癌治療の効果を高め、その副作用を軽減する方法および栄養製剤
本発明は、化学療法および／または放射線療法を組み合わせて、患者を保護し、かつ癌細胞の感受性を高める方法に関する。より詳しくは、本発明は、患者の慢性的な体重減少を引き起こさずに癌の増殖を抑制し、正常な細胞、組織および臓器を化学療法および／または放射線療法から保護し、かつ低用量、通常用量、高用量の化学療法に対する癌細胞の感受性を高めることができる、栄養学的方法および処方を提供する。それらの方法のいくつかはまた、化学療法を行わない場合でさえも癌の成長を妨げる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２００９年１０月２２日出願の米国仮特許出願第６１／２５４，１５４号の利益を主張するものであり、その開示内容はすべて参照することによりここに組み込まれる。
【０００２】
本発明は、一般に、食事療法および癌の治療に関する。より詳しくは、本発明は、正常な細胞を保護しつつ、癌細胞の化学療法薬に対する感受性を高めるために使用することができる方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
化学療法は、様々な悪性腫瘍と診断された患者の生存を延長させることができる。しかしながら、正常な細胞および組織に対する有害な副作用のために、化学療法の用量の強度、頻度および効能が制限されている。例えば、広く処方されている抗癌剤のドキソルビシンおよびシスプラチンは、それぞれに現れる心毒性および腎毒性によって、その治療能力を完全に発揮することが制限されている（Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ，Ｓ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １９８８；Ｈａｌｅ，Ｊ．Ｐ．、Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ １９９４；Ｄｏｂｙａｎ，Ｄ．Ｃ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅ．Ｔ１９８０；Ｆｉｌｌａｓｔｒｅ，Ｊ．Ｐ．、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ｌｅｔ １９８９）。したがって、悪性細胞の殺滅に妥協せずに正常な細胞を選択的に保護することにより、望ましくない毒性を減少させることは、癌治療を促進するための有望な戦略になる。
【０００４】
最近、培養細胞、および神経芽細胞腫のマウスにおいて、高用量の化学療法に対し、癌細胞を除き正常な細胞のみを特異的に保護することができる、絶食に基づく治療介入が報告された（Ｒａｆｆａｇｈｅｌｌｏ，Ｌ．、ＰＮＡＳ ２００８）。神経芽細胞腫異種移植マウスモデルでは、マウスに、エトポシド治療前の４８時間、水のみを与えた。アドリブ摂食（ａｄ ｌｉｂ ｆｅｄ）のマウスでは、高用量のエトポシドが５０％の致死率をもたらしたのに対して、絶食は、薬の化学毒性から保護しただけでなく、神経芽細胞腫の転移に依存する死亡も遅延させた（Ｒａｆｆａｇｈｅｌｌｏ，Ｌ．、ＰＮＡＳ ２００８）。
【０００５】
酵母から哺乳動物に至る生命体においては、カロリー制限がストレス耐性を高め、寿命を延ばすことが知られている。カロリー制限はまた、癌の増殖を遅らせることが示されているが、その効果が小さいうえに、癌患者には有害かつ持続することが非常に困難な長期の体重減少が求められるため、化学療法と併用することはできず、また単独で適用することもできない。
【０００６】
したがって、少なくともこれらの理由のために、治療の助けになるとともに、化学療法の副作用を軽減する食事療法を効果的に組み込んだ、さらなる癌の治療法が要望されている。
【発明の概要】
【０００７】
このような先行技術の背景に対し、癌の増殖または癌の症状を軽減する方法を提供する。本実施形態の方法は、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を提供するステップを含む。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪、好ましくは一不飽和脂肪から得る。その後、患者に、第２の所定期間、第２の食を提供する。第２の食では、患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与える。その後、体重の回復と、正常な細胞および臓器の最適な回復と健康に必要な必須栄養素の補充を最適化する第３の食を、患者に提供する。本実施形態は、正常な細胞の保護と、癌細胞の増殖の阻害および抑制に有効な、短期の改変食事療法プロトコールを提供する。このプロトコールと改変食事療法は、患者の長期の体重減少を引き起こすことなく、それらの効果を促進するであろう。
【０００８】
他の実施形態では、化学療法薬に対する癌の感受性を高める方法を提供する。この方法は、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を提供するステップを含む。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る。その後、患者に、第２の所定期間、第２の食を提供する。第２の食では、患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与える。その後、体重の回復と、正常な細胞および臓器の最適な回復と健康に必要な必須栄養素の補充を最適化する第３の食を、患者に提供する。本実施形態は、正常な細胞の保護と、癌の化学療法から／への感受性（特異的ストレス耐性）の増大に有効な、短期の改変食事療法プロトコールを提供する。このプロトコールと改変食事療法は、患者の長期の体重減少を引き起こすことなく、それらの効果を促進するであろう。
【０００９】
絶食は、それまでの化学療法サイクルにより衰弱した、あるいは、ひどく痩せてしまっている癌患者には潜在的に有害であるとする、腫瘍学者が一般に認めている考え方からすれば、これらの結果は興味深い。
【００１０】
さらに他の実施形態では、放射線治療に対する癌の感受性を高める方法を提供する。この方法は、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を提供するステップを含む。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る。その後、患者に、第２の所定期間、第２の食を提供する。第２の食では、患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与える。その後、体重の回復と、正常な細胞および臓器の最適な回復と健康に必要な必須栄養素の補充を最適化する第３の食を、患者に提供する。本実施形態は、正常な細胞の保護と、癌の放射線療法から／への感受性の増大（ストレス耐性の差）に有効な、短期の改変食事療法プロトコールを提供する。このプロトコールと改変食事療法は、患者の長期の体重減少を引き起こすことなく、それらの効果を促進するであろう。
【００１１】
他の実施形態では、単独で投与されたときに癌の増殖を遅延させ、あるいは、化学療法および／または放射線療法からホストを保護し、かつ癌細胞の化学療法および／または放射線療法に対する感受性を高めるための、特定の範囲のタンパク質、必須アミノ酸、炭水化物、脂肪、ビタミン、ミネラルおよび必須脂肪酸を含有する製剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、症例１における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図１Ａは好中球；（Ｂ）図１Ｂはリンパ球；（Ｃ）図１Ｃは白血球、ＷＢＣ、（Ｄ）図１Ｄは血小板；（Ｅ）図１Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図１Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図１Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｈ）図１Ｈは体重、黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示す。
【図２】図２は、症例１における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、２サイクルの化学療法単独の平均値と２サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図３】図３は、症例２における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、化学療法単独３サイクルの平均値と５サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図４】図４は、症例３における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図４Ａは好中球；（Ｂ）図４Ｂはリンパ球；（Ｃ）図４Ｃは白血球、ＷＢＣ、（Ｄ）図４Ｄは血小板；（Ｅ）図４Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図４Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図４Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｈ）図４Ｈは前立腺特異抗原（ＰＳＡ）値、患者は垂直の破線で示した９０日間のアビラテロンアセテート（ＣＹＰ１７阻害薬）トライアルに登録され、また、アビラテロンアセテートによる治療の期間を除いて、化学療法の日にＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与され、黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、矢印はテストステロンの塗布（クリーム、１％）を示し、臨床検査値の正常範囲は水平の破線で示す。
【図５】図５は、症例３における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、５サイクルの化学療法単独の平均値と７サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図６】図６は、症例４における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図６Ａは好中球；（Ｂ）図６Ｂはリンパ球；（Ｃ）図６Ｃは白血球、ＷＢＣ、（Ｄ）図６Ｄは血小板；（Ｅ）図６Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図６Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図６Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示す。
【図７】図７は、症例４における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、５サイクルの化学療法単独の平均値と１サイクルの化学療法−絶食治療を表す。
【図８】図８は、症例５における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、１サイクルの化学療法単独（第１サイクル）と５サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図９】図９は、症例６における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図９Ａは好中球；（Ｂ）図９Ｂはリンパ球；（Ｃ）図９Ｃは白血球、ＷＢＣ；（Ｄ）図９Ｄは血小板；（Ｅ）図９Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図９Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図９Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示し、患者は７１日目に赤血球の輸血（３単位）を受け、また、図示したようにＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与された。
【図１０】図１０は、症例６における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフである。
【図１１】図１１は、症例７における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図１１Ａは好中球；（Ｂ）図１１Ｂはリンパ球；（Ｃ）図１１Ｃは白血球、ＷＢＣ；（Ｄ）図１１Ｄは血小板；（Ｅ）図１１Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図１１Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図１１Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｈ）図１１Ｈは前立腺特異抗原（ＰＳＡ）値、黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、矢印はアビラテロンの投与を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示し、患者はまた、図示したように、Ｇ−ＣＳＦ Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与された。
【図１２】図１２は、症例７における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、８サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１３】図１３は、症例８における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、４サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１４】図１４は、症例９における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、４サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１５】図１５は、症例１０における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図１５Ａは好中球；（Ｂ）図１５Ｂはリンパ球；（Ｃ）図１５Ｃは白血球、ＷＢＣ；（Ｄ）図１５Ｄは血小板；（Ｅ）図１５Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図１５Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図１５Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｇ）図１５Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ、黒三角形は化学療法の日を示す；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示し、患者はまた、図示したようにＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与された。
【図１６】図１６は、症例１０における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、６サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１７】図１７は、絶食を併用した、または併用しなかった化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフである。（Ａ）図１７Ａのデータは、この研究の患者全員から報告されたＣＴＣグレードの平均値を表し；アドリブ摂食下の１８サイクルの化学療法を、４６サイクルの化学療法−絶食治療と比較し；（Ｂ）図１７Ｂのデータは、絶食および非絶食のサイクルのマッチングから得られたＣＴＣグレードの平均値を示し；６人の患者が化学療法単独、または化学療法−絶食治療を受け、最も近い２つのサイクルからの自己申告による副作用を互いに比較し、マッチングしたサイクルからのみ統計的分析を行い、データを平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表し、Ｐ値を対でない両側ｔ−検定により計算した（＊，Ｐ＜０．０５）。
【図１８】図１８は、マウス乳癌細胞（４Ｔ１−ｌｕｃ）を９６ウェル細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させた。その後、図１８Ａは、照射（５Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１８Ｂは、照射（１０Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１８Ｃは、生存率をＭＴＴ法により求め、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により統計的分析を行った実験の結果を示した、棒グラフである。
【図１９】図１９は、マウスグリオーマ（ＧＬ２６）細胞を９６ウェル細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させ、その後、図１９Ａは、照射（５Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１９Ｂは、照射（１０Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１９Ｃは、生存率をＭＴＴ法により求め、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により統計的分析を行った実験の結果を示した、棒グラフである。
【図２０】図２０は、体重２０〜２５ｇのメスのＢＡＬＢ／ｃマウスに、同系の乳癌細胞（４Ｔ１−ｌｕｃ；２×１０５細胞／マウス）を皮下注射したところ、１３日目には腫瘍が３００〜５００ｍｍ３まで著しく進んでおり、照射（ＩＲ；５Ｇｙ）前の４８時間、マウスを絶食させる治療を開始し、１週間後、ＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）の第２のサイクルを行い、毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定により統計的分析を行った実験をプロットしたものである（＊ｐ＜０．０５）。
【図２１】図２１は、体重２５〜３０ｇのメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに、同系のグリオーマ癌細胞（ＧＬ２６；３×１０５細胞／マウス）を皮下注射したところ、２７日目には腫瘍が５００〜１０００ｍｍ３まで著しく進んでおり、照射（ＩＲ；７．５Ｇｙ）前の４８時間、マウスを絶食させる治療を開始し、１週間後、ＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）の第２のサイクルを行い、毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定により統計的分析を行った実験をプロットしたものである（＊ｐ＜０．０５）。
【図２２】図２２は、絶食が腫瘍の化学療法に対する感受性を高めることを示すプロットであり、特に、マウスの（Ａ）図２２Ａは乳癌（４Ｔ１）、（Ｂ）図２２Ｂはメラノーマ（Ｂ１６）および（Ｃ）図２２Ｃはグリオーマ（ＧＬ２６）の皮下腫瘍の進行を、４８時間の各絶食サイクルの前後における腫瘍サイズの成長百分率で示している。
【図２３】図２３は、（Ａ〜Ｃ）図２３Ａ〜Ｃは皮下性および（Ｄ）図２３Ｄは転移性癌のマウスモデルにおいて、４８〜６０時間の絶食による体重の減少が、通常の給餌再開後、容易に回復したことを示すプロットである：（Ａ）図２３Ａはマウス乳癌（４Ｔ１）罹患ＢＡＬＢ／ｃマウス、（Ｂ）図２３Ｂはマウスメラノーマ（Ｂ１６）罹患Ｃ５７ＢＬマウス、および（Ｃ）図２３Ｃはグリオーマ（ＧＬ２６）罹患Ｃ５７ＢＬマウス、ならびに（Ｄ）図２３Ｄはマウス神経芽細胞腫（Ｎｅｕｒｏ２ａ）罹患Ａ／Ｊマウス。
【図２４】図２４は、２４〜４８時間の絶食が、転移性マウスメラノーマ（Ｂ１６）の生存を高めたことを示すプロットである。
【図２５】図２５は、種々の臓器へのＢ１６メラノーマ細胞の転移を、通常の給餌下でＤＸＲを投与されたマウスと比較して示す棒グラフである。
【図２６】図２６は、マウス神経芽細胞腫：ＮＸＳ２の２つの転移モデルにおいて、絶食がまた腫瘍の感受性を高め（Ｐ＜０．００１）、長期生存をもたらしたことを示すプロットである。
【図２７】図２７は、マウス神経芽細胞腫：Ｎｅｕｒｏ２ａの２つの転移モデルにおいて、絶食がまた腫瘍の感受性を高め（Ｐ＝０．００５）、長期生存をもたらしたことを示すプロットである。
【図２８】図２８は、乳癌（４Ｔ１）の転移マウスモデルにおいて、絶食が癌細胞の化学療法に対する感受性を高めたことを示すプロットである（ログランク検定、Ｐ＜０．０００５）。
【図２９】図２９は、絶食がヌードマウスに皮下注射した異種移植ヒト神経芽細胞腫（ＡＣＮ）の腫瘍進行を抑制したことを示すプロットであり；腫瘍が触知可能になった時点で、全部で５サイクルの絶食を行った［皮下モデルにＴｕｋｅｙポスト検定（２７日目の（Ｂ）にＳｔｕｄｅｎｔのｔ−検定）、転移モデルにログランク検定を使用した、一元配置分散分析、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１］。
【図３０】図３０は、アドリブ摂食マウスの血清で毒性の低かったＤＸＲおよびＣＰの用量に対する乳癌細胞の感受性を絶食マウスの血清が増大させたことを示す棒グラフである。対照群は、ヒトおよびマウスの細胞をそれぞれ、１０％ＦＢＳを加えた１．０ｇ／Ｌおよび２．０ｇ／Ｌのグルコース中で培養した。ＳＴＳ群は、１％ＦＢＳを加えた０．５ｇ／Ｌのグルコース中で培養した。ＭＴＴ還元法により生存率を求めた。グルコースと血清の全ての組み合わせがＤＸＲとＣＰに及ぼす影響については、図３３〜３４を参照。
【図３１】図３１は、絶食マウスの血中グルコース値を示す棒グラフである。
【図３２】図３２は、ＳＴＳが１７種の癌細胞のうち１５種でＤＸＲｉｎ ｖｉｔｒに対する感受性を高めたという実験結果を示すプロットであり、４種のマウス癌細胞、すなわち乳癌（４Ｔ１）、メラノーマ（Ｂ１６）、グリオーマ（ＧＬ２６）および神経芽細胞腫（ＮＸＳ２およびＮｅｕｒｏ２ａ）、ならびに１３種のヒト癌細胞、すなわち前立腺癌（ＰＣ３、２２ＲＶ１）、乳癌（ＭＣＦ−７、Ｃ４２Ｂ）、神経膠芽細胞腫（Ｕ８７−ＭＧ）、子宮頚癌（ＨｅＬａ）、結腸癌（ＬＯＶＯ）、神経芽細胞腫（ＡＣＮ、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）、類表皮癌（Ａ４３１）、メラノーマ（ＭＺ−ＭＥＬ）および卵巣がん（ＯＶＣＡＲ）にＳＴＳを適用し、ＤＸＲを併用した。
【図３３】図３３は、グルコースと血清の全ての組み合わせがＤＸＲに及ぼす影響を示すプロットである。
【図３４】図３４は、グルコースと血清の全ての組み合わせがＣＰに及ぼす影響を示すプロットである。
【図３５】図３５は、化学療法に対する癌細胞のＳＴＳ依存の増感を、ＩＧＦ−Ｉが無効にすることを示す棒グラフであり；グルコース制限下（１％ＦＢＳ存在下、０．５ｇ／Ｌ対２．０ｇ／Ｌ）、マウス乳癌（４Ｔ１）およびメラノーマ（Ｂ１６）細胞をｒｈＩＧＦ−Ｉ（２００μＭ）で処理し、続いてＤＸＲ（１６μＭ）で処理した；Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定；＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図３６】図３６は、その絶食と、酸化ストレスおよびＤＮＡ修復の調節とを示す試験結果であり；ＳＴＳは、遺伝毒性があり、（Ａ）図３６Ａは乳癌（４Ｔ１）においてＣＰと組み合せ、（Ｂ）図３６Ｂはメラノーマ（Ｂ１６）においてＤＸＲと組み合わせ、および（Ｃ）図３６Ｃはグリオーマ（ＧＬ２６）細胞においてＤＸＲと組み合わせ、コメットアッセイによる測定で、ＤＮＡの損傷を相乗的に増加させた。対照群およびＳＴＳ群の細胞は、１％ＦＢＳを加えた、通常グルコース（２．０ｇ／Ｌ）または低濃度グルコース（０．５ｇ／Ｌ）でそれぞれ培養した。薬剤は、図２２Ａ〜Ｃのインビボでの研究と一貫性が保たれるように選択した。
【図３７】図３７は、通常給餌マウスまたは絶食マウスからの皮下乳癌（４Ｔ１）に対するマイクロアレイ解析の結果を示したもので、細胞増殖経路の特異的制御を示している。
【図３８】図３８は、通常給餌マウスまたは絶食マウスからの皮下乳癌（４Ｔ１）に対するマイクロアレイ解析の結果を示したもので、リボソームアセンブリー／生合成を含む翻訳機構の増加を示している。
【図３９】図３９は、マウス乳癌細胞（４Ｔ１）において、絶食がＡｋｔおよびＳ６Ｋを増加させ、ｅＩＦ２αリン酸化反応を減少させており、翻訳成分の増加と整合していることを示す試験結果であり、（Ａ）図３９Ａはインビボ、（Ｂ）図３９Ｂはインビトロである。
【図４０】図４０は、ＳＴＳがインビトロで癌細胞の増殖を妨げており、マウスにおける腫瘍の増殖抑制と整合していることを示す棒グラフである。
【図４１】図４１は、フォークヘッドボックスＯ３（ＦＯＸＯ３）、核因子カッパＢ（ＮＦｋＢ）、およびヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１）などのストレス応答成分の発現において、絶食が、腫瘍においてはこれを顕著に抑制し、正常な臓器においてはこれを大量に誘導することにより、これを特異的に制御したことを示す棒グラフである；Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定；＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図４２】図４２は、ＳＴＳが、スーパーオキシドマーカー（ＤＨＥ）により推定される細胞内酸化ストレスを増加させたことを示す試験結果である。
【図４３】図４３は、ＳＴＳがＣＰ誘導細胞内スーパーオキシド値を増加させることを示す試験結果であり；インビトロで、マウス乳癌細胞（４Ｔ１）を絶食させ、ＣＰで処理した。
【図４４】図４４は、絶食が、腫瘍内のカスパーゼ３の開裂／活性化レベルを選択的に増加させたが、正常臓器／細胞ではそうでなかったことを示す試験結果であり、（Ａ）図４４Ａはインビボ、（Ｂ）図４４Ｂはインビトロの結果である。
【図４５】図４５は、細胞のエネルギー機構を維持するために、ＳＴＳが自己貪食を誘導したことを示す試験結果である。
【図４６】図４６は、ＳＴＳ処理中の自己貪食の遮断が細胞死をさらに増加させていることを示す棒グラフである。
【図４７】図４７は、マウス乳癌細胞（４Ｔ１）を、ＦＢＳを１％含有する通常または低濃度グルコース中において、最も一般的なＨＯ−１誘発剤のヘミン（１０μＭ）で処理し、その後ＣＰを加えた実験結果のプロットである。
【図４８】図４８は、ＨＯ−１が絶食依存性ＤＳＲの主たるメディエータであることを示すプロットであり；ＦＢＳを通常（１０％）または低濃度（１％）で含有する、通常または低濃度グルコース中において、最も一般的なＨＯ−１誘発剤のヘミンで、ＣＰ処理前の２４時間、およびＣＰ処理中の２４間、マウス乳癌細胞を処理した。
【図４９】図４９は、ＦＢＳを１％含有する通常または低濃度グルコース中において、一般に使用されているＨＯ−１阻害剤のＺｎＰＰ（２０μＭ）でマウス乳癌細胞（４Ｔ１）を処理し、その後ＣＰを加えた実験結果のプロットである。
【図５０】図５０は、ＨＯ−１が絶食依存性ＤＳＲの主たるメディエータであることを示すプロットであり；ＦＢＳを通常（１０％）または低濃度（１％）で含有する、通常または低濃度グルコース中において、一般に使用されているＨＯ−１阻害剤のＺｎＰＰで、ＣＰ処理前の２４時間、およびＣＰ処理中の２４間マウス乳癌細胞を処理した。
【図５１】図５１は、絶食に応答して化学療法に対する感受性を高めた絶食依存性腫瘍のモデルを示し、グルコース、ＩＧＦ−Ｉおよび他の成長促進分子／因子が減少し、この減少に応答して、悪性細胞が、ＡＫＴ／Ｓ６ＫおよびｅＩＦ２αを活性化させ、翻訳を増加させるが、またストレス耐性タンパク質のＦＯＸＯ３ａ、ＮＦｋＢおよびＨＯ−１の発現を減少させ、これらの変化によって、酸化ストレスおよびＤＮＡ損傷の増加、カスパーゼ−３の活性化、ならびに細胞死がもたらされている。
【図５２】図５２は、対照食（Ｔ．Ｄ．７９１２）もしくはアミノ酸処方（ＡＡ−Ｄ）を与えるか、または２．５日間飢餓させた（短期飢餓、ＳＴＳ）メスのＣＤ１マウスにおける血清ＩＧＦ−Ｉ値の実験結果を示すプロットであり；改変アミノ酸食では、５日間の給餌で、血清ＩＧＦ−Ｉが５０％まで低下した。
【図５３】図５３は、短期飢餓（ＳＴＳ）後、改変アミノ酸食を給餌することによって、低血清ＩＧＦ−Ｉ値が維持されたことを示すプロットであり；メスＣＤ１マウスに２．５日間飢餓させた後、２日または４日間、対照食（Ｔ．Ｄ．７９１２）または改変アミノ酸食（ＡＡ−Ｄを再び与えた。
【図５４】図５４は、血中グルコース値を示すプロットであり：（Ａ）図５４ＡはメスのＣＤ１マウスに３日間飢餓させるか、あるいは低カロリー（通常のカロリー摂取量の６％）ＶＣＭ食（３日間）、または改変アミノ酸食（ＡＡ−Ｄ、３または５日間）を与え；（Ｂ）図５４ＢはメスＣＤ１マウスに２．５日間飢餓させた後、４日間、対照食または改変アミノ酸食を再び与え、餌を取り上げてから４時間後にグルコースを測定した。
【図５５】図５５は、血清ＩＧＦ−Ｉ値：メスのＣＤ１マウスに２．５日間（ＳＴＳ）飢餓させるか、低カロリーＶＣＭ−Ｍ食（２日間）の後に、１日間の改変アミノ酸食（Ｍ／ＡＡ）を与えるか、または低カロリーＶＣＭ−Ｈ（２日間）の後に、１日間の変法アミノ酸食（Ｈ／ＡＡ）を与えて、Ｔｕｋｅｙ検定で対照と比較し；（Ｂ）図５５Ｂは２日間の低カロリーＶＣＭ食の後、１日間の改変アミノ酸食を与えることにより、ドキソルビシン（ＤＸＲ，１８ｍｇ／ｋｇ）で治療したマウスの生存率が増加した実験結果を示す棒グラフである。
【図５６】図５６は、メスのＣＤ１マウスに２．５日間、対照（Ｔ．Ｄ．７９１２）を与えるか、飢餓させるか、またはＶｅｇｅＧｅｌを与えた実験結果プロットである：（Ａ）図５６Ａは絶食血中グルコース値；（Ｂ）図５６Ｂは血清ＩＧＦ−Ｉ値。
【図５７】図５７は、メスのＣＤ１マウスに対照食（ＴＤ．７９１２）、カロリー制限ケトン産生食（３日間）、またはカロリー制限ケトン産生食（１日間）を与えた後、ＶｅｇｅＧｅｌ（２日間）を与えた実験結果のプロットである：（Ａ）図５７Ａは絶食血中グルコース値；（Ｂ）図５７Ｂは血清ＩＧＦ−Ｉ値。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の、現時点で好ましい組成物、実施形態および方法について詳しく説明するが、これは、本発明者らが現時点で知っている本発明の最良の実施モードを構成するものである。図面は必ずしも正確に縮尺したものではない。しかしながら、開示した実施形態が、種々の、他にも取り得る形態で実施することができる本発明の単なる例示であると理解されるべきである。したがって、ここで開示する具体的な詳細は、限定のためでなく、単に、本発明の任意の態様の代表的基礎として、かつ／または本発明を様々に使用するよう当業者に教示するための代表的な基礎として理解されるべきである。
【００１４】
実施例を除き、あるいは他に明示されていなければ、物質の量、または反応および／もしくは使用の条件を示す本明細書中のあらゆる数値的量は、本発明の最も広い範囲を記述する際には、「約」という語で修飾されていると理解されるべきである。記述されている数値範囲内での実施が一般には好ましい。また、反対の記載がなければ：パーセント、「部」および比の値は、重量基準であり；本発明に関連した所与の目的に適した、または好ましい物質の群またはクラスについての記載は、群またはクラスのメンバーの任意の２種以上の混合物も同様に適しているか、または好ましいものであるという意味を含んでおり；化学的表現での成分の記載は、明細書中に特定された組み合わせに添加する時の成分をいい、混合後の混合物の成分間の化学的相互作用を必ずしも排除するものではなく；頭字語または他の略語の最初の定義は、ここでの同一の略語のその後の全ての使用に適用され、また最初に定義された略語の通常の文法的な変更に準用され；かつ、反対の記載がなければ、特性の測定は、同一の特性に対して先に、または後に参照されたものと同じ手法によって測定される。
【００１５】
また、特定の成分および／または条件は、当然ながら変更し得るものであるから、本発明が以下に記載の特定の実施形態および方法に限定されないことも理解されるべきである。さらに、ここで使用する用語は、本発明の特定の実施形態を記載する目的でのみ使用されるものであって、決して限定することを意図するものではない。
【００１６】
また、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、特に他の明示がなければ、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」が複数の指示対象を含むことに注意しなければならない。例えば、ある構成要素を単数形で参照するとき、複数の構成要素を含むことを意図している。
【００１７】
用語「必須アミノ酸」は、有機体により合成できないアミノ酸をいう。ヒトの必須アミノ酸には、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリンが含まれる。さらに、次のアミノ酸―すなわち、ヒスチジン、チロシンおよびセレノシステインも、ある条件下ではヒトに必須である。
【００１８】
用語「キロカロリー」（ｋｃａｌ）および「大カロリー（Ｃａｌｏｒｉｅ）」は、食物のカロリーをいう。用語「カロリー（ｃａｌｏｒｉｅ）」はいわゆる小カロリーをいう。
【００１９】
用語「患者」は、霊長類（特に高等霊長類）、ヒツジ、イヌ、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）、モルモット、ヤギ、ブタ、ネコ、ウサギおよびウシなどのあらゆる哺乳動物を含む、ヒトまたは動物をいう。
【００２０】
用語「飢餓させる」は、細胞または患者を低栄養または無栄養状態にすることを意味する。
【００２１】
用語「癌」は、無制御な細胞分裂と、増殖し隣接する組織へ直接侵入するか、または転移により離れた部位に生着することにより拡がっていくそれらの細胞の能力を特徴とする疾病または疾患をいう。癌の例としては、これらに限定はされないものの、原発癌、転移癌、癌腫、リンパ腫、白血病、肉腫、中皮腫、膠腫、胚細胞腫、絨毛癌、前立腺癌、肺癌、乳癌、大腸癌、消化器癌、膀胱癌、膵臓癌、子宮内膜癌、卵巣癌、メラノーマ、脳癌、精巣腫瘍、腎臓癌、皮膚癌、甲状腺癌、頭頚部癌、肝臓癌、食道癌、胃癌、腸癌、結腸癌、直腸癌、骨髄腫、神経芽細胞腫、褐色細胞腫および網膜芽細胞腫が挙げられる。
【００２２】
一般に、短期飢餓（ＳＴＳまたは絶食）が、選択的に腫瘍の成長を妨げ、化学療法毒性から正常細胞を保護するが、癌細胞のそれに対する感受性は高めることがわかった。この目標を達成する方法および組成物の具体的な実施形態について、以下に説明する。本発明の作用は特定のメカニズムに限定されるものではないが、本発明の各種実施形態で観察される保護は、部分的には、その癌細胞に対する効果を妨害せずに、ＩＧＦ−Ｉ経路およびグルコース濃度を調節することによるものである（特異的ストレス耐性、ＤＳＲ）。絶食の保護効果の基礎は、栄養分が不足または欠乏するとき、再生／成長から保護／維持へエネルギーを配分し直す能力に基づいていると考えられる。長期の食事制限によって引き起こされるＩＧＦ−Ｉおよびグルコースの減少が、絶食に比べてはるかに小さいことを指摘しておかなければならない。さらに、絶食とは異なり、長期の食事制限は、慢性の体重減少を引き起こし、維持することが非常に困難であることから、大部分の癌患者に適していない。代わりに、化学療法前の平均約６２時間と、化学療法後の２４時間の絶食であれば、様々な毒性治療を受けている癌患者にとって十分に耐えられるものであった。
【００２３】
また、細胞の増殖およびストレス応答に関係する経路で一般に見られる発癌突然変異が、絶食中であっても、悪性細胞における高い保護モードへの切り替えを防止し、増殖または増殖関連状態を推進することも指摘しておかなければならない。酵母および哺乳動物についての研究からは、悪性細胞の毒素／オキシダントに対する増感が、保護モードへの移行阻害における増殖促進経路の重複性のために、発癌突然変異のタイプとはほとんど無関係であり得ることが示唆されており、これは大部分の癌細胞および癌タイプが、ＳＴＳまたは低ＩＧＦ−Ｉに応答して保護されないことを示している。
【００２４】
本発明の一実施形態においては、癌の増殖または癌の症状を緩和する方法が提供される。本実施形態によれば、癌患者は、同定後、第１の所定期間に第１の食が与えられる。第１の食は、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪、好ましくは一不飽和脂肪から得る。患者の通常のカロリー摂取量は、患者が彼／彼女の体重を維持するために消費するｋｃａｌ数である。患者の通常のカロリー摂取量は、患者との面接により、あるいは患者の体重を考慮することにより推定し得る。おおまかな目安として、患者の通常のカロリー摂取量は、平均、男で２６００ｋｃａｌ／日、女で１８５０ｋｃａｌ／日である。一つの態様（ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）では、第１の食で７００〜１２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。特に有用な態様では、第１の食で、平均体重の男性患者には約１１００ｋｃａｌ／日を与え、平均体重の女性患者には９００ｋｃａｌ／日を与える。通常、第１の所定期間は約１〜５日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。第１の食における脂肪レベルを見直すために、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎは、典型的な１日当たり２０００ｋｃａｌの食事に対して、次のような栄養の内訳：脂肪６５グラム（約５８５キロカロリー）、タンパク質５０グラム（約２００キロカロリー）、全炭水化物３００グラム（約１２００キロカロリー）を推奨している。したがって、第１の食の１つのバージョンでは、炭水化物とタンパク質からのカロリーの大部分は除かれる。
【００２５】
第１の食は実質的にいかなる脂肪源を包含してもよいが、一不飽和脂肪源、多価不飽和脂肪源など、不飽和脂肪が多い脂肪源が特に有用である（例えば、オメガ−３／６必須脂肪酸）。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食にはまた、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源としては、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００２６】
その後、患者には、第２の所定期間、第２の食が与えられる。第２の食では、最大５００ｋｃａｌ／日を患者に与える。一つの態様では、第２の食は、最大２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は３日である。さらに他の一つの態様では、第２の食には、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源には、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００２７】
第１の食および第２の食の効果は、患者の多くのパラメータを測定することによりモニターされる。例えば、患者のＩＧＦ−Ｉの血清中濃度は、第２の食の終わりまでには２５〜９０％減少していることが望ましい。また、患者の血中グルコース濃度も、第２の食の終わりまでには２５〜７５％減少していることが望ましい。
【００２８】
本実施形態の変形では、患者に、第３の所定期間、第３の食が与えられる。第３食は、患者の通常の食を補充するためのものである。補充組成物に、必須アミノ酸、ミネラルおよび必須脂肪が含まれるのが特徴である。有利なことに、第３の食は、患者に正常な体重を回復させ、その体力を最大にするであろう。通常、第３の所定期間は、少なくとも５日である。補充組成物にはまた、任意選択により、多くの追加の成分が含まれるであろう。例えば、補充組成物は、野菜抽出物を含んでもよい。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。補充組成物はまた、オメガ−３／６必須脂肪酸および非必須アミノ酸を含んでもよい。適切な非必須アミノ酸の例としては、限定はされないものの、ヒスチジン、セリン、タウリン、チロシン、システイン、グルタミン、およびこれらの組み合わせが挙げられる。補充組成物はまた、鉄、亜鉛、銅、マグネシウムおよびカルシウムを含有する多成分ミネラル錠を含んでもよく、またビタミンＢ１２などのビタミンＢ複合体を含有してもよい。
【００２９】
本発明の他の実施形態では、癌の化学療法薬に対する感受性を高める方法が提供される。本方法においては、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を与える。本方法に感受性の高い癌の例としては、限定はされないが、皮膚癌、結腸癌、乳癌、食道癌、前立腺癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、グリオーマ、メラノーマ、神経芽細胞腫および褐色細胞腫が挙げられる。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得る。通常、第１の所定期間は、約１〜５日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。上述したように、第１の食は、実質的に任意の脂肪源を包含するが、不飽和脂肪が多い脂肪源、特に一不飽和脂肪の脂肪源が好ましい。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないが、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３０】
その後、患者には、第２の所定期間、第２の食が与えられる。第２の食では、最大５００ｋｃａｌ／日を患者に与える。一つの態様では、第２の食は、最大２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は３日である。第２の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３１】
患者が第２の食を摂取している間、またはその後に、患者には化学療法薬剤が投与される。通常、化学療法薬剤は、第２の食の４８〜７２時間後に投与される。本方法が実質的にいかなる化学療法薬に対しても有効であることは、容易に理解される。有用な化学療法薬の例としては、限定はされないものの、ＤＮＡアルキル化剤、オキシダント、トポイソメラーゼ阻害薬、およびこれらの組み合わせが挙げられる。有用な化学療法薬の具体例としては、限定はされないものの、メチルメタンスルホネート、シクロホスファミド、エトポシド、および他のトポイソメラーゼ阻害薬、ドキソルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、および他のプラチナベースの薬剤、ゲムシタビン、ドセタキセルまたは５−ＦＵが挙げられる。
【００３２】
本発明の変形では、続いて、患者に、第３の所定期間、第３の食が与えられる。第３の食は、患者の通常のカロリー摂取量を補うものであり、補充組成物を含む。補充組成物に、必須アミノ酸が含まれるのが特徴である。補充組成物にはまた、天然の、必須脂肪酸源、ビタミン源およびミネラル源、ならびに鉄、亜鉛、銅、マグネシウムおよびカルシウムを含む多成分ミネラル錠が含まれていてもよく、また、ビタミンＢ１２などのビタミンＢ複合体が含まれていてもよい。
【００３３】
上記したように、第３の食を患者の通常の食と共に与えることにより、患者は正常な体重を回復し、体力が最大になるであろう。通常、第３の所定期間は少なくとも５日であり、無期限に続けてもよい。一つの態様では、第３の所定期間は、約４日〜約１４日である。この目的のためには、１週間がほぼ最適であると推定される。補充組成物にはまた、任意選択により、多くの追加の成分が含まれるであろう。例えば、補充組成物は野菜抽出物を含んでもよい。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。補充組成物はまた、オメガ−３／６必須脂肪酸および非必須アミノ酸を含んでもよい。適切な非必須アミノ酸の例としては、限定はされないものの、ヒスチジン、セリン、タウリン、チロシン、システイン、グルタミン、およびこれらの組み合わせが挙げられる。第３の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３４】
本実施形態の方法は、多くの治療上の利点を提供する。例えば、この方法によれば、患者に第１の食および第２の食が与えられていないときの化学療法薬の標準的な使用期間よりもより長い期間、患者に化学療法薬を与えることが可能になる。このような期間の増大は、第１および第２の食が、化学療法薬の毒作用を減少させ、かつ／または癌細胞の化学療法薬に対する感受性を、正常（すなわち、非癌性の）細胞よりも高めたことの結果である。多くの患者で、第１および第２の食を使用しない治療プロトコールよりも、ホストを保護する第１および第２の食によって、化学療法薬をより大量に投与することが可能になる。通常、そのような薬剤は、一般に患者が耐えられる量より少なくとも１０％多く投与することができる。しかしながら、ある種の患者では、そのような薬剤の用量は、１０％〜４０％増加させることができる。そのようなシナリオでは、患者をより積極的に治療することができる。他の一つの態様では、癌の感受性を高める第１および第２の食は、最適に近い、または増大した応答を維持しながら、患者に与える化学療法薬の量を通常より少なくできるという効果を有する。そのような場合、化学療法薬剤は、通常投与する量より少なくとも１０％少ない量を投与することができる。ある種の患者では、望ましくない毒性を低下させるために、そのような薬剤の用量を１０％〜４０％減少させることができる。本方法によればまた、好ましくない副作用を示す化学療法治療を患者に継続させることが可能になる。その場合、患者が化学療法に関連する毒性症状を示すことを確認した後、上述した方法および期間で、第１、第２および第３の食を与える。有利なことに、本方法によればまた、末期にあると確認され、他の方法では治療を中断するであろう患者に対し、治療を継続することが可能になる。さらに他の変形では、長期に亘る化学療法薬の投与中、例えば、５−ＦＵによる５日間の治療中に、第１および第２の食が与えられる。
【００３５】
本発明の他の実施形態では、癌の放射線療法に対する感受性を高める方法が提供される。本方法においては、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を与える。本方法に感受性の高い癌の例としては、限定はされないが、皮膚癌、結腸癌、乳癌、食道癌、前立腺癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、グリオーマ、メラノーマ、神経芽細胞腫および褐色細胞腫が挙げられる。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得る。通常、第１の所定期間は、約１〜５日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。上述したように、第１の食は、実質的に任意の脂肪源を包含するが、不飽和脂肪が多い脂肪源、特に一不飽和脂肪の脂肪源が好ましい。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないが、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３６】
その後、患者には、第２の所定期間、第２の食が与えられる。第２の食では、最大５００ｋｃａｌ／日を患者に与える。一つの態様では、第２の食は、最大２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は３日である。第２の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３７】
患者が第２の食を摂取している間、またはその後、患者には放射線療法が行われる。通常、放射線療法は第２の食の４８〜７２時間後に行われる。
【００３８】
本発明の変形では、続いて、患者に、第３の所定期間、第３の食が与えられる。第３食は、患者の通常のカロリー摂取量を補うものであり、補充組成物を含む。補充組成物に、必須アミノ酸が含まれるのが特徴である。補充組成物にはまた、天然の、必須脂肪酸源、ビタミン源およびミネラル源、ならびに鉄、亜鉛、銅、マグネシウムおよびカルシウムを含む多成分ミネラル錠が含まれていてもよく、また、ビタミンＢ１２などのビタミンＢ複合体が含まれていてもよい。
【００３９】
上記したように、第３の食を患者の通常の食と共に与えることにより、患者は正常な体重を回復し、体力が最大になるであろう。通常、第３の所定期間は少なくとも５日であり、無期限に続けてもよい。一つの態様では、第３の所定期間は、約４日〜約１４日である。この目的のためには、１週間がほぼ最適であると推定される。補充組成物にはまた、任意選択により、多くの追加の成分が含まれるであろう。例えば、補充組成物は野菜抽出物を含んでもよい。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。補充組成物はまた、オメガ−３／６必須脂肪酸および非必須アミノ酸を含んでもよい。適切な非必須アミノ酸の例としては、限定はされないものの、ヒスチジン、セリン、タウリン、チロシン、システイン、グルタミン、およびこれらの組み合わせが挙げられる。第３の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００４０】
本発明のさらに他の実施形態では、癌患者に食事を提供するための、癌の増殖を抑制し、化学療法薬の効果を高める治療食パッケージが提供される。治療食パッケージは、上記の方法が必要とする適切な栄養とカロリーを提供するように考えられている。治療食パッケージには、第１の食事コンポーネント、第２の食事コンポーネントおよび補充組成物が含まれる。第１の食事コンポーネントは、上述した第１の食の栄養成分を提供する。第１の食事コンポーネントは、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、かつそのキロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る食事に分割される。第１の食事コンポーネントは、第１の所定期間に十分な量の食事を提供する。ある一つの態様では、第１の食事コンポーネントはまた、５食分の野菜に相当する抽出物およびオメガ−３／６必須脂肪酸を含む。
【００４１】
第２の食事コンポーネントは、上記第２のダイエット食の栄養成分を提供する。第２の食事コンポーネントは、癌患者に最大５００ｋｃａｌ／日を与える食事に分割される。第２の食事コンポーネントは、第２の所定期間に十分な量の食事を提供する。第２の食事コンポーネントはまた、５食分の野菜に相当する抽出物の他、ミネラルおよびオメガ−３／６必須脂肪酸も含む。
【００４２】
補充組成物は、少なくとも部分的に、上述した第３の食の栄養成分を提供する。通常、補充組成物は、患者に通常のカロリー摂取量の幾分かを提供するために、患者の通常の食と併用される。補充組成物は、必須アミノ酸を含む。補充組成物は、第３の所定期間に十分な量の補充物を提供する。
【００４３】
上記したように、第１の食事コンポーネントは高脂肪である。第１の食事コンポーネントは実質的に任意の脂肪源を包含し得るが、脂肪の潜在的に有害な心血管の副作用を最小化するため、特にこの食を度々使用するであろう患者には、不飽和脂肪が多い脂肪源、特に一不飽和脂肪源が好ましい。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食事コンポーネントにはまた、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源としては、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００４４】
上記したように、第２の食事コンポーネントは、患者に非常に低いカロリーを提供する。一つの態様では、第２の食事コンポーネントには、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源としては、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００４５】
補充組成物は、患者の通常の体重および体力が維持されるように（または、体重減少があったならば、回復するように）考えられている。一つの態様では、補充組成物はさらに、５食分の野菜に相当する抽出物の他、ミネラルおよびオメガ−３／６必須脂肪酸も含む。補充組成物は、目標とする体重および体力が達成されるように、通常の食と共に摂取すべきであると認識すべきである。上記したように、一般に、通常の食は患者の通常のカロリー摂取量をほぼ提供するであろう。
【００４６】
一つの変型例では、治療食パッケージはまた、第１の食のコンポーネント、第２の食のコンポーネントおよび補充組成物を癌患者に与えるための使用説明書を含む。使用説明書は、方法に関し、上で記載した詳細を提供するであろう。一つの態様では、使用説明書には、第１の食のコンポーネントが、上記のように、第１の所定期間を通して患者に提供されるべきことが記載される。通常、第１の所定期間は約１〜２日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。使用説明書にはまた、第２の食のコンポーネントが、上記のように、第２の所定期間を通して患者に提供されるべきことが記載される。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は約３日である。使用説明書にはまた、補充組成物が通常の食と共に、そして特に、患者の体重および体力を維持または回復するのに十分な量の追加食品と共に摂取すべきであることが記載される。通常、第３の所定期間は少なくとも５日である。一つの態様では、第３の所定期間は約４日〜約１４日である。この目的のためには１週間がほぼ最適であることがわかっている。
【００４７】
本実施形態の変形例では、治療食パッケージは、容器（例えば、箱）に詰められる。一つの態様では、第１の食のコンポーネントおよび第２の食事コンポーネントはそれぞれ、１日量に分けられ、それを示すラベルが付される。さらに他の態様では、各１日分はさらに３食分に分けられる。通常、各食事は、固形食、ミルクセーキおよびスープの組み合わせ（１日目）で、２、３および４日目はスープとミルクセーキのみ（３食／日）であろう。各パッケージにはまた、必須脂肪酸、ミネラルおよびビタミンを含む錠剤、および／または野菜抽出物が入っているであろう。箱にはまた、錠剤の形態をしているであろう１週間分の補充食も入っているであろう。一般に、食の全てのコンポーネントで、それらに含まれる品目はいずれも非天然のものは最小限にされる。
【００４８】
以下の実施例は、本発明の各種実施形態を説明するものである。当業者であれば、本発明の精神と特許請求の範囲内に多くの変形があることを認めるであろう。
【実施例】
【００４９】
実験１
多様な悪性腫瘍があると診断された患者らが、化学療法の前（４８〜１４０時間）および／または後（２４〜５６時間）に自発的に絶食を行った１０の症例について記載する。絶食と組み合わせて平均４サイクルの化学療法を受けた１０人の患者は、空腹以外は誰も、絶食自体による重大な副作用を訴えることはなかった。毒性のグレード分け、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）のＣｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ＣＴＣ）に基づいて行い、そして５人の患者が自己申告した副作用は、絶食が疲労、衰弱および消化器への副作用から保護し得ることを示している。癌の進行をモニターできた患者では、絶食が化学療法依存の腫瘍量または腫瘍マーカーの減少を阻害することはなかった。臨床転帰および患者の生活の質を高めることにおける絶食の役割を調べるには、制御した臨床試験が必要であるが、ここに示した１０の症例は、化学療法と併用した絶食は、妥当であり、安全であり、かつ従来の化学療法を増強する可能性を有していることを示唆している。
【００５０】
各種タイプの癌と診断され、化学療法の前後に自発的に絶食を行った患者について、１０の症例を報告する。自己評価による健康転帰と血液検査の結果に基づいて示された結果は、絶食が安全であって、癌細胞の殺滅を阻害せずに化学療法による多くの副作用を軽減し得ることを示唆している。
【００５１】
症例１：
ドセタキセル（ＤＴＸ）およびシクロホスファミド（ＣＰ）による補助化学療法が推奨された、ステージＩＩＡの乳癌と診断された５１歳の白人女性。彼女は第１回の化学療法を実施する前に絶食を行った。絶食の方法は、化学療法前の１２０時間、および化学療法後の６０時間（計１８０時間）はカロリーを完全に断ち、その間、彼女は水とビタミンのみを摂取するというものであった。患者は、この長期に亘る絶食を重大な不都合もなく終え、体重は７ポンド減少したが、これは治療が終わるまでに回復した（図ＩＨ）。絶食−化学療法のサイクル後、患者は軽い疲労、口内乾燥、吃逆を経験した（図２）が、それにもかかわらず、彼女は日々の活動（１日に１２時間まで仕事）を行うことができた。対照的に、その後の化学療法サイクル（第２回および第３回）では、彼女は絶食せずに化学療法を受け、軽度から重度に至る疲労、衰弱、悪心、腹部痙攣および下痢を訴えた（図２）。今度は、副作用によって彼女はいつもの仕事のスケジュールをこなせなかった。第４回および最後のサイクルでは、化学療法前の１２０時間、および化学療法後の２４時間の絶食からなる異なる方法であったが、再度、絶食することを選択した。注目すべきことに、前のサイクルで組織には蓄積された損傷が見込まれるにもかかわらず、彼女が自己申告した副作用は軽度なものであった。これと一致して、血液検査の結果も、絶食が血液細胞の保護に好ましい効果をもたらし得ることを支持するものであった。化学療法の前に絶食を行ったときは、総白血球数（ＷＢＣ）および好中球絶対数（ＡＮＣ）は、最下点で僅かではあるが一貫して増大した（図１Ａ、Ｃ；表１）。さらに、絶食−化学療法において、第１および第４サイクルそれぞれで、血小板数は減少せず、むしろ安定を維持するか、または増加することが観察された。（図１Ｄ）。興味深いことに、１４４時間の絶食と併用した第４回化学療法サイクル後、ＡＮＣ、ＷＢＣおよび血小板数は、８０日前の化学療法の開始以来、最高値に達した（図１Ａ、ＣおよびＤ）。研究室での数値とＣＴＣの調査は、概ね、絶食が安全であって、化学療法による有害な副作用からこの患者を保護することができたことを示唆している。
【００５２】
症例２：
２００８年２月に食道腺癌と診断された６８歳の白人男性。診断時までに、ＣＴ−ＰＥＴスキャンで左副腎への転移が発見され、これはステージＩＶの疾患と一致する。初期の治療は、シスプラチン（ＣＤＤＰ）を併用した５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）であった。この化学療法と同時に、彼はまた最初の２サイクルで局所放射線照射を受けた。この期間を通して患者は、重度の衰弱、極度の疲労、激しい嘔吐および重篤な末梢神経障害を含む多くの副作用を経験した（図３）。さらに患者は、放射線治療により最も引き起こされやすい、重篤な粘膜炎に続いて強い嚥下障害を訴えた。第３のサイクルの間、重度の悪心と難治性嘔吐のために、５−ＦＵの投与を中断せざるを得なかった（図３）。化学療法と放射線を使用する攻撃的な治療にもかかわらず、彼の病気は進行した。２００８年８月に測定した新しいＣＴ−ＰＥＴからは、右の副腎、右肺の下葉、左仙骨、および烏口突起への新たな転移の展開が示された。これらのことから、彼の化学療法の強化が促された（第４のサイクル）。カルボプラチン（ＣＢＤＣＡ）のＤＴＸおよび５−Ｆｕとの併用（５−ＦＵは９６時間投与された）。患者は、第４のサイクルの間、化学療法前７２時間と、化学療法後５１時間の絶食を組み込んだ。化学療法後５１時間絶食したのは、５−ＦＵの継続投与から保護するためであった。患者は体重が約７ポンド減少したが、通常食を再開して最初の数日のうちに４ポンド回復した（データを示さず）。このサイクルの間、３種類の化学療法薬剤を併用したが、報告された自己申告の副作用は、アドリブ食−化学療法サイクルより一貫して軽度であった（図３）。第５の化学療法治療の前に、患者は再び絶食することを選択した。前に彼が受けたような９６時間の５−ＦＵの点滴を受ける代わりに、同用量の薬が４８時間以内に投与され、絶食の方法も薬剤送達前の４８時間と薬剤送達後５６時間に修正された。興味深いことに、自己申告の副作用が軽度であったばかりでなく、ＣＴ−ＰＥＴスキャンで記録された臨床応答も励みになるものであった。主な食道腫瘤、副腎転移、および肺の右下葉小結節の標準摂取率（ＳＵＶ）が減少したことが、スキャンで示された。第６、第７、第８サイクルでは、患者は化学療法治療の前後で絶食を行った（表３）。毒性の蓄積が予想されたにもかかわらず、第７化学療法サイクルの間に軽い下痢と腹部痙攣があったことを除いて、ほとんどの副作用が絶食により軽減された。非常に攻撃的な癌であり、十分に耐えられた化学療法であったにもかかわらず、患者の病気は進行し、患者は２００９年２月に死亡した。
【００５３】
症例３：
２０００年７月に、グリーソンスコア７、ＰＳＡ値５．８ｎｇ／ｍｌの両側前立腺癌と診断された７４歳の白人男性。２０００年９月に前立腺切除を行い、２００３年１月にＰＳＡ値が１．４ｎｇ／ｍｌに上昇するまでは、検出不能のＰＳＡ値であった。ビカルタミドおよびフィナステリドと共に酢酸リュープロリドが処方された。しかしながら、テストステロンの欠乏に関係した重度の副作用のために、２００４年４月にはこれらの薬の投与を中止せざるを得なかった。この病気をコントロールするために、トリプトレリンパモ酸塩、ニルタミド、サリドマイド、ＣＰおよびケトコナゾールを含む、異なる薬剤が使用された。２００７年には、患者のＰＳＡ値は９ｎｇ／ｍｌに達し、骨スキャン中に新たな転移が認められた。１週当たり２５ｍｇ／ｍ２のＤＴＸを投与したが、ＰＳＡ値は増加を続け、４０．６ｎｇ／ｍｌ（データを示さず）に達した。ベバシズマブを治療に加え、それによって初めて、ＰＳＡが顕著に低下した（データを示さず）。これに一致して、新たな骨スキャンは全体的な改善を示した。化学療法を伴うサイクルを通じて、患者は、疲労、衰弱、金属味、眩暈、失念、短期記憶障害および末梢神経障害を含む重篤な副作用を経験した（図５）。化学療法治療の停止後、彼のＰＳＡは急激に上昇した。３週サイクルで７５ｍｇ／ｍ２のＤＴＸ投与が方法として選択され、患者は、再度、重篤な副作用を経験することになった（図５）。２００８年６月、化学療法を中止した。患者は、ＣＹＰ１７（非性腺アンドロゲンの生合成に必要な一連の反応を触媒するミクロゾーム酵素）を選択的に遮断することができる薬剤である酢酸アビラテロンのフェーズＩＩＩ臨床試験に参加した（Ｄｅｒｅｋ ＲａｇｈａｖａｎおよびＥｒｉｃ Ａ．Ｋｌｅｉｎ著、Ｊ．Ｃ．Ｏ、２００８）。試験中、患者のＰＳＡ値は２０．９ｎｇ／ｄｌまで上昇し（図４Ｈ）、化学療法治療の再開を促された。今度は、患者は化学療法前に絶食することを選択した。彼の絶食スケジュールは、ほとんどが薬剤投与前６０時間および薬剤投与後２４であった（表３）。ＰＳＡ値は化学療法−絶食治療（ＤＴＸ ７５ｍｇ／ｍ２）を再開すると直ちに低下し、そして注目すべきことに、患者の副作用の報告は、以前のアドリブ食化学療法サイクルのときよりかなり少なかった（図５）。患者の経験と一致して、血液検査の結果は、治療の期間中一貫して安定しており、正常範囲に留まっていた（図４Ａ〜Ｇ）。最後の３サイクルの間、患者に、絶食に加えて、化学療法前の５日間、テストステロン（クリーム１％）を塗布した。その結果、ＰＳＡ値はテストステロン値と共に顕著に増加した。それにもかかわらず、絶食と併用した３サイクルの化学療法により、ＰＳＡは３４．２ｎｇ／ｍｌから６．４３ｎｇ／ｍｌへと低下した（図４Ｈ）。これらの結果は、絶食が癌細胞を部分的に保護し得る可能性を支持するものではない。
【００５４】
症例４：
２００８年６月に低分化の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断された６１歳の白人女性。最初にＣＴスキャンで見られた腫瘤は、ＰＥＴスタディ（２００８年、６月）で異化亢進であることがわかり、生検の結果とも相関した。同じＰＥＴスキャンで、多数の縦隔および左の肺門周囲のリンパ節に、広範囲に及ぶ転移性の病変が認められた。骨、肝臓、脾臓および膵臓への転移も認められた。最初の治療は、２１日毎にＤＴＸを７５ｍｇ／ｍ２とＣＢＤＣＡを５４０ｍｇ／ｍ２投与することから始められた。彼女は通常の食を摂っていたが、最初の５サイクルの間、各化学療法治療の後で平均４ポンド体重が減少した。化学療法毒性が原因である可能性が最も高い。彼女の報告によれば、元の体重に戻るのに約３週間を要したということであった。経験した副作用の中でも、彼女は激しい筋痙攣、下肢神経障害、強い疲労、口内および舌の痛み、内出血のしやすさ、ならびに腸の不快感を訴えた（図７）。同じ薬と用量からなる第６サイクルの間、患者は、化学療法前４８時間と化学療法後２４時間、絶食した。この期間中に彼女の体重は約６ポンド減少したが、これは１０日で回復した（データを示さず）。患者は、軽い疲労と衰弱以外は、先の５回のサイクルの間に経験した他の副作用を訴えることはなかった（図７）。なお、末梢神経障害、脱毛または短期記憶障害などの蓄積性の副作用は、一度発現すると絶食により元に戻すことはできないことに留意しなければならない。一方、急性の有毒な副作用は、絶食状態で化学療法を行うと、回避できた（図７）。第６および最後のサイクルの後で、患者から、薬剤投与の僅か３日後に３マイルを歩けるほど急速に活力が回復したとの報告があった。患者の血液検査では大きな差異は認められなかった（図６Ａ〜Ｇ）。２００９年２月に行われた最後の放射線検査（ＰＥＴ）は、ベースライン検査と比較して、主要腫瘤（左肺の下葉）の病変が安定しており、かつ脾臓および肝臓中のトレーサーの吸収が減少していることを示した。
【００５５】
症例５：
２００８年にステージＩＶの子宮体部漿液性腺癌であると診断された７４歳の女性患者。外科的処置（ＴＡＨ−ＢＳＯ）に続いて補助化学療法を行うことが推奨された。さらに、骨盤、傍大静脈および大静脈前のリンパ節を切除した。最後に右尿管が大きく肥大していたので、右腎摘出を行った。ＣＢＤＣＡ（４８０ｍｇ）およびパクリタクセル（２８０ｍｇ）の投与を、２１日毎に、６サイクル行った。第１の治療の間、患者は通常の食を摂っており、疲労、衰弱、脱毛、頭痛を経験し、胃腸の不快感を訴えた（図８）。一方、サイクル２〜６の間は、患者は薬剤投与の前後に絶食を行い、化学療法後の副作用が軽減したことを報告した（表３；図８）。他の報告と一致して、絶食は化学療法依存の癌細胞殺滅を妨害することはなく、これは第４サイクルの後でＣＡ−１２５腫瘍マーカーが８７％減少したことで実証された（データを示さず）。
【００５６】
症例６：
２００７年７月に、右卵巣腫瘤（１０×１２ｃｍ）と診断された４４歳の白人女性患者。外科的処置（ＴＡＨ−ＢＳＯ）が行われた。腫瘍は、卵巣被膜への浸潤がなく、切除した３０＋のリンパ節は全て陰性であった。彼女の病変はステージＩＡの卵巣癌肉腫とグレードづけられた。最初に行われた治療は、イホスファミドとＣＤＤＰによる６サイクルのコースであり、患者はこれを２００７年７月から１１月まで受けた。２００８年１月に行われた彼女の最初のＣＴスキャンでは、卵巣の病変の拡大は認められなかった。７か月後、ＭＲＩによって新たな多数の肺結節が見出された。この発見はＣＴスキャンにより確認され、脾臓領域における数か所の異常（低密度の像＝ＭＴＳ？）、および脊椎の退行性変化と共に、２０を超える新たな小結節が肺の内部に認められた。これらの結果に基づき、Ｔａｘｏｌ、カルボプラチンおよびアバスチンを含む薬剤による新たな投薬計画が立てられた。２００８年８月に点滴が開始され、３週間のスケジュールで行われた。同時に、患者には、高用量のビタミンＣ（５０ｍｇ／日）が追加された。２００８年９月には、ＣＴスキャンによる再評価が行われ、散在する多数の両側性肺結節のサイズと数が顕著に減少したことを示した。しかしながら、１１月までに、主な結節の１つが０．５〜０．８ｃｍまで拡大していることがＣＴスキャンにより判明し、病気が進行していることを示した。１日目にゲムシタビン、続いて８日目にゲムシタビンおよびドセタキセルからなる新たな治療が決められた。しかしながら、最初にゲムシタビンを総量（９００ｍｇ／ｍ２）投与した後、患者の好中球減少（図９Ａ）および血小板減少（図９Ｄ）が長引き、そのためその後の治療を中止しなければならなくなった。第２のサイクルでは、患者へのゲムシタビンの投与量を減らした（７２０ｍｇ／ｍ２）が、再び長期に亘る好中球減少および血小板減少がみられ、当初のスケジュールを完遂することは困難であった。第３サイクルの前に、患者は化学療法前６２時間と化学療法後２４時間の絶食を行った。患者は、絶食を行ったか否かにかかわらず、副作用を報告することはなかったが、興味深いことに、血液検査は絶食−化学療法治療の間に顕著な改善を示した（図１０）。最下点はあまり明瞭でないが、最高点はＡＮＣ、リンパ球およびＷＢＣ数においてはかなり高くなっていく傾向が認められた（それぞれ図９Ａ、Ｂ、Ｃ；表２）。さらに、第１および第２の化学療法サイクルの間、ゲムシタビン単独では、血小板数が急速かつ大幅に減少し、回復にそれぞれ１１および１２日を要した（表２）。しかしながら、最初の絶食−化学療法併用治療（第３サイクル）の後は、血小板数は減少せず、むしろ増加した（図９Ｄ）。先の化学療法単独治療と比べて、血小板の最下点はより低い値となったが、これは、３種類の化学療法薬の相加効果で説明できよう（図９Ｄ；表２）。それにもかかわらず、化学療法単独と比較すれば、絶食−化学療法治療の間は、血小板数の最高点と正常値への回復時間は、それぞれきわめて明瞭であり、かつ短縮された（図９Ｄ；表２）。複数回の絶食／化学療法後の血小板の、この顕著な改善と急速な回復は、患者が化学療法治療を完遂させるのを可能としたばかりでなく、この戦略が、血液細胞前駆体に対する保護効果を有し得るものであり、血小板および顆粒球の急速な再増殖を可能にすることを示唆している。
【００５７】
症例７：
１９９８年７月にグリーソンスコアー８の前立腺腺癌と診断された６６歳の白人男性。同年に実施したＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ検査では、右腸骨リンパ節に放射性トレーサーの明白な吸収がみられ、ステージＤ１の病気と一致した。１９９８年に、患者は初めて、酢酸リュープロリドとビカルタミドによる治療を受けた。１９９９年９月には、これらの薬剤を減らして、フィナステライドが処方された。２０００年１２月、ＣＴスキャンから、病気の局所進行が疑われた。彼は、酢酸リュープロリドによる第２サイクルを開始し、また高線量率（ＨＤＲ）近接照射療法、および強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）による外部ビーム照射も受けた。病気をコントロールするために、ビカルタミド、トリプトレリンパモ酸塩およびナンドロロンなどの複数の薬剤を使用する相補的治療を行った。しかしながら、治療を止める度に、彼のＰＳＡ値は急激に上昇した。２００８年４月、Ｃｏｍｂｉｄｅｘスキャンにより、３×５ｃｍの骨盤腔内腫瘤と左の水腎症が見つかり、同年６月には、新たなＰＳＡ値の逆戻りがあり、そしてまた新たなＣＴスキャン測定により、さらに左腸骨領域の腫瘤を確認したため、ＤＴＸによる治療が促された。患者は、化学療法前６０〜６６時間と化学療法後８〜２４時間の絶食を行うことを決めた（表３）。絶食中、患者は意識が朦朧とし、血圧が大きく低下する経験をしたが、化学療法後の自己申告による副作用は、７回の連続ＤＴＸサイクル後に発現した足の軽度の振動感覚以外にはほとんど何もなかった（図１２）。患者の検査結果を解析すると、ＡＮＣ、ＷＢＣ，血小板およびリンパ球数は正常の範囲に維持されていたが、赤血球とその関連パラメータ（ヘマトクリットおよびヘモグロビン）はそうでなかった（図１１Ａ〜Ｇ）。このことは、血液細胞の中には絶食依存性の保護の利益を受け得るものがあり、その他はそうでないことを示唆している。最後に、サイクルを通してＰＳＡ値は一貫して減少傾向を示したが、これは絶食が前立腺癌細胞の殺滅を妨げなかったことを立証するものである（図１１Ｈ）。
【００５８】
症例８：
ステージＩＩＡの乳癌（ＨＥＲ２＋）と診断された５３歳の白人女性患者。２００８年に行われた乳腺腫瘤摘出手術後、患者は２１日毎に予定された４サイクルの化学療法を受けた。投与計画にはＤＸＴ（７５ｍｇ／ｍ２）およびＣＰ（６００ｍｇ／ｍ２）が含まれた。４サイクルを通して、患者は化学療法実施前６４時間と化学療法実施後２４時間の絶食を行った。報告された副作用には、軽度の衰弱および軽度の短期記憶障害が含まれた（図１３）
【００５９】
症例９：
乳癌と診断され、補助化学療法が推奨された乳癌と診断された４８歳の白人女性患者。彼女の化学療法は、２１日スケジュールの４サイクルのＣＰ（１１００ｍｇ）併用ドキソルビシン（ＤＸＲ）（１１０ｍｇ）と、それに続く、週１回の頻度による１２週のパクリタキセルおよびトラスツズマブからなるものであった。患者は、最初の化学療法治療の前に、４８時間の絶食を行ったが、副作用の言及はなかった。第２のサイクルの間、患者は化学療法前６０時間と、薬剤投与後５時間の絶食を組み込んだ。興味深いことに、彼女は絶食を行うことにいかなる困難も示さなかった。彼女は脱毛と軽度の衰弱を経験したが、化学療法でよく報告されている他の副作用に苦しむことはなかった（図１４）。
【００６０】
症例１０：
ＲＥＲ２陽性乳癌と診断された７８歳の白人女性。診断時および複雑な乳腺腫瘤摘出手術の後、患者は乳房全切除術を受けた。Ｇ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を補ったＣＢＤＣＡ４００ｍｇ（ＡＵＣ＝６）、ＤＴＸ（７５ｍｇ／ｍ２）による６サイクルの補助化学療法と、その後の６か月までのトラスツズマブによる化学療法が、腫瘍学者により指示された（表３）。化学療法治療の期間を通して、患者は薬剤投与の前後に絶食を行った。患者は変動がある絶食法を採用したが、重度の副作用は経験しなかった（図１６；表３）。さらに血液検査の結果では、ＷＢＣ、ＡＮＣ、血小板およびリンパ球の数は、治療期間を通して正常な範囲であった（図１５Ａ〜Ｄ）。
【００６１】
経験した副作用の重篤度を調べるために、１０人の患者全員からの自己申告評価を得た。化学療法毒性の副作用の多くは蓄積性のものであるため、調査データは、絶食および非絶食を伴った化学療法の組み合わせの、全ての副作用を含めて比較した（図１７Ａ）。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＣｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａに基づいて、毒性のグレードを付けた。励まされたことに、化学療法−絶食サイクルはほとんど治療の後期で行われたにもかかわらず、患者全員から、比較的良好な自己申告の健康転帰が語られた。化学療法−絶食が行われたときはいつも、１０人の患者全員から悪心、嘔吐、下痢、腹部痙攣および口内触痛の報告がされることは実質的になかったが、一方、アドリブ食が与えられた患者では６人のうち５人までが、これらの症状の中の少なくとも１つを報告した（図１７Ａ）。全ての化学療法治療と併用して常に絶食が行われた４人の患者は、大部分の副作用で低い重篤度を報告した（図１２、１３、１４、１６）。軽度の衰弱と脱毛のみが多くの患者から報告された。絶食またはアドリブ食の両方と共に化学療法を受けた６人の患者では、自己申告の副作用の重篤度は、患者が絶食したか、しなかったかにかかわらず、化学療法の最も近接した２つのサイクルのみを考慮して決めた。絶食と併用した場合には、自己申告の副作用の多くで、重篤度の一般的かつ大きな減少が見られた（図１７Ｂ）。疲労および衰弱などの症状が顕著に減少する（それぞれ、ｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１９３）一方、絶食を併用したサイクルが一貫して最後に実施されたにもかかわらず、嘔吐および下痢は、絶食との併用時には決して経験されなかった（図１７Ｂ）。注目すべきことに、ＣＴＣ基準の調査に含まれる副作用で、絶食により平均重篤度が上昇したものは全くなかった（図１７Ａ、１７Ｂ）。
【００６２】
小規模かつ不均質な患者グループのこの調査結果は、絶食は安全であり、かつ癌患者が十分に耐え得るものであって、複数の化学療法依存副作用を改善し得ることを示唆している。患者による副作用の判断には先入観が影響し得るであろうが、化学療法後の血液検査の結果が示す改善傾向は、絶食が、実際、種々の化学療法薬から保護し得ることを立証している。注目すべきことに、絶食が各種毒物およびストレスから酵母およびマウスを保護することが知られており（Ｒａｆａｇｈｅｌｌｏ、ＬＰＮＡＳ、２００８；Ｍａｔｓｓｏｎ，Ｍ．著、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ ２００５）、したがって、多くの化学療法薬からヒトを保護する効果があることは、驚くべきことではないであろう。
【００６３】
結果
メジアン年齢が６１歳（４４〜７８歳の範囲）の、女性７人および男性３人の、化学療法を受けている１０人の癌患者が、この研究に参加している。４人は乳癌を患い、２人は前立腺癌、そして４人は卵巣癌、子宮、肺の非小細胞癌または食道腺癌を患っていた。患者は全員、彼らを治療する腫瘍学者の監視の下、化学療法前に合計４８〜１４０時間の絶食および／または化学療法後２４〜５６時間の絶食を自発的に行った。全ての症例で、絶食によく耐えることができた。空腹および血圧低下が、長い絶食の後に患者が言う共通の症状であった。
【００６４】
考察
癌治療中に一般に推奨される食は、栄養不足を防止または高める、脂肪のない体を保護する、栄養が関係する副作用（食欲減退、悪心、味覚の変化、または腸の変化など）を最小にするという総合的な目標に基づく（Ｄｏｙｌｅ、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｄｕｒｉｎｇ ａｎｄ Ａｆｔｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ、２００６）。化学療法後の標準的な食とは対照的に、このシリーズの大部分の患者は、疲労、衰弱、悪心、嘔吐および腹部痙攣などの副作用が軽減されるため、絶食は実行可能であり、有益であると報告した。絶食中に、眩暈、空腹または頭痛などの軽い症状は生じたが、仕事を含む通常な活動を妨げるほどのレベルではなかった。
【００６５】
癌患者においては、体重の減少が重大な関心事である。これは、癌自体、化学療法後の食欲減退、または胃腸障害によるものであり得る。注目すべきことに、この症例報告では、ほとんどの患者が絶食中の体重減少を急激に回復した。絶食と、絶食を行わない両方の化学療法を受けた患者では、化学毒性の副作用は、絶食−化学療法サイクル中に低減するようであった。この介入によって寛解されると思われる症状は、主として胃腸および体質に関するものであった。
【００６６】
非悪性細胞においては、絶食／グルコース欠乏などの厳しい条件になると、生命体を刺激して成長／再生を抑制し、そのエネルギーを維持／修復に使用させ、生存の機会を最大にさせる（Ｌｏｎｇｏ． Ｎａｔｕｒｅ． ２００５）。したがって、ＩＧＦ−Ｉなどの成長因子は減少し（Ｔｈｉｅｓｓｅｎ，Ｊ．Ｐ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖ １９９４；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｒ．Ｓｐｉｎｄｌｅｒ Ａｎｎｕａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２００７）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ７０）やグルコース応答タンパク質（ＧＲＰ７８）などの小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）などのストレス耐性機構が亢進する（Ｍｏｔｅ，Ｐ．Ｌ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ Ａｇｅ Ｄｅｖ １９９８；Ｌｅｅ，Ａ．Ｓ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１；Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａ Ｋ．Ｒｅｄｄｙ Ｊ．ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００３）。正常な細胞はこれらの変化に応答し、一方、悪性の細胞は増殖信号の自給自足のために応答しない（Ｈａｎａｈａｎ． Ｈａｌｌｍａｒｋｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ． ２０００）。したがって、絶食は、癌細胞に対する薬剤活性を低下させることなく、化学療法の毒性から正常細胞を選択的に保護するであろう。
【００６７】
結果は、僅かに１０人の患者による、未だ予備的なものであるが、それにもかかわらず、ここに示された副作用の大部分は蓄積性パターンを有し、かつ化学療法−絶食サイクルの大半が治療の後の方で行われているので、有望である。
【００６８】
【００６９】
【００７０】
【００７１】
【００７２】
【００７３】
【００７４】
【００７５】
【００７６】
【００７７】
【００７８】
【００７９】
【００８０】
実験２
図１８を参照すると、絶食は悪性細胞の放射線照射に対する感受性を高める。マウス乳癌（４Ｔ１−ｌｕｃ）細胞を９６ウェルの細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させた。その後、放射線照射前の４８時間、培地を低または高グルコース培地のいずれかに切り替えた（５または１０Ｇｙ；図１８Ａ、１８Ｂ）。生存率をＭＴＴ試験により測定した（図１８Ｃ）。統計的分析をＳｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により行った。
【００８１】
図１９を参照すると、絶食は悪性細胞の放射線照射に対する感受性を高める。マウスグリオーマ（ＧＬ２６）細胞を９６ウェルの細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させた。その後、放射線照射前の４８時間、培地を低または高グルコース培地のいずれかに切り替えた（５または１０Ｇｙ；図１９Ａ、１９Ｂ）。生存率をＭＴＴ試験により測定した（図１９Ｃ）。統計的分析をＳｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により行った。
【００８２】
図２０を参照すると、ＳＴＳ（絶食）はマウス乳癌細胞の放射線照射に対する感受性を高め、マウスにおける腫瘍のコントロール性を増大させる。体重２０〜２５ｇのメスのＢＡＬＢ／ｃマウスに同系の乳癌細胞（４Ｔ１−ｌｕｃ；２×１０５細胞／マウス）を皮下注射した。１３日目には、腫瘍は３００〜５００ｍｍ３にまで著しく進んでおり、放射線照射（ＩＲ；５Ｇｙ）前４８時間、マウスを絶食させて治療を開始した。１週間後に第２のＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）サイクルを行った。毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔの検定により統計的分析を行った。＊ｐ＜０．０５。
【００８３】
図２１を参照すると、ＳＴＳ（絶食）はマウスグリオーマ癌細胞の放射線照射に対する感受性を高め、マウスにおける腫瘍のコントロール性を増大させる。体重２５〜３０ｇのメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに同系のグリオーマ癌細胞（ＧＬ２６；３×１０５細胞／マウス）を皮下注射した。２７日目には、腫瘍は５００〜１０００ｍｍ３にまで著しく進んでおり、放射線照射（ＩＲ；７．５Ｇｙ）前の４８時間、マウスを絶食させて治療を開始した。１週間後に第２のＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）サイクルを行った。毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔの検定により統計的分析を行った。＊ｐ＜０．０５。
【００８４】
実験３
絶食により引き起こされるエネルギー源、成長因子および他の細胞外因子の多くの変化が、保護を阻害するだけでなく、多様な癌細胞の化学療法薬に対する感受性の増大を促進するという仮説を試験した。
【００８５】
絶食が化学療法毒性を相乗的に増大させるか否かを調べるために、マウス乳癌（４Ｔ１）、メラノーマ（Ｂ１６）、グリオーマ（ＧＬ２６）およびマウス神経芽細胞腫（ＮＸＳ２、Ｎｅｕｒｏ−２−ａ）、ならびにヒト神経芽細胞腫（ＡＣＮ）の細胞を使用して、各種のマウス癌モデルについて研究を行った。水の摂取は常に可能にした状態で、４８〜６０時間、餌を全く与えないことによって、短期の飢餓（ＳＴＳ）状態、すなわち絶食状態にした。予想通り、アドリブ食下で行われた化学療法は、皮下腫瘍の成長を遅らせた（図２２Ａ〜Ｃ）。注目すべきことに、絶食単独の２サイクル（各４８時間）は、化学療法治療の２サイクルと同等の効果があった。絶食単独の効果は第２サイクル後までは維持されなかったが、皮下メラノーマ腫瘤（Ｂ１６細胞）を有するマウスで、類似の効果が観察され（図２２Ｂ）、また皮下グリオーマ腫瘤（ＧＬ２６細胞）を有するマウスでも類似の効果が観察された（図２２Ｃ）。グリオーマモデルの絶食は、対照（アドリブ食、化学療法行わず）群の腫瘍の成長が異常に速かったため、一度だけ行った。多用されている化学療法薬のドキソルビシン（ＤＸＲ）またはシクロホスファミド（ＣＰ）のいずれかを絶食と併用すると、最大の治療係数が観察された（図２２Ａ〜Ｃ）。４Ｔ１乳癌では、２サイクルの絶食により、最後の治療から２０日後でも、腫瘍サイズはＣＰ治療単独群の半分未満であった（図２２Ａ）。同様の効果が、皮下グリオーマおよびメラノーマモデルで観察された（図２２Ｂ〜Ｃ）。注目すべきことに、絶食中の体重の減少は、化学療法治療後でも、通常、３日間の給餌再開で回復しており（図２３Ａ〜Ｄ）、腫瘍および化学療法がマウスの体重減少に及ぼす影響を、絶食は増幅させないことが確認され、これは、患者の絶食および化学療法についての先の研究での観察と一致している。
【００８６】
マウス乳癌細胞（４Ｔ１）、メラノーマ細胞（Ｂ１６）、および２種類の神経芽細胞腫細胞株（ＮＸＳ２およびＮｅｕｒｏ−２ａ）を免疫適格マウスに静脈注射することによって得られた転移モデルで、化学療法に対する絶食の影響を調べた。絶食は化学療法の効果を高め、全ての転移癌マウスモデルを延命させた（図２４〜２８）。メラノーマ転移モデルでは、転移に対するＳＴＳの影響を調べるために、早期にマウスを犠牲にした。興味深いことに、ＤＸＲと併用したＳＴＳは、通常の給餌下でＤＸＲを受けたマウスと比較して、Ｂ１６メラノーマ細胞の種々の臓器への転移が減少した（図２５）。例えば、肺への転移は、通常給餌下および絶食下でＤＸＲを受けたマウスで、それぞれ１００％および６５％見つけられた。さらに、通常給餌のマウスと異なり、絶食マウスの肝臓または脾臓には転移が検出されなかった（図２５）。
【００８７】
悪性の転移癌に対する複数サイクルの絶食および化学療法の効果を調べるために、２匹の神経芽細胞腫転移マウスモデルの生存をモニターした。アドリブ食群では死亡率が１００％であったのに対して、２サイクルの絶食と高用量ＤＸＲ（１６ｍｇ／Ｋｇ）治療を受けた、マウス神経芽細胞腫（ＮＸＳ２）を有するマウスでは、その４２％が長期生存（１８０日超）を達成した（図２６）。進行性転移癌のモデルを作るために、マウス神経芽細胞腫細胞（Ｎｅｕｒｏ−２ａ）をマウスに静脈注射し、化学療法を始める前の９日間、腫瘍を拡大させた。標準療法と併用したＳＴＳの効果を神経芽細胞腫転移モデルで調べるために、この子供の悪性腫瘍の治療に広く使用されている療法（１０ｍｇ／ＫｇのＤＸＲ＋８ｍｇ／Ｋｇのシスプラチン、ＣＤＤＰ）をベースとした高用量カクテル化学療法を、絶食と併用した。注目すべきことに、アドリブ食と併用したカクテル化学療法で治療したマウスが７５日目までに全て死亡したのに対し、カクテル化学療法と併用して絶食を行ったマウスの２５％は長期生存（３００日超）を達成した（図２７）。化学療法を行わずに多サイクルの絶食（ＳＴＳ）を行うことが神経芽細胞腫の進行を遅延させるのに有効であり得るか否かを調べるだけでなく、ヒト腫瘍モデルに対する効果も調べるために、ヒトＡＣＮ神経芽細胞腫細胞を皮下注射した免疫無防備状態のヌードマウスに、５サイクルの絶食を実施した（図２９）。３６日後、５サイクルの絶食は、腫瘍サイズを、通常給餌マウスで到達したそれの半分に抑えることができた（図２９）。
【００８８】
インビトロで絶食モデルを作るために、アドリブ食給餌マウスまたは４８時間絶食マウスのいずれかから採取した血清を含む培地で、癌細胞をインキュベートした。マウスでの結果と一致して、絶食マウスからの血清を加えた培地で培養した乳癌細胞（４Ｔ１）は、アドリブ食給餌マウスからの血清でインキュベートした場合と比べて、ＤＸＲおよびＣＰの双方に対する感受性が増大した（図３０）。グルコースおよび成長因子の顕著な減少（例えば、成長因子ＩＧＦ−Ｉの７５％の減少）は、絶食に対する２つの重要な細胞外応答であるので、通常給餌マウスおよび絶食マウスの血中グルコースの測定（図３１）をベースに、異なるグルコース濃度および血清濃度で細胞をインキュベート、すなわち、低グルコース（０．５ｇ／Ｌ）と低血清（１％ＦＢＳ）、または通常グルコース（ヒトおよびマウス細胞株でそれぞれ１．０および２．０ｇ／Ｌ）と通常血清（１０％ＦＢＳ）で、薬剤処理前２４時間、また薬剤処理中もインキュベートした（図３２）。インビボの研究と一致して、グルコースおよび血清の制限によって、マウスメラノーマ（Ｂ１６）、グリオーマ（ＧＬ２６）および乳癌（４Ｔ１）の細胞を含む、１７種の癌細胞株のうち１５種で、ＤＸＲおよび／またはＣＰに対する感受性が増大した（図３２〜３４）。さらに、グルコースまたは血清のいずれかだけを制限しても、癌細胞に対するＤＸＲおよび／またはＣＰの毒性を増大させたが、両者の併用ほどの効果はなかった（図３３、３４）。絶食依存ＤＳＲに関係する数多くの成長因子の中で、ＩＧＦ−Ｉの減少が重要な変化であり、またＩＧＦ−Ｉを点滴すると化学療法に対するマウスの保護を逆行させ得ることは先に報告した。ここでも、４Ｔ１およびＢ１６細胞をＩＧＦ−Ｉで処理すると、グルコース制限によって引き起こされた癌細胞のＤＸＲに対する感受性の増大を逆行させることが示されており、ＩＧＦ−Ｉを減少させることにより、ＳＴＳが癌細胞の感受性を一部増大させることを示唆している（図３５）。
【００８９】
このＳＴＳ依存増感作用が生じるメカニズムを調べるために、化学療法に暴露した癌細胞中のＤＮＡ一本鎖および二本鎖の断裂に及ぼす低グルコースの影響をコメットアッセイにより調べた。後世生物の主なエネルギー源であるグルコースは、悪性細胞に特に重要であり（ワールブルク効果として知られている現象）、血中グルコース値が高くなると癌の成長を促進する。グルコース値を、アドリブ食（２．０ｇ／Ｌ）から、低血清条件（１％ＦＢＳ）と併用した絶食後に到達する値（０．５ｇ／Ｌ）にまで低下させる（絶食依存の、血中の成長因子およびタンパク質の減少を模擬するためでもある）と、化学療法単独の場合よりＤＮＡの損傷が増加し、０．５ｇ／Ｌのグルコースと化学療法の併用では、４Ｔ１乳癌細胞（図３６Ａ）およびＢ１６メラノーマ細胞（図３６Ｂ）の双方で、ＤＮＡの損傷が大きく促進され、２０倍に増大した。その代わりに、ＧＬ２６グリオーマ細胞の処理では、低グルコースの効果はドキソルビシンの効果と相加的であった（図３６Ｃ）。
【００９０】
絶食に応答して癌細胞中で生じる遺伝子発現の変化について、先入観のない見解を得るために、４８時間絶食させたマウス、またはアドリブ食を給餌したマウスのいずれかの心臓、筋肉、肝臓、および皮下４Ｔ１乳癌の腫瘤についてゲノム全域にわたるマイクロアレイ解析を行った。マイクロアレイ解析は、絶食が細胞増殖に関係する遺伝子を特異的に制御することを明確に示している（図３７）。さらに、自家移植した乳癌（４Ｔ１）では、翻訳およびリボソームの生合成／アセンブリー遺伝子の発現が顕著に増加するが、正常組織では、それらは抑制されるか、または軽微な影響を受けるに過ぎないことがわかった（図３８）。この翻訳成分の増加と一致して、予め飢餓状態にした自家移植腫瘍の癌細胞（図３９Ａ）で、そしてまたインビトロでも、特にＣＰ治療と併用した場合（図３９Ｂ）でも、ＡｋｔおよびＳ６Ｋリン酸化反応が促進され、ｅＩＦ２αリン酸化反応が抑制された。しかしながら、この翻訳メカニズムの飢餓依存活性化にもかかわらず、癌細胞の倍加はインビトロでは大幅に減少しており（図４０）、これはインビボでの絶食による癌の進行抑制と一致している（図３６、３７）。翻訳は細胞サイクルの進行および細胞成長と密接な繋がりがあり、急速に増殖している細胞では細胞エネルギーの５０〜７５％を消費し得るコスト高のプロセスである。４Ｔ１腫瘍が、成長に必要な栄養素の欠乏を翻訳の増大によって補おうとし、その結果、細胞死に至る以上のエネルギーを消費することはあり得る。
【００９１】
ストレス耐性転写因子ＦＯＸＯ３ａは、ＡＫＴにより不活性化されることが知られているので、その発現に及ぼす絶食の影響を４Ｔ１腫瘤と正常組織で調べた。ＦＯＸＯ３ａは絶食に応答して特異的に制御されることがわかった。その発現は腫瘍で顕著に抑制され、正常臓器では誘発された（図４１）。自家移植乳癌（４Ｔ１）中の、他の主要なストレス応答転写因子、核因子カッパＢ（ＮＦｋＢ）に及ぼす絶食の影響も明らかになった。ＲＴ−ＰＣＲは、絶食によるＮＦｋＢの特異的発現を示しており、その発現は腫瘍で大きく抑制されたが、正常臓器では顕著に発現した（図４１）。ＮＦｋＢによって発現が誘導される保護遺伝子の中で、ヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）は、ＵＶＡおよび酸化ストレスを含む各種の刺激に応答して顕著に誘導される、進化的に保存されている酵素である。絶食はまた、腫瘍中でＨＯ−１の発現を抑制するが、正常臓器ではこの発現を大幅に増加させることがわかった。これは、ＦＯＸＯ３ａおよびＮＦｋＢと一致している（図４１）。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１．
【００９２】
ＦＯＸＯ３ａおよびＮＦｋＢの両者は、ＨＯ−１および／またはＭｎＳＯＤによって酸化ストレスを低下させるため、ＣＰによる治療後の標準条件下およびＳＴＳ条件下でのスーパーオキシド値を推定する方法として、ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）の酸化を利用して４Ｔ１細胞における活性酸素種（ＲＯＳ）の濃度を測定した（図４２，４３）。絶食／化学療法の後でより高レベルのＤＨＥ酸化が癌細胞中に検出され、酸化ストレスの増大と、スーパーオキシド値の上昇の可能性を示唆している。さらに、カスパーゼ−３の濃度が、ＳＴＳ後の同種移植腫瘍でのみ増加したが、正常な臓器ではインビボ（図４４Ａ）でもインビトロ（図４４Ｂ）でもそうでなかったことがわかり、これは、細胞死の促進におけるオキシダントの作用と、カスパーゼ−３の活性を阻害する際のＨＯ−１の役割に一致するものであった。癌細胞のグルコース制限により誘発される細胞死が、自己貪食によっても促進されることは従来示唆されている。低血清インキュベーションでのグルコース制限は、４Ｔ１細胞での自己貪食を増加させた（図４５）が、クロロキンによって自己貪食を阻害すると、細胞死が一層増加した。このことは、低グルコースが自己貪食依存細胞死による細胞死を促進するものではないことを示すものであった（図４６）。
【００９３】
化学療法に対する絶食依存の増感作用におけるＨＯ−１の役割を確認するために、絶食中にヘミンを使用してＨＯ−１の発現を誘導したところ、増感は部分的に逆行し得ることがわかった（図４７、４８）。反対に、ＨＯ−１阻害剤の亜鉛プロトポルフィリン（ＺｎＰＰ）が化学療法に対する癌細胞の感受性を高めた（図４９、５０）。両者を併せれば、これらの研究は、ＨＯ−１の発現の低下が、４Ｔ１乳癌細胞の絶食依存増感作用を引き起こすメカニズムに関与していることを示している。
【００９４】
要約すると、細胞培養およびマウスにおいて、飢餓／絶食に応答して生じることが知られている、グルコース、ＩＧＦ−Ｉの大幅な減少と、可能性のある他の多くの変化が、特に化学療法と併用した際に、広範な腫瘍細胞において成長の抑制と細胞死の顕著な増加をもたらすことが示された（図５１）。これらの結果は、癌療法において複数回の絶食サイクルを行うことにより、患者の保護および癌に対する増感効果の両方が提供され得ることを示唆している。
【００９５】
方法
細胞培養
４Ｔ１−ｌｕｃマウス乳癌細胞は、ＳｉｂＴｅｃｈ社（Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ、ＣＴ）から購入した。Ｂ１６−ｆｌｕｃマウスメラノーマ細胞は、Ｎｏａｈ Ｃｒａｆｔ（ＵＣＬＡ）から提供された。ＧＬ２６マウスグリオーマ、Ｕ８７−ＭＧヒト神経膠芽細胞腫の細胞は、Ｔｈｏｍａｓ Ｃｈｅｎ（ＵＳＣ）から提供された。ＰＣ３および２２ＲＶ１ヒト前立腺癌細胞は、Ｐｉｎｃｈａｓ Ｃｏｈｅｎ（ＵＣＬＡ）から提供された。ＭＣＦ−７およびＣ４２Ｂヒト乳癌細胞と、ＨｅＬａヒト子宮頚癌細胞は、Ａｍｙ Ｌｅｅ（ＵＳＣ）から提供された。ＬＯＶＯヒト結腸癌細胞は、Ｄａｒｒｙｌ Ｓｈｉｂａｔａ（ＵＳＣ）から提供された。ＮＸＳ２およびＮｅｕｒｏ−２ａマウス神経芽細胞腫、ヒトＡＣＮおよびＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽細胞腫、ＯＶＣＡＲヒト卵巣癌、ＭＺ−ＭＥＬヒトメラノーマ、Ａ４３１類表皮癌細胞は、Ｇａｓｌｉｎｉ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＬａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙで常法により培養された。４Ｔ１にはＬＣ３−ＧＦＰが安定に移入されており、これは、ＵＳＣのＪａｅ Ｊｕｎｇからの自己貪食の研究に対する親切な贈り物であった。全ての細胞は、常法により、ＤＭＥＭ１０％ＦＢＳ中、３７℃、５％ＣＯ２下で維持した。自己貪食を回避するために、インビトロでのＳＴＳ中、５μＭのクロロキン（ＣＱ）で細胞を４８時間処理した。ＨＯ−１の活性を調節するために、４Ｔ１細胞を、化学療法治療前の２４時間と、化学療法治療中の２４時間、１０μＭのヘミン（Ｓｉｇｍａ）、または２０μＭの亜鉛プロトポルフィリン（ＺｎＰＰ；Ｓｉｇｍａ）で処理した。
【００９６】
化学療法
ドキソルビシン（ＤＸＲ；Ｂｅｄｆｏｒｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡ）およびシクロホスファミド（ＣＰ；Ｂａｘｔｅｒ、ＵＳＡ）は、インビトロおよびインビボで使用した。
【００９７】
インビトロ化学療法は、化学療法を含有した培地で細胞を２４時間処理することにより行った。薬剤の最適量は、細胞々の細胞株毎に決定した。インビボの研究では、尾側部静脈からＤＸＲを静脈注射し、ＣＰは腹腔内に注射した。
【００９８】
癌のマウスモデル
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ＣａｌｉｆｏｒｎｉａのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅと、Ｉｔａｌｙ、ＧｅｎｏａのＮａｔｉｏｎａｌ ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのライセンスおよび倫理委員会により、そしてまたＩｔａｌｉａｎ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈにより認められている手順にしたがって、全ての動物実験を行った。皮下癌マウスモデルの作成には、１２週齢のメスＢＡＬＢ／ｃ、１２週齢のメスおよびオスのＣ５７ＢＬ／６マウス、ならびに７週齢のヌードマウスに、４Ｔ１乳癌細胞、Ｂ１６メラノーマおよびＧＬ２６グリオーマ細胞、ならびにＡＣＮヒト神経芽細胞腫細胞をそれぞれ注射した。転移癌マウスモデルでは、１２週齢のメスＢＡＬＢ／ｃ、１２週齢のメスおよびオスのＣ５７ＢＬ／６マウスに、それぞれ２×１０５の４Ｔ１、Ｂ１６、ＧＬ２６細胞を、尾側部静脈から静脈注射し、６週齢のメスＡ／Ｊマウスに、２×１０５のＮＸＳ２および１×１０６のＮｅｕｒｏ−２ａ細胞を、尾側部静脈から注射した。注射の前に、成長の対数期にある細胞を集め、２×１０６細胞／ｍｌでＰＢＳに懸濁させ、１００μＬ（２×１０５細胞／マウス）を腰背部へ皮下注射、または尾側部静脈から静脈注射した。ＡＣＮおよびＮｅｕｒｏ−２ａ細胞は、５×１０７および１×１０７細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳに懸濁させ、それぞれ１００μＬ（５×１０６ＡＣＮ細胞／マウスおよび１×１０６Ｎｅｕｒｏ−２ａ細胞／マウス）を腰背部へ皮下注射、または尾側部静脈から静脈注射した。全てのマウスは、皮下腫瘍注射の前に体毛を剃り、また静脈注射の前に穏やかに温めて静脈を膨張させた。定期的に体重を測定し、腫瘍サイズをデジタルノギスにより測定した。腫瘍体積を次式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅×高さ）×π／６（長さ、幅および高さの単位はｍｍである）により算出した。
【００９９】
インビトロ絶食
絶食マウスおよび通常給餌マウスの血中グルコースの測定に基づき、グルコースおよび／または血清を制限することにより、細胞を飢餓状態にした（低濃度約０．５ｇ／Ｌおよび高濃度約２．０ｇ／Ｌ）。ヒト細胞株には、通常のグルコースは１．０ｇ／Ｌであるとみなした。絶食培地に変更する前に、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。
【０１００】
インビボ絶食
餌を完全に取り去ったが、水は自由に飲めるようにして、動物をトータルで４８〜６０時間、絶食させた。マウスは、共食い、食糞および残留飼料を減少させるために、一匹ずつ清潔な新しいケージに入れた。絶食の直前、直後に体重を測定した。
【０１０１】
インビトロ測定法
臭化メチルチアゾリルジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）を還元する能力によって細胞毒性を測定した。簡単に説明すると、ＭＴＴをＰＢＳ中に５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、測定用として０．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に希釈し、３７℃で３〜４時間インキュベートした。ホルマザンの結晶を、３７℃で１００μｌの溶解緩衝液（ＳＤＳ１５％（ｗ／ｖ）、ジメチルホルムアミド５０％（ｖ／ｖ）、ｐＨ４．７）に終夜（１６時間）溶解した。生存率は、対照細胞に対する処理細胞のＭＴＴ還元レベルのパーセントで表示した。吸光度は、マイクロプレートリーダーＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）およびＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ ３．０ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して５７０ｎｍで読み取った。
【０１０２】
スーパーオキシド値は、蛍光染料ＤＨＥ（ジヒドロエチジン；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）の酸化により推定した。細胞をスライド上で培養し、処理し、ＰＢＳで二回洗浄した後、ＤＨＥ（１０μＭ；０．１％ＤＭＳＯ中）と共に３０分間のインキュベーションを行った。
【０１０３】
免疫ブロット法
氷冷ＰＢＳ中で細胞を一度洗浄し、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）およびホスファターゼ阻害剤のカクテル（Ｓｉｇｍａ）を含むＲＩＰＡｌｙｓｉｓ緩衝液中に集めた。同じプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を添加したＲＩＰＡｌｙｓｉｓ緩衝液中で腫瘍細胞を均質化した。全溶解液からのタンパク質を８〜１２％のＳＤＳ−ＰＡＧＥに溶解し、ＧＡＰＤＨ、Ａｋｔおよびホスフォ−Ｓｅｒ４７３Ａｋｔ、Ｐ７０Ｓ６キナーゼおよびホスフォ−Ｔｈｒ３８９ｐ７０Ｓ６キナーゼ、ｅＩＦ２αおよびホスフォ−Ｓｅｒ５１ ｅＩＦ２α用抗体（１：１０００〜２０００、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）使用し、免疫ブロット法により分析した。
【０１０４】
コメットアッセイプロトコール
細胞を培地中（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２）、１０５／ｍｌに希釈し、５０μＭのＤＸＲにより３７℃で１時間処理した。その後、氷冷ＰＢＳで細胞を１回洗浄し、製造業者が推奨する手順にしたがってＣｏｍｅｔＡｓｓａｙ（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，Ｉｎｃ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）に供した。コメット像をＮｉｋｏｎ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＴＥ３００蛍光顕微鏡により取得し、ソフトウェアＣｏｍｅｔ Ｓｃｏｒｅ（ＴｒｉＴｅｋ Ｃｏｒｐ．、バージョン１．５）で分析した。遺伝子型／処理グループ毎に１００〜３００の細胞を採点した。
【０１０５】
血液の採取およびグルコース値の測定
マウスを２％イソフルラン吸入薬で麻酔し、左心室穿刺により血液を採取した。血液はＫ２−ＥＤＴＡでコーティングしたチューブに採取し、血清を処理した（ＢＤ、ＵＳＡ）。血中グルコース値をＰｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘｔｒａ血中グルコース値モニタリングシステム（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡ）を使用して測定した。
【０１０６】
マイクロアレイ解析
Ｑｉａｇｅｎ製ＲＮｅａｓｙキット（カタログ番号７４１０６）を使用し、製造者から示された手順にしたがって、組織からＲＮＡを単離した。その後、ＩｌｌｕｍｉｎａＢｅａｄｃｈｉｐｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）製のＢＤ−２０２−０２０２チップにＲＮＡをハイブリダイズした。先述したように、生データをＺ正規化した。ＡＮＯＶＡフィルタリング（ＡＮＯＶＡ ｐ＜０．０５）を使用し、ＳＡＭプロトコールにしたがって、パラメータ化した有意性検定を行った。有意な遺伝子をそれぞれの対比較のために選択する。先述したＰＡＧＥ法を使用して遺伝子セットの濃縮を試験した。Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ Ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ Ｐａｔｈｗａｙ Ｄａｔａ Ｓｅｔにより提供される名前と説明に基づいて図面を選択した。さらに、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｐａｔｈｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用し、遺伝子の系統的関係および標準経路の分析を行う。
【０１０７】
リアルタイムＰＣＲ
Ｑｉａｇｅｎ製ＲＮｅａｓｙキット（カタログ番号７４１０６）を使用し、製造業者から示された手順にしたがって組織からＲＮＡを単離した。Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＡＢ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号４３６８８１４）を使用してｃＤＮＡを合成し、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（ＡＢ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号４３０９１５９）を使用してＲＴ−ＰＣＲを行った。キャリブレータ遺伝子としてＧＡＰＤＨ遺伝子を使用した。分析したそれぞれの処理は、３つの生物学的レプリカを使用して行い、少なくとも３つの反応を使用して、発現を計算した。発現比を２−ΔΔＣＰ法にしたがって計算した。
【０１０８】
実験４
化学療法を受けている癌患者の食計画を確認するために、様々な食組成をマウスモデルで試験した。目標点は、ホストの保護と広範な癌細胞の増感に有効であるとわかっている、血清グルコースおよび／またはＩＧＦ−１を２０〜７５％低下させることである。組成は、通常の体重を十分に維持することができるだけの栄養レベルが提供されるように選択される。毎日の食物摂取量、体重、および一般的健康（動作および身体的外見）がモニターされる。各給餌スケジュールの終わりには、グルコースおよびＩＧＦ−１の測定のために採血する。通常の総カロリーを有するが、特定のアミノ酸が不足している食（ＡＡ−Ｄ）では、５日間の給餌で（図５２）、血清ＩＧＦ−１（図５２）とグルコース（図５４Ａ）は顕著に低下することがわかった。短期飢餓の後にＡＡ−Ｄ食が続く再給餌パラダイム（図５３および５４Ｂ）で使用すれば、この有益な効果は増大する。
【０１０９】
２日間の極低カロリー食（ＶＣＭ、通常のカロリー摂取量の６％）と、その後に続く１日のアミノ酸欠損食（ＡＡ）からなる食計画では、短期飢餓（ＳＴＳ）の場合より血清ＩＧＦ−Ｉ値は顕著に低下した（図５５Ａ）。さらに、この食計画は化学療法薬、ドキソルビシン（ＤＸＲ）からマウスを保護した（図５５Ｂ）。ここでは、ＤＸＲは、２日間のＶＣＭ後、アミノ酸欠損食（ＡＡ）の再給餌開始時に注射される。
【０１１０】
低カロリーＶｅｇｅＧｅｌ製剤（野菜の推奨５食分に相当）は、短期飢餓（ＳＴＳ）に類似して血清グルコースおよびＩＧＦ−１を低下させることがわかった（図５６ＡおよびＢ）。さらに、３日間のカロリー制限ケトン産生食（カロリーの９０％が脂肪由来）では、血清ＩＧＦ−１およびグルコースが低下することが実証された（図６ＡおよびＢ、緑色の三角形）。重要なことに、１日間のこのケトン産生食の後に２日間のＶｅｇｅＧｅｌ製剤を摂ると、ケトン産生食単独の場合よりグルコースおよびＩＧＦ−Ｉ低下に有益な効果が得られる（図５７ＡおよびＢ、赤色の四角形）。
【０１１１】
以上、代表的な実施形態を記載したが、これらの実施形態により本発明の全ての可能な形態を記載することを意図するものではない。むしろ、この明細書で使用されている用語は、限定よりむしろ説明のための用語であり、本発明の精神と範囲から逸脱することなく各種の変更を加え得ることは理解される。さらに、各種実施形態の特徴を組み合わせて、本発明のさらに他の実施形態を形成することも可能である。
【図１−１】
【図１−２】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、２００９年１０月２２日出願の米国仮特許出願第６１／２５４，１５４号の利益を主張するものであり、その開示内容はすべて参照することによりここに組み込まれる。
【０００２】
本発明は、一般に、食事療法および癌の治療に関する。より詳しくは、本発明は、正常な細胞を保護しつつ、癌細胞の化学療法薬に対する感受性を高めるために使用することができる方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
化学療法は、様々な悪性腫瘍と診断された患者の生存を延長させることができる。しかしながら、正常な細胞および組織に対する有害な副作用のために、化学療法の用量の強度、頻度および効能が制限されている。例えば、広く処方されている抗癌剤のドキソルビシンおよびシスプラチンは、それぞれに現れる心毒性および腎毒性によって、その治療能力を完全に発揮することが制限されている（Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎ，Ｓ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １９８８；Ｈａｌｅ，Ｊ．Ｐ．、Ａｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ １９９４；Ｄｏｂｙａｎ，Ｄ．Ｃ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｅ．Ｔ１９８０；Ｆｉｌｌａｓｔｒｅ，Ｊ．Ｐ．、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ｌｅｔ １９８９）。したがって、悪性細胞の殺滅に妥協せずに正常な細胞を選択的に保護することにより、望ましくない毒性を減少させることは、癌治療を促進するための有望な戦略になる。
【０００４】
最近、培養細胞、および神経芽細胞腫のマウスにおいて、高用量の化学療法に対し、癌細胞を除き正常な細胞のみを特異的に保護することができる、絶食に基づく治療介入が報告された（Ｒａｆｆａｇｈｅｌｌｏ，Ｌ．、ＰＮＡＳ ２００８）。神経芽細胞腫異種移植マウスモデルでは、マウスに、エトポシド治療前の４８時間、水のみを与えた。アドリブ摂食（ａｄ ｌｉｂ ｆｅｄ）のマウスでは、高用量のエトポシドが５０％の致死率をもたらしたのに対して、絶食は、薬の化学毒性から保護しただけでなく、神経芽細胞腫の転移に依存する死亡も遅延させた（Ｒａｆｆａｇｈｅｌｌｏ，Ｌ．、ＰＮＡＳ ２００８）。
【０００５】
酵母から哺乳動物に至る生命体においては、カロリー制限がストレス耐性を高め、寿命を延ばすことが知られている。カロリー制限はまた、癌の増殖を遅らせることが示されているが、その効果が小さいうえに、癌患者には有害かつ持続することが非常に困難な長期の体重減少が求められるため、化学療法と併用することはできず、また単独で適用することもできない。
【０００６】
したがって、少なくともこれらの理由のために、治療の助けになるとともに、化学療法の副作用を軽減する食事療法を効果的に組み込んだ、さらなる癌の治療法が要望されている。
【発明の概要】
【０００７】
このような先行技術の背景に対し、癌の増殖または癌の症状を軽減する方法を提供する。本実施形態の方法は、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を提供するステップを含む。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪、好ましくは一不飽和脂肪から得る。その後、患者に、第２の所定期間、第２の食を提供する。第２の食では、患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与える。その後、体重の回復と、正常な細胞および臓器の最適な回復と健康に必要な必須栄養素の補充を最適化する第３の食を、患者に提供する。本実施形態は、正常な細胞の保護と、癌細胞の増殖の阻害および抑制に有効な、短期の改変食事療法プロトコールを提供する。このプロトコールと改変食事療法は、患者の長期の体重減少を引き起こすことなく、それらの効果を促進するであろう。
【０００８】
他の実施形態では、化学療法薬に対する癌の感受性を高める方法を提供する。この方法は、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を提供するステップを含む。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る。その後、患者に、第２の所定期間、第２の食を提供する。第２の食では、患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与える。その後、体重の回復と、正常な細胞および臓器の最適な回復と健康に必要な必須栄養素の補充を最適化する第３の食を、患者に提供する。本実施形態は、正常な細胞の保護と、癌の化学療法から／への感受性（特異的ストレス耐性）の増大に有効な、短期の改変食事療法プロトコールを提供する。このプロトコールと改変食事療法は、患者の長期の体重減少を引き起こすことなく、それらの効果を促進するであろう。
【０００９】
絶食は、それまでの化学療法サイクルにより衰弱した、あるいは、ひどく痩せてしまっている癌患者には潜在的に有害であるとする、腫瘍学者が一般に認めている考え方からすれば、これらの結果は興味深い。
【００１０】
さらに他の実施形態では、放射線治療に対する癌の感受性を高める方法を提供する。この方法は、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を提供するステップを含む。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る。その後、患者に、第２の所定期間、第２の食を提供する。第２の食では、患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与える。その後、体重の回復と、正常な細胞および臓器の最適な回復と健康に必要な必須栄養素の補充を最適化する第３の食を、患者に提供する。本実施形態は、正常な細胞の保護と、癌の放射線療法から／への感受性の増大（ストレス耐性の差）に有効な、短期の改変食事療法プロトコールを提供する。このプロトコールと改変食事療法は、患者の長期の体重減少を引き起こすことなく、それらの効果を促進するであろう。
【００１１】
他の実施形態では、単独で投与されたときに癌の増殖を遅延させ、あるいは、化学療法および／または放射線療法からホストを保護し、かつ癌細胞の化学療法および／または放射線療法に対する感受性を高めるための、特定の範囲のタンパク質、必須アミノ酸、炭水化物、脂肪、ビタミン、ミネラルおよび必須脂肪酸を含有する製剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、症例１における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図１Ａは好中球；（Ｂ）図１Ｂはリンパ球；（Ｃ）図１Ｃは白血球、ＷＢＣ、（Ｄ）図１Ｄは血小板；（Ｅ）図１Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図１Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図１Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｈ）図１Ｈは体重、黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示す。
【図２】図２は、症例１における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、２サイクルの化学療法単独の平均値と２サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図３】図３は、症例２における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、化学療法単独３サイクルの平均値と５サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図４】図４は、症例３における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図４Ａは好中球；（Ｂ）図４Ｂはリンパ球；（Ｃ）図４Ｃは白血球、ＷＢＣ、（Ｄ）図４Ｄは血小板；（Ｅ）図４Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図４Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図４Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｈ）図４Ｈは前立腺特異抗原（ＰＳＡ）値、患者は垂直の破線で示した９０日間のアビラテロンアセテート（ＣＹＰ１７阻害薬）トライアルに登録され、また、アビラテロンアセテートによる治療の期間を除いて、化学療法の日にＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与され、黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、矢印はテストステロンの塗布（クリーム、１％）を示し、臨床検査値の正常範囲は水平の破線で示す。
【図５】図５は、症例３における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、５サイクルの化学療法単独の平均値と７サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図６】図６は、症例４における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図６Ａは好中球；（Ｂ）図６Ｂはリンパ球；（Ｃ）図６Ｃは白血球、ＷＢＣ、（Ｄ）図６Ｄは血小板；（Ｅ）図６Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図６Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図６Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示す。
【図７】図７は、症例４における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、５サイクルの化学療法単独の平均値と１サイクルの化学療法−絶食治療を表す。
【図８】図８は、症例５における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、１サイクルの化学療法単独（第１サイクル）と５サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図９】図９は、症例６における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図９Ａは好中球；（Ｂ）図９Ｂはリンパ球；（Ｃ）図９Ｃは白血球、ＷＢＣ；（Ｄ）図９Ｄは血小板；（Ｅ）図９Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図９Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図９Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示し、患者は７１日目に赤血球の輸血（３単位）を受け、また、図示したようにＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与された。
【図１０】図１０は、症例６における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフである。
【図１１】図１１は、症例７における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図１１Ａは好中球；（Ｂ）図１１Ｂはリンパ球；（Ｃ）図１１Ｃは白血球、ＷＢＣ；（Ｄ）図１１Ｄは血小板；（Ｅ）図１１Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図１１Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図１１Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｈ）図１１Ｈは前立腺特異抗原（ＰＳＡ）値、黒三角形は化学療法の日を示し；四角形は絶食を示し、矢印はアビラテロンの投与を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示し、患者はまた、図示したように、Ｇ−ＣＳＦ Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与された。
【図１２】図１２は、症例７における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、８サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１３】図１３は、症例８における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、４サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１４】図１４は、症例９における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、４サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１５】図１５は、症例１０における血球数の臨床検査値のプロットを示す：（Ａ）図１５Ａは好中球；（Ｂ）図１５Ｂはリンパ球；（Ｃ）図１５Ｃは白血球、ＷＢＣ；（Ｄ）図１５Ｄは血小板；（Ｅ）図１５Ｅは赤血球、ＲＢＣ（Ｆ）図１５Ｆはヘモグロビン、Ｈｇｂ；（Ｇ）図１５Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ；（Ｇ）図１５Ｇはヘマトクリット、Ｈｃｔ、黒三角形は化学療法の日を示す；四角形は絶食を示し、臨床検査値の正常範囲は破線で示し、患者はまた、図示したようにＧ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を投与された。
【図１６】図１６は、症例１０における化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフであり、データは、６サイクルの化学療法−絶食治療の平均値を表す。
【図１７】図１７は、絶食を併用した、または併用しなかった化学療法後の自己申告による副作用を示す棒グラフである。（Ａ）図１７Ａのデータは、この研究の患者全員から報告されたＣＴＣグレードの平均値を表し；アドリブ摂食下の１８サイクルの化学療法を、４６サイクルの化学療法−絶食治療と比較し；（Ｂ）図１７Ｂのデータは、絶食および非絶食のサイクルのマッチングから得られたＣＴＣグレードの平均値を示し；６人の患者が化学療法単独、または化学療法−絶食治療を受け、最も近い２つのサイクルからの自己申告による副作用を互いに比較し、マッチングしたサイクルからのみ統計的分析を行い、データを平均値の標準誤差（ＳＥＭ）として表し、Ｐ値を対でない両側ｔ−検定により計算した（＊，Ｐ＜０．０５）。
【図１８】図１８は、マウス乳癌細胞（４Ｔ１−ｌｕｃ）を９６ウェル細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させた。その後、図１８Ａは、照射（５Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１８Ｂは、照射（１０Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１８Ｃは、生存率をＭＴＴ法により求め、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により統計的分析を行った実験の結果を示した、棒グラフである。
【図１９】図１９は、マウスグリオーマ（ＧＬ２６）細胞を９６ウェル細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させ、その後、図１９Ａは、照射（５Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１９Ｂは、照射（１０Ｇｙ）前の４８時間、培地を低または高グルコース培地に切り替え；図１９Ｃは、生存率をＭＴＴ法により求め、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により統計的分析を行った実験の結果を示した、棒グラフである。
【図２０】図２０は、体重２０〜２５ｇのメスのＢＡＬＢ／ｃマウスに、同系の乳癌細胞（４Ｔ１−ｌｕｃ；２×１０５細胞／マウス）を皮下注射したところ、１３日目には腫瘍が３００〜５００ｍｍ３まで著しく進んでおり、照射（ＩＲ；５Ｇｙ）前の４８時間、マウスを絶食させる治療を開始し、１週間後、ＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）の第２のサイクルを行い、毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定により統計的分析を行った実験をプロットしたものである（＊ｐ＜０．０５）。
【図２１】図２１は、体重２５〜３０ｇのメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに、同系のグリオーマ癌細胞（ＧＬ２６；３×１０５細胞／マウス）を皮下注射したところ、２７日目には腫瘍が５００〜１０００ｍｍ３まで著しく進んでおり、照射（ＩＲ；７．５Ｇｙ）前の４８時間、マウスを絶食させる治療を開始し、１週間後、ＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）の第２のサイクルを行い、毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定により統計的分析を行った実験をプロットしたものである（＊ｐ＜０．０５）。
【図２２】図２２は、絶食が腫瘍の化学療法に対する感受性を高めることを示すプロットであり、特に、マウスの（Ａ）図２２Ａは乳癌（４Ｔ１）、（Ｂ）図２２Ｂはメラノーマ（Ｂ１６）および（Ｃ）図２２Ｃはグリオーマ（ＧＬ２６）の皮下腫瘍の進行を、４８時間の各絶食サイクルの前後における腫瘍サイズの成長百分率で示している。
【図２３】図２３は、（Ａ〜Ｃ）図２３Ａ〜Ｃは皮下性および（Ｄ）図２３Ｄは転移性癌のマウスモデルにおいて、４８〜６０時間の絶食による体重の減少が、通常の給餌再開後、容易に回復したことを示すプロットである：（Ａ）図２３Ａはマウス乳癌（４Ｔ１）罹患ＢＡＬＢ／ｃマウス、（Ｂ）図２３Ｂはマウスメラノーマ（Ｂ１６）罹患Ｃ５７ＢＬマウス、および（Ｃ）図２３Ｃはグリオーマ（ＧＬ２６）罹患Ｃ５７ＢＬマウス、ならびに（Ｄ）図２３Ｄはマウス神経芽細胞腫（Ｎｅｕｒｏ２ａ）罹患Ａ／Ｊマウス。
【図２４】図２４は、２４〜４８時間の絶食が、転移性マウスメラノーマ（Ｂ１６）の生存を高めたことを示すプロットである。
【図２５】図２５は、種々の臓器へのＢ１６メラノーマ細胞の転移を、通常の給餌下でＤＸＲを投与されたマウスと比較して示す棒グラフである。
【図２６】図２６は、マウス神経芽細胞腫：ＮＸＳ２の２つの転移モデルにおいて、絶食がまた腫瘍の感受性を高め（Ｐ＜０．００１）、長期生存をもたらしたことを示すプロットである。
【図２７】図２７は、マウス神経芽細胞腫：Ｎｅｕｒｏ２ａの２つの転移モデルにおいて、絶食がまた腫瘍の感受性を高め（Ｐ＝０．００５）、長期生存をもたらしたことを示すプロットである。
【図２８】図２８は、乳癌（４Ｔ１）の転移マウスモデルにおいて、絶食が癌細胞の化学療法に対する感受性を高めたことを示すプロットである（ログランク検定、Ｐ＜０．０００５）。
【図２９】図２９は、絶食がヌードマウスに皮下注射した異種移植ヒト神経芽細胞腫（ＡＣＮ）の腫瘍進行を抑制したことを示すプロットであり；腫瘍が触知可能になった時点で、全部で５サイクルの絶食を行った［皮下モデルにＴｕｋｅｙポスト検定（２７日目の（Ｂ）にＳｔｕｄｅｎｔのｔ−検定）、転移モデルにログランク検定を使用した、一元配置分散分析、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１］。
【図３０】図３０は、アドリブ摂食マウスの血清で毒性の低かったＤＸＲおよびＣＰの用量に対する乳癌細胞の感受性を絶食マウスの血清が増大させたことを示す棒グラフである。対照群は、ヒトおよびマウスの細胞をそれぞれ、１０％ＦＢＳを加えた１．０ｇ／Ｌおよび２．０ｇ／Ｌのグルコース中で培養した。ＳＴＳ群は、１％ＦＢＳを加えた０．５ｇ／Ｌのグルコース中で培養した。ＭＴＴ還元法により生存率を求めた。グルコースと血清の全ての組み合わせがＤＸＲとＣＰに及ぼす影響については、図３３〜３４を参照。
【図３１】図３１は、絶食マウスの血中グルコース値を示す棒グラフである。
【図３２】図３２は、ＳＴＳが１７種の癌細胞のうち１５種でＤＸＲｉｎ ｖｉｔｒに対する感受性を高めたという実験結果を示すプロットであり、４種のマウス癌細胞、すなわち乳癌（４Ｔ１）、メラノーマ（Ｂ１６）、グリオーマ（ＧＬ２６）および神経芽細胞腫（ＮＸＳ２およびＮｅｕｒｏ２ａ）、ならびに１３種のヒト癌細胞、すなわち前立腺癌（ＰＣ３、２２ＲＶ１）、乳癌（ＭＣＦ−７、Ｃ４２Ｂ）、神経膠芽細胞腫（Ｕ８７−ＭＧ）、子宮頚癌（ＨｅＬａ）、結腸癌（ＬＯＶＯ）、神経芽細胞腫（ＡＣＮ、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）、類表皮癌（Ａ４３１）、メラノーマ（ＭＺ−ＭＥＬ）および卵巣がん（ＯＶＣＡＲ）にＳＴＳを適用し、ＤＸＲを併用した。
【図３３】図３３は、グルコースと血清の全ての組み合わせがＤＸＲに及ぼす影響を示すプロットである。
【図３４】図３４は、グルコースと血清の全ての組み合わせがＣＰに及ぼす影響を示すプロットである。
【図３５】図３５は、化学療法に対する癌細胞のＳＴＳ依存の増感を、ＩＧＦ−Ｉが無効にすることを示す棒グラフであり；グルコース制限下（１％ＦＢＳ存在下、０．５ｇ／Ｌ対２．０ｇ／Ｌ）、マウス乳癌（４Ｔ１）およびメラノーマ（Ｂ１６）細胞をｒｈＩＧＦ−Ｉ（２００μＭ）で処理し、続いてＤＸＲ（１６μＭ）で処理した；Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定；＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図３６】図３６は、その絶食と、酸化ストレスおよびＤＮＡ修復の調節とを示す試験結果であり；ＳＴＳは、遺伝毒性があり、（Ａ）図３６Ａは乳癌（４Ｔ１）においてＣＰと組み合せ、（Ｂ）図３６Ｂはメラノーマ（Ｂ１６）においてＤＸＲと組み合わせ、および（Ｃ）図３６Ｃはグリオーマ（ＧＬ２６）細胞においてＤＸＲと組み合わせ、コメットアッセイによる測定で、ＤＮＡの損傷を相乗的に増加させた。対照群およびＳＴＳ群の細胞は、１％ＦＢＳを加えた、通常グルコース（２．０ｇ／Ｌ）または低濃度グルコース（０．５ｇ／Ｌ）でそれぞれ培養した。薬剤は、図２２Ａ〜Ｃのインビボでの研究と一貫性が保たれるように選択した。
【図３７】図３７は、通常給餌マウスまたは絶食マウスからの皮下乳癌（４Ｔ１）に対するマイクロアレイ解析の結果を示したもので、細胞増殖経路の特異的制御を示している。
【図３８】図３８は、通常給餌マウスまたは絶食マウスからの皮下乳癌（４Ｔ１）に対するマイクロアレイ解析の結果を示したもので、リボソームアセンブリー／生合成を含む翻訳機構の増加を示している。
【図３９】図３９は、マウス乳癌細胞（４Ｔ１）において、絶食がＡｋｔおよびＳ６Ｋを増加させ、ｅＩＦ２αリン酸化反応を減少させており、翻訳成分の増加と整合していることを示す試験結果であり、（Ａ）図３９Ａはインビボ、（Ｂ）図３９Ｂはインビトロである。
【図４０】図４０は、ＳＴＳがインビトロで癌細胞の増殖を妨げており、マウスにおける腫瘍の増殖抑制と整合していることを示す棒グラフである。
【図４１】図４１は、フォークヘッドボックスＯ３（ＦＯＸＯ３）、核因子カッパＢ（ＮＦｋＢ）、およびヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ−１）などのストレス応答成分の発現において、絶食が、腫瘍においてはこれを顕著に抑制し、正常な臓器においてはこれを大量に誘導することにより、これを特異的に制御したことを示す棒グラフである；Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定；＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図４２】図４２は、ＳＴＳが、スーパーオキシドマーカー（ＤＨＥ）により推定される細胞内酸化ストレスを増加させたことを示す試験結果である。
【図４３】図４３は、ＳＴＳがＣＰ誘導細胞内スーパーオキシド値を増加させることを示す試験結果であり；インビトロで、マウス乳癌細胞（４Ｔ１）を絶食させ、ＣＰで処理した。
【図４４】図４４は、絶食が、腫瘍内のカスパーゼ３の開裂／活性化レベルを選択的に増加させたが、正常臓器／細胞ではそうでなかったことを示す試験結果であり、（Ａ）図４４Ａはインビボ、（Ｂ）図４４Ｂはインビトロの結果である。
【図４５】図４５は、細胞のエネルギー機構を維持するために、ＳＴＳが自己貪食を誘導したことを示す試験結果である。
【図４６】図４６は、ＳＴＳ処理中の自己貪食の遮断が細胞死をさらに増加させていることを示す棒グラフである。
【図４７】図４７は、マウス乳癌細胞（４Ｔ１）を、ＦＢＳを１％含有する通常または低濃度グルコース中において、最も一般的なＨＯ−１誘発剤のヘミン（１０μＭ）で処理し、その後ＣＰを加えた実験結果のプロットである。
【図４８】図４８は、ＨＯ−１が絶食依存性ＤＳＲの主たるメディエータであることを示すプロットであり；ＦＢＳを通常（１０％）または低濃度（１％）で含有する、通常または低濃度グルコース中において、最も一般的なＨＯ−１誘発剤のヘミンで、ＣＰ処理前の２４時間、およびＣＰ処理中の２４間、マウス乳癌細胞を処理した。
【図４９】図４９は、ＦＢＳを１％含有する通常または低濃度グルコース中において、一般に使用されているＨＯ−１阻害剤のＺｎＰＰ（２０μＭ）でマウス乳癌細胞（４Ｔ１）を処理し、その後ＣＰを加えた実験結果のプロットである。
【図５０】図５０は、ＨＯ−１が絶食依存性ＤＳＲの主たるメディエータであることを示すプロットであり；ＦＢＳを通常（１０％）または低濃度（１％）で含有する、通常または低濃度グルコース中において、一般に使用されているＨＯ−１阻害剤のＺｎＰＰで、ＣＰ処理前の２４時間、およびＣＰ処理中の２４間マウス乳癌細胞を処理した。
【図５１】図５１は、絶食に応答して化学療法に対する感受性を高めた絶食依存性腫瘍のモデルを示し、グルコース、ＩＧＦ−Ｉおよび他の成長促進分子／因子が減少し、この減少に応答して、悪性細胞が、ＡＫＴ／Ｓ６ＫおよびｅＩＦ２αを活性化させ、翻訳を増加させるが、またストレス耐性タンパク質のＦＯＸＯ３ａ、ＮＦｋＢおよびＨＯ−１の発現を減少させ、これらの変化によって、酸化ストレスおよびＤＮＡ損傷の増加、カスパーゼ−３の活性化、ならびに細胞死がもたらされている。
【図５２】図５２は、対照食（Ｔ．Ｄ．７９１２）もしくはアミノ酸処方（ＡＡ−Ｄ）を与えるか、または２．５日間飢餓させた（短期飢餓、ＳＴＳ）メスのＣＤ１マウスにおける血清ＩＧＦ−Ｉ値の実験結果を示すプロットであり；改変アミノ酸食では、５日間の給餌で、血清ＩＧＦ−Ｉが５０％まで低下した。
【図５３】図５３は、短期飢餓（ＳＴＳ）後、改変アミノ酸食を給餌することによって、低血清ＩＧＦ−Ｉ値が維持されたことを示すプロットであり；メスＣＤ１マウスに２．５日間飢餓させた後、２日または４日間、対照食（Ｔ．Ｄ．７９１２）または改変アミノ酸食（ＡＡ−Ｄを再び与えた。
【図５４】図５４は、血中グルコース値を示すプロットであり：（Ａ）図５４ＡはメスのＣＤ１マウスに３日間飢餓させるか、あるいは低カロリー（通常のカロリー摂取量の６％）ＶＣＭ食（３日間）、または改変アミノ酸食（ＡＡ−Ｄ、３または５日間）を与え；（Ｂ）図５４ＢはメスＣＤ１マウスに２．５日間飢餓させた後、４日間、対照食または改変アミノ酸食を再び与え、餌を取り上げてから４時間後にグルコースを測定した。
【図５５】図５５は、血清ＩＧＦ−Ｉ値：メスのＣＤ１マウスに２．５日間（ＳＴＳ）飢餓させるか、低カロリーＶＣＭ−Ｍ食（２日間）の後に、１日間の改変アミノ酸食（Ｍ／ＡＡ）を与えるか、または低カロリーＶＣＭ−Ｈ（２日間）の後に、１日間の変法アミノ酸食（Ｈ／ＡＡ）を与えて、Ｔｕｋｅｙ検定で対照と比較し；（Ｂ）図５５Ｂは２日間の低カロリーＶＣＭ食の後、１日間の改変アミノ酸食を与えることにより、ドキソルビシン（ＤＸＲ，１８ｍｇ／ｋｇ）で治療したマウスの生存率が増加した実験結果を示す棒グラフである。
【図５６】図５６は、メスのＣＤ１マウスに２．５日間、対照（Ｔ．Ｄ．７９１２）を与えるか、飢餓させるか、またはＶｅｇｅＧｅｌを与えた実験結果プロットである：（Ａ）図５６Ａは絶食血中グルコース値；（Ｂ）図５６Ｂは血清ＩＧＦ−Ｉ値。
【図５７】図５７は、メスのＣＤ１マウスに対照食（ＴＤ．７９１２）、カロリー制限ケトン産生食（３日間）、またはカロリー制限ケトン産生食（１日間）を与えた後、ＶｅｇｅＧｅｌ（２日間）を与えた実験結果のプロットである：（Ａ）図５７Ａは絶食血中グルコース値；（Ｂ）図５７Ｂは血清ＩＧＦ−Ｉ値。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の、現時点で好ましい組成物、実施形態および方法について詳しく説明するが、これは、本発明者らが現時点で知っている本発明の最良の実施モードを構成するものである。図面は必ずしも正確に縮尺したものではない。しかしながら、開示した実施形態が、種々の、他にも取り得る形態で実施することができる本発明の単なる例示であると理解されるべきである。したがって、ここで開示する具体的な詳細は、限定のためでなく、単に、本発明の任意の態様の代表的基礎として、かつ／または本発明を様々に使用するよう当業者に教示するための代表的な基礎として理解されるべきである。
【００１４】
実施例を除き、あるいは他に明示されていなければ、物質の量、または反応および／もしくは使用の条件を示す本明細書中のあらゆる数値的量は、本発明の最も広い範囲を記述する際には、「約」という語で修飾されていると理解されるべきである。記述されている数値範囲内での実施が一般には好ましい。また、反対の記載がなければ：パーセント、「部」および比の値は、重量基準であり；本発明に関連した所与の目的に適した、または好ましい物質の群またはクラスについての記載は、群またはクラスのメンバーの任意の２種以上の混合物も同様に適しているか、または好ましいものであるという意味を含んでおり；化学的表現での成分の記載は、明細書中に特定された組み合わせに添加する時の成分をいい、混合後の混合物の成分間の化学的相互作用を必ずしも排除するものではなく；頭字語または他の略語の最初の定義は、ここでの同一の略語のその後の全ての使用に適用され、また最初に定義された略語の通常の文法的な変更に準用され；かつ、反対の記載がなければ、特性の測定は、同一の特性に対して先に、または後に参照されたものと同じ手法によって測定される。
【００１５】
また、特定の成分および／または条件は、当然ながら変更し得るものであるから、本発明が以下に記載の特定の実施形態および方法に限定されないことも理解されるべきである。さらに、ここで使用する用語は、本発明の特定の実施形態を記載する目的でのみ使用されるものであって、決して限定することを意図するものではない。
【００１６】
また、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、特に他の明示がなければ、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」が複数の指示対象を含むことに注意しなければならない。例えば、ある構成要素を単数形で参照するとき、複数の構成要素を含むことを意図している。
【００１７】
用語「必須アミノ酸」は、有機体により合成できないアミノ酸をいう。ヒトの必須アミノ酸には、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリンが含まれる。さらに、次のアミノ酸―すなわち、ヒスチジン、チロシンおよびセレノシステインも、ある条件下ではヒトに必須である。
【００１８】
用語「キロカロリー」（ｋｃａｌ）および「大カロリー（Ｃａｌｏｒｉｅ）」は、食物のカロリーをいう。用語「カロリー（ｃａｌｏｒｉｅ）」はいわゆる小カロリーをいう。
【００１９】
用語「患者」は、霊長類（特に高等霊長類）、ヒツジ、イヌ、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）、モルモット、ヤギ、ブタ、ネコ、ウサギおよびウシなどのあらゆる哺乳動物を含む、ヒトまたは動物をいう。
【００２０】
用語「飢餓させる」は、細胞または患者を低栄養または無栄養状態にすることを意味する。
【００２１】
用語「癌」は、無制御な細胞分裂と、増殖し隣接する組織へ直接侵入するか、または転移により離れた部位に生着することにより拡がっていくそれらの細胞の能力を特徴とする疾病または疾患をいう。癌の例としては、これらに限定はされないものの、原発癌、転移癌、癌腫、リンパ腫、白血病、肉腫、中皮腫、膠腫、胚細胞腫、絨毛癌、前立腺癌、肺癌、乳癌、大腸癌、消化器癌、膀胱癌、膵臓癌、子宮内膜癌、卵巣癌、メラノーマ、脳癌、精巣腫瘍、腎臓癌、皮膚癌、甲状腺癌、頭頚部癌、肝臓癌、食道癌、胃癌、腸癌、結腸癌、直腸癌、骨髄腫、神経芽細胞腫、褐色細胞腫および網膜芽細胞腫が挙げられる。
【００２２】
一般に、短期飢餓（ＳＴＳまたは絶食）が、選択的に腫瘍の成長を妨げ、化学療法毒性から正常細胞を保護するが、癌細胞のそれに対する感受性は高めることがわかった。この目標を達成する方法および組成物の具体的な実施形態について、以下に説明する。本発明の作用は特定のメカニズムに限定されるものではないが、本発明の各種実施形態で観察される保護は、部分的には、その癌細胞に対する効果を妨害せずに、ＩＧＦ−Ｉ経路およびグルコース濃度を調節することによるものである（特異的ストレス耐性、ＤＳＲ）。絶食の保護効果の基礎は、栄養分が不足または欠乏するとき、再生／成長から保護／維持へエネルギーを配分し直す能力に基づいていると考えられる。長期の食事制限によって引き起こされるＩＧＦ−Ｉおよびグルコースの減少が、絶食に比べてはるかに小さいことを指摘しておかなければならない。さらに、絶食とは異なり、長期の食事制限は、慢性の体重減少を引き起こし、維持することが非常に困難であることから、大部分の癌患者に適していない。代わりに、化学療法前の平均約６２時間と、化学療法後の２４時間の絶食であれば、様々な毒性治療を受けている癌患者にとって十分に耐えられるものであった。
【００２３】
また、細胞の増殖およびストレス応答に関係する経路で一般に見られる発癌突然変異が、絶食中であっても、悪性細胞における高い保護モードへの切り替えを防止し、増殖または増殖関連状態を推進することも指摘しておかなければならない。酵母および哺乳動物についての研究からは、悪性細胞の毒素／オキシダントに対する増感が、保護モードへの移行阻害における増殖促進経路の重複性のために、発癌突然変異のタイプとはほとんど無関係であり得ることが示唆されており、これは大部分の癌細胞および癌タイプが、ＳＴＳまたは低ＩＧＦ−Ｉに応答して保護されないことを示している。
【００２４】
本発明の一実施形態においては、癌の増殖または癌の症状を緩和する方法が提供される。本実施形態によれば、癌患者は、同定後、第１の所定期間に第１の食が与えられる。第１の食は、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪、好ましくは一不飽和脂肪から得る。患者の通常のカロリー摂取量は、患者が彼／彼女の体重を維持するために消費するｋｃａｌ数である。患者の通常のカロリー摂取量は、患者との面接により、あるいは患者の体重を考慮することにより推定し得る。おおまかな目安として、患者の通常のカロリー摂取量は、平均、男で２６００ｋｃａｌ／日、女で１８５０ｋｃａｌ／日である。一つの態様（ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）では、第１の食で７００〜１２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。特に有用な態様では、第１の食で、平均体重の男性患者には約１１００ｋｃａｌ／日を与え、平均体重の女性患者には９００ｋｃａｌ／日を与える。通常、第１の所定期間は約１〜５日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。第１の食における脂肪レベルを見直すために、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎは、典型的な１日当たり２０００ｋｃａｌの食事に対して、次のような栄養の内訳：脂肪６５グラム（約５８５キロカロリー）、タンパク質５０グラム（約２００キロカロリー）、全炭水化物３００グラム（約１２００キロカロリー）を推奨している。したがって、第１の食の１つのバージョンでは、炭水化物とタンパク質からのカロリーの大部分は除かれる。
【００２５】
第１の食は実質的にいかなる脂肪源を包含してもよいが、一不飽和脂肪源、多価不飽和脂肪源など、不飽和脂肪が多い脂肪源が特に有用である（例えば、オメガ−３／６必須脂肪酸）。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食にはまた、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源としては、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００２６】
その後、患者には、第２の所定期間、第２の食が与えられる。第２の食では、最大５００ｋｃａｌ／日を患者に与える。一つの態様では、第２の食は、最大２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は３日である。さらに他の一つの態様では、第２の食には、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源には、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００２７】
第１の食および第２の食の効果は、患者の多くのパラメータを測定することによりモニターされる。例えば、患者のＩＧＦ−Ｉの血清中濃度は、第２の食の終わりまでには２５〜９０％減少していることが望ましい。また、患者の血中グルコース濃度も、第２の食の終わりまでには２５〜７５％減少していることが望ましい。
【００２８】
本実施形態の変形では、患者に、第３の所定期間、第３の食が与えられる。第３食は、患者の通常の食を補充するためのものである。補充組成物に、必須アミノ酸、ミネラルおよび必須脂肪が含まれるのが特徴である。有利なことに、第３の食は、患者に正常な体重を回復させ、その体力を最大にするであろう。通常、第３の所定期間は、少なくとも５日である。補充組成物にはまた、任意選択により、多くの追加の成分が含まれるであろう。例えば、補充組成物は、野菜抽出物を含んでもよい。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。補充組成物はまた、オメガ−３／６必須脂肪酸および非必須アミノ酸を含んでもよい。適切な非必須アミノ酸の例としては、限定はされないものの、ヒスチジン、セリン、タウリン、チロシン、システイン、グルタミン、およびこれらの組み合わせが挙げられる。補充組成物はまた、鉄、亜鉛、銅、マグネシウムおよびカルシウムを含有する多成分ミネラル錠を含んでもよく、またビタミンＢ１２などのビタミンＢ複合体を含有してもよい。
【００２９】
本発明の他の実施形態では、癌の化学療法薬に対する感受性を高める方法が提供される。本方法においては、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を与える。本方法に感受性の高い癌の例としては、限定はされないが、皮膚癌、結腸癌、乳癌、食道癌、前立腺癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、グリオーマ、メラノーマ、神経芽細胞腫および褐色細胞腫が挙げられる。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得る。通常、第１の所定期間は、約１〜５日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。上述したように、第１の食は、実質的に任意の脂肪源を包含するが、不飽和脂肪が多い脂肪源、特に一不飽和脂肪の脂肪源が好ましい。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないが、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３０】
その後、患者には、第２の所定期間、第２の食が与えられる。第２の食では、最大５００ｋｃａｌ／日を患者に与える。一つの態様では、第２の食は、最大２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は３日である。第２の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３１】
患者が第２の食を摂取している間、またはその後に、患者には化学療法薬剤が投与される。通常、化学療法薬剤は、第２の食の４８〜７２時間後に投与される。本方法が実質的にいかなる化学療法薬に対しても有効であることは、容易に理解される。有用な化学療法薬の例としては、限定はされないものの、ＤＮＡアルキル化剤、オキシダント、トポイソメラーゼ阻害薬、およびこれらの組み合わせが挙げられる。有用な化学療法薬の具体例としては、限定はされないものの、メチルメタンスルホネート、シクロホスファミド、エトポシド、および他のトポイソメラーゼ阻害薬、ドキソルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、および他のプラチナベースの薬剤、ゲムシタビン、ドセタキセルまたは５−ＦＵが挙げられる。
【００３２】
本発明の変形では、続いて、患者に、第３の所定期間、第３の食が与えられる。第３の食は、患者の通常のカロリー摂取量を補うものであり、補充組成物を含む。補充組成物に、必須アミノ酸が含まれるのが特徴である。補充組成物にはまた、天然の、必須脂肪酸源、ビタミン源およびミネラル源、ならびに鉄、亜鉛、銅、マグネシウムおよびカルシウムを含む多成分ミネラル錠が含まれていてもよく、また、ビタミンＢ１２などのビタミンＢ複合体が含まれていてもよい。
【００３３】
上記したように、第３の食を患者の通常の食と共に与えることにより、患者は正常な体重を回復し、体力が最大になるであろう。通常、第３の所定期間は少なくとも５日であり、無期限に続けてもよい。一つの態様では、第３の所定期間は、約４日〜約１４日である。この目的のためには、１週間がほぼ最適であると推定される。補充組成物にはまた、任意選択により、多くの追加の成分が含まれるであろう。例えば、補充組成物は野菜抽出物を含んでもよい。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。補充組成物はまた、オメガ−３／６必須脂肪酸および非必須アミノ酸を含んでもよい。適切な非必須アミノ酸の例としては、限定はされないものの、ヒスチジン、セリン、タウリン、チロシン、システイン、グルタミン、およびこれらの組み合わせが挙げられる。第３の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３４】
本実施形態の方法は、多くの治療上の利点を提供する。例えば、この方法によれば、患者に第１の食および第２の食が与えられていないときの化学療法薬の標準的な使用期間よりもより長い期間、患者に化学療法薬を与えることが可能になる。このような期間の増大は、第１および第２の食が、化学療法薬の毒作用を減少させ、かつ／または癌細胞の化学療法薬に対する感受性を、正常（すなわち、非癌性の）細胞よりも高めたことの結果である。多くの患者で、第１および第２の食を使用しない治療プロトコールよりも、ホストを保護する第１および第２の食によって、化学療法薬をより大量に投与することが可能になる。通常、そのような薬剤は、一般に患者が耐えられる量より少なくとも１０％多く投与することができる。しかしながら、ある種の患者では、そのような薬剤の用量は、１０％〜４０％増加させることができる。そのようなシナリオでは、患者をより積極的に治療することができる。他の一つの態様では、癌の感受性を高める第１および第２の食は、最適に近い、または増大した応答を維持しながら、患者に与える化学療法薬の量を通常より少なくできるという効果を有する。そのような場合、化学療法薬剤は、通常投与する量より少なくとも１０％少ない量を投与することができる。ある種の患者では、望ましくない毒性を低下させるために、そのような薬剤の用量を１０％〜４０％減少させることができる。本方法によればまた、好ましくない副作用を示す化学療法治療を患者に継続させることが可能になる。その場合、患者が化学療法に関連する毒性症状を示すことを確認した後、上述した方法および期間で、第１、第２および第３の食を与える。有利なことに、本方法によればまた、末期にあると確認され、他の方法では治療を中断するであろう患者に対し、治療を継続することが可能になる。さらに他の変形では、長期に亘る化学療法薬の投与中、例えば、５−ＦＵによる５日間の治療中に、第１および第２の食が与えられる。
【００３５】
本発明の他の実施形態では、癌の放射線療法に対する感受性を高める方法が提供される。本方法においては、癌患者を同定した後、第１の所定期間、第１の食を与える。本方法に感受性の高い癌の例としては、限定はされないが、皮膚癌、結腸癌、乳癌、食道癌、前立腺癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、グリオーマ、メラノーマ、神経芽細胞腫および褐色細胞腫が挙げられる。第１の食では、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、そのキロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得る。通常、第１の所定期間は、約１〜５日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。上述したように、第１の食は、実質的に任意の脂肪源を包含するが、不飽和脂肪が多い脂肪源、特に一不飽和脂肪の脂肪源が好ましい。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないが、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３６】
その後、患者には、第２の所定期間、第２の食が与えられる。第２の食では、最大５００ｋｃａｌ／日を患者に与える。一つの態様では、第２の食は、最大２００ｋｃａｌ／日を患者に与える。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は３日である。第２の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００３７】
患者が第２の食を摂取している間、またはその後、患者には放射線療法が行われる。通常、放射線療法は第２の食の４８〜７２時間後に行われる。
【００３８】
本発明の変形では、続いて、患者に、第３の所定期間、第３の食が与えられる。第３食は、患者の通常のカロリー摂取量を補うものであり、補充組成物を含む。補充組成物に、必須アミノ酸が含まれるのが特徴である。補充組成物にはまた、天然の、必須脂肪酸源、ビタミン源およびミネラル源、ならびに鉄、亜鉛、銅、マグネシウムおよびカルシウムを含む多成分ミネラル錠が含まれていてもよく、また、ビタミンＢ１２などのビタミンＢ複合体が含まれていてもよい。
【００３９】
上記したように、第３の食を患者の通常の食と共に与えることにより、患者は正常な体重を回復し、体力が最大になるであろう。通常、第３の所定期間は少なくとも５日であり、無期限に続けてもよい。一つの態様では、第３の所定期間は、約４日〜約１４日である。この目的のためには、１週間がほぼ最適であると推定される。補充組成物にはまた、任意選択により、多くの追加の成分が含まれるであろう。例えば、補充組成物は野菜抽出物を含んでもよい。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。補充組成物はまた、オメガ−３／６必須脂肪酸および非必須アミノ酸を含んでもよい。適切な非必須アミノ酸の例としては、限定はされないものの、ヒスチジン、セリン、タウリン、チロシン、システイン、グルタミン、およびこれらの組み合わせが挙げられる。第３の食に関するさらなる詳細は、上で記載したものと同様である。
【００４０】
本発明のさらに他の実施形態では、癌患者に食事を提供するための、癌の増殖を抑制し、化学療法薬の効果を高める治療食パッケージが提供される。治療食パッケージは、上記の方法が必要とする適切な栄養とカロリーを提供するように考えられている。治療食パッケージには、第１の食事コンポーネント、第２の食事コンポーネントおよび補充組成物が含まれる。第１の食事コンポーネントは、上述した第１の食の栄養成分を提供する。第１の食事コンポーネントは、患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を患者に与え、かつそのキロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る食事に分割される。第１の食事コンポーネントは、第１の所定期間に十分な量の食事を提供する。ある一つの態様では、第１の食事コンポーネントはまた、５食分の野菜に相当する抽出物およびオメガ−３／６必須脂肪酸を含む。
【００４１】
第２の食事コンポーネントは、上記第２のダイエット食の栄養成分を提供する。第２の食事コンポーネントは、癌患者に最大５００ｋｃａｌ／日を与える食事に分割される。第２の食事コンポーネントは、第２の所定期間に十分な量の食事を提供する。第２の食事コンポーネントはまた、５食分の野菜に相当する抽出物の他、ミネラルおよびオメガ−３／６必須脂肪酸も含む。
【００４２】
補充組成物は、少なくとも部分的に、上述した第３の食の栄養成分を提供する。通常、補充組成物は、患者に通常のカロリー摂取量の幾分かを提供するために、患者の通常の食と併用される。補充組成物は、必須アミノ酸を含む。補充組成物は、第３の所定期間に十分な量の補充物を提供する。
【００４３】
上記したように、第１の食事コンポーネントは高脂肪である。第１の食事コンポーネントは実質的に任意の脂肪源を包含し得るが、脂肪の潜在的に有害な心血管の副作用を最小化するため、特にこの食を度々使用するであろう患者には、不飽和脂肪が多い脂肪源、特に一不飽和脂肪源が好ましい。一不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、ピーナッツバター、オリーブ、ナッツ（例えば、アーモンド、ペカン、ピスタチオ、カシュー）、アボカド、種子類（例えば、ゴマ）、オイル類（例えば、オリーブ、ゴマ、ピーナッツ、キャノーラ）などが挙げられる。多価不飽和食物源の適切な例としては、限定はされないものの、クルミ、種子類（例えば、カボチャ、ヒマワリ）、亜麻仁、魚（例えば、サケ、マグロ、サバ）、オイル類（例えば、ベニバナ、ダイズ、トウモロコシ）が挙げられる。第１の食事コンポーネントにはまた、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源としては、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００４４】
上記したように、第２の食事コンポーネントは、患者に非常に低いカロリーを提供する。一つの態様では、第２の食事コンポーネントには、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される成分が含まれる。一つの態様では、そのような野菜抽出物は、野菜の推奨日量の５日分を提供する。適切な野菜抽出物源としては、限定はされないものの、青梗菜、ケール、レタス、アスパラガス、ニンジン、バターナットカボチャ、アルファルファ、グリーンピース トマト、キャベツ カリフラワー、ビートが挙げられる。適切なオメガ−３／６必須脂肪酸源としては、サケ、マグロ、サバ、ブルーフィッシュ、メカジキなどの魚が挙げられる。
【００４５】
補充組成物は、患者の通常の体重および体力が維持されるように（または、体重減少があったならば、回復するように）考えられている。一つの態様では、補充組成物はさらに、５食分の野菜に相当する抽出物の他、ミネラルおよびオメガ−３／６必須脂肪酸も含む。補充組成物は、目標とする体重および体力が達成されるように、通常の食と共に摂取すべきであると認識すべきである。上記したように、一般に、通常の食は患者の通常のカロリー摂取量をほぼ提供するであろう。
【００４６】
一つの変型例では、治療食パッケージはまた、第１の食のコンポーネント、第２の食のコンポーネントおよび補充組成物を癌患者に与えるための使用説明書を含む。使用説明書は、方法に関し、上で記載した詳細を提供するであろう。一つの態様では、使用説明書には、第１の食のコンポーネントが、上記のように、第１の所定期間を通して患者に提供されるべきことが記載される。通常、第１の所定期間は約１〜２日である。一つの態様では、第１の所定期間は１日である。使用説明書にはまた、第２の食のコンポーネントが、上記のように、第２の所定期間を通して患者に提供されるべきことが記載される。通常、第２の所定期間は約２〜７日である。特に有用な態様では、第２の所定期間は約３日である。使用説明書にはまた、補充組成物が通常の食と共に、そして特に、患者の体重および体力を維持または回復するのに十分な量の追加食品と共に摂取すべきであることが記載される。通常、第３の所定期間は少なくとも５日である。一つの態様では、第３の所定期間は約４日〜約１４日である。この目的のためには１週間がほぼ最適であることがわかっている。
【００４７】
本実施形態の変形例では、治療食パッケージは、容器（例えば、箱）に詰められる。一つの態様では、第１の食のコンポーネントおよび第２の食事コンポーネントはそれぞれ、１日量に分けられ、それを示すラベルが付される。さらに他の態様では、各１日分はさらに３食分に分けられる。通常、各食事は、固形食、ミルクセーキおよびスープの組み合わせ（１日目）で、２、３および４日目はスープとミルクセーキのみ（３食／日）であろう。各パッケージにはまた、必須脂肪酸、ミネラルおよびビタミンを含む錠剤、および／または野菜抽出物が入っているであろう。箱にはまた、錠剤の形態をしているであろう１週間分の補充食も入っているであろう。一般に、食の全てのコンポーネントで、それらに含まれる品目はいずれも非天然のものは最小限にされる。
【００４８】
以下の実施例は、本発明の各種実施形態を説明するものである。当業者であれば、本発明の精神と特許請求の範囲内に多くの変形があることを認めるであろう。
【実施例】
【００４９】
実験１
多様な悪性腫瘍があると診断された患者らが、化学療法の前（４８〜１４０時間）および／または後（２４〜５６時間）に自発的に絶食を行った１０の症例について記載する。絶食と組み合わせて平均４サイクルの化学療法を受けた１０人の患者は、空腹以外は誰も、絶食自体による重大な副作用を訴えることはなかった。毒性のグレード分け、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）のＣｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ＣＴＣ）に基づいて行い、そして５人の患者が自己申告した副作用は、絶食が疲労、衰弱および消化器への副作用から保護し得ることを示している。癌の進行をモニターできた患者では、絶食が化学療法依存の腫瘍量または腫瘍マーカーの減少を阻害することはなかった。臨床転帰および患者の生活の質を高めることにおける絶食の役割を調べるには、制御した臨床試験が必要であるが、ここに示した１０の症例は、化学療法と併用した絶食は、妥当であり、安全であり、かつ従来の化学療法を増強する可能性を有していることを示唆している。
【００５０】
各種タイプの癌と診断され、化学療法の前後に自発的に絶食を行った患者について、１０の症例を報告する。自己評価による健康転帰と血液検査の結果に基づいて示された結果は、絶食が安全であって、癌細胞の殺滅を阻害せずに化学療法による多くの副作用を軽減し得ることを示唆している。
【００５１】
症例１：
ドセタキセル（ＤＴＸ）およびシクロホスファミド（ＣＰ）による補助化学療法が推奨された、ステージＩＩＡの乳癌と診断された５１歳の白人女性。彼女は第１回の化学療法を実施する前に絶食を行った。絶食の方法は、化学療法前の１２０時間、および化学療法後の６０時間（計１８０時間）はカロリーを完全に断ち、その間、彼女は水とビタミンのみを摂取するというものであった。患者は、この長期に亘る絶食を重大な不都合もなく終え、体重は７ポンド減少したが、これは治療が終わるまでに回復した（図ＩＨ）。絶食−化学療法のサイクル後、患者は軽い疲労、口内乾燥、吃逆を経験した（図２）が、それにもかかわらず、彼女は日々の活動（１日に１２時間まで仕事）を行うことができた。対照的に、その後の化学療法サイクル（第２回および第３回）では、彼女は絶食せずに化学療法を受け、軽度から重度に至る疲労、衰弱、悪心、腹部痙攣および下痢を訴えた（図２）。今度は、副作用によって彼女はいつもの仕事のスケジュールをこなせなかった。第４回および最後のサイクルでは、化学療法前の１２０時間、および化学療法後の２４時間の絶食からなる異なる方法であったが、再度、絶食することを選択した。注目すべきことに、前のサイクルで組織には蓄積された損傷が見込まれるにもかかわらず、彼女が自己申告した副作用は軽度なものであった。これと一致して、血液検査の結果も、絶食が血液細胞の保護に好ましい効果をもたらし得ることを支持するものであった。化学療法の前に絶食を行ったときは、総白血球数（ＷＢＣ）および好中球絶対数（ＡＮＣ）は、最下点で僅かではあるが一貫して増大した（図１Ａ、Ｃ；表１）。さらに、絶食−化学療法において、第１および第４サイクルそれぞれで、血小板数は減少せず、むしろ安定を維持するか、または増加することが観察された。（図１Ｄ）。興味深いことに、１４４時間の絶食と併用した第４回化学療法サイクル後、ＡＮＣ、ＷＢＣおよび血小板数は、８０日前の化学療法の開始以来、最高値に達した（図１Ａ、ＣおよびＤ）。研究室での数値とＣＴＣの調査は、概ね、絶食が安全であって、化学療法による有害な副作用からこの患者を保護することができたことを示唆している。
【００５２】
症例２：
２００８年２月に食道腺癌と診断された６８歳の白人男性。診断時までに、ＣＴ−ＰＥＴスキャンで左副腎への転移が発見され、これはステージＩＶの疾患と一致する。初期の治療は、シスプラチン（ＣＤＤＰ）を併用した５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）であった。この化学療法と同時に、彼はまた最初の２サイクルで局所放射線照射を受けた。この期間を通して患者は、重度の衰弱、極度の疲労、激しい嘔吐および重篤な末梢神経障害を含む多くの副作用を経験した（図３）。さらに患者は、放射線治療により最も引き起こされやすい、重篤な粘膜炎に続いて強い嚥下障害を訴えた。第３のサイクルの間、重度の悪心と難治性嘔吐のために、５−ＦＵの投与を中断せざるを得なかった（図３）。化学療法と放射線を使用する攻撃的な治療にもかかわらず、彼の病気は進行した。２００８年８月に測定した新しいＣＴ−ＰＥＴからは、右の副腎、右肺の下葉、左仙骨、および烏口突起への新たな転移の展開が示された。これらのことから、彼の化学療法の強化が促された（第４のサイクル）。カルボプラチン（ＣＢＤＣＡ）のＤＴＸおよび５−Ｆｕとの併用（５−ＦＵは９６時間投与された）。患者は、第４のサイクルの間、化学療法前７２時間と、化学療法後５１時間の絶食を組み込んだ。化学療法後５１時間絶食したのは、５−ＦＵの継続投与から保護するためであった。患者は体重が約７ポンド減少したが、通常食を再開して最初の数日のうちに４ポンド回復した（データを示さず）。このサイクルの間、３種類の化学療法薬剤を併用したが、報告された自己申告の副作用は、アドリブ食−化学療法サイクルより一貫して軽度であった（図３）。第５の化学療法治療の前に、患者は再び絶食することを選択した。前に彼が受けたような９６時間の５−ＦＵの点滴を受ける代わりに、同用量の薬が４８時間以内に投与され、絶食の方法も薬剤送達前の４８時間と薬剤送達後５６時間に修正された。興味深いことに、自己申告の副作用が軽度であったばかりでなく、ＣＴ−ＰＥＴスキャンで記録された臨床応答も励みになるものであった。主な食道腫瘤、副腎転移、および肺の右下葉小結節の標準摂取率（ＳＵＶ）が減少したことが、スキャンで示された。第６、第７、第８サイクルでは、患者は化学療法治療の前後で絶食を行った（表３）。毒性の蓄積が予想されたにもかかわらず、第７化学療法サイクルの間に軽い下痢と腹部痙攣があったことを除いて、ほとんどの副作用が絶食により軽減された。非常に攻撃的な癌であり、十分に耐えられた化学療法であったにもかかわらず、患者の病気は進行し、患者は２００９年２月に死亡した。
【００５３】
症例３：
２０００年７月に、グリーソンスコア７、ＰＳＡ値５．８ｎｇ／ｍｌの両側前立腺癌と診断された７４歳の白人男性。２０００年９月に前立腺切除を行い、２００３年１月にＰＳＡ値が１．４ｎｇ／ｍｌに上昇するまでは、検出不能のＰＳＡ値であった。ビカルタミドおよびフィナステリドと共に酢酸リュープロリドが処方された。しかしながら、テストステロンの欠乏に関係した重度の副作用のために、２００４年４月にはこれらの薬の投与を中止せざるを得なかった。この病気をコントロールするために、トリプトレリンパモ酸塩、ニルタミド、サリドマイド、ＣＰおよびケトコナゾールを含む、異なる薬剤が使用された。２００７年には、患者のＰＳＡ値は９ｎｇ／ｍｌに達し、骨スキャン中に新たな転移が認められた。１週当たり２５ｍｇ／ｍ２のＤＴＸを投与したが、ＰＳＡ値は増加を続け、４０．６ｎｇ／ｍｌ（データを示さず）に達した。ベバシズマブを治療に加え、それによって初めて、ＰＳＡが顕著に低下した（データを示さず）。これに一致して、新たな骨スキャンは全体的な改善を示した。化学療法を伴うサイクルを通じて、患者は、疲労、衰弱、金属味、眩暈、失念、短期記憶障害および末梢神経障害を含む重篤な副作用を経験した（図５）。化学療法治療の停止後、彼のＰＳＡは急激に上昇した。３週サイクルで７５ｍｇ／ｍ２のＤＴＸ投与が方法として選択され、患者は、再度、重篤な副作用を経験することになった（図５）。２００８年６月、化学療法を中止した。患者は、ＣＹＰ１７（非性腺アンドロゲンの生合成に必要な一連の反応を触媒するミクロゾーム酵素）を選択的に遮断することができる薬剤である酢酸アビラテロンのフェーズＩＩＩ臨床試験に参加した（Ｄｅｒｅｋ ＲａｇｈａｖａｎおよびＥｒｉｃ Ａ．Ｋｌｅｉｎ著、Ｊ．Ｃ．Ｏ、２００８）。試験中、患者のＰＳＡ値は２０．９ｎｇ／ｄｌまで上昇し（図４Ｈ）、化学療法治療の再開を促された。今度は、患者は化学療法前に絶食することを選択した。彼の絶食スケジュールは、ほとんどが薬剤投与前６０時間および薬剤投与後２４であった（表３）。ＰＳＡ値は化学療法−絶食治療（ＤＴＸ ７５ｍｇ／ｍ２）を再開すると直ちに低下し、そして注目すべきことに、患者の副作用の報告は、以前のアドリブ食化学療法サイクルのときよりかなり少なかった（図５）。患者の経験と一致して、血液検査の結果は、治療の期間中一貫して安定しており、正常範囲に留まっていた（図４Ａ〜Ｇ）。最後の３サイクルの間、患者に、絶食に加えて、化学療法前の５日間、テストステロン（クリーム１％）を塗布した。その結果、ＰＳＡ値はテストステロン値と共に顕著に増加した。それにもかかわらず、絶食と併用した３サイクルの化学療法により、ＰＳＡは３４．２ｎｇ／ｍｌから６．４３ｎｇ／ｍｌへと低下した（図４Ｈ）。これらの結果は、絶食が癌細胞を部分的に保護し得る可能性を支持するものではない。
【００５４】
症例４：
２００８年６月に低分化の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）と診断された６１歳の白人女性。最初にＣＴスキャンで見られた腫瘤は、ＰＥＴスタディ（２００８年、６月）で異化亢進であることがわかり、生検の結果とも相関した。同じＰＥＴスキャンで、多数の縦隔および左の肺門周囲のリンパ節に、広範囲に及ぶ転移性の病変が認められた。骨、肝臓、脾臓および膵臓への転移も認められた。最初の治療は、２１日毎にＤＴＸを７５ｍｇ／ｍ２とＣＢＤＣＡを５４０ｍｇ／ｍ２投与することから始められた。彼女は通常の食を摂っていたが、最初の５サイクルの間、各化学療法治療の後で平均４ポンド体重が減少した。化学療法毒性が原因である可能性が最も高い。彼女の報告によれば、元の体重に戻るのに約３週間を要したということであった。経験した副作用の中でも、彼女は激しい筋痙攣、下肢神経障害、強い疲労、口内および舌の痛み、内出血のしやすさ、ならびに腸の不快感を訴えた（図７）。同じ薬と用量からなる第６サイクルの間、患者は、化学療法前４８時間と化学療法後２４時間、絶食した。この期間中に彼女の体重は約６ポンド減少したが、これは１０日で回復した（データを示さず）。患者は、軽い疲労と衰弱以外は、先の５回のサイクルの間に経験した他の副作用を訴えることはなかった（図７）。なお、末梢神経障害、脱毛または短期記憶障害などの蓄積性の副作用は、一度発現すると絶食により元に戻すことはできないことに留意しなければならない。一方、急性の有毒な副作用は、絶食状態で化学療法を行うと、回避できた（図７）。第６および最後のサイクルの後で、患者から、薬剤投与の僅か３日後に３マイルを歩けるほど急速に活力が回復したとの報告があった。患者の血液検査では大きな差異は認められなかった（図６Ａ〜Ｇ）。２００９年２月に行われた最後の放射線検査（ＰＥＴ）は、ベースライン検査と比較して、主要腫瘤（左肺の下葉）の病変が安定しており、かつ脾臓および肝臓中のトレーサーの吸収が減少していることを示した。
【００５５】
症例５：
２００８年にステージＩＶの子宮体部漿液性腺癌であると診断された７４歳の女性患者。外科的処置（ＴＡＨ−ＢＳＯ）に続いて補助化学療法を行うことが推奨された。さらに、骨盤、傍大静脈および大静脈前のリンパ節を切除した。最後に右尿管が大きく肥大していたので、右腎摘出を行った。ＣＢＤＣＡ（４８０ｍｇ）およびパクリタクセル（２８０ｍｇ）の投与を、２１日毎に、６サイクル行った。第１の治療の間、患者は通常の食を摂っており、疲労、衰弱、脱毛、頭痛を経験し、胃腸の不快感を訴えた（図８）。一方、サイクル２〜６の間は、患者は薬剤投与の前後に絶食を行い、化学療法後の副作用が軽減したことを報告した（表３；図８）。他の報告と一致して、絶食は化学療法依存の癌細胞殺滅を妨害することはなく、これは第４サイクルの後でＣＡ−１２５腫瘍マーカーが８７％減少したことで実証された（データを示さず）。
【００５６】
症例６：
２００７年７月に、右卵巣腫瘤（１０×１２ｃｍ）と診断された４４歳の白人女性患者。外科的処置（ＴＡＨ−ＢＳＯ）が行われた。腫瘍は、卵巣被膜への浸潤がなく、切除した３０＋のリンパ節は全て陰性であった。彼女の病変はステージＩＡの卵巣癌肉腫とグレードづけられた。最初に行われた治療は、イホスファミドとＣＤＤＰによる６サイクルのコースであり、患者はこれを２００７年７月から１１月まで受けた。２００８年１月に行われた彼女の最初のＣＴスキャンでは、卵巣の病変の拡大は認められなかった。７か月後、ＭＲＩによって新たな多数の肺結節が見出された。この発見はＣＴスキャンにより確認され、脾臓領域における数か所の異常（低密度の像＝ＭＴＳ？）、および脊椎の退行性変化と共に、２０を超える新たな小結節が肺の内部に認められた。これらの結果に基づき、Ｔａｘｏｌ、カルボプラチンおよびアバスチンを含む薬剤による新たな投薬計画が立てられた。２００８年８月に点滴が開始され、３週間のスケジュールで行われた。同時に、患者には、高用量のビタミンＣ（５０ｍｇ／日）が追加された。２００８年９月には、ＣＴスキャンによる再評価が行われ、散在する多数の両側性肺結節のサイズと数が顕著に減少したことを示した。しかしながら、１１月までに、主な結節の１つが０．５〜０．８ｃｍまで拡大していることがＣＴスキャンにより判明し、病気が進行していることを示した。１日目にゲムシタビン、続いて８日目にゲムシタビンおよびドセタキセルからなる新たな治療が決められた。しかしながら、最初にゲムシタビンを総量（９００ｍｇ／ｍ２）投与した後、患者の好中球減少（図９Ａ）および血小板減少（図９Ｄ）が長引き、そのためその後の治療を中止しなければならなくなった。第２のサイクルでは、患者へのゲムシタビンの投与量を減らした（７２０ｍｇ／ｍ２）が、再び長期に亘る好中球減少および血小板減少がみられ、当初のスケジュールを完遂することは困難であった。第３サイクルの前に、患者は化学療法前６２時間と化学療法後２４時間の絶食を行った。患者は、絶食を行ったか否かにかかわらず、副作用を報告することはなかったが、興味深いことに、血液検査は絶食−化学療法治療の間に顕著な改善を示した（図１０）。最下点はあまり明瞭でないが、最高点はＡＮＣ、リンパ球およびＷＢＣ数においてはかなり高くなっていく傾向が認められた（それぞれ図９Ａ、Ｂ、Ｃ；表２）。さらに、第１および第２の化学療法サイクルの間、ゲムシタビン単独では、血小板数が急速かつ大幅に減少し、回復にそれぞれ１１および１２日を要した（表２）。しかしながら、最初の絶食−化学療法併用治療（第３サイクル）の後は、血小板数は減少せず、むしろ増加した（図９Ｄ）。先の化学療法単独治療と比べて、血小板の最下点はより低い値となったが、これは、３種類の化学療法薬の相加効果で説明できよう（図９Ｄ；表２）。それにもかかわらず、化学療法単独と比較すれば、絶食−化学療法治療の間は、血小板数の最高点と正常値への回復時間は、それぞれきわめて明瞭であり、かつ短縮された（図９Ｄ；表２）。複数回の絶食／化学療法後の血小板の、この顕著な改善と急速な回復は、患者が化学療法治療を完遂させるのを可能としたばかりでなく、この戦略が、血液細胞前駆体に対する保護効果を有し得るものであり、血小板および顆粒球の急速な再増殖を可能にすることを示唆している。
【００５７】
症例７：
１９９８年７月にグリーソンスコアー８の前立腺腺癌と診断された６６歳の白人男性。同年に実施したＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ検査では、右腸骨リンパ節に放射性トレーサーの明白な吸収がみられ、ステージＤ１の病気と一致した。１９９８年に、患者は初めて、酢酸リュープロリドとビカルタミドによる治療を受けた。１９９９年９月には、これらの薬剤を減らして、フィナステライドが処方された。２０００年１２月、ＣＴスキャンから、病気の局所進行が疑われた。彼は、酢酸リュープロリドによる第２サイクルを開始し、また高線量率（ＨＤＲ）近接照射療法、および強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）による外部ビーム照射も受けた。病気をコントロールするために、ビカルタミド、トリプトレリンパモ酸塩およびナンドロロンなどの複数の薬剤を使用する相補的治療を行った。しかしながら、治療を止める度に、彼のＰＳＡ値は急激に上昇した。２００８年４月、Ｃｏｍｂｉｄｅｘスキャンにより、３×５ｃｍの骨盤腔内腫瘤と左の水腎症が見つかり、同年６月には、新たなＰＳＡ値の逆戻りがあり、そしてまた新たなＣＴスキャン測定により、さらに左腸骨領域の腫瘤を確認したため、ＤＴＸによる治療が促された。患者は、化学療法前６０〜６６時間と化学療法後８〜２４時間の絶食を行うことを決めた（表３）。絶食中、患者は意識が朦朧とし、血圧が大きく低下する経験をしたが、化学療法後の自己申告による副作用は、７回の連続ＤＴＸサイクル後に発現した足の軽度の振動感覚以外にはほとんど何もなかった（図１２）。患者の検査結果を解析すると、ＡＮＣ、ＷＢＣ，血小板およびリンパ球数は正常の範囲に維持されていたが、赤血球とその関連パラメータ（ヘマトクリットおよびヘモグロビン）はそうでなかった（図１１Ａ〜Ｇ）。このことは、血液細胞の中には絶食依存性の保護の利益を受け得るものがあり、その他はそうでないことを示唆している。最後に、サイクルを通してＰＳＡ値は一貫して減少傾向を示したが、これは絶食が前立腺癌細胞の殺滅を妨げなかったことを立証するものである（図１１Ｈ）。
【００５８】
症例８：
ステージＩＩＡの乳癌（ＨＥＲ２＋）と診断された５３歳の白人女性患者。２００８年に行われた乳腺腫瘤摘出手術後、患者は２１日毎に予定された４サイクルの化学療法を受けた。投与計画にはＤＸＴ（７５ｍｇ／ｍ２）およびＣＰ（６００ｍｇ／ｍ２）が含まれた。４サイクルを通して、患者は化学療法実施前６４時間と化学療法実施後２４時間の絶食を行った。報告された副作用には、軽度の衰弱および軽度の短期記憶障害が含まれた（図１３）
【００５９】
症例９：
乳癌と診断され、補助化学療法が推奨された乳癌と診断された４８歳の白人女性患者。彼女の化学療法は、２１日スケジュールの４サイクルのＣＰ（１１００ｍｇ）併用ドキソルビシン（ＤＸＲ）（１１０ｍｇ）と、それに続く、週１回の頻度による１２週のパクリタキセルおよびトラスツズマブからなるものであった。患者は、最初の化学療法治療の前に、４８時間の絶食を行ったが、副作用の言及はなかった。第２のサイクルの間、患者は化学療法前６０時間と、薬剤投与後５時間の絶食を組み込んだ。興味深いことに、彼女は絶食を行うことにいかなる困難も示さなかった。彼女は脱毛と軽度の衰弱を経験したが、化学療法でよく報告されている他の副作用に苦しむことはなかった（図１４）。
【００６０】
症例１０：
ＲＥＲ２陽性乳癌と診断された７８歳の白人女性。診断時および複雑な乳腺腫瘤摘出手術の後、患者は乳房全切除術を受けた。Ｇ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）を補ったＣＢＤＣＡ４００ｍｇ（ＡＵＣ＝６）、ＤＴＸ（７５ｍｇ／ｍ２）による６サイクルの補助化学療法と、その後の６か月までのトラスツズマブによる化学療法が、腫瘍学者により指示された（表３）。化学療法治療の期間を通して、患者は薬剤投与の前後に絶食を行った。患者は変動がある絶食法を採用したが、重度の副作用は経験しなかった（図１６；表３）。さらに血液検査の結果では、ＷＢＣ、ＡＮＣ、血小板およびリンパ球の数は、治療期間を通して正常な範囲であった（図１５Ａ〜Ｄ）。
【００６１】
経験した副作用の重篤度を調べるために、１０人の患者全員からの自己申告評価を得た。化学療法毒性の副作用の多くは蓄積性のものであるため、調査データは、絶食および非絶食を伴った化学療法の組み合わせの、全ての副作用を含めて比較した（図１７Ａ）。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＣｏｍｍｏｎ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａに基づいて、毒性のグレードを付けた。励まされたことに、化学療法−絶食サイクルはほとんど治療の後期で行われたにもかかわらず、患者全員から、比較的良好な自己申告の健康転帰が語られた。化学療法−絶食が行われたときはいつも、１０人の患者全員から悪心、嘔吐、下痢、腹部痙攣および口内触痛の報告がされることは実質的になかったが、一方、アドリブ食が与えられた患者では６人のうち５人までが、これらの症状の中の少なくとも１つを報告した（図１７Ａ）。全ての化学療法治療と併用して常に絶食が行われた４人の患者は、大部分の副作用で低い重篤度を報告した（図１２、１３、１４、１６）。軽度の衰弱と脱毛のみが多くの患者から報告された。絶食またはアドリブ食の両方と共に化学療法を受けた６人の患者では、自己申告の副作用の重篤度は、患者が絶食したか、しなかったかにかかわらず、化学療法の最も近接した２つのサイクルのみを考慮して決めた。絶食と併用した場合には、自己申告の副作用の多くで、重篤度の一般的かつ大きな減少が見られた（図１７Ｂ）。疲労および衰弱などの症状が顕著に減少する（それぞれ、ｐ＜０．００１およびｐ＜０．００１９３）一方、絶食を併用したサイクルが一貫して最後に実施されたにもかかわらず、嘔吐および下痢は、絶食との併用時には決して経験されなかった（図１７Ｂ）。注目すべきことに、ＣＴＣ基準の調査に含まれる副作用で、絶食により平均重篤度が上昇したものは全くなかった（図１７Ａ、１７Ｂ）。
【００６２】
小規模かつ不均質な患者グループのこの調査結果は、絶食は安全であり、かつ癌患者が十分に耐え得るものであって、複数の化学療法依存副作用を改善し得ることを示唆している。患者による副作用の判断には先入観が影響し得るであろうが、化学療法後の血液検査の結果が示す改善傾向は、絶食が、実際、種々の化学療法薬から保護し得ることを立証している。注目すべきことに、絶食が各種毒物およびストレスから酵母およびマウスを保護することが知られており（Ｒａｆａｇｈｅｌｌｏ、ＬＰＮＡＳ、２００８；Ｍａｔｓｓｏｎ，Ｍ．著、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ ２００５）、したがって、多くの化学療法薬からヒトを保護する効果があることは、驚くべきことではないであろう。
【００６３】
結果
メジアン年齢が６１歳（４４〜７８歳の範囲）の、女性７人および男性３人の、化学療法を受けている１０人の癌患者が、この研究に参加している。４人は乳癌を患い、２人は前立腺癌、そして４人は卵巣癌、子宮、肺の非小細胞癌または食道腺癌を患っていた。患者は全員、彼らを治療する腫瘍学者の監視の下、化学療法前に合計４８〜１４０時間の絶食および／または化学療法後２４〜５６時間の絶食を自発的に行った。全ての症例で、絶食によく耐えることができた。空腹および血圧低下が、長い絶食の後に患者が言う共通の症状であった。
【００６４】
考察
癌治療中に一般に推奨される食は、栄養不足を防止または高める、脂肪のない体を保護する、栄養が関係する副作用（食欲減退、悪心、味覚の変化、または腸の変化など）を最小にするという総合的な目標に基づく（Ｄｏｙｌｅ、Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｄｕｒｉｎｇ ａｎｄ Ａｆｔｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ、２００６）。化学療法後の標準的な食とは対照的に、このシリーズの大部分の患者は、疲労、衰弱、悪心、嘔吐および腹部痙攣などの副作用が軽減されるため、絶食は実行可能であり、有益であると報告した。絶食中に、眩暈、空腹または頭痛などの軽い症状は生じたが、仕事を含む通常な活動を妨げるほどのレベルではなかった。
【００６５】
癌患者においては、体重の減少が重大な関心事である。これは、癌自体、化学療法後の食欲減退、または胃腸障害によるものであり得る。注目すべきことに、この症例報告では、ほとんどの患者が絶食中の体重減少を急激に回復した。絶食と、絶食を行わない両方の化学療法を受けた患者では、化学毒性の副作用は、絶食−化学療法サイクル中に低減するようであった。この介入によって寛解されると思われる症状は、主として胃腸および体質に関するものであった。
【００６６】
非悪性細胞においては、絶食／グルコース欠乏などの厳しい条件になると、生命体を刺激して成長／再生を抑制し、そのエネルギーを維持／修復に使用させ、生存の機会を最大にさせる（Ｌｏｎｇｏ． Ｎａｔｕｒｅ． ２００５）。したがって、ＩＧＦ−Ｉなどの成長因子は減少し（Ｔｈｉｅｓｓｅｎ，Ｊ．Ｐ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖ １９９４；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｒ．Ｓｐｉｎｄｌｅｒ Ａｎｎｕａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２００７）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ７０）やグルコース応答タンパク質（ＧＲＰ７８）などの小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）などのストレス耐性機構が亢進する（Ｍｏｔｅ，Ｐ．Ｌ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ Ａｇｅ Ｄｅｖ １９９８；Ｌｅｅ，Ａ．Ｓ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅ ２００１；Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａ Ｋ．Ｒｅｄｄｙ Ｊ．ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００３）。正常な細胞はこれらの変化に応答し、一方、悪性の細胞は増殖信号の自給自足のために応答しない（Ｈａｎａｈａｎ． Ｈａｌｌｍａｒｋｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ． ２０００）。したがって、絶食は、癌細胞に対する薬剤活性を低下させることなく、化学療法の毒性から正常細胞を選択的に保護するであろう。
【００６７】
結果は、僅かに１０人の患者による、未だ予備的なものであるが、それにもかかわらず、ここに示された副作用の大部分は蓄積性パターンを有し、かつ化学療法−絶食サイクルの大半が治療の後の方で行われているので、有望である。
【００６８】
【００６９】
【００７０】
【００７１】
【００７２】
【００７３】
【００７４】
【００７５】
【００７６】
【００７７】
【００７８】
【００７９】
【００８０】
実験２
図１８を参照すると、絶食は悪性細胞の放射線照射に対する感受性を高める。マウス乳癌（４Ｔ１−ｌｕｃ）細胞を９６ウェルの細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させた。その後、放射線照射前の４８時間、培地を低または高グルコース培地のいずれかに切り替えた（５または１０Ｇｙ；図１８Ａ、１８Ｂ）。生存率をＭＴＴ試験により測定した（図１８Ｃ）。統計的分析をＳｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により行った。
【００８１】
図１９を参照すると、絶食は悪性細胞の放射線照射に対する感受性を高める。マウスグリオーマ（ＧＬ２６）細胞を９６ウェルの細胞培養プレートに播種し（２０，０００／ウェル）、平衡化させ、４８時間かけて培養密度に到達させた。その後、放射線照射前の４８時間、培地を低または高グルコース培地のいずれかに切り替えた（５または１０Ｇｙ；図１９Ａ、１９Ｂ）。生存率をＭＴＴ試験により測定した（図１９Ｃ）。統計的分析をＳｔｕｄｅｎｔのｔ−検定（Ｎ＝６０）により行った。
【００８２】
図２０を参照すると、ＳＴＳ（絶食）はマウス乳癌細胞の放射線照射に対する感受性を高め、マウスにおける腫瘍のコントロール性を増大させる。体重２０〜２５ｇのメスのＢＡＬＢ／ｃマウスに同系の乳癌細胞（４Ｔ１−ｌｕｃ；２×１０５細胞／マウス）を皮下注射した。１３日目には、腫瘍は３００〜５００ｍｍ３にまで著しく進んでおり、放射線照射（ＩＲ；５Ｇｙ）前４８時間、マウスを絶食させて治療を開始した。１週間後に第２のＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）サイクルを行った。毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔの検定により統計的分析を行った。＊ｐ＜０．０５。
【００８３】
図２１を参照すると、ＳＴＳ（絶食）はマウスグリオーマ癌細胞の放射線照射に対する感受性を高め、マウスにおける腫瘍のコントロール性を増大させる。体重２５〜３０ｇのメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに同系のグリオーマ癌細胞（ＧＬ２６；３×１０５細胞／マウス）を皮下注射した。２７日目には、腫瘍は５００〜１０００ｍｍ３にまで著しく進んでおり、放射線照射（ＩＲ；７．５Ｇｙ）前の４８時間、マウスを絶食させて治療を開始した。１週間後に第２のＳＴＳ／ＩＲ（３Ｇｙ）サイクルを行った。毎日、Ｓｔｕｄｅｎｔの検定により統計的分析を行った。＊ｐ＜０．０５。
【００８４】
実験３
絶食により引き起こされるエネルギー源、成長因子および他の細胞外因子の多くの変化が、保護を阻害するだけでなく、多様な癌細胞の化学療法薬に対する感受性の増大を促進するという仮説を試験した。
【００８５】
絶食が化学療法毒性を相乗的に増大させるか否かを調べるために、マウス乳癌（４Ｔ１）、メラノーマ（Ｂ１６）、グリオーマ（ＧＬ２６）およびマウス神経芽細胞腫（ＮＸＳ２、Ｎｅｕｒｏ−２−ａ）、ならびにヒト神経芽細胞腫（ＡＣＮ）の細胞を使用して、各種のマウス癌モデルについて研究を行った。水の摂取は常に可能にした状態で、４８〜６０時間、餌を全く与えないことによって、短期の飢餓（ＳＴＳ）状態、すなわち絶食状態にした。予想通り、アドリブ食下で行われた化学療法は、皮下腫瘍の成長を遅らせた（図２２Ａ〜Ｃ）。注目すべきことに、絶食単独の２サイクル（各４８時間）は、化学療法治療の２サイクルと同等の効果があった。絶食単独の効果は第２サイクル後までは維持されなかったが、皮下メラノーマ腫瘤（Ｂ１６細胞）を有するマウスで、類似の効果が観察され（図２２Ｂ）、また皮下グリオーマ腫瘤（ＧＬ２６細胞）を有するマウスでも類似の効果が観察された（図２２Ｃ）。グリオーマモデルの絶食は、対照（アドリブ食、化学療法行わず）群の腫瘍の成長が異常に速かったため、一度だけ行った。多用されている化学療法薬のドキソルビシン（ＤＸＲ）またはシクロホスファミド（ＣＰ）のいずれかを絶食と併用すると、最大の治療係数が観察された（図２２Ａ〜Ｃ）。４Ｔ１乳癌では、２サイクルの絶食により、最後の治療から２０日後でも、腫瘍サイズはＣＰ治療単独群の半分未満であった（図２２Ａ）。同様の効果が、皮下グリオーマおよびメラノーマモデルで観察された（図２２Ｂ〜Ｃ）。注目すべきことに、絶食中の体重の減少は、化学療法治療後でも、通常、３日間の給餌再開で回復しており（図２３Ａ〜Ｄ）、腫瘍および化学療法がマウスの体重減少に及ぼす影響を、絶食は増幅させないことが確認され、これは、患者の絶食および化学療法についての先の研究での観察と一致している。
【００８６】
マウス乳癌細胞（４Ｔ１）、メラノーマ細胞（Ｂ１６）、および２種類の神経芽細胞腫細胞株（ＮＸＳ２およびＮｅｕｒｏ−２ａ）を免疫適格マウスに静脈注射することによって得られた転移モデルで、化学療法に対する絶食の影響を調べた。絶食は化学療法の効果を高め、全ての転移癌マウスモデルを延命させた（図２４〜２８）。メラノーマ転移モデルでは、転移に対するＳＴＳの影響を調べるために、早期にマウスを犠牲にした。興味深いことに、ＤＸＲと併用したＳＴＳは、通常の給餌下でＤＸＲを受けたマウスと比較して、Ｂ１６メラノーマ細胞の種々の臓器への転移が減少した（図２５）。例えば、肺への転移は、通常給餌下および絶食下でＤＸＲを受けたマウスで、それぞれ１００％および６５％見つけられた。さらに、通常給餌のマウスと異なり、絶食マウスの肝臓または脾臓には転移が検出されなかった（図２５）。
【００８７】
悪性の転移癌に対する複数サイクルの絶食および化学療法の効果を調べるために、２匹の神経芽細胞腫転移マウスモデルの生存をモニターした。アドリブ食群では死亡率が１００％であったのに対して、２サイクルの絶食と高用量ＤＸＲ（１６ｍｇ／Ｋｇ）治療を受けた、マウス神経芽細胞腫（ＮＸＳ２）を有するマウスでは、その４２％が長期生存（１８０日超）を達成した（図２６）。進行性転移癌のモデルを作るために、マウス神経芽細胞腫細胞（Ｎｅｕｒｏ−２ａ）をマウスに静脈注射し、化学療法を始める前の９日間、腫瘍を拡大させた。標準療法と併用したＳＴＳの効果を神経芽細胞腫転移モデルで調べるために、この子供の悪性腫瘍の治療に広く使用されている療法（１０ｍｇ／ＫｇのＤＸＲ＋８ｍｇ／Ｋｇのシスプラチン、ＣＤＤＰ）をベースとした高用量カクテル化学療法を、絶食と併用した。注目すべきことに、アドリブ食と併用したカクテル化学療法で治療したマウスが７５日目までに全て死亡したのに対し、カクテル化学療法と併用して絶食を行ったマウスの２５％は長期生存（３００日超）を達成した（図２７）。化学療法を行わずに多サイクルの絶食（ＳＴＳ）を行うことが神経芽細胞腫の進行を遅延させるのに有効であり得るか否かを調べるだけでなく、ヒト腫瘍モデルに対する効果も調べるために、ヒトＡＣＮ神経芽細胞腫細胞を皮下注射した免疫無防備状態のヌードマウスに、５サイクルの絶食を実施した（図２９）。３６日後、５サイクルの絶食は、腫瘍サイズを、通常給餌マウスで到達したそれの半分に抑えることができた（図２９）。
【００８８】
インビトロで絶食モデルを作るために、アドリブ食給餌マウスまたは４８時間絶食マウスのいずれかから採取した血清を含む培地で、癌細胞をインキュベートした。マウスでの結果と一致して、絶食マウスからの血清を加えた培地で培養した乳癌細胞（４Ｔ１）は、アドリブ食給餌マウスからの血清でインキュベートした場合と比べて、ＤＸＲおよびＣＰの双方に対する感受性が増大した（図３０）。グルコースおよび成長因子の顕著な減少（例えば、成長因子ＩＧＦ−Ｉの７５％の減少）は、絶食に対する２つの重要な細胞外応答であるので、通常給餌マウスおよび絶食マウスの血中グルコースの測定（図３１）をベースに、異なるグルコース濃度および血清濃度で細胞をインキュベート、すなわち、低グルコース（０．５ｇ／Ｌ）と低血清（１％ＦＢＳ）、または通常グルコース（ヒトおよびマウス細胞株でそれぞれ１．０および２．０ｇ／Ｌ）と通常血清（１０％ＦＢＳ）で、薬剤処理前２４時間、また薬剤処理中もインキュベートした（図３２）。インビボの研究と一致して、グルコースおよび血清の制限によって、マウスメラノーマ（Ｂ１６）、グリオーマ（ＧＬ２６）および乳癌（４Ｔ１）の細胞を含む、１７種の癌細胞株のうち１５種で、ＤＸＲおよび／またはＣＰに対する感受性が増大した（図３２〜３４）。さらに、グルコースまたは血清のいずれかだけを制限しても、癌細胞に対するＤＸＲおよび／またはＣＰの毒性を増大させたが、両者の併用ほどの効果はなかった（図３３、３４）。絶食依存ＤＳＲに関係する数多くの成長因子の中で、ＩＧＦ−Ｉの減少が重要な変化であり、またＩＧＦ−Ｉを点滴すると化学療法に対するマウスの保護を逆行させ得ることは先に報告した。ここでも、４Ｔ１およびＢ１６細胞をＩＧＦ−Ｉで処理すると、グルコース制限によって引き起こされた癌細胞のＤＸＲに対する感受性の増大を逆行させることが示されており、ＩＧＦ−Ｉを減少させることにより、ＳＴＳが癌細胞の感受性を一部増大させることを示唆している（図３５）。
【００８９】
このＳＴＳ依存増感作用が生じるメカニズムを調べるために、化学療法に暴露した癌細胞中のＤＮＡ一本鎖および二本鎖の断裂に及ぼす低グルコースの影響をコメットアッセイにより調べた。後世生物の主なエネルギー源であるグルコースは、悪性細胞に特に重要であり（ワールブルク効果として知られている現象）、血中グルコース値が高くなると癌の成長を促進する。グルコース値を、アドリブ食（２．０ｇ／Ｌ）から、低血清条件（１％ＦＢＳ）と併用した絶食後に到達する値（０．５ｇ／Ｌ）にまで低下させる（絶食依存の、血中の成長因子およびタンパク質の減少を模擬するためでもある）と、化学療法単独の場合よりＤＮＡの損傷が増加し、０．５ｇ／Ｌのグルコースと化学療法の併用では、４Ｔ１乳癌細胞（図３６Ａ）およびＢ１６メラノーマ細胞（図３６Ｂ）の双方で、ＤＮＡの損傷が大きく促進され、２０倍に増大した。その代わりに、ＧＬ２６グリオーマ細胞の処理では、低グルコースの効果はドキソルビシンの効果と相加的であった（図３６Ｃ）。
【００９０】
絶食に応答して癌細胞中で生じる遺伝子発現の変化について、先入観のない見解を得るために、４８時間絶食させたマウス、またはアドリブ食を給餌したマウスのいずれかの心臓、筋肉、肝臓、および皮下４Ｔ１乳癌の腫瘤についてゲノム全域にわたるマイクロアレイ解析を行った。マイクロアレイ解析は、絶食が細胞増殖に関係する遺伝子を特異的に制御することを明確に示している（図３７）。さらに、自家移植した乳癌（４Ｔ１）では、翻訳およびリボソームの生合成／アセンブリー遺伝子の発現が顕著に増加するが、正常組織では、それらは抑制されるか、または軽微な影響を受けるに過ぎないことがわかった（図３８）。この翻訳成分の増加と一致して、予め飢餓状態にした自家移植腫瘍の癌細胞（図３９Ａ）で、そしてまたインビトロでも、特にＣＰ治療と併用した場合（図３９Ｂ）でも、ＡｋｔおよびＳ６Ｋリン酸化反応が促進され、ｅＩＦ２αリン酸化反応が抑制された。しかしながら、この翻訳メカニズムの飢餓依存活性化にもかかわらず、癌細胞の倍加はインビトロでは大幅に減少しており（図４０）、これはインビボでの絶食による癌の進行抑制と一致している（図３６、３７）。翻訳は細胞サイクルの進行および細胞成長と密接な繋がりがあり、急速に増殖している細胞では細胞エネルギーの５０〜７５％を消費し得るコスト高のプロセスである。４Ｔ１腫瘍が、成長に必要な栄養素の欠乏を翻訳の増大によって補おうとし、その結果、細胞死に至る以上のエネルギーを消費することはあり得る。
【００９１】
ストレス耐性転写因子ＦＯＸＯ３ａは、ＡＫＴにより不活性化されることが知られているので、その発現に及ぼす絶食の影響を４Ｔ１腫瘤と正常組織で調べた。ＦＯＸＯ３ａは絶食に応答して特異的に制御されることがわかった。その発現は腫瘍で顕著に抑制され、正常臓器では誘発された（図４１）。自家移植乳癌（４Ｔ１）中の、他の主要なストレス応答転写因子、核因子カッパＢ（ＮＦｋＢ）に及ぼす絶食の影響も明らかになった。ＲＴ−ＰＣＲは、絶食によるＮＦｋＢの特異的発現を示しており、その発現は腫瘍で大きく抑制されたが、正常臓器では顕著に発現した（図４１）。ＮＦｋＢによって発現が誘導される保護遺伝子の中で、ヘムオキシゲナーゼ−１（ＨＯ−１）は、ＵＶＡおよび酸化ストレスを含む各種の刺激に応答して顕著に誘導される、進化的に保存されている酵素である。絶食はまた、腫瘍中でＨＯ−１の発現を抑制するが、正常臓器ではこの発現を大幅に増加させることがわかった。これは、ＦＯＸＯ３ａおよびＮＦｋＢと一致している（図４１）。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定；＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１．
【００９２】
ＦＯＸＯ３ａおよびＮＦｋＢの両者は、ＨＯ−１および／またはＭｎＳＯＤによって酸化ストレスを低下させるため、ＣＰによる治療後の標準条件下およびＳＴＳ条件下でのスーパーオキシド値を推定する方法として、ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）の酸化を利用して４Ｔ１細胞における活性酸素種（ＲＯＳ）の濃度を測定した（図４２，４３）。絶食／化学療法の後でより高レベルのＤＨＥ酸化が癌細胞中に検出され、酸化ストレスの増大と、スーパーオキシド値の上昇の可能性を示唆している。さらに、カスパーゼ−３の濃度が、ＳＴＳ後の同種移植腫瘍でのみ増加したが、正常な臓器ではインビボ（図４４Ａ）でもインビトロ（図４４Ｂ）でもそうでなかったことがわかり、これは、細胞死の促進におけるオキシダントの作用と、カスパーゼ−３の活性を阻害する際のＨＯ−１の役割に一致するものであった。癌細胞のグルコース制限により誘発される細胞死が、自己貪食によっても促進されることは従来示唆されている。低血清インキュベーションでのグルコース制限は、４Ｔ１細胞での自己貪食を増加させた（図４５）が、クロロキンによって自己貪食を阻害すると、細胞死が一層増加した。このことは、低グルコースが自己貪食依存細胞死による細胞死を促進するものではないことを示すものであった（図４６）。
【００９３】
化学療法に対する絶食依存の増感作用におけるＨＯ−１の役割を確認するために、絶食中にヘミンを使用してＨＯ−１の発現を誘導したところ、増感は部分的に逆行し得ることがわかった（図４７、４８）。反対に、ＨＯ−１阻害剤の亜鉛プロトポルフィリン（ＺｎＰＰ）が化学療法に対する癌細胞の感受性を高めた（図４９、５０）。両者を併せれば、これらの研究は、ＨＯ−１の発現の低下が、４Ｔ１乳癌細胞の絶食依存増感作用を引き起こすメカニズムに関与していることを示している。
【００９４】
要約すると、細胞培養およびマウスにおいて、飢餓／絶食に応答して生じることが知られている、グルコース、ＩＧＦ−Ｉの大幅な減少と、可能性のある他の多くの変化が、特に化学療法と併用した際に、広範な腫瘍細胞において成長の抑制と細胞死の顕著な増加をもたらすことが示された（図５１）。これらの結果は、癌療法において複数回の絶食サイクルを行うことにより、患者の保護および癌に対する増感効果の両方が提供され得ることを示唆している。
【００９５】
方法
細胞培養
４Ｔ１−ｌｕｃマウス乳癌細胞は、ＳｉｂＴｅｃｈ社（Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ、ＣＴ）から購入した。Ｂ１６−ｆｌｕｃマウスメラノーマ細胞は、Ｎｏａｈ Ｃｒａｆｔ（ＵＣＬＡ）から提供された。ＧＬ２６マウスグリオーマ、Ｕ８７−ＭＧヒト神経膠芽細胞腫の細胞は、Ｔｈｏｍａｓ Ｃｈｅｎ（ＵＳＣ）から提供された。ＰＣ３および２２ＲＶ１ヒト前立腺癌細胞は、Ｐｉｎｃｈａｓ Ｃｏｈｅｎ（ＵＣＬＡ）から提供された。ＭＣＦ−７およびＣ４２Ｂヒト乳癌細胞と、ＨｅＬａヒト子宮頚癌細胞は、Ａｍｙ Ｌｅｅ（ＵＳＣ）から提供された。ＬＯＶＯヒト結腸癌細胞は、Ｄａｒｒｙｌ Ｓｈｉｂａｔａ（ＵＳＣ）から提供された。ＮＸＳ２およびＮｅｕｒｏ−２ａマウス神経芽細胞腫、ヒトＡＣＮおよびＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽細胞腫、ＯＶＣＡＲヒト卵巣癌、ＭＺ−ＭＥＬヒトメラノーマ、Ａ４３１類表皮癌細胞は、Ｇａｓｌｉｎｉ ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＬａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙで常法により培養された。４Ｔ１にはＬＣ３−ＧＦＰが安定に移入されており、これは、ＵＳＣのＪａｅ Ｊｕｎｇからの自己貪食の研究に対する親切な贈り物であった。全ての細胞は、常法により、ＤＭＥＭ１０％ＦＢＳ中、３７℃、５％ＣＯ２下で維持した。自己貪食を回避するために、インビトロでのＳＴＳ中、５μＭのクロロキン（ＣＱ）で細胞を４８時間処理した。ＨＯ−１の活性を調節するために、４Ｔ１細胞を、化学療法治療前の２４時間と、化学療法治療中の２４時間、１０μＭのヘミン（Ｓｉｇｍａ）、または２０μＭの亜鉛プロトポルフィリン（ＺｎＰＰ；Ｓｉｇｍａ）で処理した。
【００９６】
化学療法
ドキソルビシン（ＤＸＲ；Ｂｅｄｆｏｒｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡ）およびシクロホスファミド（ＣＰ；Ｂａｘｔｅｒ、ＵＳＡ）は、インビトロおよびインビボで使用した。
【００９７】
インビトロ化学療法は、化学療法を含有した培地で細胞を２４時間処理することにより行った。薬剤の最適量は、細胞々の細胞株毎に決定した。インビボの研究では、尾側部静脈からＤＸＲを静脈注射し、ＣＰは腹腔内に注射した。
【００９８】
癌のマウスモデル
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ＣａｌｉｆｏｒｎｉａのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅと、Ｉｔａｌｙ、ＧｅｎｏａのＮａｔｉｏｎａｌ ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのライセンスおよび倫理委員会により、そしてまたＩｔａｌｉａｎ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈにより認められている手順にしたがって、全ての動物実験を行った。皮下癌マウスモデルの作成には、１２週齢のメスＢＡＬＢ／ｃ、１２週齢のメスおよびオスのＣ５７ＢＬ／６マウス、ならびに７週齢のヌードマウスに、４Ｔ１乳癌細胞、Ｂ１６メラノーマおよびＧＬ２６グリオーマ細胞、ならびにＡＣＮヒト神経芽細胞腫細胞をそれぞれ注射した。転移癌マウスモデルでは、１２週齢のメスＢＡＬＢ／ｃ、１２週齢のメスおよびオスのＣ５７ＢＬ／６マウスに、それぞれ２×１０５の４Ｔ１、Ｂ１６、ＧＬ２６細胞を、尾側部静脈から静脈注射し、６週齢のメスＡ／Ｊマウスに、２×１０５のＮＸＳ２および１×１０６のＮｅｕｒｏ−２ａ細胞を、尾側部静脈から注射した。注射の前に、成長の対数期にある細胞を集め、２×１０６細胞／ｍｌでＰＢＳに懸濁させ、１００μＬ（２×１０５細胞／マウス）を腰背部へ皮下注射、または尾側部静脈から静脈注射した。ＡＣＮおよびＮｅｕｒｏ−２ａ細胞は、５×１０７および１×１０７細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳに懸濁させ、それぞれ１００μＬ（５×１０６ＡＣＮ細胞／マウスおよび１×１０６Ｎｅｕｒｏ−２ａ細胞／マウス）を腰背部へ皮下注射、または尾側部静脈から静脈注射した。全てのマウスは、皮下腫瘍注射の前に体毛を剃り、また静脈注射の前に穏やかに温めて静脈を膨張させた。定期的に体重を測定し、腫瘍サイズをデジタルノギスにより測定した。腫瘍体積を次式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅×高さ）×π／６（長さ、幅および高さの単位はｍｍである）により算出した。
【００９９】
インビトロ絶食
絶食マウスおよび通常給餌マウスの血中グルコースの測定に基づき、グルコースおよび／または血清を制限することにより、細胞を飢餓状態にした（低濃度約０．５ｇ／Ｌおよび高濃度約２．０ｇ／Ｌ）。ヒト細胞株には、通常のグルコースは１．０ｇ／Ｌであるとみなした。絶食培地に変更する前に、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。
【０１００】
インビボ絶食
餌を完全に取り去ったが、水は自由に飲めるようにして、動物をトータルで４８〜６０時間、絶食させた。マウスは、共食い、食糞および残留飼料を減少させるために、一匹ずつ清潔な新しいケージに入れた。絶食の直前、直後に体重を測定した。
【０１０１】
インビトロ測定法
臭化メチルチアゾリルジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）を還元する能力によって細胞毒性を測定した。簡単に説明すると、ＭＴＴをＰＢＳ中に５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、測定用として０．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に希釈し、３７℃で３〜４時間インキュベートした。ホルマザンの結晶を、３７℃で１００μｌの溶解緩衝液（ＳＤＳ１５％（ｗ／ｖ）、ジメチルホルムアミド５０％（ｖ／ｖ）、ｐＨ４．７）に終夜（１６時間）溶解した。生存率は、対照細胞に対する処理細胞のＭＴＴ還元レベルのパーセントで表示した。吸光度は、マイクロプレートリーダーＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）およびＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ ３．０ソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して５７０ｎｍで読み取った。
【０１０２】
スーパーオキシド値は、蛍光染料ＤＨＥ（ジヒドロエチジン；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）の酸化により推定した。細胞をスライド上で培養し、処理し、ＰＢＳで二回洗浄した後、ＤＨＥ（１０μＭ；０．１％ＤＭＳＯ中）と共に３０分間のインキュベーションを行った。
【０１０３】
免疫ブロット法
氷冷ＰＢＳ中で細胞を一度洗浄し、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）およびホスファターゼ阻害剤のカクテル（Ｓｉｇｍａ）を含むＲＩＰＡｌｙｓｉｓ緩衝液中に集めた。同じプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を添加したＲＩＰＡｌｙｓｉｓ緩衝液中で腫瘍細胞を均質化した。全溶解液からのタンパク質を８〜１２％のＳＤＳ−ＰＡＧＥに溶解し、ＧＡＰＤＨ、Ａｋｔおよびホスフォ−Ｓｅｒ４７３Ａｋｔ、Ｐ７０Ｓ６キナーゼおよびホスフォ−Ｔｈｒ３８９ｐ７０Ｓ６キナーゼ、ｅＩＦ２αおよびホスフォ−Ｓｅｒ５１ ｅＩＦ２α用抗体（１：１０００〜２０００、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）使用し、免疫ブロット法により分析した。
【０１０４】
コメットアッセイプロトコール
細胞を培地中（１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２）、１０５／ｍｌに希釈し、５０μＭのＤＸＲにより３７℃で１時間処理した。その後、氷冷ＰＢＳで細胞を１回洗浄し、製造業者が推奨する手順にしたがってＣｏｍｅｔＡｓｓａｙ（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ，Ｉｎｃ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）に供した。コメット像をＮｉｋｏｎ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＴＥ３００蛍光顕微鏡により取得し、ソフトウェアＣｏｍｅｔ Ｓｃｏｒｅ（ＴｒｉＴｅｋ Ｃｏｒｐ．、バージョン１．５）で分析した。遺伝子型／処理グループ毎に１００〜３００の細胞を採点した。
【０１０５】
血液の採取およびグルコース値の測定
マウスを２％イソフルラン吸入薬で麻酔し、左心室穿刺により血液を採取した。血液はＫ２−ＥＤＴＡでコーティングしたチューブに採取し、血清を処理した（ＢＤ、ＵＳＡ）。血中グルコース値をＰｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘｔｒａ血中グルコース値モニタリングシステム（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡ）を使用して測定した。
【０１０６】
マイクロアレイ解析
Ｑｉａｇｅｎ製ＲＮｅａｓｙキット（カタログ番号７４１０６）を使用し、製造者から示された手順にしたがって、組織からＲＮＡを単離した。その後、ＩｌｌｕｍｉｎａＢｅａｄｃｈｉｐｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）製のＢＤ−２０２−０２０２チップにＲＮＡをハイブリダイズした。先述したように、生データをＺ正規化した。ＡＮＯＶＡフィルタリング（ＡＮＯＶＡ ｐ＜０．０５）を使用し、ＳＡＭプロトコールにしたがって、パラメータ化した有意性検定を行った。有意な遺伝子をそれぞれの対比較のために選択する。先述したＰＡＧＥ法を使用して遺伝子セットの濃縮を試験した。Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ Ｄａｔａｂａｓｅ ａｎｄ Ｐａｔｈｗａｙ Ｄａｔａ Ｓｅｔにより提供される名前と説明に基づいて図面を選択した。さらに、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｐａｔｈｗａｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｒｅｄｗｏｏｄ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用し、遺伝子の系統的関係および標準経路の分析を行う。
【０１０７】
リアルタイムＰＣＲ
Ｑｉａｇｅｎ製ＲＮｅａｓｙキット（カタログ番号７４１０６）を使用し、製造業者から示された手順にしたがって組織からＲＮＡを単離した。Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＡＢ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号４３６８８１４）を使用してｃＤＮＡを合成し、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（ＡＢ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号４３０９１５９）を使用してＲＴ−ＰＣＲを行った。キャリブレータ遺伝子としてＧＡＰＤＨ遺伝子を使用した。分析したそれぞれの処理は、３つの生物学的レプリカを使用して行い、少なくとも３つの反応を使用して、発現を計算した。発現比を２−ΔΔＣＰ法にしたがって計算した。
【０１０８】
実験４
化学療法を受けている癌患者の食計画を確認するために、様々な食組成をマウスモデルで試験した。目標点は、ホストの保護と広範な癌細胞の増感に有効であるとわかっている、血清グルコースおよび／またはＩＧＦ−１を２０〜７５％低下させることである。組成は、通常の体重を十分に維持することができるだけの栄養レベルが提供されるように選択される。毎日の食物摂取量、体重、および一般的健康（動作および身体的外見）がモニターされる。各給餌スケジュールの終わりには、グルコースおよびＩＧＦ−１の測定のために採血する。通常の総カロリーを有するが、特定のアミノ酸が不足している食（ＡＡ−Ｄ）では、５日間の給餌で（図５２）、血清ＩＧＦ−１（図５２）とグルコース（図５４Ａ）は顕著に低下することがわかった。短期飢餓の後にＡＡ−Ｄ食が続く再給餌パラダイム（図５３および５４Ｂ）で使用すれば、この有益な効果は増大する。
【０１０９】
２日間の極低カロリー食（ＶＣＭ、通常のカロリー摂取量の６％）と、その後に続く１日のアミノ酸欠損食（ＡＡ）からなる食計画では、短期飢餓（ＳＴＳ）の場合より血清ＩＧＦ−Ｉ値は顕著に低下した（図５５Ａ）。さらに、この食計画は化学療法薬、ドキソルビシン（ＤＸＲ）からマウスを保護した（図５５Ｂ）。ここでは、ＤＸＲは、２日間のＶＣＭ後、アミノ酸欠損食（ＡＡ）の再給餌開始時に注射される。
【０１１０】
低カロリーＶｅｇｅＧｅｌ製剤（野菜の推奨５食分に相当）は、短期飢餓（ＳＴＳ）に類似して血清グルコースおよびＩＧＦ−１を低下させることがわかった（図５６ＡおよびＢ）。さらに、３日間のカロリー制限ケトン産生食（カロリーの９０％が脂肪由来）では、血清ＩＧＦ−１およびグルコースが低下することが実証された（図６ＡおよびＢ、緑色の三角形）。重要なことに、１日間のこのケトン産生食の後に２日間のＶｅｇｅＧｅｌ製剤を摂ると、ケトン産生食単独の場合よりグルコースおよびＩＧＦ−Ｉ低下に有益な効果が得られる（図５７ＡおよびＢ、赤色の四角形）。
【０１１１】
以上、代表的な実施形態を記載したが、これらの実施形態により本発明の全ての可能な形態を記載することを意図するものではない。むしろ、この明細書で使用されている用語は、限定よりむしろ説明のための用語であり、本発明の精神と範囲から逸脱することなく各種の変更を加え得ることは理解される。さらに、各種実施形態の特徴を組み合わせて、本発明のさらに他の実施形態を形成することも可能である。
【図１−１】
【図１−２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の増殖または癌の症状を軽減する方法において、
ａ）癌患者を同定するステップと
ｂ）前記患者に、第１の所定期間、第１の食を提供するステップであって、前記第１の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得るステップと、
ｃ）前記患者に、第２の所定期間、第２の食を提供するステップであって、前記第２の食は、前記患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与えるステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記第１の所定期間が約１日であり、かつ前記第２の所定期間が約３日であることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、前記第２の食は、前記患者に最大２００ｋｃａｌ／日を与えることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、前記第１の食は、前記患者に７００〜１２００ｋｃａｌ／日を与えることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法において、
前記患者に、第３の所定期間、第３の食を提供するステップであって、前記第３の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの５０％を超えるカロリーを有する食品と補充組成物とを含み、前記補充組成物は必須アミノ酸を含むステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法において、前記第３の所定期間が少なくとも５日であることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項５に記載の方法において、前記補充組成物が、野菜抽出物源、オメガ−３／６必須脂肪酸、タンパク質および／または必須アミノ酸と非必須アミノ酸、ビタミン、ミネラル、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される成分をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法において、前記患者の血清中のＩＧＦ−Ｉ濃度を、２５〜９０％減少させることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法において、前記患者の血中グルコース濃度を、２５〜７５％減少させることを特徴とする方法。
【請求項１０】
癌の化学療法薬に対する感受性を高める方法において、
ａ）癌患者を同定するステップ、および
ｂ）前記患者に、第１の所定期間、第１の食を提供するステップであって、前記第１の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得るステップ、
ｃ）前記患者に、第２の所定期間、第２の食を提供するステップであって、前記第２の食は、前記患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与えるステップ、および
ｄ）前記患者が前記第２の食を少なくとも４８時間摂取している間、またはその後に、化学療法薬剤を前記患者に投与するステップ
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、ＤＮＡアルキル化剤、オキシダントまたはトポイソメラーゼ阻害薬であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、メチルメタンスルホネート、シクロホスファミド、エトポシド、ドキソルビシン、またはメナジオンシスプラチン、カルボプラチン、および他のプラチナベースの薬剤、ゲムシタビン、ドセタキセル、５−ＦＵ、またはトポイソメラーゼ阻害薬であることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の方法において、前記癌が、皮膚癌、結腸癌、乳癌、食道癌、前立腺癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、および前立腺癌、またはグリオーマ、メラノーマ、神経芽細胞腫、褐色細胞腫であることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の方法において、前記患者に前記第１の食および前記第２の食が与えられないとき、前記化学療法薬剤は、前記化学療法薬剤の標準の実施基準よりも長期間投与されることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤の長期投与中、前記第１および前記第２の食が投与されることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１０に記載の方法において、前記患者に前記第１の食および前記第２の食が与えられないとき、前記化学療法薬剤は、前記化学療法薬剤の標準の実施基準よりも短期間投与されることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、通常与えられる量より少なくとも１０％多く投与されることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、通常与えられる量より少なくとも１０％少なく投与されることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１０に記載の方法において、ステップｂ）の前に、前記患者が化学療法に関連する毒性症状を示していることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１０に記載の方法において、ステップｂ）の前に、前記患者が末期と診断されていることを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項１０に記載の方法において、前記第１の所定期間が約１日であり、かつ前記第２の所定期間が約３日であることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項１０に記載の方法において、前記第２の食が最大２００ｋｃａｌ／日であることを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項１０に記載の方法において、前記患者に、第３の所定期間、第３の食を提供するステップであって、前記患者の通常の食を補う前記第３の食が補充組成物を含み、前記補充組成物は必須アミノ酸および他のアミノ酸を含むステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法において、前記第３の所定期間が少なくとも５日であることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２３に記載の方法において、前記補充組成物が、野菜抽出物源、オメガ−３／６必須脂肪酸、非必須アミノ酸、ミネラル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される成分をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
癌の放射線療法に対する感受性を高める方法において、
ａ）癌患者を同定するステップ、および
ｂ）前記患者に、第１の所定期間、第１の食を提供するステップであって、前記第１の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得るステップ、
ｃ）前記患者に、第２の所定期間、第２の食を提供するステップであって、前記第２の食は、前記患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与えるステップ、および
ｄ）前記患者が前記第２の食を少なくとも４８時間摂取している間、またはその後に、放射線療法を前記患者に実施するステップ
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
癌患者に食事を提供するための、癌の増殖を抑制し、化学療法薬の効果を高める治療食パッケージであって、
前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記癌患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る食事に分割され、第１の所定期間に十分な量の食事を提供する第１の食のコンポーネントと、
前記癌患者に最大５００ｋｃａｌ／日を与える食事に分割され、第２の所定期間に十分な量の食事を提供する第２の食事コンポーネントと、
必須アミノ酸および他の非必須アミノ酸、必須脂肪酸、ミネラル、ビタミン、並びに／または野菜抽出物を含む、第３の所定期間のための補充組成物と、
前記第１の食のコンポーネントおよび前記第２の食事コンポーネントを前記癌患者に与えるための使用説明書と
を含むことを特徴とする治療食パッケージ。
【請求項２８】
請求項２７に記載の治療食パッケージにおいて、前記第１の食のコンポーネント、前記第２の食事コンポーネント、および前記第３食コンポーネントはそれぞれ独立して、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される成分を含んでいることを特徴とする治療食パッケージ。
【請求項１】
癌の増殖または癌の症状を軽減する方法において、
ａ）癌患者を同定するステップと
ｂ）前記患者に、第１の所定期間、第１の食を提供するステップであって、前記第１の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得るステップと、
ｃ）前記患者に、第２の所定期間、第２の食を提供するステップであって、前記第２の食は、前記患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与えるステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記第１の所定期間が約１日であり、かつ前記第２の所定期間が約３日であることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、前記第２の食は、前記患者に最大２００ｋｃａｌ／日を与えることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、前記第１の食は、前記患者に７００〜１２００ｋｃａｌ／日を与えることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法において、
前記患者に、第３の所定期間、第３の食を提供するステップであって、前記第３の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの５０％を超えるカロリーを有する食品と補充組成物とを含み、前記補充組成物は必須アミノ酸を含むステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法において、前記第３の所定期間が少なくとも５日であることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項５に記載の方法において、前記補充組成物が、野菜抽出物源、オメガ−３／６必須脂肪酸、タンパク質および／または必須アミノ酸と非必須アミノ酸、ビタミン、ミネラル、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される成分をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法において、前記患者の血清中のＩＧＦ−Ｉ濃度を、２５〜９０％減少させることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法において、前記患者の血中グルコース濃度を、２５〜７５％減少させることを特徴とする方法。
【請求項１０】
癌の化学療法薬に対する感受性を高める方法において、
ａ）癌患者を同定するステップ、および
ｂ）前記患者に、第１の所定期間、第１の食を提供するステップであって、前記第１の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得るステップ、
ｃ）前記患者に、第２の所定期間、第２の食を提供するステップであって、前記第２の食は、前記患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与えるステップ、および
ｄ）前記患者が前記第２の食を少なくとも４８時間摂取している間、またはその後に、化学療法薬剤を前記患者に投与するステップ
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、ＤＮＡアルキル化剤、オキシダントまたはトポイソメラーゼ阻害薬であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、メチルメタンスルホネート、シクロホスファミド、エトポシド、ドキソルビシン、またはメナジオンシスプラチン、カルボプラチン、および他のプラチナベースの薬剤、ゲムシタビン、ドセタキセル、５−ＦＵ、またはトポイソメラーゼ阻害薬であることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の方法において、前記癌が、皮膚癌、結腸癌、乳癌、食道癌、前立腺癌、肺癌、子宮癌、卵巣癌、および前立腺癌、またはグリオーマ、メラノーマ、神経芽細胞腫、褐色細胞腫であることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の方法において、前記患者に前記第１の食および前記第２の食が与えられないとき、前記化学療法薬剤は、前記化学療法薬剤の標準の実施基準よりも長期間投与されることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤の長期投与中、前記第１および前記第２の食が投与されることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１０に記載の方法において、前記患者に前記第１の食および前記第２の食が与えられないとき、前記化学療法薬剤は、前記化学療法薬剤の標準の実施基準よりも短期間投与されることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、通常与えられる量より少なくとも１０％多く投与されることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１０に記載の方法において、前記化学療法薬剤が、通常与えられる量より少なくとも１０％少なく投与されることを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１０に記載の方法において、ステップｂ）の前に、前記患者が化学療法に関連する毒性症状を示していることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１０に記載の方法において、ステップｂ）の前に、前記患者が末期と診断されていることを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項１０に記載の方法において、前記第１の所定期間が約１日であり、かつ前記第２の所定期間が約３日であることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項１０に記載の方法において、前記第２の食が最大２００ｋｃａｌ／日であることを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項１０に記載の方法において、前記患者に、第３の所定期間、第３の食を提供するステップであって、前記患者の通常の食を補う前記第３の食が補充組成物を含み、前記補充組成物は必須アミノ酸および他のアミノ酸を含むステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法において、前記第３の所定期間が少なくとも５日であることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２３に記載の方法において、前記補充組成物が、野菜抽出物源、オメガ−３／６必須脂肪酸、非必須アミノ酸、ミネラル、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される成分をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
癌の放射線療法に対する感受性を高める方法において、
ａ）癌患者を同定するステップ、および
ｂ）前記患者に、第１の所定期間、第１の食を提供するステップであって、前記第１の食は、前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％は脂肪から得るステップ、
ｃ）前記患者に、第２の所定期間、第２の食を提供するステップであって、前記第２の食は、前記患者に、最大５００ｋｃａｌ／日を与えるステップ、および
ｄ）前記患者が前記第２の食を少なくとも４８時間摂取している間、またはその後に、放射線療法を前記患者に実施するステップ
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２７】
癌患者に食事を提供するための、癌の増殖を抑制し、化学療法薬の効果を高める治療食パッケージであって、
前記患者が通常摂取するカロリーの最大でも５０％を前記癌患者に与え、前記キロカロリーの少なくとも５０％を脂肪から得る食事に分割され、第１の所定期間に十分な量の食事を提供する第１の食のコンポーネントと、
前記癌患者に最大５００ｋｃａｌ／日を与える食事に分割され、第２の所定期間に十分な量の食事を提供する第２の食事コンポーネントと、
必須アミノ酸および他の非必須アミノ酸、必須脂肪酸、ミネラル、ビタミン、並びに／または野菜抽出物を含む、第３の所定期間のための補充組成物と、
前記第１の食のコンポーネントおよび前記第２の食事コンポーネントを前記癌患者に与えるための使用説明書と
を含むことを特徴とする治療食パッケージ。
【請求項２８】
請求項２７に記載の治療食パッケージにおいて、前記第１の食のコンポーネント、前記第２の食事コンポーネント、および前記第３食コンポーネントはそれぞれ独立して、野菜抽出物、ミネラル、オメガ−３／６必須脂肪酸、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される成分を含んでいることを特徴とする治療食パッケージ。
【図２】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【図５】
【図６−１】
【図６−２】
【図７】
【図８】
【図９−１】
【図９−２】
【図１０】
【図１１−１】
【図１１−２】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５−１】
【図１５−２】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【図５】
【図６−１】
【図６−２】
【図７】
【図８】
【図９−１】
【図９−２】
【図１０】
【図１１−１】
【図１１−２】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５−１】
【図１５−２】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【公表番号】特表２０１３−５０８４１１（Ｐ２０１３−５０８４１１Ａ）
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３５４２６（Ｐ２０１２−５３５４２６）
【出願日】平成２２年１０月２２日（２０１０．１０．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５３８２１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５０３０２
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５０８２３０２２６）ユニバーシティ オブ サザン カリフォルニア (8)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月２２日（２０１０．１０．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５３８２１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５０３０２
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５０８２３０２２６）ユニバーシティ オブ サザン カリフォルニア (8)
【Ｆターム（参考）】
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