新規なキラルセレクター、及びエナンチオマー混合物分離のための固定相
本発明は、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分離法におけるキラルセレクターとしての、式（Ｉ）［式中、Ｘが担体材料への共有結合のためのリンカーであれば、ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１又はｎ＝２であり、Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、或いはＸ＝ＯＨであれば、Ｒ2＝ＣＨ2ＣＨＲ3Ｒ4であり、ここでＲ3＝Ｈ又はＯＨであり、Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである］のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体の使用、並びにキラル固定相を製造するためのこのセレクターの使用に関する。本発明はさらに、上記キラルセレクターから誘導されるキラル固定相、該固定相の製造方法、並びに物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーを分離するためのキラルセレクターとしての、α位で非置換のβ−アミノ酸の使用、並びにα位で非置換のβ−アミノ酸、及びとりわけその誘導体を中心的なキラルセレクターとして含むキラル固定相（ＣＳＰ）、前記固定相の合成、及びこの固定相を用いた、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分離法に関する。
【０００２】
純エナンチオマー物質に対する、及び化学的及び医薬的な適用のための作用物質に対する需要が増大しているため、クロマトグラフィーの分野ではとりわけ、エナンチオマー純度を制御するため、及びラセミ化プロセスの試験のための分析レベルでも、医薬的な品質管理のため、及び薬物動力学的な調査、また、純エナンチオマー化合物の作成のための分取的なレベルでも使用することができる、多数の立体選択性分離技術が発展してきている。
【０００３】
エナンチオマーは、アキラルな環境においてジアステレオマーとは異なり、同一の化学的及び物理的特性を有する。従ってクロマトグラフィーによるエナンチオマー分離は、間接的な手法を用いて、すなわち分析物をキラル誘導体化試薬と反応させてジアステレオマー混合物にすることによって（このジアステレオマー混合物はアキラルな相材料のエナンチオマー混合物とは異なり、分離することができる）、又はいわゆる直接的な手法で、移動相又は固定相へ組み込まれるキラルセレクターを使用して行うことができる。ここで分離性能は、非共有結合の相互作用により分析物とセレクターとの間に形成されるジアステレオマー錯体の様々な安定性に基づく。
【０００４】
直接法も間接法もすでに、様々なクロマトグラフィー法、及び電気泳動法、例えばガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、高性能液体クロマトグラフィー（高速液体クロマトグラフィーとも、ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＤＣ）、超臨界及び亜臨界液体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）、キャピラリー電気クロマトグラフィー（ＣＥ）において、エナンチオマー分離の分野で適用されている（Guebitz und Schmid (Eds.), Methods in Molecular Biology, VoI 243: Chiral Separations: Methods and Protocols, Humana Press Inc: Totowa, NJ: 2004; Guebitz und Schmid, Biopharm. Drug Dispos. 2001 , 22, 291-336）。
【０００５】
分析物の誘導体化とは、不所望の副生成物及び分解生成物の形成、並びに（部分的な）ラセミ化につながり得る、少なくとも１つの付加的な反応工程を意味する。これに加えて分析物中に、誘導体化に適した官能基が存在していなければならず、キラルな誘導体化試薬は高いエナンチオマー純度で利用可能でなければならない（Guebitz und Schmid, Biopharm. Drug Dispos. 2001 , 22, 291-336）。このため現在は、非誘導的な直接クロマトグラフィー法又は電気泳動法が好ましいだろう。
【０００６】
クロマトグラフィーシステム又は電気泳動システムの移動相へのキラルセレクターの添加は、確かに取り扱いが容易なエナンチオマー分離のための手法ではあるものの、非常にコストが高く、かつあらゆる場合で実用的なものではない。
【０００７】
キラルセレクターが共有結合的に、又は吸着的に担体材料に結合されているキラル固定相を使用する直接クロマトグラフィー法は取り扱いが便利であり、キラル相材料の充分な分離性能が前提となるものの、分取的なレベルでも適用可能である。幅広い種類の化合物への適用を可能にするために、キラル固定相の分野では特に、一方でキラル化合物の両方のエナンチオマーの効率的な分離を可能にしながら、他方で充分に柔軟なキラルセレクターが望ましい。
【０００８】
直接法の変法がリガンド交換法（ＬＥ）であり、その基礎となるのは、金属イオン、キラルセレクター、及び分析物（後者２つが金属イオンに対するリガンドとして働く）との間の三種混合錯体の形成である。ここで効果的な分離に対して責任を担うのは、分析物の（Ｒ）若しくは（Ｓ）エナンチオマーとの混合錯体の様々な安定性定数である。リガンド交換則は、一連の上記方法で効果的にエナンチオマー分離に使用することができた：古典的なカラムクロマトグラフィー、高性能液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、及びキャピラリー電気クロマトグラフィーにおいては、一方でキャピラリー電気泳動における電解質に対してキラルセレクターを用い、それに加えてキラル固定相を用いるということであり、この際にこれらの場合でキラルセレクターは共有結合的に、又は吸着的に担体材料に結合されていてよい。
【０００９】
しかしながらキラル分離は今日まで予測されていないので、キラル固定相と移動相の適切な組み合わせを効果的かつ迅速に発見することは、従前通りクロマトグラフィーの大きな挑戦であり(Subramanian, Practical Approach to Chiral Separations by Liquid Chromatography, Wiley-VCH: Weinheim 1994; Guebitz und Schmid (Eds.), Methods in Molecular Biology, VoI 243: Chiral Separations: Methods and Protocols, Humana Press Inc: Totowa, NJ: 2004; Francotte, GIT Labor-Fachzeitschrift 5/2006, 452-455)、集中的な研究により常に新たな、そして改善された相材料につながっている (Laemmerhofer und Lindner, : Separation Methods in Drug Synthesis and Purification, Valko(Ed.), Elsevier: Amsterdam 2000, 337-437)。Armstrong et al., (Anal. Chem. 2001 , 73, 557A-561 A)によれば、２００１年で既に、高性能液体クロマトグラフィー用のものだけでも、様々なセレクターに基づいた１００以上のキラル固定相が市販で得られる。あらゆる製造元は、範囲の広い適用ハンドブックを提供しており、そこでは例えば、脂肪族、芳香族、脂環式、又は複素環式のキラルアミン、アルコール、アミノアルコール、又はα−アミノ酸、及びその誘導体のための多様な分離条件が、ほぼ製品に特有のものだけ、リストに挙げられている。これら多数の市販で得られるキラル固定相は、一方では非常に重要な意味を持つこと、そして分離技術に対する大きな関心を裏付けるものではあるが、キラル固定相を用いた直接クロマトグラフィー法と電気泳動法に今日までつきまとっている大きな欠点を表している：構造的に近縁な構成要素の場合ですら、効率的な分離を達成するためには、一連の（高価な）キラル固定相が必要となることがしばしばである。
【００１０】
そこで独自の試験、また文献の記載が証明しているように、これまでは例えばβ−アミノ酸とその誘導体のキラルクロマトグラフィーのために多数の固定相が必要であり、これらの固定相がガスクロマトグラフィー（ＧＣ）又は液体クロマトグラフィー（例えばＨＰＬＣ）に使用される。従来技術からは例えば、セルロースカルバメート相、アミロース誘導体、クラウンエーテル(Berkecz et al., J. Chromatogr. A, 2006, 1125, 138-143 ; Hyun et al., J. Sep. Sci. 2005, 28, 421-427)、リガンド交換相(Hyun et al., J. Sep. Sci. 2003, 26, 1615-1622; Hyun et al., Biomed. Chromatogr. 2003, 17, 292-296)、又はマクロ環式グリコペプチド相(Sztojkov-Ivanov et al., Chromatographia 2006, 64, 89-94; Illisz et al., J. Sep. Sci. 2006, 29, 1305-1321、及びそこで引用された文献; D' Acquarica et al., Tetrahedron: Asymmetry 2000, 11 , 2375-2385)から公知である。
【００１１】
β−アミノ酸は近年、キー成分としてのその特別な薬理学的特性が原因で、多数のペプチド擬似物、及びさらなる生理活性物質に組み込まれてきた(Kuehl et al., Amino Acids 2005, 29, 89-100)。これに関連して、合成構成要素及び目的生成物のエナンチオマー純度を試験するための分析手法に対する需要がますます高まっており、明らかに過剰量の光学鏡像異性体の存在下でエナンチオマーの痕跡を検出するための微量痕跡測定の分野では、特にそうである(Juaristi und Soloshonok, Enantioselective Synthesis of β-Amino Acids, Wiley-VCH: New York 2005)。
【００１２】
本発明の課題は、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分離のための新規なキラル相の基礎構造に基づいて作成することができる、新規なキラルセレクターを提供することであり、このキラルセレクターは、キラル化合物のエナンチオマーペア、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体をクロマトグラフィー法で、とりわけ高性能液体クロマトグラフィーで効率的かつ可能な限り汎用的に分別することを、分析的及び分取的なレベルで可能にするものである。
【００１３】
完全に意想外なことに、α位で非置換のβ−アミノ酸誘導体は、柔軟であり、その上、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体の分離法における高選択性のキラルセレクターであることが判明した。本発明によるセレクターをエナンチオマー分離のために使用することができるさらなる物質群は例えば、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸である。従って本発明の特別な利点は、α位で非置換のβ−アミノ酸誘導体ベースのキラルセレクターを含むキラル相が、意想外なことに多数の物質群のクロマトグラフィー分離のために汎用的に使用可能であるということである。
【００１４】
従って本発明の対象は、式（Ｉ）
【化１】
［式中、
キラルセレクターがリンカーＸを介して担体材料に結合されれば、
ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、
或いはＸ＝ＯＨであれば、
Ｒ2＝ＣＨ2ＣＨＲ3Ｒ4であり、
ここでＲ3＝Ｈ又はＯＨであり、Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである］
のキラルセレクターの使用である。
【００１５】
本発明によれば前記キラルセレクターは主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在し、その一方で側鎖に潜在的に存在する立体中心が主として絶対配置に存在している必要がない。
【００１６】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル基とは、任意の分岐を有していてよい１〜４個の飽和炭素原子を有する基をいい、好ましいのはメチル基、イソプロピル基、イソブチル基、及びｓ−ブチル基である。
【００１７】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ6〜Ｃ10）アリール基とは、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族基をいい、好ましいのは、フェニル基、並びにさらなる基又は官能基、とりわけフルオロ基、クロロ基、ブロモ基、メチル基及び／又はトリフルオロメチル基でモノ置換、オリゴ置換、ポリ置換又はペル置換されていてもよい１−ナフチル基及び２−ナフチル基、並びにヒドロキシ基及び／又はシアノ基である。
【００１８】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル基とは好ましくは、メチレン基を介して分子に結合された（Ｃ6〜Ｃ10）アリール基をいい、さらに好ましいのはフェニルエチル基とジフェニルメチル基である。
【００１９】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル基とは、メチレン基を介して分子に結合されたピリジル基又はインドリル基をいう。
【００２０】
本発明の意味合いにおいてナフチル基とは好ましくは、さらなる置換基に結合されていてよい１−ナフチル又は２−ナフチル基をいう。
【００２１】
好ましくは、Ｒ1＝フェニルであり、特に好ましいのは、Ｒ1＝フェニルであり、かつｎ＝１、又はｎ＝２である実施態様である。好ましくは、さらにＲ4＝フェニルである。
【００２２】
本発明の対象はさらに、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法のための固定相を製造するための、式（Ｉ）で表されるキラルセレクターの使用であり、この際、キラルセレクターは担体材料に対して共有結合的に、又は吸着的にシリカゲル基材又はモノリス基材上に結合される。
【００２３】
式（Ｉ）で表されるキラルセレクター若しくは前記キラルセレクターをベースとするキラル固定相は、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法におけるセレクターとして適している。この際に試料は、エナンチオマー混合物の他にまたさらなる化合物、例えば副生成物及び／又は不純物（これらは後に除去されるべきである）を含んでいてよい。本発明の意味合いにおいてクロマトグラフィー法とは、とりわけ薄層クロマトグラフィー（ＤＣ）、キャピラリー電気クロマトグラフィー（ＣＥＣ）であり、特に好ましいのは高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。本発明の意味合いにおいてさらなるクロマトグラフィー法とは、マイクロチップへのマイクロ高性能液体クロマトグラフ（μ−ＨＰＬＣ）及びキャピラリー電気クロマトグラフィー（ＣＥＣ）（いわゆるラボオンチップ技術）である。本発明の特別な利点は、キラルセレクターにより、多様な条件下で安定的であり、かつ順相形態（ＮＰ）でも、有機極性形態（ＰＯ）でも、そして逆相形態（ＲＰ）でも稼働させることができる固定相の製造が可能になることである。本発明のさらなる利点は、前記キラルセレクターにより、その高選択性に基づいて、エナンチオマーの微量痕跡測定が可能になることである。
【００２４】
さらに好ましいのは、いわゆるリガンド交換形態でのクロマトグラフィー法であり、この方法は、移動相が正に帯電した金属イオン、好ましくは二価の金属イオン、とりわけ銅（ＩＩ）イオンを含むものである(Davankov, J. Chromatogr. 1971 , 60, 280-283)。リガンド交換形態では、式（Ｉ）に記載のキラルセレクターの吸着的な結合が好ましく、この際にＸ＝ＯＨ、かつＲ2＝ＣＨ2ＣＨＲ3Ｒ4（ここでＲ3＝Ｈ又はＯＨであり、かつＲ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである）である。
【００２５】
本発明はさらに、担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相を利用可能にし、この際に前記キラルセレクターは式
【化２】
［式中、ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、かつ
Ｘが担体材料へのキラルセレクターの共有結合のためのリンカーである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体を含む。
【００２６】
本発明によれば、前記キラルセレクターは主として炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在する。
【００２７】
好ましくは、Ｒ1＝フェニルであり、特に好ましいのは、Ｒ1＝フェニルであり、かつｎ＝１、又はｎ＝２である実施態様である。
【００２８】
リンカーＸは好ましくは、第一級アミノ基を有するアミノアルキルリンカー、特に好ましいのはアミノプロピルリンカーであり、このリンカーを介して前記セレクターがカルボン酸アミドとして担体材料に結合される。この実施態様は、式（ＩＩａ）に表されている。
【化３】
【００２９】
本発明の意味合いにおいて好ましい担体材料は、シリカゲル基材又はモノリス基材上の材料である。
【００３０】
本発明はさらに、式（ＩＩ）又は式（ＩＩａ）のキラルセレクターを含むキラル固定相の製造方法を提供し、この方法は以下の工程：
（ｉａ）α位で非置換のβ−アミノ酸又はこれに相応するβ−アミノ酸エステルを、アセチル化に適した３，５−ジニトロベンゾイル誘導体、好ましくは３，５−ジニトロベンゾイルクロリドによってアセチル化（Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル）する工程、又は
（ｉｂ）α位で非置換のＮ−ナフチル化されたβ−アミノ酸、又はこれに相応するβ−アミノ酸エステル（Ｒ2＝ナフチル）を合成する工程、
（ｉｉ）場合により、エステル官能基を鹸化する工程、
（ｉｉｉ）場合により、α位で非置換のさらなるβ−アミノ酸単位をカップリングする工程、
（ｉｖ）場合によりリンカーを介して、キラルセレクターを担体材料に共有結合させる工程、
を含むものである。一般式（ＩＩ）及び（ＩＩａ）の化合物の製造は例えば、相応するβ−アミノ酸若しくは相応するβ−アミノ酸エステルを、アセチル化に適した３，５−ジニトロベンゾイル誘導体、好ましくは３，５−ジニトロベンゾイルクロリドによってアセチル化（Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル）することによって（Pirke et al.によって刊行された、とりわけα−アミノ酸ベースのキラル相の調製方法に倣って）行うことができる。主としてエナンチオマー形態（Ｒ2＝ナフチル）のα位で非置換のＮ−ナフチル化されたβ−アミノ酸の、又はこれに相応するβ−アミノ酸エステルの合成は例えば、相応するβ−アミノ酸及びナフトールから出発する古典的なブッヘラー反応の変法により（Pirkle及びPochapskyにより刊行された、高エナンチオマー純度のＮ−（２−ナフチル）−２−アミノ酸及びＮ−（２−ナフチル）−２−アミノ酸エステルの製造法（J. Org. Chem. 1986, 51 , 102-105）に倣って）可能である。β−アミノ酸エステルは、β−アミノ酸繰返単位（ｎ＞１）を有するセレクターの構築に必要となり、この構築は例えば、溶液中での古典的なペプチド合成の経路で行うことが出来る。その詳細と代替的な合成経路については、ペプチド合成のための関連公知文献で指摘されている（例えば、Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Band 15/1 und 15/2; M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag 1984）。
【００３１】
本発明はさらに、式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）により表されるキラルセレクター、又は前記キラルセレクターをベースとするキラル固定相を用いた、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のための方法を提供し、この方法は、
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、担体材料及び式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）固定相との異なる相互作用に基づき、移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、
（ｉｉｉ）場合により、移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含むものである。この方法は加えて、エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーの微量痕跡測定のために適している。好ましいのは、液体クロマトグラフィー法、とりわけＨＰＬＣ法である。これらの方法は例えば、順相形態（ＮＰ）、極性有機形態（ＰＯ）、又は逆相形態（ＲＰ）において、金属イオンを添加せずに行うことができる。
【００３２】
本発明はさらに、担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相を利用可能にすることであり、この際に前記キラルセレクターは式
【化４】
［式中、Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4−（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2−ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ3＝Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体である。
【００３３】
本発明によれば前記キラルセレクターは主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在し、その一方で２’位に潜在的に存在する立体中心が主として絶対配置に存在している必要がない。
【００３４】
好ましくは、Ｒ1＝フェニルである。
【００３５】
本発明の意味合いにおいてＲ4は好ましくは、短鎖の置換されたフェニル基、特に好ましくは非置換のフェニル基であるか、又は１〜２０個の炭素原子、好ましくは４〜１８個の炭素原子、特に好ましくは６〜１６個の炭素原子、とりわけ１０〜１２個の炭素原子を有する、線状若しくは分枝状のアルキル基であり、特に好ましいのはｎ−デシルである。とりわけ、Ｒ1＝フェニル、かつＲ4＝ｎ−デシルである実施態様が好ましい。
【００３６】
適切な担体材料上への、式（ＩＩＩ）に記載のキラルセレクターの施与は、好ましくは吸着的に、逆相材料（Reversed-Phase材料、ＲＰ材料）をいわゆる動的被覆（dynamische Belegung）することにより、好ましくはシリカゲル又はモノリス基材上に行う。好ましいＲＰ材料は例えば、ＲＰ−２、ＲＰ−４、ＲＰ−５、ＲＰ−６、ＲＰ−８、ＲＰ−１２、及びとりわけＲＰ−１８である。
【００３７】
本発明はさらに、式（ＩＩＩ）に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相の製造方法を提供し、この方法は以下の工程：以下の工程を含む、Ｎ−アルキル化されたアミノ酸の調製、請求項１５から２２までのいずれか１項に記載のキラル固定相の製造方法：
（ｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を調製する工程、
（ｉｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を担体材料に吸着結合させる工程、
を含むものである。
【００３８】
一般式（ＩＩＩ）の化合物の製造は例えば、等モル量の強塩基、例えばナトリウムメチレートを用いて、相応するエポキシド化合物と、その都度のβ−アミノ酸との反応により行うことができる（Busker et al., DE 3 143 726 A1）。このことは、２’−炭素原子に対するラセミ配置につながる。式（ＩＩＩ）のキラルセレクターを調製するための代替的な方法は、相応するβ−アミノ酸を、ｎ−アルキルブロミドでＮ−アルキル化することである（例えばDavankov et al., Chromatographia 1980, 13, 677-685に記載）。
【００３９】
好ましいのはさらに、分析的な、半分取的な、又は分取的なレベルにおいて、式（ＩＩＩ）で表されたキラルセレクター又は前記キラルセレクターをベースとするキラル固定相を用い、とりわけリガンド交換形態（ＬＥ）で、金属イオン、好ましくは二価の金属イオン、特に好ましくは銅（ＩＩ）イオンが添加される、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法である。このような方法は、
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、式（ＩＩＩ）に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）キラルセレクターとの異なる相互作用に基づき、二価の遷移金属イオン、好ましくは銅（ＩＩ）イオンを含む移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、及び
（ｉｉｉ）分取的、又は半分取的液体クロマトグラフィー適用の場合には、場合により移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含む。この方法は加えて、エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーの微量痕跡測定のために適している。
【００４０】
本発明の意味合いにおいてクロマトグラフィー分離とは、分析目的のために分離された物質を以後単離することなく、また半分取的な又は分取的な目的のためにクロマトグラフィーシステム（担体材料、移動相）の成分及び試料中に含まれている他の物質から分離された成分を以後分離しても行われる、キラル固定相を用いた、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分別をいう。
【００４１】
本発明の意味合いにおいて、主として絶対配置にとは、５０％超、好ましくは少なくとも９０％超、とりわけ少なくとも９５％超が光学活性のエナンチオマー形態であり、特に好ましくは純エナンチオマー形態である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】実施例１に記載のキラル固定相を用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割（chromatographische Aufloesung）である。
【図２】実施例２に記載のキラル固定相を用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【図３】実施例３に記載のキラル固定相を用いた、様々なα−及びβ−アミノ酸、並びにα−ヒドロキシ酸の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【図４】エナンチオマー純度を測定するため、とりわけ微量痕跡測定の分野での、実施例２に従ったキラル固定相の使用である。
【００４３】
上のクロマトグラムが示しているのは、実施例２に記載のキラル固定相を用いた、（Ｒ）−及び（Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸のラセミ体混合物のクロマトグフラフィー分割である。中央にあるのは、前記相を用いた、純粋な（Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸のクロマトグラムである。下のクロマトグラムが示しているのは、（Ｒ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸を１％増加させた、（Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸の分割である。
【００４４】
すでに従来技術で言及されているように、多数のキラルセレクター、及び前記キラルセレクターをベースとする固定相は公知である。従って例えば、高性能液体グラフィーを用いてβ−アミノ酸とその誘導体を分離するために、これまでクラウンエーテル、α−アミノ酸誘導体、又はマクロ環式グリコペプチドをベースとするキラルセレクターが適用されている。表１には、従来技術より公知のエナンチオマーのβ−アミノ酸を分離するための様々なクロマトグラフィー法がまとめられており、本発明の教示により達成することができる結果が対比されている。分離カラムの同定は、通常の方法（例えばMeyer, Praxis der Hochdruckfluessigkeitschromatographie, Wiley-VCH Weinheim 2004に記載の方法）で、キャパシティ係数ｋ1及びｋ2によって、分離係数α、及び分割Ｒsにより行う。正確なクロマトグラフ条件は、各オリジナル文献から読み取ることができる。
【００４５】
表１：キラル固定相を用いた、一般式Ｈ2Ｎ−ＣＨＲ1−ＣＨ2−ＣＯ2Ｈのβ−アミノ酸のエナンチオマー混合物のクロマトグラフィー分離
【表１−１】
【表１−２】
【００４６】
表１から明らかなように、本発明によるセレクター、及び前記セレクターをベースとする固定相は、従来技術より公知のセレクターよりも分離性能の点で極めて有利であり、分離係数α、及びエナンチオマーＲsの分割により、特に半分取的な、及び分取的な適用という観点でも同定することができる。これに加えてこれらは、幅広い適用可能性を示す；ここでは、表２〜４に示す結果を指摘しておく。
【００４７】
さらには従来技術から、α−アミノ酸をベースとし、式（ＩＩ）で表されるセレクターに対して一定の類似性を有するキラルセレクターは公知である（Welch, J. Chromatogr. A 1994, 3-26）。しかしながら、そこに記載されたキラルセレクターは、α位で非置換のβ−アミノ酸誘導体ではない。従来技術において、それどころか多様な情報源に記載されているように、キラル検出に関与する官能基間の距離がより大きくなること、及びセレクターの立体配座柔軟性がより高度になること（これらのことは、本発明によるセレクターの場合には付加的なメチレン基に基づき、α−アミノ酸と比較して、又はα位で置換されたβ−アミノ酸と比較して生じる）は、分離性能に対して否定的に作用するのである（とりわけ、Pirkle und McCune, J. Chromatogr. 1988, 441 , 311 ; Wang et al., Anal. Chem. 2000, 72, 5459-5465; Welch, J. Chromatogr. A 1994, 3-26参照）。
【００４８】
実施例
以下の実施例は、本発明をより詳しく説明するものだが、いかなる場合であっても本発明を制限するものではない。
【００４９】
実施例１
アミノプロピル官能化されたシリカゲルマトリックス（アミノ相）への（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸の共有結合を用いた、キラル固定相の製造
（１）（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸の合成
（Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸（（Ｓ）−β−フェニルアラニン）１６ｇに、５％の水酸化ナトリウム水溶液８０ｍｌを加え、そして生成する溶液を５０％の水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨ値を１１〜１２に調整する。テトラヒドロフラン２０ｍｌの添加後、反応混合物を１０℃に冷却し、ジニトロベンゾイルクロリド２３．１ｇをテトラヒドロフラン６０ｍｌに入れた溶液を６０分にわたって添加し、そして反応混合物をさらに６０分撹拌する。その後、有機相を蒸留により除去し、残っている水相をメチル−ｔ−ブチルエーテルで二度抽出する。この水相に酢酸エチル２００ｍｌを添加し、そして４Ｎの塩酸を添加することにより、ｐＨ値を１〜２に調整する。これらの相を分離し、そしてこの有機相を飽和食塩溶液２００ｍｌで洗浄する。４５℃、ｐ＝１５０ｍｂａｒで溶剤を留去した後、残留物をシクロヘキサン３００ｍｌに取る。生成物を濾別し、４０℃で乾燥させる。生成物のさらなる精製は、分取高性能液体クロマトグラフィーを用いて、逆相材料（例えばKromasil RP-18、粒径１０μｍ）で、アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸の溶剤混合物中で行う。収率：８．０ｇ、ＨＰＬＣ純度 ９９．８Ｆｌ％；元素分析：
【００５０】
（２）アミノプロピル官能化されたシリカゲル相（アミノ相）への（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸の結合
（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸４ｇをテトラヒドロフラン２００ｍｌに入れた溶液中に、アミノ相（YMC-GeI Amino NH12S05、粒径５μｍ）４．１ｇを懸濁させ、そして撹拌しながらこの反応混合物にＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）３．２ｇを加える。室温で８時間後に相材料を濾別し、それぞれ５０ｍｌのメタノール及びジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させる。収率：所望の担体材料４．６ｇ、元素分析：Ｃ １０．６％、Ｈ １．２％、Ｎ ２．４％；０．４ｍｍｏｌ／ｇの被覆に相応。
【００５１】
２５０×５ｍｍのＨＰＬＣカラムの充填は、３００ｂａｒで、バランス密度法（Balanced density-Methode）に従って行う（Meyer, Praxis der Hochdruckfluessigkeits-chromatographie, Wiley-VCH: Weinheim 2004参照）。
【００５２】
適用例１
実施例１に従って製造された分離カラムは、ＨＰＬＣ条件下で多数のβ−アミノ酸若しくはβ−アミノ酸誘導体のクロマトグラフィーに適している（表２）。図１が示しているのは、実施例１に従った分離カラムを用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【表２−１】
【表２−２】
【００５３】
実施例２
アミノプロピル官能化されたシリカゲルマトリックス（アミノ相）への（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニル−（Ｓ）−β−フェニルアラニン）の共有結合を用いた、キラル固定相の製造
（１）（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンソイル）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニル−（Ｓ）−β−フェニルアラニン）の合成
ａ．（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルの合成
（Ｓ）−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルヒドロクロリド１１．４９ｇを、テトラヒドロフラン１００ｍｌ中に懸濁させ、そして氷浴中で０〜１０℃に冷却する。トリエチルアミン１４ｍｌの添加後、撹拌及び冷却しながら３０分間にわたり、３，５−ジニトロベンゾイルクロリド１１．５２ｇをテトラヒドロフラン４０ｍｌに入れた溶液を添加する。冷却浴を取り去り、反応混合物をさらに１２０分撹拌し、この際に前記反応混合物は室温まで温まってもよい。この反応混合物を濾過し、そして濾液を乾燥するまで濃縮する（生成画分１）。トリエチルアミンヒドロクロリド及びさらなる生成物から成るフィルターケークを酢酸エチル１００ｍｌに取り、そして２０分、３５℃で温浸する（digerieren）。懸濁液を濾過し、そしてフィルターケーキを捨てる。濾液を４０℃で、低減された圧力で乾燥するまで濃縮する（生成画分２）。生成画分を一つにまとめる。収率１６．４ｇ；ＨＰＬＣ純度＞９７Ｆｌ％。さらなる精製のために、未精製生成物を室温で２時間、４００ｍｌの水に温浸し、引き続き濾過する。湿分収率は１５．４ｇ；ＨＰＬＣ純度は９９．８Ｆｌ％である。この生成物を、さらなる精製無しでさらに反応させる。
【００５４】
ｂ．（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸への鹸化
反応ａからの（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸エチルエステル１５．４ｇをテトラヒドロフラン１００ｍｌに溶解させ、生成する溶液に水５０ｍｌを加える。激しく撹拌しながら、少し濁った反応混合物を４５℃に加熱し、そしてｐＨ値を３２％の水酸化ナトリウム水溶液で１３〜１３．５に調整し、反応の推移に対して一定に維持する。反応の終了後（ＨＰＬＣチェック＞９９Ｆｌ％の反応率）、溶液のｐＨ値を６Ｎの塩酸の添加により７〜８に調整し、引き続き有機溶剤を低減された圧力下で留去する。この水溶液を水で３５０ｍｌに希釈し、そして激しく撹拌しながら６Ｎの塩酸でｐＨ値を１〜２に調整する。沈殿する生成物を吸い取り、水で二度洗浄する。低減された圧力下で４０℃での乾燥後、１３．６７ｇという収率が測定される。ＨＰＬＣ純度は９９．８Ｆｌ％である。
【００５５】
ｃ．（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）エステル（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニン（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）エステル）の合成
反応ｂ）からの（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸１２ｇを、テトラヒドロフラン１２０ｍｌに溶解させ、そしてＮ−ヒドロキシスクシンイミド３．９２ｇを加える。氷浴での冷却下、０〜５℃で部分量でジシクロヘキシルカルボジイミド７．１ｇを反応混合物に添加する。完全に添加後、さらに撹拌しながら、溶液が室温に達するまでバッチを氷浴中に置く。反応終了後（ＨＰＬＣチェック ＞９５Ｆｌ％の反応率）、沈殿するジシクロヘキシル尿素を濾別し、そしてテトラヒドロフランで洗浄する。濾液を低減された圧力下で濃縮し、そして残留物を２５０ｍｌの２−プロパノール中で二時間、還流で温浸する。生成物を吸い取り、２−プロパノールで洗浄し、そして低減された圧力下で５０℃で乾燥させる。収率は１３．８７ｇ；ＨＰＬＣ純度は９８．８Ｆｌ％である。
【００５６】
ｄ．（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニル−（Ｓ）−β−フェニルアラニン）への反応
（Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸５．６５ｇを、水７０ｍｌ中に懸濁させ、この懸濁液のｐＨ値を水酸化ナトリウム溶液の添加により、１０．５〜１１に調整し、テトラヒドロフラン７０ｍｌを添加する。バッチを氷浴中で０〜５℃に冷却し、そして撹拌しながら（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）エステル１３ｇを１５分間にわたって部分量で添加する。完全に添加した後、水酸化ナトリウム溶液の添加により、反応混合物のｐＨ値を９〜９．５に維持する。ほぼ完全な反応率（ＨＰＬＣチェック；＜０．５ Ｆｌ％の出発原料）で一定のｐＨ値に達した後、溶液を水で約８００ｍｌに希釈し、４Ｎの塩酸の添加により、ｐＨ値を１．５〜２に調整し、そしてさらに３０分間撹拌する。固体を吸い取り、水で洗浄し、そして低減された圧力下で５０℃で乾燥させる。乾燥された固体を、テトラヒドロフラン２５０ｍｌ中で４０℃で温浸し、懸濁液を冷却し、そして固体（生成画分１）を吸い取る。この母液を４０℃の水浴温度で約７０〜８０ｍｌの体積に凝縮し、生成する懸濁液を室温に冷却し、そして固体（生成画分２）を吸い取る。生成物画分を１つにまとめ、そして低減された圧力下、５０℃で乾燥させる。収率は１１．１ｇ；ＨＰＬＣ純度は９９．５Ｆｌ％である；
【００５７】
（２）アミノプロピル官能化されたシリカゲル相（アミノ相）への（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸の結合
（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸４．７ｇをテトラヒドロフラン１ｌに入れた溶液中に、アミノ相（YMC-GeI Amino NH12S05、粒径５μｍ）５ｇを懸濁させ、そして撹拌しながらこの懸濁液にＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）４ｇを加える。室温で２４時間後に相材料を濾別し、それぞれ１００ｍｌのメタノール及びジエチルエーテルで洗浄し、引き続き乾燥させる。元素分析：Ｃ １２．４４％、Ｈ １．３６％、Ｎ ２．７６％；０．３１２ｍｍｏｌ／ｇの被覆に相応。
【００５８】
２５０×５ｍｍのＨＰＬＣカラムの充填は、３００ｂａｒで、バランス密度法に従って行う（Meyer, Praxis der Hochdruckfluessigkeitschromatographie, Wiley-VCH: Weinheim 2004参照）。
【００５９】
適用例２
実施例２に従って製造された分離カラムもまた、ＨＰＬＣ条件下で多数のβ−アミノ酸若しくはβ−アミノ酸誘導体に適しており、部分的にはモノマーに対して改善された選択性を有する。このことは、ジペプチドセレクターによる様々な分析物の厳密なキラル検出に起因する。
【００６０】
表３に結果がまとめられている。図２が示しているのは、実施例２に従った分離カラムを用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【表３−１】
【表３−２】
【００６１】
実施例３
（３Ｓ）−３−（２−（Ｒ，Ｓ）−ヒドロキシドデシルアミノ）−３−フェニルプロピオン酸によるＲＰ担体材料の動的被覆を用いたキラル固定相の製造
（１）（３Ｓ）−３−（２−（Ｒ，Ｓ）−ヒドロキシドデシルアミノ）−３−フェニルプロピオン酸の合成
メタノール８００ｍｌ中に、ナトリウムメチレート２７．０１ｇ、及び（Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸８２．６ｇを溶解させる。１，２−エポキシドデカン９２ｇを添加後、室温で２０時間、この溶液を撹拌する。引き続き、メタノール性塩酸で溶液のｐＨ値を６に調整し、そして晶出する塩化ナトリウムを濾別する。メタノールの留去後、油状の残留物が残り、これは７００ｍｌのアセトンとの撹拌混合の際に結晶化する。無色の結晶が１５３．４ｇ生じる。
【００６２】
（２）ＲＰ−１８担体材料の動的被覆
（３Ｓ）−３−（２−（Ｒ，Ｓ）−ヒドロキシドデシルアミノ）−３−フェニルプロピオン酸１ｇを、５０ｍｌのメタノールに溶解させ（セレクター溶液）、そして被覆すべき固定相（Kromasil C18、カラム長さ２５０ｍｍ、カラム内径４．６ｍｍ）をメタノールですすぐ。引き続き、再循環させながら、セレクター溶液を１ｍＬ／分の流れで３時間、カラムを介して圧送する。４ｍＬ／分の流速でのメタノールによるすすぎ工程の後、メタノール性の銅（ＩＩ）アセタール飽和溶液を約３０分間、１ｍＬ／分の流れで室温でカラムを介して圧送する。この後、分離カラムはクロマトグラフィー使用のために準備ができている。
【００６３】
適用例３
実施例３に従って修正された分離カラムはリガンド交換形態で、多数のβ−アミノ酸とその誘導体、並びに多数のα−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸のエナンチオマー分離のために適している。
【００６４】
表４に結果がまとめられている。図３が示しているのは、実施例２に従った分離カラムを用いた、様々なβ−アミノ酸の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【表４−１】
【表４−２】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーを分離するためのキラルセレクターとしての、α位で非置換のβ−アミノ酸の使用、並びにα位で非置換のβ−アミノ酸、及びとりわけその誘導体を中心的なキラルセレクターとして含むキラル固定相（ＣＳＰ）、前記固定相の合成、及びこの固定相を用いた、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分離法に関する。
【０００２】
純エナンチオマー物質に対する、及び化学的及び医薬的な適用のための作用物質に対する需要が増大しているため、クロマトグラフィーの分野ではとりわけ、エナンチオマー純度を制御するため、及びラセミ化プロセスの試験のための分析レベルでも、医薬的な品質管理のため、及び薬物動力学的な調査、また、純エナンチオマー化合物の作成のための分取的なレベルでも使用することができる、多数の立体選択性分離技術が発展してきている。
【０００３】
エナンチオマーは、アキラルな環境においてジアステレオマーとは異なり、同一の化学的及び物理的特性を有する。従ってクロマトグラフィーによるエナンチオマー分離は、間接的な手法を用いて、すなわち分析物をキラル誘導体化試薬と反応させてジアステレオマー混合物にすることによって（このジアステレオマー混合物はアキラルな相材料のエナンチオマー混合物とは異なり、分離することができる）、又はいわゆる直接的な手法で、移動相又は固定相へ組み込まれるキラルセレクターを使用して行うことができる。ここで分離性能は、非共有結合の相互作用により分析物とセレクターとの間に形成されるジアステレオマー錯体の様々な安定性に基づく。
【０００４】
直接法も間接法もすでに、様々なクロマトグラフィー法、及び電気泳動法、例えばガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、高性能液体クロマトグラフィー（高速液体クロマトグラフィーとも、ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＤＣ）、超臨界及び亜臨界液体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）、キャピラリー電気クロマトグラフィー（ＣＥ）において、エナンチオマー分離の分野で適用されている（Guebitz und Schmid (Eds.), Methods in Molecular Biology, VoI 243: Chiral Separations: Methods and Protocols, Humana Press Inc: Totowa, NJ: 2004; Guebitz und Schmid, Biopharm. Drug Dispos. 2001 , 22, 291-336）。
【０００５】
分析物の誘導体化とは、不所望の副生成物及び分解生成物の形成、並びに（部分的な）ラセミ化につながり得る、少なくとも１つの付加的な反応工程を意味する。これに加えて分析物中に、誘導体化に適した官能基が存在していなければならず、キラルな誘導体化試薬は高いエナンチオマー純度で利用可能でなければならない（Guebitz und Schmid, Biopharm. Drug Dispos. 2001 , 22, 291-336）。このため現在は、非誘導的な直接クロマトグラフィー法又は電気泳動法が好ましいだろう。
【０００６】
クロマトグラフィーシステム又は電気泳動システムの移動相へのキラルセレクターの添加は、確かに取り扱いが容易なエナンチオマー分離のための手法ではあるものの、非常にコストが高く、かつあらゆる場合で実用的なものではない。
【０００７】
キラルセレクターが共有結合的に、又は吸着的に担体材料に結合されているキラル固定相を使用する直接クロマトグラフィー法は取り扱いが便利であり、キラル相材料の充分な分離性能が前提となるものの、分取的なレベルでも適用可能である。幅広い種類の化合物への適用を可能にするために、キラル固定相の分野では特に、一方でキラル化合物の両方のエナンチオマーの効率的な分離を可能にしながら、他方で充分に柔軟なキラルセレクターが望ましい。
【０００８】
直接法の変法がリガンド交換法（ＬＥ）であり、その基礎となるのは、金属イオン、キラルセレクター、及び分析物（後者２つが金属イオンに対するリガンドとして働く）との間の三種混合錯体の形成である。ここで効果的な分離に対して責任を担うのは、分析物の（Ｒ）若しくは（Ｓ）エナンチオマーとの混合錯体の様々な安定性定数である。リガンド交換則は、一連の上記方法で効果的にエナンチオマー分離に使用することができた：古典的なカラムクロマトグラフィー、高性能液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、及びキャピラリー電気クロマトグラフィーにおいては、一方でキャピラリー電気泳動における電解質に対してキラルセレクターを用い、それに加えてキラル固定相を用いるということであり、この際にこれらの場合でキラルセレクターは共有結合的に、又は吸着的に担体材料に結合されていてよい。
【０００９】
しかしながらキラル分離は今日まで予測されていないので、キラル固定相と移動相の適切な組み合わせを効果的かつ迅速に発見することは、従前通りクロマトグラフィーの大きな挑戦であり(Subramanian, Practical Approach to Chiral Separations by Liquid Chromatography, Wiley-VCH: Weinheim 1994; Guebitz und Schmid (Eds.), Methods in Molecular Biology, VoI 243: Chiral Separations: Methods and Protocols, Humana Press Inc: Totowa, NJ: 2004; Francotte, GIT Labor-Fachzeitschrift 5/2006, 452-455)、集中的な研究により常に新たな、そして改善された相材料につながっている (Laemmerhofer und Lindner, : Separation Methods in Drug Synthesis and Purification, Valko(Ed.), Elsevier: Amsterdam 2000, 337-437)。Armstrong et al., (Anal. Chem. 2001 , 73, 557A-561 A)によれば、２００１年で既に、高性能液体クロマトグラフィー用のものだけでも、様々なセレクターに基づいた１００以上のキラル固定相が市販で得られる。あらゆる製造元は、範囲の広い適用ハンドブックを提供しており、そこでは例えば、脂肪族、芳香族、脂環式、又は複素環式のキラルアミン、アルコール、アミノアルコール、又はα−アミノ酸、及びその誘導体のための多様な分離条件が、ほぼ製品に特有のものだけ、リストに挙げられている。これら多数の市販で得られるキラル固定相は、一方では非常に重要な意味を持つこと、そして分離技術に対する大きな関心を裏付けるものではあるが、キラル固定相を用いた直接クロマトグラフィー法と電気泳動法に今日までつきまとっている大きな欠点を表している：構造的に近縁な構成要素の場合ですら、効率的な分離を達成するためには、一連の（高価な）キラル固定相が必要となることがしばしばである。
【００１０】
そこで独自の試験、また文献の記載が証明しているように、これまでは例えばβ−アミノ酸とその誘導体のキラルクロマトグラフィーのために多数の固定相が必要であり、これらの固定相がガスクロマトグラフィー（ＧＣ）又は液体クロマトグラフィー（例えばＨＰＬＣ）に使用される。従来技術からは例えば、セルロースカルバメート相、アミロース誘導体、クラウンエーテル(Berkecz et al., J. Chromatogr. A, 2006, 1125, 138-143 ; Hyun et al., J. Sep. Sci. 2005, 28, 421-427)、リガンド交換相(Hyun et al., J. Sep. Sci. 2003, 26, 1615-1622; Hyun et al., Biomed. Chromatogr. 2003, 17, 292-296)、又はマクロ環式グリコペプチド相(Sztojkov-Ivanov et al., Chromatographia 2006, 64, 89-94; Illisz et al., J. Sep. Sci. 2006, 29, 1305-1321、及びそこで引用された文献; D' Acquarica et al., Tetrahedron: Asymmetry 2000, 11 , 2375-2385)から公知である。
【００１１】
β−アミノ酸は近年、キー成分としてのその特別な薬理学的特性が原因で、多数のペプチド擬似物、及びさらなる生理活性物質に組み込まれてきた(Kuehl et al., Amino Acids 2005, 29, 89-100)。これに関連して、合成構成要素及び目的生成物のエナンチオマー純度を試験するための分析手法に対する需要がますます高まっており、明らかに過剰量の光学鏡像異性体の存在下でエナンチオマーの痕跡を検出するための微量痕跡測定の分野では、特にそうである(Juaristi und Soloshonok, Enantioselective Synthesis of β-Amino Acids, Wiley-VCH: New York 2005)。
【００１２】
本発明の課題は、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分離のための新規なキラル相の基礎構造に基づいて作成することができる、新規なキラルセレクターを提供することであり、このキラルセレクターは、キラル化合物のエナンチオマーペア、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体をクロマトグラフィー法で、とりわけ高性能液体クロマトグラフィーで効率的かつ可能な限り汎用的に分別することを、分析的及び分取的なレベルで可能にするものである。
【００１３】
完全に意想外なことに、α位で非置換のβ−アミノ酸誘導体は、柔軟であり、その上、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体の分離法における高選択性のキラルセレクターであることが判明した。本発明によるセレクターをエナンチオマー分離のために使用することができるさらなる物質群は例えば、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸である。従って本発明の特別な利点は、α位で非置換のβ−アミノ酸誘導体ベースのキラルセレクターを含むキラル相が、意想外なことに多数の物質群のクロマトグラフィー分離のために汎用的に使用可能であるということである。
【００１４】
従って本発明の対象は、式（Ｉ）
【化１】
［式中、
キラルセレクターがリンカーＸを介して担体材料に結合されれば、
ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、
或いはＸ＝ＯＨであれば、
Ｒ2＝ＣＨ2ＣＨＲ3Ｒ4であり、
ここでＲ3＝Ｈ又はＯＨであり、Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである］
のキラルセレクターの使用である。
【００１５】
本発明によれば前記キラルセレクターは主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在し、その一方で側鎖に潜在的に存在する立体中心が主として絶対配置に存在している必要がない。
【００１６】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル基とは、任意の分岐を有していてよい１〜４個の飽和炭素原子を有する基をいい、好ましいのはメチル基、イソプロピル基、イソブチル基、及びｓ−ブチル基である。
【００１７】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ6〜Ｃ10）アリール基とは、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族基をいい、好ましいのは、フェニル基、並びにさらなる基又は官能基、とりわけフルオロ基、クロロ基、ブロモ基、メチル基及び／又はトリフルオロメチル基でモノ置換、オリゴ置換、ポリ置換又はペル置換されていてもよい１−ナフチル基及び２−ナフチル基、並びにヒドロキシ基及び／又はシアノ基である。
【００１８】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル基とは好ましくは、メチレン基を介して分子に結合された（Ｃ6〜Ｃ10）アリール基をいい、さらに好ましいのはフェニルエチル基とジフェニルメチル基である。
【００１９】
本発明の意味合いにおいて（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル基とは、メチレン基を介して分子に結合されたピリジル基又はインドリル基をいう。
【００２０】
本発明の意味合いにおいてナフチル基とは好ましくは、さらなる置換基に結合されていてよい１−ナフチル又は２−ナフチル基をいう。
【００２１】
好ましくは、Ｒ1＝フェニルであり、特に好ましいのは、Ｒ1＝フェニルであり、かつｎ＝１、又はｎ＝２である実施態様である。好ましくは、さらにＲ4＝フェニルである。
【００２２】
本発明の対象はさらに、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法のための固定相を製造するための、式（Ｉ）で表されるキラルセレクターの使用であり、この際、キラルセレクターは担体材料に対して共有結合的に、又は吸着的にシリカゲル基材又はモノリス基材上に結合される。
【００２３】
式（Ｉ）で表されるキラルセレクター若しくは前記キラルセレクターをベースとするキラル固定相は、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法におけるセレクターとして適している。この際に試料は、エナンチオマー混合物の他にまたさらなる化合物、例えば副生成物及び／又は不純物（これらは後に除去されるべきである）を含んでいてよい。本発明の意味合いにおいてクロマトグラフィー法とは、とりわけ薄層クロマトグラフィー（ＤＣ）、キャピラリー電気クロマトグラフィー（ＣＥＣ）であり、特に好ましいのは高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である。本発明の意味合いにおいてさらなるクロマトグラフィー法とは、マイクロチップへのマイクロ高性能液体クロマトグラフ（μ−ＨＰＬＣ）及びキャピラリー電気クロマトグラフィー（ＣＥＣ）（いわゆるラボオンチップ技術）である。本発明の特別な利点は、キラルセレクターにより、多様な条件下で安定的であり、かつ順相形態（ＮＰ）でも、有機極性形態（ＰＯ）でも、そして逆相形態（ＲＰ）でも稼働させることができる固定相の製造が可能になることである。本発明のさらなる利点は、前記キラルセレクターにより、その高選択性に基づいて、エナンチオマーの微量痕跡測定が可能になることである。
【００２４】
さらに好ましいのは、いわゆるリガンド交換形態でのクロマトグラフィー法であり、この方法は、移動相が正に帯電した金属イオン、好ましくは二価の金属イオン、とりわけ銅（ＩＩ）イオンを含むものである(Davankov, J. Chromatogr. 1971 , 60, 280-283)。リガンド交換形態では、式（Ｉ）に記載のキラルセレクターの吸着的な結合が好ましく、この際にＸ＝ＯＨ、かつＲ2＝ＣＨ2ＣＨＲ3Ｒ4（ここでＲ3＝Ｈ又はＯＨであり、かつＲ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである）である。
【００２５】
本発明はさらに、担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相を利用可能にし、この際に前記キラルセレクターは式
【化２】
［式中、ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、かつ
Ｘが担体材料へのキラルセレクターの共有結合のためのリンカーである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体を含む。
【００２６】
本発明によれば、前記キラルセレクターは主として炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在する。
【００２７】
好ましくは、Ｒ1＝フェニルであり、特に好ましいのは、Ｒ1＝フェニルであり、かつｎ＝１、又はｎ＝２である実施態様である。
【００２８】
リンカーＸは好ましくは、第一級アミノ基を有するアミノアルキルリンカー、特に好ましいのはアミノプロピルリンカーであり、このリンカーを介して前記セレクターがカルボン酸アミドとして担体材料に結合される。この実施態様は、式（ＩＩａ）に表されている。
【化３】
【００２９】
本発明の意味合いにおいて好ましい担体材料は、シリカゲル基材又はモノリス基材上の材料である。
【００３０】
本発明はさらに、式（ＩＩ）又は式（ＩＩａ）のキラルセレクターを含むキラル固定相の製造方法を提供し、この方法は以下の工程：
（ｉａ）α位で非置換のβ−アミノ酸又はこれに相応するβ−アミノ酸エステルを、アセチル化に適した３，５−ジニトロベンゾイル誘導体、好ましくは３，５−ジニトロベンゾイルクロリドによってアセチル化（Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル）する工程、又は
（ｉｂ）α位で非置換のＮ−ナフチル化されたβ−アミノ酸、又はこれに相応するβ−アミノ酸エステル（Ｒ2＝ナフチル）を合成する工程、
（ｉｉ）場合により、エステル官能基を鹸化する工程、
（ｉｉｉ）場合により、α位で非置換のさらなるβ−アミノ酸単位をカップリングする工程、
（ｉｖ）場合によりリンカーを介して、キラルセレクターを担体材料に共有結合させる工程、
を含むものである。一般式（ＩＩ）及び（ＩＩａ）の化合物の製造は例えば、相応するβ−アミノ酸若しくは相応するβ−アミノ酸エステルを、アセチル化に適した３，５−ジニトロベンゾイル誘導体、好ましくは３，５−ジニトロベンゾイルクロリドによってアセチル化（Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル）することによって（Pirke et al.によって刊行された、とりわけα−アミノ酸ベースのキラル相の調製方法に倣って）行うことができる。主としてエナンチオマー形態（Ｒ2＝ナフチル）のα位で非置換のＮ−ナフチル化されたβ−アミノ酸の、又はこれに相応するβ−アミノ酸エステルの合成は例えば、相応するβ−アミノ酸及びナフトールから出発する古典的なブッヘラー反応の変法により（Pirkle及びPochapskyにより刊行された、高エナンチオマー純度のＮ−（２−ナフチル）−２−アミノ酸及びＮ−（２−ナフチル）−２−アミノ酸エステルの製造法（J. Org. Chem. 1986, 51 , 102-105）に倣って）可能である。β−アミノ酸エステルは、β−アミノ酸繰返単位（ｎ＞１）を有するセレクターの構築に必要となり、この構築は例えば、溶液中での古典的なペプチド合成の経路で行うことが出来る。その詳細と代替的な合成経路については、ペプチド合成のための関連公知文献で指摘されている（例えば、Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Band 15/1 und 15/2; M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag 1984）。
【００３１】
本発明はさらに、式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）により表されるキラルセレクター、又は前記キラルセレクターをベースとするキラル固定相を用いた、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のための方法を提供し、この方法は、
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、担体材料及び式（ＩＩ）又は（ＩＩａ）に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）固定相との異なる相互作用に基づき、移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、
（ｉｉｉ）場合により、移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含むものである。この方法は加えて、エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーの微量痕跡測定のために適している。好ましいのは、液体クロマトグラフィー法、とりわけＨＰＬＣ法である。これらの方法は例えば、順相形態（ＮＰ）、極性有機形態（ＰＯ）、又は逆相形態（ＲＰ）において、金属イオンを添加せずに行うことができる。
【００３２】
本発明はさらに、担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相を利用可能にすることであり、この際に前記キラルセレクターは式
【化４】
［式中、Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4−（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2−ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ3＝Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体である。
【００３３】
本発明によれば前記キラルセレクターは主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在し、その一方で２’位に潜在的に存在する立体中心が主として絶対配置に存在している必要がない。
【００３４】
好ましくは、Ｒ1＝フェニルである。
【００３５】
本発明の意味合いにおいてＲ4は好ましくは、短鎖の置換されたフェニル基、特に好ましくは非置換のフェニル基であるか、又は１〜２０個の炭素原子、好ましくは４〜１８個の炭素原子、特に好ましくは６〜１６個の炭素原子、とりわけ１０〜１２個の炭素原子を有する、線状若しくは分枝状のアルキル基であり、特に好ましいのはｎ−デシルである。とりわけ、Ｒ1＝フェニル、かつＲ4＝ｎ−デシルである実施態様が好ましい。
【００３６】
適切な担体材料上への、式（ＩＩＩ）に記載のキラルセレクターの施与は、好ましくは吸着的に、逆相材料（Reversed-Phase材料、ＲＰ材料）をいわゆる動的被覆（dynamische Belegung）することにより、好ましくはシリカゲル又はモノリス基材上に行う。好ましいＲＰ材料は例えば、ＲＰ−２、ＲＰ−４、ＲＰ−５、ＲＰ−６、ＲＰ−８、ＲＰ−１２、及びとりわけＲＰ−１８である。
【００３７】
本発明はさらに、式（ＩＩＩ）に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相の製造方法を提供し、この方法は以下の工程：以下の工程を含む、Ｎ−アルキル化されたアミノ酸の調製、請求項１５から２２までのいずれか１項に記載のキラル固定相の製造方法：
（ｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を調製する工程、
（ｉｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を担体材料に吸着結合させる工程、
を含むものである。
【００３８】
一般式（ＩＩＩ）の化合物の製造は例えば、等モル量の強塩基、例えばナトリウムメチレートを用いて、相応するエポキシド化合物と、その都度のβ−アミノ酸との反応により行うことができる（Busker et al., DE 3 143 726 A1）。このことは、２’−炭素原子に対するラセミ配置につながる。式（ＩＩＩ）のキラルセレクターを調製するための代替的な方法は、相応するβ−アミノ酸を、ｎ−アルキルブロミドでＮ−アルキル化することである（例えばDavankov et al., Chromatographia 1980, 13, 677-685に記載）。
【００３９】
好ましいのはさらに、分析的な、半分取的な、又は分取的なレベルにおいて、式（ＩＩＩ）で表されたキラルセレクター又は前記キラルセレクターをベースとするキラル固定相を用い、とりわけリガンド交換形態（ＬＥ）で、金属イオン、好ましくは二価の金属イオン、特に好ましくは銅（ＩＩ）イオンが添加される、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法である。このような方法は、
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、式（ＩＩＩ）に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）キラルセレクターとの異なる相互作用に基づき、二価の遷移金属イオン、好ましくは銅（ＩＩ）イオンを含む移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、及び
（ｉｉｉ）分取的、又は半分取的液体クロマトグラフィー適用の場合には、場合により移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含む。この方法は加えて、エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーの微量痕跡測定のために適している。
【００４０】
本発明の意味合いにおいてクロマトグラフィー分離とは、分析目的のために分離された物質を以後単離することなく、また半分取的な又は分取的な目的のためにクロマトグラフィーシステム（担体材料、移動相）の成分及び試料中に含まれている他の物質から分離された成分を以後分離しても行われる、キラル固定相を用いた、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー混合物、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分別をいう。
【００４１】
本発明の意味合いにおいて、主として絶対配置にとは、５０％超、好ましくは少なくとも９０％超、とりわけ少なくとも９５％超が光学活性のエナンチオマー形態であり、特に好ましくは純エナンチオマー形態である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】実施例１に記載のキラル固定相を用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割（chromatographische Aufloesung）である。
【図２】実施例２に記載のキラル固定相を用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【図３】実施例３に記載のキラル固定相を用いた、様々なα−及びβ−アミノ酸、並びにα−ヒドロキシ酸の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【図４】エナンチオマー純度を測定するため、とりわけ微量痕跡測定の分野での、実施例２に従ったキラル固定相の使用である。
【００４３】
上のクロマトグラムが示しているのは、実施例２に記載のキラル固定相を用いた、（Ｒ）−及び（Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸のラセミ体混合物のクロマトグフラフィー分割である。中央にあるのは、前記相を用いた、純粋な（Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸のクロマトグラムである。下のクロマトグラムが示しているのは、（Ｒ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸を１％増加させた、（Ｓ）−３−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸の分割である。
【００４４】
すでに従来技術で言及されているように、多数のキラルセレクター、及び前記キラルセレクターをベースとする固定相は公知である。従って例えば、高性能液体グラフィーを用いてβ−アミノ酸とその誘導体を分離するために、これまでクラウンエーテル、α−アミノ酸誘導体、又はマクロ環式グリコペプチドをベースとするキラルセレクターが適用されている。表１には、従来技術より公知のエナンチオマーのβ−アミノ酸を分離するための様々なクロマトグラフィー法がまとめられており、本発明の教示により達成することができる結果が対比されている。分離カラムの同定は、通常の方法（例えばMeyer, Praxis der Hochdruckfluessigkeitschromatographie, Wiley-VCH Weinheim 2004に記載の方法）で、キャパシティ係数ｋ1及びｋ2によって、分離係数α、及び分割Ｒsにより行う。正確なクロマトグラフ条件は、各オリジナル文献から読み取ることができる。
【００４５】
表１：キラル固定相を用いた、一般式Ｈ2Ｎ−ＣＨＲ1−ＣＨ2−ＣＯ2Ｈのβ−アミノ酸のエナンチオマー混合物のクロマトグラフィー分離
【表１−１】
【表１−２】
【００４６】
表１から明らかなように、本発明によるセレクター、及び前記セレクターをベースとする固定相は、従来技術より公知のセレクターよりも分離性能の点で極めて有利であり、分離係数α、及びエナンチオマーＲsの分割により、特に半分取的な、及び分取的な適用という観点でも同定することができる。これに加えてこれらは、幅広い適用可能性を示す；ここでは、表２〜４に示す結果を指摘しておく。
【００４７】
さらには従来技術から、α−アミノ酸をベースとし、式（ＩＩ）で表されるセレクターに対して一定の類似性を有するキラルセレクターは公知である（Welch, J. Chromatogr. A 1994, 3-26）。しかしながら、そこに記載されたキラルセレクターは、α位で非置換のβ−アミノ酸誘導体ではない。従来技術において、それどころか多様な情報源に記載されているように、キラル検出に関与する官能基間の距離がより大きくなること、及びセレクターの立体配座柔軟性がより高度になること（これらのことは、本発明によるセレクターの場合には付加的なメチレン基に基づき、α−アミノ酸と比較して、又はα位で置換されたβ−アミノ酸と比較して生じる）は、分離性能に対して否定的に作用するのである（とりわけ、Pirkle und McCune, J. Chromatogr. 1988, 441 , 311 ; Wang et al., Anal. Chem. 2000, 72, 5459-5465; Welch, J. Chromatogr. A 1994, 3-26参照）。
【００４８】
実施例
以下の実施例は、本発明をより詳しく説明するものだが、いかなる場合であっても本発明を制限するものではない。
【００４９】
実施例１
アミノプロピル官能化されたシリカゲルマトリックス（アミノ相）への（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸の共有結合を用いた、キラル固定相の製造
（１）（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸の合成
（Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸（（Ｓ）−β−フェニルアラニン）１６ｇに、５％の水酸化ナトリウム水溶液８０ｍｌを加え、そして生成する溶液を５０％の水酸化ナトリウム水溶液を添加してｐＨ値を１１〜１２に調整する。テトラヒドロフラン２０ｍｌの添加後、反応混合物を１０℃に冷却し、ジニトロベンゾイルクロリド２３．１ｇをテトラヒドロフラン６０ｍｌに入れた溶液を６０分にわたって添加し、そして反応混合物をさらに６０分撹拌する。その後、有機相を蒸留により除去し、残っている水相をメチル−ｔ−ブチルエーテルで二度抽出する。この水相に酢酸エチル２００ｍｌを添加し、そして４Ｎの塩酸を添加することにより、ｐＨ値を１〜２に調整する。これらの相を分離し、そしてこの有機相を飽和食塩溶液２００ｍｌで洗浄する。４５℃、ｐ＝１５０ｍｂａｒで溶剤を留去した後、残留物をシクロヘキサン３００ｍｌに取る。生成物を濾別し、４０℃で乾燥させる。生成物のさらなる精製は、分取高性能液体クロマトグラフィーを用いて、逆相材料（例えばKromasil RP-18、粒径１０μｍ）で、アセトニトリル／水／トリフルオロ酢酸の溶剤混合物中で行う。収率：８．０ｇ、ＨＰＬＣ純度 ９９．８Ｆｌ％；元素分析：
【００５０】
（２）アミノプロピル官能化されたシリカゲル相（アミノ相）への（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸の結合
（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸４ｇをテトラヒドロフラン２００ｍｌに入れた溶液中に、アミノ相（YMC-GeI Amino NH12S05、粒径５μｍ）４．１ｇを懸濁させ、そして撹拌しながらこの反応混合物にＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）３．２ｇを加える。室温で８時間後に相材料を濾別し、それぞれ５０ｍｌのメタノール及びジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させる。収率：所望の担体材料４．６ｇ、元素分析：Ｃ １０．６％、Ｈ １．２％、Ｎ ２．４％；０．４ｍｍｏｌ／ｇの被覆に相応。
【００５１】
２５０×５ｍｍのＨＰＬＣカラムの充填は、３００ｂａｒで、バランス密度法（Balanced density-Methode）に従って行う（Meyer, Praxis der Hochdruckfluessigkeits-chromatographie, Wiley-VCH: Weinheim 2004参照）。
【００５２】
適用例１
実施例１に従って製造された分離カラムは、ＨＰＬＣ条件下で多数のβ−アミノ酸若しくはβ−アミノ酸誘導体のクロマトグラフィーに適している（表２）。図１が示しているのは、実施例１に従った分離カラムを用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【表２−１】
【表２−２】
【００５３】
実施例２
アミノプロピル官能化されたシリカゲルマトリックス（アミノ相）への（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニル−（Ｓ）−β−フェニルアラニン）の共有結合を用いた、キラル固定相の製造
（１）（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンソイル）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニル−（Ｓ）−β−フェニルアラニン）の合成
ａ．（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルの合成
（Ｓ）−３−フェニルプロピオン酸エチルエステルヒドロクロリド１１．４９ｇを、テトラヒドロフラン１００ｍｌ中に懸濁させ、そして氷浴中で０〜１０℃に冷却する。トリエチルアミン１４ｍｌの添加後、撹拌及び冷却しながら３０分間にわたり、３，５−ジニトロベンゾイルクロリド１１．５２ｇをテトラヒドロフラン４０ｍｌに入れた溶液を添加する。冷却浴を取り去り、反応混合物をさらに１２０分撹拌し、この際に前記反応混合物は室温まで温まってもよい。この反応混合物を濾過し、そして濾液を乾燥するまで濃縮する（生成画分１）。トリエチルアミンヒドロクロリド及びさらなる生成物から成るフィルターケークを酢酸エチル１００ｍｌに取り、そして２０分、３５℃で温浸する（digerieren）。懸濁液を濾過し、そしてフィルターケーキを捨てる。濾液を４０℃で、低減された圧力で乾燥するまで濃縮する（生成画分２）。生成画分を一つにまとめる。収率１６．４ｇ；ＨＰＬＣ純度＞９７Ｆｌ％。さらなる精製のために、未精製生成物を室温で２時間、４００ｍｌの水に温浸し、引き続き濾過する。湿分収率は１５．４ｇ；ＨＰＬＣ純度は９９．８Ｆｌ％である。この生成物を、さらなる精製無しでさらに反応させる。
【００５４】
ｂ．（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸への鹸化
反応ａからの（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸エチルエステル１５．４ｇをテトラヒドロフラン１００ｍｌに溶解させ、生成する溶液に水５０ｍｌを加える。激しく撹拌しながら、少し濁った反応混合物を４５℃に加熱し、そしてｐＨ値を３２％の水酸化ナトリウム水溶液で１３〜１３．５に調整し、反応の推移に対して一定に維持する。反応の終了後（ＨＰＬＣチェック＞９９Ｆｌ％の反応率）、溶液のｐＨ値を６Ｎの塩酸の添加により７〜８に調整し、引き続き有機溶剤を低減された圧力下で留去する。この水溶液を水で３５０ｍｌに希釈し、そして激しく撹拌しながら６Ｎの塩酸でｐＨ値を１〜２に調整する。沈殿する生成物を吸い取り、水で二度洗浄する。低減された圧力下で４０℃での乾燥後、１３．６７ｇという収率が測定される。ＨＰＬＣ純度は９９．８Ｆｌ％である。
【００５５】
ｃ．（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）エステル（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニン（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）エステル）の合成
反応ｂ）からの（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸１２ｇを、テトラヒドロフラン１２０ｍｌに溶解させ、そしてＮ−ヒドロキシスクシンイミド３．９２ｇを加える。氷浴での冷却下、０〜５℃で部分量でジシクロヘキシルカルボジイミド７．１ｇを反応混合物に添加する。完全に添加後、さらに撹拌しながら、溶液が室温に達するまでバッチを氷浴中に置く。反応終了後（ＨＰＬＣチェック ＞９５Ｆｌ％の反応率）、沈殿するジシクロヘキシル尿素を濾別し、そしてテトラヒドロフランで洗浄する。濾液を低減された圧力下で濃縮し、そして残留物を２５０ｍｌの２−プロパノール中で二時間、還流で温浸する。生成物を吸い取り、２−プロパノールで洗浄し、そして低減された圧力下で５０℃で乾燥させる。収率は１３．８７ｇ；ＨＰＬＣ純度は９８．８Ｆｌ％である。
【００５６】
ｄ．（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸（３−（３，５−ジニトロベンゾイル）−（Ｓ）−β−フェニルアラニル−（Ｓ）−β−フェニルアラニン）への反応
（Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸５．６５ｇを、水７０ｍｌ中に懸濁させ、この懸濁液のｐＨ値を水酸化ナトリウム溶液の添加により、１０．５〜１１に調整し、テトラヒドロフラン７０ｍｌを添加する。バッチを氷浴中で０〜５℃に冷却し、そして撹拌しながら（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロピオン酸（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）エステル１３ｇを１５分間にわたって部分量で添加する。完全に添加した後、水酸化ナトリウム溶液の添加により、反応混合物のｐＨ値を９〜９．５に維持する。ほぼ完全な反応率（ＨＰＬＣチェック；＜０．５ Ｆｌ％の出発原料）で一定のｐＨ値に達した後、溶液を水で約８００ｍｌに希釈し、４Ｎの塩酸の添加により、ｐＨ値を１．５〜２に調整し、そしてさらに３０分間撹拌する。固体を吸い取り、水で洗浄し、そして低減された圧力下で５０℃で乾燥させる。乾燥された固体を、テトラヒドロフラン２５０ｍｌ中で４０℃で温浸し、懸濁液を冷却し、そして固体（生成画分１）を吸い取る。この母液を４０℃の水浴温度で約７０〜８０ｍｌの体積に凝縮し、生成する懸濁液を室温に冷却し、そして固体（生成画分２）を吸い取る。生成物画分を１つにまとめ、そして低減された圧力下、５０℃で乾燥させる。収率は１１．１ｇ；ＨＰＬＣ純度は９９．５Ｆｌ％である；
【００５７】
（２）アミノプロピル官能化されたシリカゲル相（アミノ相）への（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸の結合
（Ｓ）−３−［（Ｓ）−３−（３，５−ジニトロベンゾアミド）−３−フェニルプロパンアミド］−３−フェニルプロピオン酸４．７ｇをテトラヒドロフラン１ｌに入れた溶液中に、アミノ相（YMC-GeI Amino NH12S05、粒径５μｍ）５ｇを懸濁させ、そして撹拌しながらこの懸濁液にＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）４ｇを加える。室温で２４時間後に相材料を濾別し、それぞれ１００ｍｌのメタノール及びジエチルエーテルで洗浄し、引き続き乾燥させる。元素分析：Ｃ １２．４４％、Ｈ １．３６％、Ｎ ２．７６％；０．３１２ｍｍｏｌ／ｇの被覆に相応。
【００５８】
２５０×５ｍｍのＨＰＬＣカラムの充填は、３００ｂａｒで、バランス密度法に従って行う（Meyer, Praxis der Hochdruckfluessigkeitschromatographie, Wiley-VCH: Weinheim 2004参照）。
【００５９】
適用例２
実施例２に従って製造された分離カラムもまた、ＨＰＬＣ条件下で多数のβ−アミノ酸若しくはβ−アミノ酸誘導体に適しており、部分的にはモノマーに対して改善された選択性を有する。このことは、ジペプチドセレクターによる様々な分析物の厳密なキラル検出に起因する。
【００６０】
表３に結果がまとめられている。図２が示しているのは、実施例２に従った分離カラムを用いた、様々なβ−アミノ酸誘導体の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【表３−１】
【表３−２】
【００６１】
実施例３
（３Ｓ）−３−（２−（Ｒ，Ｓ）−ヒドロキシドデシルアミノ）−３−フェニルプロピオン酸によるＲＰ担体材料の動的被覆を用いたキラル固定相の製造
（１）（３Ｓ）−３−（２−（Ｒ，Ｓ）−ヒドロキシドデシルアミノ）−３−フェニルプロピオン酸の合成
メタノール８００ｍｌ中に、ナトリウムメチレート２７．０１ｇ、及び（Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸８２．６ｇを溶解させる。１，２−エポキシドデカン９２ｇを添加後、室温で２０時間、この溶液を撹拌する。引き続き、メタノール性塩酸で溶液のｐＨ値を６に調整し、そして晶出する塩化ナトリウムを濾別する。メタノールの留去後、油状の残留物が残り、これは７００ｍｌのアセトンとの撹拌混合の際に結晶化する。無色の結晶が１５３．４ｇ生じる。
【００６２】
（２）ＲＰ−１８担体材料の動的被覆
（３Ｓ）−３−（２−（Ｒ，Ｓ）−ヒドロキシドデシルアミノ）−３−フェニルプロピオン酸１ｇを、５０ｍｌのメタノールに溶解させ（セレクター溶液）、そして被覆すべき固定相（Kromasil C18、カラム長さ２５０ｍｍ、カラム内径４．６ｍｍ）をメタノールですすぐ。引き続き、再循環させながら、セレクター溶液を１ｍＬ／分の流れで３時間、カラムを介して圧送する。４ｍＬ／分の流速でのメタノールによるすすぎ工程の後、メタノール性の銅（ＩＩ）アセタール飽和溶液を約３０分間、１ｍＬ／分の流れで室温でカラムを介して圧送する。この後、分離カラムはクロマトグラフィー使用のために準備ができている。
【００６３】
適用例３
実施例３に従って修正された分離カラムはリガンド交換形態で、多数のβ−アミノ酸とその誘導体、並びに多数のα−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸のエナンチオマー分離のために適している。
【００６４】
表４に結果がまとめられている。図３が示しているのは、実施例２に従った分離カラムを用いた、様々なβ−アミノ酸の光学異性体のクロマトグラフィー分割である。
【表４−１】
【表４−２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分離法におけるキラルセレクターとしての、式
【化１】
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体の使用において、
Ｘが担体材料への共有結合のためのリンカーであれば、
ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、
或いはＸ＝ＯＨであれば、
Ｒ2＝ＣＨ2ＣＨＲ3Ｒ4であり、
ここでＲ3＝Ｈ又はＯＨであり、Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである
ことを特徴とする、前記β−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項２】
前記キラルセレクターが主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在することを特徴とする、請求項１に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項３】
Ｒ1＝フェニルであることを特徴とする、請求項１又は２に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項４】
Ｒ4＝（Ｃ8〜Ｃ18）アルキル、好ましくは（Ｃ6〜Ｃ16）アルキル、とりわけ（Ｃ10〜Ｃ12）アルキル、及び特に好ましくはＲ4＝ｎ−デシルであることを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項５】
Ｒ4＝フェニルであり、ｎ＝１であることを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項６】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法のための固定相を製造するための、請求項１から５までのいずれか１項に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用において、前記キラルセレクターが担体材料に対して共有結合で、又は吸着的にシリカゲル基材上、又はモノリス基材上に結合されることを特徴とする、前記β−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項７】
担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相において、
前記キラルセレクターが、式
【化２】
［式中、
ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１、又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4−（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2−ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、
Ｘは担体材料への共有結合のためのリンカーである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体を含むことを特徴とする、前記キラル固定相。
【請求項８】
前記キラルセレクターが主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在することを特徴とする、請求項７に記載のキラル固定相。
【請求項９】
Ｒ1＝フェニルであることを特徴とする、請求項７又は８に記載のキラル固定相。
【請求項１０】
Ｘがアミノアルキルリンカー、好ましくはアミノプロピルリンカーであり、かつ前記キラルセレクターがカルボン酸アミドとして担体材料に結合されていることを特徴とする、請求項７から９までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項１１】
前記担体材料が、シリカゲル相又はモノリス相であることを特徴とする、請求項７から１０までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項１２】
請求項７から１１までのいずれか１項に記載のキラル固定相の製造方法であって、以下の工程：
（ｉａ）α位で非置換のβ−アミノ酸又はこれに相応するβ−アミノ酸エステルを、アセチル化に適した３，５−ジニトロベンゾイル誘導体、好ましくは３，５−ジニトロベンゾイルクロリドによってアセチル化（Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル）する工程、又は
（ｉｂ）α位で非置換のＮ−ナフチル化されたβ−アミノ酸、又はこれに相応するβ−アミノ酸エステル（Ｒ2＝ナフチル）を合成する工程、
（ｉｉ）場合により、エステル官能基を鹸化する工程、
（ｉｉｉ）場合により、α位で非置換のさらなるβ−アミノ酸単位をカップリングする工程、
（ｉｖ）場合によりリンカーを介して、キラルセレクターを担体材料に共有結合させる工程、
を含む、前記製造方法。
【請求項１３】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法であって、以下の工程：
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、請求項７から１１までのいずれか１項に記載のキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）固定相との異なる相互作用に基づき、移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、
（ｉｉｉ）場合により、移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含む、前記方法。
【請求項１４】
エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーを微量痕跡測定するための、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
液体クロマトグラフィー法、好ましくはＨＰＬＣ法であることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相において、
前記キラルセレクターが、式
【化３】
［式中、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4−（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2−ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣＮＨＮＨ2であり、
Ｒ3＝Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体であることを特徴とする、前記キラル固定相。
【請求項１７】
前記キラルセレクターが主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在し、その一方で２’位に潜在的に存在する立体中心が主として絶対配置に存在している必要がないことを特徴とする、請求項１６に記載のキラル固定相。
【請求項１８】
Ｒ1＝フェニルであることを特徴とする、請求項１６又は１７に記載のキラル固定相。
【請求項１９】
Ｒ4＝（Ｃ4〜Ｃ18）アルキル、好ましくは（Ｃ6〜Ｃ16）アルキル、とりわけ（Ｃ10〜Ｃ12）アルキル、及び特に好ましくはＲ4＝ｎ−デシルであることを特徴とする、請求項１６から１８までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項２０】
Ｒ4＝フェニルであることを特徴とする、請求項１６から１８までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項２１】
前記キラルセレクターが、担体材料に対して吸着的にシリカゲル基材上、又はモノリス基材上に結合されていることを特徴とする、請求項１６から２０までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項２２】
前記担体材料が逆相材料であることを特徴とする、請求項２１に記載のキラル固定相。
【請求項２３】
前記担体材料が、ＲＰ−２、ＲＰ−４、ＲＰ−５、ＲＰ−６、ＲＰ−８、ＲＰ−１２、及びとりわけＲＰ−１８の相を含む群から選択されていることを特徴とする、請求項２２に記載のキラル固定相。
【請求項２４】
以下の工程：
（ｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を調製する工程、
（ｉｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を担体材料に吸着結合させる工程、
を含む、請求項１６から２３のいずれか１項に記載のキラル固定相の製造方法。
【請求項２５】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法であって、以下の工程：
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、請求項１６から２３までのいずれか１項に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）キラルセレクターとの異なる相互作用に基づき、二価の遷移金属イオン、好ましくは銅（ＩＩ）イオンを含む移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、
（ｉｉｉ）場合により、移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含む、前記方法。
【請求項２６】
エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーを微量痕跡測定するための、請求項２５に記載の方法。
【請求項１】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーの分離法におけるキラルセレクターとしての、式
【化１】
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体の使用において、
Ｘが担体材料への共有結合のためのリンカーであれば、
ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、
或いはＸ＝ＯＨであれば、
Ｒ2＝ＣＨ2ＣＨＲ3Ｒ4であり、
ここでＲ3＝Ｈ又はＯＨであり、Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである
ことを特徴とする、前記β−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項２】
前記キラルセレクターが主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在することを特徴とする、請求項１に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項３】
Ｒ1＝フェニルであることを特徴とする、請求項１又は２に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項４】
Ｒ4＝（Ｃ8〜Ｃ18）アルキル、好ましくは（Ｃ6〜Ｃ16）アルキル、とりわけ（Ｃ10〜Ｃ12）アルキル、及び特に好ましくはＲ4＝ｎ−デシルであることを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項５】
Ｒ4＝フェニルであり、ｎ＝１であることを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項６】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法のための固定相を製造するための、請求項１から５までのいずれか１項に記載のβ−アミノ酸誘導体の使用において、前記キラルセレクターが担体材料に対して共有結合で、又は吸着的にシリカゲル基材上、又はモノリス基材上に結合されることを特徴とする、前記β−アミノ酸誘導体の使用。
【請求項７】
担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相において、
前記キラルセレクターが、式
【化２】
［式中、
ｎ＝１〜５、好ましくはｎ＝１、又はｎ＝２であり、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4−（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2−ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2であり、
Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル、又はナフチルであり、
Ｘは担体材料への共有結合のためのリンカーである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体を含むことを特徴とする、前記キラル固定相。
【請求項８】
前記キラルセレクターが主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在することを特徴とする、請求項７に記載のキラル固定相。
【請求項９】
Ｒ1＝フェニルであることを特徴とする、請求項７又は８に記載のキラル固定相。
【請求項１０】
Ｘがアミノアルキルリンカー、好ましくはアミノプロピルリンカーであり、かつ前記キラルセレクターがカルボン酸アミドとして担体材料に結合されていることを特徴とする、請求項７から９までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項１１】
前記担体材料が、シリカゲル相又はモノリス相であることを特徴とする、請求項７から１０までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項１２】
請求項７から１１までのいずれか１項に記載のキラル固定相の製造方法であって、以下の工程：
（ｉａ）α位で非置換のβ−アミノ酸又はこれに相応するβ−アミノ酸エステルを、アセチル化に適した３，５−ジニトロベンゾイル誘導体、好ましくは３，５−ジニトロベンゾイルクロリドによってアセチル化（Ｒ2＝３，５−ジニトロベンゾイル）する工程、又は
（ｉｂ）α位で非置換のＮ−ナフチル化されたβ−アミノ酸、又はこれに相応するβ−アミノ酸エステル（Ｒ2＝ナフチル）を合成する工程、
（ｉｉ）場合により、エステル官能基を鹸化する工程、
（ｉｉｉ）場合により、α位で非置換のさらなるβ−アミノ酸単位をカップリングする工程、
（ｉｖ）場合によりリンカーを介して、キラルセレクターを担体材料に共有結合させる工程、
を含む、前記製造方法。
【請求項１３】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法であって、以下の工程：
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、請求項７から１１までのいずれか１項に記載のキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）固定相との異なる相互作用に基づき、移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、
（ｉｉｉ）場合により、移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含む、前記方法。
【請求項１４】
エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーを微量痕跡測定するための、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
液体クロマトグラフィー法、好ましくはＨＰＬＣ法であることを特徴とする、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
担体材料及びキラルセレクターを含む、物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離のためのキラル固定相において、
前記キラルセレクターが、式
【化３】
［式中、
Ｒ1＝（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキル、（Ｃ7〜Ｃ10）ヘテロアラルキル、ピリジル、ヒドロキシメチル、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3、ＣＨ2ＣＯＮＨ2、ＣＨ2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）2ＣＯＮＨ2、（ＣＨ2）2ＣＯＯＨ、（ＣＨ2）4−（ＮＨ）2、（ＣＨ2）2−ＳＣＨ3、又は（ＣＨ2）3ＮＨＣＮＨＮＨ2であり、
Ｒ3＝Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ4＝（Ｃ1〜Ｃ20）アルキル、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、又は（Ｃ7〜Ｃ13）アラルキルである］
のα位で非置換のβ−アミノ酸誘導体であることを特徴とする、前記キラル固定相。
【請求項１７】
前記キラルセレクターが主として、炭素原子Ｃ−３（β−炭素原子）に対して絶対配置に存在し、その一方で２’位に潜在的に存在する立体中心が主として絶対配置に存在している必要がないことを特徴とする、請求項１６に記載のキラル固定相。
【請求項１８】
Ｒ1＝フェニルであることを特徴とする、請求項１６又は１７に記載のキラル固定相。
【請求項１９】
Ｒ4＝（Ｃ4〜Ｃ18）アルキル、好ましくは（Ｃ6〜Ｃ16）アルキル、とりわけ（Ｃ10〜Ｃ12）アルキル、及び特に好ましくはＲ4＝ｎ−デシルであることを特徴とする、請求項１６から１８までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項２０】
Ｒ4＝フェニルであることを特徴とする、請求項１６から１８までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項２１】
前記キラルセレクターが、担体材料に対して吸着的にシリカゲル基材上、又はモノリス基材上に結合されていることを特徴とする、請求項１６から２０までのいずれか１項に記載のキラル固定相。
【請求項２２】
前記担体材料が逆相材料であることを特徴とする、請求項２１に記載のキラル固定相。
【請求項２３】
前記担体材料が、ＲＰ−２、ＲＰ−４、ＲＰ−５、ＲＰ−６、ＲＰ−８、ＲＰ−１２、及びとりわけＲＰ−１８の相を含む群から選択されていることを特徴とする、請求項２２に記載のキラル固定相。
【請求項２４】
以下の工程：
（ｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を調製する工程、
（ｉｉ）Ｎ−アルキル化されたアミノ酸を担体材料に吸着結合させる工程、
を含む、請求項１６から２３のいずれか１項に記載のキラル固定相の製造方法。
【請求項２５】
物質混合物、好ましくはキラル物質の混合物、特に好ましくはエナンチオマー、とりわけβ−アミノ酸とその誘導体、α−アミノ酸及びα−ヒドロキシ酸を含む群から選択される物質のエナンチオマーのクロマトグラフィー分離法であって、以下の工程：
（ｉ）分離すべき物質混合物の溶液を、請求項１６から２３までのいずれか１項に記載のキラルセレクターを含むキラル固定相と接触させる工程、
（ｉｉ）キラルセレクターとの異なる相互作用に基づき、二価の遷移金属イオン、好ましくは銅（ＩＩ）イオンを含む移動相を用いて物質混合物の個々の成分を分別する工程、
（ｉｉｉ）場合により、移動相を分別収集し、クロマトグラフィー精製した物質をそこから単離する工程、
を含む、前記方法。
【請求項２６】
エナンチオマー、好ましくはα−及びβ−アミノ酸のエナンチオマーを微量痕跡測定するための、請求項２５に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２０１１−５１６４１３（Ｐ２０１１−５１６４１３Ａ）
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５５０１１１（Ｐ２０１０−５５０１１１）
【出願日】平成２１年２月１６日（２００９．２．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５１７４５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１１２３２５
【国際公開日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【出願人】（５０１０７３８６２）エボニック デグサ ゲーエムベーハー (837)
【氏名又は名称原語表記】Ｅｖｏｎｉｋ Ｄｅｇｕｓｓａ ＧｍｂＨ
【住所又は居所原語表記】Ｒｅｌｌｉｎｇｈａｕｓｅｒ Ｓｔｒａｓｓｅ １−１１， Ｄ−４５１２８ Ｅｓｓｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月１６日（２００９．２．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５１７４５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１１２３２５
【国際公開日】平成２１年９月１７日（２００９．９．１７）
【出願人】（５０１０７３８６２）エボニック デグサ ゲーエムベーハー (837)
【氏名又は名称原語表記】Ｅｖｏｎｉｋ Ｄｅｇｕｓｓａ ＧｍｂＨ
【住所又は居所原語表記】Ｒｅｌｌｉｎｇｈａｕｓｅｒ Ｓｔｒａｓｓｅ １−１１， Ｄ−４５１２８ Ｅｓｓｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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