肝細胞増殖因子産生促進剤
【課題】高いＨＧＦ産生促進効果を有する肝細胞増殖因子産生促進剤を提供する。
【解決手段】蒲公英から得られる抽出物を有効成分とする肝細胞増殖因子産生促進剤である。下記一般式
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とする肝細胞増殖因子産生促進剤である。血小板由来成長因子もしくは血小板由来成長因子様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強することが好ましい。
【解決手段】蒲公英から得られる抽出物を有効成分とする肝細胞増殖因子産生促進剤である。下記一般式
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とする肝細胞増殖因子産生促進剤である。血小板由来成長因子もしくは血小板由来成長因子様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強することが好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝細胞増殖因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、以下、「ＨＧＦ」とも称す）産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
蒲公英（以下、「ホコウエイ」とも記す）は、キク科のモウコタンポポ（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ）等の各種 Ｔａｒａｘａｃｕｍ 属植物の根つき全草であり、特許文献１には、ホコウエイを有効成分とする５α−リダクターゼ阻害剤が開示されている。
【０００３】
一方、ＨＧＦは、当初肝細胞に対する最も強力な増殖促進因子として同定されていたが、腎尿細管や気管支上皮、ケラチノサイトなど様々な上皮系細胞に対しても増殖促進因子（ｍｉｔｏｇｅｎ）として機能することが知られている（非特許文献１）。また、最近では、血管内皮細胞や軟骨細胞、造血幹細胞などの間葉系細胞の増殖を促進させることも明らかにされている（非特許文献１）。さらに、毛髪の成長期移行シグナルであるＳＴＡＴ３（Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）は、ＨＧＦにより活性化されることが知られている（非特許文献２）。
【０００４】
そのため、肌荒れの改善や育毛効果を目的として、ＨＧＦ産生促進剤を化粧品、育毛剤等の外用剤に配合することが提案されている。例えば、特許文献２には、ＨＧＦ産生促進剤として米抽出物を配合した化粧品が開示されている。
【０００５】
また、特許文献３には、キク科の植物由来の成長因子産生増強物質を有効成分として含有している成長因子産生増強用組成物が、開示されている。さらに、特許文献４には、セイヨウタンポポから得られた抽出物を含有する繊維芽細胞増殖促進剤が、開示されている。
【特許文献１】特開２０００−９５６４８号公報
【特許文献２】特開２００４−９９５０３号公報
【特許文献３】国際公開第２００１／０７６６１４号パンフレット
【特許文献４】特開平１０−３６２７９号公報
【非特許文献１】実験医学，Ｖｏｌ．１５ Ｎｏ．９ ｐ７８（１９９７）
【非特許文献２】フレグランスジャーナル， Ｎｏ．１２ ｐ１３（２００７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献２に記載の方法では、十分なＨＧＦ産生促進効果が得られず、よりＨＧＦ産生促進効果の高いＨＧＦ産生促進剤が求められている。また、米抽出物を配合しているためアレルギーを発症する場合もあり、より安全性の高いＨＧＦ産生促進剤が求められている。
【０００７】
さらに、特許文献１は、ホコウエイに関して５α−リダクターゼ阻害効果については開示されているものの、ＨＧＦ産生促進効果については考慮されていない。さらにまた、特許文献３は、キク科の植物としてタンポポが記載されているものの、キク科のヨモギ中のクロロゲン酸等の成分について注目したものであり、Ｔａｒａｘａｃｕｍ 属に属するホコウエイに関しては開示されておらず、その効果については不明である。また、特許文献４には、セイヨウタンポポの繊維芽細胞増殖促進効果については記載があるものの、ホコウエイのＨＧＦ産生促進効果については不明である。
【０００８】
そこで、本発明の目的は、高いＨＧＦ産生促進効果を有するＨＧＦ産生促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、キク科の特定の抽出物に高いＨＧＦ産生促進効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ホコウエイから得られる抽出物（以下、「ホコウエイ抽出物」とも称す）を有効成分とすることを特徴とするものである。
【００１１】
また、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、前記抽出物を酢酸エチル／水で分配処理し、得られた水可溶画分をｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水可溶画分であることが好ましく、前記抽出物が、前記ｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水可溶画分を、樹脂吸着クロマトグラフィーにかけ得られたメタノール溶出画分であることが好ましい。
【００１２】
さらに、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、下記一般式（１）、
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とすることを特徴とするものである。
【００１３】
さらにまた、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、血小板由来成長因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、以下、「ＰＤＧＦ」とも称す）もしくはＰＤＧＦ様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強することが好ましい。ここで言うＰＤＧＦ様作用物質とは、ＰＤＧＦのレセプターに結合して、ＰＤＧＦと同様の作用を細胞に起こす物質のことである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、高いＨＧＦ産生促進効果を有するＨＧＦ産生促進剤を提供することが可能である。また、本発明は、細胞等に直接作用しＨＧＦ産生促進効果を発揮するとともに、ＰＤＧＦもしくはＰＤＧＦ様作用物質の存在下でＨＧＦ産生誘導能を増強する効果を有するものである。さらに、本発明により、十分なＨＧＦ産生促進効果を発揮し、上皮細胞を増殖し、傷ついた上皮組織の再生を促進することができる。よって、ＨＧＦの形態形成誘導作用や血管新生作用により血管、皮膚や胃腸などの創傷治癒の効果を期待できる。また、肝炎などの肝障害、腎炎などの腎障害、肺炎などの肺障害などの各種炎症に対して著しい防止作用の効果を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明の好適実施形態につき具体的に説明する。
本発明においては、ホコウエイは、キク科のモウコタンポポ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ等の各種 Ｔａｒａｘａｃｕｍ 属植物の根つき全草のことを指し、セイヨウタンポポ、モウコタンポポ等が例示される。これらの中でも植物としてはモウコタンポポが好ましく、使用する部位としては根が好ましい。また、本発明で用いるホコウエイ抽出物とは、かかる全草等を乾燥し又は乾燥することなく粉砕した後、常温又は加温下に、溶剤により抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液、あるいはその乾燥末を意味するものである。
【００１６】
ここで、ホコウエイの抽出に使用される溶媒は特に限定されず、例えば、水、メチルアルコール、エチルアルコール等の低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステル、ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素、ジエチルエーテル、アセトン等の公知の溶媒が挙げられ、これらの溶媒は、１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの中でもエタノール水溶液が好ましく、７０％エタノール水溶液が特に好ましい。なお、ホコウエイの抽出は常法で行ない、得られたホコウエイ抽出物はそのまま用いてもよいが、さらに必要により濃縮、濾過等の処理したものを用いることができる。
【００１７】
本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ホコウエイ抽出物を有効成分とするものであり、優れたＨＧＦ産生促進効果を有し、かつ安全性も高いので、剤型としては錠剤、カプセル剤、散剤、内服液、細粒剤、顆粒剤等の経口投与剤の形態となすことができ、また、適当な基剤、薬剤などと混合した皮膚外用剤や頭髪化粧料等の外用形態とすることができる。具体的には、ローション、乳液、軟膏、クリーム、ジェル、オイル、パック、シャンプー、リンス、トリートメント、ヘアートニック、ヘアーリキッド等の形態を採ることができる。さらに上記のような外用剤の他にも、例えば、石鹸、入浴剤といったものに配合して用いてもよい。
【００１８】
また、本発明において、ホコウエイ抽出物を処理したものとしては、例えば、ホコウエイの根からの抽出物を酢酸エチル／水で分配処理し、処理して得られた水可溶画分をｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水可溶画分（以下、「水画分」と称す）があり、さらに、ｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水画分を、樹脂吸着クロマトグラフィーにかけ得られたメタノール溶出画分（以下、「メタノール画分」）等が挙げられる。
【００１９】
さらに、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、下記一般式（１）、
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とするものである。ここで、Ｒ１〜Ｒ６で表される炭素数１〜３のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。
【００２０】
上記一般式（１）の化合物は、植物からの抽出、単離、または既知の方法による合成により得ることができる。特に、上記の方法によりホコウエイの根からホコウエイ根抽出物を得た後、単離することにより、好適に得ることができる。単離方法は特に制限されるものではないが、液−液分配、各種クロマトグラフィー、再結晶化などの手法により好適に単離することができる。
【００２１】
また、本発明において、上記一般式中のＲ１〜Ｒ６が水素原子で、Ｘ１およびＸ２がビニレン基である下記式、
で表されるチコリ酸（ｃｈｉｃｏｒｉｃ ａｃｉｄ）であることが好ましい。チコリ酸は、ホコウエイ抽出物から定法により単離することもできるし、ＳＹＮＴＨＥＴＩＣ ＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＳ， ２８（４）， ７３７（１９９８）記載の方法等により合成することもできる。
【００２２】
本発明において、ホコウエイ抽出物の配合量は、添加形態および投与形態によっても異なるが、外用剤の場合には、全組成物中０．０００１〜９０質量％配合することが好ましく、０．００１〜５０質量％配合することがより好ましく、０．００１〜１０質量％配合することがさらにより好ましい。また、経口投与剤の場合には、成人１日あたり０．００１〜１００ｇになるようにするのが好ましい。
【００２３】
また、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ＰＤＧＦもしくはＰＤＧＦ様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強することが好ましい。これにより、より高いＨＧＦ産生促進効果を得ることができる。
【００２４】
本発明のＨＧＦ産生促進剤には、さらに必要に応じて、本発明の効果を損なわない範囲で、化粧品や医薬品等に一般に用いられている保湿剤、油性成分、界面活性剤、ビタミン類、蛋白分解酵素、増粘剤、防腐剤、粉体、酸化防止剤、紫外線吸収剤、乳化剤、アルコール類、色素、水性成分、脂肪酸類、香料、キレート剤、ｐＨ調整剤、精製水等の添加成分を配合することができる。
【００２５】
保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール、ソルビット、マンニット等の糖アルコール、ヒアルロン酸塩、コンドロイチン硫酸塩、キトサン等の水溶性高分子、尿素、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸塩等が挙げられる。
【００２６】
油性成分としては、例えば、大豆油、コメヌカ油、アボカド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ脂、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸グリセリド等の合成グリセリド、ジグリセリド等の油脂類、ホホバ油、カルナウバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等のロウ類、流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、プリスタン等の炭化水素類、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等の高級脂肪酸類、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール、ホホバアルコール等の高級アルコール類、オクタン酸セチル、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール等のエステル類、精油類およびシリコーン油類が挙げられる。
【００２７】
界面活性剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリグリセリン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、ショ糖脂肪酸エステル、高級脂肪酸アルカノールアミド等の非イオン性界面活性剤、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ラウリル二ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、分岐鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、アルケニル硫酸塩、エチレンオキサイド及び／又はプロピレンオキサイドを付加したアルキルエーテルカルボン酸塩又はアルケニルエーテルカルボン酸塩、α−スルホ脂肪酸エステル、アミノ酸型界面活性剤、リン酸エステル型界面活性剤、タウリン型界面活性剤、アマイドエーテルサルフェート型界面活性剤等の陰イオン性界面活性剤、カルボキシベタイン型、アミノカルボン酸、スルホベタイン型等の両性界面活性剤および４級アンモニウム塩等の陽イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００２８】
ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、ビタミンＵ、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、リポ酸、オロット酸及びその誘導体等が挙げられる。蛋白分解酵素としては、例えば、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、カテプシン、パパイン、ブロメライン、フィシン及び細菌、酵母、カビ由来のプロテアーゼ等が挙げられる。
【００２９】
増粘剤としては、例えば、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン、ゼラチン、キサンタンガム、ポリアクリル酸塩等の水溶性高分子化合物、塩化ナトリウム、塩化カリウム等の無機塩が挙げられる。防腐剤としては、例えば、フェノキシエタノール、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム等が挙げられる。粉体としては、例えば、タルク、セリサイト、マイカ、カオリン、シリカ、ベントナイト、バーミキュライト、亜鉛華、雲母、雲母チタン、酸化チタン、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、ベンガラ、酸化鉄、群青等が挙げられる。その他の成分としては、香料、色素、殺菌剤等を挙げることができる。
【００３０】
また、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、他の成分を併用せずにホコウエイ抽出物だけで用いてもよいが、さらに脱毛防止、養毛・育毛効果を増強する目的で血行促進剤、局所刺激剤、角質溶解剤、抗脂漏剤、抗菌剤、抗炎症剤、毛包賦活剤、抗男性ホルモン剤、保湿剤等の他の成分と併用してもよい。
【００３１】
さらに、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ホコウエイ抽出物および任意成分を組み合わせて、常法に従って製造することができる。
【実施例】
【００３２】
以下、本発明を実施例に従い、詳細に説明する。
（ホコウエイ抽出物の調製例）
モウコタンポポ根（乾燥品）１ｋｇに７０％エタノール１０Ｌを加えて２時間加熱還流抽出を行った。濾過により、必要に応じオリ（沈殿物）を除き、濾液を減圧濃縮し、その後凍結乾燥を行い、約２７０ｇのホコウエイ抽出物（ホコウエイ根エキス末）を得た。
【００３３】
（水画分の調製例）
得られたホコウエイ抽出物２００ｇに酢酸エチルおよび水を加え分配処理し、得られた水層部分にｎ−ブタノールを加え分配処理した。得られた水層部分を減圧濃縮し、水画分を得た。
【００３４】
（メタノール画分の調製例）
水画分１７０ｇを、ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２０（三菱化学（株）製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、メタノール溶出部分を濃縮し、水画分のメタノール画分５．５ｇを得た。
【００３５】
（チコリ酸の調製例）
メタノール画分３６０ｍｇを下記条件でＯＤＳ−ＡＭおよびＯＤＳゲルを用いたカラムクロマトグラフィーに順次付することにより分離精製し、下記式で示すチコリ酸３５ｍｇを得た。
カラム：ＯＤＳ Ｓ−３４３ （μｍ，２０ｍｍ Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ）
カラム温度 ： 室温
移動相 ： ０．１％Ｈ３ＰＯ４／ＭｅＯＨ（６７：３３）
目的ピークを確認後、ＭｅＯＨで溶出流速： ３ｍＬ／ｍｉｎ
検出器 ： ＵＶ ２５４ｎｍ
【００３６】
チコリ酸
【００３７】
（ＨＧＦ産生促進効果の評価）
指定の濃度の試験試料を含有した０．５％仔牛血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ変法ＭＥＭ（ＤＭＥＭ）、および指定の濃度の試験試料に２０ｎｇ／ｍＬのＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）を含有した０．５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを使用して、正常ヒト線維芽細胞を、それぞれ２４時間培養した。培養後、上清を回収してサンドイッチＥＬＩＳＡに供した。培地中のＨＧＦ量は、全細胞のタンパク量で培地中のＨＧＦ量を除することによって、単位タンパク量あたりのＨＧＦ産生量（ｐｇ／μｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）として算出した。試験試料として、ホコウエイ抽出物、水画分、メタノール画分およびチコリ酸を使用し、各試験試料のＨＧＦ産生促進効果を、ＰＤＧＦ未添加のＨＧＦ産生量、およびＰＤＧＦ添加細胞のＨＧＦ量よりＰＤＧＦ未添加のＨＧＦ量を差し引いたΔＨＧＦ値（ｐｇ／μｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）により評価した。それぞれの試験試料のＨＧＦ産生量の結果を表１〜８および図１〜８に示し、表中ＰＤＧＦを含有する場合を「＋」、含有しない場合を「−」で示す。さらに、ΔＨＧＦ値の結果を表９〜１２および図９〜１２に示す。なお、表中及び図中の試験試料の「０」は各試験試料が無添加であることを示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】
【表５】
【００４３】
【表６】
【００４４】
【表７】
【００４５】
【表８】
【００４６】
【表９】
【００４７】
【表１０】
【００４８】
【表１１】
【００４９】
【表１２】
【００５０】
表１〜８および図１〜８の結果から、ホコウエイ抽出物、水画分、メタノール画分およびチコリ酸は、いずれも優れたＨＧＦ産生促進効果を示した。また、表９〜１２および図９〜１２の結果から、ＰＤＧＦを添加することにより、より優れたＨＧＦ産生促進効果を示した。
【００５１】
処方例１ 育毛剤
上記調製例で得られたホコウエイ根抽出末を、５０％エタノール水溶液に溶解し、２．７％ホコウエイ根抽出液（以下、「２．７％ホコウエイ根抽出液」と称す）を得た。これを使用し、下記表１３記載の成分と混合し、ホコウエイ根抽出液配合育毛剤を調製した。
【００５２】
【表１３】
【００５３】
上記育毛剤は、ホコウエイ根エキスを配合していない育毛剤と比較して、ＨＧＦ産生促進効果により、育毛および発毛効果において優れるものであった。
【００５４】
処方例２ トニック
下記表１４の処方（質量％）に従い、まず、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、イソプロピルメチルフェノール、パントテニルアルコール、グリチルレチン酸、エタノール（９９．５％）、ミリスチン酸オクチルドデシル、２−エチルヘキサン酸オクチル、香料、メントールを均一に混合した。次に、センブリ抽出液、ニンジン抽出液、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、エデト酸４ナトリウム、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（５０Ｅ．Ｏ）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ）、２．７％ホコウエイ根抽出液、精製水を均一に混合した。最後に両者を混合し、濾過して充填することによりホコウエイ根抽出液配合液状型トニックを調製した。
【００５５】
【表１４】
【００５６】
処方例３ トニック
下記表１５の処方（質量％）に従い、まず、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、イソプロピルメチルフェノール、パントテニルアルコール、エタノール（９９．５％）、香料、メントールを均一に混合した。次に、センブリ抽出液、ニンジン抽出液、ジプロピレングリコール、３−メチル−１，３−ブタンジオール、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、エデト酸４ナトリウム、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、モノラウリン酸デカグリセリル、２．７％ホコウエイ根抽出液、精製水を均一に混合した。次に両者を混合し、濾過して原液とし、最後に、原液と噴射剤を充填処方に合わせて、缶に充填することによりホコウエイ根抽出液配合エアゾール型トニックを調製した。
【００５７】
【表１５】
【００５８】
処方例２、３は、ＨＧＦ産生促進効果により、育毛効果が期待できる。
【００５９】
処方例４ ハンドクリーム
下記表１６の処方（質量％）に従い、下記の製造例に準拠し、ホコウエイ根抽出液配合ハンドクリーム製剤（以下、「ホコウエイ配合クリーム」という）を調製した。
【００６０】
まず、流動パラフィン、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸、セタノール、モノステアリン酸グリセリン、ジメチルポリシロキサン、デカメチルテトラシロキサン、ブチルパラベン、モノステアリン酸デカグリセリル、酢酸トコフェロールを混合し、加熱した。次に、メチルパラベン、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、濃グリセリン、エデト酸２ナトリウム、トリエタノールアミン、精製水を混合し加熱し、先の混合物に加え乳化させた。冷却後、フェノキシエタノール、グリチルリチン酸ジカリウム、香料、２．７％ホコウエイ根抽出液を添加することによりハンドクリームを調製した。
【００６１】
【表１６】
【００６２】
処方例５ ボディクリーム
下記表１７の処方（質量％）に従い、油相と水相をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解させた。水相に油相を添加して乳化させた後、冷却後、添加相を添加することによりｐＨ６．１のホコウエイ根抽出末配合ボディクリーム（１）を調製した。
【００６３】
【表１７】
【００６４】
処方例６ ボディクリーム
下記表１８の処方（質量％）に従い、油相と水相をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解させた。水相に油相を添加して乳化させた後、冷却後、添加相を添加することによりｐＨ７．５のホコウエイ根抽出末配合ボディクリーム（２）を調製した。
【００６５】
【表１８】
【００６６】
処方例７ 日焼け止めクリーム
下記表１９の処方（質量％）に従い、油相と水相をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解させた。水相に油相を添加して乳化させた後、冷却後、微細に粉砕した粉体相および添加相を添加することによりＳＰＦ２０のホコウエイ根抽出末配合日焼け止めクリームを調製した。
【００６７】
【表１９】
【００６８】
処方例８ 粉体入浴剤
上記調製例で得られたホコウエイ根抽出末を、５０％エタノール水溶液に溶解し、２％ホコウエイ根抽出液（以下、「２％ホコウエイ根抽出液」と称す）を得た。これを使用し、下記表２０の処方（質量％）に従い、すべての原料を均一に混合することによりホコウエイ根抽出液配合粉体入浴剤を調製した。
【００６９】
【表２０】
【００７０】
処方例９ 液体入浴剤
上記調製例で得られたホコウエイ根抽出末を、５０％エタノール水溶液に溶解し、３％ホコウエイ根抽出液（以下、「３％ホコウエイ根抽出液」と称す）を得た。これを使用し、下記表２１の処方（質量％）に従い、Ａ相およびＢ相を７０℃に加熱し完全溶解させ、Ａ相をＢ相に添加後、３０℃まで冷却することによりホコウエイ根抽出液配合液状入浴剤を調製した。
【００７１】
【表２１】
【００７２】
処方例１０ 化粧水
下記表２２の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加し原液を調整し、その原液を缶に入れ、ＬＰＧ、ブタン等のガスを充填することによりホコウエイ根抽出末配合化粧水（エアゾール製品）を調製した。
【００７３】
【表２２】
【００７４】
処方例１１ 化粧水
下記表２３の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加し、可溶化させることによりｐＨ５．５のホコウエイ根抽出液配合弱酸性化粧水（透明タイプ）を調製した。
【００７５】
【表２３】
【００７６】
処方例１２ 化粧水
下記表２４の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加し、乳化させることによりｐＨ７．５のホコウエイ根抽出液配合化粧水（白濁タイプ）を調製した。
【００７７】
【表２４】
【００７８】
処方例１３ 化粧水
下記表２５の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加して可溶化させた後、粉体相を添加することによりｐＨ６．２の３層型のホコウエイ根抽出液配合化粧水（分離型タイプ）を調製した。
【００７９】
【表２５】
【００８０】
処方例４〜１３は、ホコウエイ根エキスのＨＧＦ産生促進効果により、皮膚における各種炎症の緩解が期待でき、肌荒れ等に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】ＰＤＧＦを含まないホコウエイ抽出物のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図２】ＰＤＧＦを含むホコウエイ抽出物のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図３】ＰＤＧＦを含まない水画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図４】ＰＤＧＦを含む水画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図５】ＰＤＧＦを含まないメタノール画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図６】ＰＤＧＦを含むメタノール画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図７】ＰＤＧＦを含まないチコリ酸のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図８】ＰＤＧＦを含むチコリ酸のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図９】ホコウエイ抽出物のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【図１０】水画分のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【図１１】メタノール画分のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【図１２】チコリ酸のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝細胞増殖因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、以下、「ＨＧＦ」とも称す）産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
蒲公英（以下、「ホコウエイ」とも記す）は、キク科のモウコタンポポ（Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ）等の各種 Ｔａｒａｘａｃｕｍ 属植物の根つき全草であり、特許文献１には、ホコウエイを有効成分とする５α−リダクターゼ阻害剤が開示されている。
【０００３】
一方、ＨＧＦは、当初肝細胞に対する最も強力な増殖促進因子として同定されていたが、腎尿細管や気管支上皮、ケラチノサイトなど様々な上皮系細胞に対しても増殖促進因子（ｍｉｔｏｇｅｎ）として機能することが知られている（非特許文献１）。また、最近では、血管内皮細胞や軟骨細胞、造血幹細胞などの間葉系細胞の増殖を促進させることも明らかにされている（非特許文献１）。さらに、毛髪の成長期移行シグナルであるＳＴＡＴ３（Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）は、ＨＧＦにより活性化されることが知られている（非特許文献２）。
【０００４】
そのため、肌荒れの改善や育毛効果を目的として、ＨＧＦ産生促進剤を化粧品、育毛剤等の外用剤に配合することが提案されている。例えば、特許文献２には、ＨＧＦ産生促進剤として米抽出物を配合した化粧品が開示されている。
【０００５】
また、特許文献３には、キク科の植物由来の成長因子産生増強物質を有効成分として含有している成長因子産生増強用組成物が、開示されている。さらに、特許文献４には、セイヨウタンポポから得られた抽出物を含有する繊維芽細胞増殖促進剤が、開示されている。
【特許文献１】特開２０００−９５６４８号公報
【特許文献２】特開２００４−９９５０３号公報
【特許文献３】国際公開第２００１／０７６６１４号パンフレット
【特許文献４】特開平１０−３６２７９号公報
【非特許文献１】実験医学，Ｖｏｌ．１５ Ｎｏ．９ ｐ７８（１９９７）
【非特許文献２】フレグランスジャーナル， Ｎｏ．１２ ｐ１３（２００７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献２に記載の方法では、十分なＨＧＦ産生促進効果が得られず、よりＨＧＦ産生促進効果の高いＨＧＦ産生促進剤が求められている。また、米抽出物を配合しているためアレルギーを発症する場合もあり、より安全性の高いＨＧＦ産生促進剤が求められている。
【０００７】
さらに、特許文献１は、ホコウエイに関して５α−リダクターゼ阻害効果については開示されているものの、ＨＧＦ産生促進効果については考慮されていない。さらにまた、特許文献３は、キク科の植物としてタンポポが記載されているものの、キク科のヨモギ中のクロロゲン酸等の成分について注目したものであり、Ｔａｒａｘａｃｕｍ 属に属するホコウエイに関しては開示されておらず、その効果については不明である。また、特許文献４には、セイヨウタンポポの繊維芽細胞増殖促進効果については記載があるものの、ホコウエイのＨＧＦ産生促進効果については不明である。
【０００８】
そこで、本発明の目的は、高いＨＧＦ産生促進効果を有するＨＧＦ産生促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、キク科の特定の抽出物に高いＨＧＦ産生促進効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
即ち、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ホコウエイから得られる抽出物（以下、「ホコウエイ抽出物」とも称す）を有効成分とすることを特徴とするものである。
【００１１】
また、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、前記抽出物を酢酸エチル／水で分配処理し、得られた水可溶画分をｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水可溶画分であることが好ましく、前記抽出物が、前記ｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水可溶画分を、樹脂吸着クロマトグラフィーにかけ得られたメタノール溶出画分であることが好ましい。
【００１２】
さらに、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、下記一般式（１）、
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とすることを特徴とするものである。
【００１３】
さらにまた、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、血小板由来成長因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ、以下、「ＰＤＧＦ」とも称す）もしくはＰＤＧＦ様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強することが好ましい。ここで言うＰＤＧＦ様作用物質とは、ＰＤＧＦのレセプターに結合して、ＰＤＧＦと同様の作用を細胞に起こす物質のことである。
【発明の効果】
【００１４】
本発明により、高いＨＧＦ産生促進効果を有するＨＧＦ産生促進剤を提供することが可能である。また、本発明は、細胞等に直接作用しＨＧＦ産生促進効果を発揮するとともに、ＰＤＧＦもしくはＰＤＧＦ様作用物質の存在下でＨＧＦ産生誘導能を増強する効果を有するものである。さらに、本発明により、十分なＨＧＦ産生促進効果を発揮し、上皮細胞を増殖し、傷ついた上皮組織の再生を促進することができる。よって、ＨＧＦの形態形成誘導作用や血管新生作用により血管、皮膚や胃腸などの創傷治癒の効果を期待できる。また、肝炎などの肝障害、腎炎などの腎障害、肺炎などの肺障害などの各種炎症に対して著しい防止作用の効果を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明の好適実施形態につき具体的に説明する。
本発明においては、ホコウエイは、キク科のモウコタンポポ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ等の各種 Ｔａｒａｘａｃｕｍ 属植物の根つき全草のことを指し、セイヨウタンポポ、モウコタンポポ等が例示される。これらの中でも植物としてはモウコタンポポが好ましく、使用する部位としては根が好ましい。また、本発明で用いるホコウエイ抽出物とは、かかる全草等を乾燥し又は乾燥することなく粉砕した後、常温又は加温下に、溶剤により抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液、あるいはその乾燥末を意味するものである。
【００１６】
ここで、ホコウエイの抽出に使用される溶媒は特に限定されず、例えば、水、メチルアルコール、エチルアルコール等の低級アルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステル、ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素、ジエチルエーテル、アセトン等の公知の溶媒が挙げられ、これらの溶媒は、１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの中でもエタノール水溶液が好ましく、７０％エタノール水溶液が特に好ましい。なお、ホコウエイの抽出は常法で行ない、得られたホコウエイ抽出物はそのまま用いてもよいが、さらに必要により濃縮、濾過等の処理したものを用いることができる。
【００１７】
本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ホコウエイ抽出物を有効成分とするものであり、優れたＨＧＦ産生促進効果を有し、かつ安全性も高いので、剤型としては錠剤、カプセル剤、散剤、内服液、細粒剤、顆粒剤等の経口投与剤の形態となすことができ、また、適当な基剤、薬剤などと混合した皮膚外用剤や頭髪化粧料等の外用形態とすることができる。具体的には、ローション、乳液、軟膏、クリーム、ジェル、オイル、パック、シャンプー、リンス、トリートメント、ヘアートニック、ヘアーリキッド等の形態を採ることができる。さらに上記のような外用剤の他にも、例えば、石鹸、入浴剤といったものに配合して用いてもよい。
【００１８】
また、本発明において、ホコウエイ抽出物を処理したものとしては、例えば、ホコウエイの根からの抽出物を酢酸エチル／水で分配処理し、処理して得られた水可溶画分をｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水可溶画分（以下、「水画分」と称す）があり、さらに、ｎ−ブタノール／水で分配処理して得られた水画分を、樹脂吸着クロマトグラフィーにかけ得られたメタノール溶出画分（以下、「メタノール画分」）等が挙げられる。
【００１９】
さらに、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、下記一般式（１）、
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とするものである。ここで、Ｒ１〜Ｒ６で表される炭素数１〜３のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。
【００２０】
上記一般式（１）の化合物は、植物からの抽出、単離、または既知の方法による合成により得ることができる。特に、上記の方法によりホコウエイの根からホコウエイ根抽出物を得た後、単離することにより、好適に得ることができる。単離方法は特に制限されるものではないが、液−液分配、各種クロマトグラフィー、再結晶化などの手法により好適に単離することができる。
【００２１】
また、本発明において、上記一般式中のＲ１〜Ｒ６が水素原子で、Ｘ１およびＸ２がビニレン基である下記式、
で表されるチコリ酸（ｃｈｉｃｏｒｉｃ ａｃｉｄ）であることが好ましい。チコリ酸は、ホコウエイ抽出物から定法により単離することもできるし、ＳＹＮＴＨＥＴＩＣ ＣＯＭＭＵＮＩＣＡＴＩＯＮＳ， ２８（４）， ７３７（１９９８）記載の方法等により合成することもできる。
【００２２】
本発明において、ホコウエイ抽出物の配合量は、添加形態および投与形態によっても異なるが、外用剤の場合には、全組成物中０．０００１〜９０質量％配合することが好ましく、０．００１〜５０質量％配合することがより好ましく、０．００１〜１０質量％配合することがさらにより好ましい。また、経口投与剤の場合には、成人１日あたり０．００１〜１００ｇになるようにするのが好ましい。
【００２３】
また、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ＰＤＧＦもしくはＰＤＧＦ様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強することが好ましい。これにより、より高いＨＧＦ産生促進効果を得ることができる。
【００２４】
本発明のＨＧＦ産生促進剤には、さらに必要に応じて、本発明の効果を損なわない範囲で、化粧品や医薬品等に一般に用いられている保湿剤、油性成分、界面活性剤、ビタミン類、蛋白分解酵素、増粘剤、防腐剤、粉体、酸化防止剤、紫外線吸収剤、乳化剤、アルコール類、色素、水性成分、脂肪酸類、香料、キレート剤、ｐＨ調整剤、精製水等の添加成分を配合することができる。
【００２５】
保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール、ソルビット、マンニット等の糖アルコール、ヒアルロン酸塩、コンドロイチン硫酸塩、キトサン等の水溶性高分子、尿素、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸塩等が挙げられる。
【００２６】
油性成分としては、例えば、大豆油、コメヌカ油、アボカド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ脂、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸グリセリド等の合成グリセリド、ジグリセリド等の油脂類、ホホバ油、カルナウバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等のロウ類、流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、プリスタン等の炭化水素類、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等の高級脂肪酸類、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール、ホホバアルコール等の高級アルコール類、オクタン酸セチル、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール等のエステル類、精油類およびシリコーン油類が挙げられる。
【００２７】
界面活性剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリグリセリン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、ショ糖脂肪酸エステル、高級脂肪酸アルカノールアミド等の非イオン性界面活性剤、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ラウリル二ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、分岐鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、アルケニル硫酸塩、エチレンオキサイド及び／又はプロピレンオキサイドを付加したアルキルエーテルカルボン酸塩又はアルケニルエーテルカルボン酸塩、α−スルホ脂肪酸エステル、アミノ酸型界面活性剤、リン酸エステル型界面活性剤、タウリン型界面活性剤、アマイドエーテルサルフェート型界面活性剤等の陰イオン性界面活性剤、カルボキシベタイン型、アミノカルボン酸、スルホベタイン型等の両性界面活性剤および４級アンモニウム塩等の陽イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００２８】
ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、ビタミンＵ、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、リポ酸、オロット酸及びその誘導体等が挙げられる。蛋白分解酵素としては、例えば、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、カテプシン、パパイン、ブロメライン、フィシン及び細菌、酵母、カビ由来のプロテアーゼ等が挙げられる。
【００２９】
増粘剤としては、例えば、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン、ゼラチン、キサンタンガム、ポリアクリル酸塩等の水溶性高分子化合物、塩化ナトリウム、塩化カリウム等の無機塩が挙げられる。防腐剤としては、例えば、フェノキシエタノール、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム等が挙げられる。粉体としては、例えば、タルク、セリサイト、マイカ、カオリン、シリカ、ベントナイト、バーミキュライト、亜鉛華、雲母、雲母チタン、酸化チタン、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、ベンガラ、酸化鉄、群青等が挙げられる。その他の成分としては、香料、色素、殺菌剤等を挙げることができる。
【００３０】
また、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、他の成分を併用せずにホコウエイ抽出物だけで用いてもよいが、さらに脱毛防止、養毛・育毛効果を増強する目的で血行促進剤、局所刺激剤、角質溶解剤、抗脂漏剤、抗菌剤、抗炎症剤、毛包賦活剤、抗男性ホルモン剤、保湿剤等の他の成分と併用してもよい。
【００３１】
さらに、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、ホコウエイ抽出物および任意成分を組み合わせて、常法に従って製造することができる。
【実施例】
【００３２】
以下、本発明を実施例に従い、詳細に説明する。
（ホコウエイ抽出物の調製例）
モウコタンポポ根（乾燥品）１ｋｇに７０％エタノール１０Ｌを加えて２時間加熱還流抽出を行った。濾過により、必要に応じオリ（沈殿物）を除き、濾液を減圧濃縮し、その後凍結乾燥を行い、約２７０ｇのホコウエイ抽出物（ホコウエイ根エキス末）を得た。
【００３３】
（水画分の調製例）
得られたホコウエイ抽出物２００ｇに酢酸エチルおよび水を加え分配処理し、得られた水層部分にｎ−ブタノールを加え分配処理した。得られた水層部分を減圧濃縮し、水画分を得た。
【００３４】
（メタノール画分の調製例）
水画分１７０ｇを、ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２０（三菱化学（株）製）を用いたカラムクロマトグラフィーに付し、メタノール溶出部分を濃縮し、水画分のメタノール画分５．５ｇを得た。
【００３５】
（チコリ酸の調製例）
メタノール画分３６０ｍｇを下記条件でＯＤＳ−ＡＭおよびＯＤＳゲルを用いたカラムクロマトグラフィーに順次付することにより分離精製し、下記式で示すチコリ酸３５ｍｇを得た。
カラム：ＯＤＳ Ｓ−３４３ （μｍ，２０ｍｍ Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ）
カラム温度 ： 室温
移動相 ： ０．１％Ｈ３ＰＯ４／ＭｅＯＨ（６７：３３）
目的ピークを確認後、ＭｅＯＨで溶出流速： ３ｍＬ／ｍｉｎ
検出器 ： ＵＶ ２５４ｎｍ
【００３６】
チコリ酸
【００３７】
（ＨＧＦ産生促進効果の評価）
指定の濃度の試験試料を含有した０．５％仔牛血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ変法ＭＥＭ（ＤＭＥＭ）、および指定の濃度の試験試料に２０ｎｇ／ｍＬのＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）を含有した０．５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを使用して、正常ヒト線維芽細胞を、それぞれ２４時間培養した。培養後、上清を回収してサンドイッチＥＬＩＳＡに供した。培地中のＨＧＦ量は、全細胞のタンパク量で培地中のＨＧＦ量を除することによって、単位タンパク量あたりのＨＧＦ産生量（ｐｇ／μｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）として算出した。試験試料として、ホコウエイ抽出物、水画分、メタノール画分およびチコリ酸を使用し、各試験試料のＨＧＦ産生促進効果を、ＰＤＧＦ未添加のＨＧＦ産生量、およびＰＤＧＦ添加細胞のＨＧＦ量よりＰＤＧＦ未添加のＨＧＦ量を差し引いたΔＨＧＦ値（ｐｇ／μｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）により評価した。それぞれの試験試料のＨＧＦ産生量の結果を表１〜８および図１〜８に示し、表中ＰＤＧＦを含有する場合を「＋」、含有しない場合を「−」で示す。さらに、ΔＨＧＦ値の結果を表９〜１２および図９〜１２に示す。なお、表中及び図中の試験試料の「０」は各試験試料が無添加であることを示す。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】
【表３】
【００４１】
【表４】
【００４２】
【表５】
【００４３】
【表６】
【００４４】
【表７】
【００４５】
【表８】
【００４６】
【表９】
【００４７】
【表１０】
【００４８】
【表１１】
【００４９】
【表１２】
【００５０】
表１〜８および図１〜８の結果から、ホコウエイ抽出物、水画分、メタノール画分およびチコリ酸は、いずれも優れたＨＧＦ産生促進効果を示した。また、表９〜１２および図９〜１２の結果から、ＰＤＧＦを添加することにより、より優れたＨＧＦ産生促進効果を示した。
【００５１】
処方例１ 育毛剤
上記調製例で得られたホコウエイ根抽出末を、５０％エタノール水溶液に溶解し、２．７％ホコウエイ根抽出液（以下、「２．７％ホコウエイ根抽出液」と称す）を得た。これを使用し、下記表１３記載の成分と混合し、ホコウエイ根抽出液配合育毛剤を調製した。
【００５２】
【表１３】
【００５３】
上記育毛剤は、ホコウエイ根エキスを配合していない育毛剤と比較して、ＨＧＦ産生促進効果により、育毛および発毛効果において優れるものであった。
【００５４】
処方例２ トニック
下記表１４の処方（質量％）に従い、まず、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、イソプロピルメチルフェノール、パントテニルアルコール、グリチルレチン酸、エタノール（９９．５％）、ミリスチン酸オクチルドデシル、２−エチルヘキサン酸オクチル、香料、メントールを均一に混合した。次に、センブリ抽出液、ニンジン抽出液、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、エデト酸４ナトリウム、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（５０Ｅ．Ｏ）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ）、２．７％ホコウエイ根抽出液、精製水を均一に混合した。最後に両者を混合し、濾過して充填することによりホコウエイ根抽出液配合液状型トニックを調製した。
【００５５】
【表１４】
【００５６】
処方例３ トニック
下記表１５の処方（質量％）に従い、まず、酢酸ｄｌ−α−トコフェロール、イソプロピルメチルフェノール、パントテニルアルコール、エタノール（９９．５％）、香料、メントールを均一に混合した。次に、センブリ抽出液、ニンジン抽出液、ジプロピレングリコール、３−メチル−１，３−ブタンジオール、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム、エデト酸４ナトリウム、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、モノラウリン酸デカグリセリル、２．７％ホコウエイ根抽出液、精製水を均一に混合した。次に両者を混合し、濾過して原液とし、最後に、原液と噴射剤を充填処方に合わせて、缶に充填することによりホコウエイ根抽出液配合エアゾール型トニックを調製した。
【００５７】
【表１５】
【００５８】
処方例２、３は、ＨＧＦ産生促進効果により、育毛効果が期待できる。
【００５９】
処方例４ ハンドクリーム
下記表１６の処方（質量％）に従い、下記の製造例に準拠し、ホコウエイ根抽出液配合ハンドクリーム製剤（以下、「ホコウエイ配合クリーム」という）を調製した。
【００６０】
まず、流動パラフィン、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸、セタノール、モノステアリン酸グリセリン、ジメチルポリシロキサン、デカメチルテトラシロキサン、ブチルパラベン、モノステアリン酸デカグリセリル、酢酸トコフェロールを混合し、加熱した。次に、メチルパラベン、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、濃グリセリン、エデト酸２ナトリウム、トリエタノールアミン、精製水を混合し加熱し、先の混合物に加え乳化させた。冷却後、フェノキシエタノール、グリチルリチン酸ジカリウム、香料、２．７％ホコウエイ根抽出液を添加することによりハンドクリームを調製した。
【００６１】
【表１６】
【００６２】
処方例５ ボディクリーム
下記表１７の処方（質量％）に従い、油相と水相をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解させた。水相に油相を添加して乳化させた後、冷却後、添加相を添加することによりｐＨ６．１のホコウエイ根抽出末配合ボディクリーム（１）を調製した。
【００６３】
【表１７】
【００６４】
処方例６ ボディクリーム
下記表１８の処方（質量％）に従い、油相と水相をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解させた。水相に油相を添加して乳化させた後、冷却後、添加相を添加することによりｐＨ７．５のホコウエイ根抽出末配合ボディクリーム（２）を調製した。
【００６５】
【表１８】
【００６６】
処方例７ 日焼け止めクリーム
下記表１９の処方（質量％）に従い、油相と水相をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解させた。水相に油相を添加して乳化させた後、冷却後、微細に粉砕した粉体相および添加相を添加することによりＳＰＦ２０のホコウエイ根抽出末配合日焼け止めクリームを調製した。
【００６７】
【表１９】
【００６８】
処方例８ 粉体入浴剤
上記調製例で得られたホコウエイ根抽出末を、５０％エタノール水溶液に溶解し、２％ホコウエイ根抽出液（以下、「２％ホコウエイ根抽出液」と称す）を得た。これを使用し、下記表２０の処方（質量％）に従い、すべての原料を均一に混合することによりホコウエイ根抽出液配合粉体入浴剤を調製した。
【００６９】
【表２０】
【００７０】
処方例９ 液体入浴剤
上記調製例で得られたホコウエイ根抽出末を、５０％エタノール水溶液に溶解し、３％ホコウエイ根抽出液（以下、「３％ホコウエイ根抽出液」と称す）を得た。これを使用し、下記表２１の処方（質量％）に従い、Ａ相およびＢ相を７０℃に加熱し完全溶解させ、Ａ相をＢ相に添加後、３０℃まで冷却することによりホコウエイ根抽出液配合液状入浴剤を調製した。
【００７１】
【表２１】
【００７２】
処方例１０ 化粧水
下記表２２の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加し原液を調整し、その原液を缶に入れ、ＬＰＧ、ブタン等のガスを充填することによりホコウエイ根抽出末配合化粧水（エアゾール製品）を調製した。
【００７３】
【表２２】
【００７４】
処方例１１ 化粧水
下記表２３の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加し、可溶化させることによりｐＨ５．５のホコウエイ根抽出液配合弱酸性化粧水（透明タイプ）を調製した。
【００７５】
【表２３】
【００７６】
処方例１２ 化粧水
下記表２４の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加し、乳化させることによりｐＨ７．５のホコウエイ根抽出液配合化粧水（白濁タイプ）を調製した。
【００７７】
【表２４】
【００７８】
処方例１３ 化粧水
下記表２５の処方（質量％）に従い、水相にアルコール相を添加して可溶化させた後、粉体相を添加することによりｐＨ６．２の３層型のホコウエイ根抽出液配合化粧水（分離型タイプ）を調製した。
【００７９】
【表２５】
【００８０】
処方例４〜１３は、ホコウエイ根エキスのＨＧＦ産生促進効果により、皮膚における各種炎症の緩解が期待でき、肌荒れ等に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】ＰＤＧＦを含まないホコウエイ抽出物のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図２】ＰＤＧＦを含むホコウエイ抽出物のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図３】ＰＤＧＦを含まない水画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図４】ＰＤＧＦを含む水画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図５】ＰＤＧＦを含まないメタノール画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図６】ＰＤＧＦを含むメタノール画分のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図７】ＰＤＧＦを含まないチコリ酸のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図８】ＰＤＧＦを含むチコリ酸のＨＧＦ産生量を示すグラフである。
【図９】ホコウエイ抽出物のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【図１０】水画分のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【図１１】メタノール画分のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【図１２】チコリ酸のΔＨＧＦ値を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蒲公英から得られる抽出物を有効成分とすることを特徴とする肝細胞増殖因子産生促進剤。
【請求項２】
下記一般式（１）、
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とすることを特徴とする肝細胞増殖因子産生促進剤。
【請求項３】
血小板由来成長因子もしくは血小板由来成長因子様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強する請求項１または２記載の肝細胞増殖因子産生促進剤。
【請求項１】
蒲公英から得られる抽出物を有効成分とすることを特徴とする肝細胞増殖因子産生促進剤。
【請求項２】
下記一般式（１）、
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、各々独立に、水素原子または炭素数１〜３のアルキル基を示し、Ｘ１およびＸ２は、各々独立に、エチレン基またはビニレン基を示す）で表される骨格を有する化合物を有効成分とすることを特徴とする肝細胞増殖因子産生促進剤。
【請求項３】
血小板由来成長因子もしくは血小板由来成長因子様作用物質の存在下でＨＧＦ産生促進を増強する請求項１または２記載の肝細胞増殖因子産生促進剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公開番号】特開２０１０−４３０１３（Ｐ２０１０−４３０１３Ａ）
【公開日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２０６８２７（Ｐ２００８−２０６８２７）
【出願日】平成２０年８月１１日（２００８．８．１１）
【出願人】（３０８０４０６３８）ツムラライフサイエンス株式会社 (12)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月１１日（２００８．８．１１）
【出願人】（３０８０４０６３８）ツムラライフサイエンス株式会社 (12)
【Ｆターム（参考）】
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