医薬品の製造のためにプリン誘導体を使用する方法
本発明は、細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気、より特に、過剰な細胞死が該病気の原因である病気、を治療するための医薬品の製造において、プリン誘導体を使用する方法に関する。本発明に従うと、式Ｉのプリン誘導体が使用される。本発明は薬学的分野において用途を見出す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分裂及び細胞死の間の不均衡が関与する病気、より詳細には、過剰な細胞死が該病気の原因である病気の治療を意図された医薬品の製造においてプリン誘導体を使用する方法に関する。
【０００２】
これらのプリンの誘導体の一部にもまた関する。
【０００３】
細胞分裂と細胞死との間の不均衡が関与する病気は、特に慢性のリンパ性白血病及び腎臓の病気、例えば多嚢胞腎臓病である。
【０００４】
慢性リンパ性白血病即ちＣＬＬは、血液、骨髄、及び造血器官におけるＣＤ５＋モノクロナールＢ細胞の蓄積を特徴とする病気の混成群である。
【０００５】
それは、モノクロナールＢ細胞が全く又はほとんど自然なアポトーシス（細胞死）をせず細胞サイクルに関与するＢ細胞の小さな偶発(contingent)を含む病気である。この意味において、この病気はモノクロナール細胞の過剰な（止められない）増殖が観察される病気、モノクロナール細胞が細胞サイクルに高度に関与する病気、及びアポトーシス（細胞死）に対する抵抗が二次的な病原性を構成する病気とはむしろ異なる病気である。
【０００６】
ＣＬＬは、一般的に、別のカテゴリーであって、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病及びＴ細胞慢性リンパ性白血病を含むカテゴリーに分類される。用語「ＣＬＬ」は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）を意味することが一般的に理解される。
【０００７】
Ｂ−ＣＬＬとして知られるＢ細胞慢性リンパ性白血病は、血液中ではリンパ球増多症（hyperlymphocytosis）を起こし、骨髄では骨髄不全を起こし、リンパ節では多発血管炎を起こす該Ｂ病気に特徴的である膜の抗原例えばＣＤ５及びＣＤ２３分子を発現する、リンパ球形態学のＢリンパ球の蓄積の原因であるＢリンパ球細胞の病気である。
【０００８】
Ｂ−ＣＬＬは、変化可能な進行性（variable progressive nature）を有する単一の生物学的構成要素として特徴付けられてきた。
【０００９】
Ｂｉｎｅｔの予後分類（prognosis classification）は、該病気の３つのステージＡ，Ｂ，及びＣへの進行のプロフィールをアレンジすることを可能にする。
【００１０】
該病気のステージＡにおける患者の中で、４１％がステージＢ及びＣに進む。生物学的パラメーターの中で、６月未満のリンパ球倍増時間、即ち溶解性のＣＤ２３のレベルの増加又は血清チミジンキナーゼの活性の増加は、予後不良（poor prognosis）を示していると考えられる。予後不良の完全に識別された遺伝的パラメーターは、該病気の突然変異されていない形（unmutated form）（14ｑ32の初期位置の免疫グロブリンの重い鎖の遺伝子）、１１ｑ及び１７ｐの染色体の欠損異常(deletion abnormalities)又は１２q+タイプの追加の染色体異常を含む。Ｂ−ＣＬＬのキャリヤーである患者及びこれらの生物学的特徴を発現する患者は、短い進行期間を有する。即ち、突然変異を起こしていない（unmutated）患者の５０％は２４月内に進行した。１７ｐ−、１１ｑ−又は１２ｑ＋を示す患者の５０％は、１５月において進行した。ステージＡの患者が重度にこれらの生物学的基準を発現するならば、ステージＢ及びＣの患者は積極的な治療姿勢から利益を得るべきである。
【００１１】
現在の治療は該病気の回復をもたらすが、すべての患者が再発し、ＣＬＬは、依然として不治の病であると述べることに合意が、現在はある。
【００１２】
今日、提起されている本当の問題は、深刻な状態に進行する生物学的な可能性を示す患者を該病気のステージＡにおいて定義するという問題である。
【００１３】
Ｂ−ＣＬＬに対して最良の最初に行われる治療が定義されるべきである。
【背景技術】
【００１４】
プリン類似体、特にフルダラビン、は、これまでＢ−ＣＬＬにおいて最もよく研究されている。フルダラビンは単独で、アルキル化剤を含むマルチドラッグ治療及びコルチコステロイド治療（corticotherapy）よりもよい反応の総レベルを誘起する。フルダラビンはCHOP又はＣＡＰ（chloraminophene）タイプのマルチドラッグ治療より、より完全な血液学的な回復（７〜４０％）を誘起する。
【００１５】
フルダラビンで観察されるよりよい反応にもかかわらず、全体の生存率に関して観察される利益は少ないままである。現在の治療努力は、フルダラビンと慣用の化学療法の組合せ、例えばフルダラビンプラスシクロホスファミド、特に該病気の抵抗型の場合、に向けられている。フルダラビンに抵抗のある患者の平均余命は１２月に過ぎない。それにもかかわらず、該治療の毒性、特に血液学上の毒性、はこれらの組合せで増加する。
【００１６】
フルダラビンとシクロホスファミドとの組合せで治療された患者の５０％に感染が観察される。治療された患者の２５％に記録された敗血症又は肺炎が、他の２５％には記録されていない発熱及び／又は入院が、治療中に観察される。
【００１７】
治療の革命は、治療用の抗体の到来により達成された。Ｂ−ＣＬＬにおいて、２つの治療用抗体が出現した。即ち、リツキシマブ及びアレムツズマブである。Ｂ−ＣＬＬにおいてリツキシマブの活性はＣＬＬのＢリンパ球上の標的、ＣＤ２０抗原、の低い発現により不利な立場に立たされる。リツキシマブはプリン類似体及び／又はシクロホスファミドと相乗的にＢ−ＣＬＬにおいて配置される（フルダラビンに抵抗する患者においてフルダラビン／シクロホスファミド／リツキシマブの組合せで、５％のみの完全な応答を含めて５９％の全体の応答が観察される）。
【００１８】
アレムツズマブの活性は、抗原の非常に不均一な膜密度を有する白血球及びＣＬＬの白血病性Ｂリンパ球上で発現される抗原に向けられるが、治療の間又は治療後の高い免疫抑制活性及び巨大細胞の感染及び日和見感染の再活性化の高い発生率により不利な立場に立たされる。抗体は高いＴ免疫抑制活性を示す。アレムツズマブに対する血液学的反応は３３％である。抗体は血液中及び骨髄中のクロナール Ｂリンパ球を破壊することができるが、リンパ節ではほとんど効果を有しない。これらの点は、この適応症における該抗体の使用を制限する。イットリウム−９０と組み合わせた抗−ＣＤ２０（ゼバリン）を用いる放射線免疫治療はＢ−ＣＬＬにおける低いパーセンテージの回復を誘起し、大きな影響を与える骨髄抑制の原因である。
【００１９】
米国特許第6812232号は、本発明と類似するプリン類似体の細胞増殖を阻害する活性について記載している。事実、ＣＬＬにおいて、過度な細胞増殖が抑えられた。
【００２０】
国際特許出願公開第２００５／００２５８４号は、それ自身、慢性リンパ性白血病、より特にＢ細胞慢性リンパ性白血病の治療におけるロスコビチン（roscovitine）、好ましくはその（Ｒ）絶対配置のもの、の使用を提供する。
【００２１】
ロスコビチンは以下の式を有するプリンである。
【００２２】
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２３】
実際は、ロスコビチン誘導体は、細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気の治療においては、ロスコビチンよりずっと高い活性を有すること、及びある場合には該誘導体はロスコビチンよりよい溶解性を有する場合もあることが今発見された。
【００２４】
即ち、本発明は、細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気の治療を意図された医薬品の製造において、下記式Ｉの少なくとも１の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、エステル若しくは異性体を使用する方法を提供する。
【００２５】
【００２６】
上記式中、
ＸはＣ又はＮであり
ＹはＣＨ３又はＯＨであり、かつ
ＺはＨ又はＣＨ３である。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】ロスコビチンにより誘発される細胞死と比較した、慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉａの化合物及び式Ｉａの化合物のシュウ酸塩による細胞死の誘発を示す。
【図２】慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉｅ及びＩｆの化合物による細胞死の誘発を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明の第一の選択の形において、該病気は慢性のリンパ性白血病である。
【００２９】
より特に、該病気はＢ細胞慢性リンパ性白血病である。
【００３０】
本発明の第二の選択の形において、該病気は腎臓病であり、より特に多嚢胞の腎臓病である。
【００３１】
細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療するための医薬品の製造における使用のための好ましい塩は、式Ｉの化合物のシュウ酸塩である。
【００３２】
好ましくは、使用される該少なくとも１の化合物は下記式Ｉ‐１を有する。該式はＸがＮである式Ｉに対応する。
【００３３】
【００３４】
これは、該化合物が、慢性リンパ性白血病及び多嚢胞腎臓病の細胞モデルにおいて４〜５倍活性であり、ＸがＣであるところの対応物（以下に示される）より、水性媒体に５〜１０倍溶解するからである。
【００３５】
しかし、より好ましくは、使用される該少なくとも１の化合物は下記式Ｉ‐ＩＩを有する。該式は、ＸがＮであり、ＹがＯＨである式Ｉに対応する。
【００３６】
【００３７】
構造Ｉ‐ＩＩを有する化合物は、Ｉ‐Ｉ誘導体に匹敵する活性を示すが、水性媒体における溶解度はさらに増加されている。
【００３８】
より特に、そして第一の好ましい実施態様において、これらの病気を治療するための医薬品の製造において使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、ＺがＨである式Ｉの化合物である。この化合物は（Ｒ）の絶対配置を有し、下記式Ｉａを有する。
【００３９】
【００４０】
本発明の第二の非常に特に好ましい実施態様において、該少なくとも１の化合物は（Ｓ）の絶対配置を有する。この化合物は下記式Ｉｂを有する。
【００４１】
【００４２】
これは特に驚きである、なぜなら先行技術において、最も良い結果を得ることを可能にするのは、一般的に（Ｒ）の絶対配置を有する化合物だからである。
【００４３】
本発明の第三の非常に特に好ましい実施態様において、式Ｉａ又はＩｂの少なくとも１の化合物はそのシュウ酸塩の形である。
【００４４】
しかし、本発明の第四の好ましい実施態様において、細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療するための医薬品の製造において使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＣであり、ＹがＣＨ３であり、ＺがＨである式Ｉの化合物である。この化合物は下記式Ｉｃを有する。
【００４５】
【００４６】
この化合物は、（Ｓ）又は（Ｒ）の絶対配置の両方及びこれらの混合物の形で使用されることができる。
【００４７】
しかし、本発明の第五の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＮであり、ＹがＯＨであり、ＺがＨである式Ｉの化合物である。この化合物は下記式Ｉｄを有する。
【００４８】
【００４９】
化合物Ｉｄは以下の実施例１において記載されるように得られることができる。
【００５０】
実施例１：化合物Ｉｄの製造
この化合物は、以下のスキームに従って、ジクロロプリンから出発して３ステージで得られる。
【００５１】
【００５２】
反応物及び条件：
ａ：４−（２−ピリジル）ベンジルアミン、ｎ−ＢｕＯＨ，１１０℃；ｂ：２−ブロモプロパン、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＳＯ；ｃ：セリノール、加熱１６０℃、８時間）
【００５３】
ステージ１：２−クロロ−６−［４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ］−プリン（ＩＩＩａ）
４−（２−ピリジル）ベンジルアミン（２．０ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）及び３ｍｌのＮＥｔ３が２０ｍｌのｎ−ＢｕＯＨ中の２，６−ジクロロプリンの溶液（２．３ｇ，１０ｍｍｏｌ）に添加される。１１０℃において３時間加熱した後、混合物は２０℃に冷却されて、固体がろ過除去され、５ｍｌの冷ブタノールで洗浄され、真空乾燥される。Ｙｄ＝８５％、融点＞２５０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ４．８０（ｓ、２Ｈ，ＣＨ２）；７．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈピリジル）；７．４５（ｄ、２Ｈ、Ｈフェニル）；７．７２（ｍ、２Ｈ，Ｈピリジル）；７．９５（ｍ、３Ｈ、Ｈフェニル及びＨ−８）、８．５４（ｄ、１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈピリジル）。
【００５４】
ステージ２：
２−クロロ−９−イソプロピル−６−[４−（２−ピリジル）フェニルメチル−アミノ]プリン（ＩＶａ）
Ｋ２ＣＯ３（３．５ｇ、２４ｍｍｏｌ）及び１．９ｍｌ（２０ｍｍｏｌ）の２−ブロモプロパンが、１０ｍｌのＤＭＳＯ中の２−クロロ−６−[４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ]プリン（８ｍｍｏｌ）に１８〜２０℃において添加される。１８〜２０℃において５時間撹拌した後、２−ブロモプロパン（０．５ｍｌ）が再び添加され、撹拌は２０℃において５時間続けられる。５０ｍｌの冷水（５℃）を添加した後、混合物はＥｔＯＡｃで抽出され（３×１０ｍｌ）、有機相が飽和食塩水で洗浄され（３×１０ｍｌ）、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥される。誘導体ＩＶａが溶媒の蒸発により結晶する。２ｍｌの２−プロパノールから粉にされ、ろ過除去される。
Ｙｄ８６％、１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．５８（ｄ，６Ｈ）；４．７９（ｈｅｐｔ、１Ｈ）；４．８５（ブロードｓ，２Ｈ）；６．５９（ブロードｓ，１Ｈ）；７．２０〜７．２３（ｍ，１Ｈ）；７．４９（ｄ，２Ｈ）；７．７３〜７．７１（ｍ，２Ｈ）；７．７９（ｓ、１Ｈ）；７．９８（ｄ，２Ｈ）；８．７１（ｄ，１Ｈ）。
【００５５】
ステージ３：２−（１，３−ジヒドロキシプロピ−２−イルアミノ）−６−［４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ］−９−イソプロピルプリンＩｄ
化合物ＩＶａ（１０ｍｍｏｌ）及びセリノール（２−アミノプロパン−１，３−ジオール）（２ｍｌ）の混合物がＮ２下、１６０℃において８時間加熱される。２０℃に冷却した後、２０ｍｌの水が添加され、混合物はＥｔＯＡＣで抽出される（４×１０ｍｌ）。有機溶液は２×２０ｍｌの水で洗浄され、乾燥され、蒸発される。誘導体ＩｄがＥｔ２Ｏからの粉砕化により結晶する。
融点１１４〜１１７℃、Ｙｄ７４％。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣｄＣｌ３）δｌ．５２（ｄ，６Ｈ）；３．７８（ｍ，４Ｈ）；３．９６（ｍ，ＩＨ）；４．５５（ｈｅｐｔ，ＩＨ）；４．７６（ｓ，２Ｈ）；５．４０（ｓ，ｌＨ）；６．２０（ｓ，ＩＨ）；７．１２（ｍ，ＩＨ）；７．３８（ｄ，２Ｈ）；７．４８（ｓ，ＩＨ）；７．６２（ｍ，２Ｈ）；７．９０（ｄ，２Ｈ）；８．６０（ｄ，ＩＨ）．
【００５６】
本発明の第六の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、ＺがＣＨ３である式Ｉの化合物である。この化合物は下記式Ｉを有する。
【００５７】
【００５８】
本発明の第七の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、式Ｉｅの化合物のシュウ酸塩である。この化合物は下記式Ｉｆを有する。
【００５９】
【００６０】
プリンの複数の窒素の一つは、塩の形成に関与していてもよく、該塩は一分子のプリンと二酸との組み合わせに対応することに留意されたい。
【００６１】
本発明の第八の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、下記式Ｉｇの化合物である。
【００６２】
【００６３】
この化合物は、（１Ｒ、２Ｒ）−２−（１，３−ジヒドロキシブチ−２−イルアミノ）−６−[４−(２−ピリジル)フェニルメチルアミノ]−９−イソプロピルプリンＩｇである。
【００６４】
それは、生成物Ｉｄと同じ方法で得られるが、最終ステージのアミノプロパンジオールをＬ−トレオニオール又は（１Ｒ、２Ｒ）−２−アミノブタン−１，３−ジオールで置き換える。
ＮＭＲにより測定されて以下の特徴を有している：
ＮＭＲ：１．２（ｄ，３Ｈ）；１．４（ｄ，６Ｈ）；３．７０（ｍ，４Ｈ）；４．１０（ｍ、１Ｈ）、４．５２（ｈｅｐｔ、１Ｈ）；４．７２（ブロードｓ、２Ｈ）；５．５０（ｓ、１Ｈ）；６．２（ブロードｓ、１Ｈ）；７．１５（ｍ、１Ｈ）；７．４（ｄ，２Ｈ）；７．４２（ｓ、１Ｈ）；７．５５（ｍ、２Ｈ）；７．８５（ｄ，２Ｈ）；８．６０（ｄ，１Ｈ）。
【００６５】
本発明の第九の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、下記式Ｉｈの化合物である。
【００６６】
【００６７】
プリンの複数の窒素の一つが塩の形成に関与しており、該塩は一分子のプリンと二酸との組み合わせに対応することに留意されたい、酒石酸の３つの異性体が使用されることができる。
【００６８】
この化合物は、酒石酸２−（１，３−ジヒドロキシプロピ−２−イルアミノ）−６−[４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ]−９−イソプロピルピリン（Ｉｈ）である。
それは以下のようにして得られる：
イソプロパノール（１ｍｌ）に溶解された２．１ｍｍｏｌの酒石酸が、イソプロパノール（１ｍｌ）中の２ｍｍｏｌのＩｄの溶液であって、７０〜８０℃に至らせられた溶液に添加される。冷却した後、Ｉｄの酒石酸塩がろ過により単離される。
【００６９】
式Ｉａ，Ｉｄ，及びＩｇの化合物の塩、例えばフマール酸塩若しくは塩酸塩、水和物、及びエステル及び式Ｉｃ及びＩｇの化合物の異性体もまた有利に使用されることができる。
【００７０】
特に、式Ｉの化合物のエステルもまた本発明に含まれる。
【００７１】
式Ｉの化合物の好ましいエステルは、アシルエステル、例えばアセチルエステル、ニコチニルエステル、及びＬシリーズ若しくはＤシリーズのアミノ酸のエステルである。
【００７２】
他の好ましいエステルは、アミノ酸、例えばバリン若しくはロイシンから形成される。
【００７３】
特に好ましいエステルは下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４を有する。
【００７４】
【００７５】
これは、これらのエステルは式Ｉの生成物の前駆体（プロドラッグ）だからである。
【００７６】
細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療することを意図された医薬品の製造においてそれらを使用する方法もまた本発明である。
【００７７】
以下の説明記載を読めば、本発明のよりより理解は達成され、本発明の他の特徴及び利点はより明確に明らかになるだろう。該説明記載は図を参照してなされ、該図において
添付の図１は、ロスコビチンにより誘発される細胞死と比較した、慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉａの化合物及び式Ｉａの化合物のシュウ酸塩による細胞死の誘発を示す
図２は、慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉｅ及びＩｆの化合物による細胞死の誘発を示す。
【００７８】
ロスコビチン及び式Ｉａ及びそのシュウ酸塩の化合物の効果はキナーゼアッセイにおいて種々の濃度において試験された。
【００７９】
これらの試験は以下の通りに行われた。
【００８０】
バッファー
バッファーＡ：１０ｍＭのＭｇＣｌ２，１ｍＭのＥＧＴＡ，１ｍＭのＤＴＴ，２５ｍＭのトリスＨＣｌｐＨ７．５、５０μｇのヘパリン/ｍｌ
バッファーＣ：６０ｍＭのグリセロホスフェート、１５ｍＭのｐ−ニトロフェニルホスフェート、２５ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）、５ｍＭのＥＧＴＡ、１５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ，１ｍＭのバナジン酸ナトリウム、１ｍＭのフェニルホスフェート。
【００８１】
キナーゼの製造及びアッセイ
キナーゼの活性はバッファーＡ又はＣにおいて３０℃及び１５μｇの最終的なＡＴＰ濃度においてアッセイされた。対照は、ジメチルスルホキサイドの適当な希釈で行われる。
【００８２】
ＣＤＫ１/シクリンＢ（ヒトデＭ相卵巣細胞、ネイティブ）及びＣＤＫ５／ｐ２５（ヒト、リコンビナント）が製造され、Ｌｅｃｌｅｒｃ Ｓ．等、Ｊ．Ｂｉｏl．Ｃｈｅｍ．，２００１年、２７６号、２５１〜６０ページにおいて記載されているようにアッセイされた。アッセイは、３０μｌの最終体積で、１５μｍの[Ｙ−３３Ｐ]ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１０ｍＣｉ／ｍｌ）の存在下、１ｍｇのヒストンＨ１／ｍｌで行われた。３０℃において３０分間インキュベーションした後、２５μｌの上澄みが２．５×３ｃｍのワットマンＰ８ホスホセルロース紙の上に載せられ、２０秒後に該フィルターは１０ｍｌのリン酸／リットルの溶液中で５回洗浄された。フィルターは、次に１ｍｌのＡＣＳ（アマシャム（Amersham）の存在下で数えられた。
【００８３】
ＣＤＫ２／シクリンＡ及びＣＤＫ２／シクリンＥ（ヒト、リコンビナント、昆虫の細胞で発現された）がＣＤＫ１のようにアッセイされた。
【００８４】
ＣＤＫ９／シクリンＴ（ヒト、リコンビナント、昆虫の細胞で発現された）が、基質としてｐＲＢフラグメント（ＡＡ７７３−９２８）（３．５μｇ／アッセイ）を用いてＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされた。
【００８５】
ＧＳＫ−３／α／β（ブタの脳、ネイティブ、アフィニティ精製された）がＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされたが、バッファーＡ中で、特異的なＧＳＫ−３基質（ＧＳ−１：ＹＲＲＡＡＶＰＰＳＰＳＬＳＲＨＳＳＰＨＱＳｐＥＤＥＥＥ）（Ｂａｃｈ Ｓ．等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００５年、第２８０号、３１２０８〜１９ページ）を用いて行った。
【００８６】
ＣＫ１δ／ｅ（ブタの脳、ネイティブ、アフィニティ精製された）がＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされたが、バッファーＡ中で、特異的な基質ＲＲＫＨＡＡＩＧＳｐＡＹＳＩＴＡ（Ｒｅｉｎｈａｒｄｔ Ｊ．等、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ ＆ Ｐｕｒｉｆ．，２００７年，第５４号，１０１〜９ページ）を用いて行った。
【００８７】
ＤＹＲＫ１Ａ（ヒト、リコンビナント、大腸菌の細胞において発現された）がＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされた。
【００８８】
平均阻害濃度ＩＣ５０値が投与／応答曲線から計算され、下記の表ＩにμＭで列挙される。
【００８９】
【表１】
【００９０】
すべてのプロテインキナーゼについて、（Ｓ）配置の式Ｉｂの化合物は、種々のキナーゼについて阻害的な活性を示すことが表Ｉから見られる。該活性は、ロスコビチンの活性に類似しており、かつ式Ｉａの化合物、つまり（Ｒ）絶対配置のそのホモローグ、の活性より少し低い。
【００９１】
しかし、式Ｉａの化合物及びそのシュウ酸塩及び式Ｉｅ及びＩｆの化合物がこのタイプの慢性リンパ性白血病を有する患者から採取されたＢ慢性リンパ性白血病細胞上で試験されたとき、驚いたことにこれらの化合物はＣＬＬ細胞上では、図１及び２において見られるように、ロスコビチンの活性よりずっと高く、５０〜１００倍高い細胞死誘発活性を有することが見出された。
【００９２】
さらに、患者に由来するＢ２リンパ球の細胞死の誘発に対する化合物Ｉａ，Ｉｂ，Ｉｃ，Ｉｄ，ＩｅおよびＩｆ及び化合物Ｉａのシュウ酸塩の効果は、この同じ誘発に対する（Ｒ）−ロスコビチンの効果と比較された。
【００９３】
Ｂ２リンパ球はＢ２細胞慢性リンパ性白血病に関与するリンパ球である。
【００９４】
細胞の生存能力は３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）の還元により決定される。
【００９５】
細胞死は、細胞の分解の間に放出されるラクテートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の活性のレベルの測定により決定される。２つのプロセスが、「リバスＪ．及びボワＪ．（Ribas J．，and Boix J．）、ＢＣＬ−２又はＢＣＬ-ＸＬたんぱく質ではなく、細胞分裂、カスパーゼ阻害、及び巨大分子合成の妨害が２つのＣＤＫ阻害薬により引き起こされる細胞死からのＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を保護する、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２００４年、２９５、９〜２４ページ」に詳細に記載されている。
【００９６】
得られた結果は、下記の表２に示される。
【００９７】
【００９８】
表２において、示された値はμＭで表された平均阻害濃度ＩＣ５０値である。
【００９９】
本発明の化合物Ｉｂ及びＩｄの多嚢胞腎臓病に対する効果もまた（Ｒ）ロスコビチンとの比較においてＭＤＣＫライン上で試験された。化合物Ｉｂ及びＩｄはロスコビチンより５０〜６０倍活性である。
【０１００】
ＸがＮである本発明の化合物の溶解度は、ＸがＣであるものより水に５〜１０倍よく溶けると言われていた。
【０１０１】
すなわち、式Ｉｃの化合物（ＸがＣである）は、０．５μｇ／ｍｌの水への溶解度を有するが、ＸがＮである対応する化合物、即ち式Ｉｂにより示される化合物、は３．３μｇ／ｍｌの水への溶解度を有する。
【０１０２】
式Ｉｂ〜Ｉｈの化合物はそれ自体もまた、本発明である。
【０１０３】
式Ｉの化合物のエステルもまた本発明に含まれる。
【０１０４】
式Ｉの化合物の好ましいエステルは、
アシルエステル、例えば、アセチルエステル、ニコチニルエステル、及びＬシリーズ若しくはＤシリーズのアミノ酸のエステルである。
【０１０５】
該好ましいエステルは、アミノ酸、例えばバリン若しくはロイシンから形成される。
【０１０６】
特に好ましいエステルは、下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４を有する。
【０１０７】
【０１０８】
これは、これらのエステルは式Ｉの化合物の前駆体（プロドラッグ）だからである。
【０１０９】
従って、本発明の化合物は慢性リンパ性白血病を治療するための医薬品の製造における使用のために特に効果的である。それらは慢性リンパ性白血病に罹った患者の治療方法における投与のためにもまた特に適切である。
【０１１０】
それらは腎臓病、特に多嚢胞腎臓病、を治療するための医薬品の製造における使用のためにもまた特に効果的である。同じように、それらは腎臓病、特に多嚢胞腎臓病、に罹った患者の治療方法における投与のためにもまた特に効果的である。
【０１１１】
当業者は、本発明の化合物は、２以上の互いの混合物として、また、慢性リンパ性白血病又は腎臓病、例えば多嚢胞腎臓病、の治療において治療上の活性を有する他の化合物と組み合わせて、及び／又は医薬品の製造において薬学的に許容される任意の賦形剤と組み合わせて使用されることができること及びこれらの組み合わせ及び混合物もまた本願発明に含まれることを容易に理解する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分裂及び細胞死の間の不均衡が関与する病気、より詳細には、過剰な細胞死が該病気の原因である病気の治療を意図された医薬品の製造においてプリン誘導体を使用する方法に関する。
【０００２】
これらのプリンの誘導体の一部にもまた関する。
【０００３】
細胞分裂と細胞死との間の不均衡が関与する病気は、特に慢性のリンパ性白血病及び腎臓の病気、例えば多嚢胞腎臓病である。
【０００４】
慢性リンパ性白血病即ちＣＬＬは、血液、骨髄、及び造血器官におけるＣＤ５＋モノクロナールＢ細胞の蓄積を特徴とする病気の混成群である。
【０００５】
それは、モノクロナールＢ細胞が全く又はほとんど自然なアポトーシス（細胞死）をせず細胞サイクルに関与するＢ細胞の小さな偶発(contingent)を含む病気である。この意味において、この病気はモノクロナール細胞の過剰な（止められない）増殖が観察される病気、モノクロナール細胞が細胞サイクルに高度に関与する病気、及びアポトーシス（細胞死）に対する抵抗が二次的な病原性を構成する病気とはむしろ異なる病気である。
【０００６】
ＣＬＬは、一般的に、別のカテゴリーであって、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病及びＴ細胞慢性リンパ性白血病を含むカテゴリーに分類される。用語「ＣＬＬ」は、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）を意味することが一般的に理解される。
【０００７】
Ｂ−ＣＬＬとして知られるＢ細胞慢性リンパ性白血病は、血液中ではリンパ球増多症（hyperlymphocytosis）を起こし、骨髄では骨髄不全を起こし、リンパ節では多発血管炎を起こす該Ｂ病気に特徴的である膜の抗原例えばＣＤ５及びＣＤ２３分子を発現する、リンパ球形態学のＢリンパ球の蓄積の原因であるＢリンパ球細胞の病気である。
【０００８】
Ｂ−ＣＬＬは、変化可能な進行性（variable progressive nature）を有する単一の生物学的構成要素として特徴付けられてきた。
【０００９】
Ｂｉｎｅｔの予後分類（prognosis classification）は、該病気の３つのステージＡ，Ｂ，及びＣへの進行のプロフィールをアレンジすることを可能にする。
【００１０】
該病気のステージＡにおける患者の中で、４１％がステージＢ及びＣに進む。生物学的パラメーターの中で、６月未満のリンパ球倍増時間、即ち溶解性のＣＤ２３のレベルの増加又は血清チミジンキナーゼの活性の増加は、予後不良（poor prognosis）を示していると考えられる。予後不良の完全に識別された遺伝的パラメーターは、該病気の突然変異されていない形（unmutated form）（14ｑ32の初期位置の免疫グロブリンの重い鎖の遺伝子）、１１ｑ及び１７ｐの染色体の欠損異常(deletion abnormalities)又は１２q+タイプの追加の染色体異常を含む。Ｂ−ＣＬＬのキャリヤーである患者及びこれらの生物学的特徴を発現する患者は、短い進行期間を有する。即ち、突然変異を起こしていない（unmutated）患者の５０％は２４月内に進行した。１７ｐ−、１１ｑ−又は１２ｑ＋を示す患者の５０％は、１５月において進行した。ステージＡの患者が重度にこれらの生物学的基準を発現するならば、ステージＢ及びＣの患者は積極的な治療姿勢から利益を得るべきである。
【００１１】
現在の治療は該病気の回復をもたらすが、すべての患者が再発し、ＣＬＬは、依然として不治の病であると述べることに合意が、現在はある。
【００１２】
今日、提起されている本当の問題は、深刻な状態に進行する生物学的な可能性を示す患者を該病気のステージＡにおいて定義するという問題である。
【００１３】
Ｂ−ＣＬＬに対して最良の最初に行われる治療が定義されるべきである。
【背景技術】
【００１４】
プリン類似体、特にフルダラビン、は、これまでＢ−ＣＬＬにおいて最もよく研究されている。フルダラビンは単独で、アルキル化剤を含むマルチドラッグ治療及びコルチコステロイド治療（corticotherapy）よりもよい反応の総レベルを誘起する。フルダラビンはCHOP又はＣＡＰ（chloraminophene）タイプのマルチドラッグ治療より、より完全な血液学的な回復（７〜４０％）を誘起する。
【００１５】
フルダラビンで観察されるよりよい反応にもかかわらず、全体の生存率に関して観察される利益は少ないままである。現在の治療努力は、フルダラビンと慣用の化学療法の組合せ、例えばフルダラビンプラスシクロホスファミド、特に該病気の抵抗型の場合、に向けられている。フルダラビンに抵抗のある患者の平均余命は１２月に過ぎない。それにもかかわらず、該治療の毒性、特に血液学上の毒性、はこれらの組合せで増加する。
【００１６】
フルダラビンとシクロホスファミドとの組合せで治療された患者の５０％に感染が観察される。治療された患者の２５％に記録された敗血症又は肺炎が、他の２５％には記録されていない発熱及び／又は入院が、治療中に観察される。
【００１７】
治療の革命は、治療用の抗体の到来により達成された。Ｂ−ＣＬＬにおいて、２つの治療用抗体が出現した。即ち、リツキシマブ及びアレムツズマブである。Ｂ−ＣＬＬにおいてリツキシマブの活性はＣＬＬのＢリンパ球上の標的、ＣＤ２０抗原、の低い発現により不利な立場に立たされる。リツキシマブはプリン類似体及び／又はシクロホスファミドと相乗的にＢ−ＣＬＬにおいて配置される（フルダラビンに抵抗する患者においてフルダラビン／シクロホスファミド／リツキシマブの組合せで、５％のみの完全な応答を含めて５９％の全体の応答が観察される）。
【００１８】
アレムツズマブの活性は、抗原の非常に不均一な膜密度を有する白血球及びＣＬＬの白血病性Ｂリンパ球上で発現される抗原に向けられるが、治療の間又は治療後の高い免疫抑制活性及び巨大細胞の感染及び日和見感染の再活性化の高い発生率により不利な立場に立たされる。抗体は高いＴ免疫抑制活性を示す。アレムツズマブに対する血液学的反応は３３％である。抗体は血液中及び骨髄中のクロナール Ｂリンパ球を破壊することができるが、リンパ節ではほとんど効果を有しない。これらの点は、この適応症における該抗体の使用を制限する。イットリウム−９０と組み合わせた抗−ＣＤ２０（ゼバリン）を用いる放射線免疫治療はＢ−ＣＬＬにおける低いパーセンテージの回復を誘起し、大きな影響を与える骨髄抑制の原因である。
【００１９】
米国特許第6812232号は、本発明と類似するプリン類似体の細胞増殖を阻害する活性について記載している。事実、ＣＬＬにおいて、過度な細胞増殖が抑えられた。
【００２０】
国際特許出願公開第２００５／００２５８４号は、それ自身、慢性リンパ性白血病、より特にＢ細胞慢性リンパ性白血病の治療におけるロスコビチン（roscovitine）、好ましくはその（Ｒ）絶対配置のもの、の使用を提供する。
【００２１】
ロスコビチンは以下の式を有するプリンである。
【００２２】
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２３】
実際は、ロスコビチン誘導体は、細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気の治療においては、ロスコビチンよりずっと高い活性を有すること、及びある場合には該誘導体はロスコビチンよりよい溶解性を有する場合もあることが今発見された。
【００２４】
即ち、本発明は、細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気の治療を意図された医薬品の製造において、下記式Ｉの少なくとも１の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、エステル若しくは異性体を使用する方法を提供する。
【００２５】
【００２６】
上記式中、
ＸはＣ又はＮであり
ＹはＣＨ３又はＯＨであり、かつ
ＺはＨ又はＣＨ３である。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】ロスコビチンにより誘発される細胞死と比較した、慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉａの化合物及び式Ｉａの化合物のシュウ酸塩による細胞死の誘発を示す。
【図２】慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉｅ及びＩｆの化合物による細胞死の誘発を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明の第一の選択の形において、該病気は慢性のリンパ性白血病である。
【００２９】
より特に、該病気はＢ細胞慢性リンパ性白血病である。
【００３０】
本発明の第二の選択の形において、該病気は腎臓病であり、より特に多嚢胞の腎臓病である。
【００３１】
細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療するための医薬品の製造における使用のための好ましい塩は、式Ｉの化合物のシュウ酸塩である。
【００３２】
好ましくは、使用される該少なくとも１の化合物は下記式Ｉ‐１を有する。該式はＸがＮである式Ｉに対応する。
【００３３】
【００３４】
これは、該化合物が、慢性リンパ性白血病及び多嚢胞腎臓病の細胞モデルにおいて４〜５倍活性であり、ＸがＣであるところの対応物（以下に示される）より、水性媒体に５〜１０倍溶解するからである。
【００３５】
しかし、より好ましくは、使用される該少なくとも１の化合物は下記式Ｉ‐ＩＩを有する。該式は、ＸがＮであり、ＹがＯＨである式Ｉに対応する。
【００３６】
【００３７】
構造Ｉ‐ＩＩを有する化合物は、Ｉ‐Ｉ誘導体に匹敵する活性を示すが、水性媒体における溶解度はさらに増加されている。
【００３８】
より特に、そして第一の好ましい実施態様において、これらの病気を治療するための医薬品の製造において使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、ＺがＨである式Ｉの化合物である。この化合物は（Ｒ）の絶対配置を有し、下記式Ｉａを有する。
【００３９】
【００４０】
本発明の第二の非常に特に好ましい実施態様において、該少なくとも１の化合物は（Ｓ）の絶対配置を有する。この化合物は下記式Ｉｂを有する。
【００４１】
【００４２】
これは特に驚きである、なぜなら先行技術において、最も良い結果を得ることを可能にするのは、一般的に（Ｒ）の絶対配置を有する化合物だからである。
【００４３】
本発明の第三の非常に特に好ましい実施態様において、式Ｉａ又はＩｂの少なくとも１の化合物はそのシュウ酸塩の形である。
【００４４】
しかし、本発明の第四の好ましい実施態様において、細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療するための医薬品の製造において使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＣであり、ＹがＣＨ３であり、ＺがＨである式Ｉの化合物である。この化合物は下記式Ｉｃを有する。
【００４５】
【００４６】
この化合物は、（Ｓ）又は（Ｒ）の絶対配置の両方及びこれらの混合物の形で使用されることができる。
【００４７】
しかし、本発明の第五の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＮであり、ＹがＯＨであり、ＺがＨである式Ｉの化合物である。この化合物は下記式Ｉｄを有する。
【００４８】
【００４９】
化合物Ｉｄは以下の実施例１において記載されるように得られることができる。
【００５０】
実施例１：化合物Ｉｄの製造
この化合物は、以下のスキームに従って、ジクロロプリンから出発して３ステージで得られる。
【００５１】
【００５２】
反応物及び条件：
ａ：４−（２−ピリジル）ベンジルアミン、ｎ−ＢｕＯＨ，１１０℃；ｂ：２−ブロモプロパン、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＳＯ；ｃ：セリノール、加熱１６０℃、８時間）
【００５３】
ステージ１：２−クロロ−６−［４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ］−プリン（ＩＩＩａ）
４−（２−ピリジル）ベンジルアミン（２．０ｇ，１．０５ｍｍｏｌ）及び３ｍｌのＮＥｔ３が２０ｍｌのｎ−ＢｕＯＨ中の２，６−ジクロロプリンの溶液（２．３ｇ，１０ｍｍｏｌ）に添加される。１１０℃において３時間加熱した後、混合物は２０℃に冷却されて、固体がろ過除去され、５ｍｌの冷ブタノールで洗浄され、真空乾燥される。Ｙｄ＝８５％、融点＞２５０℃。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ４．８０（ｓ、２Ｈ，ＣＨ２）；７．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈピリジル）；７．４５（ｄ、２Ｈ、Ｈフェニル）；７．７２（ｍ、２Ｈ，Ｈピリジル）；７．９５（ｍ、３Ｈ、Ｈフェニル及びＨ−８）、８．５４（ｄ、１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，Ｈピリジル）。
【００５４】
ステージ２：
２−クロロ−９−イソプロピル−６−[４−（２−ピリジル）フェニルメチル−アミノ]プリン（ＩＶａ）
Ｋ２ＣＯ３（３．５ｇ、２４ｍｍｏｌ）及び１．９ｍｌ（２０ｍｍｏｌ）の２−ブロモプロパンが、１０ｍｌのＤＭＳＯ中の２−クロロ−６−[４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ]プリン（８ｍｍｏｌ）に１８〜２０℃において添加される。１８〜２０℃において５時間撹拌した後、２−ブロモプロパン（０．５ｍｌ）が再び添加され、撹拌は２０℃において５時間続けられる。５０ｍｌの冷水（５℃）を添加した後、混合物はＥｔＯＡｃで抽出され（３×１０ｍｌ）、有機相が飽和食塩水で洗浄され（３×１０ｍｌ）、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥される。誘導体ＩＶａが溶媒の蒸発により結晶する。２ｍｌの２−プロパノールから粉にされ、ろ過除去される。
Ｙｄ８６％、１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．５８（ｄ，６Ｈ）；４．７９（ｈｅｐｔ、１Ｈ）；４．８５（ブロードｓ，２Ｈ）；６．５９（ブロードｓ，１Ｈ）；７．２０〜７．２３（ｍ，１Ｈ）；７．４９（ｄ，２Ｈ）；７．７３〜７．７１（ｍ，２Ｈ）；７．７９（ｓ、１Ｈ）；７．９８（ｄ，２Ｈ）；８．７１（ｄ，１Ｈ）。
【００５５】
ステージ３：２−（１，３−ジヒドロキシプロピ−２−イルアミノ）−６−［４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ］−９−イソプロピルプリンＩｄ
化合物ＩＶａ（１０ｍｍｏｌ）及びセリノール（２−アミノプロパン−１，３−ジオール）（２ｍｌ）の混合物がＮ２下、１６０℃において８時間加熱される。２０℃に冷却した後、２０ｍｌの水が添加され、混合物はＥｔＯＡＣで抽出される（４×１０ｍｌ）。有機溶液は２×２０ｍｌの水で洗浄され、乾燥され、蒸発される。誘導体ＩｄがＥｔ２Ｏからの粉砕化により結晶する。
融点１１４〜１１７℃、Ｙｄ７４％。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣｄＣｌ３）δｌ．５２（ｄ，６Ｈ）；３．７８（ｍ，４Ｈ）；３．９６（ｍ，ＩＨ）；４．５５（ｈｅｐｔ，ＩＨ）；４．７６（ｓ，２Ｈ）；５．４０（ｓ，ｌＨ）；６．２０（ｓ，ＩＨ）；７．１２（ｍ，ＩＨ）；７．３８（ｄ，２Ｈ）；７．４８（ｓ，ＩＨ）；７．６２（ｍ，２Ｈ）；７．９０（ｄ，２Ｈ）；８．６０（ｄ，ＩＨ）．
【００５６】
本発明の第六の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、ＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、ＺがＣＨ３である式Ｉの化合物である。この化合物は下記式Ｉを有する。
【００５７】
【００５８】
本発明の第七の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、式Ｉｅの化合物のシュウ酸塩である。この化合物は下記式Ｉｆを有する。
【００５９】
【００６０】
プリンの複数の窒素の一つは、塩の形成に関与していてもよく、該塩は一分子のプリンと二酸との組み合わせに対応することに留意されたい。
【００６１】
本発明の第八の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、下記式Ｉｇの化合物である。
【００６２】
【００６３】
この化合物は、（１Ｒ、２Ｒ）−２−（１，３−ジヒドロキシブチ−２−イルアミノ）−６−[４−(２−ピリジル)フェニルメチルアミノ]−９−イソプロピルプリンＩｇである。
【００６４】
それは、生成物Ｉｄと同じ方法で得られるが、最終ステージのアミノプロパンジオールをＬ−トレオニオール又は（１Ｒ、２Ｒ）−２−アミノブタン−１，３−ジオールで置き換える。
ＮＭＲにより測定されて以下の特徴を有している：
ＮＭＲ：１．２（ｄ，３Ｈ）；１．４（ｄ，６Ｈ）；３．７０（ｍ，４Ｈ）；４．１０（ｍ、１Ｈ）、４．５２（ｈｅｐｔ、１Ｈ）；４．７２（ブロードｓ、２Ｈ）；５．５０（ｓ、１Ｈ）；６．２（ブロードｓ、１Ｈ）；７．１５（ｍ、１Ｈ）；７．４（ｄ，２Ｈ）；７．４２（ｓ、１Ｈ）；７．５５（ｍ、２Ｈ）；７．８５（ｄ，２Ｈ）；８．６０（ｄ，１Ｈ）。
【００６５】
本発明の第九の好ましい実施態様において、使用される該少なくとも１の化合物は、下記式Ｉｈの化合物である。
【００６６】
【００６７】
プリンの複数の窒素の一つが塩の形成に関与しており、該塩は一分子のプリンと二酸との組み合わせに対応することに留意されたい、酒石酸の３つの異性体が使用されることができる。
【００６８】
この化合物は、酒石酸２−（１，３−ジヒドロキシプロピ−２−イルアミノ）−６−[４−（２−ピリジル）フェニルメチルアミノ]−９−イソプロピルピリン（Ｉｈ）である。
それは以下のようにして得られる：
イソプロパノール（１ｍｌ）に溶解された２．１ｍｍｏｌの酒石酸が、イソプロパノール（１ｍｌ）中の２ｍｍｏｌのＩｄの溶液であって、７０〜８０℃に至らせられた溶液に添加される。冷却した後、Ｉｄの酒石酸塩がろ過により単離される。
【００６９】
式Ｉａ，Ｉｄ，及びＩｇの化合物の塩、例えばフマール酸塩若しくは塩酸塩、水和物、及びエステル及び式Ｉｃ及びＩｇの化合物の異性体もまた有利に使用されることができる。
【００７０】
特に、式Ｉの化合物のエステルもまた本発明に含まれる。
【００７１】
式Ｉの化合物の好ましいエステルは、アシルエステル、例えばアセチルエステル、ニコチニルエステル、及びＬシリーズ若しくはＤシリーズのアミノ酸のエステルである。
【００７２】
他の好ましいエステルは、アミノ酸、例えばバリン若しくはロイシンから形成される。
【００７３】
特に好ましいエステルは下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４を有する。
【００７４】
【００７５】
これは、これらのエステルは式Ｉの生成物の前駆体（プロドラッグ）だからである。
【００７６】
細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療することを意図された医薬品の製造においてそれらを使用する方法もまた本発明である。
【００７７】
以下の説明記載を読めば、本発明のよりより理解は達成され、本発明の他の特徴及び利点はより明確に明らかになるだろう。該説明記載は図を参照してなされ、該図において
添付の図１は、ロスコビチンにより誘発される細胞死と比較した、慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉａの化合物及び式Ｉａの化合物のシュウ酸塩による細胞死の誘発を示す
図２は、慢性リンパ性白血病細胞における式Ｉｅ及びＩｆの化合物による細胞死の誘発を示す。
【００７８】
ロスコビチン及び式Ｉａ及びそのシュウ酸塩の化合物の効果はキナーゼアッセイにおいて種々の濃度において試験された。
【００７９】
これらの試験は以下の通りに行われた。
【００８０】
バッファー
バッファーＡ：１０ｍＭのＭｇＣｌ２，１ｍＭのＥＧＴＡ，１ｍＭのＤＴＴ，２５ｍＭのトリスＨＣｌｐＨ７．５、５０μｇのヘパリン/ｍｌ
バッファーＣ：６０ｍＭのグリセロホスフェート、１５ｍＭのｐ−ニトロフェニルホスフェート、２５ｍＭのＭＯＰＳ（ｐＨ７．２）、５ｍＭのＥＧＴＡ、１５ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＤＴＴ，１ｍＭのバナジン酸ナトリウム、１ｍＭのフェニルホスフェート。
【００８１】
キナーゼの製造及びアッセイ
キナーゼの活性はバッファーＡ又はＣにおいて３０℃及び１５μｇの最終的なＡＴＰ濃度においてアッセイされた。対照は、ジメチルスルホキサイドの適当な希釈で行われる。
【００８２】
ＣＤＫ１/シクリンＢ（ヒトデＭ相卵巣細胞、ネイティブ）及びＣＤＫ５／ｐ２５（ヒト、リコンビナント）が製造され、Ｌｅｃｌｅｒｃ Ｓ．等、Ｊ．Ｂｉｏl．Ｃｈｅｍ．，２００１年、２７６号、２５１〜６０ページにおいて記載されているようにアッセイされた。アッセイは、３０μｌの最終体積で、１５μｍの[Ｙ−３３Ｐ]ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１０ｍＣｉ／ｍｌ）の存在下、１ｍｇのヒストンＨ１／ｍｌで行われた。３０℃において３０分間インキュベーションした後、２５μｌの上澄みが２．５×３ｃｍのワットマンＰ８ホスホセルロース紙の上に載せられ、２０秒後に該フィルターは１０ｍｌのリン酸／リットルの溶液中で５回洗浄された。フィルターは、次に１ｍｌのＡＣＳ（アマシャム（Amersham）の存在下で数えられた。
【００８３】
ＣＤＫ２／シクリンＡ及びＣＤＫ２／シクリンＥ（ヒト、リコンビナント、昆虫の細胞で発現された）がＣＤＫ１のようにアッセイされた。
【００８４】
ＣＤＫ９／シクリンＴ（ヒト、リコンビナント、昆虫の細胞で発現された）が、基質としてｐＲＢフラグメント（ＡＡ７７３−９２８）（３．５μｇ／アッセイ）を用いてＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされた。
【００８５】
ＧＳＫ−３／α／β（ブタの脳、ネイティブ、アフィニティ精製された）がＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされたが、バッファーＡ中で、特異的なＧＳＫ−３基質（ＧＳ−１：ＹＲＲＡＡＶＰＰＳＰＳＬＳＲＨＳＳＰＨＱＳｐＥＤＥＥＥ）（Ｂａｃｈ Ｓ．等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００５年、第２８０号、３１２０８〜１９ページ）を用いて行った。
【００８６】
ＣＫ１δ／ｅ（ブタの脳、ネイティブ、アフィニティ精製された）がＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされたが、バッファーＡ中で、特異的な基質ＲＲＫＨＡＡＩＧＳｐＡＹＳＩＴＡ（Ｒｅｉｎｈａｒｄｔ Ｊ．等、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ ＆ Ｐｕｒｉｆ．，２００７年，第５４号，１０１〜９ページ）を用いて行った。
【００８７】
ＤＹＲＫ１Ａ（ヒト、リコンビナント、大腸菌の細胞において発現された）がＣＤＫ１／シクリンＢのようにアッセイされた。
【００８８】
平均阻害濃度ＩＣ５０値が投与／応答曲線から計算され、下記の表ＩにμＭで列挙される。
【００８９】
【表１】
【００９０】
すべてのプロテインキナーゼについて、（Ｓ）配置の式Ｉｂの化合物は、種々のキナーゼについて阻害的な活性を示すことが表Ｉから見られる。該活性は、ロスコビチンの活性に類似しており、かつ式Ｉａの化合物、つまり（Ｒ）絶対配置のそのホモローグ、の活性より少し低い。
【００９１】
しかし、式Ｉａの化合物及びそのシュウ酸塩及び式Ｉｅ及びＩｆの化合物がこのタイプの慢性リンパ性白血病を有する患者から採取されたＢ慢性リンパ性白血病細胞上で試験されたとき、驚いたことにこれらの化合物はＣＬＬ細胞上では、図１及び２において見られるように、ロスコビチンの活性よりずっと高く、５０〜１００倍高い細胞死誘発活性を有することが見出された。
【００９２】
さらに、患者に由来するＢ２リンパ球の細胞死の誘発に対する化合物Ｉａ，Ｉｂ，Ｉｃ，Ｉｄ，ＩｅおよびＩｆ及び化合物Ｉａのシュウ酸塩の効果は、この同じ誘発に対する（Ｒ）−ロスコビチンの効果と比較された。
【００９３】
Ｂ２リンパ球はＢ２細胞慢性リンパ性白血病に関与するリンパ球である。
【００９４】
細胞の生存能力は３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＳ）の還元により決定される。
【００９５】
細胞死は、細胞の分解の間に放出されるラクテートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）の活性のレベルの測定により決定される。２つのプロセスが、「リバスＪ．及びボワＪ．（Ribas J．，and Boix J．）、ＢＣＬ−２又はＢＣＬ-ＸＬたんぱく質ではなく、細胞分裂、カスパーゼ阻害、及び巨大分子合成の妨害が２つのＣＤＫ阻害薬により引き起こされる細胞死からのＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を保護する、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２００４年、２９５、９〜２４ページ」に詳細に記載されている。
【００９６】
得られた結果は、下記の表２に示される。
【００９７】
【００９８】
表２において、示された値はμＭで表された平均阻害濃度ＩＣ５０値である。
【００９９】
本発明の化合物Ｉｂ及びＩｄの多嚢胞腎臓病に対する効果もまた（Ｒ）ロスコビチンとの比較においてＭＤＣＫライン上で試験された。化合物Ｉｂ及びＩｄはロスコビチンより５０〜６０倍活性である。
【０１００】
ＸがＮである本発明の化合物の溶解度は、ＸがＣであるものより水に５〜１０倍よく溶けると言われていた。
【０１０１】
すなわち、式Ｉｃの化合物（ＸがＣである）は、０．５μｇ／ｍｌの水への溶解度を有するが、ＸがＮである対応する化合物、即ち式Ｉｂにより示される化合物、は３．３μｇ／ｍｌの水への溶解度を有する。
【０１０２】
式Ｉｂ〜Ｉｈの化合物はそれ自体もまた、本発明である。
【０１０３】
式Ｉの化合物のエステルもまた本発明に含まれる。
【０１０４】
式Ｉの化合物の好ましいエステルは、
アシルエステル、例えば、アセチルエステル、ニコチニルエステル、及びＬシリーズ若しくはＤシリーズのアミノ酸のエステルである。
【０１０５】
該好ましいエステルは、アミノ酸、例えばバリン若しくはロイシンから形成される。
【０１０６】
特に好ましいエステルは、下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４を有する。
【０１０７】
【０１０８】
これは、これらのエステルは式Ｉの化合物の前駆体（プロドラッグ）だからである。
【０１０９】
従って、本発明の化合物は慢性リンパ性白血病を治療するための医薬品の製造における使用のために特に効果的である。それらは慢性リンパ性白血病に罹った患者の治療方法における投与のためにもまた特に適切である。
【０１１０】
それらは腎臓病、特に多嚢胞腎臓病、を治療するための医薬品の製造における使用のためにもまた特に効果的である。同じように、それらは腎臓病、特に多嚢胞腎臓病、に罹った患者の治療方法における投与のためにもまた特に効果的である。
【０１１１】
当業者は、本発明の化合物は、２以上の互いの混合物として、また、慢性リンパ性白血病又は腎臓病、例えば多嚢胞腎臓病、の治療において治療上の活性を有する他の化合物と組み合わせて、及び／又は医薬品の製造において薬学的に許容される任意の賦形剤と組み合わせて使用されることができること及びこれらの組み合わせ及び混合物もまた本願発明に含まれることを容易に理解する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療することを意図された医薬品の製造において、下記式Ｉの少なくとも１の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、エステル若しくは異性体を使用する方法。
上記式中、
ＸはＣ又はＮであり
ＹはＣＨ３又はＯＨであり、かつ
ＺはＨ又はＣＨ３である。
【請求項２】
該病気が腎臓病、例えば多嚢胞腎臓病、であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該病気が、慢性のリンパ性白血病、より特に、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該薬学的に許容される塩がシュウ酸塩又は酒石酸塩又は塩酸塩又はフマール酸塩であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＸがＮである式Ｉの該少なくとも１の化合物を特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
該少なくとも１の化合物が、ＸがＮでありかつＹがＯＨである式Ｉの化合物であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＨであり、下記式Ｉａで示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＨであり、下記式Ｉｂで示される（Ｓ）絶対配置の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
該少なくとも１の化合物が、式Ｉｂの化合物のシュウ酸塩であることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＯＨであり、かつＺがＨであり、下記式Ｉｃで示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくは異性体であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＣであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＨであり、下記式Ｉｄにより示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＣＨ３であり、下記式Ｉｅにより示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＣＨ３である化合物のシュウ酸塩であり、下記式Ｉｆで示されることを特徴とする、請求項１〜４及び１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
該少なくとも１の化合物が、下記式Ｉｇを有する化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくは異性体であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
該少なくとも１の化合物が下記式Ｉｈを有することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
該少なくとも１の化合物が下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４の化合物から選択されたエステルであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
下記式Ｉｂの化合物又はその塩、水和物若しくはエステルの一つ。
【請求項１８】
下記式Ｉｃの化合物又はその塩、水和物若しくは異性体の一つ。
【請求項１９】
下記式Ｉｄの化合物又はその塩、水和物若しくは異性体の一つ。
【請求項２０】
下記式Ｉｅの化合物又は後者の塩、水和物若しくはエステル。
【請求項２１】
下記式Ｉｆの化合物。
【請求項２２】
下記式Ｉｇの化合物又はその塩、水和物、エステル若しくは異性体。
【請求項２３】
下記式Ｉｈの化合物。
【請求項２４】
下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４を有することを特徴とする化合物。
【請求項１】
細胞分裂と細胞死との不均衡が関与する病気を治療することを意図された医薬品の製造において、下記式Ｉの少なくとも１の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物、エステル若しくは異性体を使用する方法。
上記式中、
ＸはＣ又はＮであり
ＹはＣＨ３又はＯＨであり、かつ
ＺはＨ又はＣＨ３である。
【請求項２】
該病気が腎臓病、例えば多嚢胞腎臓病、であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該病気が、慢性のリンパ性白血病、より特に、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該薬学的に許容される塩がシュウ酸塩又は酒石酸塩又は塩酸塩又はフマール酸塩であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＸがＮである式Ｉの該少なくとも１の化合物を特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
該少なくとも１の化合物が、ＸがＮでありかつＹがＯＨである式Ｉの化合物であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＨであり、下記式Ｉａで示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＨであり、下記式Ｉｂで示される（Ｓ）絶対配置の化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
該少なくとも１の化合物が、式Ｉｂの化合物のシュウ酸塩であることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＯＨであり、かつＺがＨであり、下記式Ｉｃで示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくは異性体であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＣであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＨであり、下記式Ｉｄにより示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＣＨ３であり、下記式Ｉｅにより示される化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくはエステルであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
該少なくとも１の化合物が、式ＩにおいてＸがＮであり、ＹがＣＨ３であり、かつＺがＣＨ３である化合物のシュウ酸塩であり、下記式Ｉｆで示されることを特徴とする、請求項１〜４及び１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
該少なくとも１の化合物が、下記式Ｉｇを有する化合物又はその薬学的に許容される塩、水和物若しくは異性体であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
該少なくとも１の化合物が下記式Ｉｈを有することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
該少なくとも１の化合物が下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４の化合物から選択されたエステルであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
下記式Ｉｂの化合物又はその塩、水和物若しくはエステルの一つ。
【請求項１８】
下記式Ｉｃの化合物又はその塩、水和物若しくは異性体の一つ。
【請求項１９】
下記式Ｉｄの化合物又はその塩、水和物若しくは異性体の一つ。
【請求項２０】
下記式Ｉｅの化合物又は後者の塩、水和物若しくはエステル。
【請求項２１】
下記式Ｉｆの化合物。
【請求項２２】
下記式Ｉｇの化合物又はその塩、水和物、エステル若しくは異性体。
【請求項２３】
下記式Ｉｈの化合物。
【請求項２４】
下記式ＩＩ−１〜ＩＩ−４を有することを特徴とする化合物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１０−５３９１４６（Ｐ２０１０−５３９１４６Ａ）
【公表日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２４５４２（Ｐ２０１０−５２４５４２）
【出願日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／００１２７８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６８７６１
【国際公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【出願人】（５００５３１１４１）セントレ・ナショナル・デ・ラ・レシェルシェ・サイエンティフィーク (84)
【出願人】（５１００６８５３０）ユニヴェルシテ デ レンヌ １ (2)
【出願人】（５１００６９３５３）ユニヴェルシテ パリ デカルト (2)
【出願人】（５１００７００６１）ユニヴェルシテ ド ブルターニュ オクシデンタル (1)
【出願人】（５１００７００７２）サントル オスピタリエ ユニヴェルシテール ド ブレスト (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００８／００１２７８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６８７６１
【国際公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【出願人】（５００５３１１４１）セントレ・ナショナル・デ・ラ・レシェルシェ・サイエンティフィーク (84)
【出願人】（５１００６８５３０）ユニヴェルシテ デ レンヌ １ (2)
【出願人】（５１００６９３５３）ユニヴェルシテ パリ デカルト (2)
【出願人】（５１００７００６１）ユニヴェルシテ ド ブルターニュ オクシデンタル (1)
【出願人】（５１００７００７２）サントル オスピタリエ ユニヴェルシテール ド ブレスト (1)
【Ｆターム（参考）】
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