２０７】
【化７５】
は、ホスホジエステル結合の存在を表す。
【０２０８】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、一般に、６個と１００個との間のヌクレオチドの範囲の長さを有する。いくつかの実施形態において、この長さは、６〜４０個、１３〜１００個、１３〜４０個、１３〜３０個、１５〜５０個、もしくは１５〜３０個の範囲のヌクレオチド、またはその間の任意の整数の範囲のヌクレオチドである。
【０２０９】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基および交換可能な有機塩基に連結された糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）（これらは、置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））または、置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれかである）を含む分子）を意味するために交換可能に使用される。本明細書中で使用される場合、用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、オリゴリボヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチドを指す。用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はまた、ポリヌクレオチシド（すなわち、ポリヌクレオチドからリン酸を引いたもの）および任意の他の有機塩基含有ポリマーも含む。核酸分子は、既存の核酸供給源（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）から得られ得るが、好ましくは、（例えば、核酸合成により生成された）合成物である。
【０２１０】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、本明細書中で使用される場合、本発明の核酸分子およびオリゴヌクレオチド、ならびに、本発明のオリゴヌクレオチドアナログを包含する。用語「オリゴデオキシヌクレオチド」、そして等価に「ＯＤＮ」は、本明細書中で使用される場合、本発明の修飾されていないオリゴデオキシヌクレオチド、ならびに、本発明のオリゴデオキシヌクレオチドアナログを包含する。
【０２１１】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はまた、例えば、塩基および／または糖が置換または修飾された核酸またはオリゴヌクレオチドを包含する。例えば、これらとしては、２’位でヒドロキシル基以外の低分子量有機基に共有結合した骨格糖を有する核酸、および５’位でリン酸基またはヒドロキシ基以外の低分子量有機基に共有結合した骨格糖を有する核酸が挙げられる。従って、修飾された核酸は、２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含み得る。さらに、修飾された核酸は、リボースの代わりにアラビノースまたは２’−フルオロアラビノースのような糖を含み得る。従って、核酸は、骨格の組成が異種性であり得、それによって、ペプチド−核酸（核酸塩基と共にペプチド様骨格を有する）のように一緒に連結されたポリマー単位のあらゆる可能な組み合わせを含む。他の例は、以下により詳細に記載される。
【０２１２】
本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、天然のＲＮＡおよびＤＮＡと比べて、種々の化学的修飾および置換を包含し得、これらは、ホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ、β−Ｄ−リボース単位、および／または天然のヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）を含む。化学的修飾の例は、当業者に公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ Ｅら（１９９０）Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４３；「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ」Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ＆ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｅｄ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ １９９３；Ｃｒｏｏｋｅ ＳＴら（１９９６）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３６：１０７−２９；およびＨｕｎｚｉｋｅｒ Ｊら（１９９５）Ｍｏｄ Ｓｙｎｔｈ Ｍｅｔｈｏｄｓ ７：３３１−４１７に記載されている。本発明に従うオリゴヌクレオチドは、１つ以上の改変を有し得、ここで、各々の改変は、特定のホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ、および／または特定のβ−Ｄ−リボース単位、および／または、天然のＤＮＡもしくはＲＮＡから構成された同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較した特定の天然のヌクレオシド塩基位置に位置する。
【０２１３】
例えば、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の改変を含み得、ここで各々の改変は、独立して以下から選択される：
ａ）修飾されたヌクレオシド間ブリッジによる、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジの置き換え、
ｂ）脱リン結合による、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルブリッジの置き換え、
ｃ）別の単位による、糖リン酸骨格からの糖リン酸単位の置き換え、
ｄ）修飾された糖単位による、β−Ｄ−リボース単位の置き換え、ならびに
ｅ）修飾されたヌクレオシド塩基による、天然のヌクレオシド塩基の置き換え。
【０２１４】
オリゴヌクレオチドの化学修飾についてのより詳細な例は、以下のとおりである。
【０２１５】
オリゴヌクレオチドは、上記ａまたはｂに記載されたもののような、修飾されたヌクレオチド間結合を含み得る。これらの修飾された結合は、部分的に分解に抵抗性（例えば、安定化されている）であり得る。「安定化されたオリゴヌクレオチド分子」は、このような修飾から生じる、（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）インビボ分解に対して比較的抵抗性のオリゴヌクレオチドを意味する。いくつかの実施形態において、ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、最大の活性を提供し、そして、細胞内のエキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解から、オリゴヌクレオチドを保護し得る。
【０２１６】
ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジは、修飾されたヌクレオシド間ブリッジにより置き換えられ得、ここで、修飾されたヌクレオシド間ブリッジは、例えば、以下から選択される：ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ１Ｒ２−ホスホラミダイト、ボラノホスフェート（ｂｏｒａｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、α−ヒドロキシベンジルホスホネート、ホスフェート−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル、ホスフェート−［（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルホスホネート、および／または（Ｃ６〜Ｃ１２）アリールホスホネートブリッジ、（Ｃ７〜Ｃ１２）−α−ヒドロキシメチル−アリール（例えば、ＷＯ ９５／０１３６３に開示されるもの）（ここで、（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール、（Ｃ６〜Ｃ２０）アリールおよび（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールは、必要に応じて、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノにより置換され、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、（Ｃ６〜Ｃ２０）−アリール、（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルおよび／もしくはメトキシエチルであるか、あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それを有する窒素原子を一緒になって、５〜６員の複素環を形成し、この環は、さらに、Ｏ、ＳおよびＮの群からのヘテロ原子を含み得る）。
【０２１７】
脱リンブリッジによる、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルブリッジの置き換え（脱リンブリッジは、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ ＥおよびＰｅｙｍａｎ Ａ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｖｏｌ．２０，「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ」，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ １９９３，Ｃｈａｐｔｅｒ １６，ｐｐ．３５５ ｆｆに記載される）。ここで、脱リンブリッジは、例えば、脱リンブリッジホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチル−ヒドラゾ、ジメチレンスルホン、および／またはシリル基から選択される。
【０２１８】
糖リン酸骨格からの糖リン酸単位（すなわち、糖リン酸単位を共に形成する、β−Ｄ−リボースおよびホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ）（すなわち、糖リン酸骨格は、糖リン酸単位から構成される）は、他の単位が、例えば、「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ ＥＰら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １７：６１２９−４１に記載される）を構築するために適切な別の単位によって置き換えられ得る（すなわち、例えば、モルホリノ誘導体単位による置き換え）か；または、ポリアミド核酸（「ＰＮＡ」；例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＥら（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ５：３−７に記載される）を構築するために適切な別の単位によって置き換えられ得る（すなわち、ＰＮＡ骨格による（例えば、２−アミノエチルグリシンによる）置き換え）。オリゴヌクレオチドは、他の炭水化物骨格の修飾および置換（例えば、リン酸基を有するペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロックト核酸（ＬＮＡ）、およびアルキルリンカーもしくはアミノリンカーを有する骨格セクションを有するオリゴヌクレオチド）を有し得る。アルキルリンカーは、分枝もしくは非分枝の、置換もしくは非置換の、キラル的に純粋であるか、またはラセミ体の混合物であり得る。
【０２１９】
β−リボース単位またはβ−Ｄ−２’−デオキシリボース単位は、修飾された糖単位により置き換えされ得、この修飾された糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボースから選択され、好ましくは、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボースは、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル−リボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル］−リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロ−フラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、および炭素環式（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ（１９９２）Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １１４：８３２０に記載される）、および／または開鎖の糖アナログ（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅら（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９：７２２３に記載される）、および／または二環式糖アナログ（例えば、Ｔａｒｋｏｖ Ｍら（１９９３）Ｈｅｌｖ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ７６：４８１に記載される）である。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、糖は、２’−Ｏ−メチルリボースであり、特に、ホスホジエステルもしくはホスホジエステル様のヌクレオシド間結合により一方または両方のヌクレオシドが連結されている。
【０２２１】
核酸はまた、Ｃ−５プロピン（ｐｒｏｐｙｎｅ）ピリミジン修飾された塩基および７−デアザ−７−置換プリン修飾された塩基のような、置換プリンおよび置換ピリミジンを含む。Ｗａｇｎｅｒ ＲＷら（１９９６）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４：８４０−４。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、チミンおよびウラシル、ならびに、天然に存在しない核酸塩基、置換および非置換の芳香族部分が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２２】
修飾された塩基は、ＤＮＡおよびＲＮＡにおいて代表的に見られる、天然に存在する塩基（例えば、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＡおよびＵ）とは化学的に異なるが、これらの天然に存在する塩基と基本的な化学構造を共有する、任意の塩基である。修飾されたヌクレオシド塩基は、例えば、以下から選択され得る：ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、シュードウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン（好ましくは、７−デアザ−７−置換プリンおよび／または７−デアザ−８−置換プリン）、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン（例えば、Ｎ４−エチルシトシン）、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン（例えば、Ｎ４−エチルデオキシシチジン）、６−チオデオキシグアノシン、およびニトロピロールのデオキシリボヌクレオシド、Ｃ５−プロピルピリミジン、およびジアミノプリン（例えば、２，６−ジアミノプリン）、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチン、あるいは、天然のヌクレオシド塩基の他の修飾物。このリストは、例示的なものを意味し、そして、限定的であることは意図されるべきでない。
【０２２３】
本明細書中に記載される特定の処方において、修飾された塩基が組み込まれ得る。例えば、シトシンは、修飾されたシトシンで置き換えられ得る。本明細書中で使用される場合、修飾されたシトシンは、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなく、この塩基を置き換え得る、シトシンの天然に存在するか、または天然に存在しないピリミジン塩基アナログである。修飾されたシトシンとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および非置換もしくは置換の５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン（例えば、６−ヒドロキシ−シトシン）、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、シュード−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピル−ウラシル）。いくつかの好ましいシトシンとしては、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、およびＮ４−エチル−シトシンが挙げられる。本発明の別の実施形態において、シトシン塩基は、ユニバーサル塩基（例えば、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基）、芳香族環系（例えば、フルオロベンゼンまたはジフルオロベンゼン）、または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）により置換される。
【０２２４】
グアニンは、修飾されたグアニン塩基で置き換えられ得る。修飾されたグアニンとは、本明細書中で使用される場合、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなく、この塩基を置き換え得る、グアニンの天然に存在するか、または天然に存在しない、プリン塩基アナログである。修飾されたグアニンとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：７−デアザグアニン、７−デアザ−７置換グアニン、（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ、６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン、（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）、８−置換グアニン、（例えば、８−ヒドロキシグアニンおよび８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニン。本発明の別の実施形態において、グアニン塩基は、ユニバーサル塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、およびＫ−塩基）、芳香族環系（例えば、ベンズイミダゾールまたはジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）により置換される。
【０２２５】
一実施形態において、ＣＧジヌクレオチドのＣおよびＧの両方が、それぞれ、修飾されていないシトシン残基および修飾されていないグアニン残基である。一実施形態において、ＣＧジヌクレオチドのＣは、メチル化されていない。
【０２２６】
本発明における使用について、本発明のオリゴヌクレオチドは、当該分野で周知の多くの手順（例えば、β−シアノエチルホスホラミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ ＳＬら（１９８１）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２２：１８５９）；またはヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５１−４；Ｆｒｏｅｈｌｅｒ ＢＣら（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ １４：５３９９−４０７；Ｇａｒｅｇｇら（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５５−８；Ｇａｆｆｎｅｙら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２９：２６１９−２２））のいずれかを使用して、新たに合成され得る。これらの化学は、市場で入手可能な種々の自動化核酸合成装置によって実施され得る。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと呼ばれる。単離されたオリゴヌクレオチドは、一般に、自然状態では正常に関連している構成要素から分離されたオリゴヌクレオチドを指す。一例として、単離されたオリゴヌクレオチドは、細胞から、核から、ミトコンドリアから、またはクロマチンから分離されたオリゴヌクレオチドであり得る。
【０２２７】
ホスホロチオエートのような修飾された骨格は、ホスホラミダイトまたはＨ−ホスホネート化学のいずれかを使用する自動化技術を用いて合成され得る。アリール−ホスホネートおよびアルキル−ホスホネートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載されるように作製され得；そして、アルキルホスホトリエステル（米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載されるように、帯電した酸素部分がアルキル化されている）は、市販の試薬を用いる自動化固相合成により調製され得る。他のＤＮＡ骨格の修飾および置換を作製するための方法が記載されている（例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ Ｅら（１９９０）Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ Ｊ（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １：１６５）。
【０２２８】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、ヌクレオチドまたはヌクレオシドアナログ部分の間に、１つ以上の異常な結合を含み得る。通常のヌクレオシド間結合は、３’５’−結合である。全ての他の結合（例えば、２’５’−結合、５’５’−結合、３’３’−結合、２’２’−結合、および２’３’−結合）は、異常なヌクレオシド間結合とみなされる。それにより、２’〜５’の命名法は、リボースの炭素原子に従って選択される。しかし、環拡大した糖アナログ（例えば、ヘキサノース、シロヘキセン、またはピラノース）、または二環式もしくは三環式の糖アナログのような非天然の糖部分が使用される場合、この命名法は、モノマーの命名法に従って変化する。３’−デオキシ−β−Ｄ−リボピラノースアナログ（β−ＤＮＡとも呼ばれる）において、モノヌクレオシドは、例えば、４’２’−結合を介して接続される。
【０２２９】
ヌクレオチドが１つの３’３’−結合を含む場合、このオリゴヌクレオチドアナログは、通常、２つの未結合５’−末端を有する。同様に、ヌクレオチドが、１つの５’５’−結合を含む場合、このオリゴヌクレオチドアナログは、通常、２つの未結合３’−末端を有する。ヌクレオチドの未結合末端のアクセス性は、そのレセプターにより良好にアクセス可能であり得る。両方の型の異常な結合（３’３’−および５’５’−）は、Ｏｒｔｉｇａｏ ＪＦら（１９９２）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ Ｄｅｖ ２：１２９−４６により記載されており、この文献では、３’３’−結合を有するオリゴヌクレオチドが、ヌクレアーゼによる切断に対して増強された安定性を示すことが報告された。
【０２３０】
異なる型の結合がまた、１つの分子内で組み合わされ得、オリゴマーの分枝をもたらし得る。オリゴヌクレオチドの１つの部分が、３’３’−結合を介して３’−末端において第２のオリゴヌクレオチド部分に接続され、そして、２’３’−結合を介して２’−末端において分子の第３の部分に接続される場合、これは、例えば、３つの５’−末端（３’３’−分枝、２’３’−分枝）を有する分枝オリゴヌクレオチドを生じる。
【０２３１】
原則として、オリゴヌクレオチドの異なる部分の間、または、異なるオリゴヌクレオチド間の結合は、それぞれ、そのレセプターによる認識を負に妨げない限りは、この分子のあらゆる部分を介して生じ得る。核酸の性質に従って、結合は、糖部分（Ｓｕ）、複素環式核酸塩基（Ｂａ）またはリン酸骨格（Ｐｈ）を必要とし得る。従って、Ｓｕ−Ｓｕ、Ｓｕ−Ｐｈ、Ｓｕ−Ｂａ、Ｂａ−Ｂａ、Ｂａ−Ｓｕ、Ｂａ−Ｐｈ、Ｐｈ−Ｐｈ、Ｐｈ−Ｓｕ、およびＰｈ−Ｂａの型の結合が可能である。オリゴヌクレオチドが、特定の非ヌクレオチド置換基によってさらに修飾される場合、この結合はまた、オリゴヌクレオチドの修飾された部分を介して生じ得る。これらの修飾としては、修飾された核酸（例えば、ＰＮＡ、ＬＮＡまたはモルホリノオリゴヌクレオチドアナログ）が挙げられる。
【０２３２】
結合は、好ましくは、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｂ、Ｐおよびハロゲンから構成され、３〜３００個の原子を含む。３個の原子を有するものの例は、例えば、１つのヌクレオチドの３’−ヒドロキシ基を、第２のオリゴヌクレオチドの３’−ヒドロキシ基に接続する、アセタール結合（ＯＤＮ１−３’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−３’−ＯＤＮ２；ＦｒｏｅｈｌｅｒおよびＭａｔｔｅｕｃｃｉ）である。約３００個の原子を有するものの例は、ＰＥＧ−４０（テトラコンタポリエチレングリコール（ｔｅｔｒａｃｏｎｔａ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ））である。好ましい結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホラミダイト、ボラノホスホネート、アミド、エーテル、チオエーテル、アセタール、チオアセタール、ウレア、チオウレア、スルホンアミド、シッフ塩基、およびジスルフィド結合である。別の可能性は、Ｓｏｌｕｌｉｎｋ ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＴｒｉＬｉｎｋ ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の使用である。
【０２３３】
オリゴヌクレオチドが、２つ以上の配列部分から構成される場合、これらの部分は、同一であっても異なっていてもよい。従って、３’３’−結合を有するオリゴヌクレオチドにおいて、配列は同一（例えば、５’−ＯＤＮ１−３’３’−ＯＤＮ１−５’）であっても、異なって（例えば、５’−ＯＤＮ１−３’３’−ＯＤＮ２−５’）いてもよい。さらに、種々のオリゴヌクレオチド部分およびこれらをつなぐリンカーの化学修飾は、異なり得る。短いオリゴヌクレオチドの取り込みは、長いオリゴヌクレオチドの取り込みよりも非効率的であるようなので、２つ以上の短い配列の結合は、改善された免疫刺激を生じる。短いオリゴヌクレオチドの長さは、好ましくは、２〜２０ヌクレオチドであり、より好ましくは、３〜１６ヌクレオチドであるが、最も好ましくは、５〜１０ヌクレオチドである。好ましくは、２つ以上の未結合５’−末端を有するオリゴヌクレオチドで連結される。
【０２３４】
オリゴヌクレオチドの部分配列はまた、得に、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコール単位、またはヘキサエチレングリコール単位において、非ヌクレオチドリンカーにより連結され得る。他のリンカーとしては、アルキルアミノリンカー（例えば、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２のアミノリンカー）、そしてまた、アルキルチオールリンカー（例えば、Ｃ３またはＣ６のチオールリンカー）が挙げられる。オリゴヌクレオチドはまた、アルキル基もしくは置換アルキル基によりさらに置換され得る、芳香族残基により連結され得る。
【０２３５】
オリゴヌクレオチドはまた、二重または三重（ｄｏｕｂｌｅｒ ｏｒ ｔｒｅｂｌｅｒ）の単位（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）（特に、３’３’−結合を有するオリゴヌクレオチド）を含み得る。一実施形態において、二重単位は、１，３−ビス−［５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ペンチルアミド］プロピル−２−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトに基づき得る。一実施形態において、三重単位は、トリス−２，２，２−［３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）プロピルオキシメチル］エチル−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトの取り込みに基づき得る。複数の二重、三重または他の多重の単位によるオリゴヌクレオチドの枝分かれは、デンドリマーを生じ、これは、本発明のさらなる実施形態である。オリゴヌクレオチドはまた、ペプチド修飾試薬、またはオリゴヌクレオチド修飾試薬（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）から生じるリンカー単位を含み得る。さらに、結合は、ペプチド（アミド）結合により接続された１つ以上の天然または非天然のアミノ酸残基を含み得る。
【０２３６】
オリゴヌクレオチドを連結するための別の可能性は、複素環式塩基の架橋を介するものである（Ｖｅｒｍａ Ｓら（１９９８）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６７：９９−１３４；第１２４頁）。なお別の可能性は、１つの配列部分の糖部分と、別の配列部分の複素環式塩基との間の結合である（Ｉｙｅｒら（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １：３４４−５８；第３５２頁）。
【０２３７】
異常な結合を含む異なるオリゴヌクレオチドは、確立された方法により合成され、そして、固相合成の間に、オンラインで一緒に連結され得る。あるいは、これらは、個々の部分配列の合成に続いて、一緒に連結され得る。
【０２３８】
マウスのシステムにおいて強い刺激活性を有するＣｐＧホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、ヒトおよび他の非げっ歯類免疫細胞においてより低い活性を示す傾向にある。これらの（ＴＣＧ）ｎＮモチーフまたはＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎモチーフを含むＤＮＡは、ヒトの末梢血を強く刺激して、ＩＦＮ−αを生成した。
【０２３９】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドのサブセットは、ヒト細胞（例えば、ＰＢＭＣ）に対して劇的な免疫刺激効果を有するということが、本発明によって発見され、これは、これらのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、ヒトワクチン接種、癌の免疫療法、喘息の免疫療法、免疫機能の全身性の増強、照射または化学療法の後の造血の回復の増強、および他の免疫調節性用途のための有効な治療剤であることを示唆している。
【０２４０】
本明細書中で使用される場合、用語「処置する、処置される、または処置すること」は、感染性疾患、癌、アレルギーまたは喘息のような障害に関して使用される場合、疾患の発症に対する被験体の抵抗性を増加させる（例えば、病原での感染）、または、言い換えると、被験体が疾患を発症する可能性を減少させる（例えば、病原に感染される）ための予防的処置、および、疾患と闘う（例えば、感染を減少または排除する）ため、もしくは疾患が悪化することを防止するための、被験体が疾患を発症した後の処置を指す。
【０２４１】
従って、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、本発明のいくつかの局面において、アレルギーもしくは喘息、感染性生物での感染、または、特定の癌抗原が同定されている癌を罹患しているか、またはこれらを発症する危険がある被験体の処置のためのワクチンとして、有用である。従って、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、感染、アレルギー、喘息または癌の処置のための抗原またはアレルゲンと組み合わせて被験体に投与され得る。あるいは、および、さらに、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、感染、アレルギー、もしくは癌に対する防御のために、抗原またはアレルゲンなしの単独で与えられ得るか、または、他の治療剤と共に投与され得る。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、他の治療剤と共に投与され得る。反復用量は、より長い期間の防御を可能にし得る。
【０２４２】
本明細書中で使用される場合、「危険がある被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ ａｔ ｒｉｓｋ）」とは、感染の原因となる病原もしくはアレルゲンへの曝露の任意の特定可能な危険があるか、または、癌を発症する危険がある被験体である。例えば、感染を発症する危険がある被験体とは、特定の型の感染性因子が見られた領域に旅行することを計画している被験体であり得るか、または、ライフスタイルもしくは医療手順を介して、感染性の生物を含み得る体液、もしくはその生物に直接曝露される被験体であり得るか、または、感染性生物またはアレルゲンが同定されている領域に住んでいる任意の被験体であり得る。感染を発症する危険がある被験体としてはまた、特定の感染性生物抗原を用いるワクチン接種を、医療機関が推奨する一般大衆が挙げられる。抗原が、アレルゲンであり、被験体が、その特定の抗原に対してアレルギー反応を発症し、さらに、被験体が、例えば、花粉のシーズンの間に、抗原に曝露され得る場合、その被験体は、アレルギー反応を発症する危険がある。アレルギーもしくは喘息を発症する危険がある被験体としては、アレルギーもしくは喘息を罹患しているとして同定されたが、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの処置の間には、活性な疾患を有さない被験体が挙げられる。アレルギーもしくは喘息を発症する危険がある被験体としてはまた、遺伝的要因または環境要因に起因してこれらの疾患を発症する危険があると考えられる被験体が挙げられる。
【０２４３】
癌を発症する危険がある被験体は、癌を発症する可能性が高い被験体である。これらの被験体としては、例えば、遺伝的異常を有する被験体、癌を発症する高い可能性と相関関係を有することが実証された存在、タバコ、アスベストもしくは他の化学毒のような癌に関連する因子に曝露された被験体、および、以前に癌の処置を受け、外見上は寛解している被験体が挙げられる。癌を発症する危険がある被験体が、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド、そして必要に応じて、その被験体が発症する危険がある癌の型に特異的な抗原で処置される場合、この被験体は、癌が発症すると、癌細胞を殺傷し得る。被験体内で腫瘍が形成し始めると、被験体は、生得的な免疫応答、または腫瘍抗原に対する特定の免疫応答を発症する。
【０２４４】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの予防的処置のための使用に加えて、本発明はまた、感染、アレルギー、喘息または癌を罹患している被験体の処置のためのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用を包含する。
【０２４５】
感染を罹患している被験体は、感染性の病原に対して曝露され、そして、体内に急性もしくは慢性的に検出可能なレベルの病原を有する被験体である。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、抗原もしくは他の治療剤を伴ってか、または伴わずに使用され得、感染性病原のレベルを減少し得るか、または、感染性病原を根絶し得る、生得的もしくは抗原特異的な全身性もしくは粘膜性の免疫応答を起こし得る。本明細書中で使用される場合、「感染病」とは、体内における外来性の微生物の存在から生じる疾患である。病原の進入の最初の部位である、身体の粘膜表面を保護するための有効なワクチンストラテジーおよび処置を開発することが特に重要である。
【０２４６】
アレルギーを罹患している被験体は、アレルゲンに対する応答において、アレルギー反応を発症し得る被験体である。アレルギーは、基質（アレルゲン）に対する獲得された過感受性を指す。アレルギー性の条件としては、湿疹、アレルギー性鼻炎もしくは鼻感冒、花粉症、結膜炎、気管支喘息、アレルギー性喘息、蕁麻疹、食物アレルギー、および他のアトピー性条件が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４７】
アレルギーは、一般に、無害なアレルゲンに対するＩｇＥ抗体の生成により生じる。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの全身投与もしくは粘膜投与により誘導されるサイトカインは、Ｔｈ１と呼ばれるクラス（例としては、ＩＬ−１２、ＩＰ−１０、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−γである）に多く、そして、これらは、体液性免疫応答および細胞性免疫応答の両方を誘導する。ＩＬ−４およびＩＬ−５サイトカインの生成に関連する免疫応答の他の主要な型は、Ｔｈ２免疫応答と呼ばれる。一般に、アレルギー性疾患は、Ｔｈ２型の免疫応答により媒介されるようである。本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの、優勢なＴｈ２（ＩｇＥ抗体およびアレルギーの生成に関連する）から平衡したＴｈ２／Ｔｈ１応答（アレルギー反応に対する防御）へと被験体における免疫応答をシフトさせる能力に基づいて、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの免疫応答を誘導するための有効用量が、喘息およびアレルギーを処置するために、被験体に投与され得る。
【０２４８】
従って、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、アレルギー状態および喘息の処置において有意な治療的有用性を有する。Ｔｈ２サイトカイン（特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５）は、喘息の被験体の気道において増大される。これらのサイトカインは、喘息の炎症性応答の重要な局面（ＩｇＥアイソトープの切り替え、好酸球の化学走性および活性化、ならびに、肥満細胞の増殖が挙げられる）を促進する。Ｔｈ１サイトカイン（特に、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２）は、Ｔｈ２クローンの形成、およびＴｈ２サイトカインの生成を抑制し得る。喘息は、免疫により特徴付けられる呼吸器系の障害、気道の狭小化、および吸入剤に対する気道の反応性の増加を指す。喘息は、専らではないものの、しばしば、アトピー症状またはアレルギー症状に関連する。従って、喘息は、アレルギー性喘息および非アレルギー性喘息を含む。
【０２４９】
癌を罹患する被験体は、検出可能な癌性細胞を有する被験体である。癌は、悪性の癌であっても非悪性の癌であってもよい。癌または腫瘍としては、胆管癌；脳腫瘍；乳癌；子宮頸部癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；上皮内新生物；リンパ腫；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；黒色腫；神経芽細胞腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫；皮膚癌；精巣癌；甲状腺癌；および腎臓癌、ならびに他の癌腫および他の肉腫が挙げられるがこれらに限定されない。一実施形態において、癌は、毛様細胞白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮細胞癌腫、腎細胞癌腫、前立腺癌腫、膀胱細胞癌腫、または結腸癌腫である。
【０２５０】
被験体とは、ヒトまたは脊椎動物を意味し、これらとしては、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ターキー、ニワトリ、霊長類（例えば、サル）、魚類（水産種）（例えば、サケ）が挙げられる。従って、この化合物は、ヒトおよび非ヒト被験体において癌および腫瘍、感染、ならびにアレルギー／喘息を処置するために使用され得る。癌は、愛玩動物（例えば、ネコおよびイヌ）の死の主な原因の１つである。
【０２５１】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、抗原と共に投与される例において、被験体は、抗原に曝露され得る。本明細書中で使用される場合、用語「〜に曝露される」とは、被験体を抗原に曝露させるという能動的な工程、または、インビボでの被験体の抗原への受動的な曝露のいずれかを指す。抗原への被験体の能動的な曝露のための方法は、当該分野で周知である。一般に、抗原は、静脈内、筋肉内、経口、経皮、粘膜、鼻腔内、気管内、または皮下の投与のような手段で、被験体に直接投与される。抗原は、全身もしくは局所的に投与され得る。抗原およびＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを投与するための方法は、以下により詳細に記載される。被験体は、抗原が体内の免疫細胞への曝露に利用可能になると、抗原に受動的に曝露される。被験体は、例えば、外来性の病原の体内への侵入によって、またはその表面に外来性の抗原を発現する腫瘍細胞を発生させることによって、抗原に受動的に曝露され得る。
【０２５２】
被験体が抗原に受動的に曝露される方法は、特に、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの投与のタイミングに依存し得る。例えば、癌もしくは感染病、またはアレルギー反応もしくは喘息反応を発症する危険がある被験体において、被験体は、その危険性が最大になるとき（例えば、アレルギーのシーズン中、または、癌の原因となる因子への曝露後）に、定期的にＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを投与され得る。さらに、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、旅行者が、感染性因子に曝露される危険に曝される外国に旅行する前に、旅行者に投与され得る。同様に、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、被験体が、抗原に曝露される場合に、その抗原に対する全身もしくは粘液の免疫応答を誘導するような生物戦争（ｂｉｏｗａｒｆａｒｅ）に曝露される危険がある兵士または一般市民に投与され得る。
【０２５３】
本明細書において使用される抗原は、免疫応答を惹起し得る分子である。抗原としては、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖、多糖結合体、多糖のペプチド模倣物および非ペプチド模倣物、ならびに他の分子、低分子、脂質、糖脂質、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに、寄生生物のような多細胞生物、ならびにアレルゲンが挙げられるがこれらに限定されない。用語「抗原」は、宿主の免疫系により外来であると認識されるあらゆる型の分子を広く包含する。抗原としては、癌抗原、微生物抗原、およびアレルゲンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２５４】
本明細書において使用される癌抗原は、腫瘍または癌細胞の表面に結合し、そして、ＭＨＣ分子との関連において、抗原提示細胞の表面に発現されるときに、免疫応答を惹起し得る、ペプチドまたはタンパク質のような化合物である。癌抗原は、例えば、Ｃｏｈｅｎ
ＰＡら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５４：１０５５−８に記載されるように、癌細胞の粗抽出物を調製すること、抗原を部分的に精製すること、組換え技術、または、公知の抗原の新規合成のいずれかによって、癌細胞から調製され得る。癌抗原としては、組換え的に発現された抗原、その免疫原性部分、もしくは、全体、または癌細胞が挙げられるがこれらに限定されない。このような抗原は、組換え的にか、または、当該分野で公知の任意の他の手段によって単離または調製され得る。
【０２５５】
本明細書中で使用される場合、用語「癌抗原」および「腫瘍抗原」は、癌細胞により差次的に発現され、それにより、癌細胞を標的とするために利用され得る抗原をいうために、交換可能に使用される。癌抗原は、明らかに腫瘍特異的な免疫応答を潜在的に刺激し得る抗原である。これらの抗原のいくつかは、必ずしも発現されていないが、正常細胞によってコードされる。これらの抗原は、正常細胞において通常はサイレント（すなわち、発現されていない）もの、分化の特定の段階でのみ発現されるもの、そして、胚性抗原および胎性抗原のような一過的に発現されるものとして特徴付けられ得る。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化されたｒａｓ癌遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異たがｐ５３）、内部欠失または染色体転座から生じた融合タンパク質のような、変異型の細胞遺伝子によりコードされる。なお他の癌抗原は、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上で運搬されるもののようなウイルス遺伝子によりコードされ得る。
【０２５６】
本明細書中で使用される微生物抗原は、微生物の抗原であり、微生物としては、ウイルス、細菌、寄生生物および真菌が挙げられるがこれらに限定されない。これらの抗原としては、インタクトな微生物、ならびに天然に存在する単離体およびそのフラグメントまたは誘導体、そしてまた、天然に存在する微生物と同一であるかもしくはこれに類似し、かつその微生物に特異的な免疫応答を誘導する合成化合物が挙げられる。化合物は、天然に存在する微生物抗原に対して免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘導する場合に、天然に存在する微生物抗原に類似する。このような抗原は、当該分野で慣用的に使用されており、当業者に周知である。
【０２５７】
ヒトにおいて見られるウイルスの例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：レトロウイルス科（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、もしくはＨＩＶ−ＩＩＩとも呼ばれる）；および他の単離株（例えば、ＨＩＶ−ＬＰ））；ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、リノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳウイルス）；オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンヤウイルス科（例えば、ハンターンウイルス、ブンヤウイルス、フレボウイルスおよびナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および単純ヘルペスウイルス２、水痘−帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）；ならびに未分類のウイルス（例えば、デルタ型肝炎の病因因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトであると考えられる）、Ｃ型肝炎の病因因子；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、ならびにアストロウイルス）。
【０２５８】
グラム陰性およびグラム陽性の両方の細菌が、脊椎動物における抗原として機能する。このようなグラム陽性細菌としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ種、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種が挙げられるがこれらに限定されない。グラム陰性細菌としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種が挙げられるがこれらに限定されない。感染性細菌の具体的な例としては、以下：
【０２５９】
【化７６】
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２６０】
真菌の例としては、以下：
【０２６１】
【化７７】
が挙げられる。
【０２６２】
他の感染性生物（すなわち、原生生物）としては、以下：
【０２６３】
【化７８】
が挙げられる。血液由来および／または組織の寄生生物としては、以下：
【０２６４】
【化７９】
が挙げられる。
【０２６５】
他の医療的に関連のある微生物は、文献に広範に記載されている。例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ
Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉｎ １９８３（その全内容が、本明細書により参考として援用される）を参照のこと。
【０２６６】
アレルゲンは、病気にかかりやすい被験体においてアレルギーまたは喘息の応答を誘導し得る物質（抗原）をいう。アレルゲンのリストは、莫大であり、花粉、昆虫毒、動物の鱗屑、粉塵、真菌の胞子および薬物（例えば、ペニシリン）が挙げられ得る。天然の、動植物のアレルゲンの例としては、以下の種属：
【０２６７】
【化８０】
に特異的なタンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２６８】
抗原は、実質的に精製されていてもよい。用語「実質的に精製された」とは、本明細書中で使用される場合、他のタンパク質、脂質、炭水化物またはその抗原に天然に結合している他の物質を実質的に含まない、抗原、すなわち、ポリペプチドを指す。当業者は、タンパク質精製の標準的な技術を使用して、ポリペプチド抗原を精製し得る。実質的に純粋なポリペプチドは、しばしば、非還元のポリアクリルアミドゲル上で単一の主要なバンドを得る。部分的にグリコシル化されたポリペプチド、またはいくつかの開始コドンを有するものの場合、非還元のポリアクリルアミドゲル上にいくつかのバンドが存在し得るが、これらは、そのポリペプチドに特徴的なパターンを形成する。ポリペプチド抗原の純度はまた、アミノ末端のアミノ酸配列分析により決定され得る。多糖、低分子、模倣物などのような他の型の抗原が、本発明に含まれ、これらは、必要に応じて、実質的に純粋であり得る。
【０２６９】
本発明のオリゴヌクレオチドは、抗細菌剤と共に被験体に投与され得る。抗細菌剤とは、本明細書中で使用される場合、感染性微生物を殺傷または抑制し得る、天然に存在するか、または合成の化合物をいう。本発明に従って有用な抗細菌剤の型は、その被験体が感染しているかまたは感染する危険がある、微生物の型に依存する。抗細菌剤としては、抗細菌剤（ａｎｔｉ−ｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｇｅｎｔ）、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および駆虫剤（ａｎｔｉ−ｐａｒａｓｉｔｉｃ ａｇｅｎｔ）が挙げられるがこれらに限定されない。「抗感染剤」、「抗細菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「駆虫剤」および「殺虫剤（ｐａｒａｓｉｔｉｃｉｄｅ）」のような句は、当業者に対して十分に確立された意味を有し、そして、標準的な医学の教科書に規定されている。簡単に述べると、抗細菌剤は、細菌を殺傷または抑制する。抗細菌剤としては、抗生物質、ならびに類似する機能を有する他の合成化合物もしくは天然化合物が挙げられる。抗生物質とは、細胞（例えば、微生物）による二次代謝物として生成される低分子量分子である。一般的には、抗生物質は、その微生物に特異的でありかつ宿主細胞中には存在しない、１つ以上の細菌もしくは構造体を妨害する。抗ウイルス剤は、天然供給源から単離されても、合成されてもよい。抗ウイルス剤は、ウイルスを殺傷または抑制するために有用である。抗真菌剤は、表面真菌感染症ならびに日和見真菌感染症および現発性全身真菌感染症を処置するために使用される。抗寄生生物剤は、寄生生物を殺傷または抑制する。
【０２７０】
ヒトへの投与に有用な殺虫剤とも呼ばれる抗寄生生物剤の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：アルベンダゾール、アムホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、クロロキンリン酸塩、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフロエート、エフロオルニチン、フラゾリドン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、グルココルチコイド、ハロファントリン（ｈａｌｏｆａｎｔｒｉｎｅ）、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾル、メフロキン（ｍｅｆｌｏｑｕｉｎｅ）、アンチモン酸メグロミン、メラルソプロール（ｍｅｌａｒｓｏｐｒｏｌ）、メトリホナート、メトロニダゾール、ニクロスアミド、ニフルチモックス（ｎｉｆｕｒｔｉｍｏｘ）、オキサムニキン、パロモマイシン、ペンタミジンイセチオネート、ピペラジン、プロジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル（ｐｒｏｇｕａｎｉｌ）、ピランテルパモエート、ピリメタミン−スルホンアミド（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｏ）、ピリメタミン−スルファドキシン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆａｄｏｘｉｎｅ）、キナクリンＨＣｌ、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコネートナトリウム（グルコン酸アンチモンナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトロピウム−スルファメトキサゾール、および、トリパルサミド（これらのうちのいくつかは、単独でか、もしくは他のものと組み合わせて使用される）。
【０２７１】
抗細菌剤は、細菌を殺傷させるか、または細菌の増殖もしくは機能を抑制する。抗細菌剤の大きな種類は、抗生物質である。広範な細菌を殺傷または抑制するのに有効である抗生物質は、広域抗生物質と呼ばれる。他の型の抗生物質は、グラム陽性である種類の細菌またはグラム陰性である種類の細菌に対して主に有効である。これらの型の抗生物質は、狭域抗生物質と呼ばれる。単一の生物または疾患に対して有効であり他の型の細菌に対しては有効ではない他の抗生物質は、限定域抗生物質と呼ばれる。抗細菌剤は、時に、その主要作用様式に基づいて分類される。一般的に、抗細菌剤は、細胞壁合成インヒビター、細胞膜インヒビター、タンパク質合成インヒビター、核酸合成インヒビターもしくは核酸機能インヒビター、および競合インヒビターである。
【０２７２】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞感染を防ぐかまたは細胞内でのウイルス複製を防ぐ、化合物である。抗細菌剤よりはかなり少ない抗ウイルス剤が存在する。なぜなら、ウイルス複製プロセスは、宿主におけるＤＮＡ複製と非常に密接に関連しており、非特異的抗ウイルス剤は、その宿主にとってしばしば毒性であるからである。抗ウイルス剤によっ
て遮断または阻害され得るいくつかの段階が、ウイルス感染プロセス中に存在する。これらの段階としては、宿主細胞へのウイルスの付着（免疫グロブリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱被膜（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成もしくは翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡもしくはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシドアナログ）、新規なウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼインヒビター）、ならびにウイルスの出芽および放出が、挙げられる。
【０２７３】
ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドに類似するが、不完全もしくは異常なデオキシリボース基もしくはリボース基を有する、合成化合物である。一旦ヌクレオチドアナログが細胞内に入ると、これらは、リン酸化されて、チオリン酸形態を生じ、このチオリン酸形態は、ウイルスＤＮＡまたはウイルスＲＮＡ内への組み込みについて、正常なヌクレオチドと競合する。一旦、ヌクレオチドアナログのチオリン酸形態が、増大する核酸鎖内に組み込まれると、これは、ウイルスポリメラーゼと不可逆的な会合を生じ、従って、連鎖が停止する。ヌクレオチドアナログとしては、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの処置に使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に有用）、イドクスウリジン、リバビリン（ＲＳウイルスの処置に有用）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ジドブジン（アジドチミジン）、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、およびレシミキモド（ｒｅｓｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７４】
インターフェロンは、ウイルス感染細胞および免疫細胞により分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接する細胞上にある特異的なレセプターに結合し、ウイルスによる感染からその細胞を保護する細胞内での変化を生じることによって機能する。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンはまた、感染細胞の表面上でクラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ分子の発現を誘導し、宿主の免疫細胞認識のための抗原提示の増加を生じる。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、組換え形態として利用可能であり、慢性のＢ型肝炎およびＣ型肝炎の感染の処置に使用されている。抗ウイルス両方に有効な投薬量において、インターフェロンは、発熱、倦怠感および体重減少のような重篤な副作用を有する。
【０２７５】
本発明において有用な抗ウイルス剤としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオシドアナログ、およびプロテアーゼインヒビター。抗ウイルス剤の特定の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：アセマンナン（Ａｃｅｍａｎｎａｎ）；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデフォビル（Ａｄｅｆｏｖｉｒ）；アロブジン（Ａｌｏｖｕｄｉｎｅ）；アルビルセプトスドトックス（Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ Ｓｕｄｏｔｏｘ）；塩酸アマンタジン；アラノチン（Ａｒａｎｏｔｉｎ）；アリルドン（Ａｒｉｌｄｏｎｅ）；メシル酸アテルビジン；アブリジン（Ａｖｒｉｄｉｎｅ）；シドフォビル（Ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）；シパムフィリン（Ｃｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）；塩酸シタラビン；メシル酸デラビルジン（Ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；デスシクロビル；ジダノシン；ジソキサリル（Ｄｉｓｏｘａｒｉｌ）；エドクスウリジン；エンビラデン（Ｅｎｖｉｒａｄｅｎｅ）；エンビロキシム（Ｅｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ファムシクロビル；塩酸ファモチン（Ｆａｍｏｔｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；フィアシタビン（Ｆｉａｃｉｔａｂｉｎｅ）；フィアルリジン（Ｆｉａｌｕｒｉｄｉｎｅ）；フォサリレート（Ｆｏｓａｒｉｌａｔｅ）；フォスカーネットナトリウム；ホスホネットナトリウム（Ｆｏｓｆｏｎｅｔ Ｓｏｄｉｕｍ）；ガンシクロビル；ガンシクロビルナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）；ラミブジン（Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）；ロブカビル（Ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）；塩酸メモチン；メチサゾン；ネビラピン（Ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）；ペンシクロビル（Ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）；ピロダビル（Ｐｉｒｏｄａｖｉｒ）；リバビリン；塩酸リマンタジン（Ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；メシル酸サキナルビル；塩酸ソマンタジン；ソリブジン；スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）；スタブジン（Ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）；塩酸チロロン；トリフルリジン；塩酸バラシクロビル；ビダラビン；リン酸ビダラビン；ビダラビンリン酸ナトリウム；ビロキシム（Ｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ザルシタビン；ジドブジン；およびジンビロキシム（Ｚｉｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）。
【０２７６】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防のために有用である。抗真菌剤は、時には、その作用機構によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって細胞壁インヒビターとして機能する。これらとしては、バシウンジン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが挙げられるが、これに限定されない。他の抗真菌剤は、膜完全性を破壊することによって機能する。これらとしては、イミダゾール類（例えば、クロトリマゾール、セルタコンゾール（ｓｅｒｔａｃｏｎｚｏｌｅ）、フルコナゾール（ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、イトラコナゾール（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ケトコナゾール、ミコナゾールおよびボリコナコール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）ならびにＦＫ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジミシン（ｐｒａｄｉｍｉｃｉｎ）、ＵＫ ２９２、ブテナフィン（ｂｕｔｅｎａｆｉｎｅ）およびテルビナフィン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌剤は、キチンを破壊することによって機能する（例えば、キチナーゼ）か、または免疫抑制によって（５０１クリーム）、機能する。
【０２７７】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、他の治療剤（例えば、アジュバント）と組み合わせて免疫応答を増強し得る。このＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび他の治療剤は、同時または連続的に投与され得る。上記の他の治療剤が同時に投与される場合、それらの治療剤は、同じ処方物または別個の処方物中で投与され得るが、同時に投与される。上記の他の治療剤は、その他の治療剤およびＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの投与が時間的に分離している場合、互いにおよびＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと連続的に投与される。より具体的には、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、少なくとも１種の他の治療剤の投与（もしくはその治療剤への暴露）の前または後に投与され得る。これらの化合物の投与の間の時間的分離は、分単位の事項であっても、またはより長いものであってもよい。他の治療剤としては、アジュバント、サイトカイン、抗体、抗原などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７８】
本発明の組成物はまた、非核酸アジュバントとともに投与され得る。非核酸アジュバントは、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を刺激し得る、本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド以外の任意の分子または化合物である。非核酸アジュバントとしては、例えば、デポー効果を生じるアジュバント、免疫刺激アジュバント、ならびにデポー効果を生じて免疫系を刺激するアジュバントが、挙げられる。
【０２７９】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、粘膜アジュバントとして有用である。全身免疫および粘膜免疫の両方がＣｐＧ核酸の粘膜送達によって誘導されることが、以前に発見されている。従って、上記オリゴヌクレオチドは、他の粘膜アジュバントと組み合わせて投与され得る。
【０２８０】
免疫応答はまた、サイトカイン（ＢｕｅｌｅｒおよびＭｕｌｌｉｇａｎ，１９９６；Ｃｈｏｗら、１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒら、１９９７；Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｋｉｍら、１９９７）または副刺激分子（例えば、Ｂ７（Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｔｓｕｊｉら、１９９７）と、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドとの同時投与もしくは共直線（ｃｏ−ｌｉｎｅａｒ）発現によって、誘導または増強され得る。用語「サイトカイン」とは、ナノモル濃度またはピコモル濃度で体液性調節因子として作用し、かつ正常条件もしくは生理条件下で個々の細胞および組織の機能的活性を調節する、多岐にわたる可溶性タンパク質および可溶性ペプチドの群に関する一般名として使用される。これらのタンパク質はまた、細胞間相互作用を直接媒介し、そして細胞外環境において生じるプロセスを調節する。サイトカインの例としては、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＧＦ−β、Ｆｌｔ−３リガンド、およびＣＤ４０リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。サイトカインに加えて、上記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、特定のサイトカインに対する抗体（例えば、抗ＩＬ−１０および抗ＴＧＦ−β）ならびにシクロオキシゲナーゼインヒビター（すなわち、ＣＯＸ−１インヒビターおよびＣＯＸ−２インヒビター）と組み合わせて、使用され得る。
【０２８１】
上記オリゴヌクレオチドはまた、免疫応答を、Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答へと変えるために有用である。このことは、比較的平衡したＴｈ１／Ｔｈ２環境の生成を生じる。Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答へと免疫応答の変更は、上記核酸に応答して生成したサイトカインのレベルを測定することによって（例えば、Ｔｈ１サイトカイン（ＩＦＮ−αを含む）を生成するように単球および他の細胞を誘導することによって）、評価され得る。上記免疫応答をＴｈ２応答からＴｈ１応答へと変更または再平衡することは、喘息の処置のために特に有用である。例えば、喘息を処置するために有効な量は、喘息に関連するＴｈ２型の免疫応答を、Ｔｈ１型の応答または平衡したＴｈ１／Ｔｈ２環境へと変更するために有用な量であり得る。Ｔｈ２サイトカイン（特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５）は、喘息被験体の気道において増加する。本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、免疫系を再平衡するのを補助するＴｈ１サイトカイン増加を引き起こし、それによって優勢なＴｈ２免疫応答に関連する有害な影響を防止または減少する。
【０２８２】
Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答への免疫応答の変更はまた、特定のアイソタイプの免疫グロブリンのレベルを測定することによって、評価され得る。例えば、マウスにおいて、ＩｇＧ２ａは、Ｔｈ１免疫応答に関連し、ＩｇＧ１およびＩｇＥは、Ｔｈ２免疫応答に関連する。
【０２８３】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、樹状細胞の細胞生存、細胞分化、細胞活性化、および成熟を促進する独特の能力を有し、このＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、樹状細胞を含むインビトロ方法、インビボ方法、およびエキソビボ方法のために有用である。
【０２８４】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、ナチュラルキラー細胞溶解活性および抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増加する。ＡＤＣＣは、細胞標的（例えば、癌細胞）に特異的な抗体と組み合わせてＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを使用して、実施され得る。上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが上記抗体と組み合わせて被験体に投与される場合、その被験体の免疫系は、腫瘍細胞を死滅させるように誘導される。ＡＤＣＣ手順において有用な抗体は、身体中の細胞と相互作用する抗体を包含する。細胞標的に特異的なそのような多くの抗体が、当該分野で記載されており、多くが、市販されている。
【０２８５】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、抗癌治療と組み合わせて投与され得る。抗癌治療としては、癌薬物、放射線手順および外科手順が挙げられる。本明細書中で使用される場合、「癌薬物」とは、癌を処置する目的のために被験体に投与される因子を指す。本明細書中で使用される場合、「癌を処置する」とは、癌の発症を予防すること、癌の症状を低減すること、および／または樹立された癌の増殖を阻害することを包含する。他の局面において、上記癌薬物は、癌を発症する危険がある被験体に対して、その癌を発症する危険を減少する目的のために投与される。癌の処置のための種々の型の医薬が、本
明細書中に記載される。本明細書の目的のためには、癌薬物は、化学療法剤、免疫治療剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および生物応答改変剤として分類される。
【０２８６】
さらに、本発明の方法は、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと一緒に、１種よりも多い癌薬物の使用を包含することが意図される。例として、適切な場合には、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、化学療法剤および免疫治療剤の両方とともに投与され得る。あるいは、上記癌薬物は、癌を有する被験体または癌を発症する危険がある被験体を処置する目的のためにある被験体に投与される、免疫治療剤と癌ワクチンとを、または化学療法剤と癌ワクチンとを、または化学療法剤と免疫治療剤と癌ワクチンとを、包含し得る。
【０２８７】
上記化学療法剤は、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、非糖含有クロロエチルニトロソ尿素類、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラギリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタイン、およびポリフェルポサン、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ １２−９５６６、ＲＡＳファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレク、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、パルスポダル／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン、メタレット／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニル／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソーマルドキソルビシン、ユータキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ １２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳオンコジーンインヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口プラチナ、ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）、エルガミゾール／レバミゾール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミゾール、カンプトスター／イリノテカン、ツモデックス／ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パキセックス／パクリタキセル、ドキシル／リポソーマルドキソルビシン、カエリックス／リポソーマルドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファルマルビシン／エピルビシン、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタリミド、ＬＵ １０３７９３／ドラスタチン、カエチックス／リポソーマルドキソルビシン、ゲムザル／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメッド、ＹＭ １１６、ヨウ素シード、ＣＤＫ４インヒビターおよびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／デキシフォサミド、イフェス／メスネックス／イソファミド、ビュウモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサンアナログ、ニトロソ尿素類、アルキル化剤（例えば、メルフェランおよびシクロホスファミド）、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨＣｌ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトーテン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクトレチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、マイトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビスグアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、および硫酸ビンデシンからなる群より選択され得るが、このように限定はされない。
【０２８８】
上記免疫治療剤は、リツキサン、リブタキシン、ハーセプチン、クアドラメット、パノレックス、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム、ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス、ベキサール、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、グリオマブＨ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンホシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＣＭＡ６７６、モノファームＣ、４Ｂ５、ｉｏｒ ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ １Ｄ１０ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＡＢＬ ３６４ Ａｂ、およびＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群より選択され得るが、そのように限定はされない。
【０２８９】
上記癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合体ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬテラトープ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム性イディオタイプワクチン、メラシン、ペプチド抗原ワクチン、トキシン／抗原ワクチン、ＭＶＡベースワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、およびＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群より選択され得るが、そのように限定はされない。
【０２９０】
免疫療法剤（例えば、モノクローナル抗体）と組み合わせたＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの使用は、多数の機構（ＡＤＣＣの有意な増強（上記で考察される）、ＮＫ細胞の活性化、およびＩＦＮ−αレベルの増加を含む）を介して、長期生存を増加することが可能である。上記核酸は、モノクローナル抗体と組み合わせて使用した場合に、生物学的結果を達成するために必要な抗体の用量を減少するために役立つ。
【０２９１】
本発明はまた、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを使用して、抗原非特異的先天免疫活性化を誘導するためおよび感染性チャレンジに対する広範なスペクトル耐性を誘導するための方法を包含する。本明細書中で使用される用語「先天免疫活性化」とは、記憶Ｂ細胞以外の免疫細胞の活性化を指し、例えば、単球、好中球、マクロファージ、樹状細胞、ＮＫ細胞、および／または抗原非依存性様式で応答し得る他の免疫細胞の活性化を包含し得る。感染性チャレンジに対する広範なスペクトル耐性は、上記免疫細胞が活性形態にありかつ特定の抗原に対して特異的に刺激されるので、誘導される。上記細胞は、特定の抗原に対して特異的に刺激される必要はない。このことは、生物戦争および上記の他の環境（例えば、旅行者）において特に有用である。
【０２９２】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、被験体に直接投与され得るか、または核酸送達複合体と組み合わせて投与され得る。核酸送達複合体とは、標的化手段（例えば、標的細胞に対する高親和性結合を生じる分子）と会合（例えば、イオン結合もしくは共有結合、またはその中に封入）された核酸分子を意味する。核酸送達複合体の例としては、ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、カチオン性脂質、ビロソーム、もしくはリポソーム）、または標的細胞特異的結合因子（例えば、標的細胞特異的レセプターによって認識されるリガンド）と会合された、核酸が挙げられる。好ましい複合体は、標的細胞によるインターナリゼーションの前の有意なアンカップリング（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ）を防ぐために充分に安定であり得る。しかし、上記複合体は、上記オリゴヌクレオチドが機能的形態で放出されるように、上記細胞において適切な条件下で切断可能であり得る。
【０２９３】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび／または抗原および／または他の治療剤は、単独で（例えば、生理食塩水中もしくは緩衝液中）で投与され得るか、または当該分野で公知の任意の送達ビヒクルを使用して投与され得る。例えば、以下の送達ビヒクルが、記載されている：蝸牛状物（Ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅら、１９９４、１９９６）；エマルソーム（Ｅｍｕｌｓｏｍｅ）（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８；Ｌｏｗｅｌｌら、１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔら、１９９３；Ｃａｒｌｓｓｏｎら、１９９１；Ｈｕら、１９９８；Ｍｏｒｅｉｎら、１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら、１９９９；Ｍｉｃｈａｌｅｋら、１９８９、１９９２；ｄｅ Ｈａａｎ １９９５ａ、１９９５ｂ）；生細菌ベクター（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、カルメット−ゲラン杆菌、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｈｏｎｅら、１９９６；Ｐｏｕｗｅｌｓら、１９９８；Ｃｈａｔｆｉｅｌｄら、１９９３；Ｓｔｏｖｅｒら、１９９１；Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８）；生ウイルスベクター（例えば、Ｖａｃｃｉｎｉａ、アデノウイルス、Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら、１９９３、１９９５；Ｍｏｓｓら、１９９６；Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８；Ｆｌｅｘｎｅｒら、１９９８；Ｍｏｒｒｏｗら、１９９９）；ミクロスフェア（Ｇｕｐｔａら、１９９８；Ｊｏｎｅｓら、１９９６；Ｍａｌｏｙら、１９９４；Ｍｏｏｒｅら、１９９５；Ｏ’Ｈａｇａｎら、１９９４；Ｅｌｄｒｉｄｇｅら、１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙａｎら、１９９３；Ｋｕｋｌｉｎら、１９９７；Ｓａｓａｋｉら、１９９８；Ｏｋａｄａら、１９９７；Ｉｓｈｉｉら、１９９７）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａら、１９９８；Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら、１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔら、１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８；Ｌｏｗｅｌｌら、１９８８、１９９６、１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉら、１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔら、１９９８；Ｍａｓｏｎら、１９９８；Ｈａｑら、１９９５）；ビロソーム（Ｇｌｕｃｋら、１９９２；Ｍｅｎｇｉａｒｄｉら、１９９５；Ｃｒｙｚら、１９９８）；ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇら、１９９９；Ｌｅｉｂｌら、１９９８）。他の送達ビヒクルが、当該分野で公知である。
【０２９４】
用語「有効量」とは、一般的には、望ましい生物学的効果を実現するために必要または充分な量をさす。例えば、粘膜免疫を誘発するために抗原とともに投与されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの有効量とは、抗原に暴露された場合にその抗原に応答したＩｇＡの発生を引き起こすために必要な量であり、一方、全身免疫を誘発するために必要な量は、抗原に暴露された場合にその抗原に応答したＩｇＧの発生を引き起こすために必要な量である。本明細書中に提供される教示と組み合わせて、種々の活性化合物および重み付け因子（例えば、効力、相対的バイオアベイラビリティー、患者の体重、有害な副作用の重篤度、および好ましい投与様式）を選択することによって、実質的な毒性を引き起こさないが特定の被験体を処置するために完全に有効である、有効な予防処置レジメンもしくは有効な治療処置レジメンが計画され得る。任意の特定の適用のための有効量は、処置される疾患もしくは状態、投与される特定のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、被験体の大きさ、またはその疾患もしくは状態の重篤度のような要因に依存して、変化し得る。当業者は、特定のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび／または抗原および／または他の治療剤の有効量を、過度の実験を必要とすることなく経験的に決定し得る。
【０２９５】
粘膜送達もしくは局所送達のための本明細書中に記載される化合物の主用量は、１回の投与について代表的には約１０μｇ〜１０ｇの範囲であり、これは、その適用に依存して、毎日、毎週、もしくは毎月、およびその間の他の時間に、または必要な他の場合に、投与され得る。より代表的には、粘膜用量もしくは局所用量は、１回の投与当たり約１ｍｇ〜５００ｍｇの範囲であり、最も代表的には約１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲であり、２回〜４回の投与が、数日間隔または数週間間隔である。より代表的には、免疫刺激剤の用量は、１回の投与あたり１０μｇ〜１００ｍｇの範囲であり、最も代表的には、１００μｇ〜１０ｍｇの範囲であり、毎日または毎週投与される。抗原特異的免疫応答を誘導するための非経口送達について本明細書中に記載される化合物の用量（上記化合物は、抗原とともに送達されるが別の治療剤とは送達されない）は、代表的には、ワクチンアジュバント適用もしくは免疫刺激剤適用のための有効粘膜用量の５倍〜１０，０００倍大きく、より代表的には、１０倍〜１，０００倍大きく、最も代表的には２０倍〜１００倍大きい。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが他の治療剤と組み合わせてか特化した送達ビヒクル中で投与される場合に、先天免疫応答を誘発するため、もしくはＡＤＣＣを増加するため、もしくは抗原特異的免疫応答を誘発するための、非経口送達のための本明細書中に記載される化合物の量は、１回の投与当たり約１００μｇ〜１０ｇの範囲であり、その適用に依存して、毎日、毎週、もしくは毎月、およびその間の他の時間、または必要な他の場合に、投与され得る。より代表的には、これらの目的のための非経口用量は、１投与当たり約１ｍｇ〜５ｇの範囲であり、最も代表的には約１ｍｇ〜１ｇの範囲であり、２回〜４回の投与が、数日間隔または数週間間隔である。しかし、いくつかの実施形態において、これらの目的のための非経口用量は、上記の代表的な用量よりも５倍〜１０，０００倍大きい範囲で使用され得る。
【０２９６】
本明細書中に記載される任意の化合物について、その治療上有効な量は、動物モデルからまず決定され得る。治療上有効な用量はまた、ヒトにおいて試験された（ヒト臨床試験が進行中である）他のＣｐＧオリゴヌクレオチドについて、および同様の薬理学的活性を示すことが公知である化合物（例えば、ＬＴ抗原およびワクチン接種用の他の抗原）について、ヒトデータから決定され得る。より高用量が、非経口投与のために必要であり得る。適用される用量は、投与される化合物の相対的バイオアベイラビリティーおよび効力に基づいて、調整され得る。その用量を、上記の方法および当該分野で周知であるような他の方法に基づいて、最大効力を達成するように調整することは、充分に、当業者の能力の範囲内にある。
【０２９７】
本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液中で投与され、この溶液は、慣用的には、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性キャリア、アジュバント、および必要に応じて他の治療成分を含み得る。
【０２９８】
治療における使用のために、有効量のこのＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが、所望される表面（例えば、局所表面、粘膜表面、全身表面）にその化合物を送達する任意の様式によって、被験体に投与され得る。本発明の薬学的組成物を投与することは、当業者に公知の任意の手段によって達成され得る。好ましい投与経路としては、経口経路、非経口経路、筋肉内経路、皮下経路、病変内経路、腫瘍内経路、鼻内経路、舌下経路、気管内経路、吸入、眼内経路、膣内経路、および直腸経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９９】
経口投与のために、上記化合物（すなわち、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、抗原、および他の治療剤）は、その活性化合物を、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることによって、容易に処方され得る。そのようなキャリアは、本発明の化合物が、標的とされる被験体による経口摂取のための錠剤、ピル、糖剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして処方されるのを可能にする。経口用途のための薬学的調製物は、必要に応じて、生じた混合物を粉砕し、望まれる場合は適切な助剤を添加した後に、その顆粒混合物を処理して錠剤コアまたは糖剤コアを得ることによって、固体賦形剤として入手され得る。適切な賦形剤は、特に、充填剤（例えば、糖（ラクトース、スクロース、マンニトール、もしくはソルビトールが挙げられる）；セルロース調製物（例えば、トウモロコシスターチ、コムギスターチ、イネスターチ、ジャガイモスターチ、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））である。望まれる場合、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム））が、添加され得る。必要に応じて、その経口処方物はまた、内部酸性状態を中和するための生理食塩水もしくは緩衝液中で処方され得るか、またはいかなるキャリアも含まずに投与され得る。
【０３００】
糖剤コアは、適切なコーティングを備える。この目的のために、濃縮糖溶液が、使用され得、これは、必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含み得る。染料または色素が、異なる活性化合物用量の組み合わせを同定または特徴付けるために、錠剤または糖剤コーティングに添加され得る。
【０３０１】
経口的に使用され得る薬学的調製物としては、ゼラチンから作製された押込みばめカプセル、およびゼラチンと可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）とから作製された軟らかい密封カプセルが、挙げられる。この押込みばめカプセルは、充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、スターチ）、および／または滑沢剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム）、および必要に応じて安定化剤と混合して、活性成分を含み得る。この軟らかいカプセルにおいて、活性化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁され得る。さらに、安定化剤が添加され得る。経口投与のために処方されたミクロスフェアもまた、使用され得る。このようなミクロスフェアは、当該分野で十分に規定されている。経口投与のためのすべての処方物は、このような投与に適切な投与量である。
【０３０２】
経口腔内投与のために、この組成物は、従来の様式で処方された、錠剤またはロゼンジの形態を採り得る。
【０３０３】
上記化合物は、標準的吸入デバイスを使用して、肺（特に、気管支、より特に肺深部の肺胞）へと、吸入によって投与され得る。上記化合物は、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾル噴霧提示の形態で、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体）を使用して、送達され得る。加圧エアロゾルの場合、その投与単位は、計量した量を送達するための弁を提供することによって、決定され得る。吸入装置が、被験体に上記化合物を送達するために使用され得る。本明細書中に記載されるような吸入装置は、エアロゾル（例えば、上記化合物の乾燥粉末形態）を投与するための任意のデバイスである。この型の装置は、当該分野で周知であり、詳細に記載されている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，Ｍａｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ｐ１６７６−１６９２において見出される記載）。多くの米国特許（例えば、米国特許第６，１１６，２３７号）もまた、吸入デバイスを記載する。
【０３０４】
本明細書中で使用される「粉末」とは、微細に分散した固体粒子からなる組成物を指す。好ましくは、上記化合物は、比較的に自由に浮遊し、そして吸入デバイス中で分散され得、その後、被験体によって吸入され得て、その化合物が肺に達して肺胞への浸透を許容
するようにされる。「乾燥粉末」とは、吸入デバイス中で容易に分散してエアロゾルを形成するような水分含量を有する、粉末組成物を指す。その水分含量は、一般的には約１０重量％（％ｗ）未満であり、いくつかの実施形態では、約５％未満であり、好ましくは約３％ｗ未満である。その粉末は、ポリマーを用いて処方され得るか、または必要に応じて、他の材料（例えば、リポソーム、アルブミン、および／もしくは他のキャリア）を用いて処方され得る。
【０３０５】
エアロゾル投与および送達システムは、当業者によって特定の治療適用のために選択され得る、例えば、Ｇｏｎｄａ，Ｉ．「Ａｅｒｏｓｏｌｓ ｆｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｔｒａｃｔ」Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，６：２７３〜３１３（１９９０）およびＭｏｒｅｎ「Ａｅｒｏｓｏｌ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」Ａｅｒｏｓｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｍｏｒｅｎら編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。
【０３０６】
上記化合物は、全身送達することが望ましい場合に、注入（例えば、ボーラス注入または連続注入）による非経口投与のために処方され得る。注入のための処方物は、単位投与形態で（例えば、アンプル中にかまたは多用量容器にて）、添加された保存剤とともに提示され得る。その組成物は、油状ビヒクルもしくは水性ビヒクル中の懸濁物、溶液、またはエマルジョンのような形態を採り得、そして処方剤（例えば、懸濁剤、安定化剤、および／もしくは分散剤）を含み得る。
【０３０７】
非経口投与のための薬学的処方物としては、水溶性形態の活性化合物の水性溶液が挙げられる。さらに、その活性化合物の懸濁物が、適切な油状注入懸濁物として調製され得る。適切な親油性溶媒または親油性ビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油）または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド）、またはリポソームが挙げられる。水性注入懸濁物は、その懸濁物の粘度を増加する物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、その懸濁物はまた、非常に濃縮された溶液の調製を可能にするために、適切な安定化剤またはその化合物の溶解度を増加する薬剤を含み得る。
【０３０８】
あるいは、上記活性化合物は、適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）を用いて使用前に構成するための、散剤形態であり得る。
【０３０９】
上記化合物はまた、直腸組成物または膣内組成物（例えば、（例えば、従来の坐剤基剤（例えば、ココアバターまたは他のグリセリド）を含む）坐剤または貯留浣腸）の状態で処方され得る。
【０３１０】
上記の処方物に加えて、この化合物はまた、デポー調製物として処方され得る。そのような長期作用処方物は、適切なポリマー物質もしくは疎水性物質を用いて（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）か、またはイオン交換樹脂を用いてか、または溶解性が乏しい誘導体（例えば、溶解性が乏しい塩）として、処方され得る。
【０３１１】
この薬学的組成物はまた、適切な固相もしくはゲル相の、キャリアもしくは賦形剤を含み得る。そのようなキャリアまたは賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１２】
適切な液体薬学的調製物形態または固体薬学的調製物形態は、例えば、マイクロカプセル化されるか、蝸牛状にされる（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）か、微視的金粒子上にコーティングされるか、リポソーム中に含まれるか、噴霧されるエアロゾル中に含まれるか、皮膚への移植用のペレット中に含まれるか、または皮膚中を引っ掻く鋭い物体上に乾燥された、吸入用の水性溶液もしくは生理食塩水溶液である。この薬学的組成物はまた、活性化合物を長期放出する、顆粒、散剤、錠剤、コーティングした錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、エマルジョン、懸濁剤、クリーム、ドロップ、または調製物を含み、その調製物において、賦形剤および添加剤および／もしくは補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、甘味剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、甘味料、または可溶化剤が、上記のように慣用的に使用される。この薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用のために適切である。薬物送達のための方法の簡単な概説について、Ｌａｎｇｅｒ Ｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−３３（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０３１３】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび必要に応じて他の治療剤および／または抗原は、それ自体が（そのまま）投与され得るか、または薬学的に受容可能な塩の形態で投与され得る。薬物中で使用される場合、その塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能ではない塩が、その薬学的に受容可能な塩を調製するために簡便に使用され得る。そのような塩としては、以下の酸から調製された塩が挙げられるが、それらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、そのような塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩（例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、もしくはカルシウム塩）として調製され得る。
【０３１４】
適切な緩衝化剤としては、酢酸および塩（１％ ｗ／ｖ〜２％ ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１％ ｗ／ｖ〜３％ ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５％ ｗ／ｖ〜２．５％
ｗ／ｖ）；およびリン酸および塩（０．８％ ｗ／ｖ〜２％ ｗ／ｖ）が挙げられる。適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム（０．００３％ ｗ／ｖ〜０．０３％ ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３％ ｗ／ｖ〜０．９％ ｗ／ｖ）；パラベン類（０．０１％ ｗ／ｖ〜０．２５％ ｗ／ｖ）、およびチメロサール（０．００４％ ｗ／ｖ〜０．０２％ ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０３１５】
本発明の薬学的組成物は、有効量のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、そして必要に応じて抗原および／または他の薬剤を、必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア中に含んだ状態で、含む。用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、ヒトまたは他の脊椎動物への投与に適切な、１つ以上の適合性の、固体もしくは液体の、充填剤、希釈剤、もしくはカプセル化物質を意味する。用語「キャリア」とは、活性成分がその適用を容易にするように合わせられる、天然もしくは合成の、有機成分もしくは無機成分を示す。その薬学的組成物の成分はまた、望ましい薬学的効力を実質的に損なう相互作用が存在しない様式で、本発明の化合物と、および互いと、混合可能である。
【０３１６】
本発明は、以下の実施例によってさらに例証される。以下の実施例は、さらなる限定として解釈されるべきではない。
【実施例】
【０３１７】
（実施例１．Ｃ−クラスＯＤＮアナログは、インビトロでＩＦＮ−α分泌およびヒトＴＬＲ９活性を誘導する）
この一連の実験において、本発明のＣ−クラスＯＤＮアナログを、それらのアナログが分泌ＩＦＮ−αに対してヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を刺激し、かつヒトＴＬＲ９およびＮＦ−κＢレポーター構築物で安定にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を刺激して、ＴＬＲ９シグナル伝達を示す能力についてインビトロで試験した。
【０３１８】
ＯＤＮは、Ｂｉｏｓｐｒｉｎｇ（Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。そのＯＤＮは、Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＧｍｂＨ（Ｌａｎｇｅｎｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって正体および純度について制御された。ＯＤＮを、リン酸緩衝化生理食塩水（Ｓｉｇｍａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に希釈し、−２０℃にて保存した。すべての希釈を、発熱物質を含まない試薬を使用して実施した。試験ＯＤＮは、
【０３１９】
【化８１】
を含んだ。
【０３２０】
【化８２】
は、ホスホロチオエート結合を示し、
【０３２１】
【化８３】
は、ホスホジエステル結合を示す。ＣｐＧ ＯＤＮ２００６（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ、配列番号５６）を、ＴＬＲ９シグナル活性化についてのポジティブコントロールとして使用した。Ｃ−クラスＣｐＧ ＯＤＮ２４２９（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ、配列番号５３）を、ＩＦＮ−α誘導についてのポジティブコントロールとして使用した。非ＣｐＧ ＯＤＮ１９８２（ＴＣＣＡＧＧＡＣＴＴ
ＣＴＣＴＣＡＧＧＴＴ、配列番号１８）を、ネガティブコントロールとして使用した。
【０３２２】
健常男性ヒトドナーおよび健常女性ヒトドナーに由来する末梢血軟膜調製物を、ｔｈｅ
Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から取得した。これらから、ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）における遠心分離によって精製した。精製したＰＢＭＣを、５％（ｖ／ｖ）熱非働体化ヒトＡＢ血清（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）または１０％（ｖ／ｖ）熱非働体化ＦＣＳと、２ｍＭ Ｌ−グルタミン（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）と、１００Ｕ／ｍｌペニシリンと、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とを含む、ＲＰＭＩ １６４０培養培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）中に再懸濁した。
【０３２３】
新たなＰＢＭＣを、９６ウェル丸底プレート上に播種し、示された濃度のＯＤＮとともに、３７℃の加湿インキュベーター中で４８時間インキュベートした。培養上清を、収集し、すぐに使用しない場合には−２０℃にて必要時まで凍結した。
【０３２４】
上清中のＩＦＮ−αの量を、市販の抗体（Ａｌｅｘｉｓ ＧｍｂＨ，Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して発色させる酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価した。ＯＤＮ１２８、ＯＤＮ３３１〜ＯＤＮ３４４、ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０を、４人の異なるドナーに由来するＰＢＭＣを用いて試験し、ＯＤＮ６１４を、３人の異なるドナーに由来するＰＢＭＣを用いて試験した。
【０３２５】
ヒトＴＬＲ９レポーター遺伝子アッセイのために使用した安定にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞は、ヒトＴＬＲ９レセプターとＮＦ−κＢレポーター遺伝子構築物とを発現した。細胞を、ＯＤＮとともに３７℃の加湿インキュベーター中で１６時間インキュベートした。各データポイントは、３連で行った。細胞を溶解して、レポーター遺伝子活性についてアッセイした。刺激指数を、ＯＤＮを添加しない培地のレポーター遺伝子活性に関して算出した。
【０３２６】
（結果） 代表的な結果を、図１および図２に示す。図１は、ＣクラスＯＤＮ３３２、ＯＤＮ３３３、およびＯＤＮ３３４が、濃度１μＭにて存在する場合に、大量のＩＦＮ−α（代表的には、約２０００ｐｇ／ｍｌ〜２５００ｐｇ／ｍｌ）を誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−αの量を有意に超えた。図１はまた、Ｃ−クラスＯＤＮ３３２、ＯＤＮ３３３、およびＯＤＮ３３４が、濃度１０μＭにて存在する場合に、有意な量のＴＬＲ９シグナル伝達活性を（代表的には、刺激指数約１５にて）誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６によって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の約半分であった。本質的に同じ結果が、ＯＤＮ１２８およびＯＤＮ３３５〜ＯＤＮ３４４について観察された。
【０３２７】
図２は、ＣクラスＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６１４、およびＯＤＮ６２０が、濃度１μＭにて存在する場合に、なおより多量のＩＦＮ−α（代表的には、約３０００ｐｇ／ｍｌ〜４０００ｐｇ／ｍｌ）を誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−αの量を有意に超えた。図２はまた、Ｃ−クラスＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６１４、およびＯＤＮ６２０が、濃度１０μＭにて存在する場合に、有意な量のＴＬＲ９シグナル伝達活性を（代表的には、刺激指数約１０〜２０にて）誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６によって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の約半分であった。
【０３２８】
ＯＤＮ６１１（配列番号４３）、ＯＤＮ６１４（配列番号４３）、およびＯＤＮ６２０（配列番号４３）をまた、ＯＤＮ２４２９（記載される元のパリンドローム含有Ｃクラスオリゴヌクレオチドのうちの１つ）と比較した。これらの新たなＣクラスＯＤＮは、ヒトＴＬＲ９アッセイにおいて、より高い活性を示したが、一方、ＩＦＮ−αの誘導は、ＯＤＮ２４２９と同様であった（図３）。
【０３２９】
まとめると、これらの実験の結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、ＩＦＮ−α分泌およびヒトＴＬＲ９活性をインビトロで有効に誘導することを示す。
【０３３０】
（実施例２）
（さらなるＣクラスＯＤＮアナログは、ＩＦＮ−α分泌をインビトロで誘導する）
この一連の実験において、本発明のさらなるＣクラスＯＤＮアナログを、ＩＦＮ−α分泌を誘導する能力についてインビトロで試験した。これらの実験においてＣクラスＯＤＮアナログは、ＡＴリッチな断続的逆方向反復の存在によって、または従来のヌクレオチド残基の位置にｄＳｐａｃｅｒ残基を含む断続的逆方向反復の存在によって、部分的に特徴付けられた。
【０３３１】
ＯＤＮを、実施例１におけるようにして得た。試験ＯＤＮは、
【０３３２】
【化８４】
を含んだ。
【０３３３】
【化８５】
は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
【０３３４】
【化８６】
は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を示し、Ｌは、ｄＳｐａｃｅｒを示す。
【０３３５】
ヒトＰＢＭＣを、実施例１と同様な様式で得て処理した。
【０３３６】
上清中のＩＦＮ−αの量を、実施例１と同様な様式で酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価した。
【０３３７】
（結果） ＡＴリッチな断続的逆方向反復の存在によって部分的に特徴付けられるＣクラスＯＤＮ６４５、ＯＤＮ６４６、およびＯＤＮ６４７は、濃度１μＭにて存在する場合に、中程度の量のＩＦＮ−α（代表的には、約１２００ｐｇ／ｍｌ〜１５００ｐｇ／ｍｌ）を誘導した。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−α量を有意に超えた。ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む断続的逆方向反復の存在によって部分的に特徴付けられるＣクラスＯＤＮ６４９、ＯＤＮ６５０、およびＯＤＮ６５１は、濃度１μＭにて存在する場合に、多量のＩＦＮ−α（代表的には、約２０００ｐｇ／ｍｌ〜２５００ｐｇ／ｍｌ）を誘導した。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−α量を有意に超えた。
【０３３８】
まとめると、これらの実験の結果は、ＡＴリッチな断続的逆方向反復の存在によって、または従来のヌクレオチド残基の位置にｄＳｐａｃｅｒ残基を含む断続的逆方向反復の存在によって、部分的に特徴付けられる本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、ＩＦＮ−α分泌をインビトロで有効に誘導することを示す。
【０３３９】
（実施例３）
（さらなるＣクラスＯＤＮアナログは、ＩＦＮ−α分泌およびヒトＴＬＲ９活性をインビトロで誘導する）
この一連の実験において、本発明のＣクラスＯＤＮアナログを、分泌されたＩＦＮ−αに対してヒトＰＢＭＣを刺激するか、またはヒトＴＬＲ９およびＮＦ−κＢレポーター構築物で安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を刺激して、ＴＬＲ９シグナル伝達を示す能力についてインビトロで試験した。基本的プロトコルは、実施例１について記載される通りであるが、但し、試験ＯＤＮは、
【０３４０】
【化８７】
を含んだ。
【０３４１】
【化８８】
は、ホスホロチオエート結合を示し、
【０３４２】
【化８９】
は、ホスホジエステル結合を示す。
【０３４３】
種々の濃度のＯＤＮを、ＴＬＲ９レポーター遺伝子アッセイにおいて試験した。ＥＣ５０（効果が最大効果の５０％であるＯＤＮ濃度）を、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ（Ｗｉｎｄｏｗ
Ｖｅｒｓｉｏｎ ８．０についてはＳｉｇｍａＰｌｏｔ２００２）を使用して計算した。最大刺激指数（ｍａｘ ＳＩ）を、任意のＯＤＮについて試験したすべての濃度の最高値と、媒体コントロールとの間の商として計算した。結果を、図１に示す。１０〜３０の範囲にある刺激指数が一般的であったことが、理解され得る。
【０３４４】
（表１）
（本発明のＣクラスＣｐＧ ＯＤＮは、ヒトＴＬＲ９を活性化する）
【０３４５】
【化９０】
大量のＩＦＮ−αが、これらのＣクラスＣｐＧ ＯＤＮとともに４８時間インキュベーションした際に、ヒトＰＢＭＣによって分泌された。代表的なＩＦＮ−α量は、１μＭ以下の濃度のＯＤＮとともにインキュベートした後に、３０００ｐｇ／ｍｌ〜４０００ｐｇ／ｍｌの範囲にあった。これらの実験におけるＩＦＮ−αについての応答曲線は、図２において示される応答曲線と非常に類似した。
【０３４６】
（実施例４）
（ＣクラスＯＤＮアナログは、抗原特異的免疫応答をインビボで誘導する）
これらの一連の実験において、本発明のＣクラスＯＤＮを、マウスのワクチン接種と組み合わせてインビボで試験した。本発明のＣクラスＯＤＮは、抗原特異的な全ＩｇＧおよびＩｇＧ２ａ（マウスにおけるＴｈ１様ＩｇＧ）の力価、ならびに抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を、ＢクラスＣｐＧ ＯＤＮ２００６と少なくとも同等の様式でブーストすることが観察された。
【０３４７】
ＯＤＮは、実施例１におけるようにして得た。
【０３４８】
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢〜８週齢）を、すべての実験のために使用した。動物を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｃａｎａｄａ（Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）から購入し、Ｏｔｔａｗａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｉｖｉｃ Ｓｉｔｅの動物介護施設において、小型隔離飼育器中に収容した。
【０３４９】
ナイーブなＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞を、すべてのインビトロアッセイのために使用した。動物に、イソフルオランで麻酔し、その動物を、頚部脱臼によって安楽死させた。脾臓を、無菌条件下で取り出し、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）＋０．２％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）中に配置した。その後、脾臓を、ホモジナイズし、脾細胞を、２％正常マウス血清（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）と、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（それぞれ、最終濃度１０００Ｕ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）と、５×１０−５Ｍ β−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）とを補充したＲＰＭＩ １６４０組織培養培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に再懸濁した。
【０３５０】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１０／群）を、１μｇ Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）サブタイプａｄ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｚｙｍｅｓ，ＣＡ）で、単独でかまたは１μｇ〜１００μｇのＣｐＧ ＯＤＮ２００６、ＣｐＧ ＯＤＮ６０８、ＣｐＧ ＯＤＮ６１８、またはＣｐＧ ＯＤＮ６２０と組み合わせて免疫した。動物から採血し、初回免疫後４週間目にブーストした。ブースト後２週間目に、各群由来の５匹の動物を、安楽死させ、脾臓を、ＣＴＬアッセイのために取り出した。
【０３５１】
ＨＢｓＡｇ（抗ＨＢｓ）に対して特異的な抗体（全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａ）を、検出し、終点希釈ＥＬＩＳＡアッセイによって定量した。このアッセイは、個々の動物由来のサンプルに対して三連で実施した。終点力価を、カットオフ値０．０５にて非免疫血漿の２倍よりも大きな吸光度値（ＯＤ４５０）をもたらす最高血漿希釈度として、定義した。これらを、群平均力価（ＧＭＴ）±ＳＥＭとして報告した。
【０３５２】
ＣＴＬアッセイを、標準的様式に従って実行した。簡単に述べると、秘蔵を、免疫後４週間目に取り出し、１０％ウシ胎仔血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）と、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（それぞれ、最終濃度１０００Ｕ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＵＫ）と、５×１０−５Ｍ β−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）とを補充したＲＰＭＩ １６４０組織培養培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（完全ＲＰＭＩ １６４０）中で単細胞懸濁物になるようにホモジナイズした。脾細胞懸濁物（３×１０６細胞／ｍｌ）中のＨＢｓＡｇ特異的リンパ球を、ＨＢｓＡｇを発現するマウス細胞系統（ｐ８１５−Ｓ）とともにインキュベートすることによって、５日間再刺激した。再刺激後、ＨＢｓＡｇを発現する細胞をそのリンパ球が死滅させる能力を、５１Ｃｒ放出アッセイを使用することによって決定した。その結果を、種々のエフェクター／標的（Ｅ：Ｔ）比における特異的溶解％として示す。
【０３５３】
（結果） 代表的な結果を、図４〜図６において示す。図４において示されるように、ＯＤＮ２００６についての全ＩｇＧ力価およびＯＤＮ６２０についての全ＩｇＧ力価は、用量依存性であり、それぞれ、ＯＤＮ用量１μｇにおいて、約５×１０３および６．５×１０３であることがわかった。ＯＤＮ２００６についての全ＩｇＧ力価およびＯＤＮ６２０についての全ＩｇＧ力価は、ＯＤＮ用量１μｇにおいて、約１×１０４であることがわかった。図５において示されるように、ＯＤＮ２００６およびＯＤＮ６２０は、両方とも、非ＣｐＧコントロールであるＯＤＮ２１３７（ＴＧＣＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴ；配列番号６０）と比較して、ＩｇＧ２ａ（マウスにおけるＴｈ１様ＩｇＧ）を有意にブーストした。具体的には、用量１０μｇにて各々投与されたＯＤＮ２００６についてのＩｇＧ２ａ力価、ＯＤＮ６２０についてのＩｇＧ２ａ力価、およびＯＤＮ２１３７についてのＩｇＧ２ａ力価は、それぞれ、約３×１０３、６×１０３、および３×１０２であった。図６において示されるように、ＯＤＮ２００６およびＯＤＮ６２０についてのＥ：Ｔ比が１００：１でのＣＴＬ活性は、投与用量１０μｇおよび１００μｇにおいて、コントロールよりも有意に大きかった。例えば、用量１０μｇにて各々投与されたＯＤＮ２００６についての特異的溶解％、ＯＤＮ２６０についての特異的溶解％、およびＯＤＮ２１３７についての特異的溶解％は、約２６％、２４％、および１２％であった。
【０３５４】
まとめると、これらの実験の結果、本発明のＣクラスＯＤＮアナログは、抗原特異的免疫応答をインビボで有効に誘導することを、示す。
【０３５５】
（実施例５）
（ＣクラスＯＤＮアナログは、腫瘍モデルにおいてインビボにて、生存を改善し、腫瘍体積を減少する）
この一連の実験において、本発明のＣクラスＯＤＮアナログを、マウス神経芽細胞腫モデルにおいてインビボで試験した。本発明のＣクラスＯＤＮアナログは、全体の生存および腫瘍負荷の両方を劇的に改善することがわかった。
【０３５６】
ＯＤＮは、実施例１におけるようにして得た。
【０３５７】
ＢＡＬＢ／ｃマウスは、実施例４におけるようにして得た。
【０３５８】
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、１×１０６個のマウス神経芽細胞腫（Ｎｅｕｒｏ−２ａ）細胞（例えば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ−１３１、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、０日目に左大腿部中に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。マウスに、１０日目〜２５日目に毎日、ＰＢＳ、ＣｐＧ ２００６、ＣｐＧ ６２０、または非ＣｐＧコントロールであるＯＤＮ２１３７の皮下注射を行った。生存％および腫瘍体積を測定した。
【０３５９】
（結果） 代表的な結果を、図７に示す。図７Ａにおいて示されるように、１００μｇのＯＤＮ６２０で処理したマウスは、８０日目に５０％の生存率を有した。これに比較して、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２１３７、またはＰＢＳについて、対応する生存率は、０％〜２０％であった。さらに、図７Ｂにおいて示されるように、１００μｇ ＯＤＮ６２０で処理したマウスは、２８日目に約１０００ｍｍ３にてピークに達して３８日目までに０ｍｍ３まで減少した腫瘍体積を有した。比較すると、ＯＤＮ２１３７またはＰＢＳで処理したマウスは、より迅速な単調な腫瘍増殖を有した。
【０３６０】
まとめると、これらの実験の結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、腫瘍モデルにおいてインビボにて、生存を有効に改善し、腫瘍体積を有効に減少することを示す。
【０３６１】
（実施例６）
（ＣクラスＯＤＮアナログの組織代謝および分布）
本発明のＣクラスＯＤＮアナログを用いる吸着研究／分布研究は、マウスの皮下処置後に腎臓および肝臓などの器官からの順調な代謝およびクリアランスを示した。
【０３６２】
マウスを、５匹ずつの群へと分割し、各マウスに、０日目に単回皮下投与にて２５０μｇのＯＤＮを投与した。種々の時点で、それらの器官（肝臓、腎臓、および脾臓）を、取り出し、そのオリゴヌクレオチドおよびその代謝物を、内容物の定量のために抽出した。
【０３６３】
（結果） 本発明のＯＤＮ（例えば、ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０）は、完全にホスホロチオエートパリンドローム性である既知ＯＤＮ（例えば、ＯＤＮ２４２９）と比較して少ない蓄積を、器官において示した。例えば、３日目に、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６２０およびＯＤＮ２４２９の腎臓レベルは、それぞれ、約７０±２８ｍｇ／ｋｇ、約３０±１８ｍｇ／ｋｇ、および約９０±１０ｍｇ／ｋｇであった。同様に、３日目に、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６２０およびＯＤＮ２４２９の肝臓レベルは、それぞれ、約４５±１５ｍｇ／ｋｇ、約２８±１２ｍｇ／ｋｇ、および約１５０±１５ｍｇ／ｋｇであった。
【０３６４】
全体としてまとめると、これらの結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、ＯＤＮが蓄積し得る器官からの順調な代謝およびクリアランスを有することを、示す。
【０３６５】
（実施例７）
（ＣクラスＯＤＮアナログの物理的特徴）
この組の実験において、ＯＤＮ２４２９、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６２０、ＯＤＮ６０８
【０３６６】
【化９１】
およびＯＤＮ６１８
【０３６７】
【化９２】
を、サイズ排除クロマトグラフィー、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）、ＵＶ熱変性、および高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して、特徴付けた。ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０をサイズ排除クロマトグラフィー（ＰＢＳ中で２２５μＭ）にて調査する場合、ただ１つだけのピークが、各化合物について観察された。すなわち、各オリゴヌクレオチドは、モノマーのように溶出した。対照的に、ＯＤＮ６０８およびＯＤＮ６１８（各々は、パリンドローム配列を含む）をサイズ排除クロマトグラフィーによって調査した場合、各オリゴヌクレオチドについて２つのピークが観察された。これは、上記モノマーに加えて、分子間ダイマーの存在と一致した。しかし、ＵＶ熱変性研究は、ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０が、溶液中で二次構造を有すことを示した。これは、分子内ヘアピン構造と一致した。このヘアピン構造は、ＯＤＮ６１１の配列およびＯＤＮ６２０の配列中にある逆方向反復から生じると考えられる。一般的に言うと、これらの配列について、ＨＰＬＣおよびＣＧＥにおいては、ＯＤＮ２４２９およびＯＤＮ６０８と比較して鋭いピークが、観察された。
【０３６８】
全体としてまとめると、これらの結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、分子内二次構造を形成する傾向があり、試験した濃度においてインビトロでは分子間複合体を形成しないが、パリンドローム含有ＣクラスＯＤＮは、分子間相互作用を解して複合体になるように会合する傾向があることを、示す。しかし、インビボでは、エンドソーム内区画中で達成されるＯＤＮ濃度が、ＯＤＮの二重鎖またはより高次の複合体（本発明のＣクラスＯＤＮアナログの二重鎖またはより高次の複合体さえも含む）さえも支持するのに充分に高濃度である可能性がある。
【０３６９】
（等価物）
上記の説明は、当業者が本発明の実施するのを可能にするに充分であると考えられる。本明細書中に示されそして記載されるものに加えて本発明の種々の改変が、上記の説明から当業者にとって明らかであり、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る。本発明の利点および目的は、本発明の各実施形態によって必ずしも包含されない。
【０３７０】
本明細書において引用されるすべての参考文献、特許および特許公開物は、その全体参考として本明細書中に援用される。
【図面の簡単な説明】
【０３７１】
本発明は、添付の図面と組み合わせて考慮されるとき、より容易かつ完全に理解され得る。図面は、例示の目的のみのために提供され、本発明を理解または実施するために必要とはされない。
【図１】図１は、ＯＤＮ３３２、ＯＤＮ３３３およびＯＤＮ３３４によるＩＦＮ−αおよびＴＬＲ９のシグナル伝達の誘導を図示する、一連のグラフである。
【図２】図２は、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６１４およびＯＤＮ６２０によるＩＦＮ−αおよびＴＬＲ９のシグナル伝達の誘導を図示する、一連のグラフである。
【図３】図３は、オリゴヌクレオチドのパネルにより刺激された、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＩＦＮ−αの産生を図示するグラフである。
【図４】図４は、示された量のＯＤＮと共に１μｇのＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）で免疫した後の、抗原特異的な総ＩｇＧの群平均力価（ＧＭＴ）を図示するグラフである。
【図５】図５は、示された量のＯＤＮと共に１μｇのＨＢｓＡｇで免疫した後の、抗原特異的な個々のＩｇＧアイソタイプのＧＭＴを図示するグラフである。
【図６】図６は、示された量のＯＤＮと共に１μｇのＨＢｓＡｇで免疫した後の、抗原特異的な細胞溶解性Ｔリンパ球の応答を図示するグラフである。
【図７】図７Ａは、マウスの神経芽細胞腫腫瘍モデルにおける、異なるＯＤＮ処置による生存率を図示するグラフである。図７Ｂは、マウス神経芽細胞腫腫瘍モデルにおける、異なるＯＤＮ処置による腫瘍容積を図示するグラフである。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般に、免疫刺激性核酸、その組成物およびこの免疫刺激性核酸を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
細菌ＤＮＡは、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化させる免疫刺激効果を有するが、脊椎動物ＤＮＡは、その効果を有さない。非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；ならびに非特許文献４（総説Ｋｒｉｅｇ，１９９８）および非特許文献５。現在、細菌ＤＮＡのこれらの免疫刺激効果は、特に塩基の状況では、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（ＣｐＧモチーフ）の存在の結果であり、この非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドは、細菌ＤＮＡにおいて共通するが、脊椎動物ＤＮＡでは、メチル化されており、かつ少ないことがわかっている。非特許文献６；非特許文献７。
【０００３】
細菌ＤＮＡの免疫刺激効果は、これらのＣｐＧモチーフを含む合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）で模倣され得る。このようなＣｐＧ ＯＤＮは、ヒトおよびマウス白血球に対して非常に刺激性の効果を有し、Ｂ細胞増殖；サイトカインおよび免疫グロブリン分泌；ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の溶解活性およびインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）分泌；ならびに樹状細胞（ＤＣ）、および同時刺激性分子を発現し、かつサイトカイン（特に、Ｔｈｌ様Ｔ細胞応答の発生を促進することにおいて重要なＴｈｌ様サイトカイン）を分泌する他の抗原提示細胞の活性化を誘導する。ネイティブのホスホジエステル骨格ＣｐＧ ＯＤＮのこれらの免疫刺激効果は、そのＣｐＧモチーフがメチル化され、ＧｐＣに変化されるか、または他の方法で排除されるかもしくは変化する場合に、その効果が劇的に低下するという点で、非常にＣｐＧ特異的である。非特許文献６；非特許文献８。
【０００４】
初期の研究において、その免疫刺激性ＣｐＧモチーフは、式 プリン−プリン−ＣｐＧ−ピリミジン−ピリミジンに従うと考えられていた。非特許文献６；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１。しかし、現在では、マウスリンパ球が、この「式」に従わないホスホジエステルＣｐＧモチーフに対して極めてよく応答することが明らかであり（非特許文献１２）、ヒトＢ細胞および樹状細胞でも同じことがいえる（非特許文献８；非特許文献１３）。
【非特許文献１】Ｔｏｋｕｎａｇａ Ｔら、Ｊｐｎ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（１９８８）７９：６８２−６
【非特許文献２】Ｔｏｋｕｎａｇａ Ｔら、ＪＮＣＩ（１９８４）７２：９５５−６２
【非特許文献３】Ｍｅｓｓｉｎａ ＪＰら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９１）１４７：１７５９−６４
【非特許文献４】Ｃ．Ａ．ＳｔｅｉｎおよびＡ．Ｍ．Ｋｒｉｅｇ，（編），Ａｐｐｌｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ｐｐ．４３１−４４８
【非特許文献５】Ｋｒｉｅｇ ＡＭ、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００２）２０：７０９−６０
【非特許文献６】Ｋｒｉｅｇ ＡＭら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９５）３７４：５４６−９
【非特許文献７】Ｋｒｉｅｇ ＡＭ、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ（１９９９）１４８９：１０７−１６
【非特許文献８】Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｇら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ（１９９９）９６：９３０５−１０
【非特許文献９】Ｐｉｓｅｔｓｋｙ ＤＳ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９６）１５６：４２１−３
【非特許文献１０】Ｈａｃｋｅｒ Ｈら、ＥＭＢＯ Ｊ（１９９８）１７：６２３０−４０
【非特許文献１１】Ｌｉｐｆｏｒｄ ＧＢら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９８）６：４９６−５００
【非特許文献１２】Ｙｉ ＡＫら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９８）１６０：５８９８−９０６
【非特許文献１３】Ｌｉａｎｇ Ｈら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（１９９６）９８：１１１９−２９
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
以下の式Ｉ：
【化１】
の免疫刺激性核酸分子を含む組成物であって、ここで、
Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、ヌクレオチドであって、該ヌクレオチドは、チミン、ウラシル、アデニン、もしくは５−置換ウラシルを含むヌクレオチドであり；
Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシン（Ｃ）もしくは改変シトシンであり；
Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニン（Ｇ）もしくは改変グアニンであり；
ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｓ１は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであって、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、もしくは２’３’−ヌクレオシド間結合を必要に応じて提供し；
Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列もしくは非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであり；
Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；
ｋは、０〜５までの整数であり；
ｎは、２〜１６までの整数であり；
ｐは、１〜６までの整数であり；そして
ｑは、０〜１０までの整数であり、そしてここで
（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）が１０〜４２ヌクレオチド長である場合、Ｓ２は、４〜１０ヌクレオチド長であり、かつＳ２は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットを含み、かつ／または（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、２／３未満のＧＣ含量を有する、
組成物。
（項目２）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成する、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｔ、Ａ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＴはＡと塩基対を形成する、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成し、ＴはＧと塩基対を形成し、ＡはＴと塩基対を形成し、そしてＡはＧと塩基対を形成する、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択される、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６）
Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々のうちの少なくとも１つは、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択される、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目７）
少なくとも１つのホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格をさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目８）
少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を有する骨格をさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目９）
前記オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、全てホスホロチオエート結合である、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１０）
Ｙ１Ｒ１もしくはＹ２Ｒ２のうちの少なくとも１つを結合するホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格をさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１１）
Ｙ１はＣである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１２）
Ｒ１はＧである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１３）
Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１４）
Ｘ１もしくはＸ２は、Ｔである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１５）
Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１である、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１６）
Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１であり、ｐは１であり、ＮおよびＮ’ならびにＺ３は、各々、ヌクレオチドを含まず、Ｚ２はＴＴＴＴもしくはｄ（ＵＵＵＵ）である、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１７）
Ｓ２は、非ヌクレオチドリンカーである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１８）
Ｓ２は、少なくとも１つの無塩基性ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目１９）
前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの分枝状非ヌクレオシド結合を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２０）
少なくとも１つの二重ユニット、少なくとも１つの三重ユニット、または少なくとも１つの二重ユニットと少なくとも１つの三重ユニットをさらに含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２１）
Ｓ１は二重ユニットまたは三重ユニットである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２２）
前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２３）
式ＩＩＩ：
（Ｚ’）ｍＺ３（Ｓ３） （式ＩＩＩ）
の免疫刺激性核酸分子であって、ここで
Ｚ’は、以下：
【化２】
であり；
Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、チミン、ウラシル、アデニン、または５−置換ウラシルを含むヌクレオチドであり；
Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシンまたは改変シトシンであり；
Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニンまたは改変グアニンであり；
ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、該配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；
Ｓ１は非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであって、必要に応じて、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を提供し；
Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列または非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであり；
Ｓ３は、直接的または間接的な２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合、または非ヌクレオチドリンカーであり、該非ヌクレオチドリンカーは、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニット、またはヘキサエチレングリコールユニットを含み、該無塩基性リンカーまたは該ユニットは、ｍ配列部分の２’５’−結合、５’５’−結合、３’３’−結合、２’２’−結合、または２’３’−結合を促進し；
Ｎ１，Ｎ２，．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドまたは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、Ｎ３は、Ｎ３＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；
ｋは、０〜５の整数であり；
ｍは、２〜１０の整数であり；
ｎは、２〜１６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；そして
ｑは、０〜１０の整数である、
免疫刺激性核酸分子。
（項目２４）
【化３】
は、非パリンドローム配列である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子を含む組成物。
（項目２５）
【化４】
は、
【化５】
であり、ＬはｄＳｐａｃｅｒである、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子を含む組成物。
（項目２６）
【化６】
は、パリンドローム配列である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子を含む組成物。
（項目２７）
【化７】
は、
【化８】
である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２８）
【化９】
は、
【化１０】
である、項目１または項目２３に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目２９）
【化１１】
は、以下の配列
【化１２】
を含み、ここでＬは、ｄＳｐａｃｅｒである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３０）
【化１４】
は、以下の配列
【化１５】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３１）
以下の配列：
【化１６】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３２）
以下の配列：
【化１７】
を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３３）
以下の配列：
【化１９】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３４）
以下の配列：
【化２０】
を含む、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３５）
以下：
【化２１】
から選択される配列を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒであり、
【化２１Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２１Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３６）
以下：
【化２３】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２３Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２３Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３７）
以下：
【化２４】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２４Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２４Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３８）
以下：
【化２５】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２５Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２５Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目３９）
以下の配列：
【化２６】
を含み、ここで、
【化２６Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２６Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４０）
以下：
【化２７】
から選択される配列を含み、ここで、
【化２７Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２７Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４１）
以下の配列：
【化２８】
を含み、ここで、
【化２８Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【化２８Ｂ】
はホスホジエステルである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４２）
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンである、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４３）
前記置換ピリミジンは、Ｃ５−置換ピリミジンもしくはＣ６−置換ピリミジンである、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４４）
前記置換プリンは、Ｃ８−置換プリンもしくはＣ７−置換プリンである、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４５）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、５−置換シトシン、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ、およびウラシル誘導体、チミン誘導体、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、置換アデニン、８−置換グアニン、ならびに６−チオグアニンからなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４６）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、６−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、ならびに非置換型もしくは置換型の５−アルキニル−シトシン、Ｎ４−エチル−シトシン、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシン、フェノキサジン、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン、Ｎ２−メチル−グアニン、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニンからなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４７）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、ユニバーサル塩基（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ）、芳香族環系、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）からなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４８）
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基、およびＫ−塩基、ベンズイミダゾール、ジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド、フルオロベンゼン、およびジフルオロベンゼンからなる群より選択される、項目４２に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目４９）
Ｎ、Ｓ、Ｘ、またはＺのいずれかは、Ｃ６−Ｃ３０アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、コレステロール、オレイルリトコール酸、オレオイルコラン酸、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、ステロイド、ビタミン類、ビタミンＥ、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、トリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素類、シアニン色素Ｃｙ３、シアニン色素Ｃｙ５７６、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される残基によって置換されている、項目１に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５０）
（ａ）（ＴＣＧ）ｎＮおよびＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎから選択される免疫刺激性モチーフで始まる５’末端であって、ここでＴはチミンであり、Ｃは非メチル化シトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｒはプリンであり、ＤはＣでなく、Ｙ１およびＹ２の各々は、独立してピリミジンであり、ｎは１〜４の整数であり、Ｎは、０〜１２塩基長のあらゆる配列である、５’末端；
（ｂ）ヘアピン構造もしくはステム−ループ構造を形成することができる逆方向反復で終結する３’末端であって、該構造は、
２〜６個の連続する塩基対長のＧＣ−リッチのステム、および
少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基
を含む、３’末端；ならびに
（ｃ）少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む、複数の安定化された骨格、
を含む、免疫刺激性核酸分子。
（項目５１）
前記ＧＣ−リッチステムは、２個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５２）
前記ＧＣ−リッチステムは、３個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５３）
前記ＧＣ−リッチステムは、４個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５４）
前記ＧＣ−リッチステムは、５個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５５）
前記ＧＣ−リッチステムは、６個の連続する塩基対長である、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５６）
前記ＧＣ−リッチステムは、少なくとも２個のＧ−Ｃ塩基対を含む、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５７）
前記ＧＣ−リッチステムは、少なくとも３個のＧ−Ｃ塩基対を含む、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５８）
前記少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基は、Ｔである、項目５０〜５７のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目５９）
少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む前記部分的に安定化された骨格は、複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合をさらに含む、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６０）
前記５’末端は、
【化２８−１】
として提供される配列を有する、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６１）
前記逆方向反復で終結する３’末端は、
【化２８−２】
として提供される配列を有する、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６２）
前記逆方向反復で終結する３’末端は、
【化２９】
として提供される塩基配列を有する、項目５０に記載の免疫刺激性核酸分子。
（項目６３）
【化３０】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸。
（項目６４）
【化３１】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸。
（項目６５）
【化３２】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３２Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３２Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６６）
【化３３】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３３Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３３Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６７）
【化３４】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３４Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３４Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６８）
【化３５】
として提供される配列を有し、ここで、
【化３５Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【化３５Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である、免疫刺激性核酸。
（項目６９）
項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸分子および抗原を含む、ワクチン。
（項目７０）
項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸分子および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
（項目７１）
Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）発現を誘導するための方法であって、該方法は、
Ｉ型ＩＦＮを発現することができる細胞と、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸とを、Ｉ型ＩＦＮの発現を誘導するに有効な量で接触させる工程、
を包含する、方法。
（項目７２）
前記Ｉ型ＩＦＮは、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）である、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
γインターフェロン（ＩＦＮ−γ）発現を誘導するための方法であって、該方法は、
ＩＦＮ−γを発現することができる細胞と、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸とを、ＩＦＮ−γの発現を誘導するに有効な量で接触させる工程、
を包含する、方法。
（項目７４）
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するための方法であって、該方法は、
ＮＫ細胞と、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸とを、該ＮＫ細胞を活性化させるに有効な量で接触させる工程、
を包含する、方法。
（項目７５）
感染を処置するための方法であって、該方法は、
感染を有するか、または感染を発生させる危険性がある被験体に、該感染を処置または予防するに有効な量の、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目７６）
前記被験体は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生生物感染から選択される感染を有するかまたは該感染を発生させる危険性がある、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記被験体は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、パピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、または単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）から選択されるウイルスによるウイルス感染を有するかまたは該ウイルス感染を発生させる危険性がある、項目７５に記載の方法。
（項目７８）
前記被験体は、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、またはＡｎｔｈｒａｘから選択される細菌種による細菌感染を有するかまたは該細菌感染を発生させる危険性がある、項目７５に記載の方法。
（項目７９）
アレルギー状態を処置するための方法であって、該方法は、
アレルギー状態を有するかまたは該状態を発生させる危険性がある被験体に、該アレルギー状態を処置または予防するに有効な量の、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸を投与する工程、
を包含する、方法。
（項目８０）
前記アレルギー状態は、アレルギー性喘息である、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
癌を処置するための方法であって、該方法は、
癌を有するかまたは癌を発生させる危険性のある被験体に、該癌を処置または予防するに有効な量の、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸を投与する工程、を包含する、方法。
（項目８２）
前記癌は、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、咽頭癌、白血病、肝癌、肺癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋芽細胞腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系の癌、または他の癌腫および肉腫から選択される、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
前記癌は、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）での処置に感受性の癌である、項目８１に記載の方法。
（項目８４）
前記ＩＦＮ−αでの処置に感受性の癌は、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、前立腺癌腫、子宮頚部形成異常、または結腸癌腫から選択される、項目８３に記載の方法。
（項目８５）
感染の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
（項目８６）
アレルギー状態の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
（項目８７）
アレルギー性喘息の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
（項目８８）
癌の処置において使用するための医薬の製造のための、項目１〜６８のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
【０００６】
（発明の要旨）
本発明は、一部、その分子の３’末端でまたはその付近で逆方向反復を有する二次構造を有する、免疫刺激性ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログに関する。この二次構造は、特定の条件下で、二重鎖またはより高次の構造の形成に関与する。本発明のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログの重要な特徴として、この逆方向反復は、厳密なワトソン−クリックパリンドロームではなく、介在配列またはヌクレオチドアナログが間に入り得る。本発明のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログの別の特徴として、その骨格は、戦略的に配置されたヌクレアーゼ耐性ヌクレオチド間結合およびヌクレアーゼ感受性ヌクレオチド間結合を含むように改変され、それによって、共に、活性に好都合でありかつ潜在的な毒性を低下させ得る。さらに、これらのオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログは、Ａ−クラスおよびＢ−クラス両方の免疫刺激活性を発揮し、よって新規なＣ−クラス免疫刺激性核酸分子として分類されることが分かる。
【０００７】
本発明は、一部、その分子の３’末端にまたはその付近に不完全なパリンドロームを含む、ＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログが、それらの調製およびそれらの生物学的活性の両方に関して特定の利点を有するという本発明による発見に基づく。具体的には、本発明のＣ−クラスオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドアナログは、溶液中で特徴的にモノマーである。これらの同じ核酸分子は、インビトロで分子内二重鎖構造を形成し、このことによってこれらの分子をヌクレアーゼ消化に対して安定にし得ると考えられる。これらの同じ核酸分子は、エンドソーム内区画の環境内で、分子内二重鎖、そしておそらくより高次の構造を形成し得、この環境では、これらの分子は、その生物学的活性を発揮すると考えられる。
【０００８】
一局面において、本発明は、以下の式Ｉ：
【０００９】
【化３６】
の免疫刺激性核酸分子を含む組成物を提供し、
ここでＺ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、ヌクレオチドであって、該ヌクレオチドは、チミン、ウラシル、アデニン、もしくは５−置換ウラシルを含み；Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシン（Ｃ）もしくは改変シトシンであり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニン（Ｇ）もしくは改変グアニンであり；ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であって、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーもしくは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｓ１は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであって、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、もしくは２’３’−ヌクレオシド間結合を必要に応じて提供し；Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列もしくは非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットであり；Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；ｋは、０〜５までの整数であり；ｎは、２〜１６までの整数であり；ｐは、１〜６までの整数であり；そしてｑは、０〜１０までの整数であり、そしてここで（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）が１０〜４２ヌクレオチド長である場合、Ｓ２は、４〜１０ヌクレオチド長であり、かつＳ２は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットを含み、かつ／または（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、２／３未満のＧＣ含量を有する。
【００１０】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、ここでＣはＧと塩基対を形成する。
【００１１】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｔ、Ａ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＴはＡと塩基対を形成する。
【００１２】
これらおよび他の実施形態において、Ｃ、Ｇ、Ａ、およびＴの各々は、デオキシヌクレオチドであって、対応する塩基であるシトシン、グアニン、アデニン、およびチミンに言及され得る。
【００１３】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成し、ＴはＧと塩基対を形成し、ＡはＴと塩基対を形成し、そしてＡはＧと塩基対を形成する。
【００１４】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、各塩基対（Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃、．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃）は、ワトソン−クリック塩基対である。
【００１５】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々のうちの少なくとも１つは、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、少なくとも１つの塩基対（Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃、．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃）は、非ワトソン−クリック塩基対である。
【００１６】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つのホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００１７】
一実施形態において、免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を有する骨格を含む。
【００１８】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、全てホスホロチオエート結合である。
【００１９】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、Ｙ１Ｒ１もしくはＹ２Ｒ２のうちの少なくとも１つを結合するホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００２０】
一実施形態において、Ｙ１はＣである。
【００２１】
一実施形態において、Ｒ１はＧである。
【００２２】
一実施形態において、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧである。
【００２３】
一実施形態において、Ｘ１もしくはＸ２は、Ｔである。
【００２４】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１である。
【００２５】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１であり、ｐは１であり、ＮおよびＮ’ならびにＺ３は、各々、ヌクレオチドを含まず、Ｚ２はＴＴＴＴもしくはｄ（ＵＵＵＵ）であり、ここでｄ（ＵＵＵＵ）は、ｄＵｄＵｄＵｄＵ（すなわち、（デオキシＵ）４）を表す。
【００２６】
一実施形態において、Ｓ２は、非ヌクレオチドリンカーである。
【００２７】
一実施形態において、Ｓ２は、少なくとも１つの無塩基性ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む。
【００２８】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの分枝状非ヌクレオシド結合を含む。
【００２９】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの二重ユニット、少なくとも１つの三重ユニット、または少なくとも１つの二重ユニットと少なくとも１つの三重ユニットを含む。
【００３０】
一実施形態において、Ｓ１は二重ユニットまたは三重ユニットである。
【００３１】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を含む。
【００３２】
一実施形態において、式Ｉの免疫刺激性核酸分子は、アンチセンス核酸ではない。
【００３３】
一局面において、本発明は、式ＩＩ：
【００３４】
【化３７】
の免疫刺激性核酸分子を提供し、ここでＺ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２個のヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、チミン、ウラシル、アデニン、または５−置換ウラシルを含み；Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシン（Ｃ）または改変シトシンであり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニン（Ｇ）または改変グアニンであり；Ｎは、０〜１２個のヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｓ１は非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであって、必要に応じて、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を提供し；Ｓ２は、１〜１０個のヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列または非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであり；Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、．．．Ｎｎ−１は、Ｎｎ−１＃と塩基対を形成し、そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；ｋは、０〜５の整数であり；ｎは、２〜１６の整数であり；ｐは、１〜６の整数であり；そしてｑは、０〜１０の整数であり；そしてここで（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）が１０〜４２ヌクレオチド長である場合、Ｓ２は、４〜１０ヌクレオチド長であり、かつＳ２は、非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットもしくはヘキサエチレングリコールユニットを含み、かつ／または（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、２／３未満のＧＣ含量を有する。
【００３５】
一実施形態において、Ｚ１（Ｎｎ）（Ｎｎ−１）は、ＴＹＲであり、ここでＹは、シトシンもしくは改変シトシンであり、Ｒは、グアニンもしくは改変グアニンである。
【００３６】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｇ、またはこれらの改変から選択され、ここでＣは、Ｇと塩基対を形成する。
【００３７】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、Ｔ、Ａまたはこれらの改変から選択され、ここでＴは、Ａと塩基対を形成する。
【００３８】
これらおよび他の実施形態において、Ｃ、Ｇ、Ａ、およびＴの各々は、デオキシヌクレオチドであって、対応する塩基であるシトシン、グアニン、アデニン、およびチミンに言及され得る。
【００３９】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，Ｎｎ、およびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、Ｃ、Ｔ、Ａ、Ｇ、もしくはこれらの改変体から選択され、そしてＣはＧと塩基対を形成し、ＴはＧと塩基対を形成し、ＡはＴと塩基対を形成し、そしてＡはＧと塩基対を形成する。
【００４０】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々は、ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、各塩基対（Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃）は、ワトソン−クリック塩基対である。
【００４１】
一実施形態において、Ｎ１，Ｎ２，．．．．Ｎｎ−１，ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ−１＃，Ｎｎ＃の各々のうちの少なくとも１つは、非ワトソン−クリック塩基対を形成する、非改変ヌクレオチドもしくは改変ヌクレオチドから選択され、すなわち、少なくとも１つの塩基対Ｎ１−Ｎ１＃、Ｎ２−Ｎ２＃．．．Ｎｎ−Ｎｎ＃は、非ワトソン−クリック塩基対である。
【００４２】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つのホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００４３】
一実施形態において、免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を有する骨格を含む。
【００４４】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間結合は、全てホスホロチオエート結合である。
【００４５】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、Ｙ１Ｒ１もしくはＹ２Ｒ２のうちの少なくとも１つを結合するホスホジエステル結合で部分的に安定化した骨格を含む。
【００４６】
一実施形態において、Ｙ１はＣである。
【００４７】
一実施形態において、Ｒ１はＧである。
【００４８】
一実施形態において、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧである。
【００４９】
一実施形態において、Ｘ１もしくはＸ２は、Ｔである。
【００５０】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１である。
【００５１】
一実施形態において、Ｘ１はＴであり、Ｘ２はＴであり、Ｙ１はＣであり、Ｒ１はＧであり、ｋは１であり、ｐは１であり、ＮおよびＮ’ならびにＺ３は、各々、ヌクレオチドを含まず、Ｚ２はＴＴＴＴもしくはｄ（ＵＵＵＵ）であり、ここでｄ（ＵＵＵＵ）は、（デオキシＵ）４を表す。
【００５２】
一実施形態において、Ｓ２は、非ヌクレオチドリンカーである。
【００５３】
一実施形態において、Ｓ２は、少なくとも１つの無塩基性ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む。
【００５４】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの分枝状非ヌクレオシド結合を含む。
【００５５】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸分子は、少なくとも１つの二重ユニット、少なくとも１つの三重ユニット、または少なくとも１つの二重ユニットと少なくとも１つの三重ユニットを含む。
【００５６】
一実施形態において、Ｓ１は二重ユニットまたは三重ユニットである。
【００５７】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を含む。
【００５８】
一実施形態において、式Ｉの免疫刺激性核酸分子は、アンチセンス核酸ではない。
【００５９】
一局面において、本発明は、式ＩＩＩ：
（Ｚ’）ｍＺ３（Ｓ３） （式ＩＩＩ）
の免疫刺激性核酸分子を提供し、ここでＺ’は、以下：
【００６０】
【化３８】
であり；Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｘ１およびＸ２の各々は、独立して、チミン、ウラシル、アデニン、または５−置換ウラシルを含み；Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、シトシンまたは改変シトシンであり；Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、グアニンまたは改変グアニンであり；ＮおよびＮ’の各々は、独立して、０〜１２ヌクレオチド長のあらゆる配列であり、この配列は、必要に応じて、非ヌクレオチドリンカーまたは無塩基性ｄＳｐａｃｅｒを含み；Ｓ１は非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであって、必要に応じて、２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合を提供し；Ｓ２は、１〜１０ヌクレオチド長のあらゆる非パリンドローム配列または非ヌクレオチドリンカー、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニットまたはヘキサエチレングリコールユニットであり；Ｓ３は、直接的または間接的な２’５’−ヌクレオシド間結合、５’５’−ヌクレオシド間結合、３’３’−ヌクレオシド間結合、２’２’−ヌクレオシド間結合、または２’３’−ヌクレオシド間結合、または非ヌクレオチドリンカーであり、この非ヌクレオチドリンカーは、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコールユニット、またはヘキサエチレングリコールユニットを含み、該無塩基性リンカーまたは該ユニットは、ｍ配列部分の２’５’−結合、５’５’−結合、３’３’−結合、２’２’−結合、または２’３’−結合を促進し；Ｎ１，Ｎ２，．．．ＮｎおよびＮ１＃，Ｎ２＃，．．．Ｎｎ＃の各々は、任意のヌクレオチドまたは改変ヌクレオチドであって、ここでＮ１は、Ｎ１＃と塩基対を形成し、Ｎ２は、Ｎ２＃と塩基対を形成し、Ｎ３は、Ｎ３＃と塩基対を形成し、．．．そしてＮｎは、Ｎｎ＃と塩基対を形成し；ｋは、０〜５までの整数であり；ｍは、２〜１０までの整数であり；ｎは、２〜１６までの整数であり；ｐは、１〜６までの整数であり；そしてｑは、０〜１０までの整数である。
【００６１】
特定の実施形態において、
【００６２】
【化３９】
は、非パリンドローム配列である。
【００６３】
特定の実施形態において、
【００６４】
【化４０】
は、
【００６５】
【化４１】
であり、ＬはｄＳｐａｃｅｒである。
【００６６】
特定の実施形態において、
【００６７】
【化４２】
は、パリンドローム配列である。
【００６８】
特定の実施形態において、
【００６９】
【化４３】
は、
【００７０】
【化４４】
である。
【００７１】
特定の実施形態において、
【００７２】
【化４５】
は、
【００７３】
【化４６】
である。
【００７４】
一実施形態において、（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）Ｚ３は、以下の配列：
【００７５】
【化４７】
を含み、ここでＬは、ｄＳｐａｃｅｒである。
【００７６】
一実施形態において、（Ｎｎ）．．．（Ｎ２）（Ｎ１）Ｓ２（Ｎ１＃）（Ｎ２＃）．．．（Ｎｎ＃）は、以下の配列：
【００７７】
【化４８】
を含む。
【００７８】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、
以下の配列：
【００７９】
【化４９】
を含む。
【００８０】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【００８１】
【化５０】
を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒである。
【００８２】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【００８３】
【化５２】
を含む。
【００８４】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【００８５】
【化５３】
を含む。
【００８６】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００８７】
【化５４】
から選択される配列を含み、ここでＬはｄＳｐａｃｅｒであり、
【００８８】
【化５４Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【００８９】
【化５４Ｂ】
はホスホジエステルである。
【００９０】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００９１】
【化５６】
から選択される配列を含み、ここで、
【００９２】
【化５６Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【００９３】
【化５６Ｂ】
はホスホジエステルである。
【００９４】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００９５】
【化５７】
から選択される配列を含み、ここで、
【００９６】
【化５７Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【００９７】
【化５７Ｂ】
はホスホジエステルである。
【００９８】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【００９９】
【化５８】
から選択される配列を含み、ここで、
【０１００】
【化５８Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１０１】
【化５８Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１０２】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【０１０３】
【化５９】
を含み、ここで、
【０１０４】
【化５９Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１０５】
【化５９Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１０６】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下：
【０１０７】
【化６０】
から選択される配列を含み、ここで、
【０１０８】
【化６０Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１０９】
【化６０Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１１０】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【０１１１】
【化６１】
を含み、ここで、
【０１１２】
【化６１Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１１３】
【化６１Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１１４】
一実施形態において、この免疫刺激性核酸は、以下の配列：
【０１１５】
【化６２】
を含み、ここで、
【０１１６】
【化６２Ａ】
はホスホロチオエートであり、
【０１１７】
【化６２Ｂ】
はホスホジエステルである。
【０１１８】
一実施形態において、このオリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンである。
【０１１９】
一実施形態において、この置換ピリミジンは、Ｃ５−置換ピリミジンもしくはＣ６−置換ピリミジンである。
【０１２０】
一実施形態において、この置換プリンは、Ｃ８−置換プリンもしくはＣ７−置換プリンである。
【０１２１】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしく
は改変ピリミジンは、５−置換シトシン、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ、およびウラシル誘導体、チミン誘導体、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、置換アデニン、８−置換グアニン、ならびに６−チオグアニンからなる群より選択される。
【０１２２】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、６−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、ならびに非置換型もしくは置換型の５−アルキニル−シトシン、Ｎ４−エチル−シトシン、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシン、フェノキサジン、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン、Ｎ２−メチル−グアニン、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニンからなる群より選択される。
【０１２３】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、ユニバーサル塩基（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ）、芳香族環系、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）からなる群より選択される。
【０１２４】
一実施形態において、この置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンは、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基、およびＫ−塩基、ベンズイミダゾール、ジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド、フルオロベンゼン、およびジフルオロベンゼンからなる群より選択される。
【０１２５】
一実施形態において、Ｎ、Ｓ、Ｘ、またはＺのいずれかは、Ｃ６−Ｃ３０アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、コレステロール、オレイルリトコール酸、オレオイルコラン酸（ｏｌｅｏｙｌ ｃｈｏｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ）、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、ステロイド、ビタミン類、ビタミンＥ、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、脂肪酸エステル、トリグリセリド、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン色素類、シアニン色素Ｃｙ３、シアニン色素Ｃｙ５７６、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８色素、ソラレン、およびイブプロフェンからなる群より選択される残基によって置換されている。
【０１２６】
一局面において、本発明は、以下の（ａ）〜（ｃ）：（ａ）（ＴＣＧ）ｎＮおよびＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎから選択される免疫刺激性モチーフで始まる５’末端であって、ここでＴはチミンであり、Ｃは非メチル化シトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｒはプリンであり、ＤはＣでなく、Ｙ１およびＹ２の各々は、独立してピリミジンであり、ｎは１〜４の整数であり、Ｎは、０〜１２塩基長のあらゆる配列である、５’末端；（ｂ）ヘアピン構造もしくはステム−ループ構造を形成することができる逆方向反復で終結する３’末端であって、この構造は、２〜６個の連続する塩基対長のＧＣ−リッチのステム、および少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基を含む、３’末端；ならびに（ｃ）
少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む、複数の安定化された骨格、を含む、免疫刺激性核酸分子を提供する。
【０１２７】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、２個の連続する塩基対長である。
【０１２８】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、３個の連続する塩基対長である。
【０１２９】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、４個の連続する塩基対長である。
【０１３０】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、５個の連続する塩基対長である。
【０１３１】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、６個の連続する塩基対長である。
【０１３２】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、少なくとも２個のＧ−Ｃ塩基対を含む。
【０１３３】
一実施形態において、このＧＣ−リッチステムは、少なくとも３個のＧ−Ｃ塩基対を含む。
【０１３４】
特定の実施形態において、この少なくとも１つのマッチしない塩基またはミスマッチ塩基は、Ｔである。
【０１３５】
一実施形態において、少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含むこの部分的に安定化された骨格は、複数のホスホロチオエートヌクレオチド間結合をさらに含む。
【０１３６】
一実施形態において、その５’末端は、
【０１３７】
【化６３】
として提供される配列を有する。
【０１３８】
一実施形態において、その逆方向反復で終結する３’末端は、
【０１３９】
【化６４】
として提供される塩基配列を有する。
【０１４０】
一実施形態において、その逆方向反復で終結する３’末端は、
【０１４１】
【化６５】
として提供される塩基配列を有する。
【０１４２】
一局面において、本発明は、
【０１４３】
【化６６】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸を提供する。
【０１４４】
一局面において、本発明は、
【０１４５】
【化６７】
として提供される塩基配列を有する、免疫刺激性核酸を提供する。
【０１４６】
一局面において、本発明は、
【０１４７】
【化６８】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１４８】
【化６８Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１４９】
【化６８Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１５０】
一局面において、本発明は、
【０１５１】
【化６９】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１５２】
【化６９Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１５３】
【化６９Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１５４】
一局面において、本発明は、
【０１５５】
【化７０】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１５６】
【化７０Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１５７】
【化７０Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１５８】
一局面において、本発明は、
【０１５９】
【化７１】
として提供される塩基配列を有する免疫刺激性核酸を提供し、ここで、
【０１６０】
【化７１Ａ】
はホスホロチオエートヌクレオチド間結合であり、
【０１６１】
【化７１Ｂ】
はホスホジエステルヌクレオチド間結合である。
【０１６２】
一局面において、本発明は、本発明の免疫刺激性核酸分子および抗原を含む、ワクチンを提供する。
【０１６３】
一局面において、本発明は、本発明の免疫刺激性核酸分子および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物を提供する。
【０１６４】
一局面において、本発明は、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）発現を誘導するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、Ｉ型ＩＦＮを発現することができる細胞と、本発明の免疫刺激性核酸とを、Ｉ型ＩＦＮの発現を誘導するに有効な量で接触させる工程を包含する。
【０１６５】
一実施形態において、このＩ型ＩＦＮは、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）である。
【０１６６】
一実施形態において、このＩ型ＩＦＮは、インターフェロンβ（ＩＦＮ−β）である。
【０１６７】
一局面において、本発明は、γインターフェロン（ＩＦＮ−γ）発現を誘導するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、ＩＦＮ−γを発現することができる細胞と、本発明の免疫刺激性核酸とを、ＩＦＮ−γの発現を誘導するに有効な量で接触させ
る工程を包含する。
【０１６８】
一局面において、本発明は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、ＮＫ細胞と、本発明の免疫刺激性核酸とを、このＮＫ細胞を活性化させるに有効な量で接触させる工程を包含する。
【０１６９】
一局面において、本発明は、感染を処置するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、感染を有するか、または感染を発生させる危険性がある被験体に、この感染を処置または予防するに有効な量の、本発明の免疫刺激性核酸を投与する工程を包含する。
【０１７０】
一実施形態において、その被験体は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、または寄生生物感染から選択される感染を有するかまたは該感染を発生させる危険性がある。
【０１７１】
一実施形態において、その被験体は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、パピローマウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、または単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）から選択されるウイルスによるウイルス感染を有するかまたはこのウイルス感染を発生させる危険性がある。
【０１７２】
一実施形態において、その被験体は、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、またはＡｎｔｈｒａｘから選択される細菌種による細菌感染を有するかまたは該細菌感染を発生させる危険性がある。
【０１７３】
一局面において、本発明は、アレルギー状態を処置するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、アレルギー状態を有するかまたはこの状態を発生させる危険性がある被験体に、このアレルギー状態を処置または予防するに有効な量の、本発明の免疫刺激性核酸を投与する工程を包含する。
【０１７４】
一実施形態において、このアレルギー状態は、アレルギー性喘息である。
【０１７５】
一局面において、本発明は、癌を処置するための方法を提供する。本発明のこの局面に従う方法は、癌を有するかまたは癌を発生させる危険性のある被験体に、この癌を処置または予防するに有効な量の、本発明の免疫刺激性核酸を投与する工程を包含する。
【０１７６】
一実施形態において、この癌は、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、咽頭癌、白血病、肝癌、肺癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋芽細胞腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系の癌、または他の癌腫および肉腫から選択される。
【０１７７】
一実施形態において、この癌は、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）での処置に感受性の癌である。
【０１７８】
一実施形態において、このＩＦＮ−αでの処置に感受性の癌は、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、前立腺癌腫、子宮頚部形成異常、または結腸癌腫から選択される。
【０１７９】
一局面において、本発明は、感染の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８０】
一局面において、本発明は、アレルギー状態の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８１】
一局面において、本発明は、アレルギー性喘息の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８２】
一局面において、本発明は、癌の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明の免疫刺激性核酸の使用を提供する。
【０１８３】
本発明の限定の各々は、本発明の種々の実施形態を包含し得る。従って、いずれか１つの要素または要素の組み合わせを含む本発明の限定の各々は、本発明の各局面において含まれ得ることが理解される。
【０１８４】
【化７２−１】
【０１８５】
【化７２−２】
。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１８６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、一局面において、規定された二次構造を有するＣｐＧの免疫刺激性オリゴヌクレオチドの特定のサブクラスが、免疫刺激効果を媒介するのに高度に有効であるという知見を含む。これらのＣｐＧ核酸は、癌、感染病、アレルギー、喘息および他の障害を処置するために免疫系を刺激するため、そして、癌の化学療法の後の日和見感染症に対して防御するのに役立つために、治療的かつ予防的に有用である。ＣｐＧ刺激から生じる、強力で、さらにバランスの取れた、細胞性免疫応答および体液性免疫応答は、病原および癌性細胞の浸潤に対する身体自身の生来の防御系を反映する。
【０１８７】
本発明の配列は、ＣクラスまたはコンビネーションモチーフのＣｐＧオリゴヌクレオチドと呼ばれる、ＣｐＧオリゴヌクレオチドのあるクラスと、いくらかの構造的類似性を共有する。公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ ０３／０１５７１１パンフレットを参照のこと。以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドと同様に、本発明のＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、分子の一部として、規定された５’モチーフおよび３’モチーフを有する。これらの以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドは、従来の「刺激性」ＣｐＧ配列（一般に、分子の５’末端もしくは３’末端、またはその近くに位置する）、および「ＧＣリッチのパリンドローム」モチーフ（一般に、分子のもう一方の端、またはその近くに位置する）の両方を有する。これらの組み合わせモチーフの核酸は、従来の「Ｂクラス」のＣｐＧ ＯＤＮ（Ｂ細胞の活性化および樹状細胞の活性化の強力な誘導因子である）に関連する効果と、より最近記載されたクラスの免疫刺激性核酸（「Ａクラス」のＣｐＧ ＯＤＮ；ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞の活性化の強力な誘導因子であるが、Ｂ細胞およびＤＣの活性化については誘導性が比較的乏しい）に関連する効果との間のどこかに収まる、免疫刺激効果を有する。
【０１８８】
本発明の新規のＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドはまた、以前に記載されたＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドと構造的に異なる。以前に記載されたＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドと比較して、本発明の免疫刺激性核酸分子は、分子の一方の端にあるＧＣリッチなパリンドロームに関してのかなり緩い要件を特徴とする。例えば、以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドは、一実施形態において、少なくとも１０ヌクレオチド長であり、かつ、少なくとも２／３のＧＣ含量を有する厳密もしくは完全なパリンドロームを含む。いくつかの実施形態において、以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドのパリンドロームは、多くても、最小数の連続したミスマッチヌクレオチドを含み得る。
【０１８９】
以前に記載されたＣクラスのオリゴヌクレオチドとは対照的に、本発明のＣクラスのオリゴヌクレオチドアナログは、種々の実施形態において、１０未満のヌクレオチド；０と２／３未満との間のＧＣ含量；任意の核酸塩基（ｄＳｐａｃｅｒ）を欠いたものを含む種々のヌクレオチドアナログおよび置換基；ワトソン−クリック塩基対を形成しない４つ以上の連続するヌクレオチドもしくはヌクレオチド置換基を含む伸長された介在配列；ならびにこれらの任意の組み合わせを有し得る、パリンドロームモチーフを特徴とする。さらに、いくつかの実施形態において、２つ以上の分子の３’部分は、その３’末端を介して互いに連結され得る。完全なパリンドロームを有さないこの新規サブクラスのオリゴヌクレオチドはなお、以前に記載された組み合わせモチーフのＣｐＧオリゴヌクレオチドと同様に、高いレベルのＩＦＮ産生を誘導し得、Ｉ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β）およびＩＦＮ−γを誘導し得ことが発見された。
【０１９０】
「パリンドローム」および同等に、「パリンドローム配列」とは、本明細書中で使用される場合、その自身の完全な反対方向の相補体（すなわち、ＡＢＣＤＥＥ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’（ここで、ＡとＡ’、ＢとＢ’、ＣとＣ’、ＤとＤ’、そしてＥとＥ’は、通常のワトソン−クリック塩基対（すなわち、Ｇ−Ｃ、Ａ−ＴおよびＡ−Ｕ）を形成し得る塩基である））である核酸配列を指す。本明細書中で使用される場合、「パリンドローム」は、厳密な意味において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しない、介在配列または介在非ヌクレオチド構造を除外する。
【０１９１】
「逆方向反復」とは、本明細書中で使用される場合、不完全なパリンドローム、すなわち、通常のワトソン−クリック塩基対を形成し得るヌクレオチドと、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたは他の構造（例えば、ＡＢＣＤＥ−Ｓ−Ｅ’Ｄ’Ｃ’Ｂ’Ａ’のような配列（ここで、ＡとＡ’、ＢとＢ’、ＣとＣ’、ＤとＤ’、そしてＥとＥ’は、通常のワトソン−クリック塩基対を形成し得る塩基であり、そして、Ｓは、非パリンドローム配列または非核酸塩基リンカーまたは無塩基性のリンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）である））の両方が存在する核酸配列を指す。特定の実施形態において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチド、ヌクレオチドアナログまたは他の構造は、他の完全なパリンドロームを妨害する。特定の実施形態において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチドは、別のヌクレオチドと非ワトソン−クリック塩基対（例えば、Ｇ−Ｔ）を形成し得る。本明細書中で使用される場合、非ワトソン−クリック塩基対は、ワトソン−クリック塩基対以外の任意の塩基対であり、これらとしては、フーグスティーン塩基対、およびいわゆるウォブル塩基対が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態において、通常のワトソン−クリック塩基対形成に関与しないヌクレオチドはマッチせず、そして、ワトソン−クリック塩基対または非ワトソン−クリック塩基対を形成するためのヌクレオチド塩基またはヌクレオチド塩基アナログ（例えば、ｄＳｐａｃｅｒの逆のＧ）を有する。特定の実施形態において、塩基対形成に関与しないヌクレオチドは、別のヌクレオチドと非標準的な塩基対を形成し得る（例えば、ジアミノピリジンは、キサントシンと塩基対を形成し得る）。
【０１９２】
一実施形態において、核酸の５’末端は、（ＴＣＧ）ｎＮおよびＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎから選択される免疫刺激性モチーフから開始する。Ｔはチミンであり、Ｃは非メチル化シトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｒはプリンであり、ＤはＣではなく、Ｙ１およびＹ２の各々は、独立して、ピリミジンであり、ｎは１〜４の整数（端を含む）であり、そしてＮは、０〜１２塩基長の任意の配列である。
【０１９３】
核酸の３’末端は、ヘアピン構造またはステム−ループ構造を形成し得る逆方向反復で終結する。用語「終結する（ｔｅｒｍｉｎａｔｅ）」とは、３’末端またはその近くの構造をいう。従って、不完全なパリンドロームの末端は、分子の実際の３’末端に位置し得るか、あるいは、３’末端は、逆方向反復構造の一部ではない１つ以上のさらなるヌクレオチドを含み得る。好ましくは、分子の３’末端は、逆方向構造の一部を形成しない、３以下のヌクレオチドを含む。
【０１９４】
一実施形態において、「ヘアピン構造またはステム−ループ構造を形成し得る逆方向反復」とは、本明細書中で使用される場合、２〜１０の連続した塩基対長であるＧＣリッチなステムまたはヘアピンを形成するヌクレオチドの配列を指し、これは、少なくとも１つのマッチしていないか、またはミスマッチした塩基を含む。個々の実施形態において、ＧＣリッチなステムは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の連続した塩基対長である。いくつかの実施形態において、ＧＣリッチなステムは、少なくとも２、３または４のＧ−Ｃ塩基対を含む。
【０１９５】
一実施形態において、「ヘアピン構造またはステム−ループ構造を形成し得る逆方向反復」とは、本明細書中で使用される場合、２〜１０の連続した塩基対長であるＡＴリッチなステムまたはヘアピンを形成するヌクレオチドの配列を指し、これは、少なくとも１つのマッチしていないか、またはミスマッチした塩基を含む。個々の実施形態において、ＡＴリッチなステムは、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の連続した塩基対長である。いくつかの実施形態において、ＡＴリッチなステムは、少なくとも２、３または４のＡ−Ｔ塩基対を含む。
【０１９６】
いくつかの場合において、少なくとも１つのマッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、ステムまたはヘアピンの末端をつなぐ。このことは、分子内に、ステムが塩基対形成し、そしてヘアピンを形成する柔軟な点を提供することにより、二次構造の形成を可能にし得る。あるいは、マッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、ステム内部にあり得る。好ましくは、ミスマッチした塩基がステム内部にある場合、このステムは、少なくとも３塩基対長である。マッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、任意のヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態において、マッチしていないか、またはミスマッチした塩基は、Ｔである。二重鎖の末端にあるマッチしていないヌクレオチドはまた、二重鎖の形成またはヘパリンの形成を有意に安定化させ得る、オーバーハングヌクレオチドまたはダングリング末端として知られる。Ｆｒｅｉｅｒ ＳＭら（１９８３）Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ３’ｄａｎｇｌｉｎｇ ｅｎｄ ｓｔａｃｋｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＧＧＣＣ ａｎｄ ＣＣＧＧ ｄｏｕｂｌｅ ｈｅｌｉｘｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２２：６１９８−２０６。
【０１９７】
核酸はまた、少なくとも１つのホスホジエステル５’−ＣｐＧ−３’結合を含む部分的に安定化された骨格を含む。
【０１９８】
いくつかの場合において、分子の二重鎖の部分はまた、非天然（非標準的）な塩基対（例えば、キサントシンと対になったジアミノピリジン）も含み得る。Ｌｕｔｚ ＭＪら（１９９８）Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｎ−ｓｔａｎｄａｒｄ ｂａｓｅ ｐａｉｒ ｂｙ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｓ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ８：１１４９−５２。
【０１９９】
式は、優れた免疫刺激特性を示したＣｐＧオリゴヌクレオチドのクラスのサブセットを規定する。この式において、５’は、オリゴヌクレオチドの遊離５’末端を指し、３’は、オリゴヌクレオチドの遊離３’末端を指す。
【０２００】
オリゴヌクレオチドは、１つ以上のアクセス可能な５’末端または３’末端を有し得る。いくつかの実施形態において、３’末端は、別の３’末端に連結され得る。５’および３’のモチーフの重要性が、本明細書中において発見され、記載されたので、２つのこのような５’末端または３’末端を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを作製することがまた可能である。このことは、例えば、３’−３’結合を介して２つのオリゴヌクレオチドを結合して、２つのアクセス可能な５’末端を有するオリゴヌクレオチドを作製することによって達成され得る。３’−３’結合または５’−５’結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、または、任意の他の修飾されたヌクレオシド間ブリッジであり得る。このような結合を達成するための方法は、当該分野で公知である。例えば、このような結合は、Ｓｅｌｉｇｅｒ Ｈら（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎａｌｏｇｓ ｗｉｔｈ ｔｅｒｍｉｎａｌ ３’−３’− ａｎｄ ５’−５’−ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃ ｌｉｎｋａｇｅｓ ａｓ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ １０：４６９−７７、およびＪｉａｎｇ Ｚら（１９９９）Ｐｓｅｕｄｏ−ｃｙｃｌｉｃ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ７：２７２７−３５に記載されている。
【０２０１】
さらに、３’−３’結合または５’−５’結合したＯＤＮ（３’末端ヌクレオシドまたは５’末端ヌクレオシドとの間の結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、または他の修飾されたブリッジではない）は、トリ−、またはテトラーエチレングリコールホスフェート部分（Ｄｕｒａｎｄ Ｍら（１９９２）Ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ａｎ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｏｎｅ（ｄＡ）１２ ａｎｄ ｔｗｏ（ｄＴ）１２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｂｒｉｄｇｅｄ
ｂｙ ｔｗｏ ｈｅｘａｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｃｈａｉｎｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：９１９７−２０４；米国特許第５，６５８，７３８号；および米国特許第５，６６８，２６５号）のようなさらなるスペーサーを使用して調製され得る。あるいは、非ヌクレオチドリンカーは、エタンジオール、プロパンジオールからか、または、無塩基性のデオキシリボース（ｄＳｐａｃｅｒ）ユニット（Ｆｏｎｔａｎｅｌ ＭＬら（１９９４）Ｓｔｅｒｉｃａｌ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ Ｔ４ ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｋｉｎａｓｅ ｏｆ ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｉｃ ｍｏｉｅｔｉｅｓ ５’−ａｔｔａｃｈｅｄ ｔｏ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２２：２０２２−７）から、標準的なホスホラミダイト化学を使用して誘導され得る。この非ヌクレオチドリンカーは、１回もしくは複数回組み込まれるか、または、互いに組み合わされて、任意の所望の距離の２つのＯＤＮの３’末端間の任意を連結することを可能にし得る。
【０２０２】
「非ヌクレオチドリンカー」は、本明細書中で使用される場合、ヌクレオチドまたはそのポリマー（すなわち、ポリヌクレオチド）ではない任意のリンカー要素を指し、ここで、このヌクレオチドとしては、プリン核酸塩基またはピリミジン核酸塩基、および糖リン酸が挙げられる。従って、非ヌクレオチドリンカーとしては、無塩基性のヌクレオチド（ｄＳｐａｃｅｒ）、すなわち、核酸塩基が水素原子により置き換えられるヌクレオチド様糖リン酸ユニットが挙げられる。非ヌクレオチドリンカーは、ポリエチレングリコールであり得、トリエチレングリコールおよびヘキサエチレングリコールが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下の構造：
【０２０４】
【化７３】
のうちの１つを有する。
【０２０５】
記号
【０２０６】
【化７４】
は、安定化されたヌクレオチド間結合の存在を表し、そして、
【０２０７】
【化７５】
は、ホスホジエステル結合の存在を表す。
【０２０８】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、一般に、６個と１００個との間のヌクレオチドの範囲の長さを有する。いくつかの実施形態において、この長さは、６〜４０個、１３〜１００個、１３〜４０個、１３〜３０個、１５〜５０個、もしくは１５〜３０個の範囲のヌクレオチド、またはその間の任意の整数の範囲のヌクレオチドである。
【０２０９】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基および交換可能な有機塩基に連結された糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）（これらは、置換ピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））または、置換プリン（例えば、アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれかである）を含む分子）を意味するために交換可能に使用される。本明細書中で使用される場合、用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、オリゴリボヌクレオチドおよびオリゴデオキシリボヌクレオチドを指す。用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はまた、ポリヌクレオチシド（すなわち、ポリヌクレオチドからリン酸を引いたもの）および任意の他の有機塩基含有ポリマーも含む。核酸分子は、既存の核酸供給源（例えば、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ）から得られ得るが、好ましくは、（例えば、核酸合成により生成された）合成物である。
【０２１０】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」は、本明細書中で使用される場合、本発明の核酸分子およびオリゴヌクレオチド、ならびに、本発明のオリゴヌクレオチドアナログを包含する。用語「オリゴデオキシヌクレオチド」、そして等価に「ＯＤＮ」は、本明細書中で使用される場合、本発明の修飾されていないオリゴデオキシヌクレオチド、ならびに、本発明のオリゴデオキシヌクレオチドアナログを包含する。
【０２１１】
用語「核酸」および「オリゴヌクレオチド」はまた、例えば、塩基および／または糖が置換または修飾された核酸またはオリゴヌクレオチドを包含する。例えば、これらとしては、２’位でヒドロキシル基以外の低分子量有機基に共有結合した骨格糖を有する核酸、および５’位でリン酸基またはヒドロキシ基以外の低分子量有機基に共有結合した骨格糖を有する核酸が挙げられる。従って、修飾された核酸は、２’−Ｏ−アルキル化リボース基を含み得る。さらに、修飾された核酸は、リボースの代わりにアラビノースまたは２’−フルオロアラビノースのような糖を含み得る。従って、核酸は、骨格の組成が異種性であり得、それによって、ペプチド−核酸（核酸塩基と共にペプチド様骨格を有する）のように一緒に連結されたポリマー単位のあらゆる可能な組み合わせを含む。他の例は、以下により詳細に記載される。
【０２１２】
本発明の免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、天然のＲＮＡおよびＤＮＡと比べて、種々の化学的修飾および置換を包含し得、これらは、ホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ、β−Ｄ−リボース単位、および／または天然のヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）を含む。化学的修飾の例は、当業者に公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ Ｅら（１９９０）Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４３；「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ」Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ＆ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｅｄ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ １９９３；Ｃｒｏｏｋｅ ＳＴら（１９９６）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３６：１０７−２９；およびＨｕｎｚｉｋｅｒ Ｊら（１９９５）Ｍｏｄ Ｓｙｎｔｈ Ｍｅｔｈｏｄｓ ７：３３１−４１７に記載されている。本発明に従うオリゴヌクレオチドは、１つ以上の改変を有し得、ここで、各々の改変は、特定のホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ、および／または特定のβ−Ｄ−リボース単位、および／または、天然のＤＮＡもしくはＲＮＡから構成された同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較した特定の天然のヌクレオシド塩基位置に位置する。
【０２１３】
例えば、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の改変を含み得、ここで各々の改変は、独立して以下から選択される：
ａ）修飾されたヌクレオシド間ブリッジによる、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジの置き換え、
ｂ）脱リン結合による、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルブリッジの置き換え、
ｃ）別の単位による、糖リン酸骨格からの糖リン酸単位の置き換え、
ｄ）修飾された糖単位による、β−Ｄ−リボース単位の置き換え、ならびに
ｅ）修飾されたヌクレオシド塩基による、天然のヌクレオシド塩基の置き換え。
【０２１４】
オリゴヌクレオチドの化学修飾についてのより詳細な例は、以下のとおりである。
【０２１５】
オリゴヌクレオチドは、上記ａまたはｂに記載されたもののような、修飾されたヌクレオチド間結合を含み得る。これらの修飾された結合は、部分的に分解に抵抗性（例えば、安定化されている）であり得る。「安定化されたオリゴヌクレオチド分子」は、このような修飾から生じる、（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）インビボ分解に対して比較的抵抗性のオリゴヌクレオチドを意味する。いくつかの実施形態において、ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、最大の活性を提供し、そして、細胞内のエキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼによる分解から、オリゴヌクレオチドを保護し得る。
【０２１６】
ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジは、修飾されたヌクレオシド間ブリッジにより置き換えられ得、ここで、修飾されたヌクレオシド間ブリッジは、例えば、以下から選択される：ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ１Ｒ２−ホスホラミダイト、ボラノホスフェート（ｂｏｒａｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、α−ヒドロキシベンジルホスホネート、ホスフェート−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル、ホスフェート−［（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルホスホネート、および／または（Ｃ６〜Ｃ１２）アリールホスホネートブリッジ、（Ｃ７〜Ｃ１２）−α−ヒドロキシメチル−アリール（例えば、ＷＯ ９５／０１３６３に開示されるもの）（ここで、（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール、（Ｃ６〜Ｃ２０）アリールおよび（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールは、必要に応じて、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノにより置換され、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、（Ｃ６〜Ｃ２０）−アリール、（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルであり、好ましくは、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルおよび／もしくはメトキシエチルであるか、あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それを有する窒素原子を一緒になって、５〜６員の複素環を形成し、この環は、さらに、Ｏ、ＳおよびＮの群からのヘテロ原子を含み得る）。
【０２１７】
脱リンブリッジによる、ヌクレオシドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステルブリッジの置き換え（脱リンブリッジは、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ ＥおよびＰｅｙｍａｎ Ａ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｖｏｌ．２０，「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ」，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ １９９３，Ｃｈａｐｔｅｒ １６，ｐｐ．３５５ ｆｆに記載される）。ここで、脱リンブリッジは、例えば、脱リンブリッジホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチル−ヒドラゾ、ジメチレンスルホン、および／またはシリル基から選択される。
【０２１８】
糖リン酸骨格からの糖リン酸単位（すなわち、糖リン酸単位を共に形成する、β−Ｄ−リボースおよびホスホジエステルヌクレオシド間ブリッジ）（すなわち、糖リン酸骨格は、糖リン酸単位から構成される）は、他の単位が、例えば、「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ ＥＰら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １７：６１２９−４１に記載される）を構築するために適切な別の単位によって置き換えられ得る（すなわち、例えば、モルホリノ誘導体単位による置き換え）か；または、ポリアミド核酸（「ＰＮＡ」；例えば、Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＥら（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ５：３−７に記載される）を構築するために適切な別の単位によって置き換えられ得る（すなわち、ＰＮＡ骨格による（例えば、２−アミノエチルグリシンによる）置き換え）。オリゴヌクレオチドは、他の炭水化物骨格の修飾および置換（例えば、リン酸基を有するペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロックト核酸（ＬＮＡ）、およびアルキルリンカーもしくはアミノリンカーを有する骨格セクションを有するオリゴヌクレオチド）を有し得る。アルキルリンカーは、分枝もしくは非分枝の、置換もしくは非置換の、キラル的に純粋であるか、またはラセミ体の混合物であり得る。
【０２１９】
β−リボース単位またはβ−Ｄ−２’−デオキシリボース単位は、修飾された糖単位により置き換えされ得、この修飾された糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボースから選択され、好ましくは、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−リボースは、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル−リボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル］−リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロ−フラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロ−ヘキソ−ピラノース、および炭素環式（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ（１９９２）Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １１４：８３２０に記載される）、および／または開鎖の糖アナログ（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅら（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９：７２２３に記載される）、および／または二環式糖アナログ（例えば、Ｔａｒｋｏｖ Ｍら（１９９３）Ｈｅｌｖ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ７６：４８１に記載される）である。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、糖は、２’−Ｏ−メチルリボースであり、特に、ホスホジエステルもしくはホスホジエステル様のヌクレオシド間結合により一方または両方のヌクレオシドが連結されている。
【０２２１】
核酸はまた、Ｃ−５プロピン（ｐｒｏｐｙｎｅ）ピリミジン修飾された塩基および７−デアザ−７−置換プリン修飾された塩基のような、置換プリンおよび置換ピリミジンを含む。Ｗａｇｎｅｒ ＲＷら（１９９６）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １４：８４０−４。プリンおよびピリミジンとしては、アデニン、シトシン、グアニン、チミンおよびウラシル、ならびに、天然に存在しない核酸塩基、置換および非置換の芳香族部分が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２２２】
修飾された塩基は、ＤＮＡおよびＲＮＡにおいて代表的に見られる、天然に存在する塩基（例えば、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＡおよびＵ）とは化学的に異なるが、これらの天然に存在する塩基と基本的な化学構造を共有する、任意の塩基である。修飾されたヌクレオシド塩基は、例えば、以下から選択され得る：ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、シュードウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノ−プリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン（好ましくは、７−デアザ−７−置換プリンおよび／または７−デアザ−８−置換プリン）、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン（例えば、Ｎ４−エチルシトシン）、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン（例えば、Ｎ４−エチルデオキシシチジン）、６−チオデオキシグアノシン、およびニトロピロールのデオキシリボヌクレオシド、Ｃ５−プロピルピリミジン、およびジアミノプリン（例えば、２，６−ジアミノプリン）、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチン、あるいは、天然のヌクレオシド塩基の他の修飾物。このリストは、例示的なものを意味し、そして、限定的であることは意図されるべきでない。
【０２２３】
本明細書中に記載される特定の処方において、修飾された塩基が組み込まれ得る。例えば、シトシンは、修飾されたシトシンで置き換えられ得る。本明細書中で使用される場合、修飾されたシトシンは、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなく、この塩基を置き換え得る、シトシンの天然に存在するか、または天然に存在しないピリミジン塩基アナログである。修飾されたシトシンとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：５−置換シトシン（例えば、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、および非置換もしくは置換の５−アルキニル−シトシン）、６−置換シトシン（例えば、６−ヒドロキシ−シトシン）、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチル−シトシン）、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、シュード−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピル−ウラシル）。いくつかの好ましいシトシンとしては、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、およびＮ４−エチル−シトシンが挙げられる。本発明の別の実施形態において、シトシン塩基は、ユニバーサル塩基（例えば、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基）、芳香族環系（例えば、フルオロベンゼンまたはジフルオロベンゼン）、または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）により置換される。
【０２２４】
グアニンは、修飾されたグアニン塩基で置き換えられ得る。修飾されたグアニンとは、本明細書中で使用される場合、オリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を損なうことなく、この塩基を置き換え得る、グアニンの天然に存在するか、または天然に存在しない、プリン塩基アナログである。修飾されたグアニンとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：７−デアザグアニン、７−デアザ−７置換グアニン、（例えば、７−デアザ−７−（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルグアニン）、７−デアザ−８置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えば、Ｎ２−メチル−グアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ、６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン、（例えば、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン）、８−置換グアニン、（例えば、８−ヒドロキシグアニンおよび８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニン。本発明の別の実施形態において、グアニン塩基は、ユニバーサル塩基（例えば、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、およびＫ−塩基）、芳香族環系（例えば、ベンズイミダゾールまたはジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）により置換される。
【０２２５】
一実施形態において、ＣＧジヌクレオチドのＣおよびＧの両方が、それぞれ、修飾されていないシトシン残基および修飾されていないグアニン残基である。一実施形態において、ＣＧジヌクレオチドのＣは、メチル化されていない。
【０２２６】
本発明における使用について、本発明のオリゴヌクレオチドは、当該分野で周知の多くの手順（例えば、β−シアノエチルホスホラミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ ＳＬら（１９８１）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２２：１８５９）；またはヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇら（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５１−４；Ｆｒｏｅｈｌｅｒ ＢＣら（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ １４：５３９９−４０７；Ｇａｒｅｇｇら（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２７：４０５５−８；Ｇａｆｆｎｅｙら（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２９：２６１９−２２））のいずれかを使用して、新たに合成され得る。これらの化学は、市場で入手可能な種々の自動化核酸合成装置によって実施され得る。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと呼ばれる。単離されたオリゴヌクレオチドは、一般に、自然状態では正常に関連している構成要素から分離されたオリゴヌクレオチドを指す。一例として、単離されたオリゴヌクレオチドは、細胞から、核から、ミトコンドリアから、またはクロマチンから分離されたオリゴヌクレオチドであり得る。
【０２２７】
ホスホロチオエートのような修飾された骨格は、ホスホラミダイトまたはＨ−ホスホネート化学のいずれかを使用する自動化技術を用いて合成され得る。アリール−ホスホネートおよびアルキル−ホスホネートは、例えば、米国特許第４，４６９，８６３号に記載されるように作製され得；そして、アルキルホスホトリエステル（米国特許第５，０２３，２４３号および欧州特許第０９２，５７４号に記載されるように、帯電した酸素部分がアルキル化されている）は、市販の試薬を用いる自動化固相合成により調製され得る。他のＤＮＡ骨格の修飾および置換を作製するための方法が記載されている（例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ Ｅら（１９９０）Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ Ｊ（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ １：１６５）。
【０２２８】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、ヌクレオチドまたはヌクレオシドアナログ部分の間に、１つ以上の異常な結合を含み得る。通常のヌクレオシド間結合は、３’５’−結合である。全ての他の結合（例えば、２’５’−結合、５’５’−結合、３’３’−結合、２’２’−結合、および２’３’−結合）は、異常なヌクレオシド間結合とみなされる。それにより、２’〜５’の命名法は、リボースの炭素原子に従って選択される。しかし、環拡大した糖アナログ（例えば、ヘキサノース、シロヘキセン、またはピラノース）、または二環式もしくは三環式の糖アナログのような非天然の糖部分が使用される場合、この命名法は、モノマーの命名法に従って変化する。３’−デオキシ−β−Ｄ−リボピラノースアナログ（β−ＤＮＡとも呼ばれる）において、モノヌクレオシドは、例えば、４’２’−結合を介して接続される。
【０２２９】
ヌクレオチドが１つの３’３’−結合を含む場合、このオリゴヌクレオチドアナログは、通常、２つの未結合５’−末端を有する。同様に、ヌクレオチドが、１つの５’５’−結合を含む場合、このオリゴヌクレオチドアナログは、通常、２つの未結合３’−末端を有する。ヌクレオチドの未結合末端のアクセス性は、そのレセプターにより良好にアクセス可能であり得る。両方の型の異常な結合（３’３’−および５’５’−）は、Ｏｒｔｉｇａｏ ＪＦら（１９９２）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ Ｄｅｖ ２：１２９−４６により記載されており、この文献では、３’３’−結合を有するオリゴヌクレオチドが、ヌクレアーゼによる切断に対して増強された安定性を示すことが報告された。
【０２３０】
異なる型の結合がまた、１つの分子内で組み合わされ得、オリゴマーの分枝をもたらし得る。オリゴヌクレオチドの１つの部分が、３’３’−結合を介して３’−末端において第２のオリゴヌクレオチド部分に接続され、そして、２’３’−結合を介して２’−末端において分子の第３の部分に接続される場合、これは、例えば、３つの５’−末端（３’３’−分枝、２’３’−分枝）を有する分枝オリゴヌクレオチドを生じる。
【０２３１】
原則として、オリゴヌクレオチドの異なる部分の間、または、異なるオリゴヌクレオチド間の結合は、それぞれ、そのレセプターによる認識を負に妨げない限りは、この分子のあらゆる部分を介して生じ得る。核酸の性質に従って、結合は、糖部分（Ｓｕ）、複素環式核酸塩基（Ｂａ）またはリン酸骨格（Ｐｈ）を必要とし得る。従って、Ｓｕ−Ｓｕ、Ｓｕ−Ｐｈ、Ｓｕ−Ｂａ、Ｂａ−Ｂａ、Ｂａ−Ｓｕ、Ｂａ−Ｐｈ、Ｐｈ−Ｐｈ、Ｐｈ−Ｓｕ、およびＰｈ−Ｂａの型の結合が可能である。オリゴヌクレオチドが、特定の非ヌクレオチド置換基によってさらに修飾される場合、この結合はまた、オリゴヌクレオチドの修飾された部分を介して生じ得る。これらの修飾としては、修飾された核酸（例えば、ＰＮＡ、ＬＮＡまたはモルホリノオリゴヌクレオチドアナログ）が挙げられる。
【０２３２】
結合は、好ましくは、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｂ、Ｐおよびハロゲンから構成され、３〜３００個の原子を含む。３個の原子を有するものの例は、例えば、１つのヌクレオチドの３’−ヒドロキシ基を、第２のオリゴヌクレオチドの３’−ヒドロキシ基に接続する、アセタール結合（ＯＤＮ１−３’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−３’−ＯＤＮ２；ＦｒｏｅｈｌｅｒおよびＭａｔｔｅｕｃｃｉ）である。約３００個の原子を有するものの例は、ＰＥＧ−４０（テトラコンタポリエチレングリコール（ｔｅｔｒａｃｏｎｔａ ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ））である。好ましい結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ホスホラミダイト、ボラノホスホネート、アミド、エーテル、チオエーテル、アセタール、チオアセタール、ウレア、チオウレア、スルホンアミド、シッフ塩基、およびジスルフィド結合である。別の可能性は、Ｓｏｌｕｌｉｎｋ ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＴｒｉＬｉｎｋ ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の使用である。
【０２３３】
オリゴヌクレオチドが、２つ以上の配列部分から構成される場合、これらの部分は、同一であっても異なっていてもよい。従って、３’３’−結合を有するオリゴヌクレオチドにおいて、配列は同一（例えば、５’−ＯＤＮ１−３’３’−ＯＤＮ１−５’）であっても、異なって（例えば、５’−ＯＤＮ１−３’３’−ＯＤＮ２−５’）いてもよい。さらに、種々のオリゴヌクレオチド部分およびこれらをつなぐリンカーの化学修飾は、異なり得る。短いオリゴヌクレオチドの取り込みは、長いオリゴヌクレオチドの取り込みよりも非効率的であるようなので、２つ以上の短い配列の結合は、改善された免疫刺激を生じる。短いオリゴヌクレオチドの長さは、好ましくは、２〜２０ヌクレオチドであり、より好ましくは、３〜１６ヌクレオチドであるが、最も好ましくは、５〜１０ヌクレオチドである。好ましくは、２つ以上の未結合５’−末端を有するオリゴヌクレオチドで連結される。
【０２３４】
オリゴヌクレオチドの部分配列はまた、得に、無塩基性リンカー（ｄＳｐａｃｅｒ）、トリエチレングリコール単位、またはヘキサエチレングリコール単位において、非ヌクレオチドリンカーにより連結され得る。他のリンカーとしては、アルキルアミノリンカー（例えば、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２のアミノリンカー）、そしてまた、アルキルチオールリンカー（例えば、Ｃ３またはＣ６のチオールリンカー）が挙げられる。オリゴヌクレオチドはまた、アルキル基もしくは置換アルキル基によりさらに置換され得る、芳香族残基により連結され得る。
【０２３５】
オリゴヌクレオチドはまた、二重または三重（ｄｏｕｂｌｅｒ ｏｒ ｔｒｅｂｌｅｒ）の単位（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）（特に、３’３’−結合を有するオリゴヌクレオチド）を含み得る。一実施形態において、二重単位は、１，３−ビス−［５−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）ペンチルアミド］プロピル−２−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトに基づき得る。一実施形態において、三重単位は、トリス−２，２，２−［３−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシ）プロピルオキシメチル］エチル−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトの取り込みに基づき得る。複数の二重、三重または他の多重の単位によるオリゴヌクレオチドの枝分かれは、デンドリマーを生じ、これは、本発明のさらなる実施形態である。オリゴヌクレオチドはまた、ペプチド修飾試薬、またはオリゴヌクレオチド修飾試薬（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）から生じるリンカー単位を含み得る。さらに、結合は、ペプチド（アミド）結合により接続された１つ以上の天然または非天然のアミノ酸残基を含み得る。
【０２３６】
オリゴヌクレオチドを連結するための別の可能性は、複素環式塩基の架橋を介するものである（Ｖｅｒｍａ Ｓら（１９９８）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６７：９９−１３４；第１２４頁）。なお別の可能性は、１つの配列部分の糖部分と、別の配列部分の複素環式塩基との間の結合である（Ｉｙｅｒら（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １：３４４−５８；第３５２頁）。
【０２３７】
異常な結合を含む異なるオリゴヌクレオチドは、確立された方法により合成され、そして、固相合成の間に、オンラインで一緒に連結され得る。あるいは、これらは、個々の部分配列の合成に続いて、一緒に連結され得る。
【０２３８】
マウスのシステムにおいて強い刺激活性を有するＣｐＧホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、ヒトおよび他の非げっ歯類免疫細胞においてより低い活性を示す傾向にある。これらの（ＴＣＧ）ｎＮモチーフまたはＲＤＣＧＹ１Ｙ２Ｎモチーフを含むＤＮＡは、ヒトの末梢血を強く刺激して、ＩＦＮ−αを生成した。
【０２３９】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドのサブセットは、ヒト細胞（例えば、ＰＢＭＣ）に対して劇的な免疫刺激効果を有するということが、本発明によって発見され、これは、これらのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、ヒトワクチン接種、癌の免疫療法、喘息の免疫療法、免疫機能の全身性の増強、照射または化学療法の後の造血の回復の増強、および他の免疫調節性用途のための有効な治療剤であることを示唆している。
【０２４０】
本明細書中で使用される場合、用語「処置する、処置される、または処置すること」は、感染性疾患、癌、アレルギーまたは喘息のような障害に関して使用される場合、疾患の発症に対する被験体の抵抗性を増加させる（例えば、病原での感染）、または、言い換えると、被験体が疾患を発症する可能性を減少させる（例えば、病原に感染される）ための予防的処置、および、疾患と闘う（例えば、感染を減少または排除する）ため、もしくは疾患が悪化することを防止するための、被験体が疾患を発症した後の処置を指す。
【０２４１】
従って、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、本発明のいくつかの局面において、アレルギーもしくは喘息、感染性生物での感染、または、特定の癌抗原が同定されている癌を罹患しているか、またはこれらを発症する危険がある被験体の処置のためのワクチンとして、有用である。従って、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、感染、アレルギー、喘息または癌の処置のための抗原またはアレルゲンと組み合わせて被験体に投与され得る。あるいは、および、さらに、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、感染、アレルギー、もしくは癌に対する防御のために、抗原またはアレルゲンなしの単独で与えられ得るか、または、他の治療剤と共に投与され得る。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドはまた、他の治療剤と共に投与され得る。反復用量は、より長い期間の防御を可能にし得る。
【０２４２】
本明細書中で使用される場合、「危険がある被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ ａｔ ｒｉｓｋ）」とは、感染の原因となる病原もしくはアレルゲンへの曝露の任意の特定可能な危険があるか、または、癌を発症する危険がある被験体である。例えば、感染を発症する危険がある被験体とは、特定の型の感染性因子が見られた領域に旅行することを計画している被験体であり得るか、または、ライフスタイルもしくは医療手順を介して、感染性の生物を含み得る体液、もしくはその生物に直接曝露される被験体であり得るか、または、感染性生物またはアレルゲンが同定されている領域に住んでいる任意の被験体であり得る。感染を発症する危険がある被験体としてはまた、特定の感染性生物抗原を用いるワクチン接種を、医療機関が推奨する一般大衆が挙げられる。抗原が、アレルゲンであり、被験体が、その特定の抗原に対してアレルギー反応を発症し、さらに、被験体が、例えば、花粉のシーズンの間に、抗原に曝露され得る場合、その被験体は、アレルギー反応を発症する危険がある。アレルギーもしくは喘息を発症する危険がある被験体としては、アレルギーもしくは喘息を罹患しているとして同定されたが、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの処置の間には、活性な疾患を有さない被験体が挙げられる。アレルギーもしくは喘息を発症する危険がある被験体としてはまた、遺伝的要因または環境要因に起因してこれらの疾患を発症する危険があると考えられる被験体が挙げられる。
【０２４３】
癌を発症する危険がある被験体は、癌を発症する可能性が高い被験体である。これらの被験体としては、例えば、遺伝的異常を有する被験体、癌を発症する高い可能性と相関関係を有することが実証された存在、タバコ、アスベストもしくは他の化学毒のような癌に関連する因子に曝露された被験体、および、以前に癌の処置を受け、外見上は寛解している被験体が挙げられる。癌を発症する危険がある被験体が、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチド、そして必要に応じて、その被験体が発症する危険がある癌の型に特異的な抗原で処置される場合、この被験体は、癌が発症すると、癌細胞を殺傷し得る。被験体内で腫瘍が形成し始めると、被験体は、生得的な免疫応答、または腫瘍抗原に対する特定の免疫応答を発症する。
【０２４４】
ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの予防的処置のための使用に加えて、本発明はまた、感染、アレルギー、喘息または癌を罹患している被験体の処置のためのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用を包含する。
【０２４５】
感染を罹患している被験体は、感染性の病原に対して曝露され、そして、体内に急性もしくは慢性的に検出可能なレベルの病原を有する被験体である。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、抗原もしくは他の治療剤を伴ってか、または伴わずに使用され得、感染性病原のレベルを減少し得るか、または、感染性病原を根絶し得る、生得的もしくは抗原特異的な全身性もしくは粘膜性の免疫応答を起こし得る。本明細書中で使用される場合、「感染病」とは、体内における外来性の微生物の存在から生じる疾患である。病原の進入の最初の部位である、身体の粘膜表面を保護するための有効なワクチンストラテジーおよび処置を開発することが特に重要である。
【０２４６】
アレルギーを罹患している被験体は、アレルゲンに対する応答において、アレルギー反応を発症し得る被験体である。アレルギーは、基質（アレルゲン）に対する獲得された過感受性を指す。アレルギー性の条件としては、湿疹、アレルギー性鼻炎もしくは鼻感冒、花粉症、結膜炎、気管支喘息、アレルギー性喘息、蕁麻疹、食物アレルギー、および他のアトピー性条件が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２４７】
アレルギーは、一般に、無害なアレルゲンに対するＩｇＥ抗体の生成により生じる。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの全身投与もしくは粘膜投与により誘導されるサイトカインは、Ｔｈ１と呼ばれるクラス（例としては、ＩＬ−１２、ＩＰ−１０、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−γである）に多く、そして、これらは、体液性免疫応答および細胞性免疫応答の両方を誘導する。ＩＬ−４およびＩＬ−５サイトカインの生成に関連する免疫応答の他の主要な型は、Ｔｈ２免疫応答と呼ばれる。一般に、アレルギー性疾患は、Ｔｈ２型の免疫応答により媒介されるようである。本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの、優勢なＴｈ２（ＩｇＥ抗体およびアレルギーの生成に関連する）から平衡したＴｈ２／Ｔｈ１応答（アレルギー反応に対する防御）へと被験体における免疫応答をシフトさせる能力に基づいて、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの免疫応答を誘導するための有効用量が、喘息およびアレルギーを処置するために、被験体に投与され得る。
【０２４８】
従って、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、アレルギー状態および喘息の処置において有意な治療的有用性を有する。Ｔｈ２サイトカイン（特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５）は、喘息の被験体の気道において増大される。これらのサイトカインは、喘息の炎症性応答の重要な局面（ＩｇＥアイソトープの切り替え、好酸球の化学走性および活性化、ならびに、肥満細胞の増殖が挙げられる）を促進する。Ｔｈ１サイトカイン（特に、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２）は、Ｔｈ２クローンの形成、およびＴｈ２サイトカインの生成を抑制し得る。喘息は、免疫により特徴付けられる呼吸器系の障害、気道の狭小化、および吸入剤に対する気道の反応性の増加を指す。喘息は、専らではないものの、しばしば、アトピー症状またはアレルギー症状に関連する。従って、喘息は、アレルギー性喘息および非アレルギー性喘息を含む。
【０２４９】
癌を罹患する被験体は、検出可能な癌性細胞を有する被験体である。癌は、悪性の癌であっても非悪性の癌であってもよい。癌または腫瘍としては、胆管癌；脳腫瘍；乳癌；子宮頸部癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌；胃癌；上皮内新生物；リンパ腫；肝臓癌；肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）；黒色腫；神経芽細胞腫；口腔癌；卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫；皮膚癌；精巣癌；甲状腺癌；および腎臓癌、ならびに他の癌腫および他の肉腫が挙げられるがこれらに限定されない。一実施形態において、癌は、毛様細胞白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮細胞癌腫、腎細胞癌腫、前立腺癌腫、膀胱細胞癌腫、または結腸癌腫である。
【０２５０】
被験体とは、ヒトまたは脊椎動物を意味し、これらとしては、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ターキー、ニワトリ、霊長類（例えば、サル）、魚類（水産種）（例えば、サケ）が挙げられる。従って、この化合物は、ヒトおよび非ヒト被験体において癌および腫瘍、感染、ならびにアレルギー／喘息を処置するために使用され得る。癌は、愛玩動物（例えば、ネコおよびイヌ）の死の主な原因の１つである。
【０２５１】
ＣｐＧオリゴヌクレオチドが、抗原と共に投与される例において、被験体は、抗原に曝露され得る。本明細書中で使用される場合、用語「〜に曝露される」とは、被験体を抗原に曝露させるという能動的な工程、または、インビボでの被験体の抗原への受動的な曝露のいずれかを指す。抗原への被験体の能動的な曝露のための方法は、当該分野で周知である。一般に、抗原は、静脈内、筋肉内、経口、経皮、粘膜、鼻腔内、気管内、または皮下の投与のような手段で、被験体に直接投与される。抗原は、全身もしくは局所的に投与され得る。抗原およびＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを投与するための方法は、以下により詳細に記載される。被験体は、抗原が体内の免疫細胞への曝露に利用可能になると、抗原に受動的に曝露される。被験体は、例えば、外来性の病原の体内への侵入によって、またはその表面に外来性の抗原を発現する腫瘍細胞を発生させることによって、抗原に受動的に曝露され得る。
【０２５２】
被験体が抗原に受動的に曝露される方法は、特に、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの投与のタイミングに依存し得る。例えば、癌もしくは感染病、またはアレルギー反応もしくは喘息反応を発症する危険がある被験体において、被験体は、その危険性が最大になるとき（例えば、アレルギーのシーズン中、または、癌の原因となる因子への曝露後）に、定期的にＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを投与され得る。さらに、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、旅行者が、感染性因子に曝露される危険に曝される外国に旅行する前に、旅行者に投与され得る。同様に、ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、被験体が、抗原に曝露される場合に、その抗原に対する全身もしくは粘液の免疫応答を誘導するような生物戦争（ｂｉｏｗａｒｆａｒｅ）に曝露される危険がある兵士または一般市民に投与され得る。
【０２５３】
本明細書において使用される抗原は、免疫応答を惹起し得る分子である。抗原としては、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖、多糖結合体、多糖のペプチド模倣物および非ペプチド模倣物、ならびに他の分子、低分子、脂質、糖脂質、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに、寄生生物のような多細胞生物、ならびにアレルゲンが挙げられるがこれらに限定されない。用語「抗原」は、宿主の免疫系により外来であると認識されるあらゆる型の分子を広く包含する。抗原としては、癌抗原、微生物抗原、およびアレルゲンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２５４】
本明細書において使用される癌抗原は、腫瘍または癌細胞の表面に結合し、そして、ＭＨＣ分子との関連において、抗原提示細胞の表面に発現されるときに、免疫応答を惹起し得る、ペプチドまたはタンパク質のような化合物である。癌抗原は、例えば、Ｃｏｈｅｎ
ＰＡら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５４：１０５５−８に記載されるように、癌細胞の粗抽出物を調製すること、抗原を部分的に精製すること、組換え技術、または、公知の抗原の新規合成のいずれかによって、癌細胞から調製され得る。癌抗原としては、組換え的に発現された抗原、その免疫原性部分、もしくは、全体、または癌細胞が挙げられるがこれらに限定されない。このような抗原は、組換え的にか、または、当該分野で公知の任意の他の手段によって単離または調製され得る。
【０２５５】
本明細書中で使用される場合、用語「癌抗原」および「腫瘍抗原」は、癌細胞により差次的に発現され、それにより、癌細胞を標的とするために利用され得る抗原をいうために、交換可能に使用される。癌抗原は、明らかに腫瘍特異的な免疫応答を潜在的に刺激し得る抗原である。これらの抗原のいくつかは、必ずしも発現されていないが、正常細胞によってコードされる。これらの抗原は、正常細胞において通常はサイレント（すなわち、発現されていない）もの、分化の特定の段階でのみ発現されるもの、そして、胚性抗原および胎性抗原のような一過的に発現されるものとして特徴付けられ得る。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化されたｒａｓ癌遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異たがｐ５３）、内部欠失または染色体転座から生じた融合タンパク質のような、変異型の細胞遺伝子によりコードされる。なお他の癌抗原は、ＲＮＡ腫瘍ウイルスおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上で運搬されるもののようなウイルス遺伝子によりコードされ得る。
【０２５６】
本明細書中で使用される微生物抗原は、微生物の抗原であり、微生物としては、ウイルス、細菌、寄生生物および真菌が挙げられるがこれらに限定されない。これらの抗原としては、インタクトな微生物、ならびに天然に存在する単離体およびそのフラグメントまたは誘導体、そしてまた、天然に存在する微生物と同一であるかもしくはこれに類似し、かつその微生物に特異的な免疫応答を誘導する合成化合物が挙げられる。化合物は、天然に存在する微生物抗原に対して免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘導する場合に、天然に存在する微生物抗原に類似する。このような抗原は、当該分野で慣用的に使用されており、当業者に周知である。
【０２５７】
ヒトにおいて見られるウイルスの例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：レトロウイルス科（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、もしくはＨＩＶ−ＩＩＩとも呼ばれる）；および他の単離株（例えば、ＨＩＶ−ＬＰ））；ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、リノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＲＳウイルス）；オルソミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンヤウイルス科（例えば、ハンターンウイルス、ブンヤウイルス、フレボウイルスおよびナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１および単純ヘルペスウイルス２、水痘−帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；およびイリドウイルス科（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）；ならびに未分類のウイルス（例えば、デルタ型肝炎の病因因子（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損サテライトであると考えられる）、Ｃ型肝炎の病因因子；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、ならびにアストロウイルス）。
【０２５８】
グラム陰性およびグラム陽性の両方の細菌が、脊椎動物における抗原として機能する。このようなグラム陽性細菌としては、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ種、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ種、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種が挙げられるがこれらに限定されない。グラム陰性細菌としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種が挙げられるがこれらに限定されない。感染性細菌の具体的な例としては、以下：
【０２５９】
【化７６】
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２６０】
真菌の例としては、以下：
【０２６１】
【化７７】
が挙げられる。
【０２６２】
他の感染性生物（すなわち、原生生物）としては、以下：
【０２６３】
【化７８】
が挙げられる。血液由来および／または組織の寄生生物としては、以下：
【０２６４】
【化７９】
が挙げられる。
【０２６５】
他の医療的に関連のある微生物は、文献に広範に記載されている。例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ
Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉｎ １９８３（その全内容が、本明細書により参考として援用される）を参照のこと。
【０２６６】
アレルゲンは、病気にかかりやすい被験体においてアレルギーまたは喘息の応答を誘導し得る物質（抗原）をいう。アレルゲンのリストは、莫大であり、花粉、昆虫毒、動物の鱗屑、粉塵、真菌の胞子および薬物（例えば、ペニシリン）が挙げられ得る。天然の、動植物のアレルゲンの例としては、以下の種属：
【０２６７】
【化８０】
に特異的なタンパク質が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２６８】
抗原は、実質的に精製されていてもよい。用語「実質的に精製された」とは、本明細書中で使用される場合、他のタンパク質、脂質、炭水化物またはその抗原に天然に結合している他の物質を実質的に含まない、抗原、すなわち、ポリペプチドを指す。当業者は、タンパク質精製の標準的な技術を使用して、ポリペプチド抗原を精製し得る。実質的に純粋なポリペプチドは、しばしば、非還元のポリアクリルアミドゲル上で単一の主要なバンドを得る。部分的にグリコシル化されたポリペプチド、またはいくつかの開始コドンを有するものの場合、非還元のポリアクリルアミドゲル上にいくつかのバンドが存在し得るが、これらは、そのポリペプチドに特徴的なパターンを形成する。ポリペプチド抗原の純度はまた、アミノ末端のアミノ酸配列分析により決定され得る。多糖、低分子、模倣物などのような他の型の抗原が、本発明に含まれ、これらは、必要に応じて、実質的に純粋であり得る。
【０２６９】
本発明のオリゴヌクレオチドは、抗細菌剤と共に被験体に投与され得る。抗細菌剤とは、本明細書中で使用される場合、感染性微生物を殺傷または抑制し得る、天然に存在するか、または合成の化合物をいう。本発明に従って有用な抗細菌剤の型は、その被験体が感染しているかまたは感染する危険がある、微生物の型に依存する。抗細菌剤としては、抗細菌剤（ａｎｔｉ−ｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｇｅｎｔ）、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および駆虫剤（ａｎｔｉ−ｐａｒａｓｉｔｉｃ ａｇｅｎｔ）が挙げられるがこれらに限定されない。「抗感染剤」、「抗細菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「駆虫剤」および「殺虫剤（ｐａｒａｓｉｔｉｃｉｄｅ）」のような句は、当業者に対して十分に確立された意味を有し、そして、標準的な医学の教科書に規定されている。簡単に述べると、抗細菌剤は、細菌を殺傷または抑制する。抗細菌剤としては、抗生物質、ならびに類似する機能を有する他の合成化合物もしくは天然化合物が挙げられる。抗生物質とは、細胞（例えば、微生物）による二次代謝物として生成される低分子量分子である。一般的には、抗生物質は、その微生物に特異的でありかつ宿主細胞中には存在しない、１つ以上の細菌もしくは構造体を妨害する。抗ウイルス剤は、天然供給源から単離されても、合成されてもよい。抗ウイルス剤は、ウイルスを殺傷または抑制するために有用である。抗真菌剤は、表面真菌感染症ならびに日和見真菌感染症および現発性全身真菌感染症を処置するために使用される。抗寄生生物剤は、寄生生物を殺傷または抑制する。
【０２７０】
ヒトへの投与に有用な殺虫剤とも呼ばれる抗寄生生物剤の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：アルベンダゾール、アムホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、クロロキンリン酸塩、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフロエート、エフロオルニチン、フラゾリドン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、グルココルチコイド、ハロファントリン（ｈａｌｏｆａｎｔｒｉｎｅ）、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾル、メフロキン（ｍｅｆｌｏｑｕｉｎｅ）、アンチモン酸メグロミン、メラルソプロール（ｍｅｌａｒｓｏｐｒｏｌ）、メトリホナート、メトロニダゾール、ニクロスアミド、ニフルチモックス（ｎｉｆｕｒｔｉｍｏｘ）、オキサムニキン、パロモマイシン、ペンタミジンイセチオネート、ピペラジン、プロジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル（ｐｒｏｇｕａｎｉｌ）、ピランテルパモエート、ピリメタミン−スルホンアミド（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｏ）、ピリメタミン−スルファドキシン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ−ｓｕｌｆａｄｏｘｉｎｅ）、キナクリンＨＣｌ、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコネートナトリウム（グルコン酸アンチモンナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトロピウム−スルファメトキサゾール、および、トリパルサミド（これらのうちのいくつかは、単独でか、もしくは他のものと組み合わせて使用される）。
【０２７１】
抗細菌剤は、細菌を殺傷させるか、または細菌の増殖もしくは機能を抑制する。抗細菌剤の大きな種類は、抗生物質である。広範な細菌を殺傷または抑制するのに有効である抗生物質は、広域抗生物質と呼ばれる。他の型の抗生物質は、グラム陽性である種類の細菌またはグラム陰性である種類の細菌に対して主に有効である。これらの型の抗生物質は、狭域抗生物質と呼ばれる。単一の生物または疾患に対して有効であり他の型の細菌に対しては有効ではない他の抗生物質は、限定域抗生物質と呼ばれる。抗細菌剤は、時に、その主要作用様式に基づいて分類される。一般的に、抗細菌剤は、細胞壁合成インヒビター、細胞膜インヒビター、タンパク質合成インヒビター、核酸合成インヒビターもしくは核酸機能インヒビター、および競合インヒビターである。
【０２７２】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞感染を防ぐかまたは細胞内でのウイルス複製を防ぐ、化合物である。抗細菌剤よりはかなり少ない抗ウイルス剤が存在する。なぜなら、ウイルス複製プロセスは、宿主におけるＤＮＡ複製と非常に密接に関連しており、非特異的抗ウイルス剤は、その宿主にとってしばしば毒性であるからである。抗ウイルス剤によっ
て遮断または阻害され得るいくつかの段階が、ウイルス感染プロセス中に存在する。これらの段階としては、宿主細胞へのウイルスの付着（免疫グロブリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱被膜（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成もしくは翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡもしくはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシドアナログ）、新規なウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼインヒビター）、ならびにウイルスの出芽および放出が、挙げられる。
【０２７３】
ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドに類似するが、不完全もしくは異常なデオキシリボース基もしくはリボース基を有する、合成化合物である。一旦ヌクレオチドアナログが細胞内に入ると、これらは、リン酸化されて、チオリン酸形態を生じ、このチオリン酸形態は、ウイルスＤＮＡまたはウイルスＲＮＡ内への組み込みについて、正常なヌクレオチドと競合する。一旦、ヌクレオチドアナログのチオリン酸形態が、増大する核酸鎖内に組み込まれると、これは、ウイルスポリメラーゼと不可逆的な会合を生じ、従って、連鎖が停止する。ヌクレオチドアナログとしては、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの処置に使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に有用）、イドクスウリジン、リバビリン（ＲＳウイルスの処置に有用）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ジドブジン（アジドチミジン）、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、およびレシミキモド（ｒｅｓｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７４】
インターフェロンは、ウイルス感染細胞および免疫細胞により分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接する細胞上にある特異的なレセプターに結合し、ウイルスによる感染からその細胞を保護する細胞内での変化を生じることによって機能する。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンはまた、感染細胞の表面上でクラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ分子の発現を誘導し、宿主の免疫細胞認識のための抗原提示の増加を生じる。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、組換え形態として利用可能であり、慢性のＢ型肝炎およびＣ型肝炎の感染の処置に使用されている。抗ウイルス両方に有効な投薬量において、インターフェロンは、発熱、倦怠感および体重減少のような重篤な副作用を有する。
【０２７５】
本発明において有用な抗ウイルス剤としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオシドアナログ、およびプロテアーゼインヒビター。抗ウイルス剤の特定の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：アセマンナン（Ａｃｅｍａｎｎａｎ）；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデフォビル（Ａｄｅｆｏｖｉｒ）；アロブジン（Ａｌｏｖｕｄｉｎｅ）；アルビルセプトスドトックス（Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ Ｓｕｄｏｔｏｘ）；塩酸アマンタジン；アラノチン（Ａｒａｎｏｔｉｎ）；アリルドン（Ａｒｉｌｄｏｎｅ）；メシル酸アテルビジン；アブリジン（Ａｖｒｉｄｉｎｅ）；シドフォビル（Ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）；シパムフィリン（Ｃｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）；塩酸シタラビン；メシル酸デラビルジン（Ｄｅｌａｖｉｒｄｉｎｅ Ｍｅｓｙｌａｔｅ）；デスシクロビル；ジダノシン；ジソキサリル（Ｄｉｓｏｘａｒｉｌ）；エドクスウリジン；エンビラデン（Ｅｎｖｉｒａｄｅｎｅ）；エンビロキシム（Ｅｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ファムシクロビル；塩酸ファモチン（Ｆａｍｏｔｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；フィアシタビン（Ｆｉａｃｉｔａｂｉｎｅ）；フィアルリジン（Ｆｉａｌｕｒｉｄｉｎｅ）；フォサリレート（Ｆｏｓａｒｉｌａｔｅ）；フォスカーネットナトリウム；ホスホネットナトリウム（Ｆｏｓｆｏｎｅｔ Ｓｏｄｉｕｍ）；ガンシクロビル；ガンシクロビルナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）；ラミブジン（Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）；ロブカビル（Ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）；塩酸メモチン；メチサゾン；ネビラピン（Ｎｅｖｉｒａｐｉｎｅ）；ペンシクロビル（Ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）；ピロダビル（Ｐｉｒｏｄａｖｉｒ）；リバビリン；塩酸リマンタジン（Ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）；メシル酸サキナルビル；塩酸ソマンタジン；ソリブジン；スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）；スタブジン（Ｓｔａｖｕｄｉｎｅ）；塩酸チロロン；トリフルリジン；塩酸バラシクロビル；ビダラビン；リン酸ビダラビン；ビダラビンリン酸ナトリウム；ビロキシム（Ｖｉｒｏｘｉｍｅ）；ザルシタビン；ジドブジン；およびジンビロキシム（Ｚｉｎｖｉｒｏｘｉｍｅ）。
【０２７６】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防のために有用である。抗真菌剤は、時には、その作用機構によって分類される。いくつかの抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって細胞壁インヒビターとして機能する。これらとしては、バシウンジン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが挙げられるが、これに限定されない。他の抗真菌剤は、膜完全性を破壊することによって機能する。これらとしては、イミダゾール類（例えば、クロトリマゾール、セルタコンゾール（ｓｅｒｔａｃｏｎｚｏｌｅ）、フルコナゾール（ｆｌｕｃｏｎａｚｏｌｅ）、イトラコナゾール（ｉｔｒａｃｏｎａｚｏｌｅ）、ケトコナゾール、ミコナゾールおよびボリコナコール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）ならびにＦＫ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジミシン（ｐｒａｄｉｍｉｃｉｎ）、ＵＫ ２９２、ブテナフィン（ｂｕｔｅｎａｆｉｎｅ）およびテルビナフィン（ｔｅｒｂｉｎａｆｉｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の抗真菌剤は、キチンを破壊することによって機能する（例えば、キチナーゼ）か、または免疫抑制によって（５０１クリーム）、機能する。
【０２７７】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、他の治療剤（例えば、アジュバント）と組み合わせて免疫応答を増強し得る。このＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび他の治療剤は、同時または連続的に投与され得る。上記の他の治療剤が同時に投与される場合、それらの治療剤は、同じ処方物または別個の処方物中で投与され得るが、同時に投与される。上記の他の治療剤は、その他の治療剤およびＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの投与が時間的に分離している場合、互いにおよびＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと連続的に投与される。より具体的には、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、少なくとも１種の他の治療剤の投与（もしくはその治療剤への暴露）の前または後に投与され得る。これらの化合物の投与の間の時間的分離は、分単位の事項であっても、またはより長いものであってもよい。他の治療剤としては、アジュバント、サイトカイン、抗体、抗原などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７８】
本発明の組成物はまた、非核酸アジュバントとともに投与され得る。非核酸アジュバントは、体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答を刺激し得る、本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド以外の任意の分子または化合物である。非核酸アジュバントとしては、例えば、デポー効果を生じるアジュバント、免疫刺激アジュバント、ならびにデポー効果を生じて免疫系を刺激するアジュバントが、挙げられる。
【０２７９】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、粘膜アジュバントとして有用である。全身免疫および粘膜免疫の両方がＣｐＧ核酸の粘膜送達によって誘導されることが、以前に発見されている。従って、上記オリゴヌクレオチドは、他の粘膜アジュバントと組み合わせて投与され得る。
【０２８０】
免疫応答はまた、サイトカイン（ＢｕｅｌｅｒおよびＭｕｌｌｉｇａｎ，１９９６；Ｃｈｏｗら、１９９７；Ｇｅｉｓｓｌｅｒら、１９９７；Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｋｉｍら、１９９７）または副刺激分子（例えば、Ｂ７（Ｉｗａｓａｋｉら、１９９７；Ｔｓｕｊｉら、１９９７）と、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドとの同時投与もしくは共直線（ｃｏ−ｌｉｎｅａｒ）発現によって、誘導または増強され得る。用語「サイトカイン」とは、ナノモル濃度またはピコモル濃度で体液性調節因子として作用し、かつ正常条件もしくは生理条件下で個々の細胞および組織の機能的活性を調節する、多岐にわたる可溶性タンパク質および可溶性ペプチドの群に関する一般名として使用される。これらのタンパク質はまた、細胞間相互作用を直接媒介し、そして細胞外環境において生じるプロセスを調節する。サイトカインの例としては、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＧＦ−β、Ｆｌｔ−３リガンド、およびＣＤ４０リガンドが挙げられるが、これらに限定されない。サイトカインに加えて、上記ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、特定のサイトカインに対する抗体（例えば、抗ＩＬ−１０および抗ＴＧＦ−β）ならびにシクロオキシゲナーゼインヒビター（すなわち、ＣＯＸ−１インヒビターおよびＣＯＸ−２インヒビター）と組み合わせて、使用され得る。
【０２８１】
上記オリゴヌクレオチドはまた、免疫応答を、Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答へと変えるために有用である。このことは、比較的平衡したＴｈ１／Ｔｈ２環境の生成を生じる。Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答へと免疫応答の変更は、上記核酸に応答して生成したサイトカインのレベルを測定することによって（例えば、Ｔｈ１サイトカイン（ＩＦＮ−αを含む）を生成するように単球および他の細胞を誘導することによって）、評価され得る。上記免疫応答をＴｈ２応答からＴｈ１応答へと変更または再平衡することは、喘息の処置のために特に有用である。例えば、喘息を処置するために有効な量は、喘息に関連するＴｈ２型の免疫応答を、Ｔｈ１型の応答または平衡したＴｈ１／Ｔｈ２環境へと変更するために有用な量であり得る。Ｔｈ２サイトカイン（特に、ＩＬ−４およびＩＬ−５）は、喘息被験体の気道において増加する。本明細書中に記載されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、免疫系を再平衡するのを補助するＴｈ１サイトカイン増加を引き起こし、それによって優勢なＴｈ２免疫応答に関連する有害な影響を防止または減少する。
【０２８２】
Ｔｈ２免疫応答からＴｈ１免疫応答への免疫応答の変更はまた、特定のアイソタイプの免疫グロブリンのレベルを測定することによって、評価され得る。例えば、マウスにおいて、ＩｇＧ２ａは、Ｔｈ１免疫応答に関連し、ＩｇＧ１およびＩｇＥは、Ｔｈ２免疫応答に関連する。
【０２８３】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、樹状細胞の細胞生存、細胞分化、細胞活性化、および成熟を促進する独特の能力を有し、このＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、樹状細胞を含むインビトロ方法、インビボ方法、およびエキソビボ方法のために有用である。
【０２８４】
ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、ナチュラルキラー細胞溶解活性および抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を増加する。ＡＤＣＣは、細胞標的（例えば、癌細胞）に特異的な抗体と組み合わせてＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを使用して、実施され得る。上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが上記抗体と組み合わせて被験体に投与される場合、その被験体の免疫系は、腫瘍細胞を死滅させるように誘導される。ＡＤＣＣ手順において有用な抗体は、身体中の細胞と相互作用する抗体を包含する。細胞標的に特異的なそのような多くの抗体が、当該分野で記載されており、多くが、市販されている。
【０２８５】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドはまた、抗癌治療と組み合わせて投与され得る。抗癌治療としては、癌薬物、放射線手順および外科手順が挙げられる。本明細書中で使用される場合、「癌薬物」とは、癌を処置する目的のために被験体に投与される因子を指す。本明細書中で使用される場合、「癌を処置する」とは、癌の発症を予防すること、癌の症状を低減すること、および／または樹立された癌の増殖を阻害することを包含する。他の局面において、上記癌薬物は、癌を発症する危険がある被験体に対して、その癌を発症する危険を減少する目的のために投与される。癌の処置のための種々の型の医薬が、本
明細書中に記載される。本明細書の目的のためには、癌薬物は、化学療法剤、免疫治療剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および生物応答改変剤として分類される。
【０２８６】
さらに、本発明の方法は、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドと一緒に、１種よりも多い癌薬物の使用を包含することが意図される。例として、適切な場合には、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、化学療法剤および免疫治療剤の両方とともに投与され得る。あるいは、上記癌薬物は、癌を有する被験体または癌を発症する危険がある被験体を処置する目的のためにある被験体に投与される、免疫治療剤と癌ワクチンとを、または化学療法剤と癌ワクチンとを、または化学療法剤と免疫治療剤と癌ワクチンとを、包含し得る。
【０２８７】
上記化学療法剤は、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、非糖含有クロロエチルニトロソ尿素類、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラギリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタイン、およびポリフェルポサン、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ １２−９５６６、ＲＡＳファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレク、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、パルスポダル／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン、メタレット／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニル／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソーマルドキソルビシン、ユータキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ １２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳオンコジーンインヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口プラチナ、ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）、エルガミゾール／レバミゾール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミゾール、カンプトスター／イリノテカン、ツモデックス／ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パキセックス／パクリタキセル、ドキシル／リポソーマルドキソルビシン、カエリックス／リポソーマルドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファルマルビシン／エピルビシン、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタリミド、ＬＵ １０３７９３／ドラスタチン、カエチックス／リポソーマルドキソルビシン、ゲムザル／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメッド、ＹＭ １１６、ヨウ素シード、ＣＤＫ４インヒビターおよびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／デキシフォサミド、イフェス／メスネックス／イソファミド、ビュウモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサンアナログ、ニトロソ尿素類、アルキル化剤（例えば、メルフェランおよびシクロホスファミド）、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨＣｌ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトーテン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクトレチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、マイトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビスグアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、および硫酸ビンデシンからなる群より選択され得るが、このように限定はされない。
【０２８８】
上記免疫治療剤は、リツキサン、リブタキシン、ハーセプチン、クアドラメット、パノレックス、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム、ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス、ベキサール、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、グリオマブＨ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンホシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＣＭＡ６７６、モノファームＣ、４Ｂ５、ｉｏｒ ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ １Ｄ１０ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＡＢＬ ３６４ Ａｂ、およびＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡからなる群より選択され得るが、そのように限定はされない。
【０２８９】
上記癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合体ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬテラトープ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム性イディオタイプワクチン、メラシン、ペプチド抗原ワクチン、トキシン／抗原ワクチン、ＭＶＡベースワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、およびＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群より選択され得るが、そのように限定はされない。
【０２９０】
免疫療法剤（例えば、モノクローナル抗体）と組み合わせたＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの使用は、多数の機構（ＡＤＣＣの有意な増強（上記で考察される）、ＮＫ細胞の活性化、およびＩＦＮ−αレベルの増加を含む）を介して、長期生存を増加することが可能である。上記核酸は、モノクローナル抗体と組み合わせて使用した場合に、生物学的結果を達成するために必要な抗体の用量を減少するために役立つ。
【０２９１】
本発明はまた、上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドを使用して、抗原非特異的先天免疫活性化を誘導するためおよび感染性チャレンジに対する広範なスペクトル耐性を誘導するための方法を包含する。本明細書中で使用される用語「先天免疫活性化」とは、記憶Ｂ細胞以外の免疫細胞の活性化を指し、例えば、単球、好中球、マクロファージ、樹状細胞、ＮＫ細胞、および／または抗原非依存性様式で応答し得る他の免疫細胞の活性化を包含し得る。感染性チャレンジに対する広範なスペクトル耐性は、上記免疫細胞が活性形態にありかつ特定の抗原に対して特異的に刺激されるので、誘導される。上記細胞は、特定の抗原に対して特異的に刺激される必要はない。このことは、生物戦争および上記の他の環境（例えば、旅行者）において特に有用である。
【０２９２】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、被験体に直接投与され得るか、または核酸送達複合体と組み合わせて投与され得る。核酸送達複合体とは、標的化手段（例えば、標的細胞に対する高親和性結合を生じる分子）と会合（例えば、イオン結合もしくは共有結合、またはその中に封入）された核酸分子を意味する。核酸送達複合体の例としては、ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、カチオン性脂質、ビロソーム、もしくはリポソーム）、または標的細胞特異的結合因子（例えば、標的細胞特異的レセプターによって認識されるリガンド）と会合された、核酸が挙げられる。好ましい複合体は、標的細胞によるインターナリゼーションの前の有意なアンカップリング（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ）を防ぐために充分に安定であり得る。しかし、上記複合体は、上記オリゴヌクレオチドが機能的形態で放出されるように、上記細胞において適切な条件下で切断可能であり得る。
【０２９３】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび／または抗原および／または他の治療剤は、単独で（例えば、生理食塩水中もしくは緩衝液中）で投与され得るか、または当該分野で公知の任意の送達ビヒクルを使用して投与され得る。例えば、以下の送達ビヒクルが、記載されている：蝸牛状物（Ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅら、１９９４、１９９６）；エマルソーム（Ｅｍｕｌｓｏｍｅ）（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８；Ｌｏｗｅｌｌら、１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔら、１９９３；Ｃａｒｌｓｓｏｎら、１９９１；Ｈｕら、１９９８；Ｍｏｒｅｉｎら、１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓら、１９９９；Ｍｉｃｈａｌｅｋら、１９８９、１９９２；ｄｅ Ｈａａｎ １９９５ａ、１９９５ｂ）；生細菌ベクター（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、カルメット−ゲラン杆菌、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｈｏｎｅら、１９９６；Ｐｏｕｗｅｌｓら、１９９８；Ｃｈａｔｆｉｅｌｄら、１９９３；Ｓｔｏｖｅｒら、１９９１；Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８）；生ウイルスベクター（例えば、Ｖａｃｃｉｎｉａ、アデノウイルス、Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら、１９９３、１９９５；Ｍｏｓｓら、１９９６；Ｎｕｇｅｎｔら、１９９８；Ｆｌｅｘｎｅｒら、１９９８；Ｍｏｒｒｏｗら、１９９９）；ミクロスフェア（Ｇｕｐｔａら、１９９８；Ｊｏｎｅｓら、１９９６；Ｍａｌｏｙら、１９９４；Ｍｏｏｒｅら、１９９５；Ｏ’Ｈａｇａｎら、１９９４；Ｅｌｄｒｉｄｇｅら、１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙａｎら、１９９３；Ｋｕｋｌｉｎら、１９９７；Ｓａｓａｋｉら、１９９８；Ｏｋａｄａら、１９９７；Ｉｓｈｉｉら、１９９７）；ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａら、１９９８；Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌら、１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔら、１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔら、１９９８；Ｌｏｗｅｌｌら、１９８８、１９９６、１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉら、１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔら、１９９８；Ｍａｓｏｎら、１９９８；Ｈａｑら、１９９５）；ビロソーム（Ｇｌｕｃｋら、１９９２；Ｍｅｎｇｉａｒｄｉら、１９９５；Ｃｒｙｚら、１９９８）；ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇら、１９９９；Ｌｅｉｂｌら、１９９８）。他の送達ビヒクルが、当該分野で公知である。
【０２９４】
用語「有効量」とは、一般的には、望ましい生物学的効果を実現するために必要または充分な量をさす。例えば、粘膜免疫を誘発するために抗原とともに投与されるＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドの有効量とは、抗原に暴露された場合にその抗原に応答したＩｇＡの発生を引き起こすために必要な量であり、一方、全身免疫を誘発するために必要な量は、抗原に暴露された場合にその抗原に応答したＩｇＧの発生を引き起こすために必要な量である。本明細書中に提供される教示と組み合わせて、種々の活性化合物および重み付け因子（例えば、効力、相対的バイオアベイラビリティー、患者の体重、有害な副作用の重篤度、および好ましい投与様式）を選択することによって、実質的な毒性を引き起こさないが特定の被験体を処置するために完全に有効である、有効な予防処置レジメンもしくは有効な治療処置レジメンが計画され得る。任意の特定の適用のための有効量は、処置される疾患もしくは状態、投与される特定のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、被験体の大きさ、またはその疾患もしくは状態の重篤度のような要因に依存して、変化し得る。当業者は、特定のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび／または抗原および／または他の治療剤の有効量を、過度の実験を必要とすることなく経験的に決定し得る。
【０２９５】
粘膜送達もしくは局所送達のための本明細書中に記載される化合物の主用量は、１回の投与について代表的には約１０μｇ〜１０ｇの範囲であり、これは、その適用に依存して、毎日、毎週、もしくは毎月、およびその間の他の時間に、または必要な他の場合に、投与され得る。より代表的には、粘膜用量もしくは局所用量は、１回の投与当たり約１ｍｇ〜５００ｍｇの範囲であり、最も代表的には約１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲であり、２回〜４回の投与が、数日間隔または数週間間隔である。より代表的には、免疫刺激剤の用量は、１回の投与あたり１０μｇ〜１００ｍｇの範囲であり、最も代表的には、１００μｇ〜１０ｍｇの範囲であり、毎日または毎週投与される。抗原特異的免疫応答を誘導するための非経口送達について本明細書中に記載される化合物の用量（上記化合物は、抗原とともに送達されるが別の治療剤とは送達されない）は、代表的には、ワクチンアジュバント適用もしくは免疫刺激剤適用のための有効粘膜用量の５倍〜１０，０００倍大きく、より代表的には、１０倍〜１，０００倍大きく、最も代表的には２０倍〜１００倍大きい。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが他の治療剤と組み合わせてか特化した送達ビヒクル中で投与される場合に、先天免疫応答を誘発するため、もしくはＡＤＣＣを増加するため、もしくは抗原特異的免疫応答を誘発するための、非経口送達のための本明細書中に記載される化合物の量は、１回の投与当たり約１００μｇ〜１０ｇの範囲であり、その適用に依存して、毎日、毎週、もしくは毎月、およびその間の他の時間、または必要な他の場合に、投与され得る。より代表的には、これらの目的のための非経口用量は、１投与当たり約１ｍｇ〜５ｇの範囲であり、最も代表的には約１ｍｇ〜１ｇの範囲であり、２回〜４回の投与が、数日間隔または数週間間隔である。しかし、いくつかの実施形態において、これらの目的のための非経口用量は、上記の代表的な用量よりも５倍〜１０，０００倍大きい範囲で使用され得る。
【０２９６】
本明細書中に記載される任意の化合物について、その治療上有効な量は、動物モデルからまず決定され得る。治療上有効な用量はまた、ヒトにおいて試験された（ヒト臨床試験が進行中である）他のＣｐＧオリゴヌクレオチドについて、および同様の薬理学的活性を示すことが公知である化合物（例えば、ＬＴ抗原およびワクチン接種用の他の抗原）について、ヒトデータから決定され得る。より高用量が、非経口投与のために必要であり得る。適用される用量は、投与される化合物の相対的バイオアベイラビリティーおよび効力に基づいて、調整され得る。その用量を、上記の方法および当該分野で周知であるような他の方法に基づいて、最大効力を達成するように調整することは、充分に、当業者の能力の範囲内にある。
【０２９７】
本発明の処方物は、薬学的に受容可能な溶液中で投与され、この溶液は、慣用的には、薬学的に受容可能な濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性キャリア、アジュバント、および必要に応じて他の治療成分を含み得る。
【０２９８】
治療における使用のために、有効量のこのＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドが、所望される表面（例えば、局所表面、粘膜表面、全身表面）にその化合物を送達する任意の様式によって、被験体に投与され得る。本発明の薬学的組成物を投与することは、当業者に公知の任意の手段によって達成され得る。好ましい投与経路としては、経口経路、非経口経路、筋肉内経路、皮下経路、病変内経路、腫瘍内経路、鼻内経路、舌下経路、気管内経路、吸入、眼内経路、膣内経路、および直腸経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２９９】
経口投与のために、上記化合物（すなわち、ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、抗原、および他の治療剤）は、その活性化合物を、当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることによって、容易に処方され得る。そのようなキャリアは、本発明の化合物が、標的とされる被験体による経口摂取のための錠剤、ピル、糖剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして処方されるのを可能にする。経口用途のための薬学的調製物は、必要に応じて、生じた混合物を粉砕し、望まれる場合は適切な助剤を添加した後に、その顆粒混合物を処理して錠剤コアまたは糖剤コアを得ることによって、固体賦形剤として入手され得る。適切な賦形剤は、特に、充填剤（例えば、糖（ラクトース、スクロース、マンニトール、もしくはソルビトールが挙げられる）；セルロース調製物（例えば、トウモロコシスターチ、コムギスターチ、イネスターチ、ジャガイモスターチ、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ））である。望まれる場合、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム））が、添加され得る。必要に応じて、その経口処方物はまた、内部酸性状態を中和するための生理食塩水もしくは緩衝液中で処方され得るか、またはいかなるキャリアも含まずに投与され得る。
【０３００】
糖剤コアは、適切なコーティングを備える。この目的のために、濃縮糖溶液が、使用され得、これは、必要に応じて、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含み得る。染料または色素が、異なる活性化合物用量の組み合わせを同定または特徴付けるために、錠剤または糖剤コーティングに添加され得る。
【０３０１】
経口的に使用され得る薬学的調製物としては、ゼラチンから作製された押込みばめカプセル、およびゼラチンと可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトール）とから作製された軟らかい密封カプセルが、挙げられる。この押込みばめカプセルは、充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、スターチ）、および／または滑沢剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム）、および必要に応じて安定化剤と混合して、活性成分を含み得る。この軟らかいカプセルにおいて、活性化合物は、適切な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール）中に溶解または懸濁され得る。さらに、安定化剤が添加され得る。経口投与のために処方されたミクロスフェアもまた、使用され得る。このようなミクロスフェアは、当該分野で十分に規定されている。経口投与のためのすべての処方物は、このような投与に適切な投与量である。
【０３０２】
経口腔内投与のために、この組成物は、従来の様式で処方された、錠剤またはロゼンジの形態を採り得る。
【０３０３】
上記化合物は、標準的吸入デバイスを使用して、肺（特に、気管支、より特に肺深部の肺胞）へと、吸入によって投与され得る。上記化合物は、加圧パックまたは噴霧器からエアロゾル噴霧提示の形態で、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切な気体）を使用して、送達され得る。加圧エアロゾルの場合、その投与単位は、計量した量を送達するための弁を提供することによって、決定され得る。吸入装置が、被験体に上記化合物を送達するために使用され得る。本明細書中に記載されるような吸入装置は、エアロゾル（例えば、上記化合物の乾燥粉末形態）を投与するための任意のデバイスである。この型の装置は、当該分野で周知であり、詳細に記載されている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，Ｍａｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ｐ１６７６−１６９２において見出される記載）。多くの米国特許（例えば、米国特許第６，１１６，２３７号）もまた、吸入デバイスを記載する。
【０３０４】
本明細書中で使用される「粉末」とは、微細に分散した固体粒子からなる組成物を指す。好ましくは、上記化合物は、比較的に自由に浮遊し、そして吸入デバイス中で分散され得、その後、被験体によって吸入され得て、その化合物が肺に達して肺胞への浸透を許容
するようにされる。「乾燥粉末」とは、吸入デバイス中で容易に分散してエアロゾルを形成するような水分含量を有する、粉末組成物を指す。その水分含量は、一般的には約１０重量％（％ｗ）未満であり、いくつかの実施形態では、約５％未満であり、好ましくは約３％ｗ未満である。その粉末は、ポリマーを用いて処方され得るか、または必要に応じて、他の材料（例えば、リポソーム、アルブミン、および／もしくは他のキャリア）を用いて処方され得る。
【０３０５】
エアロゾル投与および送達システムは、当業者によって特定の治療適用のために選択され得る、例えば、Ｇｏｎｄａ，Ｉ．「Ａｅｒｏｓｏｌｓ ｆｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｔｒａｃｔ」Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，６：２７３〜３１３（１９９０）およびＭｏｒｅｎ「Ａｅｒｏｓｏｌ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」Ａｅｒｏｓｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｍｏｒｅｎら編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。
【０３０６】
上記化合物は、全身送達することが望ましい場合に、注入（例えば、ボーラス注入または連続注入）による非経口投与のために処方され得る。注入のための処方物は、単位投与形態で（例えば、アンプル中にかまたは多用量容器にて）、添加された保存剤とともに提示され得る。その組成物は、油状ビヒクルもしくは水性ビヒクル中の懸濁物、溶液、またはエマルジョンのような形態を採り得、そして処方剤（例えば、懸濁剤、安定化剤、および／もしくは分散剤）を含み得る。
【０３０７】
非経口投与のための薬学的処方物としては、水溶性形態の活性化合物の水性溶液が挙げられる。さらに、その活性化合物の懸濁物が、適切な油状注入懸濁物として調製され得る。適切な親油性溶媒または親油性ビヒクルとしては、脂肪油（例えば、ゴマ油）または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド）、またはリポソームが挙げられる。水性注入懸濁物は、その懸濁物の粘度を増加する物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン）を含み得る。必要に応じて、その懸濁物はまた、非常に濃縮された溶液の調製を可能にするために、適切な安定化剤またはその化合物の溶解度を増加する薬剤を含み得る。
【０３０８】
あるいは、上記活性化合物は、適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない滅菌水）を用いて使用前に構成するための、散剤形態であり得る。
【０３０９】
上記化合物はまた、直腸組成物または膣内組成物（例えば、（例えば、従来の坐剤基剤（例えば、ココアバターまたは他のグリセリド）を含む）坐剤または貯留浣腸）の状態で処方され得る。
【０３１０】
上記の処方物に加えて、この化合物はまた、デポー調製物として処方され得る。そのような長期作用処方物は、適切なポリマー物質もしくは疎水性物質を用いて（例えば、受容可能な油中のエマルジョンとして）か、またはイオン交換樹脂を用いてか、または溶解性が乏しい誘導体（例えば、溶解性が乏しい塩）として、処方され得る。
【０３１１】
この薬学的組成物はまた、適切な固相もしくはゲル相の、キャリアもしくは賦形剤を含み得る。そのようなキャリアまたは賦形剤の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖、スターチ、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１２】
適切な液体薬学的調製物形態または固体薬学的調製物形態は、例えば、マイクロカプセル化されるか、蝸牛状にされる（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）か、微視的金粒子上にコーティングされるか、リポソーム中に含まれるか、噴霧されるエアロゾル中に含まれるか、皮膚への移植用のペレット中に含まれるか、または皮膚中を引っ掻く鋭い物体上に乾燥された、吸入用の水性溶液もしくは生理食塩水溶液である。この薬学的組成物はまた、活性化合物を長期放出する、顆粒、散剤、錠剤、コーティングした錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、エマルジョン、懸濁剤、クリーム、ドロップ、または調製物を含み、その調製物において、賦形剤および添加剤および／もしくは補助剤（例えば、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、甘味剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、甘味料、または可溶化剤が、上記のように慣用的に使用される。この薬学的組成物は、種々の薬物送達系における使用のために適切である。薬物送達のための方法の簡単な概説について、Ｌａｎｇｅｒ Ｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−３３（これは、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。
【０３１３】
上記ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドおよび必要に応じて他の治療剤および／または抗原は、それ自体が（そのまま）投与され得るか、または薬学的に受容可能な塩の形態で投与され得る。薬物中で使用される場合、その塩は、薬学的に受容可能であるべきであるが、薬学的に受容可能ではない塩が、その薬学的に受容可能な塩を調製するために簡便に使用され得る。そのような塩としては、以下の酸から調製された塩が挙げられるが、それらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、そのような塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩（例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、もしくはカルシウム塩）として調製され得る。
【０３１４】
適切な緩衝化剤としては、酢酸および塩（１％ ｗ／ｖ〜２％ ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１％ ｗ／ｖ〜３％ ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５％ ｗ／ｖ〜２．５％
ｗ／ｖ）；およびリン酸および塩（０．８％ ｗ／ｖ〜２％ ｗ／ｖ）が挙げられる。適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム（０．００３％ ｗ／ｖ〜０．０３％ ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３％ ｗ／ｖ〜０．９％ ｗ／ｖ）；パラベン類（０．０１％ ｗ／ｖ〜０．２５％ ｗ／ｖ）、およびチメロサール（０．００４％ ｗ／ｖ〜０．０２％ ｗ／ｖ）が挙げられる。
【０３１５】
本発明の薬学的組成物は、有効量のＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチド、そして必要に応じて抗原および／または他の薬剤を、必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア中に含んだ状態で、含む。用語「薬学的に受容可能なキャリア」とは、ヒトまたは他の脊椎動物への投与に適切な、１つ以上の適合性の、固体もしくは液体の、充填剤、希釈剤、もしくはカプセル化物質を意味する。用語「キャリア」とは、活性成分がその適用を容易にするように合わせられる、天然もしくは合成の、有機成分もしくは無機成分を示す。その薬学的組成物の成分はまた、望ましい薬学的効力を実質的に損なう相互作用が存在しない様式で、本発明の化合物と、および互いと、混合可能である。
【０３１６】
本発明は、以下の実施例によってさらに例証される。以下の実施例は、さらなる限定として解釈されるべきではない。
【実施例】
【０３１７】
（実施例１．Ｃ−クラスＯＤＮアナログは、インビトロでＩＦＮ−α分泌およびヒトＴＬＲ９活性を誘導する）
この一連の実験において、本発明のＣ−クラスＯＤＮアナログを、それらのアナログが分泌ＩＦＮ−αに対してヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を刺激し、かつヒトＴＬＲ９およびＮＦ−κＢレポーター構築物で安定にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を刺激して、ＴＬＲ９シグナル伝達を示す能力についてインビトロで試験した。
【０３１８】
ＯＤＮは、Ｂｉｏｓｐｒｉｎｇ（Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。そのＯＤＮは、Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＧｍｂＨ（Ｌａｎｇｅｎｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって正体および純度について制御された。ＯＤＮを、リン酸緩衝化生理食塩水（Ｓｉｇｍａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に希釈し、−２０℃にて保存した。すべての希釈を、発熱物質を含まない試薬を使用して実施した。試験ＯＤＮは、
【０３１９】
【化８１】
を含んだ。
【０３２０】
【化８２】
は、ホスホロチオエート結合を示し、
【０３２１】
【化８３】
は、ホスホジエステル結合を示す。ＣｐＧ ＯＤＮ２００６（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ、配列番号５６）を、ＴＬＲ９シグナル活性化についてのポジティブコントロールとして使用した。Ｃ−クラスＣｐＧ ＯＤＮ２４２９（ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ、配列番号５３）を、ＩＦＮ−α誘導についてのポジティブコントロールとして使用した。非ＣｐＧ ＯＤＮ１９８２（ＴＣＣＡＧＧＡＣＴＴ
ＣＴＣＴＣＡＧＧＴＴ、配列番号１８）を、ネガティブコントロールとして使用した。
【０３２２】
健常男性ヒトドナーおよび健常女性ヒトドナーに由来する末梢血軟膜調製物を、ｔｈｅ
Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から取得した。これらから、ＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）における遠心分離によって精製した。精製したＰＢＭＣを、５％（ｖ／ｖ）熱非働体化ヒトＡＢ血清（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）または１０％（ｖ／ｖ）熱非働体化ＦＣＳと、２ｍＭ Ｌ−グルタミン（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）と、１００Ｕ／ｍｌペニシリンと、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）とを含む、ＲＰＭＩ １６４０培養培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）中に再懸濁した。
【０３２３】
新たなＰＢＭＣを、９６ウェル丸底プレート上に播種し、示された濃度のＯＤＮとともに、３７℃の加湿インキュベーター中で４８時間インキュベートした。培養上清を、収集し、すぐに使用しない場合には−２０℃にて必要時まで凍結した。
【０３２４】
上清中のＩＦＮ−αの量を、市販の抗体（Ａｌｅｘｉｓ ＧｍｂＨ，Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して発色させる酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価した。ＯＤＮ１２８、ＯＤＮ３３１〜ＯＤＮ３４４、ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０を、４人の異なるドナーに由来するＰＢＭＣを用いて試験し、ＯＤＮ６１４を、３人の異なるドナーに由来するＰＢＭＣを用いて試験した。
【０３２５】
ヒトＴＬＲ９レポーター遺伝子アッセイのために使用した安定にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞は、ヒトＴＬＲ９レセプターとＮＦ−κＢレポーター遺伝子構築物とを発現した。細胞を、ＯＤＮとともに３７℃の加湿インキュベーター中で１６時間インキュベートした。各データポイントは、３連で行った。細胞を溶解して、レポーター遺伝子活性についてアッセイした。刺激指数を、ＯＤＮを添加しない培地のレポーター遺伝子活性に関して算出した。
【０３２６】
（結果） 代表的な結果を、図１および図２に示す。図１は、ＣクラスＯＤＮ３３２、ＯＤＮ３３３、およびＯＤＮ３３４が、濃度１μＭにて存在する場合に、大量のＩＦＮ−α（代表的には、約２０００ｐｇ／ｍｌ〜２５００ｐｇ／ｍｌ）を誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−αの量を有意に超えた。図１はまた、Ｃ−クラスＯＤＮ３３２、ＯＤＮ３３３、およびＯＤＮ３３４が、濃度１０μＭにて存在する場合に、有意な量のＴＬＲ９シグナル伝達活性を（代表的には、刺激指数約１５にて）誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６によって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の約半分であった。本質的に同じ結果が、ＯＤＮ１２８およびＯＤＮ３３５〜ＯＤＮ３４４について観察された。
【０３２７】
図２は、ＣクラスＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６１４、およびＯＤＮ６２０が、濃度１μＭにて存在する場合に、なおより多量のＩＦＮ−α（代表的には、約３０００ｐｇ／ｍｌ〜４０００ｐｇ／ｍｌ）を誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−αの量を有意に超えた。図２はまた、Ｃ−クラスＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６１４、およびＯＤＮ６２０が、濃度１０μＭにて存在する場合に、有意な量のＴＬＲ９シグナル伝達活性を（代表的には、刺激指数約１０〜２０にて）誘導したことを示す。これらのＯＤＮによって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６によって誘導されるＴＬＲ９シグナル伝達活性の約半分であった。
【０３２８】
ＯＤＮ６１１（配列番号４３）、ＯＤＮ６１４（配列番号４３）、およびＯＤＮ６２０（配列番号４３）をまた、ＯＤＮ２４２９（記載される元のパリンドローム含有Ｃクラスオリゴヌクレオチドのうちの１つ）と比較した。これらの新たなＣクラスＯＤＮは、ヒトＴＬＲ９アッセイにおいて、より高い活性を示したが、一方、ＩＦＮ−αの誘導は、ＯＤＮ２４２９と同様であった（図３）。
【０３２９】
まとめると、これらの実験の結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、ＩＦＮ−α分泌およびヒトＴＬＲ９活性をインビトロで有効に誘導することを示す。
【０３３０】
（実施例２）
（さらなるＣクラスＯＤＮアナログは、ＩＦＮ−α分泌をインビトロで誘導する）
この一連の実験において、本発明のさらなるＣクラスＯＤＮアナログを、ＩＦＮ−α分泌を誘導する能力についてインビトロで試験した。これらの実験においてＣクラスＯＤＮアナログは、ＡＴリッチな断続的逆方向反復の存在によって、または従来のヌクレオチド残基の位置にｄＳｐａｃｅｒ残基を含む断続的逆方向反復の存在によって、部分的に特徴付けられた。
【０３３１】
ＯＤＮを、実施例１におけるようにして得た。試験ＯＤＮは、
【０３３２】
【化８４】
を含んだ。
【０３３３】
【化８５】
は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
【０３３４】
【化８６】
は、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を示し、Ｌは、ｄＳｐａｃｅｒを示す。
【０３３５】
ヒトＰＢＭＣを、実施例１と同様な様式で得て処理した。
【０３３６】
上清中のＩＦＮ−αの量を、実施例１と同様な様式で酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して評価した。
【０３３７】
（結果） ＡＴリッチな断続的逆方向反復の存在によって部分的に特徴付けられるＣクラスＯＤＮ６４５、ＯＤＮ６４６、およびＯＤＮ６４７は、濃度１μＭにて存在する場合に、中程度の量のＩＦＮ−α（代表的には、約１２００ｐｇ／ｍｌ〜１５００ｐｇ／ｍｌ）を誘導した。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−α量を有意に超えた。ｄＳｐａｃｅｒ残基を含む断続的逆方向反復の存在によって部分的に特徴付けられるＣクラスＯＤＮ６４９、ＯＤＮ６５０、およびＯＤＮ６５１は、濃度１μＭにて存在する場合に、多量のＩＦＮ−α（代表的には、約２０００ｐｇ／ｍｌ〜２５００ｐｇ／ｍｌ）を誘導した。これらのＯＤＮによって誘導されるＩＦＮ−αの量は、同じ濃度のＯＤＮ２００６またはＯＤＮ１９８２によって誘導されるＩＦＮ−α量を有意に超えた。
【０３３８】
まとめると、これらの実験の結果は、ＡＴリッチな断続的逆方向反復の存在によって、または従来のヌクレオチド残基の位置にｄＳｐａｃｅｒ残基を含む断続的逆方向反復の存在によって、部分的に特徴付けられる本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、ＩＦＮ−α分泌をインビトロで有効に誘導することを示す。
【０３３９】
（実施例３）
（さらなるＣクラスＯＤＮアナログは、ＩＦＮ−α分泌およびヒトＴＬＲ９活性をインビトロで誘導する）
この一連の実験において、本発明のＣクラスＯＤＮアナログを、分泌されたＩＦＮ−αに対してヒトＰＢＭＣを刺激するか、またはヒトＴＬＲ９およびＮＦ−κＢレポーター構築物で安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞を刺激して、ＴＬＲ９シグナル伝達を示す能力についてインビトロで試験した。基本的プロトコルは、実施例１について記載される通りであるが、但し、試験ＯＤＮは、
【０３４０】
【化８７】
を含んだ。
【０３４１】
【化８８】
は、ホスホロチオエート結合を示し、
【０３４２】
【化８９】
は、ホスホジエステル結合を示す。
【０３４３】
種々の濃度のＯＤＮを、ＴＬＲ９レポーター遺伝子アッセイにおいて試験した。ＥＣ５０（効果が最大効果の５０％であるＯＤＮ濃度）を、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ（Ｗｉｎｄｏｗ
Ｖｅｒｓｉｏｎ ８．０についてはＳｉｇｍａＰｌｏｔ２００２）を使用して計算した。最大刺激指数（ｍａｘ ＳＩ）を、任意のＯＤＮについて試験したすべての濃度の最高値と、媒体コントロールとの間の商として計算した。結果を、図１に示す。１０〜３０の範囲にある刺激指数が一般的であったことが、理解され得る。
【０３４４】
（表１）
（本発明のＣクラスＣｐＧ ＯＤＮは、ヒトＴＬＲ９を活性化する）
【０３４５】
【化９０】
大量のＩＦＮ−αが、これらのＣクラスＣｐＧ ＯＤＮとともに４８時間インキュベーションした際に、ヒトＰＢＭＣによって分泌された。代表的なＩＦＮ−α量は、１μＭ以下の濃度のＯＤＮとともにインキュベートした後に、３０００ｐｇ／ｍｌ〜４０００ｐｇ／ｍｌの範囲にあった。これらの実験におけるＩＦＮ−αについての応答曲線は、図２において示される応答曲線と非常に類似した。
【０３４６】
（実施例４）
（ＣクラスＯＤＮアナログは、抗原特異的免疫応答をインビボで誘導する）
これらの一連の実験において、本発明のＣクラスＯＤＮを、マウスのワクチン接種と組み合わせてインビボで試験した。本発明のＣクラスＯＤＮは、抗原特異的な全ＩｇＧおよびＩｇＧ２ａ（マウスにおけるＴｈ１様ＩｇＧ）の力価、ならびに抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を、ＢクラスＣｐＧ ＯＤＮ２００６と少なくとも同等の様式でブーストすることが観察された。
【０３４７】
ＯＤＮは、実施例１におけるようにして得た。
【０３４８】
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢〜８週齢）を、すべての実験のために使用した。動物を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｃａｎａｄａ（Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）から購入し、Ｏｔｔａｗａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｉｖｉｃ Ｓｉｔｅの動物介護施設において、小型隔離飼育器中に収容した。
【０３４９】
ナイーブなＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞を、すべてのインビトロアッセイのために使用した。動物に、イソフルオランで麻酔し、その動物を、頚部脱臼によって安楽死させた。脾臓を、無菌条件下で取り出し、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）＋０．２％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）中に配置した。その後、脾臓を、ホモジナイズし、脾細胞を、２％正常マウス血清（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）と、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（それぞれ、最終濃度１０００Ｕ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）と、５×１０−５Ｍ β−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）とを補充したＲＰＭＩ １６４０組織培養培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中に再懸濁した。
【０３５０】
ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１０／群）を、１μｇ Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）サブタイプａｄ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｚｙｍｅｓ，ＣＡ）で、単独でかまたは１μｇ〜１００μｇのＣｐＧ ＯＤＮ２００６、ＣｐＧ ＯＤＮ６０８、ＣｐＧ ＯＤＮ６１８、またはＣｐＧ ＯＤＮ６２０と組み合わせて免疫した。動物から採血し、初回免疫後４週間目にブーストした。ブースト後２週間目に、各群由来の５匹の動物を、安楽死させ、脾臓を、ＣＴＬアッセイのために取り出した。
【０３５１】
ＨＢｓＡｇ（抗ＨＢｓ）に対して特異的な抗体（全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａ）を、検出し、終点希釈ＥＬＩＳＡアッセイによって定量した。このアッセイは、個々の動物由来のサンプルに対して三連で実施した。終点力価を、カットオフ値０．０５にて非免疫血漿の２倍よりも大きな吸光度値（ＯＤ４５０）をもたらす最高血漿希釈度として、定義した。これらを、群平均力価（ＧＭＴ）±ＳＥＭとして報告した。
【０３５２】
ＣＴＬアッセイを、標準的様式に従って実行した。簡単に述べると、秘蔵を、免疫後４週間目に取り出し、１０％ウシ胎仔血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）と、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（それぞれ、最終濃度１０００Ｕ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＵＫ）と、５×１０−５Ｍ β−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）とを補充したＲＰＭＩ １６４０組織培養培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（完全ＲＰＭＩ １６４０）中で単細胞懸濁物になるようにホモジナイズした。脾細胞懸濁物（３×１０６細胞／ｍｌ）中のＨＢｓＡｇ特異的リンパ球を、ＨＢｓＡｇを発現するマウス細胞系統（ｐ８１５−Ｓ）とともにインキュベートすることによって、５日間再刺激した。再刺激後、ＨＢｓＡｇを発現する細胞をそのリンパ球が死滅させる能力を、５１Ｃｒ放出アッセイを使用することによって決定した。その結果を、種々のエフェクター／標的（Ｅ：Ｔ）比における特異的溶解％として示す。
【０３５３】
（結果） 代表的な結果を、図４〜図６において示す。図４において示されるように、ＯＤＮ２００６についての全ＩｇＧ力価およびＯＤＮ６２０についての全ＩｇＧ力価は、用量依存性であり、それぞれ、ＯＤＮ用量１μｇにおいて、約５×１０３および６．５×１０３であることがわかった。ＯＤＮ２００６についての全ＩｇＧ力価およびＯＤＮ６２０についての全ＩｇＧ力価は、ＯＤＮ用量１μｇにおいて、約１×１０４であることがわかった。図５において示されるように、ＯＤＮ２００６およびＯＤＮ６２０は、両方とも、非ＣｐＧコントロールであるＯＤＮ２１３７（ＴＧＣＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴＴＴＧＴＧＣＴＴ；配列番号６０）と比較して、ＩｇＧ２ａ（マウスにおけるＴｈ１様ＩｇＧ）を有意にブーストした。具体的には、用量１０μｇにて各々投与されたＯＤＮ２００６についてのＩｇＧ２ａ力価、ＯＤＮ６２０についてのＩｇＧ２ａ力価、およびＯＤＮ２１３７についてのＩｇＧ２ａ力価は、それぞれ、約３×１０３、６×１０３、および３×１０２であった。図６において示されるように、ＯＤＮ２００６およびＯＤＮ６２０についてのＥ：Ｔ比が１００：１でのＣＴＬ活性は、投与用量１０μｇおよび１００μｇにおいて、コントロールよりも有意に大きかった。例えば、用量１０μｇにて各々投与されたＯＤＮ２００６についての特異的溶解％、ＯＤＮ２６０についての特異的溶解％、およびＯＤＮ２１３７についての特異的溶解％は、約２６％、２４％、および１２％であった。
【０３５４】
まとめると、これらの実験の結果、本発明のＣクラスＯＤＮアナログは、抗原特異的免疫応答をインビボで有効に誘導することを、示す。
【０３５５】
（実施例５）
（ＣクラスＯＤＮアナログは、腫瘍モデルにおいてインビボにて、生存を改善し、腫瘍体積を減少する）
この一連の実験において、本発明のＣクラスＯＤＮアナログを、マウス神経芽細胞腫モデルにおいてインビボで試験した。本発明のＣクラスＯＤＮアナログは、全体の生存および腫瘍負荷の両方を劇的に改善することがわかった。
【０３５６】
ＯＤＮは、実施例１におけるようにして得た。
【０３５７】
ＢＡＬＢ／ｃマウスは、実施例４におけるようにして得た。
【０３５８】
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、１×１０６個のマウス神経芽細胞腫（Ｎｅｕｒｏ−２ａ）細胞（例えば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ−１３１、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を、０日目に左大腿部中に皮下（ｓ．ｃ．）注射した。マウスに、１０日目〜２５日目に毎日、ＰＢＳ、ＣｐＧ ２００６、ＣｐＧ ６２０、または非ＣｐＧコントロールであるＯＤＮ２１３７の皮下注射を行った。生存％および腫瘍体積を測定した。
【０３５９】
（結果） 代表的な結果を、図７に示す。図７Ａにおいて示されるように、１００μｇのＯＤＮ６２０で処理したマウスは、８０日目に５０％の生存率を有した。これに比較して、ＯＤＮ２００６、ＯＤＮ２１３７、またはＰＢＳについて、対応する生存率は、０％〜２０％であった。さらに、図７Ｂにおいて示されるように、１００μｇ ＯＤＮ６２０で処理したマウスは、２８日目に約１０００ｍｍ３にてピークに達して３８日目までに０ｍｍ３まで減少した腫瘍体積を有した。比較すると、ＯＤＮ２１３７またはＰＢＳで処理したマウスは、より迅速な単調な腫瘍増殖を有した。
【０３６０】
まとめると、これらの実験の結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、腫瘍モデルにおいてインビボにて、生存を有効に改善し、腫瘍体積を有効に減少することを示す。
【０３６１】
（実施例６）
（ＣクラスＯＤＮアナログの組織代謝および分布）
本発明のＣクラスＯＤＮアナログを用いる吸着研究／分布研究は、マウスの皮下処置後に腎臓および肝臓などの器官からの順調な代謝およびクリアランスを示した。
【０３６２】
マウスを、５匹ずつの群へと分割し、各マウスに、０日目に単回皮下投与にて２５０μｇのＯＤＮを投与した。種々の時点で、それらの器官（肝臓、腎臓、および脾臓）を、取り出し、そのオリゴヌクレオチドおよびその代謝物を、内容物の定量のために抽出した。
【０３６３】
（結果） 本発明のＯＤＮ（例えば、ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０）は、完全にホスホロチオエートパリンドローム性である既知ＯＤＮ（例えば、ＯＤＮ２４２９）と比較して少ない蓄積を、器官において示した。例えば、３日目に、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６２０およびＯＤＮ２４２９の腎臓レベルは、それぞれ、約７０±２８ｍｇ／ｋｇ、約３０±１８ｍｇ／ｋｇ、および約９０±１０ｍｇ／ｋｇであった。同様に、３日目に、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６２０およびＯＤＮ２４２９の肝臓レベルは、それぞれ、約４５±１５ｍｇ／ｋｇ、約２８±１２ｍｇ／ｋｇ、および約１５０±１５ｍｇ／ｋｇであった。
【０３６４】
全体としてまとめると、これらの結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、ＯＤＮが蓄積し得る器官からの順調な代謝およびクリアランスを有することを、示す。
【０３６５】
（実施例７）
（ＣクラスＯＤＮアナログの物理的特徴）
この組の実験において、ＯＤＮ２４２９、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６２０、ＯＤＮ６０８
【０３６６】
【化９１】
およびＯＤＮ６１８
【０３６７】
【化９２】
を、サイズ排除クロマトグラフィー、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）、ＵＶ熱変性、および高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して、特徴付けた。ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０をサイズ排除クロマトグラフィー（ＰＢＳ中で２２５μＭ）にて調査する場合、ただ１つだけのピークが、各化合物について観察された。すなわち、各オリゴヌクレオチドは、モノマーのように溶出した。対照的に、ＯＤＮ６０８およびＯＤＮ６１８（各々は、パリンドローム配列を含む）をサイズ排除クロマトグラフィーによって調査した場合、各オリゴヌクレオチドについて２つのピークが観察された。これは、上記モノマーに加えて、分子間ダイマーの存在と一致した。しかし、ＵＶ熱変性研究は、ＯＤＮ６１１およびＯＤＮ６２０が、溶液中で二次構造を有すことを示した。これは、分子内ヘアピン構造と一致した。このヘアピン構造は、ＯＤＮ６１１の配列およびＯＤＮ６２０の配列中にある逆方向反復から生じると考えられる。一般的に言うと、これらの配列について、ＨＰＬＣおよびＣＧＥにおいては、ＯＤＮ２４２９およびＯＤＮ６０８と比較して鋭いピークが、観察された。
【０３６８】
全体としてまとめると、これらの結果は、本発明のＣクラスＯＤＮアナログが、分子内二次構造を形成する傾向があり、試験した濃度においてインビトロでは分子間複合体を形成しないが、パリンドローム含有ＣクラスＯＤＮは、分子間相互作用を解して複合体になるように会合する傾向があることを、示す。しかし、インビボでは、エンドソーム内区画中で達成されるＯＤＮ濃度が、ＯＤＮの二重鎖またはより高次の複合体（本発明のＣクラスＯＤＮアナログの二重鎖またはより高次の複合体さえも含む）さえも支持するのに充分に高濃度である可能性がある。
【０３６９】
（等価物）
上記の説明は、当業者が本発明の実施するのを可能にするに充分であると考えられる。本明細書中に示されそして記載されるものに加えて本発明の種々の改変が、上記の説明から当業者にとって明らかであり、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る。本発明の利点および目的は、本発明の各実施形態によって必ずしも包含されない。
【０３７０】
本明細書において引用されるすべての参考文献、特許および特許公開物は、その全体参考として本明細書中に援用される。
【図面の簡単な説明】
【０３７１】
本発明は、添付の図面と組み合わせて考慮されるとき、より容易かつ完全に理解され得る。図面は、例示の目的のみのために提供され、本発明を理解または実施するために必要とはされない。
【図１】図１は、ＯＤＮ３３２、ＯＤＮ３３３およびＯＤＮ３３４によるＩＦＮ−αおよびＴＬＲ９のシグナル伝達の誘導を図示する、一連のグラフである。
【図２】図２は、ＯＤＮ６１１、ＯＤＮ６１４およびＯＤＮ６２０によるＩＦＮ−αおよびＴＬＲ９のシグナル伝達の誘導を図示する、一連のグラフである。
【図３】図３は、オリゴヌクレオチドのパネルにより刺激された、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＩＦＮ−αの産生を図示するグラフである。
【図４】図４は、示された量のＯＤＮと共に１μｇのＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）で免疫した後の、抗原特異的な総ＩｇＧの群平均力価（ＧＭＴ）を図示するグラフである。
【図５】図５は、示された量のＯＤＮと共に１μｇのＨＢｓＡｇで免疫した後の、抗原特異的な個々のＩｇＧアイソタイプのＧＭＴを図示するグラフである。
【図６】図６は、示された量のＯＤＮと共に１μｇのＨＢｓＡｇで免疫した後の、抗原特異的な細胞溶解性Ｔリンパ球の応答を図示するグラフである。
【図７】図７Ａは、マウスの神経芽細胞腫腫瘍モデルにおける、異なるＯＤＮ処置による生存率を図示するグラフである。図７Ｂは、マウス神経芽細胞腫腫瘍モデルにおける、異なるＯＤＮ処置による腫瘍容積を図示するグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＴＧＣＣＧ（配列番号４４）を含む、免疫刺激性核酸。
【請求項２】
本質的に、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＴＧＣＣＧ（配列番号４４）からなる、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項３】
少なくとも１つのヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエートで改変される、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項４】
各ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエートで改変される、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドが、置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンである、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項６】
前記置換ピリミジンが、Ｃ５−置換ピリミジンもしくはＣ６−置換ピリミジンである、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項７】
前記置換プリンが、Ｃ８−置換プリンもしくはＣ７−置換プリンである、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項８】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、５−置換シトシン、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ、およびウラシル誘導体、チミン誘導体、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、置換アデニン、８−置換グアニン、ならびに６−チオグアニンからなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項９】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、６−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、ならびに非置換型もしくは置換型の５−アルキニル−シトシン、Ｎ４−エチル−シトシン、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシン、フェノキサジン、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン、Ｎ２−メチル−グアニン、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニンからなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項１０】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、ユニバーサル塩基（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ）、芳香族環系、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）からなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項１１】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基、およびＫ−塩基、ベンズイミダゾール、ジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド、フルオロベンゼン、およびジフルオロベンゼンからなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸および抗原を含む、ワクチン。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸および抗癌薬物を含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
癌の処置における使用のための薬物の製造のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
【請求項１６】
前記癌が、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、咽頭癌、白血病、肝癌、肺癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋芽細胞腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系の癌、または他の癌腫および肉腫から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記癌が、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）での処置に感受性の癌である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＩＦＮ−αでの処置に感受性の癌が、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、前立腺癌腫、子宮頚部形成異常、または結腸癌腫から選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記薬物が、抗癌治療を組み合わせて使用するためのものである、請求項１５に記載の使用。
【請求項２０】
前記抗癌治療が、放射線である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記抗癌治療が、癌薬物である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
前記癌薬物が、化学療法剤である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記化学療法剤が、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、非糖含有クロロエチルニトロソ尿素類、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラギリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタイン、およびポリフェルポサン、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ １２−９５６６、ＲＡＳファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレク、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、パルスポダル／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン、メタレット／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニル／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソーマルドキソルビシン、ユータキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ １２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳオンコジーンインヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口プラチナ、ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）、エルガミゾール／レバミゾール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミゾール、カンプトスター／イリノテカン、ツモデックス／ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パキセックス／パクリタキセル、ドキシル／リポソーマルドキソルビシン、カエリックス／リポソーマルドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファルマルビシン／エピルビシン、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタリミド、ＬＵ １０３７９３／ドラスタチン、カエチックス／リポソーマルドキソルビシン、ゲムザル／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメッド、ＹＭ １１６、ヨウ素シード、ＣＤＫ４インヒビターおよびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／デキシフォサミド、イフェス／メスネックス／イソファミド、ビュウモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサンアナログ、ニトロソ尿素類、アルキル化剤（例えば、メルフェランおよびシクロホスファミド）、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨＣｌ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトーテン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクトレチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、マイトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビスグアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、あるいは硫酸ビンデシンである、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記癌薬物が、免疫治療剤である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２５】
前記免疫治療剤が、リツキサン、リブタキシン、ハーセプチン、クアドラメット、パノレックス、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム、ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス、ベキサール、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、グリオマブＨ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンホシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＣＭＡ６７６、モノファームＣ、４Ｂ５、ｉｏｒ ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ １Ｄ１０ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＡＢＬ ３６４ Ａｂ、またはＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡである、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記癌薬物が、癌ワクチンである、請求項２１に記載の使用。
【請求項２７】
前記癌ワクチンが、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合体ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬテラトープ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム性イディオタイプワクチン、メラシン、ペプチド抗原ワクチン、トキシン／抗原ワクチン、ＭＶＡベースワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、またはＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓである、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記薬物が、１より多い抗癌治療と組み合わせて使用するためのものである、請求項１５に記載の使用。
【請求項１】
ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＴＧＣＣＧ（配列番号４４）を含む、免疫刺激性核酸。
【請求項２】
本質的に、ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＴＧＣＣＧ（配列番号４４）からなる、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項３】
少なくとも１つのヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエートで改変される、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項４】
各ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエートで改変される、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドが、置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンである、請求項１に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項６】
前記置換ピリミジンが、Ｃ５−置換ピリミジンもしくはＣ６−置換ピリミジンである、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項７】
前記置換プリンが、Ｃ８−置換プリンもしくはＣ７−置換プリンである、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項８】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、５−置換シトシン、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン、５−アザ−シトシン、２−メルカプト−シトシン、イソシトシン、プソイド−イソシトシン、縮合環系を有するシトシンアナログ、およびウラシル誘導体、チミン誘導体、７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン、７−デアザ−８−置換グアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、置換アデニン、８−置換グアニン、ならびに６−チオグアニンからなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項９】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、５−メチル−シトシン、５−フルオロ−シトシン、５−クロロ−シトシン、５−ブロモ−シトシン、５−ヨード−シトシン、５−ヒドロキシ−シトシン、６−ヒドロキシ−シトシン、５−ヒドロキシメチル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、ならびに非置換型もしくは置換型の５−アルキニル−シトシン、Ｎ４−エチル−シトシン、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシン、フェノキサジン、５−フルオロ−ウラシル、５−ブロモ−ウラシル、５−ブロモビニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、５−ヒドロキシ−ウラシル、５−プロピニル−ウラシル、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン、７−デアザ−７−（Ｃ２−Ｃ６）アルキニルグアニン、Ｎ２−メチル−グアニン、Ｎ６−メチル−アデニン、８−オキソ−アデニン、８−ヒドロキシグアニン、および８−ブロモグアニンからなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項１０】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、ユニバーサル塩基（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ）、芳香族環系、および水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）からなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項１１】
前記置換プリンもしくは改変プリンまたは置換ピリミジンもしくは改変ピリミジンが、４−メチル−インドール、５−ニトロ−インドール、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基、およびＫ−塩基、ベンズイミダゾール、ジクロロ−ベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド、フルオロベンゼン、およびジフルオロベンゼンからなる群より選択される、請求項５に記載の免疫刺激性核酸。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸および抗原を含む、ワクチン。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸および抗癌薬物を含む、薬学的組成物。
【請求項１５】
癌の処置における使用のための薬物の製造のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の免疫刺激性核酸の使用。
【請求項１６】
前記癌が、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系の癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸および直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、咽頭癌、白血病、肝癌、肺癌、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋芽細胞腫、直腸癌、腎臓癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系の癌、または他の癌腫および肉腫から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記癌が、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）での処置に感受性の癌である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＩＦＮ−αでの処置に感受性の癌が、ヘアリーセル白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚Ｔ細胞白血病、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、悪性黒色腫、扁平上皮癌、ＡＩＤＳ関連カポージ肉腫、腎細胞癌、前立腺癌腫、子宮頚部形成異常、または結腸癌腫から選択される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記薬物が、抗癌治療を組み合わせて使用するためのものである、請求項１５に記載の使用。
【請求項２０】
前記抗癌治療が、放射線である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記抗癌治療が、癌薬物である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
前記癌薬物が、化学療法剤である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記化学療法剤が、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、非糖含有クロロエチルニトロソ尿素類、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラギリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタイン、およびポリフェルポサン、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ １２−９５６６、ＲＡＳファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレク、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、パルスポダル／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン、メタレット／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、Ｉｎｃｅｌ／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニル／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソーマルドキソルビシン、ユータキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ １２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳオンコジーンインヒビター、ＢＭＳ−１８２７５１／経口プラチナ、ＵＦＴ（テガフル／ウラシル）、エルガミゾール／レバミゾール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミゾール、カンプトスター／イリノテカン、ツモデックス／ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パキセックス／パクリタキセル、ドキシル／リポソーマルドキソルビシン、カエリックス／リポソーマルドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファルマルビシン／エピルビシン、デポサイト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビス−ナフタリミド、ＬＵ １０３７９３／ドラスタチン、カエチックス／リポソーマルドキソルビシン、ゲムザル／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメッド、ＹＭ １１６、ヨウ素シード、ＣＤＫ４インヒビターおよびＣＤＫ２インヒビター、ＰＡＲＰインヒビター、Ｄ４８０９／デキシフォサミド、イフェス／メスネックス／イソファミド、ビュウモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサンアナログ、ニトロソ尿素類、アルキル化剤（例えば、メルフェランおよびシクロホスファミド）、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シタラビンＨＣｌ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトーテン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクトレチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、マイトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビスグアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、あるいは硫酸ビンデシンである、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記癌薬物が、免疫治療剤である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２５】
前記免疫治療剤が、リツキサン、リブタキシン、ハーセプチン、クアドラメット、パノレックス、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム、ＳＭＡＲＴ Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、オバレックス、ベキサール、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、プレターゲット、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、グリオマブＨ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンホシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＣＭＡ６７６、モノファームＣ、４Ｂ５、ｉｏｒ ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ １Ｄ１０ Ａｂ、ＳＭＡＲＴ ＡＢＬ ３６４ Ａｂ、またはＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡである、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記癌薬物が、癌ワクチンである、請求項２１に記載の使用。
【請求項２７】
前記癌ワクチンが、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合体ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬテラトープ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム性イディオタイプワクチン、メラシン、ペプチド抗原ワクチン、トキシン／抗原ワクチン、ＭＶＡベースワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、またはＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓである、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記薬物が、１より多い抗癌治療と組み合わせて使用するためのものである、請求項１５に記載の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公開番号】特開２００７−１５１５３６（Ｐ２００７−１５１５３６Ａ）
【公開日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１３１９０８（Ｐ２００６−１３１９０８）
【出願日】平成１８年５月１０日（２００６．５．１０）
【分割の表示】特願２００６−５３８３８３（Ｐ２００６−５３８３８３）の分割
【原出願日】平成１６年１０月２９日（２００４．１０．２９）
【出願人】（５０２１０２０５１）コーリー ファーマシューティカル ゲーエムベーハー (21)
【出願人】（５００５２３９６２）コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド (18)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年５月１０日（２００６．５．１０）
【分割の表示】特願２００６−５３８３８３（Ｐ２００６−５３８３８３）の分割
【原出願日】平成１６年１０月２９日（２００４．１０．２９）
【出願人】（５０２１０２０５１）コーリー ファーマシューティカル ゲーエムベーハー (21)
【出願人】（５００５２３９６２）コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド (18)
【Ｆターム（参考）】
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