医薬におけるインターフェロン−τの使用
ヒト被験体におけるインターフェロン治療に応答性の状態を治療するための、医薬品の調製における使用のための組成物が、開示される。特に、本発明はインターフェロン−τを含有する薬学的組成物、およびこれの使用方法に関係する。この組成物は、インターフェロン−τが存在しない被験体の血中（２’，５’）−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルに対して、被験体の血中ＯＡＳレベルの増加を生じるのに有効な量で、腸管への経口投与に適した投薬形態のインターフェロン−τを包含する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明はインターフェロン−τを含有する薬学的組成物、およびこれの使用方法に関係する。より詳しくは、本発明は、２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素の血中濃度を変えるのに十分な用量でインターフェロン−τを経口投与することによってインターフェロン−τに応答性の状態を治療するための方法に関係する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
インターフェロン−τ（以下「ＩＦＮτ」もしくは「インターフェロン−τ」）は元々、反芻動物の受胎産物の栄養外胚葉により産生される妊娠認識ホルモンとして発見された（非特許文献１；非特許文献２）。ＩＦＮτ遺伝子の分布は、畜牛、ヒツジおよびヤギを含む反芻動物に限られている（非特許文献３）が、ヒトおよびマウスを含む他の生物種に属する細胞において、これは活性を有することが示されている（非特許文献４；非特許文献５）。例えば、ＩＦＮτは、抗ウイルス活性（非特許文献６）、抗増殖活性（非特許文献４）、および免疫調節活性（非特許文献７）を有することが立証されている。
【０００３】
ＩＦＮτは、Ｉ型ＩＦＮ（例えば、インターフェロン−αおよびインターフェロン−β）に代表的に関係する活性の多くを呈するが、ＩＦＮτと他のＩ型ＩＦＮとの間には著しい差異が存在する。最も顕著な差異は、反芻動物種における妊娠時のＩＦＮτの役割である。他のＩＦＮは妊娠の認識において同様の活性を有さない。また、ウイルスによる誘導も異なる。ＩＦＮτを除き、全てのＩ型ＩＦＮはウイルスおよびｄｓＲＮＡによって容易に誘導される（非特許文献８）。誘導されたＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの発現は一過性であり、およそ２、３時間続く。対して、ＩＦＮτの合成は、一旦誘導されると、数日の期間に亘って維持される（非特許文献９）。細胞当たりの基準とすると、他のＩ型ＩＦＮより３００倍のＩＦＮτが産生される（非特許文献１０）。
【０００４】
ＩＦＮτと他のＩ型インターフェロンのアミノ酸配列において、別の差異が存在する。インターフェロンα２ｂ、インターフェロンβ１、インターフェロンω１およびインターフェロンγと、インターフェロンτとの間のアミノ酸配列同一性割合を、次の表にまとめる。
【０００５】
【数１】
組換えヒツジＩＦＮτ（ｒＩＦＮτ）は、ＩＮＦα２ｂに対して４８．８パーセントの相同性であり、そしてＩＮＦβ１に対しは３３．８パーセントの相同性である。ＩＦＮτとＩＦＮαとの間、およびＩＦＮτとＩＦＮβとの間のこの限られた相同性に起因して、ＩＦＮτは、経口投与される場合に、ＩＦＮαまたはＩＦＮβと同様の様式で作用するかどうかは、予測され得ない。ＩＦＮτはまた、低いレセプター結合親和力をヒト細胞上のＩ型レセプターに対して有すると報告されている（非特許文献１４；非特許文献１５）。さらに、ＩＦＮτが非内在性ヒトタンパク質であるという事実により、ＩＦＮτがヒト体内に導入される場合、全身性の中和抗体形成についての可能性が生じる（非特許文献１４）。ＩＦＮτと他のインターフェロンとの間のこれらの差異は、ＩＦＮτがヒトに投与される場合に治療的利益をもたらすかどうかを予測することを、困難にさせる。ＩＦＮα、ＩＦＮβ、あるいは他の非τ型インターフェロンの経口投与に関係する分野の教示により、ＩＦＮτから任意の期待を導き出す根拠は提供され得ない。
【０００６】
ＩＦＮτならびに全体的なタンパク質およびポリペプチドの使用における一つの制限要因は、生体内分布に関係する。なぜなら、この生体内分布は、非経口的に投与された場合に、血漿タンパク質と血液細胞とのタンパク質相互作用によって影響されるからである。胃におけるタンパク質分解に起因して、経口経路の投与はさらにより問題である。この胃において、意図する標的に到達する前に、酸性条件が分子を分解し得る。例えば、胃の酵素作用および膵臓の酵素作用によって生じたポリペプチドおよびタンパク質フラグメントは、腸管刷子縁膜内のエキソペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼによって切断されて、ジペプチドあるいはトリペプチドを生じる。膵臓酵素によるタンパク質分解が避けられた場合、ポリペプチドは刷子縁のペプチダーゼによる分解に供される。胃を通り抜けて存続し得るポリペプチドまたはタンパク質は、通過障壁が細胞内への進入を妨げる腸管粘膜において、代謝に供される。この理由から、一定期間口腔内に保持されるロゼンジまたは溶液の形態で口腔−咽頭領域へタンパク質を送達することに、多くの試みが焦点を当てている。
【非特許文献１】Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８７）３３０：３７７−３７９
【非特許文献２】Ｂａｚｅｒ，Ｆ．Ｗ．およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｍ．、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１）２６：１９−２２
【非特許文献３】Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（１９９９）１９：１３３５−１３４１
【非特許文献４】Ｐｏｎｔｚｅｒ，Ｃ．Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９１）５１：５３０４−５３０７
【非特許文献５】Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（２０００）２０：８１７−８２２
【非特許文献６】Ｐｏｎｔｚｅｒ，Ｃ．Ｈ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９８８）１５２：８０１−８０７
【非特許文献７】Ａｓｓａｌ−Ｍｅｌｉａｎｉ，Ａ．、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）３３：２６７−２７５
【非特許文献８】Ｒｏｂｅｒｔｓら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９２）１３：４３２
【非特許文献９】Ｇｏｄｋｉｎら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．（１９８２）６５：１４１
【非特許文献１０】Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．およびＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９１）８８：３８１７−３８２１
【非特許文献１１】Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、Ｇｅｎｅ（１９８０）１０（１）：１１
【非特許文献１２】Ａｄｏｌｆら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９９１）１０８９（２）：１６７
【非特許文献１３】Ｓｔｒｅｕｌｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８０）２０９：１３４３
【非特許文献１４】Ｂｒｏｄ，Ｓ．、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（１９９９）１８：８４１
【非特許文献１５】Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（１９９７）１７：７６９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、ヒト被験体において、インターフェロン治療に応答性である状態を処置するための方法を提供することが、本発明の目的である。
【０００８】
ＩＦＮτの経口投与によってこのような状態を処置するための方法を提供することが、本発明の別の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の概要）
１つの局面において、本発明は、ヒト被験体のインターフェロン治療に反応する状態を治療するための方法を含み、この方法は、ＩＦＮτ投与を欠く場合の被験体における血中２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルに対して、その血中ＯＡＳレベルの測定可能な増加を実現するのに有効な量で、被験体の腸管にＩＦＮτを経口投与することによる。被験体の腸管へのＩＦＮτの経口投与は、このような有効量で、１週あたり少なくとも数回という通常の基準で、少なくとも１ヶ月の期間、継続される。
【００１０】
別の局面において、本発明は、ヒト被験体における、インターフェロンτ治療に応答性の状態を処置するための医薬の調製における使用のための組成物を含み、この状態は、自己免疫疾患、癌、あるいはウイルス感染から選択される。この組成物は、インターフェロン−τの投与を欠いた被験体における血中２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルに対して、被験体の血中ＯＡＳレベルの測定可能な初期増加を実現するのに有効な量で、被験体の腸管に向けた経口投与のために処方されたインターフェロン−τを含み、ここでこのインターフェロン−τは、被験体の血中ＯＡＳレベルにおける変化とは関係なしに、少なくとも1ヶ月の期間、１週あたり少なくとも数回という通常の基準で、そのような有効量で被験体の腸管に対して投与される。
【００１１】
一実施形態において、ＩＦＮτはヒツジＩＦＮτである。特定の実施形態において、このヒツジＩＦＮτは、配列番号２あるいは配列番号３として本明細書中で認識される配列を有する。より一般的には、このＩＦＮτは、ヒツジＩＦＮτと少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を有する。このＩＦＮτは、組換えで作製されたＩＦＮτであり得る。
【００１２】
継続投与は、毎日の基準で実施され得るか、または１週あたり数回（例えば、４８時間ごと）実施することもできる。
【００１３】
なお別の実施形態において、このＩＦＮτは、の自己免疫疾患（多発性硬化症等）を患う被験体に投与される。この方法において、ＩＦＮτは被験体の症状の期間投与され、代表的には被験体の生涯にわたって投与される。
【００１４】
別の実施形態では、ＩＦＮτは、ウイルス（例えば、ＨＣＶ）に罹患した被験体に投与される。この方法はさらに、被験体における感染の存在を検出する工程、および感染がもはや検出されない時点を数ヶ月過ぎた期間、ＩＦＮτの投与を継続する工程、を包含する。この被験体は、ＩＦＮτを用いた処置期間の間、第二の抗ウイルス剤を用いて処置され得る。
【００１５】
別の実施形態において、ＩＦＮτは、細胞増殖により特徴付けられる状態（例えば、癌）に罹患した被験体に投与される。この被験体は、ＩＦＮτを用いた処置期間の間、第二の抗癌剤を用いて処置され得る。
【００１６】
好ましくは、ＩＦＮτの投薬形態は、このタンパク質を優先的に小腸へと送達する投薬形態が好ましい。例えば、この投薬形態は、小腸の環境からこのタンパク質を保護および／または安定化する、粘膜接着性ポリマーからなり得る。この粘膜付着性組成物は、小腸内壁の内表面を覆う細胞に対するインターフェロンの結合を増強する。
【００１７】
この処置は、ＩＦＮτの初期投与の結果として血中ＯＡＳレベルが増加するかどうかを確認するための、血中ＯＡＳレベルをモニタリングする工程を、さらに包含し得る。別の実施形態において、被験体に初期に投与されるＩＦＮτの量を調節して、経口ＩＦＮτを投与する前に観察された血中ＯＡＳレベルに対して、血中ＯＡＳの測定可能な増加を達成する。
【００１８】
本発明のこれらおよび他の目的および特徴は、以下に詳説される本発明な説明が添付の図面と組み合わせて読まれる場合、より完全に理解されよう。
【００１９】
（配列の簡単な説明）
配列番号１は、ヒツジインターフェロン−τ（ＩＦＮτ）をコードする合成遺伝子のヌクレオチド配列である。
配列番号２は、ヒツジ成体インターフェロン−τ（ＩＦＮτ；ｏＴＰ−１；ＧｅｎＢａｎｋ識別番号Ｙ００２８７；ＰＩＤ ｇ１３５８）のアミノ酸配列に対応する。
配列番号３は、配列番号２の配列に対して、配列のうちの５位および６位のアミノ酸残基が改変されている、ヒツジ成体ＩＦＮτのアミノ酸配列に対応する。
配列番号４は、配列番号３のタンパク質をコードする合成ヌクレオチド配列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
インターフェロン−タウは、ＩＦＮτまたはインターフェロン−τとして略され、以下の二つの群の特徴の各々から、少なくとも１つの特徴的形態を有するインターフェロンタンパク質ファミリーのうちのいずれか一つをいう：（ｉ）（ａ）抗黄体退行特性、（ｂ）抗ウイルス特性、（ｃ）抗細胞増殖特性；および（ｉｉ）α−インターフェロンとの約４５％〜６８％のアミノ酸相同性、および既知のＩＦＮτ配列との７０％を超えるアミノ酸相同性（例えば、Ｏｔｔら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ．，１１：３５７（１９９１）；Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，３：１２７（１９８９）；Ｗｈａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：１０８４６（１９９４）；Ｂａｚｅｒら、ＷＯ９４／１０３１３（１９９４））。アミノ酸相同性は、例えば、デフォルトパラメーターを用いたＬＡＬＩＧＮプログラムを用いて判定することができる。このプログラムは、配列比較プログラムのＦＡＳＴＡバージョン１．７一式に見出される（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、ＰＮＡＳ，８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８３：６３（１９９０）；Ｗｉｌｌｉａｍ Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｏｘ ４４０，Ｊｏｒｄａｎ Ｈａｌｌ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡより入手可能なプログラム）。ＩＦＮτの配列は様々な反芻動物種において同定されており、これには以下が挙げられるが、これらに限定されない：乳牛（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｐ．、Ｈｅｌｍｅｒ Ｓ．Ｄ．、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１１９：５３２（１９８８））、ヒツジ（Ｏｖｉｎｅ ｓｐ．）、ジャコウウシ（Ｏｖｉｂｏｓ ｓｐ．）、キリン（Ｇｉｒａｆｆａ ｓｐ．，ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ５５０５０）、ウマ（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ）、シマウマ（Ｅｑｕｕｓ ｂｕｒｃｈｅｌｌｉ、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ００５０２７）、カバ（Ｈｉｐｐｏｐｏｔａｍｕｓ ｓｐ．）、ゾウ（Ｌｏｘｏｄｏｎｔａ ｓｐ．）、ラマ（Ｌｌａｍａ ｇｌａｍａ）、ヤギ（Ｃａｐｒａ ｓｐ．、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＹ３５７３３６、ＡＹ３５７３３５、ＡＹ３４７３３４、ＡＹ３５７３３３、ＡＹ３５７３３２、ＡＹ３５７３３１、ＡＹ３５７３３０、ＡＹ３５７３２９、ＡＹ３５７３２８、ＡＹ３５７３２７）、およびシカ（Ｃｅｒｖｉｄａｅ ｓｐ．）。これらの種のうち多くのものについてのＩＦＮτのヌクレオチド配列は、公用データベースおよび／または文献（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ．Ｒ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１８：８０５（１９９８）、Ｌｅａｍａｎ Ｄ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ．，１２：１（１９９３）、Ｒｙａｎ，Ａ．Ｍ．ら、Ａｎｉｍ．Ｇｅｎｅｔ．，３４：９（１９９６）を参照のこと）に報告される。用語「インターフェロン−τ」は、任意の反芻動物種（上記で列挙された種により例示される）由来のインターフェロン−τタンパク質を包含するよう意図され、そして上記に列挙された特性のうち、続く２つの群の各々由来の、少なくとも１つの特徴を有するよう意図される。
【００２１】
ヒツジＩＦＮτ（ＩＦＮτ）とは、本明細書中で配列番号２として識別されるアミノ酸配列を有するタンパク質をいい、そしてそのタンパク質の活性には大して影響を与えない中性アミノ酸置換基のようなアミノ酸の置換および変更を有するタンパク質（例えば、本明細書中で配列番号３として識別されるＩＦＮτタンパク質）をいう。より一般的には、ヒツジＩＦＮ−τタンパク質は、配列番号２として識別される配列に対して、約８０％の配列相同性、より好ましくは９０％の配列相同性を有するタンパク質である。
【００２２】
「’Ｘ’単位を超える１日の投薬量」（ここで、’Ｘ’は５×１０８または１．５×１０９のような特定値である）とは、約５×１０８を超える抗ウイルス単位のタンパク質を提供するのに十分なＩＦＮτの量をいい、ここでＩＦＮτの抗ウイルス活性は、標準細胞壊死効果阻害アッセイ（例えば、以下にある「方法」の章にて記載されるアッセイ）を用いて測定される。’Ｘ’単位の特定された１日投薬量を提供するためのタンパク質量（すなわち、ｍｇ）は、そのタンパク質の抗ウイルス比活性によって変化することが、認識される。
【００２３】
ある状態を処置することとは、その状態の症状を低減させること、および／またはその状態の重篤度を減少させることに効果的な治療物質を投与することをいう。
【００２４】
経口とは、口による投与、または胃もしくは小腸への直接投与（消化器（ｇａｓｔｒｉｃ）投与を含む）を含む、任意の経路をいう。
【００２５】
腸とは、胃下口から肛門まで伸びる消化管の部分をいい、小腸（十二指腸、空腸および回腸）および大腸（上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ字結腸および直腸）からなる。
【００２６】
ＯＡＳレベルとは、血中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）タンパク質の濃度あるいは活性をいう。
【００２７】
ＡＬＴとはアラニンアミノトランスフェラーゼをいう。
【００２８】
ＨＣＶとはＣ型肝炎をいう。
【００２９】
「血中ＯＡＳレベルの測定可能な増加」とは、ＯＡＳの血中レベル（血清レベルおよび／または血球レベル）の統計学上有意な増加をいい、代表的には、同一状態下で測定された処理前の濃度より少なくとも２５％の増加をいう。このレベルは検出可能なＯＡＳ酵素の増加によるか、または細胞内（例えば、血中リンパ球内）のＯＡＳ ｍＲＮＡレベルの増加によって、決定され得る。血中のＯＡＳ酵素レベルを測定するための方法は、放射免疫アッセイキットを使用して本明細書中、および文献中に記載される（Ｓａｔｏｈ，Ｙ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１９：８８７（１９９９））。細胞内でのＯＡＳのｍＲＮＡ発現レベルを測定するための方法は、文献にて公知である（Ｔａｋａｙａｍａ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１９：８９５（１９９９））。
【００３０】
（ＩＩ．インターフェロン−τ組成物と治療方法）
（Ａ．インターフェロン−τ）
ヒツジＩＦＮτ（ＩＦＮτ）は、１８〜１９ｋＤａのタンパク質として同定された最初のＩＦＮτである。受胎産物（胚および周辺膜）ホモジネートにおいて、いくつかのアイソフォームが同定された（Ｍａｒｔａｌ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．５６：６３−７３（１９７９））。続いて、受胎産物の培養培地中に放出された低分子量タンパク質が精製され、そしてこれが熱不安定性およびプロテアーゼ感受性の両方であることが示された（Ｇｏｄｋｉｎ，Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．６５：１４１−１５０（１９８２））。ＩＦＮτは、元々、ヒツジ栄養膜タンパク質−１（ｏＴＰ−１）と呼ばれた。なぜなら、このＩＦＮτは、ヒツジにおける母体認識の臨界期の間に、ヒツジ受胎産物の栄養外胚葉によって初期に産生される一次分泌タンパク質であったからである。その後の実験により、ＩＦＮτは、反芻動物（例えば、ヒツジおよびウシ）において、妊娠に対する生理学的応答を確立するのに必須な妊娠認識ホルモンであると決定された（Ｂａｚｅｒ，Ｆ．Ｗ．およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｍ．、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：１９−２２（１９９１））。
【００３１】
Ｎ末端アミノ酸配列（Ｉｍａｋａｗａら、１９８７）を表す合成オリゴヌクレオチドを用いて、ヒツジ胚盤胞ライブラリーを探索することにより取得したＩＦＮτ ｃＤＮＡは、ヒト由来のＩＦＮ−α、マウス由来のＩＦＮ−α、ラット由来のＩＦＮ−αおよびブタ由来のＩＦＮ−αと４５％〜５５％相同性であり、そして現在ＩＦＮ−ΩといわれるウシＩＦＮ−αＩＩと７０％相同性である、予測アミノ酸配列を有する。異なるアイソフォームを表し得るｃＤＮＡ配列がいくつか報告されている（Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｈ．Ｊ．ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２：６５（１９８９）；Ｋｌｅｍａｎｎ，Ｓ．Ｗ．ら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：６７２４（１９９０）；およびＣｈａｒｌｉｅｒ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．７６：１６１−１７１（１９９１））。全てのものは、約１ｋｂであり、２３アミノ酸のリーダー配列および１７２アミノ酸の成熟タンパク質をコードする、５８５ベースのオープンリーディングフレームである。アミノ末端およびカルボキシル末端が同格である、４本のへリックスの１束のようなＩＦＮ−τの予測構造は、Ｉ型ＩＦＮとしての分類をさらに支持する（Ｊａｒｐｅ，Ｍ．Ａ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８６３−８６７（１９９４））。
【００３２】
【数２】
ＩＦＮ−τはＩ型ＩＦＮ（上記の表を参照のこと）に分類上関係するいくつかの活性を示すが、ＩＦＮ−τと他のＩ型ＩＦＮとの間には著しい差異が存在する。最も顕著な差異は妊娠における役割であり、これは上記に具体的に示してある。また、ウイルス誘導性も異なる。ＩＦＮτを除く全てのＩ型ＩＦＮは、ウイルスおよびｄｓＲＮＡによって容易に誘導される（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｒｅｖ．１３：４３２−４５２（１９９２））。誘導されたＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの発現は一過性であり、約２、３時間続く。対照的に、ＩＦＮ−τの合成は、一旦誘発されると数日に渡って維持される（Ｇｏｄｋｉｎら、１９８２）。細胞当たりの基準にすると、他のＩ型ＩＦＮより、３００倍を超えるＩＦＮ−τが産生される（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．およびＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：３８１７−３８２１（１９９１））。
【００３３】
他の差異はＩＦＮτ遺伝子の制御領域に存在し得る。例えば、ウシＩＦＮτに対する遺伝子でのヒト栄養芽細胞株ＪＡＲのトランスフェクションは、抗ウイルス活性を生じ、一方、ウシＩＦＮ−Ω遺伝子でのトランスフェクションではみられなかった。このことは、ＩＦＮτ遺伝子の発現に関係する、独特なトランス作用因子を示唆する。この示唆と、ＩＦＮτの隣接プロモーター領域（１２６番目から転写開始部位まで）はＩＦＮ−αおよびＩＦＮβの隣接プロモーター領域と高い相同性であるが、−１２６〜−４５０番目の領域は相同性ではなく、ＩＦＮτの発現のみを増強する（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．およびＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：３８１７−３８２１（１９９１））という所見が一致する。従って、他のＩ型ＩＦＮと比較して、異なる調節因子がＩＦＮτの発現に関与しているようである。
【００３４】
ヒツジＩＦＮτの１７２アミノ酸配列は、例えば米国特許第５，９５８，４０２号に記載され、そしてこれに相同的なウシＩＦＮτ配列は、例えば、Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３−９１（１９８７）およびＩｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，３：１２７（１９８９）に記載される。これらの参考文献由来のヒツジＩＦＮτ配列およびウシＩＦＮτ配列は、本明細書により参考として援用される。ヒツジＩＦＮτのアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号２として示される。
【００３５】
（１．ＩＦＮτの単離）
ＩＦＮτは妊娠したヒツジから収集した受胎産物から単離され得、そしてＧｏｄｋｉｎ，Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｔｉｌ．６５：１４１−１５０（１９８２）およびＶａｌｌｅｔ，Ｊ．Ｌ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．３７：１３０７（１９８７）により記載される改変最小必要培地中でインビトロで培養され得る。ＩＦＮτはイオン交換クロマトグラフィーおよびゲルろ過により、受胎産物培養物から精製され得る。単離ＩＦＮτの均一性は、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８２）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｄｉａ，ＰＡ（１９８８））によって評価され得、そして精製ＩＦＮτサンプル中のタンパク質濃度の決定は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ；Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０：７６（１９８５））を使用して実施され得る。
【００３６】
（２．ＩＦＮτの組換え産物）
組換えＩＦＮτタンパク質は、適切な発現系（例えば、細菌細胞または酵母細胞）を使用して、任意に選択されたＩＦＮτポリヌクレオチド断片から作製され得る。ＩＦＮτヌクレオチド配列およびポリペプチド配列の単離は、ＰＣＴ公開ＷＯ／９４／１０３１３（これは、本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
【００３７】
ＩＦＮτ発現ベクターを作製するため、ＩＦＮτをコードする配列（例えば、配列番号１または配列番号４）を、発現ベクター（例えば、細菌発現ベクター）中に配置し、そして標準的な方法に従って発現される。適切なベクターの例としては、λｇｔ１１（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）ベクター；ｐＧＥＸ（Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０：７６（１９８５））ベクター；ｐＧＥＭＥＸ（Ｐｒｏｍｅｇａ）ベクター；およびｐＢＳ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）ベクターが挙げられる。また、適切なプロモーター（例えば、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼプロモーターまたはｔａｃプロモーター）を含有する他の細菌発現ベクターも使用され得る。改変ｐＩＮ ＩＩＩ ｏｍｐ−Ａ発現ベクターへのＩＦＮτ合成ポリヌクレオチドのクローニングは、「材料と方法」に記載される。
【００３８】
本明細書中に記載される研究のため、配列番号４に存在するＩＦＮτコード配列を、ベクター中にクローニングした。このベクターは酵母細胞の形質転換に適切であり、メタノール調節性アルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ）プロモーターおよびＰｈｏ１シグナル配列を含有する。このベクターを使用してＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓ宿主細胞を形質転換し、製造業者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の指示書に従い、形質転換細胞を使用してタンパク質を発現させた。
【００３９】
本発明の方法での使用のための、ＩＦＮτの発現に適切な他の酵母ベクターとしては、２μプラスミドベクター（Ｌｕｄｗｉｇ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ，１３２：３３（１９９３））、酵母組込みプラスミド（Ｓｈａｗ，Ｋ．Ｊ．ら、ＤＮＡ，７：１１７（１９８８））、ＹＥＰベクター（Ｓｈｅｎ，Ｌ．Ｐ．ら、Ｓｃｉ．Ｓｉｎ．，２９：８５６（１９８６））、酵母セントロメアプラスミド（ＹＣｐ）、および制御可能な発現を有する他のベクター（Ｈｉｔｚｅｍａｎ，Ｒ．Ａ．ら、米国特許第４，７７５，６２２号（１９８８年１０月４日発行）；Ｒｕｔｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．ら、米国特許第４，７６９，２３８号（１９８８年９月６日発行）；Ｏｅｄａ，Ｋ．ら、米国特許第４，７６６，０６８号（１９８８年８月２３日発行））が挙げられる。好ましくは、これらのベクターは、有効な酵母プロモーター（例えば、ＭＦα１プロモーター（Ｂａｙｎｅ，Ｍ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ ６６：２３５−２４４（１９８８））、ＧＡＤＰＨプロモーター（グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ；Ｗｕ，Ｄ．Ａ．ら、ＤＮＡ，１０：２０１（１９９１））、またはガラクトース誘導性ＧＡＬ１０プロモーター（Ｌｕｄｗｉｇ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ，１３２：３３（１９９３）；Ｆｅｈｅｒ，Ｚ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．，１６：４６１（１９８９）；Ｓｈｅｎ，Ｌ．Ｐ．ら、Ｓｃｉ．Ｓｉｎ．，２９：８５６（１９８６）））を含有する発現カセットを含む。酵母形質転換宿主は、代表的にはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅであるが、上記で例示されるように、形質転換に適した他の酵母（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓなど）も同様に使用され得る。
【００４０】
さらにＩＦＮτポリペプチドをコードするＤＮＡを、多数の市販のベクターにクローニングし、適切な宿主系にてこのポリペプチドの発現を生じさせ得る。これらの系としては、上記の細菌発現系および酵母発現系、ならびに以下が挙げられる：バキュロウイルス（ｂａｃｕｌｌｒｕｓ）発現（Ｒｅｉｌｌｙ，Ｐ．Ｒ．ら、ＢＡＣＵＬＯＶＩＲＵＳ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＶＥＣＴＯＲＳ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，（１９９２）；Ｂｅａｍｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１１：３７８（１９９１）；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）；植物細胞発現、遺伝子組換え植物発現、および哺乳類細胞内での発現（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ；Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ ＭＤ）。この組換えポリペプチドは融合タンパク質あるいは天然タンパク質として発現させ得る。発現ベクター内に、多くの特性（例えば、培養培地中への発現される配列の分泌を促進するリーダー配列）が操作され得る。遺伝子組換えで作製されたポリペプチドは、代表的に、溶解した細胞あるいは培養液から単離される。精製は当分野で公知の方法によって実施され得、この方法は塩分画、イオン交換クロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィーを含む。上記のように、ＩＦＮτポリペプチドに基づいて調製された抗体を用いて、免疫アフィニティークロマトグラフィーが使用され得る。
【００４１】
組換え方法に加えて、ＩＦＮτタンパク質あるいはポリペプチドは、例えば適切な抗体を使用することによる、アフィニティーに基づく方法によって、選択した細胞からを単離され得る。さらに、ＩＦＮτペプチド（例えば、配列番号２あるいは配列番号３）は、当業者に公知の方法を使用して、化学合成され得る。
【００４２】
（Ｂ．ＩＦＮτの経口投与）
本発明の支持として実施された研究において、ＩＦＮ−τがマウスおよびヒトに経口投与され、そして全血中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）（ＩＦＮ活性を認識するマーカー（Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ８：３６６−３７０（１９８８）））の誘導をモニタリングした。ＯＡＳレベルをモニタリングする代替の方法が適切であり、そして精度および感度の点において利点を提供し得ることが認識される。例えば、ＯＡＳの細胞内ｍＲＮＡ発現量が、準定量逆転写酵素ＰＣＴ技術（Ｔａｋａｙａｍａ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１９：８９５（１９９９））を使用して測定され得る。
【００４３】
（１．ＩＦＮτのマウスへの投与）
本発明の支持として実施された研究において、経口投与されたＩＦＮτが、ＯＡＳを誘導する能力について試験した。実施例１に記載されるように、ＩＦＮτを、マウスへ経口投与するかまたは腹腔内（ｉ．ｐ．）投与するかのいずれかを行った。ＩＦＮτ投与の２４時間後に全血のＯＡＳ活性を決定し、そしてこれらの結果を図１に示す。
【００４４】
図１は、１０％マルトースを含む生理食塩水で処置したコントロール動物に関する血中ＯＡＳ濃度（ｐｍｏｌ／ｄＬ）が、わずかに１０００ｐｍｏｌ／ｄＬを超えたことを示す。１０％マルトースを含む生理食塩水溶液中の５×１０８単位のＩＦＮτで腹腔内処置したマウスは、約１７００ｐｍｏｌ／ｄＬの血中ＯＡＳレベルを有した。同じＩＦＮτ投薬量で経口的に処置したマウスは、約２０００ｐｍｏｌ／ｄＬの血中ＯＡＳ濃度を有した。
【００４５】
実施例２にて詳説される別の研究において、ＩＦＮτをマウスに経口投与し、このＩＦＮτが用量依存的にＯＡＳを誘導する能力を決定した。ＩＦＮτを、０単位（コントロール）、１×１０３単位、１×１０４単位、１×１０５単位で、試験マウスにおける胃上部に経口投与した。経口投与の１２時間後、心臓から全血を採取し、そしてＯＡＳ濃度を測定した。図２に示すように、全血中のＯＡＳ濃度は用量依存的に増加した。
【００４６】
実施例３は、マウスで行ったさらなる研究を記載する。これらの研究ではＩＦＮτの投与前に、少なくとも６時間給餌および飲料を断ち、そして経口注入または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によってＩＦＮτを与えた。経口投与する場合、経口摂食ニードルを使用してＩＦＮτを胃上部に直接導入した。
【００４７】
図３は、様々な系統のマウス：ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／９、ＮＺＷ／Ｎ、ＳＪＬ／Ｊにおいて、ＩＦＮτの消化器（ｇａｓｔｒｉｃ）投与が血中ＯＡＳ活性の誘導に及ぼす効果を示す。全ての試験マウスにＩＦＮτ（１０５Ｕ）を経口で処置した。コントロールマウスに、ＩＦＮτを含まない１０％マルトース溶液を経口的に与えた。各々のバーは、２回実施した実験（同様の結果）のうちの１つの実験（マウス３〜５匹）の平均±Ｓ．Ｅ．を表す。図３に見られるように、ＩＦＮτの経口投与後、全ての系統のマウスにおいてＯＡＳ活性のレベルが増加したが、増加の程度は系統により変動した。ＩＣＲマウス、Ｃ５７ＢＬ／９マウスおよびＮＺＷ／Ｎマウスに誘導した活性レベルは、ＢＡＬＢ／ｃマウスおよびＳＪＬ／Ｊマウスにおけるレベルより高かった。
【００４８】
別の研究において、ＩＦＮτの投与後、ＯＡＳ活性を時間の関数としてモニタリングした。この研究では、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）の投与前、動物（ＩＣＲマウス）を６時間絶食させた（水有り餌無し）。ＩＦＮτ投与の８時間後、１６時間後、および２４時間後に血液をサンプリングした。結果を図４Ａに示す。
【００４９】
図４Ａは血中ＯＡＳレベルを示し、ＩＦＮτの投与後に記載した時間の間隔を空けて採取した血液試料における、生理食塩水／１０％マルトースビヒクルで処置したコントロールマウスに対する百分率として表す。図４Ａにおいて、各々のバーは、２回行った実験（同様の結果）のうちの１つの実験（マウス３匹）の平均±Ｓ．Ｅ．を表す。全血中のＯＡＳ活性は、経口注入であれ腹腔内注射であれ、経路に関わらず、時間依存的様式で増加した。しかしながら、経口投与の２４時間後、腹腔内注射よりも高いレベルを観察した。
【００５０】
別の研究において、様々な濃度のＩＦＮτ（０Ｕ、１０２Ｕ、１０３Ｕ、１０４Ｕおよび１０５Ｕ）を、６時間絶食させた後のマウスに与えた。２４時間後に採血し、そしてＯＡＳレベルをアッセイした。結果を図４Ｂに示す。
【００５１】
図４Ｂは血中ＯＡＳ濃度を示し、０Ｕ、１０２Ｕ、１０３Ｕ、１０４Ｕ、および１０５Ｕの濃度でのＩＦＮτの送達の２４時間後の、コントロールマウスに対するパーセンテージとして表している。各バーは、２回行った実験（同様の結果）のうちの１つの実験（マウス３匹）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。腹腔内注射後、低投与量（１０２Ｕ）で活性量は幾分高くなり、より高投与量のＩＦＮ−τ（１０４Ｕおよび１０５Ｕ）で飽和状態に達した。反対に、経口投与後の活性量は、用量に依存して増加した。
【００５２】
図４Ａ〜４Ｂの結果は、経口投与したＩＦＮ−τが、腹腔内注射により誘導されたレベルの血中ＯＡＳ活性も、より高いレベルの血中ＯＡＳ活性を誘導することを示している。特に、ＩＦＮ−τの投薬量が約１０３Ｕを超え、そして投与後の時間が約８時間を超える場合に、経口的に誘導された血中ＯＡＳレベルは腹腔内注射によって誘導されたＯＡＳレベルよりも高かった。
【００５３】
別の研究において、マウスにおいて、ＩＦＮ−τによる血中ＯＡＳ誘導に対する絶食状態の効果を評価した。この研究において、マウスに６時間、規定した給餌給水摂取レジメンに供した。６時間のレジメンの後、１０４ＵのＩＦＮτを、餌および水と共に経口胃管栄養法投与によるか、または腹腔内注射により投与した。摂取レジメンは以下の通りである：ケースＩ、餌も水も与えなかった；ケースＩＩ、水は与えたが餌は与えなかった；ケースＩＩＩ、餌のみを与えた；ケースＩＶ、餌と水の両方を与えた。２４時間目に心臓から全血を採取し、そしてＯＡＳ活性レベルを測定した。これらの結果を図５Ａ〜５Ｄに示す。
【００５４】
図５Ａ〜５Ｄは、それぞれ、上記段落中に規定したケースＩ〜ケースＩＶの給餌給水摂取レジメンに供されたマウスに対応する。図５Ａ〜５Ｄの結果は、インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する、パーセンテージとして表した血中ＯＳＡの誘導を示す。餌を与えなかったマウスを示す図５Ａおよび図５Ｂにおいて最も理解されるように、これらの結果は絶食状態の被験体へのＩＦＮ−τの経口投与によって、より高濃度の血中ＯＡＳが誘導されることを示す。
【００５５】
この研究では、水の供与が有る場合も無い場合も、ほぼ同量の餌が摂取されることが観察された。しかし、餌を与えた場合の水の摂取（ケースＩＩＩおよびケースＩＶ）よりも餌を与えなかった場合の水の摂取（ケースＩおよびケースＩＩ）が少なかった。一部の動物において、６時間の断食後、青色色素を含む０．２ｍＬマルトース溶液を経口的に与え、胃および腸におけるこの色素の分布を調べた（データは示さず）。餌を摂取後（ケースＩＩＩおよびケースＩＶ）、マウスの胃は膨張し、色素は主に胃に局在していた。これは恐らく餌が色素を吸収したためである。しかし、餌を摂取しなかった場合、色素は迅速に腸へ移行する。この所見は、経口摂取されたＩＦＮτは腸内で効果を発揮して、血液中で高いＯＡＳ活性レベルを誘導し得ることを示唆する。
【００５６】
血中ＯＡＳレベルに対するＭｕＩＦＮ−αの経口投与の効果を測定するため、比較研究を行った。この研究では、経口経路または腹腔内経路のいずれかによって、様々な濃度（０ＩＵ、１０２ＩＵ、１０３ＩＵおよび１０４ＩＵ）のＭｕＩＦＮ−αでＩＣＲマウスを処理した。ＭｕＩＦＮ−α投与の１６時間後に得た血中のＯＡＳ活性をアッセイした。これらの結果を図６に示す。ここで、各バーは、２回行った実験（同様の結果であった）のうちの１つ（マウス３匹）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。
【００５７】
図６は、経口的にかまたは腹腔内注射によって与えたＭｕＩＦＮα（０ＩＵ、１０２ＩＵ、１０３ＩＵおよび１０４ＩＵ）投与後の、血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフであり、コントロールマウスに対するパーセンテージとして表す。いずれの投与経路によるものでも、ＯＡＳ活性レベルは用量依存的に増加し、腹腔内注射は経口投与よりも血中ＯＡＳ活性においてより良好な誘導性を生じた。この結果は、ＩＦＮτの腹腔内注射よりもＩＦＮτの経口投与の方がより高い血中ＯＡＳレベルを達成した、ＩＦＮτで観察された結果と相反する。さらに、ＭｕＩＦＮαを投与した場合、マウスの体温はわずかに上昇したが、ＩＦＮτを使用した場合は上昇しなかった（データは示さず）。
【００５８】
図１〜６で提示したデータは、腸管へ投与したＩＦＮτが生体内でＯＡＳ応答を誘導するか、または上方制御するという証拠を示す。ＩＦＮτの経口投与は以前に文献にて報告されているが（例えば、ＷＯ９６／２８１８３を参照のこと）、この非内在性インターフェロンが経口投与の際にＯＡＳ反応を誘導し得ることを示した研究はない。本研究では、ＩＦＮτを口腔粘膜に接触させずに直接腸管内へ投与し、これによって口腔咽頭（ｏｒｏｐｈａｒｅｎｇｙｌ）領域内でのあらゆる吸収を除外した。口腔粘膜を通じて吸収されたＩＦＮτと比較して、ＩＦＮτの胃からの直接吸収は、特にＩＦＮτの長期にわたる投与の場合、ＩＦＮτに対する抗体の形成が減少させる。
【００５９】
（２．Ｃ型肝炎を患うヒトへの投与）
研究のため、Ｃ型肝炎に感染したヒト被験体を集めた。経口的なＩＦＮτ（配列番号４）での処置のため、患者を４つの試験グループに分けた。実施例４に記載したように、試験グループの各被験体は、調節された量のＩＦＮτの１ｍｇ／ｍＬ溶液を毎日３回自己投薬した。試験グループＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの患者は、１日の投与量合計が、それぞれ１ｍｇ、３ｍｇ、９ｍｇ、および１５ｍｇのＩＦＮτを受けた。患者は決められた間隔で臨床試験に戻り、以下についての分析用血液サンプルを提供した：（ｉ）（ａ）血清中および（ｂ）末梢血単核細胞中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベル；（ｉｉ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル；および（ｉｉｉ）ウイルス力価レベル（１ｍＬ当りのＣ型肝炎ウイルスＲＮＡ複製物）。
【００６０】
各テストグループの数人の被験体についての結果を下記の表３〜５に示し、図７〜８に図示する。表３Ａ〜３Ｂは、０．３３ｍｇのＩＦＮτを１日３回経口的に処置した投与グループＩの６人の患者のデータを示す。血清中２−５ＯＡＳレベル（ｐｍｏｌ／ｄＬ）を、「２−５Ａ（血清）」と識別した列に表示する。ＰＡＢ／００１およびＪＲＪ／００６という、２人の被験体は、血中ＯＡＳレベルの増加を示さなかった。他の４人の被験体は、血中ＯＡＳレベルが測定可能に増加され、ＭＳＭ／００２およびＬＥＲ／００４と識別される被験体は著しい増加を示した。被験体ＭＳＭ／００２は、１１．０ｐｍｏｌ／ｄＬの基底ＯＡＳレベルを有した。試験１５日目までに、これは５１．５（４倍を超える）に増加した。被験体Ｚ−Ｉ／００５は、４３．４ｐｍｏｌ／ｄＬの基底ＯＡＳレベルを有した。このＯＡＳレベルを増加させると、試験２９日目までに７４．８ｐｍｏｌ／ｄＬに達した。
【００６１】
表４は、１ｍｇのＩＦＮτを１日３回処置した投与グループＩＩの３人の被験体についてのデータを示す。患者ＡＭＣ／００７および患者ＤＢＦ／０１２はＩＦＮτ処置に応答し、血中ＯＡＳレベルを有意に増加させた。例えば、患者ＡＭＣ／００７は、１１．２ｐｍｏｌ／ｄＬの基底ＯＡＳレベルを有した。このＯＡＳレベルは２９日間の最初の処置にわたって着実に増加し、試験２９日目に最大１２０ｐｍｏｌ／ｄＬを測定した。ＯＡＳレベルは試験の７１日間を通じて、基底濃度の４倍を超えたままであった。患者ＤＢＦ／０１２では、処理前、２８．８ｐｍｏｌ／ｄＬの開始ＯＡＳレベルを有した。このレベルは７１日の処置期間にわたって増加および減少し、１５日目と７１日目に１００ｐｍｏｌ／ｄＬを超える高い測定値であった。８日目から７１日目の間に少なくとも１．５倍の増加が見られた。
【００６２】
表５は、３ｍｇのＩＦＮτで１日３回処置した投与グループＩＩの３人の被験体についてのデータを示す。血中ＯＡＳの基底レベルを研究した日に取った。被験体ＣＬＲ／０１１は、の反応は、血中ＯＡＳレベルの増加に関して、わずかな応答を有した。試験２９日目に、被験体ＨＣＭ／０１０は、血中ＯＡＳレベル濃度の約１．５倍の増加を示し、そして被験体ＶＣＣ／００９は、血中ＯＡＳレベルの４倍以上増加させた。
【００６３】
表３〜５中のデータは、ウイルス性Ｃ型肝炎を患う個人の、経口的ＩＦＮτに対する様々な応答を例示する。多数の患者が血中ＯＡＳレベルを増加させ、代表的には開始基底レベルに対して、血中ＯＡＳの１．５倍増加させ、しばしば２倍増加させ、そして一部の場合、４倍増加させた。各々の患者における応答は多数の要因に依存しており、これらには感染の状態および処置に対する個人の生体応答が挙げられる。
【００６４】
従って、本発明は、処置を必要とする被験体にＩＦＮτを経口投与することを企図し、ここでＩＦＮτの初期用量は、この特定の患者に対して血中ＯＡＳレベルの増加を達成するよう選択される。このＩＦＮτは、患者の腸管を標的とする形態で投与され、口腔ではない。投薬量の選択は、例えば処置前および処置開始後に、例えば血中ＯＡＳレベルまたはＯＡＳのｍＲＮＡレベルをモニタリングすることによって、なされ得るかまたは確認され得る。あるいは、様々な疾患状態下での、所定の投与に対するモデル患者の応答から、有効量を前もって決定し得る。例えば、所定の年齢範囲内であり、特定の状態（例えば、ＨＣＶ感染あるいはＭＳ）を患う患者について、様々な初期ＩＦＮ−τレベルに応答した血中ＯＡＳにおける変化をモニタリングして、この年齢／疾患プロフィールを有する患者についての適切な用量を前もって決定し得る。そしてこのような用量指針を、処置を行う医師に提供し得る。本発明の一局面は、ＩＦＮ−τの腸管への標的化に適した経口送達形態のＩＦＮ−τ（例えば、ＩＦＮ−τの腸溶性コーティングされた形態物）、および様々な患者の状態の下での有効な用量、即ち、ＯＡＳ血中レベルの測定可能な増加を生じるのに有効な用量についての指針を提供する製品情報文献あるいは挿入物を備える、ＩＦＮ−τ治療キットが含まれる。好ましくは、この挿入物は、用量の範囲およびＯＡＳ応答における予期される初期変化を提供する。
【００６５】
初回投与後、あるいは血中ＯＡＳレベルの測定可能な増加を生じる用量（有効用量）に達する場合、有効用量のＩＦＮτの投与を、長期の処置期間の間、好ましくは毎日基準または週に数回の基準で継続する。長期基準で投与される有効用量は、血中ＯＡＳの初期の測定可能な増加を生じるのに有効な用量であり、この継続する有効用量が初期有効量と同じであれ、または異なる場合であれ、長期の処置期間にわたって実際の血中ＯＡＳレベルの挙動とは無関係である。従って、被験体が、血中ＯＡＳレベルの初期の測定可能な増加を生じさせるのに有効な量のＩＦＮτを受け続けても、処置期間中に血中ＯＡＳレベルは上昇したレベルに留まり得るか、増加を続け得るか、または（例えば、感染しているウイルスレベルの減少に応答して）減少すらし得る。この有効用量は代表的には、１日当たり１０５〜１０１０単位の間のＩＦＮτであり、そして所望する血中ＯＡＳの初期増加（例えば、通常の非処置の場合の濃度の１．５倍〜４倍）を達成するよう調整され得る。
【００６６】
図７〜８は、この研究の患者の内の数人についての、ウイルス力価およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルに関するデータを表す。アラニンアミノトランスフェラーゼは、アラニンのγケト基の、ケトグルタラートのγケト基への転移を触媒して、オキザロ酢酸およびピルビン酸の形成を導く血清酵素である。ＡＬＴは本来肝臓内に見出され、そして肝臓疾患（例えば、Ｃ型肝炎）に罹患した被験体は、血中のＡＬＴレベルを上昇させる（ＨＡＲＲＩＳＯＮ’Ｓ ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＯＦ ＩＮＴＥＲＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ，Ｗｉｌｓｏｎら編、第１２版、第９巻、１３０９頁（１９９１））。健常人は、血清ＡＬＴレベル約１〜４５Ｕ／Ｌを有する。図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８ユニット（０．３３ｍｇを１日３回）のＩＦＮτの経口投与後の、投与グループＩの３人の被験体（ＰＡＢ／００１（図７Ａ）、ＭＳＭ／００２（図７Ｂ）およびＤＭＡ／００３（図７Ｃ））のＣ型肝炎（ＨＣＶ）ＲＮＡウイルス力価（影付き棒グラフ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル（ひし形）を示す。患者ＭＳＭ／００２のＡＬＴ濃度および患者ＤＭＡ／００３のＡＬＴ濃度（図７Ｂおよび７Ｃ）は、１６９日の処理期間にわたって連続的に減少した。患者ＰＡＢ／００１（図７Ａ）は、ＡＬＴ血中レベルは、ＩＦＮτ処置の結果、部分的に増加しながらより変動性を示したが、全般的に下降した。
【００６７】
図８Ａ〜８Ｂは、１日当たり１．５×１０９単位（１．０ｍｇを１日３回）の経口的ＩＦＮτで処置した投与グループＩＩの患者ＡＭＣ／００７（図８Ａ）およびＶＣＣ／００９（図８Ｂ）における、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを示す。この２人の被験体の反応は異なり、ＶＣＣ／００９は処置第一週でＡＬＴの初期増加を示し、次いで約８日目から１１３日目までＡＬＴレベルは連続的な下降を示した。
【００６８】
一部の患者および一部の状態に対して他の治療薬と併用したＩＦＮτ投与が企図されることが理解される。例えば、他の公知の肝炎抗ウイルス剤とＩＦＮτとを併用して、一部の患者において有益となり得る。より一般的には、ＩＦＮτと任意の公知の医薬品との併用が企図される。
【００６９】
（３．研究的アレルギー性脳脊髄炎を患うマウスへのＩＦＮτの投与）
自己免疫疾患処置のためのＩＦＮτの経口投与を、多発性硬化症のための認知されるモデルを使用して、別の研究で例証した。この研究では、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ；Ｚａｍｖｉｌ，Ｓ．Ｓ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：５７９−６２１（１９９０））を患うげっ歯類動物（抗原誘導性自己免疫の動物モデル）における応答を評価することによって、一般の自己免疫疾患を処置する際のＩＦＮτの有効性を評価する。ＥＡＥは、臨床的兆候および病理的兆候の両方においてヒト多発性硬化症（ＭＳ）に類似しており、従って、ＭＳのようなヒト自己免疫疾患のための処置を評価するために使用され得る。ＥＡＥは、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）あるいは脳炎誘発性ペプチドフラグメントを用いて、感受性のマウス、ラットまたはモルモットを免疫することによって誘導される、Ｔ細胞媒介性の炎症性自己免疫性脱髄性疾患である。これらのモデル動物の系統における遺伝性の感受性は、脳炎誘発性ペプチドが特定のクラスＩＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣ−ＩＩ）分子に結合する能力に一部基づく（Ｆｒｉｔｚ，Ｒ．Ｂ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０（３）：１０２４−１０２６（１９８３）；Ｗｒａｉｔｈ，Ｄ．Ｃ．ら、Ｃｅｌｌ ５９：２４７（１９８９））。特にＨ−２ｕハプロタイプを持つマウスはＥＡＥに罹りやすい。感受性マウス系統としては、ＰＬ／Ｊマウス（Ｋｌｅｉｎ，Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ １７：５５３（１９８３））、（ＰＬ／Ｊ×ＳＪＬ）Ｆ１マウス（Ｚａｍｖｉｌ．，Ｓ．Ｓ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：５７９−６２１（１９９０）；Ｗｒａｉｔｈら、１９８９）、Ｂ１０．ＰＬマウス（Ｆｉｇｕｅｒｏ，Ｆ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ １５（４）：３９９−４０４（１９８２））、ＮＺＷマウス（Ｋｏｔｚｉｎ，Ｂ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２６５：１２３７（１９８７））、および（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１マウス（Ｋｏｔｚｉｎ，Ｂ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２６５：１２３７（１９８７））が挙げられる。
【００７０】
本発明を支持しておこなわれ、そして以下に詳説される研究は、ＩＦＮτを用いた処置より利益を受ける疾患あるいは疾患状態の処置に関して、経口投与したＩＦＮτ組成物が、注入したＩＦＮτ組成物に匹敵する効力であることを示す。経口投与したＩＦＮτは、ＩＦＮτ処置より利益を受ける疾患（ＥＡＥ）を処置するのに有効であるだけではなく、注入したＩＦＮτ組成物での処置と比較して、経口経路の投与は予期せぬ利点をもたらした。例えば、経口投与したＩＦＮτは、処置された個人の血清中の抗ＩＦＮτ抗体レベルが有意により低くなった。このことは、有益である。なぜなら、経口投与したＩＦＮτが、これにより、宿主の免疫反応によって無効にさせられる（例えば、治療および／または用量レベルに対する脱感作が有意に低下される）可能性がより低く、そして処置を受けた個人は、この免疫応答の結果としての副作用に苦しむ可能性が、より低いからである。
【００７１】
これらの知見および関係する知見を実証する実験結果を以下に提示する。
【００７２】
（ａ．経口投与したＩＦＮτはＥＡＥの発症を抑制する）
実施例５に記載したように、経口投与したＩＦＮτおよび注入したＩＦＮτが、ＥＡＥの誘発を予防する能力に関して試験した。ニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）マウスをウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）で免疫することによって、ＥＡＥを誘発させた。実験的なアレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘発するため、レシピエントＮＺＷマウスに、ウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）で免疫する４８時間前、免疫当日、および免疫の４８時間後に、腹腔内注射または経口摂食のいずれかによってＯｖＩＦＮτを与えた。
【００７３】
ＯｖＩＦＮτの経口摂食および腹腔内注射の双方とも、ＥＡＥに対して防いだ（実施例５、表６）。腹腔内注射によりＩＦＮτを与えた全ての動物、および経口的にＩＦＮτを与えた動物９匹の内７匹において、ＥＡＥの症状より防いだ。さらに、抗ＯｖＩＦＮτモノクローナル抗体ＨＬ１２７は、部分的にＯｖＩＦＮτのＥＡＥをブロックする能力を中和するのに有効であった。これらの研究は、経口投与したＩＦＮτがＥＡＥ（多発性硬化症の動物モデル）の症状を処置するのに有効であることを実証する。
【００７４】
（ｂ．ＯｖＩＦＮτは、経口投与後血清中に存在する）
経口投与したＩＦＮτが循環系に入ることを確認するため、実施例６に記載したように細胞障害作用（抗ウイルス）アッセイ（Ｆａｍｉｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７８：３８７（１９８１））を使用して、腹腔内注射または経口投与によってＩＦＮτを受けたマウスの血清を、ＩＦＮτの存在について試験した。
【００７５】
結果を図９に示す。比活性は、ＭＤＢＫ細胞を使用する抗ウイルスアッセイから得たタンパク質１ｍｇ当たりの抗ウイルス単位で表す。ＯｖＩＦＮτは、２００Ｕ／ｍｌのレベルで、経口摂食（塗りつぶされたバー）後２時間まで検出した。これらのデータは、経口投与したＩＦＮτは循環系に入り、そして投与された後約２時間血清中に残留することを示している。
【００７６】
（ｃ．経口投与したＯｖＩＦＮτ由来の毒性の欠如）
Ｉ型ＩＦＮのＩＦＮαおよびＩＦＮβが、治療薬としてヒトに使用される場合、インフルエンザ様症状、発熱、嘔吐感および倦怠感として表れる毒性副作用を誘発することが以前に示されている（Ｄｅｇｒｅ，Ｍ．、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １４：６９９（１９７４）；Ｆｅｎｔ，Ｋ．およびＧ．Ｚｂｉｎｄｅｎ、Ｔｒｎｄｓ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５６：１−２６（１９８７））。対照的に、ＯｖＩＦＮτは、インビトロおよびインビボの双方で、毒性についての注目すべき欠如を呈する。本発明の支持として行った研究により、経口摂食により与えた場合の、末梢血液中のリンパ球の減少によって測定する、毒性の誘導に関してＯｖＩＦＮτとＩＦＮαおよびＩＦＮβとを比較した。尾から血液を得、血球計算板を使用して白血球細胞（ＷＢＣ）数を計数した。ライト−ギムザ染色した血球スミアに基づいて、差示的なＷＢＣ計数を行った。
【００７７】
結果を表１Ａ、１Ｂおよび１Ｃに示す。ＩＦＮαまたはＩＦＮβのいずれかを摂取したマウスにおいて、著しい毒性レベルを検出したが、１０５Ｕ、２×１０５Ｕもしくは５×１０５ＵのＯｖＩＦＮτ、またはＰＢＳ単独を摂取させたマウスではリンパ球の顕著な減少は検出されなかった。これらの結果は、経口投与したＯｖＩＦＮτは、他のＩ型ＩＦＮに対して毒性がかなり低いことを示唆している。
【００７８】
【表１Ａ】
【００７９】
【表１Ｂ】
【００８０】
【表１Ｃ】
（ｄ．ＯｖＩＦＮτはＥＡＥの慢性再発を抑制する）
ＥＡＥに関係する症状の発生を予防することに加えて、経口投与したＯｖＩＦＮτは、実施例７で詳述するように、ＥＡＥの慢性再発モデルにおいて麻痺を予防する。ＯｖＩＦＮτ処置を受けない、（ＥＡＥを誘発するため）ＭＢＰで免疫したマウス５／５が慢性再発性麻痺を発症したが、ＯｖＩＦＮτ（腹腔内注射あるいは経口摂取のいずれかを４８時間ごとに投与）で処置したマウス４／５では、疾患からが完全に抑制された（図１０Ｂおよび１０Ｃ）。これらのデータは、上記の結果をさらに支持するものであり、そしてＩＦＮτの経口投与が、慢性再発性ＥＡＥの発症をブロックし得ることを示唆する。またこれらの研究は、長期間にわたる４８時間ごとに一回の頻度でのＩＦＮτの経口的投与が、ＩＦＮτによる処置に応答性の疾患状態を処置するのに、腹腔内注射と同程度に有効であることを示唆する。
【００８１】
（ｅ．ＩＦＮτ経口投与後の、ＥＡＥマウス由来の脊髄の組織学的分析）
脊髄白質部のリンパ球病変として中枢神経系（ＣＮＳ）に現れる、ＥＡＥについての細胞性の結果に対するＯｖＩＦＮτ処置の効果を分析することによって、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥを予防する能力を分析した。リンパ球のＣＮＳ内への浸潤の範囲の病変を示す。ＭＢＰ免疫化マウスを、実施例８に記載したように、ＯｖＩＦＮτ処置をしない（コントロール）か、または経口経路もしくは腹腔内経路によるＯｖＩＦＮτ処置するかのいずれかを行い、そして腰部脊髄の切片を染色してリンパ球について評価した。組織切片の顕微鏡写真を図１１Ａ〜１１Ｃに示す。コントロール動物の脊髄白質にリンパ球病変が存在する（図１１Ａ）が、腹腔内注射（図１１Ｂ）によっても経口摂取（図１１Ｃ）によっても、ＯｖＩＦＮτで処置したマウスでは存在しなかった。これらのデータは、ＩＦＮτの保護効果が、リンパ球のＣＮＳへの浸潤抑制に関係することを示す。さらにこれらのデータは、ＩＦＮτ処置が単に症状を覆い隠すのではなく、自己免疫疾患の細胞性発現を抑制することを実証する。
【００８２】
（ｆ．ＯｖＩＦＮτを用いた処置の停止は、再発性麻痺を生じる）
実施例１０は、ＭＢＰを注射したマウスにおいてＥＡＥを予防するのに効果的な処置の形態および持続期間を決定するために行った研究を記載し、そしてその結果を図１３に示す。処置の継続の間（実施例１０では５８日間）、腹腔内注射または経口摂取を介してＯｖＩＦＮτ処理すること（４８時間ごと）によって、このマウスはＥＡＥから保護された。しかし、ＯｖＩＦＮτ処理を停止した後に疾患症状を発症した（図１３）。これらの結果は、ＩＦＮτがＥＡＥ様の自己免疫疾患（例えば、ＭＳ）を治癒することはできないが、処置を継続する限り、このＩＦＮτがその状態の病理的発現を抑制する有効な処置であることを示す。
【００８３】
（ｇ．ＯｖＩＦＮを経口投与は抗ＯｖＩＦＮ抗体を低減させる）
実施例１１で詳述するように、経口投与されるＩＦＮτ処置の１つの利点は（注射に対して）、経口治療を受けた個人における抗ＩＦＮτ抗体力価の低減である。ＯｖＩＦＮτ処置の解除後、各処置グループ由来のマウスから採血し、そして抗ＯｖＩＦＮτ抗体の存在についてＥＬＩＳＡによって血清を調べた。腹腔内注射によりＩＦＮτを受けたマウスは抗ＯｖＩＦＮτ抗体量を上昇させたが、経口摂取によりＩＦＮτを受けた動物は、ずっと低い抗ＩＦＮτ抗体力価（代表的には３分の１〜５分の１）を呈した。予想されたとおり、ＯｖＩＦＮτ処置を受けなかったマウスは抗ＯｖＩＦＮτ抗体を示さなかった。
【００８４】
また、ＯｖＩＦＮτが抗ウイルス活性を中和する能力について、ＭＤＢＫ細胞株を用いて血清を調べた。腹腔内注射したマウスの血清も、経口摂取したマウスの血清も、中和活性を持たなかった（表７）。これらの結果は、ＯｖＩＦＮτの経口摂取は、ＯｖＩＦＮτタンパク質に対する抗体応答を概ね回避することを示唆する。このように、経口処置した被験体において抗体反応が低減することによって、ＩＦＮτ治療についての免疫系関係性の有害な副作用の危険を低減させる。
【００８５】
（ＩＩＩ．使用方法）
第一の局面において、本発明は、インターフェロン治療に応答性の疾患または状態をヒト被験体において処置するための方法を提供する。「インターフェロン治療に応答性」状態とは、その状態の存在、進行または症状が、インターフェロン（特にＩ型インターフェロン、さらに具体的にはＩＦＮ−τ）の投与に基づき変更される状態である。ＩＦＮαまたはＩＦＮβを用いた処置に応答する状態はまた、ＩＦＮτを用いた処置に応答し得る。より好ましくは、インターフェロン治療に応答性の状態は、その状態の存在、進行または症状が、非経口経路（例えば、注射）で投与されたＩＦＮτによって緩和される。本明細中に記載される方法は、被験体の血中ＯＡＳレベルの増加によって証明される、治療に有効な量を、胃および／または小腸への投与のため、経口投与可能な形態でＩＦＮτを提供することを包含する。
【００８６】
ＩＦＮτは、抗ウイルス剤として、抗増殖剤として、および自己免疫疾患の処置において、生物学的活性を持つ（例えば、米国特許第５，９５８，４０２号；同第５，９４２，２２３号；同第６，０６０，４５０号；同第６，３７２，２０６号を参照する。これらは本明細中で参考として援用される）。従って、本発明は、注射により投与した場合にＩＦＮ−τに応答性の任意の状態の処置のための、ＩＦＮτの経口投与を企図する。本発明の方法を使用して処置し得る状態および疾患としては、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、および増殖亢進性疾患、ならびに免疫学的媒介性の疾患が挙げられる。
【００８７】
（Ａ．免疫系障害の処置）
本発明の方法は、免疫系過敏症が関係する状態の処置に有益である。免疫系過敏症には４つの型がある（Ｃｌａｙｍａｎ，Ｃ．Ｂ．編、ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ ＥＮＣＹＣＬＯＰＥＤＩＡ ＯＦ ＭＥＤＩＣＩＮＥ，Ｒａｎｄｏｍ Ｈｏｕｓｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９９１））。Ｉ型過敏症、すなわち即時型過敏症／アナフィラキシー過敏症は、アレルゲン（例えば、花粉等）に応答した肥満細胞の脱顆粒に起因し、そして喘息、アレルギー性鼻炎（枯草熱）、蕁麻疹、アナフィラキーショック、およびアレルギー性質の他の疾病が含まれる。ＩＩ型過敏症、すなわち自己免疫過敏症は、自己体内細胞上での感知された「抗原」に対する抗体に起因する。ＩＩＩ型過敏症は、種々の組織に留まりそしてさらなる免疫応答を活性化し、そして血清疾患、アレルギー性肺胞炎、および追加ワクチン摂取後に時折形成される大腫張のような状態の原因である、抗原／抗体免疫複合体の形成に起因する。ＩＶ型過敏症は、感作したＴ細胞からのリンホカインの放出に起因し、この放出は炎症性反応を生じる。例としては、接触性皮膚炎、麻疹の発疹、および特定の化学物質に対する「アレルギー性」反応が含まれる。
【００８８】
一部の個人において、特定の状態が過敏症を生じる機構は全体的に十分には理解されていないが、遺伝的要因と外部要因との両方が関係している可能性がある。例えば、自己免疫障害に対する遺伝的素質を既に有する個人において、細菌、ウイルスまたは薬物は自己免疫応答を引き起こす役割を果たし得る。一部の型の過敏症の発生率は他のものに関連する場合があると示唆されている。例えば、特定の一般的なアレルギーを有する個人は、自己免疫障害により感受性であると提唱されている。
【００８９】
自己免疫障害は、特定の器官または組織に本質的に限定されるもの、および全身に影響を与えるものに、大まかにグループ分けされ得る。器官特異的障害（および影響を受ける臓器）の例としては、多発性硬化症（神経突起のミエリン被覆）、Ｉ型真性糖尿病（膵臓）、橋本甲状腺炎（甲状腺）、悪性貧血（胃）、アジソン病（副腎）、重症筋無力症（神経筋接合部のアセチルコリンレセプター）、リウマチ様関節炎（関節裏側）、ブドウ膜炎（眼）、乾癬（皮膚）、ギラン−バレー症候群（神経細胞）、およびグレーブス病（甲状腺）が挙げられる。全身性自己免疫疾患としては、全身性紅斑性狼瘡および皮膚筋炎が挙げられる。
【００９０】
過敏性障害の他の例としては、喘息、湿疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、その他湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、鼻炎、扁平苔癬、天疱瘡（Ｐｅｍｐｌｕｇｕｓ）、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、ブドウ膜炎（ｕｒｉｔｃａｒｉｓ）、血管性浮腫、脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）、紅斑、皮膚好酸球増加症、円形脱毛症、アテローム性動脈硬化症、原発胆汁性肝硬変、およびネフローゼ症候群が挙げられる。関係する疾患としては、炎症性腸疾患（例えば、セリアック病、直腸炎、好酸球増加胃腸炎、肥満細胞症、炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎）、および食物関連アレルギーが挙げられる。
【００９１】
本発明の方法を使用した処置に特に感受性の自己免疫疾患としては、多発性硬化症、Ｉ型（インシュリン依存性）真性糖尿病、紅斑性狼瘡、筋萎縮性側索硬化症、クローン病、慢性関節リウマチ、口内炎、喘息、ブドウ膜炎、アレルギー、および乾癬が挙げられる。
【００９２】
本発明の方法を使用して、自己免疫障害（例えば、上記に考察されたもの）を治療的処置を行い、そしてこれによってその自己免疫障害を緩和する。自己免疫障害の処置は、多発性硬化症の動物モデルであるＥＡＥの処置に関して本明細書中に例証される。自己免疫障害を処置するために使用する場合、ＩＦＮτは、ＩＦＮτ投与の初期の間にＯＡＳの測定可能な増加を達成するのに十分な用量で投与される。一旦、所望する有効用量が達成されると、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化に関係なく、長期にわたって有効量のＩＦＮτで患者を処置する。処置期間は、少なくとも患者が症候性である期間にわたる。自己免疫状態に関連する症状が停止したら、投薬量を調整して下げ得るか、または処置を停止し得る。ＩＦＮτの処置期間中、患者は、他の薬剤（例えば、公知の抗炎症剤または免疫抑制剤）と共に同時処置され得る。
【００９３】
（Ｂ．ウイルス感染の処置）
また本発明の方法を使用して、ウイルス感染が関係する状態を処置する。ＩＦＮτの抗ウイルス活性は、ＩＦＮαが通常関係する毒性効果を伴うことなく幅広い治療的適用を有しており、そしてＩＦＮτは細胞に対する有害な効果を伴わずにその治療活性を発揮する。ＩＦＮτが細胞毒性を比較的持たないことは、インビボ治療薬剤としてこのＩＦＮτを非常に高く価値付け、そして大半の他の公知の抗ウイルス剤および他の全ての公知のインターフェロンから、ＩＦＮτを区別させる。
【００９４】
ウイルス複製を抑制するため、ＩＦＮτを含有する処方物を経口投与し得る。ウイルス感染を処置する使用のため、このタンパク質を、患者の血中ＯＡＳにおける測定可能な増加を達成するのに十分な用量で投与する。その後、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化（例えば、ウイルス負荷の低減に起因した血中ＯＡＳレベルの下降）とは無関係に、処置を有効用量で継続する。ＩＦＮτの投与を、ウイルス感染レベル（例えば、血中ウイルス力価あるいはウイルス感染に伴う症状の臨床的観察等から測定される）が低下するまで継続する。経口投与されるＩＦＮτによって処置し得る特定のウイルス疾患の例としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、非Ａ型肝炎、非Ｂ型肝炎、非Ｃ型肝炎、エプスタイン−バーウイルス感染、ＨＩＶ感染、ヘルペスウイルス（ＥＢ、ＣＭＬ、単純ヘルペス）、乳頭腫、ポックスウイルス、ピコルナウイルス、アデノウイルス、リノウイルス、ＨＴＬＶ Ｉ、ＨＴＬＶ ＩＩ、およびヒトロタウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。この治療期間の間、患者は、第二の抗ウイルス剤（例えば、ヌクレオチド類似体、アンチセンス薬剤など）と共に同時処置され得る。
【００９５】
（Ｃ．細胞増殖状態を処置するための方法）
別の実施形態において、本発明の方法は、過増殖によって特徴づけられる状態を治療するために企図される。ＩＦＮτは強力な抗細胞増殖活性を呈する。従って、調節されない細胞増殖を阻害、予防、あるいは遅延させるため、ＩＦＮτを経口投与することにより細胞増殖を阻害する方法が企図される。
【００９６】
ＩＦＮτを経口投与することによって処置され得る、特定の細胞増殖障害の例としては、ヘアリーセル白血病、カポジ肉腫、慢性骨髄白血病、多発性骨髄腫、表在性膀胱癌、皮膚癌（基底細胞癌腫および悪性黒色腫）、腎細胞癌腫、卵巣癌、軽度リンパ球性リンパ腫および皮膚性Ｔ細胞リンパ腫、ならびに神経膠腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
細胞増殖状態を処置する使用のため、ＩＦＮτは、患者の血中ＯＡＳについの初期の測定可能な増加を達成するのに十分な用量で投与される。その後処置は、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化（例えば、体内の癌細胞の減少によるＯＡＳ血中レベルの下降）に関係なく、有効投与量で継続される。有効用量でのＩＦＮτの投与は、例えば、特定の組織における腫瘍の大きさまたは癌細胞の広がりによって測定される場合、所望する緩解レベルが観察されるまで継続される。この治療期間の間、患者は、第二の抗癌剤（例えば、シスプラチン、ドキソルビシン、またはタキソール）と共に同時処置され得る。
【００９８】
（Ｄ．組成物と投与量）
ＩＦＮτを含有する経口調製物は、薬学的組成物を調製するための公知の方法に従って処方され得る。一般に、ＩＦＮτ治療組成物は、この組成物の効果的な経口投与を容易にするため、有効投与量のＩＦＮτが、適切な添加剤、担体および／または賦形剤と混ぜられるように処方される。例えば、ＩＦＮτを含む錠剤およびカプセルは、薬学的に受容可能な担体（例えば、乳糖、コーンスターチ、微結晶セルロース、シュークロース）、結合剤（例えば、澱粉アルファ体、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン）、崩壊剤（例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム、デンプン、低度に置換されたヒドロキシプロピルセルロース）、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体）、酸化防止剤（例えば、Ｌ−システイン、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム）、および滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク）のような添加物とＩＦＮτ（例えば、凍結乾燥ＩＦＮτ）を組み合わせることによって調製され得る。
【００９９】
さらに本発明のＩＦＮτポリペプチドは、固形、粉状あるいはその他の担体（例えば、乳糖、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、ポテトデンプンおよびコーンスターチのようなデンプン、ミロペクチン（ｍｉｌｌｏｐｅｃｔｉｎｅ）、セルロース誘導体、またはゼラチン）と混合され得、そしてまた、錠剤形成に対して圧縮される、滑沢剤（例えば、マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム）、またはポリエチレングリコールのワックスを包含し得る。数層の担体または稀釈剤を用いることによって、徐放性に作動する錠剤を調製し得る。
【０１００】
経口投与のための液体調製物（例えば、約０．１〜約３０重量％のＩＦＮτ、糖、ならびにエタノール、水、グリセロール、プロピレン、グリコールおよび一般的な性質の他の可能性のある添加剤からなる混合物を含有する溶液）は、エリキシル、シロップ、あるいは懸濁液の形態で作製され得る。
【０１０１】
別の適切な処方物は、腸粘膜によって吸収されるまで胃および腸内で存続するようこのタンパク質を保護する、被包薬型投薬形態である。タンパク質のための被包薬型投薬形態は当分野で公知であり、そしてこれには、腸溶コーティングおよび／または粘膜接着性ポリマーコーティングが挙げられる。粘膜接着性ポリマー処方物の例示としては、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、カルボキシビニルポリマー、カルボマー等が挙げられる。ＩＦＮτの活性形態での腸管（特に小腸）への送達のため、経口摂取を介した胃への投与のために設計された投与形態が、企図される。あるいは、ＩＦＮτは、胃環境および／または腸環境に対する多少の保護作用を提供するために、高分子物質で安定化させるかまたは脂質もしくポリマー粒子でカプセル化したプロテアーゼインヒビターと共に同時投与され得る。
【０１０２】
経口活性ＩＦＮτ薬学的組成物は治療的有効量で処置を必要とする個体に投与される。投用量は著しく変動し得、障害の重篤度、患者の年齢および体重、その患者が受けている他の医学的処置などの要因に依存する。代表的には担当医がこの用量または投薬量を決定する。投薬量は代表的には約１×１０４単位／日〜１×１０１０単位／日の間となり、より好ましくは約５×１０８単位／日を超え、約１×１０９単位／日を超えることが好ましい。
【０１０３】
血漿中のＩＦＮτレベルが安定して上昇することが必要とされる疾患は、約２〜４時間ごとくらいの投与が有益となり、他の疾患（例えば、多発性硬化症）は、例えば、１日１回あるいは４８時間ごとに１回のより少ない頻度間隔で治療的有効用量を投与することによって効果的に処置され得る。個々の用量の投与割合は、代表的には、処置される疾患の重篤度を緩和しながら最低総投薬量の投与を可能とするよう担当医によって調整される。上記に考察されるように、この方法は、処置を必要とする患者に、第一の用量でＩＦＮτを経口投与し、この第一の投薬レベルに対する個々の被験体の応答を決定するための生物学的マーカーをモニタリングすることを企図する。モニタリングは血液採取およびマーカー（例えば、血液中のＯＡＳ酵素）の分析（例えば、放射免疫アッセイキットを使用して）を介して容易に行われ得る。また、モニタリングは、血液採取および細胞（例えば、血中リンパ球）中のＯＡＳ ｍＲＮＡ発現量の分析を介して行われ得る。従って、別の局面において、本発明は、ＩＦＮτに応答性の状態を患う者を処置する際に使用するためのキットを企図する。このキットは、ＩＦＮτ経口投与のために設計された１回以上の投薬量形態単位を収容する容器からなる第一部分、および、生物性マーカーをモニタリングするのに必要とされる構成要素（例えば、ＩＦＮτの血中ＯＡＳ酵素またはｍＲＮＡレベルを分析するのに必要とされる構成要素）からなる第二部分、を備える。
【０１０４】
一旦、患者の状態の改善が生じると、必要に応じて維持用量が投与される。続いて、投薬量もしくは投与の頻度、またはその両方を、症状の関数として、改善された状態が維持されるレベルに低減され得る。
【０１０５】
当然ながら、本発明に従ったＩＦＮτの経口投与は、他の治療と併用して使用され得るが、理解される。例えば、ＩＦＮτは、、自己免疫応答が指向される抗原の投与を付随され得る。例としては、多発性硬化症を処置するためのミエリン塩基性タンパク質とＩＦＮτとの共投与；慢性関節リウマチを処置するためのコラーゲンとＩＦＮτとの共投与、および重症筋無力症を処置するためのアセチルコリンレセプターポリペプチドとＩＦＮτとの共投与、が挙げられる。
【０１０６】
さらに、多発性硬化症のような自己免疫疾患を治療するために、公知の免疫抑制剤（例えば、ステロイド）と共に、ＩＦＮτは経口投与され得る。これら免疫抑制剤は、ＩＦＮτと共同的に作用し得、そしてＩＦＮτ単独または免疫抑制剤単独の等価用量で得られ得る処置効果よりも、より大きな処置効果をもたらし得る。
【０１０７】
同様に癌あるいはウイルス疾患に対する処置において、、えば、治療的有効量の１つ以上の化学治療薬（例えば、ブスルファン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ジドブジン（ＡＺＴ）、ロイコボリン、メルファラン、プレドニゾン、シクロホスファミド、ダカルバジン、シスプラチン、ジピリダモールなど）と併用して、ＩＦＮτが投与され得る。
【実施例】
【０１０８】
（ＩＶ．実施例）
以下の実施例は、本明細書中に記載される本発明をさらに例示するものであって、本発明の範囲を限定することは決して意図されない。
【０１０９】
（材料と方法）
（Ａ．ＩＦＮτの作製）
一実施形態において、標準分子学的方法（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９８８）を用いて、ＩＦＮτアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列の連続部分を含有するオリゴヌクレオチドを連結させることによって、合成ＩＦＮτ遺伝子を作製した。使用したＤＮＡ配列は配列番号１もしくは配列番号４、またはＩｍａｋａｗａら、１９８７で示されている配列のいずれかであり得る。得られたＩＦＮτポリヌクレオチドをコードする配列は、１６位〜５３１位にまたがり得、１７２アミノ酸のコーディング配列である。
【０１１０】
一実施形態において、完全長の合成遺伝子ＳｔｕＩ／ＳＳｔｌフラグメント（５４０ｂｐ）を改変ｐＩＮ ＩＩＩ ｏｍｐ−Ａ発現ベクター中にクローニングし得、そしてＥ．ｃｏｌｉのコンピテントなＳＢ２２１株を形質転換し得る。ＩＦＮτタンパク質発現のため、発現ベクターを保有する細胞を、アンピシリンを含有するＬブロスでＯＤ（５５０ｎｍ）０．１〜１に増殖させ、ＩＰＴＧ（イソプロピル−１−チオ−ｂ−Ｄ−ガラクトシド）で３時間誘導し、そして遠心分離によって収集した。超音波処理あるいは浸透分画によって、可溶性の組換えＩＦＮτを細胞から遊離させ得る。
【０１１１】
酵母での発現のため、ＳｔｕＩ制限部位およびＳａｃＩ制限部位をそれぞれ５’末端および３’末端に含有するＰＣＲプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂ．、１９８７年７月２８日発行の米国特許第４，６８３，２０２号、Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂ．ら、１９８７年７月２８日発行の米国特許第４，６８３，１９５号）を用いて、ＩＦＮ−τ遺伝子を増幅し得る。増幅した断片をＳｔｕＩおよびＳａｃＩＩで消化し、そしてｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ＋（ＫＳ）のＳａｃＩＩ部位およびＳｍａＩ部位にライゲーションして、ｐＢＳＹ−ＩＦＮτを作製した。プラスミドｐＢＳＹ−ＩＦＮτをＳａｃＩＩおよびＥｃｏＲＶで消化し、そして合成ＩＦＮ−τ遺伝子を含有するフラグメントを単離した。酵母発現ベクターｐＢＳ２４Ｕｂ（Ｅｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：７７１５−７７１９（１９８９））をＳａｌＩで消化した。Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼを使用して平滑末端を調製した。このベクターＤＮＡをフェノールで抽出し、そしてエタノール沈殿した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））。回収したプラスミドをＳａｃＩＩで消化し、アガロース電気泳動によって精製し、そしてｐＢＳＹ−ＩＦＮ−τから単離したＳａｃＩＩ−ＥｃｏＲＶフラグメントにライゲーションした。得られた組換えプラスミドをｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτと名付けた。
【０１１２】
組換えプラスミドｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτをＥ．ｃｏｌｉに形質転換した。ＩＦＮ−τ挿入部を含有する組換えクローンを単離し、そして制限酵素分析によって同定した。ＩＦＮ−τをコードする配列をｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮ−τから単離し、そしてアルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ１）プロモーターを含有するＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）中にクローニングした。次にこのベクターを使用してＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ＧＳ１１５ Ｈｉｓ−宿主細胞を形質転換し、そして製造者の指示書に従ってタンパク質を発現させた。タンパク質は培地中に分泌され、そして連続したＤＥＡＥセルロースカラムクロマトグラフィーおよびヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーによって、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび銀染色によって決定する場合に電気泳動的に均一へと精製した。
【０１１３】
（Ｂ．抗ウイルス比活性を決定するための抗ウイルスアッセイ）
標準的な細胞変性効果アッセイ（Ｆａｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，７８：３８７−３９４（１９８１）；Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，３７：７５５−７５８（１９８１））を用いて抗ウイルス活性を測定した。概略を述べると、ＩＦＮτ稀釈物をＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙウシ腎（ＭＤＢＫ）細胞と共に３７℃で１６〜１８時間インキュベートした。インキュベーション後、攻撃物として水疱性口内炎ウイルスを使用する細胞変性効果アッセイにて、ウイルス複製の抑制を決定した。１抗ウイルス単位（Ｕ）は、単層破壊を５０％減少させた。本明細書中に記載される研究の大半で、ＩＦＮτは、１ｍｇタンパク質あたり約４．９×１０８抗ウイルス単位という比活性を有していた。
【０１１４】
（実施例１）
（マウスに経口投与および腹腔内投与したヒツジＩＦＮτを用いたＯＡＳの誘導）
ＩＦＮτ（１ｍｇタンパク質あたり４．９９×１０８単位；Ｐｅｐｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、またはＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｆａｃｉｌｉｔｙ，Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＮＥ−Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ；配列番号４）を１０％マルトース溶液に溶解して、ＩＦＮτ溶液を調製した。本発明ではＩＦＮτ（配列番号２）の使用も企図する。２００μｌのＩＦＮτ溶液を、２０ゲージのディスポーザブル経口ゾンデ（Ｆｕｃｈｉｇａｍｉ，Ｋｙｏｔｏ）を使用してＩＣＲマウス（平均体重約３０ｇ、６週齢、メス）に経口投与し、胃の上部へ直接注入した（消化器投与；ＧＡ）。
【０１１５】
腹腔内投与（ｉ．ｐ．）には、１００μｌのＩＦＮτ溶液を使用した。胃の上部へのサンプルの注入を、色素を投与することによって確認した。投与して２４時間後に、このマウスをネンブタールで麻酔した。このマウスの心臓から血液を採取し、そして２−５Ａ ＲＩＡキット（Ｅｉｋｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｔｏｋｙｏ；Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，９：７１５−７１９（１９８９））によって全血中のＯＡＳ活性を決定した。
【０１１６】
これらの結果を図１に示す。
【０１１７】
（実施例２）
（マウスへのＩＦＮτ経口投与による、用量依存的ＯＡＳ誘導）
実施例１と同じ手順を用いて、０単位、１０３単位、１０４単位、または１０５単位のＩＦＮτをＩＣＲマウスに経口投与した。経口投与して２４時間後に、このマウスの心臓から全血を採取し、全血中のＯＡＳ活性を決定した。これらの結果を図２に示す。
【０１１８】
（実施例３）
（マウスへのＩＦＮτ投与）
病原体を持たない５週齢メスのＩＣＲ系統マウス、ＢＡＬＢ／ｃ系統マウス、Ｃ５７ＢＬ／９系統マウス、ＮＺＷ／Ｎ系統マウス、およびＳＪＬ／Ｊ系統マウスを、Ｊａｐａｎ ＳＬＣ．Ｉｎｃ．，Ｈａｍａｍａｔｓｕから購入した。これらのマウスは実験前１週間、研究室にて飼育した。
【０１１９】
本明細書中に配列番号３と同定される配列を有する組換えヒツジＩＦＮ−τ（ＩＦＮ−」τ）を入手した（Ｐｅｐｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）。この研究で使用した調製物は、ＶＳＶを用いてチャレンジしたＭＤＢＫ細胞において分析し、そしてヒトＩＦＮ−αに対して標準化した場合、１ｍｇタンパク質あたり５×１０８単位（Ｕ）の比活性を有した。天然のマウスＩＦＮ−α（ＭｕＩＦＮ−α）をＳｕｍｉｔｏｍｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）から調達し、その比活性は１ｍｇタンパク質あたり１×１０８国際単位（ＩＵ）であった。
【０１２０】
マウスへの投与のため、ＩＦＮ−τを、１０％マルトースを含有する溶液に溶解した。経口（ｐ．ｏ．）処置または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射のいずれかによって、０．２ｍｌのサンプルをマウス（６週齢メス）に投与した。経口的に与える場合、２０ゲージ経口摂取用ニードルを用いて、サンプルを直接胃の上部へ導入した。投与の前に６時間（午後１時に始めて午後７時に終了した）、マウスから食餌と飲料の両方を絶った。絶食の後、経口経路または腹腔内経路のいずれかによってＩＦＮτを投与し、６時間目に食餌と飲料を与えた。次いで２４時間目に心臓から全血を採取した。
【０１２１】
Ｅｉｋｅｎの２−５Ａ ＲＩＡキットを用いて、全血中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）活性を測定した。稀釈した血液をポリＩ：Ｃ−アガロースゲルと混合し、ゲルを洗浄後ＡＴＰを加えた。そして産生した２−５ＡをＲＩＡ法（Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，９：７１５−７１９（１９８９））によってアッセイした。このアッセイは各試料につき２回行った。血中ＯＡＳレベル評価のため、少なくとも３匹のマウスを使用した。
【０１２２】
（実施例４）
（ヒト被験体におけるＩＦＮ−τの経口投与によるＡＬＴの減少、ＨＣＶウイルス力価の減少、およびＯＡＳ誘導）
（Ａ．ＩＦＮ−τの調製）
１日目に、冷蔵庫からＩＦＮτ（配列番号４）を１ビン取り出し、被験体は表２に従って正しい量の試験物質を自己投薬した。また、ＩＦＮτ（配列番号２）を調製して同様の様式で投与し得る。
【０１２３】
【表２】
（Ｂ．患者の投薬指示）
試験物質のバイアルおよび注射器は全て、２℃から８℃に維持した冷蔵庫内に保管した。医薬品を自己投薬する前に、患者はバイアル１つおよび注射器１つ冷蔵庫から取り出した。注射器先端のキャップをはずし、この注射器先端を医薬品容器内に入れ、臨床第１日目に指示された適切な容量を注射器内に吸い取った。
【０１２４】
注射器先端を口の中へ入れ、プランジャーを押して口内へと注射器内容物を空にした。次に被験体は試験物質を飲み込んだ。所望の場合、患者はグラス１杯の水を飲むことが許可された。患者は自分の日誌カードに、１用量の試験物質を投与した日付および時間を記入した。
【０１２５】
上記手順を１日３回、約８時間間隔（朝に１回、昼に１回そして晩に１回）で繰り返した。
【０１２６】
（Ｃ．結果）
１６９日の試験期間に渡って、規定の間隔で血液サンプルを採取した。２−５Ａ ＲＩＡキット（Ｅｉｋｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｔｏｋｙｏ）を使用して、このサンプルを、血清中および末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルについて分析した。稀釈した血液をポリＩ：Ｃ−アガロースゲルと共に混合し、ゲルを洗浄後ＡＴＰを加え、ＲＩＡ法（Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，９：７１５−７１９（１９８９））によって、産生した２−５Ａを測定した。このアッセイは各試料につき２回行った。また、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を用いてＣ型肝炎ウイルスの力価も測定し、そしてアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清中濃度も測定した。
【０１２７】
各被験体についての結果を以下の表３〜５に示し、図７〜８にグラフ表示する。ヒツジＩＦＮ−τの経口投与後、ＯＡＳレベルの上昇と、ＡＬＴおよびウイルス力価の減少とを観察した。
【０１２８】
【表３Ａ】
【０１２９】
【表３Ｂ】
【０１３０】
【表４】
【０１３１】
【表５】
。
【０１３２】
（実施例５）
（経口投与したＯｖＩＦＮτは実験的アレルギー性脳脊髄炎の発症をブロックする）
レシピエントのニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）マウスに、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）誘発のためにウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）で免疫する４８時間前、免疫した当日、および免疫した４８時間後に、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによってＯｖＩＦＮτ（１０５Ｕ／ｍｌ）を与えた。１０５ＵのＩＦＮτをＰＢＳと混合して全量を１００μＬとし、食道を下降して胃内部に配置した給餌チューブを使用して投与した。ＩＦＮτのリン酸緩衝化生理食塩水への稀釈は、投与の直前に行った。
【０１３３】
ＮＺＷマウスにおけるＥＡＥ誘発のため、３００μｇのウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）を、８ｍｇ／ｍＬのＨ３７Ｒａ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，Ｄｉｆｃｏ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）を含有する完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に乳化し、そして尾の根元の一方の側に注射した。また、免疫した当日および４８時間後に、４００ｎｇの百日咳毒素（Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ＣＡ）も注射した。ＳＪＬ／ＪマウスのＥＡＥ誘発には、初回免疫後７日目に再免疫する点を除いて、同じプロトコルを記載したように用いた。ＥＡＥの兆候についてマウスを毎日調べ、疾患の重篤度を次の尺度に基づいて程度分けした。：
【０１３４】
【数３】
ＥＡＥの予防がＯｖＩＦＮτ処置に特異的であるかのどうかを決定するため、抗ＯｖＩＦＮτモノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ＨＬ１２７）を使用して、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥを妨げる能力を中和した（ＨＬ１２７抗体、配列番号２の１３９〜１７２番目のアミノ酸配列に対する抗体、ＭＤＢＫ細胞系を使用した抗ウイルスアッセイにおいてＯｖＩＦＮτの抗ウイルス活性を中和する）。腹腔内注射または経口摂取のいずれかによる投与前に、ＨＬ１２７の１：１０稀釈物をＯｖＩＦＮτと共に２時間インキュベートした。ＩＦＮτ抗原に対する抗体を、本明細書中の情報を抗体産生のための公知技術（例えば、Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ら、ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：Ａ ＬＡＢＰＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８８））と組み合わせて使用して、調製し得る。
【０１３５】
結果を以下の表６に示す。ＩＦＮτの経口摂取と腹腔内注射のいずれもＥＡＥの急性誘発に対して防御した。腹腔内注射経由でＩＦＮτを与えた動物でＥＡＥの症状を発症するものは無かったが、ＯｖＩＦＮτを経口的に与えた動物に関しては、９匹中７匹（７８％）を防御した。抗ＯｖＩＦＮτ抗体ＨＬ１２７は、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥをブロックする能力を部分的に中和するのに有効であった。これらのデータは、多発性硬化症の動物モデルにおいて、経口投与したＩＦＮτが処置として有効であることを示す。
【０１３６】
【表６】
（実施例６）
（経口投与後の血清中のＯｖＩＦＮτの検出）
ＯｖＩＦＮτの経口摂取または腹腔内注射の後、マウス（上記のように処置した）の血清中に検出可能なＯｖＩＦＮτ量を時間経過とともに比較した。マウスに３×１０５ＵのＯｖＩＦＮτを投与し、ＩＦＮτ投与の０．５時間後、２時間後、４時間後、６時間後、２４時間後および４８時間後に採血した。サンプル中のＩＦＮτ量を決定するため、細胞変性効果（ウイルスプラーク）アッセイ（Ｆａｍｉｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７８：３８７（１９８１））において血清を試験した。
【０１３７】
概略を述べると、平底９６ウェルプレート内でコンフルエントまで増殖させたＭＤＢＫ細胞にＩＦＮτ稀釈物を加え、３７℃で１８〜２４時間培養した。室温で４５分間、このプレートに水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を加えた。ウイルスを除去し、メチルセルロースを加え、このプレートを３７℃で４８時間インキュベートした。メチルセルロースを除去後、プラークの視認化のため、プレートをクリスタルバイオレットで染色した。ＩＦＮの中和作用を測定するため、５００Ｕ／ｍＬ濃度のＯｖＩＦＮτを血清またはＨＬ１２７（ＯｖＩＦＮτに特異的なモノクローナル抗体）のいずれかと共に３７℃で１時間インキュベートした。１抗ウイルス単位は、ＶＳＶに感染させた未処理ＭＤＢＫ細胞（コントロールプレート）と比較して単層の破壊が５０％減少させた。アッセイ間の差異を除くため、全てのサンプルを同時にアッセイした。
【０１３８】
図９で示したように、経口摂取（塗りつぶされたバー）して０．５時間後および２時間後に、２００Ｕ／ｍＬのレベルでＯｖＩＦＮτを検出した。比較すると、腹腔内注射（白抜きのバー）後、２４時間にわたって幾分より高いレベルのＯｖＩＦＮτを検出した。これらのデータは、上記用量のＩＦＮτを、経口投与後約２時間、血清中にて検出し得ることを示す。
【０１３９】
（実施例７）
（ＯｖＩＦＮτの経口的投与による、実験的アレルギー性脳脊髄炎の慢性再発の予防）
ＥＡＥの慢性再発モデルを使用して、ＯｖＩＦＮτが麻痺を予防する能力を試験した。ここで、ＭＢＰで免疫したＳＪＬマウスは、再発緩和化様式で症状の出現が起る慢性型疾患を発症する（Ｚａｍｖｉｌ，Ｓ．Ｓ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：５７８−６２１（１９９０））。
【０１４０】
上記のように、ＳＪＬマウスでは基本的にＥＡＥが誘発された。このマウスを、免疫当日（０日目）およびその後の実験期間中４８時間ごとに、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによって、１０５ＵのＩＦＮτで処置した。結果を図１０Ａに示す。ＭＢＰで免疫したがＩＦＮτ処置を受けなかったＳＪＬマウスは、発病率５／５で慢性再発性麻痺を発症し、最大平均重篤度約２．５は、実験開始後１４日目に生じた。対照的に、腹腔内注射または経口摂取のいずれか（それぞれ、図１０Ｂ、図１０Ｃ）によるＯｖＩＦＮτでの処置は、ＥＡＥからの防御を生じた。両方のＩＦＮτ処置グループの発症率は、１匹／５匹に減少し、平均重篤度約１．０であった。これらのデータは、ＩＦＮτの経口投与が慢性再発性ＥＡＥの発症をブロックし得ることを示し、そして延長した期間にわたって約４８時間ごとにＩＦＮτを摂取させた場合、経口投与したＩＦＮτが腹腔内注射と同程度に有効であり得ることを示す。
【０１４１】
（実施例８）
（組織学的分析）
経口経路および腹腔内経路によってＯｖＩＦＮτで処置したＭＢＰ免疫マウスのＣＮＳ内に、リンパ球が浸潤する程度を判定するため、組織学的分析を行った。
【０１４２】
４％パラホルムアルデヒドでマウスを灌流し、脊柱を取り出して２〜３日間ホルマリンで処理した。脊髄を解剖して取り出し、０．５％のシュクロースに４℃で一晩浸漬した。脊髄切片を包埋し、ミクロトームで切片をカットした。４％パラホルムアルデヒド中に切片をスライドガラスに固定し、炎症性浸潤が目視できるようにクレージルバイオレットで染色した。
【０１４３】
結果を最終倍率２２２×で図１１Ａ〜１１Ｃに示す。コントロール脊髄の白質にリンパ性病変が存在した（図１１Ａ）。対照的に、腹腔内注射（図１１Ｂ）あるいは経口摂取（図１１Ｃ）によってＯｖＩＦＮτで処置したマウスにおいて、リンパ球浸潤を検出しなかった。これらのデータは、ＩＦＮτの防御効果がＣＮＳのリンパ球浸潤抑制に関係することを示す。
【０１４４】
（実施例９）
（ＯｖＩＦＮτ処置によるＩＬ−１０の誘導）
慢性再発性ＥＡＥの予防のためにＳＪＬをＯｖＩＦＮτ処置する過程の間に、マウスから採血し、そしてインターロイキン１０（ＩＬ−１０）の存在について血清を調べた。製造者の指示書に従ってＩＬ−１０ ＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を使用する固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）によって、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）を１回処置した（腹腔内注射または経口摂取によって）マウス、長期間ＩＦＮτ（１０５Ｕ）処置したマウス（腹腔内注射または経口摂取によって２０日を超える間）、または未処置マウスのいずれかに由来する血清を、ＩＬ−１０について試験した。全血清サンプルは２つ組で試験した。
【０１４５】
細胞増殖状態を処置する使用のため、患者における血中ＯＡＳの測定可能な初期増加を達成するのに十分な用量で、ＩＦＮτを投与する。その後、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化（例えば、体内の癌細胞の減少に起因してＯＡＳ血中レベルの下降）に関係なく、有効用量で処置を継続する。所望のレベルの退縮が認められるまで有効用量でのＩＦＮτの投与を継続する。この退縮は、例えば、特定の組織における腫瘍の大きさ、または癌細胞の広がりによって測定する。この治療期間中に、患者に、第二の抗癌剤（例えば、シスプラチン、ドクソルビシン、またはタキソール）と共に同時処置し得る。長期間のＩＦＮτ（１０５Ｕ）処置（腹腔内注射または経口摂取によって２０日を越える間）、または未処置をＩＬ−１０について、製造者の指示書に従ってＩＬ−１０ ＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を使用する固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）によって試験した。全血清サンプルは２つ組で試験した。
【０１４６】
結果を図１２に示す。コントロールマウスにおいても、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによるＯｖＩＦＮτを１回処置を受けたマウスにおいても、ＩＬ−１０を検出しなかった。対照的に、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによって、２０日を超える間、４８時間ごとにＯｖＩＦＮτを受けたＳＪＬマウスは、血清中に検出可能なレベルのＩＬ−１０を有した。ＩＦＮτ誘導性のＩＬ−１０産生は、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥの発症を防止する寄与機構であり得ることを、これらのデータは示唆する。
【０１４７】
（実施例１０）
（ＯｖＩＦＮτでの処置の停止は再発性麻痺を生じる）
腹腔内注射または経口摂取のいずれかによるＯｖＩＦＮτ処置（４８時間ごと）によってＥＡＥより防御したＳＪＬマウスを、その後５８日間続けた。この期間中疾患の発症は観察されなかった。次にＯｖＩＦＮτ処置を解除し、そして疾患の症状についてさらに２２日間マウスを観察した。
【０１４８】
結果を図１３に示す。ＩＦＮτ処置をグラフ下のプラス記号として表示し、ＩＦＮτ処置の解除をマイナス記号として表示する。各々の処置グループにおける疾患率は以下の通りであった：ＰＢＳコントロール＝３／４（四角）；腹腔内注射＝３／３（三角）；経口摂取＝３／４（丸）。
【０１４９】
それまでＯｖＩＦＮτ処置によってＥＡＥから防御されていた両グループのマウスは、ＯｖＩＦＮτ処置を解除後６〜１２日目に麻痺の兆候を発症した。これらのデータは、ＥＡＥの慢性再発モデルにおいて継続的にＥＡＥから防御するため、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによって、ＩＦＮτの継続的投与が望ましいことを示唆する。
【０１５０】
（実施例１１）
（ＯｖＩＦＮτの経口投与は抗ＯｖＩＦＮτ抗体応答を低減させる）
上記の実施例１０にて記載した実験においてＯｖＩＦＮτ処置を解除した後、各々の処置グループのマウスから採血し、そして抗ＯｖＩＦＮτ抗体（Ａｂ）の存在について血清を試験した。
【０１５１】
抗原ＯｖＩＦＮτは６００ｎｇ／ウェルの濃度で一晩、プラスチックの組織培養ウェルの平底に吸着させ、続いて乾燥するまでエバポレートした。非特異的な結合を防ぐため、５％乳液（カーネーション）のＰＢＳ溶液でこのプレートを２時間処理し、次に０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳで３回洗浄した。未処理のマウス由来の血清、腹腔内注射によってＯｖＩＦＮτ処置をしたマウス由来の血清、および経口摂取によってＯｖＩＦＮτ処置をしたマウス由来の血清の様々な稀釈物を加え、３時間インキュベートした。西洋ワサビパーオキシダーゼ結合化ヤギ抗マウス免疫グロブリンを用いて結合を分析した。ｏ−フェニレンジアミンおよびＨ２Ｏ２を添加し、２ＭのＨ２ＳＯ４で反応を終結させた後、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）において、４９２ｎｍで発色をモニタリングした。
【０１５２】
例示的な結果を図１４に示す。未処理由来、腹腔内注射ＯｖＩＦＮτ投与由来、および経口摂取ＯｖＩＦＮτ投与由来（１グループあたり２匹）の血清を、１：３０（白抜きのバー）および１：１２０（塗りつぶしたバー）を含む多重稀釈法を使用して、ＥＬＩＳＡによって試験した。経口摂取によってＯｖＩＦＮτを受けたマウスは、わずかな抗体レベルを呈し、一方、腹腔内注射によってＯｖＩＦＮτを受けたマウスでは、抗ＯｖＩＦＮτ抗体レベルの上昇を提示した。予想の通り、ＯｖＩＦＮτ処置を受けなかったマウスは抗ＯｖＩＦＮτ抗体を示さなかった。
【０１５３】
上記のように、ＭＤＢＫ細胞に対するＯｖＩＦＮτの抗ウイルス活性を中和する能力についても、血清を調べた。結果を以下の表７に示す。腹腔内注射マウス由来の血清も経口摂取のマウス由来の血清も、いずれも中和活性を持たなかった。これらのデータは、ＩＦＮτでの経口処置は、腹腔内注射処置した個体において観察されたＯｖＩＦＮτタンパク質に対する抗体応答が回避され、そしてどちらの処置でも、概して中和抗体を生じないことを示唆している。
【０１５４】
【表７】
本発明を特定の実施例に関連づけて記載したが、本発明から逸脱せずに、様々な変更および変法が可能であることは、当業者には明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１５５】
【図１】図１は、健常マウスへＩＦＮ−τを腹腔内（ｉ．ｐ．）あるいは消化器投与した後の血中ＯＡＳ濃度をｐｍｏｌ／ｄＬで示す。
【図２】図２は、１×１０３Ｕ、１×１０４Ｕおよび１×１０５Ｕの投薬量でＩＦＮτをマウスへ消化器投与した際の血中ＯＡＳ濃度をｐｍｏｌ／ｄＬで示す。
【図３】図３は、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）を経口投与した後の、数種のマウス系統（ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ、ＮＺＷ／ＮおよびＳＪＬ／Ｊ）の血中ＯＡＳ濃度をｐｍｏｌ／ｄＬで示す棒グラフである。コントロールのマウスは、ＩＦＮτを含まない１０％マルトース溶液を経口的に受けた。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３〜５匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を示している。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｂは、６時間の絶食後にＩＦＮτを投与した後の、マウスの血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフである。ＩＦＮτは経口投与されるかまたは腹腔内注射により投与した。図４Ａは、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）投与後０時間目、８時間目、１６時間目、および２４時間目に採取した血液サンプルにおける、血中ＯＡＳレベルを示す。インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する百分率として表している。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を示している。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｂは、６時間の絶食後にＩＦＮτを投与した後の、マウスの血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフである。ＩＦＮτは経口投与されるかまたは腹腔内注射により投与した。図４Ｂは、０Ｕ、１０２Ｕ、１０３Ｕ、１０４Ｕ、および１０５Ｕの濃度でＩＦＮτを送達した２４時間後の血中ＯＡＳ濃度を示し、コントロールに対するパーセンテージとして表す。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を示している。
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、ＩＦＮ−τ投与によるマウスの血中ＯＡＳの誘導に対する、断食状態の効果を示す棒グラフである。血中ＯＡＳの誘導は、インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する百分率として示される。処置されたマウスは、記載した摂取レジメンの６時間後に１０４ＵのＩＦＮτを（腹腔内注射または経口投与により）与えた。図５Ａは食餌も飲水もなし；図５Ｂは飲水で食餌なし、図５Ｃは食餌で飲水なし、図５Ｄは食餌および飲水の両方。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。
【図６】図６は、経口的にかまたは腹腔内注入によりＩＣＲマウスへ与えられたマウスＩＦＮα（０ＩＵ、１０２ＩＵ、１０３ＩＵ、および１０４ＩＵ）の投与によって、血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフであり、インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する百分率として表される。血中のＯＡＳ活性はＩＦＮα投与の１６時間後にアッセイされた。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８単位のＩＦＮτの経口投与後の、３人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図７Ｂ】図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８単位のＩＦＮτの経口投与後の、３人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図７Ｃ】図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８単位のＩＦＮτの経口投与後の、３人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｂは、１日当たり１．５×１０９単位のＩＦＮτの経口投与後の、２人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図８Ｂ】図８Ａ〜８Ｂは、１日当たり１．５×１０９単位のＩＦＮτの経口投与後の、２人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図９】図９は、抗ウイルスアッセイ法を用いて測定した、経口摂取（塗りつぶしたバー）または腹腔内注射（白抜きのバー）のいずれかによる投与後のＮＺＷマウス血清中のＩＦＮτ量を示す。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｃは、処置を受けなかったマウス（図１０Ａ）と比較した、ＩＦＮτの経口投与（図１０Ｃ）および腹腔内注射（図１０Ｂ）による、ＳＪＬマウスにおける、慢性再発性の実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の予防を示す。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、リンパ球の浸潤を検出するためにクレージルバイオレットで染色した、ＩＦＮτ処置をしない（図１１Ａ）か、腹腔内注射によるＩＦＮτ処置（図１１Ｂ）か、経口摂取によるＩＦＮτ処置（図１１Ｃ）かのいずれかの処置を受けた、ＥＡＥ誘発動物由来のマウス脊髄の切片を示す。
【図１２】図１２は、腹腔内注射または経口摂取によって投与された、単回用量のＩＦＮτ処置または長期のＩＦＮτ処置のいずれかによるＩＬ−１０の誘導を示す。
【図１３】図１３は、ＳＪＬマウスにおける、ＩＦＮτ処置解除後のＥＡＥの再発を示す。
【図１４】図１４は、ＩＦＮτの腹腔内注射または経口摂取の後の、ＩＦＮτ処置されたマウス血清中の抗ＩＦＮτ抗体についてのＥＬＩＳＡ検出を示す。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明はインターフェロン−τを含有する薬学的組成物、およびこれの使用方法に関係する。より詳しくは、本発明は、２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素の血中濃度を変えるのに十分な用量でインターフェロン−τを経口投与することによってインターフェロン−τに応答性の状態を治療するための方法に関係する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
インターフェロン−τ（以下「ＩＦＮτ」もしくは「インターフェロン−τ」）は元々、反芻動物の受胎産物の栄養外胚葉により産生される妊娠認識ホルモンとして発見された（非特許文献１；非特許文献２）。ＩＦＮτ遺伝子の分布は、畜牛、ヒツジおよびヤギを含む反芻動物に限られている（非特許文献３）が、ヒトおよびマウスを含む他の生物種に属する細胞において、これは活性を有することが示されている（非特許文献４；非特許文献５）。例えば、ＩＦＮτは、抗ウイルス活性（非特許文献６）、抗増殖活性（非特許文献４）、および免疫調節活性（非特許文献７）を有することが立証されている。
【０００３】
ＩＦＮτは、Ｉ型ＩＦＮ（例えば、インターフェロン−αおよびインターフェロン−β）に代表的に関係する活性の多くを呈するが、ＩＦＮτと他のＩ型ＩＦＮとの間には著しい差異が存在する。最も顕著な差異は、反芻動物種における妊娠時のＩＦＮτの役割である。他のＩＦＮは妊娠の認識において同様の活性を有さない。また、ウイルスによる誘導も異なる。ＩＦＮτを除き、全てのＩ型ＩＦＮはウイルスおよびｄｓＲＮＡによって容易に誘導される（非特許文献８）。誘導されたＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの発現は一過性であり、およそ２、３時間続く。対して、ＩＦＮτの合成は、一旦誘導されると、数日の期間に亘って維持される（非特許文献９）。細胞当たりの基準とすると、他のＩ型ＩＦＮより３００倍のＩＦＮτが産生される（非特許文献１０）。
【０００４】
ＩＦＮτと他のＩ型インターフェロンのアミノ酸配列において、別の差異が存在する。インターフェロンα２ｂ、インターフェロンβ１、インターフェロンω１およびインターフェロンγと、インターフェロンτとの間のアミノ酸配列同一性割合を、次の表にまとめる。
【０００５】
【数１】
組換えヒツジＩＦＮτ（ｒＩＦＮτ）は、ＩＮＦα２ｂに対して４８．８パーセントの相同性であり、そしてＩＮＦβ１に対しは３３．８パーセントの相同性である。ＩＦＮτとＩＦＮαとの間、およびＩＦＮτとＩＦＮβとの間のこの限られた相同性に起因して、ＩＦＮτは、経口投与される場合に、ＩＦＮαまたはＩＦＮβと同様の様式で作用するかどうかは、予測され得ない。ＩＦＮτはまた、低いレセプター結合親和力をヒト細胞上のＩ型レセプターに対して有すると報告されている（非特許文献１４；非特許文献１５）。さらに、ＩＦＮτが非内在性ヒトタンパク質であるという事実により、ＩＦＮτがヒト体内に導入される場合、全身性の中和抗体形成についての可能性が生じる（非特許文献１４）。ＩＦＮτと他のインターフェロンとの間のこれらの差異は、ＩＦＮτがヒトに投与される場合に治療的利益をもたらすかどうかを予測することを、困難にさせる。ＩＦＮα、ＩＦＮβ、あるいは他の非τ型インターフェロンの経口投与に関係する分野の教示により、ＩＦＮτから任意の期待を導き出す根拠は提供され得ない。
【０００６】
ＩＦＮτならびに全体的なタンパク質およびポリペプチドの使用における一つの制限要因は、生体内分布に関係する。なぜなら、この生体内分布は、非経口的に投与された場合に、血漿タンパク質と血液細胞とのタンパク質相互作用によって影響されるからである。胃におけるタンパク質分解に起因して、経口経路の投与はさらにより問題である。この胃において、意図する標的に到達する前に、酸性条件が分子を分解し得る。例えば、胃の酵素作用および膵臓の酵素作用によって生じたポリペプチドおよびタンパク質フラグメントは、腸管刷子縁膜内のエキソペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼによって切断されて、ジペプチドあるいはトリペプチドを生じる。膵臓酵素によるタンパク質分解が避けられた場合、ポリペプチドは刷子縁のペプチダーゼによる分解に供される。胃を通り抜けて存続し得るポリペプチドまたはタンパク質は、通過障壁が細胞内への進入を妨げる腸管粘膜において、代謝に供される。この理由から、一定期間口腔内に保持されるロゼンジまたは溶液の形態で口腔−咽頭領域へタンパク質を送達することに、多くの試みが焦点を当てている。
【非特許文献１】Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８７）３３０：３７７−３７９
【非特許文献２】Ｂａｚｅｒ，Ｆ．Ｗ．およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｍ．、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１）２６：１９−２２
【非特許文献３】Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（１９９９）１９：１３３５−１３４１
【非特許文献４】Ｐｏｎｔｚｅｒ，Ｃ．Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９１）５１：５３０４−５３０７
【非特許文献５】Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（２０００）２０：８１７−８２２
【非特許文献６】Ｐｏｎｔｚｅｒ，Ｃ．Ｈ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９８８）１５２：８０１−８０７
【非特許文献７】Ａｓｓａｌ−Ｍｅｌｉａｎｉ，Ａ．、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）３３：２６７−２７５
【非特許文献８】Ｒｏｂｅｒｔｓら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９２）１３：４３２
【非特許文献９】Ｇｏｄｋｉｎら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．（１９８２）６５：１４１
【非特許文献１０】Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．およびＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９１）８８：３８１７−３８２１
【非特許文献１１】Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、Ｇｅｎｅ（１９８０）１０（１）：１１
【非特許文献１２】Ａｄｏｌｆら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９９１）１０８９（２）：１６７
【非特許文献１３】Ｓｔｒｅｕｌｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８０）２０９：１３４３
【非特許文献１４】Ｂｒｏｄ，Ｓ．、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（１９９９）１８：８４１
【非特許文献１５】Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．（１９９７）１７：７６９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、ヒト被験体において、インターフェロン治療に応答性である状態を処置するための方法を提供することが、本発明の目的である。
【０００８】
ＩＦＮτの経口投与によってこのような状態を処置するための方法を提供することが、本発明の別の目的である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の概要）
１つの局面において、本発明は、ヒト被験体のインターフェロン治療に反応する状態を治療するための方法を含み、この方法は、ＩＦＮτ投与を欠く場合の被験体における血中２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルに対して、その血中ＯＡＳレベルの測定可能な増加を実現するのに有効な量で、被験体の腸管にＩＦＮτを経口投与することによる。被験体の腸管へのＩＦＮτの経口投与は、このような有効量で、１週あたり少なくとも数回という通常の基準で、少なくとも１ヶ月の期間、継続される。
【００１０】
別の局面において、本発明は、ヒト被験体における、インターフェロンτ治療に応答性の状態を処置するための医薬の調製における使用のための組成物を含み、この状態は、自己免疫疾患、癌、あるいはウイルス感染から選択される。この組成物は、インターフェロン−τの投与を欠いた被験体における血中２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルに対して、被験体の血中ＯＡＳレベルの測定可能な初期増加を実現するのに有効な量で、被験体の腸管に向けた経口投与のために処方されたインターフェロン−τを含み、ここでこのインターフェロン−τは、被験体の血中ＯＡＳレベルにおける変化とは関係なしに、少なくとも1ヶ月の期間、１週あたり少なくとも数回という通常の基準で、そのような有効量で被験体の腸管に対して投与される。
【００１１】
一実施形態において、ＩＦＮτはヒツジＩＦＮτである。特定の実施形態において、このヒツジＩＦＮτは、配列番号２あるいは配列番号３として本明細書中で認識される配列を有する。より一般的には、このＩＦＮτは、ヒツジＩＦＮτと少なくとも約８０％相同性であるアミノ酸配列を有する。このＩＦＮτは、組換えで作製されたＩＦＮτであり得る。
【００１２】
継続投与は、毎日の基準で実施され得るか、または１週あたり数回（例えば、４８時間ごと）実施することもできる。
【００１３】
なお別の実施形態において、このＩＦＮτは、の自己免疫疾患（多発性硬化症等）を患う被験体に投与される。この方法において、ＩＦＮτは被験体の症状の期間投与され、代表的には被験体の生涯にわたって投与される。
【００１４】
別の実施形態では、ＩＦＮτは、ウイルス（例えば、ＨＣＶ）に罹患した被験体に投与される。この方法はさらに、被験体における感染の存在を検出する工程、および感染がもはや検出されない時点を数ヶ月過ぎた期間、ＩＦＮτの投与を継続する工程、を包含する。この被験体は、ＩＦＮτを用いた処置期間の間、第二の抗ウイルス剤を用いて処置され得る。
【００１５】
別の実施形態において、ＩＦＮτは、細胞増殖により特徴付けられる状態（例えば、癌）に罹患した被験体に投与される。この被験体は、ＩＦＮτを用いた処置期間の間、第二の抗癌剤を用いて処置され得る。
【００１６】
好ましくは、ＩＦＮτの投薬形態は、このタンパク質を優先的に小腸へと送達する投薬形態が好ましい。例えば、この投薬形態は、小腸の環境からこのタンパク質を保護および／または安定化する、粘膜接着性ポリマーからなり得る。この粘膜付着性組成物は、小腸内壁の内表面を覆う細胞に対するインターフェロンの結合を増強する。
【００１７】
この処置は、ＩＦＮτの初期投与の結果として血中ＯＡＳレベルが増加するかどうかを確認するための、血中ＯＡＳレベルをモニタリングする工程を、さらに包含し得る。別の実施形態において、被験体に初期に投与されるＩＦＮτの量を調節して、経口ＩＦＮτを投与する前に観察された血中ＯＡＳレベルに対して、血中ＯＡＳの測定可能な増加を達成する。
【００１８】
本発明のこれらおよび他の目的および特徴は、以下に詳説される本発明な説明が添付の図面と組み合わせて読まれる場合、より完全に理解されよう。
【００１９】
（配列の簡単な説明）
配列番号１は、ヒツジインターフェロン−τ（ＩＦＮτ）をコードする合成遺伝子のヌクレオチド配列である。
配列番号２は、ヒツジ成体インターフェロン−τ（ＩＦＮτ；ｏＴＰ−１；ＧｅｎＢａｎｋ識別番号Ｙ００２８７；ＰＩＤ ｇ１３５８）のアミノ酸配列に対応する。
配列番号３は、配列番号２の配列に対して、配列のうちの５位および６位のアミノ酸残基が改変されている、ヒツジ成体ＩＦＮτのアミノ酸配列に対応する。
配列番号４は、配列番号３のタンパク質をコードする合成ヌクレオチド配列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
インターフェロン−タウは、ＩＦＮτまたはインターフェロン−τとして略され、以下の二つの群の特徴の各々から、少なくとも１つの特徴的形態を有するインターフェロンタンパク質ファミリーのうちのいずれか一つをいう：（ｉ）（ａ）抗黄体退行特性、（ｂ）抗ウイルス特性、（ｃ）抗細胞増殖特性；および（ｉｉ）α−インターフェロンとの約４５％〜６８％のアミノ酸相同性、および既知のＩＦＮτ配列との７０％を超えるアミノ酸相同性（例えば、Ｏｔｔら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ．，１１：３５７（１９９１）；Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，３：１２７（１９８９）；Ｗｈａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：１０８４６（１９９４）；Ｂａｚｅｒら、ＷＯ９４／１０３１３（１９９４））。アミノ酸相同性は、例えば、デフォルトパラメーターを用いたＬＡＬＩＧＮプログラムを用いて判定することができる。このプログラムは、配列比較プログラムのＦＡＳＴＡバージョン１．７一式に見出される（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、ＰＮＡＳ，８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８３：６３（１９９０）；Ｗｉｌｌｉａｍ Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｏｘ ４４０，Ｊｏｒｄａｎ Ｈａｌｌ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡより入手可能なプログラム）。ＩＦＮτの配列は様々な反芻動物種において同定されており、これには以下が挙げられるが、これらに限定されない：乳牛（Ｂｏｖｉｎｅ ｓｐ．、Ｈｅｌｍｅｒ Ｓ．Ｄ．、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１１９：５３２（１９８８））、ヒツジ（Ｏｖｉｎｅ ｓｐ．）、ジャコウウシ（Ｏｖｉｂｏｓ ｓｐ．）、キリン（Ｇｉｒａｆｆａ ｓｐ．，ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ５５０５０）、ウマ（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ）、シマウマ（Ｅｑｕｕｓ ｂｕｒｃｈｅｌｌｉ、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ００５０２７）、カバ（Ｈｉｐｐｏｐｏｔａｍｕｓ ｓｐ．）、ゾウ（Ｌｏｘｏｄｏｎｔａ ｓｐ．）、ラマ（Ｌｌａｍａ ｇｌａｍａ）、ヤギ（Ｃａｐｒａ ｓｐ．、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＹ３５７３３６、ＡＹ３５７３３５、ＡＹ３４７３３４、ＡＹ３５７３３３、ＡＹ３５７３３２、ＡＹ３５７３３１、ＡＹ３５７３３０、ＡＹ３５７３２９、ＡＹ３５７３２８、ＡＹ３５７３２７）、およびシカ（Ｃｅｒｖｉｄａｅ ｓｐ．）。これらの種のうち多くのものについてのＩＦＮτのヌクレオチド配列は、公用データベースおよび／または文献（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ．Ｒ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１８：８０５（１９９８）、Ｌｅａｍａｎ Ｄ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ．，１２：１（１９９３）、Ｒｙａｎ，Ａ．Ｍ．ら、Ａｎｉｍ．Ｇｅｎｅｔ．，３４：９（１９９６）を参照のこと）に報告される。用語「インターフェロン−τ」は、任意の反芻動物種（上記で列挙された種により例示される）由来のインターフェロン−τタンパク質を包含するよう意図され、そして上記に列挙された特性のうち、続く２つの群の各々由来の、少なくとも１つの特徴を有するよう意図される。
【００２１】
ヒツジＩＦＮτ（ＩＦＮτ）とは、本明細書中で配列番号２として識別されるアミノ酸配列を有するタンパク質をいい、そしてそのタンパク質の活性には大して影響を与えない中性アミノ酸置換基のようなアミノ酸の置換および変更を有するタンパク質（例えば、本明細書中で配列番号３として識別されるＩＦＮτタンパク質）をいう。より一般的には、ヒツジＩＦＮ−τタンパク質は、配列番号２として識別される配列に対して、約８０％の配列相同性、より好ましくは９０％の配列相同性を有するタンパク質である。
【００２２】
「’Ｘ’単位を超える１日の投薬量」（ここで、’Ｘ’は５×１０８または１．５×１０９のような特定値である）とは、約５×１０８を超える抗ウイルス単位のタンパク質を提供するのに十分なＩＦＮτの量をいい、ここでＩＦＮτの抗ウイルス活性は、標準細胞壊死効果阻害アッセイ（例えば、以下にある「方法」の章にて記載されるアッセイ）を用いて測定される。’Ｘ’単位の特定された１日投薬量を提供するためのタンパク質量（すなわち、ｍｇ）は、そのタンパク質の抗ウイルス比活性によって変化することが、認識される。
【００２３】
ある状態を処置することとは、その状態の症状を低減させること、および／またはその状態の重篤度を減少させることに効果的な治療物質を投与することをいう。
【００２４】
経口とは、口による投与、または胃もしくは小腸への直接投与（消化器（ｇａｓｔｒｉｃ）投与を含む）を含む、任意の経路をいう。
【００２５】
腸とは、胃下口から肛門まで伸びる消化管の部分をいい、小腸（十二指腸、空腸および回腸）および大腸（上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ字結腸および直腸）からなる。
【００２６】
ＯＡＳレベルとは、血中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）タンパク質の濃度あるいは活性をいう。
【００２７】
ＡＬＴとはアラニンアミノトランスフェラーゼをいう。
【００２８】
ＨＣＶとはＣ型肝炎をいう。
【００２９】
「血中ＯＡＳレベルの測定可能な増加」とは、ＯＡＳの血中レベル（血清レベルおよび／または血球レベル）の統計学上有意な増加をいい、代表的には、同一状態下で測定された処理前の濃度より少なくとも２５％の増加をいう。このレベルは検出可能なＯＡＳ酵素の増加によるか、または細胞内（例えば、血中リンパ球内）のＯＡＳ ｍＲＮＡレベルの増加によって、決定され得る。血中のＯＡＳ酵素レベルを測定するための方法は、放射免疫アッセイキットを使用して本明細書中、および文献中に記載される（Ｓａｔｏｈ，Ｙ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１９：８８７（１９９９））。細胞内でのＯＡＳのｍＲＮＡ発現レベルを測定するための方法は、文献にて公知である（Ｔａｋａｙａｍａ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１９：８９５（１９９９））。
【００３０】
（ＩＩ．インターフェロン−τ組成物と治療方法）
（Ａ．インターフェロン−τ）
ヒツジＩＦＮτ（ＩＦＮτ）は、１８〜１９ｋＤａのタンパク質として同定された最初のＩＦＮτである。受胎産物（胚および周辺膜）ホモジネートにおいて、いくつかのアイソフォームが同定された（Ｍａｒｔａｌ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．５６：６３−７３（１９７９））。続いて、受胎産物の培養培地中に放出された低分子量タンパク質が精製され、そしてこれが熱不安定性およびプロテアーゼ感受性の両方であることが示された（Ｇｏｄｋｉｎ，Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．６５：１４１−１５０（１９８２））。ＩＦＮτは、元々、ヒツジ栄養膜タンパク質−１（ｏＴＰ−１）と呼ばれた。なぜなら、このＩＦＮτは、ヒツジにおける母体認識の臨界期の間に、ヒツジ受胎産物の栄養外胚葉によって初期に産生される一次分泌タンパク質であったからである。その後の実験により、ＩＦＮτは、反芻動物（例えば、ヒツジおよびウシ）において、妊娠に対する生理学的応答を確立するのに必須な妊娠認識ホルモンであると決定された（Ｂａｚｅｒ，Ｆ．Ｗ．およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｍ．、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：１９−２２（１９９１））。
【００３１】
Ｎ末端アミノ酸配列（Ｉｍａｋａｗａら、１９８７）を表す合成オリゴヌクレオチドを用いて、ヒツジ胚盤胞ライブラリーを探索することにより取得したＩＦＮτ ｃＤＮＡは、ヒト由来のＩＦＮ−α、マウス由来のＩＦＮ−α、ラット由来のＩＦＮ−αおよびブタ由来のＩＦＮ−αと４５％〜５５％相同性であり、そして現在ＩＦＮ−ΩといわれるウシＩＦＮ−αＩＩと７０％相同性である、予測アミノ酸配列を有する。異なるアイソフォームを表し得るｃＤＮＡ配列がいくつか報告されている（Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｈ．Ｊ．ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２：６５（１９８９）；Ｋｌｅｍａｎｎ，Ｓ．Ｗ．ら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：６７２４（１９９０）；およびＣｈａｒｌｉｅｒ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．７６：１６１−１７１（１９９１））。全てのものは、約１ｋｂであり、２３アミノ酸のリーダー配列および１７２アミノ酸の成熟タンパク質をコードする、５８５ベースのオープンリーディングフレームである。アミノ末端およびカルボキシル末端が同格である、４本のへリックスの１束のようなＩＦＮ−τの予測構造は、Ｉ型ＩＦＮとしての分類をさらに支持する（Ｊａｒｐｅ，Ｍ．Ａ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８６３−８６７（１９９４））。
【００３２】
【数２】
ＩＦＮ−τはＩ型ＩＦＮ（上記の表を参照のこと）に分類上関係するいくつかの活性を示すが、ＩＦＮ−τと他のＩ型ＩＦＮとの間には著しい差異が存在する。最も顕著な差異は妊娠における役割であり、これは上記に具体的に示してある。また、ウイルス誘導性も異なる。ＩＦＮτを除く全てのＩ型ＩＦＮは、ウイルスおよびｄｓＲＮＡによって容易に誘導される（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｒｅｖ．１３：４３２−４５２（１９９２））。誘導されたＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの発現は一過性であり、約２、３時間続く。対照的に、ＩＦＮ−τの合成は、一旦誘発されると数日に渡って維持される（Ｇｏｄｋｉｎら、１９８２）。細胞当たりの基準にすると、他のＩ型ＩＦＮより、３００倍を超えるＩＦＮ−τが産生される（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．およびＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：３８１７−３８２１（１９９１））。
【００３３】
他の差異はＩＦＮτ遺伝子の制御領域に存在し得る。例えば、ウシＩＦＮτに対する遺伝子でのヒト栄養芽細胞株ＪＡＲのトランスフェクションは、抗ウイルス活性を生じ、一方、ウシＩＦＮ−Ω遺伝子でのトランスフェクションではみられなかった。このことは、ＩＦＮτ遺伝子の発現に関係する、独特なトランス作用因子を示唆する。この示唆と、ＩＦＮτの隣接プロモーター領域（１２６番目から転写開始部位まで）はＩＦＮ−αおよびＩＦＮβの隣接プロモーター領域と高い相同性であるが、−１２６〜−４５０番目の領域は相同性ではなく、ＩＦＮτの発現のみを増強する（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．およびＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：３８１７−３８２１（１９９１））という所見が一致する。従って、他のＩ型ＩＦＮと比較して、異なる調節因子がＩＦＮτの発現に関与しているようである。
【００３４】
ヒツジＩＦＮτの１７２アミノ酸配列は、例えば米国特許第５，９５８，４０２号に記載され、そしてこれに相同的なウシＩＦＮτ配列は、例えば、Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３−９１（１９８７）およびＩｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，３：１２７（１９８９）に記載される。これらの参考文献由来のヒツジＩＦＮτ配列およびウシＩＦＮτ配列は、本明細書により参考として援用される。ヒツジＩＦＮτのアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号２として示される。
【００３５】
（１．ＩＦＮτの単離）
ＩＦＮτは妊娠したヒツジから収集した受胎産物から単離され得、そしてＧｏｄｋｉｎ，Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｔｉｌ．６５：１４１−１５０（１９８２）およびＶａｌｌｅｔ，Ｊ．Ｌ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．３７：１３０７（１９８７）により記載される改変最小必要培地中でインビトロで培養され得る。ＩＦＮτはイオン交換クロマトグラフィーおよびゲルろ過により、受胎産物培養物から精製され得る。単離ＩＦＮτの均一性は、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８２）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｄｉａ，ＰＡ（１９８８））によって評価され得、そして精製ＩＦＮτサンプル中のタンパク質濃度の決定は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ；Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０：７６（１９８５））を使用して実施され得る。
【００３６】
（２．ＩＦＮτの組換え産物）
組換えＩＦＮτタンパク質は、適切な発現系（例えば、細菌細胞または酵母細胞）を使用して、任意に選択されたＩＦＮτポリヌクレオチド断片から作製され得る。ＩＦＮτヌクレオチド配列およびポリペプチド配列の単離は、ＰＣＴ公開ＷＯ／９４／１０３１３（これは、本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
【００３７】
ＩＦＮτ発現ベクターを作製するため、ＩＦＮτをコードする配列（例えば、配列番号１または配列番号４）を、発現ベクター（例えば、細菌発現ベクター）中に配置し、そして標準的な方法に従って発現される。適切なベクターの例としては、λｇｔ１１（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）ベクター；ｐＧＥＸ（Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０：７６（１９８５））ベクター；ｐＧＥＭＥＸ（Ｐｒｏｍｅｇａ）ベクター；およびｐＢＳ（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）ベクターが挙げられる。また、適切なプロモーター（例えば、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼプロモーターまたはｔａｃプロモーター）を含有する他の細菌発現ベクターも使用され得る。改変ｐＩＮ ＩＩＩ ｏｍｐ−Ａ発現ベクターへのＩＦＮτ合成ポリヌクレオチドのクローニングは、「材料と方法」に記載される。
【００３８】
本明細書中に記載される研究のため、配列番号４に存在するＩＦＮτコード配列を、ベクター中にクローニングした。このベクターは酵母細胞の形質転換に適切であり、メタノール調節性アルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ）プロモーターおよびＰｈｏ１シグナル配列を含有する。このベクターを使用してＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓ宿主細胞を形質転換し、製造業者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の指示書に従い、形質転換細胞を使用してタンパク質を発現させた。
【００３９】
本発明の方法での使用のための、ＩＦＮτの発現に適切な他の酵母ベクターとしては、２μプラスミドベクター（Ｌｕｄｗｉｇ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ，１３２：３３（１９９３））、酵母組込みプラスミド（Ｓｈａｗ，Ｋ．Ｊ．ら、ＤＮＡ，７：１１７（１９８８））、ＹＥＰベクター（Ｓｈｅｎ，Ｌ．Ｐ．ら、Ｓｃｉ．Ｓｉｎ．，２９：８５６（１９８６））、酵母セントロメアプラスミド（ＹＣｐ）、および制御可能な発現を有する他のベクター（Ｈｉｔｚｅｍａｎ，Ｒ．Ａ．ら、米国特許第４，７７５，６２２号（１９８８年１０月４日発行）；Ｒｕｔｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．ら、米国特許第４，７６９，２３８号（１９８８年９月６日発行）；Ｏｅｄａ，Ｋ．ら、米国特許第４，７６６，０６８号（１９８８年８月２３日発行））が挙げられる。好ましくは、これらのベクターは、有効な酵母プロモーター（例えば、ＭＦα１プロモーター（Ｂａｙｎｅ，Ｍ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ ６６：２３５−２４４（１９８８））、ＧＡＤＰＨプロモーター（グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ；Ｗｕ，Ｄ．Ａ．ら、ＤＮＡ，１０：２０１（１９９１））、またはガラクトース誘導性ＧＡＬ１０プロモーター（Ｌｕｄｗｉｇ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ，１３２：３３（１９９３）；Ｆｅｈｅｒ，Ｚ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．，１６：４６１（１９８９）；Ｓｈｅｎ，Ｌ．Ｐ．ら、Ｓｃｉ．Ｓｉｎ．，２９：８５６（１９８６）））を含有する発現カセットを含む。酵母形質転換宿主は、代表的にはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅであるが、上記で例示されるように、形質転換に適した他の酵母（例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓなど）も同様に使用され得る。
【００４０】
さらにＩＦＮτポリペプチドをコードするＤＮＡを、多数の市販のベクターにクローニングし、適切な宿主系にてこのポリペプチドの発現を生じさせ得る。これらの系としては、上記の細菌発現系および酵母発現系、ならびに以下が挙げられる：バキュロウイルス（ｂａｃｕｌｌｒｕｓ）発現（Ｒｅｉｌｌｙ，Ｐ．Ｒ．ら、ＢＡＣＵＬＯＶＩＲＵＳ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＶＥＣＴＯＲＳ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，（１９９２）；Ｂｅａｍｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１１：３７８（１９９１）；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）；植物細胞発現、遺伝子組換え植物発現、および哺乳類細胞内での発現（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ；Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ ＭＤ）。この組換えポリペプチドは融合タンパク質あるいは天然タンパク質として発現させ得る。発現ベクター内に、多くの特性（例えば、培養培地中への発現される配列の分泌を促進するリーダー配列）が操作され得る。遺伝子組換えで作製されたポリペプチドは、代表的に、溶解した細胞あるいは培養液から単離される。精製は当分野で公知の方法によって実施され得、この方法は塩分画、イオン交換クロマトグラフィー、およびアフィニティークロマトグラフィーを含む。上記のように、ＩＦＮτポリペプチドに基づいて調製された抗体を用いて、免疫アフィニティークロマトグラフィーが使用され得る。
【００４１】
組換え方法に加えて、ＩＦＮτタンパク質あるいはポリペプチドは、例えば適切な抗体を使用することによる、アフィニティーに基づく方法によって、選択した細胞からを単離され得る。さらに、ＩＦＮτペプチド（例えば、配列番号２あるいは配列番号３）は、当業者に公知の方法を使用して、化学合成され得る。
【００４２】
（Ｂ．ＩＦＮτの経口投与）
本発明の支持として実施された研究において、ＩＦＮ−τがマウスおよびヒトに経口投与され、そして全血中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）（ＩＦＮ活性を認識するマーカー（Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ８：３６６−３７０（１９８８）））の誘導をモニタリングした。ＯＡＳレベルをモニタリングする代替の方法が適切であり、そして精度および感度の点において利点を提供し得ることが認識される。例えば、ＯＡＳの細胞内ｍＲＮＡ発現量が、準定量逆転写酵素ＰＣＴ技術（Ｔａｋａｙａｍａ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．，１９：８９５（１９９９））を使用して測定され得る。
【００４３】
（１．ＩＦＮτのマウスへの投与）
本発明の支持として実施された研究において、経口投与されたＩＦＮτが、ＯＡＳを誘導する能力について試験した。実施例１に記載されるように、ＩＦＮτを、マウスへ経口投与するかまたは腹腔内（ｉ．ｐ．）投与するかのいずれかを行った。ＩＦＮτ投与の２４時間後に全血のＯＡＳ活性を決定し、そしてこれらの結果を図１に示す。
【００４４】
図１は、１０％マルトースを含む生理食塩水で処置したコントロール動物に関する血中ＯＡＳ濃度（ｐｍｏｌ／ｄＬ）が、わずかに１０００ｐｍｏｌ／ｄＬを超えたことを示す。１０％マルトースを含む生理食塩水溶液中の５×１０８単位のＩＦＮτで腹腔内処置したマウスは、約１７００ｐｍｏｌ／ｄＬの血中ＯＡＳレベルを有した。同じＩＦＮτ投薬量で経口的に処置したマウスは、約２０００ｐｍｏｌ／ｄＬの血中ＯＡＳ濃度を有した。
【００４５】
実施例２にて詳説される別の研究において、ＩＦＮτをマウスに経口投与し、このＩＦＮτが用量依存的にＯＡＳを誘導する能力を決定した。ＩＦＮτを、０単位（コントロール）、１×１０３単位、１×１０４単位、１×１０５単位で、試験マウスにおける胃上部に経口投与した。経口投与の１２時間後、心臓から全血を採取し、そしてＯＡＳ濃度を測定した。図２に示すように、全血中のＯＡＳ濃度は用量依存的に増加した。
【００４６】
実施例３は、マウスで行ったさらなる研究を記載する。これらの研究ではＩＦＮτの投与前に、少なくとも６時間給餌および飲料を断ち、そして経口注入または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によってＩＦＮτを与えた。経口投与する場合、経口摂食ニードルを使用してＩＦＮτを胃上部に直接導入した。
【００４７】
図３は、様々な系統のマウス：ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ／９、ＮＺＷ／Ｎ、ＳＪＬ／Ｊにおいて、ＩＦＮτの消化器（ｇａｓｔｒｉｃ）投与が血中ＯＡＳ活性の誘導に及ぼす効果を示す。全ての試験マウスにＩＦＮτ（１０５Ｕ）を経口で処置した。コントロールマウスに、ＩＦＮτを含まない１０％マルトース溶液を経口的に与えた。各々のバーは、２回実施した実験（同様の結果）のうちの１つの実験（マウス３〜５匹）の平均±Ｓ．Ｅ．を表す。図３に見られるように、ＩＦＮτの経口投与後、全ての系統のマウスにおいてＯＡＳ活性のレベルが増加したが、増加の程度は系統により変動した。ＩＣＲマウス、Ｃ５７ＢＬ／９マウスおよびＮＺＷ／Ｎマウスに誘導した活性レベルは、ＢＡＬＢ／ｃマウスおよびＳＪＬ／Ｊマウスにおけるレベルより高かった。
【００４８】
別の研究において、ＩＦＮτの投与後、ＯＡＳ活性を時間の関数としてモニタリングした。この研究では、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）の投与前、動物（ＩＣＲマウス）を６時間絶食させた（水有り餌無し）。ＩＦＮτ投与の８時間後、１６時間後、および２４時間後に血液をサンプリングした。結果を図４Ａに示す。
【００４９】
図４Ａは血中ＯＡＳレベルを示し、ＩＦＮτの投与後に記載した時間の間隔を空けて採取した血液試料における、生理食塩水／１０％マルトースビヒクルで処置したコントロールマウスに対する百分率として表す。図４Ａにおいて、各々のバーは、２回行った実験（同様の結果）のうちの１つの実験（マウス３匹）の平均±Ｓ．Ｅ．を表す。全血中のＯＡＳ活性は、経口注入であれ腹腔内注射であれ、経路に関わらず、時間依存的様式で増加した。しかしながら、経口投与の２４時間後、腹腔内注射よりも高いレベルを観察した。
【００５０】
別の研究において、様々な濃度のＩＦＮτ（０Ｕ、１０２Ｕ、１０３Ｕ、１０４Ｕおよび１０５Ｕ）を、６時間絶食させた後のマウスに与えた。２４時間後に採血し、そしてＯＡＳレベルをアッセイした。結果を図４Ｂに示す。
【００５１】
図４Ｂは血中ＯＡＳ濃度を示し、０Ｕ、１０２Ｕ、１０３Ｕ、１０４Ｕ、および１０５Ｕの濃度でのＩＦＮτの送達の２４時間後の、コントロールマウスに対するパーセンテージとして表している。各バーは、２回行った実験（同様の結果）のうちの１つの実験（マウス３匹）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。腹腔内注射後、低投与量（１０２Ｕ）で活性量は幾分高くなり、より高投与量のＩＦＮ−τ（１０４Ｕおよび１０５Ｕ）で飽和状態に達した。反対に、経口投与後の活性量は、用量に依存して増加した。
【００５２】
図４Ａ〜４Ｂの結果は、経口投与したＩＦＮ−τが、腹腔内注射により誘導されたレベルの血中ＯＡＳ活性も、より高いレベルの血中ＯＡＳ活性を誘導することを示している。特に、ＩＦＮ−τの投薬量が約１０３Ｕを超え、そして投与後の時間が約８時間を超える場合に、経口的に誘導された血中ＯＡＳレベルは腹腔内注射によって誘導されたＯＡＳレベルよりも高かった。
【００５３】
別の研究において、マウスにおいて、ＩＦＮ−τによる血中ＯＡＳ誘導に対する絶食状態の効果を評価した。この研究において、マウスに６時間、規定した給餌給水摂取レジメンに供した。６時間のレジメンの後、１０４ＵのＩＦＮτを、餌および水と共に経口胃管栄養法投与によるか、または腹腔内注射により投与した。摂取レジメンは以下の通りである：ケースＩ、餌も水も与えなかった；ケースＩＩ、水は与えたが餌は与えなかった；ケースＩＩＩ、餌のみを与えた；ケースＩＶ、餌と水の両方を与えた。２４時間目に心臓から全血を採取し、そしてＯＡＳ活性レベルを測定した。これらの結果を図５Ａ〜５Ｄに示す。
【００５４】
図５Ａ〜５Ｄは、それぞれ、上記段落中に規定したケースＩ〜ケースＩＶの給餌給水摂取レジメンに供されたマウスに対応する。図５Ａ〜５Ｄの結果は、インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する、パーセンテージとして表した血中ＯＳＡの誘導を示す。餌を与えなかったマウスを示す図５Ａおよび図５Ｂにおいて最も理解されるように、これらの結果は絶食状態の被験体へのＩＦＮ−τの経口投与によって、より高濃度の血中ＯＡＳが誘導されることを示す。
【００５５】
この研究では、水の供与が有る場合も無い場合も、ほぼ同量の餌が摂取されることが観察された。しかし、餌を与えた場合の水の摂取（ケースＩＩＩおよびケースＩＶ）よりも餌を与えなかった場合の水の摂取（ケースＩおよびケースＩＩ）が少なかった。一部の動物において、６時間の断食後、青色色素を含む０．２ｍＬマルトース溶液を経口的に与え、胃および腸におけるこの色素の分布を調べた（データは示さず）。餌を摂取後（ケースＩＩＩおよびケースＩＶ）、マウスの胃は膨張し、色素は主に胃に局在していた。これは恐らく餌が色素を吸収したためである。しかし、餌を摂取しなかった場合、色素は迅速に腸へ移行する。この所見は、経口摂取されたＩＦＮτは腸内で効果を発揮して、血液中で高いＯＡＳ活性レベルを誘導し得ることを示唆する。
【００５６】
血中ＯＡＳレベルに対するＭｕＩＦＮ−αの経口投与の効果を測定するため、比較研究を行った。この研究では、経口経路または腹腔内経路のいずれかによって、様々な濃度（０ＩＵ、１０２ＩＵ、１０３ＩＵおよび１０４ＩＵ）のＭｕＩＦＮ−αでＩＣＲマウスを処理した。ＭｕＩＦＮ−α投与の１６時間後に得た血中のＯＡＳ活性をアッセイした。これらの結果を図６に示す。ここで、各バーは、２回行った実験（同様の結果であった）のうちの１つ（マウス３匹）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。
【００５７】
図６は、経口的にかまたは腹腔内注射によって与えたＭｕＩＦＮα（０ＩＵ、１０２ＩＵ、１０３ＩＵおよび１０４ＩＵ）投与後の、血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフであり、コントロールマウスに対するパーセンテージとして表す。いずれの投与経路によるものでも、ＯＡＳ活性レベルは用量依存的に増加し、腹腔内注射は経口投与よりも血中ＯＡＳ活性においてより良好な誘導性を生じた。この結果は、ＩＦＮτの腹腔内注射よりもＩＦＮτの経口投与の方がより高い血中ＯＡＳレベルを達成した、ＩＦＮτで観察された結果と相反する。さらに、ＭｕＩＦＮαを投与した場合、マウスの体温はわずかに上昇したが、ＩＦＮτを使用した場合は上昇しなかった（データは示さず）。
【００５８】
図１〜６で提示したデータは、腸管へ投与したＩＦＮτが生体内でＯＡＳ応答を誘導するか、または上方制御するという証拠を示す。ＩＦＮτの経口投与は以前に文献にて報告されているが（例えば、ＷＯ９６／２８１８３を参照のこと）、この非内在性インターフェロンが経口投与の際にＯＡＳ反応を誘導し得ることを示した研究はない。本研究では、ＩＦＮτを口腔粘膜に接触させずに直接腸管内へ投与し、これによって口腔咽頭（ｏｒｏｐｈａｒｅｎｇｙｌ）領域内でのあらゆる吸収を除外した。口腔粘膜を通じて吸収されたＩＦＮτと比較して、ＩＦＮτの胃からの直接吸収は、特にＩＦＮτの長期にわたる投与の場合、ＩＦＮτに対する抗体の形成が減少させる。
【００５９】
（２．Ｃ型肝炎を患うヒトへの投与）
研究のため、Ｃ型肝炎に感染したヒト被験体を集めた。経口的なＩＦＮτ（配列番号４）での処置のため、患者を４つの試験グループに分けた。実施例４に記載したように、試験グループの各被験体は、調節された量のＩＦＮτの１ｍｇ／ｍＬ溶液を毎日３回自己投薬した。試験グループＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶの患者は、１日の投与量合計が、それぞれ１ｍｇ、３ｍｇ、９ｍｇ、および１５ｍｇのＩＦＮτを受けた。患者は決められた間隔で臨床試験に戻り、以下についての分析用血液サンプルを提供した：（ｉ）（ａ）血清中および（ｂ）末梢血単核細胞中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベル；（ｉｉ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル；および（ｉｉｉ）ウイルス力価レベル（１ｍＬ当りのＣ型肝炎ウイルスＲＮＡ複製物）。
【００６０】
各テストグループの数人の被験体についての結果を下記の表３〜５に示し、図７〜８に図示する。表３Ａ〜３Ｂは、０．３３ｍｇのＩＦＮτを１日３回経口的に処置した投与グループＩの６人の患者のデータを示す。血清中２−５ＯＡＳレベル（ｐｍｏｌ／ｄＬ）を、「２−５Ａ（血清）」と識別した列に表示する。ＰＡＢ／００１およびＪＲＪ／００６という、２人の被験体は、血中ＯＡＳレベルの増加を示さなかった。他の４人の被験体は、血中ＯＡＳレベルが測定可能に増加され、ＭＳＭ／００２およびＬＥＲ／００４と識別される被験体は著しい増加を示した。被験体ＭＳＭ／００２は、１１．０ｐｍｏｌ／ｄＬの基底ＯＡＳレベルを有した。試験１５日目までに、これは５１．５（４倍を超える）に増加した。被験体Ｚ−Ｉ／００５は、４３．４ｐｍｏｌ／ｄＬの基底ＯＡＳレベルを有した。このＯＡＳレベルを増加させると、試験２９日目までに７４．８ｐｍｏｌ／ｄＬに達した。
【００６１】
表４は、１ｍｇのＩＦＮτを１日３回処置した投与グループＩＩの３人の被験体についてのデータを示す。患者ＡＭＣ／００７および患者ＤＢＦ／０１２はＩＦＮτ処置に応答し、血中ＯＡＳレベルを有意に増加させた。例えば、患者ＡＭＣ／００７は、１１．２ｐｍｏｌ／ｄＬの基底ＯＡＳレベルを有した。このＯＡＳレベルは２９日間の最初の処置にわたって着実に増加し、試験２９日目に最大１２０ｐｍｏｌ／ｄＬを測定した。ＯＡＳレベルは試験の７１日間を通じて、基底濃度の４倍を超えたままであった。患者ＤＢＦ／０１２では、処理前、２８．８ｐｍｏｌ／ｄＬの開始ＯＡＳレベルを有した。このレベルは７１日の処置期間にわたって増加および減少し、１５日目と７１日目に１００ｐｍｏｌ／ｄＬを超える高い測定値であった。８日目から７１日目の間に少なくとも１．５倍の増加が見られた。
【００６２】
表５は、３ｍｇのＩＦＮτで１日３回処置した投与グループＩＩの３人の被験体についてのデータを示す。血中ＯＡＳの基底レベルを研究した日に取った。被験体ＣＬＲ／０１１は、の反応は、血中ＯＡＳレベルの増加に関して、わずかな応答を有した。試験２９日目に、被験体ＨＣＭ／０１０は、血中ＯＡＳレベル濃度の約１．５倍の増加を示し、そして被験体ＶＣＣ／００９は、血中ＯＡＳレベルの４倍以上増加させた。
【００６３】
表３〜５中のデータは、ウイルス性Ｃ型肝炎を患う個人の、経口的ＩＦＮτに対する様々な応答を例示する。多数の患者が血中ＯＡＳレベルを増加させ、代表的には開始基底レベルに対して、血中ＯＡＳの１．５倍増加させ、しばしば２倍増加させ、そして一部の場合、４倍増加させた。各々の患者における応答は多数の要因に依存しており、これらには感染の状態および処置に対する個人の生体応答が挙げられる。
【００６４】
従って、本発明は、処置を必要とする被験体にＩＦＮτを経口投与することを企図し、ここでＩＦＮτの初期用量は、この特定の患者に対して血中ＯＡＳレベルの増加を達成するよう選択される。このＩＦＮτは、患者の腸管を標的とする形態で投与され、口腔ではない。投薬量の選択は、例えば処置前および処置開始後に、例えば血中ＯＡＳレベルまたはＯＡＳのｍＲＮＡレベルをモニタリングすることによって、なされ得るかまたは確認され得る。あるいは、様々な疾患状態下での、所定の投与に対するモデル患者の応答から、有効量を前もって決定し得る。例えば、所定の年齢範囲内であり、特定の状態（例えば、ＨＣＶ感染あるいはＭＳ）を患う患者について、様々な初期ＩＦＮ−τレベルに応答した血中ＯＡＳにおける変化をモニタリングして、この年齢／疾患プロフィールを有する患者についての適切な用量を前もって決定し得る。そしてこのような用量指針を、処置を行う医師に提供し得る。本発明の一局面は、ＩＦＮ−τの腸管への標的化に適した経口送達形態のＩＦＮ−τ（例えば、ＩＦＮ−τの腸溶性コーティングされた形態物）、および様々な患者の状態の下での有効な用量、即ち、ＯＡＳ血中レベルの測定可能な増加を生じるのに有効な用量についての指針を提供する製品情報文献あるいは挿入物を備える、ＩＦＮ−τ治療キットが含まれる。好ましくは、この挿入物は、用量の範囲およびＯＡＳ応答における予期される初期変化を提供する。
【００６５】
初回投与後、あるいは血中ＯＡＳレベルの測定可能な増加を生じる用量（有効用量）に達する場合、有効用量のＩＦＮτの投与を、長期の処置期間の間、好ましくは毎日基準または週に数回の基準で継続する。長期基準で投与される有効用量は、血中ＯＡＳの初期の測定可能な増加を生じるのに有効な用量であり、この継続する有効用量が初期有効量と同じであれ、または異なる場合であれ、長期の処置期間にわたって実際の血中ＯＡＳレベルの挙動とは無関係である。従って、被験体が、血中ＯＡＳレベルの初期の測定可能な増加を生じさせるのに有効な量のＩＦＮτを受け続けても、処置期間中に血中ＯＡＳレベルは上昇したレベルに留まり得るか、増加を続け得るか、または（例えば、感染しているウイルスレベルの減少に応答して）減少すらし得る。この有効用量は代表的には、１日当たり１０５〜１０１０単位の間のＩＦＮτであり、そして所望する血中ＯＡＳの初期増加（例えば、通常の非処置の場合の濃度の１．５倍〜４倍）を達成するよう調整され得る。
【００６６】
図７〜８は、この研究の患者の内の数人についての、ウイルス力価およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルに関するデータを表す。アラニンアミノトランスフェラーゼは、アラニンのγケト基の、ケトグルタラートのγケト基への転移を触媒して、オキザロ酢酸およびピルビン酸の形成を導く血清酵素である。ＡＬＴは本来肝臓内に見出され、そして肝臓疾患（例えば、Ｃ型肝炎）に罹患した被験体は、血中のＡＬＴレベルを上昇させる（ＨＡＲＲＩＳＯＮ’Ｓ ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＯＦ ＩＮＴＥＲＮＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ，Ｗｉｌｓｏｎら編、第１２版、第９巻、１３０９頁（１９９１））。健常人は、血清ＡＬＴレベル約１〜４５Ｕ／Ｌを有する。図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８ユニット（０．３３ｍｇを１日３回）のＩＦＮτの経口投与後の、投与グループＩの３人の被験体（ＰＡＢ／００１（図７Ａ）、ＭＳＭ／００２（図７Ｂ）およびＤＭＡ／００３（図７Ｃ））のＣ型肝炎（ＨＣＶ）ＲＮＡウイルス力価（影付き棒グラフ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル（ひし形）を示す。患者ＭＳＭ／００２のＡＬＴ濃度および患者ＤＭＡ／００３のＡＬＴ濃度（図７Ｂおよび７Ｃ）は、１６９日の処理期間にわたって連続的に減少した。患者ＰＡＢ／００１（図７Ａ）は、ＡＬＴ血中レベルは、ＩＦＮτ処置の結果、部分的に増加しながらより変動性を示したが、全般的に下降した。
【００６７】
図８Ａ〜８Ｂは、１日当たり１．５×１０９単位（１．０ｍｇを１日３回）の経口的ＩＦＮτで処置した投与グループＩＩの患者ＡＭＣ／００７（図８Ａ）およびＶＣＣ／００９（図８Ｂ）における、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを示す。この２人の被験体の反応は異なり、ＶＣＣ／００９は処置第一週でＡＬＴの初期増加を示し、次いで約８日目から１１３日目までＡＬＴレベルは連続的な下降を示した。
【００６８】
一部の患者および一部の状態に対して他の治療薬と併用したＩＦＮτ投与が企図されることが理解される。例えば、他の公知の肝炎抗ウイルス剤とＩＦＮτとを併用して、一部の患者において有益となり得る。より一般的には、ＩＦＮτと任意の公知の医薬品との併用が企図される。
【００６９】
（３．研究的アレルギー性脳脊髄炎を患うマウスへのＩＦＮτの投与）
自己免疫疾患処置のためのＩＦＮτの経口投与を、多発性硬化症のための認知されるモデルを使用して、別の研究で例証した。この研究では、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ；Ｚａｍｖｉｌ，Ｓ．Ｓ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：５７９−６２１（１９９０））を患うげっ歯類動物（抗原誘導性自己免疫の動物モデル）における応答を評価することによって、一般の自己免疫疾患を処置する際のＩＦＮτの有効性を評価する。ＥＡＥは、臨床的兆候および病理的兆候の両方においてヒト多発性硬化症（ＭＳ）に類似しており、従って、ＭＳのようなヒト自己免疫疾患のための処置を評価するために使用され得る。ＥＡＥは、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）あるいは脳炎誘発性ペプチドフラグメントを用いて、感受性のマウス、ラットまたはモルモットを免疫することによって誘導される、Ｔ細胞媒介性の炎症性自己免疫性脱髄性疾患である。これらのモデル動物の系統における遺伝性の感受性は、脳炎誘発性ペプチドが特定のクラスＩＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣ−ＩＩ）分子に結合する能力に一部基づく（Ｆｒｉｔｚ，Ｒ．Ｂ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０（３）：１０２４−１０２６（１９８３）；Ｗｒａｉｔｈ，Ｄ．Ｃ．ら、Ｃｅｌｌ ５９：２４７（１９８９））。特にＨ−２ｕハプロタイプを持つマウスはＥＡＥに罹りやすい。感受性マウス系統としては、ＰＬ／Ｊマウス（Ｋｌｅｉｎ，Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ １７：５５３（１９８３））、（ＰＬ／Ｊ×ＳＪＬ）Ｆ１マウス（Ｚａｍｖｉｌ．，Ｓ．Ｓ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，８：５７９−６２１（１９９０）；Ｗｒａｉｔｈら、１９８９）、Ｂ１０．ＰＬマウス（Ｆｉｇｕｅｒｏ，Ｆ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ １５（４）：３９９−４０４（１９８２））、ＮＺＷマウス（Ｋｏｔｚｉｎ，Ｂ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２６５：１２３７（１９８７））、および（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１マウス（Ｋｏｔｚｉｎ，Ｂ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２６５：１２３７（１９８７））が挙げられる。
【００７０】
本発明を支持しておこなわれ、そして以下に詳説される研究は、ＩＦＮτを用いた処置より利益を受ける疾患あるいは疾患状態の処置に関して、経口投与したＩＦＮτ組成物が、注入したＩＦＮτ組成物に匹敵する効力であることを示す。経口投与したＩＦＮτは、ＩＦＮτ処置より利益を受ける疾患（ＥＡＥ）を処置するのに有効であるだけではなく、注入したＩＦＮτ組成物での処置と比較して、経口経路の投与は予期せぬ利点をもたらした。例えば、経口投与したＩＦＮτは、処置された個人の血清中の抗ＩＦＮτ抗体レベルが有意により低くなった。このことは、有益である。なぜなら、経口投与したＩＦＮτが、これにより、宿主の免疫反応によって無効にさせられる（例えば、治療および／または用量レベルに対する脱感作が有意に低下される）可能性がより低く、そして処置を受けた個人は、この免疫応答の結果としての副作用に苦しむ可能性が、より低いからである。
【００７１】
これらの知見および関係する知見を実証する実験結果を以下に提示する。
【００７２】
（ａ．経口投与したＩＦＮτはＥＡＥの発症を抑制する）
実施例５に記載したように、経口投与したＩＦＮτおよび注入したＩＦＮτが、ＥＡＥの誘発を予防する能力に関して試験した。ニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）マウスをウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）で免疫することによって、ＥＡＥを誘発させた。実験的なアレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘発するため、レシピエントＮＺＷマウスに、ウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）で免疫する４８時間前、免疫当日、および免疫の４８時間後に、腹腔内注射または経口摂食のいずれかによってＯｖＩＦＮτを与えた。
【００７３】
ＯｖＩＦＮτの経口摂食および腹腔内注射の双方とも、ＥＡＥに対して防いだ（実施例５、表６）。腹腔内注射によりＩＦＮτを与えた全ての動物、および経口的にＩＦＮτを与えた動物９匹の内７匹において、ＥＡＥの症状より防いだ。さらに、抗ＯｖＩＦＮτモノクローナル抗体ＨＬ１２７は、部分的にＯｖＩＦＮτのＥＡＥをブロックする能力を中和するのに有効であった。これらの研究は、経口投与したＩＦＮτがＥＡＥ（多発性硬化症の動物モデル）の症状を処置するのに有効であることを実証する。
【００７４】
（ｂ．ＯｖＩＦＮτは、経口投与後血清中に存在する）
経口投与したＩＦＮτが循環系に入ることを確認するため、実施例６に記載したように細胞障害作用（抗ウイルス）アッセイ（Ｆａｍｉｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７８：３８７（１９８１））を使用して、腹腔内注射または経口投与によってＩＦＮτを受けたマウスの血清を、ＩＦＮτの存在について試験した。
【００７５】
結果を図９に示す。比活性は、ＭＤＢＫ細胞を使用する抗ウイルスアッセイから得たタンパク質１ｍｇ当たりの抗ウイルス単位で表す。ＯｖＩＦＮτは、２００Ｕ／ｍｌのレベルで、経口摂食（塗りつぶされたバー）後２時間まで検出した。これらのデータは、経口投与したＩＦＮτは循環系に入り、そして投与された後約２時間血清中に残留することを示している。
【００７６】
（ｃ．経口投与したＯｖＩＦＮτ由来の毒性の欠如）
Ｉ型ＩＦＮのＩＦＮαおよびＩＦＮβが、治療薬としてヒトに使用される場合、インフルエンザ様症状、発熱、嘔吐感および倦怠感として表れる毒性副作用を誘発することが以前に示されている（Ｄｅｇｒｅ，Ｍ．、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １４：６９９（１９７４）；Ｆｅｎｔ，Ｋ．およびＧ．Ｚｂｉｎｄｅｎ、Ｔｒｎｄｓ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５６：１−２６（１９８７））。対照的に、ＯｖＩＦＮτは、インビトロおよびインビボの双方で、毒性についての注目すべき欠如を呈する。本発明の支持として行った研究により、経口摂食により与えた場合の、末梢血液中のリンパ球の減少によって測定する、毒性の誘導に関してＯｖＩＦＮτとＩＦＮαおよびＩＦＮβとを比較した。尾から血液を得、血球計算板を使用して白血球細胞（ＷＢＣ）数を計数した。ライト−ギムザ染色した血球スミアに基づいて、差示的なＷＢＣ計数を行った。
【００７７】
結果を表１Ａ、１Ｂおよび１Ｃに示す。ＩＦＮαまたはＩＦＮβのいずれかを摂取したマウスにおいて、著しい毒性レベルを検出したが、１０５Ｕ、２×１０５Ｕもしくは５×１０５ＵのＯｖＩＦＮτ、またはＰＢＳ単独を摂取させたマウスではリンパ球の顕著な減少は検出されなかった。これらの結果は、経口投与したＯｖＩＦＮτは、他のＩ型ＩＦＮに対して毒性がかなり低いことを示唆している。
【００７８】
【表１Ａ】
【００７９】
【表１Ｂ】
【００８０】
【表１Ｃ】
（ｄ．ＯｖＩＦＮτはＥＡＥの慢性再発を抑制する）
ＥＡＥに関係する症状の発生を予防することに加えて、経口投与したＯｖＩＦＮτは、実施例７で詳述するように、ＥＡＥの慢性再発モデルにおいて麻痺を予防する。ＯｖＩＦＮτ処置を受けない、（ＥＡＥを誘発するため）ＭＢＰで免疫したマウス５／５が慢性再発性麻痺を発症したが、ＯｖＩＦＮτ（腹腔内注射あるいは経口摂取のいずれかを４８時間ごとに投与）で処置したマウス４／５では、疾患からが完全に抑制された（図１０Ｂおよび１０Ｃ）。これらのデータは、上記の結果をさらに支持するものであり、そしてＩＦＮτの経口投与が、慢性再発性ＥＡＥの発症をブロックし得ることを示唆する。またこれらの研究は、長期間にわたる４８時間ごとに一回の頻度でのＩＦＮτの経口的投与が、ＩＦＮτによる処置に応答性の疾患状態を処置するのに、腹腔内注射と同程度に有効であることを示唆する。
【００８１】
（ｅ．ＩＦＮτ経口投与後の、ＥＡＥマウス由来の脊髄の組織学的分析）
脊髄白質部のリンパ球病変として中枢神経系（ＣＮＳ）に現れる、ＥＡＥについての細胞性の結果に対するＯｖＩＦＮτ処置の効果を分析することによって、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥを予防する能力を分析した。リンパ球のＣＮＳ内への浸潤の範囲の病変を示す。ＭＢＰ免疫化マウスを、実施例８に記載したように、ＯｖＩＦＮτ処置をしない（コントロール）か、または経口経路もしくは腹腔内経路によるＯｖＩＦＮτ処置するかのいずれかを行い、そして腰部脊髄の切片を染色してリンパ球について評価した。組織切片の顕微鏡写真を図１１Ａ〜１１Ｃに示す。コントロール動物の脊髄白質にリンパ球病変が存在する（図１１Ａ）が、腹腔内注射（図１１Ｂ）によっても経口摂取（図１１Ｃ）によっても、ＯｖＩＦＮτで処置したマウスでは存在しなかった。これらのデータは、ＩＦＮτの保護効果が、リンパ球のＣＮＳへの浸潤抑制に関係することを示す。さらにこれらのデータは、ＩＦＮτ処置が単に症状を覆い隠すのではなく、自己免疫疾患の細胞性発現を抑制することを実証する。
【００８２】
（ｆ．ＯｖＩＦＮτを用いた処置の停止は、再発性麻痺を生じる）
実施例１０は、ＭＢＰを注射したマウスにおいてＥＡＥを予防するのに効果的な処置の形態および持続期間を決定するために行った研究を記載し、そしてその結果を図１３に示す。処置の継続の間（実施例１０では５８日間）、腹腔内注射または経口摂取を介してＯｖＩＦＮτ処理すること（４８時間ごと）によって、このマウスはＥＡＥから保護された。しかし、ＯｖＩＦＮτ処理を停止した後に疾患症状を発症した（図１３）。これらの結果は、ＩＦＮτがＥＡＥ様の自己免疫疾患（例えば、ＭＳ）を治癒することはできないが、処置を継続する限り、このＩＦＮτがその状態の病理的発現を抑制する有効な処置であることを示す。
【００８３】
（ｇ．ＯｖＩＦＮを経口投与は抗ＯｖＩＦＮ抗体を低減させる）
実施例１１で詳述するように、経口投与されるＩＦＮτ処置の１つの利点は（注射に対して）、経口治療を受けた個人における抗ＩＦＮτ抗体力価の低減である。ＯｖＩＦＮτ処置の解除後、各処置グループ由来のマウスから採血し、そして抗ＯｖＩＦＮτ抗体の存在についてＥＬＩＳＡによって血清を調べた。腹腔内注射によりＩＦＮτを受けたマウスは抗ＯｖＩＦＮτ抗体量を上昇させたが、経口摂取によりＩＦＮτを受けた動物は、ずっと低い抗ＩＦＮτ抗体力価（代表的には３分の１〜５分の１）を呈した。予想されたとおり、ＯｖＩＦＮτ処置を受けなかったマウスは抗ＯｖＩＦＮτ抗体を示さなかった。
【００８４】
また、ＯｖＩＦＮτが抗ウイルス活性を中和する能力について、ＭＤＢＫ細胞株を用いて血清を調べた。腹腔内注射したマウスの血清も、経口摂取したマウスの血清も、中和活性を持たなかった（表７）。これらの結果は、ＯｖＩＦＮτの経口摂取は、ＯｖＩＦＮτタンパク質に対する抗体応答を概ね回避することを示唆する。このように、経口処置した被験体において抗体反応が低減することによって、ＩＦＮτ治療についての免疫系関係性の有害な副作用の危険を低減させる。
【００８５】
（ＩＩＩ．使用方法）
第一の局面において、本発明は、インターフェロン治療に応答性の疾患または状態をヒト被験体において処置するための方法を提供する。「インターフェロン治療に応答性」状態とは、その状態の存在、進行または症状が、インターフェロン（特にＩ型インターフェロン、さらに具体的にはＩＦＮ−τ）の投与に基づき変更される状態である。ＩＦＮαまたはＩＦＮβを用いた処置に応答する状態はまた、ＩＦＮτを用いた処置に応答し得る。より好ましくは、インターフェロン治療に応答性の状態は、その状態の存在、進行または症状が、非経口経路（例えば、注射）で投与されたＩＦＮτによって緩和される。本明細中に記載される方法は、被験体の血中ＯＡＳレベルの増加によって証明される、治療に有効な量を、胃および／または小腸への投与のため、経口投与可能な形態でＩＦＮτを提供することを包含する。
【００８６】
ＩＦＮτは、抗ウイルス剤として、抗増殖剤として、および自己免疫疾患の処置において、生物学的活性を持つ（例えば、米国特許第５，９５８，４０２号；同第５，９４２，２２３号；同第６，０６０，４５０号；同第６，３７２，２０６号を参照する。これらは本明細中で参考として援用される）。従って、本発明は、注射により投与した場合にＩＦＮ−τに応答性の任意の状態の処置のための、ＩＦＮτの経口投与を企図する。本発明の方法を使用して処置し得る状態および疾患としては、自己免疫疾患、炎症性疾患、増殖性疾患、および増殖亢進性疾患、ならびに免疫学的媒介性の疾患が挙げられる。
【００８７】
（Ａ．免疫系障害の処置）
本発明の方法は、免疫系過敏症が関係する状態の処置に有益である。免疫系過敏症には４つの型がある（Ｃｌａｙｍａｎ，Ｃ．Ｂ．編、ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ ＥＮＣＹＣＬＯＰＥＤＩＡ ＯＦ ＭＥＤＩＣＩＮＥ，Ｒａｎｄｏｍ Ｈｏｕｓｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９９１））。Ｉ型過敏症、すなわち即時型過敏症／アナフィラキシー過敏症は、アレルゲン（例えば、花粉等）に応答した肥満細胞の脱顆粒に起因し、そして喘息、アレルギー性鼻炎（枯草熱）、蕁麻疹、アナフィラキーショック、およびアレルギー性質の他の疾病が含まれる。ＩＩ型過敏症、すなわち自己免疫過敏症は、自己体内細胞上での感知された「抗原」に対する抗体に起因する。ＩＩＩ型過敏症は、種々の組織に留まりそしてさらなる免疫応答を活性化し、そして血清疾患、アレルギー性肺胞炎、および追加ワクチン摂取後に時折形成される大腫張のような状態の原因である、抗原／抗体免疫複合体の形成に起因する。ＩＶ型過敏症は、感作したＴ細胞からのリンホカインの放出に起因し、この放出は炎症性反応を生じる。例としては、接触性皮膚炎、麻疹の発疹、および特定の化学物質に対する「アレルギー性」反応が含まれる。
【００８８】
一部の個人において、特定の状態が過敏症を生じる機構は全体的に十分には理解されていないが、遺伝的要因と外部要因との両方が関係している可能性がある。例えば、自己免疫障害に対する遺伝的素質を既に有する個人において、細菌、ウイルスまたは薬物は自己免疫応答を引き起こす役割を果たし得る。一部の型の過敏症の発生率は他のものに関連する場合があると示唆されている。例えば、特定の一般的なアレルギーを有する個人は、自己免疫障害により感受性であると提唱されている。
【００８９】
自己免疫障害は、特定の器官または組織に本質的に限定されるもの、および全身に影響を与えるものに、大まかにグループ分けされ得る。器官特異的障害（および影響を受ける臓器）の例としては、多発性硬化症（神経突起のミエリン被覆）、Ｉ型真性糖尿病（膵臓）、橋本甲状腺炎（甲状腺）、悪性貧血（胃）、アジソン病（副腎）、重症筋無力症（神経筋接合部のアセチルコリンレセプター）、リウマチ様関節炎（関節裏側）、ブドウ膜炎（眼）、乾癬（皮膚）、ギラン−バレー症候群（神経細胞）、およびグレーブス病（甲状腺）が挙げられる。全身性自己免疫疾患としては、全身性紅斑性狼瘡および皮膚筋炎が挙げられる。
【００９０】
過敏性障害の他の例としては、喘息、湿疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、その他湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、鼻炎、扁平苔癬、天疱瘡（Ｐｅｍｐｌｕｇｕｓ）、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、ブドウ膜炎（ｕｒｉｔｃａｒｉｓ）、血管性浮腫、脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）、紅斑、皮膚好酸球増加症、円形脱毛症、アテローム性動脈硬化症、原発胆汁性肝硬変、およびネフローゼ症候群が挙げられる。関係する疾患としては、炎症性腸疾患（例えば、セリアック病、直腸炎、好酸球増加胃腸炎、肥満細胞症、炎症性腸疾患、クローン病および潰瘍性大腸炎）、および食物関連アレルギーが挙げられる。
【００９１】
本発明の方法を使用した処置に特に感受性の自己免疫疾患としては、多発性硬化症、Ｉ型（インシュリン依存性）真性糖尿病、紅斑性狼瘡、筋萎縮性側索硬化症、クローン病、慢性関節リウマチ、口内炎、喘息、ブドウ膜炎、アレルギー、および乾癬が挙げられる。
【００９２】
本発明の方法を使用して、自己免疫障害（例えば、上記に考察されたもの）を治療的処置を行い、そしてこれによってその自己免疫障害を緩和する。自己免疫障害の処置は、多発性硬化症の動物モデルであるＥＡＥの処置に関して本明細書中に例証される。自己免疫障害を処置するために使用する場合、ＩＦＮτは、ＩＦＮτ投与の初期の間にＯＡＳの測定可能な増加を達成するのに十分な用量で投与される。一旦、所望する有効用量が達成されると、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化に関係なく、長期にわたって有効量のＩＦＮτで患者を処置する。処置期間は、少なくとも患者が症候性である期間にわたる。自己免疫状態に関連する症状が停止したら、投薬量を調整して下げ得るか、または処置を停止し得る。ＩＦＮτの処置期間中、患者は、他の薬剤（例えば、公知の抗炎症剤または免疫抑制剤）と共に同時処置され得る。
【００９３】
（Ｂ．ウイルス感染の処置）
また本発明の方法を使用して、ウイルス感染が関係する状態を処置する。ＩＦＮτの抗ウイルス活性は、ＩＦＮαが通常関係する毒性効果を伴うことなく幅広い治療的適用を有しており、そしてＩＦＮτは細胞に対する有害な効果を伴わずにその治療活性を発揮する。ＩＦＮτが細胞毒性を比較的持たないことは、インビボ治療薬剤としてこのＩＦＮτを非常に高く価値付け、そして大半の他の公知の抗ウイルス剤および他の全ての公知のインターフェロンから、ＩＦＮτを区別させる。
【００９４】
ウイルス複製を抑制するため、ＩＦＮτを含有する処方物を経口投与し得る。ウイルス感染を処置する使用のため、このタンパク質を、患者の血中ＯＡＳにおける測定可能な増加を達成するのに十分な用量で投与する。その後、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化（例えば、ウイルス負荷の低減に起因した血中ＯＡＳレベルの下降）とは無関係に、処置を有効用量で継続する。ＩＦＮτの投与を、ウイルス感染レベル（例えば、血中ウイルス力価あるいはウイルス感染に伴う症状の臨床的観察等から測定される）が低下するまで継続する。経口投与されるＩＦＮτによって処置し得る特定のウイルス疾患の例としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、非Ａ型肝炎、非Ｂ型肝炎、非Ｃ型肝炎、エプスタイン−バーウイルス感染、ＨＩＶ感染、ヘルペスウイルス（ＥＢ、ＣＭＬ、単純ヘルペス）、乳頭腫、ポックスウイルス、ピコルナウイルス、アデノウイルス、リノウイルス、ＨＴＬＶ Ｉ、ＨＴＬＶ ＩＩ、およびヒトロタウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。この治療期間の間、患者は、第二の抗ウイルス剤（例えば、ヌクレオチド類似体、アンチセンス薬剤など）と共に同時処置され得る。
【００９５】
（Ｃ．細胞増殖状態を処置するための方法）
別の実施形態において、本発明の方法は、過増殖によって特徴づけられる状態を治療するために企図される。ＩＦＮτは強力な抗細胞増殖活性を呈する。従って、調節されない細胞増殖を阻害、予防、あるいは遅延させるため、ＩＦＮτを経口投与することにより細胞増殖を阻害する方法が企図される。
【００９６】
ＩＦＮτを経口投与することによって処置され得る、特定の細胞増殖障害の例としては、ヘアリーセル白血病、カポジ肉腫、慢性骨髄白血病、多発性骨髄腫、表在性膀胱癌、皮膚癌（基底細胞癌腫および悪性黒色腫）、腎細胞癌腫、卵巣癌、軽度リンパ球性リンパ腫および皮膚性Ｔ細胞リンパ腫、ならびに神経膠腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９７】
細胞増殖状態を処置する使用のため、ＩＦＮτは、患者の血中ＯＡＳについの初期の測定可能な増加を達成するのに十分な用量で投与される。その後処置は、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化（例えば、体内の癌細胞の減少によるＯＡＳ血中レベルの下降）に関係なく、有効投与量で継続される。有効用量でのＩＦＮτの投与は、例えば、特定の組織における腫瘍の大きさまたは癌細胞の広がりによって測定される場合、所望する緩解レベルが観察されるまで継続される。この治療期間の間、患者は、第二の抗癌剤（例えば、シスプラチン、ドキソルビシン、またはタキソール）と共に同時処置され得る。
【００９８】
（Ｄ．組成物と投与量）
ＩＦＮτを含有する経口調製物は、薬学的組成物を調製するための公知の方法に従って処方され得る。一般に、ＩＦＮτ治療組成物は、この組成物の効果的な経口投与を容易にするため、有効投与量のＩＦＮτが、適切な添加剤、担体および／または賦形剤と混ぜられるように処方される。例えば、ＩＦＮτを含む錠剤およびカプセルは、薬学的に受容可能な担体（例えば、乳糖、コーンスターチ、微結晶セルロース、シュークロース）、結合剤（例えば、澱粉アルファ体、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン）、崩壊剤（例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム、デンプン、低度に置換されたヒドロキシプロピルセルロース）、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体）、酸化防止剤（例えば、Ｌ−システイン、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム）、および滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク）のような添加物とＩＦＮτ（例えば、凍結乾燥ＩＦＮτ）を組み合わせることによって調製され得る。
【００９９】
さらに本発明のＩＦＮτポリペプチドは、固形、粉状あるいはその他の担体（例えば、乳糖、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、ポテトデンプンおよびコーンスターチのようなデンプン、ミロペクチン（ｍｉｌｌｏｐｅｃｔｉｎｅ）、セルロース誘導体、またはゼラチン）と混合され得、そしてまた、錠剤形成に対して圧縮される、滑沢剤（例えば、マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム）、またはポリエチレングリコールのワックスを包含し得る。数層の担体または稀釈剤を用いることによって、徐放性に作動する錠剤を調製し得る。
【０１００】
経口投与のための液体調製物（例えば、約０．１〜約３０重量％のＩＦＮτ、糖、ならびにエタノール、水、グリセロール、プロピレン、グリコールおよび一般的な性質の他の可能性のある添加剤からなる混合物を含有する溶液）は、エリキシル、シロップ、あるいは懸濁液の形態で作製され得る。
【０１０１】
別の適切な処方物は、腸粘膜によって吸収されるまで胃および腸内で存続するようこのタンパク質を保護する、被包薬型投薬形態である。タンパク質のための被包薬型投薬形態は当分野で公知であり、そしてこれには、腸溶コーティングおよび／または粘膜接着性ポリマーコーティングが挙げられる。粘膜接着性ポリマー処方物の例示としては、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、カルボキシビニルポリマー、カルボマー等が挙げられる。ＩＦＮτの活性形態での腸管（特に小腸）への送達のため、経口摂取を介した胃への投与のために設計された投与形態が、企図される。あるいは、ＩＦＮτは、胃環境および／または腸環境に対する多少の保護作用を提供するために、高分子物質で安定化させるかまたは脂質もしくポリマー粒子でカプセル化したプロテアーゼインヒビターと共に同時投与され得る。
【０１０２】
経口活性ＩＦＮτ薬学的組成物は治療的有効量で処置を必要とする個体に投与される。投用量は著しく変動し得、障害の重篤度、患者の年齢および体重、その患者が受けている他の医学的処置などの要因に依存する。代表的には担当医がこの用量または投薬量を決定する。投薬量は代表的には約１×１０４単位／日〜１×１０１０単位／日の間となり、より好ましくは約５×１０８単位／日を超え、約１×１０９単位／日を超えることが好ましい。
【０１０３】
血漿中のＩＦＮτレベルが安定して上昇することが必要とされる疾患は、約２〜４時間ごとくらいの投与が有益となり、他の疾患（例えば、多発性硬化症）は、例えば、１日１回あるいは４８時間ごとに１回のより少ない頻度間隔で治療的有効用量を投与することによって効果的に処置され得る。個々の用量の投与割合は、代表的には、処置される疾患の重篤度を緩和しながら最低総投薬量の投与を可能とするよう担当医によって調整される。上記に考察されるように、この方法は、処置を必要とする患者に、第一の用量でＩＦＮτを経口投与し、この第一の投薬レベルに対する個々の被験体の応答を決定するための生物学的マーカーをモニタリングすることを企図する。モニタリングは血液採取およびマーカー（例えば、血液中のＯＡＳ酵素）の分析（例えば、放射免疫アッセイキットを使用して）を介して容易に行われ得る。また、モニタリングは、血液採取および細胞（例えば、血中リンパ球）中のＯＡＳ ｍＲＮＡ発現量の分析を介して行われ得る。従って、別の局面において、本発明は、ＩＦＮτに応答性の状態を患う者を処置する際に使用するためのキットを企図する。このキットは、ＩＦＮτ経口投与のために設計された１回以上の投薬量形態単位を収容する容器からなる第一部分、および、生物性マーカーをモニタリングするのに必要とされる構成要素（例えば、ＩＦＮτの血中ＯＡＳ酵素またはｍＲＮＡレベルを分析するのに必要とされる構成要素）からなる第二部分、を備える。
【０１０４】
一旦、患者の状態の改善が生じると、必要に応じて維持用量が投与される。続いて、投薬量もしくは投与の頻度、またはその両方を、症状の関数として、改善された状態が維持されるレベルに低減され得る。
【０１０５】
当然ながら、本発明に従ったＩＦＮτの経口投与は、他の治療と併用して使用され得るが、理解される。例えば、ＩＦＮτは、、自己免疫応答が指向される抗原の投与を付随され得る。例としては、多発性硬化症を処置するためのミエリン塩基性タンパク質とＩＦＮτとの共投与；慢性関節リウマチを処置するためのコラーゲンとＩＦＮτとの共投与、および重症筋無力症を処置するためのアセチルコリンレセプターポリペプチドとＩＦＮτとの共投与、が挙げられる。
【０１０６】
さらに、多発性硬化症のような自己免疫疾患を治療するために、公知の免疫抑制剤（例えば、ステロイド）と共に、ＩＦＮτは経口投与され得る。これら免疫抑制剤は、ＩＦＮτと共同的に作用し得、そしてＩＦＮτ単独または免疫抑制剤単独の等価用量で得られ得る処置効果よりも、より大きな処置効果をもたらし得る。
【０１０７】
同様に癌あるいはウイルス疾患に対する処置において、、えば、治療的有効量の１つ以上の化学治療薬（例えば、ブスルファン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ジドブジン（ＡＺＴ）、ロイコボリン、メルファラン、プレドニゾン、シクロホスファミド、ダカルバジン、シスプラチン、ジピリダモールなど）と併用して、ＩＦＮτが投与され得る。
【実施例】
【０１０８】
（ＩＶ．実施例）
以下の実施例は、本明細書中に記載される本発明をさらに例示するものであって、本発明の範囲を限定することは決して意図されない。
【０１０９】
（材料と方法）
（Ａ．ＩＦＮτの作製）
一実施形態において、標準分子学的方法（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９８８）を用いて、ＩＦＮτアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列の連続部分を含有するオリゴヌクレオチドを連結させることによって、合成ＩＦＮτ遺伝子を作製した。使用したＤＮＡ配列は配列番号１もしくは配列番号４、またはＩｍａｋａｗａら、１９８７で示されている配列のいずれかであり得る。得られたＩＦＮτポリヌクレオチドをコードする配列は、１６位〜５３１位にまたがり得、１７２アミノ酸のコーディング配列である。
【０１１０】
一実施形態において、完全長の合成遺伝子ＳｔｕＩ／ＳＳｔｌフラグメント（５４０ｂｐ）を改変ｐＩＮ ＩＩＩ ｏｍｐ−Ａ発現ベクター中にクローニングし得、そしてＥ．ｃｏｌｉのコンピテントなＳＢ２２１株を形質転換し得る。ＩＦＮτタンパク質発現のため、発現ベクターを保有する細胞を、アンピシリンを含有するＬブロスでＯＤ（５５０ｎｍ）０．１〜１に増殖させ、ＩＰＴＧ（イソプロピル−１−チオ−ｂ−Ｄ−ガラクトシド）で３時間誘導し、そして遠心分離によって収集した。超音波処理あるいは浸透分画によって、可溶性の組換えＩＦＮτを細胞から遊離させ得る。
【０１１１】
酵母での発現のため、ＳｔｕＩ制限部位およびＳａｃＩ制限部位をそれぞれ５’末端および３’末端に含有するＰＣＲプライマーを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂ．、１９８７年７月２８日発行の米国特許第４，６８３，２０２号、Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂ．ら、１９８７年７月２８日発行の米国特許第４，６８３，１９５号）を用いて、ＩＦＮ−τ遺伝子を増幅し得る。増幅した断片をＳｔｕＩおよびＳａｃＩＩで消化し、そしてｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ＋（ＫＳ）のＳａｃＩＩ部位およびＳｍａＩ部位にライゲーションして、ｐＢＳＹ−ＩＦＮτを作製した。プラスミドｐＢＳＹ−ＩＦＮτをＳａｃＩＩおよびＥｃｏＲＶで消化し、そして合成ＩＦＮ−τ遺伝子を含有するフラグメントを単離した。酵母発現ベクターｐＢＳ２４Ｕｂ（Ｅｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：７７１５−７７１９（１９８９））をＳａｌＩで消化した。Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼを使用して平滑末端を調製した。このベクターＤＮＡをフェノールで抽出し、そしてエタノール沈殿した（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））。回収したプラスミドをＳａｃＩＩで消化し、アガロース電気泳動によって精製し、そしてｐＢＳＹ−ＩＦＮ−τから単離したＳａｃＩＩ−ＥｃｏＲＶフラグメントにライゲーションした。得られた組換えプラスミドをｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτと名付けた。
【０１１２】
組換えプラスミドｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτをＥ．ｃｏｌｉに形質転換した。ＩＦＮ−τ挿入部を含有する組換えクローンを単離し、そして制限酵素分析によって同定した。ＩＦＮ−τをコードする配列をｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮ−τから単離し、そしてアルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ１）プロモーターを含有するＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）中にクローニングした。次にこのベクターを使用してＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ＧＳ１１５ Ｈｉｓ−宿主細胞を形質転換し、そして製造者の指示書に従ってタンパク質を発現させた。タンパク質は培地中に分泌され、そして連続したＤＥＡＥセルロースカラムクロマトグラフィーおよびヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーによって、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび銀染色によって決定する場合に電気泳動的に均一へと精製した。
【０１１３】
（Ｂ．抗ウイルス比活性を決定するための抗ウイルスアッセイ）
標準的な細胞変性効果アッセイ（Ｆａｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，７８：３８７−３９４（１９８１）；Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，３７：７５５−７５８（１９８１））を用いて抗ウイルス活性を測定した。概略を述べると、ＩＦＮτ稀釈物をＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙウシ腎（ＭＤＢＫ）細胞と共に３７℃で１６〜１８時間インキュベートした。インキュベーション後、攻撃物として水疱性口内炎ウイルスを使用する細胞変性効果アッセイにて、ウイルス複製の抑制を決定した。１抗ウイルス単位（Ｕ）は、単層破壊を５０％減少させた。本明細書中に記載される研究の大半で、ＩＦＮτは、１ｍｇタンパク質あたり約４．９×１０８抗ウイルス単位という比活性を有していた。
【０１１４】
（実施例１）
（マウスに経口投与および腹腔内投与したヒツジＩＦＮτを用いたＯＡＳの誘導）
ＩＦＮτ（１ｍｇタンパク質あたり４．９９×１０８単位；Ｐｅｐｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、またはＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｆａｃｉｌｉｔｙ，Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＮＥ−Ｌｉｎｃｏｌｎ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ；配列番号４）を１０％マルトース溶液に溶解して、ＩＦＮτ溶液を調製した。本発明ではＩＦＮτ（配列番号２）の使用も企図する。２００μｌのＩＦＮτ溶液を、２０ゲージのディスポーザブル経口ゾンデ（Ｆｕｃｈｉｇａｍｉ，Ｋｙｏｔｏ）を使用してＩＣＲマウス（平均体重約３０ｇ、６週齢、メス）に経口投与し、胃の上部へ直接注入した（消化器投与；ＧＡ）。
【０１１５】
腹腔内投与（ｉ．ｐ．）には、１００μｌのＩＦＮτ溶液を使用した。胃の上部へのサンプルの注入を、色素を投与することによって確認した。投与して２４時間後に、このマウスをネンブタールで麻酔した。このマウスの心臓から血液を採取し、そして２−５Ａ ＲＩＡキット（Ｅｉｋｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｔｏｋｙｏ；Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，９：７１５−７１９（１９８９））によって全血中のＯＡＳ活性を決定した。
【０１１６】
これらの結果を図１に示す。
【０１１７】
（実施例２）
（マウスへのＩＦＮτ経口投与による、用量依存的ＯＡＳ誘導）
実施例１と同じ手順を用いて、０単位、１０３単位、１０４単位、または１０５単位のＩＦＮτをＩＣＲマウスに経口投与した。経口投与して２４時間後に、このマウスの心臓から全血を採取し、全血中のＯＡＳ活性を決定した。これらの結果を図２に示す。
【０１１８】
（実施例３）
（マウスへのＩＦＮτ投与）
病原体を持たない５週齢メスのＩＣＲ系統マウス、ＢＡＬＢ／ｃ系統マウス、Ｃ５７ＢＬ／９系統マウス、ＮＺＷ／Ｎ系統マウス、およびＳＪＬ／Ｊ系統マウスを、Ｊａｐａｎ ＳＬＣ．Ｉｎｃ．，Ｈａｍａｍａｔｓｕから購入した。これらのマウスは実験前１週間、研究室にて飼育した。
【０１１９】
本明細書中に配列番号３と同定される配列を有する組換えヒツジＩＦＮ−τ（ＩＦＮ−」τ）を入手した（Ｐｅｐｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）。この研究で使用した調製物は、ＶＳＶを用いてチャレンジしたＭＤＢＫ細胞において分析し、そしてヒトＩＦＮ−αに対して標準化した場合、１ｍｇタンパク質あたり５×１０８単位（Ｕ）の比活性を有した。天然のマウスＩＦＮ−α（ＭｕＩＦＮ−α）をＳｕｍｉｔｏｍｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）から調達し、その比活性は１ｍｇタンパク質あたり１×１０８国際単位（ＩＵ）であった。
【０１２０】
マウスへの投与のため、ＩＦＮ−τを、１０％マルトースを含有する溶液に溶解した。経口（ｐ．ｏ．）処置または腹腔内（ｉ．ｐ．）注射のいずれかによって、０．２ｍｌのサンプルをマウス（６週齢メス）に投与した。経口的に与える場合、２０ゲージ経口摂取用ニードルを用いて、サンプルを直接胃の上部へ導入した。投与の前に６時間（午後１時に始めて午後７時に終了した）、マウスから食餌と飲料の両方を絶った。絶食の後、経口経路または腹腔内経路のいずれかによってＩＦＮτを投与し、６時間目に食餌と飲料を与えた。次いで２４時間目に心臓から全血を採取した。
【０１２１】
Ｅｉｋｅｎの２−５Ａ ＲＩＡキットを用いて、全血中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）活性を測定した。稀釈した血液をポリＩ：Ｃ−アガロースゲルと混合し、ゲルを洗浄後ＡＴＰを加えた。そして産生した２−５ＡをＲＩＡ法（Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，９：７１５−７１９（１９８９））によってアッセイした。このアッセイは各試料につき２回行った。血中ＯＡＳレベル評価のため、少なくとも３匹のマウスを使用した。
【０１２２】
（実施例４）
（ヒト被験体におけるＩＦＮ−τの経口投与によるＡＬＴの減少、ＨＣＶウイルス力価の減少、およびＯＡＳ誘導）
（Ａ．ＩＦＮ−τの調製）
１日目に、冷蔵庫からＩＦＮτ（配列番号４）を１ビン取り出し、被験体は表２に従って正しい量の試験物質を自己投薬した。また、ＩＦＮτ（配列番号２）を調製して同様の様式で投与し得る。
【０１２３】
【表２】
（Ｂ．患者の投薬指示）
試験物質のバイアルおよび注射器は全て、２℃から８℃に維持した冷蔵庫内に保管した。医薬品を自己投薬する前に、患者はバイアル１つおよび注射器１つ冷蔵庫から取り出した。注射器先端のキャップをはずし、この注射器先端を医薬品容器内に入れ、臨床第１日目に指示された適切な容量を注射器内に吸い取った。
【０１２４】
注射器先端を口の中へ入れ、プランジャーを押して口内へと注射器内容物を空にした。次に被験体は試験物質を飲み込んだ。所望の場合、患者はグラス１杯の水を飲むことが許可された。患者は自分の日誌カードに、１用量の試験物質を投与した日付および時間を記入した。
【０１２５】
上記手順を１日３回、約８時間間隔（朝に１回、昼に１回そして晩に１回）で繰り返した。
【０１２６】
（Ｃ．結果）
１６９日の試験期間に渡って、規定の間隔で血液サンプルを採取した。２−５Ａ ＲＩＡキット（Ｅｉｋｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｔｏｋｙｏ）を使用して、このサンプルを、血清中および末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）中の２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルについて分析した。稀釈した血液をポリＩ：Ｃ−アガロースゲルと共に混合し、ゲルを洗浄後ＡＴＰを加え、ＲＩＡ法（Ｓｈｉｎｄｏ，Ｍ．ら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，９：７１５−７１９（１９８９））によって、産生した２−５Ａを測定した。このアッセイは各試料につき２回行った。また、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応を用いてＣ型肝炎ウイルスの力価も測定し、そしてアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清中濃度も測定した。
【０１２７】
各被験体についての結果を以下の表３〜５に示し、図７〜８にグラフ表示する。ヒツジＩＦＮ−τの経口投与後、ＯＡＳレベルの上昇と、ＡＬＴおよびウイルス力価の減少とを観察した。
【０１２８】
【表３Ａ】
【０１２９】
【表３Ｂ】
【０１３０】
【表４】
【０１３１】
【表５】
。
【０１３２】
（実施例５）
（経口投与したＯｖＩＦＮτは実験的アレルギー性脳脊髄炎の発症をブロックする）
レシピエントのニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）マウスに、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）誘発のためにウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）で免疫する４８時間前、免疫した当日、および免疫した４８時間後に、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによってＯｖＩＦＮτ（１０５Ｕ／ｍｌ）を与えた。１０５ＵのＩＦＮτをＰＢＳと混合して全量を１００μＬとし、食道を下降して胃内部に配置した給餌チューブを使用して投与した。ＩＦＮτのリン酸緩衝化生理食塩水への稀釈は、投与の直前に行った。
【０１３３】
ＮＺＷマウスにおけるＥＡＥ誘発のため、３００μｇのウシミエリン塩基性タンパク質（ｂＭＢＰ）を、８ｍｇ／ｍＬのＨ３７Ｒａ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，Ｄｉｆｃｏ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）を含有する完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に乳化し、そして尾の根元の一方の側に注射した。また、免疫した当日および４８時間後に、４００ｎｇの百日咳毒素（Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ＣＡ）も注射した。ＳＪＬ／ＪマウスのＥＡＥ誘発には、初回免疫後７日目に再免疫する点を除いて、同じプロトコルを記載したように用いた。ＥＡＥの兆候についてマウスを毎日調べ、疾患の重篤度を次の尺度に基づいて程度分けした。：
【０１３４】
【数３】
ＥＡＥの予防がＯｖＩＦＮτ処置に特異的であるかのどうかを決定するため、抗ＯｖＩＦＮτモノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ＨＬ１２７）を使用して、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥを妨げる能力を中和した（ＨＬ１２７抗体、配列番号２の１３９〜１７２番目のアミノ酸配列に対する抗体、ＭＤＢＫ細胞系を使用した抗ウイルスアッセイにおいてＯｖＩＦＮτの抗ウイルス活性を中和する）。腹腔内注射または経口摂取のいずれかによる投与前に、ＨＬ１２７の１：１０稀釈物をＯｖＩＦＮτと共に２時間インキュベートした。ＩＦＮτ抗原に対する抗体を、本明細書中の情報を抗体産生のための公知技術（例えば、Ｈａｒｌｏｗ，Ｅ．ら、ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：Ａ ＬＡＢＰＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８８））と組み合わせて使用して、調製し得る。
【０１３５】
結果を以下の表６に示す。ＩＦＮτの経口摂取と腹腔内注射のいずれもＥＡＥの急性誘発に対して防御した。腹腔内注射経由でＩＦＮτを与えた動物でＥＡＥの症状を発症するものは無かったが、ＯｖＩＦＮτを経口的に与えた動物に関しては、９匹中７匹（７８％）を防御した。抗ＯｖＩＦＮτ抗体ＨＬ１２７は、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥをブロックする能力を部分的に中和するのに有効であった。これらのデータは、多発性硬化症の動物モデルにおいて、経口投与したＩＦＮτが処置として有効であることを示す。
【０１３６】
【表６】
（実施例６）
（経口投与後の血清中のＯｖＩＦＮτの検出）
ＯｖＩＦＮτの経口摂取または腹腔内注射の後、マウス（上記のように処置した）の血清中に検出可能なＯｖＩＦＮτ量を時間経過とともに比較した。マウスに３×１０５ＵのＯｖＩＦＮτを投与し、ＩＦＮτ投与の０．５時間後、２時間後、４時間後、６時間後、２４時間後および４８時間後に採血した。サンプル中のＩＦＮτ量を決定するため、細胞変性効果（ウイルスプラーク）アッセイ（Ｆａｍｉｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７８：３８７（１９８１））において血清を試験した。
【０１３７】
概略を述べると、平底９６ウェルプレート内でコンフルエントまで増殖させたＭＤＢＫ細胞にＩＦＮτ稀釈物を加え、３７℃で１８〜２４時間培養した。室温で４５分間、このプレートに水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を加えた。ウイルスを除去し、メチルセルロースを加え、このプレートを３７℃で４８時間インキュベートした。メチルセルロースを除去後、プラークの視認化のため、プレートをクリスタルバイオレットで染色した。ＩＦＮの中和作用を測定するため、５００Ｕ／ｍＬ濃度のＯｖＩＦＮτを血清またはＨＬ１２７（ＯｖＩＦＮτに特異的なモノクローナル抗体）のいずれかと共に３７℃で１時間インキュベートした。１抗ウイルス単位は、ＶＳＶに感染させた未処理ＭＤＢＫ細胞（コントロールプレート）と比較して単層の破壊が５０％減少させた。アッセイ間の差異を除くため、全てのサンプルを同時にアッセイした。
【０１３８】
図９で示したように、経口摂取（塗りつぶされたバー）して０．５時間後および２時間後に、２００Ｕ／ｍＬのレベルでＯｖＩＦＮτを検出した。比較すると、腹腔内注射（白抜きのバー）後、２４時間にわたって幾分より高いレベルのＯｖＩＦＮτを検出した。これらのデータは、上記用量のＩＦＮτを、経口投与後約２時間、血清中にて検出し得ることを示す。
【０１３９】
（実施例７）
（ＯｖＩＦＮτの経口的投与による、実験的アレルギー性脳脊髄炎の慢性再発の予防）
ＥＡＥの慢性再発モデルを使用して、ＯｖＩＦＮτが麻痺を予防する能力を試験した。ここで、ＭＢＰで免疫したＳＪＬマウスは、再発緩和化様式で症状の出現が起る慢性型疾患を発症する（Ｚａｍｖｉｌ，Ｓ．Ｓ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：５７８−６２１（１９９０））。
【０１４０】
上記のように、ＳＪＬマウスでは基本的にＥＡＥが誘発された。このマウスを、免疫当日（０日目）およびその後の実験期間中４８時間ごとに、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによって、１０５ＵのＩＦＮτで処置した。結果を図１０Ａに示す。ＭＢＰで免疫したがＩＦＮτ処置を受けなかったＳＪＬマウスは、発病率５／５で慢性再発性麻痺を発症し、最大平均重篤度約２．５は、実験開始後１４日目に生じた。対照的に、腹腔内注射または経口摂取のいずれか（それぞれ、図１０Ｂ、図１０Ｃ）によるＯｖＩＦＮτでの処置は、ＥＡＥからの防御を生じた。両方のＩＦＮτ処置グループの発症率は、１匹／５匹に減少し、平均重篤度約１．０であった。これらのデータは、ＩＦＮτの経口投与が慢性再発性ＥＡＥの発症をブロックし得ることを示し、そして延長した期間にわたって約４８時間ごとにＩＦＮτを摂取させた場合、経口投与したＩＦＮτが腹腔内注射と同程度に有効であり得ることを示す。
【０１４１】
（実施例８）
（組織学的分析）
経口経路および腹腔内経路によってＯｖＩＦＮτで処置したＭＢＰ免疫マウスのＣＮＳ内に、リンパ球が浸潤する程度を判定するため、組織学的分析を行った。
【０１４２】
４％パラホルムアルデヒドでマウスを灌流し、脊柱を取り出して２〜３日間ホルマリンで処理した。脊髄を解剖して取り出し、０．５％のシュクロースに４℃で一晩浸漬した。脊髄切片を包埋し、ミクロトームで切片をカットした。４％パラホルムアルデヒド中に切片をスライドガラスに固定し、炎症性浸潤が目視できるようにクレージルバイオレットで染色した。
【０１４３】
結果を最終倍率２２２×で図１１Ａ〜１１Ｃに示す。コントロール脊髄の白質にリンパ性病変が存在した（図１１Ａ）。対照的に、腹腔内注射（図１１Ｂ）あるいは経口摂取（図１１Ｃ）によってＯｖＩＦＮτで処置したマウスにおいて、リンパ球浸潤を検出しなかった。これらのデータは、ＩＦＮτの防御効果がＣＮＳのリンパ球浸潤抑制に関係することを示す。
【０１４４】
（実施例９）
（ＯｖＩＦＮτ処置によるＩＬ−１０の誘導）
慢性再発性ＥＡＥの予防のためにＳＪＬをＯｖＩＦＮτ処置する過程の間に、マウスから採血し、そしてインターロイキン１０（ＩＬ−１０）の存在について血清を調べた。製造者の指示書に従ってＩＬ−１０ ＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を使用する固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）によって、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）を１回処置した（腹腔内注射または経口摂取によって）マウス、長期間ＩＦＮτ（１０５Ｕ）処置したマウス（腹腔内注射または経口摂取によって２０日を超える間）、または未処置マウスのいずれかに由来する血清を、ＩＬ−１０について試験した。全血清サンプルは２つ組で試験した。
【０１４５】
細胞増殖状態を処置する使用のため、患者における血中ＯＡＳの測定可能な初期増加を達成するのに十分な用量で、ＩＦＮτを投与する。その後、血中ＯＡＳレベルのさらなる変化（例えば、体内の癌細胞の減少に起因してＯＡＳ血中レベルの下降）に関係なく、有効用量で処置を継続する。所望のレベルの退縮が認められるまで有効用量でのＩＦＮτの投与を継続する。この退縮は、例えば、特定の組織における腫瘍の大きさ、または癌細胞の広がりによって測定する。この治療期間中に、患者に、第二の抗癌剤（例えば、シスプラチン、ドクソルビシン、またはタキソール）と共に同時処置し得る。長期間のＩＦＮτ（１０５Ｕ）処置（腹腔内注射または経口摂取によって２０日を越える間）、または未処置をＩＬ−１０について、製造者の指示書に従ってＩＬ−１０ ＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を使用する固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）によって試験した。全血清サンプルは２つ組で試験した。
【０１４６】
結果を図１２に示す。コントロールマウスにおいても、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによるＯｖＩＦＮτを１回処置を受けたマウスにおいても、ＩＬ−１０を検出しなかった。対照的に、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによって、２０日を超える間、４８時間ごとにＯｖＩＦＮτを受けたＳＪＬマウスは、血清中に検出可能なレベルのＩＬ−１０を有した。ＩＦＮτ誘導性のＩＬ−１０産生は、ＯｖＩＦＮτがＥＡＥの発症を防止する寄与機構であり得ることを、これらのデータは示唆する。
【０１４７】
（実施例１０）
（ＯｖＩＦＮτでの処置の停止は再発性麻痺を生じる）
腹腔内注射または経口摂取のいずれかによるＯｖＩＦＮτ処置（４８時間ごと）によってＥＡＥより防御したＳＪＬマウスを、その後５８日間続けた。この期間中疾患の発症は観察されなかった。次にＯｖＩＦＮτ処置を解除し、そして疾患の症状についてさらに２２日間マウスを観察した。
【０１４８】
結果を図１３に示す。ＩＦＮτ処置をグラフ下のプラス記号として表示し、ＩＦＮτ処置の解除をマイナス記号として表示する。各々の処置グループにおける疾患率は以下の通りであった：ＰＢＳコントロール＝３／４（四角）；腹腔内注射＝３／３（三角）；経口摂取＝３／４（丸）。
【０１４９】
それまでＯｖＩＦＮτ処置によってＥＡＥから防御されていた両グループのマウスは、ＯｖＩＦＮτ処置を解除後６〜１２日目に麻痺の兆候を発症した。これらのデータは、ＥＡＥの慢性再発モデルにおいて継続的にＥＡＥから防御するため、腹腔内注射または経口摂取のいずれかによって、ＩＦＮτの継続的投与が望ましいことを示唆する。
【０１５０】
（実施例１１）
（ＯｖＩＦＮτの経口投与は抗ＯｖＩＦＮτ抗体応答を低減させる）
上記の実施例１０にて記載した実験においてＯｖＩＦＮτ処置を解除した後、各々の処置グループのマウスから採血し、そして抗ＯｖＩＦＮτ抗体（Ａｂ）の存在について血清を試験した。
【０１５１】
抗原ＯｖＩＦＮτは６００ｎｇ／ウェルの濃度で一晩、プラスチックの組織培養ウェルの平底に吸着させ、続いて乾燥するまでエバポレートした。非特異的な結合を防ぐため、５％乳液（カーネーション）のＰＢＳ溶液でこのプレートを２時間処理し、次に０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳで３回洗浄した。未処理のマウス由来の血清、腹腔内注射によってＯｖＩＦＮτ処置をしたマウス由来の血清、および経口摂取によってＯｖＩＦＮτ処置をしたマウス由来の血清の様々な稀釈物を加え、３時間インキュベートした。西洋ワサビパーオキシダーゼ結合化ヤギ抗マウス免疫グロブリンを用いて結合を分析した。ｏ−フェニレンジアミンおよびＨ２Ｏ２を添加し、２ＭのＨ２ＳＯ４で反応を終結させた後、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）において、４９２ｎｍで発色をモニタリングした。
【０１５２】
例示的な結果を図１４に示す。未処理由来、腹腔内注射ＯｖＩＦＮτ投与由来、および経口摂取ＯｖＩＦＮτ投与由来（１グループあたり２匹）の血清を、１：３０（白抜きのバー）および１：１２０（塗りつぶしたバー）を含む多重稀釈法を使用して、ＥＬＩＳＡによって試験した。経口摂取によってＯｖＩＦＮτを受けたマウスは、わずかな抗体レベルを呈し、一方、腹腔内注射によってＯｖＩＦＮτを受けたマウスでは、抗ＯｖＩＦＮτ抗体レベルの上昇を提示した。予想の通り、ＯｖＩＦＮτ処置を受けなかったマウスは抗ＯｖＩＦＮτ抗体を示さなかった。
【０１５３】
上記のように、ＭＤＢＫ細胞に対するＯｖＩＦＮτの抗ウイルス活性を中和する能力についても、血清を調べた。結果を以下の表７に示す。腹腔内注射マウス由来の血清も経口摂取のマウス由来の血清も、いずれも中和活性を持たなかった。これらのデータは、ＩＦＮτでの経口処置は、腹腔内注射処置した個体において観察されたＯｖＩＦＮτタンパク質に対する抗体応答が回避され、そしてどちらの処置でも、概して中和抗体を生じないことを示唆している。
【０１５４】
【表７】
本発明を特定の実施例に関連づけて記載したが、本発明から逸脱せずに、様々な変更および変法が可能であることは、当業者には明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１５５】
【図１】図１は、健常マウスへＩＦＮ−τを腹腔内（ｉ．ｐ．）あるいは消化器投与した後の血中ＯＡＳ濃度をｐｍｏｌ／ｄＬで示す。
【図２】図２は、１×１０３Ｕ、１×１０４Ｕおよび１×１０５Ｕの投薬量でＩＦＮτをマウスへ消化器投与した際の血中ＯＡＳ濃度をｐｍｏｌ／ｄＬで示す。
【図３】図３は、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）を経口投与した後の、数種のマウス系統（ＩＣＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ５７ＢＬ、ＮＺＷ／ＮおよびＳＪＬ／Ｊ）の血中ＯＡＳ濃度をｐｍｏｌ／ｄＬで示す棒グラフである。コントロールのマウスは、ＩＦＮτを含まない１０％マルトース溶液を経口的に受けた。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３〜５匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を示している。
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｂは、６時間の絶食後にＩＦＮτを投与した後の、マウスの血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフである。ＩＦＮτは経口投与されるかまたは腹腔内注射により投与した。図４Ａは、ＩＦＮτ（１０５Ｕ）投与後０時間目、８時間目、１６時間目、および２４時間目に採取した血液サンプルにおける、血中ＯＡＳレベルを示す。インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する百分率として表している。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を示している。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｂは、６時間の絶食後にＩＦＮτを投与した後の、マウスの血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフである。ＩＦＮτは経口投与されるかまたは腹腔内注射により投与した。図４Ｂは、０Ｕ、１０２Ｕ、１０３Ｕ、１０４Ｕ、および１０５Ｕの濃度でＩＦＮτを送達した２４時間後の血中ＯＡＳ濃度を示し、コントロールに対するパーセンテージとして表す。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を示している。
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、ＩＦＮ−τ投与によるマウスの血中ＯＡＳの誘導に対する、断食状態の効果を示す棒グラフである。血中ＯＡＳの誘導は、インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する百分率として示される。処置されたマウスは、記載した摂取レジメンの６時間後に１０４ＵのＩＦＮτを（腹腔内注射または経口投与により）与えた。図５Ａは食餌も飲水もなし；図５Ｂは飲水で食餌なし、図５Ｃは食餌で飲水なし、図５Ｄは食餌および飲水の両方。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。
【図６】図６は、経口的にかまたは腹腔内注入によりＩＣＲマウスへ与えられたマウスＩＦＮα（０ＩＵ、１０２ＩＵ、１０３ＩＵ、および１０４ＩＵ）の投与によって、血中ＯＡＳ活性の誘導を示す棒グラフであり、インターフェロンを含まない１０％マルトース溶液で処置したマウスの血中ＯＡＳとして得たコントロールに対する百分率として表される。血中のＯＡＳ活性はＩＦＮα投与の１６時間後にアッセイされた。各々のバーは、行った２回の実験（同様の結果であった）のうちの１回（３匹のマウス）の平均値±Ｓ．Ｅ．を表す。
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８単位のＩＦＮτの経口投与後の、３人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図７Ｂ】図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８単位のＩＦＮτの経口投与後の、３人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図７Ｃ】図７Ａ〜７Ｃは、１日当たり４．９×１０８単位のＩＦＮτの経口投与後の、３人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図８Ａ】図８Ａ〜８Ｂは、１日当たり１．５×１０９単位のＩＦＮτの経口投与後の、２人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図８Ｂ】図８Ａ〜８Ｂは、１日当たり１．５×１０９単位のＩＦＮτの経口投与後の、２人のヒト患者におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡレベルおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）のレベルを示す。
【図９】図９は、抗ウイルスアッセイ法を用いて測定した、経口摂取（塗りつぶしたバー）または腹腔内注射（白抜きのバー）のいずれかによる投与後のＮＺＷマウス血清中のＩＦＮτ量を示す。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｃは、処置を受けなかったマウス（図１０Ａ）と比較した、ＩＦＮτの経口投与（図１０Ｃ）および腹腔内注射（図１０Ｂ）による、ＳＪＬマウスにおける、慢性再発性の実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の予防を示す。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｃは、リンパ球の浸潤を検出するためにクレージルバイオレットで染色した、ＩＦＮτ処置をしない（図１１Ａ）か、腹腔内注射によるＩＦＮτ処置（図１１Ｂ）か、経口摂取によるＩＦＮτ処置（図１１Ｃ）かのいずれかの処置を受けた、ＥＡＥ誘発動物由来のマウス脊髄の切片を示す。
【図１２】図１２は、腹腔内注射または経口摂取によって投与された、単回用量のＩＦＮτ処置または長期のＩＦＮτ処置のいずれかによるＩＬ−１０の誘導を示す。
【図１３】図１３は、ＳＪＬマウスにおける、ＩＦＮτ処置解除後のＥＡＥの再発を示す。
【図１４】図１４は、ＩＦＮτの腹腔内注射または経口摂取の後の、ＩＦＮτ処置されたマウス血清中の抗ＩＦＮτ抗体についてのＥＬＩＳＡ検出を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターフェロンτ治療に応答性のヒト被験体における状態を処置する医薬の調製における使用のための組成物であって、該状態は、自己免疫性状態、癌、またはウイルス感染から選択され、該組成物は、インターフェロン−τ投与の非存在下における該被験体の血中２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルに対して、該被験体の血中ＯＡＳレベルの初期の測定可能な増加を生じるのに有効な量での、該被験体の腸管への経口投与のために処方されたインターフェロンτを含み、ここで、該インターフェロン−τは、該患者の血中ＯＡＳレベルの変化とは無関係に、該患者の該腸管に、そのような有効量で、一週間当たり少なくとも２〜３回を通常の基準として、少なくとも１ヶ月の期間投与され得る、組成物。
【請求項２】
前記インターフェロン−τが、配列番号２または配列番号３として確認される配列を有するヒツジインターフェロン−τである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記インターフェロン−τが、毎日を基準として少なくとも約１ヶ月の期間投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記被験体における多発性硬化症の処置のための組成物であって、ここで、前記インターフェロン−τは、該被験体の症状の存在に応じた期間の間投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記被験体におけるＣ型肝炎感染の処置のための組成物であって、ここで、前記インターフェロン−τは、該被験体においてウイルス感染が検出されない時点から２〜３ヵ月後の間投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記被験体における癌の処置のための組成物であって、ここで、抗癌剤がインターフェロン−τ投与の期間の間に該被験体にさらに投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記被験体の血中ＯＡＳレベルは、該ＯＡＳレベルが上昇されているか否かを確認するために、インターフェロン−τの投与の間にモニタリングされる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１】
インターフェロンτ治療に応答性のヒト被験体における状態を処置する医薬の調製における使用のための組成物であって、該状態は、自己免疫性状態、癌、またはウイルス感染から選択され、該組成物は、インターフェロン−τ投与の非存在下における該被験体の血中２’，５’−オリゴアデニレート合成酵素（ＯＡＳ）レベルに対して、該被験体の血中ＯＡＳレベルの初期の測定可能な増加を生じるのに有効な量での、該被験体の腸管への経口投与のために処方されたインターフェロンτを含み、ここで、該インターフェロン−τは、該患者の血中ＯＡＳレベルの変化とは無関係に、該患者の該腸管に、そのような有効量で、一週間当たり少なくとも２〜３回を通常の基準として、少なくとも１ヶ月の期間投与され得る、組成物。
【請求項２】
前記インターフェロン−τが、配列番号２または配列番号３として確認される配列を有するヒツジインターフェロン−τである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記インターフェロン−τが、毎日を基準として少なくとも約１ヶ月の期間投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記被験体における多発性硬化症の処置のための組成物であって、ここで、前記インターフェロン−τは、該被験体の症状の存在に応じた期間の間投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記被験体におけるＣ型肝炎感染の処置のための組成物であって、ここで、前記インターフェロン−τは、該被験体においてウイルス感染が検出されない時点から２〜３ヵ月後の間投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記被験体における癌の処置のための組成物であって、ここで、抗癌剤がインターフェロン−τ投与の期間の間に該被験体にさらに投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記被験体の血中ＯＡＳレベルは、該ＯＡＳレベルが上昇されているか否かを確認するために、インターフェロン−τの投与の間にモニタリングされる、請求項１に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図７Ｃ】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図７Ｃ】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２００７−５０９９５８（Ｐ２００７−５０９９５８Ａ）
【公表日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３８２４４（Ｐ２００６−５３８２４４）
【出願日】平成１６年１０月２７日（２００４．１０．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３５８０４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４４２９７
【国際公開日】平成１７年５月１９日（２００５．５．１９）
【出願人】（５０４２６５０８６）ペプジェン コーポレイション (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年４月１９日（２００７．４．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１０月２７日（２００４．１０．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３５８０４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４４２９７
【国際公開日】平成１７年５月１９日（２００５．５．１９）
【出願人】（５０４２６５０８６）ペプジェン コーポレイション (5)
【Ｆターム（参考）】
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