組換えベクター
この開示は、改変シトシンデアミナーゼ(CD)を提供する。本開示は、そのような改変CDを発現するか又は含む細胞及びベクター、並びに疾患及び障害の治療でそのような改変CDを用いる方法にさらに関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結された内部リボソーム侵入部位(IRES)を含むカセットであって、3'LTRの5'側、及びレトロウイルスエンベロープをコードするenv核酸ドメインの3'側に位置するカセット;並びに
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列
を含み、6継代培養後に、配列番号21を含むベクター(pACE)と比較してより高い複製能力を維持する、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項２】
前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列が、マウス白血病ウイルス(MLV)、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)、ネコ白血病ウイルス(FeLV)又はテナガザル白血病ウイルス(GALV)に由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３】
前記MLVが両種性MLVである、請求項1又は2に記載のレトロウイルス。
【請求項４】
前記レトロウイルスがガンマレトロウイルスである、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項５】
前記標的細胞が、細胞増殖性障害を有する細胞である、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項６】
前記標的細胞が新生物細胞である、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項７】
前記細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳腫瘍、頭頚部癌、膵臓癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌、関節リウマチ又は他の自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項5に記載のレトロウイルス。
【請求項８】
前記プロモーター配列が増殖調節遺伝子に関連する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項９】
前記プロモーター配列が組織特異プロモーター配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１０】
前記組織特異プロモーター配列が少なくとも一つのアンドロゲン応答エレメント(ARE)を含む、請求項9に記載のレトロウイルス。
【請求項１１】
前記アンドロゲン応答エレメントがプロバシンプロモーターに由来する、請求項10に記載のレトロウイルス。
【請求項１２】
前記組織特異プロモーター配列がプロバシンプロモーターを含む、請求項9に記載のレトロウイルス。
【請求項１３】
前記プロモーターが、配列番号19、20又は22のヌクレオチド1位からヌクレオチド約582位までに記載の配列を有するCMVプロモーターを含み、一つ又は複数の核酸塩基に対する改変を含んでもよく、転写を誘導し開始することができる、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１４】
前記プロモーターが、配列番号19、20又は22のヌクレオチド1位からヌクレオチド約582位までに記載の配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１５】
前記プロモーターがCMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１６】
前記CMV-R-U5ドメインが、MLV R-U5領域に連結されたヒトサイトメガロウイルス由来の前初期プロモーターを含む、請求項15に記載のレトロウイルス。
【請求項１７】
前記CMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドが、配列番号19、20若しくは22のヌクレオチド約1位からヌクレオチド約1202位までに記載の配列、又は配列番号19、20若しくは22に記載の配列に対し少なくとも95%同一である配列を含み、前記ポリヌクレオチドが、作動可能にそれに連結された核酸分子の転写を促進する、請求項16に記載のレトロウイルス。
【請求項１８】
前記gagポリヌクレオチドがガンマレトロウイルスに由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１９】
前記gag核酸ドメインが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約1203からヌクレオチド約2819までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%若しくは99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項18に記載のレトロウイルス。
【請求項２０】
前記ポリヌクレオチドのpolドメインがガンマレトロウイルスに由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２１】
前記polドメインが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約2820からヌクレオチド約6358までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%若しくは99.9%の同一性を有する配列を含む、請求項20に記載のレトロウイルス。
【請求項２２】
前記envドメインが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約6359からヌクレオチド約8323までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%若しくは99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２３】
前記IRESが脳心筋炎ウイルスに由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２４】
前記IRESが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約8327からヌクレオチド約8876までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99%の同一性を有する配列を含む、請求項23に記載のレトロウイルス。
【請求項２５】
前記異種核酸が配列番号3、5、11、13、15又は17に記載の配列を有するポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２６】
前記異種核酸が配列番号4に記載の配列を含むポリペプチドをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２７】
前記異種核酸がヒトコドン最適化され、配列番号4に記載のポリペプチドをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２８】
前記異種核酸が、配列番号19又は22のヌクレオチド番号約8877から約9353までに記載の配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２９】
前記3'LTRがガンマレトロウイルスに由来する、請求項28に記載のレトロウイルス。
【請求項３０】
前記3'LTRがU3-R-U5ドメインを含む、請求項29に記載のレトロウイルス。
【請求項３１】
前記3'LTRが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド約9405位から約9998位までに記載の配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99.5%同一である配列を含む、請求項29に記載のレトロウイルス。
【請求項３２】
前記レトロウイルスポリヌクレオチドが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３３】
前記異種核酸配列が生体応答調節因子をコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３４】
前記生体応答調節因子が免疫増強サイトカインを含む、請求項33に記載のレトロウイルス。
【請求項３５】
前記免疫増強サイトカインが、インターロイキン1〜15、インターフェロン、腫瘍壊死因子(TNF)及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)からなる群から選択される、請求項34に記載のレトロウイルス。
【請求項３６】
前記免疫増強サイトカインがインターフェロンである、請求項34に記載のレトロウイルス。
【請求項３７】
前記インターフェロンがガンマインターフェロンである、請求項36に記載のレトロウイルス。
【請求項３８】
前記異種核酸が、無毒性プロドラッグを毒性薬物に変換するポリペプチドをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３９】
無毒性プロドラッグを毒性薬物に変換する前記ポリペプチドが、チミジンキナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ(PNP)又はシトシンデアミナーゼである、請求項38に記載のレトロウイルス。
【請求項４０】
前記異種核酸配列がターゲッティング部分をコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項４１】
前記ターゲッティング部分が癌抗原を含む、請求項40に記載のレトロウイルス。
【請求項４２】
前記異種核酸配列が結合ドメインをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項４３】
前記結合ドメインが受容体ドメイン、抗体又は抗体断片を含む、請求項42に記載のレトロウイルス。
【請求項４４】
前記異種核酸配列が抑制性ポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項４５】
前記抑制性ポリヌクレオチドがRNAi又はsiRNA配列を含む、請求項44に記載のレトロウイルス。
【請求項４６】
5'から3'方向に、
ヒトサイトメガロウイルス由来の前初期プロモーターとMLV R-U5領域とのCMV-R-U5融合体;
逆転写酵素のプライマー結合部位PBS;
5'スプライス部位;
Ψパッケージングシグナル;
MLV群特異的抗原をコードするgagコード配列;
MLVポリメラーゼポリプロテインをコードするpolコード配列;
3'スプライス部位;
MLV株4070Aのエンベロープタンパク質をコードする4070A envコード配列;
脳心筋炎ウイルス由来の内部リボソーム侵入部位(IRES);
異種核酸配列;
ポリプリン領域;及び
U3-R-U5 MLV長末端反復
を含む単離されたポリヌクレオチドであって、前記4070A envコード配列及びIRESが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約6359からヌクレオチド約8876までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99%の同一性を有する配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項４７】
レトロウイルスポリヌクレオチドが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項46に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
レトロウイルスポリヌクレオチド配列が、マウス白血病ウイルス(MLV)、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)、ネコ白血病ウイルス(FeLV)又はテナガザル白血病ウイルス(GALV)に由来する、請求項46に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
前記MoMLVが両種性MoMLVである、請求項48に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
細胞増殖性障害を有する被験体を治療する方法であって、前記被験体を、請求項1又は46に記載のポリヌクレオチドと、前記ポリヌクレオチドが発現されるような条件下で接触させるステップ、及び前記被験体を5-フルオロシトシンと接触させるステップを含む方法。
【請求項５１】
前記ポリヌクレオチドが前記被験体の細胞に組み込まれる、請求項50に記載の方法。
【請求項５２】
前記ポリヌクレオチドがレトロウイルスベクターによって送達される、請求項50に記載の方法。
【請求項５３】
前記レトロウイルスベクターが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項52に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞増殖性障害が多形神経膠芽腫である、請求項50に記載の方法。
【請求項５５】
前記細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳腫瘍、頭頚部癌、膵臓癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌からなる群から選択される、請求項50に記載の方法。
【請求項５６】
被験体における細胞増殖性障害を治療する方法であって、前記被験体を請求項1に記載のレトロウイルスと接触させるステップを含み、前記異種核酸配列は新生物細胞の増殖を阻害する治療的タンパク質をコードする、方法。
【請求項５７】
前記治療的タンパク質が、非細胞毒性薬物を細胞毒性薬物に変換するポリペプチドを含む、請求項56に記載の方法。
【請求項５８】
前記ポリペプチドがシトシンデアミナーゼ活性を有する、請求項57に記載の方法。
【請求項５９】
前記ポリペプチドが、配列番号4、12、14、16又は18に記載の配列を含む、請求項58に記載の方法。
【請求項６０】
前記非細胞毒性薬物が5-フルオロシトシンである、請求項57に記載の方法。
【請求項６１】
前記レトロウイルスポリヌクレオチドが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項56に記載の方法。
【請求項６２】
細胞増殖性障害を治療する方法であって、請求項46に記載のポリヌクレオチドを含むレトロウイルスを、細胞増殖性障害を有する被験体に、前記障害を有する細胞にレトロウイルスが感染するような条件下で投与するステップ、及び前記被験体を抗癌剤又は化学療法剤と接触させるステップを含む方法。
【請求項６３】
前記抗癌剤が、ベバシズマブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ソラフェニブ、スニチニブ、AE-941、VEGF Trap、パゾパニブ、バンデタニブ、バタラニブ、セジラニブ、フェンレチニド、スクアラミン、INGN-241、経口テトラチオモリブデート、テトラチオモリブデート、Panzem NCD、2-メトキシエストラジオール、AEE-788、AG-013958、ベバシラニブナトリウム、AMG-706、アクシチニブ、BIBF-1120、CDP-791、CP-547632、PI-88、SU-14813、SU-6668、XL-647、XL-999、IMC-1121B、ABT-869、BAY-57-9352、BAY-73-4506、BMS-582664、CEP-7055、CHIR-265、CT-322、CX-3542、E-7080、ENMD-1198、OSI-930、PTC-299、Sirna-027、TKI-258、Veglin、XL-184又はZK-304709からなる群から選択される、請求項62に記載の方法。
【請求項６４】
被験体における細胞増殖性障害を治療する方法であって、請求項40〜43のいずれか一項に記載のレトロウイルスを投与するステップ、及び被験体を、細胞傷害剤を含むコグネートと接触させるステップを含む方法。
【請求項６５】
配列番号4の最適化シトシンデアミナーゼのコード配列に連結されたHER2の細胞外ドメイン(ECD)及び膜貫通(TM)ドメインを含むポリペプチドをコードする配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６６】
配列番号4を含む最適化シトシンデアミナーゼに連結されたHER2の細胞外ドメインのHerceptin結合ドメインIV (ECDIV)及び膜貫通(TM)ドメインを含むポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６７】
配列番号4を含む最適化シトシンデアミナーゼに連結されたHER2の細胞外ドメインのHerceptin結合ドメインIV (ECDIV)及び膜貫通(TM)ドメインに作動可能に融合したHER2のシグナルペプチド(S)を含むポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６８】
IRESに作動可能に連結され、かつENV配列の3'側に連結された、請求項65、66又は67に記載のポリヌクレオチドを含む組換え複製適合性レトロウイルス。
【請求項６９】
前記異種ポリペプチドが、HER2又は末端切断HER2(HER2 ECDTM)又はHER2 SECDIVTMである、請求項1に記載の組換えレトロウイルス。
【請求項７０】
脳重量1gあたり10-3〜10-7 TUの用量で投与される、請求項1に記載の組換えレトロウイルス。
【請求項７１】
前記レトロウイルスが脳重量1gあたり約10-3〜10-7 TUで投与される、請求項50〜54のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記レトロウイルスが脳重量1gあたり約10-4〜10-6 TUで投与される、請求項71に記載の方法。
【請求項７３】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
miRNA又はsiRNA配列のための一次前駆体miRNA(pri-miRNA)を含むカセット、
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含む、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項７４】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
miRNA又はsiRNA配列のための前駆体miRNA(pre-miRNA)を含むカセット、
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含む、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項７５】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
polIIIプロモーター及びsiRNA又はshRNAを含むカセット、
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含み、該ベクターは、細胞中で少なくとも6継代の間少なくとも90%安定である、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項７６】
miR 128-1及びmiR 128-2についての従属クレームである、請求項73、74又は75のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項７７】
前記ベクターが、異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたIRESカセットをさらに含む、請求項73、74又は75のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項７８】
前記IRESカセットがenv遺伝子のすぐ3'側に位置する、請求項77に記載のベクター。
【請求項７９】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
天然に存在するmiRNAの標的配列を含むカセット;並びに
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含む、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項１】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結された内部リボソーム侵入部位(IRES)を含むカセットであって、3'LTRの5'側、及びレトロウイルスエンベロープをコードするenv核酸ドメインの3'側に位置するカセット;並びに
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列
を含み、6継代培養後に、配列番号21を含むベクター(pACE)と比較してより高い複製能力を維持する、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項２】
前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列が、マウス白血病ウイルス(MLV)、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)、ネコ白血病ウイルス(FeLV)又はテナガザル白血病ウイルス(GALV)に由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３】
前記MLVが両種性MLVである、請求項1又は2に記載のレトロウイルス。
【請求項４】
前記レトロウイルスがガンマレトロウイルスである、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項５】
前記標的細胞が、細胞増殖性障害を有する細胞である、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項６】
前記標的細胞が新生物細胞である、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項７】
前記細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳腫瘍、頭頚部癌、膵臓癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌、関節リウマチ又は他の自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項5に記載のレトロウイルス。
【請求項８】
前記プロモーター配列が増殖調節遺伝子に関連する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項９】
前記プロモーター配列が組織特異プロモーター配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１０】
前記組織特異プロモーター配列が少なくとも一つのアンドロゲン応答エレメント(ARE)を含む、請求項9に記載のレトロウイルス。
【請求項１１】
前記アンドロゲン応答エレメントがプロバシンプロモーターに由来する、請求項10に記載のレトロウイルス。
【請求項１２】
前記組織特異プロモーター配列がプロバシンプロモーターを含む、請求項9に記載のレトロウイルス。
【請求項１３】
前記プロモーターが、配列番号19、20又は22のヌクレオチド1位からヌクレオチド約582位までに記載の配列を有するCMVプロモーターを含み、一つ又は複数の核酸塩基に対する改変を含んでもよく、転写を誘導し開始することができる、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１４】
前記プロモーターが、配列番号19、20又は22のヌクレオチド1位からヌクレオチド約582位までに記載の配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１５】
前記プロモーターがCMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１６】
前記CMV-R-U5ドメインが、MLV R-U5領域に連結されたヒトサイトメガロウイルス由来の前初期プロモーターを含む、請求項15に記載のレトロウイルス。
【請求項１７】
前記CMV-R-U5ドメインポリヌクレオチドが、配列番号19、20若しくは22のヌクレオチド約1位からヌクレオチド約1202位までに記載の配列、又は配列番号19、20若しくは22に記載の配列に対し少なくとも95%同一である配列を含み、前記ポリヌクレオチドが、作動可能にそれに連結された核酸分子の転写を促進する、請求項16に記載のレトロウイルス。
【請求項１８】
前記gagポリヌクレオチドがガンマレトロウイルスに由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項１９】
前記gag核酸ドメインが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約1203からヌクレオチド約2819までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%若しくは99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項18に記載のレトロウイルス。
【請求項２０】
前記ポリヌクレオチドのpolドメインがガンマレトロウイルスに由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２１】
前記polドメインが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約2820からヌクレオチド約6358までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%若しくは99.9%の同一性を有する配列を含む、請求項20に記載のレトロウイルス。
【請求項２２】
前記envドメインが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約6359からヌクレオチド約8323までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%、99%若しくは99.8%の同一性を有する配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２３】
前記IRESが脳心筋炎ウイルスに由来する、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２４】
前記IRESが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約8327からヌクレオチド約8876までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99%の同一性を有する配列を含む、請求項23に記載のレトロウイルス。
【請求項２５】
前記異種核酸が配列番号3、5、11、13、15又は17に記載の配列を有するポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２６】
前記異種核酸が配列番号4に記載の配列を含むポリペプチドをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２７】
前記異種核酸がヒトコドン最適化され、配列番号4に記載のポリペプチドをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２８】
前記異種核酸が、配列番号19又は22のヌクレオチド番号約8877から約9353までに記載の配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項２９】
前記3'LTRがガンマレトロウイルスに由来する、請求項28に記載のレトロウイルス。
【請求項３０】
前記3'LTRがU3-R-U5ドメインを含む、請求項29に記載のレトロウイルス。
【請求項３１】
前記3'LTRが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド約9405位から約9998位までに記載の配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99.5%同一である配列を含む、請求項29に記載のレトロウイルス。
【請求項３２】
前記レトロウイルスポリヌクレオチドが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３３】
前記異種核酸配列が生体応答調節因子をコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３４】
前記生体応答調節因子が免疫増強サイトカインを含む、請求項33に記載のレトロウイルス。
【請求項３５】
前記免疫増強サイトカインが、インターロイキン1〜15、インターフェロン、腫瘍壊死因子(TNF)及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)からなる群から選択される、請求項34に記載のレトロウイルス。
【請求項３６】
前記免疫増強サイトカインがインターフェロンである、請求項34に記載のレトロウイルス。
【請求項３７】
前記インターフェロンがガンマインターフェロンである、請求項36に記載のレトロウイルス。
【請求項３８】
前記異種核酸が、無毒性プロドラッグを毒性薬物に変換するポリペプチドをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項３９】
無毒性プロドラッグを毒性薬物に変換する前記ポリペプチドが、チミジンキナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ(PNP)又はシトシンデアミナーゼである、請求項38に記載のレトロウイルス。
【請求項４０】
前記異種核酸配列がターゲッティング部分をコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項４１】
前記ターゲッティング部分が癌抗原を含む、請求項40に記載のレトロウイルス。
【請求項４２】
前記異種核酸配列が結合ドメインをコードする、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項４３】
前記結合ドメインが受容体ドメイン、抗体又は抗体断片を含む、請求項42に記載のレトロウイルス。
【請求項４４】
前記異種核酸配列が抑制性ポリヌクレオチドを含む、請求項1に記載のレトロウイルス。
【請求項４５】
前記抑制性ポリヌクレオチドがRNAi又はsiRNA配列を含む、請求項44に記載のレトロウイルス。
【請求項４６】
5'から3'方向に、
ヒトサイトメガロウイルス由来の前初期プロモーターとMLV R-U5領域とのCMV-R-U5融合体;
逆転写酵素のプライマー結合部位PBS;
5'スプライス部位;
Ψパッケージングシグナル;
MLV群特異的抗原をコードするgagコード配列;
MLVポリメラーゼポリプロテインをコードするpolコード配列;
3'スプライス部位;
MLV株4070Aのエンベロープタンパク質をコードする4070A envコード配列;
脳心筋炎ウイルス由来の内部リボソーム侵入部位(IRES);
異種核酸配列;
ポリプリン領域;及び
U3-R-U5 MLV長末端反復
を含む単離されたポリヌクレオチドであって、前記4070A envコード配列及びIRESが、配列番号19若しくは22のヌクレオチド番号約6359からヌクレオチド約8876までの配列、又はそれに対して少なくとも95%、98%又は99%の同一性を有する配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項４７】
レトロウイルスポリヌクレオチドが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項46に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４８】
レトロウイルスポリヌクレオチド配列が、マウス白血病ウイルス(MLV)、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)、ネコ白血病ウイルス(FeLV)又はテナガザル白血病ウイルス(GALV)に由来する、請求項46に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
前記MoMLVが両種性MoMLVである、請求項48に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５０】
細胞増殖性障害を有する被験体を治療する方法であって、前記被験体を、請求項1又は46に記載のポリヌクレオチドと、前記ポリヌクレオチドが発現されるような条件下で接触させるステップ、及び前記被験体を5-フルオロシトシンと接触させるステップを含む方法。
【請求項５１】
前記ポリヌクレオチドが前記被験体の細胞に組み込まれる、請求項50に記載の方法。
【請求項５２】
前記ポリヌクレオチドがレトロウイルスベクターによって送達される、請求項50に記載の方法。
【請求項５３】
前記レトロウイルスベクターが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項52に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞増殖性障害が多形神経膠芽腫である、請求項50に記載の方法。
【請求項５５】
前記細胞増殖性障害が、肺癌、結腸直腸癌、乳癌、前立腺癌、尿路癌、子宮癌、脳腫瘍、頭頚部癌、膵臓癌、黒色腫、胃癌及び卵巣癌からなる群から選択される、請求項50に記載の方法。
【請求項５６】
被験体における細胞増殖性障害を治療する方法であって、前記被験体を請求項1に記載のレトロウイルスと接触させるステップを含み、前記異種核酸配列は新生物細胞の増殖を阻害する治療的タンパク質をコードする、方法。
【請求項５７】
前記治療的タンパク質が、非細胞毒性薬物を細胞毒性薬物に変換するポリペプチドを含む、請求項56に記載の方法。
【請求項５８】
前記ポリペプチドがシトシンデアミナーゼ活性を有する、請求項57に記載の方法。
【請求項５９】
前記ポリペプチドが、配列番号4、12、14、16又は18に記載の配列を含む、請求項58に記載の方法。
【請求項６０】
前記非細胞毒性薬物が5-フルオロシトシンである、請求項57に記載の方法。
【請求項６１】
前記レトロウイルスポリヌクレオチドが、配列番号19、20又は22に記載の配列を含む、請求項56に記載の方法。
【請求項６２】
細胞増殖性障害を治療する方法であって、請求項46に記載のポリヌクレオチドを含むレトロウイルスを、細胞増殖性障害を有する被験体に、前記障害を有する細胞にレトロウイルスが感染するような条件下で投与するステップ、及び前記被験体を抗癌剤又は化学療法剤と接触させるステップを含む方法。
【請求項６３】
前記抗癌剤が、ベバシズマブ、ペガプタニブ、ラニビズマブ、ソラフェニブ、スニチニブ、AE-941、VEGF Trap、パゾパニブ、バンデタニブ、バタラニブ、セジラニブ、フェンレチニド、スクアラミン、INGN-241、経口テトラチオモリブデート、テトラチオモリブデート、Panzem NCD、2-メトキシエストラジオール、AEE-788、AG-013958、ベバシラニブナトリウム、AMG-706、アクシチニブ、BIBF-1120、CDP-791、CP-547632、PI-88、SU-14813、SU-6668、XL-647、XL-999、IMC-1121B、ABT-869、BAY-57-9352、BAY-73-4506、BMS-582664、CEP-7055、CHIR-265、CT-322、CX-3542、E-7080、ENMD-1198、OSI-930、PTC-299、Sirna-027、TKI-258、Veglin、XL-184又はZK-304709からなる群から選択される、請求項62に記載の方法。
【請求項６４】
被験体における細胞増殖性障害を治療する方法であって、請求項40〜43のいずれか一項に記載のレトロウイルスを投与するステップ、及び被験体を、細胞傷害剤を含むコグネートと接触させるステップを含む方法。
【請求項６５】
配列番号4の最適化シトシンデアミナーゼのコード配列に連結されたHER2の細胞外ドメイン(ECD)及び膜貫通(TM)ドメインを含むポリペプチドをコードする配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６６】
配列番号4を含む最適化シトシンデアミナーゼに連結されたHER2の細胞外ドメインのHerceptin結合ドメインIV (ECDIV)及び膜貫通(TM)ドメインを含むポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６７】
配列番号4を含む最適化シトシンデアミナーゼに連結されたHER2の細胞外ドメインのHerceptin結合ドメインIV (ECDIV)及び膜貫通(TM)ドメインに作動可能に融合したHER2のシグナルペプチド(S)を含むポリペプチドをコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６８】
IRESに作動可能に連結され、かつENV配列の3'側に連結された、請求項65、66又は67に記載のポリヌクレオチドを含む組換え複製適合性レトロウイルス。
【請求項６９】
前記異種ポリペプチドが、HER2又は末端切断HER2(HER2 ECDTM)又はHER2 SECDIVTMである、請求項1に記載の組換えレトロウイルス。
【請求項７０】
脳重量1gあたり10-3〜10-7 TUの用量で投与される、請求項1に記載の組換えレトロウイルス。
【請求項７１】
前記レトロウイルスが脳重量1gあたり約10-3〜10-7 TUで投与される、請求項50〜54のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記レトロウイルスが脳重量1gあたり約10-4〜10-6 TUで投与される、請求項71に記載の方法。
【請求項７３】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
miRNA又はsiRNA配列のための一次前駆体miRNA(pri-miRNA)を含むカセット、
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含む、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項７４】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
miRNA又はsiRNA配列のための前駆体miRNA(pre-miRNA)を含むカセット、
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含む、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項７５】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
polIIIプロモーター及びsiRNA又はshRNAを含むカセット、
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含み、該ベクターは、細胞中で少なくとも6継代の間少なくとも90%安定である、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【請求項７６】
miR 128-1及びmiR 128-2についての従属クレームである、請求項73、74又は75のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項７７】
前記ベクターが、異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたIRESカセットをさらに含む、請求項73、74又は75のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項７８】
前記IRESカセットがenv遺伝子のすぐ3'側に位置する、請求項77に記載のベクター。
【請求項７９】
レトロウイルスGAGタンパク質;
レトロウイルスPOLタンパク質;
レトロウイルスエンベロープ;
レトロウイルスポリヌクレオチドであって、前記レトロウイルスポリヌクレオチド配列の3'末端に長末端反復(LTR)配列、前記レトロウイルスポリヌクレオチドの5'末端に哺乳動物細胞での発現に適するプロモーター配列、gag核酸ドメイン、pol核酸ドメイン及びenv核酸ドメインを含むレトロウイルスポリヌクレオチド;
天然に存在するmiRNAの標的配列を含むカセット;並びに
標的細胞での逆転写、パッケージング及び組込みのために必要なシス作用性配列、
を含む、組換え複製適合性レトロウイルス(RCR)。
【図１−１】
【図１−２】
【図１−３】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図３−３】
【図３−４】
【図３−５】
【図３−６】
【図３−７】
【図３−８】
【図３−９】
【図３−１０】
【図３−１１】
【図３−１２】
【図３−１３】
【図３−１４】
【図３−１５】
【図３−１６】
【図３−１７】
【図３−１８】
【図３−１９】
【図３−２０】
【図３−２１】
【図３−２２】
【図３−２３】
【図３−２４】
【図３−２５】
【図３−２６】
【図３−２７】
【図３−２８】
【図３−２９】
【図３−３０】
【図３−３１】
【図３−３２】
【図３−３３】
【図３−３４】
【図３−３５】
【図３−３６】
【図４】
【図５】
【図６−１】
【図６−２】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０−１】
【図１０−２】
【図１０−３】
【図１０−４】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図１−２】
【図１−３】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図３−３】
【図３−４】
【図３−５】
【図３−６】
【図３−７】
【図３−８】
【図３−９】
【図３−１０】
【図３−１１】
【図３−１２】
【図３−１３】
【図３−１４】
【図３−１５】
【図３−１６】
【図３−１７】
【図３−１８】
【図３−１９】
【図３−２０】
【図３−２１】
【図３−２２】
【図３−２３】
【図３−２４】
【図３−２５】
【図３−２６】
【図３−２７】
【図３−２８】
【図３−２９】
【図３−３０】
【図３−３１】
【図３−３２】
【図３−３３】
【図３−３４】
【図３−３５】
【図３−３６】
【図４】
【図５】
【図６−１】
【図６−２】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０−１】
【図１０−２】
【図１０−３】
【図１０−４】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【公表番号】特表２０１２−５０３９８７（Ｐ２０１２−５０３９８７Ａ）
【公表日】平成２４年２月１６日（２０１２．２．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２９２９２（Ｐ２０１１−５２９２９２）
【出願日】平成２１年９月２６日（２００９．９．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５８５１２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３６９８６
【国際公開日】平成２２年４月１日（２０１０．４．１）
【出願人】（５１０３３７４３６）トカジェン インコーポレーテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年２月１６日（２０１２．２．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月２６日（２００９．９．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０５８５１２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０３６９８６
【国際公開日】平成２２年４月１日（２０１０．４．１）
【出願人】（５１０３３７４３６）トカジェン インコーポレーテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
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