多官能性金属キレート構造を有するステロイド化合物
【課題】溶解性等に優れ、病巣選択的なリポソーム造影剤の製造に適した化合物及び該化合物と金属イオンとからなるキレート化合物を提供する。
【解決手段】 一般式（Ｉ）：
［Ｒは式（II）で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示し；Ｌは２価の連結基を表し；Ｃｈは３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す］
で表される化合物、該化合物と金属イオンとからなるキレート化合物、該キレート化合物を含む膜構成成分として含むリポソーム、及び該リポソームを含むＭＲＩ又はシンチグラフィー造影剤。
【解決手段】 一般式（Ｉ）：
［Ｒは式（II）で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示し；Ｌは２価の連結基を表し；Ｃｈは３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す］
で表される化合物、該化合物と金属イオンとからなるキレート化合物、該キレート化合物を含む膜構成成分として含むリポソーム、及び該リポソームを含むＭＲＩ又はシンチグラフィー造影剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多官能性金属キレート構造を有するステロイド化合物又はその塩に関する。本発明はさらに該化合物、該化合物を含むキレート化合物、又はそれらいずれかの塩を膜構成成分として含むリポソーム及び該リポソームを含む造影剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
非侵襲的な動脈硬化の診断法としては、主にＸ線血管造影法が挙げられる。しかし、この方法は、水溶性のヨード造影剤で血液の流れを造影する方法であるため、病変組織と正常組織との区別がつけにくい。そのため、狭窄が５０％以上進んだ病巣しか検出することができず、虚血性疾患の発作が発症する前に病巣を検出することが困難である。
【０００３】
上記以外の診断法として、近年、動脈硬化巣プラーク中に多く動態分布される造影剤を用いて核磁気共鳴トモグラフィー（MRI）により疾患を検出する方法が報告されている。しかし、該造影剤として報告されている化合物はいずれも診断法に用いることには問題がある。例えば、ヘマトポルフィリン誘導体（特許文献１参照）は皮膚への沈着・着色の欠点が指摘されており、また、脂質に富んだプラークに集積するとの報告があるパーフルオロ側鎖を有するガドリニウム錯体（非特許文献１参照）は、脂肪肝・腎臓上皮・筋組織の腱などの、生体における脂質豊富な組織、器官への集積が危惧されている。
【０００４】
化合物の観点からは、胆汁酸誘導体とポリアミノカルボキシリガンドからなる化合物が知られている。（例えば、特許文献２及び３参照）しかし、これらの化合物は肝臓、胆管の造影及び血液プール剤としての使用に関するものであり、動脈硬化巣プラークの診断への使用、リポソーム化による動脈硬化巣プラーク中への造影剤の集積については何ら言及されていない。
【０００５】
また、リポソーム化の観点からは、フォスファチジルエタノールアミン（PE）とジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）をアミド結合した化合物が知られており（例えば、非特許文献２）、該化合物のガドリニウム錯体のリポソームに関する報告（非特許文献３）もある。しかし、この錯体は難溶解性であるためリポソーム化の際の操作性が悪く、生体内での蓄積性や毒性における懸念もある。
【特許文献１】米国特許第4577636号明細書
【特許文献２】特表2002-533420号公報
【特許文献３】特表2003-525306号公報
【非特許文献１】サーキュレーション（Circulation）, 109, 2890 (2004)
【非特許文献２】ポリメリック マテリアルズ サイエンス アンド エンジニアリング（Polymeric Materials Science and Engineering）, 89, 148 (2003)
【非特許文献３】インオーガニカ キミカ アクタ（Inorganica Chimica Acta）, 331, 151 (2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、病巣選択的な造影のためのリポソーム造影剤に適した化合物であって、特に溶解性及びリポソーム膜構成成分との相溶性に優れた化合物を提供することである。また、本発明の別の課題は、該化合物を含むＭＲＩ造影剤及びシンチグラフィー造影剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は上記の課題を解決すべく研究を行った結果、ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）構造を金属キレート部位として有するステロイド化合物が溶解性に富み、また、造影剤としてのリポソームの構成成分として優れた性質を有していることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【０００８】
すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒは下記一般式（II）：
【化２】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示し；Ｌは２価の連結基を示し（ただし、Ｌは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつＬを構成する酸素原子は０〜１５個であり、窒素原子は０〜６個であり、硫黄原子は０〜３個であり、及び水素原子を除くＬの総原子数は１〜３０個である）；Ｃｈは３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す］で表される化合物又はその塩を提供するものである。
【０００９】
上記発明の好ましい態様として、上記一般式（I）において、下記一般式（III）：
【化３】
（式中、ｐ1及びｐ2はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む上記化合物又はその塩が提供される。
【００１０】
上記発明のより好ましい態様によれば、下記一般式（IV）：
【化４】
（式中、ｐ3及びｐ4はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１１】
上記発明のさらに好ましい態様によれば、Ｃｈが下記一般式（V）：
【化５】
で表される基である上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１２】
また上記発明の別の好ましい態様によれば、Ｃｈが下記一般式（VI）：
【化６】
で表される基である上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１３】
別の観点から、本発明の好ましい態様として、Ｒが下記一般式（VII）：
【化７】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基である上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１４】
上記発明のより好ましい態様によれば、Ｒが下記一般式（VIII）又は（IX）：
【化８】
で表される炭化水素基である化合物又はその塩が提供される。
【００１５】
本発明の別の好ましい態様によれば、Ｌが主鎖中に炭素数１〜２０個のアルキレン基又はアルケニレン基を有する連結基である上記の化合物又はその塩；Ｌが主鎖中に−(OCH2CH2)n−、−(CH2CH2O)n−、−(OCH2CH2CH2)m−、又は−(CH2CH2CH2O)m−（ｎは１〜１０の整数を示し；mは１〜７の整数を示す）で表される部分構造を有する連結基である上記の化合物又はその塩が提供される。
【００１６】
本発明のさらに好ましい態様によれば、上記いずれかの化合物及び金属イオンからなるキレート化合物又はその塩；金属イオンが原子番号21-29、31、32、37-39、42-44、49及び、57-83からなる群から選択される元素の金属イオンである該キレート化合物又はその塩；金属イオンが原子番号21-29、42、44及び、57-71からなる群から選択される常磁性元素の金属イオンである該キレート化合物又はその塩が提供される。
【００１７】
別の観点からは、本発明により、上記の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソームが提供され、その好ましい態様によれば、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含む上記リポソームが提供される。
また、本発明により、上記のリポソームを含むMRI造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記MRI造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記MRI造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のMRI造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のMRI造影剤；マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる上記のMRI造影剤が提供される。
【００１８】
また、本発明により上記のリポソームを含むシンチグラフィー造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記シンチグラフィー造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記シンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤が提供される。
【００１９】
さらに、上記MRI造影剤又はシンチグラフィー造影剤の製造のための上記の化合物、上記キレート化合物、又はそれらのいずれかの塩の使用；MRI造影又はシンチグラフィー造影法であって、上記の化合物、上記キレート化合物、又はそれらのいずれかの塩を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にMRI造影又はシンチグラフィー造影する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物、上記のキレート化合物、又はそれらのいずれかの塩を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にMRI造影又はシンチグラフィー造影する工程を含む方法が本発明により提供される。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の化合物、キレート化合物、及びこれらの塩は、MRI造影剤又はシンチグラフィー造影剤であるリポソームの構成脂質として有用である。本発明により提供される上記の物質は高い溶解性を有しており、リポソーム膜構成成分との相溶性にも優れるという特徴があり、これらの物質を含むリポソームを容易に調製することができる。これらの物質を含むリポソームを用いてMRI造影又はシンチグラフィー造影することにより血管の病巣を選択的に造影できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本明細書において、ある官能基について「置換又は無置換」又は「置換基を有していてもよい」という場合には、その官能基が１又は２以上の置換基を有する場合があることを示しているが、特に言及しない場合には、結合する置換基の個数、置換位置、及び種類は特に限定されない。ある官能基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。本明細書において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、ハロゲン原子（本明細書において「ハロゲン原子」という場合にはフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素のいずれでもよい）、アルキル基（本明細書において「アルキル基」という場合には、直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれでもよく、環状アルキル基にはビシクロアルキル基などの多環性アルキル基を含む。アルキル部分を含む他の置換基のアルキル部分についても同様である）、アルケニル基（シクロアルケニル基、ビシクロアルケニル基を含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホ基、アルキル及びアリールスルフィニル基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリール及びヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、シリル基が挙げられる。
【００２２】
Ｃｈはその構造中に３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す。Ｃｈは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる構造のいずれであってもよい。Ｃｈが示すキレート形成部としては、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸〔DTPA〕ユニット、1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1,4,7,10-四酢酸〔DOTA〕ユニット、1,4,8,11-テトラアザシクロテトラデカン-1,4,8,11-四酢酸〔TETA〕ユニットなどが挙げられるが、これらに限定されることはない。
【００２３】
Ｃｈについてより具体的に説明すると、例えば、下記一般式（III）：
【化９】
で表される構造をＣｈの部分構造として含む場合がより好ましい。
【００２４】
上記一般式（III）で表される部分構造に任意の置換基が付与されてＣｈが形成されるが、置換基の個数、種類、及び置換位置は特に規定されることはない。置換基が付与された後のＣｈは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる構造のいずれであってもよい。置換基の個数は通常２０個以下であり、より好ましくは１５個以下であり、１０個以下であることが最も好ましい。一般式（III）で表される部分構造は二重結合を含んでいてもよい。例えば、上記一般式（III）で表される化学構造において、炭素−炭素の結合は単結合であっても二重結合であってもよい。二重結合を含む場合、二重結合の位置及び個数は特に規定されないが、通常１０個以下であり、５個以下であることがより好ましい。一般式（I）中のＬは上記一般式（III）で表される部分構造のいずれかの原子に直接結合する。上記一般式（III）においてｐ1及びｐ2はそれぞれ独立に１又は２の整数を示すが、ともに１である場合がより好ましい。
【００２５】
また、Ｃｈが下記一般式（IV）：
【化１０】
で表される構造をＣｈの部分構造として含むことがさらに好ましい。
【００２６】
上記一般式（IV）で表される部分構造に任意の置換基が付与されてＣｈが形成されるが、置換基の個数、種類、及び置換位置は特に規定されない。置換基が付与された後のＣｈは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる構造のいずれであってもよい。置換基の個数は通常２０個以下であり、より好ましくは１５個以下であり、１０個以下であることが最も好ましい。一般式（IV）で表される部分構造は二重結合を含んでいてもよい。例えば、上記一般式（IV）で表される化学構造において、炭素−炭素、又は炭素−酸素間の結合は、単結合であっても二重結合であってもよい。二重結合を含む場合、二重結合の位置及び個数は特に規定されないが、通常１０個以下であり、５個以下であることがより好ましい。一般式（I）中のＬは上記一般式（IV）で表される部分構造のいずれかの原子に直接結合する。上記一般式（IV）においてｐ3及びｐ4はそれぞれ独立に１又は２の整数を示すが、ともに１である場合がより好ましい。
【００２７】
最も好ましいＣｈの形態としては、Ｃｈが下記一般式（V）又は（VI）で表される基である場合が挙げられる。この場合、下記一般式（V）又は（VI）で表される基は１又は２個以上の置換基を有していてもよいが、無置換であることが好ましい。また下記一般式（V）又は（VI）で表される構造中に不斉炭素が含まれているが、その立体配置はＲ配置又はＳ配置のいずれであってもよく、両者の混合物であってもよい。一般式（V）又は（VI）において、C1又はC2はそれぞれ一般式（Ｉ）中のＬと直接結合する炭素原子を示す。
【化１１】
【００２８】
Ｒは下記一般式（II）：
【化１２】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示す。Ｒは飽和の基であっても不飽和結合を含んでいてもよい。不飽和結合を含む場合、その位置及び個数は特に規定されないが、通常５個以下であり、３個以下であることがより好ましい。また上記一般式（II）で表される部分構造に任意の置換基が付与されてＲが形成されるが、置換基の個数、種類、及び置換位置は特に規定されない。置換基の個数は通常３０個以下であり、より好ましくは１５個以下であり、１０個以下であることが最も好ましい。また、Ｒで表される基が不斉炭素を含む場合、その立体配置はＲ配置又はＳ配置のいずれであってもよく、両者の混合物であってもよい。不斉炭素が複数含まれる場合、それぞれの不斉炭素は独立にＲ配置又はＳ配置のいずれかの立体配置又は両者の混合物であってもよい。
【００２９】
Ｒで表される炭化水素基の具体的な例として、例えば、コレステロール、コレスタノール、ラノステロール、エストランジオール、エルゴステロール、ジオスゲニン、スチグマステロール、又はシトステロールなどが挙げられるが、これらに限定されることはない。また、Ｒで表される基のうち、上記一般式（II）中のＣ3と上記一般式（Ｉ）中のＬが炭酸エステル結合を介して直接結合する場合が好ましい。
【００３０】
また、Ｒが下記一般式（ＶIII）又は(IX) ：
【化１３】
で表される基である場合が最も好ましい。上記一般式（VIII）又は（IX）で表される基は任意の個数、種類、及び位置に置換基を有していてもよいが、無置換である場合がより好ましい。一般式（ＶIII）又は(IX)で表される基に含まれる各不斉炭素の立体配置は、それぞれ独立にＲ配置及びＳ配置のいずれであってもよく、それらの混合物であってもよい。
【００３１】
Ｌは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつ水素原子を除くＬを構成する原子の総数は１〜３０個である２価の連結基を表す。Ｌが酸素原子を含む場合、１５個以下である場合が好ましく、１２個以下である場合がより好ましく、１０個以下である場合が最も好ましい。Ｌが窒素原子を含む場合、６個以下である場合が好ましく、３個以下である場合がより好ましく、1個以下である場合が最も好ましい。Ｌが硫黄原子を含む場合、３個以下である場合が好ましく、２個以下である場合がより好ましく、1個以下である場合が最も好ましい。また、Ｌは任意の個数の置換基を有していてもよいが、その場合においてもＬは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつＬを構成する炭素原子、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子からなる群から選択される原子の総数が３０個を超えることはない。また、Ｌは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなるいずれの構造であってもよいが、直鎖状又は分岐鎖状であることが好ましく、直鎖状であることが最も好ましい。また、Ｌは飽和の基であっても、不飽和結合を含む基であってもよい。Ｌが不飽和結合を含む連結基である場合、不飽和結合の種類、位置、個数は特に規定されない。
【００３２】
Ｌで表される２価の連結基としてより好ましくは、主鎖中にアルキレン基又はアルケニレン基を含む場合が挙げられる。本明細書中においてＬの「主鎖」とは一般式（Ｉ）におけるＣｈ−で表される基と−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−Ｒで表される基との間を最小個数で結ぶ原子群を意味する。該アルキレン基又はアルケニレン基の炭素数は、通常２０個以下であり、好ましくは１５個以下であり、最も好ましくは１０個以下である。また該アルキレン基又はアルケニレン基は、飽和の基であっても、不飽和結合を含む基であってもよい。不飽和結合を含む基である場合、その種類、位置、個数は特に規定されない。また、該アルキレン基又はアルケニレン基は直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれであってもよいが、直鎖状、又は分岐鎖状が好ましく、直鎖状であることがより好ましい。また、該アルキレン基又はアルケニレン基は置換基を有していてもよい。
【００３３】
別の観点からは、Ｌは主鎖中に−(OCH2CH2)n−、−(CH2CH2O)n−、−(OCH2CH2CH2)m−、又は−(CH2CH2CH2O)m−で表される部分構造を１又は２以上個有することが好ましく、−(OCH2CH2)n−、又は−(CH2CH2O)n−で表される部分構造を１又は２個以上有することがより好ましい。上記の式で表されるいずれかの部分構造を１個有することがさらに好ましい。上記部分構造の表記法において、Ｃｈはその左に結合し、−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−Ｒで表される基は右側に適当な原子団又は基を介して、又は直接結合しているものとする。この場合の原子団又は基として、例えば−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、−Ｎ−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｎ−ＣＯ−、−Ｏ−、−(CH2)n−などが挙げられるが、これらは一例であり、これらに限定されるものではない。なお、いずれの場合においても上記一般式（Ｉ）中に酸素原子同士が直接結合した−Ｏ−Ｏ−基は含まれない。通常、nは1〜１０の整数を表すが、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜５の整数を表す。また通常、mは１〜７の整数を表すが、好ましくは１〜5、より好ましくは2〜4の整数を表す。
【００３４】
以下に本発明の化合物の好ましい例を示すが、本発明の化合物はこれらの例に限定されることはない。
【化１４】
【化１５】
【化１６】
【００３５】
以下に、本発明の化合物の一般的な合成法について説明するが、本発明の化合物の合成法はこれらに限定されるものではない。本発明の化合物の部分構造であるステロイド化合物は、通常市販されているものを使用してもよく、あるいは用途に応じて適宜合成してもよい。合成により入手する場合には、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法により、対応するアルコールやアルキルハライド等を原料として用いることができる。
【００３６】
上記のステロイド化合物に適宜必要な連結基を結合した後に、金属配位能を有するポリアミン誘導体などのキレート形成部と連結することにより本発明の化合物を製造することができる。必要な場合には保護基を用いることもできる。保護基としては、例えば、T. W. Green & P. G. M. Wuts著、Protecting groups in organic synthesis（John Wiley & sonc, inc.）に記載のものを適宜選択して用いることができる。キレート形成部であるポリアミン誘導体との連結は、例えば、Bioconjugate Chem., 10, 137 (1999)や Tetrahedron Lett., 37, 4685 (1996) 、J. Chem. Soc., Perkin Trans 2, 348 (2002) 、又は J. Heterocycl. Chem., 37, 387 (2000) に記載された方法に準じて行うことができる。もっとも、これらの方法は一例であり、これらに限定されるものではない。
【００３７】
本発明のキレート化合物は上述の化合物及び金属イオンからなるキレート化合物である。金属イオンとしては、特に限定されないが、MRI、X線、超音波コントラスト、又はシンチグラフィーなどの造影又は放射線治療の目的に適切な金属イオンとして、常磁性金属、重金属、又は放射性金属同位体の放射性金属の金属イオンを用いることが好ましい。より具体的には、原子番号21-29、31、32、37-39、42-44、49、及び57-83からなる群から選択される元素の金属イオンが好ましい。MRI造影剤として本発明のキレート化合物を使用する場合に適切な金属イオンとしては、原子番号21-29、42、44、及び57-71からなる群から選択される元素の金属イオンが挙げられる。正のMRI剤の調製に用いるためにより好ましい金属は、原子番号24（Cr）、25（Mn）、26（Fe）、63（Eu）、64（Gd）、66（Dy）、又は67（Ho）の各金属であり、原子番号25（Mn）、26（Fe）、又は64（Gd）の各金属がより好ましく、特にMn(I)、Fe(I)、又はGd(I)が好ましい。負のMRI剤の調製に用いるためにより好ましい金属は、原子番号62（Sm）、65（Tb）、又は66（Dy）の各金属である。
【００３８】
本発明の化合物又はキレート化号物は１以上の不斉中心を有する場合があるが、この場合、不斉中心に基づく光学活性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する。純粋な形態の任意の立体異性体、任意の立体異性体の混合物、又はラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。また、本発明の化合物はオレフィン性の二重結合を１個又は２個以上有する場合があるが、その配置はＥ又はＺのいずれであってもよく、両者の混合物として存在していてもよい。本発明の化合物は互変異性体として存在する場合もあるが、任意の互変異性体、又はそれらの混合物は本発明の範囲に包含される。さらに、本発明の化合物は塩を形成する場合があり、遊離形態の化合物又は塩の形態の化合物が水和物又は溶媒和物を形成する場合もあるが、このような場合も本発明の範囲に包含される。塩の種類は特に限定されず、酸付加塩又は塩基付加塩のいずれであってもよい。
【００３９】
本発明のキレート化合物又はその塩はリポソームの膜構成成分として用いることができる。本発明のキレート化合物又はその塩を用いてリポソームを調製する場合、本発明の化合物又はその塩の使用量は、膜構成成分の全質量に対して１０から９０質量％程度、好ましくは１０から８０質量％、さらに好ましくは２０から８０質量％である。本発明のキレート化合物は膜構成成分として１種類を用いてもよいが、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
リポソームの他の膜構成成分としては、リポソームの製造に通常用いられている脂質化合物をいずれも用いてもよい。例えば、Biochim. Biophys. Acta 150(4), 44 (1982)、Adv. In Lipid. Res. 16(1), 1 (1978)、RESEARCH IN LIPOSOMES (P. Machy, L. Leserman著、John Libbey EUROTEXT社)、「リポソーム」（野島、砂本、井上編、南江堂）等に記載されている。脂質化合物としてはリン脂質が好ましく、特に好ましいのはホスファチジルコリン（PC）類である。ホスファチジルコリン類の好ましい例としては、eggPC、ジミリストイルPC（DMPC）、ジパルミトイルPC（DPPC）、ジステアロイルPC（DSPC）、ジオレイルPC（DOPC）等があげられるが、これらに限定されるものではない。
【００４０】
リポソームの膜構成成分として好ましい例としては、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリン（PS）との組み合わせを挙げることができる。ホスファチジルセリンとしては、ホスファチジルコリンの好ましい例として挙げたリン脂質と同様の脂質部位を有する化合物が挙げられる。ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンとを組み合わせて用いる場合、PCとPSの好ましい使用モル比はPC：PS＝９０：１０から１０：９０の間であり、さらに好ましくは、３０：７０から７０：３０の間である。
本発明のリポソームとして好ましい別の例としては、膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンとを含み、さらにリン酸ジアルキルエステルを含むリポソームが挙げられる。リン酸ジアルキルエステルのジアルキルエステルを構成する２個のアルキル基は同一であることが好ましく、それぞれのアルキル基の炭素数は６以上であることが好ましく、１０以上がより好ましく、１２以上がさらに好ましい。好ましいリン酸ジアルキルエステルの例としては、ジラウリルフォスフェート、ジミリスチルフォスフェート、ジセチルフォスフェート等が挙げられるが、これらに限定されることはない。この態様において、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンの合計質量に対するリン酸ジアルキルエステルの好ましい使用量は１から５０質量％までであり、好ましくは１から３０質量％であり、さらに好ましくは１から２０質量％である。
【００４１】
ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リン酸ジアルキルエステル及び本発明の化合物を膜構成成分として含むリポソームにおいて、上記成分の好ましい質量比はPC：PS：リン酸ジアルキルエステル：本発明の化合物が５〜４０質量％：５〜４０質量％：１〜１０質量％：１５〜８０質量％の間で選択することができる。
本発明のリポソームの構成成分は上記４者に限定されず、他の成分を加えることができる。その例としては、コレステロール、コレステロールエステル、スフィンゴエミリン、FEBS Lett. 223, 42 (1987); Proc. Natl. Acad. Sci., USA 85, 6949 (1988)等に記載のモノシアルガングリオキシドGM1誘導体、Chem. Lett. 2145 (1989); Biochim. Biophys. Acta 1148, 77 (1992)等に記載のグルクロン酸誘導体、Biochim. Biophys. Acta 1029, 91 (1990); FEBS Lett. 268, 235 (1990)等に記載のポリエチレングリコール誘導体が挙げられるが、これに限られるものではない。
【００４２】
本発明のリポソームは、当業者が利用可能ないかなる方法で製造してもよい。製造法の例としては、先に挙げたリポソームの総説成書類の他、Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9, 467 (1980)、"Liposomes" (M. J. Ostro編、MARCELL DEKKER、INC.)等に記載されている。具体例としては、超音波処理法、エタノール注入法、フレンチプレス法、エーテル注入法、コール酸法、カルシウム融合法、凍結融解法、逆相蒸発法等が挙げられるが、これらに限られるものではない。本発明のリポソームのサイズは、上記の方法で作成できるサイズのいずれであってもよいが、通常は平均が400 nm以下であり、200 nm以下が好ましい。リポソームの構造は特に限定されず、ユニラメラ又はマルチラメラなどのいずれの形態でもよい。また、リポソームの内部に適宜の薬物や他の造影剤の１種又は２種以上を配合することも可能である。
【００４３】
本発明のリポソームを造影剤として用いる場合には、好ましくは非経口的に投与することができ、より好ましくは静脈内投与することができる。例えば、注射剤や点滴剤などの形態の製剤を凍結乾燥形態の粉末状組成物として提供し、用時に水又は他の適当な媒体（例えば生理食塩水、ブドウ等輸液、緩衝液など）に溶解ないし再懸濁して用いることができる。本発明のリポソームを造影剤として用いる場合、投与量はリポソーム中の化合物含有量が従来の造影剤の化合物含有量と同程度になるように適宜決定することが可能である。
【００４４】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、動脈硬化又はPTCA後の再狭窄等の血管疾患においては、血管の中膜を形成する血管平滑筋細胞が異常増殖を起こすと同時に内膜に遊走し、血流路を狭くすることが知られている。正常の血管平滑筋細胞が異常増殖を始めるトリガーはまだ完全に明らかにされていないが、マクロファージの内膜への遊走と泡沫化が重要な要因であることが知られており、その後に血管平滑筋細胞がフェノタイプ変換（収縮型から合成型）を起こすことが報告されている。
【００４５】
本発明のリポソームを用いると、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋に対して造影剤として作用する本発明のキレート化合物を選択的に取り込ませることができる。その結果、病巣と非疾患部位とをコントラストをつけて造影することが可能である。従って、本発明の造影剤は、特に血管疾患のMRI造影に好適に使用でき、例えば、動脈硬化巣やPTCA後の再狭窄等の造影を行うことができる。
【００４６】
また、例えば J. Biol. Chem., 265, 5226 (1990)に記載されているように、リン脂質よりなるリポソーム、特にPCとPSから形成されるリポソームが、スカベンジャーレセプターを介してマクロファージに集積しやすいことが知られている。従って、本発明のリポソームを使用することにより、本発明の化合物をマクロファージが局在化している組織又は疾患部位に集積させることができる。本発明のリポソームを用いると、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合に比べて、より多くのキレート化合物をマクロファージに集積させることが可能である。
【００４７】
マクロファージの局在化が認められ、本発明のリポソームで好適に造影可能な組織としては、例えば、血管、肝臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、又は腎臓上皮を挙げることができる。また、ある種の疾患においては、疾患部位にはマクロファージが集積していることが知られている。こうした疾患としては、腫瘍、動脈硬化、炎症、又は感染等を挙げることができる。従って、本発明のリポソームを用いることにより、これらの疾患部位を特定することができる。特に、アテローム性動脈硬化病変の初期過程において、スカベンジャーレセプターを介して変性LDLを大量に取り込んだ泡沫化マクロファージが集積していることが知られており〔Am. J. Pathol., 103, 181(1981)、Annu. Rev. Biochem., 52, 223(1983)〕、このマクロファージに本発明のリポソームを集積化させてMRI造影をすることにより、他の手段では困難な動脈硬化初期病変の位置を特定することが可能である。
【００４８】
本発明のリポソームを用いた造影方法は特に限定されない。例えば、通常のMRI造影剤を用いた造影方法と同様にして水のT1/T2緩和時間の変化を測定することにより造影を行うことができる。また、適宜、適切な金属イオンを選択することにより、シンチグラフィー造影剤、Ｘ線造影剤、光像形成剤、又は超音波コントラスト剤としても使用することも可能である。
【実施例】
【００４９】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。なお、下記の実施例中の化合物番号は上記に示した化合物例の番号に対応している。また、実施例中の化合物の構造はNMRスペクトル、及びマススペクトルにより確認した。
【００５０】
製造例１：化合物１−２の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 3.50gをテトラヒドロフラン(THF) 30 mlに溶解し、0℃でコレステロール6.96 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム1.3 gと1,3-プロパンジオール1.95 mLをTHF 15 mLに溶かした溶液に加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを0.40 g(9%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40(1H, d) 4.54-4.41 (1H, m) 4.29 (2H, t) 4.26-4.08 (1H, m) 3.74 (2H, t) 2.46-2.34 (3H, m) 2.05-0.80 (38H, m) 0.68 (3H,s)
【００５１】
（２）上記アルコールをアセトン10 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を0.15 g(68%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40(1H, d) 4.54-4.34 (3H, m) 4.26-4.14 (3H, m) 2.80-0.80 (40H, m) 0.68 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 525 (M+Na)
【００５２】
（３）上記カルボン酸146 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル(DTPA：ジエチレントリアミン５酢酸)211 mgと、2-クロロ-1,3-ジメチルイミダゾリニウムクロリド(DMC) 51mg、ピリジン0.05 mL存在下、ジクロロメタン3.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物1-2のtert-ブチルエステル体を103 mg(30%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1189 (M+H)
【００５３】
（４）上記化合物1-2のtert-ブチルエステル体103 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム27 mgとメタノール3.9 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで1-2のガドリニウム錯体を16 mg(18%)で得た。
【００５４】
製造例２：化合物１−３の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 1.46 gをTHF 15mlに溶解し、0℃でコレステロール3.48 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム65 mgと1,4-ブタンジオール2.43 gをTHF 45mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを1.1 g(24%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.53-4.42 (1H, m) 4.26 (2H, t) 3.68 (2H, t) 2.48-2.30 (3H, m) 2.05-0.80 (42H, m) 0.68 (3H,s)
【００５５】
（２）上記アルコールをアセトン10 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を0.15 g(15%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.55-4.40 (1H, m) 4.26 (2H, t) 2.70-0.80 (45H, m) 0.68 (3H, s)
【００５６】
（３）上記カルボン酸400 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13),2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル200 mgと、1-エチル-3-(3-ジエチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC) 82 mg、ジメチルアミノピリジン1.2 mg存在下、ジクロロメタン1.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物1-3のtert-ブチルエステル体を57 mg(17%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1202 (M+H)
【００５７】
（４）上記化合物1-3のtert-ブチルエステル体180 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム16 mgとメタノール2.0 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで1-3のガドリニウム錯体を27 mg(54%)で得た。
【００５８】
製造例３：化合物１−４の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 3.50 gをTHF 30 mlに溶解し、0℃でコレステロール6.96 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム1.3 gと1,5-ペンタンジオール2.85 mLをTHF 15 mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを0.30 g(6%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.38(1H, d) 4.54-4.41 (1H, m) 4.13 (2H, t) 4.07 (1H, t) 3.66 (2H, t) 2.56-2.36 (3H, m) 2.05-0.85 (45H, m) 0.68 (3H,s)
【００５９】
（２）上記アルコール0.38 gをアセトン7.4 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を82 mg(21%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.38(1H, d) 4.54-4.41 (1H, m) 4.15 (2H, t) 4.05 (2H, t) 2.56-2.36 (3H, m) 2.10-0.80 (42H, m) 0.68 (3H,s)
【００６０】
（３）上記カルボン酸159 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル−DTPAペンタ-t-ブチルエステル211 mgと、DMC 51 mg、ピリジン0.05 mL存在下、ジクロロメタン3.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物1-4のtert-ブチルエステル体を164 mg(45%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1216 (M+H)
【００６１】
（４）上記化合物1-4のtert-ブチルエステル体164 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム38 mgとメタノール5.4 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで1-4のガドリニウム錯体を66 mg(55%)で得た。
【００６２】
製造例４：化合物３−２の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 1.46 gをTHF 15 mlに溶解し、0℃でコレステロール3.48 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム54 mgとトリエチレングリコール3.6 mLをTHF 45 mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを1.3 g(25%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.56-4.41 (1H, m) 4.28 (2H, t) 3.80-3.58 (10H, m) 2.50-2.30 (3H, m) 2.10-0.80 (37H, m) 0.68 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 585 (M+Na)
【００６３】
（２）上記アルコール0.80 gをアセトン7.1 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を0.29 g(35%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.56-4.41 (1H, m) 4.34-4.25 (2H, m) 3.85-3.60 (10H, m) 2.45-2.35 (3H, m) 2.10-0.80 (37H, m) 0.68 (3H,s)
【００６４】
（３）上記カルボン酸107 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル127 mgと、DMC 35 mg、ピリジン0.3 mL存在下、ジクロロメタン1.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物3-2のtert-ブチルエステル体を124 mg(55%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1263 (M+H)
【００６５】
（４）上記化合物3-2のtert-ブチルエステル体124 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液3.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム56 mgとメタノール3.2 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで3-2のガドリニウム錯体を54 mg(35%)で得た。
【００６６】
製造例５：化合物３−３の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 1.46 gをTHF 15 mlに溶解し、0℃でコレステロール3.48 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム54 mgとテトラエチレングリコール4.7 mLをTHF 45 mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを4.4 g(81%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40 (1H, d) 4.55-4.41 (1H, m) 4.28 (2H, t) 3.76-3.59 (14H, m) 2.45-2.15 (3H, m) 2.10-0.80 (37H, m) 0.69 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 629 (M+Na)
【００６７】
（２）上記アルコールをアセトン28 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、更に水100 mLを加えた。酢酸エチル200 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を2.2 g(62%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40 (1H, d) 4.55-4.40 (1H, m) 4.28 (2H, t) 4.15(2H,s) 3.80-3.62 (12H, m) 2.80-0.80 (40H, m) 0.68 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 643 (M+Na)
【００６８】
（３）上記カルボン酸400 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル300 mgと、EDC 123 mg、ジメチルアミノピリジン0.8 mg存在下、ジクロロメタン2.2 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物3-3のtert-ブチルエステル体を180 mg(32%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1329 (M+Na)
【００６９】
（４）上記化合物3-3のtert-ブチルエステル体180 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム45 mgとメタノール3.0 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで3-3のガドリニウム錯体を54 mg(35%)で得た。
【００７０】
試験例１：溶解性試験
本発明の化合物のガドリニウム錯体、及び既知の比較化合物をそれぞれ1 mMになるように秤量し、それぞれの溶媒を1 mL加えて溶解性（室温25℃）を調べた。その結果、本発明の化合物のGd錯体は、比較化合物に比べて、特にクロロホルムに対する溶解性が向上しており、リポソーム製剤化するための優れた特性を有していることが明らかとなった。
【表１】
【００７１】
【化１７】
【００７２】
試験例２：リポソーム形成試験
J. Med. Chem., 25(12), 1500 (1982) に記載の方法に従い、下記に示した割合のジパルミトイルＰＣ（フナコシ社製、No.1201-41-0225）、ジパルミトイルＰＳ（フナコシ社製、No.1201-42-0237）を、本発明の化合物とともにナス型フラスコ内でクロロホルムに溶解して均一溶液とした後、溶媒を減圧で留去してフラスコ底面に薄膜を形成した。この薄膜を真空で乾燥後、0.9%生理食塩水（光製薬社製、No512）を適当量加え、超音波照射（Branson社製、No.3542プローブ型発振器、0.1mW）を氷冷下５分実施した後に、リポソーム調製器（セントラル科学社製）を用いて粒子径85から120 nmのリポソーム分散液を調製した。
【００７３】
上記方法に従い、ジパルミトイルＰＣ、ジパルミトイルＰＳ、及び化合物1-4若しくは化合物3-2のGd錯体の混合比率を変えてリポソーム形成を行った結果、化合物1-4、化合物3-2いずれのGd錯体も比較化合物に比べてジパルミトイルＰＳの含量が高い時でも安定してリポソームの形成が確認され、リポソーム製剤化するための優れた特性を有していることが明らかになった。
【表２】
【００７４】
試験例３：マウス３日間連続投与毒性試験
化合物1-2のGd錯体、化合物1-3のGd錯体、化合物1-4のGd錯体、化合物3-2のGd錯体、及び化合物3-3のGd錯体につきそれぞれ下記の手順で毒性試験を行った。
ＩＣＲマウス雄６週齢（日本チャールスリバー）を購入し、１週間の検疫期間の後、クリーン動物舎内（空調：へパフィルター クラス1000、室温：20〜24℃ 湿度：35〜60％）で１週間馴化した。その後、最大耐用量(Maximum tolerance dose: MTD)を求めるため、尾静脈よりマウス血清懸濁液を投与した。マウス血清懸濁液は、生理食塩水（光製薬社製）又はグルコース溶液（大塚製薬社製）のいずれかを溶媒として投与した。次に求められたＭＴＤ値をもとに、その1/2量の各錯体を３日間、尾静脈より３日間連続で投与した（ｎ＝３匹とする）。症状観察は各投与後６時間までとし、神経毒性を観察後、剖検を行ない、主要臓器について所見を取った。結果を下記に示す。本発明の化合物は低毒性であり、MRI造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有することが明らかである。
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多官能性金属キレート構造を有するステロイド化合物又はその塩に関する。本発明はさらに該化合物、該化合物を含むキレート化合物、又はそれらいずれかの塩を膜構成成分として含むリポソーム及び該リポソームを含む造影剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
非侵襲的な動脈硬化の診断法としては、主にＸ線血管造影法が挙げられる。しかし、この方法は、水溶性のヨード造影剤で血液の流れを造影する方法であるため、病変組織と正常組織との区別がつけにくい。そのため、狭窄が５０％以上進んだ病巣しか検出することができず、虚血性疾患の発作が発症する前に病巣を検出することが困難である。
【０００３】
上記以外の診断法として、近年、動脈硬化巣プラーク中に多く動態分布される造影剤を用いて核磁気共鳴トモグラフィー（MRI）により疾患を検出する方法が報告されている。しかし、該造影剤として報告されている化合物はいずれも診断法に用いることには問題がある。例えば、ヘマトポルフィリン誘導体（特許文献１参照）は皮膚への沈着・着色の欠点が指摘されており、また、脂質に富んだプラークに集積するとの報告があるパーフルオロ側鎖を有するガドリニウム錯体（非特許文献１参照）は、脂肪肝・腎臓上皮・筋組織の腱などの、生体における脂質豊富な組織、器官への集積が危惧されている。
【０００４】
化合物の観点からは、胆汁酸誘導体とポリアミノカルボキシリガンドからなる化合物が知られている。（例えば、特許文献２及び３参照）しかし、これらの化合物は肝臓、胆管の造影及び血液プール剤としての使用に関するものであり、動脈硬化巣プラークの診断への使用、リポソーム化による動脈硬化巣プラーク中への造影剤の集積については何ら言及されていない。
【０００５】
また、リポソーム化の観点からは、フォスファチジルエタノールアミン（PE）とジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）をアミド結合した化合物が知られており（例えば、非特許文献２）、該化合物のガドリニウム錯体のリポソームに関する報告（非特許文献３）もある。しかし、この錯体は難溶解性であるためリポソーム化の際の操作性が悪く、生体内での蓄積性や毒性における懸念もある。
【特許文献１】米国特許第4577636号明細書
【特許文献２】特表2002-533420号公報
【特許文献３】特表2003-525306号公報
【非特許文献１】サーキュレーション（Circulation）, 109, 2890 (2004)
【非特許文献２】ポリメリック マテリアルズ サイエンス アンド エンジニアリング（Polymeric Materials Science and Engineering）, 89, 148 (2003)
【非特許文献３】インオーガニカ キミカ アクタ（Inorganica Chimica Acta）, 331, 151 (2002)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、病巣選択的な造影のためのリポソーム造影剤に適した化合物であって、特に溶解性及びリポソーム膜構成成分との相溶性に優れた化合物を提供することである。また、本発明の別の課題は、該化合物を含むＭＲＩ造影剤及びシンチグラフィー造影剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は上記の課題を解決すべく研究を行った結果、ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）構造を金属キレート部位として有するステロイド化合物が溶解性に富み、また、造影剤としてのリポソームの構成成分として優れた性質を有していることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【０００８】
すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒは下記一般式（II）：
【化２】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示し；Ｌは２価の連結基を示し（ただし、Ｌは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつＬを構成する酸素原子は０〜１５個であり、窒素原子は０〜６個であり、硫黄原子は０〜３個であり、及び水素原子を除くＬの総原子数は１〜３０個である）；Ｃｈは３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す］で表される化合物又はその塩を提供するものである。
【０００９】
上記発明の好ましい態様として、上記一般式（I）において、下記一般式（III）：
【化３】
（式中、ｐ1及びｐ2はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む上記化合物又はその塩が提供される。
【００１０】
上記発明のより好ましい態様によれば、下記一般式（IV）：
【化４】
（式中、ｐ3及びｐ4はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１１】
上記発明のさらに好ましい態様によれば、Ｃｈが下記一般式（V）：
【化５】
で表される基である上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１２】
また上記発明の別の好ましい態様によれば、Ｃｈが下記一般式（VI）：
【化６】
で表される基である上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１３】
別の観点から、本発明の好ましい態様として、Ｒが下記一般式（VII）：
【化７】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基である上記一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩が提供される。
【００１４】
上記発明のより好ましい態様によれば、Ｒが下記一般式（VIII）又は（IX）：
【化８】
で表される炭化水素基である化合物又はその塩が提供される。
【００１５】
本発明の別の好ましい態様によれば、Ｌが主鎖中に炭素数１〜２０個のアルキレン基又はアルケニレン基を有する連結基である上記の化合物又はその塩；Ｌが主鎖中に−(OCH2CH2)n−、−(CH2CH2O)n−、−(OCH2CH2CH2)m−、又は−(CH2CH2CH2O)m−（ｎは１〜１０の整数を示し；mは１〜７の整数を示す）で表される部分構造を有する連結基である上記の化合物又はその塩が提供される。
【００１６】
本発明のさらに好ましい態様によれば、上記いずれかの化合物及び金属イオンからなるキレート化合物又はその塩；金属イオンが原子番号21-29、31、32、37-39、42-44、49及び、57-83からなる群から選択される元素の金属イオンである該キレート化合物又はその塩；金属イオンが原子番号21-29、42、44及び、57-71からなる群から選択される常磁性元素の金属イオンである該キレート化合物又はその塩が提供される。
【００１７】
別の観点からは、本発明により、上記の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソームが提供され、その好ましい態様によれば、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含む上記リポソームが提供される。
また、本発明により、上記のリポソームを含むMRI造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記MRI造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記MRI造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のMRI造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のMRI造影剤；マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる上記のMRI造影剤が提供される。
【００１８】
また、本発明により上記のリポソームを含むシンチグラフィー造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記シンチグラフィー造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記シンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤が提供される。
【００１９】
さらに、上記MRI造影剤又はシンチグラフィー造影剤の製造のための上記の化合物、上記キレート化合物、又はそれらのいずれかの塩の使用；MRI造影又はシンチグラフィー造影法であって、上記の化合物、上記キレート化合物、又はそれらのいずれかの塩を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にMRI造影又はシンチグラフィー造影する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物、上記のキレート化合物、又はそれらのいずれかの塩を膜構成成分として含むリポソームをヒトを含む哺乳類動物に投与した後にMRI造影又はシンチグラフィー造影する工程を含む方法が本発明により提供される。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の化合物、キレート化合物、及びこれらの塩は、MRI造影剤又はシンチグラフィー造影剤であるリポソームの構成脂質として有用である。本発明により提供される上記の物質は高い溶解性を有しており、リポソーム膜構成成分との相溶性にも優れるという特徴があり、これらの物質を含むリポソームを容易に調製することができる。これらの物質を含むリポソームを用いてMRI造影又はシンチグラフィー造影することにより血管の病巣を選択的に造影できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本明細書において、ある官能基について「置換又は無置換」又は「置換基を有していてもよい」という場合には、その官能基が１又は２以上の置換基を有する場合があることを示しているが、特に言及しない場合には、結合する置換基の個数、置換位置、及び種類は特に限定されない。ある官能基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。本明細書において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、ハロゲン原子（本明細書において「ハロゲン原子」という場合にはフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素のいずれでもよい）、アルキル基（本明細書において「アルキル基」という場合には、直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれでもよく、環状アルキル基にはビシクロアルキル基などの多環性アルキル基を含む。アルキル部分を含む他の置換基のアルキル部分についても同様である）、アルケニル基（シクロアルケニル基、ビシクロアルケニル基を含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホ基、アルキル及びアリールスルフィニル基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリール及びヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、シリル基が挙げられる。
【００２２】
Ｃｈはその構造中に３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す。Ｃｈは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる構造のいずれであってもよい。Ｃｈが示すキレート形成部としては、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸〔DTPA〕ユニット、1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1,4,7,10-四酢酸〔DOTA〕ユニット、1,4,8,11-テトラアザシクロテトラデカン-1,4,8,11-四酢酸〔TETA〕ユニットなどが挙げられるが、これらに限定されることはない。
【００２３】
Ｃｈについてより具体的に説明すると、例えば、下記一般式（III）：
【化９】
で表される構造をＣｈの部分構造として含む場合がより好ましい。
【００２４】
上記一般式（III）で表される部分構造に任意の置換基が付与されてＣｈが形成されるが、置換基の個数、種類、及び置換位置は特に規定されることはない。置換基が付与された後のＣｈは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる構造のいずれであってもよい。置換基の個数は通常２０個以下であり、より好ましくは１５個以下であり、１０個以下であることが最も好ましい。一般式（III）で表される部分構造は二重結合を含んでいてもよい。例えば、上記一般式（III）で表される化学構造において、炭素−炭素の結合は単結合であっても二重結合であってもよい。二重結合を含む場合、二重結合の位置及び個数は特に規定されないが、通常１０個以下であり、５個以下であることがより好ましい。一般式（I）中のＬは上記一般式（III）で表される部分構造のいずれかの原子に直接結合する。上記一般式（III）においてｐ1及びｐ2はそれぞれ独立に１又は２の整数を示すが、ともに１である場合がより好ましい。
【００２５】
また、Ｃｈが下記一般式（IV）：
【化１０】
で表される構造をＣｈの部分構造として含むことがさらに好ましい。
【００２６】
上記一般式（IV）で表される部分構造に任意の置換基が付与されてＣｈが形成されるが、置換基の個数、種類、及び置換位置は特に規定されない。置換基が付与された後のＣｈは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる構造のいずれであってもよい。置換基の個数は通常２０個以下であり、より好ましくは１５個以下であり、１０個以下であることが最も好ましい。一般式（IV）で表される部分構造は二重結合を含んでいてもよい。例えば、上記一般式（IV）で表される化学構造において、炭素−炭素、又は炭素−酸素間の結合は、単結合であっても二重結合であってもよい。二重結合を含む場合、二重結合の位置及び個数は特に規定されないが、通常１０個以下であり、５個以下であることがより好ましい。一般式（I）中のＬは上記一般式（IV）で表される部分構造のいずれかの原子に直接結合する。上記一般式（IV）においてｐ3及びｐ4はそれぞれ独立に１又は２の整数を示すが、ともに１である場合がより好ましい。
【００２７】
最も好ましいＣｈの形態としては、Ｃｈが下記一般式（V）又は（VI）で表される基である場合が挙げられる。この場合、下記一般式（V）又は（VI）で表される基は１又は２個以上の置換基を有していてもよいが、無置換であることが好ましい。また下記一般式（V）又は（VI）で表される構造中に不斉炭素が含まれているが、その立体配置はＲ配置又はＳ配置のいずれであってもよく、両者の混合物であってもよい。一般式（V）又は（VI）において、C1又はC2はそれぞれ一般式（Ｉ）中のＬと直接結合する炭素原子を示す。
【化１１】
【００２８】
Ｒは下記一般式（II）：
【化１２】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示す。Ｒは飽和の基であっても不飽和結合を含んでいてもよい。不飽和結合を含む場合、その位置及び個数は特に規定されないが、通常５個以下であり、３個以下であることがより好ましい。また上記一般式（II）で表される部分構造に任意の置換基が付与されてＲが形成されるが、置換基の個数、種類、及び置換位置は特に規定されない。置換基の個数は通常３０個以下であり、より好ましくは１５個以下であり、１０個以下であることが最も好ましい。また、Ｒで表される基が不斉炭素を含む場合、その立体配置はＲ配置又はＳ配置のいずれであってもよく、両者の混合物であってもよい。不斉炭素が複数含まれる場合、それぞれの不斉炭素は独立にＲ配置又はＳ配置のいずれかの立体配置又は両者の混合物であってもよい。
【００２９】
Ｒで表される炭化水素基の具体的な例として、例えば、コレステロール、コレスタノール、ラノステロール、エストランジオール、エルゴステロール、ジオスゲニン、スチグマステロール、又はシトステロールなどが挙げられるが、これらに限定されることはない。また、Ｒで表される基のうち、上記一般式（II）中のＣ3と上記一般式（Ｉ）中のＬが炭酸エステル結合を介して直接結合する場合が好ましい。
【００３０】
また、Ｒが下記一般式（ＶIII）又は(IX) ：
【化１３】
で表される基である場合が最も好ましい。上記一般式（VIII）又は（IX）で表される基は任意の個数、種類、及び位置に置換基を有していてもよいが、無置換である場合がより好ましい。一般式（ＶIII）又は(IX)で表される基に含まれる各不斉炭素の立体配置は、それぞれ独立にＲ配置及びＳ配置のいずれであってもよく、それらの混合物であってもよい。
【００３１】
Ｌは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつ水素原子を除くＬを構成する原子の総数は１〜３０個である２価の連結基を表す。Ｌが酸素原子を含む場合、１５個以下である場合が好ましく、１２個以下である場合がより好ましく、１０個以下である場合が最も好ましい。Ｌが窒素原子を含む場合、６個以下である場合が好ましく、３個以下である場合がより好ましく、1個以下である場合が最も好ましい。Ｌが硫黄原子を含む場合、３個以下である場合が好ましく、２個以下である場合がより好ましく、1個以下である場合が最も好ましい。また、Ｌは任意の個数の置換基を有していてもよいが、その場合においてもＬは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつＬを構成する炭素原子、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子からなる群から選択される原子の総数が３０個を超えることはない。また、Ｌは直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなるいずれの構造であってもよいが、直鎖状又は分岐鎖状であることが好ましく、直鎖状であることが最も好ましい。また、Ｌは飽和の基であっても、不飽和結合を含む基であってもよい。Ｌが不飽和結合を含む連結基である場合、不飽和結合の種類、位置、個数は特に規定されない。
【００３２】
Ｌで表される２価の連結基としてより好ましくは、主鎖中にアルキレン基又はアルケニレン基を含む場合が挙げられる。本明細書中においてＬの「主鎖」とは一般式（Ｉ）におけるＣｈ−で表される基と−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−Ｒで表される基との間を最小個数で結ぶ原子群を意味する。該アルキレン基又はアルケニレン基の炭素数は、通常２０個以下であり、好ましくは１５個以下であり、最も好ましくは１０個以下である。また該アルキレン基又はアルケニレン基は、飽和の基であっても、不飽和結合を含む基であってもよい。不飽和結合を含む基である場合、その種類、位置、個数は特に規定されない。また、該アルキレン基又はアルケニレン基は直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれであってもよいが、直鎖状、又は分岐鎖状が好ましく、直鎖状であることがより好ましい。また、該アルキレン基又はアルケニレン基は置換基を有していてもよい。
【００３３】
別の観点からは、Ｌは主鎖中に−(OCH2CH2)n−、−(CH2CH2O)n−、−(OCH2CH2CH2)m−、又は−(CH2CH2CH2O)m−で表される部分構造を１又は２以上個有することが好ましく、−(OCH2CH2)n−、又は−(CH2CH2O)n−で表される部分構造を１又は２個以上有することがより好ましい。上記の式で表されるいずれかの部分構造を１個有することがさらに好ましい。上記部分構造の表記法において、Ｃｈはその左に結合し、−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−Ｒで表される基は右側に適当な原子団又は基を介して、又は直接結合しているものとする。この場合の原子団又は基として、例えば−Ｏ−ＣＯ−Ｏ−、−Ｎ−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｎ−ＣＯ−、−Ｏ−、−(CH2)n−などが挙げられるが、これらは一例であり、これらに限定されるものではない。なお、いずれの場合においても上記一般式（Ｉ）中に酸素原子同士が直接結合した−Ｏ−Ｏ−基は含まれない。通常、nは1〜１０の整数を表すが、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜５の整数を表す。また通常、mは１〜７の整数を表すが、好ましくは１〜5、より好ましくは2〜4の整数を表す。
【００３４】
以下に本発明の化合物の好ましい例を示すが、本発明の化合物はこれらの例に限定されることはない。
【化１４】
【化１５】
【化１６】
【００３５】
以下に、本発明の化合物の一般的な合成法について説明するが、本発明の化合物の合成法はこれらに限定されるものではない。本発明の化合物の部分構造であるステロイド化合物は、通常市販されているものを使用してもよく、あるいは用途に応じて適宜合成してもよい。合成により入手する場合には、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法により、対応するアルコールやアルキルハライド等を原料として用いることができる。
【００３６】
上記のステロイド化合物に適宜必要な連結基を結合した後に、金属配位能を有するポリアミン誘導体などのキレート形成部と連結することにより本発明の化合物を製造することができる。必要な場合には保護基を用いることもできる。保護基としては、例えば、T. W. Green & P. G. M. Wuts著、Protecting groups in organic synthesis（John Wiley & sonc, inc.）に記載のものを適宜選択して用いることができる。キレート形成部であるポリアミン誘導体との連結は、例えば、Bioconjugate Chem., 10, 137 (1999)や Tetrahedron Lett., 37, 4685 (1996) 、J. Chem. Soc., Perkin Trans 2, 348 (2002) 、又は J. Heterocycl. Chem., 37, 387 (2000) に記載された方法に準じて行うことができる。もっとも、これらの方法は一例であり、これらに限定されるものではない。
【００３７】
本発明のキレート化合物は上述の化合物及び金属イオンからなるキレート化合物である。金属イオンとしては、特に限定されないが、MRI、X線、超音波コントラスト、又はシンチグラフィーなどの造影又は放射線治療の目的に適切な金属イオンとして、常磁性金属、重金属、又は放射性金属同位体の放射性金属の金属イオンを用いることが好ましい。より具体的には、原子番号21-29、31、32、37-39、42-44、49、及び57-83からなる群から選択される元素の金属イオンが好ましい。MRI造影剤として本発明のキレート化合物を使用する場合に適切な金属イオンとしては、原子番号21-29、42、44、及び57-71からなる群から選択される元素の金属イオンが挙げられる。正のMRI剤の調製に用いるためにより好ましい金属は、原子番号24（Cr）、25（Mn）、26（Fe）、63（Eu）、64（Gd）、66（Dy）、又は67（Ho）の各金属であり、原子番号25（Mn）、26（Fe）、又は64（Gd）の各金属がより好ましく、特にMn(I)、Fe(I)、又はGd(I)が好ましい。負のMRI剤の調製に用いるためにより好ましい金属は、原子番号62（Sm）、65（Tb）、又は66（Dy）の各金属である。
【００３８】
本発明の化合物又はキレート化号物は１以上の不斉中心を有する場合があるが、この場合、不斉中心に基づく光学活性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する。純粋な形態の任意の立体異性体、任意の立体異性体の混合物、又はラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。また、本発明の化合物はオレフィン性の二重結合を１個又は２個以上有する場合があるが、その配置はＥ又はＺのいずれであってもよく、両者の混合物として存在していてもよい。本発明の化合物は互変異性体として存在する場合もあるが、任意の互変異性体、又はそれらの混合物は本発明の範囲に包含される。さらに、本発明の化合物は塩を形成する場合があり、遊離形態の化合物又は塩の形態の化合物が水和物又は溶媒和物を形成する場合もあるが、このような場合も本発明の範囲に包含される。塩の種類は特に限定されず、酸付加塩又は塩基付加塩のいずれであってもよい。
【００３９】
本発明のキレート化合物又はその塩はリポソームの膜構成成分として用いることができる。本発明のキレート化合物又はその塩を用いてリポソームを調製する場合、本発明の化合物又はその塩の使用量は、膜構成成分の全質量に対して１０から９０質量％程度、好ましくは１０から８０質量％、さらに好ましくは２０から８０質量％である。本発明のキレート化合物は膜構成成分として１種類を用いてもよいが、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
リポソームの他の膜構成成分としては、リポソームの製造に通常用いられている脂質化合物をいずれも用いてもよい。例えば、Biochim. Biophys. Acta 150(4), 44 (1982)、Adv. In Lipid. Res. 16(1), 1 (1978)、RESEARCH IN LIPOSOMES (P. Machy, L. Leserman著、John Libbey EUROTEXT社)、「リポソーム」（野島、砂本、井上編、南江堂）等に記載されている。脂質化合物としてはリン脂質が好ましく、特に好ましいのはホスファチジルコリン（PC）類である。ホスファチジルコリン類の好ましい例としては、eggPC、ジミリストイルPC（DMPC）、ジパルミトイルPC（DPPC）、ジステアロイルPC（DSPC）、ジオレイルPC（DOPC）等があげられるが、これらに限定されるものではない。
【００４０】
リポソームの膜構成成分として好ましい例としては、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリン（PS）との組み合わせを挙げることができる。ホスファチジルセリンとしては、ホスファチジルコリンの好ましい例として挙げたリン脂質と同様の脂質部位を有する化合物が挙げられる。ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンとを組み合わせて用いる場合、PCとPSの好ましい使用モル比はPC：PS＝９０：１０から１０：９０の間であり、さらに好ましくは、３０：７０から７０：３０の間である。
本発明のリポソームとして好ましい別の例としては、膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンとを含み、さらにリン酸ジアルキルエステルを含むリポソームが挙げられる。リン酸ジアルキルエステルのジアルキルエステルを構成する２個のアルキル基は同一であることが好ましく、それぞれのアルキル基の炭素数は６以上であることが好ましく、１０以上がより好ましく、１２以上がさらに好ましい。好ましいリン酸ジアルキルエステルの例としては、ジラウリルフォスフェート、ジミリスチルフォスフェート、ジセチルフォスフェート等が挙げられるが、これらに限定されることはない。この態様において、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンの合計質量に対するリン酸ジアルキルエステルの好ましい使用量は１から５０質量％までであり、好ましくは１から３０質量％であり、さらに好ましくは１から２０質量％である。
【００４１】
ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リン酸ジアルキルエステル及び本発明の化合物を膜構成成分として含むリポソームにおいて、上記成分の好ましい質量比はPC：PS：リン酸ジアルキルエステル：本発明の化合物が５〜４０質量％：５〜４０質量％：１〜１０質量％：１５〜８０質量％の間で選択することができる。
本発明のリポソームの構成成分は上記４者に限定されず、他の成分を加えることができる。その例としては、コレステロール、コレステロールエステル、スフィンゴエミリン、FEBS Lett. 223, 42 (1987); Proc. Natl. Acad. Sci., USA 85, 6949 (1988)等に記載のモノシアルガングリオキシドGM1誘導体、Chem. Lett. 2145 (1989); Biochim. Biophys. Acta 1148, 77 (1992)等に記載のグルクロン酸誘導体、Biochim. Biophys. Acta 1029, 91 (1990); FEBS Lett. 268, 235 (1990)等に記載のポリエチレングリコール誘導体が挙げられるが、これに限られるものではない。
【００４２】
本発明のリポソームは、当業者が利用可能ないかなる方法で製造してもよい。製造法の例としては、先に挙げたリポソームの総説成書類の他、Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9, 467 (1980)、"Liposomes" (M. J. Ostro編、MARCELL DEKKER、INC.)等に記載されている。具体例としては、超音波処理法、エタノール注入法、フレンチプレス法、エーテル注入法、コール酸法、カルシウム融合法、凍結融解法、逆相蒸発法等が挙げられるが、これらに限られるものではない。本発明のリポソームのサイズは、上記の方法で作成できるサイズのいずれであってもよいが、通常は平均が400 nm以下であり、200 nm以下が好ましい。リポソームの構造は特に限定されず、ユニラメラ又はマルチラメラなどのいずれの形態でもよい。また、リポソームの内部に適宜の薬物や他の造影剤の１種又は２種以上を配合することも可能である。
【００４３】
本発明のリポソームを造影剤として用いる場合には、好ましくは非経口的に投与することができ、より好ましくは静脈内投与することができる。例えば、注射剤や点滴剤などの形態の製剤を凍結乾燥形態の粉末状組成物として提供し、用時に水又は他の適当な媒体（例えば生理食塩水、ブドウ等輸液、緩衝液など）に溶解ないし再懸濁して用いることができる。本発明のリポソームを造影剤として用いる場合、投与量はリポソーム中の化合物含有量が従来の造影剤の化合物含有量と同程度になるように適宜決定することが可能である。
【００４４】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、動脈硬化又はPTCA後の再狭窄等の血管疾患においては、血管の中膜を形成する血管平滑筋細胞が異常増殖を起こすと同時に内膜に遊走し、血流路を狭くすることが知られている。正常の血管平滑筋細胞が異常増殖を始めるトリガーはまだ完全に明らかにされていないが、マクロファージの内膜への遊走と泡沫化が重要な要因であることが知られており、その後に血管平滑筋細胞がフェノタイプ変換（収縮型から合成型）を起こすことが報告されている。
【００４５】
本発明のリポソームを用いると、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋に対して造影剤として作用する本発明のキレート化合物を選択的に取り込ませることができる。その結果、病巣と非疾患部位とをコントラストをつけて造影することが可能である。従って、本発明の造影剤は、特に血管疾患のMRI造影に好適に使用でき、例えば、動脈硬化巣やPTCA後の再狭窄等の造影を行うことができる。
【００４６】
また、例えば J. Biol. Chem., 265, 5226 (1990)に記載されているように、リン脂質よりなるリポソーム、特にPCとPSから形成されるリポソームが、スカベンジャーレセプターを介してマクロファージに集積しやすいことが知られている。従って、本発明のリポソームを使用することにより、本発明の化合物をマクロファージが局在化している組織又は疾患部位に集積させることができる。本発明のリポソームを用いると、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合に比べて、より多くのキレート化合物をマクロファージに集積させることが可能である。
【００４７】
マクロファージの局在化が認められ、本発明のリポソームで好適に造影可能な組織としては、例えば、血管、肝臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、又は腎臓上皮を挙げることができる。また、ある種の疾患においては、疾患部位にはマクロファージが集積していることが知られている。こうした疾患としては、腫瘍、動脈硬化、炎症、又は感染等を挙げることができる。従って、本発明のリポソームを用いることにより、これらの疾患部位を特定することができる。特に、アテローム性動脈硬化病変の初期過程において、スカベンジャーレセプターを介して変性LDLを大量に取り込んだ泡沫化マクロファージが集積していることが知られており〔Am. J. Pathol., 103, 181(1981)、Annu. Rev. Biochem., 52, 223(1983)〕、このマクロファージに本発明のリポソームを集積化させてMRI造影をすることにより、他の手段では困難な動脈硬化初期病変の位置を特定することが可能である。
【００４８】
本発明のリポソームを用いた造影方法は特に限定されない。例えば、通常のMRI造影剤を用いた造影方法と同様にして水のT1/T2緩和時間の変化を測定することにより造影を行うことができる。また、適宜、適切な金属イオンを選択することにより、シンチグラフィー造影剤、Ｘ線造影剤、光像形成剤、又は超音波コントラスト剤としても使用することも可能である。
【実施例】
【００４９】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。なお、下記の実施例中の化合物番号は上記に示した化合物例の番号に対応している。また、実施例中の化合物の構造はNMRスペクトル、及びマススペクトルにより確認した。
【００５０】
製造例１：化合物１−２の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 3.50gをテトラヒドロフラン(THF) 30 mlに溶解し、0℃でコレステロール6.96 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム1.3 gと1,3-プロパンジオール1.95 mLをTHF 15 mLに溶かした溶液に加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを0.40 g(9%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40(1H, d) 4.54-4.41 (1H, m) 4.29 (2H, t) 4.26-4.08 (1H, m) 3.74 (2H, t) 2.46-2.34 (3H, m) 2.05-0.80 (38H, m) 0.68 (3H,s)
【００５１】
（２）上記アルコールをアセトン10 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を0.15 g(68%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40(1H, d) 4.54-4.34 (3H, m) 4.26-4.14 (3H, m) 2.80-0.80 (40H, m) 0.68 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 525 (M+Na)
【００５２】
（３）上記カルボン酸146 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル(DTPA：ジエチレントリアミン５酢酸)211 mgと、2-クロロ-1,3-ジメチルイミダゾリニウムクロリド(DMC) 51mg、ピリジン0.05 mL存在下、ジクロロメタン3.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物1-2のtert-ブチルエステル体を103 mg(30%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1189 (M+H)
【００５３】
（４）上記化合物1-2のtert-ブチルエステル体103 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム27 mgとメタノール3.9 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで1-2のガドリニウム錯体を16 mg(18%)で得た。
【００５４】
製造例２：化合物１−３の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 1.46 gをTHF 15mlに溶解し、0℃でコレステロール3.48 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム65 mgと1,4-ブタンジオール2.43 gをTHF 45mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを1.1 g(24%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.53-4.42 (1H, m) 4.26 (2H, t) 3.68 (2H, t) 2.48-2.30 (3H, m) 2.05-0.80 (42H, m) 0.68 (3H,s)
【００５５】
（２）上記アルコールをアセトン10 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を0.15 g(15%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.55-4.40 (1H, m) 4.26 (2H, t) 2.70-0.80 (45H, m) 0.68 (3H, s)
【００５６】
（３）上記カルボン酸400 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13),2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル200 mgと、1-エチル-3-(3-ジエチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC) 82 mg、ジメチルアミノピリジン1.2 mg存在下、ジクロロメタン1.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物1-3のtert-ブチルエステル体を57 mg(17%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1202 (M+H)
【００５７】
（４）上記化合物1-3のtert-ブチルエステル体180 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム16 mgとメタノール2.0 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで1-3のガドリニウム錯体を27 mg(54%)で得た。
【００５８】
製造例３：化合物１−４の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 3.50 gをTHF 30 mlに溶解し、0℃でコレステロール6.96 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム1.3 gと1,5-ペンタンジオール2.85 mLをTHF 15 mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを0.30 g(6%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.38(1H, d) 4.54-4.41 (1H, m) 4.13 (2H, t) 4.07 (1H, t) 3.66 (2H, t) 2.56-2.36 (3H, m) 2.05-0.85 (45H, m) 0.68 (3H,s)
【００５９】
（２）上記アルコール0.38 gをアセトン7.4 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を82 mg(21%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.38(1H, d) 4.54-4.41 (1H, m) 4.15 (2H, t) 4.05 (2H, t) 2.56-2.36 (3H, m) 2.10-0.80 (42H, m) 0.68 (3H,s)
【００６０】
（３）上記カルボン酸159 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル−DTPAペンタ-t-ブチルエステル211 mgと、DMC 51 mg、ピリジン0.05 mL存在下、ジクロロメタン3.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物1-4のtert-ブチルエステル体を164 mg(45%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1216 (M+H)
【００６１】
（４）上記化合物1-4のtert-ブチルエステル体164 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム38 mgとメタノール5.4 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで1-4のガドリニウム錯体を66 mg(55%)で得た。
【００６２】
製造例４：化合物３−２の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 1.46 gをTHF 15 mlに溶解し、0℃でコレステロール3.48 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム54 mgとトリエチレングリコール3.6 mLをTHF 45 mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを1.3 g(25%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.56-4.41 (1H, m) 4.28 (2H, t) 3.80-3.58 (10H, m) 2.50-2.30 (3H, m) 2.10-0.80 (37H, m) 0.68 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 585 (M+Na)
【００６３】
（２）上記アルコール0.80 gをアセトン7.1 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、水50 mLを加えた。酢酸エチル100 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を0.29 g(35%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.39 (1H, d) 4.56-4.41 (1H, m) 4.34-4.25 (2H, m) 3.85-3.60 (10H, m) 2.45-2.35 (3H, m) 2.10-0.80 (37H, m) 0.68 (3H,s)
【００６４】
（３）上記カルボン酸107 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル127 mgと、DMC 35 mg、ピリジン0.3 mL存在下、ジクロロメタン1.0 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物3-2のtert-ブチルエステル体を124 mg(55%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1263 (M+H)
【００６５】
（４）上記化合物3-2のtert-ブチルエステル体124 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液3.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム56 mgとメタノール3.2 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで3-2のガドリニウム錯体を54 mg(35%)で得た。
【００６６】
製造例５：化合物３−３の調製
（１）カルボニルジイミダゾール 1.46 gをTHF 15 mlに溶解し、0℃でコレステロール3.48 gをTHF 30 mLに溶かした溶液をゆっくりと滴下した。2時間攪拌した後、この溶液を50%水素化ナトリウム54 mgとテトラエチレングリコール4.7 mLをTHF 45 mLに溶かした溶液へと加えた。1時間攪拌した後、飽和塩化アンモニウム水溶液100 mLを加え、酢酸エチル200 mLで抽出した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、コレステロール誘導体アルコールを4.4 g(81%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40 (1H, d) 4.55-4.41 (1H, m) 4.28 (2H, t) 3.76-3.59 (14H, m) 2.45-2.15 (3H, m) 2.10-0.80 (37H, m) 0.69 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 629 (M+Na)
【００６７】
（２）上記アルコールをアセトン28 mLに溶解し、溶液の色がオレンジになるまでJones試薬を加えた。室温で4時間攪拌した後に、溶液の色が緑になるまでイソプロパノールを加え、更に水100 mLを加えた。酢酸エチル200 mLで抽出し、カラムクロマトグラフィーを行うことでコレステロール誘導体カルボン酸を2.2 g(62%)得た。
1H-NMR (300MHz, CDCl3) δ: 5.40 (1H, d) 4.55-4.40 (1H, m) 4.28 (2H, t) 4.15(2H,s) 3.80-3.62 (12H, m) 2.80-0.80 (40H, m) 0.68 (3H,s)
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 643 (M+Na)
【００６８】
（３）上記カルボン酸400 mgを非特許文献5（シンセティック コミュニケーションズ (SYNTHETIC COMMUNICATIONS), 26(13), 2511 (1996)）に記載の方法で合成した1-(R)-ヒドロキシメチル-DTPAペンタ-t-ブチルエステル300 mgと、EDC 123 mg、ジメチルアミノピリジン0.8 mg存在下、ジクロロメタン2.2 mL中、室温で5時間攪拌した。反応終了後、除媒することで得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、化合物3-3のtert-ブチルエステル体を180 mg(32%)得た。
Mass(MALDI-TOFF) : m/z (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1329 (M+Na)
【００６９】
（４）上記化合物3-3のtert-ブチルエステル体180 mgを４規定の塩酸ジオキサン溶液2.0 mL中、室温で３時間半攪拌した。除媒した後に、塩化ガドリニウム45 mgとメタノール3.0 mLを加え、室温で攪拌した。水酸化ナトリウム水溶液を加え、析出した白色固体をメタノールで洗浄し、減圧下で乾燥することで3-3のガドリニウム錯体を54 mg(35%)で得た。
【００７０】
試験例１：溶解性試験
本発明の化合物のガドリニウム錯体、及び既知の比較化合物をそれぞれ1 mMになるように秤量し、それぞれの溶媒を1 mL加えて溶解性（室温25℃）を調べた。その結果、本発明の化合物のGd錯体は、比較化合物に比べて、特にクロロホルムに対する溶解性が向上しており、リポソーム製剤化するための優れた特性を有していることが明らかとなった。
【表１】
【００７１】
【化１７】
【００７２】
試験例２：リポソーム形成試験
J. Med. Chem., 25(12), 1500 (1982) に記載の方法に従い、下記に示した割合のジパルミトイルＰＣ（フナコシ社製、No.1201-41-0225）、ジパルミトイルＰＳ（フナコシ社製、No.1201-42-0237）を、本発明の化合物とともにナス型フラスコ内でクロロホルムに溶解して均一溶液とした後、溶媒を減圧で留去してフラスコ底面に薄膜を形成した。この薄膜を真空で乾燥後、0.9%生理食塩水（光製薬社製、No512）を適当量加え、超音波照射（Branson社製、No.3542プローブ型発振器、0.1mW）を氷冷下５分実施した後に、リポソーム調製器（セントラル科学社製）を用いて粒子径85から120 nmのリポソーム分散液を調製した。
【００７３】
上記方法に従い、ジパルミトイルＰＣ、ジパルミトイルＰＳ、及び化合物1-4若しくは化合物3-2のGd錯体の混合比率を変えてリポソーム形成を行った結果、化合物1-4、化合物3-2いずれのGd錯体も比較化合物に比べてジパルミトイルＰＳの含量が高い時でも安定してリポソームの形成が確認され、リポソーム製剤化するための優れた特性を有していることが明らかになった。
【表２】
【００７４】
試験例３：マウス３日間連続投与毒性試験
化合物1-2のGd錯体、化合物1-3のGd錯体、化合物1-4のGd錯体、化合物3-2のGd錯体、及び化合物3-3のGd錯体につきそれぞれ下記の手順で毒性試験を行った。
ＩＣＲマウス雄６週齢（日本チャールスリバー）を購入し、１週間の検疫期間の後、クリーン動物舎内（空調：へパフィルター クラス1000、室温：20〜24℃ 湿度：35〜60％）で１週間馴化した。その後、最大耐用量(Maximum tolerance dose: MTD)を求めるため、尾静脈よりマウス血清懸濁液を投与した。マウス血清懸濁液は、生理食塩水（光製薬社製）又はグルコース溶液（大塚製薬社製）のいずれかを溶媒として投与した。次に求められたＭＴＤ値をもとに、その1/2量の各錯体を３日間、尾静脈より３日間連続で投与した（ｎ＝３匹とする）。症状観察は各投与後６時間までとし、神経毒性を観察後、剖検を行ない、主要臓器について所見を取った。結果を下記に示す。本発明の化合物は低毒性であり、MRI造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有することが明らかである。
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒは下記一般式（II）：
【化２】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示し；Ｌは２価の連結基を示し（ただし、Ｌは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつＬを構成する酸素原子は０〜１５個であり、窒素原子は０〜６個であり、硫黄原子は０〜３個であり、及び水素原子を除くＬの総原子数は１〜３０個である）；Ｃｈは３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す］で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
下記一般式（III）：
【化３】
（式中、ｐ1及びｐ2はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
下記一般式（IV）：
【化４】
（式中、ｐ3及びｐ4はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
Ｃｈが下記一般式（V）：
【化５】
で表される基である請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項５】
Ｃｈが下記一般式（VI）：
【化６】
で表される基である請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項６】
Ｒが下記一般式（VII）：
【化７】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基である請求項１ないし５のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項７】
Ｒが下記一般式（VIII）又は（IX）：
【化８】
で表される炭化水素基である請求項６に記載の化合物又はその塩。
【請求項８】
Ｌが主鎖中に炭素数１〜２０個のアルキレン基又はアルケニレン基を有する連結基である請求項１ないし７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項９】
Ｌが主鎖中に−(OCH2CH2)n−、−(CH2CH2O)n−、−(OCH2CH2CH2)m−、又は−(CH2CH2CH2O)m−（ｎは１〜１０の整数を示し；mは１〜７の整数を示す）で表される部分構造を有する連結基である請求項８に記載の化合物又はその塩。
【請求項１０】
請求項１ないし９のいずれか１項に記載の化合物及び金属イオンからなるキレート化合物又はその塩。
【請求項１１】
金属イオンが原子番号21-29、31、32、37-39、42-44、49及び、57-83からなる群から選択される元素の金属イオンである請求項１０に記載のキレート化合物又はその塩。
【請求項１２】
金属イオンが原子番号21-29、42、44及び、57-71からなる群から選択される常磁性元素の金属イオンである請求項１０に記載のキレート化合物又はその塩。
【請求項１３】
請求項１０ないし１２のいずれか１項に記載のキレート化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム。
【請求項１４】
ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含む請求項１３に記載のリポソーム。
【請求項１５】
請求項１３又は１４に記載のリポソームを含むＭＲＩ造影剤。
【請求項１６】
血管疾患の造影に用いるための請求項１５に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項１７】
泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項１５に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項１８】
マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影のための請求項１５に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項１９】
マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項１８に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項２０】
マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる請求項１８に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項２１】
請求項１３又は１４に記載のリポソームを含むシンチグラフィー造影剤。
【請求項２２】
血管疾患の造影に用いるための請求項２１に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２３】
泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項２１に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２４】
マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影のための請求項２１に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２５】
マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項２４に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２６】
マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる請求項２４に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
【化１】
［式中、Ｒは下記一般式（II）：
【化２】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基を示し；Ｌは２価の連結基を示し（ただし、Ｌは炭素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、及び水素原子からなる群から選択される原子により構成され、かつＬを構成する酸素原子は０〜１５個であり、窒素原子は０〜６個であり、硫黄原子は０〜３個であり、及び水素原子を除くＬの総原子数は１〜３０個である）；Ｃｈは３個以上の窒素原子を含むキレート形成部を示す］で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
下記一般式（III）：
【化３】
（式中、ｐ1及びｐ2はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
下記一般式（IV）：
【化４】
（式中、ｐ3及びｐ4はそれぞれ独立に１又は２の整数を示す）で表される構造をＣｈの部分構造として含む請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
Ｃｈが下記一般式（V）：
【化５】
で表される基である請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項５】
Ｃｈが下記一般式（VI）：
【化６】
で表される基である請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項６】
Ｒが下記一般式（VII）：
【化７】
で表される構造を部分構造として含む炭化水素基である請求項１ないし５のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項７】
Ｒが下記一般式（VIII）又は（IX）：
【化８】
で表される炭化水素基である請求項６に記載の化合物又はその塩。
【請求項８】
Ｌが主鎖中に炭素数１〜２０個のアルキレン基又はアルケニレン基を有する連結基である請求項１ないし７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
【請求項９】
Ｌが主鎖中に−(OCH2CH2)n−、−(CH2CH2O)n−、−(OCH2CH2CH2)m−、又は−(CH2CH2CH2O)m−（ｎは１〜１０の整数を示し；mは１〜７の整数を示す）で表される部分構造を有する連結基である請求項８に記載の化合物又はその塩。
【請求項１０】
請求項１ないし９のいずれか１項に記載の化合物及び金属イオンからなるキレート化合物又はその塩。
【請求項１１】
金属イオンが原子番号21-29、31、32、37-39、42-44、49及び、57-83からなる群から選択される元素の金属イオンである請求項１０に記載のキレート化合物又はその塩。
【請求項１２】
金属イオンが原子番号21-29、42、44及び、57-71からなる群から選択される常磁性元素の金属イオンである請求項１０に記載のキレート化合物又はその塩。
【請求項１３】
請求項１０ないし１２のいずれか１項に記載のキレート化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム。
【請求項１４】
ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含む請求項１３に記載のリポソーム。
【請求項１５】
請求項１３又は１４に記載のリポソームを含むＭＲＩ造影剤。
【請求項１６】
血管疾患の造影に用いるための請求項１５に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項１７】
泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項１５に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項１８】
マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影のための請求項１５に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項１９】
マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項１８に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項２０】
マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる請求項１８に記載のＭＲＩ造影剤。
【請求項２１】
請求項１３又は１４に記載のリポソームを含むシンチグラフィー造影剤。
【請求項２２】
血管疾患の造影に用いるための請求項２１に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２３】
泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項２１に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２４】
マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影のための請求項２１に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２５】
マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項２４に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項２６】
マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる請求項２４に記載のシンチグラフィー造影剤。
【公開番号】特開２００７−２１０９７３（Ｐ２００７−２１０９７３Ａ）
【公開日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−３４８９５（Ｐ２００６−３４８９５）
【出願日】平成１８年２月１３日（２００６．２．１３）
【出願人】（３０６０３７３１１）富士フイルム株式会社 (25,513)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月１３日（２００６．２．１３）
【出願人】（３０６０３７３１１）富士フイルム株式会社 (25,513)
【Ｆターム（参考）】
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