患者のＭＧＭＴレベルに基づいて癌を処置するための、テモゾロミドの改良された投薬養生法
【課題】癌、腫瘍、または転移性疾患のような増殖性障害に苦しむ被験体を処置するための新しい方法およびキットを提供すること。
【解決手段】処置を必要とする患者において癌を処置するための医薬の製造のためのテモゾロミドの使用が、開示されており、それは、患者のＭＧＭＴレベルに基づいた改良された投薬養生法および／または投薬計画に従ってテモゾロミドを投与することを包含する。テモゾロミドで患者を処置するためのさらに改良された投薬養生法および／または投薬計画も、開示されている。
【解決手段】処置を必要とする患者において癌を処置するための医薬の製造のためのテモゾロミドの使用が、開示されており、それは、患者のＭＧＭＴレベルに基づいた改良された投薬養生法および／または投薬計画に従ってテモゾロミドを投与することを包含する。テモゾロミドで患者を処置するためのさらに改良された投薬養生法および／または投薬計画も、開示されている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、癌、腫瘍、または転移性疾患のような増殖性障害に苦しむ被験体を処置するための新しい方法およびキットを記述する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
本明細書中の参考文献の議論または引用は、そのような参考文献が本発明に対する先行技術であることの承認として、解釈されないものとする。
【０００３】
非特許文献１は、脳腫瘍が、全ての悪性の疾患のうちのおよそ２％を構成することを報告する。しかしながら、１００，０００人に５人の発生率で、１７，０００より多くの症例が、アメリカ合衆国では毎年診断され、およそ１３，０００の関連死を伴うことが述べられている。Ｓｔｕｐｐらの報告によると、成人では、最も共通する組織学的知見は、グレード３の未分化神経膠星状細胞腫およびグレード４の多形性グリア芽細胞腫（「ＧＢＭ」）である。Ｓｔｕｐｐらによると、悪性グリオームの標準的な管理は、実行可能な場合、外科的切除による細胞減少を含み、その後、補助的化学療法を伴うまたは補助的化学療法なしの放射線療法（ＲＴ）が続く。しかしながら、Ｓｔｕｐｐらは、この多方面からのアプローチにも関わらず、ＧＢＭの患者の予後が、悪いままであることを報告する。ＧＢＭのメジアン生存率は、典型的に９〜１２ヶ月の範囲にあり、２年の生存率は、ほんの８％〜１２％の範囲であると報告されている。
【０００４】
ニトロソウレアは、悪性脳腫瘍の処置に用いられる主要な化学療法剤である。しかしながら、ニトロソウレアは、ほんの穏当な抗腫瘍活性を示してきた。アメリカ合衆国では頻繁に処方されているが、単剤であるカルムスチン（ＢＣＮＵ）もしくはロムスチンまたは組合せ養生法としてプロカルバジン、ロムスチン、およびビンクリスチンを用いた補助的化学療法の有効性は、未だ決定的に明らかにされていない。
【０００５】
化学療法の効力である、致死の宿主毒性を引き起こすことなく腫瘍細胞を根絶するための化学療法の能力は、薬剤の選択性に依存する。抗癌剤のうちの一つのクラスであるアルキル化剤は、ＤＮＡに結合し、ＤＮＡらせん状構造を構造的にゆがめ、ＤＮＡの転写および翻訳を妨げることにより、細胞死を引き起こす。正常細胞では、アルキル化剤の損傷作用は、細胞のＤＮＡ修復酵素、特に、Ｏ６−アルキルグアニン−ＤＮＡ−アルキルトランスフェラーゼ（ＡＧＡＴ）としても公知のＯ６−メチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＭＧＭＴ）により修復され得る。ＭＧＭＴのレベルは、同じ型の腫瘍間でさえ、腫瘍細胞で変化する。ＭＧＭＴをコードする遺伝子は、一般に、変異も欠失もされない。むしろ、腫瘍細胞中のＭＧＭＴの低いレベルは、後成の改変に起因する；ＭＧＭＴのプロモーター領域は、メチル化され、その結果、ＭＧＭＴ遺伝子の転写を阻害してＭＧＭＴの発現を妨げる。
【０００６】
メチル化は、数系列の証拠により、遺伝子発現、細胞分化、腫瘍形成、Ｘ染色体の不活性化、ゲノムインプリンティング、並びに他の主要な生物学的プロセスにおいて役割を果たすことが示されている。真核細胞では、グアノシンのすぐ５’側に存在するシトシン残基のメチル化が、シトシン−グアニン（ＣＧ）の乏しい領域において主に存在する。反対に、正常細胞では、ＣｐＧアイランドは、Ｘ染色体の不活性化、並びに５’側の調節領域のメチル化が転写の抑制を誘導し得る親特異的なインプリンティングの間を除いて、メチル化されないままである。腫瘍抑制遺伝子の発現も、通常はメチル化されないＣｐＧの新生ＤＮＡメチル化によって廃止され得る。
【０００７】
ＤＮＡ修復酵素をコードする遺伝子の過剰なメチル化は、一定の癌の処置に対する臨床的な応答を予測するためのマーカーとして働き得る。一定の化学療法剤（例えばアルキル化剤を含む）は、ＤＮＡを架橋することにより細胞の増殖を阻害して、細胞死を生じる。ＤＮＡ修復酵素は、架橋された構造を除去するので、そのような化学療法剤を用いた処置の努力は、挫折し得、そしてそのような化学療法剤に対する抵抗性が、発達する。ほとんどの化学療法剤の有害性の副作用、並びに様々な処置のための一定の薬剤が効果的でないという観点から、化学療法剤での処置に対する臨床的な応答を予測することが、望ましい。
【０００８】
特許文献１は、細胞増殖性障害についての化学療法の処置に関する方法を開示する。特に、特定のアルキル化剤を含む「一定の型の化学療法剤に対する臨床的応答を予測する」ための方法が、提供される。上記方法は、処置を必要とする患者由来のＤＮＡ修復酵素をコードする核酸のメチル化状態の決定、並びにそれと処置を必要としない被験体由来のＤＮＡ修復酵素をコードする核酸のメチル化状態との比較を伴う。上記方法は、しかしながら、好ましくない「予測」を有する任意の患者の臨床的結果を改善する方法についての示唆を提供していない。
【０００９】
テモゾロミドは、アメリカ合衆国でのＴｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびヨーロッパでのＴｅｍｏｄａｌ（登録商標）という商品名で、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ．から入手可能なアルキル化剤である。経口投与のためのＴｅｍｏｄａｒ（登録商標）カプセルは、イミダゾテトラジン誘導体であるテモゾロミドを含む。テモゾロミドの化学名は、３，４−ジヒドロ−３−メチル−４−オキソイミダゾ[５，１−ｄ]−ａｓ−テトラジン−８−カルボキサミド（特許文献２を参照）である。テモゾロミドまたはその代謝産物であるＭＴＩＣの細胞毒性は、主に、ＤＮＡのアルキル化に起因すると考えられる。アルキル化（メチル化）は、主に、グアニンのＯ６位およびＮ７位に生じる。
【００１０】
Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）（テモゾロミド）カプセルが、アメリカ合衆国では、新しく診断された多形性グリア芽細胞腫、並びに難治性の未分化神経膠星状細胞腫を有する成人の患者（即ち、ニトロソウレアおよびプロカルバジンを含む薬剤養生法に際して疾患の進行を経験したことのある、最初の再発の時期にいる患者）の処置のために、現在示されている。Ｔｅｍｏｄａｌ（登録商標）は、標準的な治療の後に再発または進行を示す多形性グリア芽細胞腫または未分化神経膠星状細胞腫のような、悪性グリオームを有する患者の処置のため、現在ヨーロッパで認可されている。一定の処置方法は、増殖性障害を有する一定の患者にとって有効であるが、（特に、特徴付けられた患者を標的とすることを含む）さらなる改良された処置の大きな必要性が、持続的に存在する。増殖性障害（特に癌）のための改良された処置の必要性という観点から、処置のための新規の方法が、当該分野にとって歓迎される貢献である。本発明は、まさにそのような処置方法を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第６，７７３，８９７号明細書
【特許文献２】米国特許第５，２６０，２９１号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｓｔｕｐｐら著、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃ．、２００２年、第２０巻、第５号、ｐ．１３７５−１３８２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
本発明の一つの実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置するための方法を提供し、上記方法は、上記患者にテモゾロミド（ＴＭＺ）の標準用量強度または増加された用量強度を、上記患者から得られた試料中のＯ６−メチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスファラーゼ（ＭＧＭＴ）遺伝子のメチル化状態に基づいて投与することを包含する。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、上記患者由来の試料中のＭＧＭＴをコードする遺伝子（例えば、プロモーター領域）がメチル化されている場合、テモゾロミドの標準用量強度が、投与される；しかしながら、ＭＧＭＴをコードする遺伝子がメチル化されていない（即ち、検出レベル未満）場合、テモゾロミドの増加された用量強度が、上記患者に投与される。本発明のこの実施形態の一つの態様は、以下の工程を包含する：（１）上記患者由来の試料中のＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているか否かを評価する工程および；（２）（ａ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出される場合、上記患者にテモゾロミドの標準用量強度を投与する工程または（ｂ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、上記患者にテモゾロミドの増加された用量強度を投与する工程。本発明のこの実施形態の別の態様は、以下の工程を包含する：ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化が検出されない患者に、増加された用量強度を投与する工程。
【００１４】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「標準用量強度」は、１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２のテモゾロミドの投薬計画で、１０００ｍｇ／ｍ２／４週間という最大全用量に関して２８日周期において５日間投与される、５／２８投薬養生法を意味する。この投薬養生法は、１．０という「用量強度」を提供する。
【００１５】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「増加された用量強度」は、（標準用量強度と比較した場合に）１．４〜４．２倍、好ましくは１．４〜２．８倍、より好ましくは１．８〜２．８倍強いテモゾロミドの用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画を意味する。そのような増加された用量強度を提供する投薬養生法および投薬計画の非制限的な実施例が、表１および表２に図示されている。
【００１６】
（表１）
ＴＭＺの投薬養生法および用量強度
【００１７】
【表１】
本発明のこの実施形態によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、標準用量強度の少なくとも１．６倍または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画が好ましい；そのような条件下で、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度がより好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００１８】
当業者によって理解され得る通り、ＭＧＭＴをコードする遺伝子がメチル化されていない場合、ＭＧＭＴタンパク質が発現され、そして、本明細書中の下に詳述される通りに（例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学的技術またはＭＧＭＴ活性のための酵素アッセイなどによるか）もしくはＭＧＭＴのｍＲＮＡレベルのためのノーザンブロット（例えば、Ｄ’Ａｔｒｉら著、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２０００年、第２９４巻、ｐ．６６４−６７１を参照）またはＭＧＭＴのｍＲＮＡのためのＲＴ−ＰＣＲにより（例えば、Ｐａｔｅｌら著、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９７年、第１７巻、第１０号、ｐ．５８１３−５８２２；Ｗａｔｔｓら著、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９７年、第１７巻、第９号、ｐ．５６１２−５６１９を参照）により検出され得る。従って、本発明の代替実施形態によると、ＭＧＭＴタンパク質の存在または不在が、患者試料中にて評価される。標準用量強度または増加された用量強度が、上記患者に対して、上記患者試料中のＭＧＭＴタンパク質の不在または存在に基づいて投与される。本発明のこの態様と一致して、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、標準用量強度の少なくとも１．６倍または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する、表１に示される通りの投薬養生法および／または投薬計画が、好ましい；そのような条件下で、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度が、より好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置する方法を提供し、上記方法は、上記患者に、上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化の程度またはレベルに基づいたテモゾロミドの投薬養生法を割り当てる工程および／または上記投薬養生法を上記患者に投与する工程を包含する。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルは、上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを決定することにより評価される。上記レベルは、「低い」、「中等度の」、または「高い」として分類され、そして、上記患者は、下のスキーム１に示されるスキームに従って、表２に提示される投薬養生法のうちの一つによって処置される。
【００２０】
（表２）
（ＴＭＺの投薬養生法および用量強度）
【００２１】
【表２】
（スキーム１）
【００２２】
【表３】
患者から得られた細胞試料中のＭＧＭＴタンパク質の程度またはレベルが、多様な方法のうちの任意の方法により評価され得る。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルは、ＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な抗体を用いたウェスタンブロットにより）評価される。上記レベルは、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較される。患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルは、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２３】
この実施形態の別の態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルは、規定された数の患者細胞に対して免疫組織化学的技術を用いたＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な標識された抗体を利用し、そして上記のレベルを、同一の規定された数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較することにより）評価される。患者ＭＧＭＴのレベルは、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２４】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのレベルが、患者試料中の細胞により発現されるＭＧＭＴについての酵素アッセイにより評価される。例えば、タンパク質が、患者試料中の細胞の溶解産物から免疫沈降され、次いで酵素活性（即ち、ＤＮＡのグアニンのＯ６またはＮ６位をメチル化する能力）が評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球の酵素活性と比較される。患者ＭＧＭＴのレベルが、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴ酵素活性のレベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２５】
代替実施形態では、ＭＧＭＴの比活性が評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、以下の通り分類される：低い＝２０ｆｍｏｌ／ｍｇ未満；中等度＝２０〜６０ｆｍｏｌ／ｍｇ；または高い＝６０ｆｍｏｌ／ｍｇより高い；ここで、ＬＯＸ細胞中のＭＧＭＴの比活性は、６〜９ｆｍｏｌ／ｍｇであり、ＤＡＯＹ細胞中では６０〜１００ｆｍｏｌ／ｍｇであり、そしてＡ３７５細胞中では８０〜１５０ｆｍｏｌ／ｍｇである。この代替実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴ酵素活性が高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２６】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのメチル化のレベルが、ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化の定量的な決定により、評価される。組み合された亜硫酸水素塩制限解析（Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＣＯＢＲＡ）（Ｘｉｏｎｇら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、ｐ．２５３２−２５３４）と呼ばれる定量的技術は、この態様に有用である。上記患者の細胞中のＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化のレベルが、同等な細胞数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球のレベルと比較される。当業者に理解される通り、ＭＧＭＴを発現する正常なリンパ球は、ＭＧＭＴ遺伝子の低いレベルのメチル化を有する；反対に、ＭＧＭＴ遺伝子の高いレベルのメチル化を有する細胞は、低いレベルのＭＧＭＴタンパク質を発現する（例えば、Ｃｏｓｔｅｌｌｏら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９４年、第２６９巻、第２５号、ｐ．１７２２８−１７２３７；Ｑｉａｎら著、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ、１９９５年、第１６巻、第６号、ｐ．１３８５−１３９０を参照）。患者のメチル化されたＭＧＭＴ遺伝子のレベルは、以下の通り分類される：低い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの０〜２０％がメチル化されている；中等度＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの２１〜５０％がメチル化されている；および高い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの５１〜１００％がメチル化されている。いったん、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが評価され、そして患者が分類されると、患者は、スキーム２に示されたスキームを用いた表２に示された投薬養生法を用いて処置される。
【００２７】
（スキーム２）
【００２８】
【表４】
この実施形態のこの態様によると、患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが低い場合、養成法９番、１０番、または１１番が、好ましい。
【００２９】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルは、試料中のＭＧＭＴ対立遺伝子のうちの何パーセントがメチル化されるかを決定するために、定量的に評価される。２００１年１２月１８日に発行された米国特許第６，３３１，３９３号；Ｅａｄｓら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２０００年、第２８巻、第８号、ｐ．ｅ３２を参照のこと。これらは、本発明のこの態様に有用な、説明に役立つ定量的方法のために、参考として本明細書中に援用されている。
【００３０】
患者のＭＧＭＴのメチル化レベルが、決定され、そして以下の通り分類される：低い＝細胞のうちの０〜２０％がメチル化されているＭＧＭＴ遺伝子を有する；中等度＝細胞のうちの２１〜５０％がメチル化されているＭＧＭＴ遺伝子を有する；および高い＝細胞のうちの５１〜１００％がメチル化されているＭＧＭＴ遺伝子を有する。いったん、メチル化レベルが評価され、そして患者が分類されると、患者は、上記のスキーム２に示されたスキームを用いた表２に示された投薬養生法を用いて処置される。
【００３１】
本発明の別の代替実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置するための改良された方法を提供し、その方法は、前出の表１中の養生法３〜１６によると、上記患者に標準用量強度と比較して１．４〜２．８倍というテモゾロミドの用量強度を投与する工程を包含する。
【００３２】
本明細書中に用いられる通り、「処置する」または「処置」は、ヒトのような哺乳動物における細胞増殖性障害を緩和することまたは軽減することを意味することを意図されている。
【００３３】
本明細書中に記載される通りの細胞増殖性障害は、新生物であり得る。このような新生物は、良性か悪性のいずれかである。用語「新生物」は、細胞の新規の異常な増殖または正常より速く再生する異常な細胞の増殖に関する。新生物は、良性か悪性のいずれかであり得る構築されない塊（腫瘍）をつくる。用語「良性」は、癌でない腫瘍（例えば、その細胞は、周辺の組織に侵入したりまたは離れた場所に転移しない）に関する。用語「悪性」は、癌性、転移性であり、連続した組織に侵入し、またはもはや正常な細胞増殖の制御下にない腫瘍に関する。好ましい実施形態では、本発明の方法またはキットは、メラノーマ、グリオーム、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、精巣癌、肝臓癌、腎臓癌、脾臓癌、膀胱癌、結腸直腸癌および／または結腸癌、頭部および頸部の癌、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病または菌状息肉腫を含むがこれらに限定されない増殖性障害を処置するために用いられる。より好ましい実施形態では、本発明の方法およびキットは、メラノーマ、グリオーム、肺癌、リンパ腫、結腸直腸癌および／または結腸癌、頭部および頸部の癌、もしくは卵巣癌を処置するために用いられる。
【００３４】
本明細書中で用いられる通り、患者から得られた「試料」は、ＭＧＭＴタンパク質かＭＧＭＴ遺伝子の核酸のいずれかを含む腫瘍組織、脳組織、脳脊髄液、血液、血漿、血清、リンパ、リンパ節、脾臓、肝臓、骨髄、または任意の他の生物学的検体として得られるか、またはこれらから単離され得る。
【００３５】
本発明は、増殖性障害を有する患者を処置するためのキットも提供する。上記のキットは、以下のものを包含する：（１）本発明の方法において用いられる試薬；並びに（２）本明細書中に記載される通りの方法を実行するための説明書。上記キットは、さらにテモゾロミドを包含し得る。
【００３６】
当業者に理解され得る通り、テモゾロミドを用いて増殖性障害を有する患者を処置するための本発明の新規の方法およびキットは、単一治療法として用いられ得るか、または放射線療法並びに／または他の細胞毒性因子および／もしくは細胞増殖抑制因子および／もしくはホルモン性因子、または他の補助的療法と組み合わせて用いられ得る。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
該患者にテモゾロミドを以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
Ｉ．メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）を用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ＩＩ．ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
ａ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出されない場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３）
項目２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
テモゾロミドを該患者に以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
ａ）ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
ａ）ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６）
項目５に記載の方法であって、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目７）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低い場合、以下の二つの養生法のうちのいずれか：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、中等度である場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉｖ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、高い場合、以下の三つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目８）
項目７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目９）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球工程のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、工程Ｉにおいて、正常なリンパ球のものと比較して低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉｖ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１０）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球工程のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して低いとして分類される場合、以下の三つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、上記試料中に検出されない場合、１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉｖ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して高いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間。
（項目１１）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、以下の養生法のうちの一つ：
Ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ＩＩ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ＩＩＩ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１２）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１３）
項目１２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目１４）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１５）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１６）
項目１５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目１７）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１８）
項目１７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目１９）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２０）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２１）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２２）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２３）
項目２２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目２４）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２５）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２６）
項目２５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目２７）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２８）
項目２７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目２９）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３０）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球工程のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３１）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３２）
リンパ腫を有する患者を処置する方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３３）
項目３２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目３４）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３５）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３６）
項目３５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目３７）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３８）
項目３７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目３９）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４０）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４１）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４２）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４３）
項目４２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４４）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４５）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４６）
項目４５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４７）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４８）
項目４７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４９）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５０）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５１）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５２）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５３）
項目５２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目５４）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、
テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５５）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５６）
項目５５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目５７）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５８）
項目５７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目５９）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６０）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６１）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
Ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ＩＩ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ＩＩＩ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６２）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６３）
項目６２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目６４）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６５）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６６）
項目６５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目６７）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６８）
項目６７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目６９）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７０）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７１）
項目１、１１、２１、３１、４１、５１または６１のうちのいずれかに記載の方法を行うための試薬および説明書を含む、キット。
（項目７２）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７３）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７４）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７５）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７６）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７７）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７８）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７９）
項目７２〜７８のうちのいずれかに記載の方法を行うための試薬および説明書を含む、キット。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）。
【図２】図２は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）。
【図３】図３Ａは、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）。図３Ｂは、８日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の三つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜８日目）；（ｉｉ）連続した２日間の投薬（１〜２日目）；または（ｉｉ）断続的な２日間の投薬（１日目、５日目）。
【図４】図４Ａは、ＴＭＺ処理の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株におけるＭＧＭＴ酵素活性のレベルを図示する。図４Ｂは、ＴＭＺ処理の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株におけるＭＧＭＴタンパク質のレベルを図示する。レーン１〜４は、７２時間のＴＭＺ処理の後に調製された細胞溶解産物を表す。レーン５〜８は、７２時間のＴＭＺ処理、その後ＴＭＺ処理をしないでさらに７２時間後に調製された細胞溶解産物を表す。
【図５】図５Ａは、連続的な毎日の投薬の１５日周期を二回連続（１〜１５日目（第一周期）、１６〜３０日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株における、平均腫瘍増殖曲線を図示する；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、３６０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、５４０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、または８１０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）であった。図５Ｂは、連続した５日間の投薬の１５日周期を二回連続（１〜５日目（第一周期）、１６〜２０日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株における、平均腫瘍増殖曲線を図示する；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋであった。図５Ｃは、断続的な５日間の投薬の１５日周期を二回連続（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目（第一周期）；１６日目、１９日目、２２日目、２５日目、２８日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株における、平均腫瘍増殖曲線を図示する；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋであった。
【図６】図６は、Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株の、１５日周期のＴＭＺ処置後の１５日目における個々の腫瘍体積を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の三つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜１５日目）；（ｉｉ）連続した５日間の投薬（１〜５日目）；または（ｉｉ）５日間（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目）の断続的な投薬；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、１８０ｍｐｋ、２７０ｍｐｋまたは４０５ｍｐｋであった。
【図７】図７は、ＬＯＸヒトメラノーマ異種移植片腫瘍、即ち、低いＭＧＭＴレベルの細胞株の、１２日周期のＴＭＺ処置後の１８日目における個々の腫瘍体積を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜１２日目）；または（ｉｉ）連続した４日間の投薬（１〜４日目）；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６ｍｐｋ、７２ｍｐｋまたは１４４ｍｐｋであった。
【図８】図８は、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株の個々の、連続した５日間のＴＭＺ処置（ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０または４０５ｍｐｋであった）の後のＭＧＭＴ酵素活性のレベル；並びに細胞培養物から得られた処置されていないＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のＭＧＭＴ酵素活性のレベルを図示する。Ｃ１、Ｃ２およびＣ３は、媒体で処置された三匹の異なるマウスから単離された腫瘍を表すが、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３は、ＴＭＺで処置された別の三匹の異なるマウスから単離された腫瘍を表す。
【図９】図９は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１０】図１０は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１１】図１１は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１２】図１２は、８日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１３】図１３は、４日周期のＴＭＺ処理の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１４】図１４は、４日周期のＴＭＺ処理の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１５】図１５は、４日周期のＴＭＺ処理の後の、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１６】図１６は、８日周期のＴＭＺ処理の後の、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１７】図１７は、二回の１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株における腫瘍体積を図示する。
【図１８】図１８は、１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株における腫瘍体積を図示する。
【図１９】図１９は、１２日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、２、または４であった）の後の、ＬＯＸヒトメラノーマ異種移植片腫瘍即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株における腫瘍体積を図示する。
【図２０】図２０は、二回の１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の腫瘍増殖阻害（％）を図示する。
【図２１】図２１は、１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍の腫瘍増殖阻害（％）を図示する。
【図２２】図２２は、１２日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、２、または４であった）の後の、ＤＡＯＹヒトメラノーマ異種移植片腫瘍の腫瘍増殖阻害（％）を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、増殖性障害を有する患者を処置するための新しい方法およびキットを提供し、上記方法およびキットは、上記患者に標準用量強度またはそれより強い用量強度を、上記患者から得られた試料中の上記ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化状態に基づいて投与する工程を包含する。特定の実施形態では、上記メチル化状態は、上記ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているか否かの決定により評価される。別の特定の実施形態では、上記メチル化状態は、上記ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化レベルについての定量的な決定により評価される。さらに別の実施形態では、上記メチル化状態は、ＭＧＭＴタンパク質が発現されているか否かの決定、または発現されているＭＧＭＴタンパク質のレベルの決定、または上記患者の試料中におけるＭＧＭＴの酵素活性の測定により評価される。
【００３９】
本発明の一つの実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置する方法を提供し、上記方法は、上記患者にテモゾロミド（ＴＭＺ）の標準用量強度または増加された用量強度のいずれかを、上記患者から得られた試料中の上記Ｏ６−メチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＭＧＭＴ）遺伝子のメチル化状態に基づいて投与する工程を包含する。本発明のこの実施形態における一つの態様によると、上記患者由来の試料中におけるＭＧＭＴをコードする遺伝子（例えば、プロモーター領域）がメチル化されている場合、テモゾロミドの標準用量強度が投与される；しかしながら、ＭＧＭＴをコードする遺伝子がメチル化されていない（即ち、検出レベル未満）場合、テモゾロミドの増加された用量強度が、上記患者に投与される。本発明のこの実施形態の一つの態様は、以下の工程を包含する：（１）上記患者由来の試料中のＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているか否かを評価する工程；（２）（ａ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出される場合、テモゾロミドの標準用量強度を上記患者に投与する工程、または（ｂ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、テモゾロミドの増加された用量強度を上記患者に投与する工程。本発明のこの実施形態の別の態様は、以下の工程を包含する：ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化が検出されない患者に、増加された用量強度を投与する工程。
【００４０】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「標準用量強度」は、１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２のテモゾロミドの投薬計画で、１０００ｍｇ／ｍ２／４週間という最大全用量に関して２８日周期において５日間投与される、５／２８投薬養生法を意味する。この投薬養生法は、１．０という「用量強度」を提供する。
【００４１】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「増加された用量強度」は、（標準用量強度と比較した場合に）１．２〜２．８倍強いテモゾロミドの用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画を意味する。そのような増加された用量強度を提供する投薬養生法および投薬計画の非制限的な実施例が、表１および表２に図示されている。
【００４２】
本発明のこの実施形態によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、標準用量強度の少なくとも１．６倍または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画が好ましい；そのような条件下で、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度がより好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００４３】
ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されるか否かを評価することは、当業者に公知の任意の方法を用いて行われ得る。遺伝子または核酸のメチル化を検出するために有用な技術は、以下の者によって記載されたものを含むが、これらに限定されない：Ａｈｒｅｎｄｔら著、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、１９９９年、第９１巻、ｐ．３３２−３３９；Ｂｅｌｓｉｎｋｙら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９９８年、第９５巻、ｐ．１１８９１−１１８９６；Ｃｌａｒｋら著、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９４年、第２２巻、ｐ．２９９０−２９９７；Ｈｅｒｍａｎら著、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９９６年、第９３巻、ｐ．９８２１−９８２６；ＸｉｏｎｇおよびＬａｉｒｄら著、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、ｐ．２５３２−２５３４；Ｅａｄｓら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、２００２年、第２８巻、ｐ．ｅ３２；Ｃｏｔｔｒｅｌｌら著、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２００４年、第３２巻、ｐ．１−８。ここで引用された全ての参考文献は、明細書中に参考として援用されている。
【００４４】
メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ；Ｈｅｒｍａｎら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９６年、第９３巻、第１８号、ｐ．９８２１−９８２６；Ｅｓｔｅｌｌｅｒら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９９年、第５９巻、ｐ．７９３−７９７）は、１９９８年７月２８日に発行された米国特許第５，７８６，１４６号；２０００年１月２５日に発行された米国特許第６，０１７，７０４号；２００１年３月１３日に発行された米国特許第６，２００，７５６号；並びに２００１年７月２４日に発行された米国特許第６，２６５，１７１号；２００４年８月１０日に発行された米国特許第６，７７３，８９７号も参照する；明細書中に参考として援用されているこれらの各々の全容は、メチル化感受性制限酵素の使用と独立して、ＣｐＧアイランド内の実質的に任意のグループのＣｐＧサイトのメチル化状態を素早く評価し得る。このアッセイは、亜硫酸水素ナトリウムによるＤＮＡに対する初めの改変、全てのメチル化されていないシトシン（メチル化されているシトシンを除く）をウラシルへ変換すること、そして続いて起こる、メチル化されていないＤＮＡに対するメチル化されているＤＮＡに特異的なプライマーを用いた複製を必要とする。ＭＳＰは、少量のＤＮＡのみを必要とし、与えられたＣｐＧアイランドの座における０．１％メチル化された対立遺伝子に感受性であり、そして、パラフィン包埋試料から抽出されたＤＮＡ上で行われ得る。ＭＳＰは、メチル化されたＤＮＡとメチル化されていないＤＮＡとを識別するための特異な制限酵素の分解に頼った従来のＰＣＲに基づいたアプローチに固有の擬陽性の結果を除去する。この方法は、非常に簡単であり、そして少量の組織または数個の細胞において用いられ得る。当業者に理解されるように、ＭＧＭＴをコードしている遺伝子がメチル化される場合、ＭＧＭＴタンパク質が発現され、そして本明細書中において下に詳述されるように（例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学的技術またはＭＧＭＴ活性のための酵素アッセイなどによって）ＭＧＭＴタンパク質が検出され得る。従って、本発明の代替実施形態によると、ＭＧＭＴタンパク質の存在または不在が、患者の試料中にて評価される。標準用量強度または増加された用量強度が、上記患者に上記患者の試料中のＭＧＭＴタンパク質の不在または存在に基づいて投与される。本発明の不在態様と一致して、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、表１に示される通り、標準用量強度の少なくとも１．６倍、または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画が好ましい；そのような条件下、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度がより好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００４５】
本発明のこの実施形態に有用な、患者試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを測定するためのウェスタンブロットアッセイの説明に役立つ例が、Ｌｉらによる米国特許第５，８１７，５１４号に提示されており、これらの全ての開示が、本明細書中に参考として援用されている。Ｌｉらは、天然のヒトＭＧＭＴタンパク質かまたはアルキル化された活性サイトを有するヒトＭＧＭＴタンパク質のいずれかに特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体を記述した。本発明のこの実施形態に有用な、患者試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを測定するための免疫組織化学的技術の説明に役立つ例は、米国特許第５，４０７，８０４号に提示され、この全体の開示は、本明細書中に参考として援用されている。単一細胞の調製物（免疫組織化学的染色アッセイ）並びに細胞抽出物（イムノアッセイ）の中のＭＧＭＴタンパク質に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体が、開示されている。細胞画像のデジタル処理と結び付けられた蛍光出力の使用が、記述され、そして、腫瘍生体組織検査試料が挙げられるがこれに限定されない患者試料または対照試料中のＭＧＭＴレベルの定量的測定を可能にする。
【００４６】
ＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を測定するための有用な技術は、以下によって記載された方法を含むが、これらに限定されない：Ｍｙｒｎｅｓら著、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、１９８４年、第５巻、ｐ．１０６１−１０６４；Ｆｕｔｓｃｈｅｒら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｍｍ．、１９８９年、第１巻、ｐ．６５−７３；Ｋｒｅｋｌａｗら著、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．、２００１年、第２９７巻、第２号、ｐ．５２４−５３０；Ｎａｇｅｌら著、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００３年、第３２１巻、第１巻、ｐ．３８−４３、これらの全体の開示は、本明細書中に参考として援用されている。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置する方法を提供し、上記方法は、上記患者に上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化の程度またはレベルに基づいてテモゾロミドの投薬養生法を割り当てること、および／またはその投薬養生法を上記患者に投与することを包含する。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルは、上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを決定することにより評価される。上記レベルは、「低い」、「中等度」、または「高い」として分類され、そして、上記患者は、前出のスキーム１に示されるスキームに従って、表２に提示される投薬養生法のうちの一つによって処置される。
【００４８】
患者から得られた細胞試料中のＭＧＭＴタンパク質の程度またはレベルは、任意の多様な方法（本明細書中の前出の参考文献を参照）によって評価され得る。
【００４９】
本発明のこの実施形態の一つの態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルが、ＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な抗体を用いたウェスタンブロットにより、例えば、ＭＧＭＴのレベルを決定するためのウェスタンブロットアッセイの説明のためのＬｉらによる米国特許第５，８１７，５１４号（前出）を参照）評価される。上記レベルは、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較される。患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルが、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態に従って、上記患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５０】
この実施形態の別の態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルは、規定された数の患者細胞に対して免疫組織化学的技術を用いたＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な標識された抗体を利用し、そして上記のレベルを、同一の規定された数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較すること（例えば、有用な定量的免疫組織化学的アッセイの説明のためのＹａｒｏｓｈによる米国特許第５，４０７，８０４号を参照）により）評価される。患者ＭＧＭＴのレベルは、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５１】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのレベルが、患者試料中の細胞により発現されるＭＧＭＴについての酵素アッセイにより評価される。例えば、タンパク質が、患者試料中の細胞の溶解産物から免疫沈降され、次いで酵素活性（即ち、ＤＮＡのグアニンのＯ６またはＮ６位をメチル化する能力）が評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球の酵素活性と比較される（ＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を決定するために有用なアッセイの説明のための前出の参考文献を参照）。患者ＭＧＭＴのレベルが、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５２】
代替実施形態では、ＭＧＭＴの比活性は、評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株との比較に基づいて以下の通り分類される：低い＝２０ｆｍｏｌ／ｍｇ未満；中等度＝２０〜６０ｆｍｏｌ／ｍｇ；または高い＝６０ｆｍｏｌ／ｍｇより高い；ここで、ＬＯＸ細胞中のＭＧＭＴの比活性は、６〜９ｆｍｏｌ／ｍｇであり、ＤＡＯＹ細胞中では６０〜１００ｆｍｏｌ／ｍｇであり、そしてＡ３７５細胞中では８０〜１５０ｆｍｏｌ／ｍｇである。この代替実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴ酵素活性が高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５３】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのメチル化のレベルが、ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化の定量的な決定により、評価される。ＣＯＢＲＡ（Ｘｉｏｎｇら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、ｐ．２５３２−２５３４）と呼ばれる定量的技術は、この態様に有用である。Ｅａｄｓら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２０００年、第２８巻、第８号、ｐ．ｅ３２；米国特許第６，３３１，３９３号の「ｍｅｔｈｙｌ ｌｉｇｈｔ」技術も、この態様のための定量的な決定に有用である。上記患者の細胞中のＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化のレベルが、同等な細胞数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球のレベルと比較される。当業者に理解される通り、ＭＧＭＴを発現する正常なリンパ球は、ＭＧＭＴ遺伝子の低いレベルのメチル化を有する；反対に、ＭＧＭＴ遺伝子の高いレベルのメチル化を有する細胞は、低いレベルのＭＧＭＴタンパク質を発現する（例えば、Ｃｏｓｔｅｌｌｏら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９４年、第２６９巻、第２５号、ｐ．１７２２８−１７２３７；Ｑｉａｎら著、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ、１９９５年、第１６巻、第６号、ｐ．１３８５−１３９０を参照）。患者のメチル化されたＭＧＭＴ遺伝子のレベルは、以下の通り分類される：低い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの０〜２０％がメチル化されている；中等度＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの２１〜５０％がメチル化されている；および高い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの５１〜１００％がメチル化されている。いったん、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが評価され、そして患者が分類されると、患者は、前出のスキーム２に示されたスキームを用いた前出の表２に示された投薬養生法を用いて処置される。
【００５４】
この実施形態のこの態様によると、上記患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが低い場合、養生法９番、１０番、または１１番が、好ましい。
【００５５】
上に示される通り、ＣＯＢＲＡ（Ｘｉｏｎｇら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、第１２号、ｐ．２５３２−２５３４）と呼ばれる定量的技術は、少量のゲノムＤＮＡ内の特定の遺伝子座におけるＤＮＡメチル化レベルを、定量的に決定するために用いられ得る。制限酵素による消化は、亜硫酸水素ナトリウムで処理したＤＮＡのＰＣＲ産物におけるメチル化依存性の配列の差異を明らかにするために用いられる（Ｔａｎｏら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９０年、第８７巻、ｐ．６８６−６９０は、ヒトＭＧＭＴ遺伝子の単離および配列を記述する）。元のＤＮＡ試料中のメチル化レベルは、ＤＮＡメチル化レベルの広いスペクトラムにわたり、直線的に定量的な様式で、消化されているＰＣＲ産物と消化されていないＰＣＲ産物との相対的な量によって表される。この技術は、顕微解剖されたパラフィン包埋組織試料から得られたＤＮＡに信頼性をもって適用され得る。ＣＯＢＲＡは、従って、使い易さ、定量的な正確さという強力な特徴と、パラフィン切片との適合性とを併せもつ。
【００５６】
ＭＧＭＴのｍＲＮＡのレベルを評価するために有用なＲＴ−ＰＣＲアッセイの説明に役立つ例は、Ｗａｔｔｓら著、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９７年、第１７巻、第９号、ｐ．５６１２−５６１９に記述されている。簡単にいうと、全細胞性ＲＮＡが、グアニジン イソチオシアネート細胞溶解により、次いで２．５時間、２０５，０００×ｇでの５．７ＭのＣｓＣｌを介した遠心により単離される。ＲＮＡは、Ｂｅｃｋｍａｎ ＴＬ−１００分光光度計で、２６０ｎｍにおける吸光度の測定により定量化される。全細胞性ＲＮＡは、２００ｎｇのＲＮＡ；１×ＰＣＲ緩衝液（１０ｍＭのＴｒｉｓ[ｐＨ８．３]、５０ｍＭのＫＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２）；１ｍＭの各ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ；２００ｐｍｏｌの任意の六量体、４０ＵのＲＮａｓｉｎ、および２４Ｕの鳥類の骨髄芽球症ウイルス逆転写酵素（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）から構成される４０μｌの反応混合液を４２℃で６０分間インキュベートすることにより、逆転写される。この反応を、９９℃で１０分間インキュベートすることにより停止させる。ＭＧＭＴ特異的なＰＣＲは、８０μｌの複製反応緩衝剤（１×ＰＣＲ緩衝剤、２５ｐｍｏｌのＭＧＭＴ特異的プライマーおよび／または対照配列、並びに２ＵのＴａｑＤＮＡポリメラーゼ）を２０μｌの逆転写反応混合物に添加し、次いで９４℃で５分間のインキュベーション；９４℃で１分間、６０℃で１５秒間、および７２℃で１分間を３０回；７２℃で５分間の最終的な伸長；そして素早く冷やして４℃にすることにより行われる。例えば、ＭＧＭＴ遺伝子のエキソン４からの上流プライマー配列（ヌクレオチド６６５〜ヌクレオチド６８４）が、用いられ得る。ヌクレオチドの位置は、上記ｃＤＮＡ配列に由来し得る（Ｔａｎｏら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９０年、第８７巻、ｐ．６８６−６９０）。対照のプライマー配列は、同じｃＤＮＡ反応（例えば、ヒストン３．３遺伝子のためのプライマー）において用いられ得る。解析のため、各ＰＣＲ産物のうちの１０％が、３％アガロースゲルを通して分離され、そしてエチジウムブロマイド染色により可視化される。
【００５７】
ＭＧＭＴのｍＲＮＡのレベルを評価するために有用なノーザンブロットの説明に役立つ例が、Ｄ’Ａｔｒｉら著、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２０００年、第２９４巻、ｐ．６６４−６７１に記述されている。簡単にいうと、全細胞性ＲＮＡが、グアニジン チオシアネート−フェノール−クロロホルム法（ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃｈｉら著、Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９８７年、第１６２巻、第１号、ｐ．１５６−１５９）により抽出される。引き続いて、一部分が、ホルムアルデヒドを含む１．２％アガロースゲル上における電気泳動により分画され、そして、ＲＮＡ強度が、上記ゲルのエチジウムブロマイド染色に続く可視化により確認される。ＲＮＡは、その後ナイロン膜（Ｇｅｎｅｓｃｒｅｅｎ Ｐｌｕｓ；Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）へ転写され、そして４２℃で２４時間、３２Ｐ標識されたＭＧＭＴのプローブおよび対照のプローブ（例えば、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ））とハイブリダイズされる。例えば、ＭＧＭＴのプローブは、Ｍｏｌｔ−４細胞からのＲＮＡの逆転写の後に得られたポリメラーゼ連鎖反応由来のｃＤＮＡプローブであり得る（Ｌａｃａｌら著、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ、１９９６年、第２７９巻、第１号、ｐ．４１６−４２２）。０．１×標準クエン酸塩（１０ｍＭの塩化ナトリウム、１．５ｍＭのクエン酸ナトリウム）により室温で３０分間洗浄の後、上記のブロットされた膜は、−８０℃でｘ線フィルム（Ｋｏｄａｋ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）に露光される。上記のブロットの二次元のデンシトメトリーは、Ｉｍａｇｉｎｇ ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒＧＳ−６７０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）を用いて行われ得る。
【００５８】
本発明の別の代替実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置するための改良された方法を提供し、その方法は、前出の表１中の養生法３〜養生法１６によると、上記患者に標準用量強度と比較して１．４〜２．８というテモゾロミドの用量強度を投与する工程を包含する。
【００５９】
本発明の範囲内に包含されるのは、本明細書中の上記の通りのテモゾロミドとＲＡＲＰ阻害剤とを組み合わせて投与することである。遺伝子毒性のストレスに対する細胞内反応におけるポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の役割に関する強制力のある証拠は、ＤＮＡを損傷する抗癌療法を増強させる治療薬として阻害剤を開発するための刺激であった。最近２０年にわたり、強いＰＡＲＰ阻害剤が、構造活性相関（ＳＡＲ）および結晶構造解析を用いて開発されてきた。これらのアプローチは、阻害剤と酵素との強い相互作用のための要となる望ましい性質を同定してきた。生じたＰＡＲＰ阻害剤は、古典的なベンズアミドよりも最大１，０００倍強い。これら新規の強い阻害剤は、ＰＡＲＰ阻害の治療上の可能性を定義するのを手伝ってきた。ＰＡＲＰ阻害剤は、テモゾロミドを含む三つのクラスの抗癌剤の抗腫瘍活性を増加させる。ＰＡＲＰ阻害剤は、本明細書中に記載されているようにテモゾロミドの投与の前か、それに付随するかまたはそれの後のいずれかに投与され得る。実験上のＰＡＲＰ阻害剤としては、ＣＥＰ−６８００（Ｃｅｐｈａｌｏｎ；Ｍｉｋｎｙｏｃｚｋｉら著、Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ、２００３年、第２巻、第４号、ｐ．３７１−３８２に記載されている）；３−アミノベンズアミド（３−ＡＢとしても公知である；Ｉｎｏｔｅｋ；Ｌｉａｕｄｅｔら著、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００１年、第１３３巻、第８号、ｐ．１４２４−１４３０に記載されている）；ＰＪ３４（Ｉｎｏｔｅｋ；Ａｂｄｅｌｋａｒｉｍら著、Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ、２００１年、第７巻、第３号、ｐ．２５５−２６０に記載されている）；５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（ＩＮＨ（２）ＢＰとしても公知である；Ｉｎｏｔｅｋ；Ｍａｂｌｅｙら著、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００１年、第１３３巻、第６号、ｐ．９０９−９１９、ＧＰＩ １５４２７（Ｔｅｎｔｏｒｉら著、Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ、２００５年、第２６巻、第２号、ｐ．４１５−４２２に記載されている）；１，５−ジヒドロキシイソキノリン（ＤＩＱとしても公知である；ＷａｌｉｓｓｅｒおよびＴｈｉｅｓら著、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ、１９９９年、第２５１巻、第２号、ｐ．４０１−４１３に記載されている；５−アミノイソキノリノン（５−ＡＩＱとしても公知である；Ｄｉ Ｐａｏｌａら著、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００４年、第４９２巻、第２〜３号、ｐ．２０３−２１０に記載されている；ＡＧ１４３６１（ＢｒｙａｎｔおよびＨｅｌｌｅｄａｙら著、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ、２００４年、第３２巻、Ｐｔ６、ｐ．９５９−９６１；Ｖｅｕｇｅｒら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、２００３年、第６３巻、第１８号、ｐ．６００８−６０１５；並びにＶｅｕｇｅｒら著、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２００４年、第２３巻、第４４号、ｐ．７３２２−７３２９に記載されている）；ＡＢＴ−４７２（Ａｂｂｏｔｔ）；ＩＮＯ−１００１（Ｉｎｏｔｅｋ）；ＡＡＩ−０２８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＫＵ−５４９３６（ＫｕＤＯＳ；Ｆａｒｍｅｒら著、「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｄｅｆｅｃｔ ｉｎ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｎｔ ｃｅｌｌｓ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ」、Ｎａｔｕｒｅ、２００５年、第４３４巻、第７０３５号、ｐ．９１７−９２１）；およびＪａｇｔａｐら著、Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ、２００２年、第３０巻、第５号、ｐ．１０７１−１０８２に記載されている事柄；Ｌｏｈら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、２００５年、第１５巻、第９号、ｐ．２２３５−２２３８；Ｆｅｒｒａｒｉｓら著、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、２００３年、第４６巻、第１４号、ｐ．３１３８−３１５１；Ｆｅｒｒａｒｉｓら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、２００３年、第１３巻、第１５号、ｐ．２５１３−２５１８；Ｆｅｒｒａｒｉｓら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、２００３年、第１１巻、第１７号、ｐ．３６９５−３７０７；ＬｉおよびＺｈａｎｇ著、ＩＤｒｕｇｓ、２００１年、第４巻、第７号、ｐ．８０２−８１２；Ｓｔｅｉｎｈａｇｅｎら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、２００２年、第１２巻、第２１号、ｐ．３１８７−３１９０）；国際公開第０２／０６２８４号パンフレット（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；および国際公開第０２／０６２４７号パンフレット（Ｂａｙｅｒ）に記載されているものが挙げられる。さらに、ＰＡＲＰ−１阻害剤のためのハイスループットスクリーンが、Ｄｉｌｌｏｎら著、Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ、２００３年、第８巻、第３号、ｐ．３４７−３５２に記載されている。
【００６０】
一つの処置の方法は、治療法の処置の過程において哺乳類動物に投与されたテモゾロミドおよび／または放射線治療の有効性を改善することを含み、上記方法は、上記哺乳類動物に有効量のＰＡＲＰ阻害剤（化合物、薬学的に許容可能な塩、プロドラッグ、活性な代謝産物、または溶媒化合物）をテモゾロミドおよび／または放射線治療と共に投与することを包含する。
【００６１】
Ｏ６−ベンジルグアニンは、当業者にとって公知である。造血の毒性を強調するために、肝細胞（または腫瘍細胞）中のＭＧＭＴの内因性活性が、Ｏ６−ベンジルグアニン（Ｏ６ＢＧ）により不活性化され得る。本発明は、上記の投薬養生法および／または投薬計画を用いて、癌を処置するためのテモゾロミドとＯ６−ベンジルグアニン（Ｏ６ＢＧ）とを組み合わせた使用も包含する。Ｏ６ＢＧは、本明細書中に記載されるようにテモゾロミドの投与の前か、それに付随するか、またはそれの後のいずれかに投与され得る。
【００６２】
上記の通り表１および表２において、本発明の特定の投薬養生法では、特に、養生法４番、８番、１０番および１５番が、テモゾロミドと組み合わせた増殖因子の投与を包含する。好ましい実施形態によると、上記増殖因子は、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−６、またはエリスロポエチンである。増殖因子の非制限的な例は、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）（エポエチンアルファ）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）（エポエチンアルファ）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）（フィルグラスチム、ヒトＧ−ＣＳＦ）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（高グリコシル化組換えｄａｒｂｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）（Ｎｅｕｐｏｐｅｇとも商標をつけられている、ＰＥＧ化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）組換えフィルグラスチム、ＰＥＧフィルグラスチム（ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、Ａｌｂｕｐｏｉｅｔｉｎ（登録商標）（長く作用するエリスロポエチン）、およびＡｌｂｕｇｒａｎｉｎ（登録商標）（アルブミンＧ−ＣＳＦ、および長く作用するＧ−ＣＳＦ）。より好ましい実施形態によると、上記増殖因子は、Ｇ−ＣＳＦである。
【００６３】
本明細書中に用いられる通り、「ＧＭ−ＣＳＦ」は、（ａ）Ｌｅｅら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９８５年、第８２巻、ｐ．４３６０により記載される成熟した（シグナルペプチドを欠く）ヒトＧＭ−ＣＳＦの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、かつ（ｂ）天然のＧＭ−ＣＳＦに共通の生物学的活性を有する、タンパク質を意味する。
【００６４】
アミノ酸配列の実質的な同一性は、その配列が、同一であるか、または生物学的活性を実質的に弱めない一つ以上のアミノ酸の改変（欠失、付加、置換）により異なることを意味する。ヒトＧＭ−ＣＳＦの間で、ヌクレオチド配列およびアミノ酸（ａｍｉｎｏ ａｄｄ）の不均質性が、観察されてきた。例えば、スレオニンおよびイソロイシンの両者が、アミノ酸配列のＮ末端位置に関してＧＭ−ＣＳＦの１００位で観察されてきた。Ｓｃｈｒｉｍｓｈｅｒら著、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、１９８７年、第２４７巻、ｐ．１９５も、８０位のメチオニン残基がイソロイシン残基で置換されているヒトＧＭ−ＣＳＦ変異体を開示している。マウスおよびテナガザルおよびラットのような他の種のＧＭ−ＣＳＦ（テナガザルのＧＭ−ＣＳＦは３つのみのメチオニンを含む）も、本発明によって予想される。原核生物の発現システムにおいて産生される組換えＧＭ−ＣＳＦは、当該分野で周知の通り、さらなるＮ末端のメチオニン残基を含み得る。上記の実質的な同一性要件を満たす任意のＧＭ−ＣＳＦが、グリコシル化されようと（即ち、天然の供給源由来または原核生物の発現システム由来であろうと）グリコシル化されなかろうと（即ち、真核生物の発現システムまたは化学合成由来であろうと）含まれる。
【００６５】
本発明における使用のためのＧＭ−ＣＳＦが、天然の供給源から得られ得る（米国特許第４，４３８，０３２；Ｇａｓｓｏｎら著、前出；Ｂｕｒｇｅｓｓら著、前出；Ｓｐａｒｒｏｗら著、Ｗｕら著、前出）。実質的に同一のアミノ酸配列、並びに天然に存在するＧＭ−ＣＳＦの活性を有するＧＭ−ＣＳＦが、本発明で用いられ得る。ＧＭ−ＣＳＦの相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）が、多くの研究室（例えば、Ｇｏｕｇｈら著、Ｎａｔｕｒｅ、１９８４年、第３０９巻、ｐ．７６３（マウス）；Ｌｅｅら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８５年、第８２巻、ｐ．４３６０（ヒト）；Ｗｏｎｇら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８５年、第２２８巻、ｐ．８１０（ヒトおよびテナガザル）；Ｃａｎｔｒｅｌｌら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８５年、第８２巻、ｐ．６２５０（ヒト）、Ｇｏｕｇｈら著、Ｎａｔｕｒｅ、１９８４年、第３０９巻、ｐ．７６３（マウス）；Ｗｏｎｇら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８５年、第２２８巻、ｐ．８１０（ヒトおよびテナガザル）；Ｃａｎｔｒｅｌｌら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９８５年、第８２巻、ｐ．６２５０（ヒト））により、クローン化され、そして配列が読まれてきた。
【００６６】
ＧＭ−ＣＳＦは、ワシントン州シアトルのＩｍｍｕｎｅｘ、Ｉｎｃ． およびニュージャージー州ケニルワースのＳｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから、並びにマサチューセッツ州ボストンのＧｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからも得られ得る。
【００６７】
本発明の有利な実施形態では、テモゾロミドが、本明細書中に教示される方法に従って抗催吐剤と組み合わせて、投与され得る。パロノセトロン、トロピセトロン、オンダンセトロン、グラニセトロン、ベメセトロンまたは前述の非常に選択的な作用物質のうちの少なくとも二つのくみあわせが、抗催吐剤として働く５ＨＴ３受容体拮抗薬として用いられる。この点について、一回の投薬単位における活性な抗催吐物質の量は、２〜１０ｍｇに達することが好ましく、そして、５〜８ｍｇという一回の投薬単位における活性物質の量が、特に好ましい。一日の用量は、一般的に２〜２０ｍｇという活性物質の量を含み、特に好ましいのは、５〜１６ｍｇという活性物質の量である。本発明の方法では、アプレピタント（ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）のようなＮＫ−１拮抗薬（ニューロキニン−１拮抗薬）は、単独でまたはデキサメタゾンのようなステロイドと組み合わせても、５ＨＴ３受容体拮抗薬と共にまたは５ＨＴ３受容体拮抗薬なしで用いら得る。必要である場合に、当業者は、その要件に従って、一回の投薬単位における活性物質および毎日の用量のレベルを変化させる方法を知る。体重、全体の構成、上記処置に対する応答などのような、上記方法を決定する因子は、必要な場合に、状況に応じて反応するために、かつ一回の投薬単位における活性物質の量を調整するかまたは一日の用量を調整するために、当業者により持続的にモニタリングされ得る。
【００６８】
さらなる別の実施形態によると、テモゾロミドが、本明細書中に教示される方法を用いてファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤と組み合わせて投与される。
【００６９】
別の実施形態によると、テモゾロミドは、別の抗催吐剤と共に投与され得る。他の有用な抗腫瘍剤の非制限的な例としては、ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオフォスフォラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、ゲムシタビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、パクリタキセル、ミトラマイシン、デオキシコフォルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン、エトポシド、テニポシド １７．アルファ．−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゴセレリン、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、ナベルベン（Ｎａｖｅｌｂｅｎｅ）、アナストラゾール、レトラゾール（Ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、カペシタビン（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、レロキサフィン（Ｒｅｌｏｘａｆｉｎｅ）、ドロキシフェン（Ｄｒｏｌｏｘａｆｉｎｅ）、ヘキサメチルメラミン、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）（登録商標）、イレッサ（ゲフィチニブ、Ｚｄ１８３９）、ゼローデ（登録商標）（カペシタビン）、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）、アザシチジン（５−アザシチジン；５−ＡｚａＣ）、並びにこれらの混合物をが挙げられる。
【００７０】
テモゾロミドは、米国特許第５，８２４，３４６号、米国特許第５，９３９，０９８号、米国特許第５，９４２，２４７号、米国特許第６，０９６，７５７号、米国特許第６，２５１，８８６号、米国特許第６，３１６，４６２号、米国特許第６，３３３，３３３号、米国特許第６，３４６，５２４号、および米国特許第６，７０３，４００号に開示されているような他の抗癌剤と共に投与され得、それらの特許文献は全て、参考として援用される。
【実施例】
【００７１】
（実験）
一連の実験に基づく研究は下記の通りに行われた。
【００７２】
（コロニー形成アッセイ）
以下に詳述される通り、インビトロコロニー形成アッセイにおけるＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（高いＭＧＭＴレベル）、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞（高いＭＧＭＴレベル）およびＬＯＸヒトメラノーマ細胞（低いＭＧＭＴレベル）をＴＭＺの異なる投薬計画により処理した。簡単にいうと、細胞（ＤＡＯＹ、Ａ３７５、またはＬＯＸ）を含む未だコンフルエントではない（ｓｕｂ−ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）プレートを６穴プレートに播種する前に、トリプシン処理し、次いですすぎ、そして、適切な培養培地に懸濁した。細胞を１８〜２４時間、３７℃で、細胞が接着することを可能にするまでインキュベートした。段階的な濃度のＴＭＺ、または同量の容量の希釈物を三連で添加した。ＴＭＺの各パルスを２４時間続けた。例えば、連続的な毎日のＴＭＺの投与を受けている細胞をＴＭＺ含有培地で、２４時間毎に、上記の周期を通じて処理した。一つの周期におけるＴＭＺの最後のｐｕｌｓｅの後に、ＴＭＺ含有培地を除去し、そして上記のインキュベーション期間の残りの期間、ＴＭＺを含まない新しい培地と交換した。生じたコロニーをクリスタルバイオレッド溶液で染色し、次いでＩｍａｇｅＰｒｏ ｐｌｕｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｅｍｐｉｒｅ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．Ａｓｂｕｒｙ、Ｎ．Ｊ．）で定量化した。
【００７３】
（ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞株（高いＭＧＭＴレベル））
図１に図示される通り、コロニー形成アッセイを行い、それによってＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（高いＭＧＭＴ）を４日周期において、以下の二つの異なる、ＴＭＺの投薬計画のうちの一つに従って処理した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（即ち、連続した４日間；１〜４日目に毎日投与した全量の１／４）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（即ち、１日における；１日目に投与した全量）；ここで、投与するＴＭＺの全量を、０μｇ、９３μｇ、１８６μｇ、３７３μｇ、または７４６μｇとした。簡潔にいうと、単一パルス投薬の、１８６μｇ、３７３μｇ、および７４６μｇという全体のＴＭＺレベルにおける、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成に対する阻害を実証した。
【００７４】
（Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞株（高いＭＧＭＴレベル））
図２に図示される通り、コロニー形成アッセイを行い、それによってＡ３７５ヒトメラノーマ細胞（高いＭＧＭＴ）を４日周期において、以下の二つの異なるＴＭＺの投薬計画のうちの一つに従って処理した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）；ここで、投与するＴＭＺの全量を、０μｇ、６２μｇ、１２４μｇ、２４９μｇ、または４９７μｇとした。興味深いことに、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞において、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞と類似する応答のパターンを観察した。ＴＭＺによる用量依存的な阻害をＴＭＺの投与計画の両者を用いて実証したが、単一パルス投薬は、６２μｇ、１２４μｇ、２４９μｇ、４９７μｇという全ＴＭＺレベルにおいて、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を生じた。
【００７５】
（ＬＯＸヒトメラノーマ細胞株（低いＭＧＭＴレベル））
図３Ａおよび図３Ｂに図示される通り、コロニー形成アッセイを行い、それによってＬＯＸヒトメラノーマ細胞（低いＭＧＭＴ）を４日周期（図３Ａ）または８日周期（図３Ｂ）のいずれかにわたるＴＭＺの投薬計画により処理した。
【００７６】
４日周期において、図３Ａに図示される通り、ＴＭＺを以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）；ここで、投与するＴＭＺの全量を０μｇ、１６μｇ、３１μｇ、６２μｇ、または１２４μｇとした。単一パルス投薬は、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を示した。
【００７７】
８日周期において、図３Ｂに図示される通り、ＴＭＺを以下の三つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜８日目）；（ｉｉ）連続した２日間（１〜２日目）の投薬；または（ｉｉ）２日間（１日目、５日目）の断続的な投与；ここで、投与するＴＭＺの全量を０μｇ、３１μｇ、６２μｇ、１２４μｇ、または２４８μｇとした。２日間の断続的な投薬は、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を示した。さらに、２日間の断続的な投薬は、ＴＭＺの同じ全用量における連続した２日間の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を示した。
【００７８】
（ＭＧＭＴアッセイ）
以下に詳述される通り、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞中のＭＧＭＴの酵素活性およびタンパク質レベルを、ＴＭＺの異なる濃度レベル（０μｇ、１０μｇ、４０μｇ、および１６０μｇ）での以下のいずれかの期間における処理の後に決定した：（ｉ）７２時間のＴＭＺ処理；または（ｉｉ）７２時間のＴＭＺ処理に続いて、ＴＭＺ処理をしないでさらに７２時間。
【００７９】
（ＭＧＭＴの酵素活性アッセイ）
簡単にいうと、３Ｈ−メチル化されたＤＮＡ基質を子ウシの胸腺ＤＮＡから調製した。この基質を５０μｇの細胞抽出液と共に、３７℃で４５分間インキュベートした。ＭＧＭＴタンパク質への放射能の完全な転移の後、過剰のＤＮＡを加水分解し、そして、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）で洗浄した。ＭＧＭＴタンパク質へ転移された放射能をシンチレーション計数により測定した。
【００８０】
図４Ａに図示される通り、Ａ３７５メラノーマ細胞中のＭＧＭＴの酵素活性のレベルを、ＴＭＺの異なる濃度レベル（０ｍＭ、１０ｍＭ、４０ｍＭ、および１６０ｍＭ）での処理の後に測定した。７２時間のＴＭＺの処理は、用量依存的なＭＧＭＴの減少を引き起こした。さらに、ＭＧＭＴ活性の減少が薬物処理の除去後にどのくらいの期間持続するか評価するために、酵素活性を７２時間の処理の後に洗浄し、そしてＴＭＺを含まない培地中にてさらに７２時間維持した細胞の対応するセットについても測定した。興味深いことに、上記の酵素活性は、用量依存的な様式で薬物除去後の７２時間減少されたままであった。このことは、高用量のＴＭＺのパルス処理は、ＭＧＭＴのレベルに対して長期間の効果を有することを示す。また、このことは、これらの細胞におけるＴＭＺ処理のさらなる用量が、ＴＭＺの細胞毒性を増強し得ることを示す。
【００８１】
（ＭＧＭＴのウェスタンブロット）
腫瘍細胞（５×１０５）を、１０ｍｌ（９０％ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ、Ｎ．Ｙ．）と１０％のウシ胎児血清）を含む１００ｍｍ×２０ｍｍ培養プレート内に、播種した。細胞を、増加する濃度のＴＭＺまたは同量の容量の希釈物で処理した。処理後の様々な時期において、全細胞溶解産物を、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）と、１０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４／ＮａＨＰＯ４と、１３０ｍＭのＮａＣｌと、１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００と、１０ｍＭのＰＰｉ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）とを含む溶液中に、調製した。全タンパク質のうちの等量を、４〜１２％のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動し、そして、ポリビニリデンジフルオリド（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ ｄｅｆｌｕｏｒｉｄｅ）膜へ電気的な転写を行った。上記のブロットを、Ｔｒｉｓ緩衝化生理食塩水（ＴＢＳ）中５％脱脂粉乳でブロッキングし、そして、ＭＧＭＴに対する特異的抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、または内部の対照としてのＧＡＰＤＨ（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）に対する抗体でプローブした。
【００８２】
図４Ｂに示される通り、Ａ３７５メラノーマ細胞中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを、異なる濃度レベル（０μＭ、１０μＭ、４０μＭ、１６０μＭ）でのＴＭＺ処理の後に、ウェスタンブロットにより測定した。レーン１〜４は、７２時間のＴＭＺ処理の後に調製した細胞溶解産物を表す。レーン５〜８は、７２時間のＴＭＺ処理に続くＴＭＺ処理をしないでさらに７２時間の後に調製した細胞溶解産物を表す。検出したＭＧＭＴタンパク質レベルは、図４Ａに記載されている同様に処理した細胞について測定したＭＧＭＴ特異的活性のレベルと相関した。両者のアッセイにより、ＭＧＭＴタンパク質レベルの用量依存的な減少を検出した。
【００８３】
（インビボの研究）
以下に詳述される通り、ＴＭＺの異なる投薬計画を、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（高いＭＧＭＴレベル）、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞（高いＭＧＭＴレベル）、並びにＬＯＸヒトメラノーマ細胞（低いＭＧＭＴレベル）を用いて形成した異種移植片腫瘍において評価した。
【００８４】
簡単にいうと、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの、メスの無胸腺ヌードマウスまたはメスのＳＣＩＤマウス（４〜６週齢）をＶＡＦ障壁施設内で維持した。動物の操作を、実験動物の世話および使用のためのＮ．Ｉ．Ｈ．ガイドに説かれた規則に従って行った。
【００８５】
ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（５×１０６）、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞（５×１０５）、およびＡ３７５ヒトメラノーマ細胞（５×１０６）を、上記動物の右側腹部に皮下接種した（ＳＣＩＤマウスにおいてはＬＯＸ；ヌードマウスにおいてはＤＡＯＹおよびＡ３７５）。インビボでの増殖を促進するため、接種前にｍａｔｒｉｇｅｌをＤＡＯＹ細胞（５０％）およびＡ３７５細胞（５０％）に混合した。腫瘍体積がおよび１００ｍｍ３になったとき、動物を無作為化し、そして群に分けた（ｎ＝１０）。腫瘍体積および体重を、一週間当り二回、ＬａｂｃａｔＴＭ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｐｒｏｇｒａｍｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｎ．Ｊ．）を用いて測定した。腫瘍体積を、式（Ｗ×Ｌ×Ｈ）×π×１／６により算出した。
【００８６】
ＴＭＺを、腹腔内注射により、媒体としての２０％ＨＰβＣＤ（１％ＤＭＳＯを含む）とともに投与した。ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するマウスを、三つの異なる投薬計画のうちの一つにより処置した。１５日周期において、同一の全用量レベルで、マウスに以下のＴＭＺ処置の一つを施した：（ｉ）１日目から１５日目まで；（ｉｉ）１日目から５日目まで；または（ｉｉｉ）断続的に、１日目、４日目、７日目、１０日目および１３日目。全ての投薬計画について、三つの異なる用量レベル（１８０、２７０、および４０５ｍｇ／ｋｇ全量）を用いた。
【００８７】
Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するマウスを、三つの異なる投薬計画により処置した。ＤＡＯＹモデルについての上記計画に類似して、１５日周期において、同一の全用量レベルで、マウスに以下のＴＭＺ処置のうちの一つを施した：（ｉ）１日目から１５日目まで；（ｉｉ）１日目から５日目まで；または（ｉｉｉ）断続的に、１日目、４日目、７日目、１０日目および１３日目。全ての投薬計画について、三つの異なる用量レベル（１８０ｍｇ／ｋｇ全量、２７０ｍｇ／ｋｇ全量、および４０５ｍｇ／ｋｇ全量）を用いた。
【００８８】
ＬＯＸヒトメラノーマ細胞、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するマウスを、二つの異なる計画を用いて、ＴＭＺで処置した。同一の全用量を、以下のいずれかの過程において、均等に分割して投与した：（ｉ）４日間または（ｉｉ）１２日間。ＴＭＺを、腹腔内注射により、３６ｍｇ／ｋｇ、７２ｍｇ／ｋｇ、または１４４ｍｇ／ｋｇという累積的な全用量レベルを用いて投与した。
【００８９】
図５に図示される通り、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するヌードマウスを、ＴＭＺについての三つの異なる計画により、用量依存的な様式で処置した。図５Ａは、連続した毎日の投薬の１５日周期を２回連続（１日目〜１５日目（第一周期）、１６日目〜３０日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の平均増殖曲線を図示する；ここで、投与するＴＭＺの全用量は、０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、３６０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、５４０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、または８１０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）とした。図５Ｂは、連続的な毎日の投薬（１〜５日目（第一周期））、１６〜２０日目（第二周期））という二つの連続した５日周期のＴＭＺ処置の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の平均増殖曲線を図示する；ここで、投与するＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋとした。図５Ｃは、断続的な５日間の投薬の１５日周期を二回連続（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目（第一周期））；１６日目、１９日目、２２日目、２５日目、２８日目（第二周期））でＴＭＺ処置の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の平均増殖曲線を図示する；ここで、投与するＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋとした。顕著に、上記の処理期間における各処置群の平均腫瘍体積を表している。この腫瘍モデルでは、連続した５日間の投薬と５日間の断続的な投薬の両者が、連続した毎日の投薬計画（１〜１５日目）よりも優れた腫瘍増殖阻害を示した。実際、腫瘍の退縮は、連続した５日間の投薬計画における二つのＴＭＺの高用量レベルのうちのいずれか（５３または８１ｍｇ／ｋｇ／日）による処置、並びに断続的な投薬計画における最高用量レベルのＴＭＺ（８１ｍｇ／ｋｇ／日）による処置のただ一周期の後に起こった。
【００９０】
図６に図示される通り、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するヌードマウスを、上記のＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍についての実験の中のマウスと同じ投薬計画により処置した。Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍において、ＤＡＯＹグリオーム異種移植片腫瘍におけるパターンと類似のパターンを観察した。顕著に、断続的な投薬計画（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目）における二つの高用量レベル、並びに連続した５日間（１〜５日目）の投薬における最高用量レベルは、連続した毎日の投薬計画（１〜１５日目）における同等な用量レベルよりも有意に優れた効果を生じた。
【００９１】
図７に図示される通り、ＬＯＸメラノーマ細胞、即ち、低いＭＧＭＴの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するＳＣＩＤマウスを、１２日周期の以下の二つの異なる投薬計画により処置した：（ｉ）連続した４日間（１〜４日目）の投薬；または（ｉｉ）連続的な毎日の投薬（１〜１２日目）。中間の用量（７２ｍｇ／ｋｇ）において、４日間の処置計画は、１２日間の計画（５０％ＴＧＩ）よりも有意に優れた効果（８８％ＴＧＩ）を誘導した。反対に、高用量レベルおよび低用量レベルにおいて、統計学的な差異は認められなかった。ＴＭＺの効果は計画に依存しており、さらに、連続４日間投薬した場合に、より優れた効果が認められた。
【００９２】
（腫瘍中のＭＧＭＴの酵素活性）
簡単にいうと、８１ｍｇ／ｋｇのＴＭＺまたは媒体のいずれかで、連続５日間、処理した三つのＤＡＯＹ腫瘍を、マウスから回収した。各腫瘍を均質化し、そして処理の後にＭＧＭＴの酵素活性用の調製を行った。処理していないＤＡＯＹ細胞から測定したＭＧＭＴ活性も、対照として含めた。
【００９３】
図８に図示される通り、細胞培養物から得たＤＡＯＹ細胞と比較して、類似したＭＧＭＴ活性レベルを有する媒体で処理した腫瘍と異なり、ＴＭＺで連続５日間処置した腫瘍については、ほとんどＭＧＭＴ活性を検出しなかった。
【００９４】
（要約）
前述の実験から得たデータのサブセットを、説明の便宜の目的のために、図９〜２２において再度図表で表した。さらに、以下の表３〜５は、同一のデータのサブセットを要約する。
【００９５】
（表３）
（コロニー形成アッセイ）
【００９６】
【表５】
（表４）
（ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍モデル）
【００９７】
【表６】
（表５）
（Ａ３７５およびＬＯＸヒトメラノーマ異種移植片腫瘍モデル）
【００９８】
【表７】
本発明者らは、これらの実験により、異種移植片腫瘍モデルにおいて調べた通り、増加させたＴＭＺの全用量を用いた投薬計画が、高いレベルのＭＧＭＴを含む腫瘍細胞株における細胞増殖を阻害するという点で、より効果的であることを実証していると結論づける。とりわけ、上昇させた用量強度（即ち、１という用量強度より大きい）と相関するＴＭＺの投薬計画は、高いレベルのＭＧＭＴを有する細胞株に由来する異種移植片における腫瘍細胞の増殖を阻害するという点で、標準用量強度（即ち、１という用量強度）よりも効果的である。
【００９９】
本発明の一定の現在好ましい実施形態が本明細書中に記載されているが、記載された実施形態の変化および改変が本発明の精神および範囲から逸脱しないで行われ得ることは、当業者にとって明白であり得る。従って、本発明は添付された特許請求の範囲により要求される範囲にのみ限定されることが、意図されている。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、癌、腫瘍、または転移性疾患のような増殖性障害に苦しむ被験体を処置するための新しい方法およびキットを記述する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
本明細書中の参考文献の議論または引用は、そのような参考文献が本発明に対する先行技術であることの承認として、解釈されないものとする。
【０００３】
非特許文献１は、脳腫瘍が、全ての悪性の疾患のうちのおよそ２％を構成することを報告する。しかしながら、１００，０００人に５人の発生率で、１７，０００より多くの症例が、アメリカ合衆国では毎年診断され、およそ１３，０００の関連死を伴うことが述べられている。Ｓｔｕｐｐらの報告によると、成人では、最も共通する組織学的知見は、グレード３の未分化神経膠星状細胞腫およびグレード４の多形性グリア芽細胞腫（「ＧＢＭ」）である。Ｓｔｕｐｐらによると、悪性グリオームの標準的な管理は、実行可能な場合、外科的切除による細胞減少を含み、その後、補助的化学療法を伴うまたは補助的化学療法なしの放射線療法（ＲＴ）が続く。しかしながら、Ｓｔｕｐｐらは、この多方面からのアプローチにも関わらず、ＧＢＭの患者の予後が、悪いままであることを報告する。ＧＢＭのメジアン生存率は、典型的に９〜１２ヶ月の範囲にあり、２年の生存率は、ほんの８％〜１２％の範囲であると報告されている。
【０００４】
ニトロソウレアは、悪性脳腫瘍の処置に用いられる主要な化学療法剤である。しかしながら、ニトロソウレアは、ほんの穏当な抗腫瘍活性を示してきた。アメリカ合衆国では頻繁に処方されているが、単剤であるカルムスチン（ＢＣＮＵ）もしくはロムスチンまたは組合せ養生法としてプロカルバジン、ロムスチン、およびビンクリスチンを用いた補助的化学療法の有効性は、未だ決定的に明らかにされていない。
【０００５】
化学療法の効力である、致死の宿主毒性を引き起こすことなく腫瘍細胞を根絶するための化学療法の能力は、薬剤の選択性に依存する。抗癌剤のうちの一つのクラスであるアルキル化剤は、ＤＮＡに結合し、ＤＮＡらせん状構造を構造的にゆがめ、ＤＮＡの転写および翻訳を妨げることにより、細胞死を引き起こす。正常細胞では、アルキル化剤の損傷作用は、細胞のＤＮＡ修復酵素、特に、Ｏ６−アルキルグアニン−ＤＮＡ−アルキルトランスフェラーゼ（ＡＧＡＴ）としても公知のＯ６−メチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＭＧＭＴ）により修復され得る。ＭＧＭＴのレベルは、同じ型の腫瘍間でさえ、腫瘍細胞で変化する。ＭＧＭＴをコードする遺伝子は、一般に、変異も欠失もされない。むしろ、腫瘍細胞中のＭＧＭＴの低いレベルは、後成の改変に起因する；ＭＧＭＴのプロモーター領域は、メチル化され、その結果、ＭＧＭＴ遺伝子の転写を阻害してＭＧＭＴの発現を妨げる。
【０００６】
メチル化は、数系列の証拠により、遺伝子発現、細胞分化、腫瘍形成、Ｘ染色体の不活性化、ゲノムインプリンティング、並びに他の主要な生物学的プロセスにおいて役割を果たすことが示されている。真核細胞では、グアノシンのすぐ５’側に存在するシトシン残基のメチル化が、シトシン−グアニン（ＣＧ）の乏しい領域において主に存在する。反対に、正常細胞では、ＣｐＧアイランドは、Ｘ染色体の不活性化、並びに５’側の調節領域のメチル化が転写の抑制を誘導し得る親特異的なインプリンティングの間を除いて、メチル化されないままである。腫瘍抑制遺伝子の発現も、通常はメチル化されないＣｐＧの新生ＤＮＡメチル化によって廃止され得る。
【０００７】
ＤＮＡ修復酵素をコードする遺伝子の過剰なメチル化は、一定の癌の処置に対する臨床的な応答を予測するためのマーカーとして働き得る。一定の化学療法剤（例えばアルキル化剤を含む）は、ＤＮＡを架橋することにより細胞の増殖を阻害して、細胞死を生じる。ＤＮＡ修復酵素は、架橋された構造を除去するので、そのような化学療法剤を用いた処置の努力は、挫折し得、そしてそのような化学療法剤に対する抵抗性が、発達する。ほとんどの化学療法剤の有害性の副作用、並びに様々な処置のための一定の薬剤が効果的でないという観点から、化学療法剤での処置に対する臨床的な応答を予測することが、望ましい。
【０００８】
特許文献１は、細胞増殖性障害についての化学療法の処置に関する方法を開示する。特に、特定のアルキル化剤を含む「一定の型の化学療法剤に対する臨床的応答を予測する」ための方法が、提供される。上記方法は、処置を必要とする患者由来のＤＮＡ修復酵素をコードする核酸のメチル化状態の決定、並びにそれと処置を必要としない被験体由来のＤＮＡ修復酵素をコードする核酸のメチル化状態との比較を伴う。上記方法は、しかしながら、好ましくない「予測」を有する任意の患者の臨床的結果を改善する方法についての示唆を提供していない。
【０００９】
テモゾロミドは、アメリカ合衆国でのＴｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびヨーロッパでのＴｅｍｏｄａｌ（登録商標）という商品名で、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐ．から入手可能なアルキル化剤である。経口投与のためのＴｅｍｏｄａｒ（登録商標）カプセルは、イミダゾテトラジン誘導体であるテモゾロミドを含む。テモゾロミドの化学名は、３，４−ジヒドロ−３−メチル−４−オキソイミダゾ[５，１−ｄ]−ａｓ−テトラジン−８−カルボキサミド（特許文献２を参照）である。テモゾロミドまたはその代謝産物であるＭＴＩＣの細胞毒性は、主に、ＤＮＡのアルキル化に起因すると考えられる。アルキル化（メチル化）は、主に、グアニンのＯ６位およびＮ７位に生じる。
【００１０】
Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）（テモゾロミド）カプセルが、アメリカ合衆国では、新しく診断された多形性グリア芽細胞腫、並びに難治性の未分化神経膠星状細胞腫を有する成人の患者（即ち、ニトロソウレアおよびプロカルバジンを含む薬剤養生法に際して疾患の進行を経験したことのある、最初の再発の時期にいる患者）の処置のために、現在示されている。Ｔｅｍｏｄａｌ（登録商標）は、標準的な治療の後に再発または進行を示す多形性グリア芽細胞腫または未分化神経膠星状細胞腫のような、悪性グリオームを有する患者の処置のため、現在ヨーロッパで認可されている。一定の処置方法は、増殖性障害を有する一定の患者にとって有効であるが、（特に、特徴付けられた患者を標的とすることを含む）さらなる改良された処置の大きな必要性が、持続的に存在する。増殖性障害（特に癌）のための改良された処置の必要性という観点から、処置のための新規の方法が、当該分野にとって歓迎される貢献である。本発明は、まさにそのような処置方法を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第６，７７３，８９７号明細書
【特許文献２】米国特許第５，２６０，２９１号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｓｔｕｐｐら著、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃ．、２００２年、第２０巻、第５号、ｐ．１３７５−１３８２
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
本発明の一つの実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置するための方法を提供し、上記方法は、上記患者にテモゾロミド（ＴＭＺ）の標準用量強度または増加された用量強度を、上記患者から得られた試料中のＯ６−メチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスファラーゼ（ＭＧＭＴ）遺伝子のメチル化状態に基づいて投与することを包含する。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、上記患者由来の試料中のＭＧＭＴをコードする遺伝子（例えば、プロモーター領域）がメチル化されている場合、テモゾロミドの標準用量強度が、投与される；しかしながら、ＭＧＭＴをコードする遺伝子がメチル化されていない（即ち、検出レベル未満）場合、テモゾロミドの増加された用量強度が、上記患者に投与される。本発明のこの実施形態の一つの態様は、以下の工程を包含する：（１）上記患者由来の試料中のＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているか否かを評価する工程および；（２）（ａ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出される場合、上記患者にテモゾロミドの標準用量強度を投与する工程または（ｂ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、上記患者にテモゾロミドの増加された用量強度を投与する工程。本発明のこの実施形態の別の態様は、以下の工程を包含する：ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化が検出されない患者に、増加された用量強度を投与する工程。
【００１４】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「標準用量強度」は、１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２のテモゾロミドの投薬計画で、１０００ｍｇ／ｍ２／４週間という最大全用量に関して２８日周期において５日間投与される、５／２８投薬養生法を意味する。この投薬養生法は、１．０という「用量強度」を提供する。
【００１５】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「増加された用量強度」は、（標準用量強度と比較した場合に）１．４〜４．２倍、好ましくは１．４〜２．８倍、より好ましくは１．８〜２．８倍強いテモゾロミドの用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画を意味する。そのような増加された用量強度を提供する投薬養生法および投薬計画の非制限的な実施例が、表１および表２に図示されている。
【００１６】
（表１）
ＴＭＺの投薬養生法および用量強度
【００１７】
【表１】
本発明のこの実施形態によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、標準用量強度の少なくとも１．６倍または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画が好ましい；そのような条件下で、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度がより好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００１８】
当業者によって理解され得る通り、ＭＧＭＴをコードする遺伝子がメチル化されていない場合、ＭＧＭＴタンパク質が発現され、そして、本明細書中の下に詳述される通りに（例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学的技術またはＭＧＭＴ活性のための酵素アッセイなどによるか）もしくはＭＧＭＴのｍＲＮＡレベルのためのノーザンブロット（例えば、Ｄ’Ａｔｒｉら著、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２０００年、第２９４巻、ｐ．６６４−６７１を参照）またはＭＧＭＴのｍＲＮＡのためのＲＴ−ＰＣＲにより（例えば、Ｐａｔｅｌら著、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９７年、第１７巻、第１０号、ｐ．５８１３−５８２２；Ｗａｔｔｓら著、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９７年、第１７巻、第９号、ｐ．５６１２−５６１９を参照）により検出され得る。従って、本発明の代替実施形態によると、ＭＧＭＴタンパク質の存在または不在が、患者試料中にて評価される。標準用量強度または増加された用量強度が、上記患者に対して、上記患者試料中のＭＧＭＴタンパク質の不在または存在に基づいて投与される。本発明のこの態様と一致して、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、標準用量強度の少なくとも１．６倍または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する、表１に示される通りの投薬養生法および／または投薬計画が、好ましい；そのような条件下で、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度が、より好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００１９】
本発明の別の実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置する方法を提供し、上記方法は、上記患者に、上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化の程度またはレベルに基づいたテモゾロミドの投薬養生法を割り当てる工程および／または上記投薬養生法を上記患者に投与する工程を包含する。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルは、上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを決定することにより評価される。上記レベルは、「低い」、「中等度の」、または「高い」として分類され、そして、上記患者は、下のスキーム１に示されるスキームに従って、表２に提示される投薬養生法のうちの一つによって処置される。
【００２０】
（表２）
（ＴＭＺの投薬養生法および用量強度）
【００２１】
【表２】
（スキーム１）
【００２２】
【表３】
患者から得られた細胞試料中のＭＧＭＴタンパク質の程度またはレベルが、多様な方法のうちの任意の方法により評価され得る。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルは、ＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な抗体を用いたウェスタンブロットにより）評価される。上記レベルは、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較される。患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルは、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２３】
この実施形態の別の態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルは、規定された数の患者細胞に対して免疫組織化学的技術を用いたＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な標識された抗体を利用し、そして上記のレベルを、同一の規定された数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較することにより）評価される。患者ＭＧＭＴのレベルは、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２４】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのレベルが、患者試料中の細胞により発現されるＭＧＭＴについての酵素アッセイにより評価される。例えば、タンパク質が、患者試料中の細胞の溶解産物から免疫沈降され、次いで酵素活性（即ち、ＤＮＡのグアニンのＯ６またはＮ６位をメチル化する能力）が評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球の酵素活性と比較される。患者ＭＧＭＴのレベルが、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴ酵素活性のレベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２５】
代替実施形態では、ＭＧＭＴの比活性が評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、以下の通り分類される：低い＝２０ｆｍｏｌ／ｍｇ未満；中等度＝２０〜６０ｆｍｏｌ／ｍｇ；または高い＝６０ｆｍｏｌ／ｍｇより高い；ここで、ＬＯＸ細胞中のＭＧＭＴの比活性は、６〜９ｆｍｏｌ／ｍｇであり、ＤＡＯＹ細胞中では６０〜１００ｆｍｏｌ／ｍｇであり、そしてＡ３７５細胞中では８０〜１５０ｆｍｏｌ／ｍｇである。この代替実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴ酵素活性が高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００２６】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのメチル化のレベルが、ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化の定量的な決定により、評価される。組み合された亜硫酸水素塩制限解析（Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｂｉｓｕｌｆｉｔｅ Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＣＯＢＲＡ）（Ｘｉｏｎｇら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、ｐ．２５３２−２５３４）と呼ばれる定量的技術は、この態様に有用である。上記患者の細胞中のＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化のレベルが、同等な細胞数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球のレベルと比較される。当業者に理解される通り、ＭＧＭＴを発現する正常なリンパ球は、ＭＧＭＴ遺伝子の低いレベルのメチル化を有する；反対に、ＭＧＭＴ遺伝子の高いレベルのメチル化を有する細胞は、低いレベルのＭＧＭＴタンパク質を発現する（例えば、Ｃｏｓｔｅｌｌｏら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９４年、第２６９巻、第２５号、ｐ．１７２２８−１７２３７；Ｑｉａｎら著、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ、１９９５年、第１６巻、第６号、ｐ．１３８５−１３９０を参照）。患者のメチル化されたＭＧＭＴ遺伝子のレベルは、以下の通り分類される：低い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの０〜２０％がメチル化されている；中等度＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの２１〜５０％がメチル化されている；および高い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの５１〜１００％がメチル化されている。いったん、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが評価され、そして患者が分類されると、患者は、スキーム２に示されたスキームを用いた表２に示された投薬養生法を用いて処置される。
【００２７】
（スキーム２）
【００２８】
【表４】
この実施形態のこの態様によると、患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが低い場合、養成法９番、１０番、または１１番が、好ましい。
【００２９】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルは、試料中のＭＧＭＴ対立遺伝子のうちの何パーセントがメチル化されるかを決定するために、定量的に評価される。２００１年１２月１８日に発行された米国特許第６，３３１，３９３号；Ｅａｄｓら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２０００年、第２８巻、第８号、ｐ．ｅ３２を参照のこと。これらは、本発明のこの態様に有用な、説明に役立つ定量的方法のために、参考として本明細書中に援用されている。
【００３０】
患者のＭＧＭＴのメチル化レベルが、決定され、そして以下の通り分類される：低い＝細胞のうちの０〜２０％がメチル化されているＭＧＭＴ遺伝子を有する；中等度＝細胞のうちの２１〜５０％がメチル化されているＭＧＭＴ遺伝子を有する；および高い＝細胞のうちの５１〜１００％がメチル化されているＭＧＭＴ遺伝子を有する。いったん、メチル化レベルが評価され、そして患者が分類されると、患者は、上記のスキーム２に示されたスキームを用いた表２に示された投薬養生法を用いて処置される。
【００３１】
本発明の別の代替実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置するための改良された方法を提供し、その方法は、前出の表１中の養生法３〜１６によると、上記患者に標準用量強度と比較して１．４〜２．８倍というテモゾロミドの用量強度を投与する工程を包含する。
【００３２】
本明細書中に用いられる通り、「処置する」または「処置」は、ヒトのような哺乳動物における細胞増殖性障害を緩和することまたは軽減することを意味することを意図されている。
【００３３】
本明細書中に記載される通りの細胞増殖性障害は、新生物であり得る。このような新生物は、良性か悪性のいずれかである。用語「新生物」は、細胞の新規の異常な増殖または正常より速く再生する異常な細胞の増殖に関する。新生物は、良性か悪性のいずれかであり得る構築されない塊（腫瘍）をつくる。用語「良性」は、癌でない腫瘍（例えば、その細胞は、周辺の組織に侵入したりまたは離れた場所に転移しない）に関する。用語「悪性」は、癌性、転移性であり、連続した組織に侵入し、またはもはや正常な細胞増殖の制御下にない腫瘍に関する。好ましい実施形態では、本発明の方法またはキットは、メラノーマ、グリオーム、前立腺癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、精巣癌、肝臓癌、腎臓癌、脾臓癌、膀胱癌、結腸直腸癌および／または結腸癌、頭部および頸部の癌、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病または菌状息肉腫を含むがこれらに限定されない増殖性障害を処置するために用いられる。より好ましい実施形態では、本発明の方法およびキットは、メラノーマ、グリオーム、肺癌、リンパ腫、結腸直腸癌および／または結腸癌、頭部および頸部の癌、もしくは卵巣癌を処置するために用いられる。
【００３４】
本明細書中で用いられる通り、患者から得られた「試料」は、ＭＧＭＴタンパク質かＭＧＭＴ遺伝子の核酸のいずれかを含む腫瘍組織、脳組織、脳脊髄液、血液、血漿、血清、リンパ、リンパ節、脾臓、肝臓、骨髄、または任意の他の生物学的検体として得られるか、またはこれらから単離され得る。
【００３５】
本発明は、増殖性障害を有する患者を処置するためのキットも提供する。上記のキットは、以下のものを包含する：（１）本発明の方法において用いられる試薬；並びに（２）本明細書中に記載される通りの方法を実行するための説明書。上記キットは、さらにテモゾロミドを包含し得る。
【００３６】
当業者に理解され得る通り、テモゾロミドを用いて増殖性障害を有する患者を処置するための本発明の新規の方法およびキットは、単一治療法として用いられ得るか、または放射線療法並びに／または他の細胞毒性因子および／もしくは細胞増殖抑制因子および／もしくはホルモン性因子、または他の補助的療法と組み合わせて用いられ得る。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
該患者にテモゾロミドを以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
Ｉ．メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ）を用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ＩＩ．ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
ａ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出されない場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３）
項目２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
テモゾロミドを該患者に以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
ａ）ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法のいずれかに従って投与する工程：
ａ）ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、以下の養生法：
１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６）
項目５に記載の方法であって、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目７）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低い場合、以下の二つの養生法のうちのいずれか：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、中等度である場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉｖ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、高い場合、以下の三つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目８）
項目７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目９）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球工程のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、工程Ｉにおいて、正常なリンパ球のものと比較して低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉｖ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１０）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球工程のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して低いとして分類される場合、以下の三つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、上記試料中に検出されない場合、１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉｖ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して高いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間。
（項目１１）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、以下の養生法のうちの一つ：
Ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ＩＩ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ＩＩＩ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１２）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１３）
項目１２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目１４）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１５）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１６）
項目１５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目１７）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目１８）
項目１７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目１９）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２０）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２１）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２２）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２３）
項目２２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目２４）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２５）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２６）
項目２５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目２７）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目２８）
項目２７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目２９）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３０）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球工程のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３１）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３２）
リンパ腫を有する患者を処置する方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３３）
項目３２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目３４）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３５）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３６）
項目３５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目３７）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目３８）
項目３７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目３９）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４０）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４１）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４２）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４３）
項目４２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４４）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４５）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４６）
項目４５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４７）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目４８）
項目４７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目４９）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５０）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５１）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５２）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５３）
項目５２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目５４）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、
テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５５）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５６）
項目５５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目５７）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目５８）
項目５７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目５９）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６０）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６１）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＳＰを用いて、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該患者から得られた試料中に検出される場合、該患者にテモゾロミドを以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
Ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ＩＩ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ＩＩＩ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６２）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．ＭＳＰを用いて、該患者から得られた試料中にて、ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているかどうかを評価する工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が、該試料中に検出される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６３）
項目６２に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目６４）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、ＭＧＭＴタンパク質のためのウェスタンブロットイムノアッセイ、免疫組織化学的技術、または酵素アッセイを用いて、ＭＧＭＴタンパク質が、該患者から得られた試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６５）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の存在または不在を検出するために、ウェスタンブロット、免疫組織化学的アッセイ、または酵素アッセイを行う工程；および
ＩＩ．ＭＧＭＴタンパク質が、該試料中に検出されない場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６６）
項目６５に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目６７）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、該患者から得られた試料中に検出されたＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度である場合、テモゾロミドを該患者に以下の三つの養生法のうちの一つに従って投与する工程を包含する方法：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目６８）
項目６７に記載の方法であって、ここで、前記試料は、腫瘍生体組織検査試料である、方法。
（項目６９）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性を評価し、そして該レベルまたは該活性を正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルまたは酵素活性が、正常なリンパ球のものと比較して、低いかまたは中等度として分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７０）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルを評価し、そして該レベルを正常なリンパ球のものと比較して低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．該患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが、正常なリンパ球のものと比較して、中等度であるかまたは高いとして分類される場合、テモゾロミドを該患者に以下の養生法のうちの一つに従って投与する工程：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；または
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；または
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７１）
項目１、１１、２１、３１、４１、５１または６１のうちのいずれかに記載の方法を行うための試薬および説明書を含む、キット。
（項目７２）
グリオームを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７３）
メラノーマを有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７４）
肺癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７５）
リンパ腫を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７６）
頭部および頸部の癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７７）
卵巣癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７８）
結腸直腸癌および／または結腸癌を有する患者を処置するための方法であって、以下の工程を包含する方法：
Ｉ．該患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を評価し、そして該酵素活性を、ＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株と比較して、低い、中等度、または高いとして分類する工程；および
ＩＩ．テモゾロミドを該患者に以下の養生法の通り投与する工程：
ａ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、工程Ｉにおいて、低いとして分類される場合、以下の二つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り２５０ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；または
ｂ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、中等度として分類される場合、以下の四つの養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．増殖因子と組み合わせて、１日当り３００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において５日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間；もしくは
ｉＶ．１日当り７５ｍｇ／ｍ２を５６日周期において４２日間；または
ｃ）該患者のＭＧＭＴタンパク質の酵素活性が、高いとして分類される場合、以下の養生法のうちの一つ：
ｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２１日周期において１４日間；もしくは
ｉｉ．１日当り１５０ｍｇ／ｍ２を１４日周期において７日間；もしくは
ｉｉｉ．１日当り１００ｍｇ／ｍ２を２８日周期において２１日間。
（項目７９）
項目７２〜７８のうちのいずれかに記載の方法を行うための試薬および説明書を含む、キット。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）。
【図２】図２は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）。
【図３】図３Ａは、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）。図３Ｂは、８日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の三つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜８日目）；（ｉｉ）連続した２日間の投薬（１〜２日目）；または（ｉｉ）断続的な２日間の投薬（１日目、５日目）。
【図４】図４Ａは、ＴＭＺ処理の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株におけるＭＧＭＴ酵素活性のレベルを図示する。図４Ｂは、ＴＭＺ処理の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株におけるＭＧＭＴタンパク質のレベルを図示する。レーン１〜４は、７２時間のＴＭＺ処理の後に調製された細胞溶解産物を表す。レーン５〜８は、７２時間のＴＭＺ処理、その後ＴＭＺ処理をしないでさらに７２時間後に調製された細胞溶解産物を表す。
【図５】図５Ａは、連続的な毎日の投薬の１５日周期を二回連続（１〜１５日目（第一周期）、１６〜３０日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株における、平均腫瘍増殖曲線を図示する；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、３６０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、５４０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、または８１０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）であった。図５Ｂは、連続した５日間の投薬の１５日周期を二回連続（１〜５日目（第一周期）、１６〜２０日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株における、平均腫瘍増殖曲線を図示する；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋであった。図５Ｃは、断続的な５日間の投薬の１５日周期を二回連続（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目（第一周期）；１６日目、１９日目、２２日目、２５日目、２８日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株における、平均腫瘍増殖曲線を図示する；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋであった。
【図６】図６は、Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株の、１５日周期のＴＭＺ処置後の１５日目における個々の腫瘍体積を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の三つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜１５日目）；（ｉｉ）連続した５日間の投薬（１〜５日目）；または（ｉｉ）５日間（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目）の断続的な投薬；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、１８０ｍｐｋ、２７０ｍｐｋまたは４０５ｍｐｋであった。
【図７】図７は、ＬＯＸヒトメラノーマ異種移植片腫瘍、即ち、低いＭＧＭＴレベルの細胞株の、１２日周期のＴＭＺ処置後の１８日目における個々の腫瘍体積を図示する。ここで、ＴＭＺは、以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与された：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜１２日目）；または（ｉｉ）連続した４日間の投薬（１〜４日目）；ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６ｍｐｋ、７２ｍｐｋまたは１４４ｍｐｋであった。
【図８】図８は、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍、即ち、高いＭＧＭＴレベルの細胞株の個々の、連続した５日間のＴＭＺ処置（ここで、投与されたＴＭＺの全用量は、０または４０５ｍｐｋであった）の後のＭＧＭＴ酵素活性のレベル；並びに細胞培養物から得られた処置されていないＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のＭＧＭＴ酵素活性のレベルを図示する。Ｃ１、Ｃ２およびＣ３は、媒体で処置された三匹の異なるマウスから単離された腫瘍を表すが、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３は、ＴＭＺで処置された別の三匹の異なるマウスから単離された腫瘍を表す。
【図９】図９は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１０】図１０は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１１】図１１は、４日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１２】図１２は、８日周期のＴＭＺ処理の後に存在する、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の数を図示する。
【図１３】図１３は、４日周期のＴＭＺ処理の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１４】図１４は、４日周期のＴＭＺ処理の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１５】図１５は、４日周期のＴＭＺ処理の後の、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１６】図１６は、８日周期のＴＭＺ処理の後の、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞のコロニー形成の阻害（％）を図示する。
【図１７】図１７は、二回の１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株における腫瘍体積を図示する。
【図１８】図１８は、１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株における腫瘍体積を図示する。
【図１９】図１９は、１２日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、２、または４であった）の後の、ＬＯＸヒトメラノーマ異種移植片腫瘍即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株における腫瘍体積を図示する。
【図２０】図２０は、二回の１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の腫瘍増殖阻害（％）を図示する。
【図２１】図２１は、１５日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、１．５、または２．２５であった）の後の、Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍の腫瘍増殖阻害（％）を図示する。
【図２２】図２２は、１２日周期にわたるＴＭＺ処置（ここで、その用量強度は、１、２、または４であった）の後の、ＤＡＯＹヒトメラノーマ異種移植片腫瘍の腫瘍増殖阻害（％）を図示する。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、増殖性障害を有する患者を処置するための新しい方法およびキットを提供し、上記方法およびキットは、上記患者に標準用量強度またはそれより強い用量強度を、上記患者から得られた試料中の上記ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化状態に基づいて投与する工程を包含する。特定の実施形態では、上記メチル化状態は、上記ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているか否かの決定により評価される。別の特定の実施形態では、上記メチル化状態は、上記ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化レベルについての定量的な決定により評価される。さらに別の実施形態では、上記メチル化状態は、ＭＧＭＴタンパク質が発現されているか否かの決定、または発現されているＭＧＭＴタンパク質のレベルの決定、または上記患者の試料中におけるＭＧＭＴの酵素活性の測定により評価される。
【００３９】
本発明の一つの実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置する方法を提供し、上記方法は、上記患者にテモゾロミド（ＴＭＺ）の標準用量強度または増加された用量強度のいずれかを、上記患者から得られた試料中の上記Ｏ６−メチルグアニン−ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＭＧＭＴ）遺伝子のメチル化状態に基づいて投与する工程を包含する。本発明のこの実施形態における一つの態様によると、上記患者由来の試料中におけるＭＧＭＴをコードする遺伝子（例えば、プロモーター領域）がメチル化されている場合、テモゾロミドの標準用量強度が投与される；しかしながら、ＭＧＭＴをコードする遺伝子がメチル化されていない（即ち、検出レベル未満）場合、テモゾロミドの増加された用量強度が、上記患者に投与される。本発明のこの実施形態の一つの態様は、以下の工程を包含する：（１）上記患者由来の試料中のＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されているか否かを評価する工程；（２）（ａ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出される場合、テモゾロミドの標準用量強度を上記患者に投与する工程、または（ｂ）ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、テモゾロミドの増加された用量強度を上記患者に投与する工程。本発明のこの実施形態の別の態様は、以下の工程を包含する：ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化が検出されない患者に、増加された用量強度を投与する工程。
【００４０】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「標準用量強度」は、１日当り１５０〜２００ｍｇ／ｍ２のテモゾロミドの投薬計画で、１０００ｍｇ／ｍ２／４週間という最大全用量に関して２８日周期において５日間投与される、５／２８投薬養生法を意味する。この投薬養生法は、１．０という「用量強度」を提供する。
【００４１】
本明細書中で用いられる通り、用語テモゾロミドの「増加された用量強度」は、（標準用量強度と比較した場合に）１．２〜２．８倍強いテモゾロミドの用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画を意味する。そのような増加された用量強度を提供する投薬養生法および投薬計画の非制限的な実施例が、表１および表２に図示されている。
【００４２】
本発明のこの実施形態によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、標準用量強度の少なくとも１．６倍または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画が好ましい；そのような条件下で、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度がより好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化が検出されない場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００４３】
ＭＧＭＴ遺伝子がメチル化されるか否かを評価することは、当業者に公知の任意の方法を用いて行われ得る。遺伝子または核酸のメチル化を検出するために有用な技術は、以下の者によって記載されたものを含むが、これらに限定されない：Ａｈｒｅｎｄｔら著、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、１９９９年、第９１巻、ｐ．３３２−３３９；Ｂｅｌｓｉｎｋｙら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９９８年、第９５巻、ｐ．１１８９１−１１８９６；Ｃｌａｒｋら著、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９４年、第２２巻、ｐ．２９９０−２９９７；Ｈｅｒｍａｎら著、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９９６年、第９３巻、ｐ．９８２１−９８２６；ＸｉｏｎｇおよびＬａｉｒｄら著、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、ｐ．２５３２−２５３４；Ｅａｄｓら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、２００２年、第２８巻、ｐ．ｅ３２；Ｃｏｔｔｒｅｌｌら著、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２００４年、第３２巻、ｐ．１−８。ここで引用された全ての参考文献は、明細書中に参考として援用されている。
【００４４】
メチル化特異的ＰＣＲ（ＭＳＰ；Ｈｅｒｍａｎら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９６年、第９３巻、第１８号、ｐ．９８２１−９８２６；Ｅｓｔｅｌｌｅｒら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９９年、第５９巻、ｐ．７９３−７９７）は、１９９８年７月２８日に発行された米国特許第５，７８６，１４６号；２０００年１月２５日に発行された米国特許第６，０１７，７０４号；２００１年３月１３日に発行された米国特許第６，２００，７５６号；並びに２００１年７月２４日に発行された米国特許第６，２６５，１７１号；２００４年８月１０日に発行された米国特許第６，７７３，８９７号も参照する；明細書中に参考として援用されているこれらの各々の全容は、メチル化感受性制限酵素の使用と独立して、ＣｐＧアイランド内の実質的に任意のグループのＣｐＧサイトのメチル化状態を素早く評価し得る。このアッセイは、亜硫酸水素ナトリウムによるＤＮＡに対する初めの改変、全てのメチル化されていないシトシン（メチル化されているシトシンを除く）をウラシルへ変換すること、そして続いて起こる、メチル化されていないＤＮＡに対するメチル化されているＤＮＡに特異的なプライマーを用いた複製を必要とする。ＭＳＰは、少量のＤＮＡのみを必要とし、与えられたＣｐＧアイランドの座における０．１％メチル化された対立遺伝子に感受性であり、そして、パラフィン包埋試料から抽出されたＤＮＡ上で行われ得る。ＭＳＰは、メチル化されたＤＮＡとメチル化されていないＤＮＡとを識別するための特異な制限酵素の分解に頼った従来のＰＣＲに基づいたアプローチに固有の擬陽性の結果を除去する。この方法は、非常に簡単であり、そして少量の組織または数個の細胞において用いられ得る。当業者に理解されるように、ＭＧＭＴをコードしている遺伝子がメチル化される場合、ＭＧＭＴタンパク質が発現され、そして本明細書中において下に詳述されるように（例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学的技術またはＭＧＭＴ活性のための酵素アッセイなどによって）ＭＧＭＴタンパク質が検出され得る。従って、本発明の代替実施形態によると、ＭＧＭＴタンパク質の存在または不在が、患者の試料中にて評価される。標準用量強度または増加された用量強度が、上記患者に上記患者の試料中のＭＧＭＴタンパク質の不在または存在に基づいて投与される。本発明の不在態様と一致して、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、表１に示される通り、標準用量強度の少なくとも１．６倍、または少なくとも１．８倍の用量強度を提供する投薬養生法および／または投薬計画が好ましい；そのような条件下、標準用量強度の少なくとも２．０倍の用量強度がより好ましい。代替実施形態では、ＭＧＭＴタンパク質が検出される場合、投薬養生法９番、１１番または１２番が好ましい。
【００４５】
本発明のこの実施形態に有用な、患者試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを測定するためのウェスタンブロットアッセイの説明に役立つ例が、Ｌｉらによる米国特許第５，８１７，５１４号に提示されており、これらの全ての開示が、本明細書中に参考として援用されている。Ｌｉらは、天然のヒトＭＧＭＴタンパク質かまたはアルキル化された活性サイトを有するヒトＭＧＭＴタンパク質のいずれかに特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体を記述した。本発明のこの実施形態に有用な、患者試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを測定するための免疫組織化学的技術の説明に役立つ例は、米国特許第５，４０７，８０４号に提示され、この全体の開示は、本明細書中に参考として援用されている。単一細胞の調製物（免疫組織化学的染色アッセイ）並びに細胞抽出物（イムノアッセイ）の中のＭＧＭＴタンパク質に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体が、開示されている。細胞画像のデジタル処理と結び付けられた蛍光出力の使用が、記述され、そして、腫瘍生体組織検査試料が挙げられるがこれに限定されない患者試料または対照試料中のＭＧＭＴレベルの定量的測定を可能にする。
【００４６】
ＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を測定するための有用な技術は、以下によって記載された方法を含むが、これらに限定されない：Ｍｙｒｎｅｓら著、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、１９８４年、第５巻、ｐ．１０６１−１０６４；Ｆｕｔｓｃｈｅｒら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｍｍ．、１９８９年、第１巻、ｐ．６５−７３；Ｋｒｅｋｌａｗら著、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．、２００１年、第２９７巻、第２号、ｐ．５２４−５３０；Ｎａｇｅｌら著、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００３年、第３２１巻、第１巻、ｐ．３８−４３、これらの全体の開示は、本明細書中に参考として援用されている。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置する方法を提供し、上記方法は、上記患者に上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化の程度またはレベルに基づいてテモゾロミドの投薬養生法を割り当てること、および／またはその投薬養生法を上記患者に投与することを包含する。本発明のこの実施形態の一つの態様によると、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルは、上記患者から得られた試料中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを決定することにより評価される。上記レベルは、「低い」、「中等度」、または「高い」として分類され、そして、上記患者は、前出のスキーム１に示されるスキームに従って、表２に提示される投薬養生法のうちの一つによって処置される。
【００４８】
患者から得られた細胞試料中のＭＧＭＴタンパク質の程度またはレベルは、任意の多様な方法（本明細書中の前出の参考文献を参照）によって評価され得る。
【００４９】
本発明のこの実施形態の一つの態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルが、ＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な抗体を用いたウェスタンブロットにより、例えば、ＭＧＭＴのレベルを決定するためのウェスタンブロットアッセイの説明のためのＬｉらによる米国特許第５，８１７，５１４号（前出）を参照）評価される。上記レベルは、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較される。患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルが、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態に従って、上記患者のＭＧＭＴタンパク質のレベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５０】
この実施形態の別の態様によると、上記患者の細胞により発現されるＭＧＭＴタンパク質のレベルは、規定された数の患者細胞に対して免疫組織化学的技術を用いたＭＧＭＴタンパク質の測定により（例えば、ＭＧＭＴに特異的な標識された抗体を利用し、そして上記のレベルを、同一の規定された数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球により発現されるレベルと比較すること（例えば、有用な定量的免疫組織化学的アッセイの説明のためのＹａｒｏｓｈによる米国特許第５，４０７，８０４号を参照）により）評価される。患者ＭＧＭＴのレベルは、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球により発現されるＭＧＭＴの７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５１】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのレベルが、患者試料中の細胞により発現されるＭＧＭＴについての酵素アッセイにより評価される。例えば、タンパク質が、患者試料中の細胞の溶解産物から免疫沈降され、次いで酵素活性（即ち、ＤＮＡのグアニンのＯ６またはＮ６位をメチル化する能力）が評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球の酵素活性と比較される（ＭＧＭＴタンパク質の酵素活性を決定するために有用なアッセイの説明のための前出の参考文献を参照）。患者ＭＧＭＴのレベルが、以下の通り分類される：低い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の０〜３０％；中等度＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の３１〜７０％；および高い＝正常なリンパ球のＭＧＭＴ酵素活性の７１〜３００％またはそれより高い。この実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴタンパク質レベルが高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５２】
代替実施形態では、ＭＧＭＴの比活性は、評価され、そしてＭＧＭＴを発現することが公知の細胞株との比較に基づいて以下の通り分類される：低い＝２０ｆｍｏｌ／ｍｇ未満；中等度＝２０〜６０ｆｍｏｌ／ｍｇ；または高い＝６０ｆｍｏｌ／ｍｇより高い；ここで、ＬＯＸ細胞中のＭＧＭＴの比活性は、６〜９ｆｍｏｌ／ｍｇであり、ＤＡＯＹ細胞中では６０〜１００ｆｍｏｌ／ｍｇであり、そしてＡ３７５細胞中では８０〜１５０ｆｍｏｌ／ｍｇである。この代替実施形態によると、上記患者のＭＧＭＴ酵素活性が高い場合、養生法９番、１１番、または１２番が、好ましい。
【００５３】
この実施形態のさらなる別の態様によると、ＭＧＭＴのメチル化のレベルが、ＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化の定量的な決定により、評価される。ＣＯＢＲＡ（Ｘｉｏｎｇら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、ｐ．２５３２−２５３４）と呼ばれる定量的技術は、この態様に有用である。Ｅａｄｓら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２０００年、第２８巻、第８号、ｐ．ｅ３２；米国特許第６，３３１，３９３号の「ｍｅｔｈｙｌ ｌｉｇｈｔ」技術も、この態様のための定量的な決定に有用である。上記患者の細胞中のＭＧＭＴをコードする遺伝子のメチル化のレベルが、同等な細胞数の、ＭＧＭＴを発現することが公知の正常なリンパ球のレベルと比較される。当業者に理解される通り、ＭＧＭＴを発現する正常なリンパ球は、ＭＧＭＴ遺伝子の低いレベルのメチル化を有する；反対に、ＭＧＭＴ遺伝子の高いレベルのメチル化を有する細胞は、低いレベルのＭＧＭＴタンパク質を発現する（例えば、Ｃｏｓｔｅｌｌｏら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９４年、第２６９巻、第２５号、ｐ．１７２２８−１７２３７；Ｑｉａｎら著、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ、１９９５年、第１６巻、第６号、ｐ．１３８５−１３９０を参照）。患者のメチル化されたＭＧＭＴ遺伝子のレベルは、以下の通り分類される：低い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの０〜２０％がメチル化されている；中等度＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの２１〜５０％がメチル化されている；および高い＝ＭＧＭＴ遺伝子のプロモーター領域中のＣｐＧの５１〜１００％がメチル化されている。いったん、ＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが評価され、そして患者が分類されると、患者は、前出のスキーム２に示されたスキームを用いた前出の表２に示された投薬養生法を用いて処置される。
【００５４】
この実施形態のこの態様によると、上記患者のＭＧＭＴ遺伝子のメチル化のレベルが低い場合、養生法９番、１０番、または１１番が、好ましい。
【００５５】
上に示される通り、ＣＯＢＲＡ（Ｘｉｏｎｇら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、第２５巻、第１２号、ｐ．２５３２−２５３４）と呼ばれる定量的技術は、少量のゲノムＤＮＡ内の特定の遺伝子座におけるＤＮＡメチル化レベルを、定量的に決定するために用いられ得る。制限酵素による消化は、亜硫酸水素ナトリウムで処理したＤＮＡのＰＣＲ産物におけるメチル化依存性の配列の差異を明らかにするために用いられる（Ｔａｎｏら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９０年、第８７巻、ｐ．６８６−６９０は、ヒトＭＧＭＴ遺伝子の単離および配列を記述する）。元のＤＮＡ試料中のメチル化レベルは、ＤＮＡメチル化レベルの広いスペクトラムにわたり、直線的に定量的な様式で、消化されているＰＣＲ産物と消化されていないＰＣＲ産物との相対的な量によって表される。この技術は、顕微解剖されたパラフィン包埋組織試料から得られたＤＮＡに信頼性をもって適用され得る。ＣＯＢＲＡは、従って、使い易さ、定量的な正確さという強力な特徴と、パラフィン切片との適合性とを併せもつ。
【００５６】
ＭＧＭＴのｍＲＮＡのレベルを評価するために有用なＲＴ−ＰＣＲアッセイの説明に役立つ例は、Ｗａｔｔｓら著、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９７年、第１７巻、第９号、ｐ．５６１２−５６１９に記述されている。簡単にいうと、全細胞性ＲＮＡが、グアニジン イソチオシアネート細胞溶解により、次いで２．５時間、２０５，０００×ｇでの５．７ＭのＣｓＣｌを介した遠心により単離される。ＲＮＡは、Ｂｅｃｋｍａｎ ＴＬ−１００分光光度計で、２６０ｎｍにおける吸光度の測定により定量化される。全細胞性ＲＮＡは、２００ｎｇのＲＮＡ；１×ＰＣＲ緩衝液（１０ｍＭのＴｒｉｓ[ｐＨ８．３]、５０ｍＭのＫＣｌ、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２）；１ｍＭの各ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ；２００ｐｍｏｌの任意の六量体、４０ＵのＲＮａｓｉｎ、および２４Ｕの鳥類の骨髄芽球症ウイルス逆転写酵素（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）から構成される４０μｌの反応混合液を４２℃で６０分間インキュベートすることにより、逆転写される。この反応を、９９℃で１０分間インキュベートすることにより停止させる。ＭＧＭＴ特異的なＰＣＲは、８０μｌの複製反応緩衝剤（１×ＰＣＲ緩衝剤、２５ｐｍｏｌのＭＧＭＴ特異的プライマーおよび／または対照配列、並びに２ＵのＴａｑＤＮＡポリメラーゼ）を２０μｌの逆転写反応混合物に添加し、次いで９４℃で５分間のインキュベーション；９４℃で１分間、６０℃で１５秒間、および７２℃で１分間を３０回；７２℃で５分間の最終的な伸長；そして素早く冷やして４℃にすることにより行われる。例えば、ＭＧＭＴ遺伝子のエキソン４からの上流プライマー配列（ヌクレオチド６６５〜ヌクレオチド６８４）が、用いられ得る。ヌクレオチドの位置は、上記ｃＤＮＡ配列に由来し得る（Ｔａｎｏら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９０年、第８７巻、ｐ．６８６−６９０）。対照のプライマー配列は、同じｃＤＮＡ反応（例えば、ヒストン３．３遺伝子のためのプライマー）において用いられ得る。解析のため、各ＰＣＲ産物のうちの１０％が、３％アガロースゲルを通して分離され、そしてエチジウムブロマイド染色により可視化される。
【００５７】
ＭＧＭＴのｍＲＮＡのレベルを評価するために有用なノーザンブロットの説明に役立つ例が、Ｄ’Ａｔｒｉら著、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２０００年、第２９４巻、ｐ．６６４−６７１に記述されている。簡単にいうと、全細胞性ＲＮＡが、グアニジン チオシアネート−フェノール−クロロホルム法（ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃｈｉら著、Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９８７年、第１６２巻、第１号、ｐ．１５６−１５９）により抽出される。引き続いて、一部分が、ホルムアルデヒドを含む１．２％アガロースゲル上における電気泳動により分画され、そして、ＲＮＡ強度が、上記ゲルのエチジウムブロマイド染色に続く可視化により確認される。ＲＮＡは、その後ナイロン膜（Ｇｅｎｅｓｃｒｅｅｎ Ｐｌｕｓ；Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）へ転写され、そして４２℃で２４時間、３２Ｐ標識されたＭＧＭＴのプローブおよび対照のプローブ（例えば、グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ））とハイブリダイズされる。例えば、ＭＧＭＴのプローブは、Ｍｏｌｔ−４細胞からのＲＮＡの逆転写の後に得られたポリメラーゼ連鎖反応由来のｃＤＮＡプローブであり得る（Ｌａｃａｌら著、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ、１９９６年、第２７９巻、第１号、ｐ．４１６−４２２）。０．１×標準クエン酸塩（１０ｍＭの塩化ナトリウム、１．５ｍＭのクエン酸ナトリウム）により室温で３０分間洗浄の後、上記のブロットされた膜は、−８０℃でｘ線フィルム（Ｋｏｄａｋ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）に露光される。上記のブロットの二次元のデンシトメトリーは、Ｉｍａｇｉｎｇ ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒＧＳ−６７０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、ＣＡ）を用いて行われ得る。
【００５８】
本発明の別の代替実施形態は、増殖性障害を有する患者を処置するための改良された方法を提供し、その方法は、前出の表１中の養生法３〜養生法１６によると、上記患者に標準用量強度と比較して１．４〜２．８というテモゾロミドの用量強度を投与する工程を包含する。
【００５９】
本発明の範囲内に包含されるのは、本明細書中の上記の通りのテモゾロミドとＲＡＲＰ阻害剤とを組み合わせて投与することである。遺伝子毒性のストレスに対する細胞内反応におけるポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の役割に関する強制力のある証拠は、ＤＮＡを損傷する抗癌療法を増強させる治療薬として阻害剤を開発するための刺激であった。最近２０年にわたり、強いＰＡＲＰ阻害剤が、構造活性相関（ＳＡＲ）および結晶構造解析を用いて開発されてきた。これらのアプローチは、阻害剤と酵素との強い相互作用のための要となる望ましい性質を同定してきた。生じたＰＡＲＰ阻害剤は、古典的なベンズアミドよりも最大１，０００倍強い。これら新規の強い阻害剤は、ＰＡＲＰ阻害の治療上の可能性を定義するのを手伝ってきた。ＰＡＲＰ阻害剤は、テモゾロミドを含む三つのクラスの抗癌剤の抗腫瘍活性を増加させる。ＰＡＲＰ阻害剤は、本明細書中に記載されているようにテモゾロミドの投与の前か、それに付随するかまたはそれの後のいずれかに投与され得る。実験上のＰＡＲＰ阻害剤としては、ＣＥＰ−６８００（Ｃｅｐｈａｌｏｎ；Ｍｉｋｎｙｏｃｚｋｉら著、Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ、２００３年、第２巻、第４号、ｐ．３７１−３８２に記載されている）；３−アミノベンズアミド（３−ＡＢとしても公知である；Ｉｎｏｔｅｋ；Ｌｉａｕｄｅｔら著、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００１年、第１３３巻、第８号、ｐ．１４２４−１４３０に記載されている）；ＰＪ３４（Ｉｎｏｔｅｋ；Ａｂｄｅｌｋａｒｉｍら著、Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ、２００１年、第７巻、第３号、ｐ．２５５−２６０に記載されている）；５−ヨード−６−アミノ−１，２−ベンゾピロン（ＩＮＨ（２）ＢＰとしても公知である；Ｉｎｏｔｅｋ；Ｍａｂｌｅｙら著、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００１年、第１３３巻、第６号、ｐ．９０９−９１９、ＧＰＩ １５４２７（Ｔｅｎｔｏｒｉら著、Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ、２００５年、第２６巻、第２号、ｐ．４１５−４２２に記載されている）；１，５−ジヒドロキシイソキノリン（ＤＩＱとしても公知である；ＷａｌｉｓｓｅｒおよびＴｈｉｅｓら著、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ、１９９９年、第２５１巻、第２号、ｐ．４０１−４１３に記載されている；５−アミノイソキノリノン（５−ＡＩＱとしても公知である；Ｄｉ Ｐａｏｌａら著、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２００４年、第４９２巻、第２〜３号、ｐ．２０３−２１０に記載されている；ＡＧ１４３６１（ＢｒｙａｎｔおよびＨｅｌｌｅｄａｙら著、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ、２００４年、第３２巻、Ｐｔ６、ｐ．９５９−９６１；Ｖｅｕｇｅｒら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、２００３年、第６３巻、第１８号、ｐ．６００８−６０１５；並びにＶｅｕｇｅｒら著、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２００４年、第２３巻、第４４号、ｐ．７３２２−７３２９に記載されている）；ＡＢＴ−４７２（Ａｂｂｏｔｔ）；ＩＮＯ−１００１（Ｉｎｏｔｅｋ）；ＡＡＩ−０２８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＫＵ−５４９３６（ＫｕＤＯＳ；Ｆａｒｍｅｒら著、「Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ＤＮＡ ｒｅｐａｉｒ ｄｅｆｅｃｔ ｉｎ ＢＲＣＡ ｍｕｔａｎｔ ｃｅｌｌｓ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ」、Ｎａｔｕｒｅ、２００５年、第４３４巻、第７０３５号、ｐ．９１７−９２１）；およびＪａｇｔａｐら著、Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ、２００２年、第３０巻、第５号、ｐ．１０７１−１０８２に記載されている事柄；Ｌｏｈら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、２００５年、第１５巻、第９号、ｐ．２２３５−２２３８；Ｆｅｒｒａｒｉｓら著、Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、２００３年、第４６巻、第１４号、ｐ．３１３８−３１５１；Ｆｅｒｒａｒｉｓら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、２００３年、第１３巻、第１５号、ｐ．２５１３−２５１８；Ｆｅｒｒａｒｉｓら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ、２００３年、第１１巻、第１７号、ｐ．３６９５−３７０７；ＬｉおよびＺｈａｎｇ著、ＩＤｒｕｇｓ、２００１年、第４巻、第７号、ｐ．８０２−８１２；Ｓｔｅｉｎｈａｇｅｎら著、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、２００２年、第１２巻、第２１号、ｐ．３１８７−３１９０）；国際公開第０２／０６２８４号パンフレット（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；および国際公開第０２／０６２４７号パンフレット（Ｂａｙｅｒ）に記載されているものが挙げられる。さらに、ＰＡＲＰ−１阻害剤のためのハイスループットスクリーンが、Ｄｉｌｌｏｎら著、Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ、２００３年、第８巻、第３号、ｐ．３４７−３５２に記載されている。
【００６０】
一つの処置の方法は、治療法の処置の過程において哺乳類動物に投与されたテモゾロミドおよび／または放射線治療の有効性を改善することを含み、上記方法は、上記哺乳類動物に有効量のＰＡＲＰ阻害剤（化合物、薬学的に許容可能な塩、プロドラッグ、活性な代謝産物、または溶媒化合物）をテモゾロミドおよび／または放射線治療と共に投与することを包含する。
【００６１】
Ｏ６−ベンジルグアニンは、当業者にとって公知である。造血の毒性を強調するために、肝細胞（または腫瘍細胞）中のＭＧＭＴの内因性活性が、Ｏ６−ベンジルグアニン（Ｏ６ＢＧ）により不活性化され得る。本発明は、上記の投薬養生法および／または投薬計画を用いて、癌を処置するためのテモゾロミドとＯ６−ベンジルグアニン（Ｏ６ＢＧ）とを組み合わせた使用も包含する。Ｏ６ＢＧは、本明細書中に記載されるようにテモゾロミドの投与の前か、それに付随するか、またはそれの後のいずれかに投与され得る。
【００６２】
上記の通り表１および表２において、本発明の特定の投薬養生法では、特に、養生法４番、８番、１０番および１５番が、テモゾロミドと組み合わせた増殖因子の投与を包含する。好ましい実施形態によると、上記増殖因子は、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−３、ＩＬ−６、またはエリスロポエチンである。増殖因子の非制限的な例は、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）（エポエチンアルファ）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）（エポエチンアルファ）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）（フィルグラスチム、ヒトＧ−ＣＳＦ）、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）（高グリコシル化組換えｄａｒｂｅｐｏｅｔｉｎ ａｌｆａ）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）（Ｎｅｕｐｏｐｅｇとも商標をつけられている、ＰＥＧ化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）組換えフィルグラスチム、ＰＥＧフィルグラスチム（ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、Ａｌｂｕｐｏｉｅｔｉｎ（登録商標）（長く作用するエリスロポエチン）、およびＡｌｂｕｇｒａｎｉｎ（登録商標）（アルブミンＧ−ＣＳＦ、および長く作用するＧ−ＣＳＦ）。より好ましい実施形態によると、上記増殖因子は、Ｇ−ＣＳＦである。
【００６３】
本明細書中に用いられる通り、「ＧＭ−ＣＳＦ」は、（ａ）Ｌｅｅら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９８５年、第８２巻、ｐ．４３６０により記載される成熟した（シグナルペプチドを欠く）ヒトＧＭ−ＣＳＦの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、かつ（ｂ）天然のＧＭ−ＣＳＦに共通の生物学的活性を有する、タンパク質を意味する。
【００６４】
アミノ酸配列の実質的な同一性は、その配列が、同一であるか、または生物学的活性を実質的に弱めない一つ以上のアミノ酸の改変（欠失、付加、置換）により異なることを意味する。ヒトＧＭ−ＣＳＦの間で、ヌクレオチド配列およびアミノ酸（ａｍｉｎｏ ａｄｄ）の不均質性が、観察されてきた。例えば、スレオニンおよびイソロイシンの両者が、アミノ酸配列のＮ末端位置に関してＧＭ−ＣＳＦの１００位で観察されてきた。Ｓｃｈｒｉｍｓｈｅｒら著、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、１９８７年、第２４７巻、ｐ．１９５も、８０位のメチオニン残基がイソロイシン残基で置換されているヒトＧＭ−ＣＳＦ変異体を開示している。マウスおよびテナガザルおよびラットのような他の種のＧＭ−ＣＳＦ（テナガザルのＧＭ−ＣＳＦは３つのみのメチオニンを含む）も、本発明によって予想される。原核生物の発現システムにおいて産生される組換えＧＭ−ＣＳＦは、当該分野で周知の通り、さらなるＮ末端のメチオニン残基を含み得る。上記の実質的な同一性要件を満たす任意のＧＭ−ＣＳＦが、グリコシル化されようと（即ち、天然の供給源由来または原核生物の発現システム由来であろうと）グリコシル化されなかろうと（即ち、真核生物の発現システムまたは化学合成由来であろうと）含まれる。
【００６５】
本発明における使用のためのＧＭ−ＣＳＦが、天然の供給源から得られ得る（米国特許第４，４３８，０３２；Ｇａｓｓｏｎら著、前出；Ｂｕｒｇｅｓｓら著、前出；Ｓｐａｒｒｏｗら著、Ｗｕら著、前出）。実質的に同一のアミノ酸配列、並びに天然に存在するＧＭ−ＣＳＦの活性を有するＧＭ−ＣＳＦが、本発明で用いられ得る。ＧＭ−ＣＳＦの相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）が、多くの研究室（例えば、Ｇｏｕｇｈら著、Ｎａｔｕｒｅ、１９８４年、第３０９巻、ｐ．７６３（マウス）；Ｌｅｅら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８５年、第８２巻、ｐ．４３６０（ヒト）；Ｗｏｎｇら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８５年、第２２８巻、ｐ．８１０（ヒトおよびテナガザル）；Ｃａｎｔｒｅｌｌら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８５年、第８２巻、ｐ．６２５０（ヒト）、Ｇｏｕｇｈら著、Ｎａｔｕｒｅ、１９８４年、第３０９巻、ｐ．７６３（マウス）；Ｗｏｎｇら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８５年、第２２８巻、ｐ．８１０（ヒトおよびテナガザル）；Ｃａｎｔｒｅｌｌら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１９８５年、第８２巻、ｐ．６２５０（ヒト））により、クローン化され、そして配列が読まれてきた。
【００６６】
ＧＭ−ＣＳＦは、ワシントン州シアトルのＩｍｍｕｎｅｘ、Ｉｎｃ． およびニュージャージー州ケニルワースのＳｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから、並びにマサチューセッツ州ボストンのＧｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎからも得られ得る。
【００６７】
本発明の有利な実施形態では、テモゾロミドが、本明細書中に教示される方法に従って抗催吐剤と組み合わせて、投与され得る。パロノセトロン、トロピセトロン、オンダンセトロン、グラニセトロン、ベメセトロンまたは前述の非常に選択的な作用物質のうちの少なくとも二つのくみあわせが、抗催吐剤として働く５ＨＴ３受容体拮抗薬として用いられる。この点について、一回の投薬単位における活性な抗催吐物質の量は、２〜１０ｍｇに達することが好ましく、そして、５〜８ｍｇという一回の投薬単位における活性物質の量が、特に好ましい。一日の用量は、一般的に２〜２０ｍｇという活性物質の量を含み、特に好ましいのは、５〜１６ｍｇという活性物質の量である。本発明の方法では、アプレピタント（ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）のようなＮＫ−１拮抗薬（ニューロキニン−１拮抗薬）は、単独でまたはデキサメタゾンのようなステロイドと組み合わせても、５ＨＴ３受容体拮抗薬と共にまたは５ＨＴ３受容体拮抗薬なしで用いら得る。必要である場合に、当業者は、その要件に従って、一回の投薬単位における活性物質および毎日の用量のレベルを変化させる方法を知る。体重、全体の構成、上記処置に対する応答などのような、上記方法を決定する因子は、必要な場合に、状況に応じて反応するために、かつ一回の投薬単位における活性物質の量を調整するかまたは一日の用量を調整するために、当業者により持続的にモニタリングされ得る。
【００６８】
さらなる別の実施形態によると、テモゾロミドが、本明細書中に教示される方法を用いてファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤と組み合わせて投与される。
【００６９】
別の実施形態によると、テモゾロミドは、別の抗催吐剤と共に投与され得る。他の有用な抗腫瘍剤の非制限的な例としては、ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオフォスフォラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、ゲムシタビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、パクリタキセル、ミトラマイシン、デオキシコフォルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン、エトポシド、テニポシド １７．アルファ．−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゴセレリン、シスプラチン、カルボプラチン、ヒドロキシウレア、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、ナベルベン（Ｎａｖｅｌｂｅｎｅ）、アナストラゾール、レトラゾール（Ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、カペシタビン（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、レロキサフィン（Ｒｅｌｏｘａｆｉｎｅ）、ドロキシフェン（Ｄｒｏｌｏｘａｆｉｎｅ）、ヘキサメチルメラミン、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ）（登録商標）、イレッサ（ゲフィチニブ、Ｚｄ１８３９）、ゼローデ（登録商標）（カペシタビン）、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ）、アザシチジン（５−アザシチジン；５−ＡｚａＣ）、並びにこれらの混合物をが挙げられる。
【００７０】
テモゾロミドは、米国特許第５，８２４，３４６号、米国特許第５，９３９，０９８号、米国特許第５，９４２，２４７号、米国特許第６，０９６，７５７号、米国特許第６，２５１，８８６号、米国特許第６，３１６，４６２号、米国特許第６，３３３，３３３号、米国特許第６，３４６，５２４号、および米国特許第６，７０３，４００号に開示されているような他の抗癌剤と共に投与され得、それらの特許文献は全て、参考として援用される。
【実施例】
【００７１】
（実験）
一連の実験に基づく研究は下記の通りに行われた。
【００７２】
（コロニー形成アッセイ）
以下に詳述される通り、インビトロコロニー形成アッセイにおけるＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（高いＭＧＭＴレベル）、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞（高いＭＧＭＴレベル）およびＬＯＸヒトメラノーマ細胞（低いＭＧＭＴレベル）をＴＭＺの異なる投薬計画により処理した。簡単にいうと、細胞（ＤＡＯＹ、Ａ３７５、またはＬＯＸ）を含む未だコンフルエントではない（ｓｕｂ−ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）プレートを６穴プレートに播種する前に、トリプシン処理し、次いですすぎ、そして、適切な培養培地に懸濁した。細胞を１８〜２４時間、３７℃で、細胞が接着することを可能にするまでインキュベートした。段階的な濃度のＴＭＺ、または同量の容量の希釈物を三連で添加した。ＴＭＺの各パルスを２４時間続けた。例えば、連続的な毎日のＴＭＺの投与を受けている細胞をＴＭＺ含有培地で、２４時間毎に、上記の周期を通じて処理した。一つの周期におけるＴＭＺの最後のｐｕｌｓｅの後に、ＴＭＺ含有培地を除去し、そして上記のインキュベーション期間の残りの期間、ＴＭＺを含まない新しい培地と交換した。生じたコロニーをクリスタルバイオレッド溶液で染色し、次いでＩｍａｇｅＰｒｏ ｐｌｕｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｅｍｐｉｒｅ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．Ａｓｂｕｒｙ、Ｎ．Ｊ．）で定量化した。
【００７３】
（ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞株（高いＭＧＭＴレベル））
図１に図示される通り、コロニー形成アッセイを行い、それによってＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（高いＭＧＭＴ）を４日周期において、以下の二つの異なる、ＴＭＺの投薬計画のうちの一つに従って処理した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（即ち、連続した４日間；１〜４日目に毎日投与した全量の１／４）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（即ち、１日における；１日目に投与した全量）；ここで、投与するＴＭＺの全量を、０μｇ、９３μｇ、１８６μｇ、３７３μｇ、または７４６μｇとした。簡潔にいうと、単一パルス投薬の、１８６μｇ、３７３μｇ、および７４６μｇという全体のＴＭＺレベルにおける、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成に対する阻害を実証した。
【００７４】
（Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞株（高いＭＧＭＴレベル））
図２に図示される通り、コロニー形成アッセイを行い、それによってＡ３７５ヒトメラノーマ細胞（高いＭＧＭＴ）を４日周期において、以下の二つの異なるＴＭＺの投薬計画のうちの一つに従って処理した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）；ここで、投与するＴＭＺの全量を、０μｇ、６２μｇ、１２４μｇ、２４９μｇ、または４９７μｇとした。興味深いことに、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞において、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞と類似する応答のパターンを観察した。ＴＭＺによる用量依存的な阻害をＴＭＺの投与計画の両者を用いて実証したが、単一パルス投薬は、６２μｇ、１２４μｇ、２４９μｇ、４９７μｇという全ＴＭＺレベルにおいて、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を生じた。
【００７５】
（ＬＯＸヒトメラノーマ細胞株（低いＭＧＭＴレベル））
図３Ａおよび図３Ｂに図示される通り、コロニー形成アッセイを行い、それによってＬＯＸヒトメラノーマ細胞（低いＭＧＭＴ）を４日周期（図３Ａ）または８日周期（図３Ｂ）のいずれかにわたるＴＭＺの投薬計画により処理した。
【００７６】
４日周期において、図３Ａに図示される通り、ＴＭＺを以下の二つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜４日目）；または（ｉｉ）単一パルス投薬（１日目）；ここで、投与するＴＭＺの全量を０μｇ、１６μｇ、３１μｇ、６２μｇ、または１２４μｇとした。単一パルス投薬は、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を示した。
【００７７】
８日周期において、図３Ｂに図示される通り、ＴＭＺを以下の三つの異なる投薬計画のうちの一つに従って投与した：（ｉ）連続的な毎日の投薬（１〜８日目）；（ｉｉ）連続した２日間（１〜２日目）の投薬；または（ｉｉ）２日間（１日目、５日目）の断続的な投与；ここで、投与するＴＭＺの全量を０μｇ、３１μｇ、６２μｇ、１２４μｇ、または２４８μｇとした。２日間の断続的な投薬は、連続的な毎日の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を示した。さらに、２日間の断続的な投薬は、ＴＭＺの同じ全用量における連続した２日間の投薬よりも優れたコロニー形成阻害を示した。
【００７８】
（ＭＧＭＴアッセイ）
以下に詳述される通り、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞中のＭＧＭＴの酵素活性およびタンパク質レベルを、ＴＭＺの異なる濃度レベル（０μｇ、１０μｇ、４０μｇ、および１６０μｇ）での以下のいずれかの期間における処理の後に決定した：（ｉ）７２時間のＴＭＺ処理；または（ｉｉ）７２時間のＴＭＺ処理に続いて、ＴＭＺ処理をしないでさらに７２時間。
【００７９】
（ＭＧＭＴの酵素活性アッセイ）
簡単にいうと、３Ｈ−メチル化されたＤＮＡ基質を子ウシの胸腺ＤＮＡから調製した。この基質を５０μｇの細胞抽出液と共に、３７℃で４５分間インキュベートした。ＭＧＭＴタンパク質への放射能の完全な転移の後、過剰のＤＮＡを加水分解し、そして、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）で洗浄した。ＭＧＭＴタンパク質へ転移された放射能をシンチレーション計数により測定した。
【００８０】
図４Ａに図示される通り、Ａ３７５メラノーマ細胞中のＭＧＭＴの酵素活性のレベルを、ＴＭＺの異なる濃度レベル（０ｍＭ、１０ｍＭ、４０ｍＭ、および１６０ｍＭ）での処理の後に測定した。７２時間のＴＭＺの処理は、用量依存的なＭＧＭＴの減少を引き起こした。さらに、ＭＧＭＴ活性の減少が薬物処理の除去後にどのくらいの期間持続するか評価するために、酵素活性を７２時間の処理の後に洗浄し、そしてＴＭＺを含まない培地中にてさらに７２時間維持した細胞の対応するセットについても測定した。興味深いことに、上記の酵素活性は、用量依存的な様式で薬物除去後の７２時間減少されたままであった。このことは、高用量のＴＭＺのパルス処理は、ＭＧＭＴのレベルに対して長期間の効果を有することを示す。また、このことは、これらの細胞におけるＴＭＺ処理のさらなる用量が、ＴＭＺの細胞毒性を増強し得ることを示す。
【００８１】
（ＭＧＭＴのウェスタンブロット）
腫瘍細胞（５×１０５）を、１０ｍｌ（９０％ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ、Ｎ．Ｙ．）と１０％のウシ胎児血清）を含む１００ｍｍ×２０ｍｍ培養プレート内に、播種した。細胞を、増加する濃度のＴＭＺまたは同量の容量の希釈物で処理した。処理後の様々な時期において、全細胞溶解産物を、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）と、１０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４／ＮａＨＰＯ４と、１３０ｍＭのＮａＣｌと、１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００と、１０ｍＭのＰＰｉ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）とを含む溶液中に、調製した。全タンパク質のうちの等量を、４〜１２％のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動し、そして、ポリビニリデンジフルオリド（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ ｄｅｆｌｕｏｒｉｄｅ）膜へ電気的な転写を行った。上記のブロットを、Ｔｒｉｓ緩衝化生理食塩水（ＴＢＳ）中５％脱脂粉乳でブロッキングし、そして、ＭＧＭＴに対する特異的抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、または内部の対照としてのＧＡＰＤＨ（ＵＳＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ）に対する抗体でプローブした。
【００８２】
図４Ｂに示される通り、Ａ３７５メラノーマ細胞中のＭＧＭＴタンパク質のレベルを、異なる濃度レベル（０μＭ、１０μＭ、４０μＭ、１６０μＭ）でのＴＭＺ処理の後に、ウェスタンブロットにより測定した。レーン１〜４は、７２時間のＴＭＺ処理の後に調製した細胞溶解産物を表す。レーン５〜８は、７２時間のＴＭＺ処理に続くＴＭＺ処理をしないでさらに７２時間の後に調製した細胞溶解産物を表す。検出したＭＧＭＴタンパク質レベルは、図４Ａに記載されている同様に処理した細胞について測定したＭＧＭＴ特異的活性のレベルと相関した。両者のアッセイにより、ＭＧＭＴタンパク質レベルの用量依存的な減少を検出した。
【００８３】
（インビボの研究）
以下に詳述される通り、ＴＭＺの異なる投薬計画を、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（高いＭＧＭＴレベル）、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞（高いＭＧＭＴレベル）、並びにＬＯＸヒトメラノーマ細胞（低いＭＧＭＴレベル）を用いて形成した異種移植片腫瘍において評価した。
【００８４】
簡単にいうと、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからの、メスの無胸腺ヌードマウスまたはメスのＳＣＩＤマウス（４〜６週齢）をＶＡＦ障壁施設内で維持した。動物の操作を、実験動物の世話および使用のためのＮ．Ｉ．Ｈ．ガイドに説かれた規則に従って行った。
【００８５】
ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞（５×１０６）、ＬＯＸヒトメラノーマ細胞（５×１０５）、およびＡ３７５ヒトメラノーマ細胞（５×１０６）を、上記動物の右側腹部に皮下接種した（ＳＣＩＤマウスにおいてはＬＯＸ；ヌードマウスにおいてはＤＡＯＹおよびＡ３７５）。インビボでの増殖を促進するため、接種前にｍａｔｒｉｇｅｌをＤＡＯＹ細胞（５０％）およびＡ３７５細胞（５０％）に混合した。腫瘍体積がおよび１００ｍｍ３になったとき、動物を無作為化し、そして群に分けた（ｎ＝１０）。腫瘍体積および体重を、一週間当り二回、ＬａｂｃａｔＴＭ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｐｒｏｇｒａｍｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｎ．Ｊ．）を用いて測定した。腫瘍体積を、式（Ｗ×Ｌ×Ｈ）×π×１／６により算出した。
【００８６】
ＴＭＺを、腹腔内注射により、媒体としての２０％ＨＰβＣＤ（１％ＤＭＳＯを含む）とともに投与した。ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するマウスを、三つの異なる投薬計画のうちの一つにより処置した。１５日周期において、同一の全用量レベルで、マウスに以下のＴＭＺ処置の一つを施した：（ｉ）１日目から１５日目まで；（ｉｉ）１日目から５日目まで；または（ｉｉｉ）断続的に、１日目、４日目、７日目、１０日目および１３日目。全ての投薬計画について、三つの異なる用量レベル（１８０、２７０、および４０５ｍｇ／ｋｇ全量）を用いた。
【００８７】
Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するマウスを、三つの異なる投薬計画により処置した。ＤＡＯＹモデルについての上記計画に類似して、１５日周期において、同一の全用量レベルで、マウスに以下のＴＭＺ処置のうちの一つを施した：（ｉ）１日目から１５日目まで；（ｉｉ）１日目から５日目まで；または（ｉｉｉ）断続的に、１日目、４日目、７日目、１０日目および１３日目。全ての投薬計画について、三つの異なる用量レベル（１８０ｍｇ／ｋｇ全量、２７０ｍｇ／ｋｇ全量、および４０５ｍｇ／ｋｇ全量）を用いた。
【００８８】
ＬＯＸヒトメラノーマ細胞、即ち低いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するマウスを、二つの異なる計画を用いて、ＴＭＺで処置した。同一の全用量を、以下のいずれかの過程において、均等に分割して投与した：（ｉ）４日間または（ｉｉ）１２日間。ＴＭＺを、腹腔内注射により、３６ｍｇ／ｋｇ、７２ｍｇ／ｋｇ、または１４４ｍｇ／ｋｇという累積的な全用量レベルを用いて投与した。
【００８９】
図５に図示される通り、ＤＡＯＹヒトグリオーム細胞、即ち高いＭＧＭＴレベルの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するヌードマウスを、ＴＭＺについての三つの異なる計画により、用量依存的な様式で処置した。図５Ａは、連続した毎日の投薬の１５日周期を２回連続（１日目〜１５日目（第一周期）、１６日目〜３０日目（第二周期））でＴＭＺ処置した後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の平均増殖曲線を図示する；ここで、投与するＴＭＺの全用量は、０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、３６０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、５４０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、または８１０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）とした。図５Ｂは、連続的な毎日の投薬（１〜５日目（第一周期））、１６〜２０日目（第二周期））という二つの連続した５日周期のＴＭＺ処置の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の平均増殖曲線を図示する；ここで、投与するＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋとした。図５Ｃは、断続的な５日間の投薬の１５日周期を二回連続（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目（第一周期））；１６日目、１９日目、２２日目、２５日目、２８日目（第二周期））でＴＭＺ処置の後の、ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍の平均増殖曲線を図示する；ここで、投与するＴＭＺの全用量は、０ｍｐｋ、３６０ｍｐｋ、５４０ｍｐｋ、または８１０ｍｐｋとした。顕著に、上記の処理期間における各処置群の平均腫瘍体積を表している。この腫瘍モデルでは、連続した５日間の投薬と５日間の断続的な投薬の両者が、連続した毎日の投薬計画（１〜１５日目）よりも優れた腫瘍増殖阻害を示した。実際、腫瘍の退縮は、連続した５日間の投薬計画における二つのＴＭＺの高用量レベルのうちのいずれか（５３または８１ｍｇ／ｋｇ／日）による処置、並びに断続的な投薬計画における最高用量レベルのＴＭＺ（８１ｍｇ／ｋｇ／日）による処置のただ一周期の後に起こった。
【００９０】
図６に図示される通り、Ａ３７５ヒトメラノーマ細胞、即ち高いＭＧＭＴの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するヌードマウスを、上記のＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍についての実験の中のマウスと同じ投薬計画により処置した。Ａ３７５ヒトメラノーマ異種移植片腫瘍において、ＤＡＯＹグリオーム異種移植片腫瘍におけるパターンと類似のパターンを観察した。顕著に、断続的な投薬計画（１日目、４日目、７日目、１０日目、１３日目）における二つの高用量レベル、並びに連続した５日間（１〜５日目）の投薬における最高用量レベルは、連続した毎日の投薬計画（１〜１５日目）における同等な用量レベルよりも有意に優れた効果を生じた。
【００９１】
図７に図示される通り、ＬＯＸメラノーマ細胞、即ち、低いＭＧＭＴの細胞株の異種移植片腫瘍を保有するＳＣＩＤマウスを、１２日周期の以下の二つの異なる投薬計画により処置した：（ｉ）連続した４日間（１〜４日目）の投薬；または（ｉｉ）連続的な毎日の投薬（１〜１２日目）。中間の用量（７２ｍｇ／ｋｇ）において、４日間の処置計画は、１２日間の計画（５０％ＴＧＩ）よりも有意に優れた効果（８８％ＴＧＩ）を誘導した。反対に、高用量レベルおよび低用量レベルにおいて、統計学的な差異は認められなかった。ＴＭＺの効果は計画に依存しており、さらに、連続４日間投薬した場合に、より優れた効果が認められた。
【００９２】
（腫瘍中のＭＧＭＴの酵素活性）
簡単にいうと、８１ｍｇ／ｋｇのＴＭＺまたは媒体のいずれかで、連続５日間、処理した三つのＤＡＯＹ腫瘍を、マウスから回収した。各腫瘍を均質化し、そして処理の後にＭＧＭＴの酵素活性用の調製を行った。処理していないＤＡＯＹ細胞から測定したＭＧＭＴ活性も、対照として含めた。
【００９３】
図８に図示される通り、細胞培養物から得たＤＡＯＹ細胞と比較して、類似したＭＧＭＴ活性レベルを有する媒体で処理した腫瘍と異なり、ＴＭＺで連続５日間処置した腫瘍については、ほとんどＭＧＭＴ活性を検出しなかった。
【００９４】
（要約）
前述の実験から得たデータのサブセットを、説明の便宜の目的のために、図９〜２２において再度図表で表した。さらに、以下の表３〜５は、同一のデータのサブセットを要約する。
【００９５】
（表３）
（コロニー形成アッセイ）
【００９６】
【表５】
（表４）
（ＤＡＯＹヒトグリオーム異種移植片腫瘍モデル）
【００９７】
【表６】
（表５）
（Ａ３７５およびＬＯＸヒトメラノーマ異種移植片腫瘍モデル）
【００９８】
【表７】
本発明者らは、これらの実験により、異種移植片腫瘍モデルにおいて調べた通り、増加させたＴＭＺの全用量を用いた投薬計画が、高いレベルのＭＧＭＴを含む腫瘍細胞株における細胞増殖を阻害するという点で、より効果的であることを実証していると結論づける。とりわけ、上昇させた用量強度（即ち、１という用量強度より大きい）と相関するＴＭＺの投薬計画は、高いレベルのＭＧＭＴを有する細胞株に由来する異種移植片における腫瘍細胞の増殖を阻害するという点で、標準用量強度（即ち、１という用量強度）よりも効果的である。
【００９９】
本発明の一定の現在好ましい実施形態が本明細書中に記載されているが、記載された実施形態の変化および改変が本発明の精神および範囲から逸脱しないで行われ得ることは、当業者にとって明白であり得る。従って、本発明は添付された特許請求の範囲により要求される範囲にのみ限定されることが、意図されている。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【公開番号】特開２０１１−１２１９６０（Ｐ２０１１−１２１９６０Ａ）
【公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−３４８０（Ｐ２０１１−３４８０）
【出願日】平成２３年１月１１日（２０１１．１．１１）
【分割の表示】特願２００７−５４０１７６（Ｐ２００７−５４０１７６）の分割
【原出願日】平成１７年１１月７日（２００５．１１．７）
【出願人】（５９６１２９２１５）シェーリング コーポレイション (785)
【氏名又は名称原語表記】Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１月１１日（２０１１．１．１１）
【分割の表示】特願２００７−５４０１７６（Ｐ２００７−５４０１７６）の分割
【原出願日】平成１７年１１月７日（２００５．１１．７）
【出願人】（５９６１２９２１５）シェーリング コーポレイション (785)
【氏名又は名称原語表記】Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
【Ｆターム（参考）】
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