本発明は、血管新生因子を含む組換えリステリア株、ＰＥＳＴ様配列を含むポリペプチドに作動可能に連結された血管新生因子を含む組換えポリペプチド、該組換えポリペプチドをコードする組換えヌクレオチド分子、関連するワクチン、ならびにそれらを用いる免疫原性的および治療的方法を提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管新生因子を発現する組換えリステリア株であって、前記血管新生因子は、血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦＲ２）ポリペプチド、エンドグリン、またはそれらの免疫原性断片である、組換えリステリア株。
【請求項２】
前記ＶＥＧＦＲ２断片は、胎児肝臓キナーゼ１（Ｆｌｋ１）−Ｅ１、Ｆｌｋ１−Ｅ２、Ｆｌｋ１−Ｉ１、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項３】
前記ＶＥＧＦＲ２断片は、配列番号５〜７から選択される、請求項２に記載の組換えリステリア株。
【請求項４】
前記エンドグリン断片は、配列番号５９〜６０から選択される、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項５】
前記血管新生因子は、ｈｌｙプロモーターから発現される、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項６】
前記血管新生因子は、ｐｒｆＡプロモーターから発現される、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項７】
前記血管新生因子は、ａｃｔＡプロモーターから発現される、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項８】
前記血管新生因子は、ｐ６０プロモーターから発現される、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項９】
前記血管新生因子は、エピソームベクターから発現される、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項１０】
前記血管新生因子は、リステリア染色体から発現される、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項１１】
前記血管新生因子は、前記断片の前記免疫原性を高めるポリペプチドとの融合ペプチドである、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項１２】
前記ポリペプチドは、ＰＥＳＴ様配列を含む、請求項８に記載の組換えリステリア株。
【請求項１３】
前記ポリペプチドは、非溶血性リステリオリシン（ＬＬＯ）ポリペプチドである、請求項９に記載の組換えリステリア株。
【請求項１４】
前記ポリペプチドは、Ｎ末端ＡｃｔＡポリペプチドである、請求項９に記載の組換えリステリア株。
【請求項１５】
前記ポリペプチドは、ＰＥＳＴ様配列からなる、請求項８に記載の組換えリステリア株。
【請求項１６】
腫瘍抗原をさらに含む、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項１７】
前記腫瘍抗原は、ＰＥＳＴ含有ポリペプチドとの融合ポリペプチドとして発現される、請求項１３に記載の組換えリステリア株。
【請求項１８】
前記ＰＥＳＴ含有ポリペプチドは、非溶血性リステリオリシン（ＬＬＯ）ポリペプチド、Ｎ末端ＡｃｔＡポリペプチド、またはＰＥＳＴ配列である、請求項１４に記載の組換えリステリア株。
【請求項１９】
前記組換えリステリア株は、組換えリステリア・モノサイトゲネス株である、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項２０】
前記組換えリステリア株は、動物宿主で継代されている、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項２１】
前記組換えリステリア株は、１つ以上の抗血管新生因子の放出を誘導する、請求項１に記載の組換えリステリア株。
【請求項２２】
請求項１に記載の組換えリステリア株と、アジュバントと、を含む、ワクチン。
【請求項２３】
対象において抗ＶＥＧＦＲ２免疫応答を誘導する方法であって、請求項１に記載の組換えリステリア株を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
対象において抗エンドグリン免疫応答を誘導する方法であって、請求項１に記載の組換えリステリア株を含む組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２５】
対象において癌を治療する方法であって、請求項１に記載の組換えリステリア株を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項２６】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記癌によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記癌は、乳癌である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記癌は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する癌である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
対象において癌を阻害または抑制する方法であって、請求項１に記載の組換えリステリア株を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項３１】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記癌によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記癌は、乳癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記癌は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する癌である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
対象において腫瘍の再発を予防する方法であって、請求項１に記載の組換えリステリア株を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項３６】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記腫瘍によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記腫瘍は、乳腺腫瘍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記腫瘍は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する腫瘍である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
対象において腫瘍の転移を阻害する方法であって、請求項１に記載の組換えリステリア株を含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項４１】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記腫瘍によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記腫瘍は、乳腺腫瘍である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記腫瘍は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する腫瘍である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
ＰＥＳＴ様配列を含むポリペプチドに作動可能に連結された血管新生因子を含む、組換えポリペプチド。
【請求項４６】
前記血管新生因子は、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）ポリペプチドまたはその免疫原性断片である、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項４７】
前記血管新生因子は、エンドグリンまたはその免疫原性断片である、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項４８】
ＰＥＳＴ様配列を含む前記ポリペプチドは、非溶血性リステリオリシン（ＬＬＯ）ポリペプチドである、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項４９】
ＰＥＳＴ様配列を含む前記ポリペプチドは、Ｎ末端ＡｃｔＡポリペプチドである、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５０】
ＰＥＳＴ様配列を含む前記ポリペプチドは、ＰＥＳＴ様配列からなる、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５１】
前記ＶＥＧＦＲ２断片は、Ｆｌｋ１−Ｅ１、ＦＬＫ１−Ｅ２、ＦＬＫ１−Ｉ１、またはそれらの組み合わせである、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５２】
前記ＶＥＧＦＲ２断片は、配列番号５〜７から選択される、請求項４６に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５３】
前記エンドグリン断片は、配列番号５９〜６０から選択される、請求項４７に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５４】
ＰＥＳＴ様配列を含む前記ポリペプチドに作動可能に連結された腫瘍抗原をさらに含む、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５５】
前記ＰＥＳＴ含有ポリペプチドは、非溶血性リステリオリシン（ＬＬＯ）ポリペプチド、Ｎ末端ＡｃｔＡポリペプチド、またはＰＥＳＴ配列である、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５６】
前記組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド分子を翻訳するステップを含むプロセスによって作られる、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５７】
前記ＶＥＧＦＲ２ポリペプチドを含むポリペプチドを、前記ＰＥＳＴ様配列を含む前記ポリペプチドに化学的にコンジュゲートさせるステップを含むプロセスによって作られる、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５８】
前記組換えポリペプチドは、１つ以上の抗血管新生因子の放出を誘導する、請求項４５に記載の組換えポリペプチド。
【請求項５９】
前記抗血管新生因子は、インターフェロンγである、請求項５８に記載の組換えポリペプチド。
【請求項６０】
請求項４５に記載の組換えポリペプチドと、アジュバントと、を含む、ワクチン。
【請求項６１】
請求項４５に記載の組換えポリペプチドをコードする、組換えワクチンのベクター。
【請求項６２】
対象において抗ＶＥＧＦＲ２免疫応答を誘導する方法であって、請求項４６に記載の組換えポリペプチドを含む免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項６３】
対象において抗エンドグリン免疫応答を誘導する方法であって、請求項４６に記載の組換えポリペプチドを含む免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項６４】
対象において癌を治療する方法であって、請求項４６に記載の組換えポリペプチドを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項６５】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記癌によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】
前記癌は、乳癌である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６８】
前記癌は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する癌である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６９】
対象において癌を阻害または抑制する方法であって、請求項４５に記載の組換えポリペプチドを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項７０】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項６９に記載の方法
。
【請求項７１】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記癌によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
前記癌は、乳癌である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７３】
前記癌は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する癌である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７４】
対象において腫瘍の再発を予防する方法であって、請求項４５に記載の組換えポリペプチドを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項７５】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記腫瘍によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記腫瘍は、乳腺腫瘍である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
前記腫瘍は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する腫瘍である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
対象において腫瘍の転移を阻害する方法であって、請求項４５に記載の組換えポリペプチドを含む組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項８０】
前記対象は、血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記腫瘍によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記腫瘍は、乳腺腫瘍である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記腫瘍は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する腫瘍である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
請求項４５に記載の組換えポリペプチドをコードする、ヌクレオチド分子。
【請求項８５】
請求項８４に記載のヌクレオチド分子と、アジュバントと、を含む、ワクチン。
【請求項８６】
請求項８４に記載のヌクレオチド分子を含む、組換えワクチンのベクター。
【請求項８７】
対象において抗ＶＥＧＦＲ２免疫応答を誘導する方法であって、請求項８４に記載のヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８８】
対象において抗エンドグリン免疫応答を誘導する方法であって、請求項８４に記載のヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８９】
対象において癌を治療する方法であって、請求項８４に記載のヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項９０】
前記対象は、血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記癌によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
前記癌は、乳癌である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９３】
前記癌は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する癌である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９４】
対象において癌を阻害または抑制する方法であって、請求項８４に記載のヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項９５】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記癌によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項９４に記載の方法。
【請求項９７】
前記癌は、乳癌である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９８】
前記癌は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する癌である、請求項９４に記載の方法。
【請求項９９】
対象において腫瘍の再発を予防する方法であって、請求項８４に記載のヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項１００】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記腫瘍によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
前記腫瘍は、乳腺腫瘍である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０３】
前記腫瘍は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する腫瘍である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０４】
対象において腫瘍の転移を阻害する方法であって、請求項８４に記載のヌクレオチド分子を含む免疫原性組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０５】
前記対象は、前記血管新生因子に対する免疫応答を開始する、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記対象は、エピトープスプレッディングを介して前記腫瘍によって発現される腫瘍抗原に対する免疫応答を開始する、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０７】
前記腫瘍は、乳腺腫瘍である、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０８】
前記腫瘍は、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕを発現する腫瘍である、請求項１０４に記載の方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図２Ｄ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図６Ｃ】

【図６Ｄ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図７Ｄ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【公表番号】特表２０１２−５１９４９０（Ｐ２０１２−５１９４９０Ａ）
【公表日】平成２４年８月３０日（２０１２．８．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５３１１７（Ｐ２０１１−５５３１１７）
【出願日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２６２５７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０２１４０
【国際公開日】平成２２年９月１０日（２０１０．９．１０）
【出願人】（５００４２９１０３）ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア (102)
【Ｆターム（参考）】