組織修復を増加させるモノテルペンの使用
本発明は、生体組織修復、すなわち、組織再生または治癒を増加させるモノテルペンの使用；個体の皮膚または粘膜の生体組織修復を増加させるモノテルペンの化粧用使用；および個体の生体組織傷害を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体組織修復を増加させるモノテルペンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
組織修復は、組織再生または治癒により、再発（relapse）を伴ってまたは伴うことなく、病変の回復に到達する過程を包含する。
内因性組織再生は、何百万という細胞が、組織リモデリングおよび組織機能復活を絶えず生じている生体の規則的維持である。それは、幹細胞で始まる。生化学的シグナルは、増殖因子およびサイトカインが、再生のための環境を生成した部位へと幹細胞を引き寄せる。
【０００３】
瘢痕組織は、再生された組織とは異なる。傷害が起こった時、身体の最初の反応は、止血であり、その時に、フィブリンおよび炎症性サイトカインは、血餅または暫定的スカフォールドを形成する。より多くの炎症性細胞が現れ、その血餅をリモデリングして瘢痕組織にする。瘢痕組織中のコラーゲンは、異常に整列していて、しかもエラスチンをほとんど有していない。再生された組織とは異なり、瘢痕組織は、それが置き換わる周囲組織とは異なる、すなわち、周囲組織より不完全である。
【０００４】
テルペンは、主として、広範囲の植物、具体的には、針葉樹によって生産されるが、アゲハチョウ（swallowtail butterflies）などの、臭角からテルペンを発するいくつかの昆虫によっても生産される、広範且つ多様なクラスの炭化水素である。それらは、樹脂のおよび樹脂から生産されるテルペンチンの主成分である。「テルペン」という名称は、「テルペンチン」という語に由来する。テルペンが、炭素骨格の酸化または転位などによって化学修飾された場合、得られた化合物は、概して、テルペノイドと称される。幾人かの著者は、テルペンという用語を用いて、全てのテルペノイドを包含するであろう。テルペンおよびテルペノイドは、多くのタイプの植物および花からの精油の主な構成成分である。精油は、食品用の天然フレーバー添加剤として、香水中の芳香剤として、アロマセラピーにおいて、および伝統医学および代替医療において広く用いられている。天然テルペンおよびテルペノイドの合成変種および誘導体も、香水に用いられる芳香および食品添加物に用いられるフレーバーの種類を大きく拡大している。
【０００５】
テルペンは、分子式Ｃ５Ｈ８を有するイソプレンの単位から生合成誘導される。テルペンの基本的な分子式は、その倍数、すなわち、（Ｃ５Ｈ８）ｎであり、ここにおいて、ｎは、連結したイソプレン単位の数である。イソプレン自体は、増成過程を受けることがないが、むしろ、活性形、すなわち、イソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰまたは更に、イソペンテニル二リン酸）およびジメチルアリルピロリン酸（ＤＭＡＰＰまたは更に、ジメチルアリル二リン酸）は、生合成経路中の成分である。イソプレン単位の連鎖が増成されると、得られたテルペンは、サイズによって順に、ヘミテルペン、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セステルテルペン（sesterterpenes）、トリテルペンおよびテトラテルペンとして分類される。
【０００６】
モノテルペンは、２個のイソプレン単位から成り、分子式Ｃ１０Ｈ１６を有する。モノテルペンの例は、ゲラニオールおよびリモネンである。モノテルペンは、単環式、二環式および非環式の形で存在し、そして単純かまたは修飾された炭化水素である。それらは、植物のメバロン酸分枝生合成経路によるアセテートの同化作用から誘導されるイソプレノイド分子のクラスである。
【０００７】
オレンジピール油の主成分および発癌研究中のモノテルペンの原型であるＤ−リモネン（（４Ｒ）−１−メチル−４−イソプロペニルシクロヘキサ−１−エン）は、１０−炭素イソプレン中間体ゲラニルピロリン酸の環化によって形成される。
【０００８】
【化１】
【０００９】
Ｄ−リモネンおよびその誘導代謝産物は、いろいろな前臨床モデルシステムにおいて癌化学療法的および化学的予防法的な効力を有することが分かった。
Crowell PL et al. は、カスタード中の１００ｍｇ／ｋｇのリモネンを摂取した７人の健康なヒト志願者の血液中にリモネンの血漿代謝産物を識別した。オンライン・キャピラリーガスクロマトグラフィー／マススペクトロメトリー分析は、少なくとも５種類の化合物が、摂取後４時間に存在したことを示した。二つのメジャーピークは、ラットのリモネン代謝産物であるジヒドロペリラ酸（dihydroperillic acid）およびペリラ酸（perillic acid）として識別され、そして二つのマイナーピークは、これら酸のそれぞれのメチルエステルであることが判明した（Crowell PL et al., 1994）。
【００１０】
Ｒ−およびＳ−リモネンは、イソプレニル化酵素の弱い阻害剤にすぎないが、それらの主要代謝産物であるペリラ酸およびペリリルアルコールは、低ｍＭ範囲内のＩＣ５０値を有する一層強力な阻害剤である。それら代謝産物は、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ型酵素に対して、ファルネシルトランスフェラーゼよりも大きい活性を有する（Hardcastle IR et al., 1999）。
【００１１】
Ｄ−リモネンは、前臨床研究において顕著な化学療法活性および最小限の毒性を有する。進行癌の患者における毒性、最大許容投与量（ＭＴＤ）および薬物動態を評価するＩ相臨床試験を行った後、乳癌における一定のII相評価を行った。Ｄ−リモネンは、癌患者において、臨床的活性を有することができる用量で十分に許容される（Vigushin DM et al., 1998）。
【００１２】
伝統医学において疾患を治癒させるのに用いられる植物に由来する化合物は、新しい活性薬剤分子の開発に重要な源である。このような戦略を用いて、発明者らは、従来、反復炎症性エピソードによって誘発されるヒト血管内皮細胞の老化を特異的に予防するまたは処置することができる数種類のモノテルペンを識別してきた（ＷＯ２００５／１０５０７４号）。
【００１３】
炎症性応答は、傷害組織の組織修復について最初の生命に必要な機構である。それは、赤血球の損失を妨げる即時イベント；損傷組織を除去し、そして修復を支持するように血管供給を達成する急性応答；および組織修復期を特徴とする。
【００１４】
市場にある抗炎症性分子であるイブプロフェンのような非ステロイド性抗炎症薬は、炎症を遅らせることによって、炎症過程の最終段階、すなわち、組織修復を妨げる。顆粒球の炎症性反応を減少させることが主な作用である抗炎症薬も、治癒抑制傾向を有する（Lee KH et al., 1968）。
【００１５】
切開創傷における破壊強さを減少させる非ステロイド性抗炎症薬は、創傷収縮および上皮化への可変作用を有することが判明した（Rao CM. et al., 1988; Kumar A. et al., 1988）。
【００１６】
イブプロフェンは、修復された伸筋腱の破壊強さ、創傷収縮および上皮化を減少させることが報告された（Dvivedi S. et al., 1997, Kulick MI. et al., 1986; Dong Y-L. et al., 1993）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】ＷＯ２００５／１０５０７４号
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Crowell PL et al.,“Human metabolism of the experimental cancer therapeutic agent d-limonene”, Cancer Chemother Pharmacol. 1994; 35(1): 31-7
【非特許文献２】Hardcastle IR et al.,“Inhibition of protein prenylation by metabolites of limonene”, Biochem Pharmacol. 1999 Apr 1; 57(7): 801-9
【非特許文献３】Vigushin DM et al.,“Phase I and pharmacokinetic study of D-limonene in patients with advanced cancer. Cancer Research Campaign Phase I/II Clinical Trials Committee”, Cancer Chemother Pharmaol. 1998; 42(2): 111-7
【非特許文献４】Lee KH. Studies on the mechanism of action of salicylate. II. Retardation of wound healing by aspirin. Journal of Pharmaceutical Sciences. 1968; 57(6): 1042-1043
【非特許文献５】Rao CM, Kumar A, Kulkarni DR., Effects of enfenamic acid and its zinc salt on wound-heaking. Indian Journal of Physiology and Pharmacology. 1988; 32(1): 61-66
【非特許文献６】Kumar A, Rao M, Kulkarni DR. Zinc incorporation reverses suppressant effect of ibuprofen on wound healing. Indian Journal of Experimental Biology. 1988; 26(6): 483-485
【非特許文献７】Dvivedi S, Tiwari SM, Sharma A. Effect of ibuprofen and diclofenac sodium on experimental wound healing. Indian Journal of Experimental Biology. 1997; 35(11): 1243-1245
【非特許文献８】Kulick MI, Smith S, Hadler K. Oral ibuprofen: evaluation of its effect on peritendinous adhesions and the breaking strength of a tenorrhaphy. Jounal of Hand Surgery. 1986; 11(1): 110-120
【非特許文献９】Dong Y-L, Fleming RYD, Yan TZ, Herndon DN, Waymack JP. Effect of ibuprofen on the inflammatory response to surgical wounds. Journal of Trauma. 1993; 35(3): 340-343
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明者は、ここで、予想外にも、リモネンおよびペリリルアルコールが、以前に本発明者に認められたそれらの抗炎症作用にもかかわらず、生体組織修復を誘発するということを示した（ＷＯ２００５／１０５０７４号）。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
第一に、本発明者は、ここで、予想外にも、ラット結腸炎症モデルにおいて、リモネンの抗炎症作用が、組織修復を妨げないということを認めた。
第二に、本発明者は、リモネンおよびペリリルアルコールが、アトピー性皮膚炎のような慢性皮膚炎症障害に対して有益であるということを示した。
【００２１】
第三に、本発明者は、古典的な治癒モデルにおけるリモネンおよびペリリルアルコールの有益な作用を示した。
組織修復へのリモネンの作用を理解するために、３０匹の Wistar HsdBrlHan 雌ラットを、結腸炎ラットモデルに用いた。結腸炎症は、２，５，６−トリニトロベンゼンスルホン酸溶液（ＴＮＢＳ，Fluka, France）の単回直腸投与によって誘発し、そして経口投与で与えられるリモネンの組織修復への抗炎症作用を研究した。結腸炎症の誘発後６日目に試料採取された結腸の平均の肉眼的スコアおよび顕微鏡的スコアを比較した。それら結果は、リモネンが、その抗炎症作用にもかかわらず、イブプロフェンと比較して、炎症後組織修復を誘発したということを示した。更に、それは、基準分子として用いられたイブプロフェンの濃度より５倍劣る濃度で循環ＴＮＦ−αレベルを低下させた。
【００２２】
慢性皮膚炎症モデルにおいて、本発明者は、更に、皮膚修復および炎症誘発性サイトカインレベルへのリモネンおよびペリリルアルコールの有意の作用を示した。慢性皮膚炎症は、２４匹の雌マウス無毛Ｓｋｈ−１において、ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＴＰＡ）の７日間毎日の背部適用によって誘発した（Stanley P.L., et. al., 1991）。
【００２３】
もう一つの皮膚モデルにおいて、治癒過程へのリモネンおよびペリリルアルコールの影響を、各々の側腹に皮膚の乱刺を施された無毛Ｓｋｈ−１マウスで研究した。トウモロコシ油単独、トウモロコシ油中溶液中のリモネン、またはトウモロコシ油中溶液中のペリリルアルコールを、各々の乱刺部位への局所適用により、１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で８日間毎日投与した。創傷治癒過程は、ペリリルアルコールの毎日適用で、リモネンと比較してより良い結果、および対照と比較してはるかに良い結果を与えた。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、ラット平均体重の進展を示す（平均±ＥＳＭ）。
【図２】図２は、ＴＮＦ−αの平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す（平均±ＥＳＭ）。マン・ホイットニーＵ検定（U Test Mann-Whitney）：＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１（対「対照」）；＃Ｐ＜０．０５（対「ＴＮＢＳ／対照」）。
【図３】図３は、５種類の処置群のラット結腸の平均肉眼的スコアを示す（平均±ＥＳＭ）。マン・ホイットニーＵ検定：＊＊Ｐ＜０．０１（対「対照」）；＃Ｐ＜０．０５および＃＃Ｐ＜０．０１（対「ＴＮＢＳ／対照」）；°Ｐ＜０．０５（対「ＴＮＢＳ／リモネン１００」）。
【図４】図４は、５種類の処置群のラットの平均結腸長さ（ｃｍ）を示す。（平均±ＥＳＭ）マン・ホイットニーＵ検定：＊＊Ｐ＜０．０１（対「対照」）；＃Ｐ＜０．０５（対「ＴＮＢＳ／対照」）。
【図５】図５は、マウス平均体重進展を示す（平均±ＥＳＭ）。
【図６】図６は、４種類の処置群のマウスの皮膚炎症の平均肉眼的スコアを示す。
【図７】図７は、４種類の処置群のマウスの皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアを示す。
【図８】図８は、４種類の処置群のマウスの屠殺前のＩＬ−１βの平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図９】図９は、４種類の処置群のマウスの屠殺前のＩＬ−６の平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図１０】図１０は、４種類の処置群のマウスの屠殺前のＩＦＮ−γの平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
組織修復を増加させるモノテルペンの使用
したがって、本発明は、生体組織修復を増加させるモノテルペンの使用に関する。
好ましくは、組織修復には、組織再生および治癒が含まれる。
【００２６】
一つの態様において、モノテルペンは、本発明にしたがって用いられて、生体組織再生を増加させる。
好ましくは、モノテルペンは、本発明にしたがって用いられて、in vitro 生体組織再生を増加させる。
【００２７】
本発明の文脈中において、「組織」は、相互連結した細胞の集合を意味する。
本発明の文脈中において、「生体組織」は、ヒトまたは動物起原の組織を意味し、そしてそれには、in vivo 組織および in vitro または ex vivo の培養組織が含まれる。
【００２８】
in vitro または ex vivo の培養組織の例には、線維芽細胞のような培養細胞、および皮膚に見出されるいろいろな細胞タイプを含む in vitro 皮膚モデルが含まれる。
in vivo 生体組織の例には、皮膚および粘膜が含まれる。
【００２９】
一つの態様において、皮膚は、頭皮を意味する。
本発明の文脈中において、「生体組織修復」は、傷害および／または欠陥および／または疾患症状を示している生体組織の組織再生および／または治癒を意味する。
【００３０】
生体組織傷害には、熱傷、切り傷、灼熱再発、創傷、および過度の寒冷または熱を含めた極端な気象条件（weather condition）の再発が含まれる。
生体組織疾患には、アトピー性皮膚炎、脂漏性角膜炎（seborrhoic keratitis）、後天性表皮水疱症（epidermolysis bullosa acquisita）、乾癬、エリテマトーデスにおける皮膚変質、皮膚筋炎、強皮症、慢性座瘡、慢性セルライテス（cellulites）、そう痒、および糖尿病の場合のような異常または欠陥瘢痕形成のような皮膚組織疾患が含まれる。
【００３１】
生体組織欠陥には、座瘡膿疱、セルライテス、瘢痕、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、瘢痕および着色を含めた老化過程による美的でない皮膚欠点、しわおよび落屑性容貌、伸展線、加齢マーク、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、酒さ、および外傷後再発の非審美的状態（unesthetisms）などの皮膚組織欠陥が含まれる。
【００３２】
生体組織修復を増加させる本発明によるモノテルペンの使用は、化粧用であってよいしまたは治療的であってよい。
このような使用のために、そのモノテルペンは、全身経路によってまたは局所経路（topic route）によって投与することができる。好ましくは、全身経路は、経口、舌、舌下、筋肉および静脈内の経路から成る群より選択される。より好ましくは、全身経路は、経口経路である。
好ましくは、本発明によるモノテルペンの化粧用使用は、局所に用いられる化粧用製剤の形であってよいし、または経口で用いられる補助食品の形であってよい。
【００３３】
化粧用使用
別の態様において、本発明は、個体の皮膚または粘膜の生体組織修復を増加させるためのモノテルペンの化粧用使用に関する。
【００３４】
好ましくは、本発明は、個体の皮膚または粘膜の生体組織修復を増加させるためのモノテルペンの経口または局所使用に関する。
好ましくは、本発明は、個体の皮膚または粘膜の組織再生を増加させるためのモノテルペンの化粧用使用に関する。
【００３５】
皮膚には、表皮および真皮が含まれる。表皮は、皮膚の最外層である。表皮を構成している細胞の主要タイプは、角化細胞、色素細胞、ランゲルハンス細胞およびメルケル細胞である。真皮は、表皮下の結合組織から成る皮膚層である。
【００３６】
粘膜の例には、口周囲粘膜、頬粘膜、胃および結腸粘膜、生殖器粘膜が含まれる。
本明細書中で用いられる「個体」という用語は、ヒト、愛玩動物、実験動物または生産動物、より好ましくは、鳥または哺乳動物、例えば齧歯類動物、ネコ科、ウマ科、ウシ科、ヤギ、イヌ科、ブタおよび霊長類などの動物である。好ましくは、本発明による個体は、ヒト、ネコまたはイヌである。
【００３７】
「局所に」は、皮膚または粘膜への適用状態を意味する。
もう一つの態様において、本発明は、皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法に関する。
【００３８】
好ましくは、本発明による皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法は、その皮膚または粘膜欠陥上への、モノテルペンを含む化粧用製剤の１回用量または反復用量でのおよび規定の時間間隔での適用を含む。
【００３９】
本発明による皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法の枠内において、投与方式は、例えば、４週間を超えるまたは８週間を超える期間であってよい。
【００４０】
好ましくは、本発明による皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法の枠内において、モノテルペンの用量範囲は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。より好ましくは、その用量範囲は、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。最も好ましくは、用量範囲は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００４１】
好ましくは、個体の皮膚または粘膜の生体組織修復を増加させるモノテルペンの化粧用使用は、パッチ、カプセル剤、丸剤、クリーム剤、ペースト剤（練り歯磨き）、シャンプーおよびダーモソープ（dermo-soap）などの洗剤、泡沫浴または浴用塩類、水性、アルコール性または油性のローション剤、ゲル剤、低オゾンスプレー剤から成る群より選択される形であってよい。
【００４２】
好ましくは、モノテルペンは、リポソーム中に、または遅延作用を可能にするいずれか他の化学的または機械的捕捉システムまたは装置中に閉じ込められている。
本発明によるモノテルペンの化粧用使用は、好ましくは、皮膚または粘膜上への化粧用製剤の適用によって局所に行われる。
【００４３】
化粧用製剤は、モノテルペンの他に、他の活性成分および一つまたはそれを超える化粧用に許容しうる担体を包含してよい。
本明細書中で用いられる「化粧用に許容しうる担体」は、毒性、刺激、過度のアレルギー性応答または他の不都合な反応を伴うことなく、ヒト身体のいろいろな表在部分、例えば、表皮に接触して用いられる担体を意味する。
【００４４】
このような化粧用製剤は、概して、ローション剤、乳剤、クリーム剤、ゲル剤、シャンプーまたはパッチの形である。
当業者は、得られる化粧用製剤のタイプにしたがって、化粧用製剤中で行われる補足成分を特定することができるであろう。
【００４５】
好ましくは、本発明は、皮膚または粘膜欠陥上の皮膚または粘膜組織修復を増加させるためのモノテルペンの使用であって、その欠陥が、好ましくは、座瘡膿疱、セルライテス、瘢痕、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、瘢痕および着色を含めた老化過程による美的でない皮膚欠点、しわおよび落屑性容貌、伸展線、加齢マーク、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、酒さ、および外傷後再発の非審美的状態などの美的でない皮膚欠点から成る群より選択される使用に関する。
【００４６】
薬学的使用
本発明のもう一つの目的は、個体の生体組織傷害を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用に関する。
【００４７】
本発明のもう一つの目的は、生体組織疾患を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用に関する。
好ましくは、この生体組織傷害または疾患は、皮膚傷害または疾患である。
【００４８】
好ましい態様において、この予防または処置は、ヒト、愛玩動物、実験動物または生産動物に関する。より好ましくは、この予防、軽減または処置は、鳥または哺乳動物であって、齧歯類動物、ネコ科、ウマ科、ウシ科、ヤギ、イヌ科、ブタおよび霊長類などの動物から成る群において選択される個体に関する。最も好ましくは、この予防、軽減または処置は、ヒト、ネコまたはイヌに関する。
【００４９】
好ましくは、この医薬組成物は、局所にまたは全身に、より好ましくは、経口で用いられる。
このような医薬組成物は、活性成分としてのモノテルペンと、薬学的に許容しうる担体を含む。
【００５０】
「薬学的に許容しうる」は、動物またはヒトに適宜投与された場合に、有害な、アレルギー性のまたは他の不都合な反応を生じることがない分子物質および組成物を意味する。
本明細書中で用いられる「薬学的に許容しうる担体」には、いずれかおよび全ての溶媒、分散媒質、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。医薬活性物質のためのこのような媒質および物質の使用は、当該技術分野において周知である。いずれかの慣用的な媒質または物質が、本発明によって用いられるモノテルペンと不相溶性である場合を除いて、医薬組成物中、薬剤中、または本発明による個体の生体組織傷害を予防するまたは処置する方法を実行するためのその使用が考えられる。補助的活性成分も、医薬組成物中に包含されることができる。
【００５１】
本発明の文脈中において、「予防するために」、「予防すること」または「予防」という用語は、組織傷害を免れさせることを意味する。
本発明の文脈中において、「処置するために」、「処置すること」または「処置」という用語は、組織傷害を逆転させること、軽減することまたは抑制することを意味する。
【００５２】
本発明の文脈中において、組織疾患は、好ましくは、皮膚疾患であり、そしてそれには、アトピー性皮膚炎、脂漏性角膜炎、後天性表皮水疱症、乾癬、エリテマトーデスにおける皮膚変質、皮膚筋炎、強皮症、慢性座瘡、慢性セルライテス、そう痒、および糖尿病の場合のような異常または欠陥瘢痕形成などの皮膚組織疾患が含まれてよい。
【００５３】
本発明の文脈中において、組織傷害は、好ましくは、皮膚傷害であり、そしてそれには、熱傷、切り傷、過度の寒冷または熱を含めた極端な気象条件の再発、灼熱再発および創傷が含まれてよい。
【００５４】
もう一つの態様において、本発明は、個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法に関する。
好ましくは、本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法は、モノテルペンを含む医薬組成物の１回用量または反復用量でのおよび規定の時間間隔での投与を含む。
【００５５】
本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法の枠内において、投与方式は、全身方式または局所方式、好ましくは、局所方式であってよい。
本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法の枠内において、投与方式は、例えば、６週間未満または８週間未満の期間であってよい。
【００５６】
好ましくは、本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法の枠内において、モノテルペンの用量範囲は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。より好ましくは、その用量範囲は、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。最も好ましくは、用量範囲は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日である。より好ましくは、用量範囲は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日でる。
【００５７】
本発明によるモノテルペンの薬学的使用は、好ましくは、皮膚または粘膜上への医薬製剤の適用によって局所に行われる。
好ましくは、個体の生体組織傷害の予防または処置のためのモノテルペンを含む医薬組成物の使用は、パッチ、カプセル剤、丸剤、軟膏剤および創傷用包帯剤から成る群において選択される形であってよい。
【００５８】
モノテルペン
本発明において用いられるモノテルペンには、リモネン、ゲラニオール、ゲラニルアセテート、イソメントーン（isomenthone）、ペリリルアルコール、ペリラ酸、ジヒドロペリラ酸、これら酸のそれぞれのメチルエステル、カルヴォン、シトラールおよびメントールが含まれる。
【００５９】
本発明の文脈中において、リモネンは、（Ｒ）−（＋）−リモネン、すなわち、Ｄ−リモネンを意味する。
より好ましくは、本発明において用いられるモノテルペンは、リモネン、その代謝産物の一つまたは混合物である。
【００６０】
リモネン代謝産物には、ペリリルアルコール、ペリラ酸、ジヒドロペリラ酸およびそれらのそれぞれのメチルエステルが含まれる。
最も好ましくは、本発明において用いられるモノテルペンは、リモネン、ペリリルアルコールまたはペリラ酸またはその混合物である。
【００６１】
本発明を、以下の図面および実施例によって更に詳しく説明する。
【実施例】
【００６２】
実施例１：ラット結腸炎モデルにおけるリモネンの予防的抗炎症作用
材料および方法
１−被験動物
平均体重１７５〜２００ｇの３０匹の雌ラット Wistar HsdBrlHan ＥＯＰＳ（Ganat, France）を用いた。
【００６３】
２−検定製品
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のリモネン（（Ｒ）−（＋）−リモネン、ＭＷ＝１３６．２３、純度＝９７％）およびイブプロフェン（（Ｓ）−（＋）−イブプロフェン、ＭＷ＝２０６．２８、純度＝１００％）を用いた。リモネンおよびイブプロフェンは、トウモロコシ油中で処置日毎に即席調製した。
【００６４】
３−結腸炎症へのリモネンの予防的抗炎症作用
３０匹のラットを秤量し、印を付け、そして６匹ずつ５群に分けた（ｎ＝６）。
- 「対照」群＝結腸炎症無し、トウモロコシ油で毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ対照」群＝結腸炎症誘発、トウモロコシ油で毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ＋リモネン１０」群＝結腸炎症誘発、リモネンを１０ｍｇ／ｋｇで毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ＋リモネン１００」群＝結腸炎症誘発、リモネンを１００ｍｇ／ｋｇで毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ＋イブプロフェン」群＝結腸炎症誘発、イブプロフェンを５０ｍｇ／ｋｇで毎日経口処置。
【００６５】
３．１−結腸炎症誘発
結腸炎症は、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸溶液（ＴＮＢＳ，Fluka, France）の１回の直腸投与によって誘発した。ＴＮＢＳを、４０°アルコール中に５０ｍｇ／ｋｇの濃度で溶解させた。被験動物の腹腔内に、２ｍｇ／ｋｇの Calmivet（Vetoquinol, Lure, France）および５０ｍｇ／ｋｇのケタミン（Ketamine １０００，Virbac, Carros, France）で麻酔した。０．４ｍｌのＴＮＢＳ溶液を、直腸内投与し、そしてそれらラットを、ＴＮＢＳの放出を免れるために少なくとも３０分間維持した。
【００６６】
３．２−製品投与（表１）
リモネンを、１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇで、結腸炎症誘発前３日間および誘発後５日間、毎日経口投与した。対照として用いられたイブプロフェンは、５０ｍｇ／ｋｇで、結腸炎症誘発前３日間および誘発後５日間、毎日経口投与した。
【００６７】
【表１】
【００６８】
４−統計
クラスカル・ウォリス（Kruskal-Wallis）検定後、可能ならば、マン・ホイットニー検定を用いて、被処置群のいろいろな研究変数を、「対照」群および「ＴＮＢＳ／対照」群との比較によって比較した。有意性閾値は、Ｐ＜０．０５で処理した。
【００６９】
統計は、Statview ５ソフトウェア（SAS, Institute Inc., USA）で行った。
結果
１−被験動物体重推移
図１は、検定中の５種類の群の被験動物の平均体重推移を示す。
【００７０】
クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝０．３８１；Ｐ＝０．９８４）は、処置前のＪ−２において、５種類の処置群のラットの平均体重の間で有意の不均一を示さなかった。
【００７１】
Ｊ１では、直腸内ＴＮＢＳ投与直前および４８時間絶食期間後に（Ｊ−１〜Ｊ１）、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝０．３０８；Ｐ＝０．９８９）は、５種類の処置群のラットの平均体重の間で有意の不均一を示さなかった。
【００７２】
Ｊ６では、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝１４．４１５；Ｐ＝０．００６１）は、５種類の処置群のラットの平均体重の間で有意の不均一を示した。マン・ホイットニーＵ検定は、「ＴＮＢＳ／対照」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット平均体重が、「対照」群のラットの場合より有意に小であることを示した。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット平均体重は、「ＴＮＢＳ／対照」群のラットの場合と有意に異なることはなかった。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット平均体重は、有意に異なることはなかった。
【００７３】
２−結腸肉眼的スコア
図２および表２は、結腸炎症誘発後６日に摘出された５種類の処置群の被験動物の結腸の平均肉眼的スコアを示す。
【００７４】
クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝２１．９２５；Ｐ＝０．０００２）は、５種類の処置群のラット結腸の平均肉眼的スコアの間で有意の不均一を示した。マン・ホイットニーＵ検定は、「ＴＮＢＳ／対照」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均肉眼的スコアが、「対照」群のラットの場合より有意に大であることを示した。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均肉眼的スコアは、「ＴＮＢＳ／対照」群および「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群のラット（それぞれ、ｚ＝２．０３；Ｐ＝０．０４２７およびｚ＝２．４１；Ｐ＝０．０１５９）の場合より有意に小であった。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均肉眼的スコアは、有意に異なることはなかった。
【００７５】
【表２】
【００７６】
３−結腸長さ
図３は、結腸炎症誘発後６日に摘出された５種類の処置群の被験動物の結腸の平均長さを示す。
【００７７】
クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝１５．８２７；Ｐ＝０．００３３）は、５種類の処置群のラット結腸の平均長さの間で有意の不均一を示した。マン・ホイットニーＵ検定は、「ＴＮＢＳ／対照」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均長さが、「対照」群のラットの場合より有意に大であることを示した。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均長さは、「ＴＮＢＳ／対照」群のラットの場合より有意に小であった。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均長さは、有意に異なることはなかった。
【００７８】
４−結腸の組織病理学的分析および顕微鏡的スコア
結腸炎症誘発後６日に摘出された５種類の処置群の被験動物の結腸の組織病理学的分析を、一つの結腸について９画割付で行った。
【００７９】
「対照」群の結腸は、水腫、炎症性浸潤、壊死、上皮萎縮も異形成もない、０の顕微鏡的スコアに該当する正常結腸壁を示した。
「ＴＮＢＳ／対照」群の結腸は、概して、急性化膿壊死性および多病巣性炎症性病変で極端に再生された、４の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
【００８０】
「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群の結腸は、概して、潰瘍性の非特異的結腸炎の軽症多病巣性病変で再生された、２の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群の結腸は、概して、急性化膿壊死性および多病巣性炎症性病変で極端に再生された、４の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
【００８１】
「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群の結腸は、半分は、潰瘍性の非特異的結腸炎の軽症二焦点病変を含む、１の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁、そしてもう半分は、急性化膿壊死性および多病巣性炎症性病変で極端に再生された、４の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
【００８２】
実施例２：マウス慢性皮膚炎症モデルにおけるリモネンおよびペリリルアルコールの予防的抗炎症作用
材料および方法
１−被験動物
平均体重２０〜２５ｇの２４匹の雌マウス無毛Ｓｋｈ−１を用いた。その２４匹のマウスに印を付け、そして６匹ずつ４群に分けた（ｎ＝６）。
【００８３】
- 「対照」群＝皮膚炎症誘発無し、担体で１０日間毎日局所処置；
- 「ＴＰＡ＋対照」群＝皮膚炎症誘発、担体で１０日間毎日局所処置；
- 「ＴＰＡ＋リモネン」群＝皮膚炎症誘発、リモネンを１０ｍｇ／ｋｇ／日で１０日間毎日局所処置；
- 「ＴＰＡ＋ペリリルアルコール」群＝皮膚炎症誘発、ペリリルアルコールを１０ｍｇ／ｋｇ／日で１０日間毎日局所処置。
【００８４】
２−皮膚炎症の誘発
ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＴＰＡ，ＭＷ＝６１６．８３、純度＝少なくとも９８％）は、使用前に、製造者の取扱説明書にしたがって貯蔵した（SIGMA-ALDRICH, Saint-Quentin Fallavier, France）。
【００８５】
１００μｌのＴＰＡ溶液を、０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で、マウスの背部表面上に毎日７日間（Ｊ４〜Ｊ１０）適用した。
３−検定製品および処置条件
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のリモネン（（Ｒ）−（＋）−リモネン、ＭＷ＝１３６．２３、純度＝９７％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【００８６】
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のペリリルアルコール（（Ｓ）−４−イソプロペニル−１−シクロヘキセニルメタノール；（Ｓ）−ｐ−メンタ−１，８−ジエン−７−オール、ＭＷ＝１５２．２３、純度＝９８％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【００８７】
リモネンおよびペリリルアルコールは、トウモロコシ油中で処置日毎に即席調製した。
毎日局所処置は、皮膚炎症誘発前３日（＝Ｊ１）に開始し、そして皮膚炎症誘発後７日（＝Ｊ１０）続けた。Ｊ４〜Ｊ１０に、検定製品を、同じ皮膚部位に、ＴＰＡの適用前３０分に適用した。
【００８８】
４−血清試料採取
マウスを、ケタミン（Ketamine １０００，Virbac, Carros, France）およびキシラジン（Rompun ２％，Bayer Healthcare, Kiel, Allemagne）の混合物（２／３〜１／３ｖｏｌ／ｖｏｌ）の８ｍｌ／ｋｇの用量での腹腔内注射によって麻酔した。最後の処置後、心臓内穿刺を行って血液（１ｍｌ）を得た。血液試料を、＋４℃で２０〜３０分間貯蔵後、１５００ｇで１５分間遠心分離した。血清を取り出し、−２０℃で凍結させ、そして−８０℃で、炎症誘発性サイトカイン投与まで貯蔵した。
【００８９】
５−皮膚試料採取
背部皮膚試料を取り出し、固定し、そしてホルムアルデヒド（Roti（登録商標）-Histofix ４％，Carl Roth, Karlsruhe, Allemagne）中で組織病理学的分析まで貯蔵した。
【００９０】
被験動物は、血液および皮膚の試料採取後、過剰用量の麻酔薬で屠殺した。
６−炎症誘発性サイトカイン投与
炎症誘発性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのレベルを、解凍後の血清試料中において、Mouse 3-plex A panel Bio-Rad キット（Ref. １７１−Ｆ１１０８０，Marnes-la-Coquette, France）によって三重反復試験で同時に測定した。
【００９１】
７−統計
クラスカル・ウォリス検定後、可能ならば、マン・ホイットニー検定を用いて、被処置群のいろいろな研究変数を、「対照」群および「ＴＰＡ＋対照」群との比較によって比較した。有意性閾値は、Ｐ＜０．０５で処理した。
【００９２】
統計は、Statview ５ソフトウェア（SAS, Institute Inc., USA）で行った。
結果
１−被験動物体重推移
図４は、検定中の４種類の群のマウスの平均体重推移を示す。
【００９３】
Ｊ−１〜Ｊ１０に、マウスの平均体重は、異なった群間で有意差を示さなかったが、不均一への傾向を示した（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝６．７３；ｐ＝０．０８１）。
２−皮膚炎症の肉眼的スコア
図５は、皮膚炎症の平均肉眼的スコアを示す。
【００９４】
皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、異なった群間で有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１９．８３；ｐ＝０．０００２）。
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、対照群の場合より有意に大であった（それぞれ、ｚ＝３．００，ｐ＝０．００２７；ｚ＝３．１１，ｐ＝０．００１９；ｚ＝３．１４，ｐ＝０．００１７）。
【００９５】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（それぞれ、ｚ＝２．６２，ｐ＝０．００８９；ｚ＝２．８２，ｐ＝０．００４９）。ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、ＴＰＡ＋リモネン群の場合より有意に小であった（ｚ＝２．０７，ｐ＝０．０３９）。
【００９６】
３−皮膚試料の組織病理学的分析
異なった処置群のマウスから摘出した皮膚試料の組織病理学的分析は、次の結果を示した。
【００９７】
- 対照群：皮膚は標準的であった；
- ＴＰＡ＋対照群：皮膚は、明らかに炎症性であった；表皮潰瘍化を伴い且つしばしば顕著な炎症性浸潤を伴う非特異的炎症性皮膚病変を示した；
- ＴＰＡ＋リモネン群：皮膚は炎症性であった；表皮潰瘍化を伴わないが、多かれ少なかれ顕著な炎症性浸潤を伴う非特異的炎症性皮膚病変を示した；
- ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群：皮膚は、ほとんど炎症性ではなかった；表皮潰瘍化を伴わないが、希に顕著な炎症性を伴う非特異的炎症性皮膚病変を示した。
【００９８】
４−皮膚炎症の顕微鏡的スコア
図６は、異なった処置群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアを示す。
皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、異なった群間で有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１７．４９；ｐ＝０．０００６）。
【００９９】
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝２．９１，ｐ＝０．００３６）。
【０１００】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（それぞれ、ｚ＝２．１０，ｐ＝０．０３６；ｚ＝２．４９，ｐ＝０．０１３）。ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群、およびＴＰＡ＋リモネン群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、有意に異なることはなかった（ｚ＝０．９７，ｐ＝０．３３）。
【０１０１】
５−炎症誘発性サイトカイン投与
５．１．ＩＬ−１β
図７は、異なった処置群のＩＬ−１βの平均血清レベルを示す。
【０１０２】
異なった処置群のＩＬ−１βの平均血清レベルは、有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１５．６２；ｐ＝０．００１４）（表３）。
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−１βの平均血清レベルは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝３．０８，ｐ＝０．００２１）。
【０１０３】
ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−１βの平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小である傾向を示した（ｚ＝１．９２，ｐ＝０．０５５）。
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−１βの平均血清レベルの間には、有意差が示されなかった。
【０１０４】
【表３】
【０１０５】
５．２．ＩＬ−６
図８は、異なった処置群のマウスのＩＬ−６の平均血清レベルを示す。
異なった処置群のＩＬ−６の平均血清レベルは、有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１６．４２；ｐ＝０．０００９）（表４）。
【０１０６】
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−６の平均血清レベルは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝３．０８，ｐ＝０．００２１）。
【０１０７】
ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−６の平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（ｚ＝２．０８，ｐ＝０．０３７）。
ＴＰＡ＋リモネン群のＩＬ−６の平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小である傾向を示した（ｚ＝１．７６，ｐ＝０．０７８）。
【０１０８】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−６の平均血清レベルの間には、有意差が示されなかった。
【０１０９】
【表４】
【０１１０】
５．３．ＴＮＦ−α
図９は、異なった処置群のＴＮＦ−αの平均血清レベルを示す。
異なった処置群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１７．０８；ｐ＝０．０００７）（表５）。
【０１１１】
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝３．０８，ｐ＝０．００２１）。
【０１１２】
ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（ｚ＝２．２４，ｐ＝０．０２５）。
ＴＰＡ＋リモネン群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小である傾向を示した（ｚ＝１．７６，ｐ＝０．０７８）。
【０１１３】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＴＮＦ−αの平均血清レベルの間には、有意差が示されなかった。
【０１１４】
【表５】
【０１１５】
６−結論
皮膚炎症の誘発前に１０ｍｇ／ｋｇ／日で３日間の予防的処置で局所投与されたリモネンおよびペリリルアルコールは、炎症度（肉眼的および顕微鏡的スコア）を減少させることによって、および炎症誘発性サイトカイン分泌（ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α）を減少させることによって、皮膚炎症への有意の作用を示した。
【０１１６】
実施例３：リモネンおよびペリリルアルコールの治癒への作用
材料および方法
１−被験動物
平均体重２０〜２５ｇの６匹の雌マウス無毛Ｓｋｈ−１を用いた。その６匹のマウスに印を付け、そして２匹ずつ３群に分けた。
【０１１７】
- 「対照」群＝各々の側腹部に乱刺、担体で８日間毎日局所処置；
- 「リモネン」群＝各々の側腹部に乱刺、１０ｍｇ／ｋｇ／日のリモネンを８日間毎日局所処置；
- 「ペリリルアルコール」群＝各々の側腹部に乱刺、１０ｍｇ／ｋｇ／日のペリリルアルコールを８日間毎日局所処置。
【０１１８】
２−乱刺
各々のマウスの各々の側腹部に、皮膚の乱刺を施した。
３−検定製品および処置条件
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のリモネン（（Ｒ）−（＋）−リモネン、ＭＷ＝１３６．２３、純度＝９７％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【０１１９】
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のペリリルアルコール（（Ｓ）−４−イソプロペニル−１−シクロヘキセニルメタノール；（Ｓ）−ｐ−メンタ−１，８−ジエン−７−オール、ＭＷ＝１５２．２３、純度＝９８％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【０１２０】
リモネンおよびペリリルアルコールは、トウモロコシ油中で処置日毎に即席調製した。
毎日局所処置は、乱刺前１時間に開始し、そして乱刺後８日続けた。
結果
治癒過程を追跡するために、毎日、観察および写真撮影を行った。
【０１２１】
創傷治癒過程は、ペリリルアルコールのトウモロコシ油溶液の毎日局所適用で、リモネンと比較してより良い結果を、そしてトウモロコシ油単独と比較してはるかに良い結果を与えた。
【０１２２】
乱刺部位、皮膚表面および皮膚表面下にも、治癒のマークはほとんど認められなかった。
【０１２３】
【表６】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体組織修復を増加させるモノテルペンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
組織修復は、組織再生または治癒により、再発（relapse）を伴ってまたは伴うことなく、病変の回復に到達する過程を包含する。
内因性組織再生は、何百万という細胞が、組織リモデリングおよび組織機能復活を絶えず生じている生体の規則的維持である。それは、幹細胞で始まる。生化学的シグナルは、増殖因子およびサイトカインが、再生のための環境を生成した部位へと幹細胞を引き寄せる。
【０００３】
瘢痕組織は、再生された組織とは異なる。傷害が起こった時、身体の最初の反応は、止血であり、その時に、フィブリンおよび炎症性サイトカインは、血餅または暫定的スカフォールドを形成する。より多くの炎症性細胞が現れ、その血餅をリモデリングして瘢痕組織にする。瘢痕組織中のコラーゲンは、異常に整列していて、しかもエラスチンをほとんど有していない。再生された組織とは異なり、瘢痕組織は、それが置き換わる周囲組織とは異なる、すなわち、周囲組織より不完全である。
【０００４】
テルペンは、主として、広範囲の植物、具体的には、針葉樹によって生産されるが、アゲハチョウ（swallowtail butterflies）などの、臭角からテルペンを発するいくつかの昆虫によっても生産される、広範且つ多様なクラスの炭化水素である。それらは、樹脂のおよび樹脂から生産されるテルペンチンの主成分である。「テルペン」という名称は、「テルペンチン」という語に由来する。テルペンが、炭素骨格の酸化または転位などによって化学修飾された場合、得られた化合物は、概して、テルペノイドと称される。幾人かの著者は、テルペンという用語を用いて、全てのテルペノイドを包含するであろう。テルペンおよびテルペノイドは、多くのタイプの植物および花からの精油の主な構成成分である。精油は、食品用の天然フレーバー添加剤として、香水中の芳香剤として、アロマセラピーにおいて、および伝統医学および代替医療において広く用いられている。天然テルペンおよびテルペノイドの合成変種および誘導体も、香水に用いられる芳香および食品添加物に用いられるフレーバーの種類を大きく拡大している。
【０００５】
テルペンは、分子式Ｃ５Ｈ８を有するイソプレンの単位から生合成誘導される。テルペンの基本的な分子式は、その倍数、すなわち、（Ｃ５Ｈ８）ｎであり、ここにおいて、ｎは、連結したイソプレン単位の数である。イソプレン自体は、増成過程を受けることがないが、むしろ、活性形、すなわち、イソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰまたは更に、イソペンテニル二リン酸）およびジメチルアリルピロリン酸（ＤＭＡＰＰまたは更に、ジメチルアリル二リン酸）は、生合成経路中の成分である。イソプレン単位の連鎖が増成されると、得られたテルペンは、サイズによって順に、ヘミテルペン、モノテルペン、セスキテルペン、ジテルペン、セステルテルペン（sesterterpenes）、トリテルペンおよびテトラテルペンとして分類される。
【０００６】
モノテルペンは、２個のイソプレン単位から成り、分子式Ｃ１０Ｈ１６を有する。モノテルペンの例は、ゲラニオールおよびリモネンである。モノテルペンは、単環式、二環式および非環式の形で存在し、そして単純かまたは修飾された炭化水素である。それらは、植物のメバロン酸分枝生合成経路によるアセテートの同化作用から誘導されるイソプレノイド分子のクラスである。
【０００７】
オレンジピール油の主成分および発癌研究中のモノテルペンの原型であるＤ−リモネン（（４Ｒ）−１−メチル−４−イソプロペニルシクロヘキサ−１−エン）は、１０−炭素イソプレン中間体ゲラニルピロリン酸の環化によって形成される。
【０００８】
【化１】
【０００９】
Ｄ−リモネンおよびその誘導代謝産物は、いろいろな前臨床モデルシステムにおいて癌化学療法的および化学的予防法的な効力を有することが分かった。
Crowell PL et al. は、カスタード中の１００ｍｇ／ｋｇのリモネンを摂取した７人の健康なヒト志願者の血液中にリモネンの血漿代謝産物を識別した。オンライン・キャピラリーガスクロマトグラフィー／マススペクトロメトリー分析は、少なくとも５種類の化合物が、摂取後４時間に存在したことを示した。二つのメジャーピークは、ラットのリモネン代謝産物であるジヒドロペリラ酸（dihydroperillic acid）およびペリラ酸（perillic acid）として識別され、そして二つのマイナーピークは、これら酸のそれぞれのメチルエステルであることが判明した（Crowell PL et al., 1994）。
【００１０】
Ｒ−およびＳ−リモネンは、イソプレニル化酵素の弱い阻害剤にすぎないが、それらの主要代謝産物であるペリラ酸およびペリリルアルコールは、低ｍＭ範囲内のＩＣ５０値を有する一層強力な阻害剤である。それら代謝産物は、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼＩ型酵素に対して、ファルネシルトランスフェラーゼよりも大きい活性を有する（Hardcastle IR et al., 1999）。
【００１１】
Ｄ−リモネンは、前臨床研究において顕著な化学療法活性および最小限の毒性を有する。進行癌の患者における毒性、最大許容投与量（ＭＴＤ）および薬物動態を評価するＩ相臨床試験を行った後、乳癌における一定のII相評価を行った。Ｄ−リモネンは、癌患者において、臨床的活性を有することができる用量で十分に許容される（Vigushin DM et al., 1998）。
【００１２】
伝統医学において疾患を治癒させるのに用いられる植物に由来する化合物は、新しい活性薬剤分子の開発に重要な源である。このような戦略を用いて、発明者らは、従来、反復炎症性エピソードによって誘発されるヒト血管内皮細胞の老化を特異的に予防するまたは処置することができる数種類のモノテルペンを識別してきた（ＷＯ２００５／１０５０７４号）。
【００１３】
炎症性応答は、傷害組織の組織修復について最初の生命に必要な機構である。それは、赤血球の損失を妨げる即時イベント；損傷組織を除去し、そして修復を支持するように血管供給を達成する急性応答；および組織修復期を特徴とする。
【００１４】
市場にある抗炎症性分子であるイブプロフェンのような非ステロイド性抗炎症薬は、炎症を遅らせることによって、炎症過程の最終段階、すなわち、組織修復を妨げる。顆粒球の炎症性反応を減少させることが主な作用である抗炎症薬も、治癒抑制傾向を有する（Lee KH et al., 1968）。
【００１５】
切開創傷における破壊強さを減少させる非ステロイド性抗炎症薬は、創傷収縮および上皮化への可変作用を有することが判明した（Rao CM. et al., 1988; Kumar A. et al., 1988）。
【００１６】
イブプロフェンは、修復された伸筋腱の破壊強さ、創傷収縮および上皮化を減少させることが報告された（Dvivedi S. et al., 1997, Kulick MI. et al., 1986; Dong Y-L. et al., 1993）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】ＷＯ２００５／１０５０７４号
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Crowell PL et al.,“Human metabolism of the experimental cancer therapeutic agent d-limonene”, Cancer Chemother Pharmacol. 1994; 35(1): 31-7
【非特許文献２】Hardcastle IR et al.,“Inhibition of protein prenylation by metabolites of limonene”, Biochem Pharmacol. 1999 Apr 1; 57(7): 801-9
【非特許文献３】Vigushin DM et al.,“Phase I and pharmacokinetic study of D-limonene in patients with advanced cancer. Cancer Research Campaign Phase I/II Clinical Trials Committee”, Cancer Chemother Pharmaol. 1998; 42(2): 111-7
【非特許文献４】Lee KH. Studies on the mechanism of action of salicylate. II. Retardation of wound healing by aspirin. Journal of Pharmaceutical Sciences. 1968; 57(6): 1042-1043
【非特許文献５】Rao CM, Kumar A, Kulkarni DR., Effects of enfenamic acid and its zinc salt on wound-heaking. Indian Journal of Physiology and Pharmacology. 1988; 32(1): 61-66
【非特許文献６】Kumar A, Rao M, Kulkarni DR. Zinc incorporation reverses suppressant effect of ibuprofen on wound healing. Indian Journal of Experimental Biology. 1988; 26(6): 483-485
【非特許文献７】Dvivedi S, Tiwari SM, Sharma A. Effect of ibuprofen and diclofenac sodium on experimental wound healing. Indian Journal of Experimental Biology. 1997; 35(11): 1243-1245
【非特許文献８】Kulick MI, Smith S, Hadler K. Oral ibuprofen: evaluation of its effect on peritendinous adhesions and the breaking strength of a tenorrhaphy. Jounal of Hand Surgery. 1986; 11(1): 110-120
【非特許文献９】Dong Y-L, Fleming RYD, Yan TZ, Herndon DN, Waymack JP. Effect of ibuprofen on the inflammatory response to surgical wounds. Journal of Trauma. 1993; 35(3): 340-343
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明者は、ここで、予想外にも、リモネンおよびペリリルアルコールが、以前に本発明者に認められたそれらの抗炎症作用にもかかわらず、生体組織修復を誘発するということを示した（ＷＯ２００５／１０５０７４号）。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
第一に、本発明者は、ここで、予想外にも、ラット結腸炎症モデルにおいて、リモネンの抗炎症作用が、組織修復を妨げないということを認めた。
第二に、本発明者は、リモネンおよびペリリルアルコールが、アトピー性皮膚炎のような慢性皮膚炎症障害に対して有益であるということを示した。
【００２１】
第三に、本発明者は、古典的な治癒モデルにおけるリモネンおよびペリリルアルコールの有益な作用を示した。
組織修復へのリモネンの作用を理解するために、３０匹の Wistar HsdBrlHan 雌ラットを、結腸炎ラットモデルに用いた。結腸炎症は、２，５，６−トリニトロベンゼンスルホン酸溶液（ＴＮＢＳ，Fluka, France）の単回直腸投与によって誘発し、そして経口投与で与えられるリモネンの組織修復への抗炎症作用を研究した。結腸炎症の誘発後６日目に試料採取された結腸の平均の肉眼的スコアおよび顕微鏡的スコアを比較した。それら結果は、リモネンが、その抗炎症作用にもかかわらず、イブプロフェンと比較して、炎症後組織修復を誘発したということを示した。更に、それは、基準分子として用いられたイブプロフェンの濃度より５倍劣る濃度で循環ＴＮＦ−αレベルを低下させた。
【００２２】
慢性皮膚炎症モデルにおいて、本発明者は、更に、皮膚修復および炎症誘発性サイトカインレベルへのリモネンおよびペリリルアルコールの有意の作用を示した。慢性皮膚炎症は、２４匹の雌マウス無毛Ｓｋｈ−１において、ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＴＰＡ）の７日間毎日の背部適用によって誘発した（Stanley P.L., et. al., 1991）。
【００２３】
もう一つの皮膚モデルにおいて、治癒過程へのリモネンおよびペリリルアルコールの影響を、各々の側腹に皮膚の乱刺を施された無毛Ｓｋｈ−１マウスで研究した。トウモロコシ油単独、トウモロコシ油中溶液中のリモネン、またはトウモロコシ油中溶液中のペリリルアルコールを、各々の乱刺部位への局所適用により、１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で８日間毎日投与した。創傷治癒過程は、ペリリルアルコールの毎日適用で、リモネンと比較してより良い結果、および対照と比較してはるかに良い結果を与えた。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、ラット平均体重の進展を示す（平均±ＥＳＭ）。
【図２】図２は、ＴＮＦ−αの平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す（平均±ＥＳＭ）。マン・ホイットニーＵ検定（U Test Mann-Whitney）：＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１（対「対照」）；＃Ｐ＜０．０５（対「ＴＮＢＳ／対照」）。
【図３】図３は、５種類の処置群のラット結腸の平均肉眼的スコアを示す（平均±ＥＳＭ）。マン・ホイットニーＵ検定：＊＊Ｐ＜０．０１（対「対照」）；＃Ｐ＜０．０５および＃＃Ｐ＜０．０１（対「ＴＮＢＳ／対照」）；°Ｐ＜０．０５（対「ＴＮＢＳ／リモネン１００」）。
【図４】図４は、５種類の処置群のラットの平均結腸長さ（ｃｍ）を示す。（平均±ＥＳＭ）マン・ホイットニーＵ検定：＊＊Ｐ＜０．０１（対「対照」）；＃Ｐ＜０．０５（対「ＴＮＢＳ／対照」）。
【図５】図５は、マウス平均体重進展を示す（平均±ＥＳＭ）。
【図６】図６は、４種類の処置群のマウスの皮膚炎症の平均肉眼的スコアを示す。
【図７】図７は、４種類の処置群のマウスの皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアを示す。
【図８】図８は、４種類の処置群のマウスの屠殺前のＩＬ−１βの平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図９】図９は、４種類の処置群のマウスの屠殺前のＩＬ−６の平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図１０】図１０は、４種類の処置群のマウスの屠殺前のＩＦＮ−γの平均血清レベル（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
組織修復を増加させるモノテルペンの使用
したがって、本発明は、生体組織修復を増加させるモノテルペンの使用に関する。
好ましくは、組織修復には、組織再生および治癒が含まれる。
【００２６】
一つの態様において、モノテルペンは、本発明にしたがって用いられて、生体組織再生を増加させる。
好ましくは、モノテルペンは、本発明にしたがって用いられて、in vitro 生体組織再生を増加させる。
【００２７】
本発明の文脈中において、「組織」は、相互連結した細胞の集合を意味する。
本発明の文脈中において、「生体組織」は、ヒトまたは動物起原の組織を意味し、そしてそれには、in vivo 組織および in vitro または ex vivo の培養組織が含まれる。
【００２８】
in vitro または ex vivo の培養組織の例には、線維芽細胞のような培養細胞、および皮膚に見出されるいろいろな細胞タイプを含む in vitro 皮膚モデルが含まれる。
in vivo 生体組織の例には、皮膚および粘膜が含まれる。
【００２９】
一つの態様において、皮膚は、頭皮を意味する。
本発明の文脈中において、「生体組織修復」は、傷害および／または欠陥および／または疾患症状を示している生体組織の組織再生および／または治癒を意味する。
【００３０】
生体組織傷害には、熱傷、切り傷、灼熱再発、創傷、および過度の寒冷または熱を含めた極端な気象条件（weather condition）の再発が含まれる。
生体組織疾患には、アトピー性皮膚炎、脂漏性角膜炎（seborrhoic keratitis）、後天性表皮水疱症（epidermolysis bullosa acquisita）、乾癬、エリテマトーデスにおける皮膚変質、皮膚筋炎、強皮症、慢性座瘡、慢性セルライテス（cellulites）、そう痒、および糖尿病の場合のような異常または欠陥瘢痕形成のような皮膚組織疾患が含まれる。
【００３１】
生体組織欠陥には、座瘡膿疱、セルライテス、瘢痕、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、瘢痕および着色を含めた老化過程による美的でない皮膚欠点、しわおよび落屑性容貌、伸展線、加齢マーク、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、酒さ、および外傷後再発の非審美的状態（unesthetisms）などの皮膚組織欠陥が含まれる。
【００３２】
生体組織修復を増加させる本発明によるモノテルペンの使用は、化粧用であってよいしまたは治療的であってよい。
このような使用のために、そのモノテルペンは、全身経路によってまたは局所経路（topic route）によって投与することができる。好ましくは、全身経路は、経口、舌、舌下、筋肉および静脈内の経路から成る群より選択される。より好ましくは、全身経路は、経口経路である。
好ましくは、本発明によるモノテルペンの化粧用使用は、局所に用いられる化粧用製剤の形であってよいし、または経口で用いられる補助食品の形であってよい。
【００３３】
化粧用使用
別の態様において、本発明は、個体の皮膚または粘膜の生体組織修復を増加させるためのモノテルペンの化粧用使用に関する。
【００３４】
好ましくは、本発明は、個体の皮膚または粘膜の生体組織修復を増加させるためのモノテルペンの経口または局所使用に関する。
好ましくは、本発明は、個体の皮膚または粘膜の組織再生を増加させるためのモノテルペンの化粧用使用に関する。
【００３５】
皮膚には、表皮および真皮が含まれる。表皮は、皮膚の最外層である。表皮を構成している細胞の主要タイプは、角化細胞、色素細胞、ランゲルハンス細胞およびメルケル細胞である。真皮は、表皮下の結合組織から成る皮膚層である。
【００３６】
粘膜の例には、口周囲粘膜、頬粘膜、胃および結腸粘膜、生殖器粘膜が含まれる。
本明細書中で用いられる「個体」という用語は、ヒト、愛玩動物、実験動物または生産動物、より好ましくは、鳥または哺乳動物、例えば齧歯類動物、ネコ科、ウマ科、ウシ科、ヤギ、イヌ科、ブタおよび霊長類などの動物である。好ましくは、本発明による個体は、ヒト、ネコまたはイヌである。
【００３７】
「局所に」は、皮膚または粘膜への適用状態を意味する。
もう一つの態様において、本発明は、皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法に関する。
【００３８】
好ましくは、本発明による皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法は、その皮膚または粘膜欠陥上への、モノテルペンを含む化粧用製剤の１回用量または反復用量でのおよび規定の時間間隔での適用を含む。
【００３９】
本発明による皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法の枠内において、投与方式は、例えば、４週間を超えるまたは８週間を超える期間であってよい。
【００４０】
好ましくは、本発明による皮膚または粘膜欠陥の非病理学的状態を予防するまたは処置する方法の枠内において、モノテルペンの用量範囲は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。より好ましくは、その用量範囲は、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。最も好ましくは、用量範囲は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００４１】
好ましくは、個体の皮膚または粘膜の生体組織修復を増加させるモノテルペンの化粧用使用は、パッチ、カプセル剤、丸剤、クリーム剤、ペースト剤（練り歯磨き）、シャンプーおよびダーモソープ（dermo-soap）などの洗剤、泡沫浴または浴用塩類、水性、アルコール性または油性のローション剤、ゲル剤、低オゾンスプレー剤から成る群より選択される形であってよい。
【００４２】
好ましくは、モノテルペンは、リポソーム中に、または遅延作用を可能にするいずれか他の化学的または機械的捕捉システムまたは装置中に閉じ込められている。
本発明によるモノテルペンの化粧用使用は、好ましくは、皮膚または粘膜上への化粧用製剤の適用によって局所に行われる。
【００４３】
化粧用製剤は、モノテルペンの他に、他の活性成分および一つまたはそれを超える化粧用に許容しうる担体を包含してよい。
本明細書中で用いられる「化粧用に許容しうる担体」は、毒性、刺激、過度のアレルギー性応答または他の不都合な反応を伴うことなく、ヒト身体のいろいろな表在部分、例えば、表皮に接触して用いられる担体を意味する。
【００４４】
このような化粧用製剤は、概して、ローション剤、乳剤、クリーム剤、ゲル剤、シャンプーまたはパッチの形である。
当業者は、得られる化粧用製剤のタイプにしたがって、化粧用製剤中で行われる補足成分を特定することができるであろう。
【００４５】
好ましくは、本発明は、皮膚または粘膜欠陥上の皮膚または粘膜組織修復を増加させるためのモノテルペンの使用であって、その欠陥が、好ましくは、座瘡膿疱、セルライテス、瘢痕、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、瘢痕および着色を含めた老化過程による美的でない皮膚欠点、しわおよび落屑性容貌、伸展線、加齢マーク、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、酒さ、および外傷後再発の非審美的状態などの美的でない皮膚欠点から成る群より選択される使用に関する。
【００４６】
薬学的使用
本発明のもう一つの目的は、個体の生体組織傷害を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用に関する。
【００４７】
本発明のもう一つの目的は、生体組織疾患を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用に関する。
好ましくは、この生体組織傷害または疾患は、皮膚傷害または疾患である。
【００４８】
好ましい態様において、この予防または処置は、ヒト、愛玩動物、実験動物または生産動物に関する。より好ましくは、この予防、軽減または処置は、鳥または哺乳動物であって、齧歯類動物、ネコ科、ウマ科、ウシ科、ヤギ、イヌ科、ブタおよび霊長類などの動物から成る群において選択される個体に関する。最も好ましくは、この予防、軽減または処置は、ヒト、ネコまたはイヌに関する。
【００４９】
好ましくは、この医薬組成物は、局所にまたは全身に、より好ましくは、経口で用いられる。
このような医薬組成物は、活性成分としてのモノテルペンと、薬学的に許容しうる担体を含む。
【００５０】
「薬学的に許容しうる」は、動物またはヒトに適宜投与された場合に、有害な、アレルギー性のまたは他の不都合な反応を生じることがない分子物質および組成物を意味する。
本明細書中で用いられる「薬学的に許容しうる担体」には、いずれかおよび全ての溶媒、分散媒質、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等が含まれる。医薬活性物質のためのこのような媒質および物質の使用は、当該技術分野において周知である。いずれかの慣用的な媒質または物質が、本発明によって用いられるモノテルペンと不相溶性である場合を除いて、医薬組成物中、薬剤中、または本発明による個体の生体組織傷害を予防するまたは処置する方法を実行するためのその使用が考えられる。補助的活性成分も、医薬組成物中に包含されることができる。
【００５１】
本発明の文脈中において、「予防するために」、「予防すること」または「予防」という用語は、組織傷害を免れさせることを意味する。
本発明の文脈中において、「処置するために」、「処置すること」または「処置」という用語は、組織傷害を逆転させること、軽減することまたは抑制することを意味する。
【００５２】
本発明の文脈中において、組織疾患は、好ましくは、皮膚疾患であり、そしてそれには、アトピー性皮膚炎、脂漏性角膜炎、後天性表皮水疱症、乾癬、エリテマトーデスにおける皮膚変質、皮膚筋炎、強皮症、慢性座瘡、慢性セルライテス、そう痒、および糖尿病の場合のような異常または欠陥瘢痕形成などの皮膚組織疾患が含まれてよい。
【００５３】
本発明の文脈中において、組織傷害は、好ましくは、皮膚傷害であり、そしてそれには、熱傷、切り傷、過度の寒冷または熱を含めた極端な気象条件の再発、灼熱再発および創傷が含まれてよい。
【００５４】
もう一つの態様において、本発明は、個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法に関する。
好ましくは、本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法は、モノテルペンを含む医薬組成物の１回用量または反復用量でのおよび規定の時間間隔での投与を含む。
【００５５】
本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法の枠内において、投与方式は、全身方式または局所方式、好ましくは、局所方式であってよい。
本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法の枠内において、投与方式は、例えば、６週間未満または８週間未満の期間であってよい。
【００５６】
好ましくは、本発明による個体の生体組織傷害または疾患を予防するまたは処置する方法の枠内において、モノテルペンの用量範囲は、０．１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日であってよい。より好ましくは、その用量範囲は、１ｍｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日である。最も好ましくは、用量範囲は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日である。より好ましくは、用量範囲は、１０ｍｇ／ｋｇ／日〜５０ｍｇ／ｋｇ／日でる。
【００５７】
本発明によるモノテルペンの薬学的使用は、好ましくは、皮膚または粘膜上への医薬製剤の適用によって局所に行われる。
好ましくは、個体の生体組織傷害の予防または処置のためのモノテルペンを含む医薬組成物の使用は、パッチ、カプセル剤、丸剤、軟膏剤および創傷用包帯剤から成る群において選択される形であってよい。
【００５８】
モノテルペン
本発明において用いられるモノテルペンには、リモネン、ゲラニオール、ゲラニルアセテート、イソメントーン（isomenthone）、ペリリルアルコール、ペリラ酸、ジヒドロペリラ酸、これら酸のそれぞれのメチルエステル、カルヴォン、シトラールおよびメントールが含まれる。
【００５９】
本発明の文脈中において、リモネンは、（Ｒ）−（＋）−リモネン、すなわち、Ｄ−リモネンを意味する。
より好ましくは、本発明において用いられるモノテルペンは、リモネン、その代謝産物の一つまたは混合物である。
【００６０】
リモネン代謝産物には、ペリリルアルコール、ペリラ酸、ジヒドロペリラ酸およびそれらのそれぞれのメチルエステルが含まれる。
最も好ましくは、本発明において用いられるモノテルペンは、リモネン、ペリリルアルコールまたはペリラ酸またはその混合物である。
【００６１】
本発明を、以下の図面および実施例によって更に詳しく説明する。
【実施例】
【００６２】
実施例１：ラット結腸炎モデルにおけるリモネンの予防的抗炎症作用
材料および方法
１−被験動物
平均体重１７５〜２００ｇの３０匹の雌ラット Wistar HsdBrlHan ＥＯＰＳ（Ganat, France）を用いた。
【００６３】
２−検定製品
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のリモネン（（Ｒ）−（＋）−リモネン、ＭＷ＝１３６．２３、純度＝９７％）およびイブプロフェン（（Ｓ）−（＋）−イブプロフェン、ＭＷ＝２０６．２８、純度＝１００％）を用いた。リモネンおよびイブプロフェンは、トウモロコシ油中で処置日毎に即席調製した。
【００６４】
３−結腸炎症へのリモネンの予防的抗炎症作用
３０匹のラットを秤量し、印を付け、そして６匹ずつ５群に分けた（ｎ＝６）。
- 「対照」群＝結腸炎症無し、トウモロコシ油で毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ対照」群＝結腸炎症誘発、トウモロコシ油で毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ＋リモネン１０」群＝結腸炎症誘発、リモネンを１０ｍｇ／ｋｇで毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ＋リモネン１００」群＝結腸炎症誘発、リモネンを１００ｍｇ／ｋｇで毎日経口処置；
- 「ＴＮＢＳ＋イブプロフェン」群＝結腸炎症誘発、イブプロフェンを５０ｍｇ／ｋｇで毎日経口処置。
【００６５】
３．１−結腸炎症誘発
結腸炎症は、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸溶液（ＴＮＢＳ，Fluka, France）の１回の直腸投与によって誘発した。ＴＮＢＳを、４０°アルコール中に５０ｍｇ／ｋｇの濃度で溶解させた。被験動物の腹腔内に、２ｍｇ／ｋｇの Calmivet（Vetoquinol, Lure, France）および５０ｍｇ／ｋｇのケタミン（Ketamine １０００，Virbac, Carros, France）で麻酔した。０．４ｍｌのＴＮＢＳ溶液を、直腸内投与し、そしてそれらラットを、ＴＮＢＳの放出を免れるために少なくとも３０分間維持した。
【００６６】
３．２−製品投与（表１）
リモネンを、１０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇで、結腸炎症誘発前３日間および誘発後５日間、毎日経口投与した。対照として用いられたイブプロフェンは、５０ｍｇ／ｋｇで、結腸炎症誘発前３日間および誘発後５日間、毎日経口投与した。
【００６７】
【表１】
【００６８】
４−統計
クラスカル・ウォリス（Kruskal-Wallis）検定後、可能ならば、マン・ホイットニー検定を用いて、被処置群のいろいろな研究変数を、「対照」群および「ＴＮＢＳ／対照」群との比較によって比較した。有意性閾値は、Ｐ＜０．０５で処理した。
【００６９】
統計は、Statview ５ソフトウェア（SAS, Institute Inc., USA）で行った。
結果
１−被験動物体重推移
図１は、検定中の５種類の群の被験動物の平均体重推移を示す。
【００７０】
クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝０．３８１；Ｐ＝０．９８４）は、処置前のＪ−２において、５種類の処置群のラットの平均体重の間で有意の不均一を示さなかった。
【００７１】
Ｊ１では、直腸内ＴＮＢＳ投与直前および４８時間絶食期間後に（Ｊ−１〜Ｊ１）、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝０．３０８；Ｐ＝０．９８９）は、５種類の処置群のラットの平均体重の間で有意の不均一を示さなかった。
【００７２】
Ｊ６では、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝１４．４１５；Ｐ＝０．００６１）は、５種類の処置群のラットの平均体重の間で有意の不均一を示した。マン・ホイットニーＵ検定は、「ＴＮＢＳ／対照」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット平均体重が、「対照」群のラットの場合より有意に小であることを示した。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット平均体重は、「ＴＮＢＳ／対照」群のラットの場合と有意に異なることはなかった。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット平均体重は、有意に異なることはなかった。
【００７３】
２−結腸肉眼的スコア
図２および表２は、結腸炎症誘発後６日に摘出された５種類の処置群の被験動物の結腸の平均肉眼的スコアを示す。
【００７４】
クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝２１．９２５；Ｐ＝０．０００２）は、５種類の処置群のラット結腸の平均肉眼的スコアの間で有意の不均一を示した。マン・ホイットニーＵ検定は、「ＴＮＢＳ／対照」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均肉眼的スコアが、「対照」群のラットの場合より有意に大であることを示した。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均肉眼的スコアは、「ＴＮＢＳ／対照」群および「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群のラット（それぞれ、ｚ＝２．０３；Ｐ＝０．０４２７およびｚ＝２．４１；Ｐ＝０．０１５９）の場合より有意に小であった。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均肉眼的スコアは、有意に異なることはなかった。
【００７５】
【表２】
【００７６】
３−結腸長さ
図３は、結腸炎症誘発後６日に摘出された５種類の処置群の被験動物の結腸の平均長さを示す。
【００７７】
クラスカル・ウォリス検定（Ｈ（ｄｄｌ＝４）＝１５．８２７；Ｐ＝０．００３３）は、５種類の処置群のラット結腸の平均長さの間で有意の不均一を示した。マン・ホイットニーＵ検定は、「ＴＮＢＳ／対照」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均長さが、「対照」群のラットの場合より有意に大であることを示した。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均長さは、「ＴＮＢＳ／対照」群のラットの場合より有意に小であった。「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群、「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群および「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群のラット結腸の平均長さは、有意に異なることはなかった。
【００７８】
４−結腸の組織病理学的分析および顕微鏡的スコア
結腸炎症誘発後６日に摘出された５種類の処置群の被験動物の結腸の組織病理学的分析を、一つの結腸について９画割付で行った。
【００７９】
「対照」群の結腸は、水腫、炎症性浸潤、壊死、上皮萎縮も異形成もない、０の顕微鏡的スコアに該当する正常結腸壁を示した。
「ＴＮＢＳ／対照」群の結腸は、概して、急性化膿壊死性および多病巣性炎症性病変で極端に再生された、４の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
【００８０】
「ＴＮＢＳ／リモネン１０」群の結腸は、概して、潰瘍性の非特異的結腸炎の軽症多病巣性病変で再生された、２の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
「ＴＮＢＳ／リモネン１００」群の結腸は、概して、急性化膿壊死性および多病巣性炎症性病変で極端に再生された、４の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
【００８１】
「ＴＮＢＳ／イブプロフェン」群の結腸は、半分は、潰瘍性の非特異的結腸炎の軽症二焦点病変を含む、１の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁、そしてもう半分は、急性化膿壊死性および多病巣性炎症性病変で極端に再生された、４の顕微鏡的スコアに該当する結腸壁を示した。
【００８２】
実施例２：マウス慢性皮膚炎症モデルにおけるリモネンおよびペリリルアルコールの予防的抗炎症作用
材料および方法
１−被験動物
平均体重２０〜２５ｇの２４匹の雌マウス無毛Ｓｋｈ−１を用いた。その２４匹のマウスに印を付け、そして６匹ずつ４群に分けた（ｎ＝６）。
【００８３】
- 「対照」群＝皮膚炎症誘発無し、担体で１０日間毎日局所処置；
- 「ＴＰＡ＋対照」群＝皮膚炎症誘発、担体で１０日間毎日局所処置；
- 「ＴＰＡ＋リモネン」群＝皮膚炎症誘発、リモネンを１０ｍｇ／ｋｇ／日で１０日間毎日局所処置；
- 「ＴＰＡ＋ペリリルアルコール」群＝皮膚炎症誘発、ペリリルアルコールを１０ｍｇ／ｋｇ／日で１０日間毎日局所処置。
【００８４】
２−皮膚炎症の誘発
ホルボール１２−ミリステート−１３−アセテート（ＴＰＡ，ＭＷ＝６１６．８３、純度＝少なくとも９８％）は、使用前に、製造者の取扱説明書にしたがって貯蔵した（SIGMA-ALDRICH, Saint-Quentin Fallavier, France）。
【００８５】
１００μｌのＴＰＡ溶液を、０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で、マウスの背部表面上に毎日７日間（Ｊ４〜Ｊ１０）適用した。
３−検定製品および処置条件
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のリモネン（（Ｒ）−（＋）−リモネン、ＭＷ＝１３６．２３、純度＝９７％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【００８６】
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のペリリルアルコール（（Ｓ）−４−イソプロペニル−１−シクロヘキセニルメタノール；（Ｓ）−ｐ−メンタ−１，８−ジエン−７−オール、ＭＷ＝１５２．２３、純度＝９８％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【００８７】
リモネンおよびペリリルアルコールは、トウモロコシ油中で処置日毎に即席調製した。
毎日局所処置は、皮膚炎症誘発前３日（＝Ｊ１）に開始し、そして皮膚炎症誘発後７日（＝Ｊ１０）続けた。Ｊ４〜Ｊ１０に、検定製品を、同じ皮膚部位に、ＴＰＡの適用前３０分に適用した。
【００８８】
４−血清試料採取
マウスを、ケタミン（Ketamine １０００，Virbac, Carros, France）およびキシラジン（Rompun ２％，Bayer Healthcare, Kiel, Allemagne）の混合物（２／３〜１／３ｖｏｌ／ｖｏｌ）の８ｍｌ／ｋｇの用量での腹腔内注射によって麻酔した。最後の処置後、心臓内穿刺を行って血液（１ｍｌ）を得た。血液試料を、＋４℃で２０〜３０分間貯蔵後、１５００ｇで１５分間遠心分離した。血清を取り出し、−２０℃で凍結させ、そして−８０℃で、炎症誘発性サイトカイン投与まで貯蔵した。
【００８９】
５−皮膚試料採取
背部皮膚試料を取り出し、固定し、そしてホルムアルデヒド（Roti（登録商標）-Histofix ４％，Carl Roth, Karlsruhe, Allemagne）中で組織病理学的分析まで貯蔵した。
【００９０】
被験動物は、血液および皮膚の試料採取後、過剰用量の麻酔薬で屠殺した。
６−炎症誘発性サイトカイン投与
炎症誘発性サイトカインＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αのレベルを、解凍後の血清試料中において、Mouse 3-plex A panel Bio-Rad キット（Ref. １７１−Ｆ１１０８０，Marnes-la-Coquette, France）によって三重反復試験で同時に測定した。
【００９１】
７−統計
クラスカル・ウォリス検定後、可能ならば、マン・ホイットニー検定を用いて、被処置群のいろいろな研究変数を、「対照」群および「ＴＰＡ＋対照」群との比較によって比較した。有意性閾値は、Ｐ＜０．０５で処理した。
【００９２】
統計は、Statview ５ソフトウェア（SAS, Institute Inc., USA）で行った。
結果
１−被験動物体重推移
図４は、検定中の４種類の群のマウスの平均体重推移を示す。
【００９３】
Ｊ−１〜Ｊ１０に、マウスの平均体重は、異なった群間で有意差を示さなかったが、不均一への傾向を示した（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝６．７３；ｐ＝０．０８１）。
２−皮膚炎症の肉眼的スコア
図５は、皮膚炎症の平均肉眼的スコアを示す。
【００９４】
皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、異なった群間で有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１９．８３；ｐ＝０．０００２）。
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、対照群の場合より有意に大であった（それぞれ、ｚ＝３．００，ｐ＝０．００２７；ｚ＝３．１１，ｐ＝０．００１９；ｚ＝３．１４，ｐ＝０．００１７）。
【００９５】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（それぞれ、ｚ＝２．６２，ｐ＝０．００８９；ｚ＝２．８２，ｐ＝０．００４９）。ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均肉眼的スコアは、ＴＰＡ＋リモネン群の場合より有意に小であった（ｚ＝２．０７，ｐ＝０．０３９）。
【００９６】
３−皮膚試料の組織病理学的分析
異なった処置群のマウスから摘出した皮膚試料の組織病理学的分析は、次の結果を示した。
【００９７】
- 対照群：皮膚は標準的であった；
- ＴＰＡ＋対照群：皮膚は、明らかに炎症性であった；表皮潰瘍化を伴い且つしばしば顕著な炎症性浸潤を伴う非特異的炎症性皮膚病変を示した；
- ＴＰＡ＋リモネン群：皮膚は炎症性であった；表皮潰瘍化を伴わないが、多かれ少なかれ顕著な炎症性浸潤を伴う非特異的炎症性皮膚病変を示した；
- ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群：皮膚は、ほとんど炎症性ではなかった；表皮潰瘍化を伴わないが、希に顕著な炎症性を伴う非特異的炎症性皮膚病変を示した。
【００９８】
４−皮膚炎症の顕微鏡的スコア
図６は、異なった処置群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアを示す。
皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、異なった群間で有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１７．４９；ｐ＝０．０００６）。
【００９９】
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝２．９１，ｐ＝０．００３６）。
【０１００】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（それぞれ、ｚ＝２．１０，ｐ＝０．０３６；ｚ＝２．４９，ｐ＝０．０１３）。ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群、およびＴＰＡ＋リモネン群の皮膚炎症の平均顕微鏡的スコアは、有意に異なることはなかった（ｚ＝０．９７，ｐ＝０．３３）。
【０１０１】
５−炎症誘発性サイトカイン投与
５．１．ＩＬ−１β
図７は、異なった処置群のＩＬ−１βの平均血清レベルを示す。
【０１０２】
異なった処置群のＩＬ−１βの平均血清レベルは、有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１５．６２；ｐ＝０．００１４）（表３）。
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−１βの平均血清レベルは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝３．０８，ｐ＝０．００２１）。
【０１０３】
ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−１βの平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小である傾向を示した（ｚ＝１．９２，ｐ＝０．０５５）。
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−１βの平均血清レベルの間には、有意差が示されなかった。
【０１０４】
【表３】
【０１０５】
５．２．ＩＬ−６
図８は、異なった処置群のマウスのＩＬ−６の平均血清レベルを示す。
異なった処置群のＩＬ−６の平均血清レベルは、有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１６．４２；ｐ＝０．０００９）（表４）。
【０１０６】
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−６の平均血清レベルは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝３．０８，ｐ＝０．００２１）。
【０１０７】
ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−６の平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（ｚ＝２．０８，ｐ＝０．０３７）。
ＴＰＡ＋リモネン群のＩＬ−６の平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小である傾向を示した（ｚ＝１．７６，ｐ＝０．０７８）。
【０１０８】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＩＬ−６の平均血清レベルの間には、有意差が示されなかった。
【０１０９】
【表４】
【０１１０】
５．３．ＴＮＦ−α
図９は、異なった処置群のＴＮＦ−αの平均血清レベルを示す。
異なった処置群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、有意に異なった（Ｈ（ｄｄｌ＝３）＝１７．０８；ｐ＝０．０００７）（表５）。
【０１１１】
ＴＰＡ＋対照群、ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、対照群の場合より有意に大であった（いずれの場合もｚ＝３．０８，ｐ＝０．００２１）。
【０１１２】
ＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小であった（ｚ＝２．２４，ｐ＝０．０２５）。
ＴＰＡ＋リモネン群のＴＮＦ−αの平均血清レベルは、ＴＰＡ＋対照群の場合より有意に小である傾向を示した（ｚ＝１．７６，ｐ＝０．０７８）。
【０１１３】
ＴＰＡ＋リモネン群、およびＴＰＡ＋ペリリルアルコール群のＴＮＦ−αの平均血清レベルの間には、有意差が示されなかった。
【０１１４】
【表５】
【０１１５】
６−結論
皮膚炎症の誘発前に１０ｍｇ／ｋｇ／日で３日間の予防的処置で局所投与されたリモネンおよびペリリルアルコールは、炎症度（肉眼的および顕微鏡的スコア）を減少させることによって、および炎症誘発性サイトカイン分泌（ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α）を減少させることによって、皮膚炎症への有意の作用を示した。
【０１１６】
実施例３：リモネンおよびペリリルアルコールの治癒への作用
材料および方法
１−被験動物
平均体重２０〜２５ｇの６匹の雌マウス無毛Ｓｋｈ−１を用いた。その６匹のマウスに印を付け、そして２匹ずつ３群に分けた。
【０１１７】
- 「対照」群＝各々の側腹部に乱刺、担体で８日間毎日局所処置；
- 「リモネン」群＝各々の側腹部に乱刺、１０ｍｇ／ｋｇ／日のリモネンを８日間毎日局所処置；
- 「ペリリルアルコール」群＝各々の側腹部に乱刺、１０ｍｇ／ｋｇ／日のペリリルアルコールを８日間毎日局所処置。
【０１１８】
２−乱刺
各々のマウスの各々の側腹部に、皮膚の乱刺を施した。
３−検定製品および処置条件
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のリモネン（（Ｒ）−（＋）−リモネン、ＭＷ＝１３６．２３、純度＝９７％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【０１１９】
ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ（Saint-Quentin Fallavier, France）製のペリリルアルコール（（Ｓ）−４−イソプロペニル−１−シクロヘキセニルメタノール；（Ｓ）−ｐ−メンタ−１，８−ジエン−７−オール、ＭＷ＝１５２．２３、純度＝９８％）を、ＳＩＧＭＡ−ＦＬＵＫＡ取扱説明書にしたがって用い且つ貯蔵した。
【０１２０】
リモネンおよびペリリルアルコールは、トウモロコシ油中で処置日毎に即席調製した。
毎日局所処置は、乱刺前１時間に開始し、そして乱刺後８日続けた。
結果
治癒過程を追跡するために、毎日、観察および写真撮影を行った。
【０１２１】
創傷治癒過程は、ペリリルアルコールのトウモロコシ油溶液の毎日局所適用で、リモネンと比較してより良い結果を、そしてトウモロコシ油単独と比較してはるかに良い結果を与えた。
【０１２２】
乱刺部位、皮膚表面および皮膚表面下にも、治癒のマークはほとんど認められなかった。
【０１２３】
【表６】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
in vitro または ex vivo で培養された組織の生体組織修復を増加させるためのモノテルペンの使用。
【請求項２】
個体の皮膚または粘膜の組織修復を増加させるためのモノテルペンの化粧用使用。
【請求項３】
皮膚欠陥修復を増加させるための、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記皮膚欠陥が、座瘡膿疱、蜂巣炎（cellulitis）、瘢痕、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、瘢痕および着色を含めた老化過程による美的でない皮膚欠点、しわおよび落屑性容貌、伸展裂創、加齢マーク（aging marks）、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、酒さ、および外傷後再発（relapse）の非審美的状態（unesthetisms）から成る群より選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
生体組織再生を増加させるための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
個体の生体組織傷害を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用。
【請求項７】
前記組織傷害が、熱傷、切り傷、過度の寒冷または熱を含めた極端な気象条件（weather condition）の再発、灼熱再発および創傷から成る群において選択される、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
個体の皮膚疾患を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用。
【請求項９】
前記組織疾患が、アトピー性皮膚炎、脂漏性角膜炎（seborrhoic keratitis）、後天性表皮水疱症（epidermolysis bullosa acquisita）、乾癬、エリテマトーデスにおける皮膚変質、皮膚筋炎、強皮症、慢性座瘡、慢性セルライテス（cellulites）、そう痒、および糖尿病における異常または欠陥瘢痕形成から成る群より選択される皮膚疾患である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記医薬組成物が、局所適用用である、請求項６〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記個体が、ヒトである、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記モノテルペンが、リモネン、ゲラニオール、ゲラニルアセテート、イソメントーン（isomenthone）、ペリリルアルコール、ペリラ酸（perillic acid）、ジヒドロペリラ酸（dihydroperillic acid）、これら酸のそれぞれのメチルエステル、カルヴォン、シトラールおよびメントールから成る群より選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記モノテルペンが、リモネンまたはペリラ酸またはペリリルアルコールまたはその混合物である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１】
in vitro または ex vivo で培養された組織の生体組織修復を増加させるためのモノテルペンの使用。
【請求項２】
個体の皮膚または粘膜の組織修復を増加させるためのモノテルペンの化粧用使用。
【請求項３】
皮膚欠陥修復を増加させるための、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記皮膚欠陥が、座瘡膿疱、蜂巣炎（cellulitis）、瘢痕、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、瘢痕および着色を含めた老化過程による美的でない皮膚欠点、しわおよび落屑性容貌、伸展裂創、加齢マーク（aging marks）、日光およびＵＶで誘発される早期皮膚老化、酒さ、および外傷後再発（relapse）の非審美的状態（unesthetisms）から成る群より選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
生体組織再生を増加させるための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
個体の生体組織傷害を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用。
【請求項７】
前記組織傷害が、熱傷、切り傷、過度の寒冷または熱を含めた極端な気象条件（weather condition）の再発、灼熱再発および創傷から成る群において選択される、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
個体の皮膚疾患を予防するまたは処置することを予定した医薬組成物の製造のためのモノテルペンの使用。
【請求項９】
前記組織疾患が、アトピー性皮膚炎、脂漏性角膜炎（seborrhoic keratitis）、後天性表皮水疱症（epidermolysis bullosa acquisita）、乾癬、エリテマトーデスにおける皮膚変質、皮膚筋炎、強皮症、慢性座瘡、慢性セルライテス（cellulites）、そう痒、および糖尿病における異常または欠陥瘢痕形成から成る群より選択される皮膚疾患である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記医薬組成物が、局所適用用である、請求項６〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記個体が、ヒトである、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記モノテルペンが、リモネン、ゲラニオール、ゲラニルアセテート、イソメントーン（isomenthone）、ペリリルアルコール、ペリラ酸（perillic acid）、ジヒドロペリラ酸（dihydroperillic acid）、これら酸のそれぞれのメチルエステル、カルヴォン、シトラールおよびメントールから成る群より選択される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記モノテルペンが、リモネンまたはペリラ酸またはペリリルアルコールまたはその混合物である、請求項１２に記載の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２０１０−５４０４９７（Ｐ２０１０−５４０４９７Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２６３０９（Ｐ２０１０−５２６３０９）
【出願日】平成２０年９月２６日（２００８．９．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６２９３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０４０４２０
【国際公開日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【出願人】（５１００８３０３８）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月２６日（２００８．９．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６２９３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０４０４２０
【国際公開日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【出願人】（５１００８３０３８）
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]