本発明は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体の活性に拮抗する、ＶＥＧＦ受容体の外部ドメインの最も膜近位のＩｇ様ドメイン（Ｄ７）と結合する部分を提供する。本発明は、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦ受容体）、たとえば、ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ１）、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ／Ｆｌｋ１）およびＶＥＧＦＲ３（Ｆｌｔ４）の外部ドメインと結合する部分、たとえば、抗体またはその抗原結合性一部分、小分子、ペプチド性分子、アプタマー、およびアドネクチンを提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦ受容体）の外部ドメインと結合する部分であって、該ＶＥＧＦ受容体の活性に拮抗する、部分。
【請求項２】
ヒトＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインと結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項３】
前記Ｉｇ様ドメインがリガンドと前記ＶＥＧＦ受容体との結合に関与していない、請求項２に記載の部分。
【請求項４】
前記Ｉｇ様ドメインがリガンドと前記ＶＥＧＦ受容体との結合に関与する、請求項２に記載の部分。
【請求項５】
前記ＶＥＧＦ受容体と該ＶＥＧＦ受容体のリガンドとの間の相互作用を遮断しない、請求項１に記載の部分。
【請求項６】
前記ＶＥＧＦ受容体と該ＶＥＧＦ受容体のリガンドとの間の相互作用を遮断する、請求項１に記載の部分。
【請求項７】
前記ＶＥＧＦ受容体の二量体化を妨げない、請求項１に記載の部分。
【請求項８】
前記ＶＥＧＦ受容体の二量体化を妨げる、請求項１に記載の部分。
【請求項９】
前記ＶＥＧＦ受容体のそれぞれのプロトマーからの前記外部ドメインの膜近位領域間の相互作用を妨げる、請求項１に記載の部分。
【請求項１０】
前記相互作用がホモタイプである、請求項９に記載の部分。
【請求項１１】
前記相互作用がヘテロタイプである、請求項９に記載の部分。
【請求項１２】
前記外部ドメインの前記膜近位領域がＶＥＧＦ受容体の第７のＩｇ様ドメイン（Ｄ７）である、請求項９に記載の部分。
【請求項１３】
ＶＥＧＦ受容体のＤ７ドメインの以下のコンセンサス配列と結合する、請求項１２に記載の部分：
Ｌ／Ｉ Ｘ_１ Ｒ Φ Ｘ_２ Ｘ_３ Ｘ_４ Ｄ／Ｅ Ｘ_５ Ｇ（配列番号１５８）［式中、Ｌはロイシンであり、Ｉはイソロイシンであり、Ｒはアルギニンであり、Φは疎水性アミノ酸であり、Ｄはアスパラギン酸であり、Ｅはグルタミン酸であり、Ｇはグリシンであり、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４およびＸ_５は任意のアミノ酸である］。
【請求項１４】
Φがバリンであり、Ｘ_１が、アルギニン、グルタミン、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなる群より選択され、Ｘ_２が、アルギニン、リシンおよびスレオニンからなる群より選択され、Ｘ_３が、リシン、グルタミン酸、グルタミンおよびバリンからなる群より選択され、Ｘ_４が、グルタミン酸およびバリンからなる群より選択され、Ｘ_５が、グルタミン酸、グリシン、セリンおよびグルタミンからなる群より選択される（配列番号１５９）、請求項１３に記載の部分。
【請求項１５】
前記ＶＥＧＦ受容体のそれぞれのプロトマーからの前記外部ドメインの前記膜近位領域が１６Åを超える距離によって隔てられることを引き起こす、請求項９に記載の部分。
【請求項１６】
前記ＶＥＧＦ受容体がＶＥＧＦＲ１である、請求項１に記載の部分。
【請求項１７】
前記ＶＥＧＦ受容体がＶＥＧＦＲ２である、請求項１に記載の部分。
【請求項１８】
前記ＶＥＧＦ受容体がＶＥＧＦＲ３である、請求項１に記載の部分。
【請求項１９】
前記ＶＥＧＦ受容体の前記外部ドメインを不活性状態に固定する、請求項１に記載の部分。
【請求項２０】
ＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基Ａｒｇ７２６と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２１】
ＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基Ａｓｐ７３１と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２２】
ＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基Ａｒｇ７２６およびＡｓｐ７３１と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２３】
ＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基７２４、７２５、７２６、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２および７３３からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸残基と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２４】
ＶＥＧＦＲ１のアミノ酸残基Ａｒｇ７２０と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２５】
ＶＥＧＦＲ１のアミノ酸残基Ａｓｐ７２５と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２６】
ＶＥＧＦＲ１のアミノ酸残基Ａｒｇ７２０およびＡｓｐ７２５と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２７】
ＶＥＧＦＲ１のアミノ酸残基７１８、７１９、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６および７２７からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸残基と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２８】
ＶＥＧＦＲ３のアミノ酸残基Ａｒｇ７３７と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項２９】
ＶＥＧＦＲ３のアミノ酸残基Ａｓｐ７４２と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項３０】
ＶＥＧＦＲ３のアミノ酸残基Ａｒｇ７３７およびＡｓｐ７４２と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項３１】
ＶＥＧＦＲ３のアミノ酸残基７３５、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３および７４４からなる群より選択される１つまたは複数のアミノ酸残基と結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項３２】
前記ＶＥＧＦ受容体上のコンフォメーションエピトープと結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項３３】
前記コンフォメーションエピトープが、前記ＶＥＧＦ受容体のＤ７ドメイン中の２つ以上の残基から構成される、請求項３２に記載の部分。
【請求項３４】
前記コンフォメーションエピトープが、アミノ酸残基Ａｒｇ７２６およびＡｓｐ７３１、Ａｒｇ７２０およびＡｓｐ７２５、またはＡｒｇ７３７およびＡｓｐ７４２を含む、請求項３２に記載の部分。
【請求項３５】
前記ＶＥＧＦ受容体のリガンド誘導性のチロシン自己リン酸化を遮断する、請求項１に記載の部分。
【請求項３６】
前記ＶＥＧＦ受容体のリガンド誘導性の内在化を遮断する、請求項１に記載の部分。
【請求項３７】
前記ＶＥＧＦ受容体上の近接エピトープと結合する、請求項１に記載の部分。
【請求項３８】
前記近接エピトープが、前記ＶＥＧＦ受容体のＤ７ドメイン中の２つ以上の残基から構成される、請求項３７に記載の部分。
【請求項３９】
前記近接エピトープが、ＶＥＧＦＲ１の^６７２ＶＡＩＳＳＳ^６７７、ＶＥＧＦＲ１の^６７８ＴＴＬＤＣＨＡ^６８４、ＶＥＧＦＲ１の^６８５ＮＧＶＰＥＰＱ^６９１、ＶＥＧＦＲ１の^７００ＫＩＱＱＥＰＧ^７０６、ＶＥＧＦＲ１の^７０７ＩＩＬＧ^７１０、ＶＥＧＦＲ１の^７１１ＰＧＳ^７１３、ＶＥＧＦＲ１の^７１４ＳＴＬＦＩ^７１８、ＶＥＧＦＲ１の^７１９ＥＲＶＴＥＥＤＥＧＶ^７２８、ＶＥＧＦＲ３の^６８９ＶＮＶＳＤＳ^６９４、ＶＥＧＦＲ３の^６９５ＬＥＭＱＣＬＶ^７０１、ＶＥＧＦＲ３の^７０２ＡＧＡＨＡＰＳ^７０８、ＶＥＧＦＲ３の^７１７ＬＬＥＥＫＳＧ^７２３、ＶＥＧＦＲ３の^７２４ＶＤＬＡ^７２７、ＶＥＧＦＲ３の^７２８ＤＳＮ^７３０、ＶＥＧＦＲ３の^７３１ＱＫＬＳＩ^７３５、ＶＥＧＦＲ３の^７３６ＱＲＶＲＥＥＤＡＧＲ^７４５、ＶＥＧＦＲ２の^６７８ＴＳＩＧＥＳ^６８３、ＶＥＧＦＲ２の^６８４ＩＥＶＳＣＴＡ^６９０、ＶＥＧＦＲ２の^６９１ＳＧＮＰＰＰＱ^６９７、ＶＥＧＦＲ２の^７０６ＴＬＶＥＤＳＧ^７１２、ＶＥＧＦＲ２の^７１３ＩＶＬＫ^７１６、ＶＥＧＦＲ２の^７１７ＤＧＮ^７１９、ＶＥＧＦＲ２の^７２０ＲＮＬＴＩ^７２４およびＶＥＧＦＲ２の^７２５ＲＲＶＲＫＥＤＥＧＬ^７３４からなる群より選択されるエピトープである、請求項３８に記載の部分。
【請求項４０】
単離された抗体またはその抗原結合性一部分である、請求項１に記載の部分。
【請求項４１】
前記抗体またはその抗原結合性一部分が、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、およびキメラ抗体からなる群より選択される、請求項４０に記載の部分。
【請求項４２】
前記抗体またはその抗原結合性一部分が、ＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域、ＩｇＧ４定常領域、ＩｇＭ定常領域、ＩｇＡ定常領域およびＩｇＥ定常領域からなる群より選択される重鎖定常領域を含む、請求項４１に記載の部分。
【請求項４３】
前記抗体重鎖定常領域がＩｇＧ１である、請求項４２に記載の部分。
【請求項４４】
前記抗体またはその抗原結合性一部分が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖Ｆｖ断片、ＳＭＩＰ、アフィボディ、アビマー、ナノボディ、および単一ドメイン抗体からなる群より選択される、請求項４０に記載の部分。
【請求項４５】
前記抗体またはその抗原結合性一部分が、１×１０^−７Ｍ以下、より好ましくは５×１０^−８Ｍ以下、より好ましくは１×１０^−８Ｍ以下、より好ましくは５×１０^−９Ｍ以下からなる群より選択されるＫＤで受容体チロシンキナーゼのＩｇ様ドメインと結合する、請求項４０に記載の部分。
【請求項４６】
請求項４０から請求項４５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性一部分を産生するハイブリドーマ。
【請求項４７】
小分子である、請求項１に記載の部分。
【請求項４８】
ＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基Ａｒｇ７２６、ＶＥＧＦＲ２のＡｓｐ７３１、ＶＥＧＦＲ１のＡｒｇ７２０、ＶＥＧＦＲ１のＡｓｐ７２５、ＶＥＧＦＲ３のＡｒｇ７３７、およびＶＥＧＦＲ３のＡｓｐ７４２からなる群より選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つと結合する、請求項４７に記載の部分。
【請求項４９】
ペプチド性分子である、請求項１に記載の部分。
【請求項５０】
前記ペプチド性分子が、前記ＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインに基づいて設計されている、請求項４９に記載の部分。
【請求項５１】
前記ペプチド性分子が、前記ヒトＶＥＧＦ受容体のＤ７ドメインに基づいて設計されている、請求項５０に記載の部分。
【請求項５２】
前記ペプチド性分子が、構造：Ｌ／Ｉ Ｘ_１ Ｒ Φ Ｘ_２ Ｘ_３ Ｘ_４ Ｄ／Ｅ Ｘ_５ Ｇ（配列番号１５８）［式中、Ｌはロイシンであり、Ｉはイソロイシンであり、Ｒはアルギニンであり、Φは疎水性アミノ酸であり、Ｄはアスパラギン酸であり、Ｅはグルタミン酸であり、Ｇはグリシンであり、Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４およびＸ_５は任意のアミノ酸である］を含む、請求項５１に記載の部分。
【請求項５３】
Φがバリンであり、Ｘ_１が、アルギニン、グルタミン、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなる群より選択され、Ｘ_２が、アルギニン、リシンおよびスレオニンからなる群より選択され、Ｘ_３が、リシン、グルタミン酸、グルタミンおよびバリンからなる群より選択され、Ｘ_４が、グルタミン酸およびバリンからなる群より選択され、Ｘ_５が、グルタミン酸、グリシン、セリンおよびグルタミンからなる群より選択される（配列番号１５９）、請求項５２に記載の部分。
【請求項５４】
前記ペプチド性分子が、ヒトＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基７２４〜７３３と少なくとも８０％同一である構造を含む、請求項５０に記載の部分。
【請求項５５】
前記ペプチド性分子が、ヒトＶＥＧＦＲ１のアミノ酸残基７１８〜７２７と少なくとも８０％同一である構造を含む、請求項５０に記載の部分。
【請求項５６】
前記ペプチド性分子が、ヒトＶＥＧＦＲ３のアミノ酸残基７３５〜７４４と少なくとも８０％同一である構造を含む、請求項５０に記載の部分。
【請求項５７】
前記ペプチド性分子が少なくとも１つのＤ−アミノ酸残基を含む、請求項５０に記載の部分。
【請求項５８】
アドネクチンである、請求項１に記載の部分。
【請求項５９】
ヒトＶＥＧＦ受容体の第７のＩｇ様ドメイン上のコンフォメーションエピトープと結合する部分であって、該部分は、該ヒトＶＥＧＦ受容体の活性に拮抗し、該コンフォメーションエピトープは、ＶＥＧＦＲ２の残基Ａｒｇ７２６およびＡｓｐ７３１、ＶＥＧＦＲ１の残基Ａｒｇ７２０およびＡｓｐ７２５、またはＶＥＧＦＲ３の残基Ａｒｇ７３７およびＡｓｐ７４２を含む、部分。
【請求項６０】
ＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基Ａｒｇ７２６およびＡｓｐ７３１、ＶＥＧＦＲ１のアミノ酸残基Ａｒｇ７２０およびＡｓｐ７２５、またはＶＥＧＦＲ３のアミノ酸残基Ａｒｇ７３７およびＡｓｐ７４２と結合して、ヒトＶＥＧＦ受容体の活性に拮抗する、部分。
【請求項６１】
請求項１から請求項６０のいずれか一項に記載の部分と、薬学的に許容されるキャリアとを含む、医薬組成物。
【請求項６２】
被験体においてＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼに関連する疾患を処置または予防するための薬の調製における、有効量の請求項１から６０のいずれか一項に記載の部分の使用。
【請求項６３】
前記ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼに関連する疾患が、がん、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、糖尿病性網膜症、リンパ性疾患および疼痛に関連する疾患からなる群より選択される、請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
前記がんが、ＧＩＳＴ、ＡＭＬ、ＳＣＬＣ、腎臓がん、結腸がん、リンパ性がんおよび乳がんからなる群より選択される、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
ＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインと結合する部分を同定するための方法であって、
ＶＥＧＦ受容体を候補部分と接触させるステップと、
同時にまたは順次、該ＶＥＧＦ受容体を該ＶＥＧＦ受容体のリガンドと接触させるステップと、
該部分が、該リガンドによって誘導される二量体ＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン間の配置、配向および／または距離に影響を与えるか否かを決定して、ＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインと結合する部分を同定するステップと
を含む、方法。
【請求項６６】
前記部分が、前記ＶＥＧＦ受容体の外部ドメインを不活性状態に固定する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記部分が、前記ＶＥＧＦ受容体の第７のＩｇ様ドメイン（Ｄ７）と結合する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
ヒトＶＥＧＦ受容体の第７のＩｇ様ドメイン上のコンフォメーションエピトープと結合する単離された抗体またはその抗原結合性一部分であって、該単離された抗体またはその抗原結合性一部分は、該ヒトＶＥＧＦ受容体の活性に拮抗し、該コンフォメーションエピトープは、ＶＥＧＦＲ２の残基Ａｒｇ７２６およびＡｓｐ７３１、ＶＥＧＦＲ１の残基Ａｒｇ７２０およびＡｓｐ７２５、またはＶＥＧＦＲ３の残基Ａｒｇ７３７およびＡｓｐ７４２を含む、抗体またはその抗原結合性一部分。
【請求項６９】
ＶＥＧＦＲ２のアミノ酸残基７２４〜７３３と結合して、ＶＥＧＦＲ２の活性に拮抗する、単離された抗体またはその抗原結合性一部分。
【請求項７０】
ＶＥＧＦＲ１のアミノ酸残基Ａｒｇ７２０およびＡｓｐ７２５と結合して、ＶＥＧＦＲ１の活性に拮抗する、単離された抗体またはその抗原結合性一部分。
【請求項７１】
ＶＥＧＦＲ３のアミノ酸残基Ａｒｇ７３７およびＡｓｐ７４２と結合して、ＶＥＧＦＲ３の活性に拮抗する、単離された抗体またはその抗原結合性一部分。
【請求項７２】
ヒトＶＥＧＦ受容体のＡｒｇ７２６およびＡｓｐ７３１からなる群より選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つと結合して、該ヒトＶＥＧＦ受容体の活性に拮抗する、単離された抗体またはその抗原結合性一部分。
【請求項７３】
ヒトＶＥＧＦ受容体のＡｒｇ７２０およびＡｓｐ７２５からなる群より選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つと結合して、該ヒトＶＥＧＦ受容体の活性に拮抗する、単離された抗体またはその抗原結合性一部分。
【請求項７４】
ヒトＶＥＧＦ受容体のＡｒｇ７３７およびＡｓｐ７４２からなる群より選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも１つと結合して、該ヒトＶＥＧＦ受容体の活性に拮抗する、単離された抗体またはその抗原結合性一部分。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図１Ｄ】

【図１Ｅ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図３Ｅ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６Ａ】

【図６Ｃ】

【図７Ａ】

【図７Ｃ】

【図９】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１２Ｄ】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【図１９Ｂ】

【図１９Ｃ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２１Ｂ】

【図２３】

【図３１Ａ】

【図３１Ｂ】

【図３１Ｃ】

【図３１Ｄ】

【図３Ａ】

【図６Ｂ】

【図６Ｄ】

【図７Ｂ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図１０】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１９Ａ】

【図２１Ａ】

【図２２】

【図２４】

【図２５】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２６Ｃ】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３２】

【図３３】

【公表番号】特表２０１３−５１５７７６（Ｐ２０１３−５１５７７６Ａ）
【公表日】平成２５年５月９日（２０１３．５．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４７１２８（Ｐ２０１２−５４７１２８）
【出願日】平成２２年１２月２０日（２０１０．１２．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０６１２９６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０９０６４８
【国際公開日】平成２３年７月２８日（２０１１．７．２８）
【出願人】（５９３１５２７２０）
【氏名又は名称原語表記】Ｙａｌｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
【Ｆターム（参考）】