内分泌前駆細胞、膵臓ホルモン発現細胞及びそれらの製造方法
内分泌前駆細胞、未熟膵臓ホルモン発現細胞及び成熟膵臓ホルモン発現細胞の細胞培養物及び濃縮された細胞集団が本明細書中に開示される。このような細胞培養物及び細胞集団を産生する方法も本明細書中に開示される。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト細胞を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物であって、該ヒト細胞の少なくとも約２％が、グレリン、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する膵島ホルモン発現細胞であり、該膵島ホルモン発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、細胞培養物。
【請求項２】
前記ヒト細胞の少なくとも約５％が膵島ホルモン発現細胞である、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が膵島ホルモン発現細胞である、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％がニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）を発現するヒト内分泌前駆細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項５】
前記ヒト内分泌前駆細胞が、ペアードボックス４（ＰＡＸ４）及びＮＫＸ２転写因子関連遺伝子座２（ＮＫＸ２．２）から成る群から選択されるマーカーを発現する、請求項４に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項６】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が、ニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）を発現するヒト内分泌前駆細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項７】
前記ヒト内分泌前駆細胞が、ペアードボックス４（ＰＡＸ４）及びＮＫＸ２転写因子関連遺伝子座２（ＮＫＸ２．２）から成る群から選択されるマーカーを発現する、請求項６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項８】
前記膵島ホルモン発現細胞が、グレリン、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも２つのホルモンを発現する、請求項１に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項９】
前記膵島ホルモン発現細胞がグレリン、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを発現する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１０】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約５％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１１】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約１０％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１２】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約２０％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１３】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約３０％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ細胞培養物。
【請求項１４】
インスリンがグルコース刺激に応じて分泌される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１５】
Ｃ−ペプチドがグルコース刺激に応じて分泌される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１６】
前記膵島細胞の少なくとも１０％が膵島細胞クラスターに存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１７】
前記膵島ホルモン発現細胞が、膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、ＩＳＬ１転写因子（ＩＳＬ１）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）及びペアードボックス６（ＰＡＸ６）から成る群から選択されるマーカーをさらに発現する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１８】
前記膵島ホルモン発現細胞が、ニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）及びペアードボックス遺伝子４（ＰＡＸ４）から成る群から選択されるマーカーを実質的に発現しない、請求項１７に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１９】
少なくとも約１つの膵島ホルモン発現細胞が、前記細胞培養物において約１０個の内分泌前駆細胞毎に存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２０】
少なくとも約１つの膵島ホルモン発現細胞が、前記細胞培養物において約５個の内分泌前駆細胞毎に存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２１】
少なくとも約１つの膵島ホルモン発現細胞が、前記細胞培養物において約２個の内分泌前駆細胞毎に存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２２】
前記膵島ホルモン発現細胞が非組み換え細胞である、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２３】
ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２４】
エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２５】
約１０ｍＭの濃度でニコチンアミド（ＮＩＣ）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２６】
約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でエキセンジン４（Ｅｘ４）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２７】
約２５ｎｇ／ｍｌの濃度で肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２８】
約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でインスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２９】
ヒト細胞を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物であって、該ヒト細胞の少なくとも約５％がニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）を発現する内分泌前駆細胞であり、該内分泌前駆細胞がインスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞である、ヒト細胞を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３０】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が内分泌前駆細胞である、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３１】
前記ヒト細胞の少なくとも約２５％が内分泌前駆細胞である、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３２】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が内分泌前駆細胞である、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３３】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３４】
前記ヒト細胞の少なくとも約２５％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３５】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３６】
ヒト膵島ホルモン発現細胞を実質的に欠いている、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３７】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項３６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３８】
前記ヒト細胞の少なくとも約２５％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項３６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３９】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項３６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４０】
前記内分泌前駆細胞がペアードボックス４（ＰＡＸ４）及びＮＫＸ２転写因子関連遺伝子座２（ＮＫＸ２．２）から成る群から選択されるマーカーを発現する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４１】
少なくとも約１個の内分泌前駆細胞が、前記細胞培養物において約１０個のＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞毎に存在する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４２】
少なくとも約１個の内分泌前駆細胞が、前記細胞培養物において約５個のＰＤＸ１陽性
膵臓内胚葉細胞毎に存在する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４３】
少なくとも約１個の内分泌前駆細胞が、前記細胞培養物において約２個のＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞毎に存在する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４４】
前記内分泌前駆細胞が非組み換え細胞である、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４５】
Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む培地をさらに含む、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４６】
前記ＤＡＰＴの濃度が少なくとも約１μＭである、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４７】
前記ＤＡＰＴの濃度が約３μＭである、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４８】
レチノイン酸（ＲＡ）及びエキセンジン４（Ｅｘ４）から選択される因子をさらに含む、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４９】
前記培地がＣＭＲＬである、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項５０】
ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞であるヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得る工程と、前記細胞集団においてヒト膵島ホルモン発現細胞の存在を検出することによって求められる、ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地で該ヒト内分泌前駆細胞をインキュベートする工程とを含む、ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項５１】
前記細胞集団におけるヒト細胞の少なくとも約２％が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞集団におけるヒト細胞の少なくとも約５％が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞集団におけるヒト細胞の少なくとも約１０％が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
ヒト内分泌前駆細胞のヒト膵島ホルモン発現細胞への分化をさらに促進するのに十分な量で、ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ１）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を前記ヒト膵臓内分泌細胞に供給することをさらに含み、該ヒト膵島ホルモン発現細胞が、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記因子がＥｘ４、ＨＧＦ及びＩＧＦ１から成る群から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記因子がＩＧＦ１である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
ＩＧＦ１が、約２５ｎｇ／ｍｌ〜約７５ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
ＩＧＦ１が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
細胞集団におけるヒト膵島ホルモン発現細胞の存在を検出することが、該細胞集団の細胞において膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）、グレリン（ＧＨＲＬ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、ＩＳＬ１転写因子（ＩＳＬ１）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）及びペアードボックス６（ＰＡＸ６）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６４】
少なくとも１つの前記マーカーの発現がＱ−ＰＣＲによって求められる、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
少なくとも１つの前記マーカーの発現が免疫細胞化学法によって求められる、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
ヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得る工程が、
腸管の前部から誘導される細胞、組織又は器官に分化することができる、多能性細胞であるヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程と、
γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６７】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
ヒトＰＤＸ陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞であるヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、
レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、
腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程と、
線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの任意の増殖因子を回収することをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項８１】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７６に記載の方法。
【請求項８４】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７６に記載の方法。
【請求項８５】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７６に記載の方法。
【請求項８６】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、多能性ヒト胚性幹細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を該多能性ヒト胚性幹細胞の集団に供給する工程とを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項８７】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項８６に記載の方法。
【請求項９０】
ウィングレス型（wingless-type）ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）を多能性ヒト胚性幹細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項９１】
ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９２】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９４】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９５】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９６】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９７】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９８】
多能性ヒト胚性幹細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項８６に記載の方法。
【請求項９９】
多能性ヒト胚性幹細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導される、請求項８６に記載の方法。
【請求項１００】
請求項８６に記載の方法によって産生されるヒト膵島ホルモン発現細胞。
【請求項１０１】
（ａ）多能性ヒト胚性幹細胞の集団を得る工程と、
（ｂ）前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を多能性ヒト胚性幹細胞の前記集団に供給し、それによりヒト胚体内胚葉細胞の集団を産生する、工程と、
（ｃ）少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｄ）レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｅ）γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞を含む集団を産生する工程と、
（ｆ）ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地でヒト内分泌前駆細胞の前記集団をインキュベートする工程を含む、
ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項１０２】
工程（ｂ）が、ヘッジホッグ経路阻害剤を供給することをさらに含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
線維芽細胞増殖因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２及びＦＧＦ２３から成る群から選択される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
線維芽細胞増殖因子がＦＧＦ１０を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
工程（ｄ）が、インスリン又はインスリン様増殖因子を供給することをさらに含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を実質的に回収することをさらに含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０７】
レチノイド及びγ−セクレターゼ阻害剤が、ほとんど同じ時間で供給される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０８】
前記前腸内胚葉細胞が、膵臓細胞にさらに分化する能力がある、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０９】
ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法であって、
（ａ）多能性ヒト胚性幹細胞の集団を得る工程と、
（ｂ）前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を多能性ヒト胚性幹細胞の前記集団に供給し、それによりヒト胚体内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｃ）レチノイドをヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｄ）ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、レチノイドの存在下でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団をインキュベートする工程と、
を含む、ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項１１０】
線維芽細胞ファミリー増殖因子をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給する工程をさらに含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
線維芽細胞ファミリー増殖因子がＦＧＦ１０又はＦＧＦ７を含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
ヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給する工程をさらに含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１３】
ヘッジホッグ経路阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記レチノイドがレチノイン酸である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１５】
γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給する工程をさらに含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１６】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）と結合する試薬を、ヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団に供給する工程と、該試薬と結合するヒト内分泌前駆細胞を該試薬と結合しない細胞から分離し、それによりヒト内分泌前駆細胞が濃縮された細胞集団を産生する工程とを含む、ヒト内分泌前駆細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法。
【請求項１１８】
ヒト内分泌前駆細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
ヒト内分泌前駆細胞が、ニューロゲニン３（ＮＧＮ３）を発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１、ＮＦＭ、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ソマトスタチン（ＳＳＴ）及びグレリン（ＧＨＲＬ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２０】
ヒト内分泌前駆細胞がペアードボックス遺伝子４（ＰＡＸ４）を発現する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
ヒト内分泌前駆細胞がペアードボックス６転写因子（ＰＡＸ６）を実質的に発現しない、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
前記試薬が、抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２３】
ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２５】
抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記試薬と結合する二次試薬を前記細胞集団及び該試薬に供給することをさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２７】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、前記二次試薬が蛍光標識される、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記分離する工程が、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて、前記抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記内分泌前駆細胞を該抗ＮＣＡＭ抗体と結合しない該細胞から分離することを含む、請求項１２５又は１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
ＮＣＡＭと結合する前記試薬を前記細胞集団に供給する前に、ヒト内分泌前駆細胞を含
む該細胞集団において前記細胞を脱集塊化する工程をさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１３０】
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができる多能性細胞である、ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を含む細胞集団を得る工程と、γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程とをさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１３１】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５，−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３４】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給することをさらに含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３５】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３７】
ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞である、ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３８】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４１】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの外から加えられた因子を回収することをさらに含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル(Nodal)、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡである、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４５】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４８】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４９】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１５０】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、ヒト多能性細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子をヒト多能性細胞の該集団に供給する工程とを含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１５１】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５２】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５３】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５４】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）をヒト多能性細胞の集団に供給することをさらに含む、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５５】
ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５６】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５８】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５９】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６０】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６１】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６２】
ヒト多能性細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６３】
ヒト多能性細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６４】
濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団であって、該ヒト内分泌前駆細胞がＮＧＮ３を発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１、ＮＦＭ、ＩＮＳ、ＧＣＧ、ＳＳＴ及びＧＨＲＬから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６５】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６６】
請求項１１７に記載の方法によって産生される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６７】
請求項１５０に記載の方法によって産生される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６８】
少なくとも約５％が、ニューロゲニン３（ＮＧＮ３）を発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１、ＮＦＭ、ＩＮＳ、ＧＣＧ、ＳＳＴ及びＧＨＲＬから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト内分泌前駆細胞を含む、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６９】
ＰＡＸ４を発現する、請求項１６８に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７０】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉から誘導される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７１】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト前腸内胚葉細胞から誘導される、請求項１７０に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７２】
ヒト前腸内胚葉細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏで胚体内胚葉細胞から誘導される、請求項１７１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７３】
胚体内胚葉細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）から誘導される、請求項１７２に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７４】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法であって、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）と結合する試薬を、ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む細胞集団に供給する工程と、該試薬と結合するヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該試薬と結合しない細胞から分離し、それによりヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を産生する工程とを含む、ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法。
【請求項１７５】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞がＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡから成る群から選択されるマーカーを実質的に発現しない、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７７】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、ＭＯＸ１、ＣＥＲ、ＰＯＵ５Ｆ１、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１７８】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、シナプトフィジン（ＳＹＰ）、クロモグラニンＡ（ＣＨＧＡ）、ＮＫＸ２．２、Ｉｓｌｅｔ１（ＩＳＬ１）、ペアードボックス遺伝子６（ＰＡＸ６）、及び神経発生分化１（ＮＥＵＲＯＤ）、ＰＤＸ１及びＨＢ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１７９】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約９８％未満をプロセシングする、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８０】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約７０％未満をプロセシングする、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８１】
インスリンのプロセシングが、Ｃ−ペプチド放出によって測定される、請求項１７９又は１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記試薬が、抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８３】
ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８４】
抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８５】
抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項１８４に記載の方法。
【請求項１８６】
前記試薬と結合する二次試薬を細胞集団に供給することをさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８７】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
分離する工程が、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて、抗ＮＣＡＭ抗体と結合するヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該抗ＮＣＡＭ抗体と結合しない該細胞から分離することを含む、請求項１８５又は１８７に記載の方法。
【請求項１８９】
ＣＤ１３３と結合する第２の試薬をヒト未熟膵島ホルモン発現細胞に供給する工程と、ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該第２の試薬と結合する細胞から分離する工程とをさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１９０】
ＮＣＡＭと結合する前記試薬を前記細胞集団に供給する前に該細胞集団を解離する工程
をさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１９１】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞であるヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得ること、及びヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地で該ヒト内分泌前駆細胞をインキュベートすることをさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１９２】
ヒト内分泌前駆細胞のヒト未熟膵島ホルモン発現細胞への分化をさらに促進するのに十分な量で、ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ１）、グルコース依存性インスリン分泌促進ポリペプチド（ＧＩＰ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を前記ヒト内分泌前駆細胞に供給することをさらに含む、請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９３】
前記因子がＥｘ４、ＨＧＦ及びＩＧＦ１から成る群から選択される、請求項１９２に記載の方法。
【請求項１９４】
前記因子がＥｘ４である、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項１９４に記載の方法。
【請求項１９６】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項１９４に記載の方法。
【請求項１９７】
前記因子がＩＧＦ１である、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９８】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項１９９】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２００】
ＩＧＦ１が、約２５ｎｇ／ｍｌ〜約７５ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２０１】
ＩＧＦ１が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２０２】
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができる多能性細胞である、ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を含む細胞集団を得る工程と、γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程をさらに含む、請求項１９１に記載の方法。
【請求項２０３】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５，−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０４】
ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０３に記載の方法。
【請求項２０５】
ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０３に記載の方法。
【請求項２０６】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給することをさらに含む、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０７】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０６に記載の方法。
【請求項２０８】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０６に記載の方法。
【請求項２０９】
ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞であるヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２１０】
レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項２０９に記載の方法。
【請求項２１１】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２１０に記載の方法。
【請求項２１２】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程と、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項２０９に記載の方法。
【請求項２１３】
胚体内胚葉細胞の集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの外から加えられた因子を回収することをさらに含む、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２１４】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項２１３に記載の方法。
【請求項２１５】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの増殖因子がアクチビンＡである、請求項２１４に記載の方法。
【請求項２１６】
ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２１７】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２１６に記載の方法。
【請求項２１８】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２１６に記載の方法。
【請求項２１９】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２０】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２１】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２２】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、ヒト多能性細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子をヒト多能性細胞の該集団に供給する工程とを含む、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２３】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２４】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２５】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２６】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）をヒト多能性細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２７】
前記ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２８】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項２２７に記載の方法。
【請求項２２９】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３０】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３１】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３２】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３３】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３４】
前記ヒト多能性細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３５】
前記ヒト多能性細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３６】
濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団であって、該ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞がＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しない、濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２３７】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項２３６に記載の濃縮された
ｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２３８】
請求項１７４に記載の方法によって産生される、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２３９】
請求項２２２に記載の方法によって産生される、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４０】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約２５％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４１】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約５０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４２】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約７０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４３】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約９０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４４】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約２５％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４５】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約５０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４６】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約７０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４７】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約９０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４８】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、ＭＯＸ１、ＣＥＲ、ＰＯＵ５Ｆ１、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４９】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、シナプトフィジン（ＳＹＰ）、クロモグラニンＡ（ＣＨＧＡ）、ＮＫＸ２．２、Ｉｓｌｅｔ１（ＩＳＬ１）、ペアードボックス遺伝子６（ＰＡＸ６）、及び神経発生分化１（ＮＥＵＲＯＤ）、ＰＤＸ１及びＨＢ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５０】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約９８％未満をプロセシングする、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５１】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約７０％未満をプロセシングする、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５２】
前記インスリンのプロセシングが、Ｃ−ペプチド放出によって測定される、請求項２５０又は２５１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５３】
ヒト膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法であって、該ヒト膵島ホルモン発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導され、該方法が神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）と結合する試薬を、ヒト膵島ホルモン発現細胞を含む細胞集団に供給する工程と、該試薬と結合するヒト内分泌前駆細胞を該試薬と結合しない細胞から分離し、それによりヒト膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を得る工程とを含む、ヒト膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法。
【請求項２５４】
前記試薬が、抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２５５】
前記ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５６】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５７】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項２５６に記載の方法。
【請求項２５８】
前記試薬と結合する二次試薬を前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５９】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項２５８に記載の方法。
【請求項２６０】
前記分離する工程が、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて、前記抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記膵島ホルモン発現細胞を該抗ＮＣＡＭ抗体と結合しない該細胞から分離することを含む、請求項２５７又は２５９に記載の方法。
【請求項２６１】
ＣＤ１３３と結合する第２の試薬を前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞に供給する工程と、該ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該第２の試薬と結合する細胞から分離する工程とをさらに含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２６２】
ＮＣＡＭと結合する前記試薬を前記細胞集団に供給する前に該細胞集団を解離する工程をさらに含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２６３】
ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞であるヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得ること、及びヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地で該ヒト内分泌前駆細胞をインキュベートすることをさらに含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２６４】
前記ヒト内分泌前駆細胞のヒト膵島ホルモン発現細胞への分化をさらに促進するのに十分な量で、ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ１）、グルコース依存性インスリン分泌促進ポリペプチド（ＧＩＰ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を前記ヒト内分泌前駆細胞に供給することをさらに含み、該ヒト膵島ホルモン発現細胞がインスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する、請求項２６３に記載の方法。
【請求項２６５】
前記因子がＥｘ４、ＨＧＦ及びＩＧＦ１から成る群から選択される、請求項２６４に記載の方法。
【請求項２６６】
前記因子がＥｘ４である、請求項２６５に記載の方法。
【請求項２６７】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６６に記載の方法。
【請求項２６８】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６６に記載の方法。
【請求項２６９】
前記因子がＩＧＦ１である、請求項２６５に記載の方法。
【請求項２７０】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７１】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７２】
ＩＧＦ１が、約２５ｎｇ／ｍｌ〜約７５ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７３】
ＩＧＦ１が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７４】
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができる多能性細胞である、ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を含む細胞集団を得る工程と、γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程とをさらに含む、請求項２６３に記載の方法。
【請求項２７５】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項２７４に記載の方法。
【請求項２７６】
前記ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７５に記載の方法。
【請求項２７７】
前記ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７５に記載の方法。
【請求項２７８】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項２７４に記載の方法。
【請求項２７９】
前記Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７８に記載の方法。
【請求項２８０】
前記Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７８に記載の方法。
【請求項２８１】
ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞であるヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項２７４に記載の方法。
【請求項２８２】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項２８１に記載の方法。
【請求項２８３】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８２に記載の方法。
【請求項２８４】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる、多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程と、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項２８１に記載の方法。
【請求項２８５】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの外から加えられた因子を回収することをさらに含む、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２８６】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項２８５に記載の方法。
【請求項２８７】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡである、請求項２８６に記載の方法。
【請求項２８８】
前記ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２８９】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８８に記載の方法。
【請求項２９０】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８８に記載の方法。
【請求項２９１】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９２】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９３】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９４】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、ヒト多能性細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子をヒト多能性細胞の該集団に供給する工程とを含む、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９５】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９６】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９７】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９８】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）をヒト多能性細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９９】
前記ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３００】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項２９９に記載の方法。
【請求項３０１】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０２】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０３】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０４】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０５】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０６】
前記ヒト多能性細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０７】
前記ヒト多能性細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０８】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３０９】
請求項２５３に記載の方法によって産生される、請求項３０８に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１０】
請求項２９４に記載の方法によって産生される、請求項３０８に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１１】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約２５％が、グレリン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）、ソマトスタチン（ＳＯＭ）、及び膵臓ポリペプチド（ＰＰ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項３０９又は３１０に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１２】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約５０％が、グレリン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）、ソマトスタチン（ＳＯＭ）、及び膵臓ポリペプチド（ＰＰ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項３１１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１３】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約９０％が、グレリン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）、ソマトスタチン（ＳＯＭ）、及び膵臓ポリペプチド（ＰＰ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項３１１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１４】
ＮＣＡＭを発現するヒト内分泌前駆細胞を含むｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体であって、該内分泌前駆細胞が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞、及び該ＮＣＡＭと結合する試薬である、ＮＣＡＭを発現するヒト内分泌前駆細胞を含むｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１５】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項３１４に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１６】
前記ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項３１５に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１７】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体である、請求項３１５に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１８】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項３１７に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１９】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項３１８に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２０】
前記試薬と結合する二次試薬をさらに含む、請求項３１４に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２１】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項３２０に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２２】
ＮＣＡＭを発現するヒト未熟膵島ホルモン発現細胞及び該ＮＣＡＭと結合する試薬を含むｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体であって、該ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞である、ｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２３】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項３２２に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２４】
前記ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項３２３に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２５】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体である、請求項３２３に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２６】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項３２５に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２７】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項３２６に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２８】
前記試薬と結合する二次試薬をさらに含む、請求項３２２に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２９】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項３２８に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３３０】
前記ヒト多能性細胞が、着床前胚から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項８６、１５０、２２２又は２９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３１】
ヒト膵臓ホルモン発現細胞を製造する方法であって、
（ａ）前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を多能性ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）の集団に供給し、それによりヒト胚体内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｂ）少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｃ）ノギンをヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞を含む集団を産生する工程と、
（ｄ）前記細胞集団におけるヒト膵臓ホルモン発現細胞の存在を検出することによって求められている、ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地でヒト内分泌前駆細胞の前記集団をインキュベートする工程と、
を含む、ヒト膵臓ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項３３２】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約２％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３３】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約５％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３４】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約１０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞
に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３５】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約２０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３６】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約４０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３７】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約５０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３８】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約７０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３９】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約９０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４０】
前記細胞集団におけるヒト膵島ホルモン発現細胞の存在を検出することが、該細胞集団の細胞において膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）、グレリン（ＧＨＲＬ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、ＩＳＬ１転写因子（ＩＳＬ１）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）及びペアードボックス６（ＰＡＸ６）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４１】
少なくとも１つの前記マーカーの発現がＱ−ＰＣＲによって求められる、請求項３４０に記載の方法。
【請求項３４２】
少なくとも１つの前記マーカーの発現が免疫細胞化学法によって求められる、請求項３４０に記載の方法。
【請求項３４３】
γ−セクレターゼ阻害剤を前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４４】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項３４３に記載の方法。
【請求項３４５】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、ノギンを添加するのとほぼ同時又はノギンを添加した後に、前記細胞集団に供給される、請求項３４３に記載の方法。
【請求項３４６】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、約０．１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で前記細胞集団に供給される、請求項３４４に記載の方法。
【請求項３４７】
少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子が線維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ−７）である、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４８】
前記ＦＧＦ−７が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で前記細胞培養物に供給される、請求項３４７に記載の方法。
【請求項３４９】
少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子を添加するのとほぼ同時に、ヘッジホッグ阻害剤
を前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５０】
前記ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項３４９に記載の方法。
【請求項３５１】
前記ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で前記細胞集団に供給される、請求項３５０に記載の方法。
【請求項３５２】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの任意の増殖因子を回収することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５３】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５４】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡを含む、請求項３５３に記載の方法。
【請求項３５５】
前記アクチビンＡが、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で前記ｈＥＳＣに供給される、請求項３５４に記載の方法。
【請求項３５６】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）を前記ｈＥＳＣに供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５７】
前記Ｗｎｔ３Ａが、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項３５６に記載の方法。
【請求項３５８】
前記ｈＥＳＣが、約２％未満の血清を含む培地においてヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５９】
前記ｈＥＳＣが、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導される、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３６０】
ノギンを供給するのとほぼ同時に、レチノイドを前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３６１】
少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子を添加するのとほぼ同時又は添加した後に、レチノイドを前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３６２】
前記レチノイドがレチノールである、請求項３６０又は３６１に記載の方法。
【請求項３６３】
前記レチノイドがレチノイン酸である、請求項３６０又は３６１に記載の方法。
【請求項３６４】
前記レチノイン酸が、約０．０１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項３６３に記載の方法。
【請求項３６５】
少なくとも幾つかの前記細胞が非組み換え細胞である、請求項１〜４９、１６４〜１７３、２３６〜２５２又は３０８〜３１３のいずれか１項に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６６】
前記細胞が非組み換え細胞である、請求項１〜４９、１６４〜１７３、２３６〜２５２
又は３０８〜３１３のいずれか１項に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６７】
前記細胞がヒストンデアセチラーゼ阻害剤の存在下では培養されていない、請求項１〜４９、１６４〜１７３、２３６〜２５２又は３０８〜３１３のいずれか１項に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６８】
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が酪酸ナトリウムを含む、請求項３６７に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６９】
少なくとも幾つかの前記細胞が非組み換え細胞である、請求項５０〜１６３、１７４〜２３５、２５３〜３０７又は３３１〜３６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７０】
前記細胞が非組み換え細胞である、請求項５０〜１６３、１７４〜２３５、２５３〜３０７又は３３１〜３６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７１】
前記細胞がヒストンデアセチラーゼ阻害剤の存在下では培養されていない、請求項５０〜１６３、１７４〜２３５、２５３〜３０７又は３３１〜３６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７２】
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が酪酸ナトリウムを含む、請求項３７１に記載の方法。
【請求項１】
ヒト細胞を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物であって、該ヒト細胞の少なくとも約２％が、グレリン、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する膵島ホルモン発現細胞であり、該膵島ホルモン発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、細胞培養物。
【請求項２】
前記ヒト細胞の少なくとも約５％が膵島ホルモン発現細胞である、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が膵島ホルモン発現細胞である、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％がニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）を発現するヒト内分泌前駆細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項５】
前記ヒト内分泌前駆細胞が、ペアードボックス４（ＰＡＸ４）及びＮＫＸ２転写因子関連遺伝子座２（ＮＫＸ２．２）から成る群から選択されるマーカーを発現する、請求項４に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項６】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が、ニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）を発現するヒト内分泌前駆細胞である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項７】
前記ヒト内分泌前駆細胞が、ペアードボックス４（ＰＡＸ４）及びＮＫＸ２転写因子関連遺伝子座２（ＮＫＸ２．２）から成る群から選択されるマーカーを発現する、請求項６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項８】
前記膵島ホルモン発現細胞が、グレリン、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも２つのホルモンを発現する、請求項１に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項９】
前記膵島ホルモン発現細胞がグレリン、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを発現する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１０】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約５％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１１】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約１０％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１２】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約２０％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１３】
前記膵島ホルモン発現細胞の少なくとも約３０％がインスリンを発現するが、グレリン、ソマトスタチン及びグルカゴンを有意に発現しない、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ細胞培養物。
【請求項１４】
インスリンがグルコース刺激に応じて分泌される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１５】
Ｃ−ペプチドがグルコース刺激に応じて分泌される、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１６】
前記膵島細胞の少なくとも１０％が膵島細胞クラスターに存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１７】
前記膵島ホルモン発現細胞が、膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、ＩＳＬ１転写因子（ＩＳＬ１）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）及びペアードボックス６（ＰＡＸ６）から成る群から選択されるマーカーをさらに発現する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１８】
前記膵島ホルモン発現細胞が、ニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）及びペアードボックス遺伝子４（ＰＡＸ４）から成る群から選択されるマーカーを実質的に発現しない、請求項１７に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項１９】
少なくとも約１つの膵島ホルモン発現細胞が、前記細胞培養物において約１０個の内分泌前駆細胞毎に存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２０】
少なくとも約１つの膵島ホルモン発現細胞が、前記細胞培養物において約５個の内分泌前駆細胞毎に存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２１】
少なくとも約１つの膵島ホルモン発現細胞が、前記細胞培養物において約２個の内分泌前駆細胞毎に存在する、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２２】
前記膵島ホルモン発現細胞が非組み換え細胞である、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２３】
ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２４】
エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２５】
約１０ｍＭの濃度でニコチンアミド（ＮＩＣ）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２６】
約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でエキセンジン４（Ｅｘ４）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２７】
約２５ｎｇ／ｍｌの濃度で肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２８】
約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でインスリン様増殖因子１（ＩＧＦ１）を含む培地をさらに含む、請求項１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項２９】
ヒト細胞を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物であって、該ヒト細胞の少なくとも約５％がニューロゲニン３（ＮＥＵＲＯＧ３）を発現する内分泌前駆細胞であり、該内分泌前駆細胞がインスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞である、ヒト細胞を含むｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３０】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が内分泌前駆細胞である、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３１】
前記ヒト細胞の少なくとも約２５％が内分泌前駆細胞である、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３２】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が内分泌前駆細胞である、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３３】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３４】
前記ヒト細胞の少なくとも約２５％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３５】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３６】
ヒト膵島ホルモン発現細胞を実質的に欠いている、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３７】
前記ヒト細胞の少なくとも約１０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項３６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３８】
前記ヒト細胞の少なくとも約２５％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項３６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項３９】
前記ヒト細胞の少なくとも約５０％が、ヒト膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）陽性膵臓内胚葉細胞である、請求項３６に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４０】
前記内分泌前駆細胞がペアードボックス４（ＰＡＸ４）及びＮＫＸ２転写因子関連遺伝子座２（ＮＫＸ２．２）から成る群から選択されるマーカーを発現する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４１】
少なくとも約１個の内分泌前駆細胞が、前記細胞培養物において約１０個のＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞毎に存在する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４２】
少なくとも約１個の内分泌前駆細胞が、前記細胞培養物において約５個のＰＤＸ１陽性
膵臓内胚葉細胞毎に存在する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４３】
少なくとも約１個の内分泌前駆細胞が、前記細胞培養物において約２個のＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞毎に存在する、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４４】
前記内分泌前駆細胞が非組み換え細胞である、請求項２９に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４５】
Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む培地をさらに含む、請求項２９に記載のｉｎ
ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４６】
前記ＤＡＰＴの濃度が少なくとも約１μＭである、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４７】
前記ＤＡＰＴの濃度が約３μＭである、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４８】
レチノイン酸（ＲＡ）及びエキセンジン４（Ｅｘ４）から選択される因子をさらに含む、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項４９】
前記培地がＣＭＲＬである、請求項４５に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞培養物。
【請求項５０】
ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞であるヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得る工程と、前記細胞集団においてヒト膵島ホルモン発現細胞の存在を検出することによって求められる、ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地で該ヒト内分泌前駆細胞をインキュベートする工程とを含む、ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項５１】
前記細胞集団におけるヒト細胞の少なくとも約２％が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞集団におけるヒト細胞の少なくとも約５％が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記細胞集団におけるヒト細胞の少なくとも約１０％が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
ヒト内分泌前駆細胞のヒト膵島ホルモン発現細胞への分化をさらに促進するのに十分な量で、ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ１）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を前記ヒト膵臓内分泌細胞に供給することをさらに含み、該ヒト膵島ホルモン発現細胞が、インスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記因子がＥｘ４、ＨＧＦ及びＩＧＦ１から成る群から選択される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
前記因子がＩＧＦ１である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
ＩＧＦ１が、約２５ｎｇ／ｍｌ〜約７５ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
ＩＧＦ１が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
細胞集団におけるヒト膵島ホルモン発現細胞の存在を検出することが、該細胞集団の細胞において膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）、グレリン（ＧＨＲＬ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、ＩＳＬ１転写因子（ＩＳＬ１）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）及びペアードボックス６（ＰＡＸ６）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６４】
少なくとも１つの前記マーカーの発現がＱ−ＰＣＲによって求められる、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
少なくとも１つの前記マーカーの発現が免疫細胞化学法によって求められる、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
ヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得る工程が、
腸管の前部から誘導される細胞、組織又は器官に分化することができる、多能性細胞であるヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程と、
γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６７】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
ヒトＰＤＸ陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞であるヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、
レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、
腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程と、
線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７７】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの任意の増殖因子を回収することをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項８１】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７６に記載の方法。
【請求項８４】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７６に記載の方法。
【請求項８５】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項７６に記載の方法。
【請求項８６】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、多能性ヒト胚性幹細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を該多能性ヒト胚性幹細胞の集団に供給する工程とを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項８７】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項８６に記載の方法。
【請求項９０】
ウィングレス型（wingless-type）ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）を多能性ヒト胚性幹細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項９１】
ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９２】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９４】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９５】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９６】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９７】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項８６に記載の方法。
【請求項９８】
多能性ヒト胚性幹細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項８６に記載の方法。
【請求項９９】
多能性ヒト胚性幹細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導される、請求項８６に記載の方法。
【請求項１００】
請求項８６に記載の方法によって産生されるヒト膵島ホルモン発現細胞。
【請求項１０１】
（ａ）多能性ヒト胚性幹細胞の集団を得る工程と、
（ｂ）前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を多能性ヒト胚性幹細胞の前記集団に供給し、それによりヒト胚体内胚葉細胞の集団を産生する、工程と、
（ｃ）少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｄ）レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｅ）γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞を含む集団を産生する工程と、
（ｆ）ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地でヒト内分泌前駆細胞の前記集団をインキュベートする工程を含む、
ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項１０２】
工程（ｂ）が、ヘッジホッグ経路阻害剤を供給することをさらに含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
線維芽細胞増殖因子が、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１５、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２及びＦＧＦ２３から成る群から選択される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
線維芽細胞増殖因子がＦＧＦ１０を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
工程（ｄ）が、インスリン又はインスリン様増殖因子を供給することをさらに含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を実質的に回収することをさらに含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０７】
レチノイド及びγ−セクレターゼ阻害剤が、ほとんど同じ時間で供給される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０８】
前記前腸内胚葉細胞が、膵臓細胞にさらに分化する能力がある、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０９】
ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法であって、
（ａ）多能性ヒト胚性幹細胞の集団を得る工程と、
（ｂ）前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を多能性ヒト胚性幹細胞の前記集団に供給し、それによりヒト胚体内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｃ）レチノイドをヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｄ）ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、レチノイドの存在下でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団をインキュベートする工程と、
を含む、ヒト膵島ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項１１０】
線維芽細胞ファミリー増殖因子をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給する工程をさらに含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
線維芽細胞ファミリー増殖因子がＦＧＦ１０又はＦＧＦ７を含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
ヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給する工程をさらに含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１３】
ヘッジホッグ経路阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記レチノイドがレチノイン酸である、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１５】
γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給する工程をさらに含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１６】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）と結合する試薬を、ヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団に供給する工程と、該試薬と結合するヒト内分泌前駆細胞を該試薬と結合しない細胞から分離し、それによりヒト内分泌前駆細胞が濃縮された細胞集団を産生する工程とを含む、ヒト内分泌前駆細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法。
【請求項１１８】
ヒト内分泌前駆細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
ヒト内分泌前駆細胞が、ニューロゲニン３（ＮＧＮ３）を発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１、ＮＦＭ、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ソマトスタチン（ＳＳＴ）及びグレリン（ＧＨＲＬ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２０】
ヒト内分泌前駆細胞がペアードボックス遺伝子４（ＰＡＸ４）を発現する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
ヒト内分泌前駆細胞がペアードボックス６転写因子（ＰＡＸ６）を実質的に発現しない、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
前記試薬が、抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２３】
ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２５】
抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記試薬と結合する二次試薬を前記細胞集団及び該試薬に供給することをさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２７】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、前記二次試薬が蛍光標識される、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記分離する工程が、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて、前記抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記内分泌前駆細胞を該抗ＮＣＡＭ抗体と結合しない該細胞から分離することを含む、請求項１２５又は１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
ＮＣＡＭと結合する前記試薬を前記細胞集団に供給する前に、ヒト内分泌前駆細胞を含
む該細胞集団において前記細胞を脱集塊化する工程をさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１３０】
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができる多能性細胞である、ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を含む細胞集団を得る工程と、γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程とをさらに含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１３１】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５，−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３３】
ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３４】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給することをさらに含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３５】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３７】
ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞である、ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３８】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４１】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの外から加えられた因子を回収することをさらに含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル(Nodal)、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡである、請求項１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４５】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４４に記載の方法。
【請求項１４６】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４８】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４９】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１５０】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、ヒト多能性細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子をヒト多能性細胞の該集団に供給する工程とを含む、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１５１】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５２】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５３】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５４】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）をヒト多能性細胞の集団に供給することをさらに含む、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５５】
ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５６】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５８】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１５９】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６０】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６１】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６２】
ヒト多能性細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６３】
ヒト多能性細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項１５０に記載の方法。
【請求項１６４】
濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団であって、該ヒト内分泌前駆細胞がＮＧＮ３を発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１、ＮＦＭ、ＩＮＳ、ＧＣＧ、ＳＳＴ及びＧＨＲＬから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６５】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６６】
請求項１１７に記載の方法によって産生される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６７】
請求項１５０に記載の方法によって産生される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６８】
少なくとも約５％が、ニューロゲニン３（ＮＧＮ３）を発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１、ＮＦＭ、ＩＮＳ、ＧＣＧ、ＳＳＴ及びＧＨＲＬから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト内分泌前駆細胞を含む、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１６９】
ＰＡＸ４を発現する、請求項１６８に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７０】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉から誘導される、請求項１６４に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７１】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト前腸内胚葉細胞から誘導される、請求項１７０に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７２】
ヒト前腸内胚葉細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏで胚体内胚葉細胞から誘導される、請求項１７１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７３】
胚体内胚葉細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）から誘導される、請求項１７２に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト内分泌前駆細胞集団。
【請求項１７４】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法であって、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）と結合する試薬を、ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む細胞集団に供給する工程と、該試薬と結合するヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該試薬と結合しない細胞から分離し、それによりヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を産生する工程とを含む、ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法。
【請求項１７５】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞がＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡから成る群から選択されるマーカーを実質的に発現しない、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７７】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、ＭＯＸ１、ＣＥＲ、ＰＯＵ５Ｆ１、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１７８】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、シナプトフィジン（ＳＹＰ）、クロモグラニンＡ（ＣＨＧＡ）、ＮＫＸ２．２、Ｉｓｌｅｔ１（ＩＳＬ１）、ペアードボックス遺伝子６（ＰＡＸ６）、及び神経発生分化１（ＮＥＵＲＯＤ）、ＰＤＸ１及びＨＢ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項１７６に記載の方法。
【請求項１７９】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約９８％未満をプロセシングする、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８０】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約７０％未満をプロセシングする、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８１】
インスリンのプロセシングが、Ｃ−ペプチド放出によって測定される、請求項１７９又は１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記試薬が、抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８３】
ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８４】
抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８５】
抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項１８４に記載の方法。
【請求項１８６】
前記試薬と結合する二次試薬を細胞集団に供給することをさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１８７】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８８】
分離する工程が、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて、抗ＮＣＡＭ抗体と結合するヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該抗ＮＣＡＭ抗体と結合しない該細胞から分離することを含む、請求項１８５又は１８７に記載の方法。
【請求項１８９】
ＣＤ１３３と結合する第２の試薬をヒト未熟膵島ホルモン発現細胞に供給する工程と、ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該第２の試薬と結合する細胞から分離する工程とをさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１９０】
ＮＣＡＭと結合する前記試薬を前記細胞集団に供給する前に該細胞集団を解離する工程
をさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１９１】
ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞であるヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得ること、及びヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地で該ヒト内分泌前駆細胞をインキュベートすることをさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１９２】
ヒト内分泌前駆細胞のヒト未熟膵島ホルモン発現細胞への分化をさらに促進するのに十分な量で、ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ１）、グルコース依存性インスリン分泌促進ポリペプチド（ＧＩＰ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を前記ヒト内分泌前駆細胞に供給することをさらに含む、請求項１９１に記載の方法。
【請求項１９３】
前記因子がＥｘ４、ＨＧＦ及びＩＧＦ１から成る群から選択される、請求項１９２に記載の方法。
【請求項１９４】
前記因子がＥｘ４である、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項１９４に記載の方法。
【請求項１９６】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項１９４に記載の方法。
【請求項１９７】
前記因子がＩＧＦ１である、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９８】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項１９９】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２００】
ＩＧＦ１が、約２５ｎｇ／ｍｌ〜約７５ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２０１】
ＩＧＦ１が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の細胞集団に供給される、請求項１９７に記載の方法。
【請求項２０２】
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができる多能性細胞である、ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を含む細胞集団を得る工程と、γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程をさらに含む、請求項１９１に記載の方法。
【請求項２０３】
γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５，−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０４】
ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０３に記載の方法。
【請求項２０５】
ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０３に記載の方法。
【請求項２０６】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給することをさらに含む、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２０７】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０６に記載の方法。
【請求項２０８】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２０６に記載の方法。
【請求項２０９】
ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞であるヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項２０２に記載の方法。
【請求項２１０】
レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項２０９に記載の方法。
【請求項２１１】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２１０に記載の方法。
【請求項２１２】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程と、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項２０９に記載の方法。
【請求項２１３】
胚体内胚葉細胞の集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの外から加えられた因子を回収することをさらに含む、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２１４】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項２１３に記載の方法。
【請求項２１５】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの増殖因子がアクチビンＡである、請求項２１４に記載の方法。
【請求項２１６】
ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２１７】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２１６に記載の方法。
【請求項２１８】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の集団に供給される、請求項２１６に記載の方法。
【請求項２１９】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２０】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２１】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２２】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、ヒト多能性細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子をヒト多能性細胞の該集団に供給する工程とを含む、請求項２１２に記載の方法。
【請求項２２３】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２４】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２５】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２６】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）をヒト多能性細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２７】
前記ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２２８】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項２２７に記載の方法。
【請求項２２９】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３０】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３１】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３２】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３３】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３４】
前記ヒト多能性細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３５】
前記ヒト多能性細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項２２２に記載の方法。
【請求項２３６】
濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団であって、該ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞がＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しない、濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２３７】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される、請求項２３６に記載の濃縮された
ｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２３８】
請求項１７４に記載の方法によって産生される、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２３９】
請求項２２２に記載の方法によって産生される、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４０】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約２５％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４１】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約５０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４２】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約７０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４３】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約９０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３８又は２３９に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４４】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約２５％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４５】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約５０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４６】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約７０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４７】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約９０％が、ＭＡＦＢを発現し、ＮＧＮ３及びＭＡＦＡを実質的に発現しないヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４８】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、ＭＯＸ１、ＣＥＲ、ＰＯＵ５Ｆ１、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しない、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２４９】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、シナプトフィジン（ＳＹＰ）、クロモグラニンＡ（ＣＨＧＡ）、ＮＫＸ２．２、Ｉｓｌｅｔ１（ＩＳＬ１）、ペアードボックス遺伝子６（ＰＡＸ６）、及び神経発生分化１（ＮＥＵＲＯＤ）、ＰＤＸ１及びＨＢ９から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現する、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５０】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約９８％未満をプロセシングする、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５１】
前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、前記未熟膵島ホルモン発現細胞によって産生されたインスリンの約７０％未満をプロセシングする、請求項２３６に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５２】
前記インスリンのプロセシングが、Ｃ−ペプチド放出によって測定される、請求項２５０又は２５１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト未熟膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項２５３】
ヒト膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法であって、該ヒト膵島ホルモン発現細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導され、該方法が神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）と結合する試薬を、ヒト膵島ホルモン発現細胞を含む細胞集団に供給する工程と、該試薬と結合するヒト内分泌前駆細胞を該試薬と結合しない細胞から分離し、それによりヒト膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を得る工程とを含む、ヒト膵島ホルモン発現細胞が濃縮された細胞集団を製造する方法。
【請求項２５４】
前記試薬が、抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２５５】
前記ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５６】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５７】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項２５６に記載の方法。
【請求項２５８】
前記試薬と結合する二次試薬を前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項２５４に記載の方法。
【請求項２５９】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項２５８に記載の方法。
【請求項２６０】
前記分離する工程が、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて、前記抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記膵島ホルモン発現細胞を該抗ＮＣＡＭ抗体と結合しない該細胞から分離することを含む、請求項２５７又は２５９に記載の方法。
【請求項２６１】
ＣＤ１３３と結合する第２の試薬を前記ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞に供給する工程と、該ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞を該第２の試薬と結合する細胞から分離する工程とをさらに含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２６２】
ＮＣＡＭと結合する前記試薬を前記細胞集団に供給する前に該細胞集団を解離する工程をさらに含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２６３】
ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞であるヒト内分泌前駆細胞を含む細胞集団を得ること、及びヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地で該ヒト内分泌前駆細胞をインキュベートすることをさらに含む、請求項２５３に記載の方法。
【請求項２６４】
前記ヒト内分泌前駆細胞のヒト膵島ホルモン発現細胞への分化をさらに促進するのに十分な量で、ニコチンアミド（ＮＩＣ）、エキセンジン４（Ｅｘ４）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ１）、グルコース依存性インスリン分泌促進ポリペプチド（ＧＩＰ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）及びそれらの組合せから成る群から選択される因子を前記ヒト内分泌前駆細胞に供給することをさらに含み、該ヒト膵島ホルモン発現細胞がインスリン、ソマトスタチン及びグルカゴンから成る群から選択される少なくとも１つの膵臓ホルモンを発現する、請求項２６３に記載の方法。
【請求項２６５】
前記因子がＥｘ４、ＨＧＦ及びＩＧＦ１から成る群から選択される、請求項２６４に記載の方法。
【請求項２６６】
前記因子がＥｘ４である、請求項２６５に記載の方法。
【請求項２６７】
Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６６に記載の方法。
【請求項２６８】
Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６６に記載の方法。
【請求項２６９】
前記因子がＩＧＦ１である、請求項２６５に記載の方法。
【請求項２７０】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７１】
ＩＧＦ１が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７２】
ＩＧＦ１が、約２５ｎｇ／ｍｌ〜約７５ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７３】
ＩＧＦ１が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度で内分泌前駆細胞の前記細胞集団に供給される、請求項２６９に記載の方法。
【請求項２７４】
腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができる多能性細胞である、ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を含む細胞集団を得る工程と、γ−セクレターゼ阻害剤をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞の集団を産生する工程とをさらに含む、請求項２６３に記載の方法。
【請求項２７５】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項２７４に記載の方法。
【請求項２７６】
前記ＤＡＰＴが、約１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７５に記載の方法。
【請求項２７７】
前記ＤＡＰＴが、約３μＭの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７５に記載の方法。
【請求項２７８】
エキセンジン４（Ｅｘ４）をヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項２７４に記載の方法。
【請求項２７９】
前記Ｅｘ４が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７８に記載の方法。
【請求項２８０】
前記Ｅｘ４が、約４０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２７８に記載の方法。
【請求項２８１】
ヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の前部から誘導される、細胞、組織又は器官に分化することができるＰＤＸ１陰性多能性細胞であるヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程と、レチノイドをヒト前腸内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒトＰＤＸ１陽性膵臓内胚葉細胞の集団を産生する工程とを含む、請求項２７４に記載の方法。
【請求項２８２】
前記レチノイドがレチノイン酸（ＲＡ）である、請求項２８１に記載の方法。
【請求項２８３】
ＲＡが、約１ｎＭ〜約１０μＭの範囲の濃度でヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８２に記載の方法。
【請求項２８４】
ヒト前腸内胚葉細胞の集団を得る工程が、腸管の細胞又はそれから誘導される器官に分化することができる、多能性細胞であるヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程と、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ−１０）及びヘッジホッグ経路阻害剤をヒト胚体内胚葉細胞の該集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程を含む、請求項２８１に記載の方法。
【請求項２８５】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの外から加えられた因子を回収することをさらに含む、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２８６】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項２８５に記載の方法。
【請求項２８７】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡである、請求項２８６に記載の方法。
【請求項２８８】
前記ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２８９】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１μＭの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８８に記載の方法。
【請求項２９０】
ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．２μＭの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８８に記載の方法。
【請求項２９１】
ＦＧＦ−１０が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９２】
ＦＧＦ−１０が、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９３】
ＦＧＦ−１０が、約５０ｎｇ／ｍｌの濃度でヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給される、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９４】
ヒト胚体内胚葉細胞の集団を得る工程が、ヒト多能性細胞の集団を得る工程と、前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子をヒト多能性細胞の該集団に供給する工程とを含む、請求項２８４に記載の方法。
【請求項２９５】
少なくとも１つの増殖因子がノーダルである、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９６】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＡである、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９７】
少なくとも１つの増殖因子がアクチビンＢである、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９８】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）をヒト多能性細胞の前記集団に供給することをさらに含む、請求項２９４に記載の方法。
【請求項２９９】
前記ＴＧＦβスーパーファミリーの複数の増殖因子が供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３００】
Ｗｎｔ３Ａも供給される、請求項２９９に記載の方法。
【請求項３０１】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０２】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０３】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０４】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０５】
少なくとも１つの増殖因子が、少なくとも約５０００ｎｇ／ｍｌの濃度で供給される、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０６】
前記ヒト多能性細胞が、約２％未満の血清を含む培地でヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０７】
前記ヒト多能性細胞が、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項２９４に記載の方法。
【請求項３０８】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト多能性細胞から誘導される濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３０９】
請求項２５３に記載の方法によって産生される、請求項３０８に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１０】
請求項２９４に記載の方法によって産生される、請求項３０８に記載の濃縮されたｉｎ
ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１１】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約２５％が、グレリン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）、ソマトスタチン（ＳＯＭ）、及び膵臓ポリペプチド（ＰＰ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項３０９又は３１０に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１２】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約５０％が、グレリン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）、ソマトスタチン（ＳＯＭ）、及び膵臓ポリペプチド（ＰＰ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項３１１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１３】
前記濃縮されたヒト細胞集団の少なくとも約９０％が、グレリン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、インスリン（ＩＮＳ）、グルカゴン（ＧＣＧ）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）、ソマトスタチン（ＳＯＭ）、及び膵臓ポリペプチド（ＰＰ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを発現し、ＡＦＰ、ＳＯＸ７、ＳＯＸ１、ＺＩＣ１及びＮＦＭから成る群から選択される少なくとも１つのマーカーを実質的に発現しないヒト膵島ホルモン発現細胞を含む、請求項３１１に記載の濃縮されたｉｎ ｖｉｔｒｏヒト膵島ホルモン発現細胞集団。
【請求項３１４】
ＮＣＡＭを発現するヒト内分泌前駆細胞を含むｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体であって、該内分泌前駆細胞が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞、及び該ＮＣＡＭと結合する試薬である、ＮＣＡＭを発現するヒト内分泌前駆細胞を含むｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１５】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項３１４に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１６】
前記ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項３１５に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１７】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体である、請求項３１５に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１８】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項３１７に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３１９】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項３１８に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２０】
前記試薬と結合する二次試薬をさらに含む、請求項３１４に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２１】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項３２０に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２２】
ＮＣＡＭを発現するヒト未熟膵島ホルモン発現細胞及び該ＮＣＡＭと結合する試薬を含むｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体であって、該ヒト未熟膵島ホルモン発現細胞が、ヒト膵島ホルモン発現細胞に分化することができる多能性細胞である、ｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２３】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体、抗ＮＣＡＭ抗体断片及びＮＣＡＭリガンドから成る群から選択される分子を含む、請求項３２２に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２４】
前記ＮＣＡＭリガンドがＮＣＡＭ結合タンパク質１０（ＮＢＰ１０）である、請求項３２３に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２５】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体である、請求項３２３に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２６】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が標識される、請求項３２５に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２７】
前記抗ＮＣＡＭ抗体が蛍光標識される、請求項３２６に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２８】
前記試薬と結合する二次試薬をさらに含む、請求項３２２に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３２９】
前記試薬が抗ＮＣＡＭ抗体を含み、該抗ＮＣＡＭ抗体と結合する前記二次試薬が蛍光標識される、請求項３２８に記載のｅｘ ｖｉｖｏ試薬−細胞複合体。
【請求項３３０】
前記ヒト多能性細胞が、着床前胚から誘導されるヒト胚性幹細胞である、請求項８６、１５０、２２２又は２９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３１】
ヒト膵臓ホルモン発現細胞を製造する方法であって、
（ａ）前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの少なくとも１つの増殖因子を多能性ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）の集団に供給し、それによりヒト胚体内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｂ）少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子をヒト胚体内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト前腸内胚葉細胞の集団を産生する工程と、
（ｃ）ノギンをヒト前腸内胚葉細胞の前記集団に供給し、それによりヒト内分泌前駆細胞を含む集団を産生する工程と、
（ｄ）前記細胞集団におけるヒト膵臓ホルモン発現細胞の存在を検出することによって求められている、ヒト膵島ホルモン発現細胞が形成されるのに十分な時間、培養培地でヒト内分泌前駆細胞の前記集団をインキュベートする工程と、
を含む、ヒト膵臓ホルモン発現細胞を製造する方法。
【請求項３３２】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約２％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３３】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約５％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３４】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約１０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞
に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３５】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約２０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３６】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約４０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３７】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約５０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３８】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約７０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３３９】
前記細胞集団において前記ヒト細胞の少なくとも約９０％がヒト膵臓ホルモン発現細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４０】
前記細胞集団におけるヒト膵島ホルモン発現細胞の存在を検出することが、該細胞集団の細胞において膵臓十二指腸ホメオボックス１（ＰＤＸ１）、グレリン（ＧＨＲＬ）、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、膵臓ポリペプチド（ＰＰ）、ＩＳＬ１転写因子（ＩＳＬ１）、ＮＫＸ６転写因子関連遺伝子座１（ＮＫＸ６．１）及びペアードボックス６（ＰＡＸ６）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーの発現を検出することを含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４１】
少なくとも１つの前記マーカーの発現がＱ−ＰＣＲによって求められる、請求項３４０に記載の方法。
【請求項３４２】
少なくとも１つの前記マーカーの発現が免疫細胞化学法によって求められる、請求項３４０に記載の方法。
【請求項３４３】
γ−セクレターゼ阻害剤を前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４４】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（ＤＡＰＴ）を含む、請求項３４３に記載の方法。
【請求項３４５】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、ノギンを添加するのとほぼ同時又はノギンを添加した後に、前記細胞集団に供給される、請求項３４３に記載の方法。
【請求項３４６】
前記γ−セクレターゼ阻害剤が、約０．１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で前記細胞集団に供給される、請求項３４４に記載の方法。
【請求項３４７】
少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子が線維芽細胞増殖因子７（ＦＧＦ−７）である、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３４８】
前記ＦＧＦ−７が、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で前記細胞培養物に供給される、請求項３４７に記載の方法。
【請求項３４９】
少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子を添加するのとほぼ同時に、ヘッジホッグ阻害剤
を前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５０】
前記ヘッジホッグ阻害剤がＫＡＡＤ−シクロパミンを含む、請求項３４９に記載の方法。
【請求項３５１】
前記ＫＡＡＤ−シクロパミンが、約０．０１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で前記細胞集団に供給される、請求項３５０に記載の方法。
【請求項３５２】
胚体内胚葉細胞の前記集団に存在し得る前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの任意の増殖因子を回収することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５３】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子が、ノーダル、アクチビンＡ、アクチビンＢ及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５４】
前記ＴＧＦ−βスーパーファミリーの前記増殖因子がアクチビンＡを含む、請求項３５３に記載の方法。
【請求項３５５】
前記アクチビンＡが、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で前記ｈＥＳＣに供給される、請求項３５４に記載の方法。
【請求項３５６】
ウィングレス型ＭＭＴＶ組込部位ファミリー成員３Ａ（Ｗｎｔ３Ａ）を前記ｈＥＳＣに供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５７】
前記Ｗｎｔ３Ａが、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で供給される、請求項３５６に記載の方法。
【請求項３５８】
前記ｈＥＳＣが、約２％未満の血清を含む培地においてヒト胚体内胚葉細胞に分化する、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３５９】
前記ｈＥＳＣが、桑実胚、胚のＩＣＭ及び胚の生殖隆起から成る群から選択される組織から誘導される、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３６０】
ノギンを供給するのとほぼ同時に、レチノイドを前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３６１】
少なくとも１つの線維芽細胞増殖因子を添加するのとほぼ同時又は添加した後に、レチノイドを前記細胞集団に供給することをさらに含む、請求項３３１に記載の方法。
【請求項３６２】
前記レチノイドがレチノールである、請求項３６０又は３６１に記載の方法。
【請求項３６３】
前記レチノイドがレチノイン酸である、請求項３６０又は３６１に記載の方法。
【請求項３６４】
前記レチノイン酸が、約０．０１μＭ〜約１０μＭの範囲の濃度で供給される、請求項３６３に記載の方法。
【請求項３６５】
少なくとも幾つかの前記細胞が非組み換え細胞である、請求項１〜４９、１６４〜１７３、２３６〜２５２又は３０８〜３１３のいずれか１項に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６６】
前記細胞が非組み換え細胞である、請求項１〜４９、１６４〜１７３、２３６〜２５２
又は３０８〜３１３のいずれか１項に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６７】
前記細胞がヒストンデアセチラーゼ阻害剤の存在下では培養されていない、請求項１〜４９、１６４〜１７３、２３６〜２５２又は３０８〜３１３のいずれか１項に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６８】
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が酪酸ナトリウムを含む、請求項３６７に記載の細胞培養物又は細胞集団。
【請求項３６９】
少なくとも幾つかの前記細胞が非組み換え細胞である、請求項５０〜１６３、１７４〜２３５、２５３〜３０７又は３３１〜３６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７０】
前記細胞が非組み換え細胞である、請求項５０〜１６３、１７４〜２３５、２５３〜３０７又は３３１〜３６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７１】
前記細胞がヒストンデアセチラーゼ阻害剤の存在下では培養されていない、請求項５０〜１６３、１７４〜２３５、２５３〜３０７又は３３１〜３６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７２】
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤が酪酸ナトリウムを含む、請求項３７１に記載の方法。
【図１】
【図２−１】
【図２−２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２−１】
【図２２−２】
【図２３】
【図２４−１】
【図２４−２】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図２−１】
【図２−２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２−１】
【図２２−２】
【図２３】
【図２４−１】
【図２４−２】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【公表番号】特表２００９−５２８０６６（Ｐ２００９−５２８０６６Ａ）
【公表日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５７４３１（Ｐ２００８−５５７４３１）
【出願日】平成１９年３月２日（２００７．３．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００５５４１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０３２８２
【国際公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【出願人】（５０３４３１７９２）サイセラ，インコーポレイテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月２日（２００７．３．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００５５４１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０３２８２
【国際公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【出願人】（５０３４３１７９２）サイセラ，インコーポレイテッド (9)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]