免疫調節ペプチドおよびその使用
炎症を処置するためのペプチド、ならびにその治療的な使用およびそれを使用する方法が開示される。伝達配列を含むペプチドは、ｔｏｌｌ様レセプターとの相互作用を介した、サイトカイン活性およびＴＮＦ−α分泌の阻害に有効である。中耳炎を処置する際の本化合物の有効性を図説しながら、実験が記載される。いくつかの実施形態において、本発明は：ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；またはｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２００９年６月５日に出願された米国仮特許出願第６１／１８４，４３８号、２００９年６月５日に出願された米国仮特許出願第６１／１８４，４５５号、２００９年６月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／２２０，７３８号、２００９年６月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／２２０，７４５号、および２００９年１０月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／２５６，３６４号への優先権を主張し、これらの米国仮特許出願の各々は、それらの全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
政府支援の研究に関する陳述
本発明に至る研究は、ＳＢＩＲ ＡＩ０６５０００、「Ｂａｃｔｅｒｉａｌ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｐｓｉｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓｔｒａｔｅｇｙ」、および、ＳＢＩＲ ＤＣ００５８８２、「Ｎｅｗ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｄｄｌｅ Ｅａｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ」に支援された。合衆国政府は、本発明に一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と呼ばれる保存されたモチーフを認識し、それに応答する。ＴＬＲは、細胞外のロイシンリッチリピートモチーフおよび細胞内のＴｏｌｌ／ＩＬ−１レセプター（ＴＩＲ）ドメインを特徴とする。ＰＡＭＰがＴＬＲの引き金を引くことにより、病原体を囲んで排除するように仕組まれた炎症性の免疫応答をもたらす一連の細胞内シグナル伝達事象が惹起される。ウイルスは、細胞内のＴＩＲシグナル伝達を効果的に阻害して炎症性の免疫応答を低減し得る、Ａ５２Ｒ（ワクシニアウイルスによって産生されるタンパク質）などの免疫調節タンパク質をコードする。
【０００４】
小児と成人の両方が、慢性中耳炎（ＣＯＭ）に罹患する。ＣＯＭに見られる慢性炎症は、内耳に影響を及ぼすことがあり、感音難聴に至ることがある。ＣＯＭは、深刻な医学的問題であり、現在、ＣＯＭを処置するために利用可能なステロイド以外の治療薬はない。ＣＯＭを有する多くの患者が、鼓膜チューブ（ｅａｒ ｔｕｂｅｓ）の外科的留置を必要としている。急性中耳炎（ＡＯＭ）と同様に、ＣＯＭを有する患者は、中耳内での激しい炎症反応の発生（残留体液の存在を含む）に起因して聴力が低下する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の要旨
いくつかの実施形態において、本発明は：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０００６】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜１８６のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６８のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを企図する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６９のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドの誘導体を企図し、ここで、その誘導体は、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御する方法を企図し、その方法は、この制御を必要とするかまたは欲している生物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む有効量の薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列（ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）をさらに含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置する方法を企図し、その方法は、処置を必要とするかまたは欲している動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置する方法を企図し、その方法は、処置を必要とするかまたは欲している生物にエアロゾル組成物を投与する工程を包含し、そのエアロゾル組成物は：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを含み、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善する方法を企図し、その方法は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下した動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、そのペプチドは、局所的に投与され、聴力は、普通レベルと変わらないレベルまで改善し、そして／または聴力は、そのペプチドの投与なしに聴力が改善するよりも速く改善する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置する方法を企図し、その方法は、処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、その医薬は、エアロゾル組成物を含み、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その動物は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、その医薬は、局所用の医薬である。
【００１８】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その医薬は、処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜への投与に適しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１：ＦＩＴＣ標識されたＰ１３による鼓膜の横断についてのアッセイ結果を表している。図１Ａ。明視野顕微鏡検査法により、中耳液中の細胞が示されている。図１Ｂ。蛍光顕微鏡検査法により、中耳液中の細胞と会合したＦＩＴＣ標識Ｐ１３が示されている。
【図２】図２：Ｐ１３は、中耳の炎症を減少させる。ＢＡＬＢ／ｃマウス（ＰＢＳ群においてｎ＝６およびＰ１３群においてｎ＝７）に、加熱殺菌されたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａを注射し、２４時間後に、Ｐ１３（１μｇ）の局所（点耳）投与によって処置し、細菌導入の７２時間後に組織学検査した。パネルＡ：中耳内の細胞数；パネルＢ：中耳内の体液の面積。注意：Ｐ１３処置群における細胞数が多い動物と体液の面積が広い動物は、同じ動物である。
【図３】図３：Ｐ１３の局所投与は、聴力閾値を有意に改善する。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、加熱殺菌されたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａを投与し、２４時間後にマウスをＰ１３（１μｇ）またはＰＢＳで局所（点耳）処置した。パネルＡ：細菌投与の５および１３日後にＡＢＲによって４、８、１６および３２ｋＨｚにおける聴力閾値を定量化した。処置後のＡＢＲからバックグラウンドＡＢＲを減算し、周波数を合計することによって、聴力損失を計算した。パネルＢ：すべての周波数において＞２０ＤＢの聴力を失った動物の数。動物の数は、括弧内の数字である。
【図４】図４：ペプチドＴ５２、Ｓ５およびＰ１３によるＴＮＦ−α分泌の阻害率。ＲＡＷ２６４．７細胞を４８ウェルプレートに３×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。２４時間後、その細胞を室温にて３つ組で様々な濃度のペプチドとともに１５分間インキュベートし、次いで、１μｇ／ｍｌ ＣｐＧ−ＯＤＮで刺激した。次いで、細胞を３７℃で４時間インキュベートし、上清を回収し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡによって測定した。ペプチドとともにインキュベートされた細胞からのＴＮＦ−α分泌をペプチド処理していないコントロール細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較することによって阻害率を計算した。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
参考としての援用
この明細書中で述べられるすべての刊行物、特許および特許出願は、個別の刊行物、特許または特許出願が、参考として援用されると明確かつ個別に示された場合と同程度に、本明細書中で参考として援用される。
【００２１】
発明の詳細な説明
自然炎症および病原体によって誘導される炎症の処置および管理は、深刻な臨床的難題である。ＴＬＲ／ＴＩＲシグナル伝達カスケードを標的にすることは、炎症を管理するアプローチの１つである；ゆえに、Ａ５２Ｒタンパク質またはＡ５２Ｒ様タンパク質に由来するペプチドを同定することによって、治療に役立つ応用法が見出される。本明細書中に開示される本発明のペプチドおよび薬学的組成物ならびにその使用およびそれを使用する方法は、炎症の管理に関する問題および炎症に関連する細胞経路の制御に関する問題に対して解決策を与える。
【００２２】
本開示全体を通じて、本発明のペプチドのアミノ酸残基は、当該分野で公知の標準的な省略形：ａ）一文字省略形（例えば、アルギニンに対するＲ、アスパラギン酸に対するＤ、バリンに対するＶなど）；およびｂ）３文字省略形（例えば、アルギニンに対するＡｒｇ、アスパラギン酸に対するＡｓｐ、バリンに対するＶａｌなど）の一方または両方によって言及される。本発明は、Ｌ型とＤ型の両方のアミノ酸残基を企図する。省略形が、Ｄ配置のアミノ酸残基についてのみ言及している場合、その省略形は、用語「Ｄ−」の後に続く（例えば、Ｄ−アルギニンに対するＤ−Ａｒｇ、Ｄ−アスパラギン酸に対するＤ−Ａｓｐ、Ｄ−バリンに対するＤ−Ｖａｌなど）。
【００２３】
Ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達
Ｔｏｌｌ様レセプター（「ＴＬＲ」）は、細菌、真菌、原生生物およびウイルス由来の構造を認識する保存された分子レセプターである。ＴＬＲの活性化は、一連の細胞内の事象を惹起し、炎症促進性サイトカインの産生を特徴とする自然免疫応答をもたらす（参考文献２〜９）。ＴＬＲシグナル伝達は、すべてのＴＬＲの間で保存されている細胞質のＴｏｌｌ／インターロイキン−１レセプター（ＴＩＲ）ドメインから起こる。いかなる理論にも限定されないが、ある特定の実施形態において、アダプター分子ＭｙＤ８８（ＴＩＲドメインとデスドメインの両方を備える）は、ＴＬＲおよびＩＲＡＫタンパク質のＴＩＲドメインと会合し得る。次いで、ＩＲＡＫのリン酸化（Ｐｈｏｓｐｏｒｙｌａｔｉｏｎ）によって、ＴＲＡＦ６と会合し得、その後、ＮＦ−κＢの活性化および炎症促進性サイトカインの分泌がもたらされ得る（参考文献１４、２２〜２５）。
【００２４】
ペプチド
ポックスウイルスファミリーのメンバーであるワクシニアウイルスは、免疫調節性タンパク質をコードすると証明されているＤＮＡウイルスである（参考文献１５〜１８）。これらのタンパク質の１つであるＡ５２Ｒは、ＴＩＲシグナル伝達カスケードの開始後のＮＦ−κＢの活性化を阻害すると示されている（参考文献１５および１８）。最近の研究から、Ａ５２Ｒは、ＴＲシグナル伝達を阻害し、ワクシニアウイルスのビルレンスに寄与すると証明された。ある特定の実施形態において、種々のＰＡＭＰに応答した細胞の活性化には、すべてのＴＬＲに共通のいくつかの細胞内分子（ＭｙＤ８８、ＩＬ−１レセプター関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）タンパク質のメンバー、ＴＮＦレセプター関連因子（ＴＲＡＦ６）およびＮＦ−κＢが挙げられるがこれらに限定されない）が関わる（参考文献１）。
【００２５】
Ｈａｒｔｅおよびその共同研究者ら（参考文献１８）は、Ａ５２Ｒタンパク質がＩＲＡＫ２とＴＲＡＦ６の両方に結合することによってＴＩＲシグナル伝達を阻害することを証明した。ワクシニアウイルス由来のＡ５２Ｒタンパク質の欠失によって、ウイルスのビルレンスが低下する。
【００２６】
ペプチド１３（「Ｐ１３」）配列（ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩ（配列番号３６９））は、ワクシニアウイルス由来のＡ５２Ｒ配列から得られた。Ｂｌａｓｔ検索解析から、ペプチドＰ１３が、Ａ５２Ｒ以外のワクシニアウイルス由来のより大きいタンパク質、牛痘ウイルス由来の２つのタンパク質およびウサギポックスウイルス由来の１つのタンパク質に見られる配列と１００％の相同性を有することが示された。ペプチド１３は、異なる系統の天然痘（痘瘡）ウイルス由来の３つの別個のタンパク質：ｉ）大痘瘡ウイルス（ｖａｒｉｏｌａ ｍａｊｏｒ ｖｉｒｕｓ）Ｉｎｄｉａ系統由来のＡ４６Ｌ；ｉｉ）小痘瘡ウイルス（ｖａｒｉｏｌａ ｍｉｎｏｒ ｖｉｒｕｓ）Ｇａｒｃｉａ由来のＡ４９Ｌ；およびｉｉｉ）大痘瘡ウイルス系統由来のＡ４４Ｌと著しい相同性を有すると示された。
【００２７】
Ｐ１３は、ｔｏｌｌ様レセプター依存性シグナル伝達を阻害する（全体が本明細書中で参考として援用されるＵＳ７，１９２，９３０およびＵＳ２００８／００３９３９５）。いくつかの実施形態において、活性増強のために置換され得るＰ１３配列内のアミノ酸残基を同定するために構造活性試験が行われ得る。
【００２８】
いくつかの実施形態において、本発明は、Ａ５２Ｒに由来するペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、耳用の薬学的組成物である。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３に由来する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体またはアナログである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７０）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＦＴＩＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７１）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩ（配列番号３６９）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＶＹＤＣＩ（配列番号３７２）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＫＬＴＶＹ（配列番号３７４）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０残基を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、７〜５０残基を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、伝達配列を含む。その伝達配列は、細胞の取り込みに関与し得る。伝達配列が存在することにより、細胞の取り込みが高まり得るか、または選択的な細胞の取り込みがもたらされ得る。いくつかの実施形態において、伝達配列は、ペプチドのＮ末端に存在する。いくつかの実施形態において、伝達配列は、ペプチドのＣ末端に存在する。
【００３１】
伝達配列の非限定的な例は、ポリアルギニン配列である。いくつかの実施形態において、そのポリアルギニン配列は、アルギニン残基を含む。いくつかの実施形態において、そのポリアルギニン配列は、アルギニン残基からなる。特定の実施形態において、伝達配列は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または２０個のアルギニン残基を含む。いくつかの実施形態において、伝達配列は、９個のアルギニン残基を含む。いくつかの実施形態において、伝達配列は、９個のアルギニン残基からなる。上記伝達配列のアルギニン残基は、Ｌ−アルギニン、Ｄ−アルギニン、またはＬ−アルギニンとＤ−アルギニンとの混合物であり得る。
【００３２】
表１は、本発明のペプチドの非限定的な例を提供している。例示的なペプチド１〜１３０は、Ａ５２Ｒに由来するペプチドである。ペプチド１〜１３０のうち、あるサブセットが、さらにＳ１〜Ｓ２２と命名される。他の例としては、Ｐ１３に由来するペプチド（「Ｔペプチド」）が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明は、表１に列挙されている任意のアミノ酸配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、表１に列挙されている任意のペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｓ１〜Ｓ２２のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｓ１〜Ｓ２２のいずれかのペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｔ１〜Ｔ５６のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｔ１〜Ｔ５６のいずれかのペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、伝達配列を有する。いくつかの実施形態において、その伝達配列は、ポリアルギニンである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１、１８２、２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｔ３、Ｔ１１、Ｔ２１、Ｔ３６、Ｔ３７、Ｔ５１またはＴ５２の配列を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｔ３−Ｒ９、Ｔ１１−Ｒ９、Ｔ２１−Ｒ９、Ｔ３６−Ｒ９、Ｔ３７−Ｒ９、Ｔ５１−Ｒ９またはＴ５２−Ｒ９の配列を含む。
【００３３】
【表１−１】
【００３４】
【表１−２】
【００３５】
【表１−３】
【００３６】
【表１−４】
【００３７】
【表１−５】
【００３８】
【表１−６】
【００３９】
【表１−７】
【００４０】
【表１−８】
【００４１】
【表１−９】
【００４２】
【表１−１０】
【００４３】
【表１−１１】
表１の説明：
ペプチドＴ３１およびＴ３１−Ｒ９におけるＸａａは、α−アミノ酪酸であり；
ペプチドＴ３２およびＴ３２−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−ノルバリンであり；
ペプチドＴ３０およびＴ３０−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−システイン（Ｓ−Ａｃｍ）であり；
ペプチドＴ２８およびＴ２８−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−システイン（Ｓ−カルボキシメチル）であり；そして
ペプチドＴ２９およびＴ２９−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−システイン（Ｓ−カルバミドメチル）である。
【００４４】
本発明のペプチドおよびそれを含む組成物は、細胞活性を調節するのに有効である。いくつかの実施形態において、細胞活性の調節は、細胞のシグナル伝達を調節することによって達成される。活性は、例えば、ｔｏｌｌ様レセプターによって制御され得る。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドおよび組成物は、サイトカイン分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドおよび組成物は、サイトカイン分泌を増強する。いくつかの実施形態において、サイトカイン分泌は、ｔｏｌｌ様レセプター依存性の刺激に応答する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、Ａ５２ＲまたはＰ１３に由来するペプチドの投与は、サイトカイン分泌を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％阻害し得る。いくつかの実施形態において、Ａ５２ＲまたはＰ１３に由来するペプチドの投与は、サイトカイン分泌を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％増強し得る。いくつかの実施形態において、サイトカイン分泌は、ＴＬＲ依存性のシグナル伝達の結果である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される活性は、ＴＮＦ−αの分泌である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増強を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増強を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増強を提供するのに有効である。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態は、９−アルギニン細胞導入配列または他のタイプの細胞導入配列に連結されたアミノ酸配列ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩ（配列番号３６９）を含むペプチドを企図する。ペプチドＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）は、ＴＬＲ活性化に応答したサイトカイン分泌を効果的に阻害する。そのペプチドは、ＴＬＲ刺激とは無関係に惹起される細胞の活性化に起因するサイトカイン分泌に対しては影響を有しなかった。滲出を伴う中耳炎（ＯＭＥ）のマウスモデルを用いたとき、ＢＡＬＢ／ｃマウスの中耳に、加熱不活性化された肺炎球菌を投与することによって、著しい炎症反応がもたされ、その炎症反応は、ペプチド処置によって劇的に減少した。実験は、そのペプチドがＬＰＳ誘導性の敗血症性ショックのマウスモデルにおいて炎症促進性メディエーターを減少させるだろうということも証明した。そのペプチドは、細菌感染またはウイルス感染によって惹起される慢性炎症の処置において有効である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、本発明は：
ａ）中耳液の量を約３０〜８０％減少させる；
ｂ）中耳液中の浸潤細胞数を約３０〜８０％減少させる；および
ｃ）耳の炎症を有するマウスの鼓膜の厚さを約３０〜８０％減少させる
のに有効な薬学的組成物を企図し、ここで、その組成物は、そのマウスに約０．１μｇ〜６０μｇの量で投与される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、耳用の薬学的組成物である。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、耳内投与用に製剤化される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、滴剤として製剤化される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、点耳薬として製剤化される。
【００４９】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、そのペプチドは、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニン（ｐｏｌｙ−ａｒｇｅｎｉｎｅ）ドメインを含むペプチド、または表１のペプチドである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ａ５２Ｒに由来する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｓ１〜Ｓ２２のペプチドである。本発明はまた、耳の炎症の処置を必要とするかまたは欲している動物における耳の炎症を処置する方法も企図し、その方法は、その動物に本発明の薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【００５０】
Ｐ１３のインビボにおける有効性は、中耳炎（ＯＭ）のマウスモデルを用いて証明された。ＯＭは、体液の蓄積を伴う中耳の炎症性疾患である。ＯＭは、白血球、マクロファージおよびマスト細胞の浸潤、ならびに炎症性メディエーターおよび酵素の放出を特徴とする（参考文献２１）。これらのメディエーターは、血管透過性および分泌活性を高め、炎症性事象のカスケードを惹起し、体液の蓄積およびムチンの分泌をもたらす（参考文献２６および２７）。ＯＭにおける炎症の惹起は、種々の因子によるものとされており、それらの因子としては、細菌またはウイルスの感染、エウスタキオ管の機能不全およびアレルギーが挙げられる。しかしながら、証拠から、大抵の場合、サイトカインの活性化をもたらす細菌が原因であることが指摘される。滲出液の最大４０％から細菌が培養され、研究によって、培養物中に生存可能な生物が存在しないことが多い滲出液のおよそ８０％において細菌ＤＮＡの存在がＰＣＲによって示された（参考文献２８）。中耳に侵入する最も一般的な細菌は、肺炎球菌、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（インフルエンザ菌）およびＭ．ｃａｔａｒｒａｌｉｓである。これらの３つの細菌は、急性中耳感染の８５％を占め（参考文献２７）、肺炎球菌が、最も多い原因である。はじめに、生細菌が急性の炎症を引き起こす（その炎症は、病原体を排除するように仕組まれている）。急性感染において、自然免疫応答の干渉は、潜在的に宿主にとって害になり得、さらに細菌が広がり得る。細菌の感染によって惹起された急性炎症は、自己回復する（ｓｅｌｆ−ｒｅｓｏｌｖｅ）か、または抗生物質によって処置可能である。慢性炎症は、生存不能な細菌の生成物によることが多い、免疫系の継続的な活性化を伴う。ＯＭはしばしば、長引くか、または抗生物質抵抗性であることから、生細菌の非存在下におけるＴＬＲ刺激が示唆される。
【００５１】
本明細書中に開示される実験においてＰ１３でマウスを処置することにより、中耳内の細菌によって誘導される炎症が著しく減少した。中耳における体液の蓄積、浸潤細胞および鼓膜の厚さはすべて、ペプチドでの処置によって劇的に減少した。多くの潜在的なＴＬＲリガンドを有する加熱不活性化された細菌の投与によって、複数のＴＬＲの活性化におそらく起因する炎症反応を中耳に誘導した。加熱不活性化された細菌を使用することにより、生細菌によって惹起される急性感染において起き得る炎症のペプチド阻害について、細菌の拡散を招く可能性なく調査することが可能になった。ペプチドＰ１３がインビボにおいてこの応答を著しく阻害する能力は、個別にまたは組み合わせて使用される複数のＴＬＲリガンドに応答したサイトカイン分泌の阻害を示すインビトロデータと一致する。これらの研究では、単一用量のペプチドが、正常なＢＡＬＢ／ｃマウスの中耳に、加熱不活性化された肺炎球菌と同時に投与された。そのインビトロデータは、ＴＬＲ活性化を惹起した数時間後にペプチドＰ１３が加えられたとしても、サイトカイン分泌が阻害されることも示した。
【００５２】
本明細書中に開示される本発明は、Ｐ１３および表１のペプチドに加えて、本発明のいずれかのペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログとしてより広く特徴づけられるペプチドも企図する。これらの用語は、排他的ではなく、それらの用語の１つ以上によって記載されるペプチドのことを記載すると一斉に企図され得る。多くのそのようなペプチド（それらのすべてが本明細書中にはっきりと開示されるとは限らない）は、ペプチドとして、製剤または薬学的組成物の構成要素として、ならびに本発明の方法および使用のエレメントとして、企図される。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログは、本発明のペプチドおよびポリアルギニン配列を含むペプチドを含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログは、１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログのアミノ酸残基のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０個が、Ｄ−配置を有する。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を有する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログは、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域に１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、Ｐ１３と類似であるかまたはＰ１３に由来するペプチドの領域は、２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかもしくは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域またはポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかもしくは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域またはポリアルギニン配列は、２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域とポリアルギニン配列の両方が、独立してＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域とポリアルギニン配列の両方が、独立して２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５６】
ポリアルギニン配列を含む本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログを含むペプチドを含むいくつかの実施形態において、Ｐ１３と類似であるかまたはＰ１３に由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、ポリアルギニン配列は、Ｌ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、ポリアルギニン配列は、１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｌ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５８】
ポリアルギニン配列を含む本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログを含むペプチドを含むいくつかの実施形態において、そのペプチドは、Ｄ−アミノ酸残基からなる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、不斉側鎖を含むアミノ酸残基、例えば、トレオニン、アロ−トレオニン、イソロイシンまたはアロ−イソロイシンを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｄ−アロ−トレオニン残基またはＤ−アロ−イソロイシン残基を含む。
【００６０】
疾患
病原体に対する炎症反応の惹起は、自然免疫応答の構成要素であり、感染を管理するように仕組まれている。しかしながら、炎症性メディエーター産生の持続は、慢性炎症、組織損傷および疾患発症に導き得る。ＰＡＭＰ／ＴＬＲ相互作用によって惹起されて細胞の活性化に至るシグナル伝達カスケードは、多くの疾患状態（中耳炎、内耳の炎症、敗血症、自己免疫疾患、喘息、心臓疾患および癌を含む）と関連している（参考文献２９）。ＯＭは、中耳の炎症性疾患である。ＯＭはしばしば、長引くか、または抗生物質抵抗性である；これらの特徴は、生細菌の非存在下におけるＴＬＲ刺激を示唆する。異常なＴＬＲシグナル伝達応答は、敗血症の一因となる過度の細胞活性化応答をもたらし得る（参考文献３０および３１）。
【００６１】
炎症は、自己免疫の局面でもあり、疾患（例えば、多発性硬化症、関節リウマチおよびインスリン依存性真性糖尿病）における組織破壊に何らかの役割を果たすと仮説が立てられている（参考文献３２）。自然免疫系の細胞は、獲得／適応免疫において不可欠な役割を有する。ＴＬＲタンパク質は、獲得免疫の発生に最も関連性があると考えられている抗原提示細胞のタイプである樹状細胞の成熟および活性化に関わっている（参考文献３３）。アレルギー性喘息は、適応免疫応答による慢性炎症性疾患の例であり、ＴＬＲシグナル伝達経路が、アレルギー性表現型の誘導期と関係付けられている（参考文献３０）。炎症細胞の活性化を高める細菌感染およびウイルス感染は、喘息およびＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）などの疾患における増悪の主因である（参考文献３０）。
【００６２】
いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる。いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせに関連する。いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせと相関する。いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせを伴う。いくつかの実施形態において、炎症を有する生物は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせも有する。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されるペプチドは、炎症を処置するために被験体に投与される。炎症の原因の非限定的な例としては、ウイルス、細菌または真菌の感染が挙げられる。いくつかの実施形態において、炎症は、自己抗原または他の任意の抗原に対する応答の結果である。いくつかの実施形態において、炎症は、抗自己抗原に対する応答の結果である。
【００６４】
いくつかの実施形態において、炎症は、耳の炎症を含む。その耳の炎症は、内耳および／または中耳の炎症であり得る。いくつかの実施形態において、炎症は、中耳炎を含む。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、中耳炎の処置のために使用される。
【００６５】
ＴＬＲ４シグナル伝達に欠陥のあるＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスは、慢性中耳炎（「ＣＯＭ」）を自然発症すると知られている。そのような内耳の炎症を有するマウスは、中耳性伝音難聴に加えて感音難聴を示し得る。ＣＯＭを有するＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスの中耳および内耳の組織学的検査は、中耳の粘膜面の肥厚、正円窓膜の肥厚、線維症、迷路炎およびエウスタキオ管の閉塞を実証した。これらの組織学的変化は、ＣＯＭおよび迷路炎の病歴を有する患者由来のヒト側頭骨にみられる組織学と相関する。そのマウスの研究から、ＣＯＭを有するＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスは、中耳にグラム陰性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ細菌を有することが示された。マウス実験における観察結果とヒトＣＯＭおよび迷路炎（ｌａｂｒｉｎｔｈｉｔｉｓ）患者における観察結果との共通点から、本明細書中に開示される本発明のペプチドまたは薬学的組成物を用いたマウス実験は、ヒト被験体における治療効果がどのようなものであり得るかを予測する結果を提供することが示唆される。
【００６６】
いくつかの実施形態において、中耳炎は、聴力損失または聴力低下に関連する。本発明のペプチドまたは（ｏｆ）その薬学的組成物の投与は、発症している生物の聴力を普通の聴力レベルに改善し得る。いくつかの実施形態において、治療有効量の薬学的組成物を、それを必要とするかまたは欲している生物に投与することによって、その生物の聴力が改善する（ここで、その生物は、中耳炎を有し、かつ聴力が低下している）。いくつかの実施形態において、上記ペプチドまたは薬学的組成物は、局所的に投与される。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドまたは（ｏｆ）その薬学的組成物を投与する際、聴力を失った生物は、そのペプチドまたは薬学的組成物の投与なしに聴力が改善し得る速度よりも速く聴力を回復させる。
【００６７】
いくつかの実施形態において、治療有効量の本発明のペプチドまたはそれを含む薬学的組成物の投与を必要とするかまたは欲している中耳炎を有する生物にそれを投与することにより、中耳炎の症状の治療的な軽減が提供される。中耳炎の症状の非限定的な例としては、耳痛（疼痛）、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢が挙げられる。いくつかの実施形態において、症状は、疼痛である。
【００６８】
いくつかの実施形態において、炎症は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症を含む。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症の処置のために使用される。
【００６９】
いくつかの実施形態において、炎症は、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬を含む。いくつかの実施形態において、関節炎は、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎を含む。いくつかの実施形態において、皮膚炎は、海綿状皮膚炎（ｓｐｏｎｇｉｏｔｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、小児湿疹（ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｅｃｚｅｍａ）、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ）皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹を含む。いくつかの実施形態において、乾癬は、プラーク乾癬（ｐｌａｑｕｅ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、屈側性乾癬（ｆｌｅｘｕｒａｌ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態において、投与は、局所適用を含む。いくつかの実施形態において、投与は、皮膚、毛、外耳、鼓膜、鼻腔、頬側前庭または舌下腔（ｓｕｂｌｉｎｇｕａｌ ｃａｖｉｔｙ）への局所適用を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドおよびそれを含む薬学的組成物は、副鼻腔炎の処置に有効である。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物の投与を必要とするかまたは欲している生物へのその投与は、副鼻腔炎またはその症状に対して治療効果を提供する。副鼻腔炎の症状の非限定的な例としては、鼻詰まりもしくは鼻水、鼻汁、血性鼻汁、くしゃみ、咳嗽、鼻痛、頭痛、後鼻漏、顔面掻痒（ｉｔｃｈｙ ｆａｃｅ）、嗅覚もしくは味覚の低下、口臭、発熱、悪寒、歯痛または顔面痛が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、エアロゾル、蒸気、スプレーまたは噴霧として投与される。
【００７２】
治療的な用途
本発明の薬学的組成物で処置される「患者」、「被験体」または「宿主」は、ヒトまたは非ヒト動物のことを意味し得る。いくつかの実施形態において、被験体は、ヒトである。本発明のペプチドは、上記のような疾患および障害（例えば、炎症を伴うものであるがこれに限定されない）の処置において有用である。１つの実施形態において、本発明のペプチドおよび薬学的組成物は、任意の数の用途（例えば、患者の任意の疾患または他の処置可能な状態の処置が挙げられる）のための医薬の製造において使用され得る。
【００７３】
「治療効果」は、この用語が本明細書中で使用されるとき、治療的な利点および／または予防的な利点を包含する。治療的な利点とは、根底にある処置されている障害の根絶または回復のことを意味する。また、治療的な利点は、根底にある障害になおも患者が苦しめられているかもしれないが、その患者において改善が認められるような、その根底にある障害に関連する生理学的症状の１つ以上の根絶または回復によって達成される。予防的な利点のために、上記組成物は、たとえ特定の疾患の診断がなされていないかもしれないにしても、この疾患を発症するリスクのある患者またはある疾患の生理学的症状の１つ以上を報告している患者に投与され得る。予防効果には、ある疾患もしくは状態の出現を遅延させることもしくは無くすこと、ある疾患もしくは状態の症状の発生を遅延させることもしくは無くすこと、ある疾患もしくは状態の進行を遅くすること、停止することもしくは逆行させること、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。
【００７４】
投与
ペプチドを含む薬学的組成物は、薬学的賦形剤または薬学的希釈剤とともに患者に投与され得る。適当な薬学的賦形剤または薬学的希釈剤の非限定的な例としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、穀粉、胡粉、シリカゲル、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、緩衝水、リン酸緩衝食塩水などが挙げられる。これらの組成物は、滴剤、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、散剤、徐放製剤などの形態をとり得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、点耳薬である。別の好ましい実施形態において、任意の形態のペプチドを含む組成物は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ剤、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムならびに鉱油をはじめとした適当な賦形剤および希釈剤を用いてさらに調節され得る。上記製剤は、さらに滑沢剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、保存剤、甘味剤または香味剤を含み得る。上記組成物は、単位剤形として製剤化され得る（各投薬量は例えば約１ｎｇ〜１０００ｍｇの上記ペプチドを含む）。いくつかの実施形態において、用量は、１００〜１０００ｍｇの上記ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、用量は、１００〜５００ｍｇの上記ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、用量は、２００〜３００ｍｇの上記ペプチドを含む。用語「単位剤形」とは、ヒト被験体および他の哺乳動物に対する単位投薬量として適する物理的に分離した単位のことを指し、各単位は、適当な薬学的希釈剤または薬学的賦形剤とともに、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性な材料を含む。これらは、薬学的に許容され得る希釈剤または賦形剤とともにヒト、家庭内のペット、家畜または他の動物に単位剤形で投与され得る。投与は、局所的、耳内、非経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼、脳室内、嚢内、脊髄内、槽内、腹腔内、鼻腔内、エアロゾル、坐剤によるもの、または経口投与であり得る。経口使用のための製剤としては、無毒性の薬学的に許容され得る賦形剤との混合物中に活性成分を含む錠剤が挙げられる。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、滑沢剤、滑剤および接着防止剤（ａｎｔｉａｄｈｅｓｉｖｅ）（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油またはタルク）であり得る。
【００７５】
本発明の活性な治療用製剤は、非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）、皮下、皮内、筋肉内または静脈内投与用の、例えば、等張性緩衝液、水性緩衝液または食塩緩衝液において再構成することが意図された凍結乾燥形態で提供され得る。本発明の主題の組成物はまた、開口部用の、例えば、経口、耳内、経鼻または舌下投与用の液体調製物（例えば、懸濁液、シロップ剤またはエリキシル剤）によって、治療用ペプチドを必要とする患者に投与され得る。本発明の主題の組成物はまた、経口投与用の製剤のために調製され得る（例えば、カプセル、錠剤、丸剤など、ならびにチュアブル固体製剤）。本発明の主題の組成物はまた、経皮投与用のクリーム（例えば、液体、粘稠性液体、ペーストまたは粉末）として調製され得る。本発明の主題の組成物はまた、エアロゾル化成分を含むかまたは含まない、肺投与用の散剤として調製され得る。本発明の組成物は、滴剤、例えば、点耳薬として調製され得る。
【００７６】
ここに開示されている組成物は、経口、耳内、鼻腔内、舌下、十二指腸内、皮下、頬側、結腸内、直腸、膣、粘膜、肺、経皮、皮内、非経口、静脈内、筋肉内および眼球への形態での送達、ならびに血液脳関門を越えることができる形態での送達のために使用され得る。
【００７７】
投薬量
本発明の任意のペプチドの投薬量は、患者の症状、年齢および体重、処置されるかまたは予防される障害の性質および重症度、投与経路、ならびに組成物の形状に応じて変動し得る。主題の任意の製剤は、単一用量または分割量で投与され得る。本発明のペプチドに対する投薬量は、当業者に公知の手法または本明細書中で教示されるような手法によって容易に決定され得る。また、本発明は、２つ以上の主題のペプチドの混合物ならびに他の治療薬を企図する。
【００７８】
ある特定の実施形態において、主題のペプチドの投薬量は、通常、体重１ｋｇあたり約０．０１ｎｇ〜約１０ｇの範囲、詳細には、１ｋｇあたり約１ｎｇ〜約０．１ｇの範囲、より詳細には、１ｋｇあたり約１００ｎｇ〜約１０ｍｇの範囲であり得る。
【００７９】
有効な用量または有効量、および上記製剤の投与のタイミングに対して起こり得る任意の影響が、本発明の任意の特定のペプチドに対して特定される必要があり得る。これは、動物の１つ以上の群を用いるか、または適切な場合はヒトにおける治験において、本明細書中に記載されるような通例の実験によって達成され得る。任意のペプチドおよび方法の処置または予防に関する有効性は、サプリメントを投与して、そして目的の新生物に関連する１つ以上の指標を測定し、これらの指標の処置後の値を処置前の同じ指標の値と比較することによって、その投与の影響を評価することによって評価され得る。
【００８０】
所与の患者に最も効果的な処置をもたらし得る任意の特定のペプチドの投与の正確な時間および量は、特定のペプチドの活性、薬物動態およびバイオアベイラビリティ、患者の生理学的状態（年齢、性別、疾患のタイプおよびステージ、全般的な身体的状態、所与の投薬量に対する応答性、ならびに投薬形態を含む）、投与経路などに依存し得る。本明細書中に示される指針、例えば、投与の最適な時間および／または量を決定することを用いることにより、処置が最適化され得る（この最適化には、被験体をモニタリングすることならびに投薬量および／またはタイミングを調整することからなる単なる通例の実験法が必要なだけである）。
【００８１】
被験体が処置されながら、２４時間のあいだの所定の時間に、関連性のある１つ以上の指標を測定することによってその被験体の健康状態がモニターされ得る。サプリメントを含む処置、投与の量、時間、および製剤は、そのようなモニタリングの結果に従って最適化され得る。患者は、同じパラメータを測定することによって改善の程度を判定するために定期的に再評価され得、１回目のそのような再評価は、典型的には、治療開始から４週間の終わりに行い、その後の再評価は、治療中の４〜８週間ごと、次いでその後は、３ヶ月ごとに行う。治療は、数ヶ月間または数年間にもわたって継続されることがあり、最低１ヶ月が、ヒトの場合の代表的な治療の長さである。投与されるペプチドの量の調整、および場合により、投与の時間の調整は、これらの再評価に基づいて行われ得る。
【００８２】
処置は、上記ペプチドの最適な用量未満の、より少ない投薬量から開始され得る。その後、投薬量は、最適な治療効果に達するまで少量ずつ増加され得る。
【００８３】
本発明のいくつかのペプチドまたは他のペプチドを組み合わせた使用は、種々の構成要素の作用の開始および持続時間が補完的（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）であり得るので、任意の個別の構成要素に対する必要な投薬量を減少させ得る。そのような併用療法では、種々のペプチドが、一緒にまたは別個に、同時にまたはその日のうちの異なる時点において、送達され得る。
【００８４】
主題のペプチドの毒性および治療効果は、細胞培養物または例えばＬＤ５０およびＥＤ５０を測定するための実験動物において、標準的な薬学的手順によって測定され得る。毒性の副作用を示すペプチドを使用してもよいが、副作用を減少させるために、それらのペプチドが所望の部位を標的にする送達系を設計するように取り計らうべきである。
【００８５】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトにおいて使用するためのある範囲の投薬量を定める際に用いられ得る。任意のサプリメントの投薬量またはその中の任意の構成要素の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたはまったくなく、ＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に置かれる。その投薬量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。本発明のペプチドの場合、治療的に有効な用量は、はじめに細胞培養アッセイから推定され得る。細胞培養物において測定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する被験ペプチドの濃度）を含む循環血漿濃度の範囲を達成する用量が動物モデルにおいて製剤化され得る。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定され得る。
【００８６】
製剤
本発明のペプチドに基づく組成物は、当該分野で周知であるようなそれらの意図される用途に応じて、様々な手段によって投与され得る。例えば、本発明の組成物が経口的に投与される場合、それらは、錠剤、カプセル、顆粒剤、散剤またはシロップ剤として製剤化され得る。あるいは、本発明の製剤は、注射（静脈内、筋肉内または皮下）、滴剤注入（ｄｒｏｐ ｉｎｆｕｓｉｏｎ）調製物または坐剤として非経口的に投与され得る。上記ペプチドに基づく組成物はまた、エアロゾル化賦形剤を加えてまたは加えずに、当該分野で公知の標準的な手法を用いてその組成物を１〜５μｍの粒子にエアロゾル化することによって肺の深くにまで投与され得る。眼の粘膜への経路による適用の場合、本発明の組成物は、点眼薬または眼軟膏として製剤化され得る。耳用の薬学的組成物は、内面的または外面的に耳に適用するために、点耳薬、軟膏、クリーム、液体、ゲルまたは膏薬として製剤化され得る。これらの製剤は、従来の手段によって調製され得、所望であれば、それらの組成物は、任意の従来の添加物（例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、可溶化剤、懸濁補助剤、乳化剤またはコーティング剤）と混合され得る。
【００８７】
本発明の製剤では、湿潤剤、乳化剤および潤滑剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム）ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤ならびに酸化防止剤が、製剤化された薬剤中に存在し得る。
【００８８】
主題のペプチドに基づく組成物は、経口、耳内、経鼻、局所（頬側および舌下を含む）、直腸、膣、エアロゾルおよび／または非経口投与に適していることがある。上記ペプチドに基づく組成物の製剤は、単位剤形として都合良くもたらされ得、薬学分野で周知の任意の方法によって調製され得る。単一用量を生成する他の賦形剤と組み合わされ得る組成物の量は、処置される被験体および特定の投与様式に応じて変動し得る。
【００８９】
経口投与に適している製剤は、カプセル、カシェ剤、丸剤、錠剤、舐剤（風味が付いた基剤、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカントを用いる）、散剤、顆粒剤の形態、または水性もしくは非水性の液体における溶液もしくは懸濁液としての形態、または水中油型もしくは油中水型の液体エマルジョンとしての形態、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤としての形態、またはトローチ剤（不活性な基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア）を用いる）としての形態（各々、活性成分として所定量の主題の組成物を含む）であり得る。本発明の組成物は、ボーラス、糖剤またはペーストとしても投与され得る。
【００９０】
経口投与用の固体剤形（カプセル、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）において、主題のペプチド組成物は、１つ以上の薬学的に許容され得るキャリア（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）および／または以下のもの：（１）充填剤または増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸）；（２）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア）；（３）吸湿剤（例えば、グリセロール）；（４）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩および炭酸ナトリウム）；（５）溶解遅延剤（例えば、パラフィン）；（６）吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）；（７）湿潤剤（例えば、アセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）；（８）吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）；（９）潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物）；および（１０）着色剤のうちのいずれかと混合される。カプセル、錠剤および丸剤の場合、ペプチド組成物は、緩衝剤も含み得る。同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖のような賦形剤、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを用いる軟および硬ゼラチンカプセルにおける充填剤としても使用され得る。
【００９１】
錠剤は、必要に応じて１つ以上の副成分とともに、圧縮または成形によって作製され得る。圧縮された錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシルメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤を用いて調製され得る。成形された錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らされた主題の組成物の混合物を適当な機械において成形することによって作製され得る。錠剤および他の固体剤形（例えば、糖衣錠、カプセル、丸剤および顆粒剤）は、必要に応じて、溝がつけられ得るか、またはコーティングおよびシェル（例えば、腸溶コーティングおよび医薬品の製剤化の分野において周知の他のコーティング）とともに調製され得る。
【００９２】
経口投与用の液体の剤形は、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲル、溶液、懸濁液、シロップ剤およびエリキシル剤を含む。その液体投薬のペプチド製剤は、当該分野において一般に使用されている不活性な希釈剤（例えば、水または他の溶媒）、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含み得る。
【００９３】
上記ペプチド製剤の懸濁液の投薬量は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物のような懸濁剤を含み得る。
【００９４】
直腸投与用または膣投与用のペプチド製剤は、１つ以上の適当なキャリアおよび他の賦形剤（例えば、カカオバター、ポリエチレングリコール、坐剤用ろうまたはサリチレートを含む）とペプチドを混合することによって調製され得かつ室温では固体であるが体温では液体であるがゆえに体腔内で融解してペプチドを放出する、坐剤として提供され得る。膣投与に適した製剤としては、適切であると当該分野で公知である賦形剤を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡沫またはスプレー製剤が挙げられる。
【００９５】
主題の組成物の経皮的投与用のペプチド投薬製剤としては、滴剤、散剤、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入剤が挙げられる。活性な成分は、滅菌条件下で、薬学的に許容され得るキャリアおよび必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤または噴射剤と混合され得る。
【００９６】
軟膏、ペースト、クリームおよびゲルは、主題の組成物に加えて、賦形剤（例えば、動物性脂肪および植物性脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物）を含み得る。本発明のペプチド組成物は、乳児用のウェットティシューの形態でもあり得る。
【００９７】
散剤およびスプレーは、主題の組成物に加えて、賦形剤（例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物）を含み得る。スプレーは、さらに、慣例の噴射剤（例えば、クロロフルオロヒドロカーボン）および揮発性の非置換型炭化水素（例えば、ブタンおよびプロパン）を含み得る。
【００９８】
あるいは、本発明のペプチド組成物は、エアロゾルによって投与され得る。これは、本化合物を含む水性エアロゾル、リポソーム調製物または固体粒子を調製することによって達成される。非水性（例えば、フルオロカーボン噴射剤）懸濁液も使用され得る。音波噴霧器は、主題の組成物中に含まれるペプチドを分解し得る剪断へのそのペプチドの曝露を最小にするので、音波噴霧器を使用してもよい。
【００９９】
通常、主題の組成物の水性の溶液または懸濁液を従来の薬学的に許容され得るキャリアおよび安定剤とともに製剤化することによって、水性エアロゾルが生成される。それらのキャリアおよび安定剤は、特定の主題の組成物に関する必要条件によって変化するが、それらとしては、代表的には、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎｓ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓまたはポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような無害のタンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシンなどのアミノ酸、緩衝剤、塩、糖または糖アルコールが挙げられる。エアロゾルは、一般に、等張性の溶液から調製される。
【０１００】
非経口投与に適した本発明の薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容され得る滅菌された等張性の水性もしくは非水性の溶液、分散液、懸濁液もしくはエマルジョン、または、使用直前に、滅菌された注射可能な溶液もしくは分散液に再構成され得る滅菌された粉末とともに主題の組成物を含み、それらは、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、その製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質、または懸濁剤もしくは増粘剤を含み得る。
【０１０１】
本発明の薬学的組成物において使用され得る適当な水性および非水性のキャリアの例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適当な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、分散液の場合は必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって、維持され得る。
【実施例】
【０１０２】
実施例１：材料および方法
天然の配置のペプチド：Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓの独占所有権の独自の並列アレイ合成プラットフォームを用いてＭｉｍｏｔｏｐｅｓがペプチドを合成した。各ペプチドは、本発明のアミノ酸配列、および必要に応じて、そのペプチドのＣ末端に位置する、細胞の取り込みを促進する９残基アルギニン細胞導入配列を含んでいる。それらのペプチドは、表１に示されている。
【０１０３】
Ｌ−アミノ酸残基を有するペプチドを合成するように、Ｄ−アミノ酸残基を有するペプチドを合成する。ペプチドを構築する自動システムにおいて使用するための、適切な保護基を有するＤ−アミノ酸は、商業的に入手可能である。本明細書中に記載されるペプチドは、すべてＬ−アミノ酸から作製され得るか、すべてＤ−アミノ酸から作製され得るか、またはその両方の任意の割合の混合物から作製され得る。ペプチドが、少なくとも１つのＬ−アミノ酸残基および少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む場合、そのペプチドは、立体化学的に混合されていると考えられる。同様に、導入タグも、すべてＬ−アミノ酸から作製され得るか、すべてＤ−アミノ酸から作製され得るか、またはその両方の任意の割合の混合物から作製され得る。立体化学だけが異なるペプチドは、同じレセプターまたは異なるレセプターにおいて、異なる特性、利点、特異性、親和性および活性を有し得る。一部の例では、立体化学だけが異なるペプチドは、似た特異性および活性を示し得る。
【０１０４】
各ペプチドは、ＦＩＴＣ標識（フルオレセインイソチオシアネート）ありとなしの両方で構築される。ＦＩＴＣ標識されたペプチドは、ＦＡＣＳ解析のために使用される。ＦＩＴＣ標識を欠くペプチドは、インビトロにおける阻害アッセイおよびインビボにおける処置研究のために使用される。
【０１０５】
試薬：ヌクレアーゼ抵抗性のリン酸化オリゴヌクレオチドは、Ｏｌｉｇｏｓ Ｅｔｃ．，Ｉｎｃ．から購入した。その配列は、５’−ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ−３’（配列番号３７７）（ＣｐＧ−オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）だった。ＴＮＦ−αアッセイは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入したアッセイキットを用いて行った。マウスのＩＬ−１αおよびＴＮＦ−αは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。ＰＭＡ（酢酸ミリスチン酸ホルボール）およびＬＰＳ（リポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ））は、Ｓｉｇｍａから購入した。ＴＬＲリガンドであるフラジェリン、ザイモサンおよびＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから購入した。サイトカインアッセイは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入したアッセイキットを用いて行った（加熱不活性化された肺炎球菌は、Ｄｒ．Ｔｈｏｍａｓ ＤｅＭａｒｉａ，Ｔｈｅ Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，Ｏｈｉｏからの厚意によって寄贈されたものである）。
【０１０６】
細胞株および細胞培養：ＲＡＷ２６４．７（マウス単球／マクロファージ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内で培養し、１０％（ｖ／ｖ）加熱不活性化ＦＣＳ、１．５ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充されたＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で生育した。
【０１０７】
サイトカイン分泌：ＲＡＷ２６４．７細胞を４８ウェルプレートに１．５×１０５細胞／ウェル〜３×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。２４時間後、その細胞を、様々なＰＡＭＰによって１８時間活性化する前、活性化と同時に、または活性化の後、室温にて３つ組で様々な濃度のペプチドとともにインキュベートした。無細胞上清をサイトカインについてＥＬＩＳＡによって４つ組で解析した。ＲＡＷ２６４．７細胞をＣｐＧ−ＯＤＮ（１μｇ／ｍｌまたは１．２５μｇ／ｍｌ）、ＬＰＳ（約１ｎｇ／ｍｌ）、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）（約１０μｇ／ｍｌ）、フラジェリン（約５ｎｇ／ｍｌ）またはザイモサン（約１０μｇ／ｍｌ）で刺激した。各ＰＡＭＰを用いて用量反応曲線を得ることにより、最適な刺激濃度を決定した。ＣｐＧ−ＯＤＮ刺激については、細胞を３７℃で４時間インキュベートし、上清を回収し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡによって測定した。類似のアッセイを用いて、ｔｏｌｌレセプターシグナル伝達によって媒介される炎症性疾患に関与する任意のサイトカインを測定することができる。
【０１０８】
フローサイトメトリー：ペプチドの内部移行を定量するＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェアを使用するフローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｎ，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）によって細胞を解析する。７−ＡＡＤ（７−アミノ−アクチノマイシンＤ）染色に基づいて死細胞を排除するようにゲートを設定する。ＦＩＴＣ標識ペプチドの細胞表面への結合に起因する蛍光（Ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｎｃｅ）は、トリパンブルーを用いて消光される。得られたデータは、バックグラウンドの自己蛍光が差し引かれた幾何平均蛍光単位（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｕｎｉｔｓ）（Ｆ）である。
【０１０９】
免疫ブロット法：ＲＡＷ２６４．７細胞（６×１０５）を１２ウェルプレートに一晩プレーティングする。細胞を、試験されるペプチドまたはコントロールスクランブルペプチドとともに室温で１５分間インキュベートし、次いで、１５または３０分間、培地またはＬＰＳ（１ｎｇ／ｍｌ）で刺激する。細胞を溶解し、タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリルアミドゲル電気泳動）（１２％）によって分画する。Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩｋＢ−α（Ｓｅｒ３２）抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いて免疫ブロット法を行い、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化二次抗体を用いて検出し、化学発光によって可視化する。Ｅｐｓｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ６３６スキャナーに連結されたＮｕｃｌｅｏ Ｔｅｃｈ Ｇｅｌ Ｅｘｐｅｒｔソフトウェアを用いてバンド強度を測定し、強度／面積として表現する。
【０１１０】
細胞生存率：ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造者の指示書に従って使用して生存率について細胞をアッセイした。簡潔には、細胞を９６ウェルプレートに播種し、３７℃の加湿５％ＣＯ２雰囲気内で一晩インキュベートした。サンプルをアッセイする準備が整ったら、２０μｌの試薬を各ウェルに加え、３７℃の加湿５％ＣＯ２雰囲気内で１．５時間インキュベートした。ＥＬｘ８００吸光度マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して４９０ｎｍにおける吸光度を読み、データを、Ｇｅｎ５ソフトウェア（ＢｉｏＴｅｋ）を用いて解析した。いくつかのペプチドを、ある範囲の濃度にわたるトリパンブルー排除染色によって細胞生存率に対する効果について評価し、次いで、各ペプチドを、細胞生存率に対して効果が無かった最も高い濃度でサイトカイン阻害について試験した。
【０１１１】
実施例２：ＣｐＧ−ＯＤＮによって誘導されるサイトカイン分泌に対するペプチドの効果
ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激に応答したＲＡＷ２６４．７細胞からのＴＮＦ−αの分泌に対するいくつかのペプチドの効果を研究した。はじめに、各ペプチドを３つの濃度、３７μＭ、２２．２μＭおよび１１．１μＭで試験した。３つすべての用量においてＴＮＦ−α分泌の５０〜１００％阻害を証明する１７個のペプチドが、示される（表２）。次いで、これらのペプチドを１１．１μＭ、７．４μＭおよび３．７μＭにおいて試験した（表３）。それらのペプチドは、続いて７．４μＭでも阻害活性を証明し、それらのペプチドのうちの１２個は、３．７μＭでも阻害活性を有した。ＴＮＦ−α阻害について試験された濃度において、各ペプチドに対する細胞生存率を調べた。細胞生存率の低下は証明されなかった。
【０１１２】
【表２−１】
【０１１３】
【表２−２】
【０１１４】
【表３−１】
【０１１５】
【表３−２】
実施例３：ＣｐＧ−ＯＤＮによって誘導されるサイトカイン分泌に対するペプチドの効果
様々なＴ−ペプチドによるＴＮＦ−α分泌の阻害を調べた。ＲＡＷ２６４．７細胞を４８ウェルプレートに３×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。２４時間後、その細胞を、室温にて３つ組で１５分間、様々な濃度のペプチドとともにインキュベートし、次いで、１．２５μｇ／ｍｌのＣｐＧ−ＯＤＮまたは１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した。次いで、細胞を３７℃で４時間インキュベートし、上清を回収し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡによって測定した。ペプチドとともにインキュベートされた細胞からのＴＮＦ−α分泌をペプチド処理していないコントロール細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較することによって阻害率を計算した。ペプチドＴ３、Ｔ１１、Ｔ２１、Ｔ３６、Ｔ３７、Ｔ５１およびＴ５２による阻害を、Ｃ末端に９個のアルギニン残基の配列を有するＰ１３のアナログ（Ｐ１３−Ｒ９）による阻害と比較した。（表４）。
【０１１６】
【表４】
実施例４：Ｐ１３に由来するペプチドの構造活性試験
Ｐ１３内の残基の改変に対する許容度を測定するために、構造活性相関（ＳＡＲ）を調査した。ＳＡＲに使用したペプチドには、配列番号３１７〜３６８の活性を研究するために使用された配列番号１３１〜１８２が含まれる。以下の構造的改変を有するペプチドを作製し、活性について、Ｐ１３に対して評価した：
１．Ｎ末端および／またはＣ末端の残基の欠失；
２．各残基におけるアラニンスキャン；
３．同じ位置における同様の電荷を有する残基（例えば、同じ位置におけるＡｓｐまたはＧｌｕ；同じ位置におけるＬｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ）の比較；
４．同じ位置におけるヒドロキシル化された側鎖（例えば、同じ位置におけるＳｅｒまたはＴｈｒ）の比較；
５．同じ位置における芳香族側鎖（例えば、同じ位置におけるＰｈｅ、Ｔｙｒ、ＨｉｓまたはＴｒｐ）の比較；
６．硫黄含有側鎖（例えば、ＭｅｔおよびＣｙｓ）による側鎖の置き換え；
７．分枝状脂肪族側鎖（例えば、Ｌｅｕ、ＩｌｅおよびＶａｌ）の保存的置き換え；
８．代替残基を含めることによる構造の破壊；
９．逆の配列およびスクランブル配列；ならびに
１０．二量体化。
【０１１７】
上記のＳＡＲから、ある特定の置換によって、Ｐ１３の活性よりも優れた活性を有するペプチドがもたらされることが明らかになった。少なくとも５つの異なる場合における単一アミノ酸の置換および少なくとも２つの場合における２つ以上のアミノ酸の置換によって、優れた活性が得られた。これらの７つのペプチドは、配列番号１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１および１８２である。この発見は、ＳＡＲ誘導体の活性がＰ１３の活性に匹敵するかまたはそれよりも低いと予想されるという点において予想外だった。活性は、ＣｐＧによってＲＡＷ２６４．７細胞を刺激した後のＴＮＦ−αの阻害と定義された。
【０１１８】
実施例５：中耳炎に対するペプチドの効果
中耳炎の誘導：約８〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ（Ｂａｇｇアルビノ）マウスをキシラジンおよびケタミン（約０．１ｍｇ／３０ｇ体重）の皮下注射で麻酔し、感染または穿孔がないことを確かめるためにそのマウスの耳を手術用顕微鏡下で調べる。細菌を加えないときのペプチドの効果を測定するために、１つの群の動物の一方の耳にＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）および反対の耳に約１０μＭの表１のペプチドを注射する。第２の群の動物の一方の耳に約５．０μｌのＰＢＳ＋加熱不活性化された肺炎球菌（約１０９ＣＦＵ／ｍｌ）および反対の耳に約５．０μｌのペプチド（約１０μＭ）＋加熱不活性化された肺炎球菌（約１０９ＣＦＵ／ｍｌ）を投与する。注射は、鼓膜を通り過ぎて行う。細菌注射の約３日後に動物を殺し、組織を組織学的に処理することにより中耳の疾患を評価する。１）中耳に存在する体液の面積；２）中耳液中の細胞の数；および３）注射部位から離れた点の鼓膜（ＴＭ）の厚さを測定することによって炎症を定量化する。コントロール群として役立てるために、測定された組織学的パラメータの各々について、ＰＢＳ単独を注射されたマウス（ｎ＝１８）からデータを得る。疾患の誘導は、ペプチドなしで肺炎球菌を注射された耳が、中耳の炎症について評価された３つのパラメータ：体液の面積、細胞数、鼓膜の厚さのうち少なくとも２つにおいてコントロールＰＢＳ処置マウスよりも少なくとも２標準偏差増加を示した場合、陽性と定義される。
【０１１９】
組織の回収：実験の処置の終わりに、組織学検査のためにマウスを殺し、組織を回収する。マウスに麻酔薬を過剰投与し、約１．０ｍｌの食塩水に続いて約２０ｍｌの固定液（約０．１Ｍリン酸緩衝液中の約１．５％パラホルムアルデヒド、約３％グルタルアルデヒド）を心臓内に灌流させる。中耳は、頭蓋底によって互いにつながった状態で無傷のまま放置するので、組織学的検査および切断のために両耳が一緒に処理される。これにより、組織学的包埋、切断、染色および解析のすべてを両側同時に行うことができ、それにより、その後の定量的解析に対する処理の変動（ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｖａｒｉａｂｌｅｓ）の任意の影響が減少する。中耳を脱灰し、グリコールメタアクリレートプラスチック内に包埋し、約５μｍの薄片に切り、スライドガラス上に連続的に載せ、染色し、カバーガラスをかぶせる。
【０１２０】
組織病理学的解析：鼓膜臍部（ｕｍｂｏ）および岬角（ｐｒｏｍｏｎｔｏｒｙ）のレベルの連続した３つの切片を、１）中耳に存在する体液の面積；および２）中耳液中の細胞の数；および３）鼓膜の厚さの測定のために選択する。各測定は、１検体あたり３つの連続した切片において行う。
【０１２１】
統計解析：細菌を加えないときのペプチドの効果を測定するために、動物の一方の耳にＰＢＳ単独および他方の耳に約１０μＭペプチドを注射する。３つの組織学的パラメータ：１）中耳に存在する体液の面積；２）中耳液中の細胞の数；および３）鼓膜の厚さの各々についてのＰＢＳ単独の効果をペプチドの効果と比較する、対応のあるｔ検定を行う。これらの動物を用いて、上に記載した組織学的パラメータの各々について、一方の耳におけるペプチド＋肺炎球菌の効果を、反対の耳における肺炎球菌単独の効果と比較する対応のあるｔ検定を行う。
【０１２２】
実施例６：敗血症性ショックに対するペプチドの効果
マウスの敗血症性ショックモデルにおける炎症性メディエーターの阻害。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＰＢＳ、約１００μｇ／マウス／２５０μｌのＬＰＳ、または約１００μｇのＬＰＳ＋様々な用量のペプチドを腹腔内注射する。処置の約２および約６時間後に血清を採取し、ＥＬＩＳＡによって炎症促進性サイトカインＭＩＰ−２およびＴＮＦ−α、ならびに可溶性ＩＣＡＭ−１について評価する。
【０１２３】
実施例７：マウス中耳に対するＰ１３の効果
細菌を加えないときにペプチドによって引き起こされる効果に関するアッセイ
５匹のマウスの一方の耳にＰＢＳおよび反対の耳に１０μＭのペプチドＰ１３を注射した。３日後、動物を殺し、中耳を包埋し、薄片に切り、染色し、体液の面積、浸潤細胞の数、および鼓膜の厚さについて評価した。対応のあるｔ検定（両側）を用いることにより、上記３つのパラメータの各々を分析した。細菌によって誘導された炎症が存在しないとき、ＰＢＳを注射された耳とＰ１３を注射された耳との間に、１）体液の面積（ｐ＝０．１０４）；２）細胞数（ｐ＝０．８８０）；または３）鼓膜の厚さ（ｐ＝０．８９１）の差は見られなかった。
【０１２４】
細菌を加えたときのペプチドによって引き起こされる効果に関するアッセイ
インビボにおいて炎症に影響するペプチドの有効性を調べるために、２０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの一方の中耳に加熱不活性化された肺炎球菌＋ＰＢＳ、および反対側の中耳に加熱不活性化された肺炎球菌＋１０μＭペプチドＰ１３を注射した。３日後、それらの動物を殺し、中耳液の面積、浸潤細胞の数および鼓膜の厚さについて評価した。疾患の発症は、定量化された３つのパラメータのうち２つにおいて、バックグラウンドコントロール（ＰＢＳを注射された耳、ｎ＝１８）の少なくとも２標準偏差を越えた増加と定義した。２０匹のマウスのうち、合計７匹が、疾患誘導についての基準を満たした。疾患を有するこれらの７匹のマウスからの対応のあるｔ検定による中耳の分析から、ペプチド処置が、体液の量（ｐ＝０．００４）、浸潤細胞の数（ｐ＝０．０２）および鼓膜の厚さ（ｐ＝０．００２）を有意に減少させたことが示された。疾患を有する各個別のマウスの炎症に関するこれらの３つのパラメータの調査から、ペプチドＰ１３の単回の処置によって見られる劇的な効果が例証された。興味深いことに、上記７匹のマウスのうち６匹が、炎症の全面積の減少を示したが、１匹の動物は、体液の面積および鼓膜の厚さについては中程度の減少を示しただけで、細胞数は減少を示さなかった。加熱殺菌された細菌の注射によって、３日後、中耳に顕著な炎症反応がもたらされた。これは、粘膜および鼓膜の腫脹、細胞浸潤、ならびに中耳腔を満たす著しい体液（滲出液）の分泌および蓄積を特徴とした。この炎症反応は、著しい粘膜の細胞の肥大、ならびにムチンおよび他の体液の活性な分泌をもたらした。ペプチドＰ１３を上記細菌とともに注射したとき、中耳腔への体液の蓄積の著しい減少および粘膜肥大の減少が見られた。
【０１２５】
【表５】
ａ中耳の炎症は、中耳内の体液の面積、中耳液中の細胞の数および注射部位から離れた点で測定される鼓膜の厚さについて、連続した３つの組織切片を測定することによって評価される。データは、中耳の炎症を有する動物における平均±ＳＤを表している。対応のあるｔ検定を用いて統計学的評価を行う。
ｂＰＢＳで処置される動物には細菌またはペプチドを投与しない。
ｃ動物の一方の耳に肺炎球菌＋ＰＢＳおよび反対の耳に肺炎球菌＋ペプチド（約１０μＭ）を注射する。
ｄ対応のあるｔ検定を用いる統計学的評価は、細菌を注射された罹患動物から回収されたデータを用い、ペプチドとペプチド処置なしとを比較して行う。
【０１２６】
実施例８：ＦＩＴＣ標識されたＰ１３−Ｒ９による鼓膜の横断についてのアッセイ
以下のプロトコルによって耳嚢（ｂｕｌｌａ）を介してＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した。
【０１２７】
８〜１２週齢の３匹のＢＡＬＢ／ｃマウスを、ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した後、細菌を投与した。首の腹側正中切開を行い、鈍的切開後、耳嚢を露出させた。細い針を用いておよそ３．５μｌの細菌懸濁液（加熱不活性化された肺炎球菌の１０１０ＣＦＵ／ｍｌ）を、骨壁を介して中耳に接種した。右耳と左耳の両方に耳嚢注射によって細菌を投与した。
【０１２８】
２４時間後、手術用顕微鏡を用いて動物の耳鏡検査を行った。上に記載したようにマウスを麻酔し、急性中耳炎（ＡＯＭ）についての以下の３つの基準の存在または非存在について鼓膜を調べた：１）鼓膜の後ろにおける中耳滲出液；２）透明から赤色または白色への鼓膜の色の変化（中耳の炎症および／または化膿を示唆する）；３）平坦（ｎｅｕｔｒａｌ）から出っ張りまたは引っ込みへの鼓膜の位置の変化。これらの基準によってＡＯＭを証明する動物だけを使用した。
【０１２９】
４つの耳が、ＡＯＭに対する基準を満たした。ＦＩＴＣ標識されたペプチドＰ１３−Ｒ９（１０μｇ／３０μｌ）を中耳に滴下した。そのペプチドを１０分間にわたって吸収させた。１０分後、外耳道を２回洗い流し、吸い取ることにより、残留している任意のペプチドを除いた。次いで、３０ｇ針を備えた１０μｌのＨａｍｉｌｔｏｎ注射器を用いて中耳液を吸引し、その体液をスライド上に塗抹した。ＦＩＴＣ標識されたペプチドを蛍光鏡（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｃｏｐｅ）下で観察した。写真から、ＦＩＴＣ標識されたＰ１３−Ｒ９が鼓膜を通過し、中耳液中の細胞と会合していることが証明された。
【０１３０】
図１Ａは、中耳液中の細胞の明視野の顕微鏡検査結果を表している。図１Ｂは、中耳液中の細胞と会合したＦＩＴＣ標識Ｐ１３−Ｒ９の蛍光顕微鏡検査結果を表している。
【０１３１】
実施例９：Ｐ１３の局所投与は中耳の炎症および中耳貯留液を減少させた
この実験では、前臨床ＡＯＭモデルにおいて炎症および貯留液を減少させるためにＰ１３を点耳薬によって投与した。手術用顕微鏡を用いてＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１３）の耳鏡検査を行うことによりＡＯＭの臨床症状を確かめた。マウスを麻酔し、ＡＯＭについての以下の３つの基準の存在または非存在について鼓膜（ＴＭ）を調べた：１）ＴＭの後ろにおける中耳滲出液；２）中耳の炎症および／または化膿を示唆する、透明から赤色または白色へのＴＭの色の変化；および３）平坦から出っ張りまたは引っ込みへのＴＭの位置の変化。これらの変化のいずれかを示す動物を、炎症について陽性であるとスコア付けした。すべてのマウスが、プレスクリーニングにおいて陰性とスコア付けされ、両耳に５μｌの加熱不活性化された肺炎球菌（１０９ＣＦＵ／ｍｌ）を経鼓膜的に（ｔｒａｎｓｔｙｍｐａｎｉｃａｌｌｙ）注射された。細菌注射の２４時間後、耳鏡検査によってマウスを調べ、上に記載した炎症の基準を満たす動物をこの研究に残した。陽性とスコア付けされた１３個の耳のうち；７つの耳をＰ１３（１μｇ／３０μｌ）で局所的に処置し、６つの耳をＰＢＳ（３０μｌ）で局所的に処置した。局所処置のために、動物を軽く麻酔し、Ｐ１３またはＰＢＳを鼓膜の外側に滴下した。それらの動物を１５〜２０分間鎮静させた。細菌注射の７２時間後、動物を屠殺し、組織を組織学的に処理することにより、中耳疾患を評価した。以下のとおり、中耳に存在する体液の面積を測定し、測定された中耳液の面積内の細胞の数を測定することによって、炎症を定量化した。マウスに麻酔薬を過剰投与し、１．０ｍｌの食塩水に続いて２０ｍｌの固定液（０．１Ｍリン酸緩衝液中の１．５％パラホルムアルデヒド−３％グルタルアルデヒド）を心臓内に灌流させた。中耳を脱灰し、グリコールメタアクリレートプラスチック内に包埋し、５μｍの薄片に切り、スライドガラス上に連続的に載せ、染色し、カバーガラスをかぶせた。鼓膜臍部および岬角のレベルの連続した３つの切片を、１）中耳に存在する体液の面積；および２）中耳液中の細胞の数の測定のために選択した。各測定は、１検体あたり３つの連続した切片において行った。各パラメータについて与えられた値は、３つの切片の平均値である（図２）。この実験から、Ｐ１３の点耳投与が、前臨床ＡＯＭモデルにおいて細胞浸潤と体液残留の両方を劇的に減少させることが確かめられた。興味深いことに、多い細胞数および広い体液面積を示すＰ１３処置群の１匹の動物は、同じ動物である。
【０１３２】
実施例１０：Ｐ１３の局所投与は聴覚障害の重症度および継続時間を著しく減少させた
Ａ．Ｐ１３の局所投与はＡＯＭのマウスモデルにおいて有効性を証明した。
【０１３３】
ＡＯＭを有する患者では、中耳貯留液が残留することが多く、その残留によって聴力が損なわれ得、感染が反復し得、そして極端な状態では鼓膜チューブの外科的留置が必要になり得る。ＡＯＭの前臨床モデルにおいてＰ１３の局所投与が聴力に影響し得るか否かを判定するために、１３週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝８）の両耳においてベースライン聴性脳幹反応（ＡＢＲ）および耳鏡検査を行った。ＡＢＲ刺激は、１０ｄＢずつ５つの強度レベルの４ｋＨｚ、８ｋＨｚ、１６ｋＨｚおよび３２ｋＨｚにおける２０のトーンバーストトレイン（ｔｏｎｅ−ｂｕｒｓｔ ｔｒａｉｎｓ）からなるものだった。各トーンバーストの持続時間は、２ミリ秒であり、トーンバーストの発生は、１２ミリ秒隔てられた。５ｄＢだけずれた２つの別個のトレインを刺激として与え、次いで、それらをデータ解析において組み合わせることにより、５ｄＢずつ閾値を決定した。デジタルオシロスコープを使用して３００回の反復刺激に対する応答を平均した。閾値は、応答を特定することができた最低強度に基づいた。閾値に存在する波の数は、いくらか変動したが、少なくとも２つの波の存在が、妥当な閾値であると考えられた。前に記載したように、手術用顕微鏡を使用して耳鏡検査を行うことによりＡＯＭの臨床症状を確かめた。８匹すべての動物がこの研究に残り、その両耳に５μｌの加熱不活性化された肺炎球菌（１０９ＣＦＵ／ｍｌ）を経鼓膜的に注射した。細菌注射の２４時間後、耳鏡検査によってマウスを調べ、炎症基準を満たす動物をこの研究に残した。２４時間後、各動物の一方の耳をＰ１３（１μｇ／３０μｌ）で、他方の耳をＰＢＳ（３０μｌ）で局所的に処置した。局所処置のために、動物を軽く麻酔し、Ｐ１３またはＰＢＳを鼓膜の外側に滴下した。それらの動物を１５〜２０分間鎮静させた。
【０１３４】
細菌注射の５および１３日後、上に記載したようにすべての動物においてＡＢＲ試験を行った。各周波数に対する細菌注射後のＡＢＲからベースラインＡＢＲを減算し、次いで、４つすべての周波数（４、８、１６および３２ｋＨｚ）を合計することによって、ＡＢＲデータを計算した。５および１３日目を用いて、反復測定２元配置分散分析をデータ解析のために行った。この実験から、Ｐ１３の点耳投与が、コントロールで処置された動物において見られた聴覚障害を有意に限定したことが確認された。Ｐ１３での処置は、聴覚障害の重症度を減少させ、正常なベースライン聴力レベルへの回復までの時間を短縮した（図３Ａ）。Ｐ１３処置は、ＰＢＳ処置と比べて、聴力を失った動物の数を劇的に減少させた（図３Ｂ）。まとめると、これらのデータから、聴覚障害の重症度および継続時間の減少におけるＰ１３の有効性が確認された。
【０１３５】
Ｂ．Ｐ１３の局所投与は慢性中耳炎のマウスモデルにおいて有効性を証明した
８匹のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウス（１２月齢）において臨床的な耳の検査を行った。中耳の炎症を示す動物（６匹のマウス）において２回のベースラインＡＢＲを１週間間隔で行い、次いで、各耳をＰＢＳまたは１μｇのＰ１３で局所的に処置した。Ｐ１３／ＰＢＳ処置の１および２週間後、再度耳鏡検査およびＡＢＲ評価を行った。各周波数に対する処置後のＡＢＲからベースラインＡＢＲを減算し、次いで、４つすべての周波数を合計することによって、ＡＢＲデータを計算した。Ｐ１３の局所処置によって、処置の１週間後と２週間後の両方において４つすべての周波数でのＡＢＲ測定によって評価された聴力閾値が統計学的に有意に改善された。このデータは、両方の時点において聴力閾値の劇的な改善を示し、２週間後にはおよそ４０ｄｂ改善した。単一の周波数（４ｋＨｚ）の検査から、聴力に対するＰ１３処置の効果が証明された（処置の２週間後、Ｐ１３処置動物では、コントロールと比べて聴力がおよそ１２ｄｂ改善した）。いずれの時点におけるペプチド処置後の耳鏡検査によって評価された中耳の炎症状態にも、変化は観察されなかった。
【０１３６】
Ｃ．ＣＯＭを処置する際のＰ１３のＤ−およびＬ−異性体の形態の比較
ペプチドの生物学的半減期は、Ｌ−異性体型の代わりにアミノ酸残基のＤ−異性体を使用することによって改善され得る。ゆえに、すべてＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の立体異性体（Ｄ−Ｐ１３）を、ＣＯＭを有するＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスを処置する際の有効性について試験し、その結果を、すべてＬ−アミノ酸残基を含む立体異性体（Ｌ−Ｐ１３）によって得られた結果と比較した。標準的な方法によってＤ−Ｐ１３ペプチドを作製し、＞９５％に精製した。ＣＯＭを有する３匹のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスの両耳を、上に記載したようにＤ−Ｐ１３で局所的に処置し、処置の１および２週間後にＡＢＲを評価した。Ｌ−Ｐ１３による処置で見られたのと同様に、Ｄ−Ｐ１３による処置は、臨床的に実証されている疾患を有するＣＯＭマウスの聴力閾値の改善における有効性も証明した。処置の２週間後、Ｌ−Ｐ１３では処置後およそ４０ｄｂ改善されたのに対して、Ｄ−Ｐ１３は、すべての周波数において聴力閾値をおよそ２０ｄｂ改善した。Ｐ１３のＬ−異性体は、聴力閾値のより著明な改善を示したが、Ｐ１３のＤ−およびＬ−異性体型は、この実験において同様のレベルの統計的信頼度を示した。
【０１３７】
実施例１１：Ｐ１３の局所投与は聴器毒性を有しなかった
点耳薬による投与の際の正常マウスの聴力に対する悪影響の可能性についてＰ１３を調査した。１６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１６）に、１週間空けて２回のベースライン聴性脳幹反応（ＡＢＲ）試験を行い、両耳において耳鏡検査を行った。ＡＢＲ刺激は、先に記載されたような、１０ｄＢずつ５つの強度レベルの４ｋＨｚ、８ｋＨｚ、１６ｋＨｚおよび３２ｋＨｚにおける２０のトーンバーストトレインからなるものだった。前に記載したように、手術用顕微鏡を用いて耳鏡検査を行うことによりＡＯＭの臨床症状を確かめた。プレスクリーニングにおいて異常なＡＢＲまたは検査結果を有するいずれの動物も、この研究に入れなかった。
【０１３８】
１６匹すべての動物がこの研究に残り、以下のとおり５つの群に分けた：
群１：（ｎ＝６つの耳）１μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、１回投与；
群２：（ｎ＝７つの耳）１０μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、１回投与；
群３：（ｎ＝７つの耳）１０μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、２回投与、２４時間間隔；
群４：（ｎ＝６つの耳）６０μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、１回投与；および
群５：（ｎ＝６つの耳）無処置マウス。
【０１３９】
Ｐ１３による処置の１、２、３および４週間後にＡＢＲを行った。２つのベースラインＡＢＲを平均し、それをＰ１３処置後のＡＢＲと比較した。この実験から、Ｐ１３の局所投与が、これらの正常マウスの聴力の閾値に悪影響を及ぼさないことが証明された。
【０１４０】
実施例１２：ペプチドで処置されたマウスにおけるＴＮＦ−α分泌の評価
ＣｐＧ−ＯＤＮおよびＬＰＳによる刺激に応答したマウスにおけるＴＮＦ−α分泌に対するいくつかのペプチドの効果を研究する。各ペプチド−Ｒ９について、３つの濃度、３７μＭ、２２．２μＭおよび１１．１μＭのペプチド組成物を調製し、試験する。このアッセイにおいて活性を示すペプチドを、再アッセイのためにさらに１１．１μＭ、７．４μＭおよび３．７μＭのペプチド組成物に製剤化する。
【０１４１】
約８〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ（Ｂａｇｇアルビノ）マウスを、キシラジンおよびケタミン（約０．１ｍｇ／３０ｇ体重）の皮下注射で麻酔する。そのマウスの両耳に１．２５μｇ／ｍｌのＣｐＧ−ＯＤＮまたは１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを注射する。２４時間後、そのマウスの一方の耳を１μｇのペプチド／３０μｌ、および他方の耳をＰＢＳ（３０μｌ）で局所的に処置する（点耳薬）。ペプチド／ＰＢＳ処置の２４時間後、中耳液を採取し、ＥＬＩＳＡによってＴＮＦ−α分泌について解析する。コントロール耳よりも少ないＴＮＦ−α分泌を示す耳が、生存マウスにおいてＴＮＦ−α分泌を効果的に阻害するペプチドを特定する。
【０１４２】
実施形態
以下の実施形態は、本発明の対象の非限定的な例を提供する。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、本発明は：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドがＣ末端に伝達配列をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、伝達配列は、ポリアルギニン配列である。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、伝達配列は、連続した９個のアルギニン残基を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、伝達配列は、連続した９個のアルギニン残基からなる。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドのアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、伝達配列の一部でないアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、伝達配列の少なくとも１つのアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、伝達配列のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１および１８２のうちのいずれか１つである。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、配列番号２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つである。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、滴剤の形態である。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、エアロゾル、蒸気、スプレーまたは噴霧の形態である。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜１８６のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６８のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを企図する。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１、１８２、２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６９のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドの誘導体を企図し、ここで、その誘導体は、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している生物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む有効量の薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、上記細胞活性は、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される細胞活性は、ＴＮＦ−αの分泌である。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供する。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、上記投与工程は、サイトカイン分泌の阻害をもたらす。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、耳の炎症である。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、中耳炎である。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、上記投与は、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛である。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、上記関節炎は、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、上記皮膚炎は、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、上記乾癬は、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、上記薬学的組成物は、局所適用を介して投与される。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、鼓膜への適用を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、上記鼓膜への適用は、鼓膜への滴剤の適用を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、上記動物は、ヒトである。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している生物にエアロゾル組成物を投与する工程を包含し、そのエアロゾル組成物は：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを含み、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善する方法を企図し、その方法は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下した動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、そのペプチドは、局所的に投与され、聴力は、普通レベルと変わらないレベルまで改善し、そして／または聴力は、そのペプチドの投与なしに聴力が改善するよりも速く改善する。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している動物の鼓膜に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、上記細胞活性は、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される上記細胞活性は、ＴＮＦ−αの分泌である。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、上記医薬は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供する。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、上記医薬は、サイトカイン分泌の阻害に適している。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、耳の炎症である。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、中耳炎である。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、上記投与は、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛である。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である。
【０２００】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、上記関節炎は、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、上記皮膚炎は、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、上記乾癬は、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、上記医薬は、局所適用に適している。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、鼓膜への適用を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、上記鼓膜への適用は、鼓膜への滴剤の適用を含む。いくつかの実施形態において、上記動物は、ヒトである。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、その医薬は、エアロゾル組成物を含み、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その動物は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、その医薬は、局所用の医薬である。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その医薬は、それを必要とするかまたは欲している動物の鼓膜への投与に適しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０２１１】
実施形態１０１．アミノ酸配列ＦＴＩＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７１）を含むペプチドを含む組成物。
【０２１２】
実施形態１０２．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ１７からなる群から選択される、実施形態１０１の組成物。
【０２１３】
実施形態１０３．ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態１０１の組成物。
【０２１４】
実施形態１０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態１０３の組成物。
【０２１５】
実施形態１０５．細胞にペプチドを投与する工程を包含する、細胞活性を制御する方法であって、前記ペプチドは、アミノ酸配列ＦＴＩＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７１）を含む、方法。
【０２１６】
実施形態１０６．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ１７からなる群から選択される、実施形態１０５の方法。
【０２１７】
実施形態１０７．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態１０５の方法。
【０２１８】
実施形態１０８．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態１０６の方法。
【０２１９】
実施形態１０９．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態１０５の方法。
【０２２０】
実施形態１１０．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態１０５の方法。
【０２２１】
実施形態１１１．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態１０６の方法。
【０２２２】
実施形態１１２．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態１１１の方法。
【０２２３】
実施形態１１３．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態１０５の方法。
【０２２４】
実施形態１１４．Ａ５２Ｒに由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２２５】
実施形態１１５．Ｓ１〜Ｓ１７から選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２２６】
実施形態２０１．アミノ酸配列ＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７０）を含むペプチドを含む組成物。
【０２２７】
実施形態２０２．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ２２からなる群から選択される、実施形態２０１の組成物。
【０２２８】
実施形態２０３．ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態２０１または２０２の組成物。
【０２２９】
実施形態２０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態２０３の組成物。
【０２３０】
実施形態２０５．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０１または２０２の組成物。
【０２３１】
実施形態２０６．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０３の組成物。
【０２３２】
実施形態２０７．ペプチドを細胞に投与する工程を包含し、前記ペプチドが、アミノ酸配列ＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７０）を含む、細胞活性を制御する方法。
【０２３３】
実施形態２０８．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ２２からなる群から選択される、実施形態２０７の方法。
【０２３４】
実施形態２０９．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態２０７または２０８の方法。
【０２３５】
実施形態２１０．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態２０９の方法。
【０２３６】
実施形態２１１．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０７または２０８の方法。
【０２３７】
実施形態２１２．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０９の方法。
【０２３８】
実施形態２１３．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態２０７の方法。
【０２３９】
実施形態２１４．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態２０７の方法。
【０２４０】
実施形態２１５．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態２０８の方法。
【０２４１】
実施形態２１６．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態２１５の方法。
【０２４２】
実施形態２１７．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態２０７の方法。
【０２４３】
実施形態２１８．Ａ５２Ｒに由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２４４】
実施形態２１９．（ａ）Ｓ１〜Ｓ２２から選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；（ｂ）前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２４５】
実施形態３０１．アミノ酸配列ＶＹＤＣＩ（配列番号３７２）、ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＴＶＹ（配列番号３７４）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含むペプチドを含む組成物。
【０２４６】
実施形態３０２．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態３０１の組成物。
【０２４７】
実施形態３０３．ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態３０１の組成物。
【０２４８】
実施形態３０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態３０３の組成物。
【０２４９】
実施形態３０５．ペプチドを細胞に投与する工程を包含し、前記ペプチドが、アミノ酸配列ＶＹＤＣＩ（配列番号３７２）、ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＴＶＹ（配列番号３７４）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含む、細胞活性を制御する方法。
【０２５０】
実施形態３０６．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態３０５の方法。
【０２５１】
実施形態３０７．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態３０５の方法。
【０２５２】
実施形態３０８．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態３０６の方法。
【０２５３】
実施形態３０９．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態３０５の方法。
【０２５４】
実施形態３１０．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態３０５の方法。
【０２５５】
実施形態３１１．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態３０６の方法。
【０２５６】
実施形態３１２．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態３１１の方法。
【０２５７】
実施形態３１３．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態３０５の方法。
【０２５８】
実施形態３１４．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態３０５の方法。
【０２５９】
実施形態３１５．Ｐ１３に由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２６０】
実施形態３１６．表１に列挙されているペプチドから選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２６１】
実施形態４０１．アミノ酸配列ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含むペプチドを含む組成物。
【０２６２】
実施形態４０２．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態４０１の組成物。
【０２６３】
実施形態４０３．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態４０１または４０２の組成物。
【０２６４】
実施形態４０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態４０３の組成物。
【０２６５】
実施形態４０５．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０１または４０２の組成物。
【０２６６】
実施形態４０６．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０３の組成物。
【０２６７】
実施形態４０７．細胞にペプチドを投与する工程を包含し、前記ペプチドが、アミノ酸配列ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含む、細胞活性を制御する方法。
【０２６８】
実施形態４０８．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態４０７の方法。
【０２６９】
実施形態４０９．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態４０７または４０８の方法。
【０２７０】
実施形態４１０．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態４０９の方法。
【０２７１】
実施形態４１１．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０７または４０８の方法。
【０２７２】
実施形態４１２．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０９の方法。
【０２７３】
実施形態４１３．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態４０７の方法。
【０２７４】
実施形態４１４．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態４０７の方法。
【０２７５】
実施形態４１５．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態４０８の方法。
【０２７６】
実施形態４１６．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態４１５の方法。
【０２７７】
実施形態４１７．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態４０７の方法。
【０２７８】
実施形態４１８．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態４０７の方法。
【０２７９】
実施形態４１９．Ｐ１３に由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２８０】
実施形態４２０．表１に列挙されているペプチドから選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２８１】
実施形態５０１．Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドから選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２８２】
実施形態５０２．上記炎症が、中耳炎を含む、実施形態５０１の薬学的組成物。
【０２８３】
実施形態５０３．さらに含む実施形態５０２の薬学的組成物であって、ここで、その薬学的組成物は、局所適用を介して適用される、薬学的組成物。
【０２８４】
実施形態５０４．上記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５０３の薬学的組成物。
【０２８５】
実施形態５０５．上記局所適用が、鼓膜への適用を含む、実施形態５０４の薬学的組成物。
【０２８６】
実施形態５０６．上記鼓膜への適用が、鼓膜への点耳薬の適用を含む、実施形態５０５の薬学的組成物。
【０２８７】
実施形態５０７．中耳液の量を約３０〜８０パーセント減少させる；
中耳液中の浸潤細胞数を約３０〜８０パーセント減少させる；および
耳の炎症を有するマウスの鼓膜の厚さを約３０〜８０パーセント減少させる
のに有効な薬学的組成物であって、ここで、その組成物は、そのマウスに約０．０１μｇ〜６０μｇの量で投与される、薬学的組成物。
【０２８８】
実施形態５０８．ペプチドを含む、実施形態５０７の薬学的組成物。
【０２８９】
実施形態５０９．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５０８の薬学的組成物。
【０２９０】
実施形態５１０．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５０９の薬学的組成物。
【０２９１】
実施形態５１１．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５０９の薬学的組成物。
【０２９２】
実施形態５１２．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５０９の薬学的組成物。
【０２９３】
実施形態５１３．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５１２の薬学的組成物。
【０２９４】
実施形態５１４．上記炎症が、中耳炎を含む、実施形態５０７の薬学的組成物。
【０２９５】
実施形態５１５．ペプチドを含む、実施形態５１４の薬学的組成物。
【０２９６】
実施形態５１６．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５１５の薬学的組成物。
【０２９７】
実施形態５１７．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５１６の薬学的組成物。
【０２９８】
実施形態５１８．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５１６の薬学的組成物。
【０２９９】
実施形態５１９．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５１６の薬学的組成物。
【０３００】
実施形態５２０．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５１９の薬学的組成物。
【０３０１】
実施形態５２１．さらに含む実施形態５１４の薬学的組成物であって、ここで、その薬学的組成物は、局所適用を介して適用される、薬学的組成物。
【０３０２】
実施形態５２２．ペプチドを含む、実施形態５２１の薬学的組成物。
【０３０３】
実施形態５２３．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５２２の薬学的組成物。
【０３０４】
実施形態５２４．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５２３の薬学的組成物。
【０３０５】
実施形態５２５．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５２３の薬学的組成物。
【０３０６】
実施形態５２６．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５２３の薬学的組成物。
【０３０７】
実施形態５２７．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５２６の薬学的組成物。
【０３０８】
実施形態５２８．上記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５２１の薬学的組成物。
【０３０９】
実施形態５２９．ペプチドを含む、実施形態５２８の薬学的組成物。
【０３１０】
実施形態５３０．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５２９の薬学的組成物。
【０３１１】
実施形態５３１．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５３０の薬学的組成物。
【０３１２】
実施形態５３２．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５３０の薬学的組成物。
【０３１３】
実施形態５３３．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５３０の薬学的組成物。
【０３１４】
実施形態５３４．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５３３の薬学的組成物。
【０３１５】
実施形態５３５．上記局所適用が、鼓膜への適用を含む、実施形態５２８の薬学的組成物。
【０３１６】
実施形態５３６．ペプチドを含む、実施形態５３５の薬学的組成物。
【０３１７】
実施形態５３７．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５３６の薬学的組成物。
【０３１８】
実施形態５３８．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５３７の薬学的組成物。
【０３１９】
実施形態５３９．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５３７の薬学的組成物。
【０３２０】
実施形態５４０．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５３７の薬学的組成物。
【０３２１】
実施形態５４１．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５４０の薬学的組成物。
【０３２２】
実施形態５４２．上記鼓膜への適用が、鼓膜への点耳薬の適用を含む、実施形態５３５の薬学的組成物。
【０３２３】
実施形態５４３．ペプチドを含む、実施形態５４２の薬学的組成物。
【０３２４】
実施形態５４４．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５４３の薬学的組成物。
【０３２５】
実施形態５４５．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５４４の薬学的組成物。
【０３２６】
実施形態５４６．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５４４の薬学的組成物。
【０３２７】
実施形態５４７．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５４４の薬学的組成物。
【０３２８】
実施形態５４８．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５４７の薬学的組成物。
【０３２９】
実施形態５４９．耳の炎症の処置を必要とするかまたはそれを欲している動物における耳の炎症を処置する方法であって、その方法は、その動物に実施形態５０７の薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【０３３０】
実施形態５５０．上記耳の炎症が、中耳炎を含む、実施形態５４９の方法。
【０３３１】
実施形態５５１．上記薬学的組成物が、局所適用を介して適用されることをさらに含む、実施形態５５０の方法。
【０３３２】
実施形態５５２．上記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５５１の方法。
【０３３３】
実施形態５５３．上記局所適用が、鼓膜への適用を含む、実施形態５５２の方法。
【０３３４】
実施形態５５４．上記鼓膜への適用が、鼓膜への点耳薬の適用を含む、実施形態５５３の方法。
【０３３５】
実施形態５５５．上記薬学的組成物が、Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドを含む、実施形態５４９、５５０、５５１、５５２、５５３または５５４の方法。
【０３３６】
実施形態５５６．上記Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体またはアナログが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５５５の方法。
【０３３７】
実施形態５５７．上記薬学的組成物が、Ｐ１３を含む、実施形態５５５の方法。
【０３３８】
実施形態５５８．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５５５の薬学的組成物。
【０３３９】
実施形態５５９．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５５８の方法。
【０３４０】
実施形態５６０．動物における耳の炎症を処置する方法であって、その方法は、その動物にペプチドを投与する工程を包含し、ここで、そのペプチドは、Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドを含む、方法。
【０３４１】
実施形態５６１．上記耳の炎症が、中耳炎を含む、実施形態５６０の方法。
【０３４２】
実施形態５６２．上記ペプチドの投与工程が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５６１の方法。
【０３４３】
実施形態５６３．上記局所適用が、鼓膜への必要に応じて点耳薬を介した適用を含む、実施形態５６２の方法。
【０３４４】
実施形態５６４．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５６３の方法。
【０３４５】
実施形態５６５．上記動物が、ヒトである、実施形態５６４の方法。
【０３４６】
実施形態５６６．上記ペプチドが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５６３の方法。
【０３４７】
実施形態５６７．上記動物が、ヒトである、実施形態５６６の方法。
【０３４８】
実施形態５６８．上記ペプチドが、ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）を含む、実施形態５６３の方法。
【０３４９】
実施形態５６９．上記動物が、ヒトである、実施形態５６８の方法。
【０３５０】
実施形態５７０．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５６３の方法。
【０３５１】
実施形態５７１．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５７０の方法。
【０３５２】
実施形態５７２．上記動物が、ヒトである、実施形態５７１の方法。
【０３５３】
実施形態５７３．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、そのアナログの１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５６３の方法。
【０３５４】
実施形態５７４．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５７３の方法。
【０３５５】
実施形態５７５．上記動物が、ヒトである、実施形態５７４の方法。
【０３５６】
実施形態５７６．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、実施形態５６３の方法。
【０３５７】
実施形態５７７．上記動物が、ヒトである、実施形態５７６の方法。
【０３５８】
実施形態５７８．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置、およびＤ−配置の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むポリアルギニンドメインを含む、実施形態５７３の方法。
【０３５９】
実施形態５７９．上記動物が、ヒトである、実施形態５７８の方法。
【０３６０】
実施形態５８０．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、実施形態５６３の方法。
【０３６１】
実施形態５８１．上記動物が、ヒトである、実施形態５８０の方法。
【０３６２】
実施形態５８２．アミノ酸配列：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、ペプチド。
【０３６３】
実施形態５８３．アミノ酸配列：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、ペプチド。
【０３６４】
実施形態５８４．アミノ酸配列：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ（配列番号１８５）を含む、ペプチド。
【０３６５】
実施形態５８５．アミノ酸配列：Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８６）を含む、ペプチド。
【０３６６】
実施形態５８６．ペプチドを含む薬学的組成物であって、そのペプチドは：
Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログ；あるいは
表１のペプチド
を含み、ここで、その組成物は、被験体における皮膚、関節、筋組織または結合組織の炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０３６７】
実施形態５８７．上記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデスまたは乾癬を含む、実施形態５８６の薬学的組成物。
【０３６８】
実施形態５８８．上記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎を含む、実施形態５８７の薬学的組成物。
【０３６９】
実施形態５８９．上記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹を含む、実施形態５８７の薬学的組成物。
【０３７０】
実施形態５９０．上記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症を含む、実施形態５８７の薬学的組成物。
【０３７１】
実施形態５９１．１つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む、実施形態５８６の薬学的組成物。
【０３７２】
実施形態５９２．上記ペプチドが、Ｐ１３またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５８６の薬学的組成物。
【０３７３】
実施形態５９３．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはＰ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチドを含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７４】
実施形態５９４．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７５】
実施形態５９５．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７６】
実施形態５９６．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５９５の薬学的組成物。
【０３７７】
実施形態５９７．上記ペプチドが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７８】
実施形態５９８．上記ペプチドが、ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）を含む、実施形態５９７の薬学的組成物。
【０３７９】
実施形態５９９．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、そのアナログの１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３８０】
実施形態６００．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５９９の薬学的組成物。
【０３８１】
実施形態６０１．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、実施形態５９９の薬学的組成物。
【０３８２】
実施形態６０２．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、実施形態５９９の薬学的組成物。
【０３８３】
実施形態６０３．動物における炎症を処置する方法であって、その方法は、その動物にペプチドを投与する工程を包含し、ここで、そのペプチドは、Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドを含む、方法。
【０３８４】
実施形態６０４．上記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬を含む、実施形態６０３の方法。
【０３８５】
実施形態６０５．上記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎を含む、実施形態６０４の方法。
【０３８６】
実施形態６０６．上記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹を含む、実施形態６０４の方法。
【０３８７】
実施形態６０７．上記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症を含む、実施形態６０４の方法。
【０３８８】
実施形態６０８．上記ペプチドが、Ｐ１３またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態６０３の方法。
【０３８９】
実施形態６０９．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはＰ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチドを含む、実施形態６０８の方法。
【０３９０】
実施形態６１０．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態６０８の方法。
【０３９１】
実施形態６１１．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態６０８の方法。
【０３９２】
実施形態６１２．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態６１１の方法。
【０３９３】
実施形態６１３．上記ペプチドが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態６０８の方法。
【０３９４】
実施形態６１４．上記ペプチドが、ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）を含む、実施形態６１３の方法。
【０３９５】
実施形態６１５．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、そのアナログの１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態６０８の方法。
【０３９６】
実施形態６１６．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態６１５の方法。
【０３９７】
実施形態６１７．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、実施形態６１５の方法。
【０３９８】
実施形態６１８．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、実施形態６１５の方法。
【０３９９】
実施形態６１９．上記動物が、ヒトである、実施形態６０３〜６１８のうちのいずれかの方法。
【０４００】
実施形態６２０．上記投与工程が、局所適用を含む、実施形態６０３〜６１８のうちのいずれかの方法。
【０４０１】
参考文献
以下の参考文献および本明細書中の開示において引用される参考文献は、本明細書によってそれらの全体が本明細書中で参考として援用される。
【０４０２】
【数１−１】
【０４０３】
【数１−２】
【０４０４】
【数１−３】
【０４０５】
【数１−４】
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２００９年６月５日に出願された米国仮特許出願第６１／１８４，４３８号、２００９年６月５日に出願された米国仮特許出願第６１／１８４，４５５号、２００９年６月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／２２０，７３８号、２００９年６月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／２２０，７４５号、および２００９年１０月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／２５６，３６４号への優先権を主張し、これらの米国仮特許出願の各々は、それらの全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
政府支援の研究に関する陳述
本発明に至る研究は、ＳＢＩＲ ＡＩ０６５０００、「Ｂａｃｔｅｒｉａｌ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｐｓｉｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓｔｒａｔｅｇｙ」、および、ＳＢＩＲ ＤＣ００５８８２、「Ｎｅｗ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｄｄｌｅ Ｅａｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ」に支援された。合衆国政府は、本発明に一定の権利を有し得る。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と呼ばれる保存されたモチーフを認識し、それに応答する。ＴＬＲは、細胞外のロイシンリッチリピートモチーフおよび細胞内のＴｏｌｌ／ＩＬ−１レセプター（ＴＩＲ）ドメインを特徴とする。ＰＡＭＰがＴＬＲの引き金を引くことにより、病原体を囲んで排除するように仕組まれた炎症性の免疫応答をもたらす一連の細胞内シグナル伝達事象が惹起される。ウイルスは、細胞内のＴＩＲシグナル伝達を効果的に阻害して炎症性の免疫応答を低減し得る、Ａ５２Ｒ（ワクシニアウイルスによって産生されるタンパク質）などの免疫調節タンパク質をコードする。
【０００４】
小児と成人の両方が、慢性中耳炎（ＣＯＭ）に罹患する。ＣＯＭに見られる慢性炎症は、内耳に影響を及ぼすことがあり、感音難聴に至ることがある。ＣＯＭは、深刻な医学的問題であり、現在、ＣＯＭを処置するために利用可能なステロイド以外の治療薬はない。ＣＯＭを有する多くの患者が、鼓膜チューブ（ｅａｒ ｔｕｂｅｓ）の外科的留置を必要としている。急性中耳炎（ＡＯＭ）と同様に、ＣＯＭを有する患者は、中耳内での激しい炎症反応の発生（残留体液の存在を含む）に起因して聴力が低下する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の要旨
いくつかの実施形態において、本発明は：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０００６】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜１８６のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６８のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを企図する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６９のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドの誘導体を企図し、ここで、その誘導体は、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御する方法を企図し、その方法は、この制御を必要とするかまたは欲している生物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む有効量の薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列（ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）をさらに含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置する方法を企図し、その方法は、処置を必要とするかまたは欲している動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置する方法を企図し、その方法は、処置を必要とするかまたは欲している生物にエアロゾル組成物を投与する工程を包含し、そのエアロゾル組成物は：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを含み、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善する方法を企図し、その方法は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下した動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、そのペプチドは、局所的に投与され、聴力は、普通レベルと変わらないレベルまで改善し、そして／または聴力は、そのペプチドの投与なしに聴力が改善するよりも速く改善する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置する方法を企図し、その方法は、処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、その医薬は、エアロゾル組成物を含み、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その動物は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、その医薬は、局所用の医薬である。
【００１８】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その医薬は、処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜への投与に適しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１：ＦＩＴＣ標識されたＰ１３による鼓膜の横断についてのアッセイ結果を表している。図１Ａ。明視野顕微鏡検査法により、中耳液中の細胞が示されている。図１Ｂ。蛍光顕微鏡検査法により、中耳液中の細胞と会合したＦＩＴＣ標識Ｐ１３が示されている。
【図２】図２：Ｐ１３は、中耳の炎症を減少させる。ＢＡＬＢ／ｃマウス（ＰＢＳ群においてｎ＝６およびＰ１３群においてｎ＝７）に、加熱殺菌されたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａを注射し、２４時間後に、Ｐ１３（１μｇ）の局所（点耳）投与によって処置し、細菌導入の７２時間後に組織学検査した。パネルＡ：中耳内の細胞数；パネルＢ：中耳内の体液の面積。注意：Ｐ１３処置群における細胞数が多い動物と体液の面積が広い動物は、同じ動物である。
【図３】図３：Ｐ１３の局所投与は、聴力閾値を有意に改善する。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、加熱殺菌されたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａを投与し、２４時間後にマウスをＰ１３（１μｇ）またはＰＢＳで局所（点耳）処置した。パネルＡ：細菌投与の５および１３日後にＡＢＲによって４、８、１６および３２ｋＨｚにおける聴力閾値を定量化した。処置後のＡＢＲからバックグラウンドＡＢＲを減算し、周波数を合計することによって、聴力損失を計算した。パネルＢ：すべての周波数において＞２０ＤＢの聴力を失った動物の数。動物の数は、括弧内の数字である。
【図４】図４：ペプチドＴ５２、Ｓ５およびＰ１３によるＴＮＦ−α分泌の阻害率。ＲＡＷ２６４．７細胞を４８ウェルプレートに３×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。２４時間後、その細胞を室温にて３つ組で様々な濃度のペプチドとともに１５分間インキュベートし、次いで、１μｇ／ｍｌ ＣｐＧ−ＯＤＮで刺激した。次いで、細胞を３７℃で４時間インキュベートし、上清を回収し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡによって測定した。ペプチドとともにインキュベートされた細胞からのＴＮＦ−α分泌をペプチド処理していないコントロール細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較することによって阻害率を計算した。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
参考としての援用
この明細書中で述べられるすべての刊行物、特許および特許出願は、個別の刊行物、特許または特許出願が、参考として援用されると明確かつ個別に示された場合と同程度に、本明細書中で参考として援用される。
【００２１】
発明の詳細な説明
自然炎症および病原体によって誘導される炎症の処置および管理は、深刻な臨床的難題である。ＴＬＲ／ＴＩＲシグナル伝達カスケードを標的にすることは、炎症を管理するアプローチの１つである；ゆえに、Ａ５２Ｒタンパク質またはＡ５２Ｒ様タンパク質に由来するペプチドを同定することによって、治療に役立つ応用法が見出される。本明細書中に開示される本発明のペプチドおよび薬学的組成物ならびにその使用およびそれを使用する方法は、炎症の管理に関する問題および炎症に関連する細胞経路の制御に関する問題に対して解決策を与える。
【００２２】
本開示全体を通じて、本発明のペプチドのアミノ酸残基は、当該分野で公知の標準的な省略形：ａ）一文字省略形（例えば、アルギニンに対するＲ、アスパラギン酸に対するＤ、バリンに対するＶなど）；およびｂ）３文字省略形（例えば、アルギニンに対するＡｒｇ、アスパラギン酸に対するＡｓｐ、バリンに対するＶａｌなど）の一方または両方によって言及される。本発明は、Ｌ型とＤ型の両方のアミノ酸残基を企図する。省略形が、Ｄ配置のアミノ酸残基についてのみ言及している場合、その省略形は、用語「Ｄ−」の後に続く（例えば、Ｄ−アルギニンに対するＤ−Ａｒｇ、Ｄ−アスパラギン酸に対するＤ−Ａｓｐ、Ｄ−バリンに対するＤ−Ｖａｌなど）。
【００２３】
Ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達
Ｔｏｌｌ様レセプター（「ＴＬＲ」）は、細菌、真菌、原生生物およびウイルス由来の構造を認識する保存された分子レセプターである。ＴＬＲの活性化は、一連の細胞内の事象を惹起し、炎症促進性サイトカインの産生を特徴とする自然免疫応答をもたらす（参考文献２〜９）。ＴＬＲシグナル伝達は、すべてのＴＬＲの間で保存されている細胞質のＴｏｌｌ／インターロイキン−１レセプター（ＴＩＲ）ドメインから起こる。いかなる理論にも限定されないが、ある特定の実施形態において、アダプター分子ＭｙＤ８８（ＴＩＲドメインとデスドメインの両方を備える）は、ＴＬＲおよびＩＲＡＫタンパク質のＴＩＲドメインと会合し得る。次いで、ＩＲＡＫのリン酸化（Ｐｈｏｓｐｏｒｙｌａｔｉｏｎ）によって、ＴＲＡＦ６と会合し得、その後、ＮＦ−κＢの活性化および炎症促進性サイトカインの分泌がもたらされ得る（参考文献１４、２２〜２５）。
【００２４】
ペプチド
ポックスウイルスファミリーのメンバーであるワクシニアウイルスは、免疫調節性タンパク質をコードすると証明されているＤＮＡウイルスである（参考文献１５〜１８）。これらのタンパク質の１つであるＡ５２Ｒは、ＴＩＲシグナル伝達カスケードの開始後のＮＦ−κＢの活性化を阻害すると示されている（参考文献１５および１８）。最近の研究から、Ａ５２Ｒは、ＴＲシグナル伝達を阻害し、ワクシニアウイルスのビルレンスに寄与すると証明された。ある特定の実施形態において、種々のＰＡＭＰに応答した細胞の活性化には、すべてのＴＬＲに共通のいくつかの細胞内分子（ＭｙＤ８８、ＩＬ−１レセプター関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）タンパク質のメンバー、ＴＮＦレセプター関連因子（ＴＲＡＦ６）およびＮＦ−κＢが挙げられるがこれらに限定されない）が関わる（参考文献１）。
【００２５】
Ｈａｒｔｅおよびその共同研究者ら（参考文献１８）は、Ａ５２Ｒタンパク質がＩＲＡＫ２とＴＲＡＦ６の両方に結合することによってＴＩＲシグナル伝達を阻害することを証明した。ワクシニアウイルス由来のＡ５２Ｒタンパク質の欠失によって、ウイルスのビルレンスが低下する。
【００２６】
ペプチド１３（「Ｐ１３」）配列（ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩ（配列番号３６９））は、ワクシニアウイルス由来のＡ５２Ｒ配列から得られた。Ｂｌａｓｔ検索解析から、ペプチドＰ１３が、Ａ５２Ｒ以外のワクシニアウイルス由来のより大きいタンパク質、牛痘ウイルス由来の２つのタンパク質およびウサギポックスウイルス由来の１つのタンパク質に見られる配列と１００％の相同性を有することが示された。ペプチド１３は、異なる系統の天然痘（痘瘡）ウイルス由来の３つの別個のタンパク質：ｉ）大痘瘡ウイルス（ｖａｒｉｏｌａ ｍａｊｏｒ ｖｉｒｕｓ）Ｉｎｄｉａ系統由来のＡ４６Ｌ；ｉｉ）小痘瘡ウイルス（ｖａｒｉｏｌａ ｍｉｎｏｒ ｖｉｒｕｓ）Ｇａｒｃｉａ由来のＡ４９Ｌ；およびｉｉｉ）大痘瘡ウイルス系統由来のＡ４４Ｌと著しい相同性を有すると示された。
【００２７】
Ｐ１３は、ｔｏｌｌ様レセプター依存性シグナル伝達を阻害する（全体が本明細書中で参考として援用されるＵＳ７，１９２，９３０およびＵＳ２００８／００３９３９５）。いくつかの実施形態において、活性増強のために置換され得るＰ１３配列内のアミノ酸残基を同定するために構造活性試験が行われ得る。
【００２８】
いくつかの実施形態において、本発明は、Ａ５２Ｒに由来するペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、その薬学的組成物は、耳用の薬学的組成物である。
【００２９】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３に由来する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体またはアナログである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７０）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＦＴＩＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７１）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩ（配列番号３６９）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＶＹＤＣＩ（配列番号３７２）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＫＬＴＶＹ（配列番号３７４）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、アミノ酸配列ＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０残基を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、７〜５０残基を含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、伝達配列を含む。その伝達配列は、細胞の取り込みに関与し得る。伝達配列が存在することにより、細胞の取り込みが高まり得るか、または選択的な細胞の取り込みがもたらされ得る。いくつかの実施形態において、伝達配列は、ペプチドのＮ末端に存在する。いくつかの実施形態において、伝達配列は、ペプチドのＣ末端に存在する。
【００３１】
伝達配列の非限定的な例は、ポリアルギニン配列である。いくつかの実施形態において、そのポリアルギニン配列は、アルギニン残基を含む。いくつかの実施形態において、そのポリアルギニン配列は、アルギニン残基からなる。特定の実施形態において、伝達配列は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または２０個のアルギニン残基を含む。いくつかの実施形態において、伝達配列は、９個のアルギニン残基を含む。いくつかの実施形態において、伝達配列は、９個のアルギニン残基からなる。上記伝達配列のアルギニン残基は、Ｌ−アルギニン、Ｄ−アルギニン、またはＬ−アルギニンとＤ−アルギニンとの混合物であり得る。
【００３２】
表１は、本発明のペプチドの非限定的な例を提供している。例示的なペプチド１〜１３０は、Ａ５２Ｒに由来するペプチドである。ペプチド１〜１３０のうち、あるサブセットが、さらにＳ１〜Ｓ２２と命名される。他の例としては、Ｐ１３に由来するペプチド（「Ｔペプチド」）が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明は、表１に列挙されている任意のアミノ酸配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、表１に列挙されている任意のペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｓ１〜Ｓ２２のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｓ１〜Ｓ２２のいずれかのペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｔ１〜Ｔ５６のいずれかのアミノ酸配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｔ１〜Ｔ５６のいずれかのペプチドを含む薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、伝達配列を有する。いくつかの実施形態において、その伝達配列は、ポリアルギニンである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１、１８２、２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つの配列を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｔ３、Ｔ１１、Ｔ２１、Ｔ３６、Ｔ３７、Ｔ５１またはＴ５２の配列を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｔ３−Ｒ９、Ｔ１１−Ｒ９、Ｔ２１−Ｒ９、Ｔ３６−Ｒ９、Ｔ３７−Ｒ９、Ｔ５１−Ｒ９またはＴ５２−Ｒ９の配列を含む。
【００３３】
【表１−１】
【００３４】
【表１−２】
【００３５】
【表１−３】
【００３６】
【表１−４】
【００３７】
【表１−５】
【００３８】
【表１−６】
【００３９】
【表１−７】
【００４０】
【表１−８】
【００４１】
【表１−９】
【００４２】
【表１−１０】
【００４３】
【表１−１１】
表１の説明：
ペプチドＴ３１およびＴ３１−Ｒ９におけるＸａａは、α−アミノ酪酸であり；
ペプチドＴ３２およびＴ３２−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−ノルバリンであり；
ペプチドＴ３０およびＴ３０−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−システイン（Ｓ−Ａｃｍ）であり；
ペプチドＴ２８およびＴ２８−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−システイン（Ｓ−カルボキシメチル）であり；そして
ペプチドＴ２９およびＴ２９−Ｒ９におけるＸａａは、Ｌ−システイン（Ｓ−カルバミドメチル）である。
【００４４】
本発明のペプチドおよびそれを含む組成物は、細胞活性を調節するのに有効である。いくつかの実施形態において、細胞活性の調節は、細胞のシグナル伝達を調節することによって達成される。活性は、例えば、ｔｏｌｌ様レセプターによって制御され得る。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドおよび組成物は、サイトカイン分泌を阻害する。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドおよび組成物は、サイトカイン分泌を増強する。いくつかの実施形態において、サイトカイン分泌は、ｔｏｌｌ様レセプター依存性の刺激に応答する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、Ａ５２ＲまたはＰ１３に由来するペプチドの投与は、サイトカイン分泌を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％阻害し得る。いくつかの実施形態において、Ａ５２ＲまたはＰ１３に由来するペプチドの投与は、サイトカイン分泌を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％増強し得る。いくつかの実施形態において、サイトカイン分泌は、ＴＬＲ依存性のシグナル伝達の結果である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される活性は、ＴＮＦ−αの分泌である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増強を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増強を提供するのに有効である。本発明のペプチドおよび組成物は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の増強を提供するのに有効である。
【００４７】
本発明のいくつかの実施形態は、９−アルギニン細胞導入配列または他のタイプの細胞導入配列に連結されたアミノ酸配列ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩ（配列番号３６９）を含むペプチドを企図する。ペプチドＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）は、ＴＬＲ活性化に応答したサイトカイン分泌を効果的に阻害する。そのペプチドは、ＴＬＲ刺激とは無関係に惹起される細胞の活性化に起因するサイトカイン分泌に対しては影響を有しなかった。滲出を伴う中耳炎（ＯＭＥ）のマウスモデルを用いたとき、ＢＡＬＢ／ｃマウスの中耳に、加熱不活性化された肺炎球菌を投与することによって、著しい炎症反応がもたされ、その炎症反応は、ペプチド処置によって劇的に減少した。実験は、そのペプチドがＬＰＳ誘導性の敗血症性ショックのマウスモデルにおいて炎症促進性メディエーターを減少させるだろうということも証明した。そのペプチドは、細菌感染またはウイルス感染によって惹起される慢性炎症の処置において有効である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、本発明は：
ａ）中耳液の量を約３０〜８０％減少させる；
ｂ）中耳液中の浸潤細胞数を約３０〜８０％減少させる；および
ｃ）耳の炎症を有するマウスの鼓膜の厚さを約３０〜８０％減少させる
のに有効な薬学的組成物を企図し、ここで、その組成物は、そのマウスに約０．１μｇ〜６０μｇの量で投与される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、耳用の薬学的組成物である。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、耳内投与用に製剤化される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、滴剤として製剤化される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、点耳薬として製剤化される。
【００４９】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、そのペプチドは、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニン（ｐｏｌｙ−ａｒｇｅｎｉｎｅ）ドメインを含むペプチド、または表１のペプチドである。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｐ１３である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ａ５２Ｒに由来する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｓ１〜Ｓ２２のペプチドである。本発明はまた、耳の炎症の処置を必要とするかまたは欲している動物における耳の炎症を処置する方法も企図し、その方法は、その動物に本発明の薬学的組成物を投与する工程を包含する。
【００５０】
Ｐ１３のインビボにおける有効性は、中耳炎（ＯＭ）のマウスモデルを用いて証明された。ＯＭは、体液の蓄積を伴う中耳の炎症性疾患である。ＯＭは、白血球、マクロファージおよびマスト細胞の浸潤、ならびに炎症性メディエーターおよび酵素の放出を特徴とする（参考文献２１）。これらのメディエーターは、血管透過性および分泌活性を高め、炎症性事象のカスケードを惹起し、体液の蓄積およびムチンの分泌をもたらす（参考文献２６および２７）。ＯＭにおける炎症の惹起は、種々の因子によるものとされており、それらの因子としては、細菌またはウイルスの感染、エウスタキオ管の機能不全およびアレルギーが挙げられる。しかしながら、証拠から、大抵の場合、サイトカインの活性化をもたらす細菌が原因であることが指摘される。滲出液の最大４０％から細菌が培養され、研究によって、培養物中に生存可能な生物が存在しないことが多い滲出液のおよそ８０％において細菌ＤＮＡの存在がＰＣＲによって示された（参考文献２８）。中耳に侵入する最も一般的な細菌は、肺炎球菌、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（インフルエンザ菌）およびＭ．ｃａｔａｒｒａｌｉｓである。これらの３つの細菌は、急性中耳感染の８５％を占め（参考文献２７）、肺炎球菌が、最も多い原因である。はじめに、生細菌が急性の炎症を引き起こす（その炎症は、病原体を排除するように仕組まれている）。急性感染において、自然免疫応答の干渉は、潜在的に宿主にとって害になり得、さらに細菌が広がり得る。細菌の感染によって惹起された急性炎症は、自己回復する（ｓｅｌｆ−ｒｅｓｏｌｖｅ）か、または抗生物質によって処置可能である。慢性炎症は、生存不能な細菌の生成物によることが多い、免疫系の継続的な活性化を伴う。ＯＭはしばしば、長引くか、または抗生物質抵抗性であることから、生細菌の非存在下におけるＴＬＲ刺激が示唆される。
【００５１】
本明細書中に開示される実験においてＰ１３でマウスを処置することにより、中耳内の細菌によって誘導される炎症が著しく減少した。中耳における体液の蓄積、浸潤細胞および鼓膜の厚さはすべて、ペプチドでの処置によって劇的に減少した。多くの潜在的なＴＬＲリガンドを有する加熱不活性化された細菌の投与によって、複数のＴＬＲの活性化におそらく起因する炎症反応を中耳に誘導した。加熱不活性化された細菌を使用することにより、生細菌によって惹起される急性感染において起き得る炎症のペプチド阻害について、細菌の拡散を招く可能性なく調査することが可能になった。ペプチドＰ１３がインビボにおいてこの応答を著しく阻害する能力は、個別にまたは組み合わせて使用される複数のＴＬＲリガンドに応答したサイトカイン分泌の阻害を示すインビトロデータと一致する。これらの研究では、単一用量のペプチドが、正常なＢＡＬＢ／ｃマウスの中耳に、加熱不活性化された肺炎球菌と同時に投与された。そのインビトロデータは、ＴＬＲ活性化を惹起した数時間後にペプチドＰ１３が加えられたとしても、サイトカイン分泌が阻害されることも示した。
【００５２】
本明細書中に開示される本発明は、Ｐ１３および表１のペプチドに加えて、本発明のいずれかのペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログとしてより広く特徴づけられるペプチドも企図する。これらの用語は、排他的ではなく、それらの用語の１つ以上によって記載されるペプチドのことを記載すると一斉に企図され得る。多くのそのようなペプチド（それらのすべてが本明細書中にはっきりと開示されるとは限らない）は、ペプチドとして、製剤または薬学的組成物の構成要素として、ならびに本発明の方法および使用のエレメントとして、企図される。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログは、本発明のペプチドおよびポリアルギニン配列を含むペプチドを含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログは、１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログのアミノ酸残基のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０個が、Ｄ−配置を有する。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を有する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログは、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域に１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、Ｐ１３と類似であるかまたはＰ１３に由来するペプチドの領域は、２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５５】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかもしくは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域またはポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかもしくは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域またはポリアルギニン配列は、２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域とポリアルギニン配列の両方が、独立してＤ−アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域とポリアルギニン配列の両方が、独立して２つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５６】
ポリアルギニン配列を含む本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログを含むペプチドを含むいくつかの実施形態において、Ｐ１３と類似であるかまたはＰ１３に由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、ポリアルギニン配列は、Ｌ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、ポリアルギニン配列は、１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５７】
いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、Ｌ−アミノ酸残基からなる。いくつかの実施形態において、ポリアルギニン配列は、Ｄ−アミノ酸残基からなり、本発明のペプチドと類似であるかまたは本発明のペプチドに由来するペプチドの領域は、１つ以上のＤ−アミノ酸残基を含む。
【００５８】
ポリアルギニン配列を含む本発明のペプチドの変異体、誘導体、立体異性体またはアナログを含むペプチドを含むいくつかの実施形態において、そのペプチドは、Ｄ−アミノ酸残基からなる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、不斉側鎖を含むアミノ酸残基、例えば、トレオニン、アロ−トレオニン、イソロイシンまたはアロ−イソロイシンを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、Ｄ−アロ−トレオニン残基またはＤ−アロ−イソロイシン残基を含む。
【００６０】
疾患
病原体に対する炎症反応の惹起は、自然免疫応答の構成要素であり、感染を管理するように仕組まれている。しかしながら、炎症性メディエーター産生の持続は、慢性炎症、組織損傷および疾患発症に導き得る。ＰＡＭＰ／ＴＬＲ相互作用によって惹起されて細胞の活性化に至るシグナル伝達カスケードは、多くの疾患状態（中耳炎、内耳の炎症、敗血症、自己免疫疾患、喘息、心臓疾患および癌を含む）と関連している（参考文献２９）。ＯＭは、中耳の炎症性疾患である。ＯＭはしばしば、長引くか、または抗生物質抵抗性である；これらの特徴は、生細菌の非存在下におけるＴＬＲ刺激を示唆する。異常なＴＬＲシグナル伝達応答は、敗血症の一因となる過度の細胞活性化応答をもたらし得る（参考文献３０および３１）。
【００６１】
炎症は、自己免疫の局面でもあり、疾患（例えば、多発性硬化症、関節リウマチおよびインスリン依存性真性糖尿病）における組織破壊に何らかの役割を果たすと仮説が立てられている（参考文献３２）。自然免疫系の細胞は、獲得／適応免疫において不可欠な役割を有する。ＴＬＲタンパク質は、獲得免疫の発生に最も関連性があると考えられている抗原提示細胞のタイプである樹状細胞の成熟および活性化に関わっている（参考文献３３）。アレルギー性喘息は、適応免疫応答による慢性炎症性疾患の例であり、ＴＬＲシグナル伝達経路が、アレルギー性表現型の誘導期と関係付けられている（参考文献３０）。炎症細胞の活性化を高める細菌感染およびウイルス感染は、喘息およびＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）などの疾患における増悪の主因である（参考文献３０）。
【００６２】
いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる。いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせに関連する。いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせと相関する。いくつかの実施形態において、炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせを伴う。いくつかの実施形態において、炎症を有する生物は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせも有する。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されるペプチドは、炎症を処置するために被験体に投与される。炎症の原因の非限定的な例としては、ウイルス、細菌または真菌の感染が挙げられる。いくつかの実施形態において、炎症は、自己抗原または他の任意の抗原に対する応答の結果である。いくつかの実施形態において、炎症は、抗自己抗原に対する応答の結果である。
【００６４】
いくつかの実施形態において、炎症は、耳の炎症を含む。その耳の炎症は、内耳および／または中耳の炎症であり得る。いくつかの実施形態において、炎症は、中耳炎を含む。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、中耳炎の処置のために使用される。
【００６５】
ＴＬＲ４シグナル伝達に欠陥のあるＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスは、慢性中耳炎（「ＣＯＭ」）を自然発症すると知られている。そのような内耳の炎症を有するマウスは、中耳性伝音難聴に加えて感音難聴を示し得る。ＣＯＭを有するＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスの中耳および内耳の組織学的検査は、中耳の粘膜面の肥厚、正円窓膜の肥厚、線維症、迷路炎およびエウスタキオ管の閉塞を実証した。これらの組織学的変化は、ＣＯＭおよび迷路炎の病歴を有する患者由来のヒト側頭骨にみられる組織学と相関する。そのマウスの研究から、ＣＯＭを有するＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスは、中耳にグラム陰性Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ細菌を有することが示された。マウス実験における観察結果とヒトＣＯＭおよび迷路炎（ｌａｂｒｉｎｔｈｉｔｉｓ）患者における観察結果との共通点から、本明細書中に開示される本発明のペプチドまたは薬学的組成物を用いたマウス実験は、ヒト被験体における治療効果がどのようなものであり得るかを予測する結果を提供することが示唆される。
【００６６】
いくつかの実施形態において、中耳炎は、聴力損失または聴力低下に関連する。本発明のペプチドまたは（ｏｆ）その薬学的組成物の投与は、発症している生物の聴力を普通の聴力レベルに改善し得る。いくつかの実施形態において、治療有効量の薬学的組成物を、それを必要とするかまたは欲している生物に投与することによって、その生物の聴力が改善する（ここで、その生物は、中耳炎を有し、かつ聴力が低下している）。いくつかの実施形態において、上記ペプチドまたは薬学的組成物は、局所的に投与される。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドまたは（ｏｆ）その薬学的組成物を投与する際、聴力を失った生物は、そのペプチドまたは薬学的組成物の投与なしに聴力が改善し得る速度よりも速く聴力を回復させる。
【００６７】
いくつかの実施形態において、治療有効量の本発明のペプチドまたはそれを含む薬学的組成物の投与を必要とするかまたは欲している中耳炎を有する生物にそれを投与することにより、中耳炎の症状の治療的な軽減が提供される。中耳炎の症状の非限定的な例としては、耳痛（疼痛）、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢が挙げられる。いくつかの実施形態において、症状は、疼痛である。
【００６８】
いくつかの実施形態において、炎症は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症を含む。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症の処置のために使用される。
【００６９】
いくつかの実施形態において、炎症は、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬を含む。いくつかの実施形態において、関節炎は、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎を含む。いくつかの実施形態において、皮膚炎は、海綿状皮膚炎（ｓｐｏｎｇｉｏｔｉｃ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、小児湿疹（ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｅｃｚｅｍａ）、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ）皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹を含む。いくつかの実施形態において、乾癬は、プラーク乾癬（ｐｌａｑｕｅ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、屈側性乾癬（ｆｌｅｘｕｒａｌ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症を含む。
【００７０】
いくつかの実施形態において、投与は、局所適用を含む。いくつかの実施形態において、投与は、皮膚、毛、外耳、鼓膜、鼻腔、頬側前庭または舌下腔（ｓｕｂｌｉｎｇｕａｌ ｃａｖｉｔｙ）への局所適用を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドおよびそれを含む薬学的組成物は、副鼻腔炎の処置に有効である。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物の投与を必要とするかまたは欲している生物へのその投与は、副鼻腔炎またはその症状に対して治療効果を提供する。副鼻腔炎の症状の非限定的な例としては、鼻詰まりもしくは鼻水、鼻汁、血性鼻汁、くしゃみ、咳嗽、鼻痛、頭痛、後鼻漏、顔面掻痒（ｉｔｃｈｙ ｆａｃｅ）、嗅覚もしくは味覚の低下、口臭、発熱、悪寒、歯痛または顔面痛が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、エアロゾル、蒸気、スプレーまたは噴霧として投与される。
【００７２】
治療的な用途
本発明の薬学的組成物で処置される「患者」、「被験体」または「宿主」は、ヒトまたは非ヒト動物のことを意味し得る。いくつかの実施形態において、被験体は、ヒトである。本発明のペプチドは、上記のような疾患および障害（例えば、炎症を伴うものであるがこれに限定されない）の処置において有用である。１つの実施形態において、本発明のペプチドおよび薬学的組成物は、任意の数の用途（例えば、患者の任意の疾患または他の処置可能な状態の処置が挙げられる）のための医薬の製造において使用され得る。
【００７３】
「治療効果」は、この用語が本明細書中で使用されるとき、治療的な利点および／または予防的な利点を包含する。治療的な利点とは、根底にある処置されている障害の根絶または回復のことを意味する。また、治療的な利点は、根底にある障害になおも患者が苦しめられているかもしれないが、その患者において改善が認められるような、その根底にある障害に関連する生理学的症状の１つ以上の根絶または回復によって達成される。予防的な利点のために、上記組成物は、たとえ特定の疾患の診断がなされていないかもしれないにしても、この疾患を発症するリスクのある患者またはある疾患の生理学的症状の１つ以上を報告している患者に投与され得る。予防効果には、ある疾患もしくは状態の出現を遅延させることもしくは無くすこと、ある疾患もしくは状態の症状の発生を遅延させることもしくは無くすこと、ある疾患もしくは状態の進行を遅くすること、停止することもしくは逆行させること、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。
【００７４】
投与
ペプチドを含む薬学的組成物は、薬学的賦形剤または薬学的希釈剤とともに患者に投与され得る。適当な薬学的賦形剤または薬学的希釈剤の非限定的な例としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、穀粉、胡粉、シリカゲル、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、緩衝水、リン酸緩衝食塩水などが挙げられる。これらの組成物は、滴剤、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、散剤、徐放製剤などの形態をとり得る。いくつかの実施形態において、上記組成物は、点耳薬である。別の好ましい実施形態において、任意の形態のペプチドを含む組成物は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ剤、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムならびに鉱油をはじめとした適当な賦形剤および希釈剤を用いてさらに調節され得る。上記製剤は、さらに滑沢剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、保存剤、甘味剤または香味剤を含み得る。上記組成物は、単位剤形として製剤化され得る（各投薬量は例えば約１ｎｇ〜１０００ｍｇの上記ペプチドを含む）。いくつかの実施形態において、用量は、１００〜１０００ｍｇの上記ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、用量は、１００〜５００ｍｇの上記ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、用量は、２００〜３００ｍｇの上記ペプチドを含む。用語「単位剤形」とは、ヒト被験体および他の哺乳動物に対する単位投薬量として適する物理的に分離した単位のことを指し、各単位は、適当な薬学的希釈剤または薬学的賦形剤とともに、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性な材料を含む。これらは、薬学的に許容され得る希釈剤または賦形剤とともにヒト、家庭内のペット、家畜または他の動物に単位剤形で投与され得る。投与は、局所的、耳内、非経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼、脳室内、嚢内、脊髄内、槽内、腹腔内、鼻腔内、エアロゾル、坐剤によるもの、または経口投与であり得る。経口使用のための製剤としては、無毒性の薬学的に許容され得る賦形剤との混合物中に活性成分を含む錠剤が挙げられる。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、滑沢剤、滑剤および接着防止剤（ａｎｔｉａｄｈｅｓｉｖｅ）（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油またはタルク）であり得る。
【００７５】
本発明の活性な治療用製剤は、非経口（ｐａｒｅｎｔａｌ）、皮下、皮内、筋肉内または静脈内投与用の、例えば、等張性緩衝液、水性緩衝液または食塩緩衝液において再構成することが意図された凍結乾燥形態で提供され得る。本発明の主題の組成物はまた、開口部用の、例えば、経口、耳内、経鼻または舌下投与用の液体調製物（例えば、懸濁液、シロップ剤またはエリキシル剤）によって、治療用ペプチドを必要とする患者に投与され得る。本発明の主題の組成物はまた、経口投与用の製剤のために調製され得る（例えば、カプセル、錠剤、丸剤など、ならびにチュアブル固体製剤）。本発明の主題の組成物はまた、経皮投与用のクリーム（例えば、液体、粘稠性液体、ペーストまたは粉末）として調製され得る。本発明の主題の組成物はまた、エアロゾル化成分を含むかまたは含まない、肺投与用の散剤として調製され得る。本発明の組成物は、滴剤、例えば、点耳薬として調製され得る。
【００７６】
ここに開示されている組成物は、経口、耳内、鼻腔内、舌下、十二指腸内、皮下、頬側、結腸内、直腸、膣、粘膜、肺、経皮、皮内、非経口、静脈内、筋肉内および眼球への形態での送達、ならびに血液脳関門を越えることができる形態での送達のために使用され得る。
【００７７】
投薬量
本発明の任意のペプチドの投薬量は、患者の症状、年齢および体重、処置されるかまたは予防される障害の性質および重症度、投与経路、ならびに組成物の形状に応じて変動し得る。主題の任意の製剤は、単一用量または分割量で投与され得る。本発明のペプチドに対する投薬量は、当業者に公知の手法または本明細書中で教示されるような手法によって容易に決定され得る。また、本発明は、２つ以上の主題のペプチドの混合物ならびに他の治療薬を企図する。
【００７８】
ある特定の実施形態において、主題のペプチドの投薬量は、通常、体重１ｋｇあたり約０．０１ｎｇ〜約１０ｇの範囲、詳細には、１ｋｇあたり約１ｎｇ〜約０．１ｇの範囲、より詳細には、１ｋｇあたり約１００ｎｇ〜約１０ｍｇの範囲であり得る。
【００７９】
有効な用量または有効量、および上記製剤の投与のタイミングに対して起こり得る任意の影響が、本発明の任意の特定のペプチドに対して特定される必要があり得る。これは、動物の１つ以上の群を用いるか、または適切な場合はヒトにおける治験において、本明細書中に記載されるような通例の実験によって達成され得る。任意のペプチドおよび方法の処置または予防に関する有効性は、サプリメントを投与して、そして目的の新生物に関連する１つ以上の指標を測定し、これらの指標の処置後の値を処置前の同じ指標の値と比較することによって、その投与の影響を評価することによって評価され得る。
【００８０】
所与の患者に最も効果的な処置をもたらし得る任意の特定のペプチドの投与の正確な時間および量は、特定のペプチドの活性、薬物動態およびバイオアベイラビリティ、患者の生理学的状態（年齢、性別、疾患のタイプおよびステージ、全般的な身体的状態、所与の投薬量に対する応答性、ならびに投薬形態を含む）、投与経路などに依存し得る。本明細書中に示される指針、例えば、投与の最適な時間および／または量を決定することを用いることにより、処置が最適化され得る（この最適化には、被験体をモニタリングすることならびに投薬量および／またはタイミングを調整することからなる単なる通例の実験法が必要なだけである）。
【００８１】
被験体が処置されながら、２４時間のあいだの所定の時間に、関連性のある１つ以上の指標を測定することによってその被験体の健康状態がモニターされ得る。サプリメントを含む処置、投与の量、時間、および製剤は、そのようなモニタリングの結果に従って最適化され得る。患者は、同じパラメータを測定することによって改善の程度を判定するために定期的に再評価され得、１回目のそのような再評価は、典型的には、治療開始から４週間の終わりに行い、その後の再評価は、治療中の４〜８週間ごと、次いでその後は、３ヶ月ごとに行う。治療は、数ヶ月間または数年間にもわたって継続されることがあり、最低１ヶ月が、ヒトの場合の代表的な治療の長さである。投与されるペプチドの量の調整、および場合により、投与の時間の調整は、これらの再評価に基づいて行われ得る。
【００８２】
処置は、上記ペプチドの最適な用量未満の、より少ない投薬量から開始され得る。その後、投薬量は、最適な治療効果に達するまで少量ずつ増加され得る。
【００８３】
本発明のいくつかのペプチドまたは他のペプチドを組み合わせた使用は、種々の構成要素の作用の開始および持続時間が補完的（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）であり得るので、任意の個別の構成要素に対する必要な投薬量を減少させ得る。そのような併用療法では、種々のペプチドが、一緒にまたは別個に、同時にまたはその日のうちの異なる時点において、送達され得る。
【００８４】
主題のペプチドの毒性および治療効果は、細胞培養物または例えばＬＤ５０およびＥＤ５０を測定するための実験動物において、標準的な薬学的手順によって測定され得る。毒性の副作用を示すペプチドを使用してもよいが、副作用を減少させるために、それらのペプチドが所望の部位を標的にする送達系を設計するように取り計らうべきである。
【００８５】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトにおいて使用するためのある範囲の投薬量を定める際に用いられ得る。任意のサプリメントの投薬量またはその中の任意の構成要素の投薬量は、好ましくは、毒性がほとんどないかまたはまったくなく、ＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に置かれる。その投薬量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。本発明のペプチドの場合、治療的に有効な用量は、はじめに細胞培養アッセイから推定され得る。細胞培養物において測定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する被験ペプチドの濃度）を含む循環血漿濃度の範囲を達成する用量が動物モデルにおいて製剤化され得る。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定され得る。
【００８６】
製剤
本発明のペプチドに基づく組成物は、当該分野で周知であるようなそれらの意図される用途に応じて、様々な手段によって投与され得る。例えば、本発明の組成物が経口的に投与される場合、それらは、錠剤、カプセル、顆粒剤、散剤またはシロップ剤として製剤化され得る。あるいは、本発明の製剤は、注射（静脈内、筋肉内または皮下）、滴剤注入（ｄｒｏｐ ｉｎｆｕｓｉｏｎ）調製物または坐剤として非経口的に投与され得る。上記ペプチドに基づく組成物はまた、エアロゾル化賦形剤を加えてまたは加えずに、当該分野で公知の標準的な手法を用いてその組成物を１〜５μｍの粒子にエアロゾル化することによって肺の深くにまで投与され得る。眼の粘膜への経路による適用の場合、本発明の組成物は、点眼薬または眼軟膏として製剤化され得る。耳用の薬学的組成物は、内面的または外面的に耳に適用するために、点耳薬、軟膏、クリーム、液体、ゲルまたは膏薬として製剤化され得る。これらの製剤は、従来の手段によって調製され得、所望であれば、それらの組成物は、任意の従来の添加物（例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、可溶化剤、懸濁補助剤、乳化剤またはコーティング剤）と混合され得る。
【００８７】
本発明の製剤では、湿潤剤、乳化剤および潤滑剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム）ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤ならびに酸化防止剤が、製剤化された薬剤中に存在し得る。
【００８８】
主題のペプチドに基づく組成物は、経口、耳内、経鼻、局所（頬側および舌下を含む）、直腸、膣、エアロゾルおよび／または非経口投与に適していることがある。上記ペプチドに基づく組成物の製剤は、単位剤形として都合良くもたらされ得、薬学分野で周知の任意の方法によって調製され得る。単一用量を生成する他の賦形剤と組み合わされ得る組成物の量は、処置される被験体および特定の投与様式に応じて変動し得る。
【００８９】
経口投与に適している製剤は、カプセル、カシェ剤、丸剤、錠剤、舐剤（風味が付いた基剤、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカントを用いる）、散剤、顆粒剤の形態、または水性もしくは非水性の液体における溶液もしくは懸濁液としての形態、または水中油型もしくは油中水型の液体エマルジョンとしての形態、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤としての形態、またはトローチ剤（不活性な基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア）を用いる）としての形態（各々、活性成分として所定量の主題の組成物を含む）であり得る。本発明の組成物は、ボーラス、糖剤またはペーストとしても投与され得る。
【００９０】
経口投与用の固体剤形（カプセル、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）において、主題のペプチド組成物は、１つ以上の薬学的に許容され得るキャリア（例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム）および／または以下のもの：（１）充填剤または増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸）；（２）結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシア）；（３）吸湿剤（例えば、グリセロール）；（４）崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩および炭酸ナトリウム）；（５）溶解遅延剤（例えば、パラフィン）；（６）吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）；（７）湿潤剤（例えば、アセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）；（８）吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）；（９）潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物）；および（１０）着色剤のうちのいずれかと混合される。カプセル、錠剤および丸剤の場合、ペプチド組成物は、緩衝剤も含み得る。同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖のような賦形剤、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを用いる軟および硬ゼラチンカプセルにおける充填剤としても使用され得る。
【００９１】
錠剤は、必要に応じて１つ以上の副成分とともに、圧縮または成形によって作製され得る。圧縮された錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性な希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシルメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤を用いて調製され得る。成形された錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らされた主題の組成物の混合物を適当な機械において成形することによって作製され得る。錠剤および他の固体剤形（例えば、糖衣錠、カプセル、丸剤および顆粒剤）は、必要に応じて、溝がつけられ得るか、またはコーティングおよびシェル（例えば、腸溶コーティングおよび医薬品の製剤化の分野において周知の他のコーティング）とともに調製され得る。
【００９２】
経口投与用の液体の剤形は、薬学的に許容され得るエマルジョン、マイクロエマルジョン、ゲル、溶液、懸濁液、シロップ剤およびエリキシル剤を含む。その液体投薬のペプチド製剤は、当該分野において一般に使用されている不活性な希釈剤（例えば、水または他の溶媒）、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含み得る。
【００９３】
上記ペプチド製剤の懸濁液の投薬量は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物のような懸濁剤を含み得る。
【００９４】
直腸投与用または膣投与用のペプチド製剤は、１つ以上の適当なキャリアおよび他の賦形剤（例えば、カカオバター、ポリエチレングリコール、坐剤用ろうまたはサリチレートを含む）とペプチドを混合することによって調製され得かつ室温では固体であるが体温では液体であるがゆえに体腔内で融解してペプチドを放出する、坐剤として提供され得る。膣投与に適した製剤としては、適切であると当該分野で公知である賦形剤を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡沫またはスプレー製剤が挙げられる。
【００９５】
主題の組成物の経皮的投与用のペプチド投薬製剤としては、滴剤、散剤、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入剤が挙げられる。活性な成分は、滅菌条件下で、薬学的に許容され得るキャリアおよび必要とされ得る任意の保存剤、緩衝剤または噴射剤と混合され得る。
【００９６】
軟膏、ペースト、クリームおよびゲルは、主題の組成物に加えて、賦形剤（例えば、動物性脂肪および植物性脂肪、油、ろう、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物）を含み得る。本発明のペプチド組成物は、乳児用のウェットティシューの形態でもあり得る。
【００９７】
散剤およびスプレーは、主題の組成物に加えて、賦形剤（例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物）を含み得る。スプレーは、さらに、慣例の噴射剤（例えば、クロロフルオロヒドロカーボン）および揮発性の非置換型炭化水素（例えば、ブタンおよびプロパン）を含み得る。
【００９８】
あるいは、本発明のペプチド組成物は、エアロゾルによって投与され得る。これは、本化合物を含む水性エアロゾル、リポソーム調製物または固体粒子を調製することによって達成される。非水性（例えば、フルオロカーボン噴射剤）懸濁液も使用され得る。音波噴霧器は、主題の組成物中に含まれるペプチドを分解し得る剪断へのそのペプチドの曝露を最小にするので、音波噴霧器を使用してもよい。
【００９９】
通常、主題の組成物の水性の溶液または懸濁液を従来の薬学的に許容され得るキャリアおよび安定剤とともに製剤化することによって、水性エアロゾルが生成される。それらのキャリアおよび安定剤は、特定の主題の組成物に関する必要条件によって変化するが、それらとしては、代表的には、非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎｓ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓまたはポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような無害のタンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシンなどのアミノ酸、緩衝剤、塩、糖または糖アルコールが挙げられる。エアロゾルは、一般に、等張性の溶液から調製される。
【０１００】
非経口投与に適した本発明の薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容され得る滅菌された等張性の水性もしくは非水性の溶液、分散液、懸濁液もしくはエマルジョン、または、使用直前に、滅菌された注射可能な溶液もしくは分散液に再構成され得る滅菌された粉末とともに主題の組成物を含み、それらは、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、その製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質、または懸濁剤もしくは増粘剤を含み得る。
【０１０１】
本発明の薬学的組成物において使用され得る適当な水性および非水性のキャリアの例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適当な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、分散液の場合は必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって、維持され得る。
【実施例】
【０１０２】
実施例１：材料および方法
天然の配置のペプチド：Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓの独占所有権の独自の並列アレイ合成プラットフォームを用いてＭｉｍｏｔｏｐｅｓがペプチドを合成した。各ペプチドは、本発明のアミノ酸配列、および必要に応じて、そのペプチドのＣ末端に位置する、細胞の取り込みを促進する９残基アルギニン細胞導入配列を含んでいる。それらのペプチドは、表１に示されている。
【０１０３】
Ｌ−アミノ酸残基を有するペプチドを合成するように、Ｄ−アミノ酸残基を有するペプチドを合成する。ペプチドを構築する自動システムにおいて使用するための、適切な保護基を有するＤ−アミノ酸は、商業的に入手可能である。本明細書中に記載されるペプチドは、すべてＬ−アミノ酸から作製され得るか、すべてＤ−アミノ酸から作製され得るか、またはその両方の任意の割合の混合物から作製され得る。ペプチドが、少なくとも１つのＬ−アミノ酸残基および少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む場合、そのペプチドは、立体化学的に混合されていると考えられる。同様に、導入タグも、すべてＬ−アミノ酸から作製され得るか、すべてＤ−アミノ酸から作製され得るか、またはその両方の任意の割合の混合物から作製され得る。立体化学だけが異なるペプチドは、同じレセプターまたは異なるレセプターにおいて、異なる特性、利点、特異性、親和性および活性を有し得る。一部の例では、立体化学だけが異なるペプチドは、似た特異性および活性を示し得る。
【０１０４】
各ペプチドは、ＦＩＴＣ標識（フルオレセインイソチオシアネート）ありとなしの両方で構築される。ＦＩＴＣ標識されたペプチドは、ＦＡＣＳ解析のために使用される。ＦＩＴＣ標識を欠くペプチドは、インビトロにおける阻害アッセイおよびインビボにおける処置研究のために使用される。
【０１０５】
試薬：ヌクレアーゼ抵抗性のリン酸化オリゴヌクレオチドは、Ｏｌｉｇｏｓ Ｅｔｃ．，Ｉｎｃ．から購入した。その配列は、５’−ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ−３’（配列番号３７７）（ＣｐＧ−オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）だった。ＴＮＦ−αアッセイは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入したアッセイキットを用いて行った。マウスのＩＬ−１αおよびＴＮＦ−αは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。ＰＭＡ（酢酸ミリスチン酸ホルボール）およびＬＰＳ（リポ多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃａｒｉｄｅ））は、Ｓｉｇｍａから購入した。ＴＬＲリガンドであるフラジェリン、ザイモサンおよびＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから購入した。サイトカインアッセイは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入したアッセイキットを用いて行った（加熱不活性化された肺炎球菌は、Ｄｒ．Ｔｈｏｍａｓ ＤｅＭａｒｉａ，Ｔｈｅ Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，Ｏｈｉｏからの厚意によって寄贈されたものである）。
【０１０６】
細胞株および細胞培養：ＲＡＷ２６４．７（マウス単球／マクロファージ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を３７℃の５％ＣＯ２加湿恒温器内で培養し、１０％（ｖ／ｖ）加熱不活性化ＦＣＳ、１．５ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充されたＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で生育した。
【０１０７】
サイトカイン分泌：ＲＡＷ２６４．７細胞を４８ウェルプレートに１．５×１０５細胞／ウェル〜３×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。２４時間後、その細胞を、様々なＰＡＭＰによって１８時間活性化する前、活性化と同時に、または活性化の後、室温にて３つ組で様々な濃度のペプチドとともにインキュベートした。無細胞上清をサイトカインについてＥＬＩＳＡによって４つ組で解析した。ＲＡＷ２６４．７細胞をＣｐＧ−ＯＤＮ（１μｇ／ｍｌまたは１．２５μｇ／ｍｌ）、ＬＰＳ（約１ｎｇ／ｍｌ）、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）（約１０μｇ／ｍｌ）、フラジェリン（約５ｎｇ／ｍｌ）またはザイモサン（約１０μｇ／ｍｌ）で刺激した。各ＰＡＭＰを用いて用量反応曲線を得ることにより、最適な刺激濃度を決定した。ＣｐＧ−ＯＤＮ刺激については、細胞を３７℃で４時間インキュベートし、上清を回収し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡによって測定した。類似のアッセイを用いて、ｔｏｌｌレセプターシグナル伝達によって媒介される炎症性疾患に関与する任意のサイトカインを測定することができる。
【０１０８】
フローサイトメトリー：ペプチドの内部移行を定量するＣｅｌｌｑｕｅｓｔソフトウェアを使用するフローサイトメトリー（ＦＡＣＳｃａｎ，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）によって細胞を解析する。７−ＡＡＤ（７−アミノ−アクチノマイシンＤ）染色に基づいて死細胞を排除するようにゲートを設定する。ＦＩＴＣ標識ペプチドの細胞表面への結合に起因する蛍光（Ｆｌｏｕｒｅｓｃｅｎｃｅ）は、トリパンブルーを用いて消光される。得られたデータは、バックグラウンドの自己蛍光が差し引かれた幾何平均蛍光単位（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｕｎｉｔｓ）（Ｆ）である。
【０１０９】
免疫ブロット法：ＲＡＷ２６４．７細胞（６×１０５）を１２ウェルプレートに一晩プレーティングする。細胞を、試験されるペプチドまたはコントロールスクランブルペプチドとともに室温で１５分間インキュベートし、次いで、１５または３０分間、培地またはＬＰＳ（１ｎｇ／ｍｌ）で刺激する。細胞を溶解し、タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリルアミドゲル電気泳動）（１２％）によって分画する。Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩｋＢ−α（Ｓｅｒ３２）抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を用いて免疫ブロット法を行い、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化二次抗体を用いて検出し、化学発光によって可視化する。Ｅｐｓｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ６３６スキャナーに連結されたＮｕｃｌｅｏ Ｔｅｃｈ Ｇｅｌ Ｅｘｐｅｒｔソフトウェアを用いてバンド強度を測定し、強度／面積として表現する。
【０１１０】
細胞生存率：ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造者の指示書に従って使用して生存率について細胞をアッセイした。簡潔には、細胞を９６ウェルプレートに播種し、３７℃の加湿５％ＣＯ２雰囲気内で一晩インキュベートした。サンプルをアッセイする準備が整ったら、２０μｌの試薬を各ウェルに加え、３７℃の加湿５％ＣＯ２雰囲気内で１．５時間インキュベートした。ＥＬｘ８００吸光度マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して４９０ｎｍにおける吸光度を読み、データを、Ｇｅｎ５ソフトウェア（ＢｉｏＴｅｋ）を用いて解析した。いくつかのペプチドを、ある範囲の濃度にわたるトリパンブルー排除染色によって細胞生存率に対する効果について評価し、次いで、各ペプチドを、細胞生存率に対して効果が無かった最も高い濃度でサイトカイン阻害について試験した。
【０１１１】
実施例２：ＣｐＧ−ＯＤＮによって誘導されるサイトカイン分泌に対するペプチドの効果
ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激に応答したＲＡＷ２６４．７細胞からのＴＮＦ−αの分泌に対するいくつかのペプチドの効果を研究した。はじめに、各ペプチドを３つの濃度、３７μＭ、２２．２μＭおよび１１．１μＭで試験した。３つすべての用量においてＴＮＦ−α分泌の５０〜１００％阻害を証明する１７個のペプチドが、示される（表２）。次いで、これらのペプチドを１１．１μＭ、７．４μＭおよび３．７μＭにおいて試験した（表３）。それらのペプチドは、続いて７．４μＭでも阻害活性を証明し、それらのペプチドのうちの１２個は、３．７μＭでも阻害活性を有した。ＴＮＦ−α阻害について試験された濃度において、各ペプチドに対する細胞生存率を調べた。細胞生存率の低下は証明されなかった。
【０１１２】
【表２−１】
【０１１３】
【表２−２】
【０１１４】
【表３−１】
【０１１５】
【表３−２】
実施例３：ＣｐＧ−ＯＤＮによって誘導されるサイトカイン分泌に対するペプチドの効果
様々なＴ−ペプチドによるＴＮＦ−α分泌の阻害を調べた。ＲＡＷ２６４．７細胞を４８ウェルプレートに３×１０５細胞／ウェルでプレーティングした。２４時間後、その細胞を、室温にて３つ組で１５分間、様々な濃度のペプチドとともにインキュベートし、次いで、１．２５μｇ／ｍｌのＣｐＧ−ＯＤＮまたは１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した。次いで、細胞を３７℃で４時間インキュベートし、上清を回収し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡによって測定した。ペプチドとともにインキュベートされた細胞からのＴＮＦ−α分泌をペプチド処理していないコントロール細胞からのＴＮＦ−α分泌と比較することによって阻害率を計算した。ペプチドＴ３、Ｔ１１、Ｔ２１、Ｔ３６、Ｔ３７、Ｔ５１およびＴ５２による阻害を、Ｃ末端に９個のアルギニン残基の配列を有するＰ１３のアナログ（Ｐ１３−Ｒ９）による阻害と比較した。（表４）。
【０１１６】
【表４】
実施例４：Ｐ１３に由来するペプチドの構造活性試験
Ｐ１３内の残基の改変に対する許容度を測定するために、構造活性相関（ＳＡＲ）を調査した。ＳＡＲに使用したペプチドには、配列番号３１７〜３６８の活性を研究するために使用された配列番号１３１〜１８２が含まれる。以下の構造的改変を有するペプチドを作製し、活性について、Ｐ１３に対して評価した：
１．Ｎ末端および／またはＣ末端の残基の欠失；
２．各残基におけるアラニンスキャン；
３．同じ位置における同様の電荷を有する残基（例えば、同じ位置におけるＡｓｐまたはＧｌｕ；同じ位置におけるＬｙｓ、ＡｒｇまたはＨｉｓ）の比較；
４．同じ位置におけるヒドロキシル化された側鎖（例えば、同じ位置におけるＳｅｒまたはＴｈｒ）の比較；
５．同じ位置における芳香族側鎖（例えば、同じ位置におけるＰｈｅ、Ｔｙｒ、ＨｉｓまたはＴｒｐ）の比較；
６．硫黄含有側鎖（例えば、ＭｅｔおよびＣｙｓ）による側鎖の置き換え；
７．分枝状脂肪族側鎖（例えば、Ｌｅｕ、ＩｌｅおよびＶａｌ）の保存的置き換え；
８．代替残基を含めることによる構造の破壊；
９．逆の配列およびスクランブル配列；ならびに
１０．二量体化。
【０１１７】
上記のＳＡＲから、ある特定の置換によって、Ｐ１３の活性よりも優れた活性を有するペプチドがもたらされることが明らかになった。少なくとも５つの異なる場合における単一アミノ酸の置換および少なくとも２つの場合における２つ以上のアミノ酸の置換によって、優れた活性が得られた。これらの７つのペプチドは、配列番号１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１および１８２である。この発見は、ＳＡＲ誘導体の活性がＰ１３の活性に匹敵するかまたはそれよりも低いと予想されるという点において予想外だった。活性は、ＣｐＧによってＲＡＷ２６４．７細胞を刺激した後のＴＮＦ−αの阻害と定義された。
【０１１８】
実施例５：中耳炎に対するペプチドの効果
中耳炎の誘導：約８〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ（Ｂａｇｇアルビノ）マウスをキシラジンおよびケタミン（約０．１ｍｇ／３０ｇ体重）の皮下注射で麻酔し、感染または穿孔がないことを確かめるためにそのマウスの耳を手術用顕微鏡下で調べる。細菌を加えないときのペプチドの効果を測定するために、１つの群の動物の一方の耳にＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）および反対の耳に約１０μＭの表１のペプチドを注射する。第２の群の動物の一方の耳に約５．０μｌのＰＢＳ＋加熱不活性化された肺炎球菌（約１０９ＣＦＵ／ｍｌ）および反対の耳に約５．０μｌのペプチド（約１０μＭ）＋加熱不活性化された肺炎球菌（約１０９ＣＦＵ／ｍｌ）を投与する。注射は、鼓膜を通り過ぎて行う。細菌注射の約３日後に動物を殺し、組織を組織学的に処理することにより中耳の疾患を評価する。１）中耳に存在する体液の面積；２）中耳液中の細胞の数；および３）注射部位から離れた点の鼓膜（ＴＭ）の厚さを測定することによって炎症を定量化する。コントロール群として役立てるために、測定された組織学的パラメータの各々について、ＰＢＳ単独を注射されたマウス（ｎ＝１８）からデータを得る。疾患の誘導は、ペプチドなしで肺炎球菌を注射された耳が、中耳の炎症について評価された３つのパラメータ：体液の面積、細胞数、鼓膜の厚さのうち少なくとも２つにおいてコントロールＰＢＳ処置マウスよりも少なくとも２標準偏差増加を示した場合、陽性と定義される。
【０１１９】
組織の回収：実験の処置の終わりに、組織学検査のためにマウスを殺し、組織を回収する。マウスに麻酔薬を過剰投与し、約１．０ｍｌの食塩水に続いて約２０ｍｌの固定液（約０．１Ｍリン酸緩衝液中の約１．５％パラホルムアルデヒド、約３％グルタルアルデヒド）を心臓内に灌流させる。中耳は、頭蓋底によって互いにつながった状態で無傷のまま放置するので、組織学的検査および切断のために両耳が一緒に処理される。これにより、組織学的包埋、切断、染色および解析のすべてを両側同時に行うことができ、それにより、その後の定量的解析に対する処理の変動（ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｖａｒｉａｂｌｅｓ）の任意の影響が減少する。中耳を脱灰し、グリコールメタアクリレートプラスチック内に包埋し、約５μｍの薄片に切り、スライドガラス上に連続的に載せ、染色し、カバーガラスをかぶせる。
【０１２０】
組織病理学的解析：鼓膜臍部（ｕｍｂｏ）および岬角（ｐｒｏｍｏｎｔｏｒｙ）のレベルの連続した３つの切片を、１）中耳に存在する体液の面積；および２）中耳液中の細胞の数；および３）鼓膜の厚さの測定のために選択する。各測定は、１検体あたり３つの連続した切片において行う。
【０１２１】
統計解析：細菌を加えないときのペプチドの効果を測定するために、動物の一方の耳にＰＢＳ単独および他方の耳に約１０μＭペプチドを注射する。３つの組織学的パラメータ：１）中耳に存在する体液の面積；２）中耳液中の細胞の数；および３）鼓膜の厚さの各々についてのＰＢＳ単独の効果をペプチドの効果と比較する、対応のあるｔ検定を行う。これらの動物を用いて、上に記載した組織学的パラメータの各々について、一方の耳におけるペプチド＋肺炎球菌の効果を、反対の耳における肺炎球菌単独の効果と比較する対応のあるｔ検定を行う。
【０１２２】
実施例６：敗血症性ショックに対するペプチドの効果
マウスの敗血症性ショックモデルにおける炎症性メディエーターの阻害。ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＰＢＳ、約１００μｇ／マウス／２５０μｌのＬＰＳ、または約１００μｇのＬＰＳ＋様々な用量のペプチドを腹腔内注射する。処置の約２および約６時間後に血清を採取し、ＥＬＩＳＡによって炎症促進性サイトカインＭＩＰ−２およびＴＮＦ−α、ならびに可溶性ＩＣＡＭ−１について評価する。
【０１２３】
実施例７：マウス中耳に対するＰ１３の効果
細菌を加えないときにペプチドによって引き起こされる効果に関するアッセイ
５匹のマウスの一方の耳にＰＢＳおよび反対の耳に１０μＭのペプチドＰ１３を注射した。３日後、動物を殺し、中耳を包埋し、薄片に切り、染色し、体液の面積、浸潤細胞の数、および鼓膜の厚さについて評価した。対応のあるｔ検定（両側）を用いることにより、上記３つのパラメータの各々を分析した。細菌によって誘導された炎症が存在しないとき、ＰＢＳを注射された耳とＰ１３を注射された耳との間に、１）体液の面積（ｐ＝０．１０４）；２）細胞数（ｐ＝０．８８０）；または３）鼓膜の厚さ（ｐ＝０．８９１）の差は見られなかった。
【０１２４】
細菌を加えたときのペプチドによって引き起こされる効果に関するアッセイ
インビボにおいて炎症に影響するペプチドの有効性を調べるために、２０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスの一方の中耳に加熱不活性化された肺炎球菌＋ＰＢＳ、および反対側の中耳に加熱不活性化された肺炎球菌＋１０μＭペプチドＰ１３を注射した。３日後、それらの動物を殺し、中耳液の面積、浸潤細胞の数および鼓膜の厚さについて評価した。疾患の発症は、定量化された３つのパラメータのうち２つにおいて、バックグラウンドコントロール（ＰＢＳを注射された耳、ｎ＝１８）の少なくとも２標準偏差を越えた増加と定義した。２０匹のマウスのうち、合計７匹が、疾患誘導についての基準を満たした。疾患を有するこれらの７匹のマウスからの対応のあるｔ検定による中耳の分析から、ペプチド処置が、体液の量（ｐ＝０．００４）、浸潤細胞の数（ｐ＝０．０２）および鼓膜の厚さ（ｐ＝０．００２）を有意に減少させたことが示された。疾患を有する各個別のマウスの炎症に関するこれらの３つのパラメータの調査から、ペプチドＰ１３の単回の処置によって見られる劇的な効果が例証された。興味深いことに、上記７匹のマウスのうち６匹が、炎症の全面積の減少を示したが、１匹の動物は、体液の面積および鼓膜の厚さについては中程度の減少を示しただけで、細胞数は減少を示さなかった。加熱殺菌された細菌の注射によって、３日後、中耳に顕著な炎症反応がもたらされた。これは、粘膜および鼓膜の腫脹、細胞浸潤、ならびに中耳腔を満たす著しい体液（滲出液）の分泌および蓄積を特徴とした。この炎症反応は、著しい粘膜の細胞の肥大、ならびにムチンおよび他の体液の活性な分泌をもたらした。ペプチドＰ１３を上記細菌とともに注射したとき、中耳腔への体液の蓄積の著しい減少および粘膜肥大の減少が見られた。
【０１２５】
【表５】
ａ中耳の炎症は、中耳内の体液の面積、中耳液中の細胞の数および注射部位から離れた点で測定される鼓膜の厚さについて、連続した３つの組織切片を測定することによって評価される。データは、中耳の炎症を有する動物における平均±ＳＤを表している。対応のあるｔ検定を用いて統計学的評価を行う。
ｂＰＢＳで処置される動物には細菌またはペプチドを投与しない。
ｃ動物の一方の耳に肺炎球菌＋ＰＢＳおよび反対の耳に肺炎球菌＋ペプチド（約１０μＭ）を注射する。
ｄ対応のあるｔ検定を用いる統計学的評価は、細菌を注射された罹患動物から回収されたデータを用い、ペプチドとペプチド処置なしとを比較して行う。
【０１２６】
実施例８：ＦＩＴＣ標識されたＰ１３−Ｒ９による鼓膜の横断についてのアッセイ
以下のプロトコルによって耳嚢（ｂｕｌｌａ）を介してＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した。
【０１２７】
８〜１２週齢の３匹のＢＡＬＢ／ｃマウスを、ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した後、細菌を投与した。首の腹側正中切開を行い、鈍的切開後、耳嚢を露出させた。細い針を用いておよそ３．５μｌの細菌懸濁液（加熱不活性化された肺炎球菌の１０１０ＣＦＵ／ｍｌ）を、骨壁を介して中耳に接種した。右耳と左耳の両方に耳嚢注射によって細菌を投与した。
【０１２８】
２４時間後、手術用顕微鏡を用いて動物の耳鏡検査を行った。上に記載したようにマウスを麻酔し、急性中耳炎（ＡＯＭ）についての以下の３つの基準の存在または非存在について鼓膜を調べた：１）鼓膜の後ろにおける中耳滲出液；２）透明から赤色または白色への鼓膜の色の変化（中耳の炎症および／または化膿を示唆する）；３）平坦（ｎｅｕｔｒａｌ）から出っ張りまたは引っ込みへの鼓膜の位置の変化。これらの基準によってＡＯＭを証明する動物だけを使用した。
【０１２９】
４つの耳が、ＡＯＭに対する基準を満たした。ＦＩＴＣ標識されたペプチドＰ１３−Ｒ９（１０μｇ／３０μｌ）を中耳に滴下した。そのペプチドを１０分間にわたって吸収させた。１０分後、外耳道を２回洗い流し、吸い取ることにより、残留している任意のペプチドを除いた。次いで、３０ｇ針を備えた１０μｌのＨａｍｉｌｔｏｎ注射器を用いて中耳液を吸引し、その体液をスライド上に塗抹した。ＦＩＴＣ標識されたペプチドを蛍光鏡（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｓｃｏｐｅ）下で観察した。写真から、ＦＩＴＣ標識されたＰ１３−Ｒ９が鼓膜を通過し、中耳液中の細胞と会合していることが証明された。
【０１３０】
図１Ａは、中耳液中の細胞の明視野の顕微鏡検査結果を表している。図１Ｂは、中耳液中の細胞と会合したＦＩＴＣ標識Ｐ１３−Ｒ９の蛍光顕微鏡検査結果を表している。
【０１３１】
実施例９：Ｐ１３の局所投与は中耳の炎症および中耳貯留液を減少させた
この実験では、前臨床ＡＯＭモデルにおいて炎症および貯留液を減少させるためにＰ１３を点耳薬によって投与した。手術用顕微鏡を用いてＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１３）の耳鏡検査を行うことによりＡＯＭの臨床症状を確かめた。マウスを麻酔し、ＡＯＭについての以下の３つの基準の存在または非存在について鼓膜（ＴＭ）を調べた：１）ＴＭの後ろにおける中耳滲出液；２）中耳の炎症および／または化膿を示唆する、透明から赤色または白色へのＴＭの色の変化；および３）平坦から出っ張りまたは引っ込みへのＴＭの位置の変化。これらの変化のいずれかを示す動物を、炎症について陽性であるとスコア付けした。すべてのマウスが、プレスクリーニングにおいて陰性とスコア付けされ、両耳に５μｌの加熱不活性化された肺炎球菌（１０９ＣＦＵ／ｍｌ）を経鼓膜的に（ｔｒａｎｓｔｙｍｐａｎｉｃａｌｌｙ）注射された。細菌注射の２４時間後、耳鏡検査によってマウスを調べ、上に記載した炎症の基準を満たす動物をこの研究に残した。陽性とスコア付けされた１３個の耳のうち；７つの耳をＰ１３（１μｇ／３０μｌ）で局所的に処置し、６つの耳をＰＢＳ（３０μｌ）で局所的に処置した。局所処置のために、動物を軽く麻酔し、Ｐ１３またはＰＢＳを鼓膜の外側に滴下した。それらの動物を１５〜２０分間鎮静させた。細菌注射の７２時間後、動物を屠殺し、組織を組織学的に処理することにより、中耳疾患を評価した。以下のとおり、中耳に存在する体液の面積を測定し、測定された中耳液の面積内の細胞の数を測定することによって、炎症を定量化した。マウスに麻酔薬を過剰投与し、１．０ｍｌの食塩水に続いて２０ｍｌの固定液（０．１Ｍリン酸緩衝液中の１．５％パラホルムアルデヒド−３％グルタルアルデヒド）を心臓内に灌流させた。中耳を脱灰し、グリコールメタアクリレートプラスチック内に包埋し、５μｍの薄片に切り、スライドガラス上に連続的に載せ、染色し、カバーガラスをかぶせた。鼓膜臍部および岬角のレベルの連続した３つの切片を、１）中耳に存在する体液の面積；および２）中耳液中の細胞の数の測定のために選択した。各測定は、１検体あたり３つの連続した切片において行った。各パラメータについて与えられた値は、３つの切片の平均値である（図２）。この実験から、Ｐ１３の点耳投与が、前臨床ＡＯＭモデルにおいて細胞浸潤と体液残留の両方を劇的に減少させることが確かめられた。興味深いことに、多い細胞数および広い体液面積を示すＰ１３処置群の１匹の動物は、同じ動物である。
【０１３２】
実施例１０：Ｐ１３の局所投与は聴覚障害の重症度および継続時間を著しく減少させた
Ａ．Ｐ１３の局所投与はＡＯＭのマウスモデルにおいて有効性を証明した。
【０１３３】
ＡＯＭを有する患者では、中耳貯留液が残留することが多く、その残留によって聴力が損なわれ得、感染が反復し得、そして極端な状態では鼓膜チューブの外科的留置が必要になり得る。ＡＯＭの前臨床モデルにおいてＰ１３の局所投与が聴力に影響し得るか否かを判定するために、１３週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝８）の両耳においてベースライン聴性脳幹反応（ＡＢＲ）および耳鏡検査を行った。ＡＢＲ刺激は、１０ｄＢずつ５つの強度レベルの４ｋＨｚ、８ｋＨｚ、１６ｋＨｚおよび３２ｋＨｚにおける２０のトーンバーストトレイン（ｔｏｎｅ−ｂｕｒｓｔ ｔｒａｉｎｓ）からなるものだった。各トーンバーストの持続時間は、２ミリ秒であり、トーンバーストの発生は、１２ミリ秒隔てられた。５ｄＢだけずれた２つの別個のトレインを刺激として与え、次いで、それらをデータ解析において組み合わせることにより、５ｄＢずつ閾値を決定した。デジタルオシロスコープを使用して３００回の反復刺激に対する応答を平均した。閾値は、応答を特定することができた最低強度に基づいた。閾値に存在する波の数は、いくらか変動したが、少なくとも２つの波の存在が、妥当な閾値であると考えられた。前に記載したように、手術用顕微鏡を使用して耳鏡検査を行うことによりＡＯＭの臨床症状を確かめた。８匹すべての動物がこの研究に残り、その両耳に５μｌの加熱不活性化された肺炎球菌（１０９ＣＦＵ／ｍｌ）を経鼓膜的に注射した。細菌注射の２４時間後、耳鏡検査によってマウスを調べ、炎症基準を満たす動物をこの研究に残した。２４時間後、各動物の一方の耳をＰ１３（１μｇ／３０μｌ）で、他方の耳をＰＢＳ（３０μｌ）で局所的に処置した。局所処置のために、動物を軽く麻酔し、Ｐ１３またはＰＢＳを鼓膜の外側に滴下した。それらの動物を１５〜２０分間鎮静させた。
【０１３４】
細菌注射の５および１３日後、上に記載したようにすべての動物においてＡＢＲ試験を行った。各周波数に対する細菌注射後のＡＢＲからベースラインＡＢＲを減算し、次いで、４つすべての周波数（４、８、１６および３２ｋＨｚ）を合計することによって、ＡＢＲデータを計算した。５および１３日目を用いて、反復測定２元配置分散分析をデータ解析のために行った。この実験から、Ｐ１３の点耳投与が、コントロールで処置された動物において見られた聴覚障害を有意に限定したことが確認された。Ｐ１３での処置は、聴覚障害の重症度を減少させ、正常なベースライン聴力レベルへの回復までの時間を短縮した（図３Ａ）。Ｐ１３処置は、ＰＢＳ処置と比べて、聴力を失った動物の数を劇的に減少させた（図３Ｂ）。まとめると、これらのデータから、聴覚障害の重症度および継続時間の減少におけるＰ１３の有効性が確認された。
【０１３５】
Ｂ．Ｐ１３の局所投与は慢性中耳炎のマウスモデルにおいて有効性を証明した
８匹のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウス（１２月齢）において臨床的な耳の検査を行った。中耳の炎症を示す動物（６匹のマウス）において２回のベースラインＡＢＲを１週間間隔で行い、次いで、各耳をＰＢＳまたは１μｇのＰ１３で局所的に処置した。Ｐ１３／ＰＢＳ処置の１および２週間後、再度耳鏡検査およびＡＢＲ評価を行った。各周波数に対する処置後のＡＢＲからベースラインＡＢＲを減算し、次いで、４つすべての周波数を合計することによって、ＡＢＲデータを計算した。Ｐ１３の局所処置によって、処置の１週間後と２週間後の両方において４つすべての周波数でのＡＢＲ測定によって評価された聴力閾値が統計学的に有意に改善された。このデータは、両方の時点において聴力閾値の劇的な改善を示し、２週間後にはおよそ４０ｄｂ改善した。単一の周波数（４ｋＨｚ）の検査から、聴力に対するＰ１３処置の効果が証明された（処置の２週間後、Ｐ１３処置動物では、コントロールと比べて聴力がおよそ１２ｄｂ改善した）。いずれの時点におけるペプチド処置後の耳鏡検査によって評価された中耳の炎症状態にも、変化は観察されなかった。
【０１３６】
Ｃ．ＣＯＭを処置する際のＰ１３のＤ−およびＬ−異性体の形態の比較
ペプチドの生物学的半減期は、Ｌ−異性体型の代わりにアミノ酸残基のＤ−異性体を使用することによって改善され得る。ゆえに、すべてＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の立体異性体（Ｄ−Ｐ１３）を、ＣＯＭを有するＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスを処置する際の有効性について試験し、その結果を、すべてＬ−アミノ酸残基を含む立体異性体（Ｌ−Ｐ１３）によって得られた結果と比較した。標準的な方法によってＤ−Ｐ１３ペプチドを作製し、＞９５％に精製した。ＣＯＭを有する３匹のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスの両耳を、上に記載したようにＤ−Ｐ１３で局所的に処置し、処置の１および２週間後にＡＢＲを評価した。Ｌ−Ｐ１３による処置で見られたのと同様に、Ｄ−Ｐ１３による処置は、臨床的に実証されている疾患を有するＣＯＭマウスの聴力閾値の改善における有効性も証明した。処置の２週間後、Ｌ−Ｐ１３では処置後およそ４０ｄｂ改善されたのに対して、Ｄ−Ｐ１３は、すべての周波数において聴力閾値をおよそ２０ｄｂ改善した。Ｐ１３のＬ−異性体は、聴力閾値のより著明な改善を示したが、Ｐ１３のＤ−およびＬ−異性体型は、この実験において同様のレベルの統計的信頼度を示した。
【０１３７】
実施例１１：Ｐ１３の局所投与は聴器毒性を有しなかった
点耳薬による投与の際の正常マウスの聴力に対する悪影響の可能性についてＰ１３を調査した。１６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１６）に、１週間空けて２回のベースライン聴性脳幹反応（ＡＢＲ）試験を行い、両耳において耳鏡検査を行った。ＡＢＲ刺激は、先に記載されたような、１０ｄＢずつ５つの強度レベルの４ｋＨｚ、８ｋＨｚ、１６ｋＨｚおよび３２ｋＨｚにおける２０のトーンバーストトレインからなるものだった。前に記載したように、手術用顕微鏡を用いて耳鏡検査を行うことによりＡＯＭの臨床症状を確かめた。プレスクリーニングにおいて異常なＡＢＲまたは検査結果を有するいずれの動物も、この研究に入れなかった。
【０１３８】
１６匹すべての動物がこの研究に残り、以下のとおり５つの群に分けた：
群１：（ｎ＝６つの耳）１μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、１回投与；
群２：（ｎ＝７つの耳）１０μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、１回投与；
群３：（ｎ＝７つの耳）１０μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、２回投与、２４時間間隔；
群４：（ｎ＝６つの耳）６０μｇ Ｐ１３／３０μｌ、局所、１回投与；および
群５：（ｎ＝６つの耳）無処置マウス。
【０１３９】
Ｐ１３による処置の１、２、３および４週間後にＡＢＲを行った。２つのベースラインＡＢＲを平均し、それをＰ１３処置後のＡＢＲと比較した。この実験から、Ｐ１３の局所投与が、これらの正常マウスの聴力の閾値に悪影響を及ぼさないことが証明された。
【０１４０】
実施例１２：ペプチドで処置されたマウスにおけるＴＮＦ−α分泌の評価
ＣｐＧ−ＯＤＮおよびＬＰＳによる刺激に応答したマウスにおけるＴＮＦ−α分泌に対するいくつかのペプチドの効果を研究する。各ペプチド−Ｒ９について、３つの濃度、３７μＭ、２２．２μＭおよび１１．１μＭのペプチド組成物を調製し、試験する。このアッセイにおいて活性を示すペプチドを、再アッセイのためにさらに１１．１μＭ、７．４μＭおよび３．７μＭのペプチド組成物に製剤化する。
【０１４１】
約８〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ（Ｂａｇｇアルビノ）マウスを、キシラジンおよびケタミン（約０．１ｍｇ／３０ｇ体重）の皮下注射で麻酔する。そのマウスの両耳に１．２５μｇ／ｍｌのＣｐＧ−ＯＤＮまたは１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを注射する。２４時間後、そのマウスの一方の耳を１μｇのペプチド／３０μｌ、および他方の耳をＰＢＳ（３０μｌ）で局所的に処置する（点耳薬）。ペプチド／ＰＢＳ処置の２４時間後、中耳液を採取し、ＥＬＩＳＡによってＴＮＦ−α分泌について解析する。コントロール耳よりも少ないＴＮＦ−α分泌を示す耳が、生存マウスにおいてＴＮＦ−α分泌を効果的に阻害するペプチドを特定する。
【０１４２】
実施形態
以下の実施形態は、本発明の対象の非限定的な例を提供する。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、本発明は：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドがＣ末端に伝達配列をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、伝達配列は、ポリアルギニン配列である。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、伝達配列は、連続した９個のアルギニン残基を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、伝達配列は、連続した９個のアルギニン残基からなる。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドのアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、伝達配列の一部でないアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、伝達配列の少なくとも１つのアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、伝達配列のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１および１８２のうちのいずれか１つである。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、配列番号２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つである。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、滴剤の形態である。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、エアロゾル、蒸気、スプレーまたは噴霧の形態である。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜１８６のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを含む薬学的組成物を企図する。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６８のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを企図する。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、上記ペプチドは、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１、１８２、２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１〜３６９のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドの誘導体を企図し、ここで、その誘導体は、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している生物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む有効量の薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、上記細胞活性は、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される細胞活性は、ＴＮＦ−αの分泌である。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、上記方法は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供する。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、上記投与工程は、サイトカイン分泌の阻害をもたらす。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、耳の炎症である。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、中耳炎である。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、上記投与は、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛である。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、上記関節炎は、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、上記皮膚炎は、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、上記乾癬は、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、上記薬学的組成物は、局所適用を介して投与される。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、鼓膜への適用を含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、上記鼓膜への適用は、鼓膜への滴剤の適用を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、上記動物は、ヒトである。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している生物にエアロゾル組成物を投与する工程を包含し、そのエアロゾル組成物は：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを含み、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善する方法を企図し、その方法は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下した動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、そのペプチドは、局所的に投与され、聴力は、普通レベルと変わらないレベルまで改善し、そして／または聴力は、そのペプチドの投与なしに聴力が改善するよりも速く改善する。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置する方法を企図し、その方法は、それを必要とするかまたは欲している動物の鼓膜に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、本発明は、細胞活性を制御するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、上記細胞活性は、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される上記細胞活性は、ＴＮＦ−αの分泌である。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、上記医薬は、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害を提供する。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、上記医薬は、サイトカイン分泌の阻害に適している。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物における炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、耳の炎症である。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、中耳炎である。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、上記投与は、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、上記症状は、疼痛である。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である。
【０２００】
いくつかの実施形態において、上記炎症は、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、上記関節炎は、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、上記皮膚炎は、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、上記乾癬は、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、上記医薬は、局所適用に適している。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、上記局所適用は、鼓膜への適用を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、上記鼓膜への適用は、鼓膜への滴剤の適用を含む。いくつかの実施形態において、上記動物は、ヒトである。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、本発明は、副鼻腔炎を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、その医薬は、エアロゾル組成物を含み、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、本発明は、動物の聴力を改善するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その動物は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、その医薬は、局所用の医薬である。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、本発明は、中耳および／または内耳の炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用を企図し、ここで、その医薬は、それを必要とするかまたは欲している動物の鼓膜への投与に適しており、そのペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、そのペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む。
【０２１１】
実施形態１０１．アミノ酸配列ＦＴＩＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７１）を含むペプチドを含む組成物。
【０２１２】
実施形態１０２．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ１７からなる群から選択される、実施形態１０１の組成物。
【０２１３】
実施形態１０３．ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態１０１の組成物。
【０２１４】
実施形態１０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態１０３の組成物。
【０２１５】
実施形態１０５．細胞にペプチドを投与する工程を包含する、細胞活性を制御する方法であって、前記ペプチドは、アミノ酸配列ＦＴＩＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７１）を含む、方法。
【０２１６】
実施形態１０６．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ１７からなる群から選択される、実施形態１０５の方法。
【０２１７】
実施形態１０７．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態１０５の方法。
【０２１８】
実施形態１０８．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態１０６の方法。
【０２１９】
実施形態１０９．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態１０５の方法。
【０２２０】
実施形態１１０．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態１０５の方法。
【０２２１】
実施形態１１１．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態１０６の方法。
【０２２２】
実施形態１１２．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態１１１の方法。
【０２２３】
実施形態１１３．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態１０５の方法。
【０２２４】
実施形態１１４．Ａ５２Ｒに由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２２５】
実施形態１１５．Ｓ１〜Ｓ１７から選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２２６】
実施形態２０１．アミノ酸配列ＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７０）を含むペプチドを含む組成物。
【０２２７】
実施形態２０２．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ２２からなる群から選択される、実施形態２０１の組成物。
【０２２８】
実施形態２０３．ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態２０１または２０２の組成物。
【０２２９】
実施形態２０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態２０３の組成物。
【０２３０】
実施形態２０５．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０１または２０２の組成物。
【０２３１】
実施形態２０６．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０３の組成物。
【０２３２】
実施形態２０７．ペプチドを細胞に投与する工程を包含し、前記ペプチドが、アミノ酸配列ＬＥＥＹＦＭＹ（配列番号３７０）を含む、細胞活性を制御する方法。
【０２３３】
実施形態２０８．上記ペプチドが、Ｓ１〜Ｓ２２からなる群から選択される、実施形態２０７の方法。
【０２３４】
実施形態２０９．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態２０７または２０８の方法。
【０２３５】
実施形態２１０．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態２０９の方法。
【０２３６】
実施形態２１１．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０７または２０８の方法。
【０２３７】
実施形態２１２．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態２０９の方法。
【０２３８】
実施形態２１３．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態２０７の方法。
【０２３９】
実施形態２１４．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態２０７の方法。
【０２４０】
実施形態２１５．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態２０８の方法。
【０２４１】
実施形態２１６．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態２１５の方法。
【０２４２】
実施形態２１７．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態２０７の方法。
【０２４３】
実施形態２１８．Ａ５２Ｒに由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２４４】
実施形態２１９．（ａ）Ｓ１〜Ｓ２２から選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；（ｂ）前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２４５】
実施形態３０１．アミノ酸配列ＶＹＤＣＩ（配列番号３７２）、ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＴＶＹ（配列番号３７４）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含むペプチドを含む組成物。
【０２４６】
実施形態３０２．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態３０１の組成物。
【０２４７】
実施形態３０３．ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態３０１の組成物。
【０２４８】
実施形態３０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態３０３の組成物。
【０２４９】
実施形態３０５．ペプチドを細胞に投与する工程を包含し、前記ペプチドが、アミノ酸配列ＶＹＤＣＩ（配列番号３７２）、ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＴＶＹ（配列番号３７４）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含む、細胞活性を制御する方法。
【０２５０】
実施形態３０６．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態３０５の方法。
【０２５１】
実施形態３０７．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態３０５の方法。
【０２５２】
実施形態３０８．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態３０６の方法。
【０２５３】
実施形態３０９．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態３０５の方法。
【０２５４】
実施形態３１０．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態３０５の方法。
【０２５５】
実施形態３１１．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態３０６の方法。
【０２５６】
実施形態３１２．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態３１１の方法。
【０２５７】
実施形態３１３．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態３０５の方法。
【０２５８】
実施形態３１４．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態３０５の方法。
【０２５９】
実施形態３１５．Ｐ１３に由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２６０】
実施形態３１６．表１に列挙されているペプチドから選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２６１】
実施形態４０１．アミノ酸配列ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含むペプチドを含む組成物。
【０２６２】
実施形態４０２．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態４０１の組成物。
【０２６３】
実施形態４０３．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態４０１または４０２の組成物。
【０２６４】
実施形態４０４．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態４０３の組成物。
【０２６５】
実施形態４０５．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０１または４０２の組成物。
【０２６６】
実施形態４０６．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０３の組成物。
【０２６７】
実施形態４０７．細胞にペプチドを投与する工程を包含し、前記ペプチドが、アミノ酸配列ＶＹＡＣＩ（配列番号３７３）、ＫＬＹＶＹ（配列番号３７５）またはＫＶＹＶＹ（配列番号３７６）を含む、細胞活性を制御する方法。
【０２６８】
実施形態４０８．上記ペプチドが、表１に表されているペプチドからなる群から選択される、実施形態４０７の方法。
【０２６９】
実施形態４０９．上記ペプチドが、伝達配列をさらに含む、実施形態４０７または４０８の方法。
【０２７０】
実施形態４１０．上記伝達配列が、Ｃ末端に位置する９−アルギニン配列を含む、実施形態４０９の方法。
【０２７１】
実施形態４１１．上記ペプチドが、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０７または４０８の方法。
【０２７２】
実施形態４１２．上記ペプチドおよび／または伝達配列が、Ｌ−異性体アミノ酸もしくはＤ−異性体アミノ酸またはＬ−およびＤ−異性体アミノ酸を含む、実施形態４０９の方法。
【０２７３】
実施形態４１３．上記活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、実施形態４０７の方法。
【０２７４】
実施形態４１４．上記投与が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、実施形態４０７の方法。
【０２７５】
実施形態４１５．上記ペプチドが、炎症の処置において使用される、実施形態４０８の方法。
【０２７６】
実施形態４１６．上記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、実施形態４１５の方法。
【０２７７】
実施形態４１７．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態４０７の方法。
【０２７８】
実施形態４１８．前記細胞への前記ペプチドの投与が、ＬＰＳによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、実施形態４０７の方法。
【０２７９】
実施形態４１９．Ｐ１３に由来する治療的に有効な用量のペプチドを投与する工程を包含する、ｔｏｌｌ様レセプターシグナル伝達に応答したＴＮＦ−αの分泌を減少させる方法。
【０２８０】
実施形態４２０．表１に列挙されているペプチドから選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２８１】
実施形態５０１．Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドから選択されるペプチドのうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むペプチド；
前記ペプチドのＣ末端に位置する９−アルギニン配列；および
薬学的に許容され得る賦形剤
を含む薬学的組成物であって、ここで、前記組成物は、炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０２８２】
実施形態５０２．上記炎症が、中耳炎を含む、実施形態５０１の薬学的組成物。
【０２８３】
実施形態５０３．さらに含む実施形態５０２の薬学的組成物であって、ここで、その薬学的組成物は、局所適用を介して適用される、薬学的組成物。
【０２８４】
実施形態５０４．上記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５０３の薬学的組成物。
【０２８５】
実施形態５０５．上記局所適用が、鼓膜への適用を含む、実施形態５０４の薬学的組成物。
【０２８６】
実施形態５０６．上記鼓膜への適用が、鼓膜への点耳薬の適用を含む、実施形態５０５の薬学的組成物。
【０２８７】
実施形態５０７．中耳液の量を約３０〜８０パーセント減少させる；
中耳液中の浸潤細胞数を約３０〜８０パーセント減少させる；および
耳の炎症を有するマウスの鼓膜の厚さを約３０〜８０パーセント減少させる
のに有効な薬学的組成物であって、ここで、その組成物は、そのマウスに約０．０１μｇ〜６０μｇの量で投与される、薬学的組成物。
【０２８８】
実施形態５０８．ペプチドを含む、実施形態５０７の薬学的組成物。
【０２８９】
実施形態５０９．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５０８の薬学的組成物。
【０２９０】
実施形態５１０．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５０９の薬学的組成物。
【０２９１】
実施形態５１１．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５０９の薬学的組成物。
【０２９２】
実施形態５１２．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５０９の薬学的組成物。
【０２９３】
実施形態５１３．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５１２の薬学的組成物。
【０２９４】
実施形態５１４．上記炎症が、中耳炎を含む、実施形態５０７の薬学的組成物。
【０２９５】
実施形態５１５．ペプチドを含む、実施形態５１４の薬学的組成物。
【０２９６】
実施形態５１６．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５１５の薬学的組成物。
【０２９７】
実施形態５１７．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５１６の薬学的組成物。
【０２９８】
実施形態５１８．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５１６の薬学的組成物。
【０２９９】
実施形態５１９．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５１６の薬学的組成物。
【０３００】
実施形態５２０．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５１９の薬学的組成物。
【０３０１】
実施形態５２１．さらに含む実施形態５１４の薬学的組成物であって、ここで、その薬学的組成物は、局所適用を介して適用される、薬学的組成物。
【０３０２】
実施形態５２２．ペプチドを含む、実施形態５２１の薬学的組成物。
【０３０３】
実施形態５２３．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５２２の薬学的組成物。
【０３０４】
実施形態５２４．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５２３の薬学的組成物。
【０３０５】
実施形態５２５．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５２３の薬学的組成物。
【０３０６】
実施形態５２６．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５２３の薬学的組成物。
【０３０７】
実施形態５２７．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５２６の薬学的組成物。
【０３０８】
実施形態５２８．上記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５２１の薬学的組成物。
【０３０９】
実施形態５２９．ペプチドを含む、実施形態５２８の薬学的組成物。
【０３１０】
実施形態５３０．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５２９の薬学的組成物。
【０３１１】
実施形態５３１．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５３０の薬学的組成物。
【０３１２】
実施形態５３２．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５３０の薬学的組成物。
【０３１３】
実施形態５３３．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５３０の薬学的組成物。
【０３１４】
実施形態５３４．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５３３の薬学的組成物。
【０３１５】
実施形態５３５．上記局所適用が、鼓膜への適用を含む、実施形態５２８の薬学的組成物。
【０３１６】
実施形態５３６．ペプチドを含む、実施形態５３５の薬学的組成物。
【０３１７】
実施形態５３７．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５３６の薬学的組成物。
【０３１８】
実施形態５３８．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５３７の薬学的組成物。
【０３１９】
実施形態５３９．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５３７の薬学的組成物。
【０３２０】
実施形態５４０．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５３７の薬学的組成物。
【０３２１】
実施形態５４１．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５４０の薬学的組成物。
【０３２２】
実施形態５４２．上記鼓膜への適用が、鼓膜への点耳薬の適用を含む、実施形態５３５の薬学的組成物。
【０３２３】
実施形態５４３．ペプチドを含む、実施形態５４２の薬学的組成物。
【０３２４】
実施形態５４４．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５４３の薬学的組成物。
【０３２５】
実施形態５４５．上記ペプチドが、Ｐ１３、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチド、または表１のペプチドを含む、実施形態５４４の薬学的組成物。
【０３２６】
実施形態５４６．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５４４の薬学的組成物。
【０３２７】
実施形態５４７．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５４４の薬学的組成物。
【０３２８】
実施形態５４８．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５４７の薬学的組成物。
【０３２９】
実施形態５４９．耳の炎症の処置を必要とするかまたはそれを欲している動物における耳の炎症を処置する方法であって、その方法は、その動物に実施形態５０７の薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【０３３０】
実施形態５５０．上記耳の炎症が、中耳炎を含む、実施形態５４９の方法。
【０３３１】
実施形態５５１．上記薬学的組成物が、局所適用を介して適用されることをさらに含む、実施形態５５０の方法。
【０３３２】
実施形態５５２．上記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５５１の方法。
【０３３３】
実施形態５５３．上記局所適用が、鼓膜への適用を含む、実施形態５５２の方法。
【０３３４】
実施形態５５４．上記鼓膜への適用が、鼓膜への点耳薬の適用を含む、実施形態５５３の方法。
【０３３５】
実施形態５５５．上記薬学的組成物が、Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドを含む、実施形態５４９、５５０、５５１、５５２、５５３または５５４の方法。
【０３３６】
実施形態５５６．上記Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体またはアナログが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５５５の方法。
【０３３７】
実施形態５５７．上記薬学的組成物が、Ｐ１３を含む、実施形態５５５の方法。
【０３３８】
実施形態５５８．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５５５の薬学的組成物。
【０３３９】
実施形態５５９．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５５８の方法。
【０３４０】
実施形態５６０．動物における耳の炎症を処置する方法であって、その方法は、その動物にペプチドを投与する工程を包含し、ここで、そのペプチドは、Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドを含む、方法。
【０３４１】
実施形態５６１．上記耳の炎症が、中耳炎を含む、実施形態５６０の方法。
【０３４２】
実施形態５６２．上記ペプチドの投与工程が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭または舌下腔への適用を含む、実施形態５６１の方法。
【０３４３】
実施形態５６３．上記局所適用が、鼓膜への必要に応じて点耳薬を介した適用を含む、実施形態５６２の方法。
【０３４４】
実施形態５６４．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５６３の方法。
【０３４５】
実施形態５６５．上記動物が、ヒトである、実施形態５６４の方法。
【０３４６】
実施形態５６６．上記ペプチドが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５６３の方法。
【０３４７】
実施形態５６７．上記動物が、ヒトである、実施形態５６６の方法。
【０３４８】
実施形態５６８．上記ペプチドが、ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）を含む、実施形態５６３の方法。
【０３４９】
実施形態５６９．上記動物が、ヒトである、実施形態５６８の方法。
【０３５０】
実施形態５７０．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５６３の方法。
【０３５１】
実施形態５７１．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５７０の方法。
【０３５２】
実施形態５７２．上記動物が、ヒトである、実施形態５７１の方法。
【０３５３】
実施形態５７３．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、そのアナログの１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５６３の方法。
【０３５４】
実施形態５７４．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５７３の方法。
【０３５５】
実施形態５７５．上記動物が、ヒトである、実施形態５７４の方法。
【０３５６】
実施形態５７６．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、実施形態５６３の方法。
【０３５７】
実施形態５７７．上記動物が、ヒトである、実施形態５７６の方法。
【０３５８】
実施形態５７８．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置、およびＤ−配置の少なくとも１つのアミノ酸残基を含むポリアルギニンドメインを含む、実施形態５７３の方法。
【０３５９】
実施形態５７９．上記動物が、ヒトである、実施形態５７８の方法。
【０３６０】
実施形態５８０．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、実施形態５６３の方法。
【０３６１】
実施形態５８１．上記動物が、ヒトである、実施形態５８０の方法。
【０３６２】
実施形態５８２．アミノ酸配列：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、ペプチド。
【０３６３】
実施形態５８３．アミノ酸配列：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、ペプチド。
【０３６４】
実施形態５８４．アミノ酸配列：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ（配列番号１８５）を含む、ペプチド。
【０３６５】
実施形態５８５．アミノ酸配列：Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８６）を含む、ペプチド。
【０３６６】
実施形態５８６．ペプチドを含む薬学的組成物であって、そのペプチドは：
Ｐ１３、またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログ；あるいは
表１のペプチド
を含み、ここで、その組成物は、被験体における皮膚、関節、筋組織または結合組織の炎症の処置のために使用される、薬学的組成物。
【０３６７】
実施形態５８７．上記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデスまたは乾癬を含む、実施形態５８６の薬学的組成物。
【０３６８】
実施形態５８８．上記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎を含む、実施形態５８７の薬学的組成物。
【０３６９】
実施形態５８９．上記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹を含む、実施形態５８７の薬学的組成物。
【０３７０】
実施形態５９０．上記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症を含む、実施形態５８７の薬学的組成物。
【０３７１】
実施形態５９１．１つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む、実施形態５８６の薬学的組成物。
【０３７２】
実施形態５９２．上記ペプチドが、Ｐ１３またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態５８６の薬学的組成物。
【０３７３】
実施形態５９３．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはＰ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチドを含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７４】
実施形態５９４．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７５】
実施形態５９５．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７６】
実施形態５９６．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態５９５の薬学的組成物。
【０３７７】
実施形態５９７．上記ペプチドが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３７８】
実施形態５９８．上記ペプチドが、ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）を含む、実施形態５９７の薬学的組成物。
【０３７９】
実施形態５９９．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、そのアナログの１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態５９２の薬学的組成物。
【０３８０】
実施形態６００．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態５９９の薬学的組成物。
【０３８１】
実施形態６０１．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、実施形態５９９の薬学的組成物。
【０３８２】
実施形態６０２．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、実施形態５９９の薬学的組成物。
【０３８３】
実施形態６０３．動物における炎症を処置する方法であって、その方法は、その動物にペプチドを投与する工程を包含し、ここで、そのペプチドは、Ｐ１３、Ｐ１３の変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログまたは表１のペプチドを含む、方法。
【０３８４】
実施形態６０４．上記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬を含む、実施形態６０３の方法。
【０３８５】
実施形態６０５．上記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎を含む、実施形態６０４の方法。
【０３８６】
実施形態６０６．上記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹を含む、実施形態６０４の方法。
【０３８７】
実施形態６０７．上記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症を含む、実施形態６０４の方法。
【０３８８】
実施形態６０８．上記ペプチドが、Ｐ１３またはその変異体、誘導体、立体異性体もしくはアナログを含む、実施形態６０３の方法。
【０３８９】
実施形態６０９．上記ペプチドが、Ｐ１３、またはＰ１３およびポリアルギニンドメインを含むペプチドを含む、実施形態６０８の方法。
【０３９０】
実施形態６１０．上記ペプチドが、Ｐ１３を含む、実施形態６０８の方法。
【０３９１】
実施形態６１１．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体の１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態６０８の方法。
【０３９２】
実施形態６１２．上記ペプチドが、Ｐ１３の立体異性体を含み、その立体異性体のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置を含む、実施形態６１１の方法。
【０３９３】
実施形態６１３．上記ペプチドが、Ｐ１３およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態６０８の方法。
【０３９４】
実施形態６１４．上記ペプチドが、ＤＩＶＫＬＴＶＹＤＣＩＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号３７８）を含む、実施形態６１３の方法。
【０３９５】
実施形態６１５．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、そのアナログの１つ以上のアミノ酸残基が、Ｄ−配置を含む、実施形態６０８の方法。
【０３９６】
実施形態６１６．上記ペプチドが、Ｐ１３のアナログを含み、Ｐ１３の残基に対応するそのアナログのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−配置およびポリアルギニンドメインを含む、実施形態６１５の方法。
【０３９７】
実施形態６１７．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ（配列番号１８３）を含む、実施形態６１５の方法。
【０３９８】
実施形態６１８．上記ペプチドが：Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ（配列番号１８４）を含む、実施形態６１５の方法。
【０３９９】
実施形態６１９．上記動物が、ヒトである、実施形態６０３〜６１８のうちのいずれかの方法。
【０４００】
実施形態６２０．上記投与工程が、局所適用を含む、実施形態６０３〜６１８のうちのいずれかの方法。
【０４０１】
参考文献
以下の参考文献および本明細書中の開示において引用される参考文献は、本明細書によってそれらの全体が本明細書中で参考として援用される。
【０４０２】
【数１−１】
【０４０３】
【数１−２】
【０４０４】
【数１−３】
【０４０５】
【数１−４】
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項２】
前記ペプチドが、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記伝達配列が、ポリアルギニン配列である、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記伝達配列が、連続した９個のアルギニン残基を含む、請求項２または３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記伝達配列が、連続した９個のアルギニン残基からなる、請求項２または３に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記ペプチドが、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む、Ｐ１３の誘導体を含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記ペプチドのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記伝達配列の一部でないアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記伝達配列の少なくとも１つのアミノ酸残基が、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記伝達配列のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１および１８２のうちのいずれか１つである、請求項２〜５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記ペプチドが、配列番号２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記薬学的組成物が、滴剤の形態である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記薬学的組成物が、エアロゾル、蒸気、スプレーまたは噴霧の形態である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
配列番号１〜１８６のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
配列番号１〜３６８のうちのいずれか１つの配列を含む、ペプチド。
【請求項１８】
配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１、１８２、２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つの配列を含む、請求項１７に記載のペプチド。
【請求項１９】
配列番号１〜３６９のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドの誘導体であって、ここで、該誘導体は、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む、誘導体。
【請求項２０】
細胞活性を制御する方法であって、該方法は、該制御を必要とするかまたは欲している生物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む有効量の薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項２１】
前記細胞活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される前記細胞活性が、ＴＮＦ−αの分泌である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記投与工程が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
動物における炎症を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とするかまたは欲している動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項２６】
前記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記炎症が、耳の炎症である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記炎症が、中耳炎である、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記投与が、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記症状が、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記症状が、疼痛である、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記炎症が、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である、請求項２５、２６および３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記薬学的組成物が、局所適用によって投与される、請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記局所適用が、鼓膜への適用を含む、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記鼓膜への適用が、鼓膜への滴剤の適用を含む、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記動物が、ヒトである、請求項２５〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
副鼻腔炎を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とするかまたは欲している生物にエアロゾル組成物を投与する工程を包含し、該エアロゾル組成物は：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを含み、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項４３】
動物における聴力を改善する方法であって、該方法は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下した動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、ここで、該ペプチドは、局所的に投与され、該聴力は、普通レベルと変わらないレベルまで改善し、そして／または該聴力は、該ペプチドの投与なしに該聴力が改善するよりも速く改善する、方法。
【請求項４４】
中耳および／または内耳の炎症を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項４５】
細胞活性を制御するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【請求項４６】
前記細胞活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される前記細胞活性が、ＴＮＦ−αの分泌である、請求項４６に記載の使用。
【請求項４８】
前記医薬が、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、請求項４５〜４７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４９】
前記医薬が、サイトカイン分泌の阻害に適している、請求項４５〜４８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５０】
動物における炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【請求項５１】
前記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
前記炎症が、耳の炎症である、請求項５０または５１に記載の使用。
【請求項５３】
前記炎症が、中耳炎である、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５４】
前記医薬が、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５５】
前記症状が、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
前記症状が、疼痛である、請求項５４または５５に記載の使用。
【請求項５７】
前記炎症が、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である、請求項５０または５１に記載の使用。
【請求項５８】
前記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である、請求項５０、５１および５７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５９】
前記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
前記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６１】
前記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６２】
前記医薬が、局所適用に適している、請求項５０〜６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６３】
前記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む、請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
前記局所適用が、鼓膜への適用を含む、請求項６２または６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記鼓膜への適用が、鼓膜への滴剤の適用を含む、請求項６３または６４に記載の使用。
【請求項６６】
前記動物が、ヒトである、請求項５０〜６５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６７】
副鼻腔炎を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、該医薬は、エアロゾル組成物を含み、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【請求項６８】
動物において聴力を改善するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、ここで、該動物は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下しており、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、該医薬は、局所用の医薬である、使用。
【請求項６９】
中耳および／または内耳の炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、ここで、該医薬は、該処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜への投与に適しており、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【請求項１】
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項２】
前記ペプチドが、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記伝達配列が、ポリアルギニン配列である、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記伝達配列が、連続した９個のアルギニン残基を含む、請求項２または３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記伝達配列が、連続した９個のアルギニン残基からなる、請求項２または３に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記ペプチドが、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む、Ｐ１３の誘導体を含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記ペプチドのアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記伝達配列の一部でないアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記伝達配列の少なくとも１つのアミノ酸残基が、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記伝達配列のアミノ酸残基のすべてが、Ｄ−アミノ酸残基である、請求項２〜６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１および１８２のうちのいずれか１つである、請求項２〜５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記ペプチドが、配列番号２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記薬学的組成物が、滴剤の形態である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記薬学的組成物が、エアロゾル、蒸気、スプレーまたは噴霧の形態である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
配列番号１〜１８６のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
配列番号１〜３６８のうちのいずれか１つの配列を含む、ペプチド。
【請求項１８】
配列番号４２〜４４、６８〜７７、７９〜８１、８３、１０２〜１０６、１３３、１４１、１５１、１６６、１６７、１８１、１８２、２２８〜２３０、２５４〜２６３、２６５〜２６７、２６９、２８８〜２９２、３１９、３２７、３３７、３５２、３５３、３６７および３６８のうちのいずれか１つの配列を含む、請求項１７に記載のペプチド。
【請求項１９】
配列番号１〜３６９のうちのいずれか１つの配列を含むペプチドの誘導体であって、ここで、該誘導体は、少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む、誘導体。
【請求項２０】
細胞活性を制御する方法であって、該方法は、該制御を必要とするかまたは欲している生物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む有効量の薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項２１】
前記細胞活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される前記細胞活性が、ＴＮＦ−αの分泌である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記投与工程が、サイトカイン分泌の阻害をもたらす、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
動物における炎症を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とするかまたは欲している動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含むペプチドを含む薬学的組成物を投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項２６】
前記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記炎症が、耳の炎症である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記炎症が、中耳炎である、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記投与が、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する、請求項２５〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記症状が、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記症状が、疼痛である、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記炎症が、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である、請求項２５、２６および３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記薬学的組成物が、局所適用によって投与される、請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記局所適用が、鼓膜への適用を含む、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記鼓膜への適用が、鼓膜への滴剤の適用を含む、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記動物が、ヒトである、請求項２５〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
副鼻腔炎を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とするかまたは欲している生物にエアロゾル組成物を投与する工程を包含し、該エアロゾル組成物は：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを含み、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項４３】
動物における聴力を改善する方法であって、該方法は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下した動物に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、ここで、該ペプチドは、局所的に投与され、該聴力は、普通レベルと変わらないレベルまで改善し、そして／または該聴力は、該ペプチドの投与なしに該聴力が改善するよりも速く改善する、方法。
【請求項４４】
中耳および／または内耳の炎症を処置する方法であって、該方法は、該処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜に：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含む治療有効量のペプチドを投与する工程を包含し、
ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、方法。
【請求項４５】
細胞活性を制御するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【請求項４６】
前記細胞活性が、ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
ｔｏｌｌ様レセプターによって媒介される前記細胞活性が、ＴＮＦ−αの分泌である、請求項４６に記載の使用。
【請求項４８】
前記医薬が、ＬＰＳおよび／またはＣｐＧ−ＯＤＮによる刺激後のＴＮＦ−α分泌の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の阻害をもたらす、請求項４５〜４７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４９】
前記医薬が、サイトカイン分泌の阻害に適している、請求項４５〜４８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５０】
動物における炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６８のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【請求項５１】
前記炎症が、ウイルス、細菌、真菌、抗原、自己抗原またはそれらの組み合わせによって引き起こされる、請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
前記炎症が、耳の炎症である、請求項５０または５１に記載の使用。
【請求項５３】
前記炎症が、中耳炎である、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５４】
前記医薬が、中耳炎の症状を低減させるかまたは除去する、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５５】
前記症状が、疼痛、耳漏、発熱、被刺激性、食欲不振、嘔吐または下痢である、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
前記症状が、疼痛である、請求項５４または５５に記載の使用。
【請求項５７】
前記炎症が、皮膚、関節、筋組織、脳または結合組織の炎症である、請求項５０または５１に記載の使用。
【請求項５８】
前記炎症が、関節炎、皮膚炎、エリテマトーデス、髄膜炎または乾癬である、請求項５０、５１および５７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５９】
前記関節炎が、変形性関節症、関節リウマチ、化膿性関節炎、痛風、偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病または強直性脊椎炎である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
前記皮膚炎が、海綿状皮膚炎、小児湿疹、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性皮膚炎、汗疱状皮膚炎、じんま疹、小水疱性皮膚炎もしくは水疱性皮膚炎または丘疹状じんま疹である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６１】
前記乾癬が、プラーク乾癬、屈側性乾癬、滴状乾癬、膿疱性乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎または乾癬性紅皮症である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６２】
前記医薬が、局所適用に適している、請求項５０〜６１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６３】
前記局所適用が、皮膚、毛、外耳、鼓膜、頬側前庭、鼻腔または舌下腔への適用を含む、請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
前記局所適用が、鼓膜への適用を含む、請求項６２または６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記鼓膜への適用が、鼓膜への滴剤の適用を含む、請求項６３または６４に記載の使用。
【請求項６６】
前記動物が、ヒトである、請求項５０〜６５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６７】
副鼻腔炎を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、該医薬は、エアロゾル組成物を含み、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【請求項６８】
動物において聴力を改善するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、ここで、該動物は、中耳および／または内耳の炎症を有し、かつ聴力が低下しており、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含み、該医薬は、局所用の医薬である、使用。
【請求項６９】
中耳および／または内耳の炎症を処置するための医薬の製造におけるペプチドの使用であって、ここで、該医薬は、該処置を必要とするかまたは欲している動物の鼓膜への投与に適しており、該ペプチドは：
ａ）配列番号１８７〜３６９のうちのいずれか１つの配列；または
ｂ）少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含むＰ１３の誘導体
を含み、ここで、該ペプチドは、必要に応じて、Ｃ末端に伝達配列をさらに含む、使用。
【図２】
【図３】
【図４】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２０１２−５２８８９１（Ｐ２０１２−５２８８９１Ａ）
【公表日】平成２４年１１月１５日（２０１２．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１４１８３（Ｐ２０１２−５１４１８３）
【出願日】平成２２年６月４日（２０１０．６．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３７４４３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４１８４５
【国際公開日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【出願人】（５１１２９２４４８）１３セラピューティクス， インコーポレイテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１１月１５日（２０１２．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月４日（２０１０．６．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３７４４３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４１８４５
【国際公開日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【出願人】（５１１２９２４４８）１３セラピューティクス， インコーポレイテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]