ペルオキシソーム生合成因子（Ｐｅｘ）タンパク質の活性を修正することで達成される、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）産生油性真核生物における総脂質画分中および油画分中のＰＵＦＡ量を増大させる方法。ＰＵＦＡ産生油性真核生物株中の染色体のＰｅｘ３遺伝子、Ｐｅｘ１０ｐ遺伝子またはＰｅｘ１６ｐ遺伝子の中断は、天然Ｐｅｘタンパク質が中断されていない親株と比較して、株の総脂質画分中および油画分中の、総脂肪酸％としておよび乾燥細胞重量％としてのＰＵＦＡ量の増大をもたらす。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
総脂質含量、総脂質画分、および油画分を有する油性真核生物における総脂肪酸質量％に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸の質量％を増大させる方法であって、
ａ）１）機能性多価不飽和脂肪酸生合成経路をコードする遺伝子；および
２）ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子の破壊；
を含む油性真核生物を備え、それによりＰＥＸ破壊生物を備えること：および
ｂ）ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子が破壊されていない油性真核生物における総脂質画分中または油画分中の総脂肪酸の質量％に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸の質量％を比較した場合、総脂質画分中または油画分中の総脂肪酸の質量％に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸の質量％を増大させる条件下で、ＰＥＸ破壊生物を生育させること
を含む、上記方法。
【請求項２】
油性真核生物の乾燥細胞質量に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸のパーセントを増大させる方法であって、
ａ）１）機能性多価不飽和脂肪酸生合成経路をコードする遺伝子；および
２）ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子の破壊；
を含む油性真核生物を備え、それによりＰＥＸ破壊生物を備えること：および
ｂ）ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子が破壊されていない油性真核生物における乾燥細胞質量に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸のパーセントと比較した場合、乾燥細胞質量に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸のパーセントを増大させる条件下で、ＰＥＸ破壊生物を生育させること
を含む、上記方法。
【請求項３】
ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子が破壊されていない油性真核生物における総脂質画分中または油画分中の総脂肪酸の質量％に対して多価不飽和脂肪酸の質量％を比較した場合、総脂肪酸の質量％に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸質量％の増大が少なくとも１．３である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸が、リノール酸、共役リノール酸、γ−リノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、ドコサテトラエン酸、ω−６ドコサペンタエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ω−３ドコサペンタエン酸、エイコサジエン酸、エイコサトリエン酸、ドコサヘキサエン酸、これらの水酸化またはエポキシ脂肪酸、Ｃ₁₈多価不飽和脂肪酸、Ｃ₂₀多価不飽和脂肪酸、およびＣ₂₂多価不飽和脂肪酸からなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸が多価不飽和脂肪酸の組み合わせからなり、組み合わせの質量％が総脂肪酸の質量％に対して増大する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
多価不飽和脂肪酸の組み合わせが、リノール酸、共役リノール酸、γ−リノレン酸、ジホモ−γ−リノレン酸、アラキドン酸、ドコサテトラエン酸、ω−６ドコサペンタエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸、ω−３ドコサペンタエン酸、エイコサジエン酸、エイコサトリエン酸、ドコサヘキサエン酸、これらの水酸化またはエポキシ脂肪酸、Ｃ₂₀多価不飽和脂肪酸の組み合わせ、Ｃ₂₀〜₂₂多価不飽和脂肪酸の組み合わせ、およびＣ₂₂多価不飽和脂肪酸の組み合わせからなる群から選択される、２つまたはそれ以上の多価不飽和脂肪酸の任意の組み合わせからなる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ＰＥＸ破壊生物における総脂質含量が、ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子が破壊されていない油性真核生物における総脂質含量と比較した場合、変化させられる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】
ＰＥＸ破壊生物が、油性性質を有するヤロウィア属、カンジダ属、ロドトルラ属、ロドスポリジウム属、クリプトコッカス属、トリコスポロン属、リポミセス属、クサレケカビ属、スラウストキトリウム属、シゾキトリウム属、およびサッカロミセス属からなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項９】
多価不飽和脂肪酸生合成経路が、Δ９デサチュラーゼ、Δ１２デサチュラーゼ、Δ６デサチュラーゼ、Δ５デサチュラーゼ、Δ１７デサチュラーゼ、Δ８デサチュラーゼ、Δ１５デサチュラーゼ、Δ４デサチュラーゼ、Ｃ_14/16エロンガーゼ、Ｃ_16/18エロンガーゼ、Ｃ_18/20エロンガーゼ、Ｃ_20/22エロンガーゼ、およびΔ９エロンガーゼからなる群から選択される酵素をコードする遺伝子を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１０】
ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子の破壊が、タンパク質のＣ末端部分をコードする遺伝子の一部の欠失および遺伝子ノックアウトからなる群から選択される欠失を含んでなる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
ペルオキシソーム生合成因子タンパク質が、Ｐｅｘ１ｐ、Ｐｅｘ２ｐ、Ｐｅｘ３ｐ、Ｐｅｘ３Ｂｐ、Ｐｅｘ４ｐ、Ｐｅｘ５ｐ、Ｐｅｘ５Ｂｐ、Ｐｅｘ５Ｃｐ、Ｐｅｘ５／２０ｐ、Ｐｅｘ６ｐ、Ｐｅｘ７ｐ、Ｐｅｘ８ｐ、Ｐｅｘ１０ｐ、Ｐｅｘ１２ｐ、Ｐｅｘ１３ｐ、Ｐｅｘ１４ｐ、Ｐｅｘ１５ｐ、Ｐｅｘ１６ｐ、Ｐｅｘ１７ｐ、Ｐｅｘ１４／１７ｐ、Ｐｅｘ１８ｐ、Ｐｅｘ１９ｐ、Ｐｅｘ２０ｐ、Ｐｅｘ２１ｐ、Ｐｅｘ２１Ｂｐ、Ｐｅｘ２２ｐ、Ｐｅｘ２２ｐ様、およびＰｅｘ２６ｐからなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
ペルオキシソーム生合成因子は、破壊が遺伝子ノックアウト、またはタンパク質のＣ₃ＨＣ₄亜鉛リングフィンガーモチーフのＣ末端部分をコードする遺伝子の一部の欠失である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
総脂肪酸の質量％に対して少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸の質量％の増大を有し、増大が請求項１に記載の方法によって得られる、ＰＥＸ破壊生物における油画分または総脂質画分。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法によって、総脂肪酸の質量％に対して質量％が増大している、ＰＥＸ破壊生物の少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸の食品、飼料としての、または産業上の利用における使用。
【請求項１５】
破壊が、Ｐｅｘ３ｐ、Ｐｅｘ１０ｐ、およびＰｅｘ１６ｐからなる群から選択される、ペルオキシソーム生合成因子タンパク質をコードする天然遺伝子中で起きる、ＰＥＸ破壊ヤロウィア・リポリティカ。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図１０】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【公表番号】特表２０１０−５３９９８５（Ｐ２０１０−５３９９８５Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２８１５０（Ｐ２０１０−５２８１５０）
【出願日】平成２０年１０月３日（２００８．１０．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８６７１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０４６２４８
【国際公開日】平成２１年４月９日（２００９．４．９）
【出願人】（３９００２３６７４）イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー (2,692)
【氏名又は名称原語表記】Ｅ．Ｉ．ＤＵ　ＰＯＮＴ　ＤＥ　ＮＥＭＯＵＲＳ　ＡＮＤ　ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】