新規の生物活性ペプチドをコードする単一のエキソン遺伝子
本発明は、新規の生物活性ペプチドホルモン、それらの製造方法、および、それらの使用に関する。本発明は、薬物、例えば治療用ポリペプチド、関連する標的（例えばＧＰＣＲ）または薬物介入のための標的を発見するためのリガンドとして用いることができる新規の生物活性ペプチド前駆体およびそれらの塩を同定した。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の生物活性ペプチドホルモン、それらの製造方法、および、それらの使用に関する。本発明は、薬物、例えば治療用ポリペプチド、関連する標的（例えばＧＰＣＲ）または薬物介入のための標的を発見するためのリガンドとして用いることができる新規の生物活性ペプチド前駆体およびそれらの塩を同定した。
【０００２】
本発明は、新規の生物活性ペプチドホルモン、それらの製造方法、および、それらの使用に関する。より具体的には、本発明は、治療用ポリペプチド、薬物介入のための標的、関連する標的（例えば、ＧＰＣＲの脱オーファン化（ｄｅｏｒｐｈａｎｉｎｇ））を発見するためのリガンド、または、病気をモニターするためのバイオマーカーとして用いることができる前駆タンパク質から誘導された生物活性ペプチドホルモンの同定方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
多くの生物学的に活性なペプチドは、増殖の刺激、増殖の阻害、または、重要な代謝経路の調節のいずれかによって健康状態および病気の両方に深刻な作用を示す。
【０００４】
ペプチドホルモンは、分泌線、ニューロン、腸、脳などの様々な細胞型および臓器中で前駆体として生産される。ペプチドホルモンは、最初により大きい前駆体またはプロホルモンとして合成され、輸送中にＥＲおよびゴルジスタックを介して多数の翻訳後修飾を受ける可能性がある。続いてこれらは加工され、それらの最終目的地に輸送されて、活性物質（第一のメッセンジャー）として細胞表面受容体に結合することによって細胞の反応を開始させる。これらは、例えば糖尿病（インスリン）、血圧調節（アンギオテンシン）、貧血（エリスロポイエチン−α）、多発性硬化症（インターフェロン−β）などの生物医学的な調査の様々な分野に関連する生理学的プロセスにおいて主要な役割を果たす。
【０００５】
近年のヒトゲノムの配列解析により約３０,０００種の遺伝子が解明されているが、これは、ヒトの生物学的プロセスの複雑さから予想された数よりもかなり少ない。これらの遺伝子の翻訳前の選択的スプライシングによって、２００,０００種もの一次転写物が生成する可能性がある。これらの遺伝子によってコードされたタンパク質産物が翻訳後修飾を受けることによって、機能の多様性を説明するのに求められるさらなる複雑さを示すことが現在広く認められている。
【０００６】
遺伝子の発見は、典型的には計算生物学の分野に関わるものである、この計算生物学は、生物学的に機能的な配列ストレッチ、一般的にはゲノムＤＮＡをアルゴリズムで同定することに関する。これは、特にタンパク質をコードする遺伝子を含むが、ＲＮＡ遺伝子および調節領域のような他の機能的な構成要素を含んでいてもよい。種のゲノムが配列解析されたら、それらゲノムを理解することにおける最初の最も重要な工程の１つは、遺伝子の発見である。
【０００７】
外因性の遺伝子を発見するシステムにおいて、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはタンパク質産物の既知の配列の形態で、外的証拠に類似した配列に関して標的ゲノムが検索される。ｍＲＮＡ配列の場合、転写されるはずの固有のゲノムＤＮＡ配列を誘導することが重要である。タンパク質配列の場合、可能性のあるＤＮＡコーディング配列群は、遺伝子コードの逆翻訳により誘導することができる。ひとたび候補ＤＮＡ配列が決定されたら、マッチング、完全または部分的、および、正確または不正確さについて標的ゲノムを効率的に検索できるかどうかは、アルゴリズムにかかっている。ＢＬＡＳＴは、この目
的のために設計された広く用いられているシステムである。
【０００８】
標的ゲノムの領域が、タンパク質をコードする遺伝子である多くの場合において、既知のメッセンジャーＲＮＡまたはタンパク質産物に対する高度な類似性は、強力な証拠である。しかしながら、このアプローチを系統的に適用することは、ｍＲＮＡおよびタンパク質産物の大規模な配列解析を必要とする。このように費用がかかることに加えて、複雑な生物において、どのような場合でも、その生物のゲノム中の全遺伝子の一部分だけしか発現されず、これは、多くの遺伝子に関する外的証拠は、どのような単細胞培養においても容易に得られないことを意味する。従って、複雑な生物におけるほとんどの、または、全ての遺伝子に関する外的証拠を回収するためには、数百または数千もの異なる細胞型を研究しなければならず、それはそれでさらなる困難を伴う。例えば、いくつかのヒト遺伝子は、胎芽または胎児として発達中にしか発現されない可能性がある。
これらの難点にもかかわらず、ヒト、加えて生物学において重要なその他のモデル生物（例えばマウスおよび酵母）に関する大規模な転写およびタンパク質配列データベースが作製されている。例えば、ＲｅｆＳｅｑデータベースは、多様な種由来の転写およびタンパク質配列を含むものであり、アンサンブル（Ｅｎｓｅｍｂｌ）システムは、この証拠をヒトゲノムおよびその他の数種のゲノムに対して包括的にマッピングするものである。
【０００９】
多くの遺伝子に関する外的証拠を得ることにかかる本来の費用および難しさのために、非経験的な（ａｂ ｉｎｉｔｉｏ）遺伝子の発見に頼ることも必要であり、この場合、ゲノムＤＮＡ配列が単独でタンパク質をコードする遺伝子の所定の固有の徴候に関して系統的に検索される。これらの徴候は、概して、シグナル、近くに遺伝子が存在することを示す特異的な配列、または、構成要素、タンパク質のコード配列それ自身の統計学的な特性のいずれかに分類することができる。一般的に、外的証拠は、推定の遺伝子が機能的であることをはっきりと証明するのに必要であるが、非経験的な遺伝子の発見は、遺伝子の予想として、正確に特徴付けられる可能性がある。
【００１０】
真核生物、特にヒトなどの複雑な生物における非経験的な遺伝子の発見は、いくつかの理由のために極めて困難である。まず、これらのゲノムにおけるプロモーターおよびその他の調節シグナルは、原核生物よりも複雑であり、あまりよく理解されていないことが挙げられ、そのために、それら確実に認識することをより難しくしている。真核遺伝子の検索ツールによって同定されたシグナルの２つ目の典型的な例は、ＣｐＧアイランド、および、ポリ（Ａ）テールの結合部位である。
【００１１】
第二に、真核細胞によって用いられるスプライシングメカニズムは、ゲノム中の特定のタンパク質コード配列は、数種の部分（エキソン）に分割されており、非コード配列（イントロン）がその間に存在することを意味する。スプライス部位は、それ自身がその他のシグナルであり、真核遺伝子の検索ツールは、それを同定するように設計されることが多い。ヒトにおいて典型的なタンパク質をコードする遺伝子は、数多くのエキソンに分割される可能性があり、それぞれの長さは２百塩基対未満であり、そのうちいくつかは２０から３０もの短さである。従って、真核生物においてタンパク質をコードするＤＮＡの周期性およびその他の既知の構成要素の特性を検出することはかなり困難である。
【００１２】
原核および真核のゲノムの両方のための進んだ遺伝子の検索ツールは、典型的には、多種多様のシグナルおよび構成要素の測定からの情報を組み合わせるために、隠れマルコフモデルのような複雑な確率論的なモデルを使用している。グリマー（Ｇｌｉｍｍｅｒ）システムは、原核生物用の広く用いられている極めて正確な遺伝子の検索ツールである。真核生物の非経験的な遺伝子の比較による検索ツールは、限定的な成功しか達成されておらず；特筆すべき例は、ＧＥＮＳＣＡＮプログラムである。
【００１３】
本発明において、ペプチドホルモン前駆体配列をコードする新規の単一のエキソン遺伝子の同定を用いて、新規の生物活性ペプチドホルモン前駆体が同定された。新規の単一のエキソン遺伝子を発見するために、ヒトゲノム（ＮＣＢＩ３３アセンブリ、２００３年７月１日）、および、マウスゲノム（ＮＣＢＩ３０アセンブリ、２００３年７月１日）、その両方を、標準的な遺伝子コードを用いて全６種のリーディングフレームに翻訳した。アミノ酸のメチオニンから始まり、長さが５０〜２００個のアミノ酸の配列フラグメントだけを選択した。両方の生物において密接に関連した配列を発見するために、プログラムＢＬＡＳＴを用いてヒトおよびマウスのセットを互いに比較した。両方の生物（ヒトおよびマウス）で見出される配列のみを選択した。分泌タンパク質に関してフィルタリングするために、シグナルＰ（ｓｉｇｎａｌ Ｐ）プログラムを用いて可能性のあるシグナル配列を予想し、さらに、ＴＭＨＭＭプログラムによって可能性のある膜貫通領域が存在しないことを確認した。加えて、すでに説明されているタンパク質ドメイン（例えば、キナーゼドメインなど）の存在を除外するために、選択された配列に関してインタープロ（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）による検索が行われた。残りの配列の新規度を、ＵＮＩＰＲＯＴのような公共的に利用可能なデータベースとの配列比較によって検証した。これらのコンピューター利用による解析により、これまでに述べられたタンパク質ドメインのどれも含まない新規の分泌タンパク質が発見されたことが示された。
【００１４】
一般的に理解されていることであるが、ペプチドホルモンの特徴は、それらの高い特異性、加えてそれらの極めて低濃度での有効性である。ペプチドホルモンのその他の特徴は、それらの対応するｍＲＮＡが別の組織で発現されることはわずかである点である。ペプチドホルモンの遍在的な発現パターンは、哺乳動物系ではごくまれにしか観察されない。
【００１５】
ヒトの体内で８種の新規の遺伝子を転写する組織を決定するために、一般的に使用されるインビトロでの転写分析をヒト組織パネルで行った（図１〜６を参照）。特異的なプローブ／プライマーセットを用いて、対象の遺伝子をコードするｍＲＮＡを検出し定量することができる。しかしながら、注目すべきことは、遺伝子発現データは、ゲノム上の同じ遺伝子座に存在する遺伝子の転写の影響を受ける可能性があるということである。加えて、本発明において用いられる組織パネルは、包括的なものではない。
【００１６】
生物活性ペプチドホルモンは、生物医学的な調査において相当数の用途があり、従って、医薬産業にとって興味深いものである。病気を治療するために、様々なペプチドホルモンが用いられている。
【００１７】
それに対して、特許文献１（発明の名称：“ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ”）は、数種の生物活性ポリペプチド配列を開示しているが、このような配列の同定方法および使用については何も述べられていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】ＷＯ２００４０３９９５６
【発明の概要】
【００１９】
本発明において、生物活性ペプチドホルモン前駆体をコードする新規の遺伝子が同定された。ペプチドホルモンの特徴は、それらの高い特異性、加えてそれらの極めて低濃度での有効性である。生物活性ペプチドホルモンは、生物医学的な調査において莫大な用途がある。様々なペプチドホルモンは、病気を治療したり、または、病態をモニターしたりするのに用いられる。このようなポリペプチド配列は、免疫関連の病気のための薬剤および医薬品として治療上有効な量で用いることができる。
【００２０】
最も近い従来技術（ＷＯ２００４０３９９５６）の利用可能性で述べられているような問題は、ヒトの病気の治療に有用な新規のホルモンのポリペプチド配列を同定することと定義できる。本発明は、動脈硬化症、炎症または制御不能な細胞分裂の危険を高める生理学的な因子を阻害することに用いることができる８種の新規のペプチドホルモン前駆体およびそれらのフラグメントを提供することによってこの問題を解決する。本発明によれば、生物医学的な調査の分野においてヒトの病気を治療するのに用いることができるホルモンのポリペプチドの新しい貯蔵装置を提供する。
【００２１】
従って本発明は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、少なくとも１個のアミノ酸残基の欠失、置換または挿入によってそれらから誘導されたアミノ酸配列、それらのアミドもしくはエステル、または、前記ペプチドの塩に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、配列番号１に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ１０５９４０のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図２】図２は、配列番号３に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ００５２９１のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図３】図３は、配列番号４に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ０９０６１７のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図４】図４は、配列番号５に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ１１４６８４のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図５】図５は、配列番号７に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ０６３９２０のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図６】図６は、配列番号８に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ０７４３８９のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図７】図７は、配列番号１に関するアミノ酸配列の一覧を示す。
【図８】図８は、配列番号２に関するアミノ酸配列を示す。
【図９】図９は、配列番号３に関するアミノ酸配列を示す。
【図１０】図１０は、配列番号４に関するアミノ酸配列を示す。
【図１１】図１１は、配列番号５に関するアミノ酸配列を示す。
【図１２】図１２は、配列番号６に関するアミノ酸配列を示す。
【図１３】図１３は、配列番号７に関するアミノ酸配列を示す。
【図１４】図１４は、配列番号８に関するアミノ酸配列を示す。
【図１５】図１５は、配列番号９に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１６】図１６は、配列番号１０に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１７】図１７は、配列番号１１に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１８】図１８は、配列番号１２に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１９】図１９は、配列番号１３に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２０】図２０は、配列番号１４に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２１】図２１は、配列番号１５に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２２】図２２は、配列番号１６に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２３】図２３は、配列番号１に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図２４】図２４は、配列番号１に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図２５】図２５は、配列番号１に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図２６】図２６は、配列番号２に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図２７】図２７は、配列番号２に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図２８】図２８は、配列番号２に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図２９】図２９は、配列番号３に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３０】図３０は、配列番号３に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図３１】図３１は、配列番号３に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図３２】図３２は、配列番号４に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３３】図３３は、配列番号４に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図３４】図３４は、配列番号４に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図３５】図３５は、配列番号５に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３６】図３６は、配列番号５に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図３７】図３７は、配列番号５に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図３８】図３８は、配列番号６に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３９】図３９は、配列番号６に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図４０】図４０は、配列番号６に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図４１】図４１は、配列番号７に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図４２】図４２は、配列番号７に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図４３】図４３は、配列番号７に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図４４】図４４は、配列番号８に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図４５】図４５は、配列番号８に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図４６】図４６は、配列番号８に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖について述べている：
ＭＹＷＭＡＬＲＲＩＳＴＬＧＳＲＷＬＧＬＳＲＶＬＬＦＲＡＳＫＡＳＦＴＦＬＳＬＲＦＳＬＳＶＡＡＲＲＲＳＴＤＴＤＦＬＬＨＴＬＨＡＨＧＲＨＷＰＧＱＣＳＧＶＰＳＰＬＳＳＲＧＰＧＡＳＧＬＲＶＳＳＶＲＳ。
【００２４】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＧＳＧＣＡＲＡＲＬＧＬＬＳＷＬＡＡＳＳＧＳＥＤＡＬＡＳＳＩＳＶＫＬＡＬＥＬＡＥＶＡＷＳＥＧＤＥＡＥＧＬＡＰＷＬＳＰＬＶＱＧＲＤＳＧＥＤＲＥＱＬＥＡＡＣＬＫＲＧＳＷＡＧＡＧＫＡＲＥＬＳＰＴＡＰＫＷＬＥＥＡＥＥＲＬＴＬＲＳＩＰＬ。
【００２５】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＬＬＡＭＳＳＩＳＩＦＳＳＬＦＳＦＳＳＦＣＦＴＲＣＲＬＳＩＣＳＰＳＳＡＴＬＳＡＣＦＦＬＲＶＡＡＶＡＳＣＣＲＶＡＳＳＲＳＬＲＩＦＷＮＳＡＳＬＦＬＦＩＳＩＷＡＥＶＡＰＬＡＳＳＳＬＳＬＩＳＳＳＳＬＡＲＳＥＲＣＦＳＩＬＡＬＳＶＣＳＡＳＩＳＳＳＳＳ
ＳＭＲＡ。
【００２６】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＡＴＳＷＡＧＳＡＡＰＰＡＳＡＡＫＳＶＶＧＴＲＰＳＲＰＧＧＰＲＳＡＷＲＲＲＲＡＴＬＡＡＷＴＧＰＡＲＡＡＴＡＴＴＴＲＡＡＡＲＲＰＶＡＡＲＴＰＡＲＬＡＡＴＳＲＡＴＨＡＲＴＷＰＭＡＳＰＲＡＳＶＴＴＣＴＣＡＦＲＡＡＲＡＳＰＡＬＳＳ。
【００２７】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＰＲＳＡＰＲＡＡＡＡＰＡＲＡＰＡＡＡＡＶＡＣＡＣＣＰＮＳＡＰＤＦＦＭＶＣＧＧＨＶＲＳＬＡＧＫＲＬＦＳＳＰＰＲＰＡＣＳＧＰＮＤＬＲＳＳＧＶＳＧＧＡＶＲＰＡＡＲＴＲＲＲＡＱＧＥＶＥＥＥＡＳＣＧＥＫＧＲＲＴＡＥＲＭＧＰＶＡＡＡＲＡＧＬＤＡＡＷＡＲＲＣＥＶＰＫＶＴＴＩＰＴＲＱＰＲＡＰＡＲＰＧＡＰＲＲＩ。
【００２８】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＰＫＷＲＬＡＷＰＫＱＴＲＡＳＳＣＧＬＳＬＰＳＩＳＣＡＳＳＣＳＡＳＲＮＧＧＤＲＣＳＬＲＴＴＴＴＲＨＴＲ。
【００２９】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＳＶＷＴＦＬＫＣＲＧＮＳＳＬＬＫＮＬＬＱＶＫＶＫＡＥＬＬＬＬＣＬＬＶＴＨＳＬＷＳＳＴＷＳＰＰＧＶＡＡＶＲＳＡＳＴＶＰＥＥＮＣＳＧＳＫＬＹＶＣＶＡＫＳＭＮＳＰＳＭＬＬＤＳＥＭＴＷＰＬＳＳＬＳＫＡＨＷＲＶＶＬＭＲＳＤＬＧＲＳＳＴＶＩＰＫＳＥＶＳＴＡＬＣＳＬＧＬＱＬＮＭＡＳＰＳＲＡＲＦＰＱ。
【００３０】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＡＳＡＡＧＥＰＦＳＭＹＬＡＳＡＡＡＡＬＣＴＰＴＡＳＡＲＫＡＲＧＬＲＴＥＰＬＤＥＶＬＡＲＧＧＰＡＡＳＴＬＷＣＲＣＲＬＷＰＫＡＳＬＹＰＧＡＲＫＰＣＬＡＡＳＧＳＤＳＳＴＳＧＧＳＡＴＤＴＧＰＤＬＴＰＷＫＥＶＤＳＤＬＳＡＳＭＱＬＬＭＩＷＬＴＬＳＴＳＬＡＭＶＥＩＳＡＴＥＬＷＬＳＧＰＧＲＰＳＳＱＳＬＲＳＧＧＳＰＶＲＴＳＭ。
【００３１】
また本発明の実施態様は、配列番号１〜８で示されるアミノ酸配列またはそれらのアミド、エステルまたはそれらの塩を含むポリペプチド鎖をコードする、配列番号９〜１６に記載のヌクレオチド塩基配列を含むＤＮＡも提供する。
【００３２】
本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号９に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３３】
本発明は、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる段落１で説明されているポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする、配列番号１０に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３４】
本発明のその他の実施態様は、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１１に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３５】
本発明のその他の実施態様は、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１２に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３６】
本発明のその他の実施態様は、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド
鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１３に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３７】
本発明のその他の実施態様は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１４に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３８】
本発明のその他の実施態様は、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１５に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３９】
本発明のその他の実施態様は、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１６に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００４０】
本発明は、ポリペプチドの製造方法に関し、ここにおいて前記方法は、アミノ酸を提供する工程、固相または液相合成によって該アミノ酸を合成する工程、ポリペプチドを抽出する工程、該ポリペプチドを精製する工程を含む。
【００４１】
また本発明は、ペプチド、前駆体またはそれらの塩の製造方法も提供し、本方法は、アミノ末端を構成するアミノ酸またはペプチド、および、カルボキシル末端を構成するアミノ酸またはペプチドを縮合させること（それに続いて、任意に分子内ジスルフィド結合を形成してもよい）を含む。
【００４２】
本発明の実施態様は、活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含む医薬組成物を提供し、ここにおいて前記ポリペプチド鎖は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなる。
【００４３】
また本発明は、活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含む医薬組成物の使用にも関し、ここにおいて前記ポリペプチド鎖は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなり、さらに、治療用ポリペプチド、薬物介入のための標的、関連する標的を発見するためのリガンド、病気をモニターするためのバイオマーカーとして用いることができる。
【００４４】
本発明はまた、配列番号１〜８で定義されるアミノ酸配列のうち少なくとも１種を含む、心臓血管疾患、ホルモン産生腫瘍を治療または予防するための物質、ホルモン分泌阻害剤、腫瘍増殖阻害剤の製造における本発明のペプチド、前駆体または塩の使用を提供する。
【００４５】
また本発明の実施態様は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列を含む段落１に記載のポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩に対する抗体も提供する。本発明の抗体は、体液または組織のようなサンプル中に存在する本発明のポリペプチドを検出することにも使用できる。また、精製中に各分画中の本発明のポリペプチドを検出したり、または、試験細胞中の本発明のポリペプチドの挙動を解析したりするための、本発明のポリペプチドを精製するための抗体のカラムを製造するためにも使用できる。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「ポリペプチド」は、共有結合で連結されたアミノ酸からなるあらゆるポリマーを意味するものと解釈され、この用語は、全長タンパク質の部分またはフラグメントもその範囲内に含み、このような部分またはフラグメントとしては、例えば、ペプチド、オリゴペプチド、および、少なくとも２個のアミノ酸からなるより短いペプチド配列、より具体的には、少なくとも約５個またはそれより多くのアミノ酸残基からなるより短いペプチド配列が挙げられる。
【００４７】
用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合で連結された１個またはそれ以上のアミノ酸を含む全ての成分を含む。加えて、この用語は修飾されたアミノ酸のポリマーもその範囲内に含み、このようなポリマーとしては、翻訳後修飾されたアミノ酸が挙げられ、例えば、これらに限定されないが、塩基性ペプチド主鎖を効果的に改変するグリコシル化、リン酸化、アセチル化および／または硫酸化反応などの化学修飾によって翻訳後修飾されたアミノ酸が挙げられる。従って、ポリペプチドは、天然に存在するタンパク質から誘導されてもよく、具体的には、ＣＮＢｒまたはプロテアーゼのような試薬を用いた、例えば、なかでもトリプシンまたはキモトリプシンを用いた化学的または酵素的な切断により全長タンパク質から誘導されてもよい。あるいは、このようなポリペプチドは、周知のペプチド合成方法を用いて化学合成により誘導したものでもよい。また、アミノ酸配列の変異体（本明細書では、ポリペプチド変異体と称する）も「ポリペプチド」の定義の範囲内である。これらは、天然に存在するアミノ酸配列中に、前記ポリペプチドの少なくとも１つの必須の特性（例えばその生物活性）を変更しないような１種またはそれ以上の、好ましくは保存的な、アミノ酸置換、欠失または挿入を含んでいてもよい。このようなポリペプチドは、化学的なポリペプチド合成によって合成してもよい。保存的アミノ酸置換は当業界公知である。例えば、天然型のタンパク質の１個またはそれ以上のアミノ酸残基を、類似の電荷、サイズまたは極性を有するアミノ酸残基で保存的に置換することができ、この場合、得られたポリペプチドは、本明細書において説明されているような機能的な能力を保持している。このような置換を作製するルールは周知である。より具体的には、保存的アミノ酸置換は、一般的に、それらの側鎖において関連するアミノ酸群内で起こるものである。遺伝学的にコードされたアミノ酸は、一般的に、４つのグループに分けられる：（１）酸性＝アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性＝リシン、アルギニン、および、ヒスチジン；（３）非極性＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、および、トリプトファン；および、（４）電荷を有さない極性＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、および、チロシン。また、フェニルアラニン、チロシン、および、トリプトファンも、芳香族アミノ酸として一緒に分類される。いずれかの具体的なグループ内での１またはそれ以上の置換、例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンでの置換、あるいは、アスパラギン酸のグルタミン酸での置換、または、スレオニンのセリンでの置換、または、その他のあらゆるアミノ酸残基の構造的に関連するアミノ酸残基での置換は、一般的に、得られたポリペプチドの機能に有意ではない作用しか示さないと予想される。
【００４８】
自然には存在しないような修飾を受けたアミノ酸配列の変異体も「ポリペプチド」の定義の範囲内であり、このような修飾としては、例えば、これらに限定されないが、アミドおよび非アミド結合による保護、カルボキシル化、および、誘導体化、加えて共有結合および非共有結合の修飾が挙げられる。
その機能性ドメインに相当するアミノ酸配列が存在するためにその生物活性が予想可能なペプチドも、用語「ポリペプチド」の定義の範囲に含まれる。また、そのアミノ酸配列の解析によってその生物活性を予想することができなかったペプチドも用語「ポリペプチド」に包含される。
【００４９】
アミノ酸は、アミン官能基とカルボン酸官能基との両方を含むあらゆる分子である。アミノ酸残基は、アミノ酸単量体を連結させてタンパク質鎖にするペプチド結合、化学結合の形成中に水分子（窒素側からのＨ+、および、カルボン酸側からのＯＨ-）が失われた後に残ったアミノ酸成分である。各タンパク質は、それ自身固有のアミノ酸配列を有しており、これは一次構造として知られている。アルファベットの文字が様々な方法で繋がって
エンドレスの様々な言葉を形成することができるのと同じように、アミノ酸は、様々な配列で一緒に連結して、多様なタンパク質を形成することができる。各タンパク質の固有の形状が、体内でのそれらの機能を決定する。
【００５０】
前駆体とは、その他の、通常はより活性な、または、成熟した物質が形成される物質である。タンパク質前駆体は、翻訳後修飾によって活性型に変換することができる不活性なタンパク質（またはペプチド）である。タンパク質に関する前駆体の名称は、接頭語としてｐｒｏまたはｐｒｅｐｒｏが付けられることが多い。前駆体は、後に生じるタンパク質がもしかすると有害な可能性があるが、緊急的に、および／または、大量に利用可能にする必要があるような場合、生物によって利用されることが多い。
【００５１】
本発明のポリペプチド、前駆体またはそれらの塩は、ホルモン活性を有する。それゆえに、本発明のポリペプチド、前駆体および塩は、薬物、例えば治療用ポリペプチド、関連する標的（例えばＧＰＣＲ）を発見するためのリガンド、薬物介入のための標的（例えば、モノクローナル抗体など、受容体フラグメントのための標的）、病気をモニターするためのバイオマーカー（体液中のペプチドフラグメントを検出することができるツール抗体と組み合わせて）、プロテインキナーゼ阻害剤および基質、Ｔ細胞エピトープ、受容体結合部位のペプチドミモトープ、発現レベルを測定することができるバイオマーカーとして有用である。
本発明のペプチドまたは前駆体をコードするＤＮＡは、例えば、遺伝子治療、または、心臓血管疾患、ホルモン産生腫瘍、糖尿病、胃潰瘍などの治療または予防のための物質、ホルモン分泌阻害剤、腫瘍増殖阻害剤、神経系の活性化剤などとして有用である。さらに、本発明のＤＮＡは、心臓血管疾患、ホルモン産生腫瘍、糖尿病、胃潰瘍などのような病気の遺伝子診断のための物質として有用である。
【００５２】
ベクターは、細胞へＤＮＡのような遺伝物質を運搬するための運搬体である。例えば、具体的にはＤＮＡが細胞の形質転換に用いられる場合、ＤＮＡそれ自身がベクターとみなされることもある。この意味で、ベクターは、ＤＮＡコンストラクト、例えば複製起点を含むプラスミドまたは細菌人工染色体である。適切な複製開始点は、細胞に細胞の染色体と共にコンストラクトをコピーさせ、そのコンストラクトはその後代に受け継がれる。ベクターで形質転換した単細胞は、細胞の培養物全体に増殖すると予想され、これらの細胞はいずれも、ベクター、加えてコンストラクト内に結合した全ての遺伝子を含む。精製技術によって細胞からコンストラクトを抽出することができるために、ベクターでの形質転換は、少数のＤＮＡ分子をより大量の分子にする方法の一つである。ベクターとしては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から誘導されたプラスミド（例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１２、ｐＵＣ１３）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から誘導されたプラスミド（例えば、ｐＵＢ１１０、ｐＴＰ５、ｐＣ１９４）、酵母から誘導されたプラスミド（例えば、ｐＳＨ１９、ｐＳＨ１５）、バクテリオファージ、例えば［ラムダ］ファージ、加えて動物ウイルス、例えばレトロウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルスなどが挙げられる。
【００５３】
本発明のペプチド、前駆体または塩に対する抗体は、本発明のペプチド、前駆体または塩を特異的に認識することができる。また、精製中に各分画中の本発明のポリペプチドを検出したり、または、試験細胞中の新規のポリペプチドの挙動を解析したりするための、本発明のポリペプチドを精製するための抗体のカラムを生産するためにも使用できる。従ってこれらは、試験溶液中で本発明のペプチドまたは等価体を分析することにも使用できる。
【実施例】
【００５４】
結果
１．０ コンピュータープログラムの説明：
１．１ シグナルＰバージョン２．０
目的：このプログラムをカットオフスコア０．９８で用いて可能性のあるシグナル配列を検出した。シグナルＰバージョン２．０によって、異なる生物由来のアミノ酸配列におけるシグナルペプチドの切断部位の存在および位置を予想した：この方法は、数種の人工神経回路網および隠れマルコフモデルの組み合わせに基づいて、切断部位の予想、および、シグナルペプチド／非シグナルペプチドの予想も含む。
【００５５】
１．２ ＴＭＨＭＭバージョン２．０
目的：このプログラムを用いて、タンパク質配列中の可能性のある膜貫通領域を定義した。ＴＭＨＭＭバージョン２．０は、タンパク質中の膜貫通ヘリックスを予想するために用いられる。Ｎ末端領域中の予想されたＴＭセグメントは、場合によってはシグナルペプチドになることもある。
【００５６】
１．３ ＰｒｏＰバージョン１．０
目的：このプログラムを用いて、タンパク質配列中の可能性のある切断部位を検出した。スコア０．０９を用いた。このプログラムは、神経回路網一式を用いて真核性のタンパク質配列におけるアルギニンおよびリシンプロペプチド切断部位を予想するものである。フューリン特異的な予想がデフォルトである。一般的な前駆タンパク質のコンバターゼ（ＰＣ）の予想を行うことも可能である。このプログラムは、シグナルペプチドの切断部位の存在および位置を予想するシグナルＰプログラムと統合されている。
【００５７】
１．４ インタープロスキャン（ＩｎｔｅｒＰｒｏＳｃａｎ）と組み合わせたインタープロバージョン１２
インタープロは、既知のタンパク質で見出された同定可能な特徴を未知のタンパク質配列に適用することができる、タンパク質ファミリー、ドメインおよび機能的な部位のデータベースである。１．５インタープロＳｃａｎは、アミノ酸配列をインタープロデータベースと比較するのに用いられるプログラムである。
【００５８】
１．６ ＢＬＡＳＴバージョン２．２．９
ベーシック・ローカル・アライメント・サーチ・ツール（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ；ＢＬＡＳＴ）は、配列間の局所的な類似性を示す領域を発見するものである。このプログラムは、ヌクレオチドまたはタンパク質配列を配列データベースと比較し、マッチングの統計的有意性を計算する。ＢＬＡＳＴを用いて、配列間の機能的な関係および進化の関係を推論したり、加えて、遺伝子ファミリーに属するもの同定を補助したりすることができる。ＢＬＡＳＴは、それが生産するアライメントの統計的有意性を決定するために、カーリン−アルチュール（Ｋａｒｌｉｎ−Ａｌｔｓｃｈｕｌ）の統計を使用する。基本のアルゴリズムは、多数の方法で実施することができ、さらに、様々なコンテキスト、例えば、直鎖状のＤＮＡおよびタンパク質配列データベース検索、モチーフ検索、遺伝子同定検索に適用することができ、さらに、長いＤＮＡ配列における複数の類似性領域の解析にも適用することができる。その柔軟性および数学的な解析の取り扱いやすさに加えて、ＢＬＡＳＴは、現存する匹敵する感度の配列比較ツールよりも一桁高いレベルで速い。
【００５９】
上述したこれら全てのプログラムは、パブリックドメインのインターネットより入手可能である。
【００６０】
本発明のホルモンペプチドの生物学的な役割を、発現プロファイル試験を用いて試験した（図１〜６）。数種の組織に関して、ホルモンペプチドの存在が個々の配列に応じて異なっていることが実証された。異なる組織における本発明に係るホルモンペプチドの差異
的な発現は、それらの重要な生物学的な役割に関する強力な指標とみなされる。１種または数種の本発明のホルモンペプチドの量を増加させたり、または、減少させたりしてそれらホルモンペプチドの濃度を調節することによって、低濃度または高濃度の１種または数種のこのようなホルモンペプチドを必要とする病気（例えば、心臓血管疾患、代謝病、精神疾患、癌、ウイルス、細菌または酵母によって引き起こされる感染など）の治療に強い影響を与える可能性がある。
【００６１】
２．０ 発現プロファイル
２．１）組織発現解析を行うこと
組織発現解析をＴａｑＭａｎ遺伝子発現解析を用いて行った。
【００６２】
ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）は、医療および生物学系の研究所において、例えば遺伝性疾患の検出、遺伝的指紋の同定、感染症の診断、遺伝子クローニング、起源の試験、および、ＤＮＡのコンピューター解析などの様々な業務の利用される標準的な技術である。
【００６３】
定量ＰＣＲは、ＰＣＲ産物の量を（好ましくはリアルタイムで）迅速に測定するために用いられており、従って、開始時のＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡ量を定量的に測定するための間接的な方法である。これは、一般的に、配列が存在するか、または、存在しないのか、さらにその配列が存在する場合、サンプル中のコピー数がどれだけなのかを決定する目的で使用される。
【００６４】
本発明において遺伝子発現試験に用いられるプロトコールの説明：
サンプルの調製：
試験された組織からのＲＮＡサンプルを、様々な業者から購入した。
【００６５】
ＤＮアーゼによる消化：
全ての製品を、アンビオン（Ａｍｂｉｏｎ）から購入した。ＤＮＡ非含有のＤＮアーゼ処理を行い、除去試薬（１９０６）を用いた。ＲＮＡ（５０μｇ）を用いて、製造元のプロトコールに従ってＤＮアーゼによる消化を行った。
【００６６】
ｃＤＮＡ合成：
アプレラ（Ａｐｐｌｅｒａ）から、ｃＤＮＡに関する製品の逆転写酵素キット（Ｎ８０８０２３４）、ＲＮアーゼ阻害剤（Ｎ８０８０１１９）を購入した。ＲＮＡ（１０μｇ）からｃＤＮＡ合成を行った。
【００６７】
ＴａｑＭａｎ反応の設定：
ＰＣＲ関連製品をアプレラから購入した。各反応に、ＴａｑＭａｎユニバーサルＰＣＲマスターミックス（ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ）（４３０５７１９）を用いた。標的フォワードプライマー、標的リバースプライマー、標的プローブを、各遺伝子それぞれに関してＦＡＭで標識した（プライマー配列を示す表を参照）。ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ７９００（アプレラ）を用いて以下のＰＣＲ条件下でＰＣＲを行った：５０℃で２分間、９５℃で１０分間、９５℃で１５秒を４０サイクル、および、６０℃で１分間。ＰＣＲは、標準化のための内因性コントロールとしてＢ２Ｍを用いて、マルチプレックスＰＣＲとして設定した。
【００６８】
２．３）配列番号１に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図７）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図１にも示す（ただし違う様式で）：
【００６９】
【表１】
【００７０】
【表２】
【００７１】
２．４）配列番号２に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図８）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図２にも示す（ただし違う様式で）：
【００７２】
【表３】
【００７３】
【表４】
【００７４】
２．５）配列番号３に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図９）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図３にも示す（ただし違う様式で）：
【００７５】
【表５】
【００７６】
【表６】
【００７７】
２．６）配列番号４に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図１０）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図４にも示す（ただし違う様式で）：
【００７８】
【表７】
【００７９】
【表８】
【００８０】
２．７）配列番号５に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図１１）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図５にも示す（ただし違う様式で）：
【００８１】
【表９】
【００８２】
【表１０】
【００８３】
２．８）配列番号６に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図１２）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図６にも示す（ただし違う様式で）：
【００８４】
【表１１】
【００８５】
【表１２】
【００８６】
参考文献：
Henrik Nielsen, Jacob Engelbrecht, Soren Brunak and Gunnar von Heijne “Identification of prokaryotic and eukaryotic signal peptides and prediction of their cleavage sites”Protein Engineering, 10:1-6, 1997.
A. Krogh, B. Larsson, G. von Heijne and E. L. L. Sonnhammer.“Predicting transmembrane protein topology with a hidden Markov model: Application to complete genomes”Journal of Molecular Biology, 305(3):567-580, January 2001.
Peter Duckert, Soren Brunak and Nikolaj Blom,“Prediction of proprotein convertase cleavage sites”Protein Engineering, Design and Selection: 17: 107-112, 2004.
Strand, F.L. Neuropeptides: Regulators of physiological processes. (1999) MIT
Press.
Anderson, N.L. & Anderson, N.G. The human plasma proteome: history, character,
and diagnostic prospects. Mol. Cell. Proteomics, 2002 Nov;1(11): 845-67
Mulder NJ, Apweiler R, Attwood TK, Bairoch A, Bateman A, Binns D, Bradley P, Bork P, Bucher P, Cerutti L, Copley R, Courcelle E, Das U, Durbin R, Fleischmann W, Gough J, Haft D, Harte N, Hulo N, Kahn D, Kanapin A, Krestyaninova M, Lonsdale D, Lopez R, Letunic I, Madera M, Maslen J, McDowall J, Mitchell A, Nikolskaya AN, Orchard S, Pagni M, Ponting CP, Quevillon E, Selengut J, Sigrist CJ, Silventoinen V, Studholme DJ, Vaughan R, Wu CH. InterPro, progress and status in 2005. Nucleic Acids Res. 2005 Jan 1;33(Database issue):D201-5。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の生物活性ペプチドホルモン、それらの製造方法、および、それらの使用に関する。本発明は、薬物、例えば治療用ポリペプチド、関連する標的（例えばＧＰＣＲ）または薬物介入のための標的を発見するためのリガンドとして用いることができる新規の生物活性ペプチド前駆体およびそれらの塩を同定した。
【０００２】
本発明は、新規の生物活性ペプチドホルモン、それらの製造方法、および、それらの使用に関する。より具体的には、本発明は、治療用ポリペプチド、薬物介入のための標的、関連する標的（例えば、ＧＰＣＲの脱オーファン化（ｄｅｏｒｐｈａｎｉｎｇ））を発見するためのリガンド、または、病気をモニターするためのバイオマーカーとして用いることができる前駆タンパク質から誘導された生物活性ペプチドホルモンの同定方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
多くの生物学的に活性なペプチドは、増殖の刺激、増殖の阻害、または、重要な代謝経路の調節のいずれかによって健康状態および病気の両方に深刻な作用を示す。
【０００４】
ペプチドホルモンは、分泌線、ニューロン、腸、脳などの様々な細胞型および臓器中で前駆体として生産される。ペプチドホルモンは、最初により大きい前駆体またはプロホルモンとして合成され、輸送中にＥＲおよびゴルジスタックを介して多数の翻訳後修飾を受ける可能性がある。続いてこれらは加工され、それらの最終目的地に輸送されて、活性物質（第一のメッセンジャー）として細胞表面受容体に結合することによって細胞の反応を開始させる。これらは、例えば糖尿病（インスリン）、血圧調節（アンギオテンシン）、貧血（エリスロポイエチン−α）、多発性硬化症（インターフェロン−β）などの生物医学的な調査の様々な分野に関連する生理学的プロセスにおいて主要な役割を果たす。
【０００５】
近年のヒトゲノムの配列解析により約３０,０００種の遺伝子が解明されているが、これは、ヒトの生物学的プロセスの複雑さから予想された数よりもかなり少ない。これらの遺伝子の翻訳前の選択的スプライシングによって、２００,０００種もの一次転写物が生成する可能性がある。これらの遺伝子によってコードされたタンパク質産物が翻訳後修飾を受けることによって、機能の多様性を説明するのに求められるさらなる複雑さを示すことが現在広く認められている。
【０００６】
遺伝子の発見は、典型的には計算生物学の分野に関わるものである、この計算生物学は、生物学的に機能的な配列ストレッチ、一般的にはゲノムＤＮＡをアルゴリズムで同定することに関する。これは、特にタンパク質をコードする遺伝子を含むが、ＲＮＡ遺伝子および調節領域のような他の機能的な構成要素を含んでいてもよい。種のゲノムが配列解析されたら、それらゲノムを理解することにおける最初の最も重要な工程の１つは、遺伝子の発見である。
【０００７】
外因性の遺伝子を発見するシステムにおいて、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはタンパク質産物の既知の配列の形態で、外的証拠に類似した配列に関して標的ゲノムが検索される。ｍＲＮＡ配列の場合、転写されるはずの固有のゲノムＤＮＡ配列を誘導することが重要である。タンパク質配列の場合、可能性のあるＤＮＡコーディング配列群は、遺伝子コードの逆翻訳により誘導することができる。ひとたび候補ＤＮＡ配列が決定されたら、マッチング、完全または部分的、および、正確または不正確さについて標的ゲノムを効率的に検索できるかどうかは、アルゴリズムにかかっている。ＢＬＡＳＴは、この目
的のために設計された広く用いられているシステムである。
【０００８】
標的ゲノムの領域が、タンパク質をコードする遺伝子である多くの場合において、既知のメッセンジャーＲＮＡまたはタンパク質産物に対する高度な類似性は、強力な証拠である。しかしながら、このアプローチを系統的に適用することは、ｍＲＮＡおよびタンパク質産物の大規模な配列解析を必要とする。このように費用がかかることに加えて、複雑な生物において、どのような場合でも、その生物のゲノム中の全遺伝子の一部分だけしか発現されず、これは、多くの遺伝子に関する外的証拠は、どのような単細胞培養においても容易に得られないことを意味する。従って、複雑な生物におけるほとんどの、または、全ての遺伝子に関する外的証拠を回収するためには、数百または数千もの異なる細胞型を研究しなければならず、それはそれでさらなる困難を伴う。例えば、いくつかのヒト遺伝子は、胎芽または胎児として発達中にしか発現されない可能性がある。
これらの難点にもかかわらず、ヒト、加えて生物学において重要なその他のモデル生物（例えばマウスおよび酵母）に関する大規模な転写およびタンパク質配列データベースが作製されている。例えば、ＲｅｆＳｅｑデータベースは、多様な種由来の転写およびタンパク質配列を含むものであり、アンサンブル（Ｅｎｓｅｍｂｌ）システムは、この証拠をヒトゲノムおよびその他の数種のゲノムに対して包括的にマッピングするものである。
【０００９】
多くの遺伝子に関する外的証拠を得ることにかかる本来の費用および難しさのために、非経験的な（ａｂ ｉｎｉｔｉｏ）遺伝子の発見に頼ることも必要であり、この場合、ゲノムＤＮＡ配列が単独でタンパク質をコードする遺伝子の所定の固有の徴候に関して系統的に検索される。これらの徴候は、概して、シグナル、近くに遺伝子が存在することを示す特異的な配列、または、構成要素、タンパク質のコード配列それ自身の統計学的な特性のいずれかに分類することができる。一般的に、外的証拠は、推定の遺伝子が機能的であることをはっきりと証明するのに必要であるが、非経験的な遺伝子の発見は、遺伝子の予想として、正確に特徴付けられる可能性がある。
【００１０】
真核生物、特にヒトなどの複雑な生物における非経験的な遺伝子の発見は、いくつかの理由のために極めて困難である。まず、これらのゲノムにおけるプロモーターおよびその他の調節シグナルは、原核生物よりも複雑であり、あまりよく理解されていないことが挙げられ、そのために、それら確実に認識することをより難しくしている。真核遺伝子の検索ツールによって同定されたシグナルの２つ目の典型的な例は、ＣｐＧアイランド、および、ポリ（Ａ）テールの結合部位である。
【００１１】
第二に、真核細胞によって用いられるスプライシングメカニズムは、ゲノム中の特定のタンパク質コード配列は、数種の部分（エキソン）に分割されており、非コード配列（イントロン）がその間に存在することを意味する。スプライス部位は、それ自身がその他のシグナルであり、真核遺伝子の検索ツールは、それを同定するように設計されることが多い。ヒトにおいて典型的なタンパク質をコードする遺伝子は、数多くのエキソンに分割される可能性があり、それぞれの長さは２百塩基対未満であり、そのうちいくつかは２０から３０もの短さである。従って、真核生物においてタンパク質をコードするＤＮＡの周期性およびその他の既知の構成要素の特性を検出することはかなり困難である。
【００１２】
原核および真核のゲノムの両方のための進んだ遺伝子の検索ツールは、典型的には、多種多様のシグナルおよび構成要素の測定からの情報を組み合わせるために、隠れマルコフモデルのような複雑な確率論的なモデルを使用している。グリマー（Ｇｌｉｍｍｅｒ）システムは、原核生物用の広く用いられている極めて正確な遺伝子の検索ツールである。真核生物の非経験的な遺伝子の比較による検索ツールは、限定的な成功しか達成されておらず；特筆すべき例は、ＧＥＮＳＣＡＮプログラムである。
【００１３】
本発明において、ペプチドホルモン前駆体配列をコードする新規の単一のエキソン遺伝子の同定を用いて、新規の生物活性ペプチドホルモン前駆体が同定された。新規の単一のエキソン遺伝子を発見するために、ヒトゲノム（ＮＣＢＩ３３アセンブリ、２００３年７月１日）、および、マウスゲノム（ＮＣＢＩ３０アセンブリ、２００３年７月１日）、その両方を、標準的な遺伝子コードを用いて全６種のリーディングフレームに翻訳した。アミノ酸のメチオニンから始まり、長さが５０〜２００個のアミノ酸の配列フラグメントだけを選択した。両方の生物において密接に関連した配列を発見するために、プログラムＢＬＡＳＴを用いてヒトおよびマウスのセットを互いに比較した。両方の生物（ヒトおよびマウス）で見出される配列のみを選択した。分泌タンパク質に関してフィルタリングするために、シグナルＰ（ｓｉｇｎａｌ Ｐ）プログラムを用いて可能性のあるシグナル配列を予想し、さらに、ＴＭＨＭＭプログラムによって可能性のある膜貫通領域が存在しないことを確認した。加えて、すでに説明されているタンパク質ドメイン（例えば、キナーゼドメインなど）の存在を除外するために、選択された配列に関してインタープロ（ＩｎｔｅｒＰｒｏ）による検索が行われた。残りの配列の新規度を、ＵＮＩＰＲＯＴのような公共的に利用可能なデータベースとの配列比較によって検証した。これらのコンピューター利用による解析により、これまでに述べられたタンパク質ドメインのどれも含まない新規の分泌タンパク質が発見されたことが示された。
【００１４】
一般的に理解されていることであるが、ペプチドホルモンの特徴は、それらの高い特異性、加えてそれらの極めて低濃度での有効性である。ペプチドホルモンのその他の特徴は、それらの対応するｍＲＮＡが別の組織で発現されることはわずかである点である。ペプチドホルモンの遍在的な発現パターンは、哺乳動物系ではごくまれにしか観察されない。
【００１５】
ヒトの体内で８種の新規の遺伝子を転写する組織を決定するために、一般的に使用されるインビトロでの転写分析をヒト組織パネルで行った（図１〜６を参照）。特異的なプローブ／プライマーセットを用いて、対象の遺伝子をコードするｍＲＮＡを検出し定量することができる。しかしながら、注目すべきことは、遺伝子発現データは、ゲノム上の同じ遺伝子座に存在する遺伝子の転写の影響を受ける可能性があるということである。加えて、本発明において用いられる組織パネルは、包括的なものではない。
【００１６】
生物活性ペプチドホルモンは、生物医学的な調査において相当数の用途があり、従って、医薬産業にとって興味深いものである。病気を治療するために、様々なペプチドホルモンが用いられている。
【００１７】
それに対して、特許文献１（発明の名称：“ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ”）は、数種の生物活性ポリペプチド配列を開示しているが、このような配列の同定方法および使用については何も述べられていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】ＷＯ２００４０３９９５６
【発明の概要】
【００１９】
本発明において、生物活性ペプチドホルモン前駆体をコードする新規の遺伝子が同定された。ペプチドホルモンの特徴は、それらの高い特異性、加えてそれらの極めて低濃度での有効性である。生物活性ペプチドホルモンは、生物医学的な調査において莫大な用途がある。様々なペプチドホルモンは、病気を治療したり、または、病態をモニターしたりするのに用いられる。このようなポリペプチド配列は、免疫関連の病気のための薬剤および医薬品として治療上有効な量で用いることができる。
【００２０】
最も近い従来技術（ＷＯ２００４０３９９５６）の利用可能性で述べられているような問題は、ヒトの病気の治療に有用な新規のホルモンのポリペプチド配列を同定することと定義できる。本発明は、動脈硬化症、炎症または制御不能な細胞分裂の危険を高める生理学的な因子を阻害することに用いることができる８種の新規のペプチドホルモン前駆体およびそれらのフラグメントを提供することによってこの問題を解決する。本発明によれば、生物医学的な調査の分野においてヒトの病気を治療するのに用いることができるホルモンのポリペプチドの新しい貯蔵装置を提供する。
【００２１】
従って本発明は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、少なくとも１個のアミノ酸残基の欠失、置換または挿入によってそれらから誘導されたアミノ酸配列、それらのアミドもしくはエステル、または、前記ペプチドの塩に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、配列番号１に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ１０５９４０のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図２】図２は、配列番号３に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ００５２９１のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図３】図３は、配列番号４に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ０９０６１７のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図４】図４は、配列番号５に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ１１４６８４のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図５】図５は、配列番号７に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ０６３９２０のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図６】図６は、配列番号８に関するＡＴＡＱ１におけるＡＣ０７４３８９のｍＲＮＡ発現プロファイルを示す。
【図７】図７は、配列番号１に関するアミノ酸配列の一覧を示す。
【図８】図８は、配列番号２に関するアミノ酸配列を示す。
【図９】図９は、配列番号３に関するアミノ酸配列を示す。
【図１０】図１０は、配列番号４に関するアミノ酸配列を示す。
【図１１】図１１は、配列番号５に関するアミノ酸配列を示す。
【図１２】図１２は、配列番号６に関するアミノ酸配列を示す。
【図１３】図１３は、配列番号７に関するアミノ酸配列を示す。
【図１４】図１４は、配列番号８に関するアミノ酸配列を示す。
【図１５】図１５は、配列番号９に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１６】図１６は、配列番号１０に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１７】図１７は、配列番号１１に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１８】図１８は、配列番号１２に関するヌクレオチド配列を示す。
【図１９】図１９は、配列番号１３に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２０】図２０は、配列番号１４に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２１】図２１は、配列番号１５に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２２】図２２は、配列番号１６に関するヌクレオチド配列を示す。
【図２３】図２３は、配列番号１に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図２４】図２４は、配列番号１に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図２５】図２５は、配列番号１に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図２６】図２６は、配列番号２に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図２７】図２７は、配列番号２に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図２８】図２８は、配列番号２に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図２９】図２９は、配列番号３に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３０】図３０は、配列番号３に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図３１】図３１は、配列番号３に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図３２】図３２は、配列番号４に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３３】図３３は、配列番号４に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図３４】図３４は、配列番号４に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図３５】図３５は、配列番号５に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３６】図３６は、配列番号５に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図３７】図３７は、配列番号５に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図３８】図３８は、配列番号６に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図３９】図３９は、配列番号６に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図４０】図４０は、配列番号６に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図４１】図４１は、配列番号７に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図４２】図４２は、配列番号７に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図４３】図４３は、配列番号７に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【図４４】図４４は、配列番号８に関するヌクレオチドのプローブの配列を示す。
【図４５】図４５は、配列番号８に関するヌクレオチドのフォワードプライマーの配列を示す。
【図４６】図４６は、配列番号８に関するヌクレオチドのリバースプライマーの配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖について述べている：
ＭＹＷＭＡＬＲＲＩＳＴＬＧＳＲＷＬＧＬＳＲＶＬＬＦＲＡＳＫＡＳＦＴＦＬＳＬＲＦＳＬＳＶＡＡＲＲＲＳＴＤＴＤＦＬＬＨＴＬＨＡＨＧＲＨＷＰＧＱＣＳＧＶＰＳＰＬＳＳＲＧＰＧＡＳＧＬＲＶＳＳＶＲＳ。
【００２４】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＧＳＧＣＡＲＡＲＬＧＬＬＳＷＬＡＡＳＳＧＳＥＤＡＬＡＳＳＩＳＶＫＬＡＬＥＬＡＥＶＡＷＳＥＧＤＥＡＥＧＬＡＰＷＬＳＰＬＶＱＧＲＤＳＧＥＤＲＥＱＬＥＡＡＣＬＫＲＧＳＷＡＧＡＧＫＡＲＥＬＳＰＴＡＰＫＷＬＥＥＡＥＥＲＬＴＬＲＳＩＰＬ。
【００２５】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＬＬＡＭＳＳＩＳＩＦＳＳＬＦＳＦＳＳＦＣＦＴＲＣＲＬＳＩＣＳＰＳＳＡＴＬＳＡＣＦＦＬＲＶＡＡＶＡＳＣＣＲＶＡＳＳＲＳＬＲＩＦＷＮＳＡＳＬＦＬＦＩＳＩＷＡＥＶＡＰＬＡＳＳＳＬＳＬＩＳＳＳＳＬＡＲＳＥＲＣＦＳＩＬＡＬＳＶＣＳＡＳＩＳＳＳＳＳ
ＳＭＲＡ。
【００２６】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＡＴＳＷＡＧＳＡＡＰＰＡＳＡＡＫＳＶＶＧＴＲＰＳＲＰＧＧＰＲＳＡＷＲＲＲＲＡＴＬＡＡＷＴＧＰＡＲＡＡＴＡＴＴＴＲＡＡＡＲＲＰＶＡＡＲＴＰＡＲＬＡＡＴＳＲＡＴＨＡＲＴＷＰＭＡＳＰＲＡＳＶＴＴＣＴＣＡＦＲＡＡＲＡＳＰＡＬＳＳ。
【００２７】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＰＲＳＡＰＲＡＡＡＡＰＡＲＡＰＡＡＡＡＶＡＣＡＣＣＰＮＳＡＰＤＦＦＭＶＣＧＧＨＶＲＳＬＡＧＫＲＬＦＳＳＰＰＲＰＡＣＳＧＰＮＤＬＲＳＳＧＶＳＧＧＡＶＲＰＡＡＲＴＲＲＲＡＱＧＥＶＥＥＥＡＳＣＧＥＫＧＲＲＴＡＥＲＭＧＰＶＡＡＡＲＡＧＬＤＡＡＷＡＲＲＣＥＶＰＫＶＴＴＩＰＴＲＱＰＲＡＰＡＲＰＧＡＰＲＲＩ。
【００２８】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＰＫＷＲＬＡＷＰＫＱＴＲＡＳＳＣＧＬＳＬＰＳＩＳＣＡＳＳＣＳＡＳＲＮＧＧＤＲＣＳＬＲＴＴＴＴＲＨＴＲ。
【００２９】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＳＶＷＴＦＬＫＣＲＧＮＳＳＬＬＫＮＬＬＱＶＫＶＫＡＥＬＬＬＬＣＬＬＶＴＨＳＬＷＳＳＴＷＳＰＰＧＶＡＡＶＲＳＡＳＴＶＰＥＥＮＣＳＧＳＫＬＹＶＣＶＡＫＳＭＮＳＰＳＭＬＬＤＳＥＭＴＷＰＬＳＳＬＳＫＡＨＷＲＶＶＬＭＲＳＤＬＧＲＳＳＴＶＩＰＫＳＥＶＳＴＡＬＣＳＬＧＬＱＬＮＭＡＳＰＳＲＡＲＦＰＱ。
【００３０】
本発明のその他の実施態様は、以下のアミノ酸配列からなるポリペプチドに関する：
ＭＡＳＡＡＧＥＰＦＳＭＹＬＡＳＡＡＡＡＬＣＴＰＴＡＳＡＲＫＡＲＧＬＲＴＥＰＬＤＥＶＬＡＲＧＧＰＡＡＳＴＬＷＣＲＣＲＬＷＰＫＡＳＬＹＰＧＡＲＫＰＣＬＡＡＳＧＳＤＳＳＴＳＧＧＳＡＴＤＴＧＰＤＬＴＰＷＫＥＶＤＳＤＬＳＡＳＭＱＬＬＭＩＷＬＴＬＳＴＳＬＡＭＶＥＩＳＡＴＥＬＷＬＳＧＰＧＲＰＳＳＱＳＬＲＳＧＧＳＰＶＲＴＳＭ。
【００３１】
また本発明の実施態様は、配列番号１〜８で示されるアミノ酸配列またはそれらのアミド、エステルまたはそれらの塩を含むポリペプチド鎖をコードする、配列番号９〜１６に記載のヌクレオチド塩基配列を含むＤＮＡも提供する。
【００３２】
本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号９に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３３】
本発明は、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる段落１で説明されているポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする、配列番号１０に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３４】
本発明のその他の実施態様は、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１１に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３５】
本発明のその他の実施態様は、配列番号４に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１２に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３６】
本発明のその他の実施態様は、配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド
鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１３に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３７】
本発明のその他の実施態様は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１４に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３８】
本発明のその他の実施態様は、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１５に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００３９】
本発明のその他の実施態様は、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩をコードする配列番号１６に記載のヌクレオチド塩基配列からなるＤＮＡに関する。
【００４０】
本発明は、ポリペプチドの製造方法に関し、ここにおいて前記方法は、アミノ酸を提供する工程、固相または液相合成によって該アミノ酸を合成する工程、ポリペプチドを抽出する工程、該ポリペプチドを精製する工程を含む。
【００４１】
また本発明は、ペプチド、前駆体またはそれらの塩の製造方法も提供し、本方法は、アミノ末端を構成するアミノ酸またはペプチド、および、カルボキシル末端を構成するアミノ酸またはペプチドを縮合させること（それに続いて、任意に分子内ジスルフィド結合を形成してもよい）を含む。
【００４２】
本発明の実施態様は、活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含む医薬組成物を提供し、ここにおいて前記ポリペプチド鎖は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなる。
【００４３】
また本発明は、活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含む医薬組成物の使用にも関し、ここにおいて前記ポリペプチド鎖は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなり、さらに、治療用ポリペプチド、薬物介入のための標的、関連する標的を発見するためのリガンド、病気をモニターするためのバイオマーカーとして用いることができる。
【００４４】
本発明はまた、配列番号１〜８で定義されるアミノ酸配列のうち少なくとも１種を含む、心臓血管疾患、ホルモン産生腫瘍を治療または予防するための物質、ホルモン分泌阻害剤、腫瘍増殖阻害剤の製造における本発明のペプチド、前駆体または塩の使用を提供する。
【００４５】
また本発明の実施態様は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列を含む段落１に記載のポリペプチド鎖、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩に対する抗体も提供する。本発明の抗体は、体液または組織のようなサンプル中に存在する本発明のポリペプチドを検出することにも使用できる。また、精製中に各分画中の本発明のポリペプチドを検出したり、または、試験細胞中の本発明のポリペプチドの挙動を解析したりするための、本発明のポリペプチドを精製するための抗体のカラムを製造するためにも使用できる。
【００４６】
本明細書で用いられる用語「ポリペプチド」は、共有結合で連結されたアミノ酸からなるあらゆるポリマーを意味するものと解釈され、この用語は、全長タンパク質の部分またはフラグメントもその範囲内に含み、このような部分またはフラグメントとしては、例えば、ペプチド、オリゴペプチド、および、少なくとも２個のアミノ酸からなるより短いペプチド配列、より具体的には、少なくとも約５個またはそれより多くのアミノ酸残基からなるより短いペプチド配列が挙げられる。
【００４７】
用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合で連結された１個またはそれ以上のアミノ酸を含む全ての成分を含む。加えて、この用語は修飾されたアミノ酸のポリマーもその範囲内に含み、このようなポリマーとしては、翻訳後修飾されたアミノ酸が挙げられ、例えば、これらに限定されないが、塩基性ペプチド主鎖を効果的に改変するグリコシル化、リン酸化、アセチル化および／または硫酸化反応などの化学修飾によって翻訳後修飾されたアミノ酸が挙げられる。従って、ポリペプチドは、天然に存在するタンパク質から誘導されてもよく、具体的には、ＣＮＢｒまたはプロテアーゼのような試薬を用いた、例えば、なかでもトリプシンまたはキモトリプシンを用いた化学的または酵素的な切断により全長タンパク質から誘導されてもよい。あるいは、このようなポリペプチドは、周知のペプチド合成方法を用いて化学合成により誘導したものでもよい。また、アミノ酸配列の変異体（本明細書では、ポリペプチド変異体と称する）も「ポリペプチド」の定義の範囲内である。これらは、天然に存在するアミノ酸配列中に、前記ポリペプチドの少なくとも１つの必須の特性（例えばその生物活性）を変更しないような１種またはそれ以上の、好ましくは保存的な、アミノ酸置換、欠失または挿入を含んでいてもよい。このようなポリペプチドは、化学的なポリペプチド合成によって合成してもよい。保存的アミノ酸置換は当業界公知である。例えば、天然型のタンパク質の１個またはそれ以上のアミノ酸残基を、類似の電荷、サイズまたは極性を有するアミノ酸残基で保存的に置換することができ、この場合、得られたポリペプチドは、本明細書において説明されているような機能的な能力を保持している。このような置換を作製するルールは周知である。より具体的には、保存的アミノ酸置換は、一般的に、それらの側鎖において関連するアミノ酸群内で起こるものである。遺伝学的にコードされたアミノ酸は、一般的に、４つのグループに分けられる：（１）酸性＝アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性＝リシン、アルギニン、および、ヒスチジン；（３）非極性＝アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、および、トリプトファン；および、（４）電荷を有さない極性＝グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、および、チロシン。また、フェニルアラニン、チロシン、および、トリプトファンも、芳香族アミノ酸として一緒に分類される。いずれかの具体的なグループ内での１またはそれ以上の置換、例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンでの置換、あるいは、アスパラギン酸のグルタミン酸での置換、または、スレオニンのセリンでの置換、または、その他のあらゆるアミノ酸残基の構造的に関連するアミノ酸残基での置換は、一般的に、得られたポリペプチドの機能に有意ではない作用しか示さないと予想される。
【００４８】
自然には存在しないような修飾を受けたアミノ酸配列の変異体も「ポリペプチド」の定義の範囲内であり、このような修飾としては、例えば、これらに限定されないが、アミドおよび非アミド結合による保護、カルボキシル化、および、誘導体化、加えて共有結合および非共有結合の修飾が挙げられる。
その機能性ドメインに相当するアミノ酸配列が存在するためにその生物活性が予想可能なペプチドも、用語「ポリペプチド」の定義の範囲に含まれる。また、そのアミノ酸配列の解析によってその生物活性を予想することができなかったペプチドも用語「ポリペプチド」に包含される。
【００４９】
アミノ酸は、アミン官能基とカルボン酸官能基との両方を含むあらゆる分子である。アミノ酸残基は、アミノ酸単量体を連結させてタンパク質鎖にするペプチド結合、化学結合の形成中に水分子（窒素側からのＨ+、および、カルボン酸側からのＯＨ-）が失われた後に残ったアミノ酸成分である。各タンパク質は、それ自身固有のアミノ酸配列を有しており、これは一次構造として知られている。アルファベットの文字が様々な方法で繋がって
エンドレスの様々な言葉を形成することができるのと同じように、アミノ酸は、様々な配列で一緒に連結して、多様なタンパク質を形成することができる。各タンパク質の固有の形状が、体内でのそれらの機能を決定する。
【００５０】
前駆体とは、その他の、通常はより活性な、または、成熟した物質が形成される物質である。タンパク質前駆体は、翻訳後修飾によって活性型に変換することができる不活性なタンパク質（またはペプチド）である。タンパク質に関する前駆体の名称は、接頭語としてｐｒｏまたはｐｒｅｐｒｏが付けられることが多い。前駆体は、後に生じるタンパク質がもしかすると有害な可能性があるが、緊急的に、および／または、大量に利用可能にする必要があるような場合、生物によって利用されることが多い。
【００５１】
本発明のポリペプチド、前駆体またはそれらの塩は、ホルモン活性を有する。それゆえに、本発明のポリペプチド、前駆体および塩は、薬物、例えば治療用ポリペプチド、関連する標的（例えばＧＰＣＲ）を発見するためのリガンド、薬物介入のための標的（例えば、モノクローナル抗体など、受容体フラグメントのための標的）、病気をモニターするためのバイオマーカー（体液中のペプチドフラグメントを検出することができるツール抗体と組み合わせて）、プロテインキナーゼ阻害剤および基質、Ｔ細胞エピトープ、受容体結合部位のペプチドミモトープ、発現レベルを測定することができるバイオマーカーとして有用である。
本発明のペプチドまたは前駆体をコードするＤＮＡは、例えば、遺伝子治療、または、心臓血管疾患、ホルモン産生腫瘍、糖尿病、胃潰瘍などの治療または予防のための物質、ホルモン分泌阻害剤、腫瘍増殖阻害剤、神経系の活性化剤などとして有用である。さらに、本発明のＤＮＡは、心臓血管疾患、ホルモン産生腫瘍、糖尿病、胃潰瘍などのような病気の遺伝子診断のための物質として有用である。
【００５２】
ベクターは、細胞へＤＮＡのような遺伝物質を運搬するための運搬体である。例えば、具体的にはＤＮＡが細胞の形質転換に用いられる場合、ＤＮＡそれ自身がベクターとみなされることもある。この意味で、ベクターは、ＤＮＡコンストラクト、例えば複製起点を含むプラスミドまたは細菌人工染色体である。適切な複製開始点は、細胞に細胞の染色体と共にコンストラクトをコピーさせ、そのコンストラクトはその後代に受け継がれる。ベクターで形質転換した単細胞は、細胞の培養物全体に増殖すると予想され、これらの細胞はいずれも、ベクター、加えてコンストラクト内に結合した全ての遺伝子を含む。精製技術によって細胞からコンストラクトを抽出することができるために、ベクターでの形質転換は、少数のＤＮＡ分子をより大量の分子にする方法の一つである。ベクターとしては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から誘導されたプラスミド（例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１２、ｐＵＣ１３）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から誘導されたプラスミド（例えば、ｐＵＢ１１０、ｐＴＰ５、ｐＣ１９４）、酵母から誘導されたプラスミド（例えば、ｐＳＨ１９、ｐＳＨ１５）、バクテリオファージ、例えば［ラムダ］ファージ、加えて動物ウイルス、例えばレトロウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルスなどが挙げられる。
【００５３】
本発明のペプチド、前駆体または塩に対する抗体は、本発明のペプチド、前駆体または塩を特異的に認識することができる。また、精製中に各分画中の本発明のポリペプチドを検出したり、または、試験細胞中の新規のポリペプチドの挙動を解析したりするための、本発明のポリペプチドを精製するための抗体のカラムを生産するためにも使用できる。従ってこれらは、試験溶液中で本発明のペプチドまたは等価体を分析することにも使用できる。
【実施例】
【００５４】
結果
１．０ コンピュータープログラムの説明：
１．１ シグナルＰバージョン２．０
目的：このプログラムをカットオフスコア０．９８で用いて可能性のあるシグナル配列を検出した。シグナルＰバージョン２．０によって、異なる生物由来のアミノ酸配列におけるシグナルペプチドの切断部位の存在および位置を予想した：この方法は、数種の人工神経回路網および隠れマルコフモデルの組み合わせに基づいて、切断部位の予想、および、シグナルペプチド／非シグナルペプチドの予想も含む。
【００５５】
１．２ ＴＭＨＭＭバージョン２．０
目的：このプログラムを用いて、タンパク質配列中の可能性のある膜貫通領域を定義した。ＴＭＨＭＭバージョン２．０は、タンパク質中の膜貫通ヘリックスを予想するために用いられる。Ｎ末端領域中の予想されたＴＭセグメントは、場合によってはシグナルペプチドになることもある。
【００５６】
１．３ ＰｒｏＰバージョン１．０
目的：このプログラムを用いて、タンパク質配列中の可能性のある切断部位を検出した。スコア０．０９を用いた。このプログラムは、神経回路網一式を用いて真核性のタンパク質配列におけるアルギニンおよびリシンプロペプチド切断部位を予想するものである。フューリン特異的な予想がデフォルトである。一般的な前駆タンパク質のコンバターゼ（ＰＣ）の予想を行うことも可能である。このプログラムは、シグナルペプチドの切断部位の存在および位置を予想するシグナルＰプログラムと統合されている。
【００５７】
１．４ インタープロスキャン（ＩｎｔｅｒＰｒｏＳｃａｎ）と組み合わせたインタープロバージョン１２
インタープロは、既知のタンパク質で見出された同定可能な特徴を未知のタンパク質配列に適用することができる、タンパク質ファミリー、ドメインおよび機能的な部位のデータベースである。１．５インタープロＳｃａｎは、アミノ酸配列をインタープロデータベースと比較するのに用いられるプログラムである。
【００５８】
１．６ ＢＬＡＳＴバージョン２．２．９
ベーシック・ローカル・アライメント・サーチ・ツール（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ；ＢＬＡＳＴ）は、配列間の局所的な類似性を示す領域を発見するものである。このプログラムは、ヌクレオチドまたはタンパク質配列を配列データベースと比較し、マッチングの統計的有意性を計算する。ＢＬＡＳＴを用いて、配列間の機能的な関係および進化の関係を推論したり、加えて、遺伝子ファミリーに属するもの同定を補助したりすることができる。ＢＬＡＳＴは、それが生産するアライメントの統計的有意性を決定するために、カーリン−アルチュール（Ｋａｒｌｉｎ−Ａｌｔｓｃｈｕｌ）の統計を使用する。基本のアルゴリズムは、多数の方法で実施することができ、さらに、様々なコンテキスト、例えば、直鎖状のＤＮＡおよびタンパク質配列データベース検索、モチーフ検索、遺伝子同定検索に適用することができ、さらに、長いＤＮＡ配列における複数の類似性領域の解析にも適用することができる。その柔軟性および数学的な解析の取り扱いやすさに加えて、ＢＬＡＳＴは、現存する匹敵する感度の配列比較ツールよりも一桁高いレベルで速い。
【００５９】
上述したこれら全てのプログラムは、パブリックドメインのインターネットより入手可能である。
【００６０】
本発明のホルモンペプチドの生物学的な役割を、発現プロファイル試験を用いて試験した（図１〜６）。数種の組織に関して、ホルモンペプチドの存在が個々の配列に応じて異なっていることが実証された。異なる組織における本発明に係るホルモンペプチドの差異
的な発現は、それらの重要な生物学的な役割に関する強力な指標とみなされる。１種または数種の本発明のホルモンペプチドの量を増加させたり、または、減少させたりしてそれらホルモンペプチドの濃度を調節することによって、低濃度または高濃度の１種または数種のこのようなホルモンペプチドを必要とする病気（例えば、心臓血管疾患、代謝病、精神疾患、癌、ウイルス、細菌または酵母によって引き起こされる感染など）の治療に強い影響を与える可能性がある。
【００６１】
２．０ 発現プロファイル
２．１）組織発現解析を行うこと
組織発現解析をＴａｑＭａｎ遺伝子発現解析を用いて行った。
【００６２】
ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）は、医療および生物学系の研究所において、例えば遺伝性疾患の検出、遺伝的指紋の同定、感染症の診断、遺伝子クローニング、起源の試験、および、ＤＮＡのコンピューター解析などの様々な業務の利用される標準的な技術である。
【００６３】
定量ＰＣＲは、ＰＣＲ産物の量を（好ましくはリアルタイムで）迅速に測定するために用いられており、従って、開始時のＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはＲＮＡ量を定量的に測定するための間接的な方法である。これは、一般的に、配列が存在するか、または、存在しないのか、さらにその配列が存在する場合、サンプル中のコピー数がどれだけなのかを決定する目的で使用される。
【００６４】
本発明において遺伝子発現試験に用いられるプロトコールの説明：
サンプルの調製：
試験された組織からのＲＮＡサンプルを、様々な業者から購入した。
【００６５】
ＤＮアーゼによる消化：
全ての製品を、アンビオン（Ａｍｂｉｏｎ）から購入した。ＤＮＡ非含有のＤＮアーゼ処理を行い、除去試薬（１９０６）を用いた。ＲＮＡ（５０μｇ）を用いて、製造元のプロトコールに従ってＤＮアーゼによる消化を行った。
【００６６】
ｃＤＮＡ合成：
アプレラ（Ａｐｐｌｅｒａ）から、ｃＤＮＡに関する製品の逆転写酵素キット（Ｎ８０８０２３４）、ＲＮアーゼ阻害剤（Ｎ８０８０１１９）を購入した。ＲＮＡ（１０μｇ）からｃＤＮＡ合成を行った。
【００６７】
ＴａｑＭａｎ反応の設定：
ＰＣＲ関連製品をアプレラから購入した。各反応に、ＴａｑＭａｎユニバーサルＰＣＲマスターミックス（ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ）（４３０５７１９）を用いた。標的フォワードプライマー、標的リバースプライマー、標的プローブを、各遺伝子それぞれに関してＦＡＭで標識した（プライマー配列を示す表を参照）。ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ７９００（アプレラ）を用いて以下のＰＣＲ条件下でＰＣＲを行った：５０℃で２分間、９５℃で１０分間、９５℃で１５秒を４０サイクル、および、６０℃で１分間。ＰＣＲは、標準化のための内因性コントロールとしてＢ２Ｍを用いて、マルチプレックスＰＣＲとして設定した。
【００６８】
２．３）配列番号１に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図７）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図１にも示す（ただし違う様式で）：
【００６９】
【表１】
【００７０】
【表２】
【００７１】
２．４）配列番号２に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図８）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図２にも示す（ただし違う様式で）：
【００７２】
【表３】
【００７３】
【表４】
【００７４】
２．５）配列番号３に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図９）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図３にも示す（ただし違う様式で）：
【００７５】
【表５】
【００７６】
【表６】
【００７７】
２．６）配列番号４に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図１０）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図４にも示す（ただし違う様式で）：
【００７８】
【表７】
【００７９】
【表８】
【００８０】
２．７）配列番号５に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図１１）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図５にも示す（ただし違う様式で）：
【００８１】
【表９】
【００８２】
【表１０】
【００８３】
２．８）配列番号６に記載のペプチド配列をコードする遺伝子（図１２）に関して、以下の発現プロファイルが得られた。同様にこれらの結果を図６にも示す（ただし違う様式で）：
【００８４】
【表１１】
【００８５】
【表１２】
【００８６】
参考文献：
Henrik Nielsen, Jacob Engelbrecht, Soren Brunak and Gunnar von Heijne “Identification of prokaryotic and eukaryotic signal peptides and prediction of their cleavage sites”Protein Engineering, 10:1-6, 1997.
A. Krogh, B. Larsson, G. von Heijne and E. L. L. Sonnhammer.“Predicting transmembrane protein topology with a hidden Markov model: Application to complete genomes”Journal of Molecular Biology, 305(3):567-580, January 2001.
Peter Duckert, Soren Brunak and Nikolaj Blom,“Prediction of proprotein convertase cleavage sites”Protein Engineering, Design and Selection: 17: 107-112, 2004.
Strand, F.L. Neuropeptides: Regulators of physiological processes. (1999) MIT
Press.
Anderson, N.L. & Anderson, N.G. The human plasma proteome: history, character,
and diagnostic prospects. Mol. Cell. Proteomics, 2002 Nov;1(11): 845-67
Mulder NJ, Apweiler R, Attwood TK, Bairoch A, Bateman A, Binns D, Bradley P, Bork P, Bucher P, Cerutti L, Copley R, Courcelle E, Das U, Durbin R, Fleischmann W, Gough J, Haft D, Harte N, Hulo N, Kahn D, Kanapin A, Krestyaninova M, Lonsdale D, Lopez R, Letunic I, Madera M, Maslen J, McDowall J, Mitchell A, Nikolskaya AN, Orchard S, Pagni M, Ponting CP, Quevillon E, Selengut J, Sigrist CJ, Silventoinen V, Studholme DJ, Vaughan R, Wu CH. InterPro, progress and status in 2005. Nucleic Acids Res. 2005 Jan 1;33(Database issue):D201-5。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列、または、少なくとも１個のアミノ酸残基の欠失、置換または挿入によってそれらから誘導されたアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖、それらのアミドもしくはエステル、または、前記ペプチドの塩。
【請求項２】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＹＷＭＡＬＲＲＩＳＴＬＧＳＲＷＬＧＬＳＲＶＬＬＦＲＡＳＫＡＳＦＴＦＬＳＬＲＦＳＬＳＶＡＡＲＲＲＳＴＤＴＤＦＬＬＨＴＬＨＡＨＧＲＨＷＰＧＱＣＳＧＶＰＳＰＬＳＳＲＧＰＧＡＳＧＬＲＶＳＳＶＲＳ。
【請求項３】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＧＳＧＣＡＲＡＲＬＧＬＬＳＷＬＡＡＳＳＧＳＥＤＡＬＡＳＳＩＳＶＫＬＡＬＥＬＡＥＶＡＷＳＥＧＤＥＡＥＧＬＡＰＷＬＳＰＬＶＱＧＲＤＳＧＥＤＲＥＱＬＥＡＡＣＬＫＲＧＳＷＡＧＡＧＫＡＲＥＬＳＰＴＡＰＫＷＬＥＥＡＥＥＲＬＴＬＲＳＩＰＬ。
【請求項４】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＬＬＡＭＳＳＩＳＩＦＳＳＬＦＳＦＳＳＦＣＦＴＲＣＲＬＳＩＣＳＰＳＳＡＴＬＳＡＣＦＦＬＲＶＡＡＶＡＳＣＣＲＶＡＳＳＲＳＬＲＩＦＷＮＳＡＳＬＦＬＦＩＳＩＷＡＥＶＡＰＬＡＳＳＳＬＳＬＩＳＳＳＳＬＡＲＳＥＲＣＦＳＩＬＡＬＳＶＣＳＡＳＩＳＳＳＳＳＳＭＲＡ。
【請求項５】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＡＴＳＷＡＧＳＡＡＰＰＡＳＡＡＫＳＶＶＧＴＲＰＳＲＰＧＧＰＲＳＡＷＲＲＲＲＡＴＬＡＡＷＴＧＰＡＲＡＡＴＡＴＴＴＲＡＡＡＲＲＰＶＡＡＲＴＰＡＲＬＡＡＴＳＲＡＴＨＡＲＴＷＰＭＡＳＰＲＡＳＶＴＴＣＴＣＡＦＲＡＡＲＡＳＰＡＬＳＳ。
【請求項６】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＰＲＳＡＰＲＡＡＡＡＰＡＲＡＰＡＡＡＡＶＡＣＡＣＣＰＮＳＡＰＤＦＦＭＶＣＧＧＨＶＲＳＬＡＧＫＲＬＦＳＳＰＰＲＰＡＣＳＧＰＮＤＬＲＳＳＧＶＳＧＧＡＶＲＰＡＡＲＴＲＲＲＡＱＧＥＶＥＥＥＡＳＣＧＥＫＧＲＲＴＡＥＲＭＧＰＶＡＡＡＲＡＧＬＤＡＡＷＡＲＲＣＥＶＰＫＶＴＴＩＰＴＲＱＰＲＡＰＡＲＰＧＡＰＲＲＩ。
【請求項７】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＰＫＷＲＬＡＷＰＫＱＴＲＡＳＳＣＧＬＳＬＰＳＩＳＣＡＳＳＣＳＡＳＲＮＧＧＤＲＣＳＬＲＴＴＴＴＲＨＴＲ。
【請求項８】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＳＶＷＴＦＬＫＣＲＧＮＳＳＬＬＫＮＬＬＱＶＫＶＫＡＥＬＬＬＬＣＬＬＶＴＨＳＬＷＳＳＴＷＳＰＰＧＶＡＡＶＲＳＡＳＴＶＰＥＥＮＣＳＧＳＫＬＹＶＣＶＡＫＳＭＮＳＰＳＭＬＬＤＳＥＭＴＷＰＬＳＳＬＳＫＡＨＷＲＶＶＬＭＲＳＤＬＧＲＳＳＴＶＩＰＫＳＥＶＳＴＡＬＣＳＬＧＬＱＬＮＭＡＳＰＳＲＡＲＦＰＱ。
【請求項９】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＡＳＡＡＧＥＰＦＳＭＹＬＡＳＡＡＡＡＬＣＴＰＴＡＳＡＲＫＡＲＧＬＲＴＥＰＬＤＥＶＬＡＲＧＧＰＡＡＳＴＬＷＣＲＣＲＬＷＰＫＡＳＬＹＰＧＡＲＫＰＣＬＡＡＳＧＳＤＳＳＴＳＧＧＳＡＴＤＴＧＰＤＬＴＰＷＫＥＶＤＳＤＬＳＡＳＭＱＬＬＭＩＷＬＴＬＳＴＳＬＡＭＶＥＩＳＡＴＥＬＷＬＳＧＰＧＲＰＳＳＱＳＬＲＳＧＧＳＰＶＲＴＳＭ。
【請求項１０】
配列番号１〜８で示されるアミノ酸配列を含む請求項１に記載のポリペプチド鎖、または、それらのアミド、それらのエステルまたは塩をコードする、配列番号９〜１６に記載
のヌクレオチド塩基配列を含むＤＮＡ。
【請求項１１】
請求項１または２に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号９に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１２】
請求項１または３に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１０に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１３】
請求項１または４に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１１に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１４】
請求項１または５に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１２に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１５】
請求項１または６に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１３に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１６】
請求項１または７に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１４に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１７】
請求項１または８に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１５に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１８】
請求項１または９に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１６に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１９】
組換えベクターを製造するための請求項１０〜１８に記載のＤＮＡの使用であって、前記組換えベクターは：
１．請求項１０〜１８のいずれか一項に記載のＤＮＡ
２．請求項１９（ａ）に記載の組換えベクターを宿主細胞に導入すること、
を含む、上記使用。
【請求項２０】
請求項１に記載のポリペプチドの製造方法であって、前記方法は：
ｉ）前記アミノ酸を提供する工程、
ii）固相または液相合成によって前記アミノ酸を合成する工程、
１．ポリペプチドを抽出する工程、
iii）前記ポリペプチド精製する工程、
を含む、上記方法。
【請求項２１】
アミノ末端を構成するアミノ酸またはペプチド、および、カルボキシル末端を構成するアミノ酸またはペプチドを縮合させること、それに続いて、任意に分子内のジスルフィド結合を形成することを含む、請求項１に記載のペプチド、前駆体またはそれらの塩の製造方法。
【請求項２２】
活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含む医薬組成物であって、前記ポリペプチド鎖は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなる、上記組成物。
【請求項２３】
活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含み、ここにおいて前記ポリペプチド鎖は、配列番号１
〜８に記載のアミノ酸配列からなり、動脈硬化症、炎症、または、制御不能な細胞分裂の危険を高める生理学的な因子を変化させることができる、請求項２１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２４】
配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩を含む、請求項１に記載のポリペプチド鎖に対する抗体。
【請求項１】
配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列、または、少なくとも１個のアミノ酸残基の欠失、置換または挿入によってそれらから誘導されたアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖、それらのアミドもしくはエステル、または、前記ペプチドの塩。
【請求項２】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＹＷＭＡＬＲＲＩＳＴＬＧＳＲＷＬＧＬＳＲＶＬＬＦＲＡＳＫＡＳＦＴＦＬＳＬＲＦＳＬＳＶＡＡＲＲＲＳＴＤＴＤＦＬＬＨＴＬＨＡＨＧＲＨＷＰＧＱＣＳＧＶＰＳＰＬＳＳＲＧＰＧＡＳＧＬＲＶＳＳＶＲＳ。
【請求項３】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＧＳＧＣＡＲＡＲＬＧＬＬＳＷＬＡＡＳＳＧＳＥＤＡＬＡＳＳＩＳＶＫＬＡＬＥＬＡＥＶＡＷＳＥＧＤＥＡＥＧＬＡＰＷＬＳＰＬＶＱＧＲＤＳＧＥＤＲＥＱＬＥＡＡＣＬＫＲＧＳＷＡＧＡＧＫＡＲＥＬＳＰＴＡＰＫＷＬＥＥＡＥＥＲＬＴＬＲＳＩＰＬ。
【請求項４】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＬＬＡＭＳＳＩＳＩＦＳＳＬＦＳＦＳＳＦＣＦＴＲＣＲＬＳＩＣＳＰＳＳＡＴＬＳＡＣＦＦＬＲＶＡＡＶＡＳＣＣＲＶＡＳＳＲＳＬＲＩＦＷＮＳＡＳＬＦＬＦＩＳＩＷＡＥＶＡＰＬＡＳＳＳＬＳＬＩＳＳＳＳＬＡＲＳＥＲＣＦＳＩＬＡＬＳＶＣＳＡＳＩＳＳＳＳＳＳＭＲＡ。
【請求項５】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＡＴＳＷＡＧＳＡＡＰＰＡＳＡＡＫＳＶＶＧＴＲＰＳＲＰＧＧＰＲＳＡＷＲＲＲＲＡＴＬＡＡＷＴＧＰＡＲＡＡＴＡＴＴＴＲＡＡＡＲＲＰＶＡＡＲＴＰＡＲＬＡＡＴＳＲＡＴＨＡＲＴＷＰＭＡＳＰＲＡＳＶＴＴＣＴＣＡＦＲＡＡＲＡＳＰＡＬＳＳ。
【請求項６】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＰＲＳＡＰＲＡＡＡＡＰＡＲＡＰＡＡＡＡＶＡＣＡＣＣＰＮＳＡＰＤＦＦＭＶＣＧＧＨＶＲＳＬＡＧＫＲＬＦＳＳＰＰＲＰＡＣＳＧＰＮＤＬＲＳＳＧＶＳＧＧＡＶＲＰＡＡＲＴＲＲＲＡＱＧＥＶＥＥＥＡＳＣＧＥＫＧＲＲＴＡＥＲＭＧＰＶＡＡＡＲＡＧＬＤＡＡＷＡＲＲＣＥＶＰＫＶＴＴＩＰＴＲＱＰＲＡＰＡＲＰＧＡＰＲＲＩ。
【請求項７】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＰＫＷＲＬＡＷＰＫＱＴＲＡＳＳＣＧＬＳＬＰＳＩＳＣＡＳＳＣＳＡＳＲＮＧＧＤＲＣＳＬＲＴＴＴＴＲＨＴＲ。
【請求項８】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＳＶＷＴＦＬＫＣＲＧＮＳＳＬＬＫＮＬＬＱＶＫＶＫＡＥＬＬＬＬＣＬＬＶＴＨＳＬＷＳＳＴＷＳＰＰＧＶＡＡＶＲＳＡＳＴＶＰＥＥＮＣＳＧＳＫＬＹＶＣＶＡＫＳＭＮＳＰＳＭＬＬＤＳＥＭＴＷＰＬＳＳＬＳＫＡＨＷＲＶＶＬＭＲＳＤＬＧＲＳＳＴＶＩＰＫＳＥＶＳＴＡＬＣＳＬＧＬＱＬＮＭＡＳＰＳＲＡＲＦＰＱ。
【請求項９】
以下のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のポリペプチド鎖：ＭＡＳＡＡＧＥＰＦＳＭＹＬＡＳＡＡＡＡＬＣＴＰＴＡＳＡＲＫＡＲＧＬＲＴＥＰＬＤＥＶＬＡＲＧＧＰＡＡＳＴＬＷＣＲＣＲＬＷＰＫＡＳＬＹＰＧＡＲＫＰＣＬＡＡＳＧＳＤＳＳＴＳＧＧＳＡＴＤＴＧＰＤＬＴＰＷＫＥＶＤＳＤＬＳＡＳＭＱＬＬＭＩＷＬＴＬＳＴＳＬＡＭＶＥＩＳＡＴＥＬＷＬＳＧＰＧＲＰＳＳＱＳＬＲＳＧＧＳＰＶＲＴＳＭ。
【請求項１０】
配列番号１〜８で示されるアミノ酸配列を含む請求項１に記載のポリペプチド鎖、または、それらのアミド、それらのエステルまたは塩をコードする、配列番号９〜１６に記載
のヌクレオチド塩基配列を含むＤＮＡ。
【請求項１１】
請求項１または２に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号９に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１２】
請求項１または３に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１０に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１３】
請求項１または４に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１１に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１４】
請求項１または５に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１２に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１５】
請求項１または６に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１３に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１６】
請求項１または７に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１４に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１７】
請求項１または８に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１５に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１８】
請求項１または９に記載のポリペプチド鎖をコードする配列番号１６に記載のヌクレオチド塩基配列からなる、請求項１０に記載のＤＮＡ。
【請求項１９】
組換えベクターを製造するための請求項１０〜１８に記載のＤＮＡの使用であって、前記組換えベクターは：
１．請求項１０〜１８のいずれか一項に記載のＤＮＡ
２．請求項１９（ａ）に記載の組換えベクターを宿主細胞に導入すること、
を含む、上記使用。
【請求項２０】
請求項１に記載のポリペプチドの製造方法であって、前記方法は：
ｉ）前記アミノ酸を提供する工程、
ii）固相または液相合成によって前記アミノ酸を合成する工程、
１．ポリペプチドを抽出する工程、
iii）前記ポリペプチド精製する工程、
を含む、上記方法。
【請求項２１】
アミノ末端を構成するアミノ酸またはペプチド、および、カルボキシル末端を構成するアミノ酸またはペプチドを縮合させること、それに続いて、任意に分子内のジスルフィド結合を形成することを含む、請求項１に記載のペプチド、前駆体またはそれらの塩の製造方法。
【請求項２２】
活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含む医薬組成物であって、前記ポリペプチド鎖は、配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列からなる、上記組成物。
【請求項２３】
活性物質として、ポリペプチド鎖、または、それらの前駆体、または、製薬上許容できるアミド、エステルもしくは塩を含み、ここにおいて前記ポリペプチド鎖は、配列番号１
〜８に記載のアミノ酸配列からなり、動脈硬化症、炎症、または、制御不能な細胞分裂の危険を高める生理学的な因子を変化させることができる、請求項２１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２４】
配列番号１〜８に記載のアミノ酸配列、または、それらのアミド、エステルもしくはそれらの塩を含む、請求項１に記載のポリペプチド鎖に対する抗体。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【公表番号】特表２０１０−５１２７６３（Ｐ２０１０−５１２７６３Ａ）
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４１８３７（Ｐ２００９−５４１８３７）
【出願日】平成１９年１２月１２日（２００７．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０１０８４２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７４４２４
【国際公開日】平成２０年６月２６日（２００８．６．２６）
【出願人】（３９９０５０９０９）サノフィ−アベンティス (225)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年４月３０日（２０１０．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月１２日（２００７．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０１０８４２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０７４４２４
【国際公開日】平成２０年６月２６日（２００８．６．２６）
【出願人】（３９９０５０９０９）サノフィ−アベンティス (225)
【Ｆターム（参考）】
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