紫外線抵抗性増強剤
【課題】フィラグリン産生を促進することにより細胞や皮膚の紫外線に対する抵抗性を増強することができる素材の提供。
【解決手段】ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分とする紫外線抵抗性増強剤。
【解決手段】ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分とする紫外線抵抗性増強剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線抵抗性増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
顆粒細胞内のケラトヒアリン顆粒には、フィラグリンの前駆物質であるプロフィラグリンが多量に存在し、プロフィラグリンは脱リン酸化とプロテアーゼの作用とを経てフィラグリンに分解される。フィラグリンは角質細胞の細胞質内でケラチン線維を凝集させたのち、角質層上層で分解されて、皮膚角質層の水分保持に重要な役割を果たす物質である天然保湿因子（Natural Moisturizing Factors; ＮＭＦ）が生成される。
【０００３】
プロフィラグリンの分解に関与するプロテアーゼの１つとして、プロスタシン（prostasin）／CAP1／Prss8が知られている。CAP1／Prss8をノックアウトしたマウスが重度の脱水状態に陥ること、当該ノックアウトマウスの皮膚ではプロフィラグリンからのフィラグリンモノマーの生成が障害されていることが報告されている（非特許文献１）。
【０００４】
ウロカニン酸は、ＮＭＦの１つであり、フィラグリンの分解によって生じたヒスチジン残基から合成される。ウロカニン酸にＵＶ吸収能があること（非特許文献２）、及びフィラグリン発現を抑制した皮膚組織ではウロカニン酸量が低下するとともにＵＶ感受性が上がること（非特許文献３）が報告されている。
フィラグリンやプロスタシンの発現を促進させることによって、ウロカニン酸等の天然保湿因子の産生量を増大させ、皮膚のＵＶ抵抗性を増強させることができる。
【０００５】
従来、フィラグリン産生促進剤としては、例えば、カンゾウ抽出物（特許文献１）、天然植物中に含まれるフラバノン配糖体リクイリチン（特許文献２）、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物又はオウバク抽出物（特許文献３）、ベタイン化合物、ポリオール、アスコルビン酸、又はそれらの誘導体、ならびにセイヨウノコギリ、マジョラム、イブキジャコウ、イチヤクソウ、ラベンダー、ハマメリス、オウゴンリキッド、サクラリーフ、イザヨイバラ果実、及びパロアズル（palo azul）、カルクエジャ（carqueja）、マセラミスタ（macelamista）に由来する生薬（特許文献４）、Citrus属植物エキス又は酵母エキス（特許文献５）が知られている。
しかし、これらの物質の紫外線防御機能については報告されていない。
【０００６】
フィラグリン合成促進及び紫外線障害緩和機能を有する物質としては、下記式：
【０００７】
【化１】
【０００８】
（式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して、炭素数８〜３０の飽和または不飽和アルキル基を表し；Ｙはカチオンを表し；Ｘは炭素数３〜９のアルキレン基、炭素数３〜９のアルキレンオキシ基、または炭素数３〜９のアルキルアミノ基を表し；Ｒ3は糖類残基を表す）で示される糖脂質化合物が知られている（特許文献６）。
【０００９】
フィラグリンの産生を促進することにより、ウロカニン酸等の天然保湿因子の産生を介して皮膚の紫外線抵抗性を増強することができる、さらなる物質の開発が望まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００２−３６３０５４号公報
【特許文献２】特開２００３−１４６８８６号公報
【特許文献３】特開２００６−１６３３７号公報
【特許文献４】国際公開公報ＷＯ２００２／０５３１２７
【特許文献５】特開２００１−２６１５６８号公報
【特許文献６】特開２００６−２４１０９５号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Leyvraz et al, J Cell Biol, 2005, 170(3):487-496
【非特許文献２】Zenisek et al, Biochim Biophys Acta, 1955, 18(4):589-591
【非特許文献３】Mildner et al, J Invest Dermatol, 2010, 130:2286-2294
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、フィラグリンやプロスタシン産生を促進することにより、ウロカニン酸等の天然保湿因子の産生を介して細胞や皮膚の紫外線に対する抵抗性を増強することができる、紫外線抵抗性増強剤の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、フィラグリンやプロスタシンの産生を促進して細胞や皮膚の紫外線に対する抵抗性を増強することができる素材について検討したところ、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ又はそれらの抽出物により当該機能が達成できることを見出した。
【００１４】
すなわち、本発明は以下を提供する。
（１）ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分とする紫外線抵抗性増強剤。
（２）ヤドリギ及び／又はその抽出物を有効成分とする（１）の紫外線抵抗性増強剤。
（３）抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である（１）又は（２）の紫外線抵抗性増強剤。
（４）外用剤である（１）〜（３）のいずれか１に記載の紫外線抵抗性増強剤。
（５）細胞の紫外線抵抗性を増強する方法であって、フィラグリン発現能を有する細胞を、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１の存在下で培養する工程を含む方法。
（６）細胞がケラチノサイトである（５）の方法。
（７）細胞をヤドリギ及び／又はその抽出物の存在下で培養する（５）又は（６）の方法。
（８）抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である（５）〜（７）のいずれか１に記載の方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、フィラグリンやプロスタシン産生を促進することにより、細胞や皮膚の紫外線に対する抵抗性を増強することができる紫外線抵抗性増強剤が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処置行為を含まない概念である。
【００１７】
本明細書において、「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患、症状又は状態の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
【００１８】
本明細書において、「ヤドリギ」とは、ヤドリギ科ヤドリギ属のViscum albumを指す。「Cranesbill」とは、Spotted Cranesbill又はWild Cranesbillとも称され、フウロソウ科フウロソウ属のGeranium maculatumを指す。「Shonny Haw」とは、スイカズラ科ガマズミ属のViburnum nudumを指し、「セイヨウハッカ」とは、シソ科ハッカ属のMentha piperitaを指す。「コエビスグサ」とは、マメ科カワラケツメイ属のCassia toraを指し、この種子は漢方では決明子（けつめいし）として使用されている。「サネブトナツメ」とは、クロウメモドキ科ナツメ属のZiziphus jujuba Mill. var. spinosa Hu ex H. F. Chouを指し、種子は漢方では酸棗仁（さんそうにん）として使用されている。
【００１９】
上記に挙げた植物の抽出物は、特に限定されない限り、当該植物の任意の部位、例えば全草、葉、茎、芽、花、蕾、木質部、樹皮、根、根茎、種子、果実、若しくは樹脂等、又はそれらの組み合わせからの抽出物であればよい。抽出物を得るための好ましい部位は、ヤドリギの場合は葉茎、Cranesbillの場合は根、Shonny Hawの場合は樹皮、セイヨウハッカの場合は葉、コエビスグサの場合は種子、サネブトナツメの場合は種子である。上記に挙げた部位は、そのまま抽出工程に付されてもよく、又は粉砕、切断若しくは乾燥された後に抽出工程に付されてもよい。
【００２０】
上記抽出物としては、市販されているものを利用してもよく、又は常法により得られる各種溶剤抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものであってもよい。一例として、本発明における抽出物は、上記植物を室温若しくは加温下にて抽出するか、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得ることができる。
【００２１】
抽出のための溶剤には、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。溶剤の具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び超臨界二酸化炭素；ピリジン類；油脂、ワックス等その他オイル類等の有機溶剤；ならびにこれらの混合物が挙げられる。このうち、水、アルコール類、水−アルコール混合液、プロピレングリコール、ブチレングリコール又はヘキサンを用いるのが好ましく、水、エタノール、エタノール水溶液又はヘキサンを用いるのがより好ましい。
【００２２】
上記溶剤は、抽出に用いる植物にあわせて選択することができる。例えば、ヤドリギ抽出物を調製する場合の溶剤としては、エタノール水溶液、エタノール又はヘキサンがさらに好ましいが、他の植物の抽出物を調製する場合の溶剤としては、水又はエタノール水溶液がさらに好ましい。
【００２３】
本発明で用いられる抽出物を得るための抽出条件については、使用する溶剤によって異なり特に制限はないが、例えばアルコール類と水との配合割合（容量比）としては、０．００１〜１００：９９．９９９〜０が好ましく、５〜９５：９５〜５がより好ましく、２０〜８０：８０〜２０がさらに好ましく、３０〜７０：７０〜３０がさらにより好ましく、４０〜６０：６０〜４０がなお好ましい。エタノール水溶液の場合、エタノール類濃度が４０〜６０容量％であることが好ましい。
但し、水−アルコール混合液をヤドリギ抽出物の抽出に用いる場合、液中のアルコール濃度は、１０容量％以上の範囲であればよく、好ましくは３０容量％またはそれより高く、より好ましくは５０容量％またはそれより高い。さらに好ましくは５０〜９５容量％であり、なお好ましくは６０〜８０容量％である。
【００２４】
溶剤の使用量としては、植物（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましい。抽出条件は、十分な抽出が行える条件であれば特に限定されないが、抽出時間としては、３分間〜３０日間が好ましく、６０分間〜１４日間がより好ましく、抽出温度は、０℃〜溶媒沸点が好ましく、５〜７０℃がより好ましい。通常、低温なら長時間、高温なら短時間の抽出を行う。
抽出物を得る抽出手段は、具体的には、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の手段を用いることができる。
抽出条件の例として、１５〜２５℃で７日間〜１４日間、約７０℃で５時間、等が挙げられる。
また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。この固液抽出の好適な条件の一例としては、４０〜１００℃（好ましくは５０〜７０℃）下、１００〜１０００ｒｐｍで３０〜３００分間の攪拌が挙げられる。
抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００２５】
後記実施例に示すように、上記植物又はその抽出物は、細胞のフィラグリン遺伝子発現及びプロスタシン遺伝子発現を有意に促進する作用を有する。
フィラグリンの前駆物質であるプロフィラグリンは、プロスタシン等の酵素によって分解されてフィラグリンとなり（Leyvraz et al, J Cell Biol, 2005, 170(3):487-496）、そのフィラグリンが皮膚角質層でさらに分解される時に生じるヒスチジン残基からは、ＵＶ吸収能を有し皮膚のＵＶ抵抗性に寄与する物質であるウロカニン酸が合成される（Zenisek et al, Biochim Biophys Acta, 1955, 18(4):589-591；Mildner et al, J Invest Dermatol, 2010, 130:2286-2294）。したがって、上記植物又はその抽出物は、フィラグリン産生又はプロスタシン産生を促進する作用を介して、ウロカニン酸の産生を促進することができるので、細胞及び皮膚の紫外線抵抗性を増強させることができる。また、上記植物又はその抽出物は、当該紫外線抵抗性増強作用を介して、紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等に有用である。
【００２６】
すなわち、上記植物又はその抽出物は、細胞又は皮膚の紫外線抵抗性増強のために使用することができる。あるいは、上記植物又はその抽出物は、紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のために使用することができる。当該植物又はその抽出物は、いずれか１種類が単独で使用されてもよく、あるいは任意の２種類以上が組み合わせて使用されてもよい。当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する組織、器官、細胞における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００２７】
従って、一態様として、本発明は、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分として含有する紫外線抵抗性増強剤を提供する。別の態様として、本発明は、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分として含有する、紫外線に起因する皮膚の状態の改善剤、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善剤、日焼け防止剤等を提供する。
一態様として、上記剤は、本質的に上記植物又はその抽出物のうちの少なくとも１から構成される。
【００２８】
上記植物又はその抽出物は、細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強のため、又は紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のための組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等の製造のために使用することができる。当該組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等もまた、本発明の範囲内である。
【００２９】
上記組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等は、ヒト又は非ヒト動物用として製造され、又は使用され得る。上記植物若しくはその抽出物は、当該組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等に配合され、細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強のため、又は紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のための有効成分であり得る。
【００３０】
上記医薬又は医薬部外品は、上記植物若しくはその抽出物を有効成分として含有する。当該医薬又は医薬部外品は、任意の投与形態で投与され得る。投与は経口でも非経口でもよい。経口投与のための剤型としては、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形投薬形態、ならびにエリキシロール、シロップおよび懸濁液のような液体投薬形態が挙げられ、非経口投与のための剤型としては、注射、輸液、局所、外用剤、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス、貼布剤等が挙げられる。
好ましくは、当該医薬又は医薬部外品は、皮膚外用剤の形態であり得る。
【００３１】
上記医薬又は医薬部外品は、上記植物若しくはその抽出物を単独若しくは複数で含有していてもよく、又は薬学的に許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、滑沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該医薬や医薬部外品は、上記植物又はその抽出物のフィラグリン産生若しくはプロスタシン産生を促進する作用又は細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強作用が失われない限り、他の有効成分や薬理成分を含有していてもよい。
【００３２】
上記医薬又は医薬部外品は、上記植物若しくはその抽出物から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や薬理成分を組みあわせて、常法により製造することができる。当該医薬又は医薬部外品における上記植物若しくはその抽出物の含有量は、例えば皮膚外用剤とする場合、当該抽出物の乾燥重量として、０．００００１〜２０質量％含まれるのが好ましく、０．０００１〜１０質量％含まれるのがより好ましい。
【００３３】
上記化粧料は、上記植物若しくはその抽出物を有効成分として含有する。当該化粧料は、上記植物若しくはその抽出物を単独若しくは複数で含有していてもよく、又は化粧料として許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、滑沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該化粧料は、上記植物又はその抽出物のフィラグリン産生若しくはプロスタシン産生を促進する作用又は細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強作用が失われない限り、他の有効成分や化粧成分、例えば、保湿剤、美白剤、紫外線保護剤、細胞賦活剤、洗浄剤、角質溶解剤、メークアップ成分（例えば、化粧下地、ファンデーション、おしろい、パウダー、チーク、口紅、アイメーク、アイブロウ、マスカラ、その他）等を含有していてもよい。化粧料とする場合の形態としては、クリーム、乳液、ローション、懸濁液、ジェル、パウダー、パック、シート、パッチ、スティック、ケーキ等、化粧料に使用され得る任意の形態が挙げられる。
【００３４】
上記化粧料は、上記植物若しくはその抽出物から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や化粧成分を組みあわせて、常法により製造することができる。当該化粧料における上記植物若しくはその抽出物の含有量は、当該抽出物の乾燥重量として、０．００００１〜２０質量％とするのが好ましく、０．０００１〜１０質量％含まれるのがより好ましい。
【００３５】
また本発明は、細胞のフィラグリン産生を促進する方法を提供する。当該方法は、フィラグリン産生能を有し且つフィラグリン産生を促進させたい細胞に、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を添加する工程を含む。
また本発明は、細胞のプロスタシン産生を促進する方法を提供する。当該方法は、プロスタシン産生能を有し且つプロスタシン産生を促進させたい細胞に、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を添加する工程を含む。
【００３６】
本発明においてフィラグリン産生又はプロスタシン産生を促進する「細胞」は、天然又は遺伝子工学的に改変されたフィラグリン発現能又はプロスタシン発現能を有する細胞であれば特に限定されない。好ましくは、細胞としては、上皮系由来細胞が挙げられ、より好ましくはケラチノサイトが挙げられる。
あるいは、当該「細胞」は、上記で挙げた細胞の細胞片または細胞分画物であってもよく、あるいは上記で挙げた細胞を含む組織又は上記で挙げた細胞に由来する培養物であってもよい。細胞が細胞培養物の場合、好ましくは、当該細胞は、上記植物又はそれらの抽出物の存在下で培養される。
添加される上記植物又はその抽出物の濃度は、細胞が細胞培養物の場合、培養物中での最終濃度として、当該抽出物の乾燥重量換算で、０．０００１〜２％（ｗ/ｖ）であり、好ましくは０．０００３〜０．５％（ｗ/ｖ）であり、より好ましくは０．０００５〜０．１％（ｗ/ｖ）である。
【００３７】
また本発明は、細胞の紫外線抵抗性を増強する方法を提供する。当該方法は、フィラグリン又はプロスタシン産生能を有し且つ紫外線抵抗性を増強させたい細胞に、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を添加する工程を含む。好ましくは、当該細胞は、上記植物又はそれらの抽出物の存在下で培養される。
当該細胞の例、及び当該細胞に添加される上記植物又はその抽出物の濃度は、上述のフィラグリン産生又はプロスタシン産生を促進する方法の場合と同様である。
【００３８】
また本発明において、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１は、皮膚の紫外線抵抗性を増強するため、フィラグリン産生促進のため、プロスタシン産生促進のため、又は紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のために、それらを必要とする対象に有効量で投与され得る。
一態様において、当該投与は、健康増進又は美容目的により非治療的に行われる。
好ましくは、当該投与は皮膚への局所投与である。
投与の対象としては、皮膚の紫外線抵抗性の増強を必要とする動物が挙げられる。あるいは、投与の対象としては、紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等を所望する動物が挙げられる。動物は、好ましくはヒト又は非ヒト哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００３９】
好ましい投与量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、ヒトの皮膚に局所投与する場合、投与量は、上記植物の抽出物の乾燥重量換算で、成人（６０ｋｇ）１人当たり、０．００１〜１０００ｍｇ／日とすることが好ましく、０．０１〜１００ｍｇ／日がより好ましい。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００４１】
製造例 植物抽出物の調製
【００４２】
（製造例１）ヤドリギ１０％エタノール水溶液抽出物の調製
ヤドリギの葉茎（新和物産株式会社製）１０ｇを細切し、１０％エタノール水溶液１００ｍＬを加え、室温・静置条件下で７日間抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物６３ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．８８％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
＜蒸発残分の算出＞
ヤドリギ抽出物１ｍｌを１０５℃で６時間乾燥させたところ（乾燥機：DRY Thermo Unit DTU-1C（TAITEC CORPORATION社製）使用）、乾燥物８．８０ｍｇが得られた。この抽出物の蒸発残分を、８．８０／１０００×１００＝０．８８％（ｗ／ｖ）と算出した。なお、下記の製造例においても、各抽出物の蒸発残分は同様にして算出されたものである。
【００４３】
（製造例２）ヤドリギ２０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で２０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５１ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．００％（ｗ／ｖ）であった。
【００４４】
（製造例３）ヤドリギ３０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で３０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物４７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．０８％（ｗ／ｖ）であった。これを３０％エタノール水溶液で１．０８倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４５】
（製造例４）ヤドリギ４０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で４０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物４６ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．２２％（ｗ／ｖ）であった。これを４０％エタノール水溶液で１．２２倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４６】
（製造例５）ヤドリギ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で５０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５０ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．０８％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で１．０８倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４７】
（製造例６）ヤドリギ６０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で６０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５６ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．１７％（ｗ／ｖ）であった。これを６０％エタノール水溶液で１．１７倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４８】
（製造例７）ヤドリギ７０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で７０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５５ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．９０％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、７０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４９】
（製造例８）ヤドリギ８０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で８０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．８０％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、８０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５０】
（製造例９）ヤドリギ９０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で９０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．６９％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、９０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５１】
(製造例１０）ヤドリギ９５％エタノール水溶液抽出物の調製
ヤドリギの葉茎（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、９５％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で４３日間抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物３５４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．８４％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、９５％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５２】
（製造例１１）ヤドリギヘキサン抽出物の調製
ヤドリギの葉茎（新和物産株式会社製）４０ｇ細切し、ヘキサン４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で４３日間抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物３４０ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．６９％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、９９．５％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５３】
（製造例１２）Cranesbill水抽出物の調製
Cranesbillの根（American botanicals社製）４０ｇを細切し、水４００ｍＬを加え、７０℃、５時間の条件で抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物３４７ｍＬを得た。得られた抽出物について、下記の方法で蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．１８％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５４】
（製造例１３）Cranesbill １０％エタノール水溶液抽出物の調製
Cranesbillの根（American botanicals社製）７ｇを細切し、１０％エタノール水溶液７０ｍＬを加え、室温・静置条件下で７日間抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．０５％（ｗ／ｖ）であった。これを１０％エタノール水溶液で２．０５倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５５】
（製造例１４）Cranesbill ２０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において２０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５６ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．３１％（ｗ／ｖ）であった。これを２０％エタノール水溶液で２．３１倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５６】
（製造例１５）Cranesbill ３０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において３０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．６０％（ｗ／ｖ）であった。これを３０％エタノール水溶液で２．６０倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５７】
（製造例１６）Cranesbill ４０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において４０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５５ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．６６％（ｗ／ｖ）であった。これを４０％エタノール水溶液で２．６６倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５８】
（製造例１７）Cranesbill ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
Cranesbillの根（American botanicals社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で１７日間抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物３０９ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．８８％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で２．８８倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５９】
（製造例１８）Cranesbill ６０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において６０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５８ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．５１％（ｗ／ｖ）であった。これを６０％エタノール水溶液で２．５１倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６０】
（製造例１９）Shonny Haw ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
Shonny Hawの樹皮（American botanicals社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で１９日間抽出を行った。その後、濾過して、Shonny Haw抽出物３１９ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．６９％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で１．６９倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６１】
（製造例２０）セイヨウハッカ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
セイヨウハッカの葉（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で１５日間抽出を行った。その後、濾過して、セイヨウハッカ抽出物２７７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．０７％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で２．０７倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６２】
（製造例２１）コエビスグサ水抽出物の調製
コエビスグサの種子（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、水４００ｍＬを加え、７０℃、５時間の条件で抽出を行った。その後、濾過して、コエビスグサ抽出物２６４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．４３％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６３】
(製造例２２）コエビスグサ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
コエビスグサの種子（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で４３日間抽出を行った。その後、濾過して、コエビスグサ抽出物３４３ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．６４％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固後、５０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６４】
（製造例２３） サネブトナツメ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
サネブトナツメの種子（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で２１日間抽出を行った。その後、濾過して、サネブトナツメ抽出物３１２ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．９５％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６５】
実施例１ フィラグリン産生に対する植物抽出物の効果
ヒト正常表皮細胞（ＮＨＥＫ）はEpiLife（登録商標）(Kuraboより購入)を用い、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。細胞を６穴プレートに１×１０4個／ｃｍ2で播種し、２４時間培養後、培地を血清無添加培地に交換するとともに、製造例に従って調製した表１に記載の植物抽出物を、最終濃度０．１％（ｖ/ｖ）（最終エキス分濃度０．００１ｗ／ｖ％）となるように培地に添加した。４８時間培養後、細胞からRNeasy（登録商標）Mini Kit (QIAGEN) を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。ｔｏｔａｌ ＲＮＡの濃度を測定し、一定量のｔｏｔａｌ ＲＮＡを用いて逆転写反応を行った。逆転写反応にはHigh capacity RNA-to-cDNA Kit (Applied Biosystems)を用いた。
得られたｃＤＮＡから、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ−ＰＣＲにより、フィラグリン遺伝子発現の定量を行った。定量は、Taqman（登録商標）Probe (Applied Biosystems)を用い、PRISM 7500 (Applied Biosystems)で検出定量した。５０μｌの反応系にて、増幅条件は９５℃、１５秒の変性反応、６０℃、１分のアニーリング、伸長反応にて行った。それぞれの遺伝子発現量はＲＰＬＰ０発現量により補正し、エキス無添加（溶媒のみ）コントロールにおけるフィラグリンの発現量を１とした場合の相対値として示した。結果を表１に示す。
【００６６】
【表１】
【００６７】
実施例２ フィラグリン産生に対する植物抽出物の効果
製造例１３〜１８に従って調製したCranesbill抽出物を用いて実施例１と同様の手順でフィラグリン遺伝子発現の定量を行った。使用した植物抽出物及びフィラグリン発現量を表２に示す。
【００６８】
【表２】
【００６９】
実施例３ フィラグリン産生に対する植物抽出物の効果
製造例１〜９に従って調製したヤドリギ抽出物を用いて実施例１と同様の手順でフィラグリン遺伝子発現の定量を行った。使用した植物抽出物及びフィラグリン発現量を表３に示す。
【００７０】
【表３】
【００７１】
実施例４ プロスタシン産生に対する植物抽出物の効果
実施例１と同様の手順でプロスタシン遺伝子発現の定量を行った。使用した植物抽出物及びプロスタシン発現量を表４に示す。
【００７２】
【表４】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線抵抗性増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
顆粒細胞内のケラトヒアリン顆粒には、フィラグリンの前駆物質であるプロフィラグリンが多量に存在し、プロフィラグリンは脱リン酸化とプロテアーゼの作用とを経てフィラグリンに分解される。フィラグリンは角質細胞の細胞質内でケラチン線維を凝集させたのち、角質層上層で分解されて、皮膚角質層の水分保持に重要な役割を果たす物質である天然保湿因子（Natural Moisturizing Factors; ＮＭＦ）が生成される。
【０００３】
プロフィラグリンの分解に関与するプロテアーゼの１つとして、プロスタシン（prostasin）／CAP1／Prss8が知られている。CAP1／Prss8をノックアウトしたマウスが重度の脱水状態に陥ること、当該ノックアウトマウスの皮膚ではプロフィラグリンからのフィラグリンモノマーの生成が障害されていることが報告されている（非特許文献１）。
【０００４】
ウロカニン酸は、ＮＭＦの１つであり、フィラグリンの分解によって生じたヒスチジン残基から合成される。ウロカニン酸にＵＶ吸収能があること（非特許文献２）、及びフィラグリン発現を抑制した皮膚組織ではウロカニン酸量が低下するとともにＵＶ感受性が上がること（非特許文献３）が報告されている。
フィラグリンやプロスタシンの発現を促進させることによって、ウロカニン酸等の天然保湿因子の産生量を増大させ、皮膚のＵＶ抵抗性を増強させることができる。
【０００５】
従来、フィラグリン産生促進剤としては、例えば、カンゾウ抽出物（特許文献１）、天然植物中に含まれるフラバノン配糖体リクイリチン（特許文献２）、ワイルドタイム抽出物、チョウジ抽出物、サルビア抽出物、ローヤルゼリー抽出物、シイタケ抽出物、ジオウ抽出物、カミツレ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、オウゴン抽出物又はオウバク抽出物（特許文献３）、ベタイン化合物、ポリオール、アスコルビン酸、又はそれらの誘導体、ならびにセイヨウノコギリ、マジョラム、イブキジャコウ、イチヤクソウ、ラベンダー、ハマメリス、オウゴンリキッド、サクラリーフ、イザヨイバラ果実、及びパロアズル（palo azul）、カルクエジャ（carqueja）、マセラミスタ（macelamista）に由来する生薬（特許文献４）、Citrus属植物エキス又は酵母エキス（特許文献５）が知られている。
しかし、これらの物質の紫外線防御機能については報告されていない。
【０００６】
フィラグリン合成促進及び紫外線障害緩和機能を有する物質としては、下記式：
【０００７】
【化１】
【０００８】
（式中、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立して、炭素数８〜３０の飽和または不飽和アルキル基を表し；Ｙはカチオンを表し；Ｘは炭素数３〜９のアルキレン基、炭素数３〜９のアルキレンオキシ基、または炭素数３〜９のアルキルアミノ基を表し；Ｒ3は糖類残基を表す）で示される糖脂質化合物が知られている（特許文献６）。
【０００９】
フィラグリンの産生を促進することにより、ウロカニン酸等の天然保湿因子の産生を介して皮膚の紫外線抵抗性を増強することができる、さらなる物質の開発が望まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００２−３６３０５４号公報
【特許文献２】特開２００３−１４６８８６号公報
【特許文献３】特開２００６−１６３３７号公報
【特許文献４】国際公開公報ＷＯ２００２／０５３１２７
【特許文献５】特開２００１−２６１５６８号公報
【特許文献６】特開２００６−２４１０９５号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Leyvraz et al, J Cell Biol, 2005, 170(3):487-496
【非特許文献２】Zenisek et al, Biochim Biophys Acta, 1955, 18(4):589-591
【非特許文献３】Mildner et al, J Invest Dermatol, 2010, 130:2286-2294
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、フィラグリンやプロスタシン産生を促進することにより、ウロカニン酸等の天然保湿因子の産生を介して細胞や皮膚の紫外線に対する抵抗性を増強することができる、紫外線抵抗性増強剤の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、フィラグリンやプロスタシンの産生を促進して細胞や皮膚の紫外線に対する抵抗性を増強することができる素材について検討したところ、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ又はそれらの抽出物により当該機能が達成できることを見出した。
【００１４】
すなわち、本発明は以下を提供する。
（１）ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分とする紫外線抵抗性増強剤。
（２）ヤドリギ及び／又はその抽出物を有効成分とする（１）の紫外線抵抗性増強剤。
（３）抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である（１）又は（２）の紫外線抵抗性増強剤。
（４）外用剤である（１）〜（３）のいずれか１に記載の紫外線抵抗性増強剤。
（５）細胞の紫外線抵抗性を増強する方法であって、フィラグリン発現能を有する細胞を、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１の存在下で培養する工程を含む方法。
（６）細胞がケラチノサイトである（５）の方法。
（７）細胞をヤドリギ及び／又はその抽出物の存在下で培養する（５）又は（６）の方法。
（８）抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である（５）〜（７）のいずれか１に記載の方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、フィラグリンやプロスタシン産生を促進することにより、細胞や皮膚の紫外線に対する抵抗性を増強することができる紫外線抵抗性増強剤が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処置行為を含まない概念である。
【００１７】
本明細書において、「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患、症状又は状態の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
【００１８】
本明細書において、「ヤドリギ」とは、ヤドリギ科ヤドリギ属のViscum albumを指す。「Cranesbill」とは、Spotted Cranesbill又はWild Cranesbillとも称され、フウロソウ科フウロソウ属のGeranium maculatumを指す。「Shonny Haw」とは、スイカズラ科ガマズミ属のViburnum nudumを指し、「セイヨウハッカ」とは、シソ科ハッカ属のMentha piperitaを指す。「コエビスグサ」とは、マメ科カワラケツメイ属のCassia toraを指し、この種子は漢方では決明子（けつめいし）として使用されている。「サネブトナツメ」とは、クロウメモドキ科ナツメ属のZiziphus jujuba Mill. var. spinosa Hu ex H. F. Chouを指し、種子は漢方では酸棗仁（さんそうにん）として使用されている。
【００１９】
上記に挙げた植物の抽出物は、特に限定されない限り、当該植物の任意の部位、例えば全草、葉、茎、芽、花、蕾、木質部、樹皮、根、根茎、種子、果実、若しくは樹脂等、又はそれらの組み合わせからの抽出物であればよい。抽出物を得るための好ましい部位は、ヤドリギの場合は葉茎、Cranesbillの場合は根、Shonny Hawの場合は樹皮、セイヨウハッカの場合は葉、コエビスグサの場合は種子、サネブトナツメの場合は種子である。上記に挙げた部位は、そのまま抽出工程に付されてもよく、又は粉砕、切断若しくは乾燥された後に抽出工程に付されてもよい。
【００２０】
上記抽出物としては、市販されているものを利用してもよく、又は常法により得られる各種溶剤抽出物、又はその希釈液、その濃縮液、その乾燥末、ペースト若しくはその活性炭処理したものであってもよい。一例として、本発明における抽出物は、上記植物を室温若しくは加温下にて抽出するか、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得ることができる。
【００２１】
抽出のための溶剤には、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。溶剤の具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；及び超臨界二酸化炭素；ピリジン類；油脂、ワックス等その他オイル類等の有機溶剤；ならびにこれらの混合物が挙げられる。このうち、水、アルコール類、水−アルコール混合液、プロピレングリコール、ブチレングリコール又はヘキサンを用いるのが好ましく、水、エタノール、エタノール水溶液又はヘキサンを用いるのがより好ましい。
【００２２】
上記溶剤は、抽出に用いる植物にあわせて選択することができる。例えば、ヤドリギ抽出物を調製する場合の溶剤としては、エタノール水溶液、エタノール又はヘキサンがさらに好ましいが、他の植物の抽出物を調製する場合の溶剤としては、水又はエタノール水溶液がさらに好ましい。
【００２３】
本発明で用いられる抽出物を得るための抽出条件については、使用する溶剤によって異なり特に制限はないが、例えばアルコール類と水との配合割合（容量比）としては、０．００１〜１００：９９．９９９〜０が好ましく、５〜９５：９５〜５がより好ましく、２０〜８０：８０〜２０がさらに好ましく、３０〜７０：７０〜３０がさらにより好ましく、４０〜６０：６０〜４０がなお好ましい。エタノール水溶液の場合、エタノール類濃度が４０〜６０容量％であることが好ましい。
但し、水−アルコール混合液をヤドリギ抽出物の抽出に用いる場合、液中のアルコール濃度は、１０容量％以上の範囲であればよく、好ましくは３０容量％またはそれより高く、より好ましくは５０容量％またはそれより高い。さらに好ましくは５０〜９５容量％であり、なお好ましくは６０〜８０容量％である。
【００２４】
溶剤の使用量としては、植物（乾燥質量換算）１ｇに対して１〜１００ｍＬが好ましい。抽出条件は、十分な抽出が行える条件であれば特に限定されないが、抽出時間としては、３分間〜３０日間が好ましく、６０分間〜１４日間がより好ましく、抽出温度は、０℃〜溶媒沸点が好ましく、５〜７０℃がより好ましい。通常、低温なら長時間、高温なら短時間の抽出を行う。
抽出物を得る抽出手段は、具体的には、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌等の手段を用いることができる。
抽出条件の例として、１５〜２５℃で７日間〜１４日間、約７０℃で５時間、等が挙げられる。
また、抽出時間を短縮する場合には、攪拌を伴う固液抽出が望ましい。この固液抽出の好適な条件の一例としては、４０〜１００℃（好ましくは５０〜７０℃）下、１００〜１０００ｒｐｍで３０〜３００分間の攪拌が挙げられる。
抽出物の酸化を防止するため、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する手段を併用してもよい。
【００２５】
後記実施例に示すように、上記植物又はその抽出物は、細胞のフィラグリン遺伝子発現及びプロスタシン遺伝子発現を有意に促進する作用を有する。
フィラグリンの前駆物質であるプロフィラグリンは、プロスタシン等の酵素によって分解されてフィラグリンとなり（Leyvraz et al, J Cell Biol, 2005, 170(3):487-496）、そのフィラグリンが皮膚角質層でさらに分解される時に生じるヒスチジン残基からは、ＵＶ吸収能を有し皮膚のＵＶ抵抗性に寄与する物質であるウロカニン酸が合成される（Zenisek et al, Biochim Biophys Acta, 1955, 18(4):589-591；Mildner et al, J Invest Dermatol, 2010, 130:2286-2294）。したがって、上記植物又はその抽出物は、フィラグリン産生又はプロスタシン産生を促進する作用を介して、ウロカニン酸の産生を促進することができるので、細胞及び皮膚の紫外線抵抗性を増強させることができる。また、上記植物又はその抽出物は、当該紫外線抵抗性増強作用を介して、紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等に有用である。
【００２６】
すなわち、上記植物又はその抽出物は、細胞又は皮膚の紫外線抵抗性増強のために使用することができる。あるいは、上記植物又はその抽出物は、紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のために使用することができる。当該植物又はその抽出物は、いずれか１種類が単独で使用されてもよく、あるいは任意の２種類以上が組み合わせて使用されてもよい。当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する組織、器官、細胞における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
【００２７】
従って、一態様として、本発明は、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分として含有する紫外線抵抗性増強剤を提供する。別の態様として、本発明は、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分として含有する、紫外線に起因する皮膚の状態の改善剤、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善剤、日焼け防止剤等を提供する。
一態様として、上記剤は、本質的に上記植物又はその抽出物のうちの少なくとも１から構成される。
【００２８】
上記植物又はその抽出物は、細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強のため、又は紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のための組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等の製造のために使用することができる。当該組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等もまた、本発明の範囲内である。
【００２９】
上記組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等は、ヒト又は非ヒト動物用として製造され、又は使用され得る。上記植物若しくはその抽出物は、当該組成物、医薬、医薬部外品、化粧料等に配合され、細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強のため、又は紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のための有効成分であり得る。
【００３０】
上記医薬又は医薬部外品は、上記植物若しくはその抽出物を有効成分として含有する。当該医薬又は医薬部外品は、任意の投与形態で投与され得る。投与は経口でも非経口でもよい。経口投与のための剤型としては、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤のような固形投薬形態、ならびにエリキシロール、シロップおよび懸濁液のような液体投薬形態が挙げられ、非経口投与のための剤型としては、注射、輸液、局所、外用剤、経皮、経粘膜、経鼻、経腸、吸入、坐剤、ボーラス、貼布剤等が挙げられる。
好ましくは、当該医薬又は医薬部外品は、皮膚外用剤の形態であり得る。
【００３１】
上記医薬又は医薬部外品は、上記植物若しくはその抽出物を単独若しくは複数で含有していてもよく、又は薬学的に許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、滑沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該医薬や医薬部外品は、上記植物又はその抽出物のフィラグリン産生若しくはプロスタシン産生を促進する作用又は細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強作用が失われない限り、他の有効成分や薬理成分を含有していてもよい。
【００３２】
上記医薬又は医薬部外品は、上記植物若しくはその抽出物から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や薬理成分を組みあわせて、常法により製造することができる。当該医薬又は医薬部外品における上記植物若しくはその抽出物の含有量は、例えば皮膚外用剤とする場合、当該抽出物の乾燥重量として、０．００００１〜２０質量％含まれるのが好ましく、０．０００１〜１０質量％含まれるのがより好ましい。
【００３３】
上記化粧料は、上記植物若しくはその抽出物を有効成分として含有する。当該化粧料は、上記植物若しくはその抽出物を単独若しくは複数で含有していてもよく、又は化粧料として許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、滑沢剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該化粧料は、上記植物又はその抽出物のフィラグリン産生若しくはプロスタシン産生を促進する作用又は細胞若しくは皮膚の紫外線抵抗性増強作用が失われない限り、他の有効成分や化粧成分、例えば、保湿剤、美白剤、紫外線保護剤、細胞賦活剤、洗浄剤、角質溶解剤、メークアップ成分（例えば、化粧下地、ファンデーション、おしろい、パウダー、チーク、口紅、アイメーク、アイブロウ、マスカラ、その他）等を含有していてもよい。化粧料とする場合の形態としては、クリーム、乳液、ローション、懸濁液、ジェル、パウダー、パック、シート、パッチ、スティック、ケーキ等、化粧料に使用され得る任意の形態が挙げられる。
【００３４】
上記化粧料は、上記植物若しくはその抽出物から、あるいは必要に応じて上記担体及び／又は他の有効成分や化粧成分を組みあわせて、常法により製造することができる。当該化粧料における上記植物若しくはその抽出物の含有量は、当該抽出物の乾燥重量として、０．００００１〜２０質量％とするのが好ましく、０．０００１〜１０質量％含まれるのがより好ましい。
【００３５】
また本発明は、細胞のフィラグリン産生を促進する方法を提供する。当該方法は、フィラグリン産生能を有し且つフィラグリン産生を促進させたい細胞に、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を添加する工程を含む。
また本発明は、細胞のプロスタシン産生を促進する方法を提供する。当該方法は、プロスタシン産生能を有し且つプロスタシン産生を促進させたい細胞に、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を添加する工程を含む。
【００３６】
本発明においてフィラグリン産生又はプロスタシン産生を促進する「細胞」は、天然又は遺伝子工学的に改変されたフィラグリン発現能又はプロスタシン発現能を有する細胞であれば特に限定されない。好ましくは、細胞としては、上皮系由来細胞が挙げられ、より好ましくはケラチノサイトが挙げられる。
あるいは、当該「細胞」は、上記で挙げた細胞の細胞片または細胞分画物であってもよく、あるいは上記で挙げた細胞を含む組織又は上記で挙げた細胞に由来する培養物であってもよい。細胞が細胞培養物の場合、好ましくは、当該細胞は、上記植物又はそれらの抽出物の存在下で培養される。
添加される上記植物又はその抽出物の濃度は、細胞が細胞培養物の場合、培養物中での最終濃度として、当該抽出物の乾燥重量換算で、０．０００１〜２％（ｗ/ｖ）であり、好ましくは０．０００３〜０．５％（ｗ/ｖ）であり、より好ましくは０．０００５〜０．１％（ｗ/ｖ）である。
【００３７】
また本発明は、細胞の紫外線抵抗性を増強する方法を提供する。当該方法は、フィラグリン又はプロスタシン産生能を有し且つ紫外線抵抗性を増強させたい細胞に、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を添加する工程を含む。好ましくは、当該細胞は、上記植物又はそれらの抽出物の存在下で培養される。
当該細胞の例、及び当該細胞に添加される上記植物又はその抽出物の濃度は、上述のフィラグリン産生又はプロスタシン産生を促進する方法の場合と同様である。
【００３８】
また本発明において、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１は、皮膚の紫外線抵抗性を増強するため、フィラグリン産生促進のため、プロスタシン産生促進のため、又は紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等のために、それらを必要とする対象に有効量で投与され得る。
一態様において、当該投与は、健康増進又は美容目的により非治療的に行われる。
好ましくは、当該投与は皮膚への局所投与である。
投与の対象としては、皮膚の紫外線抵抗性の増強を必要とする動物が挙げられる。あるいは、投与の対象としては、紫外線に起因する皮膚の状態の改善、例えば、しみ、しわ、たるみ等の改善、日焼け防止等を所望する動物が挙げられる。動物は、好ましくはヒト又は非ヒト哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００３９】
好ましい投与量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、ヒトの皮膚に局所投与する場合、投与量は、上記植物の抽出物の乾燥重量換算で、成人（６０ｋｇ）１人当たり、０．００１〜１０００ｍｇ／日とすることが好ましく、０．０１〜１００ｍｇ／日がより好ましい。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００４１】
製造例 植物抽出物の調製
【００４２】
（製造例１）ヤドリギ１０％エタノール水溶液抽出物の調製
ヤドリギの葉茎（新和物産株式会社製）１０ｇを細切し、１０％エタノール水溶液１００ｍＬを加え、室温・静置条件下で７日間抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物６３ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．８８％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
＜蒸発残分の算出＞
ヤドリギ抽出物１ｍｌを１０５℃で６時間乾燥させたところ（乾燥機：DRY Thermo Unit DTU-1C（TAITEC CORPORATION社製）使用）、乾燥物８．８０ｍｇが得られた。この抽出物の蒸発残分を、８．８０／１０００×１００＝０．８８％（ｗ／ｖ）と算出した。なお、下記の製造例においても、各抽出物の蒸発残分は同様にして算出されたものである。
【００４３】
（製造例２）ヤドリギ２０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で２０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５１ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．００％（ｗ／ｖ）であった。
【００４４】
（製造例３）ヤドリギ３０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で３０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物４７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．０８％（ｗ／ｖ）であった。これを３０％エタノール水溶液で１．０８倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４５】
（製造例４）ヤドリギ４０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で４０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物４６ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．２２％（ｗ／ｖ）であった。これを４０％エタノール水溶液で１．２２倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４６】
（製造例５）ヤドリギ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で５０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５０ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．０８％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で１．０８倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４７】
（製造例６）ヤドリギ６０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で６０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５６ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．１７％（ｗ／ｖ）であった。これを６０％エタノール水溶液で１．１７倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４８】
（製造例７）ヤドリギ７０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で７０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５５ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．９０％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、７０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００４９】
（製造例８）ヤドリギ８０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で８０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．８０％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、８０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５０】
（製造例９）ヤドリギ９０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１と同様の条件で９０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物５４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．６９％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、９０％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５１】
(製造例１０）ヤドリギ９５％エタノール水溶液抽出物の調製
ヤドリギの葉茎（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、９５％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で４３日間抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物３５４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．８４％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、９５％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５２】
（製造例１１）ヤドリギヘキサン抽出物の調製
ヤドリギの葉茎（新和物産株式会社製）４０ｇ細切し、ヘキサン４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で４３日間抽出を行った。その後、濾過して、ヤドリギ抽出物３４０ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．６９％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、９９．５％エタノール水溶液で１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５３】
（製造例１２）Cranesbill水抽出物の調製
Cranesbillの根（American botanicals社製）４０ｇを細切し、水４００ｍＬを加え、７０℃、５時間の条件で抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物３４７ｍＬを得た。得られた抽出物について、下記の方法で蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．１８％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５４】
（製造例１３）Cranesbill １０％エタノール水溶液抽出物の調製
Cranesbillの根（American botanicals社製）７ｇを細切し、１０％エタノール水溶液７０ｍＬを加え、室温・静置条件下で７日間抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．０５％（ｗ／ｖ）であった。これを１０％エタノール水溶液で２．０５倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５５】
（製造例１４）Cranesbill ２０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において２０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５６ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．３１％（ｗ／ｖ）であった。これを２０％エタノール水溶液で２．３１倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５６】
（製造例１５）Cranesbill ３０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において３０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．６０％（ｗ／ｖ）であった。これを３０％エタノール水溶液で２．６０倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５７】
（製造例１６）Cranesbill ４０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において４０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５５ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．６６％（ｗ／ｖ）であった。これを４０％エタノール水溶液で２．６６倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５８】
（製造例１７）Cranesbill ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
Cranesbillの根（American botanicals社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で１７日間抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物３０９ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．８８％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で２．８８倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００５９】
（製造例１８）Cranesbill ６０％エタノール水溶液抽出物の調製
製造例１３と同様の条件において６０％エタノール水溶液を使用して抽出を行った。その後、濾過して、Cranesbill抽出物５８ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．５１％（ｗ／ｖ）であった。これを６０％エタノール水溶液で２．５１倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６０】
（製造例１９）Shonny Haw ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
Shonny Hawの樹皮（American botanicals社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で１９日間抽出を行った。その後、濾過して、Shonny Haw抽出物３１９ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．６９％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で１．６９倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６１】
（製造例２０）セイヨウハッカ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
セイヨウハッカの葉（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で１５日間抽出を行った。その後、濾過して、セイヨウハッカ抽出物２７７ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は２．０７％（ｗ／ｖ）であった。これを５０％エタノール水溶液で２．０７倍希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６２】
（製造例２１）コエビスグサ水抽出物の調製
コエビスグサの種子（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、水４００ｍＬを加え、７０℃、５時間の条件で抽出を行った。その後、濾過して、コエビスグサ抽出物２６４ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は１．４３％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６３】
(製造例２２）コエビスグサ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
コエビスグサの種子（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で４３日間抽出を行った。その後、濾過して、コエビスグサ抽出物３４３ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．６４％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固後、５０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６４】
（製造例２３） サネブトナツメ５０％エタノール水溶液抽出物の調製
サネブトナツメの種子（新和物産株式会社製）４０ｇを細切し、５０％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、室温・静置条件下で２１日間抽出を行った。その後、濾過して、サネブトナツメ抽出物３１２ｍＬを得た。得られた抽出物について、蒸発残分を算出したところ、蒸発残分は０．９５％（ｗ／ｖ）であった。これを濃縮乾固させた後、１０％エタノール水溶液で希釈し、１．０％（ｗ／ｖ）（エキス固形分）抽出物を調製した。
【００６５】
実施例１ フィラグリン産生に対する植物抽出物の効果
ヒト正常表皮細胞（ＮＨＥＫ）はEpiLife（登録商標）(Kuraboより購入)を用い、３７℃、５％ＣＯ2条件下で培養した。細胞を６穴プレートに１×１０4個／ｃｍ2で播種し、２４時間培養後、培地を血清無添加培地に交換するとともに、製造例に従って調製した表１に記載の植物抽出物を、最終濃度０．１％（ｖ/ｖ）（最終エキス分濃度０．００１ｗ／ｖ％）となるように培地に添加した。４８時間培養後、細胞からRNeasy（登録商標）Mini Kit (QIAGEN) を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。ｔｏｔａｌ ＲＮＡの濃度を測定し、一定量のｔｏｔａｌ ＲＮＡを用いて逆転写反応を行った。逆転写反応にはHigh capacity RNA-to-cDNA Kit (Applied Biosystems)を用いた。
得られたｃＤＮＡから、Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ−ＰＣＲにより、フィラグリン遺伝子発現の定量を行った。定量は、Taqman（登録商標）Probe (Applied Biosystems)を用い、PRISM 7500 (Applied Biosystems)で検出定量した。５０μｌの反応系にて、増幅条件は９５℃、１５秒の変性反応、６０℃、１分のアニーリング、伸長反応にて行った。それぞれの遺伝子発現量はＲＰＬＰ０発現量により補正し、エキス無添加（溶媒のみ）コントロールにおけるフィラグリンの発現量を１とした場合の相対値として示した。結果を表１に示す。
【００６６】
【表１】
【００６７】
実施例２ フィラグリン産生に対する植物抽出物の効果
製造例１３〜１８に従って調製したCranesbill抽出物を用いて実施例１と同様の手順でフィラグリン遺伝子発現の定量を行った。使用した植物抽出物及びフィラグリン発現量を表２に示す。
【００６８】
【表２】
【００６９】
実施例３ フィラグリン産生に対する植物抽出物の効果
製造例１〜９に従って調製したヤドリギ抽出物を用いて実施例１と同様の手順でフィラグリン遺伝子発現の定量を行った。使用した植物抽出物及びフィラグリン発現量を表３に示す。
【００７０】
【表３】
【００７１】
実施例４ プロスタシン産生に対する植物抽出物の効果
実施例１と同様の手順でプロスタシン遺伝子発現の定量を行った。使用した植物抽出物及びプロスタシン発現量を表４に示す。
【００７２】
【表４】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分とする紫外線抵抗性増強剤。
【請求項２】
ヤドリギ及び／又はその抽出物を有効成分とする請求項１記載の紫外線抵抗性増強剤。
【請求項３】
抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である請求項１又は２記載の紫外線抵抗性増強剤。
【請求項４】
外用剤である請求項１〜３のいずれか１項記載の紫外線抵抗性増強剤。
【請求項５】
細胞の紫外線抵抗性を増強する方法であって、フィラグリン発現能を有する細胞を、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１の存在下で培養する工程を含む方法。
【請求項６】
細胞がケラチノサイトである請求項５記載の方法。
【請求項７】
細胞をヤドリギ及び／又はその抽出物の存在下で培養する請求項５又は６記載の方法。
【請求項８】
抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である請求項５〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項１】
ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１を有効成分とする紫外線抵抗性増強剤。
【請求項２】
ヤドリギ及び／又はその抽出物を有効成分とする請求項１記載の紫外線抵抗性増強剤。
【請求項３】
抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である請求項１又は２記載の紫外線抵抗性増強剤。
【請求項４】
外用剤である請求項１〜３のいずれか１項記載の紫外線抵抗性増強剤。
【請求項５】
細胞の紫外線抵抗性を増強する方法であって、フィラグリン発現能を有する細胞を、ヤドリギ、Cranesbill、Shonny Haw、セイヨウハッカ、コエビスグサ、サネブトナツメ及びそれらの抽出物からなる群より選択されるうちの少なくとも１の存在下で培養する工程を含む方法。
【請求項６】
細胞がケラチノサイトである請求項５記載の方法。
【請求項７】
細胞をヤドリギ及び／又はその抽出物の存在下で培養する請求項５又は６記載の方法。
【請求項８】
抽出物が水抽出物、エタノール抽出物、エタノール水溶液抽出物又はヘキサン抽出物である請求項５〜７のいずれか１項記載の方法。
【公開番号】特開２０１２−２３６８０１（Ｐ２０１２−２３６８０１Ａ）
【公開日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１０７８１９（Ｐ２０１１−１０７８１９）
【出願日】平成２３年５月１３日（２０１１．５．１３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月６日（２０１２．１２．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年５月１３日（２０１１．５．１３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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