肺疾患を処置するためのモノクローナル抗体の霧状化
【課題】特に肺疾患の治療又は防止における抗体系治療薬のための薬物送達の向上した方法及び組成物を提供すること。
【解決手段】本発明は補体系の活性化を抑制する抗体を使用し、そして肺の疾患又は状態を防止又は治療するために使用できる方法及び組成物に関する。本発明によって処置される肺の疾患又は状態としては、喘息、気管支収縮、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害が挙げられるが、これ等に限定されない。
【解決手段】本発明は補体系の活性化を抑制する抗体を使用し、そして肺の疾患又は状態を防止又は治療するために使用できる方法及び組成物に関する。本発明によって処置される肺の疾患又は状態としては、喘息、気管支収縮、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害が挙げられるが、これ等に限定されない。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２００５年５月１１日に出願された米国特許出願連続番号１１／１２７，４３８（これは、２００３年９月５日に出願された米国特許出願連続番号１０／６５５，８６１の一部継続出願であり、２００３年５月９日に出願された米国仮出願連続番号６０／４６９，１８９および２００２年９月６日に出願された米国仮出願連続番号６０／４０８，５７１の出願日に対する優先権およびその利益を主張する）の出願日に対する優先権およびその利益を主張する。これら全ては、その全体が参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
喘息、気管支炎及び気腫は総括して慢性閉塞性肺疾患として知られている。これらの疾患は慢性気管支炎、喘息及び気腫の種々の程度の症状を伴った、特に小気道の全般性気道閉塞として特徴付けられている。これ等の疾患は個体内に共存する場合が多く、そして気道閉塞の第１原因を決定することは困難である場合がある。気道閉塞は努力呼気の間の気流に対する増大した抵抗性として定義される。大気道の閉塞もまたこれ等の疾患、特に喘息において生じる場合がある。現在使用できる喘息治療法は問題点を含み続けている。同様に、他の肺疾患、例えば肺癌を治療又は防止するための進歩した治療法も望まれている。
【０００３】
患者への効果的な送達は良好な薬剤療法の何れにも重要な特徴である。送達の種々の経路が存在しており、そして各々が独自の利点及び難点を有している。丸薬、カプセル、エリキシル等の経口薬物送達は恐らくは最も簡便な方法であるが、多くの薬剤はそれらが吸収され得る前に消化管内で分解される。皮下注射は蛋白質の送達を包含する全身薬物送達のためには有効な経路であるが、患者の許容度が低い。一日一回以上の薬剤の注射は低い患者コンプライアンスの原因となる場合が多いため、種々の代替投与経路、例えば経皮、鼻内、直腸内、膣内及び肺送達が開発されている。即ち、特に肺疾患の治療又は防止における抗体系治療薬のための薬物送達の方法及び組成物を向上させることが望ましい。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（要旨）
従って、本出願は抗体系治療薬の送達に適する組成物及び方法を提供する。これ等の抗体系治療薬は肺の疾患又は状態、例えば喘息を防止又は治療する場合に特に有用である。本出願において有用な抗体の例は抗Ｃ５抗体又は補体カスケードの活性化を抑制する抗体、例えば米国特許第６，３５５，２４５号に記載されている抗体を包含する。抗体の他に、他の治療薬もまた本出願の組成物及び方法と共に使用されることを意図しており、例えば米国特許第５，６２７，２６４号に記載のキメラ補体抑制剤蛋白質が挙げられる。特定の好ましい実施形態においては抗体治療薬としてペキセリズマブ又はエクリズマブを使用する。特定の実施形態においては、肺疾患を治療又は防止するために抗体系治療薬を送達するのに適する方法は治療薬の全身送達の為に設計されるのではなく、従って、治療薬の全身作用はこれ等の方法を用いては観察されない場合がある。
【０００５】
出願の第１の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する、又は、補体系の後に活性化される１つ以上の成分の機能をブロックする抗体の治療有効量を被験体に投与することを含む、被験体における肺の状態を防止又は治療するための方法を提供する。特定の実施形態においては、追加的な活性剤も同じ被験体に投与する。抗体及び追加的活性剤の投与は同時又は何れかの順序で逐次的に行ってよい。特定の実施形態においては、抗体及び追加的活性剤は同じ送達方法又は経路を介して、例えば吸入により、被験体に投与できる。代替となる実施形態においては、抗体及び追加的活性剤は異なる送達方法又は経路を介して、例えば抗体を吸入により送達し、そして追加的活性剤を注射又は経口摂取により、被験体に投与できる。
【０００６】
出願の第２の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含むエアロゾル組成物を提供し、組成物は被験体における肺の状態を防止又は治療するのに適している。抗体はエアロゾル化に適する組成物中に製剤される。抗体は追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせた製剤はエアロゾル化に適するものである。或いは、抗体及び追加的活性剤は、エアロゾル化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【０００７】
出願の第３の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含む霧状化組成物を提供し、組成物は被験体における肺の状態を防止又は治療するのに適している。抗体はエアロゾル化に適する組成物中に製剤される。同様に、抗体は追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせた製剤は霧状化に適している。或いは、抗体及び追加的活性剤は、霧状化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【０００８】
出願の更に別の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体及びネブライザーを含む生物医薬品パッケージを提供し、パッケージは被験体の肺の状態を防止又は治療するのに適している。生物医薬品パッケージは更に、抗体の他に活性剤を含んでよい。生物医薬品パッケージはまた使用のための説明書を含んでもよい。
【０００９】
出願の意図する肺の疾患又は状態は喘息、気管支収縮、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害を包含するがこれ等に限定されない。
【００１０】
被験体に治療薬を投与するタイミングは例えば被験体の実体又は治療又は防止すべき肺の疾患又は状態、又はその両方に応じて変動できる。例えば、投与は肺の状態の顕在化の前（例えば喘息発作前）、肺の状態の顕在化の最中（例えば喘息発作中）、又は肺の状態の顕在化の後（例えば喘息発作後）に行ってよい。
【００１１】
本出願の抗体は、それがＣ５のＣ５ａ及びＣ５ｂへの分解を防止するようにＣ５に対して特異的であることができる。抗体はＣ５コンバターゼに対して特異的であることができる。或いは、抗体は補体系の成分、例えばＣ５ａ、Ｃ５ｂ又はＣ５ｂ−９に特異的であって良く、そして補体に特異的な抗体は、好ましくは、成分の機能を、例えば成分のその対応する受容体への結合をブロッキングすることにより、又は、補体カスケードにおけるその後のシグナリング又は事象の活性化におけるその機能をブロッキングすることにより抑制する。特定の実施形態はエクリズマブ又はペキセリズマブ、又は両方を使用する。本出願の抗体又は抗体治療薬は完全長の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、キメラ抗体（例えばヒト化抗体）、１本鎖抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントと変異したＦｃ部分とを有する抗体であることができる。特定の実施形態においては、変異したＦｃ部分が補体を活性化しないか、又は、Ｆｃ部分の変異が補体を活性化するＦｃ部分の能力を低下させる。本出願の抗体はバルク中に生産又は処理し、そして、種々の用量において、適当な材料（例えばガラス又はプラスチック）で製造されたアンプルに充填してよい。
【００１２】
本出願の追加的活性剤（又は抗体治療薬以外の活性剤）は、別の抗体治療薬（例えば抗ＩｇＥ抗体、例えばＸｏｌａｉｒ（登録商標）又はオマリズマブ、抗ＩＬ−４抗体又は抗ＩＬ−５抗体）、抗ＩｇＥ抑制剤（例えばＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）又はモンテルカストナトリウム）、交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗生物質（例えばトブラマイシン）、デオキシリボヌクレアーゼ（例えばプルモザイム）、抗コリン作用剤（例えばシュウ化プラトロピウム）、コルチコステロイド（例えばデキサメタゾン）、β−アドレノレセプターアゴニスト、ロイコトリエン抑制剤（例えばジロイトン）、５リポキシゲナーゼ阻害剤、ＰＤＥ抑制剤、ＣＤ２３拮抗剤、ＩＬ−１３拮抗剤、サイトカイン放出抑制剤、ヒスタミンＨ１受容体拮抗剤、抗ヒスタミン、抗炎症剤（例えばクロモリンナトリウム）又はヒスタミン放出抑制剤であることができる。
【００１３】
抗体のエアロゾル化又は霧状化に適する製剤の例は適当なｐＨ（例えばｐＨ６〜８）において生理学的な浸透圧（例えば２８０〜３２０ｍＭ）にある。本出願の製剤は更に賦形剤、例えばポリソルベート８０を含んでよく、これは０．００１５〜０．０２％で使用できる。
【００１４】
本出願のネブライザーはジェットエアネブライザー（例えばＰａｒｉ ＬＣ Ｊｅｔ Ｐｌｕｓ又はＨｕｄｓｏｎ Ｔ Ｕｐ−ｄｒａｆｔ ＩＩ）、超音波ネブライザー（例えばＭＡＢＩＳＭｉｓｔ ＩＩ）、振動メッシュネブライザー（例えばＯｍｒｏｎによるＭｉｃｒｏ ａｉｒ）及び衝撃波ネブライザー（ＥｖｉｔＬａｂｓ Ｓｏｎｉｋ ＬＤ１２０）であることができる。
【００１５】
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
補体カスケードの活性化を抑制する抗体の治療有効量及び追加的な活性剤を被験体に投与することを含む、該被験体における肺の状態を防止又は治療するための方法。
（項目２）
前記肺の状態が喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害よりなる群から選択される、項目１記載の方法。
（項目３）
前記被験体がヒトである、項目１記載の方法。
（項目４）
前記抗体がＣ５に特異的である、項目１記載の方法。
（項目５）
前記抗体がＣ５コンバターゼに特異的である、項目１記載の方法。
（項目６）
前記抗体がＣ５ａ又はＣ５ｂ−９に特異的である、項目１記載の方法。
（項目７）
前記抗体がエクリズマブ又はペキセリズマブである、項目１記載の方法。
（項目８）
前記抗体が完全長免疫グロブリン、１本鎖抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂフラグメント、及び、Ｆａｂフラグメント及び変異したＦｃ部分を有する抗体よりなる群から選択される、項目１記載の方法。
（項目９）
前記変異したＦｃ部分が補体を活性化しない、項目７記載の方法。
（項目１０）
前記肺の状態の顕在化の前、該肺の状態の顕在化の最中、又は該肺の状態の顕在化の後に前記抗体を投与する、項目１記載の方法。
（項目１１）
前記追加的な活性剤がコルチコステロイドである、項目１記載の方法。
（項目１２）
前記コルチコステロイドがデキサメタゾンである、項目１記載の方法。
（項目１３）
前記抗体及び追加的活性剤を同じ送達方法又は経路により前記被験体に投与することができる、項目１記載の方法。
（項目１４）
前記抗体及び追加的活性剤を異なる送達方法又は経路により前記被験体に投与することができる、項目１記載の方法。
（項目１５）
補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含むエアロゾル組成物であって、該組成物が被験体における肺の状態を防止又は治療するのに適している組成物。
（項目１６）
エアロゾル化に適する組成物中で前記抗体が製剤される、項目１５記載のエアロゾル組成物。
（項目１７）
追加的活性剤を更に含む、項目１５記載のエアロゾル組成物。
（項目１８）
ａ）補体カスケードの活性化を抑制する抗体；及びｂ）ネブライザーを含む生物医薬品パッケージであって、該パッケージが被験体の肺の状態を防止又は治療するのに適しているパッケージ。
（項目１９）
前記ネブライザーがジェットエアネブライザー、超音波ネブライザー、振動メッシュネブライザー及び衝撃波ネブライザーよりなる群から選択される、項目１８記載の生物医薬品パッケージ。
（項目２０）
更に使用のための説明書を含む、項目１９記載の生物医薬品パッケージ。
（項目２１）
更に追加的活性剤を含む、項目１９記載の生物医薬品パッケージ。
（項目２２）
ａ）吸入器；及びｂ）吸入送達のために製剤された抗体を含む肺薬物送達キット。
（項目２３）
前記吸入器が定量吸入器である、項目２２記載のキット。
（項目２４）
前記定量吸入器が加圧式定量吸入器である、項目２３記載のキット。
（項目２５）
前記吸入器が更に保持チャンバーを有する、項目２２又は２３記載のキット。
（項目２６）
前記吸入器がネブライザーである、項目２２記載のキット。
（項目２７）
前記ネブライザーが超音波ネブライザーである、項目２６記載のキット。
（項目２８）
前記ネブライザーがジェットエアネブライザーである、項目２６記載のキット。
（項目２９）
前記吸入器がドライパウダー吸入器である、項目２２記載のキット。
（項目３０）
ａ）１ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌを含む抗Ｃ５抗体組成物；及びｂ）霧状化による投与を示すラベルを含む肺薬物送達キット。
本特許又は出願のファイルは彩色された少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面を伴った本特許又は特許出願の公開物は、要請及び必要な代金の支払いに応じてＯｆｆｉｃｅにより提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は抗Ｃ５ｍＡｂ、ＢＢ５．１によるＣ５ａ及びＣ５ｂ−９の形成のブロッキングを示す。抗Ｃ５ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）又は対照ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）の単回ｉｖ又はｉｐ注射を受けた動物のＣ５ｂ−９媒介溶血の抑制の薬力学的プロファイル（Ａ）。黒塗りの円はｉｖ（ｎ＝２）又はｉｐ（ｎ＝２）のいずれかにより対照ｍＡｂを投与されている４対照動物のデータを示す。黒塗りの三角形はｉｐ抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物（ｎ＝３）を示す。白抜きの三角形はｉｖ抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物（ｎ＝３）を示す。Ｃ５ａ媒介好中球遊走（Ｂ）はインビトロ試験において分析した。ザイモサン活性化血清（２０％）をＣ５ａの原料として使用した。抗Ｃ５ｍＡｂ（１００μｇ／ｍｌ）を血清試料に添加した後、記載の通りザイモサン活性化を行った（ｎ＝８）。＊はザイモサン活性化血清試料と比較した場合にｐ＜０．０５を示す。図４Ｃ及びＤ以外の全図面においてＢＡＬＢ／ｃマウスを使用した。
【図２】図２はＯＶＡ誘発への気道応答及び３種の重要なチェックポイントの定義を示す。Ａ：ｓＲａｗの長手方向の変化を示す代表的ＤＣＰ結果。１０分間５％ＯＶＡを用いたエアロゾル攻撃の後、ＥＡＲの外観を１５分において、その後５時間にＬＡＲにより観察した。Ｂ：疾患の過程の間の３つの重要なポイント。チェックポイント１：抗Ｃ５ｍＡｂを第２５、２９及び３１日にｉｐ注射により投与した。下気道の機能の分析及び気道炎症の定量は第３２日において５％ＯＶＡのエアロゾル攻撃後５時間に評価した。チェックポイント２：抗Ｃ５ｍＡｂを第３３日において、第３２日の初回気道応答からの回復後にｉｐ注射により投与した。ＡＨＲは第３５日のエアロゾルＭｃｈ攻撃に応答したベースラインからのＲＬ及びＣｄｙｎの変化を評価することにより試験した。チェックポイント３：Ｃ５抑制は第３５日のＥＡＲの間、ＢＢ５．１にｉｖ又はエアロゾル投与の何れかにより行った。下気道機能は５％ＯＶＡ誘発後５時間にＬＡＲのピークの間に測定した。
【図３】図３はチェックポイント１、気道炎症の開始時のＣ５の寄与を示す。第３２日における５〜６匹のマウスの平均血清ＯＶＡ特異的抗体力価をＥＬＩＳＡにより測定した（Ａ）。斜線陰影棒グラフ：ＯＶＡ特異的ＩｇＧ。白色棒グラフ：ＯＶＡ特異的ＩｇＥ。又、第３２日において、５％エアロゾルＯＶＡ誘発後５時間にＲＬ（Ｂ）及びＣｄｙｎ（Ｃ）の測定の為に動物に気管挿管し、その後肺（Ｄ）の組織学的分析を行った。対照ｍＡｂ投与マウスの平均の組織学的評点（Ｆ）は２±０．２８であったのに対し、コルチコステロイド投与動物は０．６４±０．２１（Ｇ）、及び抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物は１．２５±０．２５（Ｈ）であり、それに対し擬似マウスでは炎症は全く存在せず、評点＝０であった（Ｅ）。特段の記載が無い限り、本図面及び全ての後続する図面において、＊は投与動物（即ちコルチコステロイド又は抗Ｃ５ｍＡｂ投与）を対照ｍＡｂ投与動物と比較した場合にｐ＜０．０５であることを示し、黒塗りの四角形はコルチコステロイド投与マウスをＣ５又はＣ５ａＲターゲティング抗体投与マウスと比較した場合にｐ＜０．０５であることを示している。明確化のために、全ての対照ｍＡｂ投与動物は後続する全ての図面において対照として標示する。矢印は好酸球浸潤を示す。ギームザ染色、倍率＝１００Ｘ。
【図４】図４はチェックポイント２、ＡＨＲの発生時のＣ５の寄与を示す。Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウス（Ａ及びＢ）及びＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウス（Ｃ及びＤ）を同一の様式においてＯＶＡで免疫化した（図２Ｂ）。動物を無作為化し、第３３日に記載した投与を行った（ｉｐ）。第３５日に、ＲＬ（Ａ及びＣ）及びＣｄｙｎ（Ｂ及びＤ）の測定の間に気管挿管を介してエアロゾルＭｃｈ攻撃を行った。ＲＬ及びＣｄｙｎにおける変化は各エアロゾル攻撃後のベースラインのパーセントとして表示した。ＯＶＡ免疫化を行うか行わなかったＣ５ｄマウスのサブグループは、Ｍｃｈ攻撃前３時間にｍＣ５ａ２００μｇで再生（ｉｖ）した。Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスについては、＊はステロイド又は抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物を対照ｍＡｂ投与動物と比較した場合にｐ＜０．０５を示す。Ｃ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスについては、対照ｍＡｂ（ｎ３）又は抗Ｃ５ｍＡｂ（ｎ＝３）の何れかを投与したｍＡｂ投与動物（ｎ＝６）をｒｍＣ５ａで再生したＯＶＡ免疫化Ｃ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスと比較した場合に、ｐ＜０．０５であることを示す。対照ｍＡｂ及び抗Ｃ５ｍＡｂを投与したＣ５ｄ動物の間には統計学的な差は無かった。
【図５】図５はチェックポイント３、進行中の気道応答の間のＣ５の寄与を示す。第３２日のアレルゲン誘発に応答して気道応答を前回経験している動物に、第３５日に二回目のエアロゾルアレルゲン攻撃を行った。ＥＡＲのピークの間、動物を無作為化し、記載した投与を行った（ｉｖ）。ＯＶＡ誘発後５時間にＲＬ（Ａ）及びＣｄｙｎ（Ｂ）の測定の為に動物に気管挿管した（群当たりマウスｎ＝７〜８匹）。
【図６】図６はＢＡＬＦのＷＢＣ計数及び分画分析を示す。ＢＡＬＦはチェックポイント１（Ａ）又はチェックポイント３（Ｂ及びＣ）におけるエアロゾルアレルゲン誘発後５時間に得た。総ＢＡＬＦのＷＢＣ計数（Ａ及びＢ）及びその分画分析（Ｃ）を二重盲検方式により病理学者が行った。６（Ｃ）について、白色棒グラフ：肺胞マクロファージ。斜線陰影棒グラフ：好酸球。黒色棒グラフ：好中球。陰影棒グラフ：リンパ球。（群当たりマウスｎ＝６〜８匹）。
【図７】図７は炎症メディエーターのＢＡＬＦ値を示す。ＢＡＬＦはチェックポイント１（斜線陰影棒グラフ）又はチェックポイント３（黒色棒グラフ）におけるエアロゾルアレルゲン誘発後５時間に得た。ＩＬ−５（Ａ）、ＩＬ−１３（Ｂ）、ヒスタミン（Ｃ）、エオタキシン（Ｄ）、ＲＡＮＴＥＳ（Ｅ）、活性化ＴＧＦ−β（Ｆ）、ＴＮＦ−α（Ｇ）及びプロＭＭＰ９（Ｈ）をＥＬＩＳＡにより測定した（群当たりｎ＝６〜８試料）。
【図８】図８はチェックポイント３における肺内Ｃ５活性化の寄与を示す。結果は同一の実験操作による３つの別個の実験からプールしたデータを示す。動物は５％ＯＶＡによりエアロゾル攻撃し、無作為化した。次にＥＡＲ中、動物にジェットネブライザーを介して記載された投与の１つをエアロゾル投与により行った。擬似免疫マウスにはエアロゾルＰＢＳを投与した。全動物につき、ＯＶＡ誘発後５時間にＲＬ（Ａ）及びＣｄｙｎ（Ｂ）の測定の為に動物に気管挿管した。ＢＡＬＦＷＢＣ計数（Ｃ）及びプロＭＭＰ９（Ｄ）は大多数の動物において分析した。対照ｍＡｂ（ｎ＝１５）及び対照ｓＩｇＧ投与マウス（ｎ＝４）のデータをプールした。抗Ｃ５Ｆａｂ（ｎ＝３）を除き、全ての他のコホートにおいてｎ＝６〜１９匹とした。
【図９】図９は樹立された気道炎症を有する被験体におけるＡＨＲの発生に対する複合療法の結果を示す。結果は本明細書に記載したチェックポイント２試験に基づいて得られた。投与はｉｐの代わりに霧状化により第３２日に送達した。Ｍｃｈ攻撃は第３５日に行った。抗Ｃ５については、３ｍｇ／ｍｌのＢＢ５．１を１０分後に霧状化した。２ｍｇ／ｍｌのステロイドを１０分間霧状化した。組み合わせについては、最終濃度はＢＢ５．１で３ｍｇ／ｍｌ、そしてステロイドで２ｍｇ／ｍｌとし、これは１０分間霧状化した。
【図１０】図１０は抗体の霧状化に適する例示される製剤を示す。
【図１１】図１１は霧状化投与後２日のＭｃｈ攻撃の結果を示す。
【図１２】図１２は粒径分布を示す。
【図１３】図１３は霧状化及び送達の効率を示す。
【図１４】図１４はエアロゾル化したエクリズマブのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図１５】図１５は２種の異なるネブライザーを用いたエアロゾル化エクリズマブのＳＥＣＨＰＬＣ分析を示す。
【図１６】図１６は抗Ｃ５モノクローナル抗体の反復長期エアロゾル投与が気道炎症を誘導しないことを示している。ここではマウスを１０週間の投与に付し；擬似マウスは１０週間に渡り週２回１０分間ＰＢＳを投与し；対照マウスには１０週間に渡りやはり週２回霧状化により１０分間ＨＦＮ７．１（アイソタイプマッチマウス抗体）を投与し；抗Ｃ５抗体（ＢＢ５．１）投与マウスには１０週間に渡りやはり週２回霧状化により１０分間ＢＢ５．１を投与した。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
（この出願の詳細な説明）
概論
本出願は以下の通り特定の用語を略記する。
【００１８】
ＡＨＲ：気道応答亢進；ＢＡＬＦ：気管支肺胞洗浄液；Ｃｄｙｎ−動的肺コンプライアンス；Ｃ５ａＲ：Ｃ５ａ受容体；Ｃ５ｄ：Ｃ５不全；Ｃ５ｓ：Ｃ５完全；ＤＣＰ：二重チャンバープレチスモグラフ；ＥＡＲ：早期気道応答；ＩＣ：免疫複合体；ＬＡＲ：後期気道応答；Ｍｃｈ：メタコリン；ｍＣ５ａ：組み換えマウスＣ５ａ；ＲＬ：肺抵抗；ｓＲａｗ：特異的気道抵抗；ｓＩｇＧ：血清中ＩｇＧ。
【００１９】
補体系
補体系は細胞及びウィルスの病原体の侵入に対抗して防御するために身体の他の免疫学的系と共同して作用する。少なくとも２５の補体蛋白質が存在し、これ等は血漿蛋白質及び膜コファクターの複雑な集合物として発見されている。血漿蛋白質は脊椎動物の血清中のグロブリンの約１０％を構成している。補体成分はその免疫防御機能を、一連の内因性であるが厳密に酵素的な切断及び膜結合の事象において相互作用することにより達成する。結果として生じる補体カスケードはオプソニンの免疫調節性及び溶解性の機能を有する産物の生産をもたらす。
【００２０】
補体カスケードは古典的経路又は代替経路を介して進行する。これ等の経路は多くの成分を共有しており、そして、それらはその初期の工程においては異なるが、標的細胞の活性化及び破壊に必要な同じ「末端補体」成分（Ｃ５〜Ｃ９）に集結し、これを共有する。
【００２１】
古典的補体経路は典型的には標的細胞上の抗原部位の抗体認識及びそれとの結合により開始される。代替経路は通常は抗体依存性であり、そして、病原体表面上の特定の分子により開始され得る。両方の経路とも補体成分Ｃ３が活性プロテアーゼ（各経路で異なる）により分解されてＣ３ａおよびＣ３ｂが得られる点において集結する。補体攻撃を活性化する他の経路は事象順序のより後期において作用することができ、補体機能の種々の態様をもたらしている。
【００２２】
Ｃ３ａはアナフィラトキシン（後述参照）である。Ｃ３ｂは細菌及び他の細胞に、そして特定のウィルス及び免疫複合体に結合し、そして循環系からの除去の為にそれらにタグ付けする。（この役割におけるＣ３ｂはオプソニンとして知られている）。Ｃ３ｂのオプソニン機能は補体系の最も重要な抗感染作用であると考えられている。Ｃ３ｂ機能をブロックする遺伝子的疾患を有する患者は広範な種類の病原体生物による感染の傾向があるのに対し、補体カスケード順序の後期において疾患を有する患者、即ち、Ｃ５機能をブロックする疾患を有する患者はナイセリア感染症に対してのみ高い傾向を示し、そしてその後は幾分より高い傾向を示すことがわかっている（Ｆｅａｒｏｎ，Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２ｄ Ｅｄ．Ｆａｎｔａ ａｎｄ Ｍｉｎａｋｅｒ，ｅｄｓ．Ｂｒｉｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｏｍｅｎ’ｓ ａｎｄ Ｂｅｔｈ Ｉｓｒａｅｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌｓ，１９８３）。
【００２３】
Ｃ３ｂはまた各経路に独特の他の成分と複合体を形成して古典的又は代替のＣ５コンバターゼを形成し、これがＣ５を切断してＣ５ａ及びＣ５ｂとする。即ち、Ｃ３は、それが代替及び古典経路の両方にとって必須であることから、補体反応順序における中枢的蛋白質とみなされている（Ｗｕｒｚｎｅｒ，等、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｉｎｆｌａｍｍ．８：３２８−３４０，１９９１）。Ｃ３ｂのこの特性はＣ３ｂに作用してｉＣ３ｂを生成する血清プロテアーゼ因子Ｉにより調節される。オプソニンとしてなお機能しながら、ｉＣ３ｂは活性Ｃ５コンバターゼを形成できない。
【００２４】
Ｃ５は約７５μｇ／ｍｌ（０．４μＭ）の濃度で正常血清中に存在する１９０ｋＤａのベータグロブリンである。Ｃ５はグリコシル化されており、その質量の約１．５〜３パーセントは炭水化物に帰属する。成熟Ｃ５は６５６アミノ酸の７５ｋＤａのベータ鎖にジスルフィド結合した９９９アミノ酸の１１５ｋＤａのアルファ鎖のヘテロ二量体である。Ｃ５は単一コピー遺伝子の１本鎖前駆体蛋白質産物として合成される（Ｈａｖｉｌａｎｄ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１，１４６：３６２−３６８）。この遺伝子の転写産物のｃＤＮＡ配列は１８アミノ酸のリーダー配列に沿った１６５９アミノ酸の分泌プロＣ５前駆体を予測させる。
【００２５】
プロＣ５前駆体はアミノ酸６５５及び６５９の後で切断され、アミノ酸末端フラグメントとしてのベータ鎖及びカルボキシ末端フラグメントとしてのアルファ鎖を生じ、２つの間の４アミノ酸が欠失する。Ｃ５は、アルファ鎖の最初の７４アミノ酸を含むアミノ末端フラグメントとして、代替又は古典的Ｃ５コンバターゼのいずれかによりＣ５のアルファ鎖から切断される。Ｃ５ａの１１ｋＤａの質量の約２０％が炭水化物に帰属する。コンバターゼ作用のための切断部位は、１８アミノ酸リーダー配列を有する１６５９アミノ酸プロＣ５前駆体配列のアミノ酸残基７３３かそれに直ぐ隣接する箇所である（米国特許第６，３５５，２４５号に記載の配列番号２）。この切断部位において、又はそれに隣接して結合する化合物は切断部位へのＣ５コンバターゼ酵素の接触をブロックする能力を有し、これにより補体抑制剤として作用する。
【００２６】
Ｃ５はまたＣ５コンバターゼ活性以外の手段によっても活性化できる。制限トリプシン消化（Ｍｉｎｔａ ａｎｄ Ｍａｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７７，１１９：１５９７
−１６０２；Ｗｅｔｓｅｌ ａｎｄ Ｋｏｌｂ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８２，１２８：２２０９−２２１６）及び酸処理（Ｙａｍｍａｍｏｔｏ ａｎｄ Ｇｅｗｕｒｚ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７８，１２０：２００８；Ｄａｍｅｒａｕ等、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９，２６：１１３３−１１４２）も又Ｃ５を分解して活性なＣ５ｂを生成することができる。
【００２７】
Ｃ５ａは別のアナフィラトキシンである。Ｃ５ｂはＣ６、Ｃ７及びＣ８と複合体化して標的細胞表面においてＣ５ｂ−８複合体を形成する。幾つかのＣ９分子の結合により、膜攻撃複合体（ＭＡＣ、Ｃ５ｂ−９、末端補体複合体−ＴＣＣ）が形成される。十分な量のＭＡが標的細胞膜内に挿入されれば、それらが形成した開口部（ＭＡＣ細孔）は標的細胞の急速な浸透圧溶解を媒介する。より低い非溶解性の濃度のＭＡＣは他の作用をもたらすことができる。特に、内皮細胞及び血小板内へのＣ５ｂ−９複合体の少数の膜挿入は有害な細胞活性化を引き起こす場合がある。一部の場合においては、活性化は細胞溶解に先行する場合がある。
【００２８】
上記した通り、Ｃ３ａ及びＣ５ａはアナフィラトキシンである。これ等の活性化された補体成分は肥満細胞の脱顆粒化をトリガーする場合があり、これによりヒスタミン及び他の炎症メディエーターが放出され、その結果、平滑筋の収縮、血管透過性の増大、白血球活性化、及び過剰細胞をもたらす細胞増殖を含む他の炎症現象が起こる。Ｃ５ａはまた補体活性化の部位にプロ炎症性顆粒球を誘引する作用を有する走化性ペプチドとしても機能する。
【００２９】
肺の疾患又は状態及び補体系
喘息等の特定の肺疾患又は状態は、慢性の気道炎症、気道閉鎖及び種々の刺激への気道の応答亢進性（ＡＨＲ）の組み合わせを特徴とし得る。これは抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｈ２サイトカイン及びアレルゲン特異的ＩｇＥを包含する順応性免疫応答により主に媒介され、肺の炎症及びＡＨＲに到ると考えられている。細菌、ウィルス及びカビの侵入に対抗した生得の免疫防御の中核を構成する（Ｎａｇｉ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１１２：７２９−７３４；Ｋａｓａｍａｔｓｕ等、Ａｒｅｒｕｉ（１９９３）４２：１６１６−１６２２；Ｂｊｏｒｎｓｏｎ等、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．（１９９１）１４３：１０６２−１０６６）補体及びその活性化成分は、古典経路、代替の経路及びレクチン経路を介して活性化されることができる（Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９６）１４７：６９−７０）。これ等の３種の活性化経路は補体成分Ｃ５において集結した後にＣ５ａ及びＣ５ｂ−９を形成し、これ等は共に強力な生物学的応答、例えば組織傷害、炎症、アナフィラキシー応答及び細胞溶解を極めて低濃度で誘発する（Ｔａｋａｆｕｊｉ等、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）１０４Ｓｕｐｐｌ．１：２７−２９）。更に、Ｃ５はアレルゲン曝露後に活性化される場合がある（Ｎａｇａｔａ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８７）８０：２４−３２）。アレルギー性喘息の動物モデルから得られた最近のデータによれば、活性化された補体成分、例えばＣ５ａは生得及び獲得の免疫の間の重要な関連性をもたらしていることが示唆されている（Ｋａｒｐ等、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１：２２１−２２６）。しかしながら、喘息の発症におけるＣ５及びその活性化成分の関与に関しては当該分野でなお異論が存在する（Ｋａｒｐ等、上出；Ｇｅｒａｒｄ等、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：７０５−７０８；Ａｂｅ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６７：４６５１−４６６０；Ｌｕｋａｃｓ等、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００１）２８０（３）：Ｌ５１２−Ｌ５１８）。
【００３０】
気管支喘息に関する幾つかの実験モデルは、Ｃ５及びその活性化成分が気道炎症及び気管支収縮（又は気管支の収縮）の発症に関与していることを示している。種々の補体抑制
剤を用いた抑制試験では、げっ歯類においてＡＨＲ又は気道炎症が顕著に低減されている（Ａｂｅ等、上出；Ｌｕｃａｓ等、上出）。Ｃ５活性化の潜在的関与はまた、臨床症状の重症度がＣ５活性化の範囲に相関しているという臨床観察事例にまで拡張されている（Ｇｏｎｃｚｉ等、Ａｌｌｅｒｇｙ（１９９７）５２：１１１０−１１１４）。一方、研究によりＣ５不全（Ｃ５ｄ）はマウスにおけるアレルゲン誘導ＡＨＲへの増大した感受性をもたらすことが判っており、そしてこの所見は喘息の発症をモジュレートすると報告されている重要なＴｈ１サイトカインであるＩＬ−１２の低減された生産の証拠により裏付けられている（Ｋａｒｐ等、上出）。論議の中心における重要な問題点は、Ｃ５及びその活性化成分が、Ｃ５ｄ動物の試験（Ｋａｒｐ等、上出）及び疾患の過程における介入を用いた実験によりそれぞれ示唆される通り、発症の感作期及びエフェクター期の間にプロ炎症性又は抗炎症性であるかどうかである（Ａｂｅ等、上出；Ｌｕｋａｃｓ等、上出）。更に、別の重要な問題は肺内活性化補体成分が発症において重要な役割を果たし、そして獲得免疫系に対する活性化Ｃ５成分の潜在的抗炎症作用を克服するかどうかである（Ｋａｒｐ等、上出）。
【００３１】
本出願は疾患の過程の間の３つの重要なポイントにおけるＣ５及びその活性化成分の研究に関し、喘息の発症における生得の免疫系のこの必須成分の重要な機序を概説する。下気道の機能の包括的分析及び気道炎症の複数のパラメーターの定量を実施している。本明細書においては、試験はＣ５が気道の炎症の開始に寄与することを示しており、樹立された気道炎症を有する動物におけるＡＨＲの発生におけるＣ５の重要な寄与、及びアレルゲン攻撃への進行中の気道応答を持続させる場合の活性化Ｃ５成分の重要な役割を明らかにしている。
【００３２】
喘息様症状の発症に必要な病理生理学的特徴は気道の炎症である。遺伝的素因を有する個体は、アレルゲン特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化、アレルゲン特異的ＩｇＥの生産及び好酸球のリクルートメントに決定的に関与しているＩＬ−４及びＩＬ−５等のＴｈ２サイトカインの分極を包含する環境曝露へのモジュレートされた獲得免疫応答を有する場合がある（Ｃｉｅｓｌｅｗｉｃｚ等Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９９）１０４：３０１−３０８）。より最近では、ＩＬ−３が発症で重要な役割を果たすものとして同定されており、動物において気道応答を誘導するために必要かつ十分であると報告されている（Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８）２８２：２２５８−２２６１）。本明細書に記載する試験で示す通り、コルチコステロイドの広範な抗炎症活性スペクトル、例えばＴｈ２サイトカインプロファイルのモジュレーション（図７ＡおよびＢ）及び下気道内への炎症細胞のリクルートメントのブロッキング（図３Ｄ）は、その強力な抗喘息活性に相関している。より早期に報告されているその抗炎症活性（Ｗａｎｇ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９６）９３：８５６３−８５６８）と合致して、チェックポイント１におけるＣ５抑制はアレルゲン暴露への獲得免疫系の応答に対して顕著な影響を与えることなく気道炎症を顕著に低減している。更に、Ｃ５ｄ動物はＣ５ｓ動物によって発症するものと同程度の気道炎症を発症している。１つの考えられる説明は、気道がアレルゲン及び感染に直接曝露されることである。これ等の曝露は、他の補体成分、例えば極めて類似したプロ炎症特性を有し（Ｔａｋａｆｕｊｉ等、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）１０４、補足、１：２７−２９；Ｎａｇａｔａ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８７）８０：２４−３２）、そして、発症に寄与するものとして知られている（Ｇｅｒａｒｄ等、Ｃｌｉｎ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：７０５−７０８）Ｃ３ａも活性化する場合がある。本出願に記載したデータは、活性化されたＣ５成分は、アレルゲンのエアロゾル曝露への獲得免疫応答の活性化を必要とする気道炎症の開始には決定的に関与しているが、必要ではないことを示している（Ｃｉｅｓｌｅｗｉｃｚ等、上出）。しかしながら、気道炎症が既に十分樹立されているチェックポイント２及び３においては、本明細書に記載したデータは、Ｃ５抑制は気道炎症の軽減及び下気道機能の改善においてはコルチコステロイドと同等又はそれより良好な薬効を有していることを示している（例えば図４〜８参照）。
【００３３】
喘息の第２の特徴、即ち非特異的刺激に応答したＡＨＲの発生を別の重要なチェックポイントとして選択した。数系統のＣ５ｓ及びＣ５ｄマウスを予備スクリーニングすることにより、内因性ＡＨＲの原因であるムスカリンアセチルコリン受容体の機能に対する遺伝子的な影響（Ｄｅ Ｓａｎｃｔｉｓ等、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．（１９９７）１５６：Ｓ６２−Ｓ８８；Ｌｅｖｉｔｔ等、ＦＡＳＥＢ Ｊ．（１９８８）２：２６０５−２６０８）が本明細書に記載した試験から排除される。内因性ＡＨＲを有さない動物を使用した場合、Ｃ５抑制は樹立された気道炎症を有するＣ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるエアロゾルＭｃｈ攻撃に対するＡＨＲの発生を防止するために十分であることが判っている（図４Ａ及びＢ）のに対し、ｒｍＣ５ａによるＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスの再生ではやはり樹立された気道炎症の存在下においてもＡＨＲが復旧している（図４Ｃ及びＤ）。これ等のデータはＣ５、特にＣ５ａは生得の免疫応答とＡＨＲに関する気道応答の重要な成分とを直接関連付ける役割を果たしている。Ｃ５ａＲは気道平滑筋細胞及び気道上皮において発見されている（Ｄｒｏｕｉｎ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６６：２０２５−２０３２）。気道平滑筋及び上皮上の受容体との活性化されたＣ５成分特にＣ５ａの直接の相互作用が以前に報告されている（Ｉｒｖｉｎ等、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．（１９８６）１３４：７７７−７８３；Ｌａｒｓｅｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）３：５９−８５）が、本明細書に提示するデータは、ｒｍＣ５ａによる維持Ｂ１０Ｄ２ｏＳｎマウスの全身再生（ｉｖ）後のＭｃｈ攻撃の間の下気道の機能に対する最小限の影響により示される通り、ＡＨＲの維持が気道上皮、気道平滑筋、炎症細胞及びその炎症メディエーターの間の複雑な相互作用に依存していることを示している（図４Ｃ及びＤ）。
【００３４】
エアロゾルアレルゲン誘発後の進行中の気道応答は、本明細書に記載した試験における第３の重要なチェックポイントとして機能する。複数の炎症メディエーターの旺盛な生産及び放出を伴ったＥＡＲ及びＬＡＲの発生は、活性化Ｃ５成分と他の生得及び獲得免疫応答の成分との複雑な相互作用及びその発症における役割を調べる良好な機会を与える。本明細書に記載するデータは、抗Ｃ５モノクローナル抗体（ｍＡｂ）又はそのＦａｂフラグメントのいずれかによるＣ５抑制が、肺内炎症活動の軽減において、並びに、下気道の機能の改善において、同様のインビボ効率を達成していることを明らかにしている。
【００３５】
本明細書に記載するデータは又、気道炎症の存在下、活性化Ｃ５成分が下流の炎症カスケードの重要な調節物質として機能することを示唆している。この調節作用は気道管腔内への炎症細胞の遊走、並びに、チェックポイント３における下気道機能の顕著な変化に相当する複数の有害なメディエーターの放出に影響するその能力により明らかにされる。Ｃ５ａは恐らくは炎症細胞の最も強力な活性化剤であり（Ｔａｋａｆｕｊｉ等、上出）、そして、Ｃ５ａＲは循環系の白血球、肥満細胞、マクロファージ及び内皮細胞上で同定されている（Ｃｈｅｎｏｗｅｔｈ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７８）７５：３９４３−３９４７）。抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ投与後、下気道機能の顕著な改善が肺内炎症活動の顕著な存在と乖離していることは、Ｃ５ａが気道平滑筋細胞及び上皮上に発現される自身の受容体と直接結合していることが、部分的には、気道の収縮の原因であるという仮説と合致している（Ｉｒｖｉｎ等、上出）。データは又、Ｃ５ｂ９の化学走性活性及び細胞活性化特性（Ｃｚｅｒｍａｋ等、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈａｔｈｏｌ．（１９９９）１５４：１５１３−１５２４）がＣ５ａ９結合の不在下における顕著な肺内炎症活動の原因であることも示している。樹立された気道炎症及びＩＣの存在下で、Ｃ５ｂ−９は、Ｃ５ａと炎症細胞上に発現されたその受容体との結合とは無関係に、プロＭＭＰ９等の複数のメディエーターの放出をトリガーすることにより下流の炎症カスケードを十分調節することができる（図８Ｄ）。Ｃ５ｂ−９の上昇したレベルの存在は複数の炎症メディエーターの存在と共に、抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ投与動物における気管支管腔内への炎症細胞の遊走に寄与している（図８Ｃ）。
【００３６】
獲得及び生得の免疫系の両方とも、気管支痙攣、改変された血管の透過性、炎症細胞の接着及び遊走、粘膜の浮腫及び過剰な粘液分泌の原因であり、最終的には３種の独特であるが相互に依存した現象、即ち気道炎症、気道閉塞及びＡＨＲをもたらす、ロイコトリエン、プロスタグランジン、ヒスタミン、アルカリ性蛋白質、サイトカイン、ケモカイン及び酵素を包含する複数の炎症メディエーターの生産及び放出の複雑な過程に寄与していた。多くの重複する生物学的機序があるため、遺伝子欠損動物の場合等の該当する状況下においては、これ等の重複した機序はより顕著な様式で補償及び寄与をもたらすと考えられる。これ等の成分の複雑な関係及び相互作用は気道の炎症、閉塞及びＡＨＲ、並びに他の肺の疾患又は状態の原因となる。
【００３７】
肺の実質細胞は、Ｃ５を生産し、そしてＣ５を活性化フラグメントに分解する能力を保有している（Ｄｅｓａｉ等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．（１９８４）１：２０１−２１６）。生得免疫応答の部分としてのＣ５の活性化は、部分的には、アレルゲン（Ｎａｇａｔａ等、上出）、ハウスダスト（Ｍａｒｕｏ等、上出）、煙（Ｒｏｂｂｉｎｓ等、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９１）２６０：Ｌ２５４−Ｌ２５９）又は気道感染（Ｎａｇｙ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１１２：７２９−７３４；Ｋａｓａｍａｔｓｕ等、Ａｒｅｒｕｇｉ（１９９３）４２：１６１６−１６２２；Ｂｊｏｒｎｓｏｎ等、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．（１９９１）１４３：１０６２−１０６６）への曝露後のＣ５の直接の酵素切断の為、自己防御応答の有害な副生成物に十分なり得るものである。アレルゲン曝露後の肺内ＩＣの形成も補体カスケードを活性化する場合もある（Ｌａｒｓｅｎ，上出）。この仮説は活性化Ｃ５成分が気道の上皮側に主に位置し、そして、非喘息個体においては、補体の肺内活性化は十分調節されるということを提案している（Ｖａｒｓａｎｏ等、Ｔｈｏｒａｘ（２０００）５５：３６４−３６９）。この仮説と合致して、本発明者等のデータは、肺内Ｃ５阻害はチェックポイント３（図８）及びチェックポイント２において全身Ｃ５抑制と同様の効率を達成したことを明らかにしている。これ等のデータは更に、肺内活性化Ｃ５成分は抗炎症性ではなく主要プロ炎症性の力であることを示唆している。
【００３８】
試験は又、好中球又は好酸球により生産又は放出された炎症メディエーターに対するＣ５の抑制の作用を示している。これ等の炎症メディエーター、特にＴＧＦ−β、ＲＡＮＴＥＳ及びプロＭＭＰ９は、不良な長期予後を有する個体に関する焦点である、下気道のリモデリングと修復をもたらす、気管支平滑筋肥大及び呼吸器上皮の基底膜下のコラーゲンの付着の誘導により、気道に不可逆的損傷を引き起こす場合がある（Ｂｏｕｌｅｔ等、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．（２０００）１６２：１３０８−１３１３）。従って、独特で異なる抗炎症機序を利用するＣ５阻害はコルチコステロイド及び他の活性剤の強力な抗炎症作用を補完し、そして長期予後のための付加的な利益を有することができる。
【００３９】
本試験は喘息を有する個体において観察される気道の複雑な機能的変化が複雑な炎症の過程と共存していることを明確に表している。一方で活性化Ｃ５成分、例えばＣ５ａはその気道Ｃ５ａＲとの結合を介して、生得免疫系とＡＨＲとの間を直接関連付ける役割を果たしている。他方で、Ｃ５ａ及びＣ５ｂ−９はＩＣ及び樹立された気道炎症の存在下、それらの化学走性及び細胞活性化の活動を介して下流の炎症カスケードを調節する。Ｃ５ａ及びＣ５ｂ−９の形成をブロッキングすることは、下気道の機能を改善するのみならず、肺内の炎症活動を軽減する。これとは対照的に、Ｃ５ａＲ拮抗剤は肺内の炎症活動に劇的に影響することなく下気道の機能を顕著に改善する。
【００４０】
エアロゾル及び霧状化組成物
１つの態様において、本出願は補体カスケードの活性化を抑制する抗体を送達するための肺薬物送達組成物及び／又は装置に関する。肺薬物送達組成物は肺の疾患又は状態を治療するのに有用である。例えば、エアロゾル組成物は、呼吸管への追加的な活性剤と組み合わせた抗体の送達の為に提供される。呼吸管は口腔咽頭部及び喉頭を含む上気道、それに引き続き、気管、次いで気管支及び細気管支への分岐部を含む下気道を包含する。上下気道は誘導気道と称される。次に末端細気管支が分割して呼吸細気管支となり、これが次に最終的な呼吸域である肺胞、又は深部肺に到る。
【００４１】
肺の薬物送達は吸入により達成してよく、そして吸入による投与は本明細書においては経口及び／又は経鼻であってよい。肺送達のための薬学的装置の例として、定量吸入器（ＭＤＩ）、ドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）及びネブライザーが挙げられる。対象となる抗体及び／又は活性剤の送達に適合できる吸入による送達系の例は、例えば米国特許第５，７５６，３５３号；第５，８５８，７８４号；及びＰＣＴ出願ＷＯ９８／３１３４６；ＷＯ９８／１０７９６；ＷＯ００／２７３５９；ＷＯ０１／５４６６４；ＷＯ０２／０６０４１２に記載されている。抗体及び／又は活性剤の送達のために使用してよい他のエアロゾル製剤は米国特許第６，２９４，１５３号；第６，３４４，１９４号；第６，０７１，４９７号及びＰＣＴ出願ＷＯ０２／０６６０７８；ＷＯ０２／０５３１９０；ＷＯ０１／６０４２０；ＷＯ００／６６２０６に記載されている。
【００４２】
加圧定量吸入器（ｐＭＤＩ）は世界中で最も一般的に使用されている吸入器である。エアロゾルは弁が開放（通常は高圧ガスキャニスターを押し下げることによる）されることにより液体高圧ガスがキャニスター外に噴出される際に形成される。典型的には、薬剤又は治療薬は液体高圧ガスに懸濁している小粒子（通常は直径数ミクロン）内に含有されるが、一部の製剤においては、薬剤又は治療薬は高圧ガス内に溶解されていてよい。高圧ガスはエアロゾルが装置を離れると急速に蒸発し、小型の薬剤又は治療薬の粒子が生じ、これが吸引される。このようなｐＭＤＩで典型的に使用される高圧ガスは限定しないがハイドロフルオロアルカン類（ＨＦＡ）を包含する。界面活性剤もまた、例えばｐＭＤＩと共に薬剤又は治療薬を製剤するために使用してよい。他の溶媒又は賦形剤、例えばエタノール、アスコルビン酸、メタ重硫酸ナトリウム、グリセリン、クロロブタノール及び塩化セチルピリジニウムもまたｐＭＤＩと共に使用してもよい。このようなｐＭＤＩは更に付加装置、例えばスペーサー、保持チャンバー及び他の変形例を含んでよい。
【００４３】
ネブライザーは吸入のための薬剤含有液滴の霧状物を形成する。それらは通常は２種類、即ち超音波ネブライザー及びジェットネブライザーに分類される。新しい型のネブライザーも入手可能であり、それは機能するために超音波や空気圧を必要としない。単回呼吸噴霧器もまた開発されており（例えばＲｅｓｐｉｍａｔ（登録商標）、これは単回呼吸で薬剤を送達するのに用いられ、そして汚染が少ないことから好ましくあり得る。ジェットネブライザーはより一般的であり、そして薬剤含有水リザーバを通過して空気流を噴射するために加圧空気源を使用し、これにより、バッフル上の表面張力と液滴の破壊とが役割を果たす非線形の現象をもたらす粘度誘導表面不安定性が関与する複雑な過程において液滴が形成される。超音波ネブライザーはプレート又はメッシュの機械的振動により液滴を形成する。何れの型のネブライザーにおいても、薬剤は通常はネブライザー中の液体の溶液として含有され、そしてそのため、形成される小液滴は溶液として薬剤を含有する。しかしながら、一部の製剤（例えばＰｕｌｍｉｃｏｒｔ）に関しては、薬剤は水中に懸濁した小粒子内に含有され、これ等がその後、形成される小液滴内部に懸濁した粒子として含有される。特定の賦形剤、例えば塩化ナトリウム（例えば等張性維持のため）、無機の酸及び塩基（例えばｐＨを維持又は調節するため）、窒素ヘッドスペースパージ材、塩化ベンザルコニウム、塩化カルシウム、クエン酸ナトリウム、エデト酸二ナトリウム及びポリソルベート８０等が通常は霧状化に適する製剤中に包含される。
【００４４】
吸入器の第３の型はドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）である。ＤＰＩにおいては、エアロゾルは通常は、それが吸引されるまで装置内に含有される粉末である。治療薬又は薬剤は小粉末粒子（通常は直径が数百万分の１メートル、又はマイクロメートル）として粉末形態において製造される。多くのＤＰＩにおいて、薬剤又は治療薬は典型的には直径５０〜１００マイクロメートルのより大型の糖粒子（例えば乳糖の１水和物）と混合される。乳糖／薬剤凝集塊上の増大した空力学的力により吸入時の薬剤粒子の捕獲が向上し、更に少量の個別粉末用量の充填も容易になる。吸入時、粉末は、乱流及び／又は粒子の凝集塊が衝突するスクリーン又は回転表面等の機械的装置の支援によりその構成粒子にまで分解し、肺内に吸入される気流中に小型の個々の薬剤粉末粒子を放出する。糖粒子は通常は装置内及び／又は口腔咽頭内に残存することが意図される。
【００４５】
出願の１つの態様は補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含むエアロゾル組成物を提供し、組成物は被験体における肺の疾患又は状態を防止又は治療するのに適する。エアロゾル抗体組成物はエアロゾル化抗体を含む組成物であるか、又は、エアロゾル化に適する製剤中に抗体を含む組成物であることができる。抗体はまた追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせ製剤はエアロゾル化に適するものである。或いは、抗体及び追加的活性剤は、エアロゾル化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【００４６】
出願の別の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含む霧状化組成物を提供し、組成物は被験体における肺の疾患又は状態を防止又は治療するのに適する。霧状化抗体組成物は、霧状化抗体を含む組成物であるか、又は、霧状化に適する製剤中に抗体を含む組成物であることができる。同様に、抗体はまた、追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせ製剤は霧状化に適する。或いは、抗体及び追加的活性剤は、霧状化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【００４７】
出願の更に別の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体及びネブライザーを含む生物医薬品パッケージを提供し、パッケージは被験体の肺の疾患又は状態を防止又は治療するのに適している。生物医薬品パッケージは更に、抗体の他に活性剤を含んでよい。生物医薬品パッケージはまた使用のための説明書を含んでもよい。
【００４８】
本出願の抗体は、それがＣ５のＣ５ａ及びＣ５ｂへの分解を防止するようにＣ５に対して特異的であることができる。抗体はＣ５コンバターゼに対して特異的であることができる。或いは、抗体は補体系の成分、例えばＣ５ａ、Ｃ５ｂ又はＣ５ｂ−９に特異的であってよく、そして補体に特異的な抗体は、好ましくは、成分の機能を、例えば成分のその対応する受容体への結合をブロッキングすることにより、又は、補体カスケードにおけるその後のシグナリング又は事象の活性化におけるその機能をブロッキングすることにより、抑制する。特定の実施形態はエクリズマブ又はペキセリズマブ、又は両方を使用する。本出願の抗体又は抗体治療薬は完全長の免疫グロブリン、キメラ抗体（例えばヒト化抗体）、１本鎖抗体、ドメイン抗体（例えばヒト抗体の重鎖（ＶＨ）又は軽鎖（ＶＬ）の何れかの可変領域に相当する抗体の最小の機能的結合単位として定義されるＤｏｍａｎｔｉｓにより開発されたドメイン抗体）、Ｆａｂフラグメント、又はＦａｂフラグメントと変異したＦｃ部分とを有する抗体であることができる。特定の実施形態においては、変異したＦｃ部分が補体を活性化しないか、又は、Ｆｃ部分の変異が補体を活性化するＦｃ部分の能力を低下させる。本出願の抗体はバルク中に生産又は処理し、そして、種々の用量において、適当な材料（例えばガラス又はプラスチック）で製造されたアンプルに充填してよい。抗体は１ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度において製剤中安定であってよい。
【００４９】
本出願の追加的活性剤（又は抗体治療薬以外の活性剤）は別の抗体治療薬（例えば抗補体又は抗Ｃ５抗体、抗ＩｇＥ抗体、例えばＸｏｌａｉｒ（登録商標）又はオマリズマブ、抗ＩＬ−４抗体又は抗ＩＬ−５抗体）、抗ＩｇＥ抑制剤（例えばＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）又はモンテルカストナトリウム）、交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗生物質（例えばトブラマイシン）、デオキシリボヌクレアーゼ（例えばプルモザイム）、抗コリン作用剤（例えばシュウ化プラトロピウム）、コルチコステロイド（例えばデキサメタゾン）、β−アドレノレセプターアゴニスト、ロイコトリエン抑制剤（例えばジロイトン）、５リポキシゲナーゼ抑制剤、ＰＤＥ抑制剤、ＣＤ２３拮抗剤、ＩＬ−１３拮抗剤、サイトカイン放出抑制剤、ヒスタミンＨ１受容体拮抗剤、抗ヒスタミン、抗炎症剤（例えばクロモリンナトリウム）又はヒスタミン放出抑制剤であることができる。本明細書においては、活性剤はまた治療薬又は薬剤とも称してよい。
【００５０】
抗体のエアロゾル化又は霧状化に適する製剤の例は適当なｐＨ（例えばｐＨ６〜８）において生理学的な浸透圧（例えば２８０〜３２０ｍＭ）にある。本出願の製剤は更に賦形剤、例えばポリソルベート８０を含んでよく、これは０．００１５〜０．０２％で使用できる。
【００５１】
米国特許第５，４７４，７５９号は、クロロフルオロカーボンを実質的に含まない、医学的用途において特定の利用性を有するエアロゾル製剤を開示している。製剤は高圧ガス（例えば１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン）、中鎖脂肪酸プロピレングリコールジエステル、中鎖トリグリセリド、場合により界面活性剤、及び場合により補助剤、例えば抗酸化剤、保存料、緩衝剤、甘味料及び矯味剤を含有する。
【００５２】
他の製薬上許容可能な担体も本出願の製剤中に使用してよい。表現「製薬上許容可能な」は、本明細書においては、調和の取れた医学上の判断内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答又は他の問題又は合併症を伴うことなく人間及び動物の組織と接触して使用することに適し、合理的な利益／危険の比において均衡している化合物、物質、組成物及び／又は剤型を指すために用いる。表現「製薬上許容しうる担体」は本明細書においては、ある臓器又は身体のある部分から別の臓器又は身体の部分まで主要拮抗剤を担持するか輸送することに関わる、製薬上許容可能な物質、組成物又はベヒクル、例えば液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又はカプセル化物質を意味する。各担体は製剤の他の成分と適合し、そして患者に対して害とならないという意味において「許容できる」ものでなければならない。製薬上許容可能な担体として機能できる物質のいくつかの例は、（１）糖類、例えば乳糖、グルコース及びスクロース；（２）澱粉、例えばコーンスターチ及びポテトスターチ；（３）セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばカカオ脂及び座薬用ワックス；（９）油脂類、例えばピーナツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油；（１０）グリコール類、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール類、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール；（１２）エステル類、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張性食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸塩緩衝溶液；（２１）医薬品製剤中に使用される他の非毒性の適合する物質を包含する。
【００５３】
これ等の製剤又は組成物を製造する方法は担体及び場合により付随的な１つ以上の成分に本出願の化合物を会合させる工程を包含する。一般的に、製剤は液体担体又は微細分割固体担体又は両方と本出願の化合物とを均質及び緊密に会合させ、そして次に、必要に応じて製品を形状化することにより製造する。
【００５４】
本出願のネブライザーはジェットネブライザー（例えばＰａｒｉ ＬＣ Ｊｅｔ Ｐｌｕｓ又はＨｕｄｓｏｎ Ｔ Ｕｐ−ｄｒａｆｔ ＩＩ）、超音波ネブライザー（例えばＭＡＢＩＳＭｉｓｔ ＩＩ）、振動メッシュネブライザー（例えばＯｍｒｏｎのＭｉｃｒｏａｉｒ）及び衝撃波ネブライザー（ＥｖｉＬａｂｓ Ｓｏｎｉｋ ＬＤ１２０）であることができる。
【００５５】
「エアロゾル組成物」とは肺送達に適する形態又は製剤中の本明細書に記載の抗体及び／又は活性剤を意味する。エアロゾル組成物はドライパウダー形態であってよく、それは霧状化するための溶液、懸濁液又はスラリーであってよく、又は、それは適当な低沸点の高度に揮発性の高圧ガスとの混合物であってよい。１つより多い抗体及び場合により他の活性剤又は成分をエアロゾル化製剤又はエアロゾル組成物中に配合してよく、そして用語「抗体」又は「活性剤」の使用はそのような抗体又は他の薬剤又は成分の２つ以上の使用を排除するものではない。
【００５６】
特定の好ましい実施形態においては、抗体又は活性剤は霧状化後にその活性の５０％超、好ましくは７０％超を保持している。特定の好ましい実施形態においては、抗体又は活性剤は霧状化後にその純度の５０％超、好ましくは７０％超を保持している。
【００５７】
本出願の使用に適する活性剤の製剤は霧状化用のドライパウダー、溶液、懸濁液又はスラリー及び高圧ガス中に懸濁又は溶解された粒子を包含する。本出願の使用に適するドライパウダーは不定形の活性剤、結晶性の活性剤及び不定形及び結晶性の活性剤の両方の混合物を包含する。ドライパウダーの活性剤は、好ましくは１０μｍ質量中央値直径（ＭＭＤ）、好ましくは７．５μｍ未満、そして最も好ましくは５μｍ未満、そして通常は直径０．１μｍ〜５μｍの範囲にある、肺の肺胞内への侵入を可能にするように選択された粒径を有する。これ等の粉末の送達用量効率（ＤＤＥ）は＞３０％、通常は＞４０％、好ましくは＞５０％、そして頻繁には＞６０％であり、そしてエアロゾル粒径分布は約１．０〜５．０μｍ質量中央値空力学的直径（ＭＭＡＤ）、通常は１．５〜４．５μｍＭＭＡＤ、そして好ましくは１．５〜４．０μｍＭＭＡＤである。これ等のドライパウダー活性剤は約１０重量％未満、通常は約５重量％未満、そして好ましくは約３重量％未満の水分含有量を有する。このような活性剤はＷＯ９５／２４１８３及びＷＯ９６／３２１４９に記載されており、これ等は参照により本明細書に組み込まれる。
【００５８】
ドライパウダー活性剤製剤は好ましくは実質的に不定形の粉末を形成する条件下に噴霧乾燥することにより製造する。バルク活性剤、通常は血漿形態のものを、生理学的に許容可能な水性緩衝液、典型的には約２〜９のｐＨ範囲を有するクエン酸塩緩衝液中に溶解する。活性剤は０．０１重量％〜１重量％、通常は０．１％〜０．２％の濃度で溶解する。次に溶液をＮｉｒｏＡ／Ｓ（Ｄｅｎｍａｒｋ）、Ｂｕｃｈｉ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）等の市販の従来の噴霧乾燥機において噴霧乾燥することにより、実質的に不定形の粉末としてよい。これ等の不定形の粉末はまた、不定形の構造を形成する条件下、適当な活性剤の溶液の凍結乾燥、真空乾燥又は蒸発乾燥により製造してよい。このようにして製造された不定形の活性剤製剤を粉砕又はミリングすることにより所望の粒径範囲の粒子を製造することができる。ドライパウダー活性剤はまた結晶形態であってよい。結晶性ドライパウダーはバルク結晶性活性剤を粉砕又はジェットミリングすることにより製造してよい。
【００５９】
本出願の活性剤粉末は場合により呼吸器及び肺への投与に適する製薬用の担体又は賦形剤と組み合わせてよい。そのような担体は、患者に送達される粉末中の活性剤の濃度を低減することが望まれる場合は単に増量剤として機能してよいが、活性剤のより効率的で再現性のある送達を行うため、及び、製造及び粉末充填を容易にするために流動性及びコン
システンシー等の活性剤の取り扱い特性を向上させるために、粉末分散装置内の粉末の分散性を向上させるために機能してもよい。そのような賦形剤は限定されないが、（ａ）炭水化物、例えば単糖類、例えばフラクトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等；二糖類、例えば乳糖、トレハロース、セロビオース等；シクロデキストリン、例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン；及び多糖類、例えばラフィノース、マルトデキストリン、デキストラン等；（ｂ）アミノ酸、例えばグリシン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、リジン等；（ｃ）有機酸及び塩基から形成された有機の塩、例えばクエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、グルコン酸マグネシウム、グルコン酸ナトリウム、塩酸トロメタミン等；（ｄ）ペプチド及び蛋白質、例えばアスパルテーム、ヒト血清アルブミン、ゼラチン等；及び（ｅ）アルジトール、例えばマンニトール、キシリトール等を包含する。担体の好ましいグループは乳糖、トレハロース、ラフィノース、マルトデキストリン、グリシン、クエン酸ナトリウム、ヒト血清アルブミン及びマンニトールを包含する。
【００６０】
ドライパウダー活性剤製剤は参照により本明細書に組み込まれるＷＯ９６／０９０８５に記載のＩｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ’ドライパウダー吸入器を用いて送達してよいが、所望のレベル又は適当な範囲内に流量を制御するように調節してよい。ドライパウダーはまた参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，３２０，０９４号においてＬａｕｂｅ等が記載する定量吸入器を用いて送達してもよい。
【００６１】
霧状化された溶液は市販の活性剤製剤溶液をエアロゾル化することにより製造してよい。これ等の溶液は前出のＬａｕｂｅ等により使用が記載されているＰｕｒｉｔａｎ Ｂｅｎｎｅｔｔにより製造されたＲａｉｎｄｒｏｐ等のジェットネブライザーにより送達してよい。溶液、懸濁液又はスラリーの送達のための他の方法はＲｕｂｓａｍｅｎ等の米国特許第５，６７２，５８１号に記載されている。振動圧電部材を使用する装置は参照により本明細書に組み込まれるＩｖｒｉ等の米国特許第５，５８６，５５０号に記載されている。
【００６２】
高圧ガス系は高圧ガス中に溶解した活性剤又は高圧ガス中に懸濁した粒子を包含してよい。製剤のこれ等の型の両方が参照により本明細書に組み込まれるＲｕｂｓａｍｅｎ等の米国特許第５，６７２，５８１号に記載されている。
【００６３】
特定の実施形態においては、エアロゾル又は霧状化抗体組成物は、１つ以上の他のエアロゾル又は霧状化治療薬、例えば交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗生物質（例えばトブラマイシン）、デオキシボヌクレアーゼ（例えばパルモザイム）、抗コリン作用薬（例えば臭化イプラトロピウム）又はコルチコステロイドと組み合わせることができる。
【００６４】
特定の実施形態においては、エアロゾル又は霧状化抗体組成物は、霧状化、吸入、静脈内又は経口経路により（同時又は逐次的に）投与される１つ以上の他の治療薬、例えば交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗コリン作用薬（例えば臭化イプラトロピウム）、炎症抑制剤（例えばクロモリンナトリウム）、ロイコトリエン抑制剤（例えばジレウトン）、抗ＩｇＥ抑制剤（例えばＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標））又はコルチコステロイドと組み合わせることができる。
【００６５】
本明細書においては、抗体又は治療薬は微粒子として製剤してよい。０．５〜１０ミクロンの直径を有する微粒子は天然の障壁の大部分を通過して肺に侵入できる。１０ミクロン未満の直径は一般的に咽喉を迂回するために必要であり；０．５ミクロン以上の直径が通常は散逸を回避するために必要である。
【００６６】
特定の実施形態においては、主要抗体又は治療薬は超分子複合体に製剤され、これは０．５〜１０ミクロンの直径を有してよく、０．５〜１０ミクロンの直径を有する粒子に凝集することができる。
【００６７】
他の実施形態においては、主要抗体又は治療薬は肺送達のために適切に製剤されたリポソーム又は超分子複合体中で提供される。
【００６８】
（ｉ）微粒子を形成するための重合体
上記した超分子複合体のほかに、多くの他の重合体も微粒子を形成するために使用できる。本明細書においては、用語「微粒子」は微小球（均一な球体）、マイクロカプセル（コア及び重合体外層を有する）及び不規則な形状の粒子を包含する。
【００６９】
重合体は好ましくは抗体又は治療薬の放出が望まれる時間帯内で、又はその後の比較的早期まで、一般的に１年、より典型的には数ヶ月、更に典型的には数日〜数週間、生体分解性である。生体分解性は微粒子の破壊、即ち微粒子を形成している重合体及び／又は重合体自身の解離を指す。これは、ジケトピペラジンの場合のように粒子が投与される担体のｐＨから放出部位のｐＨへの変化の結果として、ポリ（ヒドロキシ酸）の場合のように加水分解の結果として、アルギネート等の重合体のイオン結合により形成される微粒子の場合のように微粒子からのカルシウム等のイオンの拡散により、そして多糖類及び蛋白質の多くの場合のように酵素的作用により、生じることができる。一部の場合においては、一次的な放出が最も有用であり得るが、他の例においてはパルス放出又は「バルク放出」がより効果的な結果をもたらす場合がある。
【００７０】
代表的な合成物質はジケトピペラジン、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びこれ等の共重合体、ポリ無水物、ポリエステル、例えばポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニル化合物、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアセテート、及び、ポリビニルクロリド、ポリスチレン、ポリシロキサン、アクリル及びメタクリル酸の重合体、例えばポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポリウレタン及びこれ等の共重合体、セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロースアセテート、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートブチレート、セルロースアセテートフタレート、カルボキシエチルセルロース、セルローストリアセテート及びセルローススルフェートナトリウム塩、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）及び（乳酸カプロラクトン）共重合体である。
【００７１】
天然の重合体はアルギネート及び他の多糖類、例えばデキストラン及びセルロース、コラーゲン、アルブンミン及び他の親水性蛋白質、ゼイン及び他のプロラミン及び疎水性蛋白質、これ等の共重合体及び混合物を包含する。本明細書においては、その化学的誘導体とは置換、化学基、例えばアルキル、アルキレンの付加、ヒドロキシル化、酸化及び当該分野で知られた他の修飾を指す。
【００７２】
生体接着性重合体はＨ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９３，２６，５８１−５８７に記載された生体腐食性ヒドロゲル、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギネート、キトサン及びポリアクリレートを包含する。
【００７３】
更に説明すれば、マトリックスは重合体から溶媒の蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出及び当該分野で知られた他の方法により形成できる。薬物送達のための微小球を形成するために開発された方法は文献に記載されており、例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ５，１３−２２（１９８７）；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ６，２７５−２８３（１９８７）；及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．３５，７５５−７７４（１９８８）に記載される通りである。方法の選択は、例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ４，３２９−３４０（１９９０）；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．４５，１２５−１３４（１９９２）；及びＢｅｎｉｔａ，等、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．７３，１７２１−１７２４（１９８４）に記載される通り、重合体の選択、大きさ、外部形態及び所望の結晶性に応じたものである。
【００７４】
例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等（１９９０），Ｂｅｎｉｔａ及びＪａｆｆｅへの米国特許第４，２７２，３９８号に記載される溶媒蒸発の場合は、重合体は揮発性有機溶媒に溶解する。抗体及び／又は治療薬は、溶解可能形態又は微細粒子として分散した状態で、重合体溶液に添加し、そして混合物をポリ（ビニルアルコール）等の界面活性剤を含有する水相内に懸濁させる。得られるエマルジョンを有機溶媒大半が蒸発するまで攪拌し、固体の微小球を残存させる。
【００７５】
一般的に、重合体は塩化メチレンに溶解することができる。数種の異なる重合体濃度、例えば０．０５〜０．２０ｇ／ｍｌを使用できる。溶液に薬剤を投入した後、溶液を１％（ｗ／ｖ）ポリ（ビニルアルコール）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を含有する激しく攪拌されている蒸留水２００ｍｌ中に懸濁する。攪拌４時間の後、有機溶媒は重合体から蒸発し、そして得られる微小球を水で洗浄し、凍結乾燥機中で一晩乾燥する。
【００７６】
種々の大きさ（１〜１０００ミクロン、ただしエアロゾル用途には１０ミクロン未満）及び形態を有する微小球を、ポリエステル及びポリスチレン等の比較的安定な重合体に対して有用なこの方法で得ることができる。しかしながら、ポリ無水物等の不安定な重合体は水への曝露により分解する場合がある。これ等の重合体に対しては、ホットメルトカプセル化及び溶媒の除去が好ましい場合がある。
【００７７】
ホットメルトカプセル化の場合は、重合体を先ず溶融し、そして次に、好ましくは適切なサイズに分篩した抗体又は治療薬の固体粒子と混合する。混合物を非混和性の溶媒、例えばシリコーン油に懸濁し、そして連続的に攪拌しながら、重合体の融点より５℃高温に加熱する。エマルジョンが安定化した後、これを重合体粒子が固化するまで冷却する。得られた微小球を石油エーテルと共にデカンテーションすることにより洗浄し、自由流動粉末とする。１〜１０００ミクロンの直径を有する微小球はこの方法で得ることができる。この手法で製造された球の外表面は通常は平滑で緻密である。この操作法は水不安定性の重合体の場合に有用であるが、１０００〜５００００の分子量を有する重合体の場合の使用に限られる。
【００７８】
噴霧乾燥においては、重合体を有機溶媒、例えば塩化メチレン中に溶解する（０．０４ｍｇ／ｍｌ）。既知量の抗体及び／又は治療薬を重合体溶液中に懸濁（不溶の場合）又は
共溶解（可溶の場合）する。次に溶液又は分散液を噴霧乾燥する。重合体の選択に応じた形態を有する１〜１０ミクロンの直径範囲の微小球が得られる。
【００７９】
アルギネート又はポリホスファジン又は他のジカルボン酸重合体等のゲル型の重合体から作成されるヒドロゲル微小球は、重合体を水溶液に溶解し、配合すべき物質を混合物に懸濁し、そして、窒素ガスジェットを装着した微小液滴形成装置を通して重合体混合物を押し出すことにより製造できる。得られた微小球は、例えばＳａｌｉｂ，等、Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ４０−１１１Ａ，１２３０（１９７８）に記載の通り、緩徐に攪拌されたイオン性硬化バス内に落下させる。この系の利点は、微小球表面を、例えばＬｉｍ，等、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．７０，３５１−３５４（１９８１）に記載の通り、加工後にポリリジン等のポリカチオン性の重合体でそれらをコーティングすることにより、更に修飾することができる能力である。例えば、アルギネートの場合は、ヒドロゲルは、カルシウムイオンにアルギネートをイオン的に架橋させ、そして、次に、加工後にポリリジン等のポリカチオンに微粒子の外表面を架橋させることにより、形成することができる。微小球の大きさは種々のサイズの押出器、重合体流量及びガス流量により制御される。
【００８０】
キトサンの微小球は、重合体を酸性溶液に溶解し、そしてトリポリホスフェートに架橋することにより製造できる。例えば、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）微小球は、重合体を酸性溶液に溶解し、そして鉛イオンで微小球を沈殿させることにより製造される。アルギネート／ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）はアルギネートマイクロカプセル上のカルボキシル基の量を低減するために製造できる。
【００８１】
（ｉｉ）医薬組成物
微粒子は患者への投与のための食塩水等の何れかの適切な製薬用の担体内に懸濁することができる。最も好ましい実施形態においては、微粒子は投与直前まで乾燥又は凍結乾燥された形態において保存される。次にこれ等を十分な溶液、例えばエアロゾルとしての投与のための水溶液に懸濁するか、又はドライパウダーとして投与することができる。
【００８２】
（ｉｉｉ）ターゲティングされた投与
微粒子は特定の細胞又は臓器、特に貪食細胞及び臓器に送達できる。薬剤又は治療薬の全身送達が望まれる場合は、肺内のマクロファージによる微粒子のエンドサイトーシスを用いて微粒子を脾臓、骨髄、肝臓、リンパ節及び他の身体部分にターゲティングすることができる。
【００８３】
微粒子はまた特定の標的、例えば、肺系内の、又は肺の疾患又は状態に関連する特定の標的（例えば肺における癌細胞に特異的な標的）に特異的又は非特異的に結合する上記したもの等のリガンドの結合によりターゲティングすることもできる。このようなリガンドの例はまた、抗体及び可変領域含有フラグメント、レクチン及びホルモン、又は、標的細胞の表面上の受容体を有する他の有機分子を包含する。
【００８４】
（ｉｖ）微粒子の保存
特定の実施形態においては、微粒子は凍結乾燥して保存される。用量はカプセル化された抗体及び／又は治療薬の量、肺系内における放出速度、及び抗体及び／又は治療薬の薬物動態により決定される。
【００８５】
（ｖ）微粒子の送達
微粒子は、粒子の一部が肺系に到達するような鼻腔内への直接投与から肺の管内に到達するカテーテル又はチューブの使用まで、種々の方法を用いて送達できる。上記した通り、炭化水素高圧ガスはもはや使用されておらず、そして患者による吸気に依存しているものは用量変動をもたらす場合があるが、ドライパウダー吸入器は市販されている。適当な高圧ガスの例はヒドロフルオロアルカン高圧ガス、例えば１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＣＦ３ＣＨ２Ｆ）（ＨＦＡ−１３４ａ）及び１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン（ＣＦ３ＣＨＦＣＦ３）（ＨＦＡ−２２７）、パーフルオロエタン、モノクロロフルオロメタン、１，１−ジフルオロエタン及びこれ等の組み合わせを包含する。
【００８６】
治療方法
出願の第１の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体の治療有効量を被験体に投与することを含む、被験体における肺の疾患又は状態を防止又は治療するための方法を提供する。特定の実施形態においては、追加的活性剤もまた同じ被験体に投与する。抗体及び追加的活性剤の投与は同時に、又は何れかの順序において逐次的に行ってよい。
【００８７】
用語「防止する」は当業者の知る通りであり、そして状態、例えば局所的再発（例えば疼痛）、癌等の疾患、心不全又は何れかの他の医学的状態等の症候群複合体に関連して使用する場合は、当該分野で良く知られているものであり、そして、組成物を投与されない被験体と相対比較して、被験体における医学的状態の症状（例えば喘息）の頻度を低減するか、発症を遅延する組成物の投与を包含する。即ち、癌の防止は、例えば未投与の対照集団と相対比較して予防的投与を受けている患者の集団において検出可能な癌性の生育の数を低減すること、及び／又は、投与集団−対−未投与対照集団において例えば統計学的及び／又は臨床的に有意な分量、検出可能な癌性の生育の出現を遅延させることを包含する。感染の防止は、例えば投与集団−対−未投与対照集団において感染の診断数を低減すること、及び／又は、投与集団−対−未投与対照集団において感染の症状の発症を遅延させることを包含する。疼痛の防止は、例えば、投与集団−対−未投与対照集団において被験体により経験される疼痛感覚の、規模を低下すること、又は遅延することを包含する。
【００８８】
用語「治療する」は予防的及び／又は治療的な処置を包含する。用語「予防的又は治療的」処置は当該分野で知られる通りであり、１つ以上の主要組成物の宿主への投与を包含する。望ましくない状態（例えば宿主動物の疾患又は他の望ましくない状況）の臨床的顕在化の前に投与されれば処置は予防的（即ち望ましくない状態の発生から宿主を保護する）であるのに対し、望ましくない状態の顕在化の後に投与されれば処置は治療的である（即ち既存の望ましくない状態又はその副作用を減衰、軽減又は安定化することを意図する）。
【００８９】
出願の意図する肺の疾患又は状態は限定されないが喘息、気管支収縮、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害を包含する。
【００９０】
本治療を受ける被験体又は患者は必要とする何れかの動物、例えば霊長類、特にヒト、及び他の動物、例えばウマ、ウシ、ブタ及びヒツジ、及び家禽類及び愛玩動物全般である。
【００９１】
用語「治療有効量」は本明細書においては、動物において細胞又は臓器の少なくともサブ集団においてＣ５又は補体カスケードの活性化を抑制し、これにより何れかの医療的処置に適用可能な合理的な利益／危険の比において、投与された細胞又は臓器におけるその機能の生物学的帰結をブロッキングすることにより、何らかの所望の治療効果をもたらすために有効な本発明の化合物、物質又は化合物を含む組成物の量を意味する。
【００９２】
被験体への治療役の投与のタイミングは被験体の実体、又は、治療すべき、又は防止すべき、又は両方の肺の疾患又は状態に応じて変動することができる。例えば、投与は肺の状態の顕在化の前（例えば喘息発作前、又は、気管支収縮前）、肺の状態の顕在化の最中（例えば喘息発作又は気管支収縮の最中）、又は肺の状態の顕在化の後（例えば喘息発作後、又は、気管支収縮後）に行ってよい。
【００９３】
表現「補体カスケードの活性化を抑制する」は、本出願の抗体又は活性剤により付与される上記した補体系の何れかの成分に対する何れかの抑制的な影響又は作用を指す。抑制作用は補体の活性化に典型的な応答の低減又は消失により明らかにされ得る。例えば、補体活性化に対する典型的な細胞及び他の生物学的応答は、限定されないが、ヒスタミン放出、平滑筋収縮、増大した血管の透過性、白血球活性化、化学走性（例えば補体活性化の部位への顆粒球の移動）及び他の炎症性の現象、例えば細胞増殖を包含する。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５成分に特異的である。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５コンバターゼに特異的であり、例えばＣ５をＣ５ａ及びＣ５ｂ−９に変換するＣ５コンバターゼの機能をブロックする。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５ａに特異的である。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５ｂ又はＣ５ｂ−９に特異的である。
【実施例】
【００９４】
以下の実施例は説明の為に提示するものであり、限定するものではない。
【００９５】
材料及び方法
動物：雄性Ｃ５ｓ ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス及びＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎ／Ｊ、ＡＫＲ／Ｊ及びＳＷＲ／ＪマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、病原体不在施設において飼育した。血清Ｃ５ｂ−９媒介溶血の他に、Ｃ５遺伝子型を更に、Ｃ５ｓ及びＣ５ｄ ＤＮＡの両方に由来する２８０ｂｐのＤＮＡフラグメントを増幅するプライマー対（５’−ＣＡＣＧＡＴＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧ−３’及び５’−ＡＡＧＴＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＴＣＴＴＴＧＧＧＣＣ−３’）を用いながらテールＤＮＡに対して実施したＰＣＲにより確認した。このフラグメントはＣ５遺伝子における変異により選択的に破壊されるＨｉｎｄＩＩＩ部位をコードしており、これによりＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，ＭＡ）消化はＣ５ｄのＰＣＲ産物ではなくＣ５ｓを選択的に切断して１５０および１３０ｂｐのフラグメントとする。全動物のプロトコルはＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより検討され、ＮＩＨガイドラインに従った。
【００９６】
試薬：抗マウスＣ５ｍＡｂ（ＢＢ５．１）（Ｗａｎｇ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９６）９３：８５６３−８５６８）及びヒトフィブロネクチンに特異的なアイソタイプマッチ非関連対照ｍＡｂ（ＨＦＮ７．１）を腹水から精製した。キット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて精製したＢＢ５．１ＦａはＢＢ５．１と同様の活性を保持しており、そして純度は９７％超であった。実験的敗血症において死亡を防止することがわかっている抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ（Ｒｉｅｄｅｍａｎｎ等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００２）１１０：１０１−１０８）はザイモサン誘導好中球遊走を防止することができた。抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ及び対照ｓＩｇＧは両方とも、ＰＢＳ又はＣＦＡで乳化したマウスＣ５ａＲのＮ末端及び１つの余分なシステイン（Ｒｉｅｄｅｍａｎｎ等、上出）を包含するペプチドの何れかで反復して免疫化したＣ５ａＲ欠損マウス（Ｇｅｒａｒｄ等、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：７０５−７０８）から採取した血清より精製した。腹水又は血清の試料の何れかに由来する抗体をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（Ａｍｅｒｓｈａｍ）により精製した。コルチコステロイド（デキサメタゾン）はＳｉｇｍａから購入した。内毒素汚染が無く好中球遊走試験において強力な化学走性活性を有した組み換えマウスＣ５ａを、以前に報告されている通り（Ｒｉｅｄｅｍａｎｎ等、上出）クローニング及び精製した
。
【００９７】
気道炎症及び重度の気道応答の誘導
１０〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ及びＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスを第１日及び第１４日に２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ Ｉｎｊｅｃｔ；Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中に乳化した２０μｇのＯＶＡ（ＧｒａｄｅＶ；Ｓｉｇｍａ）のｉｐ注射により感作した。シングルハウジングチャンバー（Ｂｕｘｃｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ）に連結したジェットネブライザー（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて第２８、２９及び３０日に気道を介して１０分間１％ＯＶＡでマウスを免疫化した。第３２日に、全ての感作した動物を１０分間５％ＯＶＡでエアロゾル攻撃した。チェックポイント３実験において、ＢＡＬＢ／ｃマウスを第３５日に再度５％ＯＶＡでエアロゾル攻撃した。擬似Ｃ５ｓ又はＣ５ｄマウスはＡｌｕｍのみで免疫化し、ＯＶＡの代わりにＰＢＳでエアロゾル攻撃した。
【００９８】
ｓＲａｗの非侵襲的測定
上下気道両方の抵抗性を測定するｓＲａｗを、自発呼吸を有する覚醒動物におけるＤＣＰにより測定した（Ｂｕｘｃｏ）。ＤＣＰは５％ＯＶＡエアロゾル攻撃の前後においてｓＲａｗの長手方向の変化をモニタリングするために使用した。チェックポイント３実験において、ＤＣＰを使用してＥＡＲの出現を確認した後に、種々の投与群に動物を無作為化した。
【００９９】
下気道機能の侵襲的測定
ＲＬ及びＣｄｙｎの変化をＢｕｘｃｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍのソフトウエア及びＢｕｘｃｏの全身プレチスモグラフを用いて測定した。マウスを麻酔（Ａｖｅｒｔｉｎ、１６０ｍｇ／ｋｇ）し、気管に挿管した。臭化パンキュロニウム（０．３ｍｇ／ｋｇｉｐ）で自発呼吸をブロックした。呼吸はＨａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｉｎｓｐｉｒａベンチレーターにより維持し、これにより一回換気量及び呼吸速度を体重に従って計算した。ＲＬ及びＣｄｙｎの測定は５％ＯＶＡによるエアロゾル攻撃後５時間のＬＡＲのピーク時に実施した。ＲＬ及びＣｄｙｎのリアルタイムの変化はＢｕｘｃｏソフトウエアにより記録し、記録５分の平均値として報告した。ＡＨＲはエアロゾルＭｃｈ攻撃の間のＲＬ及びＣｄｙｎの変化に基づいて評価した。ＲＬ及びＣｄｙｎの変化は各エアロゾル攻撃の後のベースラインのパーセントとして表示した。Ｂｕｘｃｏエアロゾル制御超音波ネブライザー装置をベンチレーターに接続し、気管挿管を介するＭｃｈのエアロゾル送達に供した。ＰＢＳ又はＭｃｈ（１．６ｍｇ／ｍｌ）を１０秒当たり１０パフ〜２０パフの速度で送達し、エアロゾル送達の各パフは１５ｍｓ持続するようにした。
【０１００】
Ｃ５抑制
（１）チェックポイント１におけるＣ５阻害剤に関しては、抗Ｃ５ｍＡｂ（ＢＢ５．１）又は対照ｍＡｂ（ＨＦＮ７．１）を第２５、２９及び３１日に４０ｍｇ／ｋｇでｉｐ投与した。デキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ）を陽性対照として使用した。（２）第３２日の５％ＯＶＡ攻撃に対する気道応答を経験した動物をその後の試験の為に無作為化した。チェックポイント２におけるＣ５抑制については、動物に対し、第３３日にデキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ）、抗Ｃ５ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）又は対照ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）の単回ｉｐ注射を行った。第３５日において、エアロゾルＭｃｈ攻撃の間のＲＬ及びＣｄｙｎの測定のために動物を麻酔し、気管に挿管した。（３）チェックポイント３においては、抗Ｃ５ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）、対照ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）又はデキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ）を、第３５日の５％ＯＶＡによる動物のエアロゾル攻撃後２０分に、ｉｖ注射により投与した。この重要な時点における肺内Ｃ５抑制に関しては、動物を飼育しているシングルチャンバーに連結したジェットネブライザーを用いて、１０〜３０分間、抗Ｃ５ｍＡｂ（３ｍｇ／ｍｌ）、抗Ｃ５Ｆａｂ（３ｍｇ／ｍｌ）、対照ｍＡｂ（３ｍｇ／ｍｌ）、抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ（３ｍｇ／ｍｌ）、対照ｓＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）又はコルチコステロイド（２ｍｇ／ｍｌ）のいずれかのエアロゾル投与を動物に対して行った。擬似免疫化マウスには、同じ経路により投与したＰＢＳ溶液の同じ容量による擬似投与を行った。同じプロトコルを用いて実施した３つの肺内Ｃ５抑制実験の結果を相互にプールした。
【０１０１】
気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）の分析
アレルゲン誘発の約５．５時間の後、ＲＬ及びＣｄｙｎの測定後、気管挿管を介してＰＢＳ１ｍｌを注入し、その後穏やかに吸引することによりＢＡＬＦを採取した。ＢＡＬＦをＰＢＳ４００μｌに再懸濁した。ＢＡＬＦ中ＷＢＣ総数はエアロゾル実験の場合と同様、血球計又は自動細胞計数器を用いることにより計数した（Ｃｅｌｌ−Ｄｙｎ３７００Ａｂｂｏｔｔ）。サイトスピンスライドを準備し、固定し、そしてＤｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋを用いて染色した（ＶＷＲＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）。ＷＢＣ分画は１００×顕微鏡レンズ上でスライド当たり３００ＷＢＣの総数を計数した後に認定病理学者により調べた。プロＭＭＰ９、活性化ＴＧＦ−β、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン及びＩＬ−１３（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）、ＩＬ−５（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）及びヒスタミン（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）のＢＡＬＦレベルを製造元の指示に従ってＥＬＩＳＡにより測定した。
【０１０２】
血清ＯＶＡ特異的抗体の分析
ＥＬＩＳＡによるＯＶＡ特異的ＩｇＧ及びＩｇＥの為に、第３２日に５％アレルゲン誘発後５時間に血清試料を採取した。
【０１０３】
肺の組織学的検討
肺を、気管挿管を介して１０％緩衝ホルマリン（１ｍｌ）で膨張させ、少なくとも２４時間１０％ホルマリン中に固定した。肺試料はジームザ染色した。二重盲検組織学的分析を実施することにより、以下の基準に従って気道炎症を定量した。０：検出可能な気道炎症無し；１：２５％未満の気管支及び周囲の脈管が脈管周囲又は気管支周囲の炎症細胞浸潤を伴って観察された；２：気管支及び周囲の脈管の約２５〜５０％が罹患していた；３：気管支及び周囲の脈管の約５０〜７５％が罹患していた；４：気管支及び周囲の脈管の＞７５％が罹患していた。
【０１０４】
Ｃ５ｂ−９媒介溶血試験及びインビトロＣ５ａ媒介好中球遊走試験
以前に報告されている通り（Ｗａｎｇ等、上出）ニワトリＲＢＣの溶血を媒介しているＣ５ｂ−９の原料として、記載した時点において採取した血清を使用した。マウス血清（Ｓｉｇｍａ）をＢＢ５．１（１００μｇ／ｍｌ）又は同じ容量のＰＢＳと共にインキュベートした後に、ザイモサン（１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ）を用いて活性化した。希釈した血清（２０％）を好中球化学走性実験のためのＣ５ａの原料として使用した。
【０１０５】
統計学的分析
データは平均±ＳＥＭとして表示した。等分散と仮定したスチューデントの片側ｔ検定を用いた（ＭＳＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）。０．０５未満のＰ値を有意とみなした。
【０１０６】
抗Ｃ５ｍＡｂ、ＢＢ５．１によるＣ５ａ及びＣ５ｂ−９の形成のブロッキング
抗Ｃ５ｍＡｂによる補体成分Ｃ５の機能的抑制は血清Ｃ５ｂ−９媒介溶血活性のブロッキングの薬力学的プロファイルにより調べた（図１Ａ）。更に、Ｃ５ａ媒介好中球遊走をインビトロの試験において調べた（図１Ｂ）。抗Ｃ５ｍＡｂ、ＢＢ５．１の単回ｉｖ注射によるＣ５の抑制の薬力学的特徴は投与後最初の５時間の間、単回ｉｐ注射の薬力学的特徴とは大きく異なっている。Ｃ５ｂ−９媒介溶血の８０％超がＢＢ５．１のｉｖ投与の１時間以内に抑制されたのに対し、ｉｐ注射では３０％未満の抑制であった。抗Ｃ５ｍＡｂの投与はｉｖ注射後５時間〜４８時間では溶血の６０％超をブロックし続けていたが、ｉｐ注射後のこの期間では溶血の約５６％がブロックされていた。対照ｍＡｂ投与マウスから採取した血清試料は試験の全期間中、正常溶血活性の８０％超を有していた（図１Ａ）。溶血活性は抗Ｃ５ｍＡｂ単回注射後１週間には正常範囲となるように緩徐に回復した。
【０１０７】
インビトロの好中球遊走試験はＣ５ａの形成のブロッキングに対する抗Ｃ５ｍＡｂの能力をテストするために使用した（図１Ｂ）。ザイモサン活性化前の抗Ｃ５ｍＡｂによる血清試料の抑制は、ザイモサン活性化対照血清で観察された通り、ザイモサン活性化後にＣ５ａの存在により媒介されるヒト好中球化学走性を顕著にブロックした（図１Ｂ）。抗Ｃ５ｍＡｂＢＢ５．１はＣ５ａとＣ５ｂ−９との両方の形成をブロックし、そしてＣ５ａに直接結合しなかったため、この抗Ｃ５ａｍＡｂは恐らくはＣ５コンバターゼによるＣ５の切断のブロッキングに特異的であると考えられる。
【０１０８】
ＯＶＡ感作動物における重度の気道応答の発生及び３種の重要なポイントの定義
ＯＶＡ感作動物は５％ＯＶＡを用いたエアロゾル攻撃後、即座に重度気道応答を発生した（図２Ａ）。アレルゲンによるエアロゾル誘発に対する典型的な気道応答は、肥満細胞によるヒスタミンの放出により媒介されることが知られている早期気道応答（ＥＡＲ）、及び炎症細胞の浸潤、浮腫及び気管支の収縮の作用の組み合わせにより媒介される後期気道応答（ＬＡＲ）よりなった（Ｌａｒｓｅｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）３：５９−８５）。５％ＯＶＡ誘発後の気道応答は、非侵襲的二重チャンバープレチスモグラフ（ＤＣＰ）により各マウスにおいてモニタリングすることにより、ＥＡＲ及びＬＡＲの出現を示す特異的気道応答（ｓＲａｗ）の長手方向の変化を測定した（図２Ａ）。ＥＡＲは典型的には５％ＯＶＡ誘発後１５分のｓＲａｗの短時間上昇であり、そしてＬＡＲは典型的には５時間後に観察され、これは以前の報告と合致している（Ｃｉｅｓｌｅｗｉｃｚ，等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９９）；１０４：３０１−３０８）。ＥＡＲ及びＬＡＲは共にベースラインに対して５〜３０倍高値の程度であった。ＬＡＲピーク時の重度の気道応答は一般的に動物が明らかな呼吸困難を示しているものとして顕在化した。Ｃ５の抑制は抗Ｃ５ｍＡｂの投与により達成できるため、本発明者等はＣ５及びその活性化成分の重要な関与を疾患の重要な段階の間の３つの重要なポイントにおいて解明することにした（図２Ｂ）。３つの重要なチェックポイントは、１）喘息の発症の２つの特徴の１つである気道炎症の開始；２）喘息のもう１つの特徴である非特異的刺激に対するＡＨＲの発生；及び３）アレルゲン誘発後の進行中の既往応答の持続である。チェックポイント２及びチェックポイント３の両方は以前に重度の気道応答を経験し（図２Ｂ）、そして、気道炎症を樹立している被験体におけるＣ５の寄与を評価するために設計されている。チェックポイント３の試験はＥＡＲの間のｉｖ又はエアロゾルの経路のいずれかにより治療薬を投与することによるアレルゲン誘発後の進行中気道応答の間に実施した。下気道の機能及び既往炎症の定量は５％ＯＶＡ誘発後５時間のＬＡＲピークの間に評価した。
【０１０９】
チェックポイント１：気道炎症の開始におけるＣ５の関与
１％ＯＶＡの反復エアロゾル感作の時点であるチェックポイント１におけるＣ５抑制は、第３２日におけるＯＶＡ特異的ＩｇＥ又はＩｇＧの血清濃度に対して有意な影響を有していなかった（図３Ａ）。コルチコステロイド投与マウスもまた、第２５日においてコルチコステロイド又は抗Ｃ５ｍＡｂが投与されるより遥かに前に生じていたと考えられるＯＶＡ特異的ＩｇＥ及びＩｇＧの濃度上昇を示していた。擬似投与マウスは無視できる濃度のＯＶＡ特異的ＩｇＧ又はＩｇＥを有していた。対照ｍＡｂ及びコルチコステロイド投与マウスにおいて観察された正常溶血活性（９２．７％±６．８）と比較した場合に、抗Ｃ５ｍＡｂの反復投与（ｉｐ）の結果としてＣ５ｂ−９媒介溶血の約８０％が抑制されていた（２１．１％±４）。下気道の２つの重要な機能を５％ＯＶＡ誘発後５時間に気管挿管により調べた。肺抵抗（ＲＬ）の増大は一般的には下気道の顕著な閉塞に関連しており（図３Ｂ）、そして、動的肺コンプライアンス（Ｃｄｙｎ）は正常な肺で観察される圧力変化後の正常な容量への復帰の重要な特徴であり肺の弾力性の損失に関連している（図３Ｃ）。対照ｍＡｂ投与マウスにおいて見られた有意に増大したＲＬ及び低減したＣｄｙｎは増大した気道閉塞を示していた（図３Ｂ及びＣ）。擬似マウスはエアロゾルＰＢＳ溶液への曝露後５時間にＲＬ及びＣｄｙｎの正常な範囲を示していた。
【０１１０】
その強力な抗炎症及び抗喘息活性と相関して、チェックポイント１におけるコルチコステロイド処置はＲＬの増大を有意にブロックし、そしてＣｄｙｎの消失を防止している。同様に、チェックポイント１におけるＣ５抑制はアレルゲン誘発後５時間でＲＬの増大を有意に低下させており、ＲＬは１．６６ｃｍＨ２Ｏ／ｍｌ／秒±０．２であったのに対し、対照ｍＡｂ投与動物で見られたＲＬは２．１７ｃｍＨ２Ｏ／ｍｌ／秒±０．３３であった（図３Ｂ）。Ｃ５抑制はまた、Ｃｄｙｎの消失も僅かに低減させた（図３Ｃ）。肺組織の二重盲検組織学的分析（図３Ｄ）は機能分析から得られたデータを確認するものであり、そして対照ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスが炎症細胞の重度の脈管周囲及び気管支周囲の浸潤を有していたことを示している（図３Ｆ）。組織学的スコアの有意な低下がコルチコステロイド投与マウスにおいて観察された（図３Ｇ）のに対し、抗Ｃ５ｍＡｂ投与マウスにおいては観察された低下は明確ではなかった（図３Ｈ）。ヒトにおける重度のアレルギー性喘息と同様、気道に沿った脈管周囲及び気管支周囲の患部においては好酸球が優勢（５０％超）な炎症細胞であった（図３Ｆ〜Ｈ）。
【０１１１】
チェックポイント２：樹立された気道炎症を有する動物におけるＡＨＲの発生におけるＣ５の寄与
気道炎症に加えて、非特異的刺激に対するＡＨＲも喘息のもう１つの特徴である。ＡＨＲはエアロゾルメタコリン（Ｍｃｈ）攻撃の漸増用量に応答したベースラインのパーセントとして表示されるＲＬ及びＣｄｙｎの変化として評価した（図４Ａ及びＢ）。対照ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスはエアロゾルＭｃｈ攻撃の過程においてＲＬの有意な増大及びＣｄｙｎの有意な消失を示したが、擬似マウスはエアロゾルＭｃｈ攻撃に対して中程度に応答したのみであった。対照ｍＡｂ投与マウスでは８匹中２匹が高用量エアロゾルＭｃｈ攻撃の間に重度の呼吸ストレスのため死亡した。対照的に、Ｃ５抑制はコルチコステロイド投与動物の場合と同様、エアロゾルＭｃｈ攻撃の過程においてＲＬの劇的増大及びＣｄｙｎの低下を防止した（図４Ａ及びＢ）。擬似マウスと比較した場合のエアロゾルＭｃｈ攻撃の過程におけるＣｄｙｎの損失及びＲＬの増大は、恐らくは、これ等の動物における樹立された気道炎症の存在によるものと考えられた。３つの投与コホートの間には気道炎症の程度に注目すべき差は無かった。抗Ｃ５ｍＡｂ投与マウスは第３５日に正常溶血活性の約４５％を有していた。
【０１１２】
チェックポイント２におけるＣ５抑制の本発明者等の結果を以前の報告（Ｋａｒｐ等、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１：２２１−２２６）のデータと比較するために、天然の内因性ＡＨＲの存在又は不在を以前に報告されている正常Ｃ５ｄマウスの一部の系統において調べた（Ｄｅ Ｓａｎｃｔｉｓ等、Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ
Ｍｅｄ．（１９９７）１５６：Ｓ８２−Ｓ８８；Ｌｅｖｉｔｔ，等、ＦＡＳＥＢ Ｊ．（１９８８）２：２６０５−２６０８）。非免疫化Ｃ５ｄＡＫＲ／ＪマウスはエアロゾルＭｃｈ攻撃の漸増用量への劇的な気道応答を有しており、ベースラインを超えるＲＬの有意な増大（２０パフＭｃｈで８４．２％±１６．７）及びベースラインより低値となったＣｄｙｎの有意な低下（２０パフＭｃｈで４０％±５．４）を示したのに対し、Ｃ５ｄＳＷＲ／Ｊ及びＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスはＣ５完全（Ｃ５ｓ）ＢＡＬＢ／ｃマウス及びＣ５７ＢＬ／６マウスと識別不可能なＲＬ及びＣｄｙｎの最小限の変化を示し、ベースラインとの差はＲＬ及びＣｄｙｎの何れも１５％の最大変化を超えることは無かった（各系統につきｎ＝３、データ示さず）。次に、内因性ＡＨＲを有さないＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスを免疫化し、図４Ａ及びＢにおけるＣ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスと同一の様式においてエアロゾルＭｃｈで攻撃した。感作Ｃ５ｄ動物のサブグループもまた第３３日に対照又は抗Ｃ５ｍＡｂ投与の何れかを行った。Ｃ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスはＣ５ｓマウスと同程度の気道炎症を発症し、平均の組織学的スコアは１．９１±０．３７（ｎ＝６）であるのに対し、Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスでは組織学的スコアは２．２５±０．２５（ｎ＝４）であった。抗Ｃ５ｍＡｂと対照ｍＡｂ投与Ｃ５ｄマウスとの間には注目すべき差は無かった。以前の報告（Ｋａｒｐ等、上出）とは対照的に、漸増用量エアロゾルＭｃｈ攻撃はＯＶＡ免疫化Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスにおける下気道機能の有意な変化を誘導しなかった（図４Ｃ及びＤ）。第３３日の抗Ｃ５ｍＡｂ又は対照ｍＡｂの何れの投与もＡＨＲの発生に影響しなかった。両方のｍＡｂ投与コホートのデータをｍＡｂ投与コホートとしてプールした（図４Ｃ及びＤ）。更に、組み換えマウスＣ５ａ（ｒｍＣ５ａ）を用いたＯＶＡ免疫化Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスの再生により、有意なＲＬの増大及びＣｄｙｎの低下で示される通りエアロゾルＭｃｈ攻撃に応答したＡＨＲが完全に回復した（図４Ｃ及びＤ）。
【０１１３】
ｒｍＣ５の再生は、ｒｍＣ５ａで再生した擬似Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスがＭｃｈ攻撃の間に下気道機能の有意な変化を示さなかったことから、ＡＨＲの発生のためには十分ではなかった（図４Ｃ及びＤ）。Ｍｃｈ攻撃後の各マウスから採取した血清試料の分析によれば、Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスのＣ５不全状態が確認され、平均の溶血活性は８．１％±０．９であったのに対し、Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスでは１０８％±３．８であった。更に、Ｃ５ｓ及びＣ５ｄ動物の各ロットからの無作為の尾部試料（ｎ＝２）を分析してＣ５遺伝子型の状態を確認した。
【０１１４】
チェックポイント３：進行中の気道応答の間のＣ５の寄与
進行中の気道応答の持続におけるＣ５の役割もまた検討した。第３５日の５％ＯＶＡへのエアロゾル曝露後１５分においてＤＣＰによりモニタリングしながらＥＡＲピーク時に介入を行った。全対照ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスは重度のＬＡＲを発症し、有意なＲＬの増大及びＣｄｙｎの低下がアレルゲン誘発後５時間に観察された（図５Ａ及びＢ）。
【０１１５】
迅速な全身Ｃ５抑制を達成するためにＥＡＲ中のｉｖ注射を介した治療薬投与を選択したところ、ＬＡＲの発生は完全にブロックされ、５％ＯＶＡ誘発後５時間のＲＬは最小限の増大であり（図５Ａ）、そしてＣｄｙｎの最小限の低下により示される通り肺の弾力性の損失の大部分が防止された（図５Ｂ）。興味深いことに、コルチコステロイドの投与は５時間においてＬＡＲの発生を排除しておらず、有意なＲＬの上昇及びＣｄｙｎの低下が観察された。
【０１１６】
下気道機能に対する即時の影響（５時間以内）はｉｖコルチコステロイド投与後には観察されなかったが（図５Ａ）、この投与は２４時間後において肺内ＩＬ−１３を有意にモジュレート（図７Ｂ）し、そして下気道機能を有意に向上させた。肺組織の二重盲検組織学的分析は、図３Ｆに示す組織学的試料と同様、コルチコステロイド、抗Ｃ５ｍＡｂ又は対照ｍＡｂの何れかを用いたｉｖ介入後５時間において動物由来の炎症細胞の脈管周囲及び気管支周囲の浸潤の程度が同等であることを示していた。
【０１１７】
炎症細胞の遊走に対するＣ５抑制の作用
気道組織炎症部から気管支管腔への炎症細胞の順次の遊走もまた、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）ＷＢＣ分析により調べた。チェックポイント１において対照ｍＡｂ投与マウスと比較して、抗Ｃ５ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいては総ＢＡＬＦ炎症細胞の有意な低減があった（図６Ａ）。Ｃ５抑制による炎症細胞の遊走に対するブロッキングは改善された下気道機能の程度を超過しており（図３Ｂ及びＣ）、そして組織炎症を低減した（図３Ｄ）。同様に、ＢＡＬＦをチェックポイント３において採取した際に（図６Ｂ）、Ｃ５抑制は再度気管支管腔内への炎症細胞の遊走を有意にブロックしており、コルチコステロイド又は対照ｍＡｂの何れを投与した動物よりも、抗Ｃ５投与動物においてＢＡＬＦＷＢＣ計数値が有意に低値であった。この結果は第３５日においてアレルゲン誘発の前に採取した肺組織における炎症細胞の脈管周囲及び気管支周囲の浸潤の明確な存在とは劇的に対照的である。Ｃ５抑制による炎症細胞の遊走の有意なブロックはチェックポイント３におけるコルチコステロイド投与より高値のＣ５抑制の有意に増強された薬効と相関していた（図５Ａ及びＢ）。
【０１１８】
擬似マウスはＢＡＬＦＷＢＣ計数のベースライン値をもたらし、これはＷＢＣ分画分析においては主に正常な肺胞マクロファージ（８２．３％±１０．３）であった（図６Ｃ）。好酸球は全てのＯＶＡ免疫化動物に由来するＢＡＬＦ炎症細胞の４５％超を構成しており、治療介入とは無関係であった。コルチコステロイド（４．５％±２．８）又は抗Ｃ５ｍＡｂ（６．３％±３．３）−対−対照ｍＡｂ投与マウス（１８．３％±４．４）の何れかを用いて、チェックポイント３において投与された動物から得たＢＡＬＦ中で回収された好中球のパーセントに有意な減少があった。チェックポイント３に介入を受けた動物から得たＢＡＬＦ試料中の好酸球又はリンパ球のパーセントには有意な低下は起こらなかった（図６Ｃ）。
【０１１９】
肺内Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカインプロファイル及び炎症メディエーターに対するＣ５抑制の作用
対照ｍＡｂ投与マウスから採取したＢＡＬＦは擬似マウスと比較してＩＬ−５及びＩＬ−１３の有意に増大した濃度を有していた（図７Ａ及びＢ）。コルチコステロイド投与はＩＬ−５及びＩＬ−１３のＢＡＬＦ濃度を有意に低減したが、これは５時間の投与期間中の下気道の機能の迅速な改善（図５Ａ及びＢ）とは解釈されなかった。チェックポイント３におけるＣ５抑制後に観察された下気道機能の劇的改善（図５Ａ及びＢ）はＩＬ−５及びＩＬ−１３のＢＡＬＦ濃度の何れの低下にも相関していなかった。抗Ｃ５及びコルチコステロイド投与マウスの間ＩＬ−１３のＢＡＬＦ濃度の統計学的な差は、０．０５１のｐ値に相当している。チェックポイント３におけるＣ５抑制又はコルチコステロイド療法はヒスタミンのＢＡＬＦ濃度に影響しなかった（図７Ｃ）。このことは、エアロゾルアレルゲン誘発による肥満細胞のＩｇＥ受容体の結合時に気道管腔内にヒスタミンが恐らくは既に放出されており、そして、治療介入が行われた時点におけるＥＡＲの出現の原因となっているため、予測されたことである。下気道に沿って最も優勢な炎症細胞である好酸球（図３Ｆ〜Ｈ）が恐らくは喘息個体におけるエオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ及びＴＧＦ−βの生産の原因である（図７Ｄ〜Ｆ）。対照ｍＡｂ投与動物はエオタキシン（図７Ｄ）、ＲＡＮＴＥＳ（図７Ｅ）又は活性化ＴＧＦ−β（図７Ｆ）の有意に上昇したＢＡＬＦ濃度を有していたのに対し、擬似マウスではこれ等のメディエーターの濃度は無視可能又は検出不可能な濃度であった。対照的に、Ｃ５抑制はチェックポイント１（図Ｄ及びＥ）又はチェックポイント３（図７Ｆ）の何れかに投与した場合に、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ及び活性化ＴＧＦ−βのＢＡＬＦ濃度に対して顕著な影響を与えていた。コルチコステロイド投与はチェックポイント３に投与した場合にはＴＧＦ−βのＢＡＬＦ濃度を低下させたのみであったが、チェックポイント１に投与した場合にはエオタキシン又はＲＡＮＴＥＳの生産及び放出に対してはっきりした影響は与えなかった。
【０１２０】
好中球は一般的に気管支のＴＮＦ−α及びプロＭＭＰ９の生産に関与していると考えられている。Ｃ５抑制はチェックポイント１において投与した場合にＴＮＦ−αのＢＡＬＦ濃度を有意に低減し（図７Ｇ）、対照ｍＡｂ投与マウスとは有意に異なっていた。チェックポイント３においてＣ５抑制を行った場合には、プロＭＭＰ９の気管支内濃度は劇的に低下し、そして対照ｍＡｂ投与及びコルチコステロイド投与マウスとは有意に異なっていた（図７Ｈ）。
【０１２１】
チェックポイント３：進行中の気道応答の間のＣ５の肺内活性化の寄与
気道組織炎症から気管支管腔への炎症細胞の多大な遊走は、恐らくは気道の上皮粘膜からの強力な化学走性の力に起因する。即ち、Ｃ５はアレルゲン誘発に対する気道の応答の間、肺内で活性化される場合がある。下気道の機能及び炎症のパラメーターをＣ５の肺内活性化をブロックした後に評価した。ＦｃγＲＩＩＢ等の抑制性の受容体によるチェックポイント３における潜在的影響（Ｋａｔｚ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：６９８−７０４．；Ｒａｖｅｔｃｈ等、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）；１９：２７５−２９０）もまた、肺内Ｃ５及び抗Ｃ５ｍＡｂの間の相互作用及びその後の免疫複合体（ＩＣ）の形成の結果として評価した。
【０１２２】
この目的を達成するために、抗Ｃ５ｍＡｂによる肺内Ｃ５抑制の作用を抗Ｃ５Ｆａｂと直接比較した。更に、抗Ｃ５ａＲ血清ＩｇＧ（ｓＩｇＧ）の効率もこのチェックポイントにおける肺内Ｃ５ａ−対−Ｃ５ｂ−９の役割を解明するために評価した。図８Ａ及びＢに示す通り、対照ｍＡｂ投与動物は重度のＬＡＲを発生し、ＲＬの有意な増大及びＣｄｙｎの有意な低下を伴っており、擬似マウスにおいて見られた正常なＲＬ及びＣｄｙｎとは顕著に対照的であった。コルチコステロイドのエアロゾル投与はＲＬの低下及び相応するＣｄｙｎの保存により明らかなとおり、ＬＡＲの発生をブロックした。ＥＡＲピーク時の抗Ｃ５ｍＡｂ又は抗Ｃ５Ｆａｂの何れかのエアロゾル投与による肺内Ｃ５活性化のブロックもまたＬＡＲの発生を防止し、ＲＬの増大は最小限であり、Ｃｄｙｎの低下は最小限であった（図８Ａ及びＢ）。両方の抗Ｃ５投与コホートのＲＬ及びＣｄｙｎは対照ｍＡｂ投与動物とは有意に異なっていた。抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧを用いて肺内Ｃ５ａのその受容体への結合をブロックすることは、やはり、抗Ｃ５ｍＡｂを投与した動物と同様、ＬＡＲの発生を防止し、ＲＬの増大は最小限であり、Ｃｄｙｎの低下は最小限であった。抗Ｃ５ｍＡｂ、抗Ｃ５Ｆａｂ又は抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧの何れかを投与した３コホートの間には統計学的な差は無かった（図８Ａ及びＢ）。
【０１２３】
炎症細胞の遊走（図８Ｃ）及びプロＭＭＰ９のＢＡＬＦ濃度（図８Ｄ）等の肺内炎症活動性のパラメーターを調べたところ、Ｃ５の肺内活性化をブロックすることとＣ５ａのそのＣ５ａＲへの結合をブロックすることとの間に有意な差が見られた。ＥＡＲ中の抗Ｃ５ｍＡｂ又はそのＦａｂフラグメントの何れかのエアロゾル投与は、気管支気道管腔内への炎症細胞の遊走及びプロＭＭＰ９のＢＡＬＦ濃度の上昇の両方を有意にブロックしたのに対し、Ｃ５ａＲの結合をブロックしたことは、対照ｍＡｂを投与した動物と同様、これ等の２つの重要な炎症パラメーターに有意な影響を示さなかった（図８Ｃ及びＤ）。ＬＡＲの発生をブロックするその能力（図８Ａ及びＢ）と合致して、コルチコステロイドのエアロゾル投与はやはり、肺内炎症活動を軽減しており、炎症細胞の遊走及びプロＭＭＰ９の生産の明確な低下（図８Ｃ及びＤ）が伴っており、気管支管腔の上皮側における炎症活動の重要性を示していた。抗Ｃ５ｍＡｂ、抗Ｃ５Ｆａｂ又は抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧのエアロゾル投与は血清Ｃ５ｂ−９媒介溶血活性に対して影響を有していなかった。
【０１２４】
複合療法
図９に示す通り、非特異的対照抗体を投与した動物はＭｃｈ攻撃の過程において肺抵抗の有意な増大を示した。本試験においては、高用量のＭｃｈで攻撃した二匹の動物は重度の呼吸ストレスのため死亡した。対照的に、ステロイド及び抗Ｃ５投与動物は正常な擬似免疫化動物よりは高値であるが、対照プラセボ投与マウスよりは有意に低値である肺抵抗の僅か中等度の増大のみ有していた。抗Ｃ５抗体及びステロイドの両方を用いた複合投与はＭｃｈ攻撃の過程において肺抵抗の増大を更に有意に低減した。この結果に基づけば、ステロイド及びＣ５阻害剤の両方とも、樹立された気道炎症を有する喘息個体における非特異的なエアロゾル刺激に対する気道応答亢進の発生を防止することができる。
【０１２５】
霧状化製剤
抗体の霧状化に適する製剤の例を図１０に示す。図１１は霧状化投与の有効性を更に示すものである。図１１に示す結果は、ｉｐの代わりに第３２日に霧状化により薬物送達したことを除き、本明細書に記載したチェックポイント２と同様のプロトコルを使用した以下の試験の後に得られたものである。抗Ｃ５抗体については、３ｍｇ／ｍｌのＢＢ５．１を１０分間の霧状化に付し、２ｍｇ／ｍｌのステロイドも又１０分間の霧状化に付した。複合療法の為に、１０分間の霧状化に付した終濃度は：ＢＢ５．１は３ｍｇ／ｍｌ、そしてステロイドは２ｍｇ／ｍｌとした。
【０１２６】
図１２は更に、３０ｍｇ／ｍｌの製剤１（図１０）中のエクリズマブがＰａｒｉ ＬＣ
Ｊｅｔ Ｐｌｕｓ又はＳｏｎｉｋ ＬＤＬ等の従来のネブライザーにより効果的及び効率的に霧状化できることを示している。図１２は霧状化後の粒子の大部分が深部肺送達に適する５μＭ未満であったことを示している。
【０１２７】
図１３に示す通り、製剤１（図１０）中のエクリズマブは従来のネブライザーにより効果的及び効率的に送達することができ、やはり従来のネブライザーを使用している既存の吸入送達される肺用薬剤Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）のエアロゾル特性に匹敵していた。製剤１（図１０）中のエクリズマブはまた特殊ネブライザー、例えばＳｏｎｉｋＬＤＬによっても効果的及び効率的に送達することもできる。
【０１２８】
図１４及び図１５に示す通り、エクリズマブが霧状化により効果的及び効率的に送達することができたことがＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＨＰＬＣ分析によりわかった。適当な製剤中のエクリズマブをＰａｒｉ−Ｊｅｔ Ａｉｒネブライザー又はＳｏｎｉｋ ＬＤＩネブライザーの何れかを用いて霧状化した。噴霧形態における霧状化された抗体をネブライザーのマウスピース（例えばＦＩＤ２Ｆ）から収集し、そして別のサイズのマウスピース（例えばＦＩＤ２Ｃ１−Ｃ５）を使用した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＨＰＬＣ分析によれば、分析した試料の純度により示される通り、種々のサイズの噴霧マウスピースによる霧状化された抗体の統一性が明らかになった。
【０１２９】
参考文献
本明細書において言及した全ての公開物及び特許は、各個々の公開物及び特許が特定され個別に参照により組み込まれるように示されるがごとく、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【０１３０】
等価物
本明細書に記載した出願の特定の実施形態の多くの等価物は、当業者が認識でき、又は日常的実験を超えずに確認できるものである。このような等価物は以下の請求項により包含されることを意図している。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２００５年５月１１日に出願された米国特許出願連続番号１１／１２７，４３８（これは、２００３年９月５日に出願された米国特許出願連続番号１０／６５５，８６１の一部継続出願であり、２００３年５月９日に出願された米国仮出願連続番号６０／４６９，１８９および２００２年９月６日に出願された米国仮出願連続番号６０／４０８，５７１の出願日に対する優先権およびその利益を主張する）の出願日に対する優先権およびその利益を主張する。これら全ては、その全体が参考として本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
喘息、気管支炎及び気腫は総括して慢性閉塞性肺疾患として知られている。これらの疾患は慢性気管支炎、喘息及び気腫の種々の程度の症状を伴った、特に小気道の全般性気道閉塞として特徴付けられている。これ等の疾患は個体内に共存する場合が多く、そして気道閉塞の第１原因を決定することは困難である場合がある。気道閉塞は努力呼気の間の気流に対する増大した抵抗性として定義される。大気道の閉塞もまたこれ等の疾患、特に喘息において生じる場合がある。現在使用できる喘息治療法は問題点を含み続けている。同様に、他の肺疾患、例えば肺癌を治療又は防止するための進歩した治療法も望まれている。
【０００３】
患者への効果的な送達は良好な薬剤療法の何れにも重要な特徴である。送達の種々の経路が存在しており、そして各々が独自の利点及び難点を有している。丸薬、カプセル、エリキシル等の経口薬物送達は恐らくは最も簡便な方法であるが、多くの薬剤はそれらが吸収され得る前に消化管内で分解される。皮下注射は蛋白質の送達を包含する全身薬物送達のためには有効な経路であるが、患者の許容度が低い。一日一回以上の薬剤の注射は低い患者コンプライアンスの原因となる場合が多いため、種々の代替投与経路、例えば経皮、鼻内、直腸内、膣内及び肺送達が開発されている。即ち、特に肺疾患の治療又は防止における抗体系治療薬のための薬物送達の方法及び組成物を向上させることが望ましい。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（要旨）
従って、本出願は抗体系治療薬の送達に適する組成物及び方法を提供する。これ等の抗体系治療薬は肺の疾患又は状態、例えば喘息を防止又は治療する場合に特に有用である。本出願において有用な抗体の例は抗Ｃ５抗体又は補体カスケードの活性化を抑制する抗体、例えば米国特許第６，３５５，２４５号に記載されている抗体を包含する。抗体の他に、他の治療薬もまた本出願の組成物及び方法と共に使用されることを意図しており、例えば米国特許第５，６２７，２６４号に記載のキメラ補体抑制剤蛋白質が挙げられる。特定の好ましい実施形態においては抗体治療薬としてペキセリズマブ又はエクリズマブを使用する。特定の実施形態においては、肺疾患を治療又は防止するために抗体系治療薬を送達するのに適する方法は治療薬の全身送達の為に設計されるのではなく、従って、治療薬の全身作用はこれ等の方法を用いては観察されない場合がある。
【０００５】
出願の第１の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する、又は、補体系の後に活性化される１つ以上の成分の機能をブロックする抗体の治療有効量を被験体に投与することを含む、被験体における肺の状態を防止又は治療するための方法を提供する。特定の実施形態においては、追加的な活性剤も同じ被験体に投与する。抗体及び追加的活性剤の投与は同時又は何れかの順序で逐次的に行ってよい。特定の実施形態においては、抗体及び追加的活性剤は同じ送達方法又は経路を介して、例えば吸入により、被験体に投与できる。代替となる実施形態においては、抗体及び追加的活性剤は異なる送達方法又は経路を介して、例えば抗体を吸入により送達し、そして追加的活性剤を注射又は経口摂取により、被験体に投与できる。
【０００６】
出願の第２の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含むエアロゾル組成物を提供し、組成物は被験体における肺の状態を防止又は治療するのに適している。抗体はエアロゾル化に適する組成物中に製剤される。抗体は追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせた製剤はエアロゾル化に適するものである。或いは、抗体及び追加的活性剤は、エアロゾル化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【０００７】
出願の第３の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含む霧状化組成物を提供し、組成物は被験体における肺の状態を防止又は治療するのに適している。抗体はエアロゾル化に適する組成物中に製剤される。同様に、抗体は追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせた製剤は霧状化に適している。或いは、抗体及び追加的活性剤は、霧状化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【０００８】
出願の更に別の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体及びネブライザーを含む生物医薬品パッケージを提供し、パッケージは被験体の肺の状態を防止又は治療するのに適している。生物医薬品パッケージは更に、抗体の他に活性剤を含んでよい。生物医薬品パッケージはまた使用のための説明書を含んでもよい。
【０００９】
出願の意図する肺の疾患又は状態は喘息、気管支収縮、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害を包含するがこれ等に限定されない。
【００１０】
被験体に治療薬を投与するタイミングは例えば被験体の実体又は治療又は防止すべき肺の疾患又は状態、又はその両方に応じて変動できる。例えば、投与は肺の状態の顕在化の前（例えば喘息発作前）、肺の状態の顕在化の最中（例えば喘息発作中）、又は肺の状態の顕在化の後（例えば喘息発作後）に行ってよい。
【００１１】
本出願の抗体は、それがＣ５のＣ５ａ及びＣ５ｂへの分解を防止するようにＣ５に対して特異的であることができる。抗体はＣ５コンバターゼに対して特異的であることができる。或いは、抗体は補体系の成分、例えばＣ５ａ、Ｃ５ｂ又はＣ５ｂ−９に特異的であって良く、そして補体に特異的な抗体は、好ましくは、成分の機能を、例えば成分のその対応する受容体への結合をブロッキングすることにより、又は、補体カスケードにおけるその後のシグナリング又は事象の活性化におけるその機能をブロッキングすることにより抑制する。特定の実施形態はエクリズマブ又はペキセリズマブ、又は両方を使用する。本出願の抗体又は抗体治療薬は完全長の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、キメラ抗体（例えばヒト化抗体）、１本鎖抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントと変異したＦｃ部分とを有する抗体であることができる。特定の実施形態においては、変異したＦｃ部分が補体を活性化しないか、又は、Ｆｃ部分の変異が補体を活性化するＦｃ部分の能力を低下させる。本出願の抗体はバルク中に生産又は処理し、そして、種々の用量において、適当な材料（例えばガラス又はプラスチック）で製造されたアンプルに充填してよい。
【００１２】
本出願の追加的活性剤（又は抗体治療薬以外の活性剤）は、別の抗体治療薬（例えば抗ＩｇＥ抗体、例えばＸｏｌａｉｒ（登録商標）又はオマリズマブ、抗ＩＬ−４抗体又は抗ＩＬ−５抗体）、抗ＩｇＥ抑制剤（例えばＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）又はモンテルカストナトリウム）、交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗生物質（例えばトブラマイシン）、デオキシリボヌクレアーゼ（例えばプルモザイム）、抗コリン作用剤（例えばシュウ化プラトロピウム）、コルチコステロイド（例えばデキサメタゾン）、β−アドレノレセプターアゴニスト、ロイコトリエン抑制剤（例えばジロイトン）、５リポキシゲナーゼ阻害剤、ＰＤＥ抑制剤、ＣＤ２３拮抗剤、ＩＬ−１３拮抗剤、サイトカイン放出抑制剤、ヒスタミンＨ１受容体拮抗剤、抗ヒスタミン、抗炎症剤（例えばクロモリンナトリウム）又はヒスタミン放出抑制剤であることができる。
【００１３】
抗体のエアロゾル化又は霧状化に適する製剤の例は適当なｐＨ（例えばｐＨ６〜８）において生理学的な浸透圧（例えば２８０〜３２０ｍＭ）にある。本出願の製剤は更に賦形剤、例えばポリソルベート８０を含んでよく、これは０．００１５〜０．０２％で使用できる。
【００１４】
本出願のネブライザーはジェットエアネブライザー（例えばＰａｒｉ ＬＣ Ｊｅｔ Ｐｌｕｓ又はＨｕｄｓｏｎ Ｔ Ｕｐ−ｄｒａｆｔ ＩＩ）、超音波ネブライザー（例えばＭＡＢＩＳＭｉｓｔ ＩＩ）、振動メッシュネブライザー（例えばＯｍｒｏｎによるＭｉｃｒｏ ａｉｒ）及び衝撃波ネブライザー（ＥｖｉｔＬａｂｓ Ｓｏｎｉｋ ＬＤ１２０）であることができる。
【００１５】
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
補体カスケードの活性化を抑制する抗体の治療有効量及び追加的な活性剤を被験体に投与することを含む、該被験体における肺の状態を防止又は治療するための方法。
（項目２）
前記肺の状態が喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害よりなる群から選択される、項目１記載の方法。
（項目３）
前記被験体がヒトである、項目１記載の方法。
（項目４）
前記抗体がＣ５に特異的である、項目１記載の方法。
（項目５）
前記抗体がＣ５コンバターゼに特異的である、項目１記載の方法。
（項目６）
前記抗体がＣ５ａ又はＣ５ｂ−９に特異的である、項目１記載の方法。
（項目７）
前記抗体がエクリズマブ又はペキセリズマブである、項目１記載の方法。
（項目８）
前記抗体が完全長免疫グロブリン、１本鎖抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂフラグメント、及び、Ｆａｂフラグメント及び変異したＦｃ部分を有する抗体よりなる群から選択される、項目１記載の方法。
（項目９）
前記変異したＦｃ部分が補体を活性化しない、項目７記載の方法。
（項目１０）
前記肺の状態の顕在化の前、該肺の状態の顕在化の最中、又は該肺の状態の顕在化の後に前記抗体を投与する、項目１記載の方法。
（項目１１）
前記追加的な活性剤がコルチコステロイドである、項目１記載の方法。
（項目１２）
前記コルチコステロイドがデキサメタゾンである、項目１記載の方法。
（項目１３）
前記抗体及び追加的活性剤を同じ送達方法又は経路により前記被験体に投与することができる、項目１記載の方法。
（項目１４）
前記抗体及び追加的活性剤を異なる送達方法又は経路により前記被験体に投与することができる、項目１記載の方法。
（項目１５）
補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含むエアロゾル組成物であって、該組成物が被験体における肺の状態を防止又は治療するのに適している組成物。
（項目１６）
エアロゾル化に適する組成物中で前記抗体が製剤される、項目１５記載のエアロゾル組成物。
（項目１７）
追加的活性剤を更に含む、項目１５記載のエアロゾル組成物。
（項目１８）
ａ）補体カスケードの活性化を抑制する抗体；及びｂ）ネブライザーを含む生物医薬品パッケージであって、該パッケージが被験体の肺の状態を防止又は治療するのに適しているパッケージ。
（項目１９）
前記ネブライザーがジェットエアネブライザー、超音波ネブライザー、振動メッシュネブライザー及び衝撃波ネブライザーよりなる群から選択される、項目１８記載の生物医薬品パッケージ。
（項目２０）
更に使用のための説明書を含む、項目１９記載の生物医薬品パッケージ。
（項目２１）
更に追加的活性剤を含む、項目１９記載の生物医薬品パッケージ。
（項目２２）
ａ）吸入器；及びｂ）吸入送達のために製剤された抗体を含む肺薬物送達キット。
（項目２３）
前記吸入器が定量吸入器である、項目２２記載のキット。
（項目２４）
前記定量吸入器が加圧式定量吸入器である、項目２３記載のキット。
（項目２５）
前記吸入器が更に保持チャンバーを有する、項目２２又は２３記載のキット。
（項目２６）
前記吸入器がネブライザーである、項目２２記載のキット。
（項目２７）
前記ネブライザーが超音波ネブライザーである、項目２６記載のキット。
（項目２８）
前記ネブライザーがジェットエアネブライザーである、項目２６記載のキット。
（項目２９）
前記吸入器がドライパウダー吸入器である、項目２２記載のキット。
（項目３０）
ａ）１ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌを含む抗Ｃ５抗体組成物；及びｂ）霧状化による投与を示すラベルを含む肺薬物送達キット。
本特許又は出願のファイルは彩色された少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面を伴った本特許又は特許出願の公開物は、要請及び必要な代金の支払いに応じてＯｆｆｉｃｅにより提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は抗Ｃ５ｍＡｂ、ＢＢ５．１によるＣ５ａ及びＣ５ｂ−９の形成のブロッキングを示す。抗Ｃ５ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）又は対照ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）の単回ｉｖ又はｉｐ注射を受けた動物のＣ５ｂ−９媒介溶血の抑制の薬力学的プロファイル（Ａ）。黒塗りの円はｉｖ（ｎ＝２）又はｉｐ（ｎ＝２）のいずれかにより対照ｍＡｂを投与されている４対照動物のデータを示す。黒塗りの三角形はｉｐ抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物（ｎ＝３）を示す。白抜きの三角形はｉｖ抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物（ｎ＝３）を示す。Ｃ５ａ媒介好中球遊走（Ｂ）はインビトロ試験において分析した。ザイモサン活性化血清（２０％）をＣ５ａの原料として使用した。抗Ｃ５ｍＡｂ（１００μｇ／ｍｌ）を血清試料に添加した後、記載の通りザイモサン活性化を行った（ｎ＝８）。＊はザイモサン活性化血清試料と比較した場合にｐ＜０．０５を示す。図４Ｃ及びＤ以外の全図面においてＢＡＬＢ／ｃマウスを使用した。
【図２】図２はＯＶＡ誘発への気道応答及び３種の重要なチェックポイントの定義を示す。Ａ：ｓＲａｗの長手方向の変化を示す代表的ＤＣＰ結果。１０分間５％ＯＶＡを用いたエアロゾル攻撃の後、ＥＡＲの外観を１５分において、その後５時間にＬＡＲにより観察した。Ｂ：疾患の過程の間の３つの重要なポイント。チェックポイント１：抗Ｃ５ｍＡｂを第２５、２９及び３１日にｉｐ注射により投与した。下気道の機能の分析及び気道炎症の定量は第３２日において５％ＯＶＡのエアロゾル攻撃後５時間に評価した。チェックポイント２：抗Ｃ５ｍＡｂを第３３日において、第３２日の初回気道応答からの回復後にｉｐ注射により投与した。ＡＨＲは第３５日のエアロゾルＭｃｈ攻撃に応答したベースラインからのＲＬ及びＣｄｙｎの変化を評価することにより試験した。チェックポイント３：Ｃ５抑制は第３５日のＥＡＲの間、ＢＢ５．１にｉｖ又はエアロゾル投与の何れかにより行った。下気道機能は５％ＯＶＡ誘発後５時間にＬＡＲのピークの間に測定した。
【図３】図３はチェックポイント１、気道炎症の開始時のＣ５の寄与を示す。第３２日における５〜６匹のマウスの平均血清ＯＶＡ特異的抗体力価をＥＬＩＳＡにより測定した（Ａ）。斜線陰影棒グラフ：ＯＶＡ特異的ＩｇＧ。白色棒グラフ：ＯＶＡ特異的ＩｇＥ。又、第３２日において、５％エアロゾルＯＶＡ誘発後５時間にＲＬ（Ｂ）及びＣｄｙｎ（Ｃ）の測定の為に動物に気管挿管し、その後肺（Ｄ）の組織学的分析を行った。対照ｍＡｂ投与マウスの平均の組織学的評点（Ｆ）は２±０．２８であったのに対し、コルチコステロイド投与動物は０．６４±０．２１（Ｇ）、及び抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物は１．２５±０．２５（Ｈ）であり、それに対し擬似マウスでは炎症は全く存在せず、評点＝０であった（Ｅ）。特段の記載が無い限り、本図面及び全ての後続する図面において、＊は投与動物（即ちコルチコステロイド又は抗Ｃ５ｍＡｂ投与）を対照ｍＡｂ投与動物と比較した場合にｐ＜０．０５であることを示し、黒塗りの四角形はコルチコステロイド投与マウスをＣ５又はＣ５ａＲターゲティング抗体投与マウスと比較した場合にｐ＜０．０５であることを示している。明確化のために、全ての対照ｍＡｂ投与動物は後続する全ての図面において対照として標示する。矢印は好酸球浸潤を示す。ギームザ染色、倍率＝１００Ｘ。
【図４】図４はチェックポイント２、ＡＨＲの発生時のＣ５の寄与を示す。Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃＢｙＪマウス（Ａ及びＢ）及びＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウス（Ｃ及びＤ）を同一の様式においてＯＶＡで免疫化した（図２Ｂ）。動物を無作為化し、第３３日に記載した投与を行った（ｉｐ）。第３５日に、ＲＬ（Ａ及びＣ）及びＣｄｙｎ（Ｂ及びＤ）の測定の間に気管挿管を介してエアロゾルＭｃｈ攻撃を行った。ＲＬ及びＣｄｙｎにおける変化は各エアロゾル攻撃後のベースラインのパーセントとして表示した。ＯＶＡ免疫化を行うか行わなかったＣ５ｄマウスのサブグループは、Ｍｃｈ攻撃前３時間にｍＣ５ａ２００μｇで再生（ｉｖ）した。Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスについては、＊はステロイド又は抗Ｃ５ｍＡｂ投与動物を対照ｍＡｂ投与動物と比較した場合にｐ＜０．０５を示す。Ｃ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスについては、対照ｍＡｂ（ｎ３）又は抗Ｃ５ｍＡｂ（ｎ＝３）の何れかを投与したｍＡｂ投与動物（ｎ＝６）をｒｍＣ５ａで再生したＯＶＡ免疫化Ｃ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスと比較した場合に、ｐ＜０．０５であることを示す。対照ｍＡｂ及び抗Ｃ５ｍＡｂを投与したＣ５ｄ動物の間には統計学的な差は無かった。
【図５】図５はチェックポイント３、進行中の気道応答の間のＣ５の寄与を示す。第３２日のアレルゲン誘発に応答して気道応答を前回経験している動物に、第３５日に二回目のエアロゾルアレルゲン攻撃を行った。ＥＡＲのピークの間、動物を無作為化し、記載した投与を行った（ｉｖ）。ＯＶＡ誘発後５時間にＲＬ（Ａ）及びＣｄｙｎ（Ｂ）の測定の為に動物に気管挿管した（群当たりマウスｎ＝７〜８匹）。
【図６】図６はＢＡＬＦのＷＢＣ計数及び分画分析を示す。ＢＡＬＦはチェックポイント１（Ａ）又はチェックポイント３（Ｂ及びＣ）におけるエアロゾルアレルゲン誘発後５時間に得た。総ＢＡＬＦのＷＢＣ計数（Ａ及びＢ）及びその分画分析（Ｃ）を二重盲検方式により病理学者が行った。６（Ｃ）について、白色棒グラフ：肺胞マクロファージ。斜線陰影棒グラフ：好酸球。黒色棒グラフ：好中球。陰影棒グラフ：リンパ球。（群当たりマウスｎ＝６〜８匹）。
【図７】図７は炎症メディエーターのＢＡＬＦ値を示す。ＢＡＬＦはチェックポイント１（斜線陰影棒グラフ）又はチェックポイント３（黒色棒グラフ）におけるエアロゾルアレルゲン誘発後５時間に得た。ＩＬ−５（Ａ）、ＩＬ−１３（Ｂ）、ヒスタミン（Ｃ）、エオタキシン（Ｄ）、ＲＡＮＴＥＳ（Ｅ）、活性化ＴＧＦ−β（Ｆ）、ＴＮＦ−α（Ｇ）及びプロＭＭＰ９（Ｈ）をＥＬＩＳＡにより測定した（群当たりｎ＝６〜８試料）。
【図８】図８はチェックポイント３における肺内Ｃ５活性化の寄与を示す。結果は同一の実験操作による３つの別個の実験からプールしたデータを示す。動物は５％ＯＶＡによりエアロゾル攻撃し、無作為化した。次にＥＡＲ中、動物にジェットネブライザーを介して記載された投与の１つをエアロゾル投与により行った。擬似免疫マウスにはエアロゾルＰＢＳを投与した。全動物につき、ＯＶＡ誘発後５時間にＲＬ（Ａ）及びＣｄｙｎ（Ｂ）の測定の為に動物に気管挿管した。ＢＡＬＦＷＢＣ計数（Ｃ）及びプロＭＭＰ９（Ｄ）は大多数の動物において分析した。対照ｍＡｂ（ｎ＝１５）及び対照ｓＩｇＧ投与マウス（ｎ＝４）のデータをプールした。抗Ｃ５Ｆａｂ（ｎ＝３）を除き、全ての他のコホートにおいてｎ＝６〜１９匹とした。
【図９】図９は樹立された気道炎症を有する被験体におけるＡＨＲの発生に対する複合療法の結果を示す。結果は本明細書に記載したチェックポイント２試験に基づいて得られた。投与はｉｐの代わりに霧状化により第３２日に送達した。Ｍｃｈ攻撃は第３５日に行った。抗Ｃ５については、３ｍｇ／ｍｌのＢＢ５．１を１０分後に霧状化した。２ｍｇ／ｍｌのステロイドを１０分間霧状化した。組み合わせについては、最終濃度はＢＢ５．１で３ｍｇ／ｍｌ、そしてステロイドで２ｍｇ／ｍｌとし、これは１０分間霧状化した。
【図１０】図１０は抗体の霧状化に適する例示される製剤を示す。
【図１１】図１１は霧状化投与後２日のＭｃｈ攻撃の結果を示す。
【図１２】図１２は粒径分布を示す。
【図１３】図１３は霧状化及び送達の効率を示す。
【図１４】図１４はエアロゾル化したエクリズマブのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図１５】図１５は２種の異なるネブライザーを用いたエアロゾル化エクリズマブのＳＥＣＨＰＬＣ分析を示す。
【図１６】図１６は抗Ｃ５モノクローナル抗体の反復長期エアロゾル投与が気道炎症を誘導しないことを示している。ここではマウスを１０週間の投与に付し；擬似マウスは１０週間に渡り週２回１０分間ＰＢＳを投与し；対照マウスには１０週間に渡りやはり週２回霧状化により１０分間ＨＦＮ７．１（アイソタイプマッチマウス抗体）を投与し；抗Ｃ５抗体（ＢＢ５．１）投与マウスには１０週間に渡りやはり週２回霧状化により１０分間ＢＢ５．１を投与した。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
（この出願の詳細な説明）
概論
本出願は以下の通り特定の用語を略記する。
【００１８】
ＡＨＲ：気道応答亢進；ＢＡＬＦ：気管支肺胞洗浄液；Ｃｄｙｎ−動的肺コンプライアンス；Ｃ５ａＲ：Ｃ５ａ受容体；Ｃ５ｄ：Ｃ５不全；Ｃ５ｓ：Ｃ５完全；ＤＣＰ：二重チャンバープレチスモグラフ；ＥＡＲ：早期気道応答；ＩＣ：免疫複合体；ＬＡＲ：後期気道応答；Ｍｃｈ：メタコリン；ｍＣ５ａ：組み換えマウスＣ５ａ；ＲＬ：肺抵抗；ｓＲａｗ：特異的気道抵抗；ｓＩｇＧ：血清中ＩｇＧ。
【００１９】
補体系
補体系は細胞及びウィルスの病原体の侵入に対抗して防御するために身体の他の免疫学的系と共同して作用する。少なくとも２５の補体蛋白質が存在し、これ等は血漿蛋白質及び膜コファクターの複雑な集合物として発見されている。血漿蛋白質は脊椎動物の血清中のグロブリンの約１０％を構成している。補体成分はその免疫防御機能を、一連の内因性であるが厳密に酵素的な切断及び膜結合の事象において相互作用することにより達成する。結果として生じる補体カスケードはオプソニンの免疫調節性及び溶解性の機能を有する産物の生産をもたらす。
【００２０】
補体カスケードは古典的経路又は代替経路を介して進行する。これ等の経路は多くの成分を共有しており、そして、それらはその初期の工程においては異なるが、標的細胞の活性化及び破壊に必要な同じ「末端補体」成分（Ｃ５〜Ｃ９）に集結し、これを共有する。
【００２１】
古典的補体経路は典型的には標的細胞上の抗原部位の抗体認識及びそれとの結合により開始される。代替経路は通常は抗体依存性であり、そして、病原体表面上の特定の分子により開始され得る。両方の経路とも補体成分Ｃ３が活性プロテアーゼ（各経路で異なる）により分解されてＣ３ａおよびＣ３ｂが得られる点において集結する。補体攻撃を活性化する他の経路は事象順序のより後期において作用することができ、補体機能の種々の態様をもたらしている。
【００２２】
Ｃ３ａはアナフィラトキシン（後述参照）である。Ｃ３ｂは細菌及び他の細胞に、そして特定のウィルス及び免疫複合体に結合し、そして循環系からの除去の為にそれらにタグ付けする。（この役割におけるＣ３ｂはオプソニンとして知られている）。Ｃ３ｂのオプソニン機能は補体系の最も重要な抗感染作用であると考えられている。Ｃ３ｂ機能をブロックする遺伝子的疾患を有する患者は広範な種類の病原体生物による感染の傾向があるのに対し、補体カスケード順序の後期において疾患を有する患者、即ち、Ｃ５機能をブロックする疾患を有する患者はナイセリア感染症に対してのみ高い傾向を示し、そしてその後は幾分より高い傾向を示すことがわかっている（Ｆｅａｒｏｎ，Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２ｄ Ｅｄ．Ｆａｎｔａ ａｎｄ Ｍｉｎａｋｅｒ，ｅｄｓ．Ｂｒｉｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｏｍｅｎ’ｓ ａｎｄ Ｂｅｔｈ Ｉｓｒａｅｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌｓ，１９８３）。
【００２３】
Ｃ３ｂはまた各経路に独特の他の成分と複合体を形成して古典的又は代替のＣ５コンバターゼを形成し、これがＣ５を切断してＣ５ａ及びＣ５ｂとする。即ち、Ｃ３は、それが代替及び古典経路の両方にとって必須であることから、補体反応順序における中枢的蛋白質とみなされている（Ｗｕｒｚｎｅｒ，等、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｉｎｆｌａｍｍ．８：３２８−３４０，１９９１）。Ｃ３ｂのこの特性はＣ３ｂに作用してｉＣ３ｂを生成する血清プロテアーゼ因子Ｉにより調節される。オプソニンとしてなお機能しながら、ｉＣ３ｂは活性Ｃ５コンバターゼを形成できない。
【００２４】
Ｃ５は約７５μｇ／ｍｌ（０．４μＭ）の濃度で正常血清中に存在する１９０ｋＤａのベータグロブリンである。Ｃ５はグリコシル化されており、その質量の約１．５〜３パーセントは炭水化物に帰属する。成熟Ｃ５は６５６アミノ酸の７５ｋＤａのベータ鎖にジスルフィド結合した９９９アミノ酸の１１５ｋＤａのアルファ鎖のヘテロ二量体である。Ｃ５は単一コピー遺伝子の１本鎖前駆体蛋白質産物として合成される（Ｈａｖｉｌａｎｄ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１，１４６：３６２−３６８）。この遺伝子の転写産物のｃＤＮＡ配列は１８アミノ酸のリーダー配列に沿った１６５９アミノ酸の分泌プロＣ５前駆体を予測させる。
【００２５】
プロＣ５前駆体はアミノ酸６５５及び６５９の後で切断され、アミノ酸末端フラグメントとしてのベータ鎖及びカルボキシ末端フラグメントとしてのアルファ鎖を生じ、２つの間の４アミノ酸が欠失する。Ｃ５は、アルファ鎖の最初の７４アミノ酸を含むアミノ末端フラグメントとして、代替又は古典的Ｃ５コンバターゼのいずれかによりＣ５のアルファ鎖から切断される。Ｃ５ａの１１ｋＤａの質量の約２０％が炭水化物に帰属する。コンバターゼ作用のための切断部位は、１８アミノ酸リーダー配列を有する１６５９アミノ酸プロＣ５前駆体配列のアミノ酸残基７３３かそれに直ぐ隣接する箇所である（米国特許第６，３５５，２４５号に記載の配列番号２）。この切断部位において、又はそれに隣接して結合する化合物は切断部位へのＣ５コンバターゼ酵素の接触をブロックする能力を有し、これにより補体抑制剤として作用する。
【００２６】
Ｃ５はまたＣ５コンバターゼ活性以外の手段によっても活性化できる。制限トリプシン消化（Ｍｉｎｔａ ａｎｄ Ｍａｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７７，１１９：１５９７
−１６０２；Ｗｅｔｓｅｌ ａｎｄ Ｋｏｌｂ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８２，１２８：２２０９−２２１６）及び酸処理（Ｙａｍｍａｍｏｔｏ ａｎｄ Ｇｅｗｕｒｚ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７８，１２０：２００８；Ｄａｍｅｒａｕ等、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８９，２６：１１３３−１１４２）も又Ｃ５を分解して活性なＣ５ｂを生成することができる。
【００２７】
Ｃ５ａは別のアナフィラトキシンである。Ｃ５ｂはＣ６、Ｃ７及びＣ８と複合体化して標的細胞表面においてＣ５ｂ−８複合体を形成する。幾つかのＣ９分子の結合により、膜攻撃複合体（ＭＡＣ、Ｃ５ｂ−９、末端補体複合体−ＴＣＣ）が形成される。十分な量のＭＡが標的細胞膜内に挿入されれば、それらが形成した開口部（ＭＡＣ細孔）は標的細胞の急速な浸透圧溶解を媒介する。より低い非溶解性の濃度のＭＡＣは他の作用をもたらすことができる。特に、内皮細胞及び血小板内へのＣ５ｂ−９複合体の少数の膜挿入は有害な細胞活性化を引き起こす場合がある。一部の場合においては、活性化は細胞溶解に先行する場合がある。
【００２８】
上記した通り、Ｃ３ａ及びＣ５ａはアナフィラトキシンである。これ等の活性化された補体成分は肥満細胞の脱顆粒化をトリガーする場合があり、これによりヒスタミン及び他の炎症メディエーターが放出され、その結果、平滑筋の収縮、血管透過性の増大、白血球活性化、及び過剰細胞をもたらす細胞増殖を含む他の炎症現象が起こる。Ｃ５ａはまた補体活性化の部位にプロ炎症性顆粒球を誘引する作用を有する走化性ペプチドとしても機能する。
【００２９】
肺の疾患又は状態及び補体系
喘息等の特定の肺疾患又は状態は、慢性の気道炎症、気道閉鎖及び種々の刺激への気道の応答亢進性（ＡＨＲ）の組み合わせを特徴とし得る。これは抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｈ２サイトカイン及びアレルゲン特異的ＩｇＥを包含する順応性免疫応答により主に媒介され、肺の炎症及びＡＨＲに到ると考えられている。細菌、ウィルス及びカビの侵入に対抗した生得の免疫防御の中核を構成する（Ｎａｇｉ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１１２：７２９−７３４；Ｋａｓａｍａｔｓｕ等、Ａｒｅｒｕｉ（１９９３）４２：１６１６−１６２２；Ｂｊｏｒｎｓｏｎ等、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．（１９９１）１４３：１０６２−１０６６）補体及びその活性化成分は、古典経路、代替の経路及びレクチン経路を介して活性化されることができる（Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９６）１４７：６９−７０）。これ等の３種の活性化経路は補体成分Ｃ５において集結した後にＣ５ａ及びＣ５ｂ−９を形成し、これ等は共に強力な生物学的応答、例えば組織傷害、炎症、アナフィラキシー応答及び細胞溶解を極めて低濃度で誘発する（Ｔａｋａｆｕｊｉ等、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）１０４Ｓｕｐｐｌ．１：２７−２９）。更に、Ｃ５はアレルゲン曝露後に活性化される場合がある（Ｎａｇａｔａ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８７）８０：２４−３２）。アレルギー性喘息の動物モデルから得られた最近のデータによれば、活性化された補体成分、例えばＣ５ａは生得及び獲得の免疫の間の重要な関連性をもたらしていることが示唆されている（Ｋａｒｐ等、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１：２２１−２２６）。しかしながら、喘息の発症におけるＣ５及びその活性化成分の関与に関しては当該分野でなお異論が存在する（Ｋａｒｐ等、上出；Ｇｅｒａｒｄ等、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：７０５−７０８；Ａｂｅ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６７：４６５１−４６６０；Ｌｕｋａｃｓ等、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００１）２８０（３）：Ｌ５１２−Ｌ５１８）。
【００３０】
気管支喘息に関する幾つかの実験モデルは、Ｃ５及びその活性化成分が気道炎症及び気管支収縮（又は気管支の収縮）の発症に関与していることを示している。種々の補体抑制
剤を用いた抑制試験では、げっ歯類においてＡＨＲ又は気道炎症が顕著に低減されている（Ａｂｅ等、上出；Ｌｕｃａｓ等、上出）。Ｃ５活性化の潜在的関与はまた、臨床症状の重症度がＣ５活性化の範囲に相関しているという臨床観察事例にまで拡張されている（Ｇｏｎｃｚｉ等、Ａｌｌｅｒｇｙ（１９９７）５２：１１１０−１１１４）。一方、研究によりＣ５不全（Ｃ５ｄ）はマウスにおけるアレルゲン誘導ＡＨＲへの増大した感受性をもたらすことが判っており、そしてこの所見は喘息の発症をモジュレートすると報告されている重要なＴｈ１サイトカインであるＩＬ−１２の低減された生産の証拠により裏付けられている（Ｋａｒｐ等、上出）。論議の中心における重要な問題点は、Ｃ５及びその活性化成分が、Ｃ５ｄ動物の試験（Ｋａｒｐ等、上出）及び疾患の過程における介入を用いた実験によりそれぞれ示唆される通り、発症の感作期及びエフェクター期の間にプロ炎症性又は抗炎症性であるかどうかである（Ａｂｅ等、上出；Ｌｕｋａｃｓ等、上出）。更に、別の重要な問題は肺内活性化補体成分が発症において重要な役割を果たし、そして獲得免疫系に対する活性化Ｃ５成分の潜在的抗炎症作用を克服するかどうかである（Ｋａｒｐ等、上出）。
【００３１】
本出願は疾患の過程の間の３つの重要なポイントにおけるＣ５及びその活性化成分の研究に関し、喘息の発症における生得の免疫系のこの必須成分の重要な機序を概説する。下気道の機能の包括的分析及び気道炎症の複数のパラメーターの定量を実施している。本明細書においては、試験はＣ５が気道の炎症の開始に寄与することを示しており、樹立された気道炎症を有する動物におけるＡＨＲの発生におけるＣ５の重要な寄与、及びアレルゲン攻撃への進行中の気道応答を持続させる場合の活性化Ｃ５成分の重要な役割を明らかにしている。
【００３２】
喘息様症状の発症に必要な病理生理学的特徴は気道の炎症である。遺伝的素因を有する個体は、アレルゲン特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化、アレルゲン特異的ＩｇＥの生産及び好酸球のリクルートメントに決定的に関与しているＩＬ−４及びＩＬ−５等のＴｈ２サイトカインの分極を包含する環境曝露へのモジュレートされた獲得免疫応答を有する場合がある（Ｃｉｅｓｌｅｗｉｃｚ等Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９９）１０４：３０１−３０８）。より最近では、ＩＬ−３が発症で重要な役割を果たすものとして同定されており、動物において気道応答を誘導するために必要かつ十分であると報告されている（Ｗｉｌｌｓ−Ｋａｒｐ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８）２８２：２２５８−２２６１）。本明細書に記載する試験で示す通り、コルチコステロイドの広範な抗炎症活性スペクトル、例えばＴｈ２サイトカインプロファイルのモジュレーション（図７ＡおよびＢ）及び下気道内への炎症細胞のリクルートメントのブロッキング（図３Ｄ）は、その強力な抗喘息活性に相関している。より早期に報告されているその抗炎症活性（Ｗａｎｇ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９６）９３：８５６３−８５６８）と合致して、チェックポイント１におけるＣ５抑制はアレルゲン暴露への獲得免疫系の応答に対して顕著な影響を与えることなく気道炎症を顕著に低減している。更に、Ｃ５ｄ動物はＣ５ｓ動物によって発症するものと同程度の気道炎症を発症している。１つの考えられる説明は、気道がアレルゲン及び感染に直接曝露されることである。これ等の曝露は、他の補体成分、例えば極めて類似したプロ炎症特性を有し（Ｔａｋａｆｕｊｉ等、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４）１０４、補足、１：２７−２９；Ｎａｇａｔａ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８７）８０：２４−３２）、そして、発症に寄与するものとして知られている（Ｇｅｒａｒｄ等、Ｃｌｉｎ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：７０５−７０８）Ｃ３ａも活性化する場合がある。本出願に記載したデータは、活性化されたＣ５成分は、アレルゲンのエアロゾル曝露への獲得免疫応答の活性化を必要とする気道炎症の開始には決定的に関与しているが、必要ではないことを示している（Ｃｉｅｓｌｅｗｉｃｚ等、上出）。しかしながら、気道炎症が既に十分樹立されているチェックポイント２及び３においては、本明細書に記載したデータは、Ｃ５抑制は気道炎症の軽減及び下気道機能の改善においてはコルチコステロイドと同等又はそれより良好な薬効を有していることを示している（例えば図４〜８参照）。
【００３３】
喘息の第２の特徴、即ち非特異的刺激に応答したＡＨＲの発生を別の重要なチェックポイントとして選択した。数系統のＣ５ｓ及びＣ５ｄマウスを予備スクリーニングすることにより、内因性ＡＨＲの原因であるムスカリンアセチルコリン受容体の機能に対する遺伝子的な影響（Ｄｅ Ｓａｎｃｔｉｓ等、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．（１９９７）１５６：Ｓ６２−Ｓ８８；Ｌｅｖｉｔｔ等、ＦＡＳＥＢ Ｊ．（１９８８）２：２６０５−２６０８）が本明細書に記載した試験から排除される。内因性ＡＨＲを有さない動物を使用した場合、Ｃ５抑制は樹立された気道炎症を有するＣ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるエアロゾルＭｃｈ攻撃に対するＡＨＲの発生を防止するために十分であることが判っている（図４Ａ及びＢ）のに対し、ｒｍＣ５ａによるＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスの再生ではやはり樹立された気道炎症の存在下においてもＡＨＲが復旧している（図４Ｃ及びＤ）。これ等のデータはＣ５、特にＣ５ａは生得の免疫応答とＡＨＲに関する気道応答の重要な成分とを直接関連付ける役割を果たしている。Ｃ５ａＲは気道平滑筋細胞及び気道上皮において発見されている（Ｄｒｏｕｉｎ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６６：２０２５−２０３２）。気道平滑筋及び上皮上の受容体との活性化されたＣ５成分特にＣ５ａの直接の相互作用が以前に報告されている（Ｉｒｖｉｎ等、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．（１９８６）１３４：７７７−７８３；Ｌａｒｓｅｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）３：５９−８５）が、本明細書に提示するデータは、ｒｍＣ５ａによる維持Ｂ１０Ｄ２ｏＳｎマウスの全身再生（ｉｖ）後のＭｃｈ攻撃の間の下気道の機能に対する最小限の影響により示される通り、ＡＨＲの維持が気道上皮、気道平滑筋、炎症細胞及びその炎症メディエーターの間の複雑な相互作用に依存していることを示している（図４Ｃ及びＤ）。
【００３４】
エアロゾルアレルゲン誘発後の進行中の気道応答は、本明細書に記載した試験における第３の重要なチェックポイントとして機能する。複数の炎症メディエーターの旺盛な生産及び放出を伴ったＥＡＲ及びＬＡＲの発生は、活性化Ｃ５成分と他の生得及び獲得免疫応答の成分との複雑な相互作用及びその発症における役割を調べる良好な機会を与える。本明細書に記載するデータは、抗Ｃ５モノクローナル抗体（ｍＡｂ）又はそのＦａｂフラグメントのいずれかによるＣ５抑制が、肺内炎症活動の軽減において、並びに、下気道の機能の改善において、同様のインビボ効率を達成していることを明らかにしている。
【００３５】
本明細書に記載するデータは又、気道炎症の存在下、活性化Ｃ５成分が下流の炎症カスケードの重要な調節物質として機能することを示唆している。この調節作用は気道管腔内への炎症細胞の遊走、並びに、チェックポイント３における下気道機能の顕著な変化に相当する複数の有害なメディエーターの放出に影響するその能力により明らかにされる。Ｃ５ａは恐らくは炎症細胞の最も強力な活性化剤であり（Ｔａｋａｆｕｊｉ等、上出）、そして、Ｃ５ａＲは循環系の白血球、肥満細胞、マクロファージ及び内皮細胞上で同定されている（Ｃｈｅｎｏｗｅｔｈ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９７８）７５：３９４３−３９４７）。抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ投与後、下気道機能の顕著な改善が肺内炎症活動の顕著な存在と乖離していることは、Ｃ５ａが気道平滑筋細胞及び上皮上に発現される自身の受容体と直接結合していることが、部分的には、気道の収縮の原因であるという仮説と合致している（Ｉｒｖｉｎ等、上出）。データは又、Ｃ５ｂ９の化学走性活性及び細胞活性化特性（Ｃｚｅｒｍａｋ等、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈａｔｈｏｌ．（１９９９）１５４：１５１３−１５２４）がＣ５ａ９結合の不在下における顕著な肺内炎症活動の原因であることも示している。樹立された気道炎症及びＩＣの存在下で、Ｃ５ｂ−９は、Ｃ５ａと炎症細胞上に発現されたその受容体との結合とは無関係に、プロＭＭＰ９等の複数のメディエーターの放出をトリガーすることにより下流の炎症カスケードを十分調節することができる（図８Ｄ）。Ｃ５ｂ−９の上昇したレベルの存在は複数の炎症メディエーターの存在と共に、抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ投与動物における気管支管腔内への炎症細胞の遊走に寄与している（図８Ｃ）。
【００３６】
獲得及び生得の免疫系の両方とも、気管支痙攣、改変された血管の透過性、炎症細胞の接着及び遊走、粘膜の浮腫及び過剰な粘液分泌の原因であり、最終的には３種の独特であるが相互に依存した現象、即ち気道炎症、気道閉塞及びＡＨＲをもたらす、ロイコトリエン、プロスタグランジン、ヒスタミン、アルカリ性蛋白質、サイトカイン、ケモカイン及び酵素を包含する複数の炎症メディエーターの生産及び放出の複雑な過程に寄与していた。多くの重複する生物学的機序があるため、遺伝子欠損動物の場合等の該当する状況下においては、これ等の重複した機序はより顕著な様式で補償及び寄与をもたらすと考えられる。これ等の成分の複雑な関係及び相互作用は気道の炎症、閉塞及びＡＨＲ、並びに他の肺の疾患又は状態の原因となる。
【００３７】
肺の実質細胞は、Ｃ５を生産し、そしてＣ５を活性化フラグメントに分解する能力を保有している（Ｄｅｓａｉ等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ．（１９８４）１：２０１−２１６）。生得免疫応答の部分としてのＣ５の活性化は、部分的には、アレルゲン（Ｎａｇａｔａ等、上出）、ハウスダスト（Ｍａｒｕｏ等、上出）、煙（Ｒｏｂｂｉｎｓ等、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９１）２６０：Ｌ２５４−Ｌ２５９）又は気道感染（Ｎａｇｙ等、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１１２：７２９−７３４；Ｋａｓａｍａｔｓｕ等、Ａｒｅｒｕｇｉ（１９９３）４２：１６１６−１６２２；Ｂｊｏｒｎｓｏｎ等、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．（１９９１）１４３：１０６２−１０６６）への曝露後のＣ５の直接の酵素切断の為、自己防御応答の有害な副生成物に十分なり得るものである。アレルゲン曝露後の肺内ＩＣの形成も補体カスケードを活性化する場合もある（Ｌａｒｓｅｎ，上出）。この仮説は活性化Ｃ５成分が気道の上皮側に主に位置し、そして、非喘息個体においては、補体の肺内活性化は十分調節されるということを提案している（Ｖａｒｓａｎｏ等、Ｔｈｏｒａｘ（２０００）５５：３６４−３６９）。この仮説と合致して、本発明者等のデータは、肺内Ｃ５阻害はチェックポイント３（図８）及びチェックポイント２において全身Ｃ５抑制と同様の効率を達成したことを明らかにしている。これ等のデータは更に、肺内活性化Ｃ５成分は抗炎症性ではなく主要プロ炎症性の力であることを示唆している。
【００３８】
試験は又、好中球又は好酸球により生産又は放出された炎症メディエーターに対するＣ５の抑制の作用を示している。これ等の炎症メディエーター、特にＴＧＦ−β、ＲＡＮＴＥＳ及びプロＭＭＰ９は、不良な長期予後を有する個体に関する焦点である、下気道のリモデリングと修復をもたらす、気管支平滑筋肥大及び呼吸器上皮の基底膜下のコラーゲンの付着の誘導により、気道に不可逆的損傷を引き起こす場合がある（Ｂｏｕｌｅｔ等、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．（２０００）１６２：１３０８−１３１３）。従って、独特で異なる抗炎症機序を利用するＣ５阻害はコルチコステロイド及び他の活性剤の強力な抗炎症作用を補完し、そして長期予後のための付加的な利益を有することができる。
【００３９】
本試験は喘息を有する個体において観察される気道の複雑な機能的変化が複雑な炎症の過程と共存していることを明確に表している。一方で活性化Ｃ５成分、例えばＣ５ａはその気道Ｃ５ａＲとの結合を介して、生得免疫系とＡＨＲとの間を直接関連付ける役割を果たしている。他方で、Ｃ５ａ及びＣ５ｂ−９はＩＣ及び樹立された気道炎症の存在下、それらの化学走性及び細胞活性化の活動を介して下流の炎症カスケードを調節する。Ｃ５ａ及びＣ５ｂ−９の形成をブロッキングすることは、下気道の機能を改善するのみならず、肺内の炎症活動を軽減する。これとは対照的に、Ｃ５ａＲ拮抗剤は肺内の炎症活動に劇的に影響することなく下気道の機能を顕著に改善する。
【００４０】
エアロゾル及び霧状化組成物
１つの態様において、本出願は補体カスケードの活性化を抑制する抗体を送達するための肺薬物送達組成物及び／又は装置に関する。肺薬物送達組成物は肺の疾患又は状態を治療するのに有用である。例えば、エアロゾル組成物は、呼吸管への追加的な活性剤と組み合わせた抗体の送達の為に提供される。呼吸管は口腔咽頭部及び喉頭を含む上気道、それに引き続き、気管、次いで気管支及び細気管支への分岐部を含む下気道を包含する。上下気道は誘導気道と称される。次に末端細気管支が分割して呼吸細気管支となり、これが次に最終的な呼吸域である肺胞、又は深部肺に到る。
【００４１】
肺の薬物送達は吸入により達成してよく、そして吸入による投与は本明細書においては経口及び／又は経鼻であってよい。肺送達のための薬学的装置の例として、定量吸入器（ＭＤＩ）、ドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）及びネブライザーが挙げられる。対象となる抗体及び／又は活性剤の送達に適合できる吸入による送達系の例は、例えば米国特許第５，７５６，３５３号；第５，８５８，７８４号；及びＰＣＴ出願ＷＯ９８／３１３４６；ＷＯ９８／１０７９６；ＷＯ００／２７３５９；ＷＯ０１／５４６６４；ＷＯ０２／０６０４１２に記載されている。抗体及び／又は活性剤の送達のために使用してよい他のエアロゾル製剤は米国特許第６，２９４，１５３号；第６，３４４，１９４号；第６，０７１，４９７号及びＰＣＴ出願ＷＯ０２／０６６０７８；ＷＯ０２／０５３１９０；ＷＯ０１／６０４２０；ＷＯ００／６６２０６に記載されている。
【００４２】
加圧定量吸入器（ｐＭＤＩ）は世界中で最も一般的に使用されている吸入器である。エアロゾルは弁が開放（通常は高圧ガスキャニスターを押し下げることによる）されることにより液体高圧ガスがキャニスター外に噴出される際に形成される。典型的には、薬剤又は治療薬は液体高圧ガスに懸濁している小粒子（通常は直径数ミクロン）内に含有されるが、一部の製剤においては、薬剤又は治療薬は高圧ガス内に溶解されていてよい。高圧ガスはエアロゾルが装置を離れると急速に蒸発し、小型の薬剤又は治療薬の粒子が生じ、これが吸引される。このようなｐＭＤＩで典型的に使用される高圧ガスは限定しないがハイドロフルオロアルカン類（ＨＦＡ）を包含する。界面活性剤もまた、例えばｐＭＤＩと共に薬剤又は治療薬を製剤するために使用してよい。他の溶媒又は賦形剤、例えばエタノール、アスコルビン酸、メタ重硫酸ナトリウム、グリセリン、クロロブタノール及び塩化セチルピリジニウムもまたｐＭＤＩと共に使用してもよい。このようなｐＭＤＩは更に付加装置、例えばスペーサー、保持チャンバー及び他の変形例を含んでよい。
【００４３】
ネブライザーは吸入のための薬剤含有液滴の霧状物を形成する。それらは通常は２種類、即ち超音波ネブライザー及びジェットネブライザーに分類される。新しい型のネブライザーも入手可能であり、それは機能するために超音波や空気圧を必要としない。単回呼吸噴霧器もまた開発されており（例えばＲｅｓｐｉｍａｔ（登録商標）、これは単回呼吸で薬剤を送達するのに用いられ、そして汚染が少ないことから好ましくあり得る。ジェットネブライザーはより一般的であり、そして薬剤含有水リザーバを通過して空気流を噴射するために加圧空気源を使用し、これにより、バッフル上の表面張力と液滴の破壊とが役割を果たす非線形の現象をもたらす粘度誘導表面不安定性が関与する複雑な過程において液滴が形成される。超音波ネブライザーはプレート又はメッシュの機械的振動により液滴を形成する。何れの型のネブライザーにおいても、薬剤は通常はネブライザー中の液体の溶液として含有され、そしてそのため、形成される小液滴は溶液として薬剤を含有する。しかしながら、一部の製剤（例えばＰｕｌｍｉｃｏｒｔ）に関しては、薬剤は水中に懸濁した小粒子内に含有され、これ等がその後、形成される小液滴内部に懸濁した粒子として含有される。特定の賦形剤、例えば塩化ナトリウム（例えば等張性維持のため）、無機の酸及び塩基（例えばｐＨを維持又は調節するため）、窒素ヘッドスペースパージ材、塩化ベンザルコニウム、塩化カルシウム、クエン酸ナトリウム、エデト酸二ナトリウム及びポリソルベート８０等が通常は霧状化に適する製剤中に包含される。
【００４４】
吸入器の第３の型はドライパウダー吸入器（ＤＰＩ）である。ＤＰＩにおいては、エアロゾルは通常は、それが吸引されるまで装置内に含有される粉末である。治療薬又は薬剤は小粉末粒子（通常は直径が数百万分の１メートル、又はマイクロメートル）として粉末形態において製造される。多くのＤＰＩにおいて、薬剤又は治療薬は典型的には直径５０〜１００マイクロメートルのより大型の糖粒子（例えば乳糖の１水和物）と混合される。乳糖／薬剤凝集塊上の増大した空力学的力により吸入時の薬剤粒子の捕獲が向上し、更に少量の個別粉末用量の充填も容易になる。吸入時、粉末は、乱流及び／又は粒子の凝集塊が衝突するスクリーン又は回転表面等の機械的装置の支援によりその構成粒子にまで分解し、肺内に吸入される気流中に小型の個々の薬剤粉末粒子を放出する。糖粒子は通常は装置内及び／又は口腔咽頭内に残存することが意図される。
【００４５】
出願の１つの態様は補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含むエアロゾル組成物を提供し、組成物は被験体における肺の疾患又は状態を防止又は治療するのに適する。エアロゾル抗体組成物はエアロゾル化抗体を含む組成物であるか、又は、エアロゾル化に適する製剤中に抗体を含む組成物であることができる。抗体はまた追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせ製剤はエアロゾル化に適するものである。或いは、抗体及び追加的活性剤は、エアロゾル化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【００４６】
出願の別の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体を含む霧状化組成物を提供し、組成物は被験体における肺の疾患又は状態を防止又は治療するのに適する。霧状化抗体組成物は、霧状化抗体を含む組成物であるか、又は、霧状化に適する製剤中に抗体を含む組成物であることができる。同様に、抗体はまた、追加的活性剤と組み合わせて製剤してよく、そして組み合わせ製剤は霧状化に適する。或いは、抗体及び追加的活性剤は、霧状化が起こった後に、又は、被験体に投与された後に組み合わせられるように別個に製剤してよい。
【００４７】
出願の更に別の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体及びネブライザーを含む生物医薬品パッケージを提供し、パッケージは被験体の肺の疾患又は状態を防止又は治療するのに適している。生物医薬品パッケージは更に、抗体の他に活性剤を含んでよい。生物医薬品パッケージはまた使用のための説明書を含んでもよい。
【００４８】
本出願の抗体は、それがＣ５のＣ５ａ及びＣ５ｂへの分解を防止するようにＣ５に対して特異的であることができる。抗体はＣ５コンバターゼに対して特異的であることができる。或いは、抗体は補体系の成分、例えばＣ５ａ、Ｃ５ｂ又はＣ５ｂ−９に特異的であってよく、そして補体に特異的な抗体は、好ましくは、成分の機能を、例えば成分のその対応する受容体への結合をブロッキングすることにより、又は、補体カスケードにおけるその後のシグナリング又は事象の活性化におけるその機能をブロッキングすることにより、抑制する。特定の実施形態はエクリズマブ又はペキセリズマブ、又は両方を使用する。本出願の抗体又は抗体治療薬は完全長の免疫グロブリン、キメラ抗体（例えばヒト化抗体）、１本鎖抗体、ドメイン抗体（例えばヒト抗体の重鎖（ＶＨ）又は軽鎖（ＶＬ）の何れかの可変領域に相当する抗体の最小の機能的結合単位として定義されるＤｏｍａｎｔｉｓにより開発されたドメイン抗体）、Ｆａｂフラグメント、又はＦａｂフラグメントと変異したＦｃ部分とを有する抗体であることができる。特定の実施形態においては、変異したＦｃ部分が補体を活性化しないか、又は、Ｆｃ部分の変異が補体を活性化するＦｃ部分の能力を低下させる。本出願の抗体はバルク中に生産又は処理し、そして、種々の用量において、適当な材料（例えばガラス又はプラスチック）で製造されたアンプルに充填してよい。抗体は１ｍｇ／ｍｌ〜２００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度において製剤中安定であってよい。
【００４９】
本出願の追加的活性剤（又は抗体治療薬以外の活性剤）は別の抗体治療薬（例えば抗補体又は抗Ｃ５抗体、抗ＩｇＥ抗体、例えばＸｏｌａｉｒ（登録商標）又はオマリズマブ、抗ＩＬ−４抗体又は抗ＩＬ−５抗体）、抗ＩｇＥ抑制剤（例えばＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）又はモンテルカストナトリウム）、交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗生物質（例えばトブラマイシン）、デオキシリボヌクレアーゼ（例えばプルモザイム）、抗コリン作用剤（例えばシュウ化プラトロピウム）、コルチコステロイド（例えばデキサメタゾン）、β−アドレノレセプターアゴニスト、ロイコトリエン抑制剤（例えばジロイトン）、５リポキシゲナーゼ抑制剤、ＰＤＥ抑制剤、ＣＤ２３拮抗剤、ＩＬ−１３拮抗剤、サイトカイン放出抑制剤、ヒスタミンＨ１受容体拮抗剤、抗ヒスタミン、抗炎症剤（例えばクロモリンナトリウム）又はヒスタミン放出抑制剤であることができる。本明細書においては、活性剤はまた治療薬又は薬剤とも称してよい。
【００５０】
抗体のエアロゾル化又は霧状化に適する製剤の例は適当なｐＨ（例えばｐＨ６〜８）において生理学的な浸透圧（例えば２８０〜３２０ｍＭ）にある。本出願の製剤は更に賦形剤、例えばポリソルベート８０を含んでよく、これは０．００１５〜０．０２％で使用できる。
【００５１】
米国特許第５，４７４，７５９号は、クロロフルオロカーボンを実質的に含まない、医学的用途において特定の利用性を有するエアロゾル製剤を開示している。製剤は高圧ガス（例えば１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン）、中鎖脂肪酸プロピレングリコールジエステル、中鎖トリグリセリド、場合により界面活性剤、及び場合により補助剤、例えば抗酸化剤、保存料、緩衝剤、甘味料及び矯味剤を含有する。
【００５２】
他の製薬上許容可能な担体も本出願の製剤中に使用してよい。表現「製薬上許容可能な」は、本明細書においては、調和の取れた医学上の判断内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答又は他の問題又は合併症を伴うことなく人間及び動物の組織と接触して使用することに適し、合理的な利益／危険の比において均衡している化合物、物質、組成物及び／又は剤型を指すために用いる。表現「製薬上許容しうる担体」は本明細書においては、ある臓器又は身体のある部分から別の臓器又は身体の部分まで主要拮抗剤を担持するか輸送することに関わる、製薬上許容可能な物質、組成物又はベヒクル、例えば液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又はカプセル化物質を意味する。各担体は製剤の他の成分と適合し、そして患者に対して害とならないという意味において「許容できる」ものでなければならない。製薬上許容可能な担体として機能できる物質のいくつかの例は、（１）糖類、例えば乳糖、グルコース及びスクロース；（２）澱粉、例えばコーンスターチ及びポテトスターチ；（３）セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤、例えばカカオ脂及び座薬用ワックス；（９）油脂類、例えばピーナツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油；（１０）グリコール類、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール類、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール；（１２）エステル類、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）等張性食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）リン酸塩緩衝溶液；（２１）医薬品製剤中に使用される他の非毒性の適合する物質を包含する。
【００５３】
これ等の製剤又は組成物を製造する方法は担体及び場合により付随的な１つ以上の成分に本出願の化合物を会合させる工程を包含する。一般的に、製剤は液体担体又は微細分割固体担体又は両方と本出願の化合物とを均質及び緊密に会合させ、そして次に、必要に応じて製品を形状化することにより製造する。
【００５４】
本出願のネブライザーはジェットネブライザー（例えばＰａｒｉ ＬＣ Ｊｅｔ Ｐｌｕｓ又はＨｕｄｓｏｎ Ｔ Ｕｐ−ｄｒａｆｔ ＩＩ）、超音波ネブライザー（例えばＭＡＢＩＳＭｉｓｔ ＩＩ）、振動メッシュネブライザー（例えばＯｍｒｏｎのＭｉｃｒｏａｉｒ）及び衝撃波ネブライザー（ＥｖｉＬａｂｓ Ｓｏｎｉｋ ＬＤ１２０）であることができる。
【００５５】
「エアロゾル組成物」とは肺送達に適する形態又は製剤中の本明細書に記載の抗体及び／又は活性剤を意味する。エアロゾル組成物はドライパウダー形態であってよく、それは霧状化するための溶液、懸濁液又はスラリーであってよく、又は、それは適当な低沸点の高度に揮発性の高圧ガスとの混合物であってよい。１つより多い抗体及び場合により他の活性剤又は成分をエアロゾル化製剤又はエアロゾル組成物中に配合してよく、そして用語「抗体」又は「活性剤」の使用はそのような抗体又は他の薬剤又は成分の２つ以上の使用を排除するものではない。
【００５６】
特定の好ましい実施形態においては、抗体又は活性剤は霧状化後にその活性の５０％超、好ましくは７０％超を保持している。特定の好ましい実施形態においては、抗体又は活性剤は霧状化後にその純度の５０％超、好ましくは７０％超を保持している。
【００５７】
本出願の使用に適する活性剤の製剤は霧状化用のドライパウダー、溶液、懸濁液又はスラリー及び高圧ガス中に懸濁又は溶解された粒子を包含する。本出願の使用に適するドライパウダーは不定形の活性剤、結晶性の活性剤及び不定形及び結晶性の活性剤の両方の混合物を包含する。ドライパウダーの活性剤は、好ましくは１０μｍ質量中央値直径（ＭＭＤ）、好ましくは７．５μｍ未満、そして最も好ましくは５μｍ未満、そして通常は直径０．１μｍ〜５μｍの範囲にある、肺の肺胞内への侵入を可能にするように選択された粒径を有する。これ等の粉末の送達用量効率（ＤＤＥ）は＞３０％、通常は＞４０％、好ましくは＞５０％、そして頻繁には＞６０％であり、そしてエアロゾル粒径分布は約１．０〜５．０μｍ質量中央値空力学的直径（ＭＭＡＤ）、通常は１．５〜４．５μｍＭＭＡＤ、そして好ましくは１．５〜４．０μｍＭＭＡＤである。これ等のドライパウダー活性剤は約１０重量％未満、通常は約５重量％未満、そして好ましくは約３重量％未満の水分含有量を有する。このような活性剤はＷＯ９５／２４１８３及びＷＯ９６／３２１４９に記載されており、これ等は参照により本明細書に組み込まれる。
【００５８】
ドライパウダー活性剤製剤は好ましくは実質的に不定形の粉末を形成する条件下に噴霧乾燥することにより製造する。バルク活性剤、通常は血漿形態のものを、生理学的に許容可能な水性緩衝液、典型的には約２〜９のｐＨ範囲を有するクエン酸塩緩衝液中に溶解する。活性剤は０．０１重量％〜１重量％、通常は０．１％〜０．２％の濃度で溶解する。次に溶液をＮｉｒｏＡ／Ｓ（Ｄｅｎｍａｒｋ）、Ｂｕｃｈｉ（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）等の市販の従来の噴霧乾燥機において噴霧乾燥することにより、実質的に不定形の粉末としてよい。これ等の不定形の粉末はまた、不定形の構造を形成する条件下、適当な活性剤の溶液の凍結乾燥、真空乾燥又は蒸発乾燥により製造してよい。このようにして製造された不定形の活性剤製剤を粉砕又はミリングすることにより所望の粒径範囲の粒子を製造することができる。ドライパウダー活性剤はまた結晶形態であってよい。結晶性ドライパウダーはバルク結晶性活性剤を粉砕又はジェットミリングすることにより製造してよい。
【００５９】
本出願の活性剤粉末は場合により呼吸器及び肺への投与に適する製薬用の担体又は賦形剤と組み合わせてよい。そのような担体は、患者に送達される粉末中の活性剤の濃度を低減することが望まれる場合は単に増量剤として機能してよいが、活性剤のより効率的で再現性のある送達を行うため、及び、製造及び粉末充填を容易にするために流動性及びコン
システンシー等の活性剤の取り扱い特性を向上させるために、粉末分散装置内の粉末の分散性を向上させるために機能してもよい。そのような賦形剤は限定されないが、（ａ）炭水化物、例えば単糖類、例えばフラクトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等；二糖類、例えば乳糖、トレハロース、セロビオース等；シクロデキストリン、例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン；及び多糖類、例えばラフィノース、マルトデキストリン、デキストラン等；（ｂ）アミノ酸、例えばグリシン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、リジン等；（ｃ）有機酸及び塩基から形成された有機の塩、例えばクエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム、グルコン酸マグネシウム、グルコン酸ナトリウム、塩酸トロメタミン等；（ｄ）ペプチド及び蛋白質、例えばアスパルテーム、ヒト血清アルブミン、ゼラチン等；及び（ｅ）アルジトール、例えばマンニトール、キシリトール等を包含する。担体の好ましいグループは乳糖、トレハロース、ラフィノース、マルトデキストリン、グリシン、クエン酸ナトリウム、ヒト血清アルブミン及びマンニトールを包含する。
【００６０】
ドライパウダー活性剤製剤は参照により本明細書に組み込まれるＷＯ９６／０９０８５に記載のＩｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ’ドライパウダー吸入器を用いて送達してよいが、所望のレベル又は適当な範囲内に流量を制御するように調節してよい。ドライパウダーはまた参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，３２０，０９４号においてＬａｕｂｅ等が記載する定量吸入器を用いて送達してもよい。
【００６１】
霧状化された溶液は市販の活性剤製剤溶液をエアロゾル化することにより製造してよい。これ等の溶液は前出のＬａｕｂｅ等により使用が記載されているＰｕｒｉｔａｎ Ｂｅｎｎｅｔｔにより製造されたＲａｉｎｄｒｏｐ等のジェットネブライザーにより送達してよい。溶液、懸濁液又はスラリーの送達のための他の方法はＲｕｂｓａｍｅｎ等の米国特許第５，６７２，５８１号に記載されている。振動圧電部材を使用する装置は参照により本明細書に組み込まれるＩｖｒｉ等の米国特許第５，５８６，５５０号に記載されている。
【００６２】
高圧ガス系は高圧ガス中に溶解した活性剤又は高圧ガス中に懸濁した粒子を包含してよい。製剤のこれ等の型の両方が参照により本明細書に組み込まれるＲｕｂｓａｍｅｎ等の米国特許第５，６７２，５８１号に記載されている。
【００６３】
特定の実施形態においては、エアロゾル又は霧状化抗体組成物は、１つ以上の他のエアロゾル又は霧状化治療薬、例えば交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗生物質（例えばトブラマイシン）、デオキシボヌクレアーゼ（例えばパルモザイム）、抗コリン作用薬（例えば臭化イプラトロピウム）又はコルチコステロイドと組み合わせることができる。
【００６４】
特定の実施形態においては、エアロゾル又は霧状化抗体組成物は、霧状化、吸入、静脈内又は経口経路により（同時又は逐次的に）投与される１つ以上の他の治療薬、例えば交感神経作用剤（例えばアルブテロール）、抗コリン作用薬（例えば臭化イプラトロピウム）、炎症抑制剤（例えばクロモリンナトリウム）、ロイコトリエン抑制剤（例えばジレウトン）、抗ＩｇＥ抑制剤（例えばＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標））又はコルチコステロイドと組み合わせることができる。
【００６５】
本明細書においては、抗体又は治療薬は微粒子として製剤してよい。０．５〜１０ミクロンの直径を有する微粒子は天然の障壁の大部分を通過して肺に侵入できる。１０ミクロン未満の直径は一般的に咽喉を迂回するために必要であり；０．５ミクロン以上の直径が通常は散逸を回避するために必要である。
【００６６】
特定の実施形態においては、主要抗体又は治療薬は超分子複合体に製剤され、これは０．５〜１０ミクロンの直径を有してよく、０．５〜１０ミクロンの直径を有する粒子に凝集することができる。
【００６７】
他の実施形態においては、主要抗体又は治療薬は肺送達のために適切に製剤されたリポソーム又は超分子複合体中で提供される。
【００６８】
（ｉ）微粒子を形成するための重合体
上記した超分子複合体のほかに、多くの他の重合体も微粒子を形成するために使用できる。本明細書においては、用語「微粒子」は微小球（均一な球体）、マイクロカプセル（コア及び重合体外層を有する）及び不規則な形状の粒子を包含する。
【００６９】
重合体は好ましくは抗体又は治療薬の放出が望まれる時間帯内で、又はその後の比較的早期まで、一般的に１年、より典型的には数ヶ月、更に典型的には数日〜数週間、生体分解性である。生体分解性は微粒子の破壊、即ち微粒子を形成している重合体及び／又は重合体自身の解離を指す。これは、ジケトピペラジンの場合のように粒子が投与される担体のｐＨから放出部位のｐＨへの変化の結果として、ポリ（ヒドロキシ酸）の場合のように加水分解の結果として、アルギネート等の重合体のイオン結合により形成される微粒子の場合のように微粒子からのカルシウム等のイオンの拡散により、そして多糖類及び蛋白質の多くの場合のように酵素的作用により、生じることができる。一部の場合においては、一次的な放出が最も有用であり得るが、他の例においてはパルス放出又は「バルク放出」がより効果的な結果をもたらす場合がある。
【００７０】
代表的な合成物質はジケトピペラジン、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びこれ等の共重合体、ポリ無水物、ポリエステル、例えばポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニル化合物、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアセテート、及び、ポリビニルクロリド、ポリスチレン、ポリシロキサン、アクリル及びメタクリル酸の重合体、例えばポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポリウレタン及びこれ等の共重合体、セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロースアセテート、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートブチレート、セルロースアセテートフタレート、カルボキシエチルセルロース、セルローストリアセテート及びセルローススルフェートナトリウム塩、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）及び（乳酸カプロラクトン）共重合体である。
【００７１】
天然の重合体はアルギネート及び他の多糖類、例えばデキストラン及びセルロース、コラーゲン、アルブンミン及び他の親水性蛋白質、ゼイン及び他のプロラミン及び疎水性蛋白質、これ等の共重合体及び混合物を包含する。本明細書においては、その化学的誘導体とは置換、化学基、例えばアルキル、アルキレンの付加、ヒドロキシル化、酸化及び当該分野で知られた他の修飾を指す。
【００７２】
生体接着性重合体はＨ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９３，２６，５８１−５８７に記載された生体腐食性ヒドロゲル、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギネート、キトサン及びポリアクリレートを包含する。
【００７３】
更に説明すれば、マトリックスは重合体から溶媒の蒸発、噴霧乾燥、溶媒抽出及び当該分野で知られた他の方法により形成できる。薬物送達のための微小球を形成するために開発された方法は文献に記載されており、例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ５，１３−２２（１９８７）；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ６，２７５−２８３（１９８７）；及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．３５，７５５−７７４（１９８８）に記載される通りである。方法の選択は、例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ４，３２９−３４０（１９９０）；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．４５，１２５−１３４（１９９２）；及びＢｅｎｉｔａ，等、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．７３，１７２１−１７２４（１９８４）に記載される通り、重合体の選択、大きさ、外部形態及び所望の結晶性に応じたものである。
【００７４】
例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，等（１９９０），Ｂｅｎｉｔａ及びＪａｆｆｅへの米国特許第４，２７２，３９８号に記載される溶媒蒸発の場合は、重合体は揮発性有機溶媒に溶解する。抗体及び／又は治療薬は、溶解可能形態又は微細粒子として分散した状態で、重合体溶液に添加し、そして混合物をポリ（ビニルアルコール）等の界面活性剤を含有する水相内に懸濁させる。得られるエマルジョンを有機溶媒大半が蒸発するまで攪拌し、固体の微小球を残存させる。
【００７５】
一般的に、重合体は塩化メチレンに溶解することができる。数種の異なる重合体濃度、例えば０．０５〜０．２０ｇ／ｍｌを使用できる。溶液に薬剤を投入した後、溶液を１％（ｗ／ｖ）ポリ（ビニルアルコール）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を含有する激しく攪拌されている蒸留水２００ｍｌ中に懸濁する。攪拌４時間の後、有機溶媒は重合体から蒸発し、そして得られる微小球を水で洗浄し、凍結乾燥機中で一晩乾燥する。
【００７６】
種々の大きさ（１〜１０００ミクロン、ただしエアロゾル用途には１０ミクロン未満）及び形態を有する微小球を、ポリエステル及びポリスチレン等の比較的安定な重合体に対して有用なこの方法で得ることができる。しかしながら、ポリ無水物等の不安定な重合体は水への曝露により分解する場合がある。これ等の重合体に対しては、ホットメルトカプセル化及び溶媒の除去が好ましい場合がある。
【００７７】
ホットメルトカプセル化の場合は、重合体を先ず溶融し、そして次に、好ましくは適切なサイズに分篩した抗体又は治療薬の固体粒子と混合する。混合物を非混和性の溶媒、例えばシリコーン油に懸濁し、そして連続的に攪拌しながら、重合体の融点より５℃高温に加熱する。エマルジョンが安定化した後、これを重合体粒子が固化するまで冷却する。得られた微小球を石油エーテルと共にデカンテーションすることにより洗浄し、自由流動粉末とする。１〜１０００ミクロンの直径を有する微小球はこの方法で得ることができる。この手法で製造された球の外表面は通常は平滑で緻密である。この操作法は水不安定性の重合体の場合に有用であるが、１０００〜５００００の分子量を有する重合体の場合の使用に限られる。
【００７８】
噴霧乾燥においては、重合体を有機溶媒、例えば塩化メチレン中に溶解する（０．０４ｍｇ／ｍｌ）。既知量の抗体及び／又は治療薬を重合体溶液中に懸濁（不溶の場合）又は
共溶解（可溶の場合）する。次に溶液又は分散液を噴霧乾燥する。重合体の選択に応じた形態を有する１〜１０ミクロンの直径範囲の微小球が得られる。
【００７９】
アルギネート又はポリホスファジン又は他のジカルボン酸重合体等のゲル型の重合体から作成されるヒドロゲル微小球は、重合体を水溶液に溶解し、配合すべき物質を混合物に懸濁し、そして、窒素ガスジェットを装着した微小液滴形成装置を通して重合体混合物を押し出すことにより製造できる。得られた微小球は、例えばＳａｌｉｂ，等、Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ４０−１１１Ａ，１２３０（１９７８）に記載の通り、緩徐に攪拌されたイオン性硬化バス内に落下させる。この系の利点は、微小球表面を、例えばＬｉｍ，等、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．７０，３５１−３５４（１９８１）に記載の通り、加工後にポリリジン等のポリカチオン性の重合体でそれらをコーティングすることにより、更に修飾することができる能力である。例えば、アルギネートの場合は、ヒドロゲルは、カルシウムイオンにアルギネートをイオン的に架橋させ、そして、次に、加工後にポリリジン等のポリカチオンに微粒子の外表面を架橋させることにより、形成することができる。微小球の大きさは種々のサイズの押出器、重合体流量及びガス流量により制御される。
【００８０】
キトサンの微小球は、重合体を酸性溶液に溶解し、そしてトリポリホスフェートに架橋することにより製造できる。例えば、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）微小球は、重合体を酸性溶液に溶解し、そして鉛イオンで微小球を沈殿させることにより製造される。アルギネート／ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）はアルギネートマイクロカプセル上のカルボキシル基の量を低減するために製造できる。
【００８１】
（ｉｉ）医薬組成物
微粒子は患者への投与のための食塩水等の何れかの適切な製薬用の担体内に懸濁することができる。最も好ましい実施形態においては、微粒子は投与直前まで乾燥又は凍結乾燥された形態において保存される。次にこれ等を十分な溶液、例えばエアロゾルとしての投与のための水溶液に懸濁するか、又はドライパウダーとして投与することができる。
【００８２】
（ｉｉｉ）ターゲティングされた投与
微粒子は特定の細胞又は臓器、特に貪食細胞及び臓器に送達できる。薬剤又は治療薬の全身送達が望まれる場合は、肺内のマクロファージによる微粒子のエンドサイトーシスを用いて微粒子を脾臓、骨髄、肝臓、リンパ節及び他の身体部分にターゲティングすることができる。
【００８３】
微粒子はまた特定の標的、例えば、肺系内の、又は肺の疾患又は状態に関連する特定の標的（例えば肺における癌細胞に特異的な標的）に特異的又は非特異的に結合する上記したもの等のリガンドの結合によりターゲティングすることもできる。このようなリガンドの例はまた、抗体及び可変領域含有フラグメント、レクチン及びホルモン、又は、標的細胞の表面上の受容体を有する他の有機分子を包含する。
【００８４】
（ｉｖ）微粒子の保存
特定の実施形態においては、微粒子は凍結乾燥して保存される。用量はカプセル化された抗体及び／又は治療薬の量、肺系内における放出速度、及び抗体及び／又は治療薬の薬物動態により決定される。
【００８５】
（ｖ）微粒子の送達
微粒子は、粒子の一部が肺系に到達するような鼻腔内への直接投与から肺の管内に到達するカテーテル又はチューブの使用まで、種々の方法を用いて送達できる。上記した通り、炭化水素高圧ガスはもはや使用されておらず、そして患者による吸気に依存しているものは用量変動をもたらす場合があるが、ドライパウダー吸入器は市販されている。適当な高圧ガスの例はヒドロフルオロアルカン高圧ガス、例えば１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＣＦ３ＣＨ２Ｆ）（ＨＦＡ−１３４ａ）及び１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン（ＣＦ３ＣＨＦＣＦ３）（ＨＦＡ−２２７）、パーフルオロエタン、モノクロロフルオロメタン、１，１−ジフルオロエタン及びこれ等の組み合わせを包含する。
【００８６】
治療方法
出願の第１の態様は、補体カスケードの活性化を抑制する抗体の治療有効量を被験体に投与することを含む、被験体における肺の疾患又は状態を防止又は治療するための方法を提供する。特定の実施形態においては、追加的活性剤もまた同じ被験体に投与する。抗体及び追加的活性剤の投与は同時に、又は何れかの順序において逐次的に行ってよい。
【００８７】
用語「防止する」は当業者の知る通りであり、そして状態、例えば局所的再発（例えば疼痛）、癌等の疾患、心不全又は何れかの他の医学的状態等の症候群複合体に関連して使用する場合は、当該分野で良く知られているものであり、そして、組成物を投与されない被験体と相対比較して、被験体における医学的状態の症状（例えば喘息）の頻度を低減するか、発症を遅延する組成物の投与を包含する。即ち、癌の防止は、例えば未投与の対照集団と相対比較して予防的投与を受けている患者の集団において検出可能な癌性の生育の数を低減すること、及び／又は、投与集団−対−未投与対照集団において例えば統計学的及び／又は臨床的に有意な分量、検出可能な癌性の生育の出現を遅延させることを包含する。感染の防止は、例えば投与集団−対−未投与対照集団において感染の診断数を低減すること、及び／又は、投与集団−対−未投与対照集団において感染の症状の発症を遅延させることを包含する。疼痛の防止は、例えば、投与集団−対−未投与対照集団において被験体により経験される疼痛感覚の、規模を低下すること、又は遅延することを包含する。
【００８８】
用語「治療する」は予防的及び／又は治療的な処置を包含する。用語「予防的又は治療的」処置は当該分野で知られる通りであり、１つ以上の主要組成物の宿主への投与を包含する。望ましくない状態（例えば宿主動物の疾患又は他の望ましくない状況）の臨床的顕在化の前に投与されれば処置は予防的（即ち望ましくない状態の発生から宿主を保護する）であるのに対し、望ましくない状態の顕在化の後に投与されれば処置は治療的である（即ち既存の望ましくない状態又はその副作用を減衰、軽減又は安定化することを意図する）。
【００８９】
出願の意図する肺の疾患又は状態は限定されないが喘息、気管支収縮、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、肺悪性疾患、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、肺線維症及びコラーゲン血管障害を包含する。
【００９０】
本治療を受ける被験体又は患者は必要とする何れかの動物、例えば霊長類、特にヒト、及び他の動物、例えばウマ、ウシ、ブタ及びヒツジ、及び家禽類及び愛玩動物全般である。
【００９１】
用語「治療有効量」は本明細書においては、動物において細胞又は臓器の少なくともサブ集団においてＣ５又は補体カスケードの活性化を抑制し、これにより何れかの医療的処置に適用可能な合理的な利益／危険の比において、投与された細胞又は臓器におけるその機能の生物学的帰結をブロッキングすることにより、何らかの所望の治療効果をもたらすために有効な本発明の化合物、物質又は化合物を含む組成物の量を意味する。
【００９２】
被験体への治療役の投与のタイミングは被験体の実体、又は、治療すべき、又は防止すべき、又は両方の肺の疾患又は状態に応じて変動することができる。例えば、投与は肺の状態の顕在化の前（例えば喘息発作前、又は、気管支収縮前）、肺の状態の顕在化の最中（例えば喘息発作又は気管支収縮の最中）、又は肺の状態の顕在化の後（例えば喘息発作後、又は、気管支収縮後）に行ってよい。
【００９３】
表現「補体カスケードの活性化を抑制する」は、本出願の抗体又は活性剤により付与される上記した補体系の何れかの成分に対する何れかの抑制的な影響又は作用を指す。抑制作用は補体の活性化に典型的な応答の低減又は消失により明らかにされ得る。例えば、補体活性化に対する典型的な細胞及び他の生物学的応答は、限定されないが、ヒスタミン放出、平滑筋収縮、増大した血管の透過性、白血球活性化、化学走性（例えば補体活性化の部位への顆粒球の移動）及び他の炎症性の現象、例えば細胞増殖を包含する。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５成分に特異的である。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５コンバターゼに特異的であり、例えばＣ５をＣ５ａ及びＣ５ｂ−９に変換するＣ５コンバターゼの機能をブロックする。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５ａに特異的である。特定の実施形態においては、抑制作用はＣ５ｂ又はＣ５ｂ−９に特異的である。
【実施例】
【００９４】
以下の実施例は説明の為に提示するものであり、限定するものではない。
【００９５】
材料及び方法
動物：雄性Ｃ５ｓ ＢＡＬＢ／ｃＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス及びＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎ／Ｊ、ＡＫＲ／Ｊ及びＳＷＲ／ＪマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入し、病原体不在施設において飼育した。血清Ｃ５ｂ−９媒介溶血の他に、Ｃ５遺伝子型を更に、Ｃ５ｓ及びＣ５ｄ ＤＮＡの両方に由来する２８０ｂｐのＤＮＡフラグメントを増幅するプライマー対（５’−ＣＡＣＧＡＴＡＡＴＧＧＧＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧ−３’及び５’−ＡＡＧＴＴＧＧＡＧＴＧＴＧＧＴＣＴＴＴＧＧＧＣＣ−３’）を用いながらテールＤＮＡに対して実施したＰＣＲにより確認した。このフラグメントはＣ５遺伝子における変異により選択的に破壊されるＨｉｎｄＩＩＩ部位をコードしており、これによりＨｉｎｄＩＩＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，ＭＡ）消化はＣ５ｄのＰＣＲ産物ではなくＣ５ｓを選択的に切断して１５０および１３０ｂｐのフラグメントとする。全動物のプロトコルはＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより検討され、ＮＩＨガイドラインに従った。
【００９６】
試薬：抗マウスＣ５ｍＡｂ（ＢＢ５．１）（Ｗａｎｇ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９６）９３：８５６３−８５６８）及びヒトフィブロネクチンに特異的なアイソタイプマッチ非関連対照ｍＡｂ（ＨＦＮ７．１）を腹水から精製した。キット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて精製したＢＢ５．１ＦａはＢＢ５．１と同様の活性を保持しており、そして純度は９７％超であった。実験的敗血症において死亡を防止することがわかっている抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ（Ｒｉｅｄｅｍａｎｎ等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００２）１１０：１０１−１０８）はザイモサン誘導好中球遊走を防止することができた。抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ及び対照ｓＩｇＧは両方とも、ＰＢＳ又はＣＦＡで乳化したマウスＣ５ａＲのＮ末端及び１つの余分なシステイン（Ｒｉｅｄｅｍａｎｎ等、上出）を包含するペプチドの何れかで反復して免疫化したＣ５ａＲ欠損マウス（Ｇｅｒａｒｄ等、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：７０５−７０８）から採取した血清より精製した。腹水又は血清の試料の何れかに由来する抗体をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（Ａｍｅｒｓｈａｍ）により精製した。コルチコステロイド（デキサメタゾン）はＳｉｇｍａから購入した。内毒素汚染が無く好中球遊走試験において強力な化学走性活性を有した組み換えマウスＣ５ａを、以前に報告されている通り（Ｒｉｅｄｅｍａｎｎ等、上出）クローニング及び精製した
。
【００９７】
気道炎症及び重度の気道応答の誘導
１０〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃ及びＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスを第１日及び第１４日に２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ Ｉｎｊｅｃｔ；Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中に乳化した２０μｇのＯＶＡ（ＧｒａｄｅＶ；Ｓｉｇｍａ）のｉｐ注射により感作した。シングルハウジングチャンバー（Ｂｕｘｃｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ）に連結したジェットネブライザー（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて第２８、２９及び３０日に気道を介して１０分間１％ＯＶＡでマウスを免疫化した。第３２日に、全ての感作した動物を１０分間５％ＯＶＡでエアロゾル攻撃した。チェックポイント３実験において、ＢＡＬＢ／ｃマウスを第３５日に再度５％ＯＶＡでエアロゾル攻撃した。擬似Ｃ５ｓ又はＣ５ｄマウスはＡｌｕｍのみで免疫化し、ＯＶＡの代わりにＰＢＳでエアロゾル攻撃した。
【００９８】
ｓＲａｗの非侵襲的測定
上下気道両方の抵抗性を測定するｓＲａｗを、自発呼吸を有する覚醒動物におけるＤＣＰにより測定した（Ｂｕｘｃｏ）。ＤＣＰは５％ＯＶＡエアロゾル攻撃の前後においてｓＲａｗの長手方向の変化をモニタリングするために使用した。チェックポイント３実験において、ＤＣＰを使用してＥＡＲの出現を確認した後に、種々の投与群に動物を無作為化した。
【００９９】
下気道機能の侵襲的測定
ＲＬ及びＣｄｙｎの変化をＢｕｘｃｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍのソフトウエア及びＢｕｘｃｏの全身プレチスモグラフを用いて測定した。マウスを麻酔（Ａｖｅｒｔｉｎ、１６０ｍｇ／ｋｇ）し、気管に挿管した。臭化パンキュロニウム（０．３ｍｇ／ｋｇｉｐ）で自発呼吸をブロックした。呼吸はＨａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ Ｉｎｓｐｉｒａベンチレーターにより維持し、これにより一回換気量及び呼吸速度を体重に従って計算した。ＲＬ及びＣｄｙｎの測定は５％ＯＶＡによるエアロゾル攻撃後５時間のＬＡＲのピーク時に実施した。ＲＬ及びＣｄｙｎのリアルタイムの変化はＢｕｘｃｏソフトウエアにより記録し、記録５分の平均値として報告した。ＡＨＲはエアロゾルＭｃｈ攻撃の間のＲＬ及びＣｄｙｎの変化に基づいて評価した。ＲＬ及びＣｄｙｎの変化は各エアロゾル攻撃の後のベースラインのパーセントとして表示した。Ｂｕｘｃｏエアロゾル制御超音波ネブライザー装置をベンチレーターに接続し、気管挿管を介するＭｃｈのエアロゾル送達に供した。ＰＢＳ又はＭｃｈ（１．６ｍｇ／ｍｌ）を１０秒当たり１０パフ〜２０パフの速度で送達し、エアロゾル送達の各パフは１５ｍｓ持続するようにした。
【０１００】
Ｃ５抑制
（１）チェックポイント１におけるＣ５阻害剤に関しては、抗Ｃ５ｍＡｂ（ＢＢ５．１）又は対照ｍＡｂ（ＨＦＮ７．１）を第２５、２９及び３１日に４０ｍｇ／ｋｇでｉｐ投与した。デキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ）を陽性対照として使用した。（２）第３２日の５％ＯＶＡ攻撃に対する気道応答を経験した動物をその後の試験の為に無作為化した。チェックポイント２におけるＣ５抑制については、動物に対し、第３３日にデキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ）、抗Ｃ５ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）又は対照ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）の単回ｉｐ注射を行った。第３５日において、エアロゾルＭｃｈ攻撃の間のＲＬ及びＣｄｙｎの測定のために動物を麻酔し、気管に挿管した。（３）チェックポイント３においては、抗Ｃ５ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）、対照ｍＡｂ（４０ｍｇ／ｋｇ）又はデキサメタゾン（２ｍｇ／ｋｇ）を、第３５日の５％ＯＶＡによる動物のエアロゾル攻撃後２０分に、ｉｖ注射により投与した。この重要な時点における肺内Ｃ５抑制に関しては、動物を飼育しているシングルチャンバーに連結したジェットネブライザーを用いて、１０〜３０分間、抗Ｃ５ｍＡｂ（３ｍｇ／ｍｌ）、抗Ｃ５Ｆａｂ（３ｍｇ／ｍｌ）、対照ｍＡｂ（３ｍｇ／ｍｌ）、抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧ（３ｍｇ／ｍｌ）、対照ｓＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）又はコルチコステロイド（２ｍｇ／ｍｌ）のいずれかのエアロゾル投与を動物に対して行った。擬似免疫化マウスには、同じ経路により投与したＰＢＳ溶液の同じ容量による擬似投与を行った。同じプロトコルを用いて実施した３つの肺内Ｃ５抑制実験の結果を相互にプールした。
【０１０１】
気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）の分析
アレルゲン誘発の約５．５時間の後、ＲＬ及びＣｄｙｎの測定後、気管挿管を介してＰＢＳ１ｍｌを注入し、その後穏やかに吸引することによりＢＡＬＦを採取した。ＢＡＬＦをＰＢＳ４００μｌに再懸濁した。ＢＡＬＦ中ＷＢＣ総数はエアロゾル実験の場合と同様、血球計又は自動細胞計数器を用いることにより計数した（Ｃｅｌｌ−Ｄｙｎ３７００Ａｂｂｏｔｔ）。サイトスピンスライドを準備し、固定し、そしてＤｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋを用いて染色した（ＶＷＲＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）。ＷＢＣ分画は１００×顕微鏡レンズ上でスライド当たり３００ＷＢＣの総数を計数した後に認定病理学者により調べた。プロＭＭＰ９、活性化ＴＧＦ−β、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン及びＩＬ−１３（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）、ＩＬ−５（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）及びヒスタミン（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）のＢＡＬＦレベルを製造元の指示に従ってＥＬＩＳＡにより測定した。
【０１０２】
血清ＯＶＡ特異的抗体の分析
ＥＬＩＳＡによるＯＶＡ特異的ＩｇＧ及びＩｇＥの為に、第３２日に５％アレルゲン誘発後５時間に血清試料を採取した。
【０１０３】
肺の組織学的検討
肺を、気管挿管を介して１０％緩衝ホルマリン（１ｍｌ）で膨張させ、少なくとも２４時間１０％ホルマリン中に固定した。肺試料はジームザ染色した。二重盲検組織学的分析を実施することにより、以下の基準に従って気道炎症を定量した。０：検出可能な気道炎症無し；１：２５％未満の気管支及び周囲の脈管が脈管周囲又は気管支周囲の炎症細胞浸潤を伴って観察された；２：気管支及び周囲の脈管の約２５〜５０％が罹患していた；３：気管支及び周囲の脈管の約５０〜７５％が罹患していた；４：気管支及び周囲の脈管の＞７５％が罹患していた。
【０１０４】
Ｃ５ｂ−９媒介溶血試験及びインビトロＣ５ａ媒介好中球遊走試験
以前に報告されている通り（Ｗａｎｇ等、上出）ニワトリＲＢＣの溶血を媒介しているＣ５ｂ−９の原料として、記載した時点において採取した血清を使用した。マウス血清（Ｓｉｇｍａ）をＢＢ５．１（１００μｇ／ｍｌ）又は同じ容量のＰＢＳと共にインキュベートした後に、ザイモサン（１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ）を用いて活性化した。希釈した血清（２０％）を好中球化学走性実験のためのＣ５ａの原料として使用した。
【０１０５】
統計学的分析
データは平均±ＳＥＭとして表示した。等分散と仮定したスチューデントの片側ｔ検定を用いた（ＭＳＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）。０．０５未満のＰ値を有意とみなした。
【０１０６】
抗Ｃ５ｍＡｂ、ＢＢ５．１によるＣ５ａ及びＣ５ｂ−９の形成のブロッキング
抗Ｃ５ｍＡｂによる補体成分Ｃ５の機能的抑制は血清Ｃ５ｂ−９媒介溶血活性のブロッキングの薬力学的プロファイルにより調べた（図１Ａ）。更に、Ｃ５ａ媒介好中球遊走をインビトロの試験において調べた（図１Ｂ）。抗Ｃ５ｍＡｂ、ＢＢ５．１の単回ｉｖ注射によるＣ５の抑制の薬力学的特徴は投与後最初の５時間の間、単回ｉｐ注射の薬力学的特徴とは大きく異なっている。Ｃ５ｂ−９媒介溶血の８０％超がＢＢ５．１のｉｖ投与の１時間以内に抑制されたのに対し、ｉｐ注射では３０％未満の抑制であった。抗Ｃ５ｍＡｂの投与はｉｖ注射後５時間〜４８時間では溶血の６０％超をブロックし続けていたが、ｉｐ注射後のこの期間では溶血の約５６％がブロックされていた。対照ｍＡｂ投与マウスから採取した血清試料は試験の全期間中、正常溶血活性の８０％超を有していた（図１Ａ）。溶血活性は抗Ｃ５ｍＡｂ単回注射後１週間には正常範囲となるように緩徐に回復した。
【０１０７】
インビトロの好中球遊走試験はＣ５ａの形成のブロッキングに対する抗Ｃ５ｍＡｂの能力をテストするために使用した（図１Ｂ）。ザイモサン活性化前の抗Ｃ５ｍＡｂによる血清試料の抑制は、ザイモサン活性化対照血清で観察された通り、ザイモサン活性化後にＣ５ａの存在により媒介されるヒト好中球化学走性を顕著にブロックした（図１Ｂ）。抗Ｃ５ｍＡｂＢＢ５．１はＣ５ａとＣ５ｂ−９との両方の形成をブロックし、そしてＣ５ａに直接結合しなかったため、この抗Ｃ５ａｍＡｂは恐らくはＣ５コンバターゼによるＣ５の切断のブロッキングに特異的であると考えられる。
【０１０８】
ＯＶＡ感作動物における重度の気道応答の発生及び３種の重要なポイントの定義
ＯＶＡ感作動物は５％ＯＶＡを用いたエアロゾル攻撃後、即座に重度気道応答を発生した（図２Ａ）。アレルゲンによるエアロゾル誘発に対する典型的な気道応答は、肥満細胞によるヒスタミンの放出により媒介されることが知られている早期気道応答（ＥＡＲ）、及び炎症細胞の浸潤、浮腫及び気管支の収縮の作用の組み合わせにより媒介される後期気道応答（ＬＡＲ）よりなった（Ｌａｒｓｅｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）３：５９−８５）。５％ＯＶＡ誘発後の気道応答は、非侵襲的二重チャンバープレチスモグラフ（ＤＣＰ）により各マウスにおいてモニタリングすることにより、ＥＡＲ及びＬＡＲの出現を示す特異的気道応答（ｓＲａｗ）の長手方向の変化を測定した（図２Ａ）。ＥＡＲは典型的には５％ＯＶＡ誘発後１５分のｓＲａｗの短時間上昇であり、そしてＬＡＲは典型的には５時間後に観察され、これは以前の報告と合致している（Ｃｉｅｓｌｅｗｉｃｚ，等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９９）；１０４：３０１−３０８）。ＥＡＲ及びＬＡＲは共にベースラインに対して５〜３０倍高値の程度であった。ＬＡＲピーク時の重度の気道応答は一般的に動物が明らかな呼吸困難を示しているものとして顕在化した。Ｃ５の抑制は抗Ｃ５ｍＡｂの投与により達成できるため、本発明者等はＣ５及びその活性化成分の重要な関与を疾患の重要な段階の間の３つの重要なポイントにおいて解明することにした（図２Ｂ）。３つの重要なチェックポイントは、１）喘息の発症の２つの特徴の１つである気道炎症の開始；２）喘息のもう１つの特徴である非特異的刺激に対するＡＨＲの発生；及び３）アレルゲン誘発後の進行中の既往応答の持続である。チェックポイント２及びチェックポイント３の両方は以前に重度の気道応答を経験し（図２Ｂ）、そして、気道炎症を樹立している被験体におけるＣ５の寄与を評価するために設計されている。チェックポイント３の試験はＥＡＲの間のｉｖ又はエアロゾルの経路のいずれかにより治療薬を投与することによるアレルゲン誘発後の進行中気道応答の間に実施した。下気道の機能及び既往炎症の定量は５％ＯＶＡ誘発後５時間のＬＡＲピークの間に評価した。
【０１０９】
チェックポイント１：気道炎症の開始におけるＣ５の関与
１％ＯＶＡの反復エアロゾル感作の時点であるチェックポイント１におけるＣ５抑制は、第３２日におけるＯＶＡ特異的ＩｇＥ又はＩｇＧの血清濃度に対して有意な影響を有していなかった（図３Ａ）。コルチコステロイド投与マウスもまた、第２５日においてコルチコステロイド又は抗Ｃ５ｍＡｂが投与されるより遥かに前に生じていたと考えられるＯＶＡ特異的ＩｇＥ及びＩｇＧの濃度上昇を示していた。擬似投与マウスは無視できる濃度のＯＶＡ特異的ＩｇＧ又はＩｇＥを有していた。対照ｍＡｂ及びコルチコステロイド投与マウスにおいて観察された正常溶血活性（９２．７％±６．８）と比較した場合に、抗Ｃ５ｍＡｂの反復投与（ｉｐ）の結果としてＣ５ｂ−９媒介溶血の約８０％が抑制されていた（２１．１％±４）。下気道の２つの重要な機能を５％ＯＶＡ誘発後５時間に気管挿管により調べた。肺抵抗（ＲＬ）の増大は一般的には下気道の顕著な閉塞に関連しており（図３Ｂ）、そして、動的肺コンプライアンス（Ｃｄｙｎ）は正常な肺で観察される圧力変化後の正常な容量への復帰の重要な特徴であり肺の弾力性の損失に関連している（図３Ｃ）。対照ｍＡｂ投与マウスにおいて見られた有意に増大したＲＬ及び低減したＣｄｙｎは増大した気道閉塞を示していた（図３Ｂ及びＣ）。擬似マウスはエアロゾルＰＢＳ溶液への曝露後５時間にＲＬ及びＣｄｙｎの正常な範囲を示していた。
【０１１０】
その強力な抗炎症及び抗喘息活性と相関して、チェックポイント１におけるコルチコステロイド処置はＲＬの増大を有意にブロックし、そしてＣｄｙｎの消失を防止している。同様に、チェックポイント１におけるＣ５抑制はアレルゲン誘発後５時間でＲＬの増大を有意に低下させており、ＲＬは１．６６ｃｍＨ２Ｏ／ｍｌ／秒±０．２であったのに対し、対照ｍＡｂ投与動物で見られたＲＬは２．１７ｃｍＨ２Ｏ／ｍｌ／秒±０．３３であった（図３Ｂ）。Ｃ５抑制はまた、Ｃｄｙｎの消失も僅かに低減させた（図３Ｃ）。肺組織の二重盲検組織学的分析（図３Ｄ）は機能分析から得られたデータを確認するものであり、そして対照ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスが炎症細胞の重度の脈管周囲及び気管支周囲の浸潤を有していたことを示している（図３Ｆ）。組織学的スコアの有意な低下がコルチコステロイド投与マウスにおいて観察された（図３Ｇ）のに対し、抗Ｃ５ｍＡｂ投与マウスにおいては観察された低下は明確ではなかった（図３Ｈ）。ヒトにおける重度のアレルギー性喘息と同様、気道に沿った脈管周囲及び気管支周囲の患部においては好酸球が優勢（５０％超）な炎症細胞であった（図３Ｆ〜Ｈ）。
【０１１１】
チェックポイント２：樹立された気道炎症を有する動物におけるＡＨＲの発生におけるＣ５の寄与
気道炎症に加えて、非特異的刺激に対するＡＨＲも喘息のもう１つの特徴である。ＡＨＲはエアロゾルメタコリン（Ｍｃｈ）攻撃の漸増用量に応答したベースラインのパーセントとして表示されるＲＬ及びＣｄｙｎの変化として評価した（図４Ａ及びＢ）。対照ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスはエアロゾルＭｃｈ攻撃の過程においてＲＬの有意な増大及びＣｄｙｎの有意な消失を示したが、擬似マウスはエアロゾルＭｃｈ攻撃に対して中程度に応答したのみであった。対照ｍＡｂ投与マウスでは８匹中２匹が高用量エアロゾルＭｃｈ攻撃の間に重度の呼吸ストレスのため死亡した。対照的に、Ｃ５抑制はコルチコステロイド投与動物の場合と同様、エアロゾルＭｃｈ攻撃の過程においてＲＬの劇的増大及びＣｄｙｎの低下を防止した（図４Ａ及びＢ）。擬似マウスと比較した場合のエアロゾルＭｃｈ攻撃の過程におけるＣｄｙｎの損失及びＲＬの増大は、恐らくは、これ等の動物における樹立された気道炎症の存在によるものと考えられた。３つの投与コホートの間には気道炎症の程度に注目すべき差は無かった。抗Ｃ５ｍＡｂ投与マウスは第３５日に正常溶血活性の約４５％を有していた。
【０１１２】
チェックポイント２におけるＣ５抑制の本発明者等の結果を以前の報告（Ｋａｒｐ等、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１：２２１−２２６）のデータと比較するために、天然の内因性ＡＨＲの存在又は不在を以前に報告されている正常Ｃ５ｄマウスの一部の系統において調べた（Ｄｅ Ｓａｎｃｔｉｓ等、Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ
Ｍｅｄ．（１９９７）１５６：Ｓ８２−Ｓ８８；Ｌｅｖｉｔｔ，等、ＦＡＳＥＢ Ｊ．（１９８８）２：２６０５−２６０８）。非免疫化Ｃ５ｄＡＫＲ／ＪマウスはエアロゾルＭｃｈ攻撃の漸増用量への劇的な気道応答を有しており、ベースラインを超えるＲＬの有意な増大（２０パフＭｃｈで８４．２％±１６．７）及びベースラインより低値となったＣｄｙｎの有意な低下（２０パフＭｃｈで４０％±５．４）を示したのに対し、Ｃ５ｄＳＷＲ／Ｊ及びＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスはＣ５完全（Ｃ５ｓ）ＢＡＬＢ／ｃマウス及びＣ５７ＢＬ／６マウスと識別不可能なＲＬ及びＣｄｙｎの最小限の変化を示し、ベースラインとの差はＲＬ及びＣｄｙｎの何れも１５％の最大変化を超えることは無かった（各系統につきｎ＝３、データ示さず）。次に、内因性ＡＨＲを有さないＣ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスを免疫化し、図４Ａ及びＢにおけるＣ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスと同一の様式においてエアロゾルＭｃｈで攻撃した。感作Ｃ５ｄ動物のサブグループもまた第３３日に対照又は抗Ｃ５ｍＡｂ投与の何れかを行った。Ｃ５ｄＢ１０Ｄ２ｏＳｎマウスはＣ５ｓマウスと同程度の気道炎症を発症し、平均の組織学的スコアは１．９１±０．３７（ｎ＝６）であるのに対し、Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスでは組織学的スコアは２．２５±０．２５（ｎ＝４）であった。抗Ｃ５ｍＡｂと対照ｍＡｂ投与Ｃ５ｄマウスとの間には注目すべき差は無かった。以前の報告（Ｋａｒｐ等、上出）とは対照的に、漸増用量エアロゾルＭｃｈ攻撃はＯＶＡ免疫化Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスにおける下気道機能の有意な変化を誘導しなかった（図４Ｃ及びＤ）。第３３日の抗Ｃ５ｍＡｂ又は対照ｍＡｂの何れの投与もＡＨＲの発生に影響しなかった。両方のｍＡｂ投与コホートのデータをｍＡｂ投与コホートとしてプールした（図４Ｃ及びＤ）。更に、組み換えマウスＣ５ａ（ｒｍＣ５ａ）を用いたＯＶＡ免疫化Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスの再生により、有意なＲＬの増大及びＣｄｙｎの低下で示される通りエアロゾルＭｃｈ攻撃に応答したＡＨＲが完全に回復した（図４Ｃ及びＤ）。
【０１１３】
ｒｍＣ５の再生は、ｒｍＣ５ａで再生した擬似Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスがＭｃｈ攻撃の間に下気道機能の有意な変化を示さなかったことから、ＡＨＲの発生のためには十分ではなかった（図４Ｃ及びＤ）。Ｍｃｈ攻撃後の各マウスから採取した血清試料の分析によれば、Ｂ１０Ｄ．２ｏＳｎマウスのＣ５不全状態が確認され、平均の溶血活性は８．１％±０．９であったのに対し、Ｃ５ｓＢＡＬＢ／ｃマウスでは１０８％±３．８であった。更に、Ｃ５ｓ及びＣ５ｄ動物の各ロットからの無作為の尾部試料（ｎ＝２）を分析してＣ５遺伝子型の状態を確認した。
【０１１４】
チェックポイント３：進行中の気道応答の間のＣ５の寄与
進行中の気道応答の持続におけるＣ５の役割もまた検討した。第３５日の５％ＯＶＡへのエアロゾル曝露後１５分においてＤＣＰによりモニタリングしながらＥＡＲピーク時に介入を行った。全対照ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスは重度のＬＡＲを発症し、有意なＲＬの増大及びＣｄｙｎの低下がアレルゲン誘発後５時間に観察された（図５Ａ及びＢ）。
【０１１５】
迅速な全身Ｃ５抑制を達成するためにＥＡＲ中のｉｖ注射を介した治療薬投与を選択したところ、ＬＡＲの発生は完全にブロックされ、５％ＯＶＡ誘発後５時間のＲＬは最小限の増大であり（図５Ａ）、そしてＣｄｙｎの最小限の低下により示される通り肺の弾力性の損失の大部分が防止された（図５Ｂ）。興味深いことに、コルチコステロイドの投与は５時間においてＬＡＲの発生を排除しておらず、有意なＲＬの上昇及びＣｄｙｎの低下が観察された。
【０１１６】
下気道機能に対する即時の影響（５時間以内）はｉｖコルチコステロイド投与後には観察されなかったが（図５Ａ）、この投与は２４時間後において肺内ＩＬ−１３を有意にモジュレート（図７Ｂ）し、そして下気道機能を有意に向上させた。肺組織の二重盲検組織学的分析は、図３Ｆに示す組織学的試料と同様、コルチコステロイド、抗Ｃ５ｍＡｂ又は対照ｍＡｂの何れかを用いたｉｖ介入後５時間において動物由来の炎症細胞の脈管周囲及び気管支周囲の浸潤の程度が同等であることを示していた。
【０１１７】
炎症細胞の遊走に対するＣ５抑制の作用
気道組織炎症部から気管支管腔への炎症細胞の順次の遊走もまた、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）ＷＢＣ分析により調べた。チェックポイント１において対照ｍＡｂ投与マウスと比較して、抗Ｃ５ｍＡｂ投与ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいては総ＢＡＬＦ炎症細胞の有意な低減があった（図６Ａ）。Ｃ５抑制による炎症細胞の遊走に対するブロッキングは改善された下気道機能の程度を超過しており（図３Ｂ及びＣ）、そして組織炎症を低減した（図３Ｄ）。同様に、ＢＡＬＦをチェックポイント３において採取した際に（図６Ｂ）、Ｃ５抑制は再度気管支管腔内への炎症細胞の遊走を有意にブロックしており、コルチコステロイド又は対照ｍＡｂの何れを投与した動物よりも、抗Ｃ５投与動物においてＢＡＬＦＷＢＣ計数値が有意に低値であった。この結果は第３５日においてアレルゲン誘発の前に採取した肺組織における炎症細胞の脈管周囲及び気管支周囲の浸潤の明確な存在とは劇的に対照的である。Ｃ５抑制による炎症細胞の遊走の有意なブロックはチェックポイント３におけるコルチコステロイド投与より高値のＣ５抑制の有意に増強された薬効と相関していた（図５Ａ及びＢ）。
【０１１８】
擬似マウスはＢＡＬＦＷＢＣ計数のベースライン値をもたらし、これはＷＢＣ分画分析においては主に正常な肺胞マクロファージ（８２．３％±１０．３）であった（図６Ｃ）。好酸球は全てのＯＶＡ免疫化動物に由来するＢＡＬＦ炎症細胞の４５％超を構成しており、治療介入とは無関係であった。コルチコステロイド（４．５％±２．８）又は抗Ｃ５ｍＡｂ（６．３％±３．３）−対−対照ｍＡｂ投与マウス（１８．３％±４．４）の何れかを用いて、チェックポイント３において投与された動物から得たＢＡＬＦ中で回収された好中球のパーセントに有意な減少があった。チェックポイント３に介入を受けた動物から得たＢＡＬＦ試料中の好酸球又はリンパ球のパーセントには有意な低下は起こらなかった（図６Ｃ）。
【０１１９】
肺内Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカインプロファイル及び炎症メディエーターに対するＣ５抑制の作用
対照ｍＡｂ投与マウスから採取したＢＡＬＦは擬似マウスと比較してＩＬ−５及びＩＬ−１３の有意に増大した濃度を有していた（図７Ａ及びＢ）。コルチコステロイド投与はＩＬ−５及びＩＬ−１３のＢＡＬＦ濃度を有意に低減したが、これは５時間の投与期間中の下気道の機能の迅速な改善（図５Ａ及びＢ）とは解釈されなかった。チェックポイント３におけるＣ５抑制後に観察された下気道機能の劇的改善（図５Ａ及びＢ）はＩＬ−５及びＩＬ−１３のＢＡＬＦ濃度の何れの低下にも相関していなかった。抗Ｃ５及びコルチコステロイド投与マウスの間ＩＬ−１３のＢＡＬＦ濃度の統計学的な差は、０．０５１のｐ値に相当している。チェックポイント３におけるＣ５抑制又はコルチコステロイド療法はヒスタミンのＢＡＬＦ濃度に影響しなかった（図７Ｃ）。このことは、エアロゾルアレルゲン誘発による肥満細胞のＩｇＥ受容体の結合時に気道管腔内にヒスタミンが恐らくは既に放出されており、そして、治療介入が行われた時点におけるＥＡＲの出現の原因となっているため、予測されたことである。下気道に沿って最も優勢な炎症細胞である好酸球（図３Ｆ〜Ｈ）が恐らくは喘息個体におけるエオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ及びＴＧＦ−βの生産の原因である（図７Ｄ〜Ｆ）。対照ｍＡｂ投与動物はエオタキシン（図７Ｄ）、ＲＡＮＴＥＳ（図７Ｅ）又は活性化ＴＧＦ−β（図７Ｆ）の有意に上昇したＢＡＬＦ濃度を有していたのに対し、擬似マウスではこれ等のメディエーターの濃度は無視可能又は検出不可能な濃度であった。対照的に、Ｃ５抑制はチェックポイント１（図Ｄ及びＥ）又はチェックポイント３（図７Ｆ）の何れかに投与した場合に、エオタキシン、ＲＡＮＴＥＳ及び活性化ＴＧＦ−βのＢＡＬＦ濃度に対して顕著な影響を与えていた。コルチコステロイド投与はチェックポイント３に投与した場合にはＴＧＦ−βのＢＡＬＦ濃度を低下させたのみであったが、チェックポイント１に投与した場合にはエオタキシン又はＲＡＮＴＥＳの生産及び放出に対してはっきりした影響は与えなかった。
【０１２０】
好中球は一般的に気管支のＴＮＦ−α及びプロＭＭＰ９の生産に関与していると考えられている。Ｃ５抑制はチェックポイント１において投与した場合にＴＮＦ−αのＢＡＬＦ濃度を有意に低減し（図７Ｇ）、対照ｍＡｂ投与マウスとは有意に異なっていた。チェックポイント３においてＣ５抑制を行った場合には、プロＭＭＰ９の気管支内濃度は劇的に低下し、そして対照ｍＡｂ投与及びコルチコステロイド投与マウスとは有意に異なっていた（図７Ｈ）。
【０１２１】
チェックポイント３：進行中の気道応答の間のＣ５の肺内活性化の寄与
気道組織炎症から気管支管腔への炎症細胞の多大な遊走は、恐らくは気道の上皮粘膜からの強力な化学走性の力に起因する。即ち、Ｃ５はアレルゲン誘発に対する気道の応答の間、肺内で活性化される場合がある。下気道の機能及び炎症のパラメーターをＣ５の肺内活性化をブロックした後に評価した。ＦｃγＲＩＩＢ等の抑制性の受容体によるチェックポイント３における潜在的影響（Ｋａｔｚ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００２）１４：６９８−７０４．；Ｒａｖｅｔｃｈ等、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）；１９：２７５−２９０）もまた、肺内Ｃ５及び抗Ｃ５ｍＡｂの間の相互作用及びその後の免疫複合体（ＩＣ）の形成の結果として評価した。
【０１２２】
この目的を達成するために、抗Ｃ５ｍＡｂによる肺内Ｃ５抑制の作用を抗Ｃ５Ｆａｂと直接比較した。更に、抗Ｃ５ａＲ血清ＩｇＧ（ｓＩｇＧ）の効率もこのチェックポイントにおける肺内Ｃ５ａ−対−Ｃ５ｂ−９の役割を解明するために評価した。図８Ａ及びＢに示す通り、対照ｍＡｂ投与動物は重度のＬＡＲを発生し、ＲＬの有意な増大及びＣｄｙｎの有意な低下を伴っており、擬似マウスにおいて見られた正常なＲＬ及びＣｄｙｎとは顕著に対照的であった。コルチコステロイドのエアロゾル投与はＲＬの低下及び相応するＣｄｙｎの保存により明らかなとおり、ＬＡＲの発生をブロックした。ＥＡＲピーク時の抗Ｃ５ｍＡｂ又は抗Ｃ５Ｆａｂの何れかのエアロゾル投与による肺内Ｃ５活性化のブロックもまたＬＡＲの発生を防止し、ＲＬの増大は最小限であり、Ｃｄｙｎの低下は最小限であった（図８Ａ及びＢ）。両方の抗Ｃ５投与コホートのＲＬ及びＣｄｙｎは対照ｍＡｂ投与動物とは有意に異なっていた。抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧを用いて肺内Ｃ５ａのその受容体への結合をブロックすることは、やはり、抗Ｃ５ｍＡｂを投与した動物と同様、ＬＡＲの発生を防止し、ＲＬの増大は最小限であり、Ｃｄｙｎの低下は最小限であった。抗Ｃ５ｍＡｂ、抗Ｃ５Ｆａｂ又は抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧの何れかを投与した３コホートの間には統計学的な差は無かった（図８Ａ及びＢ）。
【０１２３】
炎症細胞の遊走（図８Ｃ）及びプロＭＭＰ９のＢＡＬＦ濃度（図８Ｄ）等の肺内炎症活動性のパラメーターを調べたところ、Ｃ５の肺内活性化をブロックすることとＣ５ａのそのＣ５ａＲへの結合をブロックすることとの間に有意な差が見られた。ＥＡＲ中の抗Ｃ５ｍＡｂ又はそのＦａｂフラグメントの何れかのエアロゾル投与は、気管支気道管腔内への炎症細胞の遊走及びプロＭＭＰ９のＢＡＬＦ濃度の上昇の両方を有意にブロックしたのに対し、Ｃ５ａＲの結合をブロックしたことは、対照ｍＡｂを投与した動物と同様、これ等の２つの重要な炎症パラメーターに有意な影響を示さなかった（図８Ｃ及びＤ）。ＬＡＲの発生をブロックするその能力（図８Ａ及びＢ）と合致して、コルチコステロイドのエアロゾル投与はやはり、肺内炎症活動を軽減しており、炎症細胞の遊走及びプロＭＭＰ９の生産の明確な低下（図８Ｃ及びＤ）が伴っており、気管支管腔の上皮側における炎症活動の重要性を示していた。抗Ｃ５ｍＡｂ、抗Ｃ５Ｆａｂ又は抗Ｃ５ａＲｓＩｇＧのエアロゾル投与は血清Ｃ５ｂ−９媒介溶血活性に対して影響を有していなかった。
【０１２４】
複合療法
図９に示す通り、非特異的対照抗体を投与した動物はＭｃｈ攻撃の過程において肺抵抗の有意な増大を示した。本試験においては、高用量のＭｃｈで攻撃した二匹の動物は重度の呼吸ストレスのため死亡した。対照的に、ステロイド及び抗Ｃ５投与動物は正常な擬似免疫化動物よりは高値であるが、対照プラセボ投与マウスよりは有意に低値である肺抵抗の僅か中等度の増大のみ有していた。抗Ｃ５抗体及びステロイドの両方を用いた複合投与はＭｃｈ攻撃の過程において肺抵抗の増大を更に有意に低減した。この結果に基づけば、ステロイド及びＣ５阻害剤の両方とも、樹立された気道炎症を有する喘息個体における非特異的なエアロゾル刺激に対する気道応答亢進の発生を防止することができる。
【０１２５】
霧状化製剤
抗体の霧状化に適する製剤の例を図１０に示す。図１１は霧状化投与の有効性を更に示すものである。図１１に示す結果は、ｉｐの代わりに第３２日に霧状化により薬物送達したことを除き、本明細書に記載したチェックポイント２と同様のプロトコルを使用した以下の試験の後に得られたものである。抗Ｃ５抗体については、３ｍｇ／ｍｌのＢＢ５．１を１０分間の霧状化に付し、２ｍｇ／ｍｌのステロイドも又１０分間の霧状化に付した。複合療法の為に、１０分間の霧状化に付した終濃度は：ＢＢ５．１は３ｍｇ／ｍｌ、そしてステロイドは２ｍｇ／ｍｌとした。
【０１２６】
図１２は更に、３０ｍｇ／ｍｌの製剤１（図１０）中のエクリズマブがＰａｒｉ ＬＣ
Ｊｅｔ Ｐｌｕｓ又はＳｏｎｉｋ ＬＤＬ等の従来のネブライザーにより効果的及び効率的に霧状化できることを示している。図１２は霧状化後の粒子の大部分が深部肺送達に適する５μＭ未満であったことを示している。
【０１２７】
図１３に示す通り、製剤１（図１０）中のエクリズマブは従来のネブライザーにより効果的及び効率的に送達することができ、やはり従来のネブライザーを使用している既存の吸入送達される肺用薬剤Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）のエアロゾル特性に匹敵していた。製剤１（図１０）中のエクリズマブはまた特殊ネブライザー、例えばＳｏｎｉｋＬＤＬによっても効果的及び効率的に送達することもできる。
【０１２８】
図１４及び図１５に示す通り、エクリズマブが霧状化により効果的及び効率的に送達することができたことがＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＨＰＬＣ分析によりわかった。適当な製剤中のエクリズマブをＰａｒｉ−Ｊｅｔ Ａｉｒネブライザー又はＳｏｎｉｋ ＬＤＩネブライザーの何れかを用いて霧状化した。噴霧形態における霧状化された抗体をネブライザーのマウスピース（例えばＦＩＤ２Ｆ）から収集し、そして別のサイズのマウスピース（例えばＦＩＤ２Ｃ１−Ｃ５）を使用した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＨＰＬＣ分析によれば、分析した試料の純度により示される通り、種々のサイズの噴霧マウスピースによる霧状化された抗体の統一性が明らかになった。
【０１２９】
参考文献
本明細書において言及した全ての公開物及び特許は、各個々の公開物及び特許が特定され個別に参照により組み込まれるように示されるがごとく、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【０１３０】
等価物
本明細書に記載した出願の特定の実施形態の多くの等価物は、当業者が認識でき、又は日常的実験を超えずに確認できるものである。このような等価物は以下の請求項により包含されることを意図している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度で抗Ｃ５抗体を含む、水性溶液。
【請求項２】
前記抗Ｃ５抗体が、補体成分Ｃ５の、フラグメントＣ５ａおよびＣ５ｂへの分解を抑制する、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項３】
前記抗Ｃ５抗体が、補体成分を活性化しない、変異したＦｃ部分を含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項４】
前記抗Ｃ５抗体がエクリズマブである、請求項１または２に記載の水性溶液。
【請求項５】
前記抗Ｃ５抗体がペキセリズマブである、請求項１または２に記載の水性溶液。
【請求項６】
ヒスチジンを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項７】
２０ｍＭのヒスチジンを含む、請求項６に記載の水性溶液。
【請求項８】
グリシンを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項９】
５０ｍＭのグリシンを含む、請求項８に記載の水性溶液。
【請求項１０】
ヒスチジンおよびグリシンを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１１】
ソルビトールを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１２】
３％（ｗ／ｖ）ソルビトールを含む、請求項１１に記載の水性溶液。
【請求項１３】
マンニトールを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１４】
１．５％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む、請求項１３に記載の水性溶液。
【請求項１５】
ソルビトールおよびマンニトールを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１６】
賦形剤を含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１７】
前記賦形剤がポリソルベート８０である、請求項１６に記載の水性溶液。
【請求項１８】
前記溶液中の前記賦形剤の濃度が、０．００１５％と０．０２％との間（両端を含む）である、請求項１６または１７に記載の水性溶液。
【請求項１９】
前記溶液のｐＨが、６と８との間（両端を含む）である、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２０】
無菌である、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２１】
（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、
（ｂ）５０ｍＭのグリシン、
（ｃ）３％（ｗ／ｖ）ソルビトール、
（ｄ）１．５％（ｗ／ｖ）マンニトール、および
（ｅ）０．００１〜０．０２％ポリソルベート８０
を含む請求項１に記載の水性溶液であって、該溶液は、生理学的な浸透圧のものであり、該溶液は、６と８との間（両端を含む）のｐＨを有する、水性溶液。
【請求項２２】
エアロゾル投与またはネブライザー投与用に製剤化される、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２３】
（ｉ）請求項１に記載の水性溶液と、
（ｉｉ）該溶液を、必要とする患者に送達する手段と
を含む、キット。
【請求項２４】
前記手段は、前記溶液の前記患者への肺内投与に適したものである、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
前記手段は吸入器である、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記手段はネブライザーである、請求項２４に記載のキット。
【請求項２７】
被験体における肺の状態の処置に使用するための少なくとも１つの追加的薬剤をさらに含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２８】
肺疾患に罹患した患者の処置に使用するための、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２９】
請求項２８に記載の使用のための水性溶液であって、前記肺疾患は、喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸促迫症候群、肺線維症、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、コラーゲン血管障害、および気管支炎からなる群より選択される、水性溶液。
【請求項３０】
前記溶液が、肺疾患を処置するための１以上の追加的治療剤とともに投与されるものである、請求項２８に記載の使用のための水性溶液。
【請求項３１】
前記１以上の追加的治療剤が、ＩｇＥ抑制剤、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ−４抗体、抗ＩＬ−５抗体、抗生物質、交感神経作用剤、デオキシリボヌクレアーゼ、抗コリン作用剤、コルチコステロイド、β−アドレノレセプターアゴニスト、ロイコトリエン抑制剤、５リポキシゲナーゼ抑制剤、ＰＤＥ抑制剤、ＣＤ２３拮抗剤、ＩＬ−１３拮抗剤、サイトカイン放出抑制剤、ヒスタミンＨＩ受容体拮抗剤、抗ヒスタミン、抗炎症剤、およびヒスタミン放出抑制剤からなる群より選択される、請求項３０に記載の使用のための水性溶液。
【請求項３２】
請求項１に記載の水性溶液と、製薬上許容可能な担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１】
４０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの濃度で抗Ｃ５抗体を含む、水性溶液。
【請求項２】
前記抗Ｃ５抗体が、補体成分Ｃ５の、フラグメントＣ５ａおよびＣ５ｂへの分解を抑制する、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項３】
前記抗Ｃ５抗体が、補体成分を活性化しない、変異したＦｃ部分を含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項４】
前記抗Ｃ５抗体がエクリズマブである、請求項１または２に記載の水性溶液。
【請求項５】
前記抗Ｃ５抗体がペキセリズマブである、請求項１または２に記載の水性溶液。
【請求項６】
ヒスチジンを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項７】
２０ｍＭのヒスチジンを含む、請求項６に記載の水性溶液。
【請求項８】
グリシンを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項９】
５０ｍＭのグリシンを含む、請求項８に記載の水性溶液。
【請求項１０】
ヒスチジンおよびグリシンを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１１】
ソルビトールを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１２】
３％（ｗ／ｖ）ソルビトールを含む、請求項１１に記載の水性溶液。
【請求項１３】
マンニトールを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１４】
１．５％（ｗ／ｖ）マンニトールを含む、請求項１３に記載の水性溶液。
【請求項１５】
ソルビトールおよびマンニトールを含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１６】
賦形剤を含む、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項１７】
前記賦形剤がポリソルベート８０である、請求項１６に記載の水性溶液。
【請求項１８】
前記溶液中の前記賦形剤の濃度が、０．００１５％と０．０２％との間（両端を含む）である、請求項１６または１７に記載の水性溶液。
【請求項１９】
前記溶液のｐＨが、６と８との間（両端を含む）である、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２０】
無菌である、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２１】
（ａ）２０ｍＭのヒスチジン、
（ｂ）５０ｍＭのグリシン、
（ｃ）３％（ｗ／ｖ）ソルビトール、
（ｄ）１．５％（ｗ／ｖ）マンニトール、および
（ｅ）０．００１〜０．０２％ポリソルベート８０
を含む請求項１に記載の水性溶液であって、該溶液は、生理学的な浸透圧のものであり、該溶液は、６と８との間（両端を含む）のｐＨを有する、水性溶液。
【請求項２２】
エアロゾル投与またはネブライザー投与用に製剤化される、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２３】
（ｉ）請求項１に記載の水性溶液と、
（ｉｉ）該溶液を、必要とする患者に送達する手段と
を含む、キット。
【請求項２４】
前記手段は、前記溶液の前記患者への肺内投与に適したものである、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
前記手段は吸入器である、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記手段はネブライザーである、請求項２４に記載のキット。
【請求項２７】
被験体における肺の状態の処置に使用するための少なくとも１つの追加的薬剤をさらに含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２８】
肺疾患に罹患した患者の処置に使用するための、請求項１に記載の水性溶液。
【請求項２９】
請求項２８に記載の使用のための水性溶液であって、前記肺疾患は、喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸促迫症候群、肺線維症、α−１アンチトリプシン欠損症、気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、サルコイドーシス、コラーゲン血管障害、および気管支炎からなる群より選択される、水性溶液。
【請求項３０】
前記溶液が、肺疾患を処置するための１以上の追加的治療剤とともに投与されるものである、請求項２８に記載の使用のための水性溶液。
【請求項３１】
前記１以上の追加的治療剤が、ＩｇＥ抑制剤、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ−４抗体、抗ＩＬ−５抗体、抗生物質、交感神経作用剤、デオキシリボヌクレアーゼ、抗コリン作用剤、コルチコステロイド、β−アドレノレセプターアゴニスト、ロイコトリエン抑制剤、５リポキシゲナーゼ抑制剤、ＰＤＥ抑制剤、ＣＤ２３拮抗剤、ＩＬ−１３拮抗剤、サイトカイン放出抑制剤、ヒスタミンＨＩ受容体拮抗剤、抗ヒスタミン、抗炎症剤、およびヒスタミン放出抑制剤からなる群より選択される、請求項３０に記載の使用のための水性溶液。
【請求項３２】
請求項１に記載の水性溶液と、製薬上許容可能な担体とを含む、医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公開番号】特開２０１２−２３３０１３（Ｐ２０１２−２３３０１３Ａ）
【公開日】平成２４年１１月２９日（２０１２．１１．２９）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１２−１９３９８５（Ｐ２０１２−１９３９８５）
【出願日】平成２４年９月４日（２０１２．９．４）
【分割の表示】特願２００８−５１１３６６（Ｐ２００８−５１１３６６）の分割
【原出願日】平成１８年５月１０日（２００６．５．１０）
【出願人】（５０３１０２６７４）アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (51)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１１月２９日（２０１２．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−１９３９８５（Ｐ２０１２−１９３９８５）
【出願日】平成２４年９月４日（２０１２．９．４）
【分割の表示】特願２００８−５１１３６６（Ｐ２００８−５１１３６６）の分割
【原出願日】平成１８年５月１０日（２００６．５．１０）
【出願人】（５０３１０２６７４）アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド (51)
【Ｆターム（参考）】
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