本発明は、癌、特に肺癌もしくは食道癌、又は発癌においてＴＢＣ１Ｄ７遺伝子によって果たされる役割に関し、癌、特に肺癌又は食道癌をＴＢＣ１Ｄ７遺伝子の１つ又は複数に対する二本鎖分子、又はそのような二本鎖分子を含む組成物、ベクターもしくは細胞を投与することによって治療及び／又は予防するための方法を特徴とする。本発明はまた、ＴＢＣ１Ｄ７の中から選択された１つ又は複数の過剰発現遺伝子を用いた、肺の診断、又は肺癌、特にＮＳＣＬＣもしくはＳＣＬＣ又は食道癌を有する患者の予後の評価／判定のための方法も特徴とする。その目的のために、ＴＢＣ１Ｄ７は肺癌又は食道癌に関する新規バイオマーカーとして役立つ可能性がある。また、肺癌又は食道癌におけるＴＢＣ１Ｄ７のうち１つ又は複数の過剰発現に及ぼすそれらの影響を指標として用いて、肺癌又は食道癌を治療又は予防するための化合物を同定する方法も開示する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における癌の検出又は診断の方法であって、患者由来の生物試料におけるＴＢＣ１Ｄ７の発現レベルを決定する段階を含み、該遺伝子の正常対照レベルと比較した該レベルの上昇が、該対象が癌に罹患しているか又は癌を発症するリスクを有することを示し、その発現レベルが以下からなる群より選択されるいずれか１つの方法によって決定される方法：
（ａ）ＴＢＣ１Ｄ７のｍＲＮＡを検出する段階、
（ｂ）ＴＢＣ１Ｄ７によってコードされるタンパク質を検出する段階、及び
（ｃ）ＴＢＣ１Ｄ７によってコードされるタンパク質の生物活性を検出する段階。
【請求項２】
前記上昇が、正常対照レベルを少なくとも１０％上回る、請求項１記載の方法。
【請求項３】
患者由来の生物試料が生検試料である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
癌が肺癌及び食道癌からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項５】
ＴＢＣ１Ｄ７の転写産物又は翻訳産物と結合する検出用試薬を含む、癌の検出又は診断のためのキット。
【請求項６】
肺癌及び／又は食道癌の患者の予後を評価するための方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）生物試料におけるＴＢＣ１Ｄ７の発現レベルを検出する段階；及び
（ｂ）検出された発現レベルを対照レベルと比較する段階；及び
（ｃ）（ｂ）の比較に基づいて患者の予後を判定する段階。
【請求項７】
対照レベルが予後良好な対照レベルであり、該対照レベルと比較した発現レベルの上昇が予後不良と判定される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記上昇が対照レベルを少なくとも１０％上回る、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記発現レベルが、以下からなる群より選択されるいずれか１つの手段によって決定される、請求項６記載の方法：
（ａ）ＴＢＣ１Ｄ７のｍＲＮＡを検出すること；
（ｂ）ＴＢＣ１Ｄ７によってコードされるタンパク質を検出すること；及び
（ｃ）ＴＢＣ１Ｄ７によってコードされるタンパク質の生物活性を検出すること。
【請求項１０】
癌の治療もしくは予防又は癌細胞成長の阻害のための候補化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
ａ）試験化合物を、ＴＢＣ１Ｄ７によってコードされるポリペプチドと接触させる段階；
ｂ）該ポリペプチドと試験化合物との間の結合活性を検出する段階；及び
ｃ）該ポリペプチドと結合する化合物を選択する段階。
【請求項１１】
癌の治療もしくは予防又は癌細胞成長の阻害のための候補化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
ａ）試験化合物を、ＴＢＣ１Ｄ７を発現する細胞と接触させる段階；及び
ｂ）ＴＢＣ１Ｄ７の発現レベルを低下させる化合物を選択する段階。
【請求項１２】
癌の治療もしくは予防又は癌細胞成長の阻害のための候補化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
ａ）試験化合物を、ＴＢＣ１Ｄ７によってコードされるポリペプチドと接触させる段階；
ｂ）段階（ａ）のポリペプチドの生物活性を検出する段階；及び
ｃ）該ポリペプチドの生物活性を、試験化合物の非存在下で検出される生物活性と比較して抑制する化合物を選択する段階。
【請求項１３】
生物活性が細胞増殖活性又は浸潤活性である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
癌の治療もしくは予防又は癌細胞成長の阻害のための候補化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
ａ）試験化合物を、ＴＢＣ１Ｄ７遺伝子の転写調節領域及び該転写調節領域の制御下で発現するレポーター遺伝子を含むベクターが導入された細胞と接触させる段階、
ｂ）該レポーター遺伝子の発現又は活性を測定する段階；及び
ｃ）該レポーター遺伝子の発現又は活性のレベルを、試験化合物の非存在下におけるレベルと比較して低下させる化合物を選択する段階。
【請求項１５】
ＴＢＣ１Ｄ７ポリペプチドと１４-３-３ζポリペプチド、ＲＡＢ１７ポリペプチド又はＴＳＣ１ポリペプチドとの間の結合の阻害のための候補化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
（ａ）ＴＢＣ１Ｄ７ポリペプチド又はその機能的等価物を、試験薬剤の存在下で、１４-３-３ζ、ＲＡＢ１７又はＴＳＣ１ポリペプチド又はその機能的等価物と接触させる段階；
（ｂ）該ポリペプチド間の結合を検出する段階；
（ｃ）段階（ｂ）で検出された結合レベルを、試験薬剤の非存在下で検出されるレベルと比較する段階；及び
（ｄ）段階（ｃ）において試験薬剤の非存在下で検出されたレベルと比較して、結合レベルを低下させるか阻害する試験薬剤を選択する段階。
【請求項１６】
ＴＢＣ１Ｄ７の機能的等価物が、１４-３-３ζ結合ドメイン、ＲＡＢ１７結合ドメイン又はＴＳＣ１結合ドメインを含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
癌が肺癌又は食道癌である、請求項１０、１１、１２及び１４記載の方法。
【請求項１８】
センス鎖及びアンチセンス鎖を含む二本鎖分子であって、センス鎖が配列番号１８又は１９からなる群より選択される標的配列に対応するヌクレオチド配列を含み、
アンチセンス鎖が該センス鎖に対して相補的なヌクレオチド配列を含み、該センス鎖及び該アンチセンス鎖が互いにハイブリダイズして該二本鎖分子を形成し、該二本鎖分子がＴＢＣ１Ｄ７遺伝子を発現する細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害する、二本鎖分子。
【請求項１９】
約１９〜約２５ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドである、請求項１８記載の二本鎖分子。
【請求項２０】
一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む単一のヌクレオチド転写物である、請求項１８記載の二本鎖分子。
【請求項２１】
前記ポリヌクレオチドが、一般式：
５'-[Ａ]-[Ｂ]-[Ａ’]-３'
を有し、式中、[Ａ]が、配列番号１８又は１９を含むヌクレオチド配列であり；[Ｂ]が、約３〜約２３ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ[Ａ’]が、[Ａ]に対して相補的なヌクレオチド配列である、請求項２０記載の二本鎖分子。
【請求項２２】
ＴＢＣ１Ｄ７遺伝子を発現する細胞が、膀胱癌細胞、胃癌細胞、結腸及び直腸癌細胞、乳癌細胞、食道癌細胞、肺癌細胞、リンパ腫細胞、膵癌細胞並びに精巣癌細胞の群から選択される、請求項１８記載の二本鎖分子。
【請求項２３】
センス鎖核酸及びアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドのそれぞれ又は両方を含むベクターであって、該センス鎖核酸が配列番号１８又は１９のヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖核酸が該センス鎖に対して相補的なヌクレオチド配列を含み、該センス鎖及び該アンチセンス鎖の転写物が互いにハイブリダイズして該二本鎖分子を形成し、該ベクターがＴＢＣ１Ｄ７遺伝子を発現する細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害する、ベクター。
【請求項２４】
ポリヌクレオチドが約１９〜約２５ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドである、請求項２３記載のベクター。
【請求項２５】
二本鎖分子が、一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む単一のヌクレオチド転写物である、請求項２３記載のベクター。
【請求項２６】
ポリヌクレオチドが一般式：
５'-[Ａ]-[Ｂ]-[Ａ’]-３'
を有し、式中、[Ａ]が、配列番号１８又は１９を含むヌクレオチド配列であり；[Ｂ]が、約３〜約２３ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ[Ａ’]が、[Ａ]に対して相補的なヌクレオチド配列である、請求項２５記載のベクター。
【請求項２７】
対象における癌の治療もしくは予防の方法であって、ＴＢＣ１Ｄ７に対する二本鎖分子の薬学的有効量、又はＴＢＣ１Ｄ７遺伝子を発現する細胞と接触して細胞増殖を阻害する該二本鎖分子を含むベクターの薬学的有効量と、薬学的に許容される担体とを該対象に投与する段階を含む、方法。
【請求項２８】
二本鎖分子が請求項１８記載のものであり、ベクターが請求項２３記載のものである、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
癌が肺癌及び食道癌から選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
ＴＢＣ１Ｄ７に対する二本鎖分子の薬学的有効量、又はＴＢＣ１Ｄ７遺伝子を発現する細胞と接触して細胞増殖を阻害する該二本鎖分子を含むベクターの薬学的有効量と、薬学的に許容される担体とを含む、癌の治療又は予防のための組成物。
【請求項３１】
二本鎖分子が請求項１８記載のものであり、ベクターが請求項２３記載のものである、請求項３０記載の組成物。
【請求項３２】
癌が肺癌及び食道癌の群から選択される、請求項３０記載の組成物。
【請求項３３】
以下からなる群より選択されるポリペプチド；
（ａ）ＹＷＩＴＲＲＦＶＮＱＬＮＴＫＹＲＤＳＬＰ（配列番号２８）を含むポリペプチド、及び
（ｂ）ＹＷＩＴＲＲＦＶＮＱＬＮＴＫＹＲＤＳＬＰ（配列番号２８）からなるポリペプチドと機能的に等価なポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドであって、
配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドの生物学的機能を欠くポリペプチド。
【請求項３４】
請求項３３記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項３５】
生物学的機能が細胞増殖活性又は浸潤活性である、請求項３３記載のポリペプチド。
【請求項３６】
２０〜６０残基からなる、請求項３３記載のポリペプチド。
【請求項３７】
細胞膜透過性物質によって修飾されている、請求項３３記載のポリペプチド。
【請求項３８】
以下の一般式：
[Ｒ]-[Ｄ]；
を有し、式中、[Ｒ]が細胞膜透過性物質を表し；[Ｄ]がＹＷＩＴＲＲＦＶＮＱＬＮＴＫＹＲＤＳＬＰ（配列番号２８）を含む断片配列のアミノ酸配列；又は該断片配列を含むポリペプチドと機能的に等価なポリペプチドのアミノ酸配列を表し、該ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドの生物学的機能を欠き、[Ｒ]及び[Ｄ]が直接的に連結されてもよく、又はリンカーを介して間接的に連結されてもよい、請求項３７記載のポリペプチド。
【請求項３９】
細胞膜透過性物質が以下のものからなる群より選択されるいずれか１つである、請求項３８記載のポリペプチド：
ポリアルギニン／ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ／配列番号４３；
Ｔａｔ／ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ／配列番号２９；
ペネトラチン／ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ／配列番号３０；
ブフォリンＩＩ／ＴＲＳＳＲＡＧＬＱＦＰＶＧＲＶＨＲＬＬＲＫ／配列番号３１；
トランスポータン／ＧＷＴＬＮＳＡＧＹＬＬＧＫＩＮＬＫＡＬＡＡＬＡＫＫＩＬ／配列番号３２；
ＭＡＰ（両親媒性ペプチドモデル）／ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ／配列番号３３；
Ｋ-ＦＧＦ／ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ／配列番号３４；
Ｋｕ７０／ＶＰＭＬＫ／配列番号３５；
Ｋｕ７０／ＰＭＬＫＥ／配列番号３６；
プリオン／ＭＡＮＬＧＹＷＬＬＡＬＦＶＴＭＷＴＤＶＧＬＣＫＫＲＰＫＰ／配列番号３７；
ｐＶＥＣ／ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ／配列番号３８；
Ｐｅｐ-１／ＫＥＴＷＷＥＴＷＷＴＥＷＳＱＰＫＫＫＲＫＶ／配列番号３９；
ＳｙｎＢ１／ＲＧＧＲＬＳＹＳＲＲＲＦＳＴＳＴＧＲ／配列番号４０；
Ｐｅｐ-７／ＳＤＬＷＥＭＭＭＶＳＬＡＣＱＹ／配列番号４１；及び
ＨＮ-１／ＴＳＰＬＮＩＨＮＧＱＫＬ／配列番号４２。

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ−Ｄ】

【図３Ｅ−Ｆ】

【図４Ａ−Ｂ】

【図４Ｃ】

【図４Ｄ−Ｆ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ−Ｃ】

【図５Ｄ】

【図６】

【公表番号】特表２０１２−５０１１６８（Ｐ２０１２−５０１１６８Ａ）
【公表日】平成２４年１月１９日（２０１２．１．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０９３４２（Ｐ２０１１−５０９３４２）
【出願日】平成２１年８月１４日（２００９．８．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００９／００３８９５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２３８３８
【国際公開日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【出願人】（５０２２４０１１３）オンコセラピー・サイエンス株式会社 (142)
【Ｆターム（参考）】